МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНАХ И КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ

Воронкин, Денис Алексеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНАХ И КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНАХ И КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ"

Воронкин Денис Алексеевич

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНАХ И КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 4 АПР 2011

Краснодар-2011

4844028

На правах рукописи

Воронкин Денис Алексеевич

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНАХ И КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Краснодар — 2011

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Микашннович Зоя Ивановна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Павлюченко Иван Иванович доктор медицинских наук, профессор Бородулин Владимир Борисович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Ставропольская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социальног о развития Российской Федерации (г. Ставрополь).

Защита состоится «А 6 » 2011 г. в 12 часов на заседании

диссертационного совета Д 208.038.02 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования ^Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России) (350063, Краснодар, ул. Седина, д. 4, тел. (861)262-73-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России.

Автореферат разослан «с1 иС1/УУТ-121011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Д 208.038.02 профессор Л.А.Скорикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность. Проблема злоупотребления алкоголем широко распространена во всем мире [H.L.Kröber, 1998; T.M.Goldfinger, 2003; J.Cochrane et al., 2003; W.Hao et al., 2004; М.И.Давыдов и соавт., 2007; R.Caetano et al., 2009; K.Kypri et al., 2009]. Отрицательные последствия алкоголизации общества напрямую связаны с качеством алкогольных напитков и количеством потребляемого этанола в расчёте на одного жителя в год при условном переводе в 100%-ный спирт. По данным Росстата, в России этот показатель в 2006 г. составил 9,5 л.

Печень, поджелудочная железа (ПЖ), желудочно-кишечный тракт наиболее подвержены патологическому действию алкоголя. ПЖ более чувствительна к алкоголю и поэтому так называемое относительно безопасное для печени количество алкоголя для ПЖ меньше в 2 - 3 раза. При употреблении алкоголя его содержание в клетках ПЖ достигает 60% от концентрации его в крови. Между количеством потребленного в год алкоголя и заболеваемостью острым панкреатитом прослежена статистически значимая прямая корреляционная связь [В.М.Махов, 2006]. В развитых странах среди первичных форм хронического панкреатита (ХП) преобладает панкреатит алкогольной этиологии (от 70 до 80% всех случаев) [H.Cichoz-Lach et al., 2008].

T.Arita et al., 1999; P.J.Mortele et al., 2000; L.Aparisi et al., 2008], недостаточно внимания уделено молекулярным аспектам патогенетической взаимосвязи между панкреатитом и патологией других внутренних органов. Не до конца ясна причина характерных изменений в интенсивности перекисного окисления липидов в периоды обострения воспалительного процесса в ГТЖ и место этих процессов в структуре факторов, повреждающих ианкреоциты [А.А.Гольдберг, 1987; О.Б.Любицкий с соавт., 1998]. Недостаточно внимания уделялось изучению функционирования антиоксидантной системы (АОС) организма в условиях развития ХП. Исследования данной системы могут оказаться полезными для понимания значения окислительного стресса в патогенезе изучаемого заболевания и его осложнений.

Цель работы - изучить характер изменений биохимических параметров, отражающих функциональное состояние и степень вовлеченности в патологический процесс органов жизнеобеспечения (печени, миокарда), а также клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов) при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите (ЭХАП).

Задачи исследования

1. Предложить новую, эффективную модель экспериментального хронического алкогольного панкреатита на крысах под контролем оценки выраженности деструктивных процессов в поджелудочной железе на основании показателей активности ферментов-маркёров цитолиза и морфологических находок.

2. Оценить наличие и степень тканевой гипоксии при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите по уровню 2,3-дифосфоглицериновой кислоты (2,3-ДФГ) и содержанию лактата в эритроцитах, печени и миокарде.

3. Охарактеризовать изменения в системе антиоксидантной защиты эритроцитов, печени и миокарда крыс при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите.

4. Оценить метаболическую активность лейкоцитов по активности миелопероксидазы (МПО) и продукции N0' при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите.

Новизна результатов исследования

1. Впервые разработана и апробирована модель экспериментального хронического алкогольного панкреатита на крысах (Патент №2394280) совместным применением растворов тритона Х-100 и этанола.

2. Получены новые данные о характере перестройки антиоксидантной системы и гликолитических процессов, имеющие свои особенности в эритроцитах, печени и миокарде при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите.

3. Установлены новые критерии контроля хронизации воспалительного процесса в ткани поджелудочной железы (повышенная ]ЧО'-синтазная и миелопероксидазная активность лейкоцитов).

4. Впервые получены данные, указывающие на неоднозначность метаболического ответа клеток крови, печени и миокарда при алкоголизации и экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите.

Теоретическая значимость исследования

Полученные факты способствуют расширению представлений о биохимических аспектах патогенеза первичной формы ХП, что может служить базой для дальнейших исследований в гастроэнтерологии.

Практическая значимость исследования

Полученные результаты исследования могут быть отобраны в качестве информативных биохимических параметров прогнозирования

развития морфологических изменений в ткани ПЖ. Созданная новая модель ЭХАП позволит расширить масштаб исследований разных форм панкреатитов и уточнить роль алкоголя в патогенезе панкреатита.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Экспериментальный хронический алкогольный панкреатит характеризуется развитием тканевой гипоксии, синдрома цитолиза, активацией кислородзависимых механизмов фагоцитоза, снижением активности а-амилазы.

2. При экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите регистрируется дисбаланс активности ферментов первой линии антиоксидантной защиты в эритроцитах и печени, и активация всех рассмотренных ферментов антиоксидантной системы в миокарде.

3. Повышенная ЫО'-синтазная активность лейкоцитов может рассматриваться как информативный показатель, предшествующий развитию морфологической картины хронического панкреатита.

Публикации и апробация работы. По теме диссертации опубликовано 16 научных работ, включая 1 патент РФ на изобретение и 2 публикации в изданиях, определённых Высшей аттестационной комиссией.

Основные положения работы представлены и обсуждены на 63-й итоговой научной конференции молодых ученых с международным участием (Ростов-на-Дону, 2009); IX межвузовской конференции с международным участием «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (Ростов-на-Дону, 2010); V научно-практической конференции молодых ученых с международным участием «Завадские чтения» (Ростов-на-Дону, 2010); V научной сессии Ростовского государственного медицинского ушверситега (Ростов-на-Дону, 2010). Диссертация апробирована на совместном заседании кафедры общей и клинической биохимии №1, кафедры общей и клинической биохимии №2, кафедры патологической

физиологии и биохимического отдела центральной научно-исследовательской лаборатории Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (ГОУ ВПО РостГМУ Росздрава, г. Ростов-на-Дону, 2010).

Структура н объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), общей характеристики материала и методов биохимического исследования (глава 2), изложения полученных результатов (главы 3,4, 5), обсуждения полученных результатов, выводов.

Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста, иллюстрирована 34 рисунками, содержит 12 таблиц. Указатель литературы содержит 267 источников, из них 112 отечественных и 155 иностранных.

Материалы н методы исследования Эксперимент проводили на белых беспородных крысах обоего пола. Животные были разделены на три группы. 1-я - контрольная (интактная) (п=16); 2-я - крысы, подвергшиеся полупринудительной алкоголизации 15% водным раствором этанола (группа сравнения) (п=32); 3-ю группу составили крысы, у которых моделировали ЭХАП (п=32).

Для моделирования ЭХАП животным под эфирным наркозом проводили срединную лапаротомию, выделяли ПЖ и в её ткань вводили 0,1 мл 1% раствора тритона Х-100. Операционную рану зашивали послойно наглухо. Затем в течение 3-х месяцев вместо воды для питья давали 15% водный раствор этанола [З.И.Микашинович с соавт., 2010]. Гибель крыс во время операции и сразу после неё составила 10% от всех прооперированных животных. Крыс выводили из эксперимента декапитацией под эфирным наркозом. Определение биохимических показателей и забор материалов на морфологическое исследование проводили на второй и третий месяц эксперимента.

Изменения в ткани ГТЖ, трактуемые как ХП, подтверждены гистологическим исследованием, проведённым на базе морфологического центра ГОУ ВПО РостГМУ Росздрава. Для гистологического исследования кусочки ПЖ экспериментальных крыс фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином-эозином. Морфологическим подтверждением ЭХАП явилась атрофия ацинусов, разрастание соединительной и жировой ткани, лимфоцитарная и макрофагальная инфильтрация (рис. 1). При алкоголизации без предварительного повреждения ПЖ имелась атрофия ацинарной, разрастание жировой и соединительной ткани (рис. 2). Лимфоцитарная и макрофагальная инфильтрация отсутствовали.

Рис. 1. Хронический панкреатит, полученный совместным использованием 2-х токсичных веществ (тритона Х-100 и этанола): разрастание соединительной (а) и жировой гкани (б), лимфоцитарная и макрофагальная инфильтрация (в), атрофия ацинусов (г); окраска: гематоксилин-эозин; увеличение х 200

При изучении метаболического обеспечения газотранспортной функции эритроцитов определяли уровень 2,3-ДФГ в эритроцитах неэкзкматическим методом по общему и неорганическому фосфору

[И.С.Луганова, М.Н.Блинов, 1975]. Количество 2,3-ДФГ выражали в ммоль/л плотного осадка эритроцитов.

Рис. 2. Поджелудочная железа крысы на 3-м месяце полупрннуднтельной алкоголизации: разрастание жировой (а) и соединительной ткани (б), атрофия ацинусов (в); окраска - гематоксилин-эозин; увеличение х 200

Для рассмотрения направленности гликолитических процессов определяли уровень содержания молочной кислоты в эритроцитах, а также гомогенатах печени и миокарда крыс. Содержание лактата определяли по реакции с параоксидифенилом [В.В.Меньшиков, 1987], результат выражали в ммоль/л плотного осадка эритроцитов или мг белка (Рг) ткани. Пировиноградную кислоту (ПВК) определяли колориметрическим методом после образования 2,4-динитрофени.пгидразона [П.М.Бабаскин, 1981]. Результаты выражали в ммоль/л плотного осадка эритроцитов или мг Рг ткани.

Для изучения состояния АОС в эритроцитах, печени и миокарде определяли активность супероксиддисмутазы (СОД) методом, основанным на способности этого фермента снижать скорость окисления адреналина в щелочной среде [H.P.Misra. У.Fridovich, 1972]. Результат выражали в

условных единицах активности на г гемоглобина (НЬ) или мг Рг ткани в час. Активность каталазы определяли методом, основанным на образовании окрашенного в жёлтый цвет комплекса не разрушенной в ходе каталазной реакции перекиси водорода с молибдатом аммония [М.А.Королюк, Л.И.Иванова, И.Г.Майорова, 1988]. Активность выражали в милликаталах на г НЬ или мг Рг ткани в час. Активность глутатионпероксидазы (ГГЮ) определяли по методу, основанному на способности этого фермента катализировать реакцию взаимодействия восстановленного глутатиона (ВГ) с гидроперекисью третичного бутила [А.И.Карпищенко с соавт., 1999]. Результат выражали в мкмоль израсходованного в реакции субстрата на г НЬ или мг Рг ткани в час. Активность глутатионредуктазы (ГР) определяли спектрофотометрически по методу, основанному на измерении скорости окисления НАДФН [1.Саг1Ьег§, В.Маппетк, 1985; Л.Б.Юсупова, 1989]. Результат выражали в мкмоль на г НЬ или мг Рг ткани в минуту. Концентрацию ВГ определяли методом, основанным на образовании окрашенного соединения при взаимодействии с дитиобис-нитробензойной кислотой [О.Ь.ЕНтап, 1959]. Результат выражали в мкмоль / г НЬ или мг Рг ткани. Концентрацию малонового диальдегида (МДА) определяли в сыворотке крови колориметрическим способом по образованию в кислой среде триметинового комплекса, который обладает розовым цветом [И Д Стальная, 1977]. Результат выражали в нМ/мгРг.

Активность а-амилазы в плазме крови определяли амилокластическим методом по Каравею с использованием стандартного набора реактивов «КлиниТест-Альфа-амилаза», выражая ее в мг крахмала, гидролизованного 1 л биологической жидкости за 1 секунду при 37°С. Активность МВ-фракции креатинкиназы (КК-МВ) в плазме крови определяли энзиматическим кинетическим методом с использованием стандартного набора реактивов «Ольвекс Диагностикум», выражая ее в

международных единицах активности на литр. Активность МПО определяли в плазме крови спектрофотометрическим методом по скорости окисления дианизидина в присутствии перекиси водорода [S.J.Klebanoff, 1971; М.Г.Шафран, С.Н.Лызлова, 1975]. Результаты выражали в мкмоль/мгРг в минуту. Продукцию N0' лейкоцитами крови определяли по качественной реакции на нитриты с помощью реактива Грисса-Илосвая [Ю.В.Шебзухов с соавт., 1998]. Количество выработанного N0' лейкоцитами крови крыс выражали в [нМ/2-105клеток]-10"3.

Для расчёта результатов активности ферментов в эритроцитах и гомогенатах органов определяли соответственно содержание НЬ [И.С.Луганова, М.Н.Блинов, 1975] и белка [C.Lowry, N.Rosenberg, R.Randall, 1953]. Концентрацию НЬ выражали в г/мл гемолизата, белка -г/л плазмы или гомогената.

Статистическую обработку результатов исследования проводили согласно общепринятым методам с определением средней арифметической, ошибки средней с использованием программы Microsoft Excel. Достоверность различий между исследуемыми группами определяли с помощью t-критерия С тьюдента после проверки распределения на нормальность. Статистически достоверными считали отличия, соответствующие величине ошибки достоверности Р<0,05.

Результаты и их обсуждение Метаболические изменения в миокарде По результатам исследований в миокардиоцитах крыс отмечена более значительная реакция со стороны А ОС при формировании ЭХАП, по сравнению с группой животных, подвергшихся алкоголизации без предварительного повреждения ПЖ (рис. 3).

Изменения содержания лактата и ПВК в миокарде у животных (рис. 4), характеризующие степень тканевой гипоксии, указываю! на разницу в

перестройке окислительно-восстановительных процессов при алкоголизации на фоне поврежденной и интактной ПЖ.

Выявленные изменения активности КК-МВ (рис. 9) отражают развитие более выраженного синдрома цитолиза у крыс с формирующимся ЭХАП, чем у животных, подвергшихся алкоголизации. Алкоголизация без предварительного повреждения ПЖ к 3-му месяцу эксперимента не сопровождается признаками разрушения кардиомиоцитов, тогда как у крыс с ЭХАП синдром цитолиза остается.

20«

150

100

«П

-•П. !

®п

• Ог

2м

Зм

:3м

2м

Зм

1м

5м

1 Зм

2ч Зм

2м

Зм

2м

IV;

2 м

Зм

сод

сод гпо ГПО_ГТ_I Р

| П2-я группа И3~я группа]

Рис. 3. Изменения антиоксидантной системы в миокарде экспериментальных крыс Примечания: здесь и в дальнейшем активности ферментов и содержание исследуемых веществ выражаются в процентах по отношению к цифрам животных контрольной группы, взятых за 100%; м - месяц; КАТ, СОД, ГПО, ГР, ВГ - соответственно каталаза, супероксиддисмутаза, глутатиониероксидаза, глутатионредуктаза, восстановленный глутагион; 2-я группа - крысы, подвергшиеся полупринудительной алкоголизации; 3-я группа - животные с экспериментальным хроническим алкогольным панкреатитом; » - р < 0,05 относительно интактных животных; а - р < 0,05 относительно крыс находящихся на полупринудительной алкоголизации соответствующего срока.

Выявленная нами более глубокая гипоксия в ткани миокарда у

животных с формирующимся ЭХАП, усиливающая наряду с другими

механизмами продукцию свободных радикалов, повреждающих, в свою очередь, клеточные мембраны, объясняет синдром цитолиза. При этом гиперпродукция лактата на фоне снижения содержания ПВК свидетельствует о переходе сердечной мышцы на анаэробный гликолиз, что можно расценивать как кратковременную защитную реакцию, необходимую для поддержания энергетики клетки.

•

Зм - - - О 2-я группа В 3-я группа

• п

• 2м • . п • п

1 2м ■у Зм [ 2м I зм | шшштш

Лактат Лактат ПВК ПВК

Рис. 4. Изменения уровня лактата и пировиноградной кислоты в миокарде экспериментальных крыс Примечания: м - месяц; ПВК - пировиноградная кислота; 2-я группа — крысы, подвергшиеся полупринудительной алкоголизации; 3-я группа - животные с экспериментальным хроническим алкогольным панкреатитом; значения показателей интактных животных приняты за 100%; • - р < 0,05 относительно интактных животных; а - р < 0,05 относительно крыс находящихся на полупринудительной алкоголизации соответствующего срока.

Полученные результаты свидетельствуют о большем вовлечении в патологический процесс миокарда при ЭХАП, чем при алкоголизации.

Метаболические изменения в печени При анализе параметров АОС в ткани печени прослеживается фазовый характер изменений, имеющий общую направленность у животных 2-й и 3-й групп (рис. 5). Отмечено достоверное постепенное повышение активности СОД, ГР и ГПО относительно контрольных цифр. Несмотря на однонаправленность сдвигов оцениваемых параметров, характеризующих состояние АОС, обращает на себя внимание существенно более выраженный метаболический ответ печени крыс при

ЭХАП на 2-м и 3-м месяце, по сравнению с животными, подвергшимися алкоголизации.

На 3-м месяце эксперимента содержание ВГ в печени крыс 3-й группы оказалось достоверно ниже, чем в группе сравнения, что говорит о большем его расходе для обеспечения потребностей АОС, возросших в условиях ЭХАП.

Активность каталазы, напротив, имеет иной характер изменений. Если в группе сравнения ее активность последовательно снижается через 2 и 3 месяца, соответственно на 53% (р<0,05) и 86% (р<0,05), то в 3-й -динамика иная.

Рис. 5. Изменения антиоксидантной системы в печени экспериментальных крыс Примечания: м — месяц; КАТ, СОД, ГТГО, ГР, ВГ - соответственно каталаза, сунероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза,

восстановленный глутатион; 2-я группа - крысы, подвергшиеся полупринудительной алкоголизации; 3-я группа - животные с

жспериментальиым хроническим алкогольным панкреатитом; значения показателей ннгактных животных приняты за 100%; • - р < 0,05 относительно интакгяых жнвогных; « - р < 0,05 относительно крыс находящихся на полупринудительной алкоголизации соответствующего срока.

Так. через 2 месяца активность каталазы повышается на 7% (р<0,05), а через 3 месяца снижается на 86% (р<0,05). Учитывая большую эффективность каталазы, чем ГПО, в защите клеток от окислительного стресса, вызванного высокими концентрациями Н2С>2, можно утверждать, что выраженное угнетение активности каталазы печени при чрезмерной активации СОД говорит о развившейся декомпенсации в АОС этого органа. При этом, несмотря на токсичность 0~2, данный факт неблагоприятен, так как образующаяся в результате реакции Н202 является более сильным окислителем, дающим начало чрезвычайно активному ОН-радикалу. Полученные факты позволяют предполагать, что окислительный стресс у крыс с ЭХАП характеризуется большим снижением эффективности защитных молекулярных механизмов, по сравнению с животными, подвергшимися алкоголизации.

Более тяжелое течение патологического процесса у крыс, подвергшихся воздействию двух токсичных веществ, подтверждается также более выраженным накоплением лактата на 2-м месяце эксперимента у животных 3-й группы (рис. 6).

Лактат Лактат ПВК ГГВК

Рис. 6. Изменения уровня лактата и пирувата в печени экспериментальных крыс Примечания: м - месяц; ПВК - пировиноградиая кислота; 2-я группа - крысы, подвергшиеся полупринудительной алкоголизации; 3-я группа - животные с экспериментальным хроническим алкогольным панкреатитом; значения показателей интактных животных приняты за 100%; • - р < 0,05 относительно интакгных животных; а - р < 0,05 относительно крыс, находящихся на полупринудительной алкоголизации соответствующего срока.

Кроме того, в 3-й группе к окончанию эксперимента отмечен более выраженный падеж животных (80%), чем в группе сравнения (40%).

Метаболические изменения в крови В эритроцитах активизируется анаэробный гликолиз, о чём можно судить по содержанию молочной кислоты в этих клетках (рис. 7). Реакция эритроцитов на алкоголизацию и повреждение ткани ПЖ тритоном Х-100 в виде усиленного образования лактата можно расценивать как отражение генерализованной гипоксии в организме, более выраженной при

моделировании ЭХАГТ.

600

500 400 300 200 100 о

•п

«м-

-Зм-1

•п

2 м В и

•-П

2м '-Зм-

Л як га г Лактат 2,3 ДФГ 2,3 ДФГ

2м 1 Зм1 11 2»г Зм 11ВК пвк

□ 2-я группа

□ 3-я группа

Рис. 7. Изменения уровня лактата, пировиноградной кислоты и 2,3-дифосфоглицериновой кислоты в эритроцитах экспериментальных

крыс

Примечания: м - месяц; ПВК - пировиноградная кислота; 2,3-ДФГ - 2,3-дифосфоглицериновая кислота; 2-я группа — крысы, подвергшиеся полупринудительной алкоголизации; 3-я группа - животные с

экспериментальным хроническим алкогольным панкреатитом; значения показателей иитактнмх животных приняты за 100%; • - р < 0,05 относительно интактных животных; а - р < 0,05 относительно крыс, находящихся на полупринудительной алкоголизации соответствующего срока.

Учитывая, что отличительной чертой гликолиза в эритроцитах является наличие шунта, приводящего к образованию 2,3-ДФГ -аллостерического регулятора сродства НЬ к кислороду, являющегося чувствительным показателем изменения оксигенации тканей, выявленное нами изменение содержания 2,3-ДФГ (рис. 7) говорит о развитии выраженной компенсаторно-приспособительной реакции при ЭХАП за

счет включения модуляционного механизма, что в сопоставлении с возрастающим уровнем лактата является отражением более тяжелой генерализованной гипоксии.

При рассмотрении состояния АО С эритроцитов (рис. 8) отмечается чрезмерная активация СОД на фоне угнетения активности кагалазы, что говорит в пользу развивающейся декомпенсации АОС, более выраженной при ЭХАП.

КАТ КАТ СОД СОД гпо ГПО ГР_ГР вг вг

I □ 2-я группа В 3-я группа I

Рис. 8. Изменения антиоксидантной системы в эритроцитах экспериментальных крыс Примечания: м - месяц; КАТ, СОД, ГПО, ГР, ВГ - соответствен»™ каталаза, супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза,

экспериментальным хроническим алкогольным панкреатитом; значения показателей интактных животных приняты за 100%; • - р < 0,05 относительно интактных животных; о - р < 0,05 относительно крыс, находящихся на полупринудительной алкоголизации соответствующего срока.

При ЭХАП наблюдается более выраженная реакция глутатионовой системы эритроцитов крыс, по сравнению с животными, подвергшимися алкоголизации.

Выявлена противоположная динамика активности а-амилазы в рассмотренных группах (рис. 9). Данные изменения могут являться

свидетельством потери ПЖ большого процента функционирующей паренхимы и замещения ее соединительной тканью у животных с формирующимся ЭХАП. При этом алкоголизация без предварительного повреждения ПЖ сопровождается менее выраженными функциональными и морфологическими изменениями, что коррелирует с характером изменения активности а-амилазы в плазме.

Действительно, в препаратах ПЖ крыс с ЭХАП отмечается атрофия ацинусов. разрастание соединительной и жировой ткани лимфоцитарная и макрофагальная инфильтрация (рис. 1). В то время как при алкоголизации без повреждения ПЖ разрастание соединительной и жировой ткани менее выражено, а лимфоцитарная и макрофагальная инфильтрация отсутствовала (рис. 2).

300

2Э0

! 00

•п

Зм

!М

•п

Зм

-Щ

Зм

„•ГЦ

Зм

2 м

Зм

2м

2 м

Зм

,2м

Зм

АМИЛ АМИЛ КК-МВ КК-МВ МДА

| □ 2-

МДА

я группа

8 3-я группа

Рис. 9. Биохимические изменения в плазме экспериментальных крыс Примечания: м - месяц; МПО, АМИЛ, КК-МВ, МДА - соответственно миелонероксидаза, «-амилаза, МВ-фракция крсатинкииазы, малоновый диальдегид; 2-я грунна - крысы, подвергшиеся полупринудительной алкоголизации; 3-я группа - животные с экспериментальным хроническим алкогольным панкреатитом; значения показателей интактных животных приняты за 100%; в - р < 0,05 относительно интактных животных; а - р < 0,05 относительно крыс, находящихся на полупринудительной алкоголизации соответствующего срока.

Изменение уровня МДА в плазме (рие. 9), свидетельствует о более выраженном оксидативном стрессе при формировании ЭХАП, чем при алкоголизации.

По нашим данным, изменение МО'-синтазной активности лейкоцитов крыс (рис. 9) говорит в пользу наличия очага воспаления в организме животных с поврежденной тритоном Х-100 ПЖ. Учитывая лимфоцитарную и макрофагальную инфильтрацию, разрастание соединительной ткани в ПЖ у крыс с ЭХАП и тропность N0', можно предположить развитие хронического воспаления железы у животных данной группы. При этом у животных, подвергшихся алкоголизации (без повреждения ПЖ), N0', как агрессивный фактор, в развитии системного поражения существенного значения не имеет.

По нашим данным, лейкоциты крыс 2-й и 3-й групп усиливают не только ГТО'-синтазную, но также и миелопероксидазную активность (рис.

9)-

Выводы

1. Совместным использованием 2-х токсичных веществ (тритона Х-100 и этанола) воспроизведена новая модель хронического алкогольного панкреатита на крысах, морфологическим подтверждением которой явились появившиеся в ткани поджелудочной железы атрофия ацинусов, разрастание соединительной и жировой ткани, лимфоцитарная и макрофагальная инфильтрация.

2. При экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите накопление 2,3-дифосфоглицерата в эритроцитах на фоне роста содержания лактата в миокарде и печени отражает включение компенсационного модуляционного механизма, усиливающего отдачу кислорода тканям при прогрессирующей генерализованной тканевой гипоксии.

3. До появления морфологических признаков хронического воспаления поджелудочной железы выявляется активация изучаемых параметров антиоксидантной системы в печени и эритроцитах, сменяющаяся к моменту формирования экспериментального хронического алкогольного панкреатита угнетением активности каталазы, на фоне сохраняющейся достоверной активации супероксиддисмутазы и глутатионовой системы, в то время как в сердечной мышце наблюдается постепенная активация всех изучаемых параметров антиоксидантной системы в течение всего эксперимента.

4. Динамика повышенной ТЧО'-синтазной и миелопероксидазной активности лейкоцитов крыс в период формирования экспериментального хронического алкогольного панкреатита может служить маркером хронизации воспалительного процесса в ткани поджелудочной железы.

5. Характер изменения антиоксидантной системы, глико логических процессов, активности миелопероксидазы, МВ-фракции хреатинкиназы и интенсивности перекисного окисления липидов, N0' плазмы крови указывают на вовлечение в патологический процесс печени, миокарда, эритроцитов и лейкоцитов при моделировании хронического алкогольного панкреатита, выраженное в большей степени, чем при алкоголизации.

Практические рекомендации

1. Повышение уровня 2,3-дифосфоглицерата в эритроцитах и {чЮ'-синтазной активности лейкоцитов на фоне сниженной активности а-амилазы плазмы крови можно использовать как ранний маркер развития хронического панкреатита, что важно для разработки эффективных профилактических мероприятий.

2. Определение МВ-фракции креатинкиназы необходимо включить в алгоритм лабораторной диагностики больных с панкреатитом для своевременного выявления ранних повреждений миокарда.

3. Повышенная NO'-синтазная активность лейкоцитов на фоне

сниженной активности а-амилазы плазмы крови может рассматриваться

как дополнительный критерий диагностики хронического алкогольного

панкреатита.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Воронкин, Д.А. Система липидной пероксидации в эритроцитах при алкогольном поражении поджелудочной железы / Д.А.Воронкин, Е.С.Бесштанько, Е.С.Моренко // 62-я Итоговая научная конференция молодых ученых: аннотации докладов и материалов дня науки — Ростов-на-Дону, 2008. - С. 149.

2. Воронкин, Д.А. Некоторые показатели метаболизма клеток крови при хронической алкоголизации / Д.А.Воронкин, В.В.Обманов, Д.Н.Костяков, Д.П.Колесникова // 62-я Итоговая научная конференция молодых ученых: аннотации докладов и материалов дня науки - Ростов-на-Дону, 2008. - С. 68.

3. Летуновский, A.B. Метаболическая реакция клеток крови при моделировании хронического панкреатита различными способами / А.В.Летуновский, Д.А.Воронкин, Л.В.Аносова, Д.П.Колесникова // Актуальные проблемы хирургии: материалы ежегодной объединенной научно-практической конференции кафедр хирургических болезней № 2 и № 4 / Ростовский государственный медицинский университет. -Ростов-на-Дону, 2008. - С. 33-36.

4. *Микашинович, З.И. Лейкоцитарная продукция нитроксильного радикала при экспериментальном повреждении поджелудочной железы / З.И.Микашинович, А.В.Летуновский, Д.А.Воронкин // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9, №1. - С. 148-149.

5. Микашинович, З.И. Метаболическая реакция некоторых органов при хронической алкоголизации на фоне поражения поджелудочной железы / З.И.Микашинович, А.В.Летуновский, Д.А.Воронкин, Е.С.Белоусова // Обмен веществ при адаптации и повреждении: материалы VII межвузовской конференции с международным участием / Ростовский государственный медицинский университет. — Ростов-на-Дону, 2008. -С. 85-87.

6. *Микашинович, З.И. Коррекция метаболических нарушений, вызванных хронической алкоголизацией, препаратом «тыквеол» / З.И.Микашинович, А.В.Летуновский, Д.А.Воронкин, Е.С.Белоусова // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия Медицина. -2008.-№7. -С. 375-378.

7. Обманов, В.В. Состояние антлокслдантной защиты и газотранспортной функции эритроцитов крыс при хронической алкоголизации /

B.B.Обманов, Д.П.Колесникова, Д.А.Воронкин // Вестник Российского государственного медицинского университета. Материалы III международной Пироговской студенческой научной конференции. -2008. - Т. 61, № 2. - С. 321-322.

8. Воронкин, Д.А. Фитопрепараты в коррекции метаболических нарушений, вызванных хронической алкоголизацией / Д.А.Воронкин, Е.С.Бесштанько, Е.С.Моренко // 63-я Итоговая научная конференция молодых ученых: аннотации докладов и материалов дня науки - Ростов-на-Дону, 2009.-С. 176.

9. Микашинович, З.И. Некоторые особенности обеспечения адаптационных процессов при экспериментальной гипоксии различного генеза и введении в рацион животных БАД / З.И.Микашинович, Е.С.Белоусова, А.В.Летуновский, Д.А.Воронкин // Научные труды X международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине» / Российский университет дружбы народов. - Москва, 2009. - С. 913-914.

10. Микашинович, З.И. Метаболическая характеристика восстановительного периода после моделирования острого панкреатита / З.И.Микашинович, А.В.Летуновский, Е.С.Белоусова, Д.А.Воронкин // Научные труды X международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине» / Российский университет дружбы народов. - Москва, 2009. - С. 10981099.

11 .Микашинович, З.И. Некоторые биохимические показатели в слюне и эритроцитах больных хроническим панкреатитом / З.И.Микашинович, А.В.Летуновский, Д.А.Воронкин, Е.Н.Серостанова // Обмен веществ при адаптации и повреждении: материалы VIII межвузовской конференции с международным участием / Ростовский государственный медицинский университет. - Ростов-на-Дону, 2009. -

C. 73-75.

!2.Микашинович, З.И. Metabolie correction at chronic alcoholisation by «Tykveol» preparation / З.И.Микашинович, А.В.Летуновский, Д.А.Воронкин, Е.С.Белоусова, P.Singh // Обмен веществ при адаптации и повреждении: материалы VIII межвузовской конференции с международным участием / Ростовский государственный медицинский университет. - Ростов-на-Дону, 2009. — С. 144-145.

13.Воронкин, Д.А. Информативные биохимические констелляции в слюне пациентов с алкогольным хроническим панкреатитом / Д.А.Воронкин Е.С.Бесштанько .// Материалы V научно-практической конференции молодых ученых с международным участием «Завадские чтения» / Ростовский государственный медицинский университет. - Ростов-на-Дону, 2010. - С. 11-12.

14.Воронкин, Д.А. Морфо-биохимические параллели в формировании

мультиорганной патологии при хронической алкоголизации / Д.А.Воронкин // V научная сессия Ростовского государственного медицинского университета. - Ростов-на-Дону, 2010. - Т. 1. - С. 158-159.

15.Летуновский, A.B. Метаболические изменения в миокарде при экспериментальном панкреатите различной этиологии / А.В.Летуновский, Д.А.Воронкин // Обмен веществ при адаптации и повреждении: материалы IX межвузовской конференции с международным участием / Ростовский государственный медицинский университет. - Ростов-на-Дону, 2010. - С. 75-77.

16.Пат. 2394280 Российская Федерация, МПК G 09 В 23/28. Способ моделирования хронического панкреатита / Микашинович З.И., Летуновский A.B., Воронкин Д.А., Белоусова Е.С., Бесштанько Е.С., Криволапова И.В.; заявители и патентообладатели Микашинович З.И., Летуновский A.B., Воронкин Д.А., Белоусова Е.С., Бесштанько Е.С., Криволапова И.В.. - №2009119277/14; заявл. 21.05.09; опубл. 10.07.2010, Бюл. №19. - 3 с. : ил.

* - работа, опубликована в журнале, включенном ВАК в Перечень ведущих

рецензируемых научных журналов и изданий

Список сок-ращепий

2,3-ДФГ — 2,3-дифосфоглицериновая кислота

АОС - аптиоксидантная система ВГ -восстановленныйглутатион ГПО - глутатионпероксидаза ГР - глутатнонредуктаза КК-МВ - MB-фракция креатинкиназы МДА - малоновый диальдегид МПО - миелопероксидаза

ПВК — пнровиноградная кислота

ПЖ— поджелудочная железа

СОД - супсроксиддисмутаза

XII - хронический панкреатит

ЭХАП - экспериментальный хронический

алкогольный панкреатит

НЬ — гемоглобин

Рг - белок

Воронкин Денис Алексеевич

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНАХ И КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 21.03.11 Набор компьютерный. Гарнитура Times. Усл.п.л. 1,6.

Тираж 100 экз. Заказ № 20 Отпечатано на копировально-множительной технике ИП Калашников, г. Краснодар, пр-т Чекистов, 22 dusya95@yandex/ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Воронкин, Денис Алексеевич

Список используемых сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Этиология хронического панкреатита.

1.2. Патогенез хронического панкреатита.

1.3. Метаболизм и патологические эффекты этанола.

1.4. Роль про- и антиоксидантов в развитии патологического процесса.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Постановка эксперимента.

2.2. Приготовление биологического материала.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Определение уровня 2,3-дифосфоглицерата.

2.3.2. Определение содержания молочной кислоты.

2.3.3. Определение содержания пировиноградной кислоты.

2.3.4. Определение активности ферментов антиоксидантной защиты (супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы, глутатионредукта-зы).

2.3.5. Определение концентрации восстановленного глутатиона.

2.3.6. Определение концентрации малонового диальдегида.

2.3.7. Определение активности маркёров цитолиза (а-амилазы и МВ-фракции креатинкиназы).

2.3.8. Определение активности миелопероксидазы.

2.3.9. Определение продукции оксида азота лейкоцитами крови.

2.3.10. Определение содержания гемоглобина и белка.

2.3.11. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Метаболические изменения в миокарде при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите и полупринудительной алкоголизации.

3.1. Антиоксидантная защита.

3.1.1. Супероксиддисмутаза и каталаза.

3.1.2. Восстановленный глутатион и ферменты его обмена.

3.2. Содержание лактата и пировиноградной кислоты.

Глава 4. Метаболические изменения в печени при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите и полупринудительной алкоголизации.

4.1. Антиоксидантная защита.

4.1.1. Супероксиддисмутаза и каталаза.

4.1.2. Восстановленный глутатион и ферменты его обмена.

4.2. Содержание лактата и пировиноградной кислоты.

Глава 5. Метаболические изменения в крови при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите и полупринудительной алкоголизации.

5.1. Эритроциты.

5.1.1. Метаболическая регуляция газотранспортной функции эритроцитов

5.1.2. Содержание лактата и пировиноградной кислоты.

5.1.3. Антиоксидантная защита.7 Г

5.1.3.1. Супероксиддисмутаза и каталаза.

5.1.3.2. Восстановленный глутатион и ферменты его обмена.

5.2. Плазма крови.

5.2.1. а-амилаза.

5.2.2. Креатинкиназа.

5.2.3. Миелопероксидаза.

5.2.4. Малоновый диальдегид.

5.3. Выработка оксида азота лейкоцитами:.::.

Обсуждение результатов собственных исследований.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНАХ И КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ"

Проблема злоупотребления алкоголем широко распространена во всем мире [H.L.Kröber, 1998; T.M.Goldfinger, 2003; J.Cochrane et al., 2003; W.Hao et al2004; М.И.Давыдов и соавт., 2007; R.Caetano et al., 2009; K.Kypri et al., 2009].

Отрицательные последствия алкоголизации общества напрямую связаны с качеством алкогольных напитков и количеством потребляемого этанола в расчёте на одного жителя в год при условном переводе в 100%-ный спирт. По данным Росстата, в России этот показатель в 2006 г. составил 9,5 л.

Печень, поджелудочная железа (ПЖ), желудочно-кишечный тракт наиболее подвержены патологическому действию алкоголя. Злоупотребление алкоголем и алкоголизм выявлены у 56-68% больных, состоящих на учете по поводу заболеваний органов пищеварения. ПЖ более чувствительна к алкоголю и поэтому так называемое относительно безопасное для печени количество алкоголя для ПЖ меньше в 2 - 3 раза. При употреблении алкоголя его содержание в клетках ПЖ достигает 60% от концентрации его в крови. Между количеством потребленного в год алкоголя и заболеваемостью острым панкреатитом (ОП) прослежена статистически значимая прямая корреляционная связь [В.М.Махов, 2006].

В развитых странах среди первичных форм хронического панкреатита (ХП) преобладает панкреатит алкогольной этиологии (от 70 до 80% всех случаев) [H.Cichoz-Lach et al., 2008]. Отличительной чертой ХГ1 алкогольного генеза считают системный характер поражения, более частое развитие осложнений и повышенный риск развития карциномы ПЖ, т. к. алкоголизм и кальцинаты ПЖ являются самостоятельными предрасполагающими онкологическими факторами [В.М.Махов, 2006]. 1

Актуальность проблемы ХП обусловлена не только ростом заболеваемости и высокой летальностью при нем, но и трудностями диагностики, нечётким представлением о механизмах возникновения и развития данной патологии. В связи с этим возможности профилактики и консервативного лечения ХП остаются достаточно скромными, а хирургические вмешательства направлены, как правило, лишь на устранение осложнений. Если патогенез вторичного панкреатита, обусловленного заболеваниями желчных путей, желудка и двенадцатиперстной кишки изучен достаточно, то в проблеме первичного ХП больше вопросов поставленных, чем решённых. Роль биохимических поломок в развитии данного заболевания раскрыта недостаточно. В работах, посвященных поражению висцеральных органов при воспалении ПЖ [Г.П.Гидирим, 1980; В.И.Ковальчук, 1982; В.М.Лащевкер, 1990; С.А.Шалимов с соавт., 1990; И.П.Верещагин, 1996; ТЛг'йа е1 а1., 1999; РЛ.МоЛек & а!., 2000; Ь.Арапя! е1 а1., 2008], недостаточно внимания уделено молекулярным аспектам патогенетической взаимосвязи между панкреатитом и патологией других внутренних органов. Не до конца ясна причина характерных изменений в интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) в периоды обострения воспалительного процесса в ПЖ и место этих процессов в структуре факторов, повреждающих панкреоциты [А.А.Гольдберг, 1987; О.Б.Любицкий с соавт., 1998]. Недостаточно внимания уделялось изучению функционирования антиоксидантной системы (АОС) организма в условиях развития ХП. Исследования данной системы могут оказаться полезными для понимания значения окислительного стресса в патогенезе изучаемого заболевания и его осложнений.

Цель • работы - изучить характер изменений биохимических параметров, ' отражающих функциональное состояние и степень вовлеченности в патологический процесс органов жизнеобеспечения (печени, миокарда), а также клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов) при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите (ЭХАП).

Задачи исследования

1. Предложить новую, эффективную модель экспериментального хронического алкогольного панкреатита' на' крысах под контролем' оценки выраженности деструктивных процессов в поджелудочной железе на основании показателей активности ферментов-маркёров цитолиза и морфологических находок.

3. Охарактеризовать изменения в системе антиоксидантной защиты (АОЗ) эритроцитов, печени и миокарда крыс при экспериментальном хроническом алкогольном панкреатите.

Новизна результатов исследования

3. Установлены новые критерии контроля хронизации воспалительного процесса в ткани поджелудочной железы (повышенная >Ю'-синтазная и миелопероксидазная активность лейкоцитов).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

Теоретическая значимость исследования Полученные факты способствуют расширению представлений о биохимических аспектах патогенеза первичной формы ХП, что может служить базой для дальнейших исследований в гастроэнтерологии.

Практическая значимость исследования Полученные результаты исследования могут быть отобраны в качестве информативных биохимических параметров прогнозирования развития морфологических изменений в ткани ПЖ. Созданная новая модель ЭХАП позволит расширить масштаб исследований разных форм панкреатитов и уточнить роль алкоголя в патогенезе панкреатита.

Внедрение результатов работы в практику Результаты исследования используются в учебном процессе кафедры общей' и клинической биохимии №1 Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 16 научных работ, включая 1 патент РФ на изобретение и 2 публикации в изданиях, определённых Высшей аттестационной комиссией.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), общей характеристики материала и методов биохимического исследования (глава 2), изложения полученных результатов (главы 3, 4, 5), обсуждения полученных результатов, выводов.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Воронкин, Денис Алексеевич

выводы

4. Динамика повышенной ЖУ-синтазной и миелопероксидазной активности лейкоцитов крыс в период формирования экспериментального хронического алкогольного панкреатита может служить маркером хронизации воспалительного процесса в ткани поджелудочной железы.

5. Характер изменения антиоксидантной системы, гликолитических процессов, активности миелопероксидазы, МВ-фракции креатинкиназы и интенсивности перекисного окисления липидов, уровня N0" плазмы крови указывают на вовлечение в патологический процесс печени, миокарда, эритроцитов и лейкоцитов при моделировании хронического алкогольного панкреатита, выраженное в большей степени, чем при алкоголизации.

ПРАКТИЧЕКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Повышение уровня 2,3-Дифосфоглицерата в эритроцитах и N0 -синтазной активности лейкоцитов на фоне сниженной активности а-амилазы плазмы крови можно использовать как ранний маркер развития хронического панкреатита, что важно для разработки эффективных профилактических мероприятий.

2. Определение МВ-фракции креатинкиназы необходимо включить в алгоритм лабораторной диагностики больных с панкреатитом для своевременного выявления1 ранних повреждений миокарда. .->-.

3. Повышенная ТчГО'-синтазная активность лейкоцитов на фоне сниженной активности а-амилазы плазмы крови может рассматриваться как дополнительный критерий диагностики хронического алкогольного панкреатита.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Воронкин, Денис Алексеевич, Краснодар

1. Аюкигитов Г.Н. Острый панкреатит / Г.Н. Акжигитов.- М.: Медицина, 1974,- 168 с.

2. Алексеев В.Н. Курс качественного химического полумикроанализа / В.Н. Алексеев.- М.: Госхимиздат, 1962.- 584 с.

3. Бабаскин М.П. Способ определения пировиноградной кислоты в крови.- А. с. № 877436, СССР. (4 с.).- Бюл. № 40, 1981.

4. Бабаян Э.А., Гонопольский М.Х. Наркология.- М.: Медицина, 1987.- 336с.

5. Баньковский A.A., Островский Ю.М., Сатановская В.И. Изоферменты алькогольдегидрогеназы печени и их роль в предпочтении крысами этанола // Вопросы медицинской химии.- 1986.- №2.- С. 34.

6. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов.- М.: Медицина, 1989.- 210с.

7. Билибин Д.П., Дворников В.Е. Патофизиология алкогольной болезни и наркомании.- М., 1991.- 350с.

8. Благовидов Д.Ф., Ганга П.Ф. Патогенез и диагностика панкреатита алкогольной этиологии // Советская медицина.- 1988.- №6.- С. 49-50.

9. Бурлакова Е.Б. Синергичный эффект антиоксидантов и фосфолипидов при окислении природных липидов // Вопросы питания.-1992.- №4.- С. 53-58.

10. Буров Ю.В., Ведерникова H.H. Нейрохимия и фармакология алкоголизма.- М.: Медицина, 1985.- 240с.

11. Бусверов А. О. Оксидативный стресс и его роль в повреждении печени // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии.- 1999.- №4.- С. 21-26.

12. Верещагин И.П., Золотарёв A.C., Кузнецов Д.И. Факторы риска развития синдрома полиорганной недостаточности при деструктивном панкреатите // Анестезиология и реаниматология.- 1996.- №3.- С. 43-45.

13. Винник Ю.С., Черданцев Д.В., Титова Н.М. и др. Состояние системы антиоксидантной защиты при остром панкреатите // Сибирское медицинское образование.- 2001.- №2.- С. 10-13.

14. Виноградов В.В., Арипов У.А., Гришкевич Э.В., Данилов М.В. Хирургия панкреатита.- Ташкент: Медицина, 1974.- 265 с.

15. Винокурова JI.B., Живаева Н.С., Царегородцева Т.М., Серова Т.И. Цитокиновый статус при* хроническом- панкреатите алкогольной и билиарной этиологии // Терапевтический архив.- 2006.- Т.78, №2. — С. 57-60.

16. Владимиров Г.В., Сергиенко В.И. Острый панкреатит: экспериментально-клинические исследования.- М.: Медицина, 1986.- 240 с.

17. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах.- М.: Наука, 1972.- 252с.

18. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика.-1991.- Т.29.- С. 1-249.

19. Внутренние болезни. В 10 кн. Кн. 10. Пер. с англ. /Под ред. Е.Браунвальда, К.Дж.Иссельбахера и др.- М.: Медицина.- 1997.

20. Волчкова Е.В., Лопаткина Т.Н., Сиволан Ю.П., Савченков В.А. Поражение печени в наркологической практике.- М.: Анахарсис, 2002.- 92с.

21. Галина Г.М. Провоспалитьельный профиль цитокинов у больрных хроническим панкреатитом и пути его медикаментозной коррекции: автореф. дис. . канд. мед. наук.- Уфа, 2002.- 24 с.

22. Геллер Л.И. Клиническая физиология поджелудочной железы.-Хабаровск, 1977.-318с.

23. Гидирим Г.П. Осложнения острого панкреатита // Хирургия.-1980.- №1.- С. 19-22.

24. Глускина В.М. Острый панкреатит.- Л.: Медицина, 1972.- 207 с.

25. Гольдберг A.A., Поберезкина Н.Б. Роль антиоксидантных факторов в патогенезе острого панкреатита // Клиническая хирургия.- 1987.-№11.- С. 23-24.

26. Гончар Н. В., Корниенко Е. А., Ткаченко Е. И. Спорные и нерешенные вопросы панкреатологии в практике педиатра и терапевта // Гастроэнтерол. С.-Петербурга.- 2005.- №3-4.- С. 29—32.

27. Губергриц Н.Б., Штода Л.А., Линевская К.Ю. и др. Бохимическая диагностика хронического рецидивирующего панкреатита // Клиническая лабораторная диагностика.- 1999.- №8.- С. 3-10.

28. Губергриц Н.Б., Христич Т.Н. Клиническая панкреатология.- -Донецк: ООО «Лебедь», 2000.- 416 с.

29. Давыдов М. И., Заридзе Д. Г., Лазарев А.Ф. Анализ смертности населения России // Вестн. Росс. Акад. мед. наук.- 2007.- №7,- С. 17-27.

30. Дегтярева И.И. Панкреатит.- Киев, 1992.- 250с.

31. Дубинина Е.Е., Шугалей Д.А. Окислительная модификация белков // Успехи современной биологии.- 1993.- Т. 113, №1.- С. 71-81.

32. Евгина С.А., Панасенко О.Н., Сергиенко В.И., Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липопротеинов крови человека, индуцированное гипохлорит-анионом // Биол. мембраны.- 1992.- Т. 9, №9.- С. 946-953.

33. Ерохин Ю. А., Пауков В. С. Изменения крови при хронической алкогольной интоксикации // Российский психиатрический журнал.- 2001.-№5.- С.58-62.

34. Жуков H.A., Ахмедов В.А., Ширинская Н.В. Хронический панкреатит и факторы, определяющие его развитие // Терапевтический архив.- 2003.- №2.- С.73-77.

35. Жукова E.H. Роль депрессии биоантиоксидантов и дефицита ингибитора протеаз в механизме активации свободно-радикального окисления и протеолиза при хроническом панкреатите // Терапевтический архив.- 2000.- №2.- С. 29-31.

36. Захаров Ю.А., Лечение алкоголизма.- М.: ООО «Школьная пресса», 1999.- 160 с.

37. Зенков Н.К. Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты.- М.: Наука/Интерпериодика, 2001.- 340 с.

38. Ивашкин В.Т. Современные проблемы клинической панкреатологии//Вестник РАМН.- 1993.- №4.- С. 29-34.

39. Каган В.Е., Орлов О.Н., Прилипко Л.Л. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика.- 1986.- Т. 18> С. 1-135. • • . •

40. Кения М.В., Лукаш Л.И., Гуськов Е.И. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе // Успехи современной биологии.- 1993.- Т. 113, №4.- С. 456-470.

41. Ковальчук В.И. Патогенез функциональной недостаточности печени при остром панкреатите // Вестник хирургии имени И.И. Грекова.-1982.- Т. 128, №6.- С. 26-29.

42. Колесова O.E., Маркин A.A., Федорова Т.Н. Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах // Лаб. дело.- 1984.- №9.- С. 540-546.

43. Комиссарова И. А. Механизмы формирования алкоголизма // Вопросы наркологии.- 1994.- №4.- С. 19-22.

44. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело.- 1988.- Т. 64, №3.- С. 16-17.

45. Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия.- Киев: Вища школа.-1989.- 447 с.

46. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред. В.В.Меньшикова.- М.: Медицина, 1987.- 232 с.

47. Лащевкер В.М. Острый панкреатит: клиника, диагностика, лечение.- Киев: Здоров'я, 1982.- 168 с.

48. Лащевкер В.М. Панкреатогенный перикардит // Клиническая хирургия.- 1990.- №11.- С. 56-60.

49. Лопаткина Т. Н. Хронический панкреатит: проблемы диагностики, роль нарушений желчевыведения и подходы к лечению // Клин, фармакол. и тер.- 2004.- №1.- С. 9-12.

50. Лопаткина Т. Н. Хронический панкреатит: факторы риска, прогноз и лечение // Клин, фармакол. и тер.- 2005.- №1.- С. 21-23.

51. Луганова И.С., Блинов М.Н. Определение 2,3-дифосфоглицерата неэнзиматическим методом и АТФ в эритроцитах больных хроническим лимфолейкозом // Лабораторное дело.- 1975.- №7.- С. 652-654.

52. Лужников Е.А. Кпиничская токсикология.- М.: Медицина, 1994.256 с.

53. Магалиф А.Ю. О клинико-биологических корреляциях при алкоголизме // Независимый психиатрический журнал.- 2003.- №2.- С. 55-58.

54. Малашенкова И.К. и др. Интерфероны и индукторы их синтеза (обзор) // Терапевтический архив.- 1998.- №11.- С. 35-39.

55. Мараховский Ю.П. Хронический панкреатит: Новые данные об этиологии и патогенезе. Современная классификация. Успехи в диагностике и лечении // Русский медицинский журнал.- 1998.- №3.- С. 1-12.

56. Маринов Б.С., Обидин А.Б., Гуляева Н.В. Изменение активности супероксиддисмутазы под действием доноров и акцепторов электронов // Биохимия.- 1987.- Т. 52, №5.- С. 846-849.

57. Маркова И.В., Неженцева М.В. Фармакология.- Спб.: Сотис 1997.- 455 с.

58. Маркова И.Н., Марков И.Н., Колесова O.E., Чудных С.М. Коррекция антиоксидантной защиты в комплексной терапии деструктивного панкреатита // Первый Московский международный конгресс хирургов.- М., 1995.- С. 213-214.

59. Махов В.М. Хронический алкогольный панкреатит: имеются ли основания для выделения его в отдельную рубрику? // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии,- 2000.- Т. 10, №5.- С. 7679.

60. Махов В.М. Системная патология органов пищеварения алкогольного генеза // Русский медицинский журнал. Болезни органов пищеварения.- 2006.- Т. 8, №1.- С.5-13.

61. Медицинские лабораторные технологии. Том 2. / Под ред. А.И.Карпищенко.- СПб.: «Интермедика», 1999.- 348с.

62. Меныцикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К., Бондарь И.А., Круговых Н.Ф., Труфакин В.А. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты.- М.: Фирма «Слово», 2006.- 556 с.

63. Микашинович З.И., Летуновский A.B., Воронкин Д.А., Белоусова Е.С., Бесштанько Е.С., Криволапова И.В. Способ моделирования хронического панкреатита. Патент № 2394280 РФ (3 с.).- Приоритет от 21.05.09.-Опубл. 10.07.2010.- Бюл.№19.

64. Минушкин О. Н., Масловский J1. В. Этиологические аспекты терапии хронических панкреатитов // Consilium Medicum.- 2005.- №6.- С. 448-451.

65. Моисеев B.C. Алкогольная болезнь: поражение внутренних органов при алкоголизме.- М., 1990.- 129 с.

66. Морозов Ю.Е., Охотин В.Е., Коновко О.О., Калиниченко С.Г. Окисляющие этанол и ацетальдегид ферменты мозга при отравлении алкоголем // Вопросы наркологии.- 2003.- №2.- С. 62-73.

67. Нестеренко Ю.А. Хронический панкреатит.- М.: Издатель Мокеев, 1999.- 182 с.

68. Новодержкина Ю.Г. и др. Изменение в содержании витамина С в крови и моче больных хроническими гастритами, язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки в процессе диетотерапии // Вопросы питания.- 1992.-№4.- С. 13-16.

69. Нужный В.П. Методологические аспекты оценки токсичности спиртосодержащих жидкостей и алкогольных напитков // Токсикологический вестник.- 1999.-№4.- С. 2-10.

70. Нужный В.П. Механизмы и клинические проявления токсического действия алкоголя // Руководство по наркологии / Под ред. Н.Н. Иванца,- М.: Медпрактика, 2002.- С. 74-93.

71. Осипенко М. Ф., Венжина Ю. Ю. Проблемы экскреторной недостаточности поджелудочной железы // Экспер. и клин, гастроэнтерол.-2004.- №4.- С. 44-47.

72. Осипов А.Н., Якутова Э.Ш., Владимиров Ю.А. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа // Биофизика.- 1993.- Т. 38, №3.- С. 390-396.

73. Островский О.М., Садовник М.Н. Пути метаболизма этанола и их роль в развитии алкоголизма // Успехи науки и техники. Сер. Токсикология.-1984.- Т. 13.- С. 93-150.

74. Панченко Л.Ф., Герасимов Л.М., Антоненков В.Д. Роль пероксисом в патологии клетки.- М.: Медицина, 1981.- 207 с.

75. Пауков B.C. Алкогольная болезнь // Архив патологии.- 1994.- Т. 56, №1.- С. 38-45.

76. Подымова С.Д. Болезни печени: Руководство для врачей.- М., 1998.- 308 с.

77. Попова A.B., Попов А.П. Глутатионпероксидаза и каталаза плазмы крови больных острым панкреатитом // Актуальные вопросы клинической медицины: сб. научных трудов, посвященных 30-летию факультета усовершенствования врачей.- Ставрополь, 1999.- 0.53-56'.

78. Рослый И.М., Абрамов C.B., Агаронов В.Р., Иванов A.B., Шуляк Ю.А. Биохимия и алкоголизм: метаболические процессы при алкоголизме // Вопросы наркологии.- 2004.- №2.- С. 70-79.

79. Садыков В.М. Клиническое течение алкогольного панкреатита // Терапевтический архив.- 2003.- №2.- С. 45-48.

80. Смирнов Д.А. Острый панкреатит и биооксиданты // Хирургия.-1994.- №3.- С.27-30.

81. Стальная И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии.-М.: Медицина.- 1997.- С. 66-68.

82. Статистический сборник ФС Российской статистики. Социальное положение и уровень жизни населения России.- М.: Росстат, 2008.

83. Сыновец O.A. Модуляция цитокинового каскада как один из патогенетических механизмов формирования острого экспериментального панкреатита // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии.- 2000.- №6.- С. 37-43.

84. Тарасенко B.C., Никитенко В.И., Кубышкин В.А. Острый панкреатит и транслокация бактерий // Вестник хирургии имени И.И. Грекова.- 2000.- Т. 159, №6.- С. 86-89.

85. Тиунов JI.А., Иванова В.А. Роль глутатиона в процессах детоксикации // Вестник Академии Медицинских Наук СССР.- 1988.- №1.- С. 62-69.

86. Трухан Д.И. Аутоиммунный вариант течения хронического панкреатита // Рос. гастроэнтерол. журн.- 1999.- №2.- С. 54-61.

87. Трухан Д.И., Полуэктов В.Л. Иммунный и неиммунный варианты острого панкреатита // Вестник хирургии имени И.И. Грекова.- 2000.- Т. 159, №1.- С. 17-20.

88. Успенский А.Е. Токсикологическая характеристика этанола // Итоги науки и техники. Сер. Токсикология.- 1984.- №3.- С. 5-44.

89. Хазанов А.И., Васильева А.П., Спесивцев В.Н. Хронический панкреатит, его течение и исходы // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии.- 1999.- №4.- С.24-30.

90. Ходжаева Н.И., Алматов К.Т. Фосфолипидный состав эритроцитов крови больных хроническим алкоголизмом // Вопросы наркологии.- 1990.- №4.- С. 40-44.

91. Хуцишвили М.Б., Рапопорт С.И. Свободно-радикальные процессы и их роль в патогенезе некоторых заболеваний органов пищеварения // Клиническая медицина.- 2002.- №10.- С. 10-15.

92. Циммерман Я. С. Хронический холецистит и хронический панкреатит. Пермь, 2002.- 180 с.

93. Циммерман Я. С. Хронический панкреатит: современное состояние проблемы // Клиническая медицина.- 2007.- Т. 85, №1.- С. 16-20.

94. Черданцев Д.В., Винник Ю.С. Диагностика и лечение окислительного стресса при остром панкреатите.- Красноярск, 2002.- 148 с.

95. Числовский К.И. Асимметрии иннервации поджелудочной железы и её практическое значение // Нов. хир. арх.- I960.- №1,- С. 24.

96. Шабанов П.Д. Руководство по наркологии.- СПб., 1998.-560 с.

97. Шабанов П.Д. Основы наркологии.- М.: Издат-во «Лань», 2002.560 с.

98. Шабанов П.Д. Наркология: Практическое руководство для врачей.- М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003.- 560 с.

99. Шалимов С.А., Радзиховский А.П., Ничитайло М.Е. Острый панкреатит и его осложнения.- Киев: Наукова думка, 1990.- 272 с.

100. Шаронов Б.П., Говорова Н.Ю. Антиокислительные свойства и деградация белков сыворотки активными формами кислорода, генерируемые стимулированными нейтрофилами // Биохимия.- 1988.- Т. 53, №5.- С.816-825.

101. Шафран М.Г., Лызлова С.Н. Очистка и некоторые свойства миелопероксидазы лейкоцитов белых мышей // Вопросы медицинской химии.- 1975.-№6.-С. 629-633. • •

102. Шебзухов Ю.В., Вайсбурд М.Ю., Артюшкин К.В., Мысякин Е.Б. Синтез окиси азота перитонеальными макрофагами мыши под действием С-реактивного протеина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1998.- Т. 125, №1.- С.48-50.

103. Шелыгин К.В., Кирпич И. А., Леонтьев В .Я., Соловьев А.Г. Методические рекомендации: Использование лабораторных животных в токсикологическом эксперименте / Под ред. проф., академика РАМН П.И. Сидорова.- Архангельск, 2002.- 20 с.

104. Шимунов Г.Я. Особенности изменения метаболических процессов в крови, печени и миокарде на разных стадиях острого экспериментального панкреатита и их коррекция: автореферат дисс. . канд. мед. наук.- М., 2006.- 26 с.

105. Юсупова Л.Б. О повышении точности определения активности глутатионредуктазы эритроцитов. // Лабораторное дело.- 1989.- № 4.- С. 1921.

106. Яковенко A.B. Хронический панкреатит: клиника и диагностика // Практикующий врач.- 1998.- №13.- С. 36-37.

107. Якутова Э.Ш., Дремина Е.С., Евгина С.А. и др. Образование свободных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа (II) // Биофизика.- 1994.- Т. 39, №2.- С. 275-279.

108. Якутова Э.Ш., Осипов А.Н., Костеноко О.В. и др. Взаимодействие гипохлорита с оксигемоглобином приводит к освобождению железа в каталитически активной форме // Биофизика.- 1992.- Т. 37, №6.- С. 1021-1028.

109. Abe R., Shimosegawa Т., Moriizumi S. et al. Lipopolysaccharide induces manganese superoxide dismutase in the rat pancreas: its role in caerulein pancreatitis // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1995.- Vol. 217.- P. 1216-1222.

110. Agarwal D.P. et al. Human aldehyde dehydrogenase isozymes and alcoholsensitivity. Isozymes. // Curr. Top. Biol. Med. Res.- 1987.- Vol. 16.- P. 2148.

111. Agarwal D.P. и Goedde H.W. Human aldehyde dehydrogenases: their role in alcoholism// Alcohol.- 1989.- Vol. 6.- P. 517-23.

112. Aparisi L., Sabater L., Del-Olmo J., Sastre J. Does an association exist between chronic pancreatitis and liver cirrhosis in alcoholic subjects? // World J. Gastroenterol.- 2008.-Vol. 14(40).-P. 6171-6179.

113. Arita Т., Matsunaga N., Takano К., Hara et al. Hepatic perfusion abnormalities in acute pancreatitis: CT appearance and clinical importance // Abdominal Imaging.- 1999.- Vol. 24, N2.- P. 157-162.

114. Bachmann S., Mundel P. Nitric oxide in the kidney: synthesis, localization, and function // Amer. J. Kidney Diseases.- 1994.- Vol. 24.- P. 112129.

115. Basso D., Panzozzo M.P., Fabris C. et al. Oxygen-derived free radicals in patients with chronic pancreatic and other digestive disease // J. Clin.Pathol.- 1990.- Vol. 43.- P. 403-404.

116. Beutler E., Moroose R., Kramer L. et al. Gamma-glutamylcysteine synthetase deficiency and hemolytic anemia // Blood.- 1990.- Vol. 75.- P. 271-273.

117. Birk D., Schoenberg M.N., Eisele S. et al. The involvement of oxygen radicals in acute pancreatitis. Clinical and experimental results of scavenger therapy // Med. Klin.- 1995.- Bd. 90.- P. 32-35.

118. Boes M., Debye C., Pincemail J. Degradation of membrane phospholipids by direct nucleophilic action ofsuperoxide anion // Free Radicals, Lipoproteins and Membrane Lipids.- N.Y.: Plenum Press, 1989.- P.105-113.

119. Bosron W.F., Li T.K. Genetic polymorphism of human liver alcohol and aldehyde dehydrogenases, and their relation ship to alcohol metabolism and alcoholism // Hepatology.- 1986.- Vol. 6, N3.- P. 502-510.

120. Brown G.C. Regulation jf mitochondrial respiration by nitric oxide inhibition of cytochrome c oxidase // Biochim. Biophys. Acta.- 2001.- Vol. 1504.-P. 47-57.

121. Buhler R. et al., Hempel. J. Kaiser R. Human liver alcohol dehydrogenase 2 // Eur. J. Biochem.- 1984.- Vol. 145, N3.- P. 447-453.

122. Bulkley G.B. The role of oxygen free radicals in human disease //Surgery.- 1983.- Vol. 94, N3.- P.407-411.

123. Caetano R., Vaeth P.A., Ramisetty-Mikler S., Rodriguez L.A. The Hispanic americans baseline alcohol survey: alcoholic beverage preference across Hispanic national groups // Alcohol. Clin. Exp. Res.- 2009.- Vol. 33.- P. 150-159.

124. Candeias L.P., Stratford M.R.L., Wardman P. Formation of hydroxyl radicals on reaction of hypochlorous acid with ferrocyanide, a model iron(II) complex // Free Radic. Res.- 1994.- Vol. 20.- P. 241-249.

125. Carlberg I., Mannervik B. Glutathione reductase // Mol. Enzymol.-1985.-N113.- P. 484-490.

126. Caro A.A., Cederbaum A.I. Oxidative stress, toxicology, and pharmacology of CYP2E1 // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.- 2004.- Vol. 44.- P. 27-42.

127. Carr L.G., Hartleroad J.Y., Liang Y., Mendenhall C., Mortitz T., Thomasson H. Polymorphism at the P450 2E1 locus is not associated with alcoholic liver disease in Caucasian men // Alcohol Clin. Exp. Res.- 1995.-Vol. 19, N1.- P. 182-184.

128. Carreras M.C., Franco M.C., Peralta J.G., Poderoso J J. Nitric oxide, complex I, and the modulation of mitochondrial reactive species in biology and disease // Mol. Aspects Med.- 2004.- Vol. 25.- P. 125-139.

129. Chambers G.K. The genetics of human alcohol metabolism // Gen. Pharmacol.- 1990.- Vol. 21, N3.- P. 267-272.

130. Chao Y.C., Lion S.R., Chung Y.Y., Tang H.S. et al. Polymorphism of alcohol and aldehyde dehydrogenase genes and alcoholic cirrosis in Chinese patients // Hepatology.- 1994.- Vol. 19, N2.- P. 360-366.

131. Chen Y.R., Chen C.L., Liu X. et al. Involvement of protein radical, protein aggregation, and effects on NO metabolism in the hypochlorite-mtdiated oxidaton of mitochondrial cytochrome c // Free Radic. Biol. Med.- 2004.- Vol. 37.-P. 1591-1603.

132. Cichoz-Lach H. et al. Alcohol-metabolizing enzyme gene polymorphisms and alcohol chronic pancreatitis among Polish individuals // HPB (Oxford).- 2008.- №10.- C. 138-143.

133. Cochrane J., Chen H., Conigrave K.M., Hao W. Alcohol use in China // Alcohol.- 2003.- Vol. 38.- P. 537-542.

134. Corbett J.A., Kwon G., Turk J., McDaniel M.L. IL-ip induces the coexpression of both nitric oxide synthase and cyclooxygenase by islets of Langerhans: Activation of cyclooxygenase by nitric oxide // Biochemistry.- 1993.-Vol. 32.-P. 13767-13770.

135. Crabb D.W., Bosron W.F., Li T.K. Ethanol Metabolism // Pharmacol. Their.- 1987.- Vol. 34, N1.- P. 59-73.

136. Dabrowski A. et all. The effect of platelet activating factor antagonist (BN 52021) on ceruleninduced acute pancreatitis with reference to oxygen radials //Int. J. Pancreatol.- 1991.- Vol. 8.- P. 1-11.

137. Duley J.A., Harris O., Holmes R.S. Analysis of human alcohol and aldehyde — metabolizing isozymes by electrophoresis and isoelectric focusing // Alcohol Clin. Exp.Res.- 1985.- Vol. 9, N3.- P. 263-273.

138. Dupont I., Lucas D., Clot P., Menez C. Cytochrome p450 2E1 inducibility and hydroxy ethyl radical formation // J. Hepatol.- 1998.- Vol. 28, N4.-P. 564-571.

139. Eaton J.W. Catalases and peroxidases and glutathione and hydrogen peroxide: Mysteries of the bestiary // J. Lab. Clin. Med.- 1991.- Vol. 118.- P. 3-4.

140. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups // Arch. Biochem. Biophys.-•1959.- Vol. 82.- P. 70-77.

141. Esterbauer H., Schaur R.J., Zollner H. Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal, malondialdehyde and related aldehydes // Free Radic. Biol. Med. 1991. - Vol. 11. - P. 81-128.

142. Fernandez C.J.C., Bellentani S., Tiribelli C. Alcohol-induced liver disease: from molecular damage to treatment // Rev. Med. Chil.- 2002.- Vol. 130, N6.- P. 681-690.

143. Floris R., Piersma S.R., Yang G. et al. Interaction of myeloperoxidase with peroxynitrite: A comparison with lactoperoxidase, horseradish peroxidase and catalase // Eur. J. Biochem.- 1993.- Vol. 215.- P. 767-775.

144. Folch E., Closa D., Prats N., Gelpi E., Rosello-Catafau J. Leukotriene generation and neutrophil infiltration after experimental acute pancreatitis // Inflammation.- 1998.- Vol. 22, N1.- P. 83-93.

145. Freeman B.D. Biological sites and mechanisms of free radical production // Free Radicals Molecular Biology, Aging, and Disease.- N.Y.: Raven Press, 1984.- P.43-52.

146. Gallen J J., Mitros F.A., Oberley L.W. Expression of antioxidant enzymes in diseases of the human pancreas: another link between chronic pancreatitis and pancreatitis cancer // Pancreas.- 2003.- Vol. 26, N1.- P.23-27.

147. Ganesh Pai C., Sreejayan Rao M.N. Evidence for oxidant stress in chronic pancreatitis // Indian J. Gastrienterol.- 1999.- Vol. 18, N4.- P. 156-157.

148. Gianotti L., Braga M., Alexander J.W. The intestine: a central organ in the pathogenesis of septic complications in acute pancreatitis // Chir. Ital.- 1995.-Vol. 47, N2.- P. 14-24.

149. Godin C., Caprani A., Dufaux J., Flaud P. Interactions between neutrophils and endothelial cells // J. Cell Sci.- 1993.- Vol. 106.- P. 441-451.

150. Goedde H.W., Agarwal D.P., Harada S. Alcohol metabolizing enzymes: studies of isozymes in human biopsies and cultured fibroblasts // Clin. Genet.- 1979.- Vol. 16, N1.- P. 29-33.

151. Goedde H.W., Agarwal D.P., Harada S. Population genetic studies on aldehyde dehydrogenase isozyme deficiency and alcohol sensitivity // Am. J. Hum. Genet.- 1983.- Vol. 35.- P. 769-772.

152. Goedde H.W., Agarwal D.P. Polymorphism of aldehyde dehydrogenase and alcohol sensitivity // Enzyme.- 1987.- Vol . 37, N1-2.- P. 2944.

153. Goldfinger TM. Beyond the French paradox: the impact of moderate beverage alcohol and wine consumption in the prevention of cardiovascular disease // Cardiol Clin. 2003.- Vol. 21.- P. 449-457.

154. Granger D.L., Hibbs J.B.J., Perfect J.R., Durack D.T. Metabolic fate of L-arginine in relation to microbistatic capability of murine macrophages // J. Clin. Invest.- 1990.- Vol. 85,- P. 264-273.

155. Guyan P.M. Heightened free adical activity in pancreatitis // Free Radical Biol. Med.- 1990.- Vol. 8.- P. 347-354.

156. Hao W., Su Z., Liu B., Zhang K., Yang H., Chen S., Biao M., Cui C. Drinking and drinking patterns and health status in the general population of five areas of China // Alcohol.- 2004.- Vol. 39.- P. 43-52.

157. Harada S., Agarwal D.P., Goedde H.W. Isozyme variations in acetaldehyde dehydrogenase in human tissues // Hum. Genet.- 1978.- Vol. 44, N2.-P. 181-185.

158. Harada S., Misawa S., Agarwal D.P., Goedde H.W. Liver alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase in the Japanese: role in alcohol intoxication // Am. J. Hum. Genet.- 1980.- Vol. 32, N1.- P. 8-15.

159. Hegyi P., Rakonczay Z., Sari R et al. L-arginine-induced experimental pancreatitis // World J. Gastroenterol.- 2004.- Vol. 10.- P. 2003-2009.

160. Hess W. Vegetative Funktionen und Zwischeuhirn.- Basel: B. Schwabe, 1986.- 669 S:

161. Hoffman M.E., Mello-Filho A.C., Meneghini R. Correlation between cytotoxic effect of hydrogen peroxide and the yield of DNA strand breaks in cells of different species //Biochim. Biophys. Acta.- 1984.- Vol. 781.- P. 234-238.

162. Hogg N., Darley-Usmar V.M., Wilson M.T., Moncada S. Production of hydroxyl radicals from the simultaneous generation of superoxide and nitric oxide // Biochem. J.- 1992,- Vol. 281.- P. 419-424.

163. Ischiropoulos H., Zhu L., Chen J. Et al. Peroxynitrite-mediated tyrosine nitration catalyzed by superoxide dismutase // Arch. Biochem. Biophys.1992.- Vol. 298.- P. 431-437.

164. Jaakkola M. Pancreatitis in Finland between 1970 and 1989 // Gut.1993.-Vol. 34, N9.-P. 1255-1260.

165. Kim H. NF — kappab and cytokines in pancreatic acinar cells //J. KorcanMed. Sci.- 2000.- Vol. 15.- P.53-54.

166. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase: role in neutrophilmediated toxicity // Molecular Biology and Infectious Diseases.- Paris: Elsevier, 1971.- P. 283-289.

167. Klebanoff S J. Oxygen metabolites from phagocytes // Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates.- N.Y;: Raven Press, 1992.- P. 541-588.

168. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase: friend and foe // J. Leukoc. Biol.-2005.- Vol. 77.- P33-39.

169. Kohn H.I., Liversedge M. On a new aerobic metabolite whose production by brain is inhibited by apomorphine, emetine, ergotamine, epinephrine, and menadione // J. Pharmacol. Exp. Ther.- 1944,- Vol. 82.- P. 292300.

170. Kolb H., Kolb-Bachofen V. Nitric oxide: A pathogenic factor in autoimmunity//Immunol. Today.- 1992.-Vol. 13.-P. 157-160.

171. Koppenol W.H., Moreno J J., Pryor W.A. et al. Peroxynitrite, a cloaked oxidant formed by nitric oxide and superoxide // Chem. Res. Toxicol.-1992.- Vol.5.- P. 834-842.

172. Kothe K., Sachsenroder Ch., Reich J.G. Redox metabolism of glutathione in the red blood cells // Acta biol. med. germ.- 1975.- Bd. 34.- S. 203228.

173. Krebs H.A., Freldland R.A., Hems R. Inhibition of hepatic gluco-neogenesis by ethanol // Biochem J.- 1969.- Vol. 112.- P. 117-124.

174. Kröber HL. Psychiatric criteria of legal responsibility after the consumption of alcohol: the German situation // Eur. Addict. Res.- 1998.- Vol. 4.-P. 107-112.

175. Kuppusamy P., Zweier J.L. Characterization of free radical generation by xanthine oxidase. Evidence for hydroxyl radical generation // J. Biol. Chem.- • -1989.- Vol. 264.- P. 9880-9884.

176. Kusterer K. Leukocyte adhesion in experimental pancreatitis // Biorheology.- 1995.- Vol. 32, N2-3.- P. 200-201.'

177. Kypri K., Paschall M.J., Langley J., Baxter J., Cashell-Smith M., Bourdeau B. Drinking and alcohol-related harm among New Zealand university students: findings from a national Web-based survey // Alcohol Clin. Exp. Res.-2009.- Vol. 33.- P. 307-314.

178. Laposata E.A., Lange L.G. Presence of nonoxidative ethanol metabolism in human organs commonly damaged by ethanol abuse //Science. -1986.- Vol. 231, N4737.- P. 497-499.

179. Lasker J.M., Raucy J., Kubota S., Lieber C.S. Purification and characterization of human liver cytochrome P450 // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1987.-Vol. 148, N1.-P.232-238 .

180. Lefer A., Späth J. Pancreatic hypoperfusion and the production of a myocardiac depressant factor in hemorrhagic shock // Ann. Surg.- 1974.- Vol. 179, N6.- P. 868-876.

181. Lehnert P. Ätiologie und Patogenesese der chronischen Pankreatitis // Internist.- 1992.- Bd. 20.- S. 320-329.

182. Lepoivre M., Raddassi K., Oswald I. et al. Antiproliferative effects of NO synthase products // Res. Immunol.- 1991.- Vol. 142.- P. 580-583.

183. Lieber C. Ethanol metabolism, cirrhosis and alcoholism // Clin. Chim. Acta.- 1994.- Vol. 257, N1.- P. 59-84.

184. Lieber C.S. Citochrome P4502E1 its physiological and pathological role // Physiol. Rev.- 1997.- Vol. 77, N2.- P. 517-544.

185. Lin Y., Lu R.B., Lee T.F., Lin W.W. Dopamine D2 receptor gene is associated with alcoholism with conduct disorter // Alcohol Clin. Exp. Res.- 2001.-Vol. 25.-P. 177-184.

186. Lucas D., Menez C., Floch F. Cytochromes P450 genotypes and susceptibility to cirrhosis or upper aerodigestive tract cancer in alcoholic Caucasians // Alcohol. Clin. Exp Res.- 1996.- Vol. 20, N6.- P. 1033-1037.

187. Mandruppoulsen T., Corbett J.A., McDaniel M.L., Nerup J. What are the types and cellular sources of free radicals in the pathogenesis of type-1 (insulin-dependent) diabetes-mellitus // Diabetologia.- 1993.- Vol. 36.- P. 470-471.

188. Mannick J.B., Asano K., Irumi K. et al. Nitric oxide produced by human B lymphocytes inhibits apoptosis and Epstein-Barr virus reactivation // Cell.- 1994.- Vol. 79.-P. 1137-1146.

189. Marklund S.L. Extracellular superoxide dismutase in human tissues and human cell lines // J. Clin. Invest.- 1984.- Vol. 74.- P. 1398-1403.

190. Mathew P., Wyllie R., Van-Rente F. et al. Antioxidants in hereditary pancreatitis // Am. J. Gastroenterol.- 1996.- Vol. 91, N8.- P.1558-1562.

191. Mayer B., Werner E.R. In search of a function for tetrahydrobiopterin in the biosynthesis of nitric oxide //Naunyn. Schmiedberg's Arch. Pharmacology.-1995.- Vol. 351.-P. 453-463.

192. Meier-Tackmann D., Leonhart R.A., Agarwal D.P., Goedde H.W. Effect of acute ethanol drinking on alcohol metabolism in subjects with different ADH genotypes //Alcohol.- 1990.- Vol. 7, N5.- P. 413-418.

193. Melkova Z., Esteban M. Inhibition of vaccina virus DNA replication by inducible expression of nitric oxide synthase // J. Immunol.- 1995.- Vol. 155.-P. 5711-5718.

194. Misra H.P., FridovichY. The role of superoxide anion in the Autoxidation of Epinephrine and sisple Assay for Superoxiddismutase // J. Biol. Chem.- 1972.- Vol. 91.- P. 247.

195. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology // Pharmacol. Rev.- 1991.- Vol. 43.- P. 109142.

196. Moriwaki Y., Yamamoto T., Suda M. et al. Purification and immunohistochemical tissue localization of human xanthine oxidase // Biochim. Biophys. Acta.- 1993.- Vol. 1164.- P. 327-330.

197. Mortele K.J., Mergo P.J., Taylor H.M. Renal and perirenal space involvement in acute pancreatitis: spiral CT findings // Abdominal Imaging.-2000.- Vol. 25, N3.- P. 272-278.

198. Mozzhelin M.E., Vengerovskii A.I., Sukhodolo I.V. Liver damages during experimental acute pancreatitis // Bulletin of Experimental Biology and Medicine.-2001.-Vol. 132, №1.-P. 647-649.

199. Munday R., Winterboume C.C. Reduced glutathione in combination with superoxide dismutase as an important biological antioxidant defense mechanism // Biochem. Pharmacol.- 1989.- Vol. 38.- P. 4349-4352.

200. Nieto N., Friedman S.L. Greenwel P CYP 2E1 mediated oxidative stress induces collagen typ I expression in rat hepatic // Hepatology.- 1999.- Vol. 30, N4.- P. 987-996.

201. Nonaka A., Manabe T., Tamura K. Changes of xanthine oxidase, lipid peroxides, and superoxide dismutase in mouse acute pancreatitis // Digestion.-1989.- Vol. 43.- P. 41-47.

202. Norman J. A., Yang J.A., Fink G.A. et al. Soverity and morality of experimental pancreatitis are dependent on interleukin-1 converting enzyme (ICE) // Interferon Cytokine Res. 1997.- Vol. 17, №2. -P. 113-118:

203. Noronha-Dutra A.A., Epperlein M.M., Woolf N. Reaction of nitric oxide with hydrogen peroxide as a model for nitric oxide-mediated killing // FEBS Lett. 1993. - Vol. 321. - P. 59-62.

204. Ohnishi K., Lieber C.S. Reconstitution of the microsomal ethanoloxidizing system. Qualitative and quantitative changes of cytochrome P450 afte chronic ethanol consumption // J. Biol. Chem.- 1977.- Vol. 252, N20.- P. 7124-7131.

205. Ohta K., Hirata Y., Imai T., Marumo F. Interleukin-1-beta induces nitric oxide synthase by hamster pancreas beta-cell line (HIT-tl5) // Biomed. Res.1993.-Vol. 14.-P. 117-122.

206. Panasenko O.M., Arnhold J., Schiller J. et al. Peroxidation of egg yolk phosphatidylcholine liposomes by hypochlorous acid // Biochim. Biophys. Acta.1994.- Vol. 1215.- P. 259-266.

207. Pestalozzi D.M., Btihler R., Hess M. Wartburg 7-p Alcohol dehydrogenase in the gastrointestinal tract an immunohistochemical study // Alcoholism (N.Y.).- 1982.- Vol. 3.- P. 429-430.

208. Plee-Gautier E., Foresto F., Ferrara R., Lucas V. Genetic repeat polymorphism in theregulating region of CYP2E1 // Alcohol. Clin. Exp. Res.-2001.- Vol. 25, N6.- P. 800-804.

209. Pompella A., Maellaro E., Casini A.F. et al. Measurement of lipid peroxidation in vivo: A comparison of different procedures // Lipids.- 1987.- Vol. 22.- P. 206-211.

210. Porter T.D., Khani S.C., Coon MJ. Induction and tissue specific expression of rabbit cytochrome P450E2 genes // Mol. Pharmacol.- 1989. -Vol. 36, N1.-P. 61-65. • •

211. Poupon R.E., Nalpas B. Coutelle C Polymorphism of alcohol dehydrogenase //Hepatology.- 1992.- Vol. 15, N6.-P. 1017-1022.

212. Pritsos C.A. Cellular distribution, metabolism and regulation of the xanthine oxidoreductase enzyme system // Chem. Biol. Interact.- 2000.- Vol. 129.-P. 195-208.

213. Rabuazzo A.M., Buscema M., Caltabiano V. et al. Interleukin-1 beta inhibition of insulin release in rat peritoneal islets: possible involvement of G-proteins in the signal transduction pathways // Diabetologia.- 1995.- Vol. 38.- P. 779-784.

214. Radi R., Beckman J.S., Bush K.M., Freeman B.A. Peroxynitrite-induced membrane lipid peroxidation: The cytotoxic potential of superoxide and nitric oxide // Arch. Biochem. Biophys.- 1991.- Vol. 288.- P. 481-487.

215. Ramos C.L., Pou S., Britigan B.E. et al. Spin trapping evidence for myeloperoxidase-dependent hydroxyl radical formation by human neutrophils and monocytes // J. Biol. Chem.- 1992.- Vol. 267.- P. 8307-8312.

216. Raskin N.H., Sokoloff L. Brain alcohol dehydrogenase // Science.-1968.-Vol. 162.- P. 131-132.

217. Raskin N.H., Sokoloff L. Ethanol induced adaptation of alcohol dehydrogenase activity in rat brain // Nature (London).- 1972.- Vol. 236.- P. 138140.

218. Raskin N. Alcohol dehydrogenase in brain: a toxicologic role // Ann. N.Y. Acad. Sei.- 1973.- Vol. 215.- P. 49-53.

219. Rex D.K., Bosron W.F., Smialek J.E., Li T.K. Alcohol and aldehyde dehydrogenase isoenzymes in North American // Alcohol Clin. Exp. Res.- 1985. -Vol. 9, N2.-P. 147-152.

220. Richards D.M.C., Dean R.T., Jessup W. Membrane proteins are critical targets in free radical mediated cytolysis // Biochim. Biophys. Acta.- 1988.-Vol. 946.-P. 281-288.

221. Salter M., Knowles R.G., Moncada S. Widespread tissue distribution, species distribution and changes in < activity of Ca2+-dependent and- Ca2t-independent nitric oxide synthases // FEBS Lett.- 1991.- Vol. 291.- P. 145-149.

222. Sarles H. Patogenesis of chronic pancreatitis // Gut.- 1998.- Vol. 3.- P. 629-632.

223. Schoenberg M.N., Buchler M., Younes M. Et al. Effect of antioxidant treatment in rats with acute hemorrhagic pancreatitis // Dig. Dis. Sci.- 1994.- Vol. 39.-P. 1034-1040.

224. Schoenberg M.N., Buchler M., Picktrzyk C. et al. Lipid peroxidation and glutathione metabolism in chronic pancreatitis // Pancreas.- 1995.- Vol. 10.- P. 36-43.

225. Scholmerich J. Cytokines in inflammatory pancreatic disease // Gut.-1997.- Vol. 41, N3.- P. 75.

226. Scott M.D., Lubin B.H., Zuo L., Kuypers F.A. Erythrocyte defense against hydrogen peroxide: Preeminent importance of catalase // J. Lab. Clin. Med.- 1991.- Vol. 118.- P. 7-16.

227. Shigeta Y., Nomura F., Kida S., Leo M.A., Lieber C.S. Ethanol metabolism in vivo by the microsomal ethanol-oxidizing system in deermice lacking alcohol dehydrogenase // Biochem. Pharmacol.- 1984.- Vol. 33, N5.- P. 807-814.

228. Sies H. Oxidative stress From basic research to clinical application // Am. J. Med.- 1991.- Vol. 91, N3.- P. 31-38.

229. Song B.J., Gelboin H.V., Park S.S. Complementary DNA and protein sequences of ethanol inducible rat and human cytochrome P450 // J. Biolo. Chem.- 1986.- Vol. 261, N35.- P. 16689-16697.

230. Stelmaszynska T., Kukovetz E., Egger G., Schaur R.J. Possible involvement of myeloperoxidase in lipid peroxidation // Int. J. Biochem.- 1992.-Vol. 24.-P. 121-128.

231. Szuster-Ciesielska A. et all. Oxidative stress in blood of patients with alcohol-related pancreatitis // Pancreas.- 2001.- Vol. 22, N3.- P.261-266.

232. Sweiry J.H., Mann G.E. Role of oxidative stress in the pathogenesis of acute pancreatitis // Scand. J. Gastroenterol. 1996. - Vol. 31(suppl. 219). — P. 1015.

233. Takahashi T., Lasker J.M., Rosman A.S., Lieber C.S. Induction of cytochrome P450 in the human liver by ethanol // Hepatology.- 1993.- Vol. 17, N2.- P. 236-245.

234. Takase S., Yasuhara M. Takada A Changes in blood acetaldehyde levels after ethanol administration in alcoholics // Alcohol.- 1990.- Vol. 7, N1.- P. 37-41.

235. Talamini G., Bassi C., Falkoni M. et al. Alcohol and smoking as risk factors in chronic pancreatitis and pancreatic cancer // Dig. Dis. Sci.- 1999.- Vol. 44.- P. 1303-1311.

236. Tatsumi T., Fliss H. Hypochlorous acid and chloramines increase endothelial permeability: possible involvement of cellular zinc // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol.- 1994.- Vol. 36.- P. 1597-1607

237. Telek G., Regly-Myrei J., Koves G.C. et al. The first histological demonstration of pancreatic oxidative stress in human acute pancreatitis // Hepato-gastroenterology.- 2001.- Vol. 48.- P.1252-1258.

238. Thurman R., Brentzel H. The role of alcohol dehydrogenase in microsomal ethanol oxidation and the adaptive increase in ethanol metabolism due to chronic treatment with ethanol // Alcoholism.- 1977.- Vol. 1, N1.- P. 33-38.

239. Turrens J. F. Mitochondrial formation of reactive oxygen species // J. Physiol.- 2003.- Vol. 552, N2.- P. 335-344.

240. Uyesaka N., Hasegawa S., Ishioka N. et al. Effects of superoxide anions on red cell deformability and membrane proteins // Biorheology.- 1992.-Vol. 29.- P. 217-229.

241. Van Gossum A., Closset P., Noel E. et al. Deficiency in antioxidant factors in patients with alcohol-related chronic pancreatitis // Dig. Dis. Sci.- 1996.-Vol. 41, N6.- P. 1303-1311.

242. Verma A., Hirsch D.J., Glatt C.E. et al. Carbon monoxide: A putative neural messenger// Science.- 1993.- Vol. 259.- P. 381- 384.

243. Weisfeldt M.L., Zweier J.L., Flaherty J.I. Oxygen-derived free radicals and myocardial ischemic injury // Heart Dis.- 1988.- Vol. 3,- P. 60-72.

244. Weiss S.J. The role of superoxide in the destruction of erythrocyte targets by human neutrophils // J. Biol. Chem.- 1980.- Vol. 255.- P. 9912-9917.

245. Worning H. Incidence and prevalence of chronic pancreatitis.- Berlin: Springer, 1990.-P. 8-14.

246. Xenos E.S., Stevens R.B., Gores P.P. et al. IL-1 beta-induced inhibition of beta-cell function is mediated through nitric oxide // Transplant. Proc.- 1993.- Vol. 25.- P. 994.

247. Xiao L., Pimentel D.R., Wang J. et al. Role of reactive oxygen species and NAD(P)H oxidase in al-adrenoceptor signaling in adult rat cardiac myocytes // Am. J. Physiol. Cell Physiol.- 2002.- Vol. 282.- P. 926-934.

248. Yu B.P. Cellular defenses against damage from reactive oxygen species //Physiol. Rev.- 1994.- Vol. 74.- P. 139-162.3 / ¿J? /

249. Zelko I.N., Mariani T.J., Folz RJ. Superoxide dismutase multigene family: A comparison of the CuZn-SOD (SOD1), Mn-SOD (SOD2), and EC-SOD (SOD3) gene structures, evolution, and expression // Free Radic. Biol. Med.-2002.- Vol. 33.- P. 337-349.

Информация о работе

Воронкин, Денис Алексеевич
кандидата медицинских наук
Краснодар, 2011
ВАК 03.01.04

Диссертация

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНАХ И КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы