Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Механизмы сенсибилизирующего эффекта кофеина и 3-аминобензамида в культуре лимфоцитов человека

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Механизмы сенсибилизирующего эффекта кофеина и 3-аминобензамида в культуре лимфоцитов человека"

¿- (

ЕРЕВАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ УЦИВЕРСИШ'

На правах рукописи Т^ИРАКССЯГ1 Альорд Гезоргоино

МЕХАНИЗМЫ СЕНСМБШШЗИРШЦЕГ О ЭФФЕКТА КОФЕИНА 3 - АМИ ВОБЕНЗАМИД А В КУЛЬТУРЕ ЛИМФОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА

О.00. - Генетика

Л 1! Т О Г К Ф Е Р А Т

тгч'-о'^т'з"":: ;:;:глт::о о^о.юи:

г и Ск'.олигкчисках н ау к

Ереван - 1993

Работа выполнена на кафедре генетики и цитологии биологического факультета Ереванского государственного университета.

Научные руководители: доктор биологических наук,

профессор' Р.Ы.АРЛДОЯН

кандидат биологических наук, ст.н.с/ Р.Г.ЗМИНЯН

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

• В.А.НШШШШ кандидат биологических наук, ст.не. ' С.Г.БЯТАМЩ

Ьсдуцеа учреждение - ШИГМТОКС Минздрава Армении.

Защита состоится " " 1993 г. в " " час. на

заседании специализированного Совета К 055.01.04 по генетике при Ереванской государственном университете по адресу;

2750-15, Лриьнил, Ереван-49, ул.Чаренца,8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЕГУ.

Автореферат разослан 11 11 1993 г.

Учений секретарь сиециалиьироваиного Совета, кандидат биологических наук

\/З^Г.Ыугнецян

--------- Ан'ту»у -чоотъ-ппобпот.-Проблема - зэгрязнония - окружающей—.........

сриди .и:,. .м1 и, 1,ч.у ^ччудии.кшн Ни только Тл-иниоС'Гл РАЗ-

НЫХ веще Ста» НО И ВОЗМОЖНОСТИ модификации ИХ аффектов, которая М0...О';’ Про.: Ч'ДЛТь л р.ЧчЧ..-. ¡1 ь !!р Л>Ли Н к!!л. Т о К , I:.. и:,! и I! о НИй а;;,..--

иушоиоа ^.»^ОДЙТ К иЦЦ--иЦЦй «.'¿’^¡.'ШаОСО ^а«^. ир1.1ии11и^..>,

¿о других ...¡рпкиторов хл.;:;чс‘С:<ого :.:,угаге;.“.5Во , называв.....х

сонОислл:::. ■ -ров, о'1‘ охососст.ъовоть уоп.чицпь; до..ствип :.;ути-генных соединений. В настоящее время весьма серьезна именно

01Ш0т)0‘1'11 ЛшОнСЛиШЗацИ»] 11 ОЛоОыа туяагинии, КОлгОрЫО* 11 pH ХриДИ-

циопных методах токсико-генэтических исследований ранее считались относительно безвредными. Необходциость раСЛИЯНЯ безотход-

ных технологий подразумевает отсутствие потенциальной генетическом активности, в частности мутагенности, как самих продуцентов, так и получаемых с их помощью продуктов. Однако данные о мутагенной активности,на примере производства аминокислот, в нашей стране малочисленны. йодк^акеция '•— 4“ - о !• «н эти чес к их :-ч>~ ■ьектов ра:ч., паук. 1:11: и.

До И и с-л.. .._,ь ¡'и урч-мл!/: иинСпоплиЗА^.'уиЩОи дилотчло кодеина 1: ¿-иминиО^л - ■ з ~,у чи:!....- ;ч..;. ¿и^оот^О!.! ви.-.дч;..;твии с иными мутаген ........................................ ( ^.у. г.; , ¡чЛм ! г , хУйО; ■ ‘ 'ч.чп е1 ч) ,

.!.7-1 , .1.ЧЧ, ' ; . ^ . !: Г 1 :. : . , [У о'V '.<-•• I ' I , ■ •: ' ■■' , IРо 7') ,

ччиии пека ....;;] гиЗчч.чкчч":. !: С:;. :.л; и И'Г/чСТ,! лтчлч ¡¡О;.: :ч: ¡¡Литок

чиТ ч 1! и <А<! ,, , ■ ..С'Ччч ;...:. 1...44' ': .' Ч ГиН н О I ■ 0 о ич д.!:! - ГГ: _ ичр чЛ—

ловом кислота с помощью кодеина в З-а.чшгобеиззмпда (Арутвтш

с.,.,..........г.:-.,

,’ч:,.; люч/ч; ;, и; ч'.л::на у: ;ч.ч;■1'^чних к;..од.уч~

тов мх производства в сочетании с виаеуказаннима модификатора-

ми представлчбт весьма актуальную проблему* Для проведения подобных неслоловаиий в качество тост-системы целесообразно при-

-'¡1 ..Ч> м,'.. ■ ■ ■ .. , О! [>; •: V.... ч; ’ '.И т ¡',и 1' и ’ - ‘ I > > ' -1СОМ и ^ ,[0 II и И с

дЛ/1 VI оу Чи »1 л да а лпЛНиСпИл ^ у ли I1 ОпО.Ь (А1'и1чуи “

гч-.'П , ;:с- ■ •• , . .[[■:: и.л'Л с -и \Л. О ч'.. ^::-1

условий окепоршентов для ьияьления максииадьного оффекха сенсибилизаторов. Необходимыми предпосылками для проведения данной работы являлись эксперименты, проведенные с ^акционированием действия мутагенов в культурах лшфоцотов (Каграыаняи М.С.,

І... і . .. . •... по; . !:•••!<•; і'.а1ч;оі ' , ОЪ.:., 1984; Каїадеі^ ,

. 14.'. ‘ • '

сепсис..:;...заборов целесообразно в зксперпыеи.-,х, имеющих целью изучений слабых мутагенних факторов внешней среды. Для этого необходимо сопоставление уровней первичных поврежден',)'.: генетического иата^иа; а (например, однонитевых разрывов

■ • •. • .•«¡(і'їИЧЙСКИХ ¡^рушений. Подобный комплексний подход

ы«д нь;шлі»іюиои и дшіиой Работ«. '

Поль и задачи исоло;-.-зання. Цель настоящей работы заключалась в изучении модифицирующих свойств оонсибил>:~:пч>роь мутаї'О-неза на модени дейемзая лааиао, аргинина>а текло некоторых про-ме ¿о/точных продуктов их синтеза в зависимости от их концентраций (в том числе и при их фракционировании), условий совместной обработки с модификаторами, времени введения мутагенов и иода$ик8їрров.

Задачи, поставленный для достижения цели исследования,были следующие:

1. Оценка цитогенетической активности изучаемых соединении а культуре лимфоцитов человека.

2. Анализ возможности повышения уровня цитогенетических «зрушенії >1, индуцируемых исследуеышги соединениямисенсибилизаторами химического мутагенеза - кофеином и З-аыинобонаамидом (3-АЕ).

3. Выявление оптимального времени введения модификаторов в культуру для получения максимального сенсибилизирующего аффекта ,

•і-. Определение эффективности изучаемых соединений в зависимости от экспериментальных условий, а также фракционированного воздействия.

5. Изучение влияния шинобактарино (АЖ) (промежуточного продукта синтеза лизина) и кофеина на уровень однонитевых разрывов ДНК и анализ эффективности репарации индуцируеыых повреждений.

Научная новизна и практическая значимость. В настоящей работе впервые предпринята попытка изучения действия слабых мутагенов в комбинации с модификаторами химического мутагенеза -кофеином и 3-АБ.

Установлено, что промежуточный продукт синтеза лизина-АМБ обладает слабой мутагенной активностью.

iiUHB’IuHO ОТСуТСТВНе КЛЗСТОГ'ОШШХ UllOllCTU ( индукции 110-

в^еждонип хрсмоциы).лиаина. и. аргинина.-----------------------------------------

¡¡uhî!1.. . .л/ дое тви t: ми ' каторов - ко-

сина ii - на ¿¿охи:; цихишauïmчоиких новрвздений, индуцируемых лип ;;.и HT !; а Г О.'.: Л И ЗИП a i, JÛ.) И .TiiJüJKTupnHGi.;

(ni.iij). Ci.;;:'-:бИЛП За :;i:ü Moi;;; b;i,j ¡¡pu .ыидоППП a ОдИфИкатОрОВ

Hi-'/.', о . 1 <■ i) Oi ii j: j ./, 11 Ly I.Î î.J-4 ; i и J 'l'U v/.' L: i. Kü^omiüwi

клеток, инкубированных с А!.;Б, пэ уровне целостности структур ЛНК. В тс ^ iiùü»n, i:ii4Hffe4ü" ypor:::;". UXC, ыПлуцюиу«мих толгло

’ü'w" ■; АЖ, ■- вариантами их совиесиюй о op о бот к и с кофеином и 3-АБ не В!.:к..ндо достоььрнjx различии. .

Результата раоити позволим рекомендовать применение модификаторов (кotj_.'uиÜü и 3-АБ) при сенсибилизации эффекта слабых мутагенов для понимания механизмов их действия. Целесообразно комплексное использование представленных нами иегодических приемов изучения действия сенсибилизаторов н кулi-т,ура лимфоцитов.

uij; i:T , и Пи 1 Т Т.:, ТТ' ; .... и Т ^ Т :. : . ;f . 'Т ; ' Т И i—Ab На

'J\: 0;;HU Ц1Г .'СНОТИ s j t 1. , Д.: i. j u.J... : ;T..U И ¡'¿Li .

î{ü;h;1!и-; c ir j■ :üi;.1:.:з.;;.'и o.ja>;ктз ;пкзттp. ¡-к; уровни цп-

'L‘0 ]‘u Г U 'i' i*'i' ■'> - • .ÎX :!1 1з;. v-v-, w*: .4 Д1Щ*

Изучение затоптн^нозти /р.'р ¡.^Лонни:,:

• • * j . • f% t. - - - uw .iuw/i |Ц H »

Апробация заботы. Основные материалы диссертации доложены на конференциях про^исеорико-принодаватедьскосо состава Ереванского l’ÛU j ;:ТоирЗИТиТа (~T-V, 1 "■') 1 > L" Al'J.) .

О1,руку , ;.аа a \i\-- и • 1. /v;i';u';;.To:,aji еезтопт из ¿»Веде-

ния, О б ЗОрЯ Л И" С Г. j Tj'p й , иа.,а.;:!ПН ::.3 Те ; ЗЛО :J И ..еУиДОЪ , риЗУ'ЛВ-

'i1 о 'и и Ij L’KCj ! i. ОШ;3 Ulj'i'L1 ]j , О Г; i; j' 1 Û C'.^U i'O .J и Клл'Ч'., IKî )\ v ,:;UiiOAOi. U

оиолиографического указателя. Работа излокена па страни-

цах машинописи, содержит 8 рисунков, IÎ схем и 8 таблиц. Список литератур),) включает 178 но именований.

I- Культивирование лимфоцитов. Материалом во всех экспериментах служила цельная периферическая кровь здоровых доноров в возрасте от 20 до 4-0 лот. ' ' ' ..

Лимфоциты культивировали ПО общепринятой методике (Hunger-tord , 1965) в течение 76-т часов при температуре 37°С. После взятия крови, ее вводили в. стерильный флакон с гепарином (15 0} на I ил, крови). Культуру стимулировали добавлением ФГА фирмы Difco (фракция Р) из расчета 0,02 мл на 10 мл культуральной смеси. ■ .... , ■

2.0крашивание поепапя-гов. Для учета хромосомных аберраций препараты окрашивали азур-эозином. Для дифференциальной окраски сестринских хроматид на 23-ом часу культивирования вводили 5-бромдезоксиуридин (ЕДУ), при окрашивании препаратов использовали раствор Hoechst 33253 (0,5 мг/мл).

3. Метод цитогенетического анализа. Анализ хромосом проводили с помощью масляной иммерсии при увеличении 12,5x1,5x100. Отбирали метафааные пластинки, содержащие 2л+2 хромосом и отвечающие стандартном требованиям. Учитывали аберрации хроыатидио-го и хромосомного типов, согласно общепринятой классификации (Бочков, 19?ч, Ьахаров и соавт., 1982). Анализировали не мекие 100 метафазиих пластинок для каждого варианта эксперимента.

Учитывали частоту аберрантных клеток (в %), общее число аберраций, одиночных и парных разрывов, число обменов хроыосои на 100 imoïïük. Количество СЮ на клетку подсчитывалось при анализе 25-АО иетафаз на ка«гий вариаше.

4. ¡’Joтод определения о.рнонятэвых разрывов ДНК. Вещества вводили на разных сроках культивирования на 2 часа (согласно представленным в следующем разделе схемам). Для определения репарации повреждений ДНК, клетки после обработки вещостваыи отбывали и дополнительно инкубировали в свежей среде 2 часа.

Для определения одноннтевых разрывов ДНК методом хроматогра ipy.u на колонках с гидрокепапатитоы (ГАД)клетки метили Н°-тшди-пом (уд.акт. 18,6 Кы/мыоль) в точение 22 часов.Метка вводилась в концентрации 1,3-1,5 мкКю/мл на 20-ом часу'инкубации (Засу-хин а Г .Д. и др., 198?; Marin et al. ,1974; tydberg ,1975) .Клыки после OTMhjBü от веществ лизировали 15 мин при комнатной тем-

пературе і! тjühotü . (Состав днаируксдві’О раствора: О,03 И //*0!< ;

0 ,ül i.l //лгіг\-Оч_\ U ,09.М..л/aCt ;-pH- =-ІІ ,8-12,0у.Кзтсточнуга"'суспсн-зй» вносили .і 2 ил лидирующего раствора. оатьи дизат нейтрализовали 0,2 К 'XI , до pH-u,ü-7,?.. іірооьі обрабатывали улътрэзвуком Ріо іір: ,‘о УоДТ~2Т, при ролика 22 кГц, ¡юсл- '-¿оі1 о доба^дили

Д0ДЄЦ11ДСу .¡'і1 /vcv ДО т,‘І.

Проб-: :іі:с:::.ліл на продварптелдно 0,01 ”

митри:,-.!,!.. 1 v: L’ ¡.'/..u.. .іП-иі» «і примываЛИ 0,0Ш И

и,иь !.•! iiO'rput:'+.ü;;;!iü'Th’u:.i оу$иуои дян освобождение с™ свободной

Хроматографию проводили при ступенчатом градиенте //&,-бу-

фере ( рН=б,8; 60°С, колонки с терыостатирующай рубашкой).Од-нонитевую ДНК элюировали 0,12 М буфером, а длунитевую - 0,45 М. Скорость элюции 0,15 ші/мин ( перистальтический насос "Унилам11-Польша). Собирали по б мл элюата для каждой фракции. Далее добавляли бычий, сывороточный альбумин (Польша) до 100 мкг/мл и трихлоруксусную кислоту (ТХУ) (до 5% в пробо), на полчаса поискали .:; лод.:..уи бз ни. bat им проводили осогдосше ::э ш-ггроцел/ы-лоаныо ф;:д:- ¿и {"¿иы Пир" ^ и, дпа^иту О ,-Х і: промывку

2 püüa т. ' лУ і;о ь ¡¿а, ф^иедроиши 70;. ат а но л о и. Фильтры сушили, поио.'.т.гл и флакони с тодуолокии сцинтпллйгороы, затем оп-ридсдіиііл у,.л и‘о и н о и v ь по іГ-їішаді:иу ни ичатчико "Интертехник" ).

Увил а .но доли однонитевои фракции ДНК свидетельствует о яовреада^» действии химического соединения на ДНК, а восстановление двунитевой ДНК до контрольного уроыы, при постинкубации клеток • оае^о;: среде - о ропарои:!:; разрывов ДНК.

5. Используемые в работе соединения. З-ашшобензамид,

М.в. - 136,2, белый кристаллический порошок4растворим в вода.

Кофеин (бензоат лСг ), - 359, дорого растворим в ¿оде.

Аптечный препарат.

Кристаллический лизин - (1-а,£-диоминока!1роцова кислота)“ монохлорид. ¿.и. - 162,7, белый кристаллические порошок, легко растворим в зодо. •

Лизин гидрохлорид (пищевой), белый кристаллический порошок, легко растворим в воде. Отличается от кристаллического лизина большей степенью очистки. ,

Кормовой концентрат лизина (КЮ1), порошок коричневого цвет, полученный путом высушивания культуральной жидкости продуцента лизина. В нем содержится лизин и продукты метаболизма его продуцента. ККЛ почти нерастворим в водной среде.

Аминобокторин (АЖ), непрозрачная жидкость темно-коричнево го цвета* Хорошо растворяется в водной среде. Состав (% сухих веществ):

а) кислотосодержащая безазотистая органика - 33-35;

б) белковые вещества - 18-20 (аминокислоты - 3-5);

в) редуцирующие вещество - 6-8;

,г) минеральные вещоствэ - 38-42 (до 46);

д) витамины - 5-7.

Аргинин моногидрохлорид (I- оС-амиио-5-гуапидинволериэновая кислота), М.в. - 210,7, белый кристаллический порошок, хорошо растворим в воде.

Сорбционный сток аргинина содержит 7-15 г/л метил-о-»зомо-чевины и 0,07 г/л метанола.

Все аминокислоты и промежуточные продукты их производства были предоставлены НПО "Армбиотехнология".

6. Схемы введения веществ.

1. Для оценки цитогенетического действия лизина, аргинине

и промежуточных продуктов их синтеза культуры лимфоцитов обра батывали исследуемыми соединениями в четырех - пяти концентрациях -в диапазоне от 0,005% до 1,0% на 46-ом часу культивирования. \

2. С целью получения максимального уровня аберраций хромо сом ККЛ и АМБ вводили в культуры на 52-ом часу, а кофеин ¡¡Ю“*5 и 3-АБ (10мМ) на трех различных сроках культивирования - 28-ом 46-ом' и 70-ом часах.

3. Для анализа сенсибилизации модификаторами уровня цитогенетических повреждений, вызванных ККЛ и АМБ, эти соединения вводили в трех концентрациях на 52-ом часу культивирования, а модификаторы: кофеин (10“Л1) и 3-АБ (10 мМ) на 4-6-ом часу куль тивирования. При этом для дифференциального окрашивания хрома-тид и определения частоты СХО на 27-ом чосу культивирования ; клетки обрабатывали ЕДУ (10 мкг/мл).

4. С целью определения оптимальных условий эксперимента

для проявления эффекта модификаторов проводили опиты с видер- . киванием лимфоцитов- в-культуральной средв^ДО”кульп!Ш4роваУшя' вво-” дяди АШ5 {0,05%) и кофеин (10), после чего лкифоциты видор-иаввлв 24 ч«са л ородо, затем стимупировэли клетки ФГА, и про- • водили обработку А.’. Ш и кофеином u и ¡т-ои чао у.

7. Статистическая обработка полученных результатов прово-" ' далось о помочью ирогро^ми " st.aum-apii " на lb.1.! PC.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ / V.'i

I. Оценка цитогенетической активности лизина, .

аргинина и промежуточных продуктов их '

синтеза в культуре лимфоцитов человека. •

Для исследования мутагенности изученных соединений исполь- , зовалось по 4-5 их концентраций, которые вводили в культуру' лимфоцитов на 46-ом часу культивирования. • '

Диализ результатов но выявил цитогенетической активности подавляющего большинства исояодуомих вецеств. Статистически . достоверное различии с контроле« доказано лшь при действии промадсуточнс!‘0 продукта еинтиои лизина - аиинобакториив (АМБ) в концантр:. .иа 0,05‘<£. Уровень аберрантных кяиток при этом составлял С,С']"~. Этот результат подтверждается несколькими экспериментам и. поскольку уроионь ЭСОрриН'ПШХ МеТафОЗ, индуцируемых АшБ а концентрации и,05% сравнительно невысок, то его можно отнести К соег.’ЛПСПКЯМ, оСлэ,;;.и:слаоой U ути г с 11!« о!: активностью в клетках. v.jlouuko.

Ь лаборатории цитогенетики ЕГУ исследования по определению генетической активности лизина и промежуточных продуктов его синтеза на других тест-системах (тест Б>/;мса к клетки волосков тычиночных нитей традесканции) выявили, чзч) доже высокие кок центр aiv-iii и зучинных оиодининии и в етих тестах не проявляли ;.!.утогиино/: ..ктивпоета.

2. Действие соединений с введением кофеина на различных сроках культивирования. -

Для определения оптимального времени введения в культуру

лимфоцитов, кофеин (10--"М) добавляли на трех различных сроках (2в~ом, 46~ом и 70-ом часах), а АЖ и ККЛ не 52-ом часу культивирования. ' . •

Анализ полученных результатов показал, что в вариантах,где кофеин ьводияся по 28-о;а часу культивирования, статистически достоверного возрастания числа аберраций хроыосоы почти не наблюдалось, хотя отмечалась тенденция к повышению уровня цитогенетических повреждений. В варианте ККЛ (0,05%)+К уровень аберрантных клеток составлял 6,0%, в варианте ке без "кофеина этот показатель ровен 1,6%, а общее число аберраций соответственно составило 6,7 и 1,6 на 100 клеток (Р > 0,05). Е варианте сов1шс*иой обработки АГ.1Б (0,05%)+К на 28-ом часу процент аберрантных клеток был равен 5,5 (Р > 0,05), но уровень аберрации полшался достоверно, достигая 10,9;. (Р <0,01).

При добавлении кофеина на 70-ом часу культивирования наблюдалось достоверное повышение аберраций хроыосоы по сравнению с вьрпантаии, где отсутствует кофеин, только в одном варианта: АНБ (1,25%)+К. При этом доля аберрантных цетафаз сос-тавлнла 6,0% (Р < 0,05), а общее число аберраций на 100 клеток-

10.0 (Р<0,01), когда в контрольном варианте, где добавлялся только АЖ (1,25%) оба показателя составляли 1,3% и 1,3.

Подобная же картина наблюдается при введении кофеина на . 46-ом часу культивирования в культуру, обработанную АМБ и ККЛ.

Полученные результаты свидетельствуют, что кофеин модифицирует действие исследуемых соединений'в некоторых вариантах обработки при его введении на зеех трех сроках культивирования.

3. Оценка афйекта кофеина и 3-АБ на уровни аберраций хромосои и 0X0, индуцированных кормовым концентратом лизина и эминобакгерином. V - _

Результаты цитогенетического анализа действия МБ и КЮ1 при их раздейы/ои, а таима оомоотаои вводаншз о кофеином и 3-ЛБ приведены з таблице I. Наиболее эффективными являются 0,05% концентрации изученных соединений. Частота индуцированных ККЛ и АМБ аберраций хроыосоы при этом составляет .соответственно

5.0 и 4,0, в то .враыя как в контроле этот показатель равен '

1.0 на 100 клеток. Уровень аберрации хромосом, индуцируемых

шолица J.

ГПрОДЗОрМТОЛЬ; О ' 0 r. }i Û ДСЖіЗЛ iu )pùüi;a ' 'екТ’Тіо“

И ¿ - (lu ¡ú) ( па 1 тО-о:.ї ча ь\7 н^ла: i :;ЛЯрО аатія) в куд-ь-

туры _ осїрабо Т8Ш!!.:в і МБ ” ККЛ firn 5; Î-0U а . культиви-

pu о..:. ли).

Вариант ооработки лОСа p. Рок ааа'і-илі-; на 11' 0 пЛОТОК

..¡о'Тсі- іуаз t пі 1 Р Об!ДЄ 8 і nvHvi а 1.^4.-. Р чий л и идино- U И;4 V р U «JJ • число ‘ ПВТ)НЬ)Х р Cí vi Ü • чисио рэар » а OG- uauax

АМБ, 1,25?, 2,0 2,0 0,5 1,5 0,0

+К 11,5 < 0,01 14,0 С 0,01 3,5 10,0 0,5

+3-АБ 10,3 < 0,01 10,3 <0,01 0,7 9,6 0,0

АМБ,0,25% 2,0 2,0 0 '2,0 0,0

+К 7,5 < 0,01 8,0 < 0,01 3,5 *,5 0,0

+3-АБ £>,5 < 0,05 6,5 < 0,05 0,5 б ,0 0,0

О о у Л,0 4,0 т г X 2,5 0,0

+к 10,0 < ü ,05 lu, и 4 0 ,0 5 і і і’- 8,8 0,0

■¡о — ЛБ 9, а < и ,а> і 2,0 < и ,0'j 2,0 10,0 0,0

Ш, 1,25,'. 3,0 / : ' -* ■»^ 1,3 1,7 0,0

+К 4 , 5 > 0,05 7,5 < 0,05 2,0 5,0 0,5

3-АБ 11,0 < 0 ,01 ъ, ь <0,01 5,0 10,5 0,0

Ш, 0 »25% 2,7 2,7 0,0 2,7 0,0

+ÍÍ 8,9 С 0,05 11,5 < 0,01 ¿ 1 Ú Є,9 0,0

+3-АБ 5,5 > U,U5 6,0 >0,05 1,0 5,0 0,0

KIOI, 0,0% 5,0 5,0 3,0 2,0 0,0

+к 7,0 > G , 01 і У f Lí >0,05 _ 1 J 7,5 0 ,0

+3 -ЛБ 10,0 ■> U , і,; 'j ІО с >ü ,0а <_ , 8,0 0,0

Контроль ' 1,0 1,0 1,0 0 0,0

Я 3,3 > 0 ,05 ■V >0,05 ■J T - > 2,8 0,0

3-АБ 3,5 >0,05 4,0 >0,05 1,5 2,5 0,0

кофейной V! 3-А.Б вша спонтанного и-составляет соответственно 3,9 и 4,0. - • .

Совместная обработка культуры лимфоцитов кофейной и АМБ, а такае 3-АБ и АМБ выявило четкое повышение уровня аберраций хромосом по сравнению с вариантами, обработанными только АМБ. Это ио'и'лю проследить на рис.I. Так, при-обработке культуры лимфоцитов АМБ в концентрации 1,25%, общее число вберраций хромосо на 100 клеток составляет 2,0, введение 3-АБ способствует возрастанию этого показателя до 10,3, а добавление кофеина приводит н увеличении мой величины ДО 14,0. -

Подобная ка картина наблюдалась :лри исследовании модификация действии КХСП.. Так, действие наибольшей из изучаемых концентрации л ¡-.Л (ь 1,25/Овизивало 3,0 общего числа аберраций, в то время как добавление кофеина и 3-АБ приводило к возрастанию ьтой величины соответственно до '7,5 и 13,5.

Лрп рассмотрении типов хромосомных аберраций, индуцируемых изучаемыми соединениями при их совместном и раздельном действии, показано, что они, в основном, представлены.одиночными и парными разрывами хромосом и незначительным числом обменов .При згой выявлено, что доля парных разрывов в общем числе хромосом, значительно превышает долю одиночных разрывов, особенно в вариантах совместного введения соединении с ингибиторами репарации.

Оценка уровней СХО, индуцированных кофеином и 3-АБ при их совместном с исследуемыми соединениями действии, выявила некоторое (статистически не достоверное) повышение числа СХО/клетку во всех вариантах сочетенпой обработки по сравнению с раздельным воздииотаиеы ККЛ и АМБ (рис.2).

4. Оценка влияния условий экспериментов на цитогенетическую активность изученных соединений. ' ' '

Для научения условий хранения лимфоцитов в культуральной среде при разных сроках введения мутагена раздельно и совместно с кофеином, а также фракционированного действия АМБ и кофеина было разработано несколько вариантов эксперимента: ’

Рис Л,

+

Ли'] ]л

*

№

ч

'Х

*^т

ч\

$

X

N

1

I

N

V

V "Ч

■Ч

(41

I

м -1.

коп- К 3-АБ

ТрОЛЬ

ч. ■ ч.

¿¿У-*#1 коф&ииа (Ю ->0 и 3-АБ (10 иМ) при их введении з „„аьтури, соиуботонние ииинобактернпоа (АМБ), По оси ординат - процент аберрантных клеток. Обозначения:

{¿В-АКБ, [!Ш- контроль, Е-Л.:.;Б+К (4Сч),

Л:.'БтЗ —ЛЬ (‘ 1С ч . ^

< 0,01 - дос-

товерности при сравнении комбинированного воздействия с вариантами, обработанными только Ай Б. ■

+

ЛУБ отмыв .¿шюоцин

-'¿Ь 4 О Ч ?ь Ч .

АМБ вводился до начала культивирования клеток и содержался в течение «-А-х часов в культуральной среде, посио чего отмывался и клетки культивировались в течение 76 часов. Ё этом случае уровень аберран'лих клеток составлял 3,8%, а общее число '

схо

клетку

10

8 -

6 .

2 -г

\

\

Ч

ч

ч

\

\

X

\

ч

ч

МБ

1,25?

АМБ

0,25%

АМБ

0,05%

Рис.2«

.сйфект кофеккэ Еыв ККЛ к*АКБ.

Обозначения:{g

ккл

1,25% (К)(Ю"3'

'М)

І

g

j+Г

І

і

0

\

\

N

ч

ч

ч

N.

N

ч

ккл -

0,25 % и 3-АБ на

ККЛ

0,05%

коя-

тро-

К 5-АБ ^ бч 4бч

уровни СХО, индуцировен-

[-ККЛ , (Щ - контроль, [ïïj- +К(А6ч),[

нЗ-АЕ(4бч)

аберраций хромосом на 100 клеток - 4,7. При этой в контроле уровень аберрантных клеток и общее число аберраций на 100 клеток составляли '¿%Т% и 2.7 (таблица рис.2).

2)

И случае 1] ИИ yK.'j'jfj;::

a;iü

фиксация

О ч -,и Ч 76 ч.

Сработки кул '.тур¡с Ам';Ь на чп-о.м часу кр1М*илирова-Л';;1 Cij-.iJ.-ilO J t,ij3CiiUU составлял!-! 5,5% я 6,0.

3)

Aivlb

АыБ фиксация

Z-t ч

О 4

46 Ч

7G

При фракционированном воздействии, когда МБ вводился до начала и на 46гом часу культивирования, уровень аберрантных клеток и общее- число аберраций были равны 5,0% и 5,0. По-видимому, подобный;,эффект можно объяснить tow, что произошла адаптация по отшзению к АМБ. Адаптация к химическим мутагенам ранее была показана и изучена рядом авторов (Георгиева В. и др., 1986; Дубинина Л.Г, и др., 19üc; liier ff ab ,J.-;6b; Sch' oert t;t al , ЛАЛ ■ • ' .

•'0

4 4

фиксация

и ч

ч

5)

Кодеин

га им я

О ч

■rb ч

Vo Ч

При обработке1 кофеином до начала культивирования как процент аборр«:.' Uüx к ли то к, так и общие число аберраций составляют ¿,9% и к,9, о при впадении кодеина на ч-6-ом часу культивирования - соответственно 3,0% и 3,3.

6) -

Кофазд

■ Кодеки

•I ч

-11. ч

фиксация 7 о ч

Яри фракционированной действии кофеина за 24 ч до культивировании и на.‘(,6-ом часу. яулыиаиродвиия уровень аберрантных кдеток досткравас-.ХО,0%, возрастает и общее число аберраций, которое состаиияет 15,1.. "

АМБ+Кофеин , отмыв • фиксация

- 24 ч ■ 0 ч . ' 76 ч

■ ■ АМБ+Кофеин фиксация

, , 0 ч" • s 46 ч 76 ч

При совместной обработке культур кофеином и АМБ, независи-ыо от времени введения кофеина, происходив замотное возрастание уровня хромосомных аберраций. Так, при совместном введенні кофеина и мутагена до культивирования и отмыва, уровень аберрантных клеток составлял 7,0%, а общее число аберраций -10,0. При совместной обработке 'культуры кофеином и АМБ на 46-оы часу культивирования процент,аберрантных клеток и частота обще^ го числа аберраций достигали 8,0%-ц 8,0. , ■

^ АМБ+Кофеин . отмыв АМБ'!--. фиксация

10)

- 24 ч ■ ,0 ч- 46 ч 76 ч

ALffi+Кофеин отмыв Кофеин : фиксация

-24 ч ,0 ч ' 46 ч . 76 ч

Повышение уровня аберраций отмечается и в том случэе,когда А,1Б и кофеин вводятся до культивации, 24 ч выдерживаются в культуральной среде, после чего на 46-оы часу культивации вводится АМБ (аберрантных клеток -'9,6%,- общее число аберраций - 9,6) или кофеин (12,5% и 13,5, соответственно).

. АМБ+Кофеин .отмыв. .АМБ+Кофеин фиксация

II) -----------------------------------------------

-24 ч 0 ч 46 ч 76 ч '

Ъ другом ко варианте на 46-ом часу культивирования добав-лялі-іськофоин и АМБ одновременно, в.результате уровни аберрантных клеток и общего числа аберраций достигали 9,5% и 9,5.

АМБ отмыв АМБ+Кофеин фиксация -24 ч 0 ч 46 ч 76 ч

Коли мутаген добавлялся до начала культивации а на 46-ом часу культивации добавлялись кофеин и АМБ одновременно, аберрантный клетки и общее число аберраций соответсвенно состав-

- Таблица 2

Изучение влияния различных условий экспериментов на цитогенетические показатели в вариантах,обработанных АМБ и кофейной. Цифрами (-24, 46) ноназинь: часы до-бавлит.'Ц соединений ь культуры лямфоциїов.

Вариант обработк’.'. лбурр. моха- і‘ фаз ііока^итилі: на ІС0 клеток

Оощве число аоер- п 8 мм}» Число Р одиночних разрїге Число парних разрыв, Число раариа . в обманах

АМЬ (-¿А) > и , 0 *г » ' ,>и ,1о и ,9 3,8 0,0

К (-ЇЛ) ■>0,и^ 3,0 >0,05 0,0 3,0 0,0

К (46) ' 3,0 >0 ,05 •- /и і,и 2,5 0,0

АМН (/¡С) V3 >'-’>05 Л О > и , и Ь ¿,0 4,0 0,0

А1<‘&( — 24) +

+АМБ (4-о) 5,0 >0,05 5,0 >0,05 0,5 4,5 0,0

К(-24)+К(4С) 10,0 <0,01 15,3 <0,01 5,3 10,0 0,0

К ,АМБ(-24) 7,0 <0,05 10,0 <0,01 2,0 8,0 0,0

К,АМБ(46) 8,0 <0,05 8,0 <0,05 4,0 4,0 0,0

К,АМБ(~24)+

+АЩ46) - ■ 9,6 <0,01 5, С. <0,01 2, V 6,9 0,0

К , Д:.іЬ( ^

+К(Чо) і;.,*; < 0,01 15,0 <0 ,иі 6,0 7,0 0,0

К-2-і ь-+И,А:,а) <.0,01 У ,5 <0,01 т :' 8,5 0,0

лш;(-^4)-г к ,ліді,(4о ; О , д. < 0,01 10,0 < 0,01 5,0 5,0 0,0

контроль ¿,0 ґ , ь 0,3 ¿,3 _ 0,0

ллян 8, и}« и 10,0. й этих вариантах, очевидно, кофеин, яв-

ляясь ингибиторов пострспяіишчшюк репарації.., ииимао* адап-ачизіюе ііо:.докоїг;!ИЄ А:.Ш, что прі-шодит к помишоиию частоты хромосомных ооарраций. .

Нами проанализированы типи хромосомних аберраций, инду-цнруо/лих /,ЦВ и кофииним. 1: оЛши ч'ч-ле оссрт/г;:::; хро„;осои,

і.: і,: і..~л ^1 • > ■ и I» о и , (.<0 1, іЛ; X. ІїсірИгЛІ'Г УХ

Иим, .'і ии ІірииОлидиЦііи ЦЬрЬШХ. рсГзрЬШОВ ХрОМОСОМ ПО СрОВНО— НИЮ С ОдШ;^ШЬШП . '

Таким образом, пол^чешшо наші реьул^таты показали, что

Рис,3.Изучение влияния различных условий экспериментов на эффект л'.Ш и кофеина (К). Ло оси ординат - общее число аберраций на 100 клеток. Цифрами (-24, 46) показаны часи добавления соединений в культуру лимфоцитов.

т-

Обозначения:

АМВ(-24) ® - К(-24)+К(46) Ш

К(-24) 0 - К,АМБ(-24) 00

К(46) 0 - К,АМБ(46) ЕЗ

АМБ (46) ■ ' \ £3 - К,АМБ(-24)+АМБ(4б)

йМБ(-2^А‘®(46) Щ - К,АМБ(~24)+К(46)

+К,АМБ(4б)

- контроль

выдерживание,лимфоцитов, обработанных слабыми мутагенными соединениями и культуральной среде, приводит и повышению уровня повреждений хромосом ¡только в том случае, когда в культуру лимфоцитов добавлялся кодеин. Достоверное возрастание, как частоты обо;;;'битных ис^афуо, тик и общего числи аберраций хромосом, происходит во всех случаях присутствия кофеина в культуре ляи^-оЧИТО) i независимо ит ври:.:ини uí'-j ^ведиии;: (до Стииуляции

ОГА, ЛИби iiü¡j¿ró~Oivi nciuy луЛ-иТПиИрОВйНИн) .

Фракц .инироиаипсе д о l : о v и л о л'1ь ь два срок.; - до культ’..¡ей-роышин и ..и ‘i ¿“Oí.! чаи у но ви;>.я»ает лоздьегииии уровня поврежден и:, хро;.!'.'!.:ом no и;»1Ъ1Ш!ИШ с о!1 о <_)д.!ü¡;;j;j¡воздействиями на культур^ лии^оцитоь человек;; и От ;¡ ..tu üpo;:::,

Очевидно, после первого воздействия мутагена происходит 8ДЭПТЗЦИЯ ого действию и получение клетками второй Jy3 ¡j ir о приводит к увеличению чистоты хромосомных аберраций.

Раздельное введение кофеина до и на 46-оы часу культивирования выбивает почти одинаковой уровень аберраций хромосом. Фракционированное же воздействие кофеина за 24 часа до и на 46-ом часу культивирования приводит к почти пятикратному возрастанию утого показателя. По-лидииому, кофеин, являясь ингибитором , о:: ¿и* свой ццьокх леи ü гори «ном добзв-

.iiJij.:.' ii 'j J 40JlOiiüKL¡ .

S. Изучение однои:-!й*й.н«х разеынои Д!!К методом .•Si.." пи на 1’Д1!.

Нар;., , j щи'огеиитичисклц ¡люлиаоа аффекта кофеина и АШБ па лг,..]фо ...■ d, приводилась о цинк а их действия на структуру и Процессы иисеХОНОВЛОНИЯ ДНК. С ОТО:! целью бил применен метод определения однонитеьых разрывов (ир) ДНК, основанный ¡¡а хроматографии клеточных лизатов на ГАПе.Фракционирование однони-тевои Д.;. . üOí./.j-.li-j хроматографии на l'Aífu) и измерение соот-

ношений одиинитевои и двунитевои фракций ДНК позволяет регистрировать повреждения ДНК, а в условиях постинкубации клеток после мутагенного воздействия и их репарируеыоитъ.

Было ::икази;ю, что одноразовая обработка яиькуоцитов периферической крова человека кофеином на различных часах культи- . вирования не повышала уровень ÜP в ДНК клеток (Р > 0,05). Однако, повторная обработка клеток кодеином (зи 24 часа и на 46-ом часу культивирования) вызывала достоверное увеличение

количества ОР ДНК (Р<0,05) (табл.З). 1 ■

Изучение аффекта ;ЖБ на ДНК лимфоцитов показало, что АМБ, вероятно, можно отнести:к.веществам со слабой ДНК - повреждающей активностью. Так, инкубация- культивируемых лимфоцитов с АЇЛБ за 24 часа до начала культивирования не вызывала индукцию ОР (Б > 0,05), а в варианте.с введением АМБ на 46-ом часу культивирования повышала уровень ОР. (Р < 0,05). Однако, повреждения ДНК, зарегистрированные в последнем случае, репарировались за 2 часа поотинкубации в свежей среде. Е то же время, результаты фракционированной -обработки культур лимфоцитов АМБ за 24 часа и потом на,46-ом часу культивирования, позволяют предполо-нить адаптацию клеток к действию АЬ5Б. - о чем свидетельствует достоверное уменьшение уровня ОР. Ло-видимому, ЭТОТ Эффект можно объяснить тем, что после первой обработки мутагеном активность репарационных систем повышается, что усиливает эффективность их работы. . '

То обстоятельство,, что ,АМБ проявил-себя как слабый мутаген, а для кофеина, в ряде исследований, установлен сенсибилизирующий эффект,, вызывало* закономерный интерес к изучению их комбинированного действия. При этом кофеин вводился в 4 сро-ііо - за 24 ч. до культивирования, на 28-ом, 46-ом и 70-ом часах культивирования, а АМБ за 24 ч до начала культивирования

г, на 46-ом часу. Нами показано, что постобработка кофеином лимфоцитов, подвергнутых обработке'АМБ за 24 часа до начала культивирования, индуцировала усиление ДНК - повреждающего эффекта А:.Ш в случае введения кофеина в клеточную культуру на 46-ом и 70-ом часах (Р <0,05). В то же время, но установлен подобный эффекта нелогичной схеме опыта при постобработке кофеином на 26-ом часу культивирования (Р >0,05). Очевидно, кофеин нарушая правильность и/или скорость репаративных процессов клетки, иимошшт кластогенную активность тестируемых веществ.

а з* к

Проведенное нами тестирование лизина, аргинина и некоторых промежуточных продуктов их синтеза в нескольких концентрациях, в основной не показало цитогенетической активности в культуре лимфоцитов человека. Выявленный мутагенный эффект АМБ, для не самоіі высокой его концентраций можно объяснить только тем,что мезду цитогенетическим эффектом и концентрацией мутагенов но

Тобдиця 3

Изучение влияния условий обработки культур пи:д']ю-цитов кофеином (К) (1СГ3М) и Л МБ (0,05^) но пп-о-гдекх двуиитсвой ДНК (от ср'ИортИ)

К | А'’;- ‘ г, ••

Чти1.! 00-рОСО'ППй ~2:\ 2 В 6 70 | -¿4 4ь і ей '(и 7и ■ , 1

Л V д г Я г Л ; .У

8 е; 90 В? Р° 86 92 г 1 < 1 1 рс; р~ !с ;■ . ■ . 86 87І — -¡87 9?! - І- 1« * ! ! ! .

- , і і />■ и ! до культ) | - - 83 86 80 85

(за 24 ч до культ) Г ■ 86 88 80 84 69 79 ■ 67 83 - - 88 9> ~ , ,..С—.

Обозначения: Д - процент двунитовой ДНК с рану поело дойогаая изучаемых соединений; Р - процент двуннтовой ЛИК при возможной репарации повреждений после 2-х часов инкубации.

всегда существует лкцойивя ззвиск.костъ. Топ, , ч:'о

гио соединения вызывают в культуре каоток -»огонок? ура-: ас:.-: оборрзциз В ИОНЦОНТрОЦ'ЛЛХ, отр; О: ‘О рО.?ЛЬК;Л‘ , но НО 0 ” П: м-: ■ -ВОЮТ четкой Д0 30Л0Й ЗОВИСИМОСТИ (Бочкон ¡¡.П. , ЧД.;;., ІУ39) ■ Єиди но, АЖ относится к категории ■:оед:^:пгг'! с полос';-' т аоо.'іствади. Поскольку общий уровень а<-,орр:;ц;іі: хро-ос'-”, у дунаровопвнх А МБ, сравнительно невисок (ь,0д), ю его можно от нести к соединениям, обладающим слабой мутагенной акти^ност^”'

В клетках "ОЛОВОКа .

іірикепеппі'іо в настоящей роботе кодеин и ¿~АЪ «влнются известными ингибиторами репарации ДНК и широко используются в ка чостве модификаторов действия химических мутагенов. Многочисленные исследования ((^егЪпг с!: ПІ . , І£-'65;КІ!)ІП'П]1 г.'. ІУ< . ’

V/ еі пп !;Н п оі п 1. , ІУ7І) ;Воогг4".''і.п (И; гі1.,ІУ'\У4) вкИПП'Л і'-т возрастание спонтанного уровня гберрадк?! 'хрокосогг при і'уодг--шгл в культуру лимфоцитов человека кофеина і; 3-АБ. 'Гек, Л о к в ичус (ІЗБІ) ¡юкиъвд, что из ряда концентраций кофеина, две “Ю-3Ы и Ю“СМ обладали выраженной мутагенностью.

Сенсабилизируодиб аффекты кофеина и 3-АБ до настоящего аре* «ЄНИ ІІССЛЄДОВіШІСЬ ЛИШЬ при ДЕЙСТВИИ СИЛЬНЫХ мутагенов (Kihbnar c-t al. , 1974, I95'2;Ceccherini , Steam, 1987). ІЇОТбНЦИрум-'ДИЛ >ф^ЄКЇ кофеина но хрсмосошша повреждения, индуцируемые

S -зовисиииаи и S -независимыми агентами, ряд авторов склонов объяснить гои, чю он обладав! способностью приводить к задержке стадии С2 клеточного цикла и укорачивает время, необходимое для репарации (Kihiman yt al. , 1982; Paiitti et al, 1984; Cec-cherini, Sbvaiui, 1987).

Gsterta^ c-t ai.(I3o5) считали, что цитогенетическая активность кофейно в клетках человека определяется реализацией хромо соцнцх аберраций только во время синтеза ДНК, то есть при обработка культуры кофеином в середине стадии С., . Автори полагают что в стадии Сг образуется стойкий комплекс ДНК - кофеин,

который линь во втором клеточной цикле реализуется в разрывы хромосом. -

Известно, что процесса пострепликативного восстановления наиболее чувствительны к корзину (Arlett et al., 1975; Lehman, et’ al., 1975; Maher et al, 1975; Hansson et al,I984). ПОТЗНЦИ-руащнй эффект кофеина некоторые авторы связывают с ингибированием заполнения пострепликативных пробелов во вновь синтезированной ДКК (Hansson et ai.,1982), или считают его ингибиторов пострешіпкатішіоіі репарации со сдвигом рамки считывания (>лЫ-oan et al.,1977). .

Показано, что эффект 3-АБ - ингибитора фермента поли(АДП--риб030)П0Л1Шер23Ы (Heartlein ,Preston , 1985; Pantelias et al, 1986) проявляется,'в основном, за счет изменения интенсивности эксцизаоиной репарации (Hunssoи et al., 1984). 3-АБ способствует возрастанию цитогенетической активности алкилируюцих агентов, предотвращая воссоединение разрывов нитей ДНК (Durkaez et al., 1980). При этой время сохранения разрывов в присутствии 3-АБ возрастает в 5 раз (Ahnstr'om ,Ljungman , 1988),

Необходимость исследования модификации действия слабых мутагенов объясняется такие теы, что они обычно действуют не изолированно. При этом комбинированное воздействие может иметь 00-лсе сильный эффект, чем наблюдаемый при раздельном действии Зі .,Х’Соединении. По известной классификации Phillips (1977) подобный тип комбинированного действия химических агентов ыоино описать следующим образом; М+Н>(UfH), где-неактивный агент (Н)

усиливает действие другого (М). Данный Эффект носит название синергического. Его можно проиллюстрировать донными о возможности 4-х - 5-4 краткого иокшешш уроьяи ловуо:.сдоций, индуцируемых ГИОбиреЛОВОЙ КИСДО’А'ОЙ при введении кофеина и несколько меншого (Г.-л-3-х краткого) - с цряибнізиивй (Р .К.Аруткшдн, ГЛ'.Ьапшиы, 1987, І9Х1). Нокаавішш ишш ыоди^мцирующий Эффект сепсибилизоторов но цптогецотмчоскуа октквноетв ш и А1,"В в основной СХО,:1,!-:;! С ДанШ-'МИ и С Є НО'.; О ЯЛ 1133 ЦЯ И ИІШ ЦЙХ’ОГеНвТИЧвСКОІ'О ' действия гибборелдовой кисло*,. Нцивдоио аналої'ичпое возрастании уровни ч^врьадеіій,; -■сро..іО'.;о;.; лик пиі: добавленим кофейна,так и 3-АБ-а в культури, обработанные АШЗ и ККІІ, хотя имеются результаты, '"-^ДСТ021ІС2Ь,,'ііч«о и ¿»»»ЛИЧНЫХ МОХОІПГСІ’ОХ ДЕЙСТВИЯ

сенсисклизсгсров на «ли'иовроваїпіо репарации ДШС.

Изменение чувствительности хромосом к алкидирующему агенту тиофосфоыиду в зависимости от условна видераивания в питательной сриде и фракционирования дозі,; оыло изучено М.С.Каграма-нян (1981). Установлено, что при фракционировании дозы мутагена В культуро лимфоцитов, цитогенетический Зффект как в отношении доли абврраілчшх метафаз, так и общего числа аберраций значи-Т'ОЛТііїО Ви , Чи:,1 \!.I До ¡."Г іі!Т:' :]'V,и.о¡'0і! ДО-Л- (ЛЛЛаК? ^СсіК[Г,ИО —

. і о Л и і) о Н! і и .*Д'-: • ■ /„.’і,. 1‘і'/.-іи'■ • : 1 ■) ЛЛ ^-'ДЛ '■і ^ 'Л С б Н 0 іі Оі'іа І] ~

ХОД:; ^ л і' :..1 ■ .. ; .д::Л'.д,,у 0 О'.оіС; >ЛЛ1 и С і. 'ЛіОа'.СТііЗіЛ*. Кіііі —

-‘о Л Л>1 Лс. . } ;.ОїО і,,; ^ и,Сі Г‘ і: 1 :Ліии і.Л1 иЛ и !■ /! и іЬ АІЯ'* иЛ О Г іі 40 С —

і;о:і ^ ..ііД'д; 'лл1 '■> н;з чуіл'лі'ідхллло^л. к фурмаколо-

!' Г: 40С К ііМ ! Л; Іі'і'о»! „

.іОс :Л ЗПил^ДУ Л.Л'ЛЛЛЛІ ОДЛІ'іЛі Ці! і! КЛ^'і'ОК к :.:;ут іі і1 є нам покивала » 'і:..: 1 Д;<іДЛа;:Л1Л;Л ЫЛЛ1 ОО^СіЛІЛКи іГг)‘иії ігШ И доьами 0Л..ИЛИРУЮ-

ідих агентов повышает их устойчивость к кластогенному действию

ІІОСЛиД^іОі.'., : іі^ЛіЛЛ-; до1*- ^ '• ?-II: г ' м: > СгИт\1й , ІЛЛ'Ї ;

Нді/сг і і- 1‘іч <: І иі у Л^ь'ДІ^^ЛсіГЬс’і'ип , ЧТО Ъ ОСНОВО

адаптации к мутагенам лекат процессы репарации ДНК на стадии

а . В дальнейшем было проведено специальное исследование, в

котором виявлоио, что :і!)і'.;оі.-оі:.-. ац.гп д;:К: глдрокенмоче-

впна , Ь -і; -їо ; 'До зо ко и у р и д и </ ^-мизок'Лшдиноипп - снизит адии-

ї.івнии диплвии ниакил доз малеинового гидрэнидт и У-ыеткл-

- а -ИИТрО'.'.. йО401>(IIі Ы .

Ризул :’:і наиа;с ^кспорп^аитив подтвердили наличие адаптации, показо1:, что выдердивание лимфоцитов человека, обработанных слабы;.: иутагешшь! еоодипснлеи в культуральной среде, при-

зодц'і' к иозшоиию уровня поврвзедвияй хроиосон только и том случае,, к о г до її культуру л:ифоцитов добавляемся кофеин. Возрастание как доли и Со рр а на' н их ииїафаз, так я общего числа аберрации >:po.‘.¡ocQ!J происходит ьо всех случаях присутствия кофеина в культура лпмроцнтов, aauannusjao от времени иго введения. Очевидно, а основе итого оффекїе находится ослабление адаптации клеток il

.і звести о, что ц’Л'іогьцаїичоокий нарушения являются следст-ьиои повре^вяий ДНК. Е то ы> вреия среди иоскедоваголвй нот единого шюшш относительно процессов, которье «с«aï в основе-ooyii зованнл ÜXO и аберраций xpOUOCOU ( Bradby et al. , 13Ъ\ Kur.o , l'i!jivúra , ЬоІ). Особое иесто В Cb HÜ 11 С ОТІ!!.! ПрПиб-puTO.ji ПОіїі.'Оі’ОЧИСЛеШШа noûofu НО изучений роли «Ûp/їИ'ШНХ HUB-* рс.одоннл дНК и их репарации в индукции цитогенетических повреждении. іісполвзовашіе ыодафикаторов мутагенеза н ренаратвнш. процессов :.:о:-.;ет дать дополнительную информацию о кеханизиах оф->>ехта слаб*,::-: мутагенов.

Относительная резистентность к сенсибилизации ДНК клеток при и бра бот ко но G^-Cj фааах клеточного цикла, которую ми а а-¡Здиїдола L олоперниентах с применением метода определения одно-HXÍOBUX pjwpUilOB ДНК - подтверждает существуйдее Utiùliiiu о той, что кои;;;.] оолео аффективно модифицирует процессы образовании ¡.іутоцноншіх повреждении на стадии £( Кіьішап et ul. , I9?'¡,

I Vo • ; лС‘К!';ъ:!чус., I9S¿; Hansson et al. , I9B2, ІУо-і).

OT¡.;ОVOM ОПрЬДЄЛЄ:ІН5.0 КОрреЯЯЦИЮ 1.1ЄГ.ДУ ДЗИНШ.Г.1 ПО ИНДуК-

д.іи .•.р'о:.:оео;.:,-шх аберраций и однонитевкх роврцвов в культуро

о ці: то в, сбрьботзіших АаБ и кофейно«. Ь то ко ьроия, но:~н

ПО І; 0 бЛ .ОД J.'i ОСЬ достоверного іі ОВ1ШСНПЛ урОВНл UXÜ ЛраНТПЧООІ.Іі

ьо всех вариантах опытов. Lito иовдо объяснить либо той, что ис-илодуеиии водеотвз не вызывают те ТИЛи повреждении ДНК, которое ..:огут индуцировать СХО, либо - повреждения репэрируютсн до S фа ai, с которой принято связывать образование СХО ( Са>-1с\,-...у , ІО'77 ; Lambert et al. , VOÍi1! И Др.).

Ь U іі о д ы

доследовался здфект модификаторов химического мутагенеза-кооеина и .-»-аиішобонуаиида (З-АБ) на уровни аберрации хуоиосоы, UXÜ п нарушения репарации ДИК в культуре дшфоцитов человека.

І. іі'.г.-_аргинин, в также некоторые промежуточные продукта их с и: іі -_по о 6л ада.'-л -итогсиитйчвоко., икт1.>л'.;остъю. Пс^.-ч>-

чоикем »гад».* ;ся аыанооии^и^::и (ЛІС) - !ц/ойо-у®о*пш5 продукт сі-штела хиишш, которьіи в одно;; пи ;!еелидоааа:и.,>- новцол?г<ЩИй (и ,05/и) ви ^изаоа’ (ари ого ззодскии из Л б—оы часу культивировании) ДОСї’иногІІОЄ ЛОшЛОИ'Ле Л.0Ы1'п ХрОЙОООШіііХ абёррЗЦИЙ.

И. Иоелодоваш:» с«искб.чл:-.аа^укадго дзйстяия кодеина я З-АБ на уроьии цлі'ОГОнєтйчоОКілх. !.од;-о,:.до¡г.:.., лидуд.:;.уи:..лх промежуточными продуктами синтеза лизина - кормовым концентратом лизина (.чКл) ;* - яі.'нкйло и подмплнк.щом оольш«пиіх»и СлучаСД ¿¿03-

роотшто чииїот зоеррзцнк хроиосоц, по по уровньл ОлО, по сравнения с вариантами, обработанными только Кйі к лУБ.

і. Добавление кофоииа в культуру лам^оцитоя, независимо от времаци его введении (за ‘¿1\- часа до начала, или на 4-ь-ои часу культивирования), приводит к достоверному ловшэнию уровня аберраций хромосом, индуцируемых АШЗ.

‘і. Двукратное ввсдонпо АМБ (ээ 24 часа до начала и на *>о-м чиє.' •} и.‘о 1-і -ли до:и;іЛ!Тр.;і:,л;: и л -¿ч ж срони что и одно-

сціи^ниіШь.- г лднолїаліт.;..:.

А>*7, :;’И его ивцдиигл и а чб-ом часу,окаливаст слабое по-врозцйздо» . 'Лісп..-о па дііг. пи К!) ит ери у учити индукции и репарации одноихті, аых разрш»оа (доводи:.: хроматограф/: на гидрокси-апатлте). . о действие ілл'-ает'.:," и уелол.ыл по^.тннкубации клеток и тенеи'ло ¿-х чаОиЬ. Двук^атион ообабитки не приводит

к аддіїтітап'”.”’ эффекту, что хор ом о согласуется с результатами Ц'лтоі'анст:. . лсоги анализа.

6* При двукратной дсоалленпи ви.і.ситс’ л лул^^у Лг;.«*оцптов наблюдает єн дмоти^ліое ут;личенио количества иднонитевых разрывов ДНК, тхи Єиі‘лаеуьтеп с ноду чєйішм и дашп«.;и о возрастании УрОііШІ аСч.;.: ¡¡Ці!!! .\v0i.ica 0!.: , .ШАУЦ'Ч'ОьННИШ КО ¿О.: НО!.: при фрЦКЦПО-ииролаииоі: . ^ а сі от к и культур.

7. Постобработка ко^иллол (ну •'іо-и:.: а 7й-о..: часах) куд.ьтур лимфоцитов, обработанных А...Б за '¿ч часа до начала культивирования, вызывает повышенно уровня одконитевых разрывов ДНК. Полученные донные о сенсибилизирующей эффекте кофеина согласуются с результатами цитогенетического исследования, что свиде-

Те.И-ОТЬуОТ 0 рОЛИ ОДНОЦКТОЧ'ЫХ рУЗрМВОИ В ’ЛНДуКЦИИ ООО у

xpc.\;jcuj и;,ч: действии vj..j6ux цутагоноз.

В. Лсоподоийнио сы.сиоилизиру иде го действия кодификаторов o*ij>0K2u слабых aysTOPOHOi. целесообразно проводить ни основе ношшоксно»! оценки уровной циеогенотичосках иаруаений и поврик-

дек:ш Ли S.*

Осиовшю полоазния диссертации опубликованы в работах:

1. Арутюнпн Залинян Г .Г., Кирокосян А.Г. №еуЧснио цито-

генетической активности лизино, аргинина и некоторых проие-^■уточних продуктов их синтеза, полученных методами биотехнологии б клетках человека.// Куриал - Веохник сельскохозяйственных наук. - 1952. - ¡,i II—12.

2. Аругюнян Р..л., Ьалиннн Г.Г., Кирэкосян АЛ'. Модификация некоторых промежуточных продуктов синтеза лизина, полученных

б нот о х но л и г и ч а с к I I.M путем, кофеином и ¿-амннобензаиидом.// журнал - Восачшк сельскохозяйственных наук, - 19ЭЗ. - fe I-

2 „

2. Кар-чксучш АЛЛ, Лрут;..1!яи P.M., Залшшн Г.Г.Тоотр.роьаиие л«—

:;;:ч I, ;t>uur:: и не;::',. \>n:,;x промежуточных продукте» их e;w;vu~

:> тур;.; л;);..,: оцг: человека.//Биолог. ;;:ypii:«j! Лр;,юш:л.

iUCi.-.rЛ.Г. , Лрут'Л ли. P.M., Сглннлн Г.Г. Соиснг'-лизапли - - ¡ч.-котор!,'Х np.x^vyvoHHLix продуктов оинтбза лизнь:.

ri>¡с-i LfyTi.ii'oHcua а у/льтуро .::'1.лоц: 1,jn

■: Л: -.// ! V.OJjO Г. 'yy,::;ui ЛрЛ’;ИЛ:;,- /]: lig’Cira/^