Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Маннан-связывающие лектины дальневосточных голотурий Apostichopus Japonicus (Aspidochirota) и Cucumaria Japonica (Dendrochirota) и их роль в защитных реакциях и морфогенезах

ВАК РФ 03.00.30, Биология развития, эмбриология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Петрова, Ирина Юрьевна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 Лектины. Функции лектинов.

2.2. Углевод-содержащие биополимеры как носители биологической информации.

2.3. Классификация зоо лектинов.

1.1. Маннан-связывающие лектины позвоночных.

1.2. Лектины иглокожих.

3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Сбор материала.

3.2. Реакция прямой гемагглютинации.

3.3. Ингибирование РПГА.

3.4. Определение зависимости активности МСЛ-Т и МСЛ-К от температуры.

3.5. Определение зависимости активности МСЛ-Т и МСЛ-К от рН и концентрации ионов Са в среде.

3.6. Выделение МСЛ-Т и МСЛ-К.

3.6.1. Ионообменная хроматография.

3.6.2. Аффинная хроматография.

3.6.3. Гельфильтрация.

3.7. Получение антисывороток к МСЛ-Т и МСЛ-К.

3.8. Выделение фракций иммуноглобулинов из антисывороток против МСЛ-Т и МСЛ-К.

3.9. Иммуноферментное определение МСЛ-Т и МСЛ-К.

3.9.1. Получение коньюгатов анти-МСЛ-Т и анти-МСЛ-К с пе-роксидазой хрена.

3.9.2. Подбор концентрации анти-МСЛ-Т и анти-МСЛ-К для адсорбции на планшетах.

3.9.3. Подбор разведений коньюгата.

3.9.4. Построение калибровочной кривой.

3.9.5. Определение концентрации МСЛ в целомической жидкости трепанга и кукумарии.

3.9.6. Определение перекрестной реактивности IgG анти-МСЛ-Т с

МСЛ-К, а также с МСЛ сыворотки крови человека и мыши.

3.10. Иммуноэлектрофорез.

3.11. Анализ белковых препаратов с помощью электрофореза в полиак-риламидном геле в присутствии ДСН.

3.12. Иммуноблоттинг.

3.13. Определение содержания белка микробиуретовым методом.

3.14. Выявление локализации лектинов в тканях голотурий.

3.15. Постановка экспериментов по изучению воздействия бактерий Yersinia pseudotuberculosis, их лизата и термостабильного токсина на компоненты защитной системы трепанга.

3.16. Электронная микроскопия.

3.17. Постановка экспериментов по изучению воздействия маннанов, с которыми эффективно связываются МСЛ-Т и МСЛ-К, на гуморальный компонент защитной системы голотурий.

3.18. Постановка опытов по регенерации кишки дальневосточного трепанга

3.19. Получение и культивирование эмбрионов Strongylocentrotus nudus.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Идентификация лектинной активности.

4.2. Выделение лектинов из целомической жидкости A.japonicus и С. japonica

4.2.1. Разработка метода фракционирования белков целомической жидкости на основе ионообменной хроматографии.

4.2.2. Разработка метода фракционирования белков целомической жидкости на основе аффинной хроматографии.

4.2.3. Разработка метода фракционирования белков целомической жидкости на основе гельфильтрации.

4.3. Физико-химические свойства лектинов

4.3.1. Молекулярная масса и субьединичный состав.

4.3.2. Углеводная специфичность лектинов.

4.3.3. Зависимость активности лектинов от концентрации ионов Са

4.3.4. Зависимость активности лектинов от рН.

4.3.5. Зависимость активности лектинов от температуры.

4.3.6. Аминокислотный состав MCJI-T и MCJI-K.

4.4. Иммунохимические свойства лектинов

4.4.1. Получение и тестирование антител к MCJI-T и MCJI-K.

4.4.2. Исследование общих антигенных детерминант у МСЛ-Т и MCJI-К.

4.4.3. Исследование перекрестной реактивности MCJI-T и MCJI-K с другими маннан-связывающими лектинами.

4.5. Локализация МСЛ-Т и МСЛ-К в организме A. japonicus и С. japónica.

4.6. Взаимодействие бактерий псевдотуберкулеза, их «лизата» и термостабильного летального токсина с компонентами иммунной системы дальневосточного трепанга.

4.6.1. Динамика суммарной лектинной активности и содержания МСЛ-Т в целомической жидкости A. japonicus.

4.6.2. Влияние «лизата» бактерий и термостабильного летального токсина на динамику суммарной лектинной активности и содержание МСЛ-Т в целомической жидкости трепанга.

4.6.3. Поведение бактериальных клеток и взаимодействие их с целомо-цитами, ответственными за осуществление защитных реакций -амебоцитами и морулоподобными клетками.

4.6.4. Корреляция между содержанием МСЛ-Т, суммарной лектинной активностью и содержанием целомоцитов в целомической жидкости дальневосточного трепанга.

4.7. Лектинная активность и содержание лектинов в целомической жидкости A.japonicus и С. japónica в ответ на введение этим животным бактериальных полисахаридов.

4.7.1. Динамика лектинной активности и содержания МСЛ-Т в целомической жидкости A.japonicus.

4.7.2. Динамика лектинной активности и содержания МСЛ-Т в целомической жидкости С. japónica.

4.8. Исследование роли МСЛ-Т в процессах репаративной регенерации кишки дальневосточного трепанга после эвисцера

4.8.1. Динамика суммарной лектинной активности и содержания МСЛ-Т в целомической жидкости в ходе регенерации кишки дальневосточного трепанга.

4.8.2. Распределение МСЛ-Т в регенерирующих тканях кишки дальневосточного трепанга.

4.9. Влияние антител к МСЛ-Т на процесс эмбрионального развития морского ежа Strongylocentrotus nudus.

5. ОБСУЖДЕНИЕ.

5.1. Определение лектинной активности целомической жидкости дальневосточного трепанга и японской кукумарии

5.2. Выделение МСЛ-Т и МСЛ-К

5.3. Свойства МСЛ-Т и МСЛ-К.

5.3.1 Молекулярная масса и субъединичность.

5.3.2. Углеводная специфичность МСЛ-Т и МСЛ-К.

5.3.3. Зависимость активности лектинов от рН и концентрации ионов Са2+ и другие свойства.

5.3.4. Аминокислотный состав и иммунохимические свойства лектинов.

5.4. Локализация МСЛ в органах и тканях голотурий.

5.5. Участие МСЛ-Т и МСЛ-К в защитных реакциях.

5.3.6. Участие МСЛ-Т в регенерации кишки дальневосточного трепанга после эвисцерации.

5.3.7. Участие МСЛ-Т в эмбриональном развитии.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Маннан-связывающие лектины дальневосточных голотурий Apostichopus Japonicus (Aspidochirota) и Cucumaria Japonica (Dendrochirota) и их роль в защитных реакциях и морфогенезах"

Лектины - это углевод-связывающие белки, отличные от ферментов и иммуноглобулинов (Barondes, 1988). Они способны соединяться с углеводными составляющими гликоконьюгатов по принципу структурного соответствия. К настоящему времени накоплен обширный фактический материал по структуре и функциям лектинов животных. Установлено, что молекула лектина несет один или несколько высококонсервативных углевод-распо-знающих доменов. На основании структурной организации углевод-распо-знающих доменов лектины животных предложено разделить на пять основных классов: C-, S-, Р-, I-лектины и пентраксины (Drickamer, 1995; Powell, Varki, 1995; Rini, 1995). Лектины выполняют множество функций в организме, принимая участие в оплодотворении, развитии, миграции лейкоцитов, апоптозе и т. д. (Ni, Tizard, 1996). Являясь составной частью иммунитета, лектины осуществляют немедленную, в отличие от иммуноглобулинов, реакцию на инфекцию или повреждение.

Значительную роль в защитных реакциях играют С-лектины и, в частности, коллектины - лектины, присутствующие в плазме и других жидкостях тела (Holmskov et al., 1994). Из этой группы лектинов наиболее хорошо изучены маннан-связывающие лектины (МСЛ) высших позвоночных, которые с высокой степенью аффинности взаимодействуют с разветвленными маннанами и углеводными цепями высокоманнозного и гибридного типа (Ezekowitz, Stahl, 1988). Установлено, что МСЛ участвуют в активации системы комплемента, в том числе по "лектиновому пути" (Holmskov et al., 1994). Однако до настоящего времени МСЛ были известны только у высших позвоночных. Нами впервые была предпринята попытка выделения МСЛ из целомической жидкости иглокожих, имеющих общего предка с хордовыми. Обнаружение аналогов маннан-связывающих лектинов у представителей иглокожих позволит проследить становление системы неспецифического иммунитета в ряду вторичноротых животных и расширит наши знания об организации иммунной системы позвоночных. Обнаружение у представителей низших вторичноротых маннан-связывающих лекти-нов С-типа, гомологичных МСЛ человека, важно для понимания процесса эволюции неспецифического иммунитета позвоночных животных. Кроме того, полученные в работе данные расширяют представления о структуре и функциях лектинов беспозвоночных.

Цель и задачи работы. Цель представленной работы - выявление у представителей иглокожих (голотурий) маннан-связывающих лектинов и выяснение их роли в защитных реакциях и морфогенетических процессах. В связи с этим были поставлены следующие конкретные задачи:

1) Выделить и охарактеризовать лектины у двух видов голотурий (дальневосточного трепанга и японской кукумарии), и на основании их физико-химических свойств установить принадлежность этих лектинов к группе маннан-связывающих лектинов С-типа (коллектинов).

2) Изучить особенности локализации маннан-связывающих лектинов в организме дальневосточного трепанга и японской кукумарии и определить места их биосинтеза.

3) Для выяснения роли маннан-связывающего лектина трепанга в регенерации, выявить корреляцию между распределением лектина в тканях регенерата и содержанием его в целомической жидкости.

4) Исследовать изменения содержания маннан-связывающих лектинов в целомической жидкости голотурий в ходе защитных реакций и исследовать участие лектинов в функционировании иммунной системы.

5) Определить возможность участия маннан-связывающего лектина трепанга в процессах оплодотворения и развития.

Научная новизна. У представителей низших вторичноротых - иглокожих нами впервые были выделены лектины, специфичные по отношению к разветвленным олигоманнанам. С использованием оригинальных методик и полученных к лектннам антител были исследованы основные физико-химические свойства и функции выделенных лектинов. Было показано, что данные лектины являются Са2+-зависимыми, а их аминокислотный состав предполагает наличие в составе молекулы коллагеноподобных доменов, что позволяет отнести их к лектинам С-типа (коллектинам). Установлено, что изучаемые лектины являются важным компонентом защитной системы иглокожих, выступая в роли агглютининов, а также участвуют в морфоге-нетических процессах. На основании совокупности полученных нами данных можно говорить о том, что впервые у представителей иглокожих охарактеризованы лектины, гомологичные MCJI высших позвоночных. Теоретическое и практическое значение работы.

Обнаружение у представителей низших вторичноротых маннан-свя-зывающих лектинов С-типа, гомологичных МСЛ человека, важно для понимания процесса эволюции неспецифического иммунитета позвоночных животных. Кроме того, полученные в работе данные расширяют представления о структуре и функциях лектинов беспозвоночных.

Кроме того, лектины, в том числе и специфичные к разветвленным маннанам, являются ценным инструментом для использования их как в структурном углеводном анализе полисахаридов, содержащих маннозу, так и для изучения микрогетерогенности углеводных компонентов биополимеров (Лахтин, 1989; Norgaard-Pedersen et al., 1980; Koppel et al., 1994). Способность полученных нами лектинов голотурий связываться с углеводным структурам ряда онкофетальных антигенов - маркеров малигнизации, таких как а-фетопротеин и раково-эмбриональный антиген, представляет большой интерес для разработки на основе МСЛ голотурий тест-систем для ранней дифференциальной диагностики рака и определения степени злокачественности неоплазий.

Апробация работы. Основные материалы диссертации были представлены на международном симпозиуме "Natural sea products", (Австралия, Та-унсвилл, 1998), на международной конференции "Spring Joint Meeting of the Korean Sociétés on Fisheries Science", (Пусан, Корея, 2000), на международном симпозиуме "8-th Intenational Symposium on Yersinia" (Турку, Финляндия, 2002), на научной конференции ТИБОХ ДВО РАН «Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии» (1998), на Региональных естественнонаучных конференциях ДВГУ в 1997-2001 гг., на годичных конференциях ИБМ ДВО РАН (1998, 2000-2001), на научном межлабораторном семинаре по морфологии, физиологии и биохимии ИБМ ДВО РАН (2002)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из 5 глав, выводов и списка литературы (140 источников, из которых 125 на английском языке). Работа изложена на 168 страницах, из них 135 машинописного текста, 73 рисунка (10 таблиц, 16 микрофотографий, 5 электроннограмм, 38 графиков).

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (Грант РФФИ № 98-04-49161) и фонда ДВО РАН.

Автор считает своим приятным долгом выразить глубокую благодарность научным руководителям, Марине Геннадьевне Елисейкиной и Александру Александровичу Булгакову за руководство, помощь, обучение, материальную и душевную поддержку на всех этапах выполнения работы. Игорю Юрьевичу Долматову за ценные замечания и помощь в подготовке иллюстраций и освоении компьютерных программ. Автор благодарит Ирину Сергеевну Спирину за организационную поддержку, Светлану Дмитриевну Кашенко за помощь в работе с эмбрионами иглокожих, Тимура Юси

12 фовича Магарламова за помощь в выполнении микробиологической части работы, Лидию Тихоновну Фролову, Нину Евгеньевну Ламаш, Людмилу Николаевну Ушеву, Талию Талгатовну Гинанову, Владимира Машанова, Ольгу Зуеву за душевную поддержку.

Автор благодарен Павлу Александровичу Лукьянову, Александру Васильевичу Курика, Валентине Ильиничне Молчановой, Ирине Владимировне Чикаловец, Наталье Ивановне Белогорцевой, Лидии Романовне За-харкиной, Лидии Васильевне Михейской, Нине Михайловне Вахрушевой, Наталье Владимировне Журавлевой, Станиславу Сергеевичу Кобелеву за предоставленные для выполнения работы возможности Лаборатории химии неинфекционного иммунитета, ценные рекомендации и замечания, теоретическую и практическую помощь при выполнении биохимической части работы, моральную поддержку. Автор глубоко признателен Евгению Львовичу Назаренко и Владимиру Анатольевичу Зубкову за любезно предоставленные препараты бактериальных полисахаридов, ценные советы и рекомендации, Геннадию Александровичу Набережных за помощь в освоении новых биохимических методов и критические замечания.

2.0бзор литературы

Заключение Диссертация по теме "Биология развития, эмбриология", Петрова, Ирина Юрьевна

ВЫВОДЫ

1. Из целомической жидкости A. japonicus и С. japónica нами впервые выделены два новых Са2~-зависимых лектина, обладающих сходными физико-химическими и иммунохимическими свойствами и специфичных к разветвленным a-D-маннанам. На основании данных по аминокислотному составу, углеводной специфичности, Са2--зависимости и наличию общих с маннан-связывающими лектинами млекопитающих антигенных детерминант, полученные лектины следует отнести к маннан-связывающим лекти-нам С-типа (коллектинам).

2. Маннан-связывающие лектины присутствуют в организме А. japonicus и С. japónica как в растворенной в целомической жидкости, так и в связанной форме, являясь компонентами базальных мембран, оболочки яйцеклеток, соединительнотканной оболочки семенника. Кроме того, маннан-связывающие лектины содержатся в составе секрета морулоподобных целомоцитов, которые, очевидно являются местом биосинтеза этих лекти-нов у голотурий.

3. Содержание лектинов в целомической жидкости у изучаемых видов голотурий существенно меняется в ответ на введение животным чужеродных веществ и микроорганизмов, что указывает на участие данных лектинов в защитных реакциях, где они выступают в роли агглютининов.

4. Повышение содержания маннан-связываюшего лектина трепанга в ходе регенерации совпадает с периодом активного морфогенеза и сопровождается повышением содержания лектина в ткани зачатка и инфильтрацией регенерата морулоподобными клетками, вырабатывающими лектин. Таким образом, маннан-связывающий лектин трепанга участвует в процессах регенерации. Являясь компонентом соединительной ткани зачатка формирующегося органа, лектин маркирует места миграции клеток регенерата,

152 осуществляя взаимодействие «клетка-субстрат» и участвуя в поддержании структурного гомеостаза организма.

5. Блокирование маннан-связывающих лектинов яйцеклеток и развивающихся эмбрионов иглокожих показало, что взаимодействие лектинов с их лигандами является одним из молекулярных механизмов, определяющих миграцию эмбриональных клеток в ходе гаструляции. Вероятно, ман-нан-связываюпше лектины воспринимают информацию, заложенную в углеводных структурах делящихся клеток, и тем самым могут направлять течение морфогенетических процессов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Петрова, Ирина Юрьевна, Владивосток

1. Коренбаум Е.С., Воробьев В.А. Клетки целомической жидкости морской звезды Asterias amurensis II Биол. Моря, 1988. № 1. С. 27-33.

2. Королев В.П. Функции лектинов в клетке // Итоги науки и техники.

3. Общие проблемы физико-химической биологии, 1984. Т. 1. С. 53-65.

4. Кочиш П., Маслер Л., Шандулай И., Усов М., Шашков A.C., Яроц-кий C.B. Изучение строения дрожжевых Ь,Е)-маннанов методом ЬС-ЯМР-спектроскопии // Биоорганическая Химия 1984. Т. 10. № 4. С. 536-543.

5. Лахтин В.М. Биотехнология лектинов // Биотехнология, 1989. Т.5. № 6. С.686-691.

6. Левин B.C. Дальневосточный трепанг. Владивосток: Дальневост. кн. изд-во, 1982. 191 с.

7. Левин B.C. Дальневосточный трепанг. Биология, промысел, воспроизводство. СПб: Голанд, 2000. 200 с.

8. Лоенко Ю.Н., Глазкова В.Е., Артюков A.A., Оводова Р.Г. Лектины морских беспозвоночных // Успехи современной биологии, 1992. Т. 112. Вып. 5-6. С. 785-793.

9. Луцик А.Д., Детюк Е.С, Луцик М.Д. Лектины в гистохимии. Львов: Изд-во Выща шк., 1989. 139 с.

10. Луцик М.Д., Панасюк Е.Д., Луцик А.Д. Лектины. Львов: Изд-во Выща шк., 1981. 153 с.

11. Миронов А.А., Комиссарчик Я.Ю., Миронов В.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. Санкт-Петербург: Наука, 1994. 430 с.

12. Назаренко E.JL, Зубков В.А., Шашков Н.С., Книрель Ю.А., Команд-рова Н.А., Горшкова Р.П., Оводов Ю.С. Структура повторяющегося звена О-специфического полисахарида Vibrio fluvial is II Биоорган. Химия, 1996, Т. 19. С. 989-1000.

13. Недашковская Е.П., Тимченко Н.Ф., Беседнов АЛ., Вертиев Ю.В. Выделение, очистка и характеризация термостабильного токсина Yersinia pseudotuberculosis 11 Ж. Микробиол., 1995, № 4, С. 5-9.

14. Полевщиков А.В. Лектины в защитных реакциях беспозвоночных // Журнал общей биологии, 1996. Т 57. № 6. С. 718-739.

15. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высш. шк., 1991. 288 с.

16. Тимченко Н.Ф. Патогенетическое значение психрофильности Yersinia pseudotuberculosis. Автореф. дисс. д-ра мед. наук. — Владивосток, 1999. 372 с.

17. Шукалюк А.И., Долматов И.Ю. Регенерация пищеварительной системы у голотурии Apostichopus japonicus после эвисцерации // Биол. Моря, 2001. Т. 27. №3. С. 202-206.

18. Ahuja К.К. Carbohydrate determinants involved in mammalian fertilisation // Amer. J. Anat, 1985. V.174. № 3. P.207-223.

19. Akiyama K., Shida Т., Yasueda H., Mita H., Yamamoto Т., Yamaguchi H. Atopic astma caused by Candida albicans acid protease: case reports // Allergy, 1994. V.49. P. 778-781.

20. Akiyama K., Shida T., Yasueda H., Mita H., Yanagihara Y., Hasegawa M., Maeda Y., Yamamoto T., Takesako K., Yamaguchi H. Allergenity of acid protease secreted by Candida albicans II Allergy, 1996. V. 51. P. 887-892.

21. Alliegro M.C., Burdsal C.A., McClay D.R. In vitro biological activities of echinonectin // Biochemistry, 1990. V. 29. P. 2135-2141.

22. Alliegro M.C., Ettensohn C.A., Burdsal C.A., Erickson H.P., McClay D.R. Echinonectin: A new embryonic substrate adhesion protein // J. Cell. Biol., 1988. V. 107. P. 2319-2327.

23. Al-Sharif W.Z., Sunyer J.O., Lambris J.D., Smith L.C. Sea urchin coelomocytes specifically express a homologue of the complement component C3 // J. Immunol., 1998. V. 160. P. 2983-2997.

24. Amano T., Kawabata H., Yochisato K. Characterisation of metamorphic changes in anuran larval epidermis using lectins as probes // Develop. Growth Differ, 1995. V. 37. P. 211-220.

25. Anders E.M., Hartley C.A., Reading P.C., Ezekowitz R.A.B. Complement-depending neutralisation of influenza-virus by a serum mannose-specific lectin // J. of General Virology, 1994. V. 75. P. 615-622.

26. Arason GJ. Lectins as defence molecules in vertebrates and invertebrates // Fish and Shellfish Immunology, 1996. № 6. P. 277-289.

27. Ashwell G., Harford J. Carbohydrate-specific receptors of liver // Annu. Rev. Biochem, 1982. V. 51. P. 531-554.

28. Axelsen N.M., Kroll J., Weeke B. A manual of quantitative Immunoelectrophoresis. Moskow: Mir,198 . P. 201-209.

29. Ballou C. Advances in microbial physiolgy // 1976. V. 14. P. 93-96, 107110.

30. Barondes S.H. Bifunctional properties of lectins: Lectins redefined // Trends Biochem. Sci. (Pers. Edit.). 1988. V. 13. P. 480-482.

31. Beck G., Ellis T.V., Truong N. Characterisation of an IL-1 recptor from Asterias forbesi coelomocytes // Cell. Immunol., 2000. V. 203 (1). P. 66-73.

32. Beck J., Habicht G.S. Isolation and characterisation of primitiveinterleikin-l-like molecule from an invertebrate Asterias forbesi II Proc. Natl.

33. Acad. Sci. USA, 1986. V. 83 (19), P. 7429-7433.

34. Bertheussen K. Complement- like activity in a sea urchin coelomic fluid // Dev. Comp. Immunol., 1983. V. 7. № 1. P. 21-31.

35. Bertheussen K. Receptor for complement on echinoid phagocytes // Dev. Comp. Immunol., 1982. V. 6. № 4. P. 635-642.

36. Bezouska K., Yuen C.T., O Brien J., Childs R.A., Chai W., Lawson A.M., Drbal K., Fiserova A.,Pospisil M., Feizi T. Oligosaccharide ligands for NK-P1 protein activate NK-cells and cytotoxity // Nature, 1994. V. 372. P. 150-157.

37. Bulgakov A.A., Nazarenko E.L., Zubkov V.A., Vakhrusheva N.M. Characterization of Ca2~-independent lectin from the sea cucumber Stichopus japonicus II Second European Symposium on Carbohydrate Mimics. Milano, 1996. P. 312.

38. Byrne M., The ultrastructure of the morula cells in Eupentacta quinquesemita (Echinodermata: Holothuroidea) and their role in the maintenance of hte extracellular matrix // J. Morphol., 1986. V. 188. P. 179189.

39. Canicatti C., Ancona G. Cellular aspects of Holothuria pooli immune response // J. of Invertebrate Pathology, 1989. V. 53. P. 152-158.

40. Canicatti C., D'Ancona G., Farina —Lipari E. The Holothuriapolii brown bodies // Bull. Zool., 1989. V. 56. P. 275-283.

41. Canicatti C., D'Ancona G., Farina—Lipari E. The coelomocytes of Holothuria polii (Echinodermata). I. Light and electron microscopy // Bull. Zool., 1989. V. 56. P. 29-36.

42. Canicatti C., Pagliara P., Stabili L. Sea urchin coelomic fluid agglutinin mediates coelomocyte adhesion // Eur. J. Cell Biol., 1992. V. 58. P. 291- 295.

43. Carred P. Harboe M., Oettinger T., Koch C., Svejgaard A. Dual role mannan-binding protein in infection another case of heterosis // European J. of Immunogenetics, 1994. V. 21. № 2. P. 125-131.

44. Chambers W.H., Adamkiewicz T., Houchins J.P. Type-II integral membrane proteins with characteristics of C-type animal lecnins expression by-natural killer cells (NK) // Glycobiology, 1993. №3. P.9-14.

45. Chamow S.M., Hedrick J.L., Subunit structure of a cortical granule lectin involved in the block in polyspermy in Xenopus laevis eggs // FEBS Lett, 1986. V. 206. №2. P. 353-357.

46. Chia F., Xing J. Echinoderm coelomocytes // Zool. Stud., 1996. V. 35. P. 231-254.

47. Cooper E.L. Comparative immunology. Mir, Moskow. 1976. 227 pp.

48. D'Ancona G., Canicatti C. The coelomocytes of Holothuria polii (Echinodermata). II. Cytochemical staining properties. // Bas. Appl. Histochem. 1990, V. 34. P.209-218.

49. Drickamer K. Increasing diversity of animal lectin structures // Curr. Opin. Struct. Biol., 1995. V. 5. P. 612-615.

50. Drickamer K. Two distinct classes of a carbohydrate-recognition domains in animal lectins // J. Biol. Chem., 1988. V. 263. № 20. P. 9557-9560.

51. Eshdat Y., Ofer I., Yashow-Gan Y. Isolation of a mannose-specific lectin from E. coli and its role in the adherence of the bacteria to epithelial cells // Biochem. Biophys. Res. Comm., 1978. V. 85. № 4. P. 1151-1559.

52. Ezekowitz R.A.B., Kuhlman M., Groupman J.K., Byrn R.A. A human serum mannose-binding protein inhibits in vitro infection by the human immunodeficience virus //J. Exp Med., 1989, V. 169. P. 185-196.

53. Ezekowitz R.A.B., Stahl P.D. The structure and function of vertebrate mannose lectin-like proteins // J. Cell. Sci. SuppL, 1988. № 9. P. 121-133.

54. Gamulin V., Rinkevich B., SchackeH., Kruse M., Muller I.M., Werner E.G. Cell adhesion receptor and nuclear receptors a hightly conerved from the lowest Metazoa ( Marine Sponges ) to Vertebrates // Biol. Chem., 1994. V. 375. P. 583-588.

55. Gewurts H., Zhang X.H., Lindt T.F. Structure and function of the pentraxis // Curr. Opin. Immunol., 1995. № 7. P. 54-64.

56. Giga A., Ikai A., Takahashi K. The complete amino acid sequence of echinoidin, a lectin from the coelomic fluid of the sea urchin, Anthocidarus crassispina. Homologies with mammalian and insect lectins // J. Biol. Chem. 1987. V. 262. P. 6197-6203.

57. Glabe C.G., Grabel L.B., Vacquier V.D., Rosen C.D. Carbohydrate specify of sea urchin sperm binding: a cell surface lectin mediating sperm-egg adhesion // J. Cell Biol., 1982. V. 94. № 1. P. 123-128.

58. Guau C.K., Zalik S.E. Expression of the 14 kDa and 16 kDa galactoside-binding lectins during differentiation of the chick yolk sak // Roux. Archives of the Developmental Biology, 1994. V. 204. № 2. P. 126-140.

59. Hakomori H. Immunochemical and molecular genetics of the histo-blood group ABO (H) and related antigen system // Baillieres Chemical Haematology, 1991. №4. P. 957-974.

60. Hatakeyama T., Himeshima T., Komatsu A., Yamasaki N. Purification and characterisation of two lectins from the sea cucumber, Stichopus japonicus // Biosci. Biotech. Biochem., 1993. V. 57. № 10. P. 1736-1739.

61. Hatakeyama T., Ohichi K., Kuroki M., Yamasaki N. Amino acid sequence of a C-type lectin CEL-IV from the marine invertebrate Cucumaria echinata II Biosci. Biotechn. Biochem., 1995. V. 59. № 7. P. 1314-1317.

62. Hayness P.A., Oka J.A., Weigel P.H., The rat hepatic lectin 1 subunit of the rat asialoglycoprotein receptor is a phosphoroprotein and contains phosphotyrosine //J. Biochem., 1994. V. 269. № 52. P. 33146-33151.

63. Hetzel H.R. Studies on holothurian coelomocytes. A survey of coelomocyte types // Biol. Bull., 1963. V 125. P. 289-301.

64. Hetzel H.R. Studies on holothurian coelomocytes. II. Origin of coelomocytes and formation of brown bodies // Biol. Bull., 1965. V. 128. P.102-111.

65. Hildeman W.H., Johnston I.S., Jokiei P. Immunocompetence in lowest Metazoan Phylium; transplantation immunity in sponges // Science, 1979. V. 204. P. 420-422.

66. Himeshima T., Hatakeyama T., Yamasaki N. Amino acid sequence of a lectin from the sea cucumber, Stichopus japonicus, and its structural relationship to the C-type animal lectin // J. Biochem., 1994. V. 115. P. 689-692.

67. Hirabayashi J., Satoh M., Kasai K. Evidence that Caenorhabditis elegans 32 kDa (3-galactoside binding protein is homologous to vertebrate (3-galactoside binding lectins // J. Biol. Chem., 1992. V. 267. P. 15485-15490.

68. Hoffman J.A., Kafatos F.C., Janeway C.A., Ezekowitz R.A., Phylogenetic perspectives in innate immunity // Scence, 1999. V. 284. 1313-1318.

69. Holmskov U., Maholtra R., Sim R.B., Jensenius J.C. Collectins: collagenous C-type lectins of innate immune defence system. // Immunol. Today, 1994. V. 15. P. 67-74.

70. Jans D., Jangous M. Structure fines des spherocytesde 1'holothuride Holothuria tubulosa И Echinoderm Research: Proceedings of the 2nd European Conference on Echinoderms, Brussels, 1989. Rotterdam: Balkema, 1989. P. 261-268.

71. Jiang H., Robey F.A., Gewurts H. Localisation sites throught which C-reactive protein binds and activates complement to residues 14-26 and 76-92 of the human Clq A-chain.// J. Exp. Med., 1992. V. 175. P. 1373-1379.

72. Johnson L.V., Calarco P.G. Mammalian preimplantation development: the cell surface//Anat. Rec., 1980. V.196. №2. P. 201-219.

73. Karp R.D., Koffaro K.A. Cellular defence systems of Echinodermata // The Reticuloendotelial System, a Comprehensive Treatise. New York; London: Plenum Press, 1980. V. 3. Phylogeny and ontogeny. P. 257-281.

74. Kawai T., Suzuki Y., Eda S., Ohtani K., Kase T., Sakamoto T., Uemura H., Wakamiya N. Molecular and biological characterization of rabbit mannan-binding protein // Glycobiology, 1998. V. 8. № 3. P. 237-244.

75. Kawamura K., Fugiwara S., Sugino Y.M., Budding-specific lectin-induced in epithelial cell is an extracellular matrix component for stem cell aggregation in extracellular matrix // Envelopment., 1991. V. 133. P. 995-1005.

76. Kawasaki K., Kubo T., Natori S. A novel-role of Periplaneta lectin as an opsonin to recognize 2-keto-3-deoxyoctonate residues of bacterial lipopolysaccharides // Comp. Biochem. Physiol., 1993. V. 106B. P. 675-680.

77. Kawasaki T. Structure and biology of mannose-binding protein, MBP, an important component of innate immunity // Biochimica and Biophysica Acta, 1999. 1473. P. 186-195.

78. Khramkova N.L, Abelev G.I. Sensitivity limit of the method of precipitation in agar // Exp. Bull. Biol., 1961. V. 12. P. 107.

79. King MJ. Blood group antigens on human erytrocytes distribution, structure and possible functions // Biochemical and Biophysical Acta, 1994. V. 196. P. 15-44.

80. Kock A.E., Halloran M.M., Haskell C.J., Shah M.R., Polverini P.J. Angiogenesis mediated by double forms of E-selectins and vascular cell adhesion molecule //Nature, 1995. V. 376. P. 517- 519.

81. Kokos A.M., Fulsford A.L. Natural killer cells in sea urchin blood // J. Mar. Biol. Assoc. U.K., 1991. V. 71. № 4. P. 934-955.

82. Komano H., Uizuno D., Natori S. Purification of lectin induced in hemolymph of Sarcophaga peregrina larvae on injury // J. Biol. Chem., 1980. V. 225. №7. P. 2919-2921.

83. Koppel R., Litvak M., Solomon B. Affinity purification of a mannose-binding protein, a sensitive tool in the diagnostics of IgM, via site-directed phosphorylated mannan bound to alumina // J. Chromatogr. B., 1994. V. 662. P.191-196.

84. Kornfeld R., Kornfeld S. Assembly of asparagine-linked oligosaccharides // Ann. Rev. Biochem., 1985. V. 591. P.272-275.

85. Kornfeld S. Structure and function of the mannose 6-phosphate insulinlike growth factor II receptors // Ann. Rev. Biochem. 1992. V. 61. P. 307-330.

86. Magor B.G., Magor K.E. Evolution of effectors and receptors of innate immunity // Developmental and Comparative Immunology, 2001. V. 25. P. 651682.

87. Matranga V. Molecular aspects of immune reactions in echinodermata. In Invertebrate immunology // Springer, 1996. P. 236-247.

88. Matsui T., Ozeki M., Suzuki M., Hino A., Titani K. Purification and characterisation of two Ca-dependent lectins from coelomic plasma of sea cucumber, Stichopus japonicus II J. Biochem., 1994. V. 116. P. 1124-1133.

89. Menthon D.N., Eisen A.Z. Cutaneous wound healing in sea cucumber Thyone briareus II J. Morphol., 1973. V. 141. P. 185-204.

90. Miyazawa S., Azumi K., Nonaka M Cloning and characterisation of integrin alpha subunits from solitary ascidian, Halocynthia roretzi II J.Immunol., 2001. V. 166. № 3. P. 1710-1715.

91. Mogues T., Ota T., Tauber A.T., Sastry K.N. Characterisation of tho mannose-binding protein cDNAs from rhesus monkey (Macaca muttata): structure and evolutionary implications // Glycobiology, 1996. V. 6. P. 543-550.

92. Monroy A., Rosati F., Dale B. Sperm-egg interaction // Boll. ZooL, 1984. V. 51. № 1-2. P. 103-119.

93. Mono H., Kurata H., Katsuyama R., Oka S., Kozutsumi Y., Kawasaki T. Renal expression of serum—type mannan-binding protein in rat // Eur. J. Biochem., 1997. V. 256. P. 770-774

94. Nair S.V., Pearce S., Green P.L., Mahajan D., Newton R.A., Raftos D.A. A collectin-like protein from tunicates // Comp. Biochem. Physiol. B. Biochem Mol. Biol., 2000. V. 125. № 2. P. 279-89.

95. Naito H., Ma Y., Uemura K., Arano Y., Kawasaki T. Metabolic properties of normal and mutant mannan-binding protein in mouse plasma // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1999. V. 256. P. 231-234.

96. Nakane P.K., Kavaoi A. Peroxidase-labelled antibody new method of conjugation // J. Histochem. Cytochem., 1974. V. 22. № 12. P. 1084-1090.

97. Nazarenko E.L., Bulgakov A.A., Zubkov V.A., Rod'kina S.A. Extracellular bacterial mannan as a model for carbohydrate-lectin interaction study // XVIII International Carbohydrate Symposium. Milano, Italy, 1996. P. 566.

98. Neth O., Jack D.L., Dodds A.W., Holzel H., Klein NJ., Turner M.W. Mannose-binding lectin binds to a range of clinically relevant microorganisms and promotes complement deposition // Infect. Immun., 2000. V. 68. P. 688693.

99. Ni Y., Tizard I. Lectin-carbohydrate interaction in the immune system // Veterinary Immunology and Immunopathology, 1996. V. 55. P. 205-223.

100. Nielsen S.L., Andersen P.L., Koch C., Jensenius J.C., Thiel S. The level of the serum opsonin, mannan-binding protein in HTV-1 antibody-positive patients // Clin. Exp. Immunol., 1995. V. 100. P. 219-292.

101. Nonaka M., Azumi K. Opsonic complement system of the solitary ascidian, Halocynthia roretzi II Dev. Comp. Immunol., 1999. V. 23. №4-5. P. 421-427.

102. Norgaard-Pedersen B., Toftager-Larsen K., Philip J. Concanavallin A reactivity pattern of human amniotic fluid AFP examined by crossed affinoimmunoelectrophoresis. A define test for neural tube defect // Clin. Genet., 1980. V.17. № 5. P.355-362.

103. Ohta M., Kawasaki T. Complement-dependent cytotoxic activity of serum mannan- binding protein towards mammalian cells with surface expozed hight mannose type glycans // Glycoconjugate Journal, 1994. V. 11. P. 304-308.

104. Ozeki Y., Matsui T., Suzuki M., Titani K. Amino acid sequence and molecular characterization of a D-galactoside-specific lectin purified from sea urchin {Anthocidarus crassispina) eggs // Biochemistry, 1991. V. 30, P. 23912394.

105. Ozeki Y., Yokota Y., Kato K.H., Titani K., Matsui T. Developmental expression of D-galactoside-binding lectin in sea urchin (Anthocidarus crassispina) eggs // Experimental Cell Resarch, 1995. V. 216. P. 318-324.

106. Petersen S.V., Thiel S., Jensenius J.C. The mannan-binding lectin pathway of complement activation: biology and disease association // Molecular immunology, 2001. V. 38. P.133-149.

107. Powell L.D., Varki A. I-type lectins // J. Biol. Chem. 1995, V. 270. № 24. P. 14243-14246.

108. Regan L J., Dodd J., Barondes S.H., Jessel T.M. Selective expression of endogenous lactose-binding lectins and lactoseries clycoconjugatesin subset of rat sensory neurons.// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1986. V. 84. P. 2248-2252.

109. Rini J.M. Lectin structure // Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 1995. V. 24. P. 551-577.

110. Ruoslanti E., Piersbacher M.D. New aspects in cell adhesion, RGD and integrins. // Science, 1987. V. 238. P. 491-495.

111. Sato T., Endo Y., Matsushita M., Fujita T. Molecular characterisation of a novel serine-protease involved in activation of the complement system by mannose-binding protein // International immunology, 1994. V. 6. № 4. P. 665669.

112. Scheriff S., Chang C.Y., Ezekowitz R.A. Human mannose-binding protein carbohydrate recognition domain trimerizes through a triple alpha-helical coiled-coil. //Natl. Struct. Biol., 1994. V.l. P. 789-794.

113. Sharon N., Lis H. Lectins as cell recognition molecules // Science, 1989. V. 246. P. 227-234.

114. Simpson A., Smithers S. Characterisation of the exposed carbohydrates on the surfaces membrane of adult Shistosoma mansoni by analysis of lectin binding // Parasitol., 1980. V. 81. № 1. P. 1-15.

115. Simpson D., Torne D., Loh H. Lectins: endogenous carbohydrate-binding proteins from vertebrate tissues. Functional role in recognition process? // Life Sci., 1978. V. 22. № 9. P. 727-748.

116. Smiley S. Holothurioidaea // Microscopic Anatomy of Invertebrates / Eds. Harrison F.W. and Chia F.S. New York: Wiley-Liss, 1994. V. 14. P. 401-472.

117. Smith L.C., Shih C-H., Dachenhausen S.G. Coelomocytes express SpBf, a homologue of factor B, the second component in the sea urchin complement system. // J. Immunology, 1998. V. 161. 6784-6793

118. Smith V.J. The Echinoderms // Invertebrate Blood Cells. London: Academic Press, 1981. P. 513-562.

119. Stabili L., Pagliara P., Netragolo M., Canicatti C. Comparative aspects of Echinoidea cytolysins // Comp. Biochem. Physiol., 1992. V. 1013. № 3. P. 553556.

120. Tennet G.A., Lovat L.B., Pepys M.B. Serum amyloid P-component prevents proteolysis of the amyloid fibers of alzheimer disease and amyloidoses // Proc. Natl. Acad . Sci. MSA, 1993. V. 92. P. 1299-1303.

121. Terai I., Kobayashi K. Prenatal changes in serum marmose binding protein (MBP) levels // Immunological Letters, 1993. V. 38. № 3. P. 185-187.

122. Thiel S., Holmskov U., Hviid L., Laursen S.B., Jensenius J.C. The concentration of the C-type lectin, mannan-binding protein in human plasma increases during an acute phase response. // Clin. Exp. Immunol., 1992. V. 90. P. 31-35.

123. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979. V. 76. P. 4350-4360.

124. Uemura K., Yokota Y., Kozutsumi Y., Kawasaki T. A unique CD glycoform recognized by the serum mannan-binding protein in immature thymocytes // J. Biol. Chem., 1996. V. 271. P. 4581-4584.

125. Umetsu K., Yamashita K., Suzuki J., Yamashita T., Suzuki T. Purification and characterisation of N-acethyllactosamine-specific lectin from larvae of moth, Phalera flavescens II Archives of Biochemistry and Biophysics, 1993. V. 301. № 1. P. 200-205.

126. Vandermulen D.L., Prasad V.V.T.S., Moskal J.R. The identification of glioblastoma-associated, fucose-containing glycoproteins induced by retinoic acid // Molecular and Chemical Neuropathology, 1994. V.21. № 2-3. P. 311327.

127. Veno P.A., Strumski M.A., Kinsey W. H. // Dev.Growth Differ., 1990. V. 32. P. 315-319.

128. Wallis R., Drickamer K Assymmetry adjanced to the collagen-like domain in rat liver // J. Biochem., 325 (1997) 391-400.

129. Weis W.I., Drickamer K., Hendrikson W.A. Structure of a C-tvpe mannose-binding protein complexed with an oligosaccharide.// Nature, 1992. V.360. P. 127-134.

130. Ying S.C., Gewurts A.T., Jiang H., Gewurts H. Human amyloid P-componemt oligomers bind and activate the classical complement pathway via residues 14-26 and 76-92 of the A-chain collagen-like region of Clq // J. Immunol., 1993. V. 150. P. 169-1976.

131. Yui M.A., Bayne CJ. Echinoderm immunology: bacterial clearance by the sea urchin Strongilocentrotus purpuratus II Biol. Bull., 1983. V. 165. № 2. P. 473-486.