Механизмы регуляции транспорта Na+ в коже лягушки

Мельницкая, Анастасия Валерьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Механизмы регуляции транспорта Na+ в коже лягушки
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Механизмы регуляции транспорта Na+ в коже лягушки"

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

МЕЛЬНИЦКАЯ АНАСТАСИЯ ВАЛЕРЬЕВНА

МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ ТРАНСПОРТА В КОЖЕ

ЛЯГУШКИ

03.00.02 - биофизика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2005

Работа выполнена на кафедре биофизики (лаборатории биофизики клетки) Санкт-Петербургского государственного университета

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Зоя Иринарховна Крутецкая

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Юрий Алексеевич Негуляев

доктор биологических наук Станислав Михайлович Попов

Ведущее учреждение: Институт биофизики клетки РАН, Пущино

Защита состоится "/^У " 2005 г. в_ Ус .часов на заседании

Диссертационного совета Д.212.232.09 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7/9, ауд. 90.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке им. A.M. Горького Санкт-Петербургского государственного университета.

Автореферат разослан" " 2005 г.

И.о. Ученого секретаря Диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Н.П. Алексеев

¿ыууш

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Исследование механизмов транспорта веществ через биологические мембраны является приоритетным и интенсивно развивающимся направлением современной биофизики, физиологии и медицины. Особый интерес вызывает изучение транспорта ионов в почке, являющейся уникальным органом по разнообразию, интенсивности и избирательности транспортных процессов, а также по многообразию механизмов их селективного регулирования. Ведущую роль в поддержании функциональной способности почки и ряда других эпителиальных тканей (основной составляющей которых является поляризованная клетка, асимметричная по своим структурным и функциональным характеристикам) играют различные транспортные процессы, осуществляемые при участии клеточных мембран. Ряд серьезных технических трудностей, возникающих при проведении экспериментов по исследованию деятельности почек в условиях in vivo, предопределил широкое применение различных модельных объектов для изучения транспорта веществ через эпителиальные клетки.

Классическими модельными объектами для исследования механизмов транспорта ионов через биологические мембраны являются кожа и мочевой пузырь амфибий. По способности к транспорту электролитов и реакции на некоторые гормоны кожа и мочевой пузырь амфибий сходны с почечными канальцами, что позволяет использовать данные, получаемые на этих объектах, для выяснения механизмов трансэпителиального транспорта воды и ионов в клетках почки.

Активный транспорт Ná** против градиента концентрации' характерен для многих типов осморегулирующих эпителиальных тканей. В собирательных трубках почки реабсорбция Na+ является важнейшим механизмом поддержания электролитического и водного гомеостаза, и, следовательно, кровяного давления. Клетки эпителия кожи лягушки также способны аккумулировать Na+ из окружающей среды против градиента концентрации.

В настоящее время общепринятой является двухмембранная модель активного транспорта Na+ эпителиальными клетками, предложенная Кефед-Джонсеном и Уссингом (Koefoed-Johnsen, Ussing, 1958). Согласно двухмембранной модели, в эпителиальной клетке пространственно разделены мембраны, определяющие пассивный вход Na+ в клетку (наружная или апикальная мембрана, в которой локализованы Na+- каналы), и мембраны, в которых располагаются натриевые насосы (внутренняя или базолатеральная мембрана, в которой локализованы Na+/K+- АТФазы). При этом электродвижущей силой, генерирующей градиент электрохимического потенциала и обеспечивающей активный транспорт Na+ через эпителий, является На+/К+-АТФаза.

Ведущую роль в транспорте Na+ через эпителиальные системы играют амилорид-чувствительные Na+- каналы (ENaC). ENaC принадлежат к суперсемейству, объединяющему особый тип Na+- проводящих каналов, нечувствительных к мембранному потенциалу и блокируемых диуретиком амилоридом.

В последние годы достигнут существенный прогресс в исследовании структуры и топологии в мембране ENaC (Canessa et al., 1994) и Na+/K+- АТФазы (Forbush et al., 1978; Blanco, Mercer, 1998), тогда как система гормональной и внутриклеточной регуляции этих ведущих компонентов системы транспорта Na+ в эпителиальных клетках, по-прежнему, остается мало изученной. Известно, что активность ENaC и Na+/K+- АТФазы в эпителиальных клетках модулируется различными системами внутриклеточной сигнализации: арахидоновой кислотой и продуктами ее окисления (Els, Helman, 1997; Mies et al., 2004), внутриклеточным Ca2+ (Palrtl.ejy циклическим

аденозинмонофосфатом (Brodin et al., 1996) i прот^^^^^Д (еЦ Helman, 1991),

протеинкиназой С (Line, Eaton, 1989; Крутецкая и др., 2003), G-белками (Cantiello et al., 1989), тирозинкиназами (Rodricuez-Conimes et al., 1994). В последнее время появляется все больше данных о важной роли элементов цитоскелета в регуляции транспорта Na+ в различных реабсорбирующих эшггелиях (Els, Ghou, 1993; Rehn et al., 1997). Однако, несмотря на интенсивные исследования в этой области, механизмы, посредством которых осуществляется регуляторное действие цитоскелета на транспорт Na+ в эпителиальных клетках, в настоящее время неизвестны. Показано, что в различных эпителиальных системах важную роль в регуляции транспорта Na+ многими гормонами и фармакологическими агентами играет фосфоинозитидная система передачи сигнала. В то же время, роль ключевых компонентов этой системы в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки изучена недостаточно полно.

В связи с этим, представлялось целесообразным исследовать роль элементов цитоскелета и ключевых компонентов фосфоинозитидного пути передачи сигнала в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки, а также определить их возможное участие в регуляции транспорта Na+ инсулином, который (наравне с альдостероном и антидиуретическим гормоном) играет важную роль в регуляции транспорта Na+ в различных эпителиальных тканях.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы заключалась в исследовании роли важнейших сигнальных систем и элементов цитоскелета в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки. Для достижения данной цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. С использованием широкого спектра фармакологических агентов, изменяющих динамическое состояние филаментов, определить влияние на транспорт Na+ различных систем цитоскелета, таких как микротрубочки и микрофиламенты.

2. С помощью специфических активаторов и ингибиторов протеинкиназы С и фосфатидилинозитолкиназ выяснить роль этих компонентов фосфоинозитидного пути передачи сигнала в регуляции транспорта Na+.

3. Исследовать влияние инсулина на транспорт Na"1" и выявить возможные механизмы, опосредующие регуляторное действие гормона на различные компоненты системы транспорта Na+ в коже лягушки.

Впервые исследовано возможное участие фосфоинозитид-специфических киназ в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки. С применением эффективного ингибитора фосфатидилинозитол 3- и фосфатидилинозитол 4-киназ вертманнина, показана важная роль этих киназ в модуляции транспорта Na*.

Полученные данные о модифицирующем влиянии структурно-функциональной организации цитоскелета на регуляцию фосфатвдилинозитолкиназами транспорта Na+ в коже лягушки являются приоритетными для реабсорбирующих эпителиев.

Впервые показано, что в коже лягушки стимулирующее действие инсулина на транспорт Na+ опосредуется фосфатидилинозитолкин азами.

Впервые проведено сравнительное исследование механизмов регуляции транспорта Na+ в коже лягушки и головастика. Показано, что ведущие компоненты фосфоинозитидного пути передачи сигнала протеинкиназа С и фосфатвдилинозитолкиназы играют важную роль в регуляции транспорта Na+ в коже головастика и лягушки.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты вносят вклад в понимание механизмов регуляции направленного переноса ионов в реабсорбируюпшх эпителиальных тканях, а также существенно расширяют имеющиеся представления о механизмах регуляции транспорта Na+ в коже лягушки - классическом модельном объекте для изучения механизмов действия на мембранный транспорт различных гормонов и фармакологических агентов.

Получены новые данные, свидетельствующие в пользу существования в коже лягушки функциональной взаимосвязи между ENaC и структурами цитоскелета, ранее показанной для некоторых других типов эпителиальных тканей. При этом динамические перестройки цитоскелета могут рассматриваться как один из важных механизмов регуляции активности ENaC и транспорта Na+ в коже лягушки.

Результаты о зависимости влияния фосфатидилинозитолкиназ на активность ENaC и транспорт Na+ в коже лягушки от структурно-функциональной организации цитоскелета имеют принципиальную значимость для понимания механизмов регуляции активности ENaC в эпителиальных клетках, а также для выяснения путей взаимодействия и взаимовлияния в этом процессе различных сигнальных систем.

Данные о влиянии протеинкиназы С и фосфатидилинозитолкиназ на транспорт Na+ в коже головастика и лягушки представляют особый интерес, так как впервые исследуется функциональная преемственность системы транспорта Na+ в коже головастиков и взрослых амфибий. Новые данные о роли фосфатидилинозитолкиназ в регуляции инсулином транспорта Na+ в коже лягушки, существенно дополняют сведения о возможных механизмах регуляции этим гормоном транспорта Na+ в эпителиальных тканях.

Сопоставление данных, полученных в ходе исследования, с результатами экспериментов на клеточных культурах, дает ценную информацию о работе клеток эпителия и механизмах регуляции трансэпителиального транспорта ионов при действии биологически активных веществ.

Данные о влиянии инсулина и фармакологических агентов на транспорт Na+ в осморегупирующих эпителиях имеют не только теоретическое, но и большое практическое значение для медицины и фармакологии, и могут быть использованы для скрининга новых эффективных лекарственных средств.

Результаты исследования используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре биофизики биолого-почвенного факультета Санкт-Петербургского государственного университета.

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на: Междисциплинарной конференции с международным участием "Новые биокибернетические и телемедицинские технологии 21 века для диагностики и лечения заболеваний человека" ("НБИТТ-21"), Петрозаводск, 2002; 5-ой, 6-ой и 7-ой Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей "Человек и его здоровье", СПб, 2002, 2003, 2004; ХЕХ съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова, Екатеринбург, 2004; Международных конференциях "Рецепция и внутриклеточная сигнализация", Пущино, 2003, 2005; International symposium "Biological Motility", Pushchino, 2004; 1П съезде биофизиков России, Воронеж, 2004; Всероссийской конференции молодых исследователей "Физиология и медицина", СПб, 2005; V Сибирском физиологическом съезде, Томск, 2005; I съезде физиологов СНГ "Физиология и здоровье человека", Сочи, 2005; а также на заседаниях кафедры биофизики Санкт-Петербургского государственного университета и научных семинарах лаборатории биофизики клетки ФНИИ им. А. А. Ухтомского.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, методического раздела, результатов исследования и их обсуждения, общего заключения, списка литературы, включающего 5?С> наименований, и приложения. Работа иллюстрирована рисунками и SC таблицами.

Материалы и методы исследования

Объект исследования. Эксперименты проводили на самцах лягушки Rana temporaria в период с ноября по март и на головастиках того же вида, находившихся на 40 - 54 стадиях метаморфоза. Кожу с брюшка взрослых особей срезали и навязывали на полую полиэтиленовую трубку с внутренним диаметром 0.8 см. Кожу с головастиков удаляли целиком и навязывали брюшной частью на идентичную трубку с внутренним диаметром 0.2 см. Трубку с кожей помещали в модифицированную камеру Уссинга таким образом, чтобы апикальная поверхность кожи была обращена к наружному раствору.

Растворы. С обеих сторон кожи добавляли идентичный по солевому составу раствор Рингера для холоднокровных, содержащий (в мМ): 110 NaCl, 2.5 КС1, 3 СаС12, 5 Tris НС1. рН раствора - 7.4. В экспериментах применяли реактивы фирмы Sigma (США). Фармакологические агенты добавляли к апикальной или базолатеральной поверхности кожи. В конце каждого опыта в раствор, омывающий апикальную поверхность кожи, добавляли б локатор ENaC амилорид (20 мкМ).

Автоматизированная установка фиксации напряжения. Для определения характера действия различных фармакологических агентов на транспорт Na+ в коже лягушки использовали автоматизированную установку фиксации потенциала и регистрации вольт-амперных характеристик (ВАХ). Для измерения ВАХ на кожу подавали линейноизменяющееся напряжение (ramp) со скоростью 20 мВ/с. В интервалах между измерениями ВАХ трансэпителиальный потенциал (VT) кожи поддерживали при 0 мВ (режим короткого замыкания) или при потенциале открытой цепи, V0c (Voc = VT при трансэпителиальном токе 1т = 0). Из ВАХ определяли электрические параметры кожи: ток короткого замыкания Isc (ISc - 1т при VT = 0), потенциал открытой цепи (Voc), трансэпителиальную проводимость (gT). gT рассчитывали по наклону ВАХ (Д1т / AVT) (Schoen, Erlij, 1985,1987). Трансэпителиальный транспорт Na+ в коже лягушки оценивали как амилорид-чувствительный ток короткого замыкания Isc (Bently, 1968; Schoen, Erlij, 1985,1987).

Всю получаемую в ходе опыта информацию регистрировали с помощью ЭВМ с использованием оригинального программного обеспечения.

Статистический анализ. На рисунках приведены результаты типичных экспериментов. Статистический анализ проводили с применением t - критерия Стьюдента. Результаты представлены в виде - среднее ± ошибка среднего.

Результаты экспериментов и их обсуждение

1. Роль фосфоинозитидиой системы в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки 1.1. Роль протеинкиназы С в регуляции транспорта Ña* в коже лягушки

Протеинкиназа С (ПКС) является одним из важнейших модуляторов функций любой эукариотической клетки. В качестве активаторов ПКС применяют производные форболового эфира, способные связываться с ферментом и вызывать те же изменения, что и эндогенный сигнал (Castagna et al., 1982; Крутецкая, Лебедев, 2000).

На рис. 1 приведены ВАХ и кинетика изменения 1$с до и после приложения со стороны апикальной поверхности кожи 150 нМ форболового эфира РМА (форбол 12-миристат 13-ацетат). Видно, что РМА вызывает увеличение амилорвд-чувствительного тока короткого замыкания (Isc) в 2 - 2.5 раза через 50 ± 20 мин после добавления агента. Увеличение Isc сопровождается сдвигом потенциала открытой цепи (Voc) в сторону гиперполяризации и увеличением трансэпителиальной проводимости кожи (gf). В среднем, по данным 10 экпериментов, значения электрических характеристик кожи лягушки в норме составляют: 1$с = 20.07 ± 5.64 мкА; Voc = -55.81 ± 11.48 мВ; gT = 0.36 ± 0.02 мСм. Приложение 150 нМ РМА со стороны апикальной поверхности кожи вызывает увеличение lsc на 85.96 ± 18.94 % (Р<0.05), Vqc - на 45.39 ± 9.82 % (Р<0.05), a gi - на 25.38 ± 6.44 % (Р<0.05). Добавление РМА к базолатеральной поверхности кожи не влияет на электрические характеристики кожи лягушки, что согласуется с данными литературы (Civan et al., 1985, 1989; Mauro et al., 1987; Els et al., 1998).

a 6

Рис. 1. Вольт-амперные характеристики кожи лягушки (а) и кинетика изменения тока короткого замыкания (1^) (б) до и после приложения со стороны апикальной поверхности кожи 150 нМ форболового эфира РМА л: О -ВАХ кожи лягушки в контроле- 1к= 18 55 мкА, Voc= -51 53 мВ, gт= 0 36 мСм, • - ВАХ кожи лягушки через 70 мин после добавления РМА- = 38.28 мкА, Vx « -83 22 мВ, gT = 0 46 мСм;

б: Одинарная стрелка соответствует моменту введения в раствор РМА; двойная стрелка соответствует моменту введения в раствор 20 мкМ амилорида.

Блокатор амилорид-чувствительных Na+- каналов (ENaC) амилорид полностью подавляет вызванное РМА повышение IsC. что свидетельствует о том, что РМА модулирует активность именно ENaC (рис. 16).

Для подтверждения того, что стимулирующее влияние РМА на транспорт Na+ связано с активацией ПКС, мы использовали два специфических ингибитора этого фермента: хелеритрин (Herbert et al., 1990) и соединение Н-7 (Hidaka et al., 1984; Kawamoto, Hidaka, 1984). Показано, что предварительная инкубация кожи лягушки с хелеритрином (10 мкМ) или соединением Н-7 (50 мкМ) в течение 35 - 40 мин существенно снижает, а в некоторых случаях полностью предотвращает стимулирующее влияние РМА на транспорт Na+. Полученные данные свидетельствуют о том, что эффект РМА на транспорт Na+ в коже лягушки действительно обусловлен активацией ПКС.

Результаты экспериментов, согласно которым активация ПКС вызывает значительное увеличение всех электрических характеристик кожи, свидетельствуют о важной роли протеинкиназы С в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки.

1.2. Роль фосфатидилинозитолкиназ в регуляции транспорта Na+ в коже

лягушки

Активность некоторых типов ионных каналов, в том числе ENaC, модулируется фосфоинозитидами (Paunescu et al., 2000; Tong et al., 2004). Известно, что нарушение взаимодействия фосфоинозигвдов и ENaC приводит к ряду патологических состояний (Tong et al., 2004). Важная роль в метаболизме фосфоинозигвдов принадлежит фосфатидилинозитолкиназам (ФИК) (Foster et а!., 2003). В последнее время появляются данные о том, что в различных реабсорбирующих эпителиях ФИК принимают участие в регуляции активности ENaC некоторыми гормонами, такими как альдостерон (Blazer-Yost et al., 1999), вазопрессин (Edinger et al., 1999) и инсулин (Record et al., 1998; Blazer-Yost et al., 2003). Однако, несмотря на то, что регуляция метаболизма фосфоинозитвдов фосфоинозитид-спешфическими киназами, такими как фосфатидилинозитол 3- (ФИЗК) и фосфатидилинозитол 4-киназы (ФИ4К) интенсивно исследуется, роль этих киназ в модуляции ионного транспорта через поляризованные клетки эпителия в настоящее время мало изучена.

Для исследования роли ФИЗК и ФИ4К в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки использовали эффективный ингибитор этих киназ вертманнин, выделяемый из Penicillium wortmanni (Walker et al., 2000). Известно, что в наномолярных концентрациях (0.01 - 0.4 мкМ) вертманнин необратимо ингибирует все известные типы ФИЗК (Walker et al., 2000; Foster et al., 2003), в то время как в более высоких (субмикромолярных) концентрациях, вертманнин ингибирует и ФИ4К (Barylko et al., 2002).

Показано, что добавление вертманнина (100 нМ, 500 нМ и 1 мкМ) со стороны базолатеральной поверхности кожи вызывает дозозависимое изменение всех электрических характеристик кожи лягушки, при этом наибольшее ингибирующее действие на транспорт Na+ оказывают микромолярные концентрации агента (рис. 2). Так, при добавлении 100 нМ вертманнина ISc снижается на 43.92 ± 14.71 % (Р<0.05), a V^ снижается на 45.97±15.01 % (Р<0.05). При приложении 500 нМ вертманнина Isc снижается на 53.63±16.98 % (Р<0.05), a Voc - на 54.02 ± 17.04 % (Р<0.05). При введении 1 мкМ вертманнина снижение ISc составляет 60.58 ± 9.66 % (Р<0.01), a Voc - 65.47 ± 10.62 % (Р<0.01).

Влияние вертманнина на gT также различается в зависимости от концентрации агента. Приложение низких концентраций вертманнина (100 и 500 нМ) вызывает увеличение gT: на 1.27 ± 0.04 % (Р<0.05) для 100 нМ, и на 1.17 ± 0.03 % (Р<0.05) для 500 нМ. Тогда как введение 1 мкМ вертманнина вызывает снижение gT на 2.18 ± 0.21 % (Р<0.05).

При добавлении вертманина со стороны апикальной поверхности кожи лягушки было обнаружено, что в зависимости от концентрации агента изменяется не только степень, но и характер действия агента на транспорт Na+ (рис. 3). Добавление 100 нМ вертманнина повышает Isc на 15.81 ± 3.78 % (Р<0.05), a VK - на 18.37 ± 4.27 % (Р0.05). При воздействии 500 нМ вертманнина Isc увеличивается на 10.93 ± 2.35 % (Р<0.05), a V^ - на 11.72 ± 2 04 % (Р<0.05). Тогда как приложение 1 мкМ вертманнина вызывает снижение Isc на 15.64 ± 4.28 % (Р<0.05), а V« - на 18.16 ± 5.31 % (Р<0.05). Изменения Isc и Voc, вызванные приложением вертманнина со стороны апикальной поверхности кожи, не сопровождаются изменениями gT.

Блокатор ENaC амилорид вызывает полное подавление ISc, что свидетельствует о том, что влияние ингибитора ФИК вертманнина на транспорт Na+ (независимо от концентрации или приложения агента со стороны апикальной или базолатеральной поверхности кожи лягушки) связано с модуляцией активности ENaC (рис. 2,3).

Полученные результата свидетельствуют о том, что воздействие вертманинна на транспорт Na+ в коже лягушки зависит от концентрации и различается при приложении

агента со стороны апикальной или базолатеральной поверхности кожи. Подобные различия связаны, по-видимому, с тем, что в регуляцию транспорта Na+ в коже лягушки вовлечены различные типы фосфатидилинозитолкиназ, различающиеся по чувствительности к ингибиторам, внутриклеточной локализации и выполняемым функциям. Известно, что противоположно ориентированные мембраны поляризованных клеток эпителия отличаются по своей структурно-функциональной организации, в том числе по липидному составу и расположению рецепторных комплексов (Rodrigues-Boulan, Nelson, 1989; Amsler, Kuwada, 1999; Kroschewski, 2004).

Согласно полученным данным, в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки Rana temporaria участвуют как ФИЗ-, так и ФИ4К. По-видимому, ФИЗ- и ФИ4К имеют различный механизм действия на транспорт Na+. При этом, ФИЗ- и ФИ4К, взаимодействующие с сигнальными комплексами, расположенными в базолатеральной мембране, имеют сходный механизм действия на активность ENaC и транспорт Na+, тогда как регуляторное влияние на транспорт Na+ ФИЗ- и ФИ4К, ассоциированных с сигнальными каскадами в апикальной мембране, осуществляется, по-видимому, с помощью различных механизмов.

1.2.1. Роль актинового цитоскелета в регуляции фосфатидилииозитолкиназами транспорта Na+ в коже лягушки

Известно, что некоторые регуляторные воздействия ФИК осуществляются при участии цитоскелета (Rameh, Cantley, 1999). В связи с этим, для выяснения возможной роли актинового цитоскелета в регуляции фосфатидилииозитолкиназами транспорта Na+ мы исследовали влияние вертманнина на транспорт Na+ после предварительной инкубации кожи лягушки с агентами, вызывающими реорганизацию микрофиламентов. Использовали деполимеризатор (латрункулин В, JIB) и стабилизатор (фаллоидин) актиновых филаментов.

Были проведены две серии экспериментов. В каждой серии апикальную поверхность кожи лягушки инкубировали в течение 30 мин с 5 мкМ ЛБ. После этого, в одной серии экспериментов вертманнин (100 нМ или 1 мкМ) вводили со стороны базолатеральной поверхности (рис. 2), а в другой - со стороны апикальной поверхности кожи (рис. 3). Видно, что ЛВ существенно изменяет влияние вертманнина на транспорт Na+.

Показано, что ЛВ вызывает ускорение кинетики и увеличение степени ингибирующего действия на Isc 100 нМ вертманнина (приложенного со стороны базолатеральной поверхности кожи) (рис 26) В среднем, Isc снижается на 70.49 ± 9.48 % (Р<0.05), а У ос - на 70.52 ± 9.54 % (Р<0.05); при этом не наблюдается увеличения gT. В то же время, обработка кожи лягушки ЛВ практически не изменяет влияние микромолярных концентраций вертманнина- добавление 1 мкМ вертманнина к коже лягушки, обработанной ЛВ, вызывает снижение Isc и Voc на 59.48 ± 9.35 % (Р<0.01) и 59.51 ± 8.99 % (Р0.01), соответственно (рис. 2а). Величина gT не меняется.

ЛВ модулирует также влияние на транспорт Na+ вертманнина, приложенного со стороны апикальной поверхности кожи. В среднем, добавление 100 нМ вертманнина к апикальной поверхности кожи, обработанной ЛВ, вызывает не увеличение, а снижение Isc и Voc на 61.35 ± 8.04 % (Р<0.05) и 58.29 ± 7.45 % (Р<0.05), соответственно (рис. 36). При этом не наблюдается изменения gT. В то же время, добавление 1 мкМ вертманнина к апикальной поверхности кожи лягушки, обработанной ЛВ, усиливает ингибирующее действие вертманнина (по сравнению с интактной кожей): величина Isc в этом случае снижается на 69,97 ± 9.34 % (Р<0.05), a Vw - на 66.07 ± 10.05 % (Р<0.05) (рис За). Изменения gT не наблюдается.

0 10 20 30 40 50 60 70 Время, мин

0 10 20 30 40 Время, мин

50 60

а б

Рис. 2. Кинетика изменения тока короткого замыкания (18С) в коже лягушки после добавления к базолатеральной поверхности 1 мкМ (а) или 100 нМ (б) вертманнина и приложения со стороны апикальной поверхности кожи блокатора ЕЫаС амилорида • - Изменения после добавления вертманнина к интактной коже; О - Изменения после добавления вертманнина к коже лягушки, предварительно обработанной в течение 30 мин латрункулином В (5 мкМ); Одинарная стрелка соответствует моменту введения в раствор вертманнина, двойная стрелка соответствует моменту введения в раствор 20 мкМ амилорида

Блокатор ENaC амилорвд вызывает полное подавление Isc (рис. 2, 3), что свидетельствует о том, что влияние ингибитора ФИК вертманнина на транспорт Na+ как в интактной, так и в обработанной J1B коже лягушки, связано с модуляцией активности ENaC.

10 20 30 Время, мин

Рис. 3. Кинетика изменения тока короткого замыкания (15С) в коже лягушки после добавления к апикальной поверхности 1 мкМ (а) или 100 нМ (б) вертманнина и приложения со стороны апикальной поверхности кожи блокатора ЕШС амилорида ф - Изменения после добавления вертманнина к интактной коже; О - Изменения после добавления вертманнина к коже лягушки, предварительно обработанной в течение 30 мин латрункулином В (5 мкМ), Одинарная стрелка соответствует моменту введения в раствор вертманнина; двойная стрелка соответствует моменту введения в раствор 20 мкМ амилорида

В аналогичных экспериментах с использованием стабилизатора акгиновых филаментов фалловдина показано, что предварительная инкубация кожи в течение 30 мин с 20 мкМ фаллоидина также модулирует влияние вертманнина на транспорт Na+.

Согласно данным литературы, элементы цитоскелета являются важными внутриклеточными эффекторами как ФИЗ-, так и ФИ4К (Cantrell, 2001). В свою очередь, активность самих ферментов также может регулироваться белками цитоскелета (Zang et al., 1992; Gachet et al., 1997; Grodin et al., 1991). Вероятно, что в коже лягушки структурам цитоскелета также принадлежит двоякая роль в модуляции влияния фосфатидилинозитолкиназ на транспорт Na+.

JIB или фаллоидин полностью предотвращают стимуляцию нано молярным и концентрациями вертманнина, приложенного к апикальной поверхности кожи. Кроме

того, инкубация кожи лягушки с JIB многократно усиливает ингибирующее влияние на транспорт Na+ микромолярных концентраций вертманнина. Подобный характер модулирующего влияния JIB и фаллоидина свидетельствует о том, что реорганизация микрофиламентов вызывает изменение активности ФИК или регулируемых ими сигнальных молекул, опосредующих влияние ФИК на транспорт Na+ в коже лягушки.

В то же время, предварительная инкубация кожи с JIB вызывает незначительное усиление ингибирующего действия на транспорт Na+ как нано-, так и микромолярных концентраций вертманнина, добавленного со стороны базолатеральной поверхности кожи. Данные результаты свидетельствуют о том, что в этом случае, влияние JIB и вертманнина на транспорт Na+ реализуется при участии сходных механизмов, а не связано с модуляцией JIB активности ФИК.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что перестройки в структуре актинового цитоскелета существенно модифицируют влияние фосфатвдилинозитолкиназ на транспорт Na+ в коже лягушки.

1.3. Роль фосфоинозитидной системы в регуляции транспорта Na4 в коже

головастика

Способность кожи аккумулировать Na+ из окружающей среды появляется у амфибий уже на ранних этапах метаморфоза (Taylor, Barker, 1965). Однако на ранних стадиях развития, когда основным органом, отвечающим за абсорбцию Na+, являются жабры, интенсивность транспорта Na+ через кожу головастика является крайне низкой, и, в отличие от транспорта Na+ в коже взрослых амфибий, не блокируется, а стимулируется амилоридом и его производными (Сох, 1997). Подобные различия связаны с тем, что в этот период развития в эпителии кожи амфибий отсутствуют ENaC, и транспорт Na+ осуществляется через неселективные катионные каналы, расположенные в апикальной мембране наружных слоев клеток кожи головастика (Сох, Alvarado, 1979; Hillyard et al., 1982; Hillyard, Van Driessche, 1989; Cox, 1997).

В литературе практически отсутствуют данные о роли различных сигнальных систем в регуляции транспорта Na+ в коже головастиков. В связи с этим, представлялось особенно интересным исследовать влияние важнейших компонентов фосфоинозитидной системы на трансэпителиальный транспорт Na+ на ранних стадиях формирования этого процесса.

Исследование функциональной организации транспорта Na+ в коже головастика показало, что амилорид-чувствительный Ige регистрируется на завершающих этапах развития, в среднем, начиная с 45 стадии метаморфоза. Известно, что на 45 - 48 стадиях метаморфоза у головастиков Rana temporaria заканчивается формирование задних конечностей и начинается перестройка ротового аппарата (Дабагян, Слепцова, 1975). Однако даже на поздних этапах метаморфоза в коже головастика присутствует амилорид-нечувствительная компонента Isc, природа которой в настоящее время не ясна

Показано, что активатор ПКС форболовый эфир РМА модулирует транспорт Na+ в коже головастика на разных этапах метаморфоза. Однако на 45 - 49 стадиях развития РМА ингибирует транспорт Na+, тогда как на более поздних стадиях (50 - 54) наблюдается стимулирующее действие агента. Кинетика изменения Isc, вызванная приложением 150 нМ РМА к апикальной поверхности кожи головастика (50 - 54 стадии развития), в целом, сходна с наблюдаемой в коже взрослой лягушки.

Влияние ингибитора ФИК вертманнина на транспорт Na+ в коже головастика также зависит от стадии метаморфоза. На ранних (вплоть до 50) стадиях развития, вертманнин не оказывает влияния на транспорт Na+. Начиная с 50 стадии, воздействие вертманнина на транспорт Na+ зависит от концентрации и различается при приложении агента со

стороны апикальной или базолатеральной поверхности кожи, так же, как это показано для кожи лягушки.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что протеинкиназа С и фосфатидюшнозиголкиназы участвуют в регуляции транспорта Na+ в коже головастика. При этом, вероятно, что РМА влияет как на активность неселективных катионных каналов, обуславливающих транспорт Na+ на ранних этапах развития амфибий, так и на ENaC, тогда как воздействие на транспорт Na+ блокатора фосфатидилинозитолкиназ вертманнина в большей степени связано с модуляцией активности ENaC при переходе головастика к взрослому типу функционирования организма.

2. Роль цитоскелета в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки

Известно, что разрушение микротрубочек (МТ) приводит к подавлению стимулирующего влияния гормонов на транспорт Na+ или предотвращению развития адаптивных реакций в клетках осморегулирующих эпителиев (Parisi et al, 1985; Verrey et al, 1995). В последнее время появляется все больше данных о важной роли элементов актинового цитоскелета в регуляции активности различных компонентов системы трансэпителиального транспорта Na+. Предполагают, что динамическое изменение в организации микрофиламентов (МФ) является одним из возможных механизмов модуляции актином активности ENaC (Cantiello et al., 1991; Prat et а!., 1993). В то же время, влияние МФ на ENaC может быть опосредовано изменением состояния липидного микроокружения канала (Cantiello et al., 1991 ; Prat et al., 1993) или связано с ролью актина как важного компонента сигнальных каскадов (Cantiello et al., 1993; Janmey 1998).

Для исследования возможной роли цитоскелета в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки мы использовали два различных типа фармакологических агентов- агенты, стимулирующие деполимеризацию МТ (колхицин и колцемид (100 мкМ), винбластин (25 мкМ)) или МФ (цитохалазин В (20, 40 мкг/мл), дигидроцитохалазин В (20, 40 мкМ), латрункулин В (5, 10 мкМ)); и агенты, стабилизирующие МТ (таксол (10, 25 и 50 мкМ)) или МФ (фаллоидин (20, 40 мкМ)).

Установлено, что агенты, вызывающие деполимеризацию МТ, подавляют транспорт Na+ в коже лягушки При этом, непосредственно после приложения к апикальной или базолатеральной поверхности кожи колхицина, колцемида или винбластина наблюдаются некоторые различия в кинетике изменения ist. В то же время, длительное приложение этих агентов, приводящее к существенному разрушению МТ, вызывает значительное подавление транспорта Na+. Показано, что наибольшее ингибирующее действие на транспорт Na+ имеет винбластин: приложение агента к апикальной поверхности кожи вызывает снижение Tsc на 30.25 ± 9.27 % (Р<0.05), a Voc - на 28.48 + 2.42 % (Р0.05). Добавление винбластина к базолатеральной поверхности кожи снижает Isc на 40.05 ± 12.43 % (Р<0.05), a Voc - на 38.29 ± 8.44 % (Р<0.05). Полученные результаты согласуются с данными литературы, согласно которым в коже лягушки Rana pipiens чувствительность микротрубочек к агентам, деполимеризующим МТ, снижается в ряду: винбластин > винкристин > колцемид > колхицин (Malawista, 1971).

Показано, что агенты, индуцирующие деполимеризацию МФ: цитохалазин В, дигидроцитохалазин В и ЛВ вызывают дозозависимое снижение транспорта Na+ в коже лягушки. При этом, ЛВ имеет значительно более выраженное ингибирующее действие на транспорт Na+, что, по-видимому, связано с более избирательным действием JIB (по сравнению с цитохалазинами) на полимерный F- актин (Spector et al., 1989). Добавление 5 мкМ ЛВ со стороны апикальной поверхности кожи вызывает снижение Isc на 57.02 ± 10.41 % (Р<0.01), а 10 мкМ ЛВ - на 79.74 ± 19.04 % (Р<0.01); приложение аналогичных

концентраций JIB со стороны базолатеральной поверхности уменьшает Isc на 31.97 ± 9.48 % (Р<0.01) и 40.01 ± 12.34 % (Р<0.01), соответственно. JIB вызывает также снижение Vqc и незначительное увеличение gT.

Агенты, стабилизирующие МТ и МФ, также подавляют транспорт Na+ в коже лягушки. При этом, фаллоидин и таксол вызывают сходную кинетику изменения Isc и имеют одинаковую степень ингибирующего действия на Isc и Vqc. Это может быть связано с общим механизмом действия данных агентов на полимерные филаменты, или свидетельствовать о сходной функциональной роли полимерных МТ или МФ в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки. Степень ингибирующего действия таксола и фаллоидина на транспорт Na+ существенно ниже, чем у агентов, индуцирующих деполимеризацию МТ и МФ.

Снижение Isc и Voc. индуцируемое приложением цитохалазинов или агентов, вызывающих реорганизацию микротрубочек, не сопровождается изменениями gT. Во всех экспериментах, блокатор ENaC амилорид вызывает полное подавление Isc. что указывает на то, что влияние агентов, модифицирующих структуры цигоскелета, на транспорт Na+ (независимо от приложения агентов со стороны апикальной или базолатеральной поверхности кожи лягушки) связано с модуляцией активности ENaC.

Полученные данные свидетельствуют о важной роли микротрубочек и микрофиламентов в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки.

3. Регуляция инеулином транспорта Na* в коже лягушки

Способность инсулина стимулировать транспорт Na+ в эпителиальных клетках амфибий впервые была продемонстрирована в 1965 году (Herrera, 1965). Стимулирующее влияние инсулина на транспорт Na+ в реабсорбируюших эпителиях является предметом интенсивных исследований в течение последних десятилетий, В то же время, механизмы, лежащие в основе данного процесса, по-прежнему, неизвестны.

Исследование влияния инсулина на транспорт Na+ в коже лягушки Rana temporaria показало, что добавление 1 мкМ инсулина со стороны базолатеральной поверхности кожи вызывает увеличение всех электрических характеристик: Isc увеличивается на 45.6 ±98 % (РС0.01), Voc - на 55.85 ± 12.16 % (Р<0.01), a gT - на 8.33 ± 1.77 % (Р<0.05). Приложение 20 мкМ амилорида к апикальной поверхности кожи полностью подавляет Isc, свидетельствуя о том, что вызванное инсулином увеличение ISc связано со стимуляцией ENaC (рис. 4а).

Рецептор инсулина принадлежит к суперсемейству рецепторов, имеющих собственную тирозинкиназную активность (Cadena, Gill, 1992), и многие регуляторные воздействия инсулина связаны с активацией тирозинкиназы (ТК) инсулинового рецептора Для выяснения участия ТК в регуляции инсулином транспорта Na+ в коже лягушки применяли специфический ингибитор ТК изофлавоновд генистейн (Akiyama, Ogawara, 1991). В серии контрольных экспериментов показано, что генистейн существенно модулирует базальный уровень транспорта Na+. Введение 100 мкМ генистейна в раствор со стороны апикальной поверхности кожи вызывает значительное увеличение Isc и Voc, тогда как приложение генистейна со стороны базолатеральной поверхности кожи приводит к снижению этих параметров. В обоих случаях не наблюдается изменения gT. В то же время, независимо от влияния на базальный уровень Isc, длительная (от 30 до 50 мин) прединкубапия как апикальной, так и базолатеральной поверхности кожи с генистейном, существенно снижает стимулирующее влияние на Isc инсулина, приложенного к базолатеральной мембране.

Известно, что тирозинфосфатазы (ТФ) являются важными компонентами сигнальных путей, запускаемых инсулином. Для определения участия ТФ в регуляции инсулином

транспорта Na+ в коже лягушки применяли эффективный ингибитор ТФ ортованадат Na (Na3V04), ингибирующий все группы ТФ в концентрации 10 - 100 мкМ (Fisher et al., 1991). Показано, что приложение со стороны базолатеральной поверхности кожи 100 мкМ Na3V04 ингибирует транспорт Na*. Индуцируемое ортованадатом Na снижение Ige сопровождается гиперполяризацией VT и незначительным увеличением gT. Показано также, что в коже лягушки Na3V04 усиливает стимулирующий эффект инсулина на транспорт Na+.

Время, мив

20 40 60 80 100 120 140¡ Время, мин !

а б

Рис. 4. Кинетика изменения тока короткого замыкания (15С) в коже лягушки после

добавления со стороны базолатеральной поверхности инсулина (а) и после последовательного добавления вертманнина (с обеих сторон кожи) и инсулина (со стороны базолатеральной поверхности кожи) (б) а: Одинарная стрелка соответствует моменту введения в раствор 1 мкМ инсулина (И); двойная стрелка соответствует моменту введения в раствор 20 мкМ амилорида;

б: Одинарная стрелка соответствует моменту введения в раствор 1 мкМ вертманнина (В) или 1 мкМ инсулина (И); двойная стрелка соответствует моменту введения в раствор 20 мкМ амилорида._

Установлено, что фосфатвдилинозитолкиназы являются важными регуляторными белками, опосредующими многие клеточные эффекты инсулина (Shepherd et al., 1996). Для выяснения роли ФИК в регуляции инсулином транспорта Na+, мы использовали высокие (микромолярные) концентрации ¿локатора ФИК вертманнина, при этом вертманнин вводили одновременно с обеих сторон кожи лягушки. Показано, что вертманнин значительно снижает стимулирующее влияние инсулина на транспорт Na+ (рис. 46).

Согласно данным литературы, стимуляция инсулином транспорта Na+ в коже лягушки Rana pipiens опосредуется активацией протеинкиназы С (Civan et al., 1988, 1989). Для определения роли ПКС в воздействии инсулина на транспорт Na+ в коже лягушки Rana temporaria применяли специфический ингибитор ПКС хелеритрин. Обнаружено, что добавление 10 мкМ хелеритрина к апикальной поверхности кожи приводит к существенному снижению стимулирующего влияния инсулина на транспорт Na+.

Полученные данные свидетельствуют о том, что стимулирующее действие инсулина на транспорт Na+ в коже лягушки Rana temporaria зависит от активности тирозинкиназ и тирозинфосфатаз и осуществляется при участии фосфатидилинозитолкиназ и протеинкиназы С. Кроме того, тирозинкиназам и тирозинфосфатазам принадлежит важная роль в регуляции базального уровня транспорта Na+. Вероятно также, что в регуляции транспорта Na+ принимают участие как рецепторные, так и нерецегггорные тирозинкиназы и тирозинфосфатазы.

♦ # *

Таким образом, транспорт Na+ в коже лягушки - тонкий, сложный и хорошо отрегулированный процесс, в котором принимают участие Na+- транспортирующие

комплексы, локализованные в различных мембранах клетки. Показано, что регуляция транспорта Na+ в коже лягушки является сложной многокомпонентной системой, которая зависит от активности различных систем вторичных посредников и функционального состояния других ключевых компонентов клетки. Важная роль в модуляции транспорта Na+ принадлежит протеинкиназе С, фосфатидилинозитол-3- и фосфатидилинозитол-4-киназам, тирозинкиназам и тирозинфосфатазам, а также таким элементам цитоскелета, как микротрубочки и микрофиламенты. По-видимому, исследованные сигнальные системы (фосфоинозитидная, тирозинкиназная) и структуры цитоскелета находятся в тесной взаимосвязи и взаимовлиянии и формируют комплексный сигнальный каскад, лежащий в основе регуляции трансэпителиального транспорта Na+ в коже лягушки.

ВЫВОДЫ

1. Транспорт Na+ в коже лягушки Rana temporaria зависит от структурно-функциональной организации цитоскелета. Любые изменения нативной структуры (деполимеризация или стабилизация) микротрубочек или микрофиламентов приводят к снижению транспорта Na+.

2. Активатор протеинкиназы С форболовый эфир РМА стимулирует транспорт Na+ в коже лягушки. Ингибиторы протеинкиназы С хелеритрин и соединение Н-7 предотвращают стимулирующее действие РМА на транспорт Na+. Полученные данные свидетельствуют о том, что протеинкиназа С является важным сигнальным компонентом, участвующим в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки.

3. Транспорт Na+ в коже лягушки регулируется фосфатидилинозитолкиназами. В модуляции транспорта Na+ участвуют как фосфатидилинозитол 3-, так и фосфатилилинозитол 4-киназы. Влияние фосфатидилинозитолкиназ на транспорт Na+ зависит от их взаимодействия с сигнальными каскадами в противоположно-ориентированных мембранах поляризованных эпителиальных клеток, различающихся по своей структурно-функциональной организации.

4. Агенты, вызывающие реорганизацию микрофиламентов (латрункулин В и фаллоидин), модулируют влияние фосфатидилинозитолкиназ на транспорт Na+ в коже лягушки. Таким образом, воздействие фосфатидилинозитолкиназ на транспорт Na+ в коже лягушки зависит от структурно-функциональной организации актинового цитоскелета.

5. Блокатор тирозинкиназ генистейн и блокатор тирозинфосфатаз ортованадат Na модулируют базальный уровень транспорта Na+, что свидетельствует о важной роли тирозинкиназ и тирозинфосфатаз в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки.

6. Инсулин стимулирует транспоргг Na+ в коже лягушки. Стимулирующее влияние инсулина на транспорт Na+ предотвращается ингибитором тирозинкиназ, усиливается блокатором тирозинфосфатаз и существенно ослабляется блокаторами фосфатидилинозитолкиназ и протеинкиназы С. Полученные результаты указывают на то, что влияние инсулина на транспорт Na+ в коже лягушки связано с тирозиновым фосфорилированием и осуществляется с участием важнейших компонентов фосфоинозитидного пути передачи сигнала.

7. Результаты исследования свидетельствуют о том, что регуляция транспорта Na+ в коже лягушки является сложной многокомпонентной системой, включающей сигнальные каскады фосфоинозитидного и тирозинкиназного путей передачи сигнала и структуры цитоскелета.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пашина (Мельницкая) A.B., Крутецкая З.И.,Лебедев O.E. Влияние активаторов и ингибиторов протеинкиназы С на трансэпителиальный транспорт Na+ в коже лягушки. Материалы 5-ой Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей "Человек и его здоровье". СПб., 2002, С. 192-193.

2. Krutetskaya Z.I., Lebedev O.E., Krutetskaya N.I., Pashina (Melnitskaya) A.V. Role of protein kinase С in Na+ transport regulation in frog skin. Materials of International interdisciplinary scientific conference "New Biocybernetic and Telemedical Technologies of the 21 Century for Disease Diagnostics and Patient Treatment". Petrosavodsk, 2002, P. 26.

3. Крутецкая З.И., Лебедев O.E., Пашина (Мельницкая) A.B. Роль фосфоинозитидов в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки. Материалы международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». Пущино, 2003, С. 80-82.

4. Крутецкая З.И., Лебедев O.E., Пашина (Мельницкая) A.B. Роль протеинкиназы С в регуляции трансэпителиального транспорта Na+ в коже взрослых особей и головастиков лягушки Rana temporaria. Цитология. 2003. Т. 45. № 6, С. 590-595.

5. Пашина (Мельницкая) A.B., Крутецкая З.И., Лебедев O.E. Роль микротрубочек в регуляции трансэпителиального транспорта Na+ в коже лягушки Rana temporaria. Материалы 6-ой Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей "Человек и его здоровье". СПб., 2003, С. 129-130.

6. Пашина (Мельницкая) A.B., Крутецкая З.И.,Лебедев O.E. Влияние инсулина на транспорт Na+ в коже лягушки. Материалы XIX съезда физиологического общества им. И.П.Павлова, Тезисы докладов. Часть 2. Рос. Физиол. журн. им. И.М.Сеченова, 2004, Т. 90, № 8, С. 68.

7. Pashina (Melnitskaya) A.V., Krutetskaya Z.I., Lebedev O.E. Role of the cytoskeleton in Na+ transport regulation in frog skin. Materials of the International symposium "Biological Motility". Pushchino, 2004, P. 53-54.

8. Крутецкая З.И., Лебедев O.E., Пашина (Мельницкая) A.B. Роль актинового цигоскелета в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки. Материалы III съезда Биофизиков России. Воронеж, 2004, Т. 1, С. 239-240.

9. Пашина (Мельницкая) A.B. Ингибитор фосфоинозитндкиназ вертманнин снижает стимулирующее влияние инсулина на транспорт Na+ в коже лягушки. Материалы 7-ой Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей "Человек и его здоровье". СПб., 2004, С. 212-213.

10. Мельницкая A.B. Влияние деполимеризатора актиновых микрофиламентов -латрункулина В на транспорт Na+ в коже лягушки Rana temporaria. Материалы Всероссийской конференции молодых исследователей "Физиология и медицина". СПб., 2005, С. 75.

11. Мельницкая A.B., Крутецкая З.И., Лебедев O.E. Влияние стабилизатора микротрубочек таксола на транспорт Na+ в коже лягушки. Тезисы докладов V Сибирского физиологического съезда. Бюллетень сибирской медицины. Научно-практический журнал, Томск, 2005, Т. 4, приложение 1, С. 116.

12. Melnitskaya A.V., Knitetskaya Z.I., Lebedev O.E. Actin filament disrupter latrunculin В modulates the effect of wortmannin on Na+ transport in frog skin. Материалы международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». Пущино, 2005, С. 94-97.

13. Мельницкая A.B., Крутецкая З.И., Лебедев O.E. Влияние инсулина на транспорт Na+ в коже головастиков Rana temporaria. Научные труды I съезда физиологов СНГ. Сочи, Дагомыс, 2005. Т. 2, С. 102.

Подписано в печать 7.11.2005. Формат 60x84/16 Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ЗАО «КопиСервис» Печать ризографическая. Заказ № 3/711. П. л. 1.0. Уч.-изд. л. 1.0. Тираж 100 экз.

ЗАО «КопиСервис» Адрес юр.-194017, Санкт-Петербург, Скобелевский пр., д. 16. Адрес факт.: 197376, Санкт-Петербург, уя. Проф. Попова, д. 5. тел.: (812) 327 5098

* 2 о 6 8 ЙГ

РНБ Русский фонд

2006-4 20104

¡ «

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мельницкая, Анастасия Валерьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

• 1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Структурно-функциональная организация системы транспорта Na в коже 13 лягушки

2.1.1. Строение кожи лягушки

2.1.2. Функциональная организация системы транспорта Na+ в коже лягушки

2.1.3. Формирование системы транспорта Na+ в коже лягушки

2.2. Амилорид-чувствительные эпителиальные Ка+-каналы 21 0 2.2.1. Основные представители суперсемейства Deg/ENaC

2.2.2. Структурно-функциональная организация эпителиальных Ка+-каналов

2.2.2.1. Функциональная организация и топология в мембране эпителиальных ф каналов

2.2.2.2. Стехиометрия субъединиц и модель поры эпителиальных На+-каналов

2.2.3. Биофизические характеристики эпителиальных Ка+-каналов

2.2.4. Регуляция активности эпителиальных Ка+-каналов

2.2.4.1. Аденилатциклазная система передачи информации и регуляция активности 32 эпителиальных Ма+-каналов антидиуретическим гормоном

2.2.4.2. Фосфоинозитидная система передачи информации

2.2.4.3. Каскад метаболизма арахидоновой кислоты

2.2.4.4. Тирозинкиназы и тирозинфосфатазы и регуляция активности эпителиальных 49 Ма+-каналов инсулином

2.2.4.5. Элементы цитоскелета

2.2.4.5.1. Роль микротубулярного аппарата клетки в регуляции активности 56 ® эпителиальных №+-каналов

2.2.4.5.2. Роль элементов актинового цитоскелета в регуляции активности 61 эпителиальных №+-каналов

2.2.4.6. Регуляция активности эпителиальных

Na -каналов альдостероном

2.2.5. Патология эпителиальных Ка+-каналов

2.2.5.1. Псевдогиперальдостеронизм (Синдром Лиддла)

2.2.5.2. Псевдогипоальдостеронизм типа

2.3. Na+/K+- АТФаза в базолатеральной мембране кожи лягушки

2.3.1. Структурно-функциональная организация Na+/K+-AT<Pa3bi

2.3.2. Гормональная регуляция активности Na+/K+-AT<t>a3bi 78 2.3.2.1. Регуляция активности Na+/K+-ATOa3bi альдостероном ф 2.3.2.2. Регуляция активности Na+/K+-AT<Pa3bi инсулином

2.3.2.3. Регуляция активности Ыа+/К+-АТФазы антидиуретическим гормоном

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы регуляции транспорта Na+ в коже лягушки"

Актуальность проблемы. Исследование механизмов транспорта веществ через биологические мембраны является приоритетным и интенсивно развивающимся направлением современной биофизики, физиологии и медицины. Особый интерес вызывает изучение транспорта ионов в почке, являющейся уникальным органом по разнообразию, интенсивности и избирательности транспортных процессов, а также по многообразию механизмов их селективного регулирования. Ведущую роль в поддержании функциональной способности почки и ряда других эпителиальных тканей (основной составляющей которых является поляризованная клетка, асимметричная по своим структурным и функциональным характеристикам) играют различные транспортные процессы, осуществляемые при участии клеточных мембран. Ряд серьезных технических трудностей, возникающих при проведении экспериментов по исследованию деятельности почек в условиях in vivo, предопределил широкое применение различных модельных; объектов для изучения транспорта веществ через эпителиальные клетки.

Активный транспорт Na+ против градиента концентрации характерен для многих типов осморегулирующих эпителиальных тканей. В собирательных трубках почки реабсорбция Na+ является важнейшим механизмом поддержания электролитического и водного гомеостаза, и, следовательно, кровяного давления (Garty, Palmer, 1997; Feraille, Doucet, 2001). Клетки эпителия кожи лягушки также способны аккумулировать Na+ из окружающей среды против градиента концентрации.

В настоящее время общепринятой является двухмембранная модель активного транспорта Na+ эпителиальными клетками, предложенная Кефед-Джонсеном и Уссингом (Koefoed-Johnsen, Ussing, 1958). Согласно двухмембранной модели, в эпителиальной клетке пространственно разделены мембраны, определяющие пассивный вход в клетку Na+ (наружная или апикальная мембрана, в которой локализованы Na+-Kai-ianbi), и мембраны, в которых располагаются натриевые насосы (внутренняя или базолатеральная мембрана, в которой локализованы На+/К+-АТФазы). При этом электродвижущей силой, генерирующей градиент электрохимического потенциала и обеспечивающей активный транспорт Na через эпителий, является Na /К -АТФаза.

Ведущую роль в транспорте Na+ через эпителиальные системы играют амилорид-чувствительные Na+- каналы (ENaC). ENaC принадлежат к суперсемейству, объединяющему особый тип №+-проводящих ионных каналов, нечувствительных к мембранному потенциалу и блокируемых диуретиком амилоридом. Суперсемейство амилорид-чувствительных №+-каналов обозначается также как Deg/ENaC -суперсемейство (дегенерины/эпителиальные Ыа+-каналы). Дегенерины/эпителиальные Ыа+-каналы универсальны для всех многоклеточных животных (Metazoa) и экспрессируются в различных типах возбудимых и невозбудимых тканей, в которых Deg/ENaC принимают участие в осуществлении таких разнообразных процессов, как болевая чувствительность, механочувствительность, направленный перенос Na+ (Benos, Stanton, 1999; Kellenberger, Schild, 2002). Амилорид-чувствительные Na "-каналы были обнаружены также и в тканях беспозвоночных животных (Canessa et al., 1994b).

В последние годы достигнут существенный прогресс в исследовании структуры и топологии в мембране ENaC (Canessa et al., 1994a; Garty, Palmer, 1997; Benos, Stanton, 1999) и Ш+/К+-АТФазы (Forbush et al., 1978; Blanco, Mercer, 1998), тогда как гормональная и внутриклеточная регуляция этих ведущих компонентов системы транспорта Na+ в эпителиальных клетках, по-прежнему, остается мало изученной. Известно, что активность ENaC и №+/К+-АТФазы в эпителиальных клетках модулируется различными системами внутриклеточной сигнализации: арахидоновой кислотой и продуктами ее окисления (Cantiello et al., 1990; Satoh et al., 1993; Els, Helman, 1997; Carattino et al., 2003; Mies et al., 2004), G-белками (Cantiello et al., 1990),

•Л I внутриклеточным CaZT (Palmer, Frindt, 1987), протеинкиназой С (Line, Eaton, 1989; Gertsberg et al., 1997; Крутецкая и др., 2003), циклическим аденозинмонофосфатом (Marunaka, Eaton, 1991; Prat et al., 1992; Brodin et al., 1996), протеинкиназой A (Aceves, 1977; Els, Helman, 1991; Marunaka, Eaton, 1991; Garty, Palmer, 1997), тирозинкиназами (Rodricuez-Commes et al., 1994; Feraille et al., 1997).

Известно, что цитоскелет играет ведущую роль в процессах секреции, абсорбции, межклеточного взаимодействия и деления клеток. В последнее время появляется все больше данных о важной роли элементов цитоскелета в регуляции транспорта Na+ в различных реабсорбирующих эпителиях (Els, Ghou, 1993; Cantiello, 1995; Berdiev et al., 1996; Manunta et al., 1997; Rehn et al., 1998). Однако, несмотря на интенсивные исследования в этой области, механизмы, посредством которых осуществляется регуляторное действие цитоскелета на транспорт Na+ в эпителиальных клетках, в настоящее время неизвестны. Кроме того, данные об участии элементов цитоскелета в регуляции транспорта Na+ получены, преимущественно, в экспериментах на клеточных культурах, тогда как влияние цитоскелета на транспорт Na+ в нативных эпителиях менее изучено.

Показано, что в различных эпителиальных системах важную роль в регуляции транспорта Na многими гормонами и фармакологическими агентами играет фосфоинозитидная система передачи сигнала. Кроме того, во многих эпителиальных тканях, в том числе в эпителии кожи и мочевого пузыря амфибий, при участии фосфоинозитидного пути регулируется не только активность различных компонентов транспорта Na+, но и модулируется регуляторное воздействие на них некоторых других сигнальных систем (Civan et al., 1985, 1989; Mauro et al., 1987). В то же время, роль ключевых компонентов фосфоинозитидной системы в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки изучена недостаточно полно.

В связи с этим, представлялось целесообразным исследовать роль элементов цитоскелета и ключевых компонентов фосфоинозитидного пути передачи сигнала в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки, а также определить их возмолсное участие в регуляции транспорта Na+ инсулином, который (наравне с альдостероном и антидиуретическим гормоном) играет важную роль в регуляции транспорта Na+ в различных эпителиальных тканях.

3. Исследовать влияние инсулина на транспорт Na+ и выявить возможные механизмы, опосредующие регуляторное действие гормона на различные компоненты системы транспорта Na4 в коже лягушки.

Научная новизна работы. С помощью широкого спектра фармакологических агентов, влияющих на организацию различных систем цитоскелета, выявлена важная роль микротрубочек и микрофиламентов в регуляции транспорта Na+ в коже лягушки. Впервые показано, что агенты, стабилизирующие микротрубочки (таксол) или микрофиламенты (фаллоидин), подавляют трансэпителиальный транспорт Na+. Впервые установлено также, что агенты, индуцирующие деполимеризацию микротрубочек (колхицин, колцемид, винбластин), существенно снижают транспорт Na+ в коже лягушки.

Полученные данные о модифицирующем влиянии структурно-функциональной организации цитоскелета на регуляцию фосфатидилинозитолкиназами транспорта Na+ в коже лягушки являются приоритетными для реабсорбирующих эпителиев.

Впервые проведено сравнительное исследование механизмов регуляции транспорта Na+ в коже лягушки и головастика. Показано, что ведущие компоненты фосфоинозитидного пути передачи сигнала протеинкиназа С и фосфатидил-инозитолкиназы играют важную роль в регуляции транспорта Na+ в коже головастика и лягушки.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты вносят вклад в понимание механизмов регуляции направленного переноса ионов в реабсорбирующих эпителиальных тканях, а также существенно расширяют имеющиеся представления о механизмах регуляции транспорта Na+ в коже лягушки - классическом модельном объекте для изучения механизмов действия на мембранный транспорт различных гормонов и фармакологических агентов.

Новые данные о роли фосфатидилинозитолкиназ в регуляции инсулином транспорта Na+ в коже лягушки, существенно дополняют сведения о возможных механизмах регуляции этим гормоном транспорта Na+ в эпителиальных тканях.

Данные о влиянии инсулина и фармакологических агентов на транспорт Na+ в осморегулирующих эпителиях имеют не только теоретическое, но и большое практическое значение для медицины и фармакологии, и могут быть использованы для скрининга новых эффективных лекарственных средств.

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на: Междисциплинарной конференции с международным участием "Новые биокибернетические и телемедицинские технологии 21 века для диагностики и лечения заболеваний человека" ("НБИТТ-21"), Петрозаводск, 2002; 5-ой, 6-ой и 7-ой Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей "Человек и его здоровье", С.-Петербург, 2002, 2003, 2004; XIX съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова, Екатеринбург, 2004; Международных конференциях "Рецепция и внутриклеточная сигнализация", Пущино, 2003, 2005; International symposium "Biological Motility", Pushchino, 2004; III съезде биофизиков России, Воронеж, 2004; Всероссийской конференции молодых исследователей "Физиология и медицина", С.-Петербург, 2005; V Сибирском физиологическом съезде, Томск, 2005; I съезде физиологов СНГ "Физиология и здоровье человека", Сочи, 2005; а также на заседаниях кафедры биофизики Санкт-Петербургского государственного университета и научных семинарах лаборатории биофизики клетки ФНИИ им. А.А. Ухтомского.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 215 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, методического раздела, результатов исследования и их обсуждения, общего заключения и списка литературы, включающего 370 наименований, и приложения. Работа иллюстрирована 70 рисунками и 1 б таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Мельницкая, Анастасия Валерьевна

7. Результаты исследования свидетельствуют о том, что регуляция транспорта Na+ в коже лягушки является сложной многокомпонентной системой, которая зависит от активности фосфоинозитидной и тирозинкиназной систем и функционального состояния структур цитоскелета.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мельницкая, Анастасия Валерьевна, Санкт-Петербург

1. Геннис Р. 1997. Биомембраны: Молекулярная структура и функции. Изд-во «Мир», Москва. С. 1-624.

2. Дабагян Н.В., Слепцова JJ.A. 1975. Объекты биологии развития. Изд-во «Наука», Москва. С. 552-464.

3. Крутецкая З.И., Лебедев О.Е. 2000. Структурно-функциональная организация сигнальных систем в клетках. Цитология. 42 (9): 844-874.

4. Наточин Ю.В., Чапек К. 1976. Методы исследования транспорта ионов и воды. Изд-во «Наука», Ленингр. Отд-ние, Л. 1-220.

5. Крутецкая 3.И., Лонский А.В. 1994. Биофизика мембран. Изд-во С.-Петербургского университета, СПб. С.1-288.

6. Крутецкая З.И., Лебедев О.Е., Курилова Л.С. 2003. Механизмы внутриклеточной сигнализации. Изд-во С.-Петербургского университета, СПб. С.1-208.

7. Крутецкая З.И., Лебедев О.Е., Пашина А.В. 2003. Роль протеинкиназы С в регуляции трансэпителиального транспорта Na+ в коже взрослых особей и головастиков лягушки Rana temporaria. Цитология. Т. 45. № 6, С. 590-595.

8. Фултон А. 1987. Цитоскелет. Архитектура и хореография клетки. М., «Мир». 117с.

9. Aballay A., Stahl Ph.D., Mayorga L.S. 1999. Phorbol ester promotes endocytosis by activating a factor involved in endosome fusion. J. Cell. Sci. 112: 2549-2557.

10. Abramcheck F.J., Van Driessche W., Helman S.I. 1985. Autoregulation of apical membrane Na+ permeability of tight epithelia. Noise analysis with amiloride and CGS 4270. J. Gen. Physiol. 85: 555-582.

11. Aceves J. 1977. Sodium pump stimulation by oxytocin and cyclic AMP in the isolated epithelium of the frog skin. PflDgers Arch. 371: 211-216.

12. Aceves J., Erlij D. 1971. Sodium transport across the isolated epithelium of the frog skin. J. Physiol. 212: 195-210.

13. Adams СМ., Anderson M.G., Motto D.G., Price M.P, Johnson W.A., Wolsh M.J. 1998. Ripped pocket and pickpocket, novel Drosophila Deg/ENaC subunits expressed in early development and in mechanosensory neurons. J. Cell. Biol.140: 143-152.

14. Akiyama Т., Ogawara H. 1991. Use and specificity of genistein as an inhibitor of protein tyrosine kinases. Methods. Enzymol. 201: 362-370.

15. Alvarez de la Rosa D.A., Li H., Canessa C.M. 1999. Effect of aldosterone on biosynthesis, traffic, and functional expression of epithelial sodium channel in A6 cells. J. Gen. Physiol. 119: 427-442.

16. Amsler K, Kuwada S.K. 1999. Membrane receptor location defines receptor interaction with signaling proteins in polarized epithelium. Am. J. Physiol. 276: C91-C101.

17. Andersen H, Bjerregaard H, Nielsen R. 1990. Effect of 12-O-tetradecanoyl phorbol 13-acetate on solute transport and production of cAMP in isolated frog skin. Acta. Physiol. Scand. 140: 199-208.

18. Anderson R.G.W. 1998. The caveolae membrane system. Annu. Rev. Biochem. 67: 1999225.

19. Arystarkhova E., Wetzel R.K., Asinovski NIC, Sweadner K.J. 1999. The gamma subunit modulates Na+ and K+ affinity of the renal Na+,K+-ATPase. J. Biol. Chem. 274: 33183-33185.

20. Ashended C.L., Staller J.M., Boutwell R.K. 1983. Protein kinase activity associated with a phorbol ester receptor purified from mouse brain. Cancer. Res. 43: 4333-4337.

21. Ausiello D., Stow J.L., Cantiello H.F., Bruno de Almeida J., Benos D.J. 1992. Purified epithelial Na+ channel complex contains the pertussis toxin-sensentive Gai-3 protein. J.Biol. Chem. 267: 4759-4765.

22. Awayda M.S. 2000. Specific and nonspecific effects of protein kinase С on the epithelial Na+ channel. J. Gen. Physiol. 115: 559-570.

23. Awayda M.S., Platzer J.D., Reger R.L., Bengrine A. 2002. Role of PKCa in feedback regulation of Na+ transport in an electrically tight epithelium. Am. J. Physiol. 283: CI 122-C1132.

24. Axelrod J. 1990. Receptor-mediated activation of phospholipase A2 and arachidonic acid release in signal transduction. Biochem. Soc. Trans. 18: 503-507.

25. Baba W.I., Smith A. J., Townshend MM 1967. The effect of vasopressin, theophylline and cyclic 3', 5'- adenosine monophosphate (cyclic AMP) on sodium transport across the frog skin. Quqrt. J. Exp. Physiol. 52:416-421.

26. Barlet-Bas C., Khandouri C., Marsy S., Doucet A. 1988. Sodium-independent in vitro induction of Na,K-ATPase by aldosterone in renal target cells: permissive effect of triiodothyronine. Proc.Natl. Acad. Sci. 85: 1707-1711.

27. Barry E., Hall W.J. 1969. Stimulation of sodium movement across frog skin by prostaglandin Eb J. Physiol. 200: 83-84.

28. Barylko В., Wlodarski P., Binns D.D., Gerber S.H., EarnestS., SudhofT.C., Grichine N., Albanesi J.P. 2002. Analysis of the catalytic domain of phosphatidylinositol 4-lcinase type II. J. Biol. Chem. 277: 44366-44375.

29. Baxennndale L.M. 1988. Insulin increases apical sodium density in A6 epithelia. FASEB. J. 2: A748.

30. Benos D.J. 1982. Amiloride: a molecular probe of sodium transport in tissues and cells. Am. J. Physiol. 242: C131-C145.

31. Benos D.J., Awayda M.S., Ismailov I.I., Johnson J.P. 1995. Structure and function of amilorige- sensitive Na+ channels. J. Membr. Biol. 143: 1-18.

32. Benos D.J., Stanton B.A. 1999. Functional domeins within the degenerin/epitelial sodium channel (Deg/ENaC) superfamily of ion channels. J. Physiol. 520: 631-644.

33. Bentley P.J. 1968. Amiloride: a potent inhibitor of sodium transport across the toad bladder. J. Physiol, bond. 195: 317-333.

34. Berdiev B.K., Prat A.G., Cantiello H., Ausiello £>., Fuller C.M., Jovov В., Benos D.J., Ismailov I. 1996. Regulation of epithelial sodium channels by short actin filaments. J. Biol. Chem. 271: 17704-17710.

35. Bergen L.G., Borisy G.G. 1983. Tubulin-colchicine complex inhibits microtubule elongation at both plus and minus ends. 1983. J. Biol. Chem. 258: 4190-4194.

36. Beron J., Forster I., Begum P., Geering K., Verrey F. 1997. Phorbol 12-myristate 13-acetate downregulates Na,K- ATPase independent of its protein kinase С site: decrease in basolateral cell surface area. Mol. Biol. Cell.8: 387-398.

37. Beron J., Mastroberardino L., Spillman A., Verrey F. 1995. Aldosterone modulates sodium kinetics of Na,IC-ATPase containing an o.j subunit in A6 kidney cell epithelia. Mol. Biol. Cell. 6:261-271.

38. Berridge M.J. 1993. Inositol trisphosphate and calcium signalling. Nature. 361: 315-325.

39. Bevan S., Wood J.N. 1987. Arachidonic acid metabolites as second messendger. Nature. 328:20.

40. Bjerregaard H.F., Nielsen R. 1990. Role of Ca2+ and prostaglandins in regulation of active Na+ transport in frog skin. Сотр. Biochem. Physiol. 97: 75-80.

41. Blanco G., Mercer R. W. 1998. Isozymes of the Na,K-ATPase: heterogeneity in structure, diversity in function. Am. J. Physiol. 275: F633-F650.

42. Blazer-Yosi B.L., Esierman M., Vlahos C.J. 2003. Insulin-stimulated trafficking of ENaC in renal cells requires PI 3-kinase activity. Am. J. Physiol. 284: C1645-C1653.

43. Blazer-Yost B.L., Paunescu T.G., Helman S.I., Lee K.D., Vlahos C.J. 1999. Phosphoinositide 3-kinase is required for aldosterone-regulated sodium reabsorption. Amer. J. Physiol. 277: C531-C536.

44. Blazer-Yost B.L.,Liu X, Helman S.I. 1996. Insulin stimulated Na+ transport is mediated by increase of apical Na+ channels and not open probability in control and aldosterone prestimulated A6 epithelia. FASEB. J. 10: A78.

45. Blazer-Yost B.L.,Liu X, Helman S.I. 1998. Hormonal regulation of EnaCs: insulin and aldosteron. Am. J. Physiol. 274: C1373-C1379.

46. Blazer-Yost B.L., Vahle J.C., Byars J.M., Bacallao R.L. 2004. Real-time three-dimensional imaging of lipid signal transduction: apical membrane insertion of epithelial Na+ channels. Amer. J. Physiol. 287: C1569-C1576.

47. Botero-Velez M., Curtis J.J., Warnock D.G. 1994. Brief Report: Liddle's syndrome revisited - a disorder of sodium reabsorption in the distal tubule. New Engl. J. Mad. 330: 178181.

48. Breyer M.D., Ando Y. 1994. Hormonal signaling and regulation of salt and water transport in the collecting duct. Annu. Rev. Physiol. 56: 711-739.

49. Breyer M.T., Breyer R.M. 2000. Prostaglandin E receptors and the kidney. Am. J. Physiol. 279: F12-F23.

50. Bridges R.J., Cragoe E.J., Frizzell R.A., Benos D.J. 1989. Inhibition of colonic Na+ transport by amiloride analogues. Am. J. Physiol. 256: C67-C74.

51. Brodin В., Rytved K.A., Nielsen R. 1996. An increase in Ca .j activates basolateral chloride channels and inhibits apical sodium channels in frog skin epithelium. Pflugers. Arch. 433: 16-25.

52. Brodsky J.L. 1990. Characterization of the (Na++IC+)-ATPase from 3T3-F442A fibroblasts abd adipocytes. Isozymes and insulin sensitivity. J. Biol. Chem. 265: 10458-10465.

53. Brown D.A., London E. 1998. Functions of lipid rafts in biological membranes. Annu. Rev. Cell. Biol. 14: 111-136.

54. Brown D., Sabolic I., Gluck S. 1991. Colchicine-induced redistribution of proton pumps in the proximal tubule. Kidney. Int. 40: S79-S83.

55. Brown D., Stow J. 1996. Protein trafficking and polarity in kidney epithelium: from cell biology to physiology. Physiol. Rev. 76: 245- 297.

56. Butterwort M.B., Edinger R.S., Johnson J.P., Frizzell A. 2004. Acute ENaC stimulation by camp in a kidney cell line is mediated by exocytic insertion from a recycling channel pool. J. Gen. Physiol. 125: 81-101.

57. Cctdenct D.L., Gill G.N. 1992. Receptor tyrosine kinases. FASEB J. 6: 2332-2337.

58. Cala P.M., Cogwell N., Mandel L.J. 1978. Binding of 3H. ouabain to split frog skin: the role of the Na,K-ATPase on the generation of short circuit current. J. Gen. Physiol.71: 347-367.

59. Canessa C.M., Merillat A.-M., Rossier B.C. 1994b. Membrane topology of the epithelial sodium channel in intact cells. Am. J. Physiol. 267:C1682-C1690.

60. Canessa C.M., Schild L., Buell G., Thorens В., Gautschi I., Horisberger J.D., Rossier B.C. 1994a. Amilorid-sensitive epithelial sodium channel is made of three homologous subunits. Nature. 367: 463-467.

61. Cantiello H.F, PratA.G., Bonventre J.V., Cun-Ningham C.C., Hartwig J. H., Ansiello D. 1993. Actin-binding protein contributes to cell volume regulatory ion channel activation in melanoma cells. J. Biol. Chem. 268: 4596-4599.

62. Cantiello H.F, Stow J., PratA.G., Aitsiello D. 1991. Actin filaments control epithelial Na+ channel activity. Am. J. Physiol. 261: C882-C888.

63. Cantiello H.F. 1995. Role of the actin cytoskeleton on epithelial Na+ channel regulation. Kid. Intern. 48: 970-984.

64. Cantiello H.F., Patenaude C.R., Codinct J., Birnbaumer L., Ausiello D.A. 1990. Guj3 regulates epithelial Na+ channels by activation of phospholipase A2 and lipoxygenase pathways. J. Biol. Chem. 265: 21624-21628.

65. Cantrell D.A. 2001. Phosphoinositide 3-kinase signaling pathways. J. Cell. Sci. 114: 1439-1445.

66. Carattino M.D., Hill W.G., Kleyman T.R. 2003. Arachidonic acid regulares surface expression of epithelial sodium channels. J. Biol. Chem. 278: 36202-36213.

67. Carranza M.L., Rousselot M., Chibalin A. V., Bertorello A.M., Farve H, Feraille E. 1998. Protein kinase A indused recruitment of active Na+,K+-ATPase unit to the plasma membrane of rat proximal convoluted tubule. J. Physiol. 511: 235-243.

68. Castanga M., Takai Y., Kaibuchi K., Sano K., Kikkawa U., Nishizuka Y. 1982. Direct activation of calmodulin- activated, phospholipid- dependent protein kinase by tumor-promouting phorbol ester. J. Biol. Chem. 257: 7847-7851.

69. Catterall W.A. 1996. Molecular properties ofNa+ and Ca2+ channels. J. Bioenergetics and Biomembranes. 28: 219-230.

70. Cereijido M., Rotunno C.A. 1968. Fluxes and distribution of sodium in frog skin. A new model. J. Gen. Physiol. 51: 280-289.

71. Chalfant M.L., Civan J.M., Peter son- Yantorno It, DiBona D.R., O'Brien T.G., Civan M.M. 1996. Regulation of epithelial Na+ permeability by protein kinase С is tissue specific. J. Memb. Biol. 152: 207-215.

72. Cheek D.В., Perry J. W. 1957. A salt- wasting syndrome in infancy. Arch. Dis. Child. 33: 252-256.

73. Chou K.Y., Els W.J. 1995. Distribution of actin microfilaments in frog skin epithelial granular cells. Biol. Cell. 83: 61-68.

74. Chou K.Y., Els W.J. 1997. Effects of disassembly of actin microfilaments on the AVP-induced regulation of sodium channel densities in frog skin epithelium. Biol. Cell. 89: 285-294.

75. Civan M.M., OlegA., Peterson-Yantorno It, George It, O'Brien T.G. 1991. A Ca2+ -independent form of protein kinase С regulate Na+ transport across frog skin. J. Membr. Biol. 121:37-50.

76. Civan M.M., Peterson-Yantorno It, George It, O'Brien T.G. 1988. Interactions of TP A and insulin on Na+ transport across frog skin. Am. J. Physiol.256: C569-C578.

77. Civan M.M., Peterson-Yantorno 1С, O'Brien T.G. 1989. Insulin and phorbol ester stimulate conductive Na+ transport through a common pathway. Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 963967.

78. Civan M.M., Peterson-Yantoro It, O'Brien T.G. 1987. Diacylglycerols stimulate short circuit current across frog skin by increasing apical Na+ permeability. J. Memb. Biol. 97: 193204.

79. Civan M.M., Rubenstein D., Mauro Т., O'Brien T.G. 1985. Effects of tumor promoters on sodium ion transport across frog skin. Am. J. Physiol.248: C457-C465.

80. Coleman R.A., Smith W.L., Narumiya S. 1994. International union of pharmacology classification of prostanoid receptor: properties, distribution, and structure of the receptors and their subtypes. Pharmacol. Rev. 46: 205-229.

81. Cooper J.A. 1987. Effects of cytochalasin ang phalloidin on actin. J. Cell. Biol. 105: 1473-1478.

82. Copeland S.J., Berdiev B.K., Ji H.-L., Lockhart J., Parker S., Fuller C.M., Benos D.J. 2001. Region in the carboxy terminus of a-bENaC involved in gating and functional effect of actin. Am. J. Physiol. 281: C231-C240.

83. Coue M., Brenner S.L., Spector I., Korn E.D. 1987. Inhibition of actin polymerization by latrunculin A. FEBS Lett. 213: 316-318.

84. Coutry N., Farman P., Bonvalet N., Blot-Chcibaud M. 1995. Synergistic action of vasopressin and aldosteron on basolateral Na+-K+-ATPase in the cortical collecting duct. J. Membr. Biol. 145: 99-106.

85. Cox M., Singer I. 1977. Insulin-mediated Na+ transport in the toad urinary bladder. Am. J. Physiol. 232: F270-F277.

86. Cox T. 1997. Amiloride analog stimulation of short-circuit current in larval frog skin epithelial. J. Experiment. Biol. 200: 3055-3065.

87. Сох Т., Alvcirado R.H. 1979. Electrical and transport characteristics of skin of larval Rana catesbeiana. Am. J. Physiol. 237: R74-R79.

88. Crabbe J. 1961. Stimulation of active sodium transport by the isolated toad bladder with aldosterone in vitro. J. Clin. Invest. 40: 2103-2110.

89. Crabbe J. 1963. Effect of adrenocortical steroids on active sodium transport by the urinary bladder and ventral skin of amphibia. In: Hormones and kidney. London. Academic. Press. C: 75-81.

90. Crabbe J. 1972. Hormonal influences on transepithelial sodium transport: aldosteron vs. Insulin. J. Ster. Biochem. 3: 229-235.

91. Cuntbert A. W., Painter E. 1968. Independent action of antidiuretic hormone, theophylline and cyclic 3', 5'- adenosine monophosphate on cell membrane permeability in frog skin. J. Physiol. 196: 593-612.

92. Davis M.J., Wu X., Nurkiewicz T.R., Kawasaki J., Gui P., Iiill M/A., Wilson E. 2001. Regulation of ion channels by protein tyrosine phosphorylation. Am. J. Physiol. 281: HI835-H1862.

93. Djelidi S., Fay M., Cluzeaud F., Escoubet В., Eugene E., Capurro C., Bonvalet J.P., Farman N., Blot-Chabaud M. 1997. Transcriptional regulation of sodium transport by vasopressin in renal cells. J. Biol. Chem. 272: 32919-32924.

94. Dumontet C., Sikic B.I. 1999. Mechanisms of action of and resistance to antitubulin agents: microtubule dynamics, drug transport, and cell death. J. Clinic. Oncol. 17: 1061-1070.

95. Eaton D.C., Beccehetti A., Ma H.P., Ling B.N. 1995. Renal sodium channels: regulation and single channel properties. Kidney Int. 48: 941-949.

96. Edinger R.S., Rokaw M.D., Johnson J.P. 1999. Vasopressin stimulates sodium transport in A6 cells via a phosphatidylinositide 3-kinase-dependent pathway. Am. J. Physiol. 277: F575-F579.

97. Els W.J., Chou K.Y. 1993. Sodium-dependent regulation of epithelial sodium channel densities in frog skin; a role for the cytoskeleton. J. Physiol. 462: 447-464.

98. Els W.J., Helman S.H. 1997. Dual role of prostaglandins (PGE2) in regulation of channel density and probability of epithelial Na+ channels in frog skin (R. pipiens). J. Membr. Biol. 155: 75-87.

99. Els W.J., Helman S.I., 1981. Vasopressin, theophylline, PGE2, and indomethacin on active Na transport in frog skin: studies with microelectrodes. Am. J. Physiol. 241: F279-F288.

100. Els W.J., Helman S.I., 1991. Activation of epithelial Na channels by hormonal and autoregulatory mechanisms of action. J. Gen. Physiol. 98: 1197-1220.

101. Els W.J., Liu X., Helman S.I. 1998. Differential effects of phorbol esters (PMA) on blocker- sensitive ENaCs of frog skin and A6 epithelium. Am. J. Physiol. 275: C120-C129.

102. Els W.J., Mahlangu F.D. 1987. Micro-electrode studies on the effect of exogenous cyclic adenosine monophosphate on active sodium transport in frog skin. J. Physiol. 388: 547-563.

103. Erlij D., CeSmet P., Van Drissche W. 1994. Effect of insulin on area and Na+ channel density of apical membrane of cultured toad kidney cells. J. Physiol. 481: 533-541.

104. Erlij D., Gersten L., Sterba G., Schoen H.F. 1986. Role of prostaglandin in the response of tight epithelia to Ca2+ ionophores. Am. J. Physiol. 250: C557-C564.

105. Eskandari S., Snyder P.M., Kreman M., Zampighi G.A., Welsh M.J., Wright E.M. 1999. Number of subunits comprising the epithelial sodium channel. J. Biol. Chem. 274: 2728127286.

106. Ewart H.S., Klip A. 1995. Hormonal regulation of the Na+-K+-ATPase: mechanism underlying rapid and sustained chandes in pump activity. Am. J. Physiol. 269:C295-C311.

107. Falconer M.M., Echeverri C.J., Brown D.L. 1992. Differential sorting of beta-tubulin isotypes into colchicines-stable microtubules during neuronal and muscle differentiation of embryonal carcinoma cells. Cell. Motil. Cytoskeleton. 21: 313-325.

108. Farquhar M.G., Palade G.E. 1965. Cell junction in amphibian skin. J. Cell. Biol. 26: 263291.

109. Fassina G., Contessa A.R. 1967. Digitoxin and prostaglandin Ei as inhibitors of catecholamine-stimulated lipolysis and their interaction with Ca in the process. Biochem. Pharmac. 16: 1447-1453.

110. Fehlmann M., Freychet P. 1981. Insulin and glucagons stimulation of (Na+-K+)-ATPase transport activity in isolated rat hepatocytes. J. Biol. Chem. 256: 7449-7453.

111. Feraille E., Carranza M.-L., Gonin S., Beguin P., Pedemonte C., Rousselol M., Caverzasio J., Geering K., Martin P.Y., Favre H. 1999. Insulin-induced stimulation of Na,K

112. ATPase activity in kidney proximal tubule cells depends on phosphorylation of the a-subunit at Tyr-10. Mol. Biol. Cell. 10: 2847-2859.

113. Feraille E., Carranza M.-L., Rousselot M., Favre H. 1994. Insulin enhances sodium sensitivity of Na-K-ATPase in isolated rat proximal convoluted tubule. Am. J. Physiol. 267: F55-F62.

114. Feraille E., Carranza M.-L., Rousselot M., Favre H. 1997. Modulation of Na, K-ATPase activity by a tyrosine phosphorylation process in rat proximal convoluted tubule. J. Physiol. 498: 99-108.

115. Feraille E., Doucet A. 2001. Sodium-potassium-adenosinetriphosphatase-dependent sodium transport in the kidney: hormonal control. Physiol. Rev. 81: 345-418.

116. Feraille E., Rousselot M., Rajerison R., Favre H. 1995. Effect of insulin on Na, K-ATPase in rat collecting duct. J. Physiol. 488: 171-180.

117. Ferreira K.T., Ferreira H.G. 1981. The regulation of volume and ion composition in frog skin. Biochim. Biophys. Acta. 646: 193-202.

118. Feschenko M.S., Sweadner K. J. 1994. Conformation-dependent phosphorylation ofNa,K-ATPase by protein kinase A abd protein kinase C. J. Biol. Chem. 269: 30436-30444.

119. Fidelman M.L., Watlington C.0.1984. Insulin and aldosterone interaction on Na+ and K+ transport in cultured kidney cells (A6). Endo. 115: 1171-1178.

120. Firsov D., Gautschi I., Merillat A.M., Rossier B.C., SchildL. 1998. The heterotetrameric architecture of the epithelial sodium channel (ENaC). EMBO J. 17: 344-352.

121. Firsov D., Schild L., Gautschi I., Merillat A.M., Schneeberger E., Rossier B.C. 1996. Cell surface expression of the epithelial Na+ channel and a mutant causing Liddle syndrom: a quantitative approach. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93: 15370-15375.

122. Fisher E.H., Charbonneau H., Tonks N.K. 1991. Protein tyrosine phospharases: a diverse family of intracellular and transmembrane enzymes. Science. 253: 401-406.

123. Forbush B.I., Kaplan J.H., Hoffman J.F. 1978. Characterization of a new photoaffmity derivative of ouabain: labeling of the large polypeptide and of a proteolipid component of the Na, K-ATPase. Biochemistry. 17: 3667-3676.

124. Foster F.M., Traer C.J., Abraham S.M., Fry M.J. 2003. The phosphoinositide (PI) 3-kinase family. J. Cell. Sci. 116: 3037-3040.

125. Franki N., Ding G., Gao Y., Hays R.M. 1992. Effect of cytochalasin D on the actin cytoskeleton of the toad bladder epithelial cell. Am. J. Physiol. 263: C995-C1000.

126. Frindt G., Lee C.O., Yang J.M., Windhager E.E. 1988. Potential role of cytoplasmic calcium ions in the regulation of sodium transport in renal tubules. Miner. Electrolyte. Metab. 14: 40-47.

127. Frindt G., Palmer L.G., 1989. Low-conductance К channels in apical membrane of rat cortical collecting tubule. Am. J. Physiol. 256: F143-F151.

128. Fujii Y., Takemoto F., Katz A.I. 1990. Early effects of aldosterone on Na-K pump in rat cortical collecting tubules. Am. J. Physiol. 259: F40-F45.

129. Gao Y., Franki N., Macaluso F., Hays R.M. 1992. Vasopressin decreases immunogold labeling of apical actin in the toad bladder granular cell. Am. J. Physiol. 263: C908-C912.

130. Garty Ii., Palmer L.G.I997. Epithelial Sodium Channels: Function, Structure, and Regulation. Physiol. Rev.77: 359-396.

131. Gavryck W.A., Moore R.D., Thompson R.C. 1975. Effect of insulin upon membrane-bound (Na++K+)-ATPase extracted from frog skeletal muscle. J. Physiol. 252: 43-58.

132. Geering K., Claire M., Gaeggeler LI.P., Rossier B.C. 1985. Receptor occupancy vs. induction of Na, K-ATPase and Na+ transport by aldosterone. Am. J. Physiol. 248: C102-C108.

133. Geering 1С, Girardet M., Bron C., ICraehenbuhl J.P., Rossier B.C. 1982. Hormonal regulation of (Na, K)-ATPase biosynthesis in the toad bladder: effect of aldosterone and 3,5,3'-thyronine. J. Biol. Chem. 257: 10338-10343.

134. Gerencser G.A. 1993. Effect of prostaglandin F^x on transmural potential difference and short-circuit current in isolated frog skin. Сотр. Biochem. Physiol. 104: 103-106.

135. Gertsberg I., Brodsky I., Priel Z., Danilenko M. 1997. Na+-K+-ATPase in frog skin esophagus mucociliary cell membranes: inhibition by protein kinase С activation. Am. J. Physiol. 273: C1842-C1848.

136. Godette D.W., Friden C. 1986. The kinetics of cytochalasin D binding to monomeric actin. J. Biol. Chem. 261: 15970-15973.

137. Grinstein S., Erlij D. 1974. Insulin unmasks latent sodium pump sites in frog muscle. Nature. 251: 57-58.

138. Grinstein S., Erlij D. 1978. Intracellular calcium and the regulation of sodium transport in the frog skin. Proc. R. Soc. Lond. 202: 353-360.

139. Grodin P., Plantavid M., Sulan C., Breton M., Mauco G., Chap H. 1991. Interaction of pp60c"src, phospholipase C, inositol-lipid, and diacylglycerol kinases whith the cytoskeletons of thrombin-stimulated platelets. J. Biol. Chem. 266: 15705-15709.

140. Guo P., Hillyard S.D., Fu B.M. 2003. A two-barrier compartment model flow across amphibian skin. Am. J. Physiol. 285: R1384-R1394.

141. Haels C., Rothstein T.L. 1988. Cytochalasin stimulates phosphoinositide metabolism in murine В lymphocytes. J. Immunol. 140: 1256-1258.

142. Hagiwara N., Tohda H., Dot Y., O'Brodovich H, Marunaca Y. 1992. Effect of insulin and tyrosine kinase inhibitor on ion transport in the alveolar cell of the fetal lung. Biochem. Biophys. Res. Commun.l87.(2):802-808.

143. Hamm-Alvares S., Sheetz M. 1998. Microtubule-dependent transport: modulate of channel and transporter activity in liver and kidney. Physiol. Rev. 78: 1109-1129.

144. Hanks S.K., HunterT. 1995. Protein kinases 6. The eukaryotic protein kinase superfamily: linase (catalytic) domain structure and classification. FASEB J. 9: 576-596.

145. HarckA.F., Larsen E.H. 1986. Concentration dependence of halide fluxes and selectivity of anion pathway in toad skin. Acta. Physiol. Scand. 128: 289-304.

146. Hays R.M., Lindberg U. 1991. Actin depolymerization in the cyclic AMP- stimulated toad bladder epithelial cells, determined by the DNAse method. FEBS. Lett. 280: 397-399.

147. Helman S.I. 1979. Electrochemical potentials in frog skin: inferences for electrical and mechanistic model. Federation. Proc. 38: 2743-2750.

148. Helman S.I., Сох T.C., Van Driessche W. 1983. Hormonal control of apical membrane Na transport in epithelia. Studies with fluctuation analysis. J. Gen. Physiol. 82: 201-220.

149. Helman S.I., Fisher R.S. 1977. Microelectrode studies of the active sodium transport pathway of frog skin. J. Gen. Physiol. 69: 571-604.

150. Helman S.I., Liu X., Baldwin K, Blazer-Yost B.L., Els W.J. 1998. Time-dependent stimulation by aldosterone of blocker-sensitive ENaC in A6 epithelia. Am. J. Physiol. 274: C947-C957.

151. Helman S.I., Nagel W., Firsov R.S. 1979. Ouabain on active transepithelial sodium transport in frog skin: studies with microelectrodes. J. Gen. Physiol. 74: 105-127.

152. Helman S.I., Thompson S.M. 1982. Interpretation and use of electrical equivalent circuits in studies of epithelial tissues. Am. J. Physiol. 243: F519-F531.

153. Hendry L.B. 1988. Stereochemical complementary of steroid agonists and antagonists. J. Steroid. Biochem. 31: 493-523.

154. Herbert J.M., Augereau J.M., Gleye J., Maffarand J.P. 1990. Cheleretrine is a potent and specific inhibitor of protein kinase C. Biochem. Biophys. Res. Commun. 172: 993-999.

155. Herrera F. C. 1965. Effect of insulin on short-circuit current and sodium transport across toad urinary bladder. Am. J. Physiol. 209: 819-824.

156. Hidaka Ii., Inagaki PL, Kawamoto S., Sasaki Y. 1984. Isoquinolinesulfonamides, novel and potent inhibitors of cyclic nucleotide dependent protein kinase and protein kinase C. Biochemistry 23: 5036-5041.

157. Hilgemann D.W., Ball R. 1996. Regulation of cardiac Na+, Ca2+ exchange and Katp potassium channels by Р1Р2. Science. 273: 956-959.

158. Hill W.G., An В., Johnson J. 2002. Endogenously expressed epithelial sodium channel is present in lipid rafts in A6 cells. J. Biol. Chem. 277: 33541-33544.

159. Hillyard S.D., Benos D.J. 1993. Western blot analysis of apical membrane proteins in an enriched apical membrane fraction of larval and adult frog skin. FASEB J. 7: A3 54.

160. Hillyard S.D., Van Driessche W. 1989. Effect of amiloride on poorly selective cation channels of larval bullfrog skin. Am. J. Physiol. 256: C168-C174.

161. Hillyard S.D., Zeiske W., Van Driessche W. 1982. Poorly selective cation channels in the skin of the larval frog (stage XIX). Pflogers Arch. 394: 287-293.

162. Holt W.F., Lechene C. 1981. ADH-PGE2 interaction in cortical collecting tubule. I. Depression of sodium transport. Am. J. Physiol. 241: F452-F460.

163. Horisberger J., Rossier В. C. 1992. Aldosterone regulation of gene transcription leading to control of ion transport. Hypertension Dallas. 19: 221-227.

164. Hoshiko Т., Ussing LI.LI. 1960. The kinetics of Na-24 flux across amphibian skin and bladder. Acta. Physiol. Scand. 49: 74-81.

165. Huang M, Chalfle M. 1994. Gene interaction affecting mechanosensory transduction in Caenorrhabditis elegans. Nature. 367: 467-470.

166. Huf E.G. 1972. The role of CL and other anions in active Na+ transport in isolated frog skin. Acta. Physiol. Scand. 84: 366-381.

167. Jaisser F., Bugeon L., Blot-Chabaud M., Bonvalet J.P., Farman N. 1989. Effect of AVP and dDAVP on PGE2 synthesis in superfused cortical collecting tybules. Am. J. Physiol. 256: F1044-F1050.

168. Janmey P.A. 1998. The cytoskeleton and cell signaling: component localization and mechanical coupling. Physiol. Rev. 78: 763-781.

169. Jo II., Byer S., McDonald J.M. 1993. Insulin stimulates association of a 41 kDa G-protein (Gir41) with the insulin receptor. Biochem. Biophys. Res. Commun. 196: 99-106.

170. Kawamoto S., Hidaka PI. 1984. l-(5-isoquinoline sulfonyl-2-methylpiperazine (H-7) is a selective inhibitor of protein kinase С in rabbit platelets. Biochem. Biophys. Res. Commun. 125: 258-264.

171. Kellenberger S., Auberson M., Gautschi I., Schneeberger E. 2001. Permeability properties of ENaC selectivity filter mutants. J. Gen. Physiol. 118: 679-692.

172. Kellenberger S., Gautschi I., Schild L. 2002. An external site controls closing of the epithelium Na+ channel. J. Physiol. 543: 413-424.

173. Kellenberger S., Hoffmann-Pochon N., Gautschi I., Schneeberger E., Schild L. 1999. On the molecular basis of ion permeation in the epithelial Na+ channel. J. Gen. Physiol. 114: 13-30.

174. Kellenberger S., Schild L. 2002. Epithelial sodium channel/Degenerin family of ion channels: a variety of function for a shared structure. Physiol. Rev. 82: 735-767.

175. Koefoed-Johnsen V., Ussing H.H. 1958. The nature of the frog skin potential. Acta. Physiol. Scand.42:298-308.

176. Kotsonis P., Funk L., Prountzos C., Iannazzo L., Majewski H. 2001. Differential abilities of phorbol esters in inducing protein kinase С (PKC) downregulation in noradrenergic neurones. British J.Pharmacol. 132: 489-499.

177. Krahl M.E., 1974. Endocrine function of the pancreas. Ann. Rev. Physiol. 36: 331-360.

178. Kristensen P. 1972. Chloride transport across isolated frog skin. Acta. Physiol. Scand. 84: 338-346.

179. Krogh A. 1937. Osmotic regulation in the frog (Rana esculenta) by active absorption of chloride ions. Scand. Arch. Physiol. 76: 60-74.

180. Krogh A. 1938. The active absorption of ions in some freshwater animals. Z. Vergl. Physiol. 25: 235-250.

181. Kroschewski R. 2004. Molecular mechanisms of epithelial polarity: about shapes, forces, and orientation problems. News. Physiol. Sci. 19: 61-66.

182. Ku N.-O., Zhou X., Toivola D.M., Omary M.B. 1999. The cytoskeleton of digestive epithelia in health and disease. Am. J. Physiol. 277: GI 108-G1137.

183. Kumar N. 1981. Taxol-induced polymerization of purified tubulin. J. Biol. Chem. 256: 10435-10441.

184. Ma H.P., Saxena S., Warnock D.G. 2002. Anionic phospholipids regulate native and expressed epithelial sodium channel. J. Biol. Chem. 277: 7641-7644.

185. MacRobbie E.A.C., Ussing H.H. 1961. Osmotic behavior of the epithelial cells of frog skin. Acta. Physiol. Scand. 53:348-365.

186. Malawista S. 1971. Colchicine-like effects of other antimitotic agents. J. Cell. Biol. 49: 848-855.

187. Mandon В., SigaE., Chabardes D., Firsov D., RoinelN., De Rouffignac C. 1993. Insulin stimulates Na+, СГ, Ca2+, and Mg2+ transports in TAL of mouse nephron: cross-potentiation with A VP. Am. J. Physiol. 265: F361-F369.

188. Mano I., Driscoll M. 1999. DEG/ENaC channels: a touchy superfamily that watches its salt. Bioessays. 21: 568-578.

189. Manunta P., Cerutti R., Bernardi L., Stella P., Bianchi G. 1997. Renal genetic mechanisms of assential hypertension. J. Nephrol. 10: 172-178.

190. Marban E., Yamagishi Т., Tomaselli G.F. 1998. Structure and function of voltage-gated sodium channels. J. Physiol. 508: 647-657.

191. Markadieu N., Blero D., Boom A., Erneux C., Beauwens R. 2004. Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate: an early mediator of insulin-stimulated sodium transport in A6 cells. Am. J. Physiol. 287: F319-F328.

192. Marples D., Barber В., Taylor A. 1996. Effect of a dynein inhibitor on vasopressin action in toad urinary bladder. J. Physiol. 490:161-11A.

193. Martens J. R., Sakamoto N., Sullivan S. A., Grobaski T. D., Tamkun M. M. 2001. Isoform-specific localization of voltage-gated K+ channels to distinct lipid raft populations. Targeting of Kvl.5 to caveolae. J. Biol. Chem. 276: 8409 - 8414.

194. Marunaka Y., Eaton D.C.I991. Effects of vasopressin and cAMP on single amilorid -blockable Na+ channels. Am. J. Physiol. 260: C1071-C1084.

195. Marunaka Y., Hagiwara Y.N., Tohda H. 1992. Insulin activates amilorid blockable Na+ channels in a distal nephron cell line (A6) and mechanical coupling. Physiol. Rev. 78: 763-781.

196. Mastroberardino L., Spindler В., Forster I., Loffing J., Assandri R., May A., Verrey F. 1998. Ras pathway activates epithelial Na+ channel and decreases its surface expression on Xenopus Oocytes. Mol. Biol. Cell. 9: 3417-3427.

197. Matsumoto P.S, Ohara A, Duchatelle P, Eaton DC. 1993. Tyrosine kinase regulates epithelial sodium transport in A6 cells. Am. J. Physiol. 264: C246-C250.

198. Mauro Т., O'Brien T.G., Civan M.M. 1987. Effects of TP A on the short-circuit current across frog skin. Am. J. Physiol.252: C173-C178.

199. Maximov A.v., Vedernikova E.A., Negulyaev Yu.A. 1996. Actin filaments regulate the activity of Na+- selectine channels in human myeloid leukemia cells. Progress in Biophysics & Molecular Biology. 65. Suppl. 1. 96.

200. McEwan I.L., Wright A.P.H., Gustafsson J.A. 1997. Mechanism of gene expression by the glucocorticoid receptor: role of protein-protein interactions. Bioessays. 19: 153-160.

201. Mcintosh T.J., Kulkarui ICG., Simon S.A. 1999. Membrane fusion promoters and inhibitors have contrasting effects on lipid bilayers structure and undulation. Biophys. J. 76: 2090-2098.

202. Meads Т., Schroer T.A. 1995. Polarity and nucleation of microtubules in polarized epithelial cells. Cell. Motil. Cytoskeleton. 32: 273-288.

203. Mies F., Shlyonsky V, Goodlaerts A., Sariban-Sohraby S. 2004. Modulation of epithelial Na+ channel activity by long-chain n-3 fatty acids. Am. J. Physiol. 287: F850-F855.

204. Minor N.T., Sha Q., Nichols C.G., Mercer R.W.1998. The gamma subunit of hte Na+,IC+-ATPase induces cation channel activity. PNAS. 95: 6521-6525.

205. Mitchison Т., Kirschner M. 1984. Dynamic instability of microtybyle growth. Nature. 312: 237-242.

206. Moller D.E., Flier J.S. 1991. Insuline resistance-mechanisms, syndromes, and implications. N. Engl. J. Med. 325: 938-948.

207. Morel А., О'Carroll A.M., Brownstein M.J., Lolait S.J. 1992. Molecular cloning and expression of a rat Via arginine vasopressin receptor. Nature. 356: 523-526.

208. Morris R., Tousson A., Benos D.J., Schafer J.A. 1995. Microtubule disruption does not prevent vasotocin activation of Na+ channels (abstract). J. Am. Soc. Nephrol. 6: 347.

209. Nagel W. 1976. The intracellular electrical potential profile of the frog skin epithelium. Pflugers. Arch. 365: 135-143.

210. Nagel W. 1978. Effect of antidiuretic hormone upon electrical potential and resistance of apical and basolateral membranes of frog skin. J. Membr. Biol. 42: 99-122.

211. Nagel W. 1985. Basolateral membrane ionic conductance in frog skin. Pfltlgers. Archiv. 405: S39-S43.

212. Nakanishi S., Catt K.J., Balla T. 1995. A wortmannin- sensitive phosphatidylinositol 4-kinase that regulated hormone- sensitive pools of inositolphospholipids. Proc. Natl. Acad. Sci. 92: 5317-5321.

213. Negulyaev Yu.A., Vedernikova E.A., Maximov A. V. 1996. Disruption of actin filaments increases the activity of Na- conducting channels in human myeloid leukemia cells. Mol. Biol. Cell. 7: 1857-1864.

214. Neubig R.R. 1994. Membrane organization in G-protein mechanisms. FASEB J. 8: 939946.

215. Newton A.C. 1995. Protein kinase C: structure, function, and regulation. J. Biol. Chem. 270: 28495-28498.

216. Niisato N, Van Driessche W, Liu M, Marunaka Y. 2000. Involvement of protein tyrosine kinase in osmoregulation of Na transport and membrane capacitance in renal A6 cells. J. Membr. Biol. 175: 63-77.

217. Nishizuka Y. 1995. Protein kinase 5: protein kinase С and lipid signaling for sustained cellular responses. FASEB J. 9: 484-496.

218. Numann R., ILaiishcka S.D., Catterall W.A., Scheuer T. 1994. Modulation of skeletal muscle sodium channels in a satellite cell line by protein kinase C. J. Neurosci. 14: 4226-4236.

219. Oguchi A., Ikeda U., Kanbe Т., Tsuruya Y., Yamamoto K., Kawakami It, Medford R.M., Schimada K. 1993. Regulation of Na,K-ATPase gene expression by aldosterone in vascular smooth muscle cells. Am. J. Physiol. 265: H1167-H1172.

220. Oh Y, Smith P.R., Bradford A.L., Keeton D„ Benos D.J. 1993. Regulation by phosphorylation of purified epithelial Na+ channels in planar lipid bilayers. Am. J. Physiol. 265: C85- C91.

221. Ordway R. W., Singer J. J., Walsh J. V, Jr. 1991. Direct regulation of ion channels by fatty acids. TINS. 14: 96-100.

222. Orloff J., Handler J.S., 1962. The similarity of effects of vasopressin, adenosine-3',5'-phosphate (cyclicAMP) and theophylline on the toad bladder. J. Clin. Invest. 41: 702-709.

223. Palmer L.G., Frindt G. 1987. Effect of cell Caz+ and pli on Na channels from rat cortical collecting tubule. Am. J. Physiol. 253: F333-F339.

224. Palmer L.G., Frindt G. 1996. Gating of Na+ channels in the rat cortical collecting tubule: effect of voltage and membrane stretch. J. Gen. Physiol. 107: 35-45.

225. Pare J., LeongM.L., Buse P., Maiyar A.C., Firestone G.L., Hemmings B.A. 1999. Serum and glucocorticoid-inducible kinase (SGK) is a target of the PI 3-kinase-stimulated signaling pathway. EMBO. J. 18: 3024-3033.

226. Parczyk K., Haase W., Kondor-Koch C. 1989. Microtubules are involved in the secretion of proteins at the apical cell surface of the polarized epithelial cell (MDCIC). J. Biol. Chem. 264: 16837-16846.

227. Parisi M., Pisam M., Merot J., Chevalier J., Bourguet J. 1985. The role of microtubules and microfilaments in the hydrosmotic response to antidiuretic hormone. Biohim. Biophys. Acta. 817: 333-342.

228. Parness J., Horwitz SB. 1981. Taxol binds to polymerized tubulin in vitro. J. Cell. Biol. 91: 479-487.

229. Paunescu T.G., Blazer-Yost B.L., Vlahos C.J., Helman S.I. 2000. LY-294002- inhibitable PI 3- kinase and regulation of baseline rates of Na+ transport in A6 epithelia. Am. J. Physiol. 279: C236-C247.

230. Pfeiffer R., Beron J., Verrey F. 1999. Regulation of Na+ pump function by aldosteron is alpha-subunit isoform specific. J. Physiol. 516: 647-655.

231. Prat A.G., Ausiello D., Cantiello H. 1992. Vasopressin and protein kinase A activate G protein-sensitive epithelial Na+ channels. Am. J. Physiol. 265: C218-C223.

232. Pratley J.N., McQuillen N.K. 1973. The role of microfilaments in frog skin ion transport. J. Cell. Biol. 56: 850-857.

233. Price M.P., Snyder P.M., Welsh M.J. 1996. Cloning and expression of a novel human brain Na+ channel. J. Biol. Chem. 271: 7879-7882.

234. Price M.P., Welsh M.J. 1999. Effect of subunit composition and Liddle's syndrome mutations on biosynthesis of ENaC. J. Gen. Physiol. 276: C1346-C1351.

235. Rajerison R.M., Montegut M., Jard S., Morel F. 1972. The isolated frog skin epithelium: permeability characteristics and responsiveness to oxytocin, cyclic AMP and theophylline. Pfliigers. Arch. 332: 302-312.

236. Rameh L.E., Cantley L.D. 1999. The role of phosphoinositide 3-kinase lipid products in cell function. J. Biol. Chem. 274: 8347-8350.

237. Record R.D., Froelich L.L., Vlahos C.J., Blazer-Yost B.L. 1998. Phosphatigylinositol 3-lcinase activation is required for insulin- stimulated sodium transport in A6 cells. Am. J. Physiol. 274: E611-E6617.

238. Reeves A.S., Collins J.H., Schwartz A. 1980. Isolation and characterization of (Na,K)-ATPase proteolipid. Biochem. Biophys. Res. Commun. 95: 1591-1598.

239. Rehn M., Weber W-M., Clauss W. 1998. Role of the cytoskeleton in stimulation of Na+ channels in A6 cells by changes in osmolality. Eur. J. Physiol. 436: 270-279.

240. Rick R., Roloff C., Dorge A., Beck F.X., Thurau K. 1984. Intracellular electrolyte concentrations in the frog skin epithelium: effect of vasopressin and dependence on the Na concentration in the bathing media. J. Membr. Biol. 78: 129-145.

241. Rick R.A., Dorge A., Von Arnim E., Thurau K. 1978. Electron microprobe analysis of frog skin epithelium: evidence for a syncitial sodium transport compartment. J. Membr. Biol. 39: 313-331.

242. Rif M.C., Troutman S.L., Shcifer J.A. 1986. Sodium transport by rat cortical collecting tubule. Effect of vasopressin and desoxycorticosterone. J. Clin. Invest. 77: 1291-1298.

243. Robinson D.H., Mills J.W.I987a. Ouabain binding in tadpole ventral skin. I. Kinetics and effect on intracellular ions. Am. J. Physiol. 253: R402-R409.

244. Robinson D.H., Mills J. W.1987b. Ouabain binding in tadpole ventral skin. II. Localization of Na pumps sites. Am. J. Physiol. 253: R410-R417.

245. Rodrigues-Boulan E., Nelson W.J. 1989. Morphogenesis of the polarized epithelial cell phenotype. Nature. 245: 718-724.

246. Rodriguez-Commes J., Isales C., Kcilghati L., Gasalla-Herraiz J., Hayslett J.P. 1994. Mechanism of insulin-stimulated electrogenic sodium transport. Kidney International. 46:666674.

247. Rohacs Т., Lopes C.M.B., Jin Т., Ramdya P.P., Molnar Z., Logothetis D.E. 2003. Specificity of activation by phosphoinositides determines lipid regulation of Kir channels. PNAS. 100: 745-750.

248. Rokaw M.D., West M., Johnson J.P. 1996. Rapamycin inhibits protein kinase С activity and stimulates Na+ transport in A6 cells. J. Biol. Chem. 271: 32468-32473.

249. Rossier B.C. 2002. Hormonal regulation of the epithelial sodium channel ENaC: N or P0? J. Gen. Physiol. 120: 67-70.

250. Rossier B.C., Geering K, Atkinson J., Roch-Ramel F. 1985. Renal receptors: In: The kidney: Physiology and pathophysiology, edited by D.W. Seldin and G. Giebisch. New York: Raven. 775-806.

251. Rotin D.D., Bar-Sagi D., O'Brodovich H., Merilainen J., Lehto V.P., Canessa C.M., Rossier B.C., Downey G.P. 1994. An SH3 binding region in the epithelial Na+ channel (arENaC) mediated localization at the apical membrane. EMBO J. 13: 4440-4450.

252. RouchAJ., ChenL., Kudo L.H., Bell P.D., Fowler B.C., Corbitt B.D., Schafer J. A. 1993. Intracellular Ca+ and PKC activation do not inhibit Na+ and water transport in rat CCD. Am. J. Physiol. 265: F569-F577.

253. Russo J.J., Sweadner K.J. 1993. Na+-K+-ATPase subunit isoform pattern modification by mitogenic insulin concentration in 3T30Llpreadipocytes. Am. J. Physiol. 264: C311-C316.

254. Rytved K.A., Brodin В., Nielsen R. 1995. Prostaglandin E2 release from dermis regulates sodium permeability of frog skin epithelium. Acta. Physiol. Scand. 153: 263-270.

255. Rytved K.A., Brodin В., Nielsen R. 1996. Outward rectifying chloride channels in the basolateral membrane of frog skin epithelium. A patch clamp study. Acta. Physiol. Scand.

256. Saltiel A.R. 1996. Diverse signaling pathways in the cellular actions of insulin. Am. J. Physiol. 270: E375-E385.

257. Sampson S.R., Brodie C., Aldoim S.C. 1994. Role of protein kinase С in insulin activation of the Na-K pump in cultured skeletal muscle. Am. J. Physiol. 266: C751-C758.

258. Satoh Т., Cohen H.T., Katz A.I. 1993. Intracellular signaling in the regulation of renal Na-K-ATPase. II. Role of eicosanoids. J. Clin. Invest. 91: 409-415.

259. Satoh Т., Endou H. 1990. Inhibitory effect of phorbol ester on sodium transport in frog urinary bladder. Am. J. Physiol.259: F425-F431.

260. Schild L., Schneeberger E., Gautschi I., Firsov D. 1997. Identification of amino acid residues in the a, (3, у subunits of the epithelial sodium channel (ENaC) involved in amiloride block and ion permeation. J. Gen. Physiol. 109: 15-26.

261. Schlessinger J., Ullrich A. 1992. Growth factor signaling by receptor tyrosine kinases. Neuron. 9: 383-391.

262. Schlondorff D., Satriano, J. A. 1985. Interaction of vasopressin, camp, and prostaglandins in toad urinary bladder. Am. J. Physiol. 248: F454-F458.

263. Schoen H.F., Erlij D. 1987. Insulin action on electrophysiological properties of apical and basolateral membranes of frog skin. Am. J. Physiol. 252: C411-C417.

264. Schoen H.F., Erlij D.1985. Current-voltage relation of the apical and basolateral membranes of the frog skin. J. Gen. Physiol. 86: 257-287.

265. Schroer T.A., Sheetz M.P. 1991. Two activators of microtubule-based vesicle transport. J. Cell. Biol. 115: 1309-1318.

266. Schulze D., Krauter Т., Fritzenschaft Ii., Soom M., Baukrowitz T. 2003. Phosphatidylinositol 4,5- bisphosphate (PIP2) modulation of ATP and pH sensitivity in Kir channels. J. Biol. Chem. 278: 10500-10505.

267. Sharkey N. A., Leach K.L., Blwnberg P.M. 1984. Competitive inhibition by diacylglycerol of specific phorbol ester binding. Proc. Natl. Acad. Sci. 81: 607-610.

268. Sheng S., Li J., McNulty K.A., Avery D., Kleyman T.R. 2000. Characterization of the selectivity filter of the epithelial sodium channel. J. Biol. Chem.275: 8572-8581.

269. Shepherd P.R., Nave B.T., O'Rahilly S. 1996. The role of phosphoinositide 3-kinase in insulin signaling. J. Mol. Endocrin. 17: 175-184.

270. Shi H., Levy-Holzman R., Cluzeaud F., Farman N., Garly LI. 2001. Membrane topology and immunolocalization of CHIF in kidney and intestine. Am. J. Physiol. 280: F505-F512.

271. Shibasaki Y., Ishihara H., Kizuki N., Asano Т., Oka Y., Yazaki Y. 1997. Massive actin polymerization induced by phosphatidylinositol 4-phosphate 5-kinase in vivo. ASBMB J. 272: 7578-7581.

272. Shlyonsky V.G., Mies F., Sariben-Sohraby S. 2003. Epithelial sodium channel activity in detergent-resistant membrane microdomains. Am. J. Physiol. 284: F182-F188.

273. Silver R.B., Frindt G., Windhager E.E., Palmer L.G. 1993. Feedback regulation of Na+ channels in rat CCD. I. Effect of inhibitor of the Na pump. Am. J. Physiol. 264: F557-F564.

274. Simon H, Gao Y., Franki N., Hays R.M. 1993. Vasopressin depolymerizes apical F- actin in rat inner medullary collecting duct. Am. J. Physiol. 265: C757-C762.

275. Simons K., Toomre D. 2000. Lipid rafts and signal transduction. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 1:31-39.

276. Singh S.S., Chauhan A., Murakami п., Chauhan V.P. 1996. Profilin and gelsolin stimulate phosphatidylinositol 3-kinase activity. Biochim. 35: 16544-16549.

277. Smith P.L., Montzka D.P., McCafferly G.P., Wasserman M.A., Fondacaro J.D. 1988. Effect of sulfidopeptide leukotrienes D4 and E4 on ileal ion transport in vitro in the rat and rabbit. Am. J. Physiol. 255: G175-G183.

278. Smith P.R., Saccomani G., Joe E., Angelides K.J., Benos D.J. 1991. Amiloride-sensitive sodium channel is linked to the cytoskeleton in renal epithelial cells. Proc. Natl. Acad. Sci. 88: 6971-6975.

279. Snyder P.M. 2002. The epithelial Na channel: cell surface insertion and retrieval in Na homeostasis and hypertension. Endocrine Rev. 23: 258-275.

280. Snyder P.M., Cheng C., Prince L.S., Rogers J.C., Welsh M.J. 1998. Electrophysiological and biochemical evidence that DEG/ENaC cation channels are composed of nine subunits. J. Biol. Chem. 273: 681-684.

281. Snyder P.M., McDonald F.J., Stokes J.B., Welsh M.J. 1994. Membrane topology of the amilorid-sensetive epithelial sodium cannels. J. Biol. Chem. 269: 24379-24383.

282. Snyder P.M., Olson D.R., Bucher D.B. 1999. A pore segment in DEG/ENaC Na+ channels. J. Biol. Chem. 274: 28484-28490.

283. Snyder P.M., Price M.P., McDonald F.J., Adams C.M., Volk K.A., Zeiher V.G., Stokes J.В., Welsh M.J. 1995. Mechanism by which Liddle's syndrome mutations increase activity of a human epithelial Na+ channel. Cell. 83: 969-978.9+ • . . .

284. Sossin W.S., Schwartz J.H. 1993. Ca -independent protein kinase Cs contain an ammo-terminal domain similar to the C2 consensus sequence. Trends. Bioghem. Sci. 18: 207-208.

285. Spector I., Shochet N.R., Blasberger D., Kashman Y. 1989. Latrunculins - novel marine macrolides that disrupt microfilament organization and affect cell growth: I. Comparison with cytochalasin D. Cell. Motil. Cytoskel. 13: 127-144.

286. Spindler В., Mastroberardino L., Custer M., Verrey F. 1997. Characterization of early aldosterone-induced RNAs identified in A6 kidney rpithelia. Pfltigers. Arch. 434: 323-331.

287. Staruschenko A., Pcitel P., Tong J.L.M., Stockand J.D. 2004. Ras activates the epithelial Na+ channel through phosphoinositide 3-OH kinase signaling. J. Biol. Chem. 279: 3777137778.

288. Steinmetz P.R. 1986. Cellular organization of urinary acidification. Am. J. Physiol. 251: F173-F187.

289. Stewart W.C., Hargittai P.Т., Lieberman E.M. 1992. Cholera toxin increases Na+/K+-ATPase activity in the RN22 Schwann cell line. Ann. NY Acad. Sci. 671: 455-457.

290. Stockand J.D. 2002. New ideas about aldosterone signaling in epithelia. Am. J. Physiol. 282: F559-F576.

291. Stockand J.D., Bao H.F., Schenck J., Malik В., Middleton P., Schanger L.E., Eaton D.C. 2000. Different effects of protein kinase С on the levels of epithelial Na+ channel subunit proteins. J. Biol. Chem. 275: 25760-255765.

292. St off J.S., Handler J.S., Orloff J. 1972. The effect of aldosterone in the accumulation of adenosine 3', 5'-cyclic monophosphate in toad bladder epithelial cells in response to vasopressin and theophylline. Proc. Nat. Acad. Sci. 69: 805-808.

293. Strautnieks S.S., Thompson R.F., Gardiner R.M., Chung E. 1996a. A novel splice-site mutation on the gamma subunit of the epithelial sodium channel in three pseudohypoaldosteronism families. Nat. Genet. 13: 248-250.

294. Sweeney G., Klip A. 1998. Regulation of the Na+/K+-ATPase by insulin: why and how? Mol. Cell. Biochem. 182: 121-133.

295. Szaszi K, Paulsen A., Szabo E.Z., Numata M., Grinstein S., Orlowski J. 2002. Clatrin-mediated endocytosis and recycling of the neuron-specific Na+/H+ exchanger NHE5 isoform. J. Biol. Chem. 277: 42623-42632.

296. Takada M. 1985. Differentiation of the active sodium transport system during metamorphosis in Rana catesbeiana skin in relation to cadmium- and amiloride-induced responses. Jpn. J. Physiol. 35: 525-534.

297. Takada M., Yai H., Komazaki S. 1998. Effects of calcium on development of amiloricl-blockable Na+ transport in axolotl in vitro. Am. J. Physiol. 257: R69-R75.

298. Takada M., Yai H., Komazaki S., Takayama-Arita K. 1996. Prolactin antagonizes the corticoid-promoted development of adult-type epidermis in cultured larval bullfrog skin. J. Exp. Biol. 199: 2573-2578.

299. Takada M.,Shiibashi M., Kasai M. 1999. Possible role of aldosterone and T3 in development of amiloride-blockable CSS across frog skin in vivo. Am. J. Physiol. 277: R1305-R1312.

300. Taylor A., Windhager E.E. 1979. Possible role of cytosolic calcium and Na-Ca exchange in regulation of transepithelial sodium transport. Am. J. Physiol. 236: F505-F512.

301. Taylor R.E., Barker S.B. 1965. Transepidermal potential difference: development in anuran larvae. Science. Wash. 148: 1612-1613.

302. Therien A. G., Blostein R. 2000. Mechanisms of sodium pump regulation. Am. J. Physiol. 279: C541-C566.

303. Therien A.G., Goldshleger R., Karlish S.J.D., Blostein R. 1997. Tissue-specific distribution and modulatory role of the у subunit of the Na, IC-ATPase. J. Biol. Chem. 272: 32628-32634.

304. Tilly ВС, Van Den Berghe N, Tertoolen LG, Edixhoven MJ, De Jonge HR. 1993. Protein tyrosine phosphorylation is involved in osmoregulation of ionic conductances. J. Biol. Chem. 268:19919-19922.

305. Toh H., Ichikawa A., Narumiya S. 1995. Molecular evolution of receptors for eicosanoids. FEBS. 361: 17-21.

306. Tomita K, OwadaA., lino Y., Yoshiyama K, Shigal T. 1987. Effect of vasopressin on N-IC-ATPase activity in rat cortical collecting duct. Am. J. Physiol. 253: F874-F879.

307. Tong O., Stockand J. 2005. Receptor tyrosine kinase mediate epithelial Na+ channel inhibition by epidermal growth factor. Am. J. Physiol. 288: F150-F161.

308. Uhrbach V., Van Kerkhove E., Harvey B.J. 1994. Inward-rectifier potassium channels in basolateral membranes of frog skin epithelium. J. Gen. Physiol. 103: 583-604.

309. Uhrbach V., Van Kerkhove E., Maguire D., Harvey B.J. 1996. Rapid activation of KATP channels by aldosteron in principal cells of frog skin. J. Physiol. 491: 111-120.

310. Ussing Н.И. 1982. Volume regulation in frog skin epithelium. Acta. Physiol. Scand. 114: 363-369.

311. Ussing H.H. 1988. Anion transport pathways in frog skin epithelium. In: Molecular Mechanisms in Secretion, edited by Thorn N.A, Treiman M, Petersen. Copenhagen: Munlcsgaard. 25. 17-27.

312. Ussing H.H., Windhager E.E. 1964. Active sodium transport at the cellular level. In: Water and Electrolytes Metabolism. II. Amsterdam, Elsevier. 3-19.

313. Ussing H.H., Zerahn K. 1951. Active transport of sodium as the sourse of electric current in the short-circuited isolated frog skin. Acta. Physiol. Scand. 23:110-127.

314. Van Driessche W. 1984. Physiological role of apical potassium ion channels in frog skin. J. Physiol. 356: 79-95.

315. Van Driessche W., Zeiske W. 1980. Spontaneous fluctuation of potassium channels in apical membrane of frog skin. J. Physiol. 299: 101-116.

316. Verrey F. 1995. Transcriptional control of sodium transport in tight epithelia by adrenal steroids. J. Membr. Biol. 144: 93-110.

317. Verrey F., Groscurth P., Bolliger U. 1995. Cytoskeletal disruption in A6 kidney cells: impact on endo/exocytosis and NaCl transport regulation by antidiuretic hormone. J. Membr. Biol. 145: 193-204.

318. Vlahos C.J., Matter W.F., Hui K.Y., Brown R.F. 1994. A specific inhibitor of of phosphatidylinositol 3-kinase, 2-(40morpholinyl)-8-phenyl-4H-1 -benzopyran-4-one (LY294002). J. Biol. Chem. 269: 5241-5248.

319. Voldstedlund M., Trcinum-Jensen J., Vinten J. 1993. Quantitation of Na+/K+-ATPase and glucose transporter isoforms in rat adipocyte plasma membrabe by immunogold labeling. J. Membr. Biol. 136: 63-73.

320. Volk 1С, Husted R.F., Snyder P.M., Stokes J.B. 2000. Kinase regulation of hENaC mediated through a region in the COOH- terminal portion of the a- subunit. Am. J. Physiol. 278: C1047-C1054.

321. Voute C.L., Meier W. 1978. The mitochondria-rich cell of frog skin as hormone sensitive 'shunt path'. J. Membr. Biol. 40: 141-165.

322. Voute C.L., Ussing H.H. 1968. Some morphological aspects of shunt-path in the epithelium of the frog skin (Rana temporaria). Exp. Cell. Res. 62: 375-383.

323. Wade J.B., Stanton B.A., Field M.J., Kashgarian M., Giebisch G. 1990. Morphological and physiological responses to aldosteron: time course and sodium dependence. Am. J. Physiol. 259: F88-F94.

324. Wakatsuki Т., Schwab В., Thompson N.C., Elson E.L. 2000. Effects of cytochalasin D and latrunculin В on mechanical properties of cells. J. Cell. Sci. 114: 1025-1036.

325. Walker E.H., Pacold M.E., Perisic O., Stephens L., Hawkins Ph.T., Wymann M.P., Williams R.L. 2000. Structural determinants of phosphoinositide 3- kinase inhibition by wortmannin, LY 294002, quercetin and staurosporine. Mol. Cell. 6: 909-919.

326. Wang W., Hebert S. C., Giebisch G. 1997. Renal К 1 channels: structure and function. Annu. Rev. Physiol. 59: 413-436.

327. Wehling M. 1997. Specific, nongenomic action of steroid hormones. Annu. Rev. Physiol. 59: 365-393.

328. Wei Y., Lin D.-H., Kemp R., Yaddanapudi G.S.S., Nasjletti A., Falck J., Wang W.-H. 2004. Arachidonic acid inhibits epithelial Na channel via cytochrome P450 (CYP) epoxygenase-dependent metabolic pathways. J. Gen. Physiol. 124: 719-727.

329. Weisman W.P., Sinha S., Klahr S. 1977. Effect of insulin, ADH, and cyclic AMP on sodium transport in in the toad urinary bladder. Am. J. Physiol. 232: F307-F314.

330. Whitear M. 1975. Flask cells and epidermal dynamics in frog skin. J. Zool. Lond. 175: 107-149.

331. Wiessman W., Sinha S., Klahr S. 1977. Effect of ionophore A23187 on base-line and vasopressin- stimulated sodium transport in the toad bladder. J. Clin. Invest. 59: 418-425.

332. Wong K, Meyers R., Cantley L.C. 1997. Subcellular locations of phosphatidylinositol 4-kinase isoforms. J. Biol. Chem. 272: 13236-13241.

333. Worrell R. Т., Bao H.-F., Denson D.D., Eaton D.C. 2001. Contrasting effects of cPLA2 on epithelial Na+ transport. Am. J. Physiol. 281: C147-C156.

334. Xu J.Z., Hall A.E., Peterson L.N., Bienkowski M.J., Eessallu Т.Е., Herbert S.C. 1997. Localization of the ROMK protein on apical membranes of rat kidney nephron segments. Am. J. Physiol. 273: F739-F748.

335. Yanase M., Handler J. S. 1986. Activators of protein kinase С inhibit sodium transport in A6 epithelia. Am. J. Physiol. 250: C517-C522.

336. Yorio Т., Torres S., Tarapoom N. 1983. Alteration in membrane permeability by diacylglycerol and phosphatidylcholine containing arachidonic acid. Lipids. 18: 96-99.

337. Yu H., ChenJ.K, FengS., Dalgarno D.C., Brauer A.W., Schreiber S.L. 1994. Structural basis for the binding of prolin-rich peptides to SH3 domains. Cell. 76: 933-945.

338. Yudowski G.A., Efendiev R., Pedemonte C.H., Katz A.I., Berggren P.-O., Bertorello A.M. 2000. Phosphoinositide- 3 kinase binds to a prolin- rich motif in the Na K - ATPase a subunit and regulates its trafficking. PNAS. 97: 6556-6561.

339. Yue G., Malik В., Yue G., Eaton D.E. 2002. Phosphatidylinositol 4,5- bisphosphate (PIP2) stimulates epithelial sodium channel activity in A6 cells. J. Biol. Chem. 277: 11965-11969.

340. Zeiske W., Van Driessche W. 1980. Interaction of Cd2+ with K+ channels in the apical membrane of frog skin (Rana temporaria). Arch. Int. Physiol. Biochim. 88: |P23-P24.

341. Zhainazcirov A.B., Ache B.W. 1999. Effects of phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate and phosphatidylinositol 4-phosphate on a Na+-gated nonselective cation channel. J. Neurosci. 19: 2929-2937.

342. Zhang J., Fry M.J., Waterfield M.D., JakenS., Liao L., FoxJ.E.B., Rittenhouse S.E. 1992. Activated phosphoinositide 3-kinase associates with membrane skeleton in thrombin-exposed platelets. J. Biol. Chem. 267: 4686-4692.

343. Zhang G., Kcizanietz M.G., В lumberg P.M., Hurley J.H. 1995. Crystal structure of the cys2 activator- binding domain of protein kinase С delta in complex with phorbol ester. Cell. 81: 917-924.

Информация о работе

Мельницкая, Анастасия Валерьевна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2005
ВАК 03.00.02

Диссертация

Механизмы регуляции транспорта Na+ в коже лягушки - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы