Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Механизмы иммунотропного и антибластомного действия интерферона, вводимого перорально с помощью бактериального вектора

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Литвяков, Николай Васильевич

Введение

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Общая характеристика интерферонов

1.1.1. Механизм прямого антивирусного действия.

1.1.2. Прямое антипролиферативное действие

1.2. Рецепция интерферона, пути внутриклеточной передачи сигнала. Механизм активации экспрессии интерферона.

1.3. Функция интерферона как центрального цитокина, связывающего врожденный и приобретенный иммунные ответы.

1.3.1. Регуляция интерфероном фаз иммунного ответа, выбор пути иммунного ответа.

1.3.2. Участие ИФН в цитокиновой регуляторной цепи.

1.4. Общая характеристика иммунной системы слизистой желудочно-кишечного тракта.

1.5. Терапевтическое и иммунотропное действие орально вводимого интерферона.

1.6. Терапевтическое действие субалина. 34 Заключение

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.2. Методы 44 3.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. 56 3.1. Иммунотропная активность и механизмы действия интерферона, вводимого перорально с помощью бактериального вектора.

3.1.1. Оценка влияния субалина на параметры иммунокомпетентных органов.

3.1.2. Влияние субалина на эффекторы неспецифической резистентности.

3.1.3.Действие субалина на эффекторы специфического иммунитета.

3.1.4. Механизмы иммунотропного действия субалина.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы иммунотропного и антибластомного действия интерферона, вводимого перорально с помощью бактериального вектора"

Актуальность. Входными воротами для большинства инфекций являются покровы слизистых трактов (желудочно-кишечного (ЖКТ), урогенитального, легочного). Индукция местного (локального) иммунного ответа является важной составляющей эффективной защиты организма от проникновения патогенных микробов во внутреннюю среду и развития инфекционного процесса. Создание регионарного иммунитета в слизистой ЖКТ в ответ на поступление патогена является одним из первых этапов специфического ответа организма, предшествующим генерализованному иммунному ответу. В силу физиологической общности иммунной системы слизистых, стимуляция иммунокомпетентных клеток в ЖКТ приводит к активации иммунной системы и других слизистых трактов (Хаитов P.M. и др., 1997, Сетдикова Н.Х. и др., 1994, Беляков И. М.,1997). В последние годы показана эффективность иммунизации с помощью пероральных вакцин, ведутся исследования по созданию пероральных препаратов интерферонов (ИФН), интерлейкинов, гормонов и других биологически активных веществ (Cummins J.M. et al, 1994, Zielenska W. et al, 1994, Воробьев A.A., 1993, 1996, 1999).

Наиболее ранним ключевым цитокином, обеспечивающим, наряду с другими цитокинами (ИЛ-1, ФНО-а, ИЛ-12, ИЛ-15), включение индуцибельных защитных механизмов, является а-ИФН, высокий уровень которого продуцируется неиммунными клетками ( эпителиоциты) и антигенпрезентирующими клетками (АПК) слизистой ЖКТ при контакте с патогенами. Взаимодействуя со специфическими рецепторами клеток, а-ИФН способен индуцировать синтез антивирусных белков, неспецифически активировать эффекторы естественной резистентности (естественные киллеры, макрофаги, нейтрофилы), стимулировать местную и системную продукцию эндогенного ИФН, повышать эффективность иммунного распознавания и развития иммунного ответа. Все это позволяет рассматривать ИФН 1 типа (а/(3) как ключевой цитокин, являющийся связующим звеном между неспецифическим и адаптивным ответом организма на возбудитель (Tompkins W.A., 1999).

Показано, что перорально вводимый человеческий ИФН 1 типа оказывает терапевтическое действие при аутоиммунных процессах вирусной этиологии и различных вирусных инфекциях, ограничивая репликацию вируса в селезенке и печени; при этом следует отметить его высокую эффективность не только у людей, но и у различных видов животных (Cummins J.M. et al. 1995, 93, Tovey M.G. et al., 1999, Zielenska W., et al., 1993, Weiss R.C. et al, 1999, Brod S.A. et al, 1995, Beilharz M.W., et al., 1997, Georgiades J.A., 1993). Отмечается, что не высокие, а именно низкие дозы орально вводимого интерферона оказывают терапевтический и иммуномодулирующий эффекты на местном и системном уровне. Эти сведения дают основания полагать, что ИФН-а, доставляемый к ассоциированной со слизистой кишечника иммунокомпетентной ткани, воспроизводит физиологическую роль эндогенного ИФН, продуцируемого в организме в ответ на патогенное воздействие (Beilharz M.W., et al., 1997, Tompkins W.A., 1999). Интерферон, появляющийся в просвете кишечника при пероральном введении, реализует свою биологическую активность через контактное взаимодействие с рецепторами эпителиальных клеток слизистой и иммунокомпетентных клеток пейеровых бляшек. Полагают, что результатом этого взаимодействия является продукция эндогенного ИФН 1типа и 2 типа (у-ИФН) и обеспечение локального цитокинового микроокружения для формирования Thi иммунного ответа (Beilharz M.W., et al., 1997, Tough D.F., et al., 1996, Tovey M.G. et al., 1999). Однако имеющиеся в литературе сведения по этому вопросу не дают четкого представления о механизмах системного терапевтического и иммуномодулирующего действия интерферона при его пероральном введении.

Разработка оральных форм интерферона продиктована необходимостью защиты лекарственной субстанции от деградирующего влияния протеолитического содержимого секретов слизистых трактов, при этом используются таблеточные, инкапсулированные и липосомальные формы. Альтернативным способом доставки интерферона к слизистым поверхностям являются препараты на основе живых рекомбинантных бактерий, продуцирующих интерферон. В НИКТИ БАВ ГНЦ «Вектор» получен рекомбинантный штамм B.subtilis 2335рМВМ105, в который введена генетическая информация, кодирующая синтез ИФН-а человека. На основе этого штамма, способного продуцировать интерферон-а in vitro и in vivo в тонком кишечнике, создан пробиотический препарат субалин (Белявская В.А., 1992, Сорокулова И.Б. и др. 1996). Показано, что при пероральном введении субалин сохраняет антибактериальную активность исходной культуры и при этом оказывает значительно более выраженный антивирусный эффект. Терапевтическая эффективность субалина в отношении целого ряда вирусов, различающихся по патогенности, тропности, путям проникновения в организм, чувствительности к интерферону и другим защитным факторам организма, свидетельствует о широком спектре механизмов реализации его действия, которые практически не исследованы. Изучение механизмов системного действия интерферона, доставляемого к слизистой кишечника препаратом субалин, позволит дополнить наши представления о механизмах терапевтической эффективности перорально вводимого интерферона, а также о физиологической роли эндогенного ИФН, продуцируемого в кишечнике. Кроме того, принимая во внимание данные о способности ИФН повышать эффективность цитостатической терапии опухолей (Воронцова A.JI. и др., 1983, Novelli F. и др., 1996) и оказывать противоопухолевый эффект при введении per os (Tovey M.G., et al., 1999), представляется актуальным изучение антибластомной активности субалина.

Целью настоящей работы явилась оценка иммунотропной и противоопухолевой активности субалина, как вектора мукозальной доставки ИФН, и исследование механизмов его действия.

Задачи:

1. Изучить влияние субалина на иммунологические параметры и функциональную активность иммунокомпетентных клеток интактных животных.

2. Оценить механизмы иммунобиологического действия субалина.

3. На моделях экспериментальных злокачественных опухолей оценить противоопухолевую активность субалина, его способность модулировать эффективность цитостатической терапии и определить влияние субалина на процесс образования химически -индуцированных опухолей.

4. Исследовать иммуноопосредованные механизмы антибластомного и химиомодулирующего действия субалина.

Научная новизна. Впервые дана комплексная характеристика механизмов действия интерферона, вводимого перорально с помощью бактериального вектора на различных уровнях: системном (иммунотропные эффекты и терапевтическое действие, включающее его противоопухолевую и антиметастатическую активность), органном (центральные и периферические органы иммунной системы), клеточном (функциональная активность иммунокомпетентных клеток различных органов), молекулярном (продукция регуляторных цитокиновых молекул). Впервые выявлена противоопухолевая и антиметастатическая активность рекомбинантного пробиотика -суперпродуцента ИФН, а также показана его способность, при пероральном введении повышать эффективность цитостатической терапии экспериментальных опухолей. Впервые охарактеризованы иммуноопосредованные механизмы противоопухолевого и химиомодулирующего действия ИФН-продуцирующего пробиотика; показана важная роль Мф и Т-лимфоцитов в реализации указанных эффектов.

Научно-практическая значимость. Полученные данные вносят вклад в развитие представлений о физиологической роли а-ИФН, продуцируемого в кишечнике. Результаты работы углубляют и расширяют современные представления о механизмах терапевтической и иммуномодулирующей активности ИФН 1 типа при их пероральном использовании. Изучены механизмы иммунотропного действия пробиотика, продуцирующего человеческий а-ИФН, что дает теоретическую базу для его патогенетически обоснованного применения. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Пероральное введение ИФН, с помощью бактерий препарата субалин стимулирует функциональную активность неспецифических и специфических имунокомпетентных клеток-эффекторов периферических органов иммунной системы.

2. Под действием экзогенного интерферона, доставляемого бактериями субалина к слизистой кишечника клетки иммунной системы организма синтезируют ИФН, который запускает продукцию комплекса эндогенных цитокинов, опосредующих взаимодействие иммунной системы кишечника и иммуноцитов периферических органов иммунитета.

3. Субалин способен оказывать ингибирующий эффект на процесс канцерогенеза и существенно повышает эффективность цитостатической терапии опухолей.

4. Антибластомное и химиомодулирующее действие субалина обусловлено противоопухолевой активацией клеток-эффекторов системы иммунитета и увеличением чувствительности клеток метастатических колоний к действию цитостатического препарата.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на 4, 5, 7, 9-ой международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы» ( С-Петербург, 1996, 1997, 1999, 2001), XXXVII международной научной студенческой конференции «Студент и научно- технический прогресс» (Новосибирск, 1999), на международной научной конференции

10 студентов и молодых ученых «Современные проблемы фундаментальной и клинической медицины» СГМУ (Томск, 1999), на конференции «Региональные проблемы экологии и природопользования» (Томск, 1999), юбилейной конференции НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН «Проблемы современной онкологии» (Томск, 1999), XXXIX международной научной студенческой конференции «Студент и научно- технический прогресс» (Новосибирск, 2001), 1 и 2-м конгрессе молодых ученых «Научная молодежь на пороге XXI века» (Томск, 2000,2001), на конференции «Актуальные проблемы инфектологии и паразитологии (Томск, 2001), на конференциях молодых ученых ТГУ «Старт в науку» (Томск, 1997, 1998), на итоговых конференциях НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН 1997 - 2001 гг., на международной конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет» (С.Петербург, 2002).

Публикации. По материалам работы опубликовано 25 печатных работ, из них 6 статей в центральной печати, 1 статья в зарубежном журнале и 13 публикаций в материалах международных конференций. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 152 страницах и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов и спика использованной литературы. Фактический материал представлен на 21 рисунке и 12 таблицах. Библиографический указатель включает 183 источник, из них 76 отечественных и 107 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Литвяков, Николай Васильевич

ВЫВОДЫ

1. Введение субалина перорально повышает активность естественных киллеров и цитостатических эффекторов селезенки, цитостатическое действие перитонеальных макрофагов, стимулирует пролиферативную активность Т - и В - лимфоцитов, ускоряет формирование антиген - специфического клеточно-опосредованного иммунного ответа.

2. Физиологическая связь между иммунной системой слизистой желудочно-кишечного тракта и периферическими органами иммунитета, при оральном введении субалина, осуществляется благодаря способности продуцируемого им интерферона индуцировать в организме синтез эндогенного интерферона и комплекса цитокинов, которые вызывают системную активацию иммунокомпетентных клеток.

3. Субалин умеренно ингибирует рост и метастазирование перевивных злокачественных опухолей, существенно повышает эффективность их цитостатической терапии, а также замедляет возникновение и развитие химически - индуцированных новообразований.

4. Антибластомное действие субалина связано с активацией макрофагов и естественных киллеров и невозможно без участия системы Т-лимфоцитов. Антиметастатическая активность субалина преимущественно обусловлена активацией макрофагов к цитотоксическому действию, а его ингибирующее действие на рост первичного опухолевого узла ассоциировано с противоопухолевой активацией ЕКК.

5. Способность субалина повышать эффективность цитостатической терапии связана с его активирующим действием на эффекторы неспецифической резистентности

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ИФН-а является наиболее ранним ключевым цитокином, обеспечивающим включение индуцибельных защитных механизмов первой фазы иммунного ответа на патоген и последующее развитие специфического иммунного ответа, высокий уровень интерферона продуцируется неиммунными клетками слизистой ЖКТ при контакте с патогенами. Создание регионарного иммунитета в слизистой ЖКТ в ответ на поступление патогена является одним из первых этапов специфического ответа организма, предшествующих. генерализованному иммунному ответу. Развитие иммунного ответа организма и исход инфекции определяется, прежде всего, интерфероногенной активностью патогенов, т.е. способностью стимулировать синтез ИФН эпителиоцитами и антигенпрезентирующими клетками слизистой ЖКТ, контактирующими с патогенами, которая весьма различается у различных инфекционных агентов. Вирусы и другие инфекционные агенты способны оказывать токсическое действие на клетки- продуценты ИФН, тем самым замедляют или делают не возможным генерацию иммунного ответа организма, что приводит к длительной персистенции патогенов и развитию заболевания. В этом плане получены убедительные данные о терапевтическом действии орально вводимого ИФН при различных вирусных инфекциях у людей и животных (Cummins J.M. et al. 1995, 93, Tovey M.G. et al., 1999, ZielenskaW., et al., 1993, Weiss R.C. et al, 1999, Brod S.A. et al, 1995, Beilharz M.W., et al., 1997, Georgiades J.A., 1993). ИФН-а, доставляемый к ассоциированной со слизистой кишечника иммунокомпетентной ткани, воспроизводит физиологическую роль эндогенного ИФН, продуцируемого в организме в ответ на патогенное воздействие (Beilharz M.W., et al., 1997, Tompkins W.A., 1999). Он реализует свою биологическую активность через контактное взаимодействие с рецепторами эпителиальных клеток слизистой и иммунокомпетентных клеток пейеровых бляшек. Полагают, что результатом этого взаимодействия является продукция эндогенного ИФН 1типа и 2 типа (у-ИФН) и обеспечение локального цитокинового микроокружения для формирования Thi иммунного ответа (Beilharz M.W., et al., 1997, Tough D.F., et al., 1996, Tovey M.G. et al., 1999). Таким образом, при оральном введении интерферон, достигающий слизистой ЖКТ, заменяет интерферон, который должен был бы синтезироваться АПК при инфекции и определять противовирусную защиту организма. Его количество не зависит от интерфероногенной активности патогена и определяется только дозой введения, однако, при оральном введении интерферон может подвергаться сильной деградации ферментами ЖКТ и это ограничивает время его действия.

Использование субалина, который представляет из себя препарат на основе живых бактерий В.subtilis 2335рМВМ105, в которые введена генетическая информация, кодирующая синтез ИФН-а человек. Субалин обладает способностью продуцировать интерферон-а in vitro и in vivo в тонком кишечнике (Белявская В. А., 1992, Сорокулова И.Б. и др.1996). При пероральном введении субалин сохраняет антибактериальную активность исходной культуры и при этом оказывает значительно более выраженный антивирусный эффект. При использовании субалина в ЖКТ попадают бактерии, которые продуцируют интерферон и тем самым как бы заменяют АПК и эпителиоциты слизистой ЖКТ, синтезирующие интерферон при контакте с патогенами. Бактерии не подвергаются деградации ферментами ЖКТ, так как являются представителями нормальной транзитной микрофлоры и могут в течение 48-72 часов продуцировать а-интерферон в кишечнике и в этом отношении субалин является весьма перспективной и удобной формой орального интерферона.

До сих пор остается не понятным механизм того, как локальная, на уровне слизистой ЖКТ, аппликация интерферона, также как и локальная его продукция АПК при вирусной инфекции, приводит к системному противовирусному иммунному ответу. Tompkins W.A. (1999) было высказано предположение, что Т хелперные лимфоциты слизистой ЖКТ, дифференцированные и активированные под действием орально вводимого интерферона мигрируют в периферические органы иммунной системы и слизистые оболочки других органов и модулируют активность иммунокомпетентных клеток этих органов, вызывая тем самым системный иммунный ответ. Однако не представлено доказательств реализации такого механизма запуска системного иммуномодулирующего действия орального интерферона, хотя высокая способность к миграции лимфоцитов иммунной системы слизистой ЖКТ широко известна (Беляков И.М., 1997). Имеются фрагментарные исследования механизмов системного иммуномодулирующего действия орально вводимого интерферона (Salazar-Mather Т.Р et al. 1996, Takayama S. et al 1997, Tough D.F., et al., 1996, Tovey M.G. et al., 1999).

Таким образом, а-ИФН при пероральном введении уже на уровне иммунной системы слизистой ЖКТ сразу же включает эндогенные механизмы, которые направляют и регулируют иммунный ответ организма также как и при проникновении патогена в организм через ЖКТ, поэтому изучение механизмов развития системных иммунных реакций организма при пероральном введении интерферона представляется чрезвычайно важным, поскольку позволит, с одной стороны, понять физиологические взаимосвязи и взаимовлияния иммунной системы слизистой ЖКТ с другими периферическими органами иммунитета, с другой стороны понять механизмы терапевтического эффекта орально вводимого ИФН.

Субалин обладает высокой противовирусной активностью в отношении вируса гриппа, вируса простого герпеса 1 и 2 типов, вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ), при этом его эффективность существенно выше, чем у исходного штамма В. subtilis (Белявская В.А., 1992, Сорокулова И.Б. и др., 1997, Масычева В.И. и др., 1998). Эти вирусы различаются по патогенности, тропности к различным органам и путям проникновения в организм, чувствительности к интерферону и другим защитным факторам организма, поэтому терапевтическая эффективность субалина в отношении этих вирусов свидетельствует о широком спектре механизмов реализации его противовирусного действия, которые связаны с его способностью продуцировать ИФН-а в просвете тонкой кишки в непосредственной близости к лимфоидной ткани кишечника. Принимая во внимание важную роль неспецифических клеточных реакций в защите от вирусной инфекции, целесообразно было полагать, что одним из механизмов реализации. противовирусной активности субалина является активация клеток-эффекторов системы естественной цитотоксичности (ЕЦТ), а именно ЕК клеток, макрофагов (Мф) и спленоцитов.

Как показали наши исследования, при пероральном введении субалина уже на 1 - 2-е сутки происходит значительная стимуляция мембранотоксической активности ЕК клеток селезенки (рис. 2), причем этот эффект субалина гораздо более высокий чем при парентеральном введении а-ИФН (рис. 4). Введение субалина вызывает дополнительное повышение активности ЕК клеток селезенки на 8-е сутки, т.е. динамика ЕКА опытной группы носит циклический характер с периодом 6 дней и двумя максимумами на 2-е и 8-е сутки от начала введения субалина. Если учитывать, что время рециклинга ЕК клеток составляет примерно 7 суток (Ванько JI.B. и соавт., 1983), то, очевидно, что повышение ЕКА спленоцитов мышей опытной группы на 1-е и 2-е сутки обеспечивается активацией субалином существующей в селезенке популяции ЕК клеток, а на 8-е сутки манифестируется ЕКА новой популяции.

Одной из важных функций макрофагов является их способность подавлять пролиферацию опухолевых клеток (цитостатическое действие) или лизировать опухолевые клетки (цитотоксическое действие). Тестирование активности Мф в цитостатическом тесте отражает их противоопухолевый потенциал, т.е. способность подавлять пролиферацию и лизировать опухолевые клетки при помощи цитокинов и цитотоксических факторов. Мы показали, что при курсовом (10-ти дневном) введении субалина более чем в 3 раза увеличивается цитостатическая активность перитонеальных макрофагов мышей С57В1/6 (рис.5). Это может быть обусловлено как стимуляцией продукции цитокинов и других цитотоксических факторов, так и усилением способности макрофагов к связыванию с клеткой-мишенью, необходимого для акта цитолизиса. Связывание Мф с опухолевыми клетками зависит от наличия рецепторов межклеточной адгезии на поверхности макрофагов, таких как CD54, CD29/CD49d, LFA-1, CD1 lb/18, CDllc/18, и лигандов этих рецепторов на поверхности опухолевых клеток (Александров А.В. и др., 1997, Балицкий К.П., 1991).

Наши исследования показали, что при введении субалина возрастает способность перитонеальных макрофагов связываться, не только с аллогенными клетками-мишенями мастоцитомы Р-815 (рис.бА), но также и с сингенными клетками-мишенями LLC (рис.6 Б.), что свидетельствует о способности субалина повышать экспрессию рецепторов межклеточной адгезии на поверхности макрофагов. В то же время, субалин не влияет на экспрессию адгезионных молекул на мембранах опухолевых клеток, так как мы не выявили уменьшения способности клеток-мишеней LLC связываться с макрофагами. Это дает основание полагать, что увеличение связывания Мф с опухолевыми клетками при введении субалина обусловлено его влиянием на макрофаги, а не на клетки опухоли.

Таким образом, увеличение способности Мф связываться с клетками-мишенями является одним из механизмов стимуляции субалином их цитостатической активности.

Селезенка содержит практически все субпопуляции иммунокомпетентных клеток. Их цитостатическое действие связано с продукцией растворимых факторов - цитокинов: ИФН, ИЛ - 1, 2, 4, 6, 8, ФНО - а, и др. (Кетлинский С.А. и др., 1995, Фрейдлин И.С., 1995), лизосомальных ферментов и синтезом, иммуноцитами короткоживугцих токсических факторов, таких как оксид азота, активные формы кислорода, продукты окисления арахидоновой кислоты (Маянский А.Н и соавт., 1989, Маянский Д.Н. и соавт., 1990). Мы показали, что цитостатическая активность спленоцитов мышей С57В1/6, получавших субалин, увеличивается на 5-е сутки введения препарата, в то время как на 3-й сутки изменения антипролиферативной активности спленоцитов не отмечено рис. 7). Как мы показали, увеличение антипролиферативной активности спленоцитов под действием субалина происходит за счет увеличения или продукции цитостатических цитокинов, причем значительное количество этих цитокинов синтезируют Т-лимфоциты селезенки (рис. 8-9).

Таким образом, пероральное введение интерферона с помощью бактерий субалина приводит к системной активации клеток-эффекторов ЕЦТ периферических органов иммунной системы, удаленных от ЖКТ. Субалин значительно стимулирует мембранотоксическую активность ЕК клеток селезенки мышей и антипролиферативную активность спленоцитов, повышает цитостатическую активность перитонеальных макрофагов.

Одним из показателей функционального состояния эффекторов специфического иммунитета является их способность пролиферировать под действием митогенов, которая определяется в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Способность к пролиферации Т - и В - лимфоцитов определяет полноценность специфического иммунного ответа на антигены и необходима для формирования клона клеток памяти (Манько В.М. и др., 1997, Болдырева М.Н. и соавт., 1989, Хаитов P.M., 2000).

Мы показали, что у мышей С57В1/6 после 5-ти кратного введения субалина наблюдается значительная стимуляция спонтанной и митоген -индуцированной пролиферации Т - и В - лимфоцитов селезенки (рис. 10).

Ранее нами были получены данные о пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови здоровых добровольцев, которые получали субалин в течение 7 дней. При этом не было выявлено существенного изменения спонтанной пролиферации, тогда как ответ лимфоцитов на ФГА был существенно усилен к 7-м суткам и сохранял высокий уровень до 14-го дня, т.е. через неделю после окончания приема субалина (Чердынцева Н.В.и соавт.,2001).

Для исследования влияния субалина на специфическую активность лимфоцитов мы использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ТЗТ), которая позволяет оценить специфическую активность Thl CD4+ клеток, а именно их способность формировать антиген - специфические клоны клеток памяти при сенсибилизации антигеном, и функциональную активность клеток памяти при повторной встрече с антигеном (Плейфэр Дж., 1998, Хаитов P.M. и соавт., 1999).

Было выявлено, что субалин достоверно увеличивает индекс реакции гиперчувствительности замедленного типа (рис.11), что свидетельствует об усилении образования клона антиген — специфических Thi CD4+ клеток и стимуляции их функциональной активности.

Таким образом, пероральное введение интерферона с помощью бактерий препарата субалин приводит к системной активации клеток-эффекторов ЕЦТ и специфического звена иммунитета периферических органов иммунной системы, удаленных от ЖКТ, т.е. затрагивает все звенья иммунитета. Эти данные согласуются с представлениями о физиологической общности иммунной системы, при этом одним из первых органов, который отвечает на пероральное введение субалина, является селезенка, что обусловлено важной иммунобиологической ролью этого органа в периферической иммунной системе, в котором сходятся все пути миграции иммунокомпетентных клеток, и происходит созревание и дифференцировка многих популяций иммуноцитов. Остается открытым вопрос, как интерферон, продуцируемый бактериями субалина в кишечнике, оказывает столь мощное иммунотропное действие на уровне всей иммунной системы организма.

Рядом исследователей было показано, что ИФН, вводимый орально в терапевтических дозах, действует локально в кишечнике не проникая в кроток, и АПК, макрофаги, Т-лимфоциты и ЕК клетки слизистой кишечника могут вырабатывать эндогенный а - и у - ИФН, в количествах, достаточных для создания цитокинового микроокружения, индуцирующего дифференцировку Th 1 типа и ЕК клеток, с помощью фактора ISG-15, ИЛ-18 и путем регуляции экспрессии рецепторов к ИЛ-12 (ИЛ-12 IVP2) (Georgiades J.A. 1993, Lawson С.М., Beilharz M.W. 1999, Tovey M.G. et al 1999, Salasar-Mather T. et al., 1996). Tompkins W.A. (1999) предположила, что T хелперные лимфоциты и ЕК клетки слизистой ЖКТ, дифференцированные и активированные под действием орально вводимого интерферона и эндогенного интерферона, мигрируют в периферические органы иммунной системы и слизистые оболочки и синтезируют цитокины, модулирующие активность иммунокомпетентных клеток этих органов. Белявской В.А. (1992) было показано, что а-ИФН, продуцируемый бактериями субалина в кишечнике, также не проникает в кровоток и его действие осуществляется локально на уровне слизистой кишечника. Тем не менее он индуцирует в организме мышей эндогенный а-ИФН и у-ИФН системно, в то время как бактерии исходного (не рекомбинантного) штамма не обладают такими свойствами. Уже в 1-2-е сутки после введения субалина титр а - и у - ИФН в сыворотке крови мышей достигает 160 МЕ/мл (80 МЕ/мл а-ИФН и 80 МЕ/мл у-ИФН). Эти данные согласуются с результатами, полученными Takayama S. et al. (1997) о том, что при оральном введении а - ИФН индуцирует синтез а-интерферона не только на местном уровне в слизистой кишечника, но и системно. Продуцируемый клетками организма ИФН может активировать клетки-эффекторы периферических органов иммунной системы. Это подтверждается нашими данными: активность ЕК клеток селезенки мышей после 2-х введений субалина превышает активность ЕК клеток мышей контрольной группы более чем в 2,5 раза, но если спленоциты мышей контрольной группы обработать реафероном перед инкубацией с клетками-мишенями (в дозе 160 МЕ/мл, которая соответствует концентрации ИФН в сыворотке крови мышей, получавших субалин), то их ЕК активность повышается до уровня таковой у мышей, получавших субалин in vivo (рис. 4). У мышей линии BALB/c, не вырабатывающих эндогенный интерферон в ответ на субалин (Белявская В.А. 1992), не происходит активации ЕК клеток селезенки. Таким образом, полученные данные свидетельствует о возможности активации клеток-эффекторов периферических органов иммунной системы эндогенным ИФН, который индуцируется при введении субалина.

Thl-лимфоциты и ЕК клетки под действием субалина могут мигрировать из слизистой кишечника в периферические органы системы иммунитета, например, в селезенку. Наши исследования подтверждают возможность такой миграции иммуноцитов. Так, уже на 1-3-е сутки после введения субалина наблюдается значительное повышение клеточности селезенки мышей (табл. 3), и это не связано со стимуляцией пролиферации кроветворных клеток костного мозга, которая под действием субалина увеличивается только на 5-е сутки (рис.

Мы предполагаем, что именно иммунокомпетентные клетки слизистой кишечника, стимулируя клетки крови и селезенки, запускают системную продукцию эндогенного ИФН, так как ранее нами было показано, что титр ИФН в сыворотке крови неуклонно повышается, начиная с первых суток введения субалина (Чердынцева Н.В., 1999). Такое экспоненциальное повышение титра ИФН свидетельствует о том, что синтез эндогенного ИФН регулируется по принципу положительной обратной связи и достаточно даже слабого воздействия, например, продукции цитокинов иммуноцитами слизистой кишечника, мигрировавшими в кровоток, чтобы произошел запуск работы такой системы. Значительное повышение концентрации ИФН в крови уже в первые сутки введения субалина обеспечивает стимуляцию синтеза других цитокинов и клетки крови приобретают способность к продукции таких провоспалительных цитокинов, как ИЛ-1(3, ФНО-а, ИЛ-4 и ИЛ-2. На 3-й день введения субалина эта способность достигает максимального уровня и впоследствие снижается (Чердынцева Н.В. и соавт., 2001). На 5-е сутки уже спленоциты синтезируют цитостатические цитокины, оказывая антипролиферативное действие на опухолевые клетки-мишени (рис. 7-9).

Регуляция синтеза эндогенного ИФН по принципу положительной обратной связи обеспечивается благодаря взаимно-индуцирующей активности а - и у - ИФН. Так а-ИФН, синтезируемый макрофагами и АПК, способен активировать синтез у-ИФН Т хелперными лимфоцитами и ЕК клетками и наоборот (Ярилин А.А., 1997). Благодаря этому и возникает система аинтерферон-у-интерфероновых взаимодействий с положительной обратной связью, которую способны активировать, стимулированные под действием орального ИФН, Т-лимфоциты и ЕК клетки слизистой кишечника. Эта система объединяет ИСС ЖКТ и иммунокомпетентные клетки крови и периферических органов. Работа системы интерферон-интерфероновых взаимодействий приводит к быстрому нарастанию в крови титра а- и у-ИФН, запускающих цитокиновый каскад и формирующих комплекс эндогенных цитокинов (КЭЦ), в который входят а-ИФН, у-ИФН, ФНО - а, ИЛ-1р, ИЛ-4иИЛ-2 (рис. 13).

КЭЦ активирует ЕК клетки селезенки на 1-е сутки введения субалина, усиливает созревание и дифференцировку ЕК клеток, что отражается в манифестации активности новой популяции на 8-е сутки введения субалина, стимулирует цитостатическую активность спленоцитов и перитонеальных макрофагов, усиливает пролиферативную активность Т - и В - лимфоцитов, увеличивает созревание и функциональную активность клона антиген -специфических Т - лимфоцитов (рис. 13).

Известно, что нормальная работа любой системы, в том числе и иммунной, обеспечивается взаимодействием факторов, осуществляющих как позитивную, так и негативную регуляцию функционирования ее элементов. Приведенные выше результаты дают представления о механизмах стимуляции эффекторов системы иммунитета под действием субалина, однако остается открытым вопрос о его влиянии на супрессорные звенья. Как мы показали, макрофаги способны регулировать активность ЕК клеток (рис. 15), что согласуется с данными, полученными другими авторами (Филатова Н.А. и др., 1989, Uchida A. et al., 1984). Считается, что универсальными клетками, регулирующими иммунные реакции являются Т-супрессорные лимфоциты (CD8+), которые продуцируют цитокины (например, ИЛ-6), ингибирующие иммунный ответ и тем самым, завершая его (Черешнев В.А. и соавт., 2001).Однако наши исследования показали, что субалин не оказывал влияния на активность Т-супрессоров. Последние десятилетия внимание исследователей привлекают, так называемые естественные супрессорные клетки (ЕСК), которые обладают самой широкой иммуносупрессорной активностью. Иммуносупрессорная функция ЕСК проявляется в ингибировании иммунного ответа (Michelson J.D. et al., 1988, Saffran D.C. et al., 1991), пролиферативного ответа как T - , так и В-лимфоцитов на антигенный или митогенный стимулы (Holda J.H. et al., 1990, Hoskin D.W. et al., 1992, Maes L.Y. et al., 1988), образования цитотоксических Т-лимфоцитов (Jamamoto H. et al., 1994, Sykes M. et al., 1988). Субалин повышает ингибирующую активность ЕСК костного мозга. ЕСК мышей, получавших субалин в течение 5-ти дней, эффективно тормозят пролиферацию Т-хелперных лимфоцитов селезенки, которые являются одними из основных эффекторов, участвующих в реализации системных иммунотропных эффектов субалина (рис. 14). Поскольку известно, что ЕСК обладают широким спектром иммуносупрессорной активности, по-видимому, именно эти клетки являются основными регуляторами иммунных реакций, возникающих при введении субалина. Во взрослом организме основным местом локализации ЕСК является костный мозг, однако, ЕСК обнаруживаются и в селезенке, к тому же они обладают высокой миграционной активностью и способны мигрировать в периферические органы иммунной системы (Yoshida Т. et al., 1991). Мы предполагаем, что ЕСК, активированные КЭЦ, мигрируют из костного мозга в селезенку и другие периферические иммунокомпетентные органы, где регулируют функциональную активность иммуноцитов. Наши представления о механизмах взаимодействия иммунной системы слизистой кишечника и периферических органов иммунитета при пероральном введении интерферона с помощью бактерий субалина отражены на рисунке 13.

Таким образом, интерферон, продуцируемый бактериями субалина в кишечнике, индуцирует комплекс эндогенных цитокинов, который стимулирует функциональную активность как специфических, так и неспецифических клеток-эффекторов периферических органов системы иммунитета. Физиологическая связь между иммунной системой слизистой кишечника и периферическими органами иммунитета осуществляется благодаря интерферон-интерфероновой системе, которая может активироваться от иммунокомпетентных клеток, мигрирующих из слизистой кишечника под действием интерферона, продуцируемого бактериями субалина, орального ИФН или ИФН синтезируемого АПК кишечника при контакте с патогенами.

Согласно современным представлениям о механизмах канцерогенеза иммунологические факторы неспецифической и специфической природы играет важную роль в патогенезе опухолей и способны регулировать развитие опухолевого процесса. ИФН как ключевой цитокин, обеспечивающий взаимодействие и регуляцию неспецифического и специфического звеньев иммунитета, способен модулировать взаимоотношения организма и опухоли. Интерфероны могут повышать противоопухолевую активность эффекторных клеток системы иммунитета, оказывать прямое цитотоксическое и цитостатическое действие на опухолевые клетки, модифицировать состояние опухолевых клеток посредством ограничения их генетической нестабильности, регуляции реакций на ростовые факторы, потенцирования иммуногенности, подавления ангиогенеза и т. п. (Кинзирский А.С. 1995, Авдеев Г.И., и др., 1985, Славина Е.Г., 1984). Многие препараты интерферона и его индукторов с успехом применяются для терапии злокачественных новообразований и наиболее эффективны при злокачественных заболеваниях кроветворной и лимфоидной тканей, кожных опухолей различных локализаций и этиологии (Baron S.et al.,1992, Гаврилова И.Е., 1993, Авдеев Г.И.и др., 1985, Ершов Ф.И. 1996). Субалин является препаратом интерферонового ряда и в предыдущем разделе нами была показана его способность на системном уровне стимулировать функциональную активность эффекторов системы ЕЦТ и специфического иммунитета. Это делает целесообразным исследование противоопухолевых свойств субалина. В этой связи мы оценили противоопухолевую и антиметастатическую активность субалина на модели солидной метастазирующей опухоли.

Как показали наши исследования субалин замедляет рост и метастазирование карциномы легких Льюис (табл. 4-5). Однако, полученные нами данные позволяют говорить лишь об умеренной противоопухолевой и антиметастатической активности субалина, что, согласно экспериментальным критериям отбора противоопухолевых препаратов, принятых в СССР и США не дает основания рассматривать его как перспективный цитостатический препарат (Софьина З.Г. и др., 1979, Акимов А.А. и соавт., 1994). Однако, ИФН - продуцирующая активность субалина и его стимулирующее на различные звенья противоопухолевой защиты организма делают целесообразным исследование способности субалина модулировать эффективность цитостатической терапии. Мы оценили эффективность его совместного применения с цитостатиками в лечении экспериментальных опухолей у мышей.

Полученные нами данные свидетельствуют о способности субалина увеличивать эффективность цитостатической терапии злокачественных опухолей (табл. 6-8), при этом взаимодействие субалина и ЦФ в их антиметастатической активности, носит синергичный характер.

Известно, что одной из основных причин возникновения опухолей является воздействие на организм канцерогенных веществ, которые, помимо мутагенного действия на геном клеток, приводящего к их трансформации, вызывают разного рода повреждения иммунной системы, что способствует беспрепятственному развитию опухоли в организме (Сейц И.Ф. и соавт., 1986). Мы предположили, что благодаря своим иммунотропным свойствам субалин может восстанавливать иммунную реактивность организма и тем самым препятствовать развитию химически-индуцированных опухолей в «скрытый» период канцерогенеза. Поэтому на модели химического канцерогенеза мы оценили антиканцерогенные свойства субалина.

Как показали наши исследования, при введении субалина, наблюдается тенденция к уменьшению процентного выхода ДМБА-индуцированных опухолей, увеличение латентного периода образования опухоли, торможение роста опухоли, а также увеличение продолжительности жизни животных с опухолью, что указывает на ингибирующее действие субалина на процесс химически - индуцированного канцерогенеза (табл. 9-10).

Описанные свойства субалина, а именно — его иммуномодулирующая активность, противоопухолевое и антиметастатическое действие, способность повышать эффективность цитостатической терапии, — позволяют рассматривать его как модификатор биологических реакций и делают перспективной оценку возможности его применения в мутьтимодальной терапии злокачественных новообразований.

Принимая во внимание сложную природу препарата субалин, который представляет собой микробные клетки, продуцирующие интерферон и обладает интерфероногенной активностью, нельзя однозначно указать действующее начало этого препарата, оказывающее антибластомное действие. Мы оценили противоопухолевую активность субалина на модели карциномы Эрлиха у мышей линии BALB/c. Мыши линии BALB/c характеризуются низкой способностью вырабатывать эндогенный интерферон при введении субалина (Белявская В.А и др. 1996) и на данной модели эндогенный ИФН, как эффекторное начало субалина не работал. Мы сравнивали противоопухолевую активность субалина и биоспорина - пробиотика на основе исходного штамма B.subtilis, не обладающего интерферон-продуцируюшей и интерфероногенной активностью. Таким образом, в данном эксперименте мы могли оценить влияние только одного эффекторного механизма субалина, а именно -продуцируемого В. subtilis 2335/105 рекомбинантного а-2-ИФН. Отсутствие противоопухолевого эффекта субалина и биоспорина на данной модели дает основания полагать, что противоопухолевый и антиметастатический эффект субалина, полученный нами на модели LLC у мышей С57В1/6, опосредуется эндогенным ИФН, запускающим продукцию эндогенных цитокинов и системные клеточные реакции организма.

Нам не удалось выявить ингибирующего действия субалина на рост карциномы легких Льюис, перевитой бестимусным мышам nude, что свидетельствует о необходимости интактной Т-системы для проявления его антибластомного эффекта. При этом определяющим моментом является дефицит продукции Т-лимфоцитарного у-ИФН, необходимого для работы а-интерферон - у-интерфероновой системы, осуществляющей, по нашему мнению, взаимодействие иммунной системы слизистой кишечника и периферических органов системы иммунитета, при пероральном введении субалина, и развитие системных иммунотропных эффектов. Мы предположили, что антибластомное и химиомодулирующее действие субалина может быть связано как с непосредственным антипролиферативным действием на клетки опухоли комплекса эндогенных цитокинов (КЭЦ), индуцируемых субалином, так и с его способностью стимулировать противоопухолевую активность клеток-эффекторов системы иммунитета, которую мы наблюдали у здоровых мышей без опухолей.

Наши исследования показали, что супернатанты спленоцитов мышей с карциномой легких Льюис, получавших субалин, не оказывают более выраженного антипролиферативного действия на клетки LLC и Р-815 (рис. 1617). Это дает основание предполагать, что антибластомное действие субалина преимущественно связано с клеточно — опосредованными механизмами и наиболее важная роль, по-видимому, принадлежит Мф и ЕК клеткам, которые в настоящее время рассматриваются в качестве основных эффекторов системы естественной резистентности, осуществляющей противоопухолевую защиту организма (Дейчман Г.Г., 1984, Славина Е.Г., 1983, Black P. et al., 1993, Markovic S. etal., 1991).

У мышей с карциномой легких Льюис, получавших субалин отмечено существенное усиление цитостатической и цитолитической активности перитонеальных макрофагов в отношении клеток этой опухоли (рис. 18), что непосредственно указывает на участие макрофагов в реализации антибластомного действия субалина.

Если ингибировать функциональную активность макрофагов у мышей (с помощью каррагенана) отмечается существенная стимуляция интенсивности метастазирования и увеличение размеров метастатических колоний в легких по сравнению с показателями животных, которым вводили только субалин и не ингибировали активность макрофагов (рис. 19). Эти результаты дают основания считать, что антиметастатическое действие субалина обусловлено противоопухолевой активацией макрофагов.

Курсовое введение субалина мышам с карциномой легких Льюис привело на 10-е сутки к существенному повышению клеточности селезенки, естественной киллерной активности спленоцитов, и, как следствие - общей литической активности селезенки (рис.20.). Интересен тот факт, что стимуляция метастазирования LLC при введении ингибитора макрофагов мышам, леченных субалином, сочетается с ингибицией роста первичной опухоли (рис.19.) и это ассоциировано с повышением ЕКА спленоцитов на фоне снижения активности Мф. Эти данные дают основания полагать, что ингибирующее действие субалина на рост первичной опухоли обусловлено противоопухолевой активацией ЕК клеток.

Таким образом, антибластомное действие субалина связано с активацией макрофагов и естественных киллеров. При этом антиметастатическая активность субалина обусловлена цитотоксической активацией макрофагов, а его ингибирующее действие на рост первичного опухолевого узла, ассоциировано с противоопухолевой активацией ЕК клеток.

Синергичный характер взаимодействия субалина и Цф позволяет предполагать, что, с одной стороны, субалин способен повышать чувствительность опухолевых клеток к Цф, с другой стороны, антибластомная активация иммунокомпетентных клеток также должна вносить определенный вклад в реализацию способности субалина повышать эффективность цитостатика.

Мы получили штамм циклофосфан-резистентной карциномы легких Льюис. LLC пассировали на мышах, которым вводили циклофосфан по общепринятой схеме в дозе 100 мг/кг. После 13-ти пассажей клетки карциномы легких Льюис оказались полностью не чувствительными к Цф. Длительная циклофосфановая нагрузка привела к клональной селекции популяции опухолевых клеток и элиминации чувствительного клона клеток. На следующем этапе мы сравнили противоопухолевое действие на циклофосфан -резистентную опухоль комбинации препаратов субалина и циклофосфана и субалина. В группе «Цф+субалин» отмечено существенно большее ингибирование образования (ИИМ) и роста (ТРМ) метастатических колоний Цф - резистентной опухоли в легких (табл. 12). Цф, изначально не оказывающий антиметастатического эффекта на клетки резистентной LLC, в комбинации с субалином начинает проявлять антиметестатическое действие. Это свидетельствует о том, что субалин повышает чувствительность клеток метастатических колоний к циклофосфану, т.е. проявляет химиосенсибилизирующие свойства. Таким образом, одним из механизмов модуляции субалином антиметастатической активности циклофосфана, является его способность повышать чувствительность метастатических клеток к цитостатику, т.е. субалин проявляет химиосенсибилизирующие свойства.

Наши исследования показали, что субалин изменял функциональное состояние перитонеальных макрофагов мышей с карциномой легких Льюис, подвергавшихся цитостатической терапии, восстанавливая их способность оказывать антипролиферативное действие на опухолевые клетки-мишени, которая практически отсутствовала у макрофагов мышей, леченных циклофосфаном (рис. 21).

Таким образом, полученные результаты дают основания полагать, что антибластомное действие субалина связано с активацией макрофагов и натуральных киллеров и невозможно без участия системы Т-лимфоцитов. Способность субалина повышать эффективность цитостатической терапии связана с его противоопухолевым и антиметастатическим действием и определяется теми же механизмами. Наряду с иммунологическими механизмами важную роль в увеличении субалином антиметасгатической активности циклофосфана играет повышение чувствительности опухолевых клеток к его действию, а также способность субалина восстанавливать

132 эффекторные функции макрофагов, с цитотоксической активацией которых связана его антиметастатическое действие. Не исключено и прямое антипролиферативное действие эндогенного ИФН и других цитокинов на опухолевые клетки и модификация их мембранных структур.

Широкий спектр иммунобиологической активности субалина, его антибактериальные и противовирусные свойства, способность при пероральном введении оказывать системные иммунотропные эффекты, позволяют рассматривать субалин как перспективное иммунотропное средство при лечении иммунодефицитных состояний, различных заболеваний инфекционной природы. Несомненную перспективность представляет собой дальнейшее изучение субалина с целью его использования в комплексной терапии рака, в качестве препарата интерферонового ряда, обладающего такими преимуществами, как способность к суперпродукции ИФН, безинъекционный путь введения, практическое отсутствие побочных реакций, возможность длительного постоянного или дробного курсового использования.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Литвяков, Николай Васильевич, Томск

1. Авдеев Г.И.,Вядро М.М., Кадагидзе З.Г. Иммунотерапия опухолей, сер. Онкология. -Т.14.-1985.

2. Акимов А.А., Филов В.А. Отбор и изучение противоопухолевых лекарственных средств. //Экспериментальная онкология.- 1994.- №2-3.- Т. 16.- С.102-108.

3. Александров А.В., Джексон A.M., Румянцев А.Г. Анализ механизма модуляции межклеточных молекул адгезии ICAM. //Иммунология.- 1997.-№1.- С. 4-13.

4. Афанасьев Ю.И., Ноздрин В.И., Бахшимян М.З., Горячкина В.Л. Структура и функции макрофагов. // Успехи совр. биологии. 1982.- Т.93.-вып.З.-С.421-432.

5. Балашов A.M., Петриченко О.Б., Алябьева Т.Н., Панченко А.Ф. Опиатная рецепция в головном мозге крыс: Влияние хронического потребления алкоголя и реаферона.//Вопр. мед. Химии. 1993. - №3. - Т.39. - С. 43 -45.

6. Балдуева И.А., Моисеенко В.М., Хансон К.П. Система дендритных клеток и ее роль в регуляции функциональной активности Т и В — лимфоцитов человека.//Вопросы онкологии.- 1999.- Т. 45.- №5.- С.473-484.

7. Балицкий К.П., Воронцова А.Л., Лисняк И.А. и др. Метастазирование опухолей: патогенетические аспекты. Киев: АН УССР , Наук, думка, 1991.

8. Балицкий К.П., Шмалько Ю.П., Придатко О.Е., Смелкова М.И. Влияние эмоционально-болевого стресса на биохимические характеристикистрессреализующих систем и метастазирование карциномы легких Льюиса у мышей.// Экспер. онкол. 1989. - Т.П. - №5. - С. 34 - 36.

9. Ю.Бахов И.И., Майчук Ю.Ф., Корнев А.В. Механизмы защиты от вирусной инфекции. Вирусные инфекции и иммунитет.//Успехи совр. биол.- 1999ю-Т. 119.-№5.- С. 428-439.

10. П.Белоусова А.К. Молекулярные основы специфического взаимодействия сигнальных белков. //Успехи современной биологии.-1999.-№4.-С.345-357.

11. Белявская В.А. Перспективы создания рекомбинантных штаммов бацилл для конструирования новых пробиотиков: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Киев, 1992.

12. З.Белявская В.А. Пробиотики из рекомбинантных бацил новый класс лечебно-профилактических препаратов и способ доставки лекарственных белков в организм.// Сб. научн. трудов НИКТИ БАВ Бердск, 1996. - С. 190 -198.

13. Белявская В.А., Кашперова Т.А., Бондаренко В.М. и др. Экспериментальная оценка биобезопасности генно-инженерных бактерий на модели штамма продуцирующего интерферон.// Журн.микробиол.-2001.-№2.-С. 16-20.

14. Белявская В.А., Чердынцева Н.В., Бондаренко В.М., Литвяков Н.В. Биологические эффекты интерферона, продуцируемого рекомбинантными бактериями препарата-пробиотика субалина. //ЖМЭИ.- 2002 .- в печати

15. Беляков И.М. Иммунная система слизистых.//Иммунология 1997.-№4.-С.7-13.

16. Билынский Б.Т., Володько Н.А., Шпарык Я.В. Иммунологические механизмы естественной противоопухолевой резистентности. Киев: Наукова думка.-1991.

17. Бландова З.К., Дугкин В.А., Макашенко A.M., Шмидт Е.Ф. Линии лабораторных животных для медико-биологических исследований. М.: Наука.- 1983.

18. Богдашин И.В. Исследование механизмов цитостатических взаимодействий клеток системы иммунитета с опухолевыми клетками // Автореф.дис.канд.мед.наук. Томск, 1989. - 19 с.

19. Болдырева М.Н., Алексеев Л.П. Активация Т-лимфоцитов поликлональными митогенами in vitro: механизмы, анализ клеточных взаимодействий.//Иммунология.- 1989.- №2.- С. 9-15.

20. Бондаренко В.М., Рубанова Э.И., Лаврова В.А. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков. //Журнал микробиол.- 1998.- №5.- С. 107-112.

21. Брондз Б. Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распознавании. М.: Наука. 1987. - 472 с.

22. Бычков И.А. Повышение избирательности действия ЦФ и 5-ФУ при их сочетании с полиеновым антибиотиком и диуретиком, //дисс. на соиск. уч. ст. к.б.н. -Москва.-1983.

23. Ванько Л.В. Сухих Г.Т. Естественная цитотоксическая активность клеток костного мозга и селезенки мыши в процессе регенерации после воздействия циклофосфамида.//БЭБиМ.- 1983.- №12.- С.84-86.

24. Возианов А.Ф., Бутенко Н.М., Зак К.П. Цитокины. Биологические и противоопухолевые свойства.- Киев: Наукова думка, 1998.- 313с.

25. Воробьев А.А. Физиологические пути введения антигенов и других биологически активных веществ в организм // Иммунология.-1996. №5 -С. 4-9.

26. Воробьев А.А. Современные направления в разработке новых иммунобиологических препаратов.// Журн.микробиол.- 1999.- № 5.- С.16-17.

27. Воробьев А.А., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции. //Журн. микробиол.- 1999.-№6.-С. 102-107.

28. Воронцова А.Л., Фадеев В.А., Кудрявец Ю.И., Балицкий К.П. Интерферон в комплексной терапии мышей с метастазирующей карциномой Льюис. //Эксперим. онкология.- 1983.- №6.- С.50-52.

29. Гласс Л., Мэки М. От часов к хаосу: Ритмы жизни. Пер. с англ. М.: Мир, 1991.-248 с.

30. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры тканей в гематологии / под редакцией В.В.Новицкого.- Томск, 1992.-272 с.

31. Громов С.А., Окулов В.Б., Войтенков Б.О. Стимуляция способности МФ, активированных иммуномодулирующими препаратами, усиливать рост опухолевых клеток.// Цитология. 1988. - Т. 30. - С. 1127 - 1128.

32. Гуменюк М.Л. Применение соединений обладающих свойствами ндукторов синтеза интерферона в лучевой терапии опухолей.// автореф. дисс.на соиск. уч.ст. к.м.н. -Москва.-1991.

33. Гуменюк М.Л., Кузнецов В.А., Афанасьев Г.Г., Пелевина И.И. Динамика распределения больших гранулярных лимфоцитов в селезенке и крови мышей под действием индуктора синтеза интерферона // Иммунология . -1991 .-№2.-С.26-28.

34. Дейл М.М., Формен Дж.К. Руководство по иммунофармакологии: Пер. с англ.- М.: Медицина, 1998.- 332с.

35. Дейчман Г.И. Роль естественной резистентности в реакции организма на возникновение, рост и метастазирование опухоли. // Итоги науки и техники, сер. Онкология.- 1984.- Т. 13.- С.46-97.

36. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. М.: Медицина, 1996.

37. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность.//Клиническая лабораторная диагностика.- 1998.-№11.-С.20-32.

38. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета.// Иммунология. — 1995. -№3.-С. 30-44.

39. Ковальчук JI.B., Ганковская Л.В., Соколова Е.В., Титовец Р.Е. Цитокины в регуляции противоопухолевой активности макрофагов; экспериментальное обоснование адоптивной макрофаготерапии при злокачественном росте .//Иммунология. -1995. -№3 .-С.52-54.

40. Логинов А.С., Царегородцева Т.М., Зотина М.М. Иммунная система и болезни органов пищеварения.- М.: Медицина.- 1986.

41. Манько В.М., Мастернак Т.Б., Чижевская М.А., Иванова А.С. Влияние иммуномодулирующих препаратов на индуцированную ФГА пролиферацию спленоцитов мышей. //Иммунология.- 1997.- №4.- С. 27-31.

42. Масычева В.И., Даниленко Е.Д., Пустошилова Н.М., Белявская В.А. Создание средств стимуляции системы неспецифической резистентности // Вестник РАМН.- 1998.- №4.-СЛЗ-17.

43. Маянский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д. Активация макрофагов. //Успехи совр. биологии.- 1990.- Т.109.-вып.З.- С.352-368.

44. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск: Наука.-1989.

45. Пальцев М.А., Иванов А. А. Межклеточные взаимодействия. М., Медицина.-1995.- 224 с.

46. Переводчикова Н.И. под ред. Справочник. Противоопухолевая химиотерапия. М.:"Медицина".-1993.

47. Плейфэр Дж. Наглядная иммунология.: Пер. с англ. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998.-96 с.

48. Рыкова М.П., Спиранде И.В., Зедгенидзе М.С. Новая чувствительная техника тестирования активности нормальных киллеров // Иммунология.-1981.- №3.- С.88-90.

49. Северин С.Е., Катуков В.Ю., Муйжнек Е.А., Северин Е.С. Проблемы избирательной регуляции клеточной активности от фундаментальных основ к практическим результатам.//Вопр. биол., медицинской и фармацевтической химии.- 1998.- №1.- С.6-15.

50. Селедцов В.И., Суслов А.П., Брондз В.Д. Ранние антигензависимые реакции Т-лимфоцитов И Биол.мембраны.- 1987.-№12.- С.1313-1318.

51. Славина Е.Г. Лимфоциты естественные киллеры (NK-клетки)-эффекторные клетки естественной противоопухолевой резистентности. //Итоги науки и техники, сер. Онкология.- 1984.- Т.13.-С.98-141.

52. Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюнитская В.А. и др. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus // Микробиол. журнал .- 1993.-Т.55.- № 4.- С.92-112.

53. Сорокин A.M., Чекнев С.Б., Кузнецов В.П. //Иммунология.-1991.-№1.-С.17-21.

54. Сорокулова И.Б., Белявская В.А., Масычева В.И. и др. Рекомбинантные пробиотики: проблемы и перспективы использования для медицины и ветеринарии.// Вестн. РАМН.- 1997.- № 3.- С.46-49.

55. Сорокулова И.Б., Смирнов В.В., Резник С.Р. и др. Профилактический биопрепарат субалин. Патент РФ 2035185 от 06.07.92.

56. Суслов А.П., Головин В.П., Скворцов В.Т., Коронцвит Т.А. Скрининговый тест клеточной миграции из микрокультур in vitro. //Иммунология.- 1989.-№2.- С. 73-77.

57. Сухих Г.Т., Ванько JI.B., Кулаков В.И. Иммунитет и генитальный герпес. Н. Новгород - Москва, 1997.

58. Сыркин А.Б., Герасимова Г.К., Барышников Ю.А., Сергеева Н.С., Якубовская Р.И., Бордюшков Ю.Н. Экспериментальная химиотерапия злокачественных опухолей на современном этапе. //Вопросы онкологии.-1995.- Т.41.-№2.-С. 41-45.

59. Талаев В.Ю. Внутриклеточные пути передачи сигналов у Т-лимфоцитов в норме и при патологии.//Иммунология.- 1999.-№6.-С.20-25.

60. Филдс Б. Вирусология М.:Мир.- 1989.- Т.2

61. Филатова Н.А., Малыгин A.M., Плескач В.А., Фель В.Я. Регуляция естественной киллерной активности спленоцитов мышей линии СЗНА в ранние сроки после трансплантации гепатомы 22а. //Экспериментальная онкология.- 1989.- Т. 11.- №2.- С. 42-45.

62. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммунная система желудочно-кишечного тракта: особенности строения и функционирования в норме и патологии.// Иммунология.- 1997.- №3.- С. 4-7.

63. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные представления о защите организма от инфекции.// Иммунология.- 2000.- №1.- С.61-64.

64. Хоробрых В.В., Пронин А.В., Киркин А.Ф., Санин А.В. Методы постановки бласттрансформации в микромодификации. //Иммунология.-1984.-№3.-С. 76-79.

65. Чекнев С.Б., ЛатышеваО.Л., Денисов Л.А., Ершов Ф.И. Взаимодействие интерферона с другими иммуномодуляторами в регуляции активности естественных киллеров человека.//БЭБиМ.- 1992.- №2.- С.179-182.

66. Чекнев С.Б. Недостаточность системы интерферона как механизм развития иммунодефицита по естественным киллерам.// Иммунология. -1993.-№6.-С. 8-16.

67. Чекнев С.Б., Ершов Ф.И., Прицкер А.Д., Латышева О.Л. Регуляция активности естественных киллеров человека аутологичным интерфероном//БЭБиМ.- 1994.-№9.-С.281-285.

68. Ярилин А.А. Системы цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии.// Иммунология. 1997. - №5. - С. 7 - 13.

69. Ярилин А.А. Межклеточная кооперация при иммунном ответе. Выбор клеткой формы ответа. //Иммунология.- 1999.- №1.- С. 17-24.

70. Adams D.O., Marino Р.А. Evidence for a multistep mechanism of cytolysis by BCG-activated macrophages: interrelationship between the capacity for cytolysis, target binding and secretion of cytolytic factors // J.Immunol.-1981.-V.126.-P.981-985.

71. Anderson D., Koch A., Grei L., Ellis K., Moran M.F., Pawson T.//Science.-1990.- V. 250.-P.971.

72. Arai K., Lee F., Miyajim S. et al. Cytokines: coordinators of immune and inflammatory responses.//Ann. Rev. Biochem.- 1990.- V. 146.- P. 836-875.

73. Baron S., Turing S.K., Fleischman W.K., Coppenhaver O.H., Niesel D.W., Klimpel G.K., Stanfon G.I., Heghes Т.к. The interferons. Mechanisms of action and clinical applications. // Energ. Sante/Serv.etud.med.- 1992.-№3.-C. 362-3 63.

74. Beilharz M.W., Mcdonald W., Watson M.W. et. al. Low dose oral Type 1 interferons reduce early virus replication of murine cytomegalovirus in vivo.// J. Interferon Cytokine Res.- 1997.- V.17.- P. 625-630.

75. Beran M., McCredie K.B., Keating M.J. Antileukemic effect of recombinant tumor necrosis factor alpha in vitro and its modulation by alpha and gamma interferons.//Blood.- 1988.- V. 72.- №2.- P.728-738.

76. Brod S.A. Effects of oral administration of Type I interferon on experimental autoimmune encephalomyelitis . //In: Interferon Therapy of Multiple Sclerosis. A.T. Reder (ed.) New York: Marcel Dekker.- 1997.- P. 245-286.

77. Brod S.A., Kerman R.H., Nelson L.D., Marshall G.D. Jr., Henninger E.M., Khan M., Jin R., and Wolinsky J.S. Ingested IFN-alpha has biological effects in humans with relapsing-remitting multiple sclerosis.// Mult. Scler.- 1997.-V. 3.-P. 1-7.

78. Brod S.A., and Burns D.K. Suppression of relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis in the SJL/J mouse by oral administration of Type I Interferons. // Neurol.- 1994.- Y. 44.- P. 1144-1148.

79. Brod S.A., Scott M., Burns, D.K. et al. Modification of acute experimental autoimmune encephalomyelitis in the Lewis rat by oral administration of type 1 interferons.// J. Interferon Cytokine Res.- 1995.- 15.- P. 115-122.

80. Caban J., Mossor-Ostrowska J., Zyrkowska-Bieda et al. Treatment of chronic viral hepatitis type В with oral mucosal administration of natural human interferon alpha lozenges.// Arch. Immunol. Ther. Exp. 1993.- V.41.- P. 229235.

81. Cella M., Scheidegger D., Palmer Lehman К et al. Ligationof CD40 on dendritic cells triggers production of high levels of interleukin-12 enhances T-cell stimulatorycapacity: T(T help via APC activation).//J. Exp. Med.- 1996.- V. 184.-P. 147-152.

82. Chen Z.G., Botazzi В., Wang J.M., Mantovani A. Tumor-associated macrophages in metastasizing tumors // Adv. Exp. Med. and Biol.-1988. -V.233.- P. 61-71.

83. Cho S.S., Bacon C.M., Sudarshan C., et al. Activation for the involvement of ligand-induced tyrosine and serine phosphorylation. //J. Immunol.- 1996.- 157.-P. 4781^789.

84. Cohen G., Ren R., Baltimore D. Modular binding domains in signal transduction proteins.//Cell.- 1995.- V. 80.-P.237.

85. Cummins J.M., Gawthrop J., Hutcyeson D.P. et. al. The effect of low dose oral human interferon alpha therapy on diarrhea in veal calves.// Arch. Immunol. Ther. Exp. 1993.- V. 41,- P.199-204.

86. Cummins J.M., Hutcheson D.P., Georglades J.A., and Richards A.B. Oral therapy with human interferon alpha in calves experimentally injected with infectious bovine rhino-tracheitis virus. //Arch. Immunol. Ther. Exp.- 1993.- V. 41.- P. 193-198.

87. Cummins J.M., Mock R.E., Shive B.W., Krakowka S., Richards A.B., and Hutcheson D.P. Oral treatment of transmissible gastroenteritis with natural human interferon alpha: A field study.// Vet. Immunol. Immunopathol.-1995.-V. 45.- P. 355-360.

88. D'Cuhna, J., Knight, E., JR., Haas, A.L. et al. Immunoregulatory properties of ISG15, an interferon-induced cytokine. //Immunol.- 1996.- V. 93.- P. 211-215.

89. David M. Transcription factors in interferon signaling. // Pharmacol. Ther.-1995.- V.65.-№2.- P. 149-161.

90. Davis R.J. The mitogen-activated protein kinase signal transduction pathway. // J. Biol.Chem.- 1993.- V. 268.- P. 1453 1456.

91. Der S.D., Zhou A., Williams B.R., Silverman R.H. Identification of gene regulated by interferon alpha, beta or gamma using oligonucleotide arrays. //Proc. Nati. Acad. Sci. USA. 1998.- V.95.- №26.- P. 15623-15628.

92. Ferbas J.J., Toso J.F., Logar A.J., Navratil J.S., and Rinaldo C.R. Jr. CD4 1 blood dendritic cells are potent producers of IFN-a in response to in vitro H1V-1 infection. //J. Immunol.- 1994.- V. 152.- P. 4649-4662.

93. Finkleman F.D., Svetic A., Gressor I., Snapper C., Holmes J., Trotta P., Katona I., and Gause W. Regulation by interferon-a of immunoglobulin isotype selection and lymphokine production in mice. //J. Exp. Med.- 1991.- V. 174.- P. 1179-1188.

94. Fleischmann W.R. Jr., Kjren S., and Fleischmann C.M. Orally administered interferon exert their white blood cell suppression effects via a novel mechanism. //Proc. Soc. Exp. Biol. & Med.- 1992.- V. 201.- P. 199-207.

95. FleischmannW.R. Jr., Fields E.E., Wang J.L., Hughes Т.К., and Stanton G.J. Modulation of peripheral leukocyte counts in mice by oral administration of interferon. //Proc. Soc. Exp. Biol. & Med.- 1991.- V. 197.- P. 424-430.

96. Gobi A.E., and Aim G.V. Interleukin-4 down regulates sendai virus-induced production of interferon-alpha and -beta in human peripheral blood monocytes in vitro. // Scand. J. Immunol.- 1992.-V. 35.- P. 167-175.

97. Havell E.A. Listeria monocytogenes -induced interferon-y primes the host for production of tumor necrosis factor and interferon-a/f3. //J. Infect. Dis.-1993.-V. 167.- P. 1364-1371.

98. Havell E.A., and Spital N.Y. Endotoxin-induced interferon synthesis in macrophage cultures. // J. Reticuloendothelial Soc 1983.- V. 33.- P. 369-380.

99. Heldin C.-H. Identification of the major phosphorylation sites for protein kinase С in kit/stem cell factor receptor in vitro and in intact cells.// Cell. -1995.-V. 80.-P. 213.

100. Herberman R.V., Santoni A. Regulation of natural killer cell activity //Biological Responses in Cancer: Progress toward Potential Application.-V.2.-Ed.E.Minich.-New York; London: S.n.,1984.-P.121-144.

101. Hester R. V., Walker W. S. Separation of murine mononuclear phagocytes by density gradients of percoll. Methods for studying mononuclear phagocytes -New York: Academic Press. 1981. - P. 195 - 200.

102. Hill C.S., Treisman R. Transcriptional regulation by extracellular signals: mechanisms and specificity.// Cell. 1995.- V. 81. P. 1159.

103. Holda J.H., Maier Т., Claman H.N. Evidence that IFN-gamma is responsible for natural supressor activity in GVHD spleen and normal bone marrow.//Transplant.- 1988.-V.45.-P. 772-777.

104. Hoskin D.W., Bowser D.A., Brookskaiser J.C. Soybean agglutinin-positive natural supressor cells in mouse bone-marrow inhibit interleukin-2 production and utilization in mixed lymphocyte reaction.//.!. Leucyte. Biol.- 1992.- V. 51.-P.649-656.

105. Houle J.L., Santoro N. Analysis of Human interfero-alpha gene promoters by multiple sequense alignment. // J. Interferon Cytokine Res.- 1996.- 16.- №2,-P. 93-98.

106. Hunter T. Protein kinases and phosphatases: the yin and yang of protein phosphorylation and signaling.// Cell. 1995.- V. 80. P. 225.

107. Iereb Berta, Petric-Grabnar Gabrijela, Tercelj-Zorman Marjeta, res-Krasovec Marija, Mazuran Renata, Soos Evgen, Stare Ianer// Radiol.and Oncol.-1993.-N4.- C.326-331.

108. Isaacs A., Burke D.C., and Fadeeva L. Effect of interferon on the growth of viruses on the chick chorion.// Br. J. Exp. Path. 1958.- V.39.- P. 447-451.

109. Jacob C. Overexpression and Knockout of Cytokines in Transgenic Mice.//Ed. O. Chaim.- Los Angeles.- 1994.- P. 111-124.

110. Jamamoto H., Hirayma M., Genyea C., Kaplan J. TGF-beta mediates natural supressor activity of IL-2 activated lymphocytes.//.!. Immunol.-1994.-V. 152.- P.3842-3847.

111. John S., Vinkemeier U., Soldaini E. Et al. The significance of tetramerization in promoter recruitment by Stat5. //Mol. Cell. Biol.- 1999.- V. 148.- P. 1910-1918.

112. Jackson R., Harrap A. Computer model of anticancer drug interaction.//Pharmacol. Ther. 1979. - V.4. - P.245 - 250.

113. Kerr I.M., Brown R.E., Ball L.A. Increased sensitivity of cell free protein synthisis to double - stranded RNA after interferon treatment.//Nature.- 1974.250 .- P. 57-59.

114. Kos F.J., and Engleman E.G. Requirement for natural killer cells in the induction of cytotoxic T cells.// J. Immunol. 1996.- V.154.- P. 578-584.

115. Kumar R., Atlas I. Interferon a induces the expression of retinoblastoma gene product in human Burkitt lymphoma Daudi cells: Roll in growth regulation. //Proc. Nat.Acad. Sci. USA.-1992.-№4.-C.6599-6603.

116. Lawson C.M., Beilharz M.W. Low dose oral use of interferon inhibits virally induced myocarditis. //J. Interferon Cytokine Res.1999.- V. 19.- P. 863867.

117. Lecce J.G., Cumminis J.M., Richards A.B. Treatment of rotavirus infection in neonate and weanling pigs using natural human interferon alpha. //J. Mol. Biotherapy.- 1990.- V. 2.- P.211-216.

118. Lockhart R.Z., JR. Production of an interferon by L cells infected with WEE virus. //J. Bacterid.- 1963.- V. 85.- P. 556-566.

119. Maes L.Y., York J.L., Soderberg L.S.F. A soluble factor produced by bone marrow natural supressor cells bloks interleukin 2 production and activity. //Cell. Immunol.- 1988.- V. 116.- P.35-43.

120. Mantovani A., Bottazzi В., Colotta F., et al. The origin and function of tumor-associated macrophages // Immunol.Today.-1992.-V.13.-№7.-P.265-279.

121. Marinaro M., Boyaka P.N., Rinkelman F.D., et al . Oral but not parenteral interleukin (IL)-12 redirects T helper 2 (Th2)-type responses to an oral vaccine without altering mucosal IgA responses.// J. Exp. Med.- 1997.- 185.- P. 415— 427.

122. Martin D.M.,Carlson R.O., Feldman E.L. Interferon у inhibits DNA synthesis and insulin like growth factor- II expression in human neuroblastoma cells.// I. Neurosci. Res.-1993 .-№>5.-C.489-501.

123. Mega J., McChee J.R., Kiyono H. Characterization on cytokine production T cells, TCR expression, and IgA plasma cells in salivary gland-associated tissues.//Adv. Exp. Med. Biol.- 1995.- V.371b.- P.l 103-1108.

124. Merika M., Williams A.J., Chen G., Collins Т., Thanos D. Recruitment of CBP/p300 by the IFN-beta enhanceosome is required for synergistic activation of transcription. Mol. Cell.- 1998.- V.2.- P. 277-287.

125. Miyajima A., Kitamura Т., Harada N. et al. Cytokine receptors and signal transduction. //Ann. Rev. Immunol.- 1992.- Vol. 10.- p.295-331.

126. Miyatake S., Sakuma M., Saito T. Induction of interleukin-2 unresponsiveness and down-regulation of the JAK-STAT system upon activation through the T cell receptor. //Eur. J. Immunol.- 1997.- V. 27.- P. 1816-1823.

127. Moore B.R., Krakowka S., Cummins J.M., and Robertson J.T. Changes in airway inflammatory cell populations in standardbred racehorses after interferon-alpha ad-ministration.// Vet. Immunol. Immunopathol. 1996.- V. 49.- P. 347-358.

128. Muller U., Steinhoff U., Reis L.F., Hemmi S., Pavlovic J., Zinkerhagel R.M., and Aguet M. Functional role of Type I and Type II interferons in antiviral defense. // Science.- 1994.- V. 264.- P. 1918-1921.

129. Nastala C., Nelson В., Green S. Recombinant IL-12 administration induces tumor regression in association with IFN-gamma production. //J. Immunol.1994.-V. 153.-P. 1697-1706.

130. Neer E.J. Heterotrimeric G proteins: organizers of transmembrane signals.//Cell.- 1995.- V. 80.- P.249-257.

131. Nelson P.A., Alselband Y., Dearborn S.M. et. al. Effect of oral beta interferon on subsequent immune responsiveness. //Ann. N.Y. Acad. Sci.1995,- V. 778.- P.145-55.

132. Okamura H., Tsutsi H., Kimatsu Т., Yutsudo M., Hakura A., Tanimoto Т., Torigoe K., Okura Т., Nukada Y., and Hattori K, et al. Cloning of a new cytokine that induces IFN-gamma production by T cells. //Nature 1995.- V. 378.-P. 88-91.

133. Orange J.S., Wolf S.F., and Biron C.A. Effects of IL-12 on the response and susceptibility to experimental viral infections. //J. Immunol.- 1993.- V. 151.- P. 1252-1264

134. Paul W.E., Seder R.A. Lymphocyte responses and cytokines.//Cell.- 1994.-V. 76.-P. 241-251.

135. Pilling D., Akbar A.N., Girdlestone J. et al. Interferon-beta mediates stromal cell rescue of T cells from apoptosis. //Eur. J. Immunol.- 1999.- V. 29.- P. 1041-1050.

136. Pine R., Canova A., Schindler C. Tyrosine phosphorylated p91 binds to a single element in the ISGF2/IRF-1 promoter to mediate induction by IFN-a and IFN-y, and likely to autoregulate the p91 gene. //EMBO J.- 1994.- V.13(l).- P. 158-167.

137. Platanias Leonidas C., Pfeffer Lawrence M., Barfon Kevin P., Vardiman James., Golomb Harvey M., Colamonici Oscar R. Expression of the IFN-a receptor in hairy cell leukaemie. // Brit. I. Haematol.-1992.- N3.- C.541-546.

138. Rajale p., Nurmi M., Alanen K., Lande M. Cytostatic effect of interferon alpha on human bladder cancer cells in vitro. A low cytometric study.// Ann. chir. et gynaecol.- 1993.- V.206.- P.50-53.

139. Rogge L., Barberis-Maino L., Biffi, M. Selective expression of an interleukin-12 receptor components by human T helper 1 cells.//J. Exp. Med. -1997.-V. 185.-P. 825-831.

140. Romagnani S. Human Thl-Th2 subsets: Eppur si muove. //Eur. Cyt. Network.- 1994.- V. 5.- №1.-P. 7-12.

141. Sadowski I., Stone J.C., Pawson T. A noncatalytic domain conserved among cytoplasmic protein-tyrosine kinases modifies the kinase function and transforming activity of Fujinami sarcoma virus P130gag-fps.// Mol. Cell. Biol.- 1986,- V. 6.- P. 4396.

142. Saffran D.C., Singhal S.K. Suppression of mixed lymphocyte-reactivity by murine bone-marrow-derived suppressor factor-inhibition of proliferation due to a dericit in IL-2 production.// Transplant.- 1991.- V. 52 P. 685-690.

143. Salazar-Mather T.P., Ishikawa R., Biron C.A. NK cell trafficking and cytokine expression in splenic compartments after IFN induction and viral infection.// J. Immunol.- 1996.- V.157.-P. 3054-3064.

144. Satoh Y., Kyoko K., Sato M. et. al. Induction of tissue 2959AS and suppression of delayed type of asthma reaction by oral administration of IFN-b in guinea pig asthma model.// J. Interferon Cytokine Res.- 1997.- V.17.- P. S96-S99.

145. Soos J.M., Mujtaba M.G., Subramaniam P.S., Streit W.J., and Johnson H.M. Oral feeding of interferon t can prevent the acute and chronic relapsing forms of experimental allergic encephalomyelitis. // J. Neuroimmunol.- 1997.-V. 75.-P. 43-50.

146. Stancato L.F., David M., Carter-Su C., Larner A.C., Pratt W.B. Preassociation of STAT1 with STAT2 and STAT3 in seprate signaling complexes prior to cytokine stimulation. //J. Biol. Chem.- 1996.-V.271.- № 8.-P. 4134-4137.

147. Steidler L., Robinson K., Chamberlain L., et al. Mucosal delivery of murine interleukin-2 (IL-2) and IL-6 by recombinant strains of Lactococcus lactis coexpressing antigen and cytokine.// Infect. Immun.- 1998.- V. 66.- P. 31833189.

148. Stewart W.E. The Interferon System.//Vienna and New York: Springer-Yerlag.- 1979.- P. 233-239.

149. Takayama S., Iwaki K., Nishida Y. et al. Effects of oral mucosal IFN-a on antibody production in mice with induced tolerance. J. Interferon Cytokine Res.- 1997.- V.17.-P.62-67.

150. Taniguchi T. Cytokine signaling through nonreceptor protein tyrosine kinases. //Science.- 1995.- V. 268.- P. 251-255.

151. Tompkins W. A. Immunomodulation and therapeutic effect of the oral use of interferon-a: Mechanism of action . J. Interferon Cytokine Res. 1999.- V.19.-P.817-828.

152. Tough D.F., Borrow P., Sprent J. Induction of bystander T cell proliferation by viruses and Type 1 interferon in vivo.// Science.- 1996.- V. 272.- P. 19471950.

153. Tovey M.G. and Maury C. Oral mucosal interferon therapy: Marked antiviral and antitumor activity. //J. Interferon Cytokine Res- 1999.- V.19.-P. 145-147.

154. Tovey M.G., Benizri E., Gugenheim J., Bernard G., Eid P., Lanchard В., and Hofman P. Role of the Type I interferons in allograft rejection.// J. Leukocyte Biol.- 1996.-V. 59.-P. 512-517.

155. Uchida A., Yanagava E., Kokoscka E.M. et al. In vitro modulation of human natural killer cell activity by interferon: generation of adherent suppressor cells. //Brit.J.Cancer.- 1984.- V.50.- P.483-492.

156. Wallase P., Morahan P., Role of macrophages in the immunotherapy of Lewis lung peritoneal carcinomatosis.// J. Lenkoc. Biol. 1994. -P.41 - 51

157. Weiss R.C., Cummins J.M., and Richards A.B. Low-dose orally administered alpha interferon treatment for feline leukemia virus infection. //J. Am. Vet. Med. Assoc.- 1991.- V.199.- P. 1477-1481

158. Young A.S., Maritim A.C., Kariuki D.P., Stagg D.A.,Wafula J.M., Mutigi J.J., Cummins J.M., Richards A.B., and Burns C. Low dose oral administration of human interferon alpha in cattle.// Parasitology 1990.- V. 101.- P. 201-209.

159. Yoshida Т., Norihisa Y., Habu S., Kobayashi N., Takei M., Rfnehira N., Shmamura T. Proliferation of natural suppressor cells in long-term cultures of spleen-cells from normal adult mice.// J.Immunol.-1991.- V.147.- P.4136-4139.

160. Zielenska W., Paszkiewicz J., Korczak A. et al. Treatment of six patients with chronic active HCV hepatitis with low dose natural human interferon alpha administrered orally. //Arch. Immunol. Ther. Exp.- 1993.- V. 41.- P. 253257.