Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Люминесцентно-гистохимическое исследование биоаминного обеспечения репродуктивной функции мужчин и женщин в условиях экстракорпорального оплодотворения

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Люминесцентно-гистохимическое исследование биоаминного обеспечения репродуктивной функции мужчин и женщин в условиях экстракорпорального оплодотворения"

Любовцева Евгения Вячеславовна

\

Люминесцентно-гистохимическое исследование бноаминного обеспечения репродуктивной функции мужчин и женщин в условиях экстракорпорального оплодотворения

Специальности 09 00 25 - Цитология, гистология, клеточная биология 14 00 01 - Акушерство и гинекология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 2005

Работа выполнена на кафедре цитологии, эмбриологии, гистологии Чувашского государственного университета им И Н Ульянова

Научные руководители:

член-корр. РАМН,

Доктор медицинских наук, профессор С.Л.Кузнецов Кандидат медицинских наук, доцент Т.Ю. Гурская

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ, академик РАЕН, Доктор медицинских наук, профессор В.Н. Швалев Доктор медицинских наук, профессор О.В.Ерустовская

Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет

Защита состоится « » А/О л су)-?___ 2005 г. в ^Г часов

на заседании Диссертационного Совета Д 212.203.08 в Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

Автореферат разослан « ' » ^ * 2005 г

Ученый секретарь Диссертациолнного совета, Кандидат биологических наук

О.Б. Саврова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Морфология половых клеток-сперматозоидов и яйцеклеток в настоящее время хорошо изучена. Однако их физиологические аспекты изучены не до конца. Особенно это касается влияния некоторых биогенных аминов (БА), на способность клеток к оплодотворению. БА впервые были обнаружены у низших беспозвоночных. Нейромедиаторные БА- это вещества, выполняющие роль химических посредников в процессах синаптической передачи. БА, действуя одновременно как медиаторы и как местные гормоны, обладают широким спектром биологических эффектов (Гордон Д.С. с соав.,1982). На сегодня есть прямые доказательства участия аминов в регуляции морфогенеза у организмов разного уровня организации. В раннем пренатальном периоде они посредством механизмов объемной передачи выполняют, в основном, роль индукторов цито- и гистогенеза, а в последующем участвуют в организации адаптивных и деструктивных процессов (Гущин Г. В., 1990). В настоящее время значительно увеличилось число больных с заболеваниями половой сферы (Гунин А.Г., 1996), иммунной системы (Корнева Е.А. с соав.1988), органов кроветворения (Озе-рецковский H.A. с соав, 1967). По данным ВОЗ среди существующих семей около 15% не имеют детей. Принято считать, что частота мужского бесплодия составляет 10-15% случаев, а в сочетании с бесплодием у жены - 30-40% случаев.

В терапии бесплодия используется экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) с 1978 года. В России ЭКО и перенос эмбриона в полость матки впервые были выполнены в научном центре акушерства, гинекологии и перинаталогии РАМН. Однако, по данным (Васильченко Г.С., 1990; Шаров A.A., 1999) в оплодотворении и последующей нормально протекающей беременности немаловажную роль играют БА. Б А присутствуют на самых ранних этапах эмбриогенеза, но в половых клетках человека эти вещества ранее не изучались. В связи с чем для выяснения влияния нейромедиаторов на оплодотворяющую способность клеток репродуктивной системы было необходимо выявить содержат ли половые клетки человека эти вещества. Кроме ТОГО, неизвестно, ВЛИЯЮТ ЛИ пяыные ИР1ЩР.Г.7-ИЯ нд fipppMPH-

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯi БИБЛИОТЕКА I С.Петер<и>г О» ш-

«mbmmhmOI *

ность, и как это отражается на форменных элементах крови и слизи цервикального канала женщин при нормально протекающей беременности и с признаками угрозы прерывания.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящего исследования является изучение содержания биогенных аминов (БА) в элементах спермы и фолликулярной жидкости, а также крови и слизи цервикального канала и способностью к оплодотворению и вынашиванию беременности.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Выявить локализацию и количественное содержание кате-холаминов (КА), серотонина, гистамина, гликозоаминогликанов, моноаминоксидазы (МАО) в сперме и фолликулярной жидкости до зачатия

2. Определить серотониновый индекс и соотносительные коэффициенты (КА/С, КА/Г, С/Г) между разными биогенными аминами (БАВ) в сперме и фолликулярной жидкости, выявляющие способность к оплодотворению.

3. Сравнить количественное содержание БА в элементах слизи цервикального канала женщин в разные триместры с нормально протекающей беременностью и с угрозой ее прерывания

4. Сравнить количественное содержание БА в элементах крови женщин в разные триместры с нормально протекающей беременностью и с угрозой ее прерывания.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые определена локализация биогенных аминов в семенной и фолликулярной жидкости человека изучаемыми методами.

Выявлена зависимость оплодотворяющей способности половых клеток от соотношения в них биогенных аминов.

Исследована локализация биогенных аминов в форменных элементах крови и слизи цервикального канала в разные триме-

"¡и» 4

ц. . • - , "I-

стры с нормально протекающей беременностью и с угрозой ее прерывания

Выявлены коррелляционные взаимосвязи БА и серотонино-вый индекс в элементах крови и слизи цервикального канала в разные триместры с нормально протекающей беременностью и с угрозой ее прерывания

Практическая ценность работы. Результаты диссертационного исследования позволяют выявить связь между содержанием БА в семенной и фолликулярной жидкости и способностью к оплодотворению. Кроме того, по содержанию БА в форменных элементах крови и слизи цервикального канала можно прогнозировать способность к вынашиванию плода и угрозе прерывания беременности. Эти данные могут быть использованы в комплексной диагностике женского и мужского бесплодия в клиниках, где применяют метод ЭКО.

Объем и структура диссертации. Диссертационный материал изложен на 108 страницах и состоит из введения (3 страниц), обзора литературы (21 страница), материала и методов исследования (5 страниц), двух разделов исследований (48 страниц), обсуждения результатов (8 страниц), выводов (1 страница) и списка цитируемой литературы (12 страниц). Работа иллюстрирована 14 таблицами и 26 рисунками. Список литературы содержит 101 отечественных и 50 иностранных источников. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

Апробация работы. Результаты исследований изложены в тезисах докладов к научно-практической конференции (Студент и научно-технический прогресс, Новосибирск, 1999), в международной конференции по иммунологии (Эйлат, Израиль, 2000), в областной конференции "Актуальные проблемы диагностики и лечения в клинике внутренних болезней" (г. Чебоксары, 2000), в VIII интернациональном Международном конгрессе "Allergy, Immunology and Global Network".(Cannes, France, April 21-26, 2002), в XVII Всемирном конгрессе по астме и V Юбилейном съезде иммунологов и аллергологов СНГ. (Санкт-Петербург; 5-11 июля 2003),. в научно-практической конференции, (Чебоксары, 2003), во Всероссийской конференции: Бабухинские чте-

ния (Орел, 2005), на 1 съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» 19-23 сентября 2005 года.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Сперма, содержащая лимфоциты, нейтрофилы, моноциты более 5 на п.з., а также бластные формы, не способна к оплодотворению 1П vivo. В этом случае оплодотворение может произойти в условиях ЭКО с отмытой спермой.

2. Сперма содержит биогенные амины в широких пределах и при исследовании необходимо учитывать не абсолютные цифры, а соотносительные коэффициенты.

3. Сопоставляя абсолютные и относительные коэффициенты в фолликулярной жидкости, можно видеть, что беременность не наступает у женщины, у которых соотносительные цифры КА-Г очень маленькие - равные 0,5; 0,2 и особенно, когда цифры малы во всех исследуемых коэффициентах. В тех случаях, когда не происходит оплодотворение, увеличивается коэффициент серо-тонинового индекса и становится больше 1. В паре серото-нин/КА ведущее положение занимает серотонин. При оплодотворении и в сперме, и в фолликулярной жидкости, а также при нормально протекающей беременности серотониновый индекс или равен единице, или становится меньше 1. В этом случае ведущим Б А являются КА.

4. Наибольшее значение для нормально протекающей беременности имеет начальное содержание гистамина. При пролонгировании беременности его содержание ко второму триместру понижается, а при наличии угрозы прерывания -повышается .

5. У большинства женщин возможно наступление беременности при применении метода экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) с первоначально пониженным содержанием гистамина в форменных элементах крови и слизи цервикального канала, однако часто беременность сопровождается угрозой прерывания.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование спермы и фолликулярной жидкости было проведено на 50 человек. Для выявления БА в сперме были изучены мазки 25 мужчин. Для выявления БА в фолликулярной жидко-

сти, нами было обследованы мазки 25 женщин. Из 25 исследованных женщин беременность наступила у 7 женщин. В дальнейшем, при исследовании слизи цервикального канала и крови, нами дополнительно были обследовано еще 20 женщин, забеременевших с помощью метода ЭКО. Далее 27 женщин были разделены на две группы: первую, составили женщины, которые доносили беременность до конца, вторую, составили женщины, у которых беременность протекала с угрозой прерывания на разных сроках (табл. 1).

Оплодотворение производили с помощью метода ЭКО в перинатальном центре г. Чебоксары. Нами было взято 25 женщин в возрасте от 30 до 40 лет, весом 50-90 кг. С первичным бесплодием было 10 женщин, с вторичным - 15. Критериями отбора женщин для данных исследований были: отсутствие эндокринных нарушений, аллергических процессов и аутоиммунных заболеваний. У многих женщин выявлялись внематочная беременность у 9 (20%), киста яичников у 9 (20%), двурогая матка у 5 (11 %) и у 2 женщин была резекция обоих яичников, в 40% определялся эндометриоз. Все женщины в анамнезе перенесли хронические воспалительные заболевания органов малого таза, в результате в 70% наблюдался спаечный процесс в малом тазу, а также многие перенесли инфекции, передающиеся половым путем (хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, трихомонады).

Таблица 1

Общая характеристика обследуемых пациентов

Женщины Беременые Не забеременевшие

Количес!-во 1 1руппа(до 38 нед) 2 группа (с угрозой прерывания) Всего Всего

17 10 27 18

Общее число обследованных мужчин - 25. женщин 45

В процессе решения поставленных задач использовались следующие методы:

I. Общая окраска железным гематоксилином. Окрашивали мазки спермы и фолликулярной жидкости для распознавания исследуемых структур.

2. С помощью окраски по Романовскому - Гимза - окрашивали мазки крови для подсчета лейкоцитарной формулы и выявления форменных элементов в слизи цервикального канала.

3. Газовый люминесцентно-гистохимический метод Кросса с соав., (1971) для выявления тканевого гистамина.

4. Люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа в модификации Е.М. Крохиной, ГШ. Александрова (1969) для избирательного выявления: катехоламинов (КА) и серотонина.

5. Метод спектрофлуориметрии использовался для количественного измерения содержания серотонина, КА и гистамина в сперме и фолликулярной жидкости, а также в элементах крови и слизи цервикального канала беременных и женщин вне беременности. Количественное измерение веществ в препарате проводили на люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ - 4 с применением фотометрической насадки ФМЭЛ-1А. Для определения гистамина служил интерференционный фильтр 7 (515 нм), катехоламинов - 6 (480 нм), серотонина - (525 нм). Наблюдение велось при напряжении 900 вольт с зондом 0,5. Показания снимались с измерительной части усилителя вольтметра в условных единицах (у.е.) (Карнаухов В.Н., 1978).

6. Гепарин и гликозоаминогликаны определяли путем покраски препарата полихромным толуидиновым синим по А. Unna.

7. Исследование моноаминоксидазы (МАО) по Гленнеру

(Лойда 3. с соав., 1982) проводили для определения активности ферментативного расщепления биогенных аминов в изучаемых структурах.

8. Корреляционный анализ проводили для установления взаимосвязи между БА в изучаемых структурах. Сильная положительная корреляционная связь (более 0,5) означает повышение концентрации каждого БА в корреляционой паре, по-видимому, связанное с определенным естественным фактором регуляции. Отрицательная корреляционная указывает, что содержание одного БА возрастает при убывании другого.

9. Вычесление серотониного индекса осуществлялось для стабилизации полученных результатов, а также для определения ведущей роли определенного БА в конкретной ситуации. Соот-

ношение серотонина и КА принято называть серотониновым индексом (Is). Когда Is больше единицы, можно говорить о преобладании в структуре серотонина. Ясли серотониновый индекс меньше единицы, то в структуре преобладают КА.

10.Статистическую обработку материала производили с помощью персонального компьютера Pentium 200 ММХ с использованием стандартного пакета программ. Оплодотворение производили in vitro на отмытой сперме. Через 16 часов под микроскопом МБС определяли по пронуклеосам степень оплодотворения, т.е. по проникновению сперматозоида (одного или двух) в яйцеклетку.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование биогенных аминов (БА) в сперме человека. При окраске спермы железным гематоксилином и без окраски с опущенным конденсором под световым микроскопом в 24% исследуемой сперме были видны признаки воспаления не только семенника, но и придатков семенника. В ней встречались сперматозоиды разного размера, сперматоциты 1 и 2 порядка, измененные сперматозоиды, бластные формы клеток, лимфоциты -иногда до 5 на одно поле зрения, нейтрофилы и моноциты. Кристаллы Беттхера считаются структурами простаты, также как и простатические шары, в части мазков спермы они присутствовали и выявлялись только при опущенном конденсоре, т.к. при этой окраске не определялись.

При исследовании мазков спермы на гистамин мы наблюдали не равномерность свечения этих клеток. Содержание гис-тамина колебалось от 7 до 27 у.е. Причем, у мужчин, сперма которых оплодотворила яйцеклетки, эти цифры колебались от 7 до 16. У мужчин, сперма которых не вызывала оплодотворение яйцеклетки, содержание гистамина колебались от 14 до 27, и также предел колебаний этого вещества был большим. Наиболее интенсивно люминесцировали головки сперматозоидов, а наибольшие цифры содержания этого диамина наблюдались в акро-соме. Молодые клетки имели меньшее содержание этого диамина, чем дифференцированные клетки. Иногда люминесцировали

разные формы нейтрофилов. В лимфоцитах люминесцировали только ядра. Чем больше в препарате было лимфоцитов, тем больше мазок содержал гистамина. В моноцитах гистамин определялся в основном в цитоплазме.

В части мазков спермы встречались ярко люминесцирую-щие гранулы тучных клеток, единично встречались сами тучные клетки, в которых содержание гистамина было очень высоким. Кристаллы Бетгхера с высоким содержанием гистамина светились равномерно. Чаще всего они определялись в виде отдельных групп и даже в центре имели образование похожее на темное, маленькое ядро. Их размеры превышали сперматозоид в несколько десятков раз. В некоторых мазках спермы встречались мелкие образования, которые клетками обозначить нельзя, т.к. они не имели ядра и состояли из 2 - 3 гранул разного размера, светящихся темно-желтым цветом. Можно допустить, что это белковые образования, взявшие на себя функции адсорбентов БА или же это гранулы разрушенных клеток АПУД-системы.

При исследовании спермы на катехоламины (КА) и серо-

тонин мы наблюдали, что наиболее интенсивно люминесцировали головки сперматозоидов. Очень часто сильной люминесценцией обладали не созревшие клетки. Эти клетки имели большие размеры, содержание серотонина в них было меньше, чем в сперматозоидах, а КА по-разному Содержание КА в сперме мужчин колебалось от 5 до 24,8 у.е. Содержание серотонина в сперме человека также имеет очень широкий диапазон колебаний от 5 до 26 у.е. В нейтрофилах в цитоплазме содержание КА и серотонина было несколько больше, чем в фоновом свечении массы сперматозоидов. В лимфоцитах КА и серотонин выявлялся только в ядре, в моноцитах - в цитоплазме.

Таблица 2

Содержание БА в сперме мужчин, женщины которых забеременели

Гистамин Серотонин КА Среднее

БА в у.е 12,1 ±0,01 9 ±0,01 6,8 ±0,01 27,9 ± 0,05

Таблица 3

Содержание БЛ в сперме мужчин, женщины которых не забеременели

Гистамин Серотонин КА Среднее

БА в у е 18 ±0,02 12,4 ± 0,03 5,7 ± 0,02 36,1 ±0,06

В мазках спермы встречались ярко люминесцирующие тучные клетки и их гранулы, в которых содержание КА было очень высоким. В Кристаллах Беттхера содержание КА было несколько выше фонового свечения, серотонин не выявлялся вовсе. Кроме того, определялись разнокалиберные люминесцирующие округлые гранулы от 0,1 до 0,5 мкм.

В сперме, при сравнении 2 и 3 таблиц, можно заметить, что первоначальное содержание БА в изучаемых группах разное. По содержанию гистамина эти группы различаются в 1,5 раза. По содержанию серотонина: в сперме вызывающей оплодотворение его на 30 % меньше, чем в противоположной группе. Содержание КА в первой группе ниже, чем во второй. Общее содержание БА в сперме вызвавшей оплодотворение составило 27,9 + 0,05 у.е., а в группе не вызвавшей оплодотворение было равно 36,1 + 0,05 у.е. Сперма не способная к оплодотворению имеет этот показатель выше. Нами подсчитано, что в 67%, сперма, содержащая БА в повышенном количестве, не оплодотворяла яйцеклетки, или же оплодотворение осуществлялось не одним сперматозоидом.

Так как у человека существуют большие колебания в содержании БА в сперме, для ее характеристики мы брали не абсолютные цифры, а отношение разных медиаторов друг к ДРУГУ- Выявленные соотносительные коэффициенты у разных людей оказались сходными.

При исследовании спермы на соотносительные коэффициенты (коррелляционный анализ) мы обнаружили, что в сперме, вызывающей оплодотворение в паре КА-С он варьирует в пределах от 0,5 до 0,9. Коэффициент 0,5 выявлен в единичном варианте при оплодотворении 2 яйцеклеток (табл.4, 5). В сперме, с помощью которой зачатие не происходило, этот коэффициент находится в пределах от 0,75 до 1,4. В 53% этот коэффициент находится в пределах от 0,95 до 1,4, чего нет в

сперме, способствующей оплодотворению. В паре КА - Г в сперме, способной вызвать зачатие, этот коэффициент равен от 0,5 до 3,3, в очень широких пределах. В сперме, не способной вызвать оплодотворение, этот коэффициент варьировал от 0,01 до 1,7, имея или ничтожно малые цифры, или цифры не превышающие 1,7 (см. табл. 3, 4). И, наконец, в паре С-Г в здоровой сперме этот коэффициент равен от 0,8 до 4,6. В сперме, не способной вызвать оплодотворение, этот коэффициент был равен от 0,1 до 2, и не превышал эту цифру. Кроме того, имеет значение и соотношение этих коэффициентов.

Таблица 4

Соотносительные коэффициенты содержания БА в сперме человека, способствующей зачатию

Название структур Порядковый номер мужчин, от спермы которой произошло оплодотворение

2 5 9 17 19 25 Среднее

КА/С 0,7 0,78 0,8 0,9 0,5 0,85 0,75

КА/Г" 3,3 0,8 0,7 0,9 1,7 0,5 1,3

С/Г 4,6 1,2 0,8 1,2 4,6 0,84 2,2

Сумма 8,6 2,78 2,3 3 6,8 2,2 4,25

При рассмотрении средней величины коэффициентов по горизонтали оказалось, что у мужчин, женщины которых забеременели соотношении КА-С равно 0,75. При отсутствии беременности он в этой паре равен 0,93. В паре КА-Г в первом случае он равен 1,3, а во втором - 0,72. В паре С-Г при беременности средний коэффициент равен 2,2, в противоположном случае- 1,76. Таким образом, в первом случае сумма коэффициентов равна 4,25, во втором - только 3,4.

При изучении всех соотносительных коэффициентов в сперме (рис. 3) можно видеть зону перекрывания, где сперма, с участием которой произошло или не произошло оплодотворение имеет одинаковые значения. Для КА/С эта зона находится пределах от 0,75 до 0,9, для КА/Г - от 0,5 до 1,7 и для С/Г - от 0,8 до 2.

При исследовании мазков семенной жидкости на моноами-ноксидазу (МАО) выявилось, что этот фермент определяется как в головке сперматозоида, так и в хвостике. Гранулы форма-

зана в цитоплазме головки были мелкими, располагались около цитолеммы, а в хвостике они располагались в виде 4-5 удлиненных гранул темного, почти черного цвета и все вместе имели вид разорванной длинной цепочки. Кристаллы Бетгхера не окрашивались. В лимфоцитах гранулы (от 16 до 22) располагались по периферии цитоплазмы, а в клетках сперматогенного эпителия МАО содержалось ближе к ядру в количестве 7-10 гранул в одном поле зрения при увеличении 10 на 40. Нейтрофилы содержали мелкие гранулы в цитоплазме, распределенные по всей цитоплазме равномерно.

Таблица 5

Соотносительные коэффициенты содержание БА в сперме человека, не способствующей зачатию

Соотносит, коэфф Порядковый номер мужчин, от спермы которых не произошло оплодотворение

6 7 8 10 12 14 16 18 19 20 21 22 23 24 Среднее

КА/С 0,75 0,8 0,8 1 0,9 1,4 1 0,8 1 0,9 1 1 0,85 0,85 0,93

КА/Г 1,5 1,1 0,7 0,4 0,5 0,9 1,7 0,7 0,5 0,01 0,6 0,25 2,4 0,15 0,72

С/Г 2 1,6 0,8 0,4 0,5 0,6 1,7 0,6 0,4 0,06 1 0,2 2,8 0 ">.5 1,76

Сумма 4,25 3,3 2,3 1,8 1,9 2,9 4,4 2,1 1,9 0,97 2,6 1,45 6 1,25 3,41

0 2 4 6 8

Рис 1 Диаграмма зон перекрывания соотносительных коэффициентов в сперме человека 1-й столбец - коэффициент С/Г 2-столбец коэффициент КА/Г 3- й столбец коэффициент КА/С Начало синего и конец бордового цвета это граница соотносительного коэффициента спермы, с участием которой беременность не наступила Бордовый цвет означает область перекрывания соотносительных коэффициентов Начало бордового и конец желтого ьто граница соотносительных коэффициентов спермы, с участием которой беременность наступила.

При исследовании локализации гепарина в сперматозоидах человека, было выявлено, чго наиболее интенсивная окраска наблюдалась в головках сперматозоидов. Зрелые сперматозоиды содержат зрелый гепарин в малой концентрации. Нейтрофилы, моноциты и лимфоциты не содержали зрелого гепарина, за исключением нейтрофилов, где в цитоплазме наблюдалась слабая метахромазия. Кристаллы Беттхера не окрашивались совсем, определялись в лучах проходящего света при опущенном кон-денсере.

Серотониновый индекс. При исследовании серотонинового индекса, можно видеть, что в сперме с участием которой произошло оплодотворение он ниже 1, равен 0,9. Ведущим БА этой пары являются КА, а при не оплодотворении серотониновый индекс равен единице, т.е. взаимодействие КА и серотонина равноценно.

Результаты исследования БА в фолликулярной жидкости. При исследовании гистамина, можно видеть, что свечение фолликулярной жидкости большинства женщин было равномерным, без каких-либо видимых структур. Однако, у некоторых из исследованных, встречались фолликулярные клетки, иногда на общем фоне, имелась древообразная, интенсивно люминесци-рующая сеточка, выявлялись структуры, похожие на кристаллы Беттхера, определялись лимфоциты и нейтрофилы.

При исследование КА и серотонина, свечение фолликулярной жидкости, у большинства женщин также было равномерное, но у некоторых из исследованных мазок разделялся на геометрические фигуры, каждая такая фигура имела свой уровень БА. В отдельных сегментах находились фолликулярные клетки, у многих, - на общем фоне имелась древообразная, интенсивно люминесцирующая сеточка. Иногда определялись единичные желтые гранулы, лимфоциты, нейтрофилы, моноциты, цитоплазма которых люминесцировала ярче общего фона (табл. 6). При исследовании углеводов, отмечалось интенсивное синие окрашивание с легкой метахромазией, что по условиям метода предполагает присутствие небольшого количества зрелого (сульфатированного) гепарина. Встречающиеся нейтрофилы также имели слабо метахроматичную цитоплазму.

Таблица 6

Абсолютные цифры содержания БА в фолликулярной жидкости _с оплодотворенными яйцеклетками_

Название веществ Порядковый номер женщин, яйцеклетки которых оплодотворились

5 9 10 16 18 24 Среди

Катехоламины 1,3 1 2 3 8 5,5 3,5

Серотонин 1,6 1,0 5,0 4,3 1,7 6,3 3,3

Гистамин 6,0 6,0 7,0 4,0 7,4 8,8 6,5

Общая сумма БА 8,9 8,0 14,0 11,3 17,1 20,6 13,3

Таблица 7

Абсолютные цифры содержания БА в фолликулярной жидкости ___не оплодотворенных яйцеклеток_

Название биоаминов Порядковый номер не оплодотворенных яйцеклеток

6 7 8 11 12 13 14 15 17 19 20 21 22 23 25

КА 5 3 3,0 1 7 2,4 2,5 5,0 1,4 1,3 4,8 5,0 5 3,4 2

Серотонин 7,0 4 5,0 2 7,5 3,0 2,5 5,5 1,7 2,7 5,0 5,5 7 4,0 2,0

Гистамин 4,0 2 1,5 5 6,5 8,4 3,0 4,0 3,0 5,5 5,0 5,0 6 5,3 3,4

Сумма БА 16 9 9,5 8 21 14,8 8,0 14,5 6,1 9,5 14,8 15,5 1,8 13 7,4

Таблица 8

Соотносительные коэффициенты содержания БА в фолликулярной жидкости с оплодотворенными яйцеклетками_

Соотносительный коэффициент Порядковый номер женщин

5 9 10 16 18 24 Среди

КА/С 0,8 1 0,36 0,98 0,5* 0,83 0,75

КА/Г 1,6 2,5 0,23 0,8 1,1* 0,63* 1,14

С/Г 2 0,4 0,63 0,8 2,3* 0,75 1,14

Общая сумма 4,4 3,9 1,2 2,6 3,9 2,2 3,03

Примечание * оплодотворена не одна яйцеклетка

Таблица 9

Соотносительные коэффициенты содержания КА/С, КА/Г, С/Г в фолликулярной жидкости с не оплодотворенными яйцеклетками_

Соотносит коэфф Порядковый номер не беременных женщин

6 7 8 11 12 13 14 15 17 19 20 21 22 23 25 Среднее

КА/С 0,7 0,7 0,6 0,5 0,9 0,8 1 0,9 0,8 0,5 1 0,9 0,7 0,8 1 0,75

КА/Г 1,2 1,5 2 0,2 1 0,3 0,8 1,2 0,5 0,2 1 1 0,8 0,6 0,4 0,85

С/Г 1,7 2 3,3 0,4 1 0,3 0,8 1,3 0,6 1 1 1 1 0,7 0,7 1,12

Среднее 3,6 4,2 5,9 1,1 2,9 1,4 2,6 3,4 1,9 1,7 3 3 2,6 2,1 2,1 2,72

Сопоставляя абсолютные и соотносительные коэффициенты можно видеть, что в фолликулярной жидкости с не оплодотворенными яйцеклетками имеются очень маленькие соотносительные коэффициенты КА-Г - равные 0,5; 0,2. Оплодотворения не происходит, когда цифры малы во всех исследуемых параметрах Таких всего 15%. В большинстве яйцеклеток могло бы быть оплодотворение, однако его не произошло. Это еще раз подтверждает, что в этом процессе многое зависит от состава спермы. Однако можно видеть, что в фолликулярной жидкости только соотношение КА/Г дают показателя оплодотворяющей ее способности. В первой группе это соотношение выше (1,14), чем во второй (0,85).

Серотониновый индекс. При исследовании серотонинового индекса в фолликулярной жидкости, обладающей способностью к оплодотворению, он равен 0,95. В этом случае можно говорить, что ведущим Б А в данном случае являются КА. В том случае, если фолликулярная жидкость не обладает способностью к оплодотворению, индекс равен 1,3. По условиям метода в этой паре ведущим оказывается серотонин, который и здесь проявляет свои супрессивные свойства.

Исследование биогенных аминов в слизи цервикального канала беременных. Во второй части нашего исследования, мы изучали изменение биоаминного статуса элементов слизи цервикального канала у женщин, с нормально протекающей беременностью и с угрозой ее прерывания. Вследствие чего, дополнительно, мы исследовали еще 20 женщин, у которых беременность наступила в результате ЭКО, но уже у их мужей сперму не анализировали.

Методом Ромаиовского-Гимзы было выявлено, что в слизи цервикального канала содержатся эпителиальные клетки, в небольшом числе определяются эритроциты, лейкоциты, белковые тельца, моноциты и лимфоциты.

Исследуя содержание гистамина в слизи цервикального канала с нормально протекающей беременностью было выявлено, что наибольшие изменения в содержании БА мы наблюдали в поли-морфоядерных лейкоцитах (ПМЯ). У женщин с доношенной беременностью в первом триместре набольшее содержание гистамина в ПМЯ-лейкоцитах было равно 20 у.е. В середине беремен-

ности содержание гистамина имеет тенденцию к уменьшению до 18,5 у.е., в третьем триместре его количество уменьшается на 6 единиц по сравнению с первоначальными данными (табл. 10).

Содержание серотонина в ПМЯ-лейкоцитах с нормально протекающей беременностью в 1 триместре было равно 9,5 у.е., ко 2 триместру его содержание увеличивается на 2,5 единицы, а к 3 триместру снова приближается к исходному уровню, однако оставался ниже на 1,5 у.е. Содержание КА во всех трех триместрах незначительно колеблется около одного уровня. Его содержание было наименьшим из всех изучаемых БА (табл. 10).

Содержание гистамина в слизи цервикального канала с угрозой прерывания беременности во 2-м триместре (13 недель) в ПМЯ-лейкоцитах было снижено по сравнению с контрольной группой. К концу 27 недели беременности содержание гистамина возросло как по сравнению с группой контроля, так и по сравнению с первым триместром (7 недель) этой группы. По сравнению с контрольной группой содержание гистамина не снижается, а резко увеличивается с 16 до 30 у.е. (табл. 10).

Первоначальное содержание серотонина было уже несколько повышено по сравнению с таковым контрольной группы. К 13 неделям содержание серотонина в ПМЯ-лейкоцитах резко снижается, а к третьему триместру (27 недель) повышается по сравнению со вторым триместром, но понижается по сравнению с первым триместром (7 недель) как и в контрольной группе с нормально протекающей беременностью. Во втором триместре у исследуемых групп содержание серотонина имеют прямо противоположное содержание этого амина.

Содержание гепарина в слизи цервикального канала при нормально протекающей беременности в третьем триместре увеличивается. Зрелый гепарин появляется в сегментоядерных нейтрофилах. В случае с угрозой прерывания беременности зрелый гепарин в мазке слизи цервикапьной канала отсутствует. Однако, он увеличивается в цитоплазме лимфоцитов и моноцитов. По данным Любовцевой Л.А. (1993), усиление метахрома-зии говорит о бластгрансформации лимфоцитов. Бласттранс-формация, как известно, это результат иммунологической реакции немедленного типа. Можно предположительно говорить о возникшем иммунном конфликте в плаценте.

' Таблица 10

Динамика БА в ПМЯ-лейкоцитах слизи цервикального канала женщин с нормально протекающей беременностью и с угрозой прерывания

IА группа 1 В группа

С нормально протекающей С уфозой прерывания

Название беременностью беременности

веществ (у.е) Триместры Триместры

1 2 3 1 (7 нед.) 2 (13 нед.) 3 (27 нед.)

Гистамин 20± 2 18,5 ± 2 13,5 ±0,6 16 ± 2 12 ± 2 30 ±3

Серотонин 9,5± 1 12 ± 2 8 ±0,7 10,5 ± 1 3 ± 0,004* 9 + 0,6

КА 4 ±0,1 4 ±0,2 4 ±0,2 5 ±0,4 6 ±0,1 6 ±0,1

Примечание' ± обозначено амплитуда колебаний цифровых значений

При исследовании корреляционных взаимодействий между КА/С, КА/Г и С/Г в ПМЯ лейкоцитах слизи цервикального канала нами обнаружено, что у женщин 1 группы не очень сильная связь между КА и серотонином (0,5), а также между серото-нином и гистамином (0,6) возникает только в 3 триместре. В случае с угрозой прерывания беременности очень сильная (2) связь возникает между КА и серотонином уже во 2 триместре к 13 неделям. Вполне возможно, что эта связь говорит именно об угрозе прерывания беременности. К 27 неделям периода геста-ции эта связь ослабевает и исчезает средняя связь между КА и гистамином.

При изучении серотонинового индекса в ПМЯ-лейкоцитах слизи цервикального канала выявилось, что при доношенной беременности во всех трех триместрах он был больше единицы. В первом триместре был равен 2,4, во-втором - 3, в третьем 2. Во всех триместрах ведущим БА являлся серотонин в изучаемых клетках. При угрозе прерывания беременности серотониновый индексе в ПМЯ-лейкоцитах слизи цервикального канала к 7 неделям был больше 1 и равнялся 2-м. К 13 неделям он упал до 0,5, далее восстановился до 1,5, однако, наступили преждевременные роды.

Исследование крови у женщин с доношенной беременностью и угрозой прерывания. Для правильной оценки содержания БА у беременных женщин в разные триместры, мы исследовали содержание этих веществ у небеременных женщин в по-

стменструальную фазу. Содержание БА в элементах крови в разные фазы менструального цикла отличается. Все элементы крови содержат БА. У небеременных женщин наибольшее содержание гистамина отмечено в тромбоцитах, эозинофилах и нейтрофилах, серотонина - в моноцитах, а КА - в тромбоцитах, эозинофилах, нейтрофилах, лимфоцитах. По содержанию БА в группе исследованных женщин вне беременности не наблюдалось значительных отличий в зависимости от возраста, группы крови, веса. У женщин вне беременности зрелый гепарин в очень малом количестве был отмечен в сегментоядерных нейтрофилах, базофилах и моноцитах.

В группе женщин с нормально протекающей беременностью и ее угрозой общее число лейкоцитов изменялось незначительно.

В группе женщин с нормально протекающей беременностью содержание гистамина в ПМЯ- лейкоцитах крови незначительно уменьшилось во 2 триместре с 15 до 13 у.е. и к концу беременности осталось на том же уровне 13 у.е. Содержание серотонина незначительно увеличилось к третьему триместру. Содержание КА в ПМЯ- лейкоцитах ко второму триместру имело тенденцию к уменьшению (с 7 у.е. до 5 у.е.) и на этом уровне осталось и к третьему триместру. Зрелый гепарин в малом концентрации в виде легкой метахромазии, был отмечен в плазме крови, в сегментоядерных нейтрофилах, базофилах, моноцитах и некоторых лимфоцитах. Появились эозинофилы, имеющие ба-зофильно окрашенные гранулы.

Содержание гистамина в плазме крови в начале беременности было наибольшим (10), во втором триместре, снизилось до 7, а к концу беременности вновь повысилось - до 9 у.е. Содержание серотонина и КА в плазме крови постепенно повышалось до конца срока гистации (табл. 12 ).

У обследованных женщин с нормально протекающей беременностью содержание гистамина в лимфоцитах крови в первом триместре составило 12 у.е., наибольшее по сравнению с другими группами беременных женщин, во 2 триместре снизилось до 10 и в 3 триместре увеличилось до 11. Изменения содержания серотонина имеет тенденцию к понижению во втором

триместре и на таком же уровне остается, а содержание КА имеет тенденцию к незначительному повышению.

Исследование БА в элементах крови у женщин с угрозой прерывания беременности. В этой группе женщин содержание гистамина в ПМЯ лейкоцитах в начале периода гестации (7 недель) было меньшим по сравнению с 1 группой и равнялось 10 у.е., но уже во втором триместре (13 недель) его содержание увеличилось до 15 у.е. и удерживалась на таком уровне до преждевременных родов (27 недель). Содержание серотонина увеличилось ко второму триместру и удерживалось на этом же уровне. Содержание КА резко снижалось к третьему триместру (27 недель) и происходили преждевременные роды (табл. 11).

Таблица 11

Содержание БА в пМЯ- лейкоцитах крови с нормально протекающей беременностью и угрозой прерывания

Название веществ (Ус) I А группа С нормально протекающей беременностью 1 В группа С угрозой прерывания беременности

Триместр Триместр

1 2 3 1 (7 нед ) 2 (13 нед) 3 (27 нед)

Гистамин 15 ± 1 13±1 13±1 10±1 15±1 16+1

Серотонин 6+0,3 6,5±0,5 7± 0,3 6+ 0,5 9+0,4 9,0+ 0,4

КА 7± 0,1 5± 0,2 5± 0,1 7± 0,1 7+0,1 2,5+ 0,1

Примечание- + обозначено амплитуда колебаний цифровых значений

Таблица 12

Содержание биогенных аминов в плазме крови беременных женщин

Название веществ (уе) I группа с нормально протекающей беременностью И группа с угрозой прерывания беременности

Триместр Триместр

1 2 3 1 (7 нед) 2 (13 нед) 3 (27 нед)

Гистамин 10+1 7+ 0,5* 9 ± 0,8* 9+ 0,5 11±0,4* 6+0,5"

Серотонин 5 + 0,02 8 ± 0,02 14 + 0,05 5 + 0,1 15 ±0,2 15 ± 0,1

КА 10 ±0,01 11+0,01 12 ±0,01 10 ±0,01 12+ 1 1,5 ±0,1

Примечание звездочкой обозначены достоверные изменения

В группе с угрозой прерывания беременности содержание гистамина в плазме крови к 7 неделям было равно 9 у.е., к 13 неделям повысилось до 11, а к 27 - снизилось до 6. Содержание серотонина резко возросло уже к 13 неделям с 5 у.е. до 15 и на таком уровне оставалось до 27 недель. В случае если преждевременные роды происходили раньше, например, во втором триместре, то снижение гистамина и КА происходило раньше. Содержание КА возросло ко 2 триместру и далее резко снизилось с 10 до 1,5 у.е.

В группе с угрозой прерывания беременности содержание гистамина в лимфоцитах в первом триместре1 триместре было равно 8 у.е., ко второму 2 триместру увеличилось до 12 у.е., а в конце беременности достигало первоначальных цифр. Содержание серотонина и КА имело тенденцию к незначительному повышению. Содержание гепарина в плазме и форменных элементах крови понижено. В форменных элементах и плазме крови нет зрелого гепарина, за исключением базофилов и некоторых лимфоцитов. В цитоплазме лимфоцитов имеется бета- и гамма-метахромазия. Увеличилось число бластов. В эозинофилах определяются базофильные гранулы. Особенно таких клеток много при прерывании беременности. В этом случае можно говорить об изменении синтеза БА, который доходит, очевидно, до меланина.

Таблица 13

Динамика содержания БА в лифоцитах крови беременных женщин

Название веществ (У е) I группа с нормально протекающей беременностью II группа с угрозой прерывания беременности

Триместр Триместр

1 2 3 1 (7 нед) 2 (13 нед) 3 (27 нед)

Гистамин 12± 0,5 10 ±0,5' 11± 0,5 8± 0,5 12 ± 0,5* 7,5+ 0,5

Сероюнин 5,5 ± 0,5 5 + 0,4 5 ±0,4 5,5 ±0,5 6 ±0,4 6 ±0,4

КА 1,7 ±0,01 1,8 ±0,01 2 ±0,01 1,6 ±0,01 2 ±0,01 2,1 ±0,01

При корреляционном анализе содержания БА в ПМЯ-лейкоцитах крови обнаружилось, что средняя коррелля-ционная связь возникает у женщин с нормально протекающей беременностью в 1 триместре между КА/С равная 0,5. Ко 2-му

триместру связь усиливается и на таким уровне 0,7 остается до конца гистации. Очень сильная связь в 1 -м триместре возникает между КА и гистамином равная 1,7. Далее эта связь резко ослабевает, становится слабой и таковой остается до конца беременности. Вначале слабая связь между серотонином и гистамином ко 2-му триместру становится средней и на этом уровне остается до конца гистации.

При угрозе прерывания беременности к 7 недели наиболее »

сильная связь, равная 1 возникает между К А и серотонином. Слабее эта связь равная 0,7. возникает между КА и гистамином. Между серотонином и гистамином возникает средняя связь рав- »

ная 0,6. Далее связь между КА и серотонином ослабевает до 0,8 и к 27 неделям становится очень слабой. Связь между КА и гистамином к 13 неделям ослабевает, и к 27 неделям становится очень слабой равной 0,15. Связь между серотонином и гистамином на протяжении до 27 недель остается средней и стабильной равной 0,6.

Серотониновый индекс в ПМЯ-лейкоцитах крови у женщин с нормально протекающей беременностью в первом триместре он был равен 0,84,т.е.в этом случае в клетках преобладали КА. Во 2-м и 3-м триместрах серотониновый индекс был больше единицы и равнялся 1,3 и 1,4 соответственно. В этом случае мы можем говорить о преобладании в ПМЯ-лейкоцитах крови серо-тонина. При угрозе прерывания беременности серотониновый индекс к 7 и 13 неделям соответствовал 1, а к 27 неделям резко увеличился до 3,8. Это говорит о том, что резко повысилось содержание серотонина в структуре.

Исследуя корреляционные взаимосвязи в лимфоцитах между БА у женщин с нормально протекающей беременностью можно видеть, что сильных связей нет между всеми БА во всех трех триместрах. Средняя положительная связь равная 0,5 возникает во втором триместре между серотонином и гистамином. К третьему триместру эта связь снова ослабевает. У женщин с угрозой прерывания беременности можно видеть, что сильная связь возникает к 7 неделям беременности между серотонином и гистамином, ко второму триместру она становится средней (0,5) и к 27 неделям вновь становится сильной (0,8). Других сильных

и средних связей не возникает на протяжении всего периода беременности вплоть до преждевременных родов.

Серотониновый индекс в лимфоцитах крови у женщин с нормально протекающей беременностью во всех триместрах наблюдается преобладание серотонина, который к третьему триместру несколько уменьшается с 3,1 до 2,5.

У женщин с угрозой прерывания беременности также во всех триместрах в лимфоцитах крови преобладает серотонин, который также к третьему триместру несколько уменьшается с 3,4 в 7 недель, 3 - в 13 недель и к 27 неделям этот индекс снижается до 2,9. Первоначальный индекс при патологии был несколько выше в этих структурах, чем у женщин с нормально протекающей беременностью (3,4 против 3,1).

Корреляционный анализ содержания БА в плазме крови у женщин с нормально протекающей беременностью выявляет, что кроме первого триместра все связи на протяжении всей беременности были очень сильные. В первом триместре связь между серотонином и гистамином была средней, и равнялась 0,5, в дальнейшем эта связь также стала сильной, больше 1.

При угрозой прерывания беременности в плазме крови к 7 и 13 неделям все повторяется с таковыми при нормально протекающей беременностью. Однако, к 27 неделям связь между КА и серотонином и между КА и гистамином становится очень слабой, а связь между серотонином и гистамином усиливается .

Серотониновый индекс в плазме крови при нормально протекающей беременности в 1-м и 2-м триместрах был меньше единицы и равнялся 0,5 и 0,7 соответственно. В этом случае мы можем говорить о преобладании в плазме крови КА. В 3-м триместре он стал больше и равнялся 1,1. Ведущим нейромедиа-тором становится серотонин. При угрозе прерывания беременности серотониновый индекс к 7 неделям равнялся 0,5, т.е. в этом случае в плазме ведущим БА являлись КА, в дальнейшем он вырос до 1,2 и к 27 неделям стал равен 10. В этом случае резко повысилось содержание серотонина.

ВЫВОДЫ:

1. Сперма содержит биогенные амины в широких пределах и при исследовании необходимо учитывать не абсолютные цифры, а соотносительные коэффициенты. Сперма, содержащая: лимфоциты, нейтрофилы, моноциты более 5 на п.з., а также бласт-ные формы клеток, не способна вызвать оплодотворение.

2. В оплодотворяющей сперме коэффициент соотношения в паре КА/С равен от 0,5 до 0,9, в паре КА/Г от 0,5 до 3,3 ив паре С/Г от 0,8 до 4,6. В среднем соотносительный коэффициент КА/С равен 0,75, в паре КА/Г 1,3, и в паре С/Г равен 2,2.

В сперме не способной вызвать оплодотворение этот коэффициент варьировал от КА/С 0,6 до 1, в паре КА/Г от 0,06 до 1,6 и в паре С/Г от 0,4 до 2,3 .имея или ничтожно малые цифры, или цифры не превышающие 1,7. В среднем КА/С равен 0,93, КА/Г 0,72, в паре С/Г равен 1,76. В первом случае сумма коэффициентов равна 4,25, во втором только 3,4.

3. Сопоставление абсолютных и относительных коэффициентов в фолликулярной жидкости свидетельствует о том, что забеременеть не могут женщины, у которых соотносительные цифры КА-Г очень маленькие - равные 0,5; 0,2 и, особенно, когда цифры малы во всех исследуемых коэффициентах Большинство женщин способны забеременность даже с очень большими нарушениями в половой сфере, однако доносить беременность могут не все.

4. При беременности наибольшим изменениям в элементах крови и слизи цервикального канала подвержено содержание гистамина во всех триместрах и в группах беременных женщин как доносивших, так и не доносивших беременность. У женщин, с нормально протекающей беременностью, содержание гистамина во всех изученных элементах крови и слизи цервикального канала ко второму триместру понижается, а у женщин, с угрозой прерывания беременности - повышается. Повышение гистамина в лимфацитах крови совпадает с увеличением их числа в лейкоцитарной формуле.

5. При не оплодотворении и угрозе прерывания беременности в изученных структурах увеличивается коэффициент серо-тониного индекса и становится больше единицы. В паре С/КА ведущее положение занимает серотонин. При нормально проте-

кающей беременности серотониновый индекс или равен единице, или он бывае1 ниже 1. В этом случае ведущим БА является КА.

6. При угрозе прерывания беременности в ПМЯ-лейкоцитах крови резко падает содержание КА и увеличивается содержание гистамина в 2, 3 раза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для выявления способности к оплодотворению можно исследовать соотносительные коэффициенты и сумму биогенных аминов в семенной и фолликулярной жидкости, а также серотониновый индекс..

2. Для выяснения способности женщины выносить беременность можно определять первоначальное содержание гистамина в крови до беременности, а также в первом и начале второго триместров. При не вынашивании эти цифры первоначально меньшие в первом триместре и имеют разнонаправленный характер во втором триместре беременности.

3. При не вынашивании беременности резко падает содержание КА и увеличивается содержание гистамина в 2, 3 раза.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ

1. Любовцева Е.В. Влияние рентгеновского облучения на костномозговое кроветворение. Физика в биологии и медицине. Екатеринбург. 1999 г. С.88.

2. Волков A.B., Глазырина О.С., Григорьева H.H., Любовцева Е.В. Влияние ауто- и гетеропересадки красного костного мозга на локализация биоаминсодержащих структур тимуса, селезенки и костного мозга. Биология. Студент и научно-технический прогресс. Материалы ХХХУ11 международной студенческой конференции. Новосибирск 1999. С.118-119.

3. Любовцева Л.А., Любовцева Е В. Распределение биогенных аминов в тимусе кошек на разных стадиях беременности. Сб. научных трудов "Актуальные проблемы диагностики и лечения в клинике внутренних болезней", г. Чебоксары 2000г С. 44-48.

4. Голубцова Н Н., Гурьянова Е.А, Московский A.B., Любовцева Е.В Влияние толуола и изогенной пересадки костного мозга на био-

аминсодержащие клетки (БА) органов иммунной системы животных и кожи человека. International Journal on Immunorehabihtation. -2001. S 276

5. Golubtsova N.N., Gurjanova E A., Lubovceva E. V., Russov A.V The Influence of Extreme Factors on Biogenic Amines' (BA) Localisation in Ammocontainmg structures of Certain Organs of Animals. VIII International Congress "Allergy, Immunology and Global Network". - Cannes, France, April 21-26, 2002

6. Кузьмин С.П.., Любовцева E.B., Кузьмин О.П., Локализация гистамина в структурах тимуса крыс после экспериментальной затравки природным газом Материалы XVII Всемирного конгресса по астме и V Юбилейного съезда иммунологов и аллергологов СНГ. -Санкт-Петербург; 2003. С. 5-11.

7. Любовцева Е.В., Любовцева Л.А. Локализация биогенных аминов в структурах семенной и фолликулярной жидкостей. Чебоксары // Медицина и научно-технический прогресс. К научно-практической конференции 2004: Сб. статей. С. 212-216.

8. Демиденко Г.М., Любовцева Е.В., Герасимова Л.И., Любовцева Л. А., Шорников A.C. Исследование биогенных аминов крови беременных с урогенетальным хламидиозом (УГХ). Некоторые вопросы теоретической и клинической медицины Межвузовский сборник научных трудов. Саранск. 2005. Вып 3. С.15-18.

9. Любовцев В.Б., Спасова Н.В., Любовцева Е.В Точки акупунк-труры в сохранении здоровья человека. Актуальные проблемы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии. Москва. 2005 С.140-141.

10. Любовцева Е.В. Характеристика нейромедиаторов в семенной жидкости человека. Ретиноиды. Бабухинские чтения в Орле. Москва. 2005. С.123-124.

11. Любовцева Л.А., Любовцева Е.В. Влияние антигенов на локализацию нейромедиаторов в ненервных структурах костного мозга. Бабухинские чтения в Орле. Москва. 2005. С.130-131.

12. Любовцева Е.В, Любобцева Л.А. Микроанализ биологически активных веществ в структурах крови и цервикальной слизи у женщин, доносивших беременность. М Медицина. 2005 г. Научные труды 1 Съезда физиологов СНГ. Т. 1. С. 118-119.

Microanalysis of biologically active substances in Spermatozoons, blood and cervical mucus structures of pregnant women beared at full term

Using luminescent-histochemical techniques of Kross (1971) for histamine and Falk (1969) for catecholamine (KA) and serotonin, blood and cervical mucus of 31 women were examined, these women became pregnant with the help of extracorporal fertilization (ECF), 14 women out of them beared at full term.

Biogenic amines in Spermatozoons are defined in the most quantity in the nuclei and acrosome cells. One to correlative analysis and serotonin index you can calculate the probability for sexual cells fertility in a digree.

Histamine was revealed to be subjected to the greatest changes in all the trimesters in both groups of women who beared at full term and who didn't bear at full term. The most changeable structures in the media studied are polymorphonucleus leukocytes (PMN- leukocytes). In women beared at full term (1 group) the histamine content in PMN-leukocytes of cervical mucus and blood gradually decreases by the third trimester. In women who didn't bear at full term (2 group), the initial histamine level is 1,5 times lower than in the first group. The histamine content in PMN-leukocytes of blood increases in 1,5 times by 13 weeks, by 27 weeks (by the beginning of the third trimester) at preterm delivery the histamine content increases greater and the KA content decreases in 2,5 times. In PMN-leukocytes of cervical mucus the histamine content decreases by 13 weeks and by 27 weeks it increases in 1,8 times. The serotonin content in this case changes as well. By 13 weeks it decreases in 3,2 times and by 27 weeks and by preterm delivery it increases again. The changes in leukocytic formulas in women of the first and the second groups are insignificant and most often keep in the standard range except for lymphocytes rate. The number of lymphocytes both in the first and the second groups gradually decreases and the histamine content in these cells in the second trimester has a differently directed character. In women of the first group the histamine content in lymphocytes tends to decrease and by the third trimester it tends to increase. In women of the second group its content increases by 13 weeks and by the moment of preterm delivery it decreases sharply. At analysis of correlation index in the first group close couplings do not appear till the end of gestation. The average positive coupling appears between KA and serotonin and between serotonin and histamine during the second and the third trimester. In the second group a close coupling appears between KA and serotonin by 13 weeks of embryogenesis which corresponds the miscarriage threat and m the sequel results in preterm delivery.

РНБ Русский фонд

2006-4 15215

Подписано в печать 6.10.05. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать оперативная. Усл. печ. л. 1,62. Тираж 100 экз. Заказ № 628.

Издательство Чувашского университета Типография университета 428015, Чебоксары, Московский просп., 15

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Любовцева, Евгения Вячеславовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1.1. Краткие сведения о гистамине.

1.1.2. Краткие сведения о катехоламинах.

1.1.3. Серотонин и его обмен.

1.1.4. Роль тучных клеток как носителей биогенных аминов.

1.1.5. Гепарин и его функциональная значимость.

1.1.6. Локализация биогенных аминов в крови.

1.2 Мужское бесплодие.

1.2.1 Секреторная форма мужского бесплодия. j 1.2.2 Обтурационная форма мужского бесплодия.

1.2.3 Иммунологическая несовместимость партнеров.-.

1.3. Состав спермы и строение мужских половых клеток.

1.4. Спермограмма.

1.5. Искусственная инсеминация.

1.6 Слизь цервикального канала.

1.7. Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО)

1.8 Фолликулярная жидкость

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Исследования биогенных аминов в сперме человека на момент * оплодотворения.

3.1.1. Общая окраска.

3.1.2. Исследование гистамина в сперме человека.

3.1.3. Исследование катехоламинов (КА) и серотонина в сперме человека.

3.1.4. Локализация моноаминоксидазы (МАО) в сперматозоидах человека.

3.1.5. Локализация гликозоаминогликанов и гепарина в сперматозоидах человека.

3.1.6. Исследовании спермы на соотносительные коэффициенты.

3.2. Результаты исследования биогенных аминов в фолликулярной жидкости.

3.2.1. Исследование гистамина.

3.2.2. Исследование катехоламинов и серотонина.

3.2.3. Локализация гликозоаминогликанов и гепарина в фолликулярной жидкости.

3.3. Исследование биогенных аминов в слизи цервикального канала беременных.

3.3.1. Общая окраска методом Романовского-Гимзы.

3.3.2. Содержание гистамина в слизи цервикального канала с нормально протекающей беременностью.

3.3.3. Содержание серотонина и КА в слизи цервикальной канала у женщин с нормально протекающей беременностью.

3.3.4. Содержание гистамина в слизи цервикального канала с угрозой прерывания беременности.

3.3.5. Содержание серотонина и КА в слизи цервикального канала с угрозой прерывания беременности.

3.3.6. Содержание гликозоаминогликанов и гепарина в слизи цервикального канала беременных.

3.3.7. Корреляционный анализ взаимосвязей в ПМЯ-лейкоцитах слизи цервикального канала.

3.4. Исследование крови у женщин с нормально протекающей беременностью и угрозой прерывания.

3.4.1. Исследование содержания БА вне беременности.

3.4.2. Исследование лейкоцитарной формулы у женщин с

Р нормально протекающей беременностью и с угрозой прерывания.

3.4.3. Исследование гликозоаминогликанов в форменных элементах крови у женщин вне беременности.

3.4.4. Исследование БА в ПМЯ- лейкоцитах крови у женщин с нормально протекающей беременностью.

3.4.5. Содержание БА в плазме крови у женщин с нормально протекающей беременностью.

3.4.6. Содержание БА в лимфоцитах крови у женщин с нормально протекающей беременностью.

3.4.7. Исследование БА в элементах крови у женщин с угрозой прерывания беременности.

С угрозой прерывания беременности.

3.4.8. Содержание БА в плазме крови у женщин с угрозой прерывания беременности.

3.4.9. Содержание БА в лимфоцитах крови у женщин с угрозой прерывания беременности.

Корреляционный анализ содержания биогенных аминов в элементах крови беременных женщин.

Корреляционный анализ содержания биогенных аминов в плазме крови беременных женщин.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ:.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Люминесцентно-гистохимическое исследование биоаминного обеспечения репродуктивной функции мужчин и женщин в условиях экстракорпорального оплодотворения"

Морфология половых клеток: сперматозоидов и яйцеклеток в настоящее время хорошо изучена. Однако, их физиологические аспекты изучены не до конца. Особенно это касается влияния некоторых биогенных аминов (БА), на способность клеток к оплодотворению. БА впервые были обнаружены у низших беспозвоночных. Ней-ромедиаторные биогенные амины - это вещества, выполняющие роль химических посредников в процессах синаптической передачи. БА, действуя одновременно как медиаторы и как местные гормоны, обладают широким спектром биологических эффектов [12,25,27].

Как известно, к нейромедиаторным БА относят катехоламины (КА), серотонин, гистамин, дофамин, ацетилхолин и многие другие вещества [47], всего их насчитывается около 30 видов. КА, серотонин и гистамин участвуют в местной или автономной регуляции многих органов кроветворения и иммунитета [27, 78, 145]. Доказана посредническая роль участия нейромедиаторов в процессах воспалительного характера, в иммунологических реакциях организма, в образовании рецепторов клеток, в их дифференцировке и созревании [56,43, 126]. На сегодня есть прямые доказательства участия аминов в регуляции морфогенеза у организмов разного уровня организации. В раннем пренатальном периоде они посредством механизмов объемной передачи выполняют, в основном, роль индукторов цито- и гистогенеза, а в последующем участвуют в организации адаптивных и деструктивных процессов [23].

Патофизиологами [16,17, 144] было установлено, что гистамин и серотонин участвуют в аллергических процессах организма: в дифференцировке Т-лимфоцитов, усиливают воспалительные процессы. Освобождаясь из клеток и тканей в стрессовых ситуациях из связи с белками или кислыми мукополисахаридами, сами в свою очередь стимулирует выделение некоторых веществ, таких как аце-тилхолин (АХ), чтобы включить в реакцию холинергическое звено вегетативной нервной системы и тем самым ввести в определенное русло реакцию организма на стрессовое состояние [12].

В настоящее время значительно увеличилось число больных с заболеваниями половой сферы [26, 103, 107, 108, 115, 123, 136, 137, 141], иммунной системы [43, 104], органов кроветворения [20, 66]. По данным ВОЗ среди существующих семей около 15% не имеют детей. Принято считать, что частота мужского бесплодия составляет 30-40% случаев, а в сочетании с бесплодием у жены — 10-15% случаев.

Показатель бесплодия одного или обоих партнеров — это отсутствие беременности у женщины в течение одного года регулярной половой жизни без применения каких-либо средств контрацепции [75, 107, 115].

Бесплодный брак представляет собой уникальную медико-социальную ситуацию, определяемую официальными документами как «болезнь». Уникальность этой болезни заключается в том, что в ней участвуют два человека, каждый из которых может быть в разной степени «ответственным» за отсутствие детей в браке. Степень этой ответственности колеблется от полного здоровья и фертильно-сти до абсолютного бесплодия одного или обоих супругов.

У мужчин нарушения детородной функции преимущественно связаны с перенесенными воспалительными заболеваниями мочеполового тракта (50% случаев). У женщин - на первом месте - эндокринные нарушения, далее непроходимость маточных труб (40-50%), внематочная беременность, сальпингоофориты, спаечные процессы в малом тазу, инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (гонорея, хламидиоз (107, 115, 136, 141), микоплазмоз, уреаплазмоз, генитальный герпес, цитомегаловирусная инфекция и др.). Иммунологические нарушения при бесплодии (образование антител к сперматозоидам) выявляют только в 2% [52].

Профилактикой бесплодия служит предупреждение абортов и своевременное лечение воспалительных заболеваний органов половой системы, упорядоченная половая жизнь.

В настоящее время широкое развитие получила программа ЭКО, в результате которой эта проблема частично решается.

В терапии бесплодия используется экстракорпоральное оплодотворение с 1978 года. В России ЭКО и перенос эмбриона в полость матки впервые были выполнены в научном центре акушерства, гинекологии и перинаталогии РАМН.

Показаниями для проведения ЭКО являются:

- бесплодие, не поддающееся терапии, или вероятность преодоления которого с помощью ЭКО выше, чем другими методами.

- при отсутствии противопоказаний ЭКО может проводиться по желанию супружеской пары (женщины, не состоящей в браке) при любой форме бесплодия.

Сущность ЭКО в том, что после комплексного лечения воспалительных процессов и гормональных сдвигов в полость матки вводят оплодотворенные вне организма женщины ее яйцеклетки, взятые заранее. В этом случае эта процедура дает возможность избежать влияния гормонов воспаления при наличии инфекции, избежать непроходимости яйцеводов и структурных изменений яичников. Однако, имеются многие неизученные параметры в этом процессе. Так, не всегда можно определить генные изменения в ДНК яйцеклеток и сперматозоидов, могут быть механические повреждения этих клеток при переносе в матку. Неизвестно влияние перепада температур, излишки кислорода при оплодотворении и многое, многое другое, о чем врач не всегда подозревает.

По данным [18, 97] в оплодотворении и последующей беременности немаловажную роль играют биогенные амины. Биогенные амины присутствуют на самых ранних этапах эмбриогенеза, однако в половых клетках эти вещества не изучены.

Для выяснения влияния нейромедиаторов (105, 111, 118, 122) на оплодотворяющую способность клеток репродуктивной системы было необходимо выявить, содержат ли половые клетки человека эти вещества. Кроме того, неизвестно, влияют ли данные вещества на беременность, и как это отражается на форменных элементах крови и слизи цервикального канала женщин при нормально протекающей беременности и с признаками угрозы прерывания.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящего исследования является изучение влияния содержания биогенных аминов (БА) в сперме и фолликулярной жидкости, а также слизи цервикального канала и крови и способностью к оплодотворению и вынашиванию беременности.

В соответствии с поставленной целью были сформированы следующие задачи исследования:

1. Изучить распределение биогенных аминов в сперме и фолликулярной жидкости.

2. Выявить количественное содержание катехоламинов (КА), се-ротонина, гистамина, гликозоаминогликанов, моноаминокси-дазы (МАО) в сперме и фолликулярной жидкости.

3. Определить соотносительные коэффициенты (КА/С, КА/Г, С/Г) между разными биогенными аминами (БАВ) в сперме и фолликулярной жидкости, выявляющих способность к оплодотворению.

4. Сравнить количественное содержание БАВ в слизи цервикального канала женщин в разные триместры беременности с нормально протекающей беременностью и с угрозой ее прерывания.

5. Сравнить количественное содержание БАВ в элементах крови женщин в разные триместры беременности с нормально протекающей беременностью и с угрозой ее прерывания.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Любовцева, Евгения Вячеславовна

ВЫВОДЫ:

1. Сперма содержит биогенные амины в широких пределах и при исследовании необходимо учитывать не абсолютные цифры, а соотносительные коэффициенты. Сперма, содержащая: лимфоциты, нейтрофилы, моноциты более 5 на поле зрения, а также бластные формы клеток, не способна вызвать оплодотворение.

2. В оплодотворяющей сперме коэффициент соотношения в паре КА/С равен от 0,5 до 0,9, в паре КА/Г - от 0,5 до 3,3 и в паре С/Г - от 0,8 до 4,6. В среднем соотносительный коэффициент КА/С равен 0,75, в паре - КА/Г 1,3, и в паре - С/Г равен 2,2.

В сперме не способной вызвать оплодотворение этот коэффициент варьировал от КА/С 0,6 до 1, в паре КА/Г - от 0,06 до 1,6 и в паре С/Г - от 0,4 до 2,3, имея или ничтожно малые цифры, или цифры не превышающие 1,7. В среднем соотносительный коэффициент КА/С равен 0,93, КА/Г - 0,72, в паре С/Г он равен 1,76.

В первом случае сумма коэффициентов равна 4,25, во-втором только 3,4.

3. Сопоставление абсолютных и относительных коэффициентов в фолликулярной жидкости свидетельствует о том, что забеременить не могут женщины, у которых соотносительные цифры КА/Г очень маленькие — равные 0,5; 0,2 и, особенно, когда цифры малы во всех исследуемых коэффициентах. Большинство женщин способны забе-ременность даже с очень большими нарушениями в половой сфере, однако, в этом случае существует угроза прерывания беременности.

4. При беременности наибольшим изменениям в полиморфоядерных лейкоцитах подвержено содержание гистамина во всех триместрах и в группах беременных женщин как с нормально протекающей беременностью, так и с угрозой ее прерывания. У женщин, с нормально протекающей беременностью, содержание гистамина понижается во всех изученных структурах, а у женщин, с угрозой преры

93 вания беременности, содержание гистамина повышается. Повышение гистамина в лимфацитах крови совпадает с увеличением их числа в лейкоцитарной формуле.

5. При не оплодотворении и угрозе прерывания беременности в изученных структурах увеличивается коэффициент серотониного индекса и становится больше единицы. В паре С/КА ведущее положение занимает серотонин. При угрозе прерывания беременности резко падает содержание КА и увеличивается содержание гистамина в 2,3 раза.

При нормально протекающей беременности серотониновый индекс или равен единице, или он бывает ниже 1. В этом случае ведущим биогенным амином являются катехоламины.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для выявления способности к оплодотворению можно исследовать соотносительные коэффициенты и сумму биогенных аминов в сперме и фолликулярной жидкости, а также серотониновый индекс.

2. Для выяснения способности женщины выносить беременность можно определять первоначальное содержание гистамина в крови до беременности, а также в первом и начале второго триместров. При угрозе прерывания эти цифры первоначально меньшие в первом триместре и имеют разнонаправленный характер во втором триместре беременности.

3. При угрозе прерывания беременности резко падает содержание КА и увеличивается содержание гистамина в 2, 3 раза.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Любовцева, Евгения Вячеславовна, Москва

1. Ажгихина И.С. Простагландины, М, Медицина, 1978

2. Айламазян Э.К., Евсюкова И.И. Королёва Л.И. К вопросу о патогенезе перинатальной патологии при генитальном хламидиозе у беременных женщин // Журн. Акушерства и женских болезней. -2000.- №1. С.9-14

3. Аксенова О.А., Трофимов В.А. Влияние про- и антиоксидантов на Н О -индуцируемую гибель перитонеальных макрофагов // Материалы международной конф. « Рецепция и внутриклеточная сигнализация» Пущино. 2003. С. 130-132.

4. Алипов В.И., Корхов В.В. Противозачаточные средства. Л.»Медицина» 1985.

5. Альперина JI.B. Анализ взаимодействия дофаминергической и серотонинергической систем в иммуномодуляции // Физиол. Ж. СССР им. И.М.Сеченова 1984. № 2 С. 239-245

6. Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А. Гистология, М, 2003

7. Агафонкин С.А.,Математическое моделирование процессов местной регуляции костномозгового кроветворения человека при анемии различного генеза./ Сб. Математические модели и их приложение. Чебоксары, 2004. Вып. 6, с. 169 176.

8. Базян А.С. Принципы функционирования и физиологическая роль аутоадренорецепторов// Физиол. И биохим. Медиат. Процессов/ Тезисы докладов 5 Всес. Конф. Поев. 90- летию со дня рожд. Х.С. Коштоянца.- Москва, 1990.-С.28-29.

9. Балаболкин М.И. Эндокринология, М, Медицина, 1989.-С. 373.

10. Бочкарев В.А. Сравнение гистохимических свойств различных популяций / перитонеальных и мезентериальных/ тучных клеток в условиях дисбаланса биогенных аминов: Автореф. Дисс. на соиск. к.м.н. М. 1988 16 С.

11. Бодяжина В.И., Жмакин К.Н. Гинекология. М. Медицина. 1977.

12. Брондз Б.Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распознавании. М. Наука. 1987. 470 с.

13. Быков B.JI. Цитология и общая гистология. Санкт- Петербург СОТИС. 1997.

14. Быков B.JI. Развитие и гетерогенность тучных клеток // Ж. Морфология 2000- № 2 С. 86-92.

15. Вайсфельд И.Л. Обмен гистамина в организме человека и животных./ Биогенные амины. М. 1967.

16. Вайсфельд И.Л., Кассиль Г.Н. Гистамин в биохимии и физиологии // М.: Наука, 1981. -№ 2. -с19-24.

17. Васильченко Г.С. Сексопатология. М.»Медицина», 1990.

18. Володина З.С. К вопросу о природе тучных клеток у человека. /Тучные клетки соединительной ткани. Новосибирск, 1968.С.81.

19. Воробьев А.И., Идельсон Л.И. Анемии. / в кн. Руководство по гематологии. Под редакцией Воробьева А.И, Лорне Ю.И.1978. С.355-387.

20. Воробьев Н.В. Биохимия человека. М. Наука. 1968

21. Вудли М., Уэлан А. Терапевтический справочник. Практика. М. 1995.

22. Говалло В.И. Иммунология репродукции // М.: медицина,1987.-304с.

23. Гольдберг Е.Д., Карпова Г.В. Характеристика кроветворения у бестимусных мышей Нуде. «Бюлл. экспер. биол. и мед.».М. 1977. №4. С. 463-468.

24. Гордон Д.С., Сергеева В.Е., Любовцева JI.A. Колебания уровня клеточных биоаминов при адаптации организма к антигенам и гормонам. Чебоксары. ВИНИТИ, 1990; 44-56 В.90.

25. Гунин А.Г. Эстроген-индуцирующий гистогенез в матке при эндокринном дисбалансе. Автореф. На соискан. Уч.степени, д.м.н. Москва. 1996.

26. Гордон Д.С., Сергеева В.Е. Посредническая роль БА в тканевых адаптациях иммунного ответа и клеточных взаимоотношений. /Сб. Морфология компенсаторных процессов. Иваново. 1991. С. 54-56.

27. Денисов И.Н., Шевченко Ю.Л. 2000 болезней от А до Я. М. Издат. Дом. ГЭОТАР-МЕД. 2003.

28. Девойно Л.В., Ильюченко Р.Ю. Моноаминергические системы в регуляции иммунных реакций // Новосибирск: Наука. Сиб. Отделение.-1983.-231с.

29. Досон Р., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. Справочник биохимика// М.: Изд-во «Мир», 1991,С21.

30. Дюговская Л.А. Роль гистамина в функции супрессорной активности тимоцитов. //Актуальные проблемы современной патофизиологии. Киев. 1981. С - 126 - 127.

31. Елисеева Л.С., Развитие иммунного ответа на белковый антиген в условиях повышеного уровня серотонина. Автореф. На соискание ученой степени д.б.н. М. 1974, 34 С.

32. Емельянова Т.П. Витамины и минеральные вещества. Полная энциклопедия. ЗАО «ВЕСЬ», Санкт-Петербург. 2000.

33. Зеленова И.Г. Адренергические структуры лимфоидных органов млекопитающих в разные периоды постэмбрионального развития //Макро- и микроструктура тканей в норме, патологии и эксперименте. Чебоксары, 1978. С. 8-11

34. Калужская В.И. Содержание гистамина и свободного гепарина в крови у детей менигококковой инфекцией. / Педиатрия. 1978; № 1. С. 17.

35. Кайнова А.С., Квятковская А.И., Михайлова И.Н. Биогенные амины в клинике. М.Медицина. 1970.

36. Каменский А.А., Антонова JI.B., Сарычева Н.Ю., Власова Т.И. Связь нейротропной активности некоторых пептидов с системой биогенных аминов мозга// Физиология и биохимия медиаторных процессов/ Тезисы докл. V Всес. конф. -М., 1990.-С.133.

37. Карась С.И., Макарова Е.В., Данилец А.В. // Ж. Бюлл. Экспер. Биол. и мед. 1993. Т. 115, № 3.- с.249-251.

38. Карнаухов В.Н. Люминесцентный спектральный анализ клетки. / М. 1978. Наука.

39. Караулов А.В. Вторичные иммунодефицитные состояния: моле-кулярно-биохимические механизмы развития и методы коррекции. // Аллергология, астма и клин. Иммунология. 2000. -№ 1. С. 24-25.

40. Клименко Н.А., Пышнов Г.Ю. Механизмы модулирующего влияния тучных клеток на лейкоцитарную реакцию при воспалении // Ж. Бюлл. Экспер. Биол. 1993, Т. 115. Вып.1, с. 29-30.

41. Козлов В.А., Колесников С.И., Мейлихов A.M. Влияние клеток тимуса на пролиферацию стволовых кроветворных клеток мышей родительской линии в селезенке реципиентов гибридов первого поколения.// Ж. Бюлл. Экспер. Биол. и медицины. 1974; № 6. С.98.

42. Корнева Е.А., Шхинек Э.К. Гормоны и иммунная система. Л.: Наука, 1988. 250 С.

43. Королёва Л.И. Роль факторов гуморального иммунитета в развитии перинатальной патологии при беременности, осложнённой ге-нитальным хламидиозом // Росс. Вестн. Перинатологии и педиатрии. -2000.-№5. С. 15

44. Кеварков Н.Н., Ширшев С.В., Князев Ю.А. Роль хорионическо-го гонадотропина в регуляции иммунного ответа 1990 г Т. 26. №6 С. 79-82.

45. Кнорре Л.Г. Краткий очерк эмбриологии человека. JI: Медгиз., 1959.

46. Кнорре Д.Г., Мызина С.Д. Биологическая химия. М. «Высшая школа» 1998.

47. Колаев В.А., 1968; Нежданова В.А.,1970; Kruger. Per. е.а., 1974;.Barath R. е.а., 1975; Линднер Д.П., 1976; Мотавкин П.А., 1977; Сергеева В.Е., 1976

48. Кузник Б.И., Басов В.И., Цыбиков Н.Н. К механизму действия гистамина на свертываемость крови.// Ж.Фармакол. и токсикол. 1972; №4 С. 448-452

49. Кудряшов Б.А. Комплекс серотонин-гепарин и его физиологическое значение в осуществлении защитной реакции противосверты-вающей системы.// Вопросы медицинской химии. 1973.Вып. 3. Т. 19. С.269-275.

50. Кремерман Г.И. Люминесцентно-гистохимический анализ мо-ноаминного обеспечения матки при беременности и иммунологическом конфликте. /Автореф. на соиск. уч. степени к.м.н. Таш-кент.1988. 17 С.

51. Лазовскис И.Р.Справочник клинических симптомов и синдромов. М. Медицина. 1981.

52. Липшиц Р.У., Клименко Н.А. Освобождение гистамина и серотонина и проницаемость сосудов в очаге острого асептического воспаления. //Ж. Бюлл. экспер. биол. и мед. 1977; 38. № 8. С. 3 - 14.

53. Лойда 3, Госсрау Р. Гистохимия ферментов. М.: Наука. 1982. С. 129.

54. Любовцева Л.А. Люминесцентно-гистохимическое исследование аминсодержащих структур костного мозга, тимуса и крови при действии нейромедиаторов и антигенов // Чебоксары: Издат. Чувашского университета.-1993.-100с.

55. Любовцева Л.А., Функциональная активность аминосодержа-щих структур костного мозга, тимуса и крови при действии нейромедиаторов и антигенов. Чебоксары. 1993. 121 С.

56. Лукашин Б.П., Агапов Я.В. Влияние гепарина на общий адаптационный синдром. //Ж. Бюлл. Экспер. биол. и мед. 1975, № 9. С. 16.

57. Машек К.П., Девойно Л.В., Кодлецова О.И. Изменение уровня серотонина в иммунокомпетентных органах при формировании иммунного ответа // Физиол. Журн. СССР. 1985. Т 1ХХ1. № 8. С. 992 - 995.

58. Мецлер Д.М. Биохимия-М, Мир, 1980

59. Марри Р., Греннер Д., Мейес П. Биохимия человека. Мир., 1993

60. Машковский М.Д. Лекарственные средства.-М., Медицина, 1994.-Т.1.-С.344-365.

61. Ноздрачев А.Д. Общий курс физиологии человека и животных. Мо»ква. «Высшая школа», 1991. Т.2., с.455-500.

62. Мотавкин П.А. Влияние адреналитиков и симпатолитиков на адренергические волокна и тучные клетки твердой мозговой оболочки.// Ж. Архив анатомии, гистол. и эмбриол. 1977. № 5. С. 26.

63. Новицкая С.А., Петрова И.В. Действие гепарина на способность лимфоцитов крови к бласттрансформации. // Ж. Бюлл. Экспер.

64. Биол. и медицины. М. 1975, № 9. С.66.

65. Озерецковский Н.А., Баланин Н.В. Изменение содержания гистамина и серотонина в крови кроликов при введении коклюшной и брюшнотифозной вакцины. // Биогенные амины. М. 1967. С. 349.

66. Орехов К.В. Внутриутробные инфекции и патология новорождённых М.: Медпрактика. - М. - 2002, 252 с.

67. Попов Г.Д., Кузнецов C.JL, Старостина Т.А. Некоторые аспекты неразвивающейся беременности после ЭКО / Современные подходы к лечению бесплодия. //Сб. научных трудов. Екатеринбург. 2002. С. 142-143.

68. Павлов А.Д., Моржакова Е. В. / Регуляция эритропоэза. М. Медицина. 1987.

69. Пивченко П.К. Провизорные органы продукции катехоламинов в эмбриогенезе человека// Нсъезд физиологов Сибири и Дальнего Востока. Часть 2.- Новосибирск,1995.-С.347.

70. Поверенный A.M., Ротт Г.М., Сулаева Н.И. Взаимодействие иммуноглобулинов с зараженными биополимерами: значение в регуляции гуморального иммунитета. // Ж. Молекул. Биология. 1989. № 1. Т. 23. С. 153 163.

71. Поленов A.JI. Нейроэндокринология. Кн. Первая. СПб. 1993. 388 с.

72. Потапова В.Б. Ультраструктура тучных клеток соединительной ткани. Новосибирск. 1968. С. 15.

73. Савельева Г.М., Федорова М.В., Клименко П.А., Сичинова Л.Г. Плацентарная недостаточность / М.: Медицина. 1991. 276 С.

74. Сумароков А.В. Внутренние болезни./М. Медицина. 1993. Т. 2.

75. Савичева A.M., Башмакова М.А. Урогенитальный хламидиоз у женщин и его последствия // Н.Новгород. 1998. - 182 С.

76. Савельева Г.М. Акушерство, М, Медицина, 2000

77. Самойлова А.В. Акупунктура в профилактике преждевременных родов и ее влияние на биогенное обеспечение плаценты.// Дисс. на соиск. уч. степени к.м.н. 1994. 22 С.

78. Серов В.Н. Диагностика и терапия плацентарной недостаточности // Росс. Мед. Журн.-2002.-№7. -С.40-43.

79. Сергеева В.Е. Люминесцентная морфология и адренергическая иннервация вилочковой железы. Автореф. на соиск. к.б.н. М. 1976,

80. Сидорова И. С., Макаров И. О., Матвиенко Н. А., Здокова А. Б. Функциональное состояние фетоплацентарной системы у беременных группы высокого риска по внутриутробному инфицированию // Акушерство и гинекология. 2001. - № 4. - с. 15-19.

81. Смирнов В.М. Гипотеза о серотонинергической иннервации желудка и кишечника // Тез. междун. конф., посвящ. 150-летию акад. И.П. Павлова- Санкт-Петербург. 1999, с.7.

82. Смородченко А.Т. Лимфатические узлы в норме и при антигенном воздействии. Уч. Пособие / ЧГУ, Чебоксары, 1996, 76

83. Тареева Т.Г., Радзинский В.Е., Федотова А.В., Микаелян А.В. Перинатальные аспекты урогенитального хламидиоза // росс. Мед. Журн.-1997.- №5. -с.28-31.

84. Улумбеков Э.Г., Челышев Ю.А. Гистология, Москва, 2001

85. Федосеев Е.А. Развитие реакции трансплантант против хозяина и ее влияние на беременность у мышей после введения гепарина.// Ж. Бюлл. Экспер. Биологии и медицины. 1977; № 3 . С 312.

86. Херодинашвили Ш.Ш., Багдань Ш Динамика содержания серотонина и сульфгидрильных групп в крови рожениц и плода при лечении слабости родовой деятельности серотонином. // Перинатальная патология.: Сб. науч. тр. Тбилиси. 1984. С. 114 -118 .

87. Хэм А., Кормак Д.М. Гистология. Мир. 1983;

88. Хромых Л.М., Анфалова Т.В., Куликова Н.Л., Абрамов В.М.,

89. Казанский Д.Б. Сравнительный анализ биохимических характеристик и биологический активности фактора кортизол-резестентных тимоцитов на различных клеток-продуцентов. //Медицинская иммунология. 2001. Т. 3. № 2. С. 134.

90. Цинзерлинг В.А., Мельникова В.Ф. Перинатальные инфекции. Практическое руководство. СПб.: Элби СПб, 2002. -352 с.

91. Чейдо М. Идова Г.В. Роль макрофагов при реализации иммунного ответа при повышении уровня серотонина // Ж. Иммунология. 1984. № 3. С. 32.

92. Чернобаева И.Д., Калинка Р.Ф., Далмане А.Р. Тучные и энтнро-хромафиноподобные клетки слизистой оболочки желудка. №Архив анатомии, гистологии и эмбриологии», М. 1977, №12, С. 72-78.

93. Шевченко Т.К. Актуальные вопросы акушерской патологии. / 1991. М. Медицина.

94. Шевченко Т.К. Акушерство и гинекология. (Руководство для врачей и студентов). /М. ГЭОТАР. Медицина. 1997.

95. Шорников А.И. Биогенные амины периферической крови и их роль при беременности и родах // Дисс. на соис. канд.мед.наук. -Чебоксары.- 1998.- 190 с.

96. Шаров А.А. Роль тучных клеток в реализации морфологических эффектов эстрогеновых гормонов в матке./ Автореф. на соиск. уч.степени, к.м.н., Чебоксары. 1999.

97. Швалев В.Н., Сосунов А.А., Гуськи Г. Морфологические основы иннервации сердца. М. Наука. 1992, 364 с.

98. Юрина Н.А., Радостина А.И., Тучные клетки и их роль в организме. /Уч. Пособие. М. 1979.

99. Юрина Н.А. Межтканевые и межклеточные взаимодействия и их регуляция в органах иммунной защиты. // Морфология и развитие органов иммунной системы. М. Пермь. 1988. С. 43.

100. Юсин В.А., Сахарова Н.Г. Влияние серотонина на дифференци-ровку клеток тимико- лимфатической системы. Здравохранение Туркменистана. №9. 1990

101. Adreesen R., Sephton R.G., Gald S. Atkins R.S. e.a.Human makro-phage maturation intro; expession of functional transferrin bending sites of hing affinity//Blut. 1988.-57.2.S.77-83.

102. Andersen В., Ostergaard L., Nygard В., Olesen F. Urogenital Chlamydia trachomatis infections in general practice: diagnosis, treatment, follow-up and contact tracing // Fam. Pract.-1998.-Vol.l5,№3.-P.223-228

103. Austem K.F., Orange R.P. Bronchial astha:the possible role of the chemikal mediators of immediate hypersensitivity in the pathogenesis of subate chronik disease. //Am.Rev.Respir.Dis. 1975. 112.423.

104. Axelrod J. Sympathetic nerve endings // J.Nature. 1961.192.4798.

105. Barbara Bates M D Physikal Eamination and History Taking . J.B.Lippincott Company.Philadelphia. 1997.

106. Cheema M.A., Rahman M.U., Whittum-Hudson Brocklehurst P., Rooney G. Interventions for treating genital chlamydia trachomatis in4fection in pregnancy // Cochrane-Database-Syst-Rev.-2000.- №2: CD000054.

107. Clark S.L. The reticulum of lymph nodes in mice studie with the electron microscope.\\ Amer. J. Anat. 1962. 110. S.217-256.

108. Csaba G.,Forgacs A. The ontogenesis of mast cells.//Acta biol.acad. Sci hung. 1971.22.4.S.423-430.

109. Csaba G., Nitzen A. In.Immunological aspectes of allergj. //Vol., I.Eds. F.Rajka, S.Korossj. Budapest. Akademiaj Kiado, 1974.

110. Dahlstrom A.,Fuxe K., Hillarp N.Site of action of reser- pine. //Acta Pharmacol.et.toxicol. 1965.V. P.277-292.

111. Donders G.G., Moerman P., D'Went G.H., Hooft P., Goubau P. The• association between chlamidial infection, chorioamnionitis and neonatal complications // Arch Gynecol Obstet, 1991. Vol. 249,№ 2.- P.79-85.

112. Faick В., Hillarp N., Thime G., Torp A. Fluorescence of catecholamines and related compaund condensend withl formaldehyde // J. Histohem. Cytohem/ 1962. № 10. P. 348-354 .

113. Gartner L. P., Hiatt J.L., Strum J.M. Cell biology ant histology, Baltimore: Harwal Publishing, 1993

114. Hakanson R.,Larsson L.,Sundler I. Peptide and amineproducing endocrinelike cells in the chicken thymus. Achemical, histochemical and electron microscope Study. //J.Histochemistry. 1974.39. 1. S. 25-34.

115. Heap B.,Kiernan I.A. Histological histochemical andpharmacologi• cal observations om. mast cells in the stomach of the rat. // J. Anat. 1973.115.3.315-325.

116. Heine Hartmut, Forsten Franz Jochen. Relations hips between mastcells and preterminal nerve fibers. // Z. mikrosk.-anatom.Forsch. 1975.89.5. S.934-937.

117. Inage Z., Wade N., Iname M. e.a. Supressor T-lymphocyte dysfunction in MCNS: Role of the H2 histamine receptor- bearing supressor N-lymphocytes.//Clin. Nephrol. 1990. 333. 1. 20-24.

118. Iversen L.L. Uptake storage and metabolism of nerepei- nephrine in tissue of the developing rat. // J. Pharmacol Exp.Ther. 1967.157.3.S.503-516.

119. J.A., Hudson A.P. Rapid communication: Cervical Chlamydia trachomatis in women at low risk for infection // Am. J. Med. Sci. 2000.-Vol.319,№2.-P. 123-125

120. Hamamah S., Lanson M., Barthelemy C., Garrigue M.A. et al. Treatment of human spermatozoa with follicular fluid can influence lipid content and motility during in vitro capacitation. Fertil Steril 1996; 65: 3: 265-271.

121. Hemmings R., Lachapelle M.H., Falcone Т., Miron P., Ward L., Guyda H. Effect of follicular fluid supplementation on the in vitro development of human pre-embryos. Fertil Steril 1994; 62: 5: 1018-1021.

122. Kopin I.J. Storage and metabolism of catecholamines:therole of monoamine oxidase.//Pharmacol.Revs,1964.v.l6. 91.

123. Krishnamoorthy M.S. /In.L'histamine cerebrale:essais de mise en evidence de voies histaminergigues cerebralesches le rat.Paris.1973.P.95.

124. Kristic R.V. Histology, 1988

125. Kristic R.V. Illustrated encyclopedia of human histology. Berlin: springer, 1984

126. Maquire N.C., Jordan A.G., Ehya H. Detection of Chlamydia trachomatis in cervical smears from pregnant population // Arch. Pathol. Lab. Med.-1990.-Vol.114,№2.-P.204-207.

127. Murangi M. Puwiazania czynnosc ciowe miedzy a kladem neurohormohalnym a immunologic Zhym.//Neuropatol.pol. 1985.23.l.S.1-21.

128. Newmaan M.E. Bioch. Pharmacol.-1994.-V.48,№9.-P. 1677-1682.-цитирует no:http:// pamology.medic.donetsk.ua/Lectures/Blood.

129. Osborne N.N., Cottell G.A. Distribution of biogenic amines in the slug, Limaxmaximus//Z.Zellforsch.-1971.-1112.-P.15-30

130. Paavonen J., Eggert-Kruse W. Chlamydia trachomatis: impact on human reproduction // Hum. Reprod. Update.-1999.-Vol.5,№5.-P.433-447

131. Smith T.R., Teylor-Robinson-D. Infection due to Chlamydia trachomatis in pregnancy and newborn // Bailliers-Clin-Obstet-Ginecol.1993.-V.7(l).-P.237-255.

132. Sorbo J., Jacobsson A., Norrby K. Mast-cell histamine is angiogenic through receptors for histamine 1 and histamine 2. Int. J. Exp.,1994. V.75, p.43-50.

133. Tsuiki K., Takada A., Nagahiro S., Gridisa M., Diksis M., Pappius H.M. Synthesis ofserotonin in traumatized rat brain//J. Neurochem.1995. V. 64, № 3.-P.1319-1325.

134. Того i., Roulich P., Vigah Sz.// J. Anat. Res. 1969.3.S. 329-341.

135. Ustacelebi S, Kultursay N. Human Chlamydial infection. // Ed. D. Serter, E.Ertem, D.Dereli. Izmir, 1997; P. 29-37.

136. Walcourt-Ambakederemo A., Winlow W. 5-HT receptors on identified limnaea neurones in culture: Pharmacological charaterization of 5-HT2 receptors// Gen. Pharmacol.-1994.-V.25,№6.-P10779-1092.

137. Welsh В., Welsh A. Differential activation by restraint stress of a mechanism to conserve brain catecholamines and serotonin in mice differing in excitability. // J. Nature. 1968. v/ 218. p. 575-577.

138. Whisler R.L.,Newhouse Y.G., Lachman L.B.//J.Immunol. 1985. V. 135. P. 172.

139. Wightman R. Mark, Scoo\hroeder Timothy J., Finnegan Jennifer M., Ciolkowski Edward L., Pihel Karin. Time course of release of catecholamines from individual vesicles duuring exocytosis at adrenal medullary cells// Biophis. J.-1995.-V.68№1 .—P.383-390.

140. West G. B.J./Pharmac. Pharmacol. 1969.2. S.513.

141. Wilcox M.H., Reynolds M.T. Combined cervical swab and urine specimens for PCR diagnosis of genital Chlamydia trachomatis infection // Sex. Transm. Infect/ 2000. Vol. 76. № 3. P. 177-178.

142. Wise William S., Still Williaml. S. e. a. Severe combined immunodeficiency with thymic mast cell hyperplasia. //J.Arch. Pathol.and Lab.Med. 1976.100.5.S.283-286.

143. Wong P.T.-H., teo W.L., Lee T. Microdialysis study on striatal dopamine, 5HT and metabilites in conscious rats after various treatments: Evidence for extravesicular release of dopamine// NeuroReport.-1993.-V.5,№1.-P.53-76.

144. Yong L.C.,Watkins S.Wilhelm D.S. The mast cell:distribution and maturation in the adult rat Pathology. 1975.7.4.S.307-318.

145. Yoshioka Mitsuhiro, Saito Hideya. Рецепторы серотонина и функция моз// Tanpakushitsu kakusan kosoAProtein, Nucl. Acid and Enzyme.-1995.-V.4№6-P.700-708.