Механизмы формирования Ca2+-сигнала в преадипоцитах бурой жировой ткани

Абжалелов, Бахытбек Байдосович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Механизмы формирования Ca2+-сигнала в преадипоцитах бурой жировой ткани
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Механизмы формирования Ca2+-сигнала в преадипоцитах бурой жировой ткани"

На правах рукописи с^й-/

Абжалелов Бахытбек Байдосович

МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ Са2+- СИГНАЛА В ПРЕАДИПОЦИТАХ БУРОЙ ЖИРОВОЙ ТКАНИ

Специальность "Биофизика" 03.00.02

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Пущино - 2003

Работа выполнена в Институте биофизики клетки РАН, Путинском Государственном Университете.

Научный руководитель:

кандидат биологических наук Долгачева Л.П. Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Белецкий И.П.

кандидат биологических наук Сафронова В.Г.

Ведущая организация - Биологический факультет МГУ им. М. В. Ломоносова, г. Москва.

Зашита диссертации состоится « Д?» Ш^х 2003 г. в ч на заседание Диссертационного совета Д002.038 01 в Институте биофизики клетки РАН по адресу: 142290, г. Пущино Московская область, ул. Институтская, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной библиотеке Путинского научного центра РАН

Автореферат разослан » 2003 г

Учёный секретарь Диссертационного совета Кандидат биологических наук / Смолихина Т.Н.

¿006-4 &Ö&W4

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Нейротрансмитгер норадреналин инициирует термогенез и увеличивает термогенную активность ткани при хроническом холодовом стрессе, стимулируя её гиперплазию и гипертрофию Норадреналин многократно ускоряет как пролиферацию клеток, так и их дифференцировку В бурых преадипошггах норадреналин стимулирует синтез ДНК и белка по сАМР-зависимому пути. В постконфлуентных клетках норадреналин стимулирует экспрессию гена белка-разобщителя Была показана линейная корреляция между экспрессией гена и повышением cAMP [Bronnikov et al, 1992} Таким образом, процессы пролиферации, дифференцировки и термогенеза, опосредованы одним и тем же мессенджером - сАМР и инициируются через ß-адренорецепторы Роль ai-адренорецепторов в указанных процессах оказалась минорной и сводилась к синергическому усилению сигнала, индуцированного через ß-рецепторы и сАМР В этом случае ионы Са1+ усиливали стимулирующее действие с AMP на термогенез клеток и экспрессию ряда генов [Thonberg et al., 1994; Zhao et al., 1997].

Единственным указанием на возможное участие ионов Са2+ в активации пролиферации бурых преадипоцитов являлась установленная ранее корреляция между эффектами нейропептидов на [Ca2*], в свежевыделенных преадипоцитах и модуляцией пролиферации культивируемых клеток пептидами при тех же концентрациях [Bronnikov et al, 1997]. Однако оказалось, что [Са2+]„ инициируемый норадреяалином и пептидами в преадипоцитах и зрелых клетках бурого жира отличается по раду параметров (кинетика, амплитуда и т д) Более того, создавалось впечатление, что Са1+-сигналы, инициируемые в преадипоцитах разными агонистами, обладают разными физиологическими функциями в этих клетках и связаны, по-видимому, со стимуляцией противоположно направленных процессов [Bronnikov et al, 1997] Поэтому мы считаем весьма важным на первом этапе установить, причины существенных отличий Са2+-ответов на норадреналин в преадипоцитах и зрелых клетках бурого жира Это позволит в последующем использовать полученные знания для контролируемого управления за развитием клеток и ткани.

К важным свойствам бурой жировой ткани относится её способность наращивать свою массу в случае хронического холодового стресса Запуск этого процесса, также как и термогенеза, осуществляется в; ¿сновнои

? £ И'^1»- J 1 f i ' i ...........

норадреналином Бурая жировая ткань представляет собой хорошую модель для исследования механизмов гормонального контроля за развитием ткани и клеток.

Цель и основные задачи исследования. Цель настоящей работы установить роль ар и Р-адренорецепторов и исследовать особенности функционирования фосфоинозитидного и аденилатци клазного путей в формировании уникального Са2+-ответа, инициируемого норадреналином в бурых преадипоцитах.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи

1 Установить тип адренорецепторов, участвующих в формировании [Са2+], на норадреналин в свежевыделенных бурых преадипоцитах мыши Оценить вклад aj- и p-адренорецепторов в формировании [Ca2+]i в свежевыделенных бурых преадипоцитах мыши.

2 Определить ключевые молекулы сигнального пути, отвечающего за проведение сигнала от момента связывания лиганда с рецептором до повышения уровня ионов Са2+ в цитоплазме клеток Продемонстрировать влияние вторичного мессенджера с AMP на Са2+-ответ бурых преадипошггов,

3 Изучить особенности регуляции [Ca2+]t в бурых преадипоцитах (участие каналов, внутриклеточных пулов)

4 Сравнить действие модуляторов Са1+-ответа в бурых преадипоцитах и зрелых бурых адипоцитах

Науная новизна работы. Показано, что медленный Са2+-ответ на норадреналин в бурых преадипоцитах инициируется преимущественно через Р-адренорецепторы и сАМР/протеинкиназа А-зависимый путь, тогда как а ] -адрен орецепторы играют второстепенную роль Активация отдельных участков аденилатциклазного пути, непосредственная активация аденилатциклазы форсколином или инкубация клеток с проникающим аналогом сАМР ВгсАМР приводит к более существенному росту [Ca2+]j, чем действие на преадипоциты норадреналина Показано, что участники сАМР-зависимого пути, активируемого через Р-адренорецепторы (аденилатциклаза, фосфодиэстераза и протеинкиназа А), способны инициировать и модулировать Са2+-ответы в бурых преадипоцитах С помощью ингибитор но го анализа клеточных ответов показаны присутствие в преадипоцитах незначительных внутриклеточных кальциевых пулов и низкая проводимость плазматической мембраны для ионов Са2+ Блокатор Са2+-каналов L-типа нифедипин и Са2+-ионофор иономицин увеличивали уровень [Са2+], в преадипоцитах

Научно-практическая иенность Знание механизмов может иметь важное значение для предотвращения и лечения ожирения и сопутствующих болезней в частности диабета Восстановление бурой жировой ткани у людей с помощью фармакологических средств позволит контролируемо «сжигать» белый жир и заметно понизить уровень жирных кислот в крови

Это в свою очередь позволит уменьшить возможность развития сахарного диабета второго типа

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на школе-конференции «Горизонты физико-химической биологии» (Пущино, июнь 2000), V и VII Пущинских конференциях молодых ученых (Пущино, апрель 2001, Пущино, апрель 2003); на международном симпозиуме «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, октябрь 2001), на XIII зимней международной молодежной школе «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (Москва, февраль 2001), на конференции «От современной фундаментальной биологии к новым наукоемким технологиям» (Пущино, ноябрь 2002), на международной конференции «Molecular Control of Adipogenesis and Obesity» (США, Colorado, January 2002); на международной конференция "Рецепция и внутриклеточная сигнализация" (Пущино, 16-18 июня, 2003).

Публикаций. По материалам диссертации опубликовано 13 работ, из них 2 статьи в реферируемых журналах

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 110 страницах, включает 18 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных экспериментальных данных и их обсуждения, заключения и выводов Список литературы содержит 298 ссылок

Список сокращений. 1Рз-инозитол-1,4,5-трифосфат; 1ВМХ-3-изобугил-1-метилксантин, ПК А- проте инки к аза А, НА-норадреналин, H-89-N-[2-(p-бромоцинамиламино) этил ! ] - 5 -изо ку и н оли несу льфо нам и д, ОРС-39! 1-N-циклоге ксил-Ы-(2-гидрокси этил) -4 - (6-( 1,2-дигидро-2 -оксокуинолилокси))бутирамид; Ro 20-1724-4-(3-бутокси-4-

митоксибензил)-2-имидазолидон; ОК-окадаиковая кислота, [Са2+],-концектрация Са2^в цитоплазме.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Эксперименты проводили на суспензии свежевыделенных бурых преадипоцитов Мышей-самцов линии NMRI в возрасте 3-5 недель содержали в отсутствие холодового стресса (температура в помещении 20-23°С) 3"бор ткани производили из затылочной, межлопаточной и пазушной областей [Néchad et al, 1983, Bronmkov et al, 1999] Бурую жировую ткань помещали в стандартный солевой буфер, содержащий (в мМ) NaCl - 123, КС1 - 5, CaCl - 1,3, глюкозы - 5, HEPES - 20, BSA - 0,5%, рН - 7,4. Ткань бурого жира переносили в пробирки с раствором коллагеназы для разрушения межклеточного матрикса Раствор коллагеназы (0,5-0,6 мг/мл изоляционного буфера) готовили непосредственно перед опытом из расчета 2-2,5 мл раствора на одну мышь

Измельченную ткань инкубировали в растворе с коллагеназой на водяной бане при 28°С в течение 20-30 мин, периодически встряхивая на шейкере, и затем охлаждали на льду в течение 15-30 мин Суспензию клеток фильтровали на нейлоновом фильтре (размер пор 250 мкм) и центрифугировали течение 10 мин при 1200 g Слой белого жира удаляли и супернатант отбирали шприцем с длинной иглой Полученный осадок ресуспендировали в 9 мл среды DMEM с добавлением 10 мМ HEPES и BSA (0,5 мг/мл), рН 7,4, отфильтровывали на нейлоновом фильтре (размер пор 25 микрон) и центрифугировали течение 10 мин при 1200 g Осадок ресуспендировали в среде DMEM без альбумина Зрелые адипоциты содержат жировые капли и не осаждаются при данных параметрах центрнфугиро вания.

Измерения [Са2*], проводили спектрофлуориметрически с помощью внутриклеточных и он-селективных флуоресцентных зондов Fura-2/AM [Tsien et al, 1982; Grynkiewicz et al, 1985] В данной работе мы регистрировали кинетики [Са2*]; при аппликации агонистов адренорецепторов в течение 20 минут и далее учитывали и анализировали величину [Са2+], на 20-й минуте Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы Origin 7,0.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ, проект 02-0448747 и 03-04-06418-МАС.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Роль аг " р-адренорецепторов в формировании Са2*•сигнала в преадипоцитах бурого жира.

В зрелых бурых адипоцитах норадреналин (НА) и <*!-селективный агонист циразолин вызывали очень схожие Са2+-ответы, в то время как влияние изопротеренола на [Са2+], было на два порядка меньше, чем влияние НА и циразолина [Вгопткоу е! а1 , 1999] В свежевыделенных бурых преадипоцитах эффективность указанных агонистов была совершенно иной Агонисты а]-адренорецепторов: циразолин, фенилефрин (не показано) и оксиметазолин (агонист оид-рецепторов, которые составляют 80-90 % от а ]-адренорецепторов в бурой жировой ткани) [(Эгаппетап е! а1,1997] вызывали в 2-3 раза меньшее увеличение [Са3+], по сравнению с НА, тогда как изопротеренол и НА инициировали в них практически идентичные Са +-ответы (рис 1) Агонист сь-адренорецепторов клонидин не имел эффекта в бурых преадипоцитах

200 -1Т5 "

Ж ■

150 -125 "

100

НА

Цир

Ковтр

Рис. I. Кинетика Са2*-отеетов в

преадипоцитах бурого жира, инициированных 3 рМ цирамлином (Цир), 3 (М изопротеренапом (Им) и 3 цМ норадреналином (НА), контроль.

I I ' I

( 10 1* Вр|ма, ИНН

—Г"

—I 20

При действии адренергических агонистов наблюдался аддитивный Са2+-ответ, стимулированный через р- и а;-адренорецелторы( [Са2+], при аппликации НА была примерно равна арифметической сумме эффектов изопротеренола и оксиметазолина [Долгачева и др, 2000] Совместная аппликация Р- и (и-агонистов при максимальной концентрации (10 цМ) последних дала в результате Са2+-ответы, аналогичные эффектам НА Для того, чтобы подтвердить относительный вклад ар и Р-адренорецепторов в Са2+-ответ под действием НА, были исследованы эффекты аю- и р-селективных антагонистов- фентоламина и надолола, соответственно Надолол на 90 % подавлял НА- шинированный Са^-ответ, в то время как фентоламин уменьшал Са2+-ответ только на 25 % (рис.2). Таким образом, оба типа адренорецепторов (ар и р-), вносят вклад в формирование [Са3+]ь однако главная роль в формировании Са2+-ответа в бурых преадипоцитах принадлежит р-адренорецепторам

Рис. 2. Влияние

селективных антагонистов аг и Р-адренорецепторов на НА-иницированный Са}*-ответ в бурых

преадипоцитах: (1) - контроль, (2) - 6 ф1 норадреналина (НА), (3) - НА + 10 [М фентоламина, (4) -НА + 10 /]М надолол а. (п=5). Уровень измеряли

через 20 мин после добавления антагонистов.

Контроль

2. Действие ингибиторов и активаторов сАМР-зависимого пути на Сег-сигнал в преадипоцитах.

Активация Р-адренорецепторов клеток бурого жира приводит к опосредованной ва-белками стимуляции аденилатциклазы (АЦ) и к образованию вторичного мессенджера

2Й0 1

10 15

Вргча, мня

Рис 3. Кинетика Са3*-ответа в

преадипоцитах под действием норадрен&гииа,

ВгсАМР и

форсколипа; (1) контроль; (2) - 1 fiM норадреиалина, (3) -ID ftM форсколипа, (4) - 0,5 цМ ВгсАМР,

cAMP [Chaudhry & Grameman, 1991, Svoboda et al, 1993] Увеличение внутриклеточного уровня с AMP можно достичь либо добавлением к клеткам проникающего через плазматическую мембрану аналога сАМР-ВгсАМР, либо добавлением форсколина- непосредственного активатора АЦ На рис 3 представлены кинетики Са2+-ответов бурых преадипоцитов на норадреналин, ВгсАМР и форсколин Как видно из рисунка, увеличение [Ca2+]j в ответ на форсколин и ВгсАМР (кривые 3 и 4) заметно выше, чем при аппликации НА, что еще раз подчеркивает ведущую роль р-адренорецепторов в формировании [Са21 ]i

Добавление 500 рМ ВгсАМР вызывает максимальное увеличение [Са2+]ь что следует из колоколообразной кривой дозозависимости (рис 4)

200-1

180-

S J»-а

140-

120-

Рис. 4. Зависимость Са**-ответа преадипоцитов от концентрации ВгсАМР.

200

400

—1—

600

800

1000

(ВгсАМР), цМ

В настоящем исследовании показано, что воздействия, приводящие к увеличению с AMP в преадипоцитах, вызывают повышение [Ca2+]i Известно, что уровень с AMP в клетке определяется балансом между двумя процессами- процессом синтеза, опосредованным активацией аденилатциклазы, и процессом деградации, опосредованным активацией фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов Неспецифическим ингибитором фосфодиэстераз циклических нуклеотидов является соединение З-изобутил-1-метилксантин (IBMX) Оптимальная концентрация IBMX для преадипоцитов бурого жира была выбрана в результате титрования вышеупомянутого ингибитора в широком диапазоне концентраций Как следует из рисунка 5, 30 цМ является самой эффективной концентрацией Таким образом, ингибирование фосфодиэстераз в присутствии IBMX вызывает увеличение уровня сАМР, что в свою очередь увеличивает кальциевый ответ на НА

1оОп

2 ж

100-1---1-----------,---,--

0 20 40 60 80 100

JIBMX], цМ

Показано, что в адипоцитах бурого жира наиболее широко представлены фосфодиэстеразы 3- и 4-типов [Degerman et al, 1987] Селективными ингибиторами фосфодиэстераз 3- и 4-типов являются, такие соединения как ОРС-3911 и Ro-20-l 724, соответственно

Ранее было показано, что ингибиторы фосфодиэстераз 3- и 4-типов синергично воздействовали на увеличение внутриклеточного уровня сАМР [Poison et al, 1996] Подобное явление наблюдалось также на культивируемых дифференцированных бурых адипоцитах fBronnikov et al, 1999] Совместное применение этих ингибиторов в данном исследовании на бурых преадипоцитах вызывало меньшее усиление Са2+-ответа на НА, чем вызывали эти ингибиторы по отдельности (рис б) На наш взгляд это полностью согласуется с колоколообразными кривыми дозозависимости эффекта ЗгсАМР (рис 3) и IBMX (рис 4) на величину Са2+-ответа в бурых преадипоцитах

140-

120 ■

Рис. 5. Зависимость Са2*-ответа на НА от концентрации IBMX в преадипоцитах.

4Чи* 350-

% 300-

250-

200-

150-

100<

Ркс.б. Влияние

ингибиторов фосфодиэетераз и фосфатазы на ответ клеток под действием НА. (1)- контроль, (2)-6}1М НА, (3)- 0,5 рМ ОРС-3911+НА, (4)- 15 цМ Ко 20-1724+НА, <5)-ОРС+Ко+НА, (6)-30 }1М ОК-УНА.

113 4

Кот-рои, НА ОРС+НА Ко+НА (Ж>Ко ОК+НА

+НА

Известно, что активность Са2+-каналов зрелых клеток модулируется процессами фосфорилирования и дефосфорилирования, осуществляемыми протеинкиназой А и серии- треонин специфической фосфатазой [Яако е1 а!, 1997] В данном исследовании установлено, что специфический ингибитор протеинкиназы А (Н-89) подавлял Са2+-ответы на изопротеренол дозозависимым образом (не показано) и форсколин Максимальное подавление Са2+-ответа на форсколин ингибитором ПКА ([Н-89]= 1 р.М) составляло 55 % (рис 7) Добавление ингибитора фосфатазы, окадаиковой кислоты, существенно увеличивало Са2+-ответ на НА (рис 6) Эти факты говорят в пользу того, что ПКА, фосфатаза и фосфодиэстераза участвуют в процессе формирования Са +-ответа на норадреналин в бурых преадипоцитах

160

Рнс. 7. Влияние ингибитора протсинкиназ ы А Н-89 (1 рМ) на кинетику Са3*-отиета в бурых преадипоцитах, под действием форсконина (10 р.М).

10 15 Время, мин

Таким образом, в данной работе показано, что Са2+-ответ в свежевыделенных бурых преадипоцитах инициируется главным образом через р-адренорецепторы и далее опосредуется через сАМР/протеинкиназа А-зависимый путь Это является отличительной чертой бурых преадипоцитов. В зрелых адипоцитах Са2+-ответы инициируются через аг адренорецепторы [Bronnikov et al, 1999, Zhang et al, 1999]

Второй отличительной чертой Са1+-ответа в бурых преадипоцитах является колоколообразная зависимость его величины от концентрации агонистов адренорецепторов или сАМР, в зрелых клетках эти зависимости имели гиперболический или сигмоидальный вид [Bronnikov et al, 1999, Dolgacheva et al, 2003] Согласно классическим представлениям колоколообразная дозозависимость в ответ на действие гормона или нейротрансмиттера указывает на его двойственное действие он является активатором при низкой концентрации и ингибитором при высокой Ранее были описаны подобные колоколообразные дозозависимости аккумуляции сАМР в зрелых бурых адипоцитах при аппликации норадреналина и изопротеренола [Bronnikov et al, 1999] Ингибирующее действие высоких концентраций (1-10 цМ) НА и изопротеренола в этом случае было обусловлено активацией ими Са1+-сигнала Возросший уровень [Са2+^ приводил к активации СаМ/Са2+-зависимой фосфодиэстеразы и расщеплению сАМР. Колоколообразный характер кривых может быть связан с наличием отрицательной обратной связи Так например, адренергическая стимуляция Са2+-каналов L-типа в кардиомиоцитах вызывает увеличение [Саг+]„ что приводит к подавлению аккумуляции с AMP, связанному в одном случае с Саг+- индуцированным ингибированием аденилатциклазы [Sako et al, 1998], в другом- с активацией СаМ-зависимой фосфодиэстеразы [Yu et al, 1993] Более того, с помощью моделирования показано, что наличие двух участков фосфорилирования Са3+-каналов в большей степени соответствует экспериментальным данным о двойственном эффекте изопротеренола на

кардйомиоцитах [Hartzell et al., 1995, Kokozet al, 1999]

3. Депо-зависимый Саг+-сигнал в преадипоцитах бурого жира.

В настоящее время считается общепринятым, что одним из основных механизмов входа Са1+ в невозбудимых клетках является депо-зависимый (емкостной) вход [Putney, 1986, 1990] В этом случае повышение [Са2+], , вызванное опустошением IPj-чу вств ите лъных Са2+-депо, осуществляется за счет экстраклеточной среды

160 -I

130 -

се

w 110 -

НА

Рис.8, кинетика Са**-ответов е бурых преадипоцитах под действием 1 fiM норадреналина (НА) и 1 fiM тапсигаргипа (ТГ).

Кокгр

—i— 16

—i 20

Время, мин

Тапсигаргин, специфический ингибитор эндоплазматических Са2+-АТРаз, вызывает опустошение 1Рз-чувствительных Са2+-депо, что позволяет идентифицировать депо-зависимый вход Са2+ В дифференцированных клетках бурого жира идентифицирован депо-зависимый вход Са2+ [Zhang, 1999] Са2+-ответ

на тапсигаргин

преадипоцитов бурого жира (в среде с Са ) был заметно слабее, чем ответ на норадреналин (рис. 8) В среде, не содержащей Са2+, этот ответ практически отсутствовал Таким образом, низкое содержание Са2+ во внутриклеточных структурах не позволяет инициировать емкостной вход Са2+

4. Со2* -каналы в преадипоцитах бурого жира.

Другой причиной медленного увеличения [Са2+], в бурых преадипоцитах может быть низкая проводимость Саг+-каналов плазматической мембраны Известно, что химическая модификация Са2+-каналов тимеросалом фиксирует их в открытом сосюянии [Chen el al, 1998]. Таким образом, по увеличению [Са2+], в ответ на добавление тимеросала, можно судить о суммарной проводимости этих каналов Как следует из рисунка (рис 9), [Ca2+], преадипоцитов повышается лишь до 200-210 нМ даже при использовании высоких концентраций тимеросала Тогда как Саг*-ответ дифференцированных бурых адипоцитов достигал 1-2 мкМ при аппликации тех же концентраций тимеросала Отсюда можно заключить, что суммарная проводимость Са2+-каналов преадипоцитов низка

200

ISO

£ WO

ъ.

140

120

ШН-1---1---1---!-1-1-.

О 200 400 «00 800

(Тнмеросал), jiM

На культивируемых зрелых адипоцитах бурого жира показано, что ингибитор Са2+-каналов L-типа нифедипин подавлял (ICjo - 20 рМ) Са1+-ответы, инициированные НА [Zhang, 1999] Ингибирующего эффекта нифедипина на гормон-инду цируемые кальциевые ответы бурых преадипоцитов зарегистрировано не было скорее наоборот, нифедипин проявил себя как кальциевый агонист (рис 10) Таким образом, Са2+-каналы L-типа, по-видимому, экспрессируются в бурых адипоцитах на стадии дяфференцировки

220

200

160

и 140

ПО

100-1—,—,—г—1-,-.---■-1—■—t—.—Г

Й S 10 IS 20 25 30 [Нифедипин), цМ

5. Иономицин-резистентные свойства нреаднпоцитов бурого жира.

Са2+-ионофор иономицин часто используется в экспериментальной практике для имитации гормонального ответа, приводящего к повышению

Рис. 10. Зависимость уровня {Се2*/, в бурых преаднпоцитах от концентрации нифедипина. Уровень (Со?*/, измеряли через 20 мин после добавления нифедипина.

Са2+ в цитоплазме. Ранее считали, что иономицин повышает [Са2+], в результате переноса Са2+ через плазматическую мембрану Однако, позже появились работы, в которых было показано, что различные типы клеток не только отличаются по чувствительности к Са2+-ионофорам, но и в диапазоне концентраций ионофора от 5-10"* М до НО"6 М происходит активация Са2+-сигнагшзации. Са ^-каналов плазматической мембраны и эндоплазматического ретикулума [Gukovskaya & Zinchenko, 1990, Kubota et al., 1995; Miller, 1996, Дедкова и др , 1999].

220-1

Рнс. 11. Зависимость уровня [Ctf*/, в преадипоцитах бурого жира от концентрации иономицина.

-4

-10 -9 •« -7 -6 Log |Иономш|ин|, (М)

-5

На рис. 11 приведены [Са2+], на 20-мин в бурых преадипоцитах

мышей в ответ на добавление иономицина в диапазоне концентраций от

НО'10 М до Ю"4 М Следует отметить, что при росте концентрации

ионофора от 3*10"9 М до 10"6 М наблюдается понижение [Са24^ Снижение (Са2+]„ по-видимому, обусловлено производством в клетках природных ингибиторов [Оикоузкауа & ХшсИепко, 1990; Дедкова и др, 1999] При добавлении иономицина в диапазоне концентраций от 1 мкМ до 30 мкМ зависимость между ростом [Са3*^ и концентрацией ионофора носит почти линейный характер Дальнейшее увеличение концентрации иономицина (30 мкМ и 100 мкМ) не вызывало существенного повышения [Са24-], (подъем [Са2+], не превышал (200-220) нМ) Этот факт свидетельствует о резистентности бурых преадипоцитов к действию иономицина. Известно, что большинство клеток не обладает резистентностью к Са2+-ионофору иономицину В ряде работ показано, что превышение потока ионофора Са2* над активностью Са2+-АТРазы (Рис 12) наблюдается даже при низких концентрациях иономицина (0,1 мкМ - для наивных Т-клеток [Сигова и др., 2000], 1 мкМ - для нейтрофилов [Дедкова и др, 1999] и тимоцитов [Гуковкая и др., 1990] и 30 мкМ- для бурых адипоцитов [Вгопшкоу е! а!,

1999] и АКЭ [Дедкова и др , 1999])

Резистетность к фармакологическим соединениям иногда определяется наличием специфической системы выброса (Multidrug resistance) [Nagy et al., 1999].

2500-

2000-

г 1500-

1000-

500-

- преаддгтоциты -алипоциты

- нейтрофилы -АКЭ

-10 -9

-8 -7 -6 -5

1у0£|И0Н0МНЦНН| (М)

Рнс.11. Зависимость уровня (Со1*/, в преадипоцитах, аАипоцитах, нейтрофилах и АКЭ от концентрации иономицина.

-3

Известно, что

клеток к Са2+-ионофорам

чувствительность

коррелирует с проводимостью Са2+-каналов плазматической мембраны [Altschuld et al, 1991] и активностью Са2+-АТРазы плазматической мембраны [Milter, 1996] Сверхэкспрессия Са2+-АТРазы плазматической мембраны [Briru et al, 2000, Guerini et al, 2000] либо ее повышенная активность могут объяснить тот факт, что ни химическая модификация Са2+-каналов тимеросалом, ни использование высоких концентраций Са2+-ионофора не приведет к заметному подъему [Са2+], в преадипоцитах бурого жира

выводы

1 Показано, что амплитуда Са2+-ответов на норадреналин в преадипоцитах бурого жира на 2 порядка меньше, чем в дифференцированных клетках

2 Обнаружено, что медленный Са2+-сигнал в бурых преадипоцитах реализуется преимущественно через p-адренорецепторы, тогда как ai-адренорецепторы играют второстепенную роль

3. Показано, что индуцирование Са2+-ответов клетки через р-адренорецепторы происходит через сАМР/протеинкиназа А-сигнальный путь:

а) неспецифический ингибитор фосфодиэстераз с AMP IB MX и специфические ингибиторы фосфодиэстераз сАМР типов 3 и 4 вызывают увеличение Са2+-ответов в преадипоцитах в ответ на норадреналин,

б) ингибитор протеин кии азы А Н-89 уменьшает [Са2^ лреадипоцитов, вызванный форсколином;

в) ингибитор серин-треонин-специфических протеинфосфатаз ОК увеличивает Са2+-ответ лреадипоцитов под действием норадреналина

4 Показано, что Са2+-сигнал, вызванный опустошением эндоплазматического ретнкулума под действием тапсигаргина или модифицированным открытым состоянием Са2+-каналов под действием тимеросала, на 2 порядка ниже по амплитуде в преадипоцитах по сравнению со зрелыми адипоцитами

5 Показано, что блокатор Са2+-каналов L- типа нифедипин проявляет свойства Са2+-агониста в бурых преадипоцитах.

6 Показано, что преаднпошггы бурого жира относятся к нономицин-резистентным клеткам.

Список опубликованных работ по теме диссертация

1 L Р. Dülgacheva, В.В. Abzhalelov. S -J Zhang, V P Zinchenko, G.E Bronnikov Norepinephrine induces slow calcium signalling in murine brown preadipocytes through the ß-adrenoceptor/cAMP/protein kinase A pathway, Cellular Signalling (2003) v 15(2) pp 209-216.

2 Л.П Долгачева, Б.Б. Абжаделов. А С Баумуратов, В П Зинченко, Г Е Бронников Аденилатциклазный путь участвует в регуляции внутриклеточного уровня Са2+ в преадипоцитах бурого жира Цитология 2002 Точ 44, №1, стр. 56-60.

3. Л П Долгачева. Б.Е. Абжалелов. А С Баумуратов, В.П Зинченко, Г Е Бронников. Развитие внутриклеточных сигнальных систем, обусловленное дифференцировкой клеток бурого жира Труды конференции "От

современной фундаментальной биологии к новым наукоемким технологиям" (Пущино, 11-14 ноября 2002г), стр 67 4 Bronnikov G Е., Dolgacheva L Р, Abzhalelov В.В , Kramarova L I, Dolgachev V A., Zinchenko V P Norepinephrine induces calcium signalling in murine brown preadipocytes through the beta-adrenoceptor/cAMP/protein kinase A pathway , Molecular control of Adipogenesis and Obesity (Keystone, Colorado, January 10-16,2002), P 67

5, G E Bronnikov, L P. Dolgacheva, B.B. Abzhalelov. L I Kramarova, V P Zinchenko Adrenergic signaling systems in regulation of brown adipose tissue recruitment Tsitologiya 43 №9, International simposium "Biology of cell in culture" (St. Petersburg, October 16-18,2001), P. 844.

6 Б.Б. Абжалелов. А С БауМуратов, В П Зинченко, Г Е Бронников, Л П Долгачева Участие протеинкиназы А в генерации Са2+-ответа агонистами Р-адренорецепторов в преадипоцитах бурой ткани 5ая Путинская конференция молодых ученых (Пущино, 16-20 апреля 2001), стр 104

7 Б.Б. Абжалелов. А С Баумуратов, В П Зинченко, Г Е Бронников, J1 П Долгачева Эффекторная молекула аденилатцнклазного пути влияет на внутриклеточный уровень Са2+ в преадипоцитах бурого жира XIII Зимняя международная молодежная научная школа "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии" (Москва, 7-9 февраля 2001 г ), стр 85

8 Б.Б. Абжалелов. А.С Баумуратов, В А Долгачев, В П Зинченко, Г Е Бронников, Л П Долгачева сАМР повышает [Са2+], в бурых преадипоцитах мьнии Тезисы докладов школы-конференции "Горизонты физико-\имической биологии" (Пущино, 28 мая- 2 июня 2000 г), стр 161

9 Абжалелов Б.Б, Долгачева Л П , Бронников Г Е Развитие медленного Са2+-ответа в бурых преадипоцитах через p-рецепторы и сАМР/протеинкиназа А-зависимый путь 7ая Пущинская конф молодых ученых (Пушино, 16-20 апреля 2001), стр 4

10 Абжалелов Б.Б. Долгачева ЛП, Бронников ГЕ Особенности неадренергического управления Са1+-сигнализации в бурых преадипоцитах 7ая Пущинская конференция молодых ученых (Пущино, 16-20 апреля 2001), стр 4

11 Баумуратов А С, Абжалелов Б.Б , Долгачева Л П , Бронников Г Е Са2+- ответы на агонисты адренорецепторов в преадипоцитах бурого жира при хладоадаптации 7ая Путинская конференция молодых ученых (Пущино, 16-20 апреля 2001), стр 9

12 Баумуратов А С., Абжалелов Б. Б , Долгачева Л П , Зинченко В П , Бронников Г Е Влияние холодовой акклимации мышей на Са2+-ответы в бурых преадипоцитах, инициированные адренергическими агонистами Международная конференция-"Реиепция и внутриклеточная сигнализация" (Пущино, 16-18 июня, 2003), стр 27-29

13 Абжалелов Б. Б , Долгачева Л П , Зинченко В П , Бронников Г Е Сравнение действия регуляторов кальциевой сигнализации на бурых адипоцитах, находящихся на разных стадиях дифференцировки

Международная конференция-"Рецепция и внутриклеточная сигнализация" (Пущино, 16-18 июня, 2003), стр. 18-21. 14 Абжалелов Б. Б. (}е1оеп А, Долгачева Л П, Зинченко В П, Бронников Г Е Сравнение действия регуляторов кальциевой сигнализации на разных уровнях лифференцировки бурых адипоцитах Биологические мембраны (в neчamv)

Подписано в печать 22.09 2003 г Формат 60 х 841/1в

Объем 1,0 л л. Тираж 100 экз Заказ 2046

ГУП Московской области «Серпуховская типография» Министерство по делам печати и информации Московской области

РНБ Русский фонд

2006-4 36492

i % - -V lií

vjr;

о Л ОКТ 7003

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Абжалелов, Бахытбек Байдосович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. БУРАЯ ЖИРОВАЯ ТКАНЬ. 8 1.1. Физиологическая роль жировых тканей.

2. Особенности разобщающего действия жирных кислот в митохондриях бурой жировой ткани.

2.1. Термогенин - разобщающий белок митохондрий бурой жировой ткани.

2.2. Жирные кислоты как разобщители окислительного фосфорилирования.

3. Норадреналин-как основной регулятор термогенеза. 19 3.1. Адренергические рецепторы клеток бурого жира. 21 3.1.1. Агонисты и антагонисты адренорецепторов клеток бурого жира.

4. Са2+-СИСТЕМА СИГНАЛИЗАЦИИ КЛЕТОК БУРОГО ЖИРА.

5. Ключевые молекулы аденилатциклазного пути.

6. Агенты, повышающие [Са ]i в клетке.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

1. Метод выделения клеток бурого жира.

2. Состав изоляционного раствора.

3. Измерение [Са ]i.

4. Стандартный солевой раствор.

5. Определение количества клеток.

6. Описание установки.

7. Используемые реактивы.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. 52 1. Роль ai и p-адренорецепторов в формировании

Са -сигнала в преадипоцитах бурого жира.

2. Действие ингибиторов и активаторов сАМР-зависимого пути на Са2+-сигнал в преадипоцитах.

3. Депо-зависимый Са2+-сигнал в преадипоцитах бурого жира.

4. Са2+

-каналы в преадипоцитах бурого жира.

5. Иономицин-резистентные свойства преадипоцитов бурого жира.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы формирования Ca2+-сигнала в преадипоцитах бурой жировой ткани"

Актуальность работы. Бурая жировая ткань впервые была описана несколько сот лет назад. Эта ткань локализована близ жизненно важных органов и играет главную роль в производстве тепла, необходимого для поддержания постоянной температуры, в особенности у мелких животных, живущих в условиях холода и/или впадающих в зимнюю спячку, а также у новорожденных, в том числе и человека [Rial et al., 1983; Nicholls & Locke, 1984]. Нейротрансмиттер норадреналин инициирует термогенез и увеличивает термогенную активность ткани при хроническом холодовом стрессе, стимулируя её гиперплазию и гипертрофию. Норадреналин многократно ускоряет как пролиферацию клеток, так и их дифференцировку. В бурых преадипоцитах норадреналин стимулирует синтез ДНК и белка по сАМР-зависимому пути. В постконфлуентных клетках норадреналин стимулирует экспрессию гена белка-разобщителя. Была показана линейная корреляция между экспрессией гена и повышением концентрации cAMP [Bronnikov et al., 1992]. Таким образом, процессы; пролиферации, дифференцировки и термогенеза, опосредованы одним и тем же мессенджером - сАМР и инициируются через p-адренорецепторы. Роль ai-адренорецепторов в указанных процессах оказалась минорной и сводилась к синергическому усилению сигнала, индуцированного через Р-рецепторы и сАМР. В этом случае ионы Са2+ усиливали стимулирующее действие сАМР на термогенез клеток и экспрессию ряда генов [Thonberg et al., 1994; Zhao et al., 1997]. i

Единственным указанием на возможное участие ионов Са в активации пролиферации бурых преадипоцитов являлась установленная ранее корреляция между эффектами нейропептидов на [Ca2+]i в свежевыделенных преадипоцитах и модуляцией пролиферации культивируемых клеток пептидами при тех же концентрациях [Bronnikov et al., 1997]. Однако оказалось, что [Са ]i, инициируемый с . норадреналином и пептидами в преадипоцитах и зрелых клетках бурого жира отличается по ряду параметров (кинетика, амплитуда и т.д.). Более того, создавалось впечатление, что Са2+-сигналы, инициируемые в преадипоцитах разными агонистами, обладают разными физиологическими функциями в этих клетках и связаны, по-видимому, со стимуляцией противоположно направленных процессов [Bronnikov et al., 1997]. Поэтому мы считаем весьма важным на первом этапе установить, причины существенных отличий Са2+-ответов на норадреналин в преадипоцитах и зрелых клетках бурого жира. Это позволит в последующем использовать полученные знания для контролируемого управления за развитием клеток и ткани.

К важным свойствам бурой жировой ткани относится её способность наращивать свою массу в случае хронического холодового стресса. Запуск этого процесса, также как и термогенеза, осуществляется в основном норадреналином. Бурая жировая ткань представляет собой хорошую модель для исследования механизмов гормонального контроля за развитием ткани и клеток. Цель и основные задачи исследования. Цель настоящей работы: установить роль аг и p-адренорецепторов и исследовать особенности функционирования фосфоинозитидного и аденилатциклазного путей в формировании уникального Са2+ -ответа, инициируемого норадреналином в бурых преадипоцитах.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Установить тип адренорецепторов, участвующих в формировании [Ca2+]i на норадреналин в свежевыделенных бурых преадипоцитах мыши. Оценить вклад ai- и )3-адренорецепторов в формировании [Ca2+]i в свежевыделенных бурых преадипоцитах мыши.

2. Определить ключевые молекулы сигнального пути, отвечающего за проведение сигнала от момента связывания лиганда с рецептором до повышения уровня ионов Са2+ в цитоплазме клеток.

Продемонстрировать влияние вторичного мессенджера сАМР на Са2+-ответ бурых преадипоцитов л I

3. Изучить особенности регуляции [Са в бурых преадипоцитах (участие каналов, внутриклеточных пулов).

4. Сравнить действие модуляторов Са2+-ответа в бурых преадипоцитах и зрелых бурых адипоцитах.

Научная новизна работы. Показано, что медленный Са2+ -ответ на норадреналин в бурых преадипоцитах инициируется преимущественно через Р-адренорецепторы и сАМР/протеинкиназа А-зависимый путь, тогда как ai-адренорецепторы играют второстепенную роль. Активация отдельных участков аденилатциклазного пути, непосредственная активация аденилатциклазы форсколином или инкубация клеток с проникающим аналогом сАМР ВгсАМР приводит к более существенному росту [Са2+]ь чем действие на преадипоциты норадреналина. Показано, что участники сАМР-зависимого пути, активируемого через Р-адренорецепторы (аденилащиклаза, фосфодиэстераза и протеинкиназа А), способны инициировать и л I модулировать Са -ответы в бурых преадипоцитах. С помощью ингибиторного анализа клеточных ответов показаны присутствие в преадипоцитах незначительных внутриклеточных кальциевых пулов и низкая проводимость плазматической мембраны для ионов Са2+. I Л L

Блокатор Са -каналов L-типа нифедипин и Са -ионофор иономицин у ■ увеличивали уровень [Са ]i в преадипоцитах.

Научно-практическая ценность. Знание механизмов может иметь важное значение для предотвращения и лечения ожирения и сопутствующих болезней, в частности диабета. Восстановление бурой жировой ткани у людей с помощью фармакологических средств позволит контролируемо «сжигать» белый жир и заметно понизить уровень жирных кислот в крови. Это в свою очередь позволит уменьшить возможность развития сахарного диабета второго типа.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Абжалелов, Бахытбек Байдосович

выводы

1. Показано, что скорость Са2+-ответов на норадреналин в преадипоцитах * бурого жира на 2 порядка меньше, чем в дифференцированных клетках.

2. Обнаружено, что медленный Са2+ -сигнал в бурых преадипоцитах реализуется преимущественно через (3-адренорецепторы, тогда как ai-адренорецепторы играют второстепенную роль. л «

3. Показано, что индуцирование Са -ответов клетки через {3-адренорецепторы происходит через сАМР/протеинкиназа А-сигнальный путь: а) неспецифический ингибитор фосфодиэстераз сАМР IBMX и специфические ингибиторы фосфодиэстераз сАМР типов 3 и 4 вызывают увеличение Са2+-ответов в преадипоцитах в ответ на норадреналин; в) ингибитор серин-треонин-специфических протеинфосфатаз окадаиковая щ кислота увеличивает Са2+-ответ преадипоцитов, вызванный норадреналином.

Л L

4. Показано, что Са -сигнал, вызванный опустошением эндоплазматического ретикулума под действием тапсигаргина или модифицированным открытым состоянием Са2+-каналов под действием тимеросала, на 1-2 порядка ниже по амплитуде в преадипоцитах по сравнению со зрелыми адипоцитами.

5. Показано, что блокатор Са2+-каналов L-типа нифедипин проявляет свойства Са2+-агониста в бурых преадипоцитах.

6. Показано, что преадипоциты бурого жира относятся к иономицин-резистентным клеткам.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучение механизмов Са2+ -зависимой секреции и пролиферации, что практически не исследовано в преадипоцитах бурого жира, является весьма важной задачей. И решающим звеном в решении этой задачи является исследование кинетики и механизмов формирования Са2+-сигнала.

Л I

В данной работе исследованы особенности формирования Са -сигнала в преадипоцитах бурой жировой ткани при действии норадреналина. Показано, что главный триггер термогенеза нейротрансмиттер норадреналин, л , вызывает медленные Са -ответы с 5-минутным лаг-периодом в л I преадипоцитах бурого жира. Увеличение [Са ]j в ответ на норадреналин в преадипоцитах бурого жира происходит медленнее более чем на 2 порядка по сравнению с дифференцированными клетками. Такой характер Са2+ответов обусловлен несколькими причинами: низким содержанием Са2+ во внутриклеточных структурах, малым количеством Са2+-каналов плазматической мембраны и, вероятно, высокой активностью Са2+-АТРазы плазматической мембраны. Такие параметры как степень развитости эндоплазматического ретикулума, проводимость Са2+-каналов плазматической мембраны и/или их количество коррелируют с

2+ чувствительностью клеток к Са -ионофорам. Показано, что при повышении концентрации иономицина в диапазоне концентраций (от 310"9 М до 10"6 М) происходит уменьшение индуцированного входа Са2+. Снижение [Ca2+]i может быть обусловлено активацией фосфолипазы Аг и производством арахидоновой кислоты - природного ингибитора Са2+-каналов плазматической мембраны невозбудимых клеток. В работе сделано заключение, что преадипоциты бурого жира относятся к иономицин-резистентным клеткам.

При исследовании влияния агонистов ари Р-адренорецепторов на л ■ ^ I

Са ]i обнаружено, что Са -сигнал в бурых преадипоцитах в отличие от зрелых адипоцитов реализуется преимущественно через Р-адренорецепторы, тогда как агадренорецепторы играют второстепенную роль.

Л 1

Главенствующая роль P-адренорецепторов в формировании Са -ответа в бурых преадипоцитах подтверждена действием антагонистов аш- и Р-адренорецепторов.

Показано, что уникальный Са2+-ответ под действием норадреналина в бурых преадипоцитах формируется за счет активации Р-адренорецепторов, аденилатциклазы/ сАМР/протеинкиназа А. Воздействия, приводящие к

Л I увеличению сАМР в преадипоцитах, вызывали повышение [Са ]{. Активаторы аденилатциклазы повышали уровень [Са ]i в преадипоцитах. Ингибиторы фосфодиэстераз сАМР (неспецифический ингибитор фосфодиэстераз сАМР IBMX и специфических ингибиторов фосфодиэстераз сАМР тгпов 3 и 4) вызывали увеличение Са -ответов в преадипоцитах в ответ на норадреналин.

Показано, что

Са2+

-ответы на норадреналин и активатор аденилатциклазы форсколин опосредованы процессами сАМР-зависимого фосфорилирования: специфический ингибитор протеинкиназы А подавлял Са

-ответы на форсколин, тогда как ингибитор серин-треонин-специфигческих протеинфосфатаз окадаиковая кислота увеличивал Са2+-ответ преадипоцитов на норадреналин.

Л I

Следует отметить, что система

Са

-сигнализации в бурых преадипоцитах устроена сложным образом, и, поскольку в них отсутствует мощный депо-зависимый вход кальция, роль минорных путей в регуляции клетки может быть весьма важной, несмотря на низкие скорости Са -ответов на гормоны.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Абжалелов, Бахытбек Байдосович, Пущино

1. Авдонин П.В., Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. // М.: Наука, 1994. 288 с.

2. Биленко М.В. (1989) Ишемические и реперфузионные поврежденияорганов, Медицина, Москва.

3. Гуковская А.С., Котелевская С.М., Трепакова Е.С., Зинченко В.П. ВлияниеI

4. SH-реагента тимеросала на Са- гомеостаз в тимоцитах.// Биологические мембраны. 1992. Том. 9. №. 2. стр. 158-165.

5. Гуковская А.С., Ариас У .П., Зинченко В. П. //Биол. мембраны. 1990. Том. 7. №. 1.С. 31-35.

6. Дедкова Е.Н., Сизова А.А., Зинченко В.П. Механизмы активирующего действия Са2+-ионофоров на интактные клетки. Ионофор-резистентные клетки. // Биологические мембраны. 1999. Т. 16. №. 3. Стр. 292-301.

7. Долгачева Л.П., Галитовская Е.Н., Бронников Г.Е., Зинченко В.П. «I Редуцирование Са2+-транспортирующих систем в молодых клетках бурогожира мыши. Биологические мембраны. 1999. Т. 16. №. 4. Стр. 410-415.

8. Долгачева Л.П., Абжалелов Б.Б., Баумуратов А.С., Зинченко В.П., Бронников Г.Е. Аденилатциклазный путь участвует в регуляции внутриклеточного уровня

9. Са в преадипоцитах бурого жира. Цитология. 2002. Том 44, №1, стр. 56-60.

10. Левицкий Д.О. Кальций и биологические мембраны: Учебн. пособие. М.: Высш. шк. 1990. -124с. (Биохимия мембран / Под ред. А.А. Болдырева; кн. 7).

11. Методы культивирования клеток: Сборник научн. Трудов. Л.: Наука, 1988. с. 313.

12. Скулачев В.П. (1962) Соотношение окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи, Наука, Моска.

13. Скулачев В.П. (1989) Энергетика биологических мембран, Наука, Моска.

14. Ткачук В.А. Молекулярные механизмы нейроэндокринной регуляции. // Соросовский образовательный журнал. 1998. №. 6. стр. 16-20.

15. Холмухамедов Э.Л., Зинченко В.П., Евтодиенко Ю.В. Автоколебания потоков ионов и редокс-состояния дыхательной цепи в митохондриях. // Биофизика, 1980.-т. XXV. с. 124-128.

16. Abernethy D.R., Soldatov N.M. Structure-functional diversity of human L-typeл I

17. Ca channel: perspectives for new pharmacological targets. // J. Pharm. Exper. Therap. 2002. V. 300. P. 724-728.

18. Abramson J.J., Zable A.C., Favero T.G., Salama G. // J. Biol. Chem. 1999. V. 270. P. 29644-29647.

19. Ahlqvist R.P. Study of adrenotropic receptors. //Am. J. Physiol. 1948. V. 53. P. 4 586-599.

20. Albert P.R., Tashjian A.H.Jr. Dual actions of phorbol esters on cytosolic freeis i 4

21. Ca concentrations and reconstitution with ionomycin of acute thyrotropin-releasing hormone responses. // J. Biol. Chem. 1985. V. 260. P. 8746.

22. Aldridge W.N., Street B.W. Mitochondria from brown adipose tissue.// Biochem J. 1968. V. 107. P. 315-7.

23. Alexander G., Bennett J.W., Gemmell R.T. Brown adipose tissue in the newborn calf. // J. Physiol. 1975. V. 244. P. 223-234.

24. Alekseev A.E., Markevich N.I., Korystova A.F., Terzic A., Kokoz Yu.M. Comparative analysis of the kinetic characteristics of L-type calcium channels in cardiac cells of hibernators. // Biophys. J. 1996. V. 70. P. 786-797.

25. Altschuld R.A., Ganote C.E., Nayler W.G., Piper H.M. What constitutes thecalcium paradox? // J. Mol. Cell Cardiol. 1991. V. 23. №. 6. P. 765-767.

26. Arch J.R.S., Ainsworth A.T., Cawthorne M.A., Piercy V., Sennitt M.V., Thody V.E., Wilson C., Wilson S. Atypical beta-adrenoceptor on brown adipocytes as target for anti-obesity drugs. // Nature. 1984. V. 309. P. 163-165.

27. Arch,J.R.S. The brown adipocyte beta-adrenoceptor. // Proc. Nutr. Soc. 1989. V. 48. P. 215-223.

28. Arner P. Insulin resistance in type 2 diabetes: role of fatty acids. // Diabetes 4 Metab Res Rev. 2002. V. 18. P. 5-9.

29. Asano A, Kimura K, Saito M. Cold-induced mRNA expression of angiogenic factors in rat brown adipose tissue. // J. Vet. Med. Sci. 1999. V. 61(4). P. 403-9.

30. Assimacopoulos-Jeannet F., Giacobino J.P., Seydonx J., Girardier L., Jeanrenaud B. Alterations of brown adipose tissue in genetically obese (ob/ob) mice. // Endocrinology. 1982. V. 110. P. 439-443.

31. Baylor S.M., Hollingworth S. Measurement and interpretation of cytoplasmic Ca2+ signals from calcium-indicator dyes. // Physiol. Sci. 2000. V. 15. P. 19-26.

32. Berman M.I., Jerdack G., Thomas Jr.G.G., Nayfeh S.N. ai-Adrenergic regulation of TSH-stimulated cyclic AMP accumulation in rat thyroid cells. // Arch. Biochem. Biophys. 1987. V. 253. P. 249-256.

33. Berridge M.J., Irvine R.F. Inositol triphosphate, a novel second messenger incellular signal transduction. // Nature. 1984. V. 312. P. 315-321.

34. Berridge M.J. Inositol triphosphate and diacylglycerol: Two interacting second messengers. //Ann. Rev. Biochem. 1987. V. 56. P. 159-193.

35. Berridge M.J., Taylor C.W. Inositol triphosphate and calcium signaling. Cold Spring Harbor Symposia on Quantative Biology. 1988. V. LIII. P. 927-933.

36. Berridge M.J. Inositol triphosphate and calcium signalling. // Nature. 1993. V. 361. P. 315-325.

37. Berridge M.J., Bootman M.D, Lipp P. Calcium- a life and death signal. // Nature. 1998. V. 395. P. 645-648.

38. Bienengraeber M., Echtay K.S., Klingenberg M. H+ transport by uncoupling protein (UCP-1) is dependent on a histidine pair, absent in UCP-2 and UCP-3. //

39. Biochemistry. 1998. V. 37. P. 3-8.

40. Boime /., Smith E.E., Hunter F.EJr. The role of fatty acids in mitochondrial changes during liver ischemia. //Arch Biochem Biophys. 1970. V. 139. P. 425-43.

41. Ca(2+) signals. //J. Cell. Sci. 2001. V. 114. P. 2213-2222.

42. Borle A.B., Snowdowne K.W. Methods for the Measurements of Intracellular Ionized Calcium in Mammalian Cells: Comparison of Four Classes of Ca2+ Indicator. // Calcium and cell function. 1987. V. 7. P. 159-200.

43. Bouillaud F., Ricquier D., Могу G., Thibault J. Increased level of mRNA for the uncoupling protein in brown adipose tissue of rats during thermogenesis induced by cold exposure or norepinephrine infusion. // J. Biol. Chem. 1984. V. 259. P. 11583-86.

44. Brini M., Bano D., Manni S., Rizzuto R., Carafoli E. Effects of PMC A and1. Л I

45. SERCA pump overexpression on the kinetics of cell Ca signaling. // EMBO. J. * 2000. V. 19. P. 4926-4935.

46. Bronnikov G.E., Zhang S.J., Cannon В., Nedergaard J. A dual component analysis explains the distinctive kinetics of cAMP accumulation in brown adipocytes. //J Biol Chem. 1999b. V. 274(53). P. 37770-80.

47. Bronnikov G., Houstek J., Nedergaard J. Adrenergic, с AMP- mediated stimulation of proliferation of brown fat cells in primary culture. Mediation via 1 but not via p3- adrenoceptors. // J Biol. Chem. 1992. V.267. P. 2006-2013.

48. Bronnikov G., Dolgacheva L., Zhang S.J., Galitovskaya E., Kramarova L., Zinchenko V. The effect of neuropeptides kyotorphin and neokyotorphin on proliferation of cultured brown preadipocytes. // FEBS Lett. 1997. V. 407. P. 7377.

49. E.N., Skulachev V.P. Thermoregulatory, carboxyatractylate-sensitive uncoupling in heart and skeletal muscle mitochondria of the ground squirrel correlates with the level of free fatty acids. // FEBS Lett. 1992. V. 305. P. 15-7.

50. Bukowiecki L., Collet A.J., FolleaN., Guay G., Jahjah L. Brown adipose tissue hyperplasia: a fundamental mechanism of adaptation to cold and hyperphagia. // Am. J. Physiol. 1982. V. 242(6). P. 353-9.

51. Bulychev A., Kramar R., Drahota Z., Lindberg O. Role of a specific endogenous fatty acid fraction in the coupling-uncoupling mechanism of oxidative phosphorylation of brown adipose tissue. //Exp. Cell Res. 1972. V. 72. P. 169-87.

52. Buxton I.L., Brunton L.L. Action of the cardiac ai-adrenergic receptor. // J.

53. Biol. Chem. 1985. V. 26. P. 6733-6737.

54. Byron K.L., Babnigg G., VilleredM.L. Bradykinin-induced Ca2+-entry, release and refilling of intracellular Ca2+ stores. // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 108-118.

55. Cannon В., Jacobsson A., Rehnmark S., Nedergaard J. Signal transduction in brown adipose tissue recruitment: noradrenaline and beyond. // Int. J. Obesity. 1996. V. 20. P. 36-42.

56. Carafoli E. Calcium pump of the plasma membrane. // Physiol. Rev. 1991. V. 71. P. 129-153.I

57. Carafoli E. The Ca pump of the plasma membrane. // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 2115-2118.

58. Carafoli E. Intracellular calcium homeostasis. // Ann. Rev. Biochem. 1987. V.56. P. 395-433.2+

59. Caroni P., Carafoli E. The Ca -pumping ATPase of heart sarcolemma.

60. Characterization, calmodulin dependence, and partial purification. // J. Biol. Chem. 1981. V. 256. P. 3263-3270.

61. Rev. Cell Dev. Biol. 2000. V. 16. P. 521-555.

62. Champigny O., Ricquier D. Evidence from in vitro differentiating cells that adrenoceptor agonists can increase uncoupling protein mRNA level in adipocytes of adult humans: an RT-PCR study. //J. Lipid Res. 1996. V. 37. P. 1907-14.

63. Chapman C.J., Puri A.K., Taylor R. W., Pfeiffer D.R. General features in the stoichiometry and stability of ionophore A23187-cation complexes in homogeneous solution. //Arch. Biochem. Biophys. 1990. V. 281. P. 44-57.

64. Chaudhry A., Granneman J.G. Developmental changes in adenylyl cyclase and GTP binding proteins in brown fat. I I Am. J. Physiol. 1991. V. 261. P. 403-11.

65. Chaudhry A., Muffler L.A., Yao R., Granneman J.G. Perinatal expression of • adenylyl cyclase subtypes in rat brown adipose tissue. // Am. J. Physiol. 1996. V.270. P. 755-760.

66. Chen W.C., Chen C.C. ATP-induced arachidonic acid release in cultured astrocytes is mediated by Gi protein coupled P2Y1 and P2Y2 receptors. // Glia. 1998. V. 22. P. 360-370.

67. Chen L., Harada N., Yamashita T. Thimerosal-induced Ca mobilization in isolated guinea pig cochlear outer hair cells. // Acta Otolaryngol Suppl. 1998. V. 539.P.28-33.

68. Christiansen E.N., Pedersen J.I., Grav H.J. Uncoupling and recoupling of oxidative phosphorylation in brown adipose tissue mitochondria. // Nature. 1969. V. 222. P. 857-60.1. Л L

69. Connoly E., Nedergaard J. Beta-adrenergic modulation of Ca uptake by 1 isolated brown adipocytes. Possible involvement of mitochondria. // J. Biol. Chem.1988. V. 263. P. 10574-10582.

70. Cork R.J., Reinach P., Moses J., Robinson K.P. Calcium does not act as a second messenger for adrenergic and cholinergic agonists in corneal epithelial cells. // Curr. Eye. Res. 1987. V. 6. P. 1309-1318.

71. Corr P.В., Gross R.W., Sobel B.E. Amphipathic metabolites and membrane dysfunction in ischemic myocardium. // Circ Res. 1984. V. 55. P. 135-54.

72. Cottle W.H., Nash C.W., Veress A.T., Fergusson B.A. Release of noradrenaline from brown fat of cold-acclimated rats. // Life Sci. 1967. V.6. P. 2267-2271.

73. Cousin B, Bascands-Viguerie N, Kassis N, Nibbelink M, AmbidL, Casteilla L, Penicaud L. Cellular changes during cold acclimatation in adipose tissues. I I J. Cell Physiol. 1996. V. 167(2). P. 285-9.

74. Daikoku T, Shinohara Y, Shima A, Yamazaki N, Terada H. Dramatic enhancement of the specific expression of the heart-type fatty acid binding protein in rat brown adipose tissue by cold exposure. // FEBS Lett. 1997. V. 410(2-3). P. 383-6.

75. Davies E.V., Campbell A.K., Hallet M.B. Dissociation of store release from transmembrane influx of calcium in human neutrophils. I I FEBS Lett. 1992. V. 313. P. 121-125.

76. Dascal N. Analysis and functional characteristics of dihydropyridine-sensitive and -insensitive calcium channel proteins. // Biochem. Pharmacol. 1990. V. 40. P. 1171-1178.

77. Degerman E., Wijkander J., Hoist L.S., Ahmad F., Belfrage P., Manganiello V. Phosphorylation and activation of hormone-sensitive adipocyte phosphodiesterase type 3B. // Methods. 1998. V. 14(1). P. 43-53.

78. Demaurex N., Lew D.P., Krause K.-H. Cyclopiazonic acid depletesл ■intracellular Ca stores and activates an influx pathway for divalent cations in HL-60 cells. // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 2318-2324.

79. Dell' Acqua M.L., Scott J.D. Protein kinase A anchoring. // J. Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 12881-12884.

80. Deslex S, Negrel R, Vannier C, Etienne J, Ailhaud G. Differentiation of human adipocyte precursors in a chemically defined serum-free medium. // Int. J. Obes. 1986. V. 10. P. 19-27.

81. DeSouza N, Reiken S, Ondrias K, Yang YM, Matkovich S, Marks AR. Protein kinase A and two phosphatases are components of the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor macromolecular signaling complex. // J Biol Chem. 2002. V. 277(42). P. 39397-400.

82. Dolgacheva L.P., Abzhalelov B.B., Zhang S.J., Zinchenko V.P., Bronnikov G.E. Norepinephrine induces slow calcium signaling in murine brown preadipocytes through the р-adrenoceptor/cAMP/PKA pathway. // Cell. Signal. 2003. V. 15. P. 209-216.

83. Drahota Z., Honova E., Hahn P. The effect of ATP and carnitine on the endogenous respiration of mitochondria from brown adipose tissue. // Experientia. 1968. V. 24. P. 431-2.

84. Ekholm D., Hemmer В., Gao G.t Vergelli R., MartinManganiello V.C. Differential expression of cyclic nucleotide phosphodiesterase 3 and 4 activities in human T cell clones specific for myelin basic protein. // J. Immunol. 1997. V. 159. P. 1520.

85. Elks M., Manganiello V.C. A role for soluble cAMP phosphodiesterases in differentiation of 3T3-L1 adipocytes. //J. Cell. Physiol. 1985. V. 124. P. 191.

86. Entenmann G., Hauner H. Relationship between replication and differentiation in cultured human adipocyte precursor cells. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1996. V. 270. P. 1011-16.

87. Erdahl W.L., Chapman C.J., Taylor R.W., Pfeiffer D.R. Ca2+ transport properties of ionophores A23187, ionomycin, and 4-BrA23187 in well defined model system. //J. Biophys. 1994. V. 66. P. 1678-1693.

88. Fellenz M., Triandafillou J., Gwilliam С., Himms-Hagen J. Growth of interscapular brown adipose tissue in cold-acclimated hypophysectomized ratsmaintained on thyroxine and corticosterone. // Can. J. Biochem. 1982. V. 60(8). P. 838-42.

89. Fisher R.M., Eriksson P., Hoffstedt J., Hotamisligil G.S., Thome A., Ryden M.,

90. Hamsten A., Arner A. Fatty acid binding protein expression in different adipose tissue depots from lean and obese individuals. // Diabetologia. 2001. V. 44. P. 1268-1273.

91. Florez-Duquet M, Horwitz В A, McDonald RB. Cellular proliferation and UCP content in brown adipose tissue of cold-exposed aging Fischer 344 rats. // Am. J. Physiol. 1998. V. 274(1 Pt 2). P. 196-203.

92. Francis Sh.H., Corbin J.D. Structure and function of cyclic nucleotide-dependent protein kinases. //Annu. Rev. Physiol. 1994. V. 56. P. 237-272.

93. Garlid K.D., Jaburek M., Jezek P. The mechanism of proton transport mediated by mitochondrial uncoupling proteins. // FEBS Letts. 1998. V. 438. P. 10-14.

94. Garlid K.D., Orosz D.E., Modriansky M, Vassanelli S., Jezek P. On the mechanism of fatty acid-induced proton transport by mitochondrial uncoupling protein. // J Biol Chem. 1996. V. 271. P. 2615-20.

95. Garruti G., Ricquier D. Analysis of uncoupling protein and its mRNA in adipose tissue deposits of adult humans. // Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord. 1992. V. 16. P. 383-90.

96. Geloen A., Collet A.J., Bukowiecki L.J. Role of sympathetic innervation in brown adipocyte proliferation. // Am. J. Physiol. 1992. V. 263(6 Pt 2). P. 1176-81.

97. Gericke M., Droogmans G., Nilius B. Thimerosal induced changes of » intracellular calcium in human endothelial cells. // Cell Calcium. 1993. V. 14(3). P.201.7.

98. Gillon-Zyzek E., Seydoux J., Prolong W.F., Girardier L. aj- and P-adrenergic1. A Iregulation of intracellular Ca levels in single brown adipocytes. // Experientia. 1993. V. 49. P. 254-254.

99. Gilman A.G. G Proteins and dual control of adenylate cyclase. // Cell. 1984. V.36. P. 577-579.

100. GoegerD.E., Riley R.T., DornerJ.W., Cole R.J. Cyclopiazonic acid inhibitionл Iof the Ca transport ATPase in rat skeletal muscle sarcoplasmic reticulum vesicles. //Biochem. Pharmacol. 1988. V. 37. P. 978-981.

101. Granneman J.G., Zhai Y., Lahners K.N. Selective up-regulation of a\A-adrenergic receptor protein and mRNA in brown adipose tissue by neural and P-adrenergic stimulation. // Mol. Pharmacol. 1997. V. 51. P. 644-650.

102. Granneman J.G. Norepinephrine and BRL 37344 stimulate adenylate cyclase by different receptors in rat brown adipose tissue. // J Pharmacol Exp Ther. 1990. V. 254(2). P. 508-13.

103. Graur S., Morton M.E., Frick G.P., Goodman H.M. Growth hormone regulates the distribution of L-type calcium channels in rat adipocyte membranes. //Am. J. Physiol. 1998. V. 275. P. 505-14.

104. Graur S., Yamaguchi H., Goodman H.M. Growth hormone regulates cytosolic free calcium in rat fat cells by maintaining L-type calcium channels. // Am. J. Physiol. 1996. V. 270. P. 1478-1484.

105. Gray P.C., Tibbs V.C., Catterall W.A., Murphy B.J. Identification of a 15-kDa cAMP-dependent protein kinase-anchoring protein associated with skeletal muscle L-type calcium channels. //J. Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 6297-302.

106. Green H., Kehinde O. Formation of normally differentiated subcutaneous fat pads by an established preadipose cell line. // J. Cell Physiol. 1979. V. 99. P. 3741.1. Л I

107. Grynkiewicz G., Poenie M., Tsien R.Y. A New Generation of Ca Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties // J. Biol. Chem. 1985. V. 260. P.щ 3440-3450.

108. Guerini D., Zecca-Mazza A., Carafoli E. Single amino acid mutations in transmembrane domain 5 confer to the plasma membrane Ca2+ pump properties1. A Itypical of the Ca pump of endo(sarco)plasmic reticulum. // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. P. 31361-8.

109. Guillory R.J., Racker E. Oxidative phosphorylation in brown adipose mitochondria. // Biochim Biophys Acta. 1968. V. 153. P. 490-3.

110. Gukovskaya A.S., Zinchenko V.P. Mechanisms of receptor mediated generation of ionic signals in rat thymocytes and Ehrlich ascites tumour cells. // Phys. Chem. Biol. 1990. V. 10. P. 1-98.

111. Hanstein W.G. Uncoupling of oxidative phosphorylation. // Biochim Biophys Acta. 1976. V. 456. P. 129-48.

112. Hemon P., Ricquier D., Могу G. A role for thyroid hormones in the response of brown adipose tissue to chronic cold. // In Regulation of Depressed Metabolism and Thermogenesis. 1976. P. 174-195.

113. Hille B. Ionic Channels of excitable membranes. I I 2nd Edition. Sinauer Associates Inc., Sunderland, USA. 1992. P. 607.

114. Hille B. Ionic Channels of excitable membranes. // 3rd Edition. Sinauer Associates Inc., Sunderland, USA. 2001. P. 725.

115. Hittelman K.J., Lindberg O., Cannon B. Oxidative phosphorylation and compartmentation of fatty acid metabolism in brown fat mitochondria. // Eur. J. Biochem. 1969. V. 11. P. 183-92.

116. Hofmann F., BielM., Flockerzi V. Molecular basis for Ca2+ channel diversity. //Annu. Rev. Neurosci. 1994. V. 17. P. 399-418.

117. HoldaJ.R., KlishinA., SedovaM., HuserJ., Blatter L.A. Capacitative calcium entry. // News Physiol. Sci. 1998. V. 13. P. 157-163.

118. Horwitz В A. Cellular events underlying catecholamine-induced thermogenesis: cation transport in brown adipocytes. // Fed. Proc. 1979. V. 38. P. 2170-6.

119. Horwitz B.A., Eaton M. The effect of adrenergic agonists and cyclic AMP on the Na+/K+ ATPase activity of brown adipose tissue. // Eur. J. Pharmacol. 1975. V. 34. P. 241-5.

120. Hwang C.S., Lane M.D. Up-Regulation of Uncoupling Protein-3 by Fatty Acid in C2C12 Myotubes. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. V. 258. P.f 464-469.

121. Hughes A.R., Takemura H., Putney J.W.Jr Does р-adrenoceptor activation stimulate Ca2+ mobilization and inositol trisphosphate formation in parotid acinar cells? // Cell Calcium. 1989 V. 10(8). P. 519-25.

122. Jezek P., Orosz D.E., Modriansky M, Garlid K.D. Transport of anions and protons by the mitochondrial uncoupling protein and its regulation by nucleotides and fatty acids. A new look at old hypotheses. // J Biol Chem. 1994. V. 269. P. 26184-90,

123. Jezek P., Engstova H., Zackova M., Vercesi A.E., Costa A.D., Arruda P., Garlid K.D. Fatty acid cycling mechanism and mitochondrial uncoupling proteins. // Biochim Biophys Acta. 1998. V. 1365. P. 319-27.

124. Jezek P., Modriansky M., Garlid K.D. Inactive fatty acids are unable to flip-flop across the lipid bilayer. // FEBS Lett. 1997a. V. 408. P. 161-5.

125. Jezek P., Modriansky M., Garlid K.D. A structure-activity study of fatty acid interaction with mitochondrial uncoupling protein. I I FEBS Lett. 1997b. V. 408. P. 166-70.

126. Jucker B.M., Dufour S., Ren J., Cao X., Previs S.F., Underbill В., Cadman K.S., Shulman G.I Assessment of mitochondrial energy coupling in vivo by 13 Cy31 P NMR. // PNAS. 2000. V. 97. P. 6880-6884.pp

127. Ishida Y., Chused T. Heterogenety of lymphocyte calcium metabolism is caused by T-cell-specific calcium-sensitive potassium channel and sensitivity of the calcium ATPase pump to membrane potential. // J. Exp. Med. 1988. V. 168. P. 839-852.

128. Kamp T.J., Hell J.W. Regulation of cardiac L-type calcium channels by protein kinase A and protein kinase C. // Circ. Res. 2000. V. 87. P. 1095-1105.1. Л i

129. KaoJ.P.Y. Practical aspects of measuring Ca .i with fluorescent indicators.

130. In: Methods in cell biology. 1994. V. 40. P. 155-181.

131. Kaumann A.J. Is there a third heart beta-adrenoceptor. // TIPS. 1989. V. 10. P. 316-316.

132. Kennedy D.R., Hammond R.P., Hamolsy M.W. Thyroid cold acclimation influences on norepinephrine metabolism in brown fat. // Am. J. Physiol. 1977. V. 232. P. 565-569.

133. Kincaid R.L., Manganiello V.C. Assay of cyclic nucleotide phosphodiesterase using radiolabeled and fluorescent substrate. // Methods Enzymol. 1988. V. 159. P. 457-471.

134. Kirkland J.L., Hollenberg C.H., Gillon W.S. Age, anatomic site, and the replication and differentiation of adipocyte precursors. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1990. V. 258. P. 206-10.

135. Klingenspor M., Ebbinghaus C., Hulshorst G., Stohr S., Spiegelhalter F., Haas K, Heldmaier G. Multiple regulatory steps are involved in the control of lipoprotein lipase activity in brown adipose tissue. // J. Lipid Res. 1996. V. 37(8). P. 1685-95.

136. Klingenberg E.M. Membrane protein oligomeric structure and transport function. // Nature. 1981. V. 290. P. 449-54.

137. Klingenberg E.M., Hackenberg H. Molecular weight and hydrodynamicparameters of the adenosine 5'-diphosphate—adenosine 5'-triphosphate carrier in Triton X-100. // Biochemistry. 1980. V. 19. P. 548-55.

138. Klingenberg M., Appel M. The uncoupling protein dimer can form a disulfide cross-link between the mobile C-terminal SH groups. // Eur J Biochem. 1989. V. 180(1). P. 123-31.

139. Klingenberg M., Huang S.G. Structure and function of the uncoupling protein from brown adipose tissue. //Biochim Biophys Acta. 1999. V. 1415(2). P. 271-96.

140. Koivisto A., Siemen D. and Nedergaard J. Reversible blockade of the calcium-activated nonselective cation channel in brown fat cells by the sulfhydryl reagents mercury and thimerosal. // Pflugers-Arch. 1993. V. 425. P. 549-551.

141. Kokoz Yu.M., Grischenko A.S., Korystova A.F., Lankina D.A., Markevich N.I.

142. Effect of isoproterenol on the L-type Ca^+ current in cardiac cells from rats and hibernating ground squirrels. //Biosci. Reports 1999. V. 19. P. 17-25. ""

143. Kopecky J., Baudysova M., Zannoti F., Janikova D., Pavelka S., Houstek J. Synthesis of mitochondrial uncoupling protein in brown adipocytes differentiated in cell culture. //J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 22204-22209.

144. Kozak U.C., Kozak L.P. Norepinephrine-dependent selection of brown adipocyte cell lines. //Endocrinology. 1994. V. 134. P. 906-13.

145. KubotaM., Kataoka A., Okuda A., Bessho R., Lin Y.W., Wakazono Y., Usami L, Akiama Y, Furusho K. Selection and partial characterization of calcium ionophore (A23187) resistant cells. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. V. 213. P. 541-549.

146. Kurahashi M., Kuroshima A. Characteristics of ^-adrenergic receptors in brown adipocytes of temperature-acclimated rats. // Biochem Res. 1981. V. 2. P. 126-133.

147. Lafontan M., Berlan M. Fat cell adrenergic receptors and the control of white and brown fat cell function. //J. Lipid Res. 1993. V. 34. P. 1057-1091.

148. Lands A.M., Arnold A., McAuliff J.P., Luduena F.P. and Brown T.G. Differentiation of receptor systems activated by sympathomimetic amines. // Nature. 1967. V. 214. P. 597-598.

149. Longer S.Z. Presynaptic regulation of catecholamine release. I I Biochem Pharmacol. 1974. V. 23. P. 1793-1800.

150. Leaver E.V., Pappone P.A. p-Adrenergic potentiation of endoplasmic reticulum Ca2+ release in brown fat cells. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2002. V. 282. P. 1016-1024.

151. Lee S.C., Nuccitelli R., Pappone P.A. Adrenergically activated Ca2+ increases in brown fat cells: effects of Ca , К , and К channel block. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1993. V. 264. P. 217-228.

152. Levitzki A. p-Adrenergic receptors and their mode of coupling to adenylate cyclase. //Physiol. Rev. 1986. V. 66. P. 19-854.

153. Lin C.S., Hackenberg H., Klingenberg E.M. The uncoupling protein from brown adipose tissue mitochondria is a dimer. A hydrodynamic study. // FEBS Lett. 1980. V. 113(2). P. 304-6.

154. Lin C.S. Klingenberg M. Characteristics of the isolated purine nucleotide binding protein from brown fat mitochondria. // Biochemistry. 1982. V. 21(12). P. 2950-6.

155. Lindberg O., de Pierre J., Rylander E., Afzelius B.A. Studies of the mitochondrial energy-transfer system of brown adipose tissue. // J Cell Biol. 1967. V. 34(1). P. 293-310.

156. Lindquist J.M., Rehnmark S. Ambient temperature regulation of apoptosis in brown adipose tissue. Erkl/2 promotes norepinephrine-dependent cell survival. // J Biol Chem. 1998. V. 273(46). P. 30147-56.

157. Liu Y., Ruoho A.E., Rao V.D., Hurley J.H. Catalytic mechanism of the adenylyl and guanylyl cyclases: modeling and mutation analysis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 13414- 13419.

158. Lowell B.B., Flier J.S. Brown adipose tissue, beta3-adrenergic receptors, and obesity. //Annu. Rev. Med. 1997. V. 48. P. 307-16.

159. Mahaut-Smith M.P., Sage St.O., Rink T.J. Receptor-activated single channels in intact human platelets. // J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 10479-10483.

160. Means C.E., Feeny R.E. Chemical Modifications of Proteins. // San Francisco: Holden Day. 1971. P. 254.

161. Meldolesi J., Pozzan T. Pathways of Ca influx at the plasma membrane: voltage-, receptor-, and second messenger-operated channels. // Exp. Cell Res. 1987. V. 171. P. 271-283.

162. Mezna M., Michelangeli F. Effects of thimerosal on the transient kinetics of inositol 1,4,5-trisphosphate-induced Ca release from cerebellar microsomes. // Biochem. J. 1997. V. 325. P. 177-182.

163. Michell R. Inositol phospholipids and cell surface receptor function. // Biochim. Biophys. Acta. 1975. V. 415. P. 81-147.

164. Missiaen L., Taylor C.W., Berridge M.J. Spontaneous calcium release from inositol trisphosphate-sensitive calcium stores. //Nature. 1991. V. 352. P. 241-244.

165. Moore R.E., Underwood M.C. The thermogenic effects of noradrenaline in new-born and infant kittens and other small mammals. A possible hormonal mechanism in the control of heat production. // J. Physiol. 1963. V.168. P. 290317.1. Л I

166. Morgan A.J., Jacob R. Ionomycin enhances Ca -influx by stimulating storeregulated cation entry and not by a direct action at the plasma membrane. // Biochem. J. 1994. V. 300. P. 665-672.

167. Mori Y., Mikala G., Varadi G., Kobayashi Т., Koch Sh., Wakamori M.,I

168. Schwartz A. Molecular pharmacology of voltage-dependent calcium channels. // Jap. J. Pharmacol. 1996. V. 72. P. 83-109.

169. Mozhayeva G.N., Naumov A.P., Kuryshev Y.A. Variety of Ca2+-permeable channels in human carcinoma A431 cells. // J. Membr. Biol. 1991. V. 124. P. 113126.

170. Must A., Spadano J., Coakley E.H., Field A.E., Colditz G., Dietz W.H. The disease burden associated with overweight and obesity. // JAMA. 1999. V. 282. P. 1523-29.

171. Nagy P., Jenei A., Damjanovich S., Jovin T.M., Szolosi J. Complexity of signal transduction mediated by ErbB2: clues to the potential of receptor-targeted cancer therapy. // Pathol Oncol Res. 1999. V. 5(4). P. 255-71.

172. Naumov A.P., Kuryshev Y.A., Kaznacheyeva E.V., Mozhayeva G.N. ATPactivated Ca2+-permeable channels in rat peritoneal macrophages. // FEBS Lett. 1992. V. 313. P. 285-287.

173. Nechad M. Development of Brown Fat Cells in Minolayer Culture. Ultrastructural characterization of precursors, differentiating adipocytes and their motochondria//Exp. Cell. Res. 1983a. V. 149. P. 119-127.

174. NechadM. Structure and development of brown adipose tissue. In Brown Adipose Tissue (Trayhurn P. and Nicholls DG., eds) Edvard Arnold Ltd., London. 1986. P.l-30.

175. NechadM., Kuusela P., Cameheim C., Bjorntorp P., Nedergaard J., Cannon B. Development of brown fat cells in monolayer culture. I. Morphological and biochemical distinction from white fat cells in culture. // Exp. Cell. Res. 1983b. V. 149. P. 105-118.

176. Nedergaard J., Herron D., Jacobsson A., Rehnmark S., Cannon B. Norepinephrine as a morphogen?: its unique interaction with brown adipose tissue. // Int. J. Dev. Biol. 1995. V. 39. P. 27-837.

177. Nedergaard J., Golozoubova V., Matthias A., AsadiAJacobsson A., Cannon B. UCP1: the only protein able to mediate adaptive non-shivering thermogenesis and metabolic inefficiency. // Biochim. Biophys. Acta. 2001. V. 1504. P. 82-106.

178. Neylon C.B., Irvine R.F. Thrombin attenuates the stimulatory effect of histamine on Ca2+ entry in confluent human umbilicial vein endothelial cell cultures. // J. Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 4251-4256.

179. Neyses L., Reinlib L., Carafoli E. Phosphorylation of the Ca2+-pumping ATPase of heart sarcolemma and erythrocyte plasma membrane by the cAMP-dependent protein kinase. //J. Biol. Chem. 1985. V. 260. P. 10283-10287.

180. Nicholls D.G., Locke R.M. Thermogenic mechanisms in brown fat. // Physiol Rev. 1984. V. 64(1). P.l-64.

181. Nicholls D.G. The effective proton conductance of the inner membrane of mitochondria from brown adipose tissue. Dependency on proton electrochemical potential gradient. // Eur J Biochem. 1977. V. 77(2). P. 349-56.

182. Nicholls D.G., Lindberg O. Brown-adipose-tissue mitochondria. Theinfluence of albumin and nucleotides on passive ion permeabilities. // Eur J Biochem. 1973. V. 37(3). P. 523-30.

183. Nishizuka Y. The role of protein kinase С in cell surface signal transduction and tumor promotion. //Nature. 1984. V. 308. P. 693-698.

184. Niggli V., Adunyah E.S., Carafoli E. Acidic phospholipids, unsaturated fatty acids and limited proteolysis mimic the effect of calmodulin on the purified erythrocyte Ca2+-ATPase. //J. Biol. Chem. 1981. V. 256. P. 8588-8592.

185. Nisoli E., Tonello C., Benarese M, Liberini P., Carruba M.O. Expression of nerve growth factor in brown adipose tissue: implications for thermogenesis and obesity. //Endocrinology. 1996. V. 137(2). P. 495-503.

186. Nordfors L., Hoffstedt J., Nyberg В., Thome A., Amer P., Schalling M., Lonnqvist F. Reduced gene expression of UCP2 but not UCP3 in skeletal muscle of human obese subjects. // Diabetologia. 1998. V. 41. P. 935-939.

187. Omatsu-Kanbe M., Kitasato H. Adrenergic and purinergic receptors-mediated calcium responses in brown adipocytes. // Jpn J Physiol. 1997. V. 47. P. 47-8.

188. Parekh A.B., Penner R. Store depletion and calcium influx. // Physiol. Rev. 1997. V. 77. P. 901-930.

189. Park I.R., Himms-Hagen J. Neural influences on trophic changes in brown 9 adipose tissue during cold acclimation. // Am. J. Physiol. 1988. V.255. P.874-81.

190. Pedersen J. I., Christiansen E.N., Grav H.J. Respiration-linked phosphorylation in mitochondria of guinea-pig brown fat. // Biochem Biophys Res Commun. 1968. V. 32(3). P. 492-500.

191. Pershadsingh M.P., Mcdonald J.M. Direct addition of insulin inhibits a high affinity Ca2+-ATPase in isolated adipocyte plasma membranes. // Nature. 1979. V. 281. P. 495-7.

192. Pershadsingh H.A., Lee L-Y., Snowdowne K.W. Evidence for a sodium/calcium exchanger and voltage-dependent calcium channels in adipocytes. // FEBS Lett. 1989. V. 244. P. 89-92.

193. Petersen C.C.H., Berridge M.J. G-protein regulation of capacitative calcium щ entry may be mediated by protein kinases A and С in Xenopus oocytes. //

194. Biochem. J. 1995. V. 432. P. 286-292.

195. Poison J.В., Strada S.J. Cyclic nucleotide phosphodiesterases and vascular smooth muscle. //Annu Rev Pharmacol Toxicol. 1996. V. 36. P. 403-27.

196. Pressman B.C. Biological applications of ionophores. // Ann. Rev. Biochem. 1976. V. 45. P. 501-530.

197. Pressman B.C., Fahim M. Pharmacology and toxicology of the monovalent carboxylic ionophores. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1982. V. 22. P. 465-490.

198. Prins J.В., ORahilly S. Regulation of adipose cell number in man. I I Clin. Sci. 1997. V. 92. P. 3-11.

199. Puigserver P., Wu Z., Park C.W., Graves R., Wright M., Spiegelman B.M. A cold-inducible coactivator of nuclear receptors linked to adaptive thermogenesis. //

200. Cell. 1998. V. 92. P. 829-39.

201. Purves D., Augustine G.J., Fitzpatrick D., Katz L.C., LaMantia A.S., McNamara J.O. Neuroscience, 1997 pp. 121-144. Sinauer Assoc. Inc. Publ., Sunderland, Mass.

202. Putney J.W. A model for receptor-regulated calcium entry. // Cell Calcium. 1986. V. 7. P. 1-13.

203. Putney J.W. Capacitative calcium entry revisited. I I Cell Calcium. 1990. V. 11. P. 611-624. «к

204. Putney J. W. Capacitative calcium entry. // Landes Biomedical Publishing. Austin. 1997. TX. P. 210.

205. Randall A.D. The molecular basis of voltage-gated Ca2+ channel diversity: is it time for T? // J. Membrane Biol. 1998. V. 161. P. 207-213.

206. Rasmussen H., Goodman D. //Physiol. Rev. 1977. V. 57. P. 421-509.

207. Rasmussen H., Isales C., Ganesan S., Colle R., Zawalich W. I I Found. Symp. 1992. V. 164. P. 98-108.

208. Reed P. W., Lardy H.A. A23187: a divalent cation ionophore. // J. Biol. Chem. 1972. V. 247. P. 6970-6977.

209. Rehnmark S., Nechad M., Herron D., Cannon В., Nedergaard J. a- and p-Adrenergic Induction of the Expression of the Uncoupling Protein Thermogenin in Brown Adipocytes Differentiated in Culture. // J. Biol. Chem. 1990. V. 265 (27). P. 16464-16471.

210. Rial E., Poustie A., Nicholls D.G. Brown-adipose-tissue mitochondria: the regulation of the 32000-Mr uncoupling protein by fatty acids and purine nucleotides.//Eur J Biochem. 1983. V. 137(1-2). P. 197-203.

211. RicquierD., Bouillaud F. The uncoupling protein homologues: UCP1, UCP2, UCP3, StUCP and AtUCP. //Biochem. J. 2000a. V. 345. P. 161-179.

212. Rippe C., Berger K., Boiers C., Ricquier D., Erlanson-Albertsson C. Effect of high-fat diet, surrounding temperature, and enterostatin on uncoupling protein gene expression. // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2000. V.279. P. 293-300.

213. RodbellM. Metabolism of isolated fat cells. // J. Biol. Chem. 1964. V. 239. P. 375-380.

214. Rooney T.A., Thomas A.P. Organization of intracellular calcium signals generated by inositol lipid-dependent hormones. // Pharmacol Ther. 1991. V. 49. P. 223-37.

215. Rothwell N.J., Stock M.J. A role for brown adipose tissue in diet-inducedthermogenesis. // Obes. Res. 1997. V. 5. P. 650-656.

216. Rovati G.E., Nicosia S. Lower efficacy: interaction with an inhibitory receptor or partial agonism? // Trends Pharmacol. Sci. 1994. V. 15. P. 140-144.

217. Sako H., Green S.A., Kranias E.G., Yatani A. Modulation of cardiac Ca2+ channels by isoproterenol studied in transgenic mice with altered SR Ca2+ content. //Am. J. Physiol. 1997. 273. P. 1666-1672.

218. Sako H., Sperelakis N., Yatani A. Ca2+ entry through cardiac L-type Ca2+ channels modulates beta-adrenergic stimulation in mouse ventricular myocytes. // Eur. J. Physiol. 1998. V. 435. P. 749-752.

219. Samec S., Seydoux J., Dulloo A.G. Skeletal muscle UCP3and UCP2gene expression in response to inhibition of free fatty acid flux through mitochondrial P-oxidation. // Pflugers Arch Eur J Physiol. 1999. V. 438. P. 452-457.

220. Schroers A., Burkovski A., Wohlrab H., Kramer R. The phosphate carrier from yeast mitochondria. Dimerization is a prerequisite for function. // J Biol Chem. 1998. V. 273(23). P. 14269-76.

221. Schatzmann H.J. ATP-Dependent Ca2+ extrusion from human red cells. // Experientia. 1966. V. 22. P. 364-365.

222. Seydoux J., Giacobino J.P., Girardier L. Impaired metabolic response to nerve stimulation in brown adipose tissue of hypothyroid rats. // Mol. Cell. Endocrinol. 1982. V. 25. P. 213-226.

223. Shol'ts K.F., Zakharova T.S. Effect of normal saturated fatty acids on rat liver mitochondria. // Biokhimiia. 1977. V. 42(5). P. 809-14.

224. Shimizu Y, Tanishita Т., Minokoshi Y, Shimazu T. Activation of mitogen-activated protein kinase by norepinephrine in brown adipocytes from rats. // Endocrinology. 1997. V. 138(1). P. 248-53.

225. Shinohara Y, Unami A., Teshima M, Nishida H., van Dam K., Terada H. Inhibitory effect of Mg2+ on the protonophoric activity of palmitic acid.// Biochim Biophys Acta. 1995. V. 1228(2-3). P. 229-234.

226. Schonfeld P., Schild L., Kunz W. Long-chain fatty acids act as protonophoric uncouplers of oxidative phosphorylation in rat liver mitochondria. // Biochim Biophys Acta. 1989. V. 977(3). P. 266-72.

227. Senault C., Cherqui G., Cadot M., Portet R. Cold-induced developmental changes in fat cell size and number in brown adipose tissue of the rat. // Am. J. Physiol. 1981. V. 240(4).P. 379-83.

228. Smith R.E., Hock RJ. Brown fat: thermogenic effector of arousal in hibernators. // Science. 1963. V. 140. P. 199-200. 1963.

229. Soderling S.H., Bayuga S.J., BeavoJA. Identification and Characterization of a Novel Family of Cyclic Nucleotide Phosphodiesterases. // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 15553-15558.

230. Sol off M.S., Sweet P. Oxytocin inhibition of (Ca2++Mg2+)-ATPase activity in rat myometrial plasma membranes. //J. Biol. Chem. 1982. V. 257. P. 10687-93.

231. Spedding M., Paoletti R. Classification of calcium channels and the sites of action of drugs modifying channel function. // Pharmacol. Rev. 1992. V. 44. P.363.376.

232. Stauderman K.A., Pruss R.M. Dissociation of Ca2+ entry and mobilization responses to Angiotensin II in bovine adrenal chromaffin cells. // Biochem. J. 1989. V. 264. P. 12838-12848.

233. Stiles M.K., Craig M.E., Grunnell L.N., Pfeiffer D.R., Taylor R. W. The formation constants of ionomycin with divalent cations in 80% methanol/water. I I J. Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 8336-8342.

234. Strosberg A.D., Pietri-Rouxel F. Function and regulation of the Рз-adrenoceptor. //Trends Pharmacol Sci. 1996. V. 17(10). P. 373-81.

235. Svartengreh J., Svoboda P., Cannon B. Desensitization of beta-adrenergic responsiveness in vivo. // Eur. J. Biochem. 1982. V. 128. P. 481-488.

236. Svartengren J., Svoboda P., Drahota Z., Cannon B. The molecular basis for adrenergic desensitization in hamster brown adipose tissue: uncoupling of adenylate cyclase activation. // Сотр. Biochem. Physiol. 1984. V. 78. P. 159-170.

237. Svoboda P., JJnelius L., Cannon В., Nedergaard J. Attenuation of Gs-proteincoupling efficiency in brown-adipose-tissue plasma membranes from coldacclimated hamsters. //Biochem. J. 1993. V. 295. P. 655-661.

238. Tai T.A.C., Jennermann C., Brown K.K., Oliver В.В., MacGinnitie M.A., et al Activation of the nuclear receptor peroxisome proliferator-activated receptor gamma promotes brown adipocyte differentiation. // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. P. 29909-14.

239. Takahashi A., Camacho P., Lechleiter J.D., Herman B. Measurement of intracellular calcium. //Physiol. Rev. 1999. V. 79. P. 1089-1125.

240. Takahashi A., Shimazu Т., Maruyama Y. Importance of sympathetic nerves for the stimulatory effect of cold exposure on glucose utilization in brown adipose tissue. // Jpn. J. Physiol. 1992. V. 42(4). P. 653-64.

241. Tanaka Т., Yoshida N., Kishimoto Т., Akira S. Defective adipocyte differentiation in mice lacking the C/EBPp and/or C/EBP8 gene. // EMBO J. 1997. V. 16. P. 7432-43.

242. Taylor S.S., BubisJ., Toner-Webb J. etal cAMP-dependent kinase: prototype for a family of enzymes. // FASEB J. 1988. V. 2. P. 2677-2685.

243. Terada H. The interaction of highly active uncouplers with mitochondria. // Biochim Biophys Acta. 1981. V. 639(3-4). P. 225-42.

244. Thastrup O., Cullen P.J., Drobak B.K., Hanley M.R., Dawson A.P.4 I

245. Thapsigargin, a tumor promoter, discharges intracellular Ca stores by specific inhibition of the endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87. P. 2466-2470.

246. Thastrup O. Role of Ca2+-ATPases in regulation of cellular Ca2+ signaling, as1. A Istudied with the selective microsomal Ca -ATPase inhibitor, thapsigargin. // Agents and Actions. 1990. V. 29. P. 8-15.

247. Thonberg H., Zhang S.J., Tvrdik P., Jacobsson A., Nedergaard J. Norepinephrine Utilizes (ai- and р-Adrenoreceptors Synergistically to Maximally Induce c-fos Expression in Brown Adipocytes. // J. Biol. Chem. 1994. V. 269. P. 33179-33186.

248. Tornquist K., Vainio P., Titievsky A., Dugue B. and Tuomine R. Redox modulation of intracellular free calcium concentration in thyroid FRTL-5 cells:evidence for an enhanced extrusion of calcium. // Biochem. J. 1999. V. 339. P. 621-628.

249. Triandafillou J., Gwilliam C., Himms-Hagen J. Role of thyroid hormone in cold induced changes in rat brown adipose tissue mitochondria. // Can. J. Biochem. 1982. V. 60. P. 530-537.

250. Tsien R.Y., Pozzan Т., Rink T.J. Calcium homeostasis in intact lymphocytes: cytoplasmic free calcium monitored with a new, intracellularly trapped fluorescent indicator. // J. Cell. Biol. 1982. V. 94. P. 325-34.

251. Tsien R.W., Tsien R.Y. Calcium channels, stores, and oscillations. // Annu. Rev. Cell Biol. 1990. V. 6. P. 715-760.

252. Tsien R.Y., Pozzan Т., Rink T.J. Measuring and manipulating cytosolic Ca2+ with trapped indicators. // Trends Biochem. Sci. 1984. V. 9. P. 263-266.

253. Tuchiya K., Nagai M. Increase in intracellular calcium in freshly-dispersed, single brown adipocytes of the rat by adrenergic stimulation. // Biomedical Research. 1994. V. 15. P. 347-355.

254. Wang N.D., Finegold M.J., Bradley A., Ou C.N., Abdelsayed S.V., et al. Impaired energy homeostasis in C/EBP alpha knockout mice. // Science. 1995. V. 269. P. 1108-12.

255. Wilcke M., Nedergaard J. ap and P-adrenergic regulation of intracellularл I

256. Ca -levels in brown adipocytes. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. V 163. P. 292-300.

257. Wu J., Takeo Т., Kamimura N., Wada J., Suga S., Hoshina Y, Wakui M. Thimerosal modulates the agonist-specific cytosolic Ca2+ oscillatory patterns in single pancreatic acinar cells of mouse. // FEBS Lett. 1996. V. 390. P. 149-52.

258. Wu Z, Puigserver P., Andersson U., Zhang C., Adelmant G., et al. Mechanisms controlling mitochondrial biogenesis and respiration through the thermogenic coactivator PGC-1. //Cell. 1999. V. 98. P. 115-24.

259. Yaekura K., Yada T. Ca2+.i-reducing action of cAMP in rat pancreatic beta-cells: involvement of thapsigargin-sensitive stores. I I Am J Physiol, 1998. V. 274. P. 513-21.

260. Yan C., Zhao A.Z., Bentley J.K., Beavo J.A. The Calmodulin-dependent Phosphodiesterase Gene PDE1C Encodes Several Functionally Different Splice Variants in a Tissue-specific Manner. // J. Biol. Chem. Vol. 1996. V. 271. P. 25699-25706.

261. Yan C., Zhao A.Z., Bentley J.K., Loughney K., Ferguson K.,Beavo J.A. Molecular cloning and characterization of a calmodulin-dependent phosphodiesterase enriched in olfactory sensory neurons. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. P. 9677-9681.

262. Yamashita H., Sato Y.t Kizaki Т., Oh-ishi S., Segawa M., Saitoh D., Ohira Y, Ohno H. II Cell Growth Differ. 1995. V. 6. P. 1457-1462.

263. Yamashita #., Sato Y., Kizaki Т., Oh S., Nagasawa J., Ohno H. Basic fibroblast growth factor (bFGF) contributes to the enlargement of brown adipose tissue during cold acclimation. // Pflugers Arch. 1994. V. 428(3-4). P. 352-6.

264. Yoshimasa Т., Sibley D.R., BouvierM., LefkowitzR.J., CaronM.G. Cross-talk between cellular signalling pathways suggested by phorbol-aster-induced adenylate cyclase phosphorylation. //Nature. 1987. V. 327. P. 67-70.

265. Yu J., Wolda S.L., Frazier A.L.B Identification and Characterization of a Human Calmodulin-Stimulated Phosphodiesterase PDE1B1. // Cell. Signal. 1997. Vol. 9. No. 7. P. 519-529.

266. Yu H.J., Ma H., Green R.D. Calcium entry via L-type calcium channels actsas a negative regulator of adenylyl cyclase activity and cyclic AMP levels in cardiac myocytes. //Mol. Pharmacol. 1993. V. 44. P. 689-693.

267. Zaagsma J., Nahorski S.R. Is the adipocyte ^-adrenoceptor a prototype for the recently cloned atypical "p3-adrenoceptor"? // TIPS. 1990. V. 11. P. 3-7.

268. Zaninovich A. A. Thyroid hormones, obesity and brown adipose tissue thermogenesis. // Medicina. 2001. V. 61 (5 Pt 1). P. 597-602.

269. Zhang S-J. Regulation of Intracellular Calcium in Adipose Tissues. Licentiate Thesis (Stockholm; Stockholm Univ., 1999).

270. Zhang S.J., Endo S., Ichikawa Т., Washiyama K., Kumanishi T. Frequent deletion and 5' CpG island methylation of the pi6 gene in primary malignant lymphoma of the brain. // Cancer Res. 1998. V. 58(6). P. 1231-7.

271. Zhao J., Unelius L., Bengtsson Т., Cannon В., Nedergaard J. Coexisting p-adrenoceptor subtypes: significance for thermogenic process in brown fat cells. // Amer. J. Physiol. 1994. V. 267. P. C969-C979.

272. Zhao J., Cannon В., Nedergaard J. ai-Adrenergic stimulation potentiates the thermogenic action of p3-adrenoceptor-generated cAMP in brown fat cells. // J. Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 32847-32856.

273. Zhong L., Inesi G. Role of the S3 stalk segment in the thapsigarginл ,concentration dependence of sarco-endoplasmic reticulum Ca ATPase inhibition. // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 12994-12998.

274. Zhong J., Hume J.R., Keef K.D. Anchoring protein is required for cAMP1. Л I tdependent stimulation of L-type Ca channels in rabbit portal vein. // Amer. J. Physiol. 1999. V. 277. P. 840-844.

275. Список опубликованных работ по теме диссертации

276. Л.П. Долгачева, Б.Б. Абжалелов. A.C. Баумуратов, В.П. Зинченко, Г.Е. Бронников. Аденилатциклазный путь участвует в регуляции внутриклеточного уровня Са2+ в преадипоцитах бурого жира. Цитология. 2002. Том 44, №1, стр. 56-60.

277. Б.Б. Абжалелов. А.С. Баумуратов, В.А. Долгачев, В.П. Зинченко, Г.Е.л I

278. Бронников, Л.П. Долгачева. сАМР повышает Са .i в бурых преадипоцитах мыши. Школа-конференция "Горизонты физико-химической биологии" (Пущино, 28 мая- 2 июня 2000 г.). стр. 161.

279. Абжалелов Б.Б. Долгачева Л.П., Бронников Г.Е. Развитие медленного Са2+-ответа в бурых преадипоцитах через Р-рецепторы и сАМР/протеинкиназа А-зависимый путь. 7м Пущинская конф. молодых ученых. {Пущино, 2001). стр. 4.

280. Абжалелов Б.Б. Долгачева Л.П., Бронников Г.Е. ОсобенностиIнеадренергического управления Са -сигнализации в бурых преадипоцитах. 7м Пущинская конференция молодых ученых. (Пущино, 2001). стр. 4.

281. Баумуратов А.С., Абжалелов Б.Б. Долгачева Л.П., Бронников Г.Е. Са2+-ответы на агонисты адренорецепторов в преадипоцитах бурого жира при хладоадаптации. 7ая Пущинская конференция молодых ученых, стр. 9.

282. Абжалелов Б.Б. Geloen А., Долгачева Л.П., Зинченко В.П., Бронников Г.Е. Сравнение действия регуляторов кальциевой сигнализации на разных уровнях дифференцировки бурых адипоцитах. Биологические мембраны (в печати).

Информация о работе

Абжалелов, Бахытбек Байдосович
кандидата биологических наук
Пущино, 2003
ВАК 03.00.02

Диссертация

Механизмы формирования Ca2+-сигнала в преадипоцитах бурой жировой ткани - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы