Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Лигнинолитическая активность Cerrena Unicolor 862 при твердофазной ферментации обрезков виноградной лозы

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Лигнинолитическая активность Cerrena Unicolor 862 при твердофазной ферментации обрезков виноградной лозы"

' На правах рукописи

. УДК 577.152:582.23

* • .

. ЗАКАРИАИБИЛИ НИНО ГЕРМАНОВНА

• • _ ЛКГНИНОЛИТЙЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СЗРЕЕНА 1ШС010К 062 ПРИ '

ТВЕРДОФАЗНОЙ -ФЕРМЕНТАЦИИ ОБРЕЗКОВ ВИНОГРАДНОЙ ЛОЗЫ,

• : 03.00.07 - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учэкой степэки - •

кандидата биологических каук ■

уЕИЛГСИ - 1092

Работу выполнена : в . лаборатории ьиоконверсии . расу;, -яьыых

субстратоз Института "биохимии растений им. С.В.Дурыиаидзэ АН.

Республики Грузия. • • • . ’ • . . ■

■Научный' г тоьодитель - кандидат биологических наук, старший

'. . • научный•сотрудник Элисашйили З.И. . - . ;

•Научный консультант - . доктор биологических наук, академик АП РГ,

- . ■ • • . профессор Квзситадзо Г.Н. ' ■■ : . ’

• ' ' Официальные оппоненты -доктор биологических наук,.профессор :

■ .. ‘ . « ■ * ■ ■ ■ . ■ ■ . ’ ■■ ■■ ■ - ’ ' Цзрцадзс м.л. ''1 ’

■ ■...•■ . ■ кандидат биологических наук, стагиип

' : . : . • - научный сотрудник Ломтатидзе З.П. '

■ '■■■■• ■' о ■ . ■■■■■. ' .

Ведущая организация Институт ботаники .имени Н.Г,Холодного ■■ *

АН Украины V' '■"■ ' ■■■

* .... ..■■■■■• ■ . ' ■, ". рО .

' ■■■. ' в ■ ■ '...■. . - 4/>

Задаїта диссертации состоится 1/(£ (ЛУОМ-ОХ892 г. в*ч час.

. ' . ‘ ' ' : . » ■ ' . ‘ . I

на заседании специализированного Совета К 057:03.17 Тбилисского государственного университета (360043, Тбилиси, ул. ' Уыи2зрс;:те*>-скап, 2). ■' ' - - ■

. С диссертацией можно ознакомиться в • научной библиотека Тбилисского государственного-унигёрситета. . .

Льторефера г разослан 1992 . г.- . ' : :

■ ■ ' ' . ■ ■ ' ‘ ■ * • '

Ученый -секретарь - ' . г

«гпьниалиаированного ■ совета.. - . ■ г

кандидат биологических нзук , /іі-^С<-?^4^Й^:'-цинПАВ38 Н.-Н. . '

ОВйАЯ ХЛРАВТВРНСТИХА РАБОТЫ. ' '

», Выссио еазияиаяыалз гриба, бла'-2Г".р-'-каличию омрокого спектра е<:скл сточных гадослигвдаских. и охнеяк-тельвых фзрмеитов и высокая прсшгаакямй -поссбиостл жц^лия з субстрат, разлагают все биопсликэрн с/раститальвсй./ биои'-сси, включая лигнин, и поэтому ногут быть использсзанм для утилизации огрсмтяс 'ресурсов. растительного сырья * ’сельскохозяйспхкяих,-' крэниЕмешвгз и • других- о-йввдсэ - и получения на их :'оснсси» . вуКзм еиоковверсии полнеяеяиого п'.-и~зого и кортового беякр, физйс,гсгктски . активна* .. соединен!:'!,..-аидяого и газообразного.-тспл’-гва. -

. .. КйС1:зтря га сравнительно неддепиый оост . ва?»фздгйВетоа’ про- ’ пассы еиоксавэреий 'растительного • сыры с участием.- • **гуг йш> »:«иомическм -Екгодации при условии од- -’его получения, иа-

арияер<; ммхрозного 'белка я комплекса. Озгризатсэ. • £50гяг»я 05рме::тг; . ';ига!1кс«яггиче^хого .комплекса»угмкалъг-т для .впайка бс~здиалышх -ггн'-С'1'.. Резработяа таких ■/биетяхкалсгиЯ требует .пси:.«а актизкмх продуяэнтоо . ферййвтоа, исследования их С,г,>:с^ого-'£йг-;:и):]:ческ;ос •особенностей и; эакономерпост&Й дегрцггцяа .-шгг.оцел-пздог.и различна рзст!?тельгиа субстр'.'тоа. • ■ -

■ : 1?2ДО^^ш!й2ааааашш-у' Цель .работа сс,‘-Го;и:? ;> исс;;еяогй~

■иик •««гнинб&итичесхой ■а’сткшоети'.ЕМсаяя £азмдио>- .. ;:з-

.'«угапяяш'следушг*э.' задачи: ' V ■ : '■ '•• .". ■ . ... \ - :

. ‘ ,. -/яроЕветл схриаияг. базздисничатсч, ••• спосеглл . «родеаире'гзте.

. . внвклетзчньге лак:язу,, лигй^ааэу л 'Нп-зегясимую .::ро<;сидз;.у,

а таклв сьсгадатъ гримам вроггеивсм ?<айтательиве .отхода щ.л - их биоюзивереии: ' " . » " ., - • '

. - изучить динамику' роста' и ^фер»*щ»?тс.'-ьс>й актяа*.юсти .отоСЛва-. кого этаима - Сеггепа ип!со1ог 062 - при; гвердофчзной фэт-

мепт&шм 'обрезко» зшюградоэй ясзи; ■

- исследовать■■■.деградация целлюлозного н лигнинезого

и'^.моя-."сггов реститалыгого суестрата; • ’

- опі*йя*«ггі.' условия кулыищирааглия отоореиаоїо п£сц;-а=ал*е, йлагоприлтстеуюцие обргпсвази:о целеаюс продуктов, . • •

. Неучв^д нш:;зма уаботи. Влерзае проайдвяа сравнительные нс-слодоеаи".! рсіч^та и фэршятатвнсй активности выжих базидиоггицегоь при твердофазной фс-г^ентации сЗреэкоз зиког^-лизй .;эзы (ОВД). Г1и-казз-т их ссосо6;;ость к бяоконверсии этого >асяителшого '.субстрата, сзоггкгоии» его протейной и накоплению ь:*а,;лзто'мш; .жгкмнсшл-ти-іЄск.іл- і;-пі:і-я;утоз. *..,.* ■ •

• • • ’ ’ ‘ •, * _ ' '

^ 3 результаты рзео-ш отобран козий срайнитвльно Єистро ■ - расту-

щий продуцент ксмплйкса ферментов - С.ипісоїог 062. Впервые иссле--дсвзніі дьчхажая, Ип-пероксидазная и лигнизаэная активности этого баэидисимцетд. Устгшовлеиі Еозноааость физиологической регуляции Е дороккх пределах- ферментативной активности . исследуеьоЯ культуры грийг. Зохвэ&ж», "что лагкомэтаеолиэируе&е углевода/а , такзк ^їс-точяикн еэота и фзаольаые соединения стимулируют». - оарозоЕа?:кі-ллккьэы, Нп-сорсксид&за и лигиинввц..' \ - . .

• Пн-хт^ч^кя?* з-інш-ікссть вчботк. Задв-тена культуры баэид.<о^и-

цс-тоа, которио могут кш*,ти применение -для получения г-гякро£ы.“ :і

' ■ . ' » ' ярагь»><иэ, оеїжашк арвиаратов, д&лигнифи#аций. дрвэвсЕыа: суес;-*и •

тор, очистки сточніж вод. Доказана целесообразность .использована»:*

ОВЛ Iі качество суб-зтратоа дли получения ферментов .к протеин^

Сазидиоклцвтсь. Получзшшг результата является- научным вкладом з

информа^иоігиіА бенх да^аик о культурах" базидаальных грибов.

А.ПХ'ОҐІУГ.ІГ-Ї г^соты. йатерчалы диссертации вопи доложены на V

Всессизкои г : гс;з!?уке по" фьиоль.чым соедкиєнлйм (Таллинн, 1937). ТЛГ

Всесоюзной -кокфе-рбнаии "Биосинтез ферментов микроорганизмам**"

(?азке.чт, ІВьЬЇ, иг ^еся/£ли}ингіи« хоьїлранциях “ Никрооргиачлеї а

е£льском хозл;':етве * (Хиа-иагв, і?5Ь, 1881), на 3-і; надгчном семинар»

дам (Рига, 193?). зь сиьатско-финсксм семинаре <Рига, 1963), VII.

' Всес. симпоз. "Инженерная энэимология" (Москва, 1991). '

С Злюсяртст. По каториалам диссертации спублукосдяо 9 равог. Структура и объем работа. Диссертация кзлымяч вз ijif стр*а>!-цап нашкзог.исяого текста, савзргит 30 та&пчц и 2 рисунка и состоит иэ веедекия, обзора литературы, экспе; зтйеятдпьяеЛ *»сти, оесуддэ-иия результатов,’сысодоз и списка цитированной литаритуры, который яключает т ссылок, из них я- на русском язwo. _

. ■ ” OSUSKTU И МЕТОДЫ- ИССЛВКОВАШШ-. " '

Оеърктами ;:сслалевания служили *£7 штаммов виеккк безидаалыяяс грибов. Посевной матерная выращивали в течение 5-7 суток на качггл-кэ, совершающей 200 об/мия, в колбах ка 750 ул, содерагизих. 150 &л среды следующего 'сестаза (г/л): глюкоза - ' 10.0; ЯН*НОа - 2.0;

KHaF<V ' 0.0; ВааЙРО* - 0:4; .HgS0.j х ?Нг0 - 0.5; ZnS0« г ?Яя0 -0.001; ’rcS04 х 7Нг0 - 0.0005; CsCl2 х. Шг0 - 0.03; .дрсяжевай экстракт - 2.0; pH среди 5.8-6.0. Ницепий гомсгеииэировгл*•и суспси-э:а> использовали в качестве посевного материала.

Твердофазную ферментами» (7ФФ) провсди.-.и при 27° ъ *;.ая ы--.

' 100 их, содержащих 4 г по абсолютно сухому весу (ACS) опияэ* от-

резков ' виноградной лозы (размер частиц 0.5-2.мм), увлажненных 12 нл указанной вьше среды &эз источвиха углерода. В ря«е »к.сяеринм»-тов использовали опилки обрезков'виноградной лозы <0ВЛ>, cttjsjtlv ьт экстрактивных веществ. -Для этого растительный субстрат «"кивали дистиллированной водой из расчета 100 нл som па 10 г ОЛ, стерилизовали при '1 ати в течение 1 часа, затаи субстрат с-п.-атпли 100 мл горячей веда, отгибали и высушивали при 60°.

. По окончании TOS часть прзросадай гриб&а* кицэлием »ссы -растительно-балковый продукт (?ЕП) - высушивали при 55° для спре-делекия ACS и протеина, а' остяльнук биомасс/ ч&тырехда протягали 20 мл дистиллированной боды м отжимали. Экстракта аевтрифугиро-

- с -

вали, ФіідьтроЕали через ст-хілжжьіо фіаич-'і и ісаоїявєогали 'кг ч<»ствэ - итрчникз ферментов.. 3 вроэксгграгмроаааю*!' РЕП ачрадіи/

. сояорхй Ж) целлкло&ы й липійвг- - ' , ’ ' . '

. срдериааиэ■протеиаа э биомассах определили.со методу Кмдоьда ля с исг" 'їі-зрванием реактива. Воссяора и казф^иаивата -в..25.. о» редолоиня истинного протеина биомассу Ьроіїзарителько сЗраСаиетал

0.2Х тр'.гхлоруксускоіі кислотой з Т£чгх-:::й І£ наш иа адшякай

. ■ -... в . . .

■ . ■ , ■ ■ * : ■» еака, шэтйифутиррвали, -про>адваля ббй-кхм : спирта-и-:

(термхитгйр^за,- Шульта, 1375)- Сояерваїзив целлюлозы •»Смсиагсах ся» реяеляли гзо ДйдегрггЬу.(и^йеагЕГ^, 1953), с содеріїззиа лигыикз -

- васос-л кзтодоы с иопользозаукам 723-вой серной кислоты. " 1 ■

В ОТДОЛЫЗОЙ серии ОПЬГГОЭ При -ИЗУЧ’ЗК/.М :ВЛИЯНИЯ ДЭЗ-ЗИЧИТеЛЬЕЬК неточмикоа углерода к азота на. фармвататишу»: .активность С<,і-г</.ії чпісоіог 0В2, ііоиимо ТФФ ОВЛ, проводили .глуьиавое культіширош::.:

. і-ри£-.2 и.нблбв». Ш3.7ЙО мл, -тедер^гірзх '1.00 'ім-«реда с- 4% ОЗЛ, -тгч качалко,' 'сонеріулкдей 2()0 .об/кна. ■ ■ ■ - • '' -

- Лк.т*аз»гст*. • .лакказц • определяла по окисле-гк» скркаг.£дд-зь>і;;л»

■ и.чопояіся, ■ 0ггу-«п0яісг,-ММ1>, ;лигвіищерсксидазііуіо '.даї-пі^гоо-їь,

' па ога і сланню вератрцлового сп-арта (Тїєи, 1834; Осій .•«& '

1964). Лигнина заїло актиз^орть .оиріадашяяи тг,:за по .обссцзєшашіич' полшіернсі'р йрзеителя Лесого!. іігіїїіані .ЗДие.В'.<5і8в«.' ..£££> С'Лкз-г' еі. ві . >1904.}. .-Лк-Тибнссть' Нп-зйізисикой ’лвроксіїд&з.у '. опрегдзлдані ■ ьо ^киспеткі НАЙІ-І (Дзаіа еі аі., ,1507). ■■■ V. ■ •• '

Опыта -били постгвлааы .і» 3-5 позторноеткзі,::прлу;ч*,ннь;е :..рс:луль -тата. сбраостятал-,статистііч>зек’и 'іЕван-Пускіїна• и :др., 1374) ... ■

‘ ' . • . ' ’• ' . ' ' -Г . - . ' '

' • . - . .ГЕЗУЛЬТАТЫ Й МХ 'СЄС39КДВЙ52. ' '' '

' . 'Скрііалні-'-'бзаиакомиозтос вок&зал,. .-Что исслєдованпью граба .*

• значи-телміой стсг-с-яи отличалась ,-иевду сойой яо . спосй?.?£>сти. рюгвег гзть ОЬл и Ъбсггиать .-ия прот*>'і»и. '-.Больюшстзо. ліссл0до:аааних...ку.кь-

тур баэидааяьгди грибса зсарактс^иясвались сд&овр менвсй деградацией обс-'й основк1« ;соияоквигсв ОЗЛ я ни едва культура, эа исключением НЕгавпз.и5 а1Насг-43 0705, не отличалась преимущественной реградацией лкгнкна при слабой разложении ссл^лолозы. .Етакиы РЬипаго-сЬаеке сЬгуаоеро^иа наиболее активно разлагали целлюлозу и лигнип СВЛ - 341-455 КГ'и 288-309 КГ, соответственно, эз 34 суток ТС®, Ряд изучению: грибов совершенно •' не,разлагали лнп?г.'1«с-яиД . хонпоневт. ОВЛ в течение первой недсЛи ферментации сусстрата; хотя раэложеш-.е целлюлозы происходило. ••• • .. , ~ »"

Лучаим проду«я:ггои лаккаэы и лиркиназы (8еаагй1-обссцвечива*о-

«»я активность) окгга-ась культура Свггела ип1сэ1ог .062;. <таблица

.■ . ■ ■' ■ ■ ' - ' - ' ' ' .

1)., Ряд культур ссэер^аяяо нэ проявляли лияказной .; и лигниназио?»

остей чер&» 7 И 14 суток ТФФ ОВЛ. Наибольшая Мп-зависимая яеракйкдазная. актишость была выявлена при •>врм--*икцтйз ОРЛ хулъту-роЯ-'Р1^'го1оя- озЪгеа*:!» -'ИБК-181 - 3300 ыгв/г Й5П ’дареэ 7 сутогми-резсиэчнил. Внсская Мп-пгрехсидзэная а.тг.пкмэсть била внявжт-такте .

• в культурах Д.аеПеа 0355-м Й.8оого4ап1ив 0403. Пи одна из кссле-дораниых ауяьтур Баздейэмизгтсз не проаглял» т?-8ачитеяы?ой • яигкма->■ .овроксияа?асй 'аетаавоста.'. Ферментативная • активность вазцдоальшх грибоз зивисилз от продаляительйости ферментации ОВЛ.

' V по • результатам скривията'дла дальнейшей работм наки была ото-брава куль-тура Сеемпа -ип1оо1аг. 082 .. Ичслгдс-зякиз. дг.н»-чхи ?СФ ОЗЛ показало,:что -с тачание первых -даух суток /куяьпширсвагздя чт?и& '-ряствт сразн;г*г?ль>-:о к^длеякэ, давая прирост прстеияа на 0.3*.' 3 .последуюцив дас-э суток прирост протеияэ составляя ухе 0.0*. ;< после 15 суток -культура, по-существу, входила в сташюварну» фазу г*ста, . увзекчивая содержание прстегка ро‘7.С.Х через 28 -.дней Фернкп-етеда.

' Деградация цаллюлозы ваибсле? • интеисизко прэчеяодил» э тече-

ние первой недели тфердофлзной ф^рме-итааий. За это гремя .С.шНао-,1ог 062. рагяагала около 13* чаяяалоэи," тогда ках в т®--»ииа итсро.3

' , . . Таблица 1.

Внеклеточное лахкаэная и лигвйжюаая актиш :с*« г-азидиомицетсй при твердофазной ферментации обрезков виног;.адзгай лозы (г.=4).

Культура гг^ба . . : • С,утни Яаккаэа, Лигиь: лаэа. Мп-Г.£рОХСЩ.^-

ъед/г РПБ ед/г РПБ эа,пед/г *>ёП

С. ип1со1'~' 082 7 1780 4 140 : 156 ■*- 5 : 550 * . 20

■ 14 ; ■ 3200 + ' 114 228 т- 25. . .1380 + 1£0

С.Ыг<5иг”5 С8В . .. ■ :-7 920 50- - 32 + 1 . 510 +' 20

' ' л - " 14 810 .4 70 00 + 5 . 1070 ■+ 50 ■

С.20па1из С.35 ‘ ' 7 ■■■ : ’ 590 +' 20 40 у 7 390 + 60

14 870 4 160 24 + 1 ЛГ-50 + ■ 70

. 0.соп^гайо&-& 0268 ■„ . 7 620 4 40 - 14 + 1 290 4 10

. 14 .. V- 220 4 ; 30 16 + ?: . .550 4 12

,;К . гш 1аЫ 5 зз ’0726 , . ■ 7 ■ 0 . ' 6 V 1 • 0

1 * - • 14 : ■ О: 20 ■»- - 8 _ ' 800. + • 50

И.аШаоеиэ 0706 *. . 7- : 190 + 40. ' 45- + 7* . ■ 240 4 СО

14 . • . . 730 4. 3.0 35 + У , 2670 + 410

. Н:ЭСОГОЙОП103 0439 • ■ 7 - ' 70 ■ 4 ' 10 ■ 72 + -е с’ • .

■ 14 230 4 ■ ’40 23 4 .6 4000 ,+ ■ 250

■ PH.сЪгуБозрргаив 0754 : : 7 С 0 210 ■*. • 20

14 0 С V .500. 210

РЬ.оЬгуБоарогаиа! ИБР-1' 7 .. >.188' 4 • 10 ■0 .. .570 + 100

1Л 143 4 28 53 .+ .16 : 370 -+ 38

РЬ, г&сЗ^аЬв 79' : • ! . • 7 . '1750 ■'4 ' '310 ; 65 + '6 ' . 470 + • 20

' ;к;‘ ,1140 » 50 47 * 2 340 + ■ 50

. Р.че£ г«а1иЕ ;ИДЖ-3 91 , ; : 7 : : ■■ 420 ео. • а ■+ ■ . « 1 8300 + 420 ,

' « ; ' 160 • 4 . 20 0 - .2800 .+■ 740 '

Р . ри 1»юпег иге :МЬК-111 ■7 ; 380; 4.. 100* 46 '■+ ,'1; 130 + •Ю

: /14 V .' ■ 50 ,4 10 0 .120 + 20

.= медеди , - около ЙХ , • а за две последующие ьадали, ферментации Ч ! лишь

52 \ целлюлозы от: исхрднбго ее сбд&рканйя в субстрат©. Б протисосо-

логиость целлюлозе, деградация лигнивг, по- существу, отсутст човял.-; '•в .твчьлю -пвдаж четкрех ««ей культивирования гриба.,- 'Затем крои»-ХОДИЛО КЯТенСИБИСКЗ разложение должна; так что к кощу второй ^Н9-Я*ферментации содержание этого компонента ОЕЛ снижалось на 153, з через - 23 дней - на 222. . '■/. \ . . -

. . Лакказная я ■ лигикназная ' активности пос-гэс^зг.э возрастали, соответственно, я 0.58 ед/г и 66 ед/г РЕЯ через два дня культивирования гриба до,5.19-5.09 «д/г и 45в-4аб е.^г - «ерез 25-30 суток Ферментации ОВЯ, Следовательно, сгигтеэ -этих ■'Сзг.леьгг'в происходил хан в стадии актиаиого роста кулвтуры, так и при.его-замедлении.

- ЛигнкнпероксидазНая и Мп-пероксидЗзная активности .обнаруживав "’-'.сь з культуре С.ип1ео1огрб2ва 4г5 -сутки йермсатади» Ьвл. -• Ляг- •• яишйгроксиса.'шэ» активность оставалась, в та-п-ше . всего , периода хультивкрев&яия гриба 'очень кдзкой,. Ке- 6>ед/г »&'!. В то

же -время, Мп-пзютссадаэная езгстгавость'- после .-4' суток ТФ© постепенно возрастала ст 68 со 1150 вед/г. РЕП,' дсзтипда иексиьума на 14 сутки культжирогания яр1«5а,’ -а' эатеи % твчггкг* 'посвчяэтоадх двух недел'. ферментации. сновалась до 020 ;вёд/г 'РШ. -. \ . ‘

Заии исследования показали, что сзрезки виноградной леэм г*?гут слу*нть благоприятном, субстратом дяя культивирования г.аэидиалыздс грибов й получения путег» их биокоавзрсии. различия .-^ермеятся. Од- . зако'ОВЛ ссДергет небольшое количество свободных угяавод&в, - а во-тес&хариди субстрат,» н азсгт могут : использоваться . й'.жрсорганизимгл только по-:Нерв деградаций растительного -кг.т.'Рйа,т. В су-.-п» а ьпв«' юсяедоваяк; влияние дсполнигеяьЕ&к' источвккоз углерода .15 азота >;д >ост С.1'П1со1ог 052 и её'-ферментативную .активность. Былс уствнов-©но, что культивирование С.апхеоХэг 032- «э с'Лйяой ло*г снимет ост гриба, к обогадекие субстрата прот»»*яюм по сравчеи;".-;- с -.чоптро-ей I. Из игяатаяккд источнжоэ углерода• только ?лшв£& в, йнболь-ой степени повышала содержание протеина в- РЕП. 'Зкзсенке ,. гяп'лс-:«г

600 МГЛ -" ОВД цеппобиоэы и Б «ща большей с.телшх авкцела ск^^^лс скорость разложения целлюлозы. Разложение лигнина каиболве активно происходило при культивировании С.ипхооХог 01>2 ка неоп-ялтьас 0Ы>. Через 21 день ТФФ ОВЛ степень разложения лигнина в присутсгяии низких концентраций источников углерода првьдаала коптролыша варианта опыта. Добавление 600 мг авицела/4 г СЗЛ приводило к п>^к-мущесть'знной деградации лигнина над целлюлозой. •

Экстрагирование растворимых веществ из ОВЛ приводило к сккае-кию всех ферментативных активностей С.ип1со1ог 0В2 по сравнению с контролем I (таблица 2). Добавление к контролю XI глюкозы и целло-биоэы ь концентрации 600 мг/4 г ОВЛ стимулировало продукцию я-акка-зы и лигниназы, тогда как авицел снижал их активность, йп-пероксидазнзя активность возрастала по сравнению с контролем только при добавлении в культуру 600 мг глккозы.

Культивирование бзэидиомицота в присутствии ряда испытгннда неорганических и органических азотсодержащих соеди.-:заий а конуса* трации 30 мМ по азоту/4 г ОВЛ усиливало рост С.ипхооХог 062 к водило к 3-4-кратному увеличению прироста истинного протеина сравнению с контрольным вариантом опыта (таблица 3). .

Глютамин, аспарагин и глютаминовая кислота стимулировали разложение целлюлозного компонента ОВЛ, тогда как гидролизат казеина и в меньшей степени пептон подавляли этот процесс. Культивирование О.uni.cc.lor 062 » присутствии дополнительных источников азота подавляло деградацию лигнин* в течение первой недели ТФФ ОВЛ во всем вариантах опыт--., а в средах с солодовым экстрактом, пептоном и гкзролизатом казеина в течение всего периода ферментации ОЗЛ.

Самая высокая лаккаэная активность - 8783-8882 вед/г РЕП сила зияе."ена в результате вырааивания гриба на средах с сулыратом ем-, мония I. глютамином. Сднакс расчет лаккаэной нктиввости на прирост протекна гриба показал, что даас в этих вариантах опыта спсцил;-

- Тае-ицп

Внеклеточная феркзнтатиэная актизяость С.ип1со1ог С62 при ТФФ отмытых ОВЛ в эавкстаости от. яепоягч«елм:ого источника . углерода в питательной среде (п=4>.

Источник“углерода, Сутки

мг/4 р ОВЛ

' Лаккаоа, . Лкгаингз^ЗТ иагпЗрскси£53а, пед/Г РБП ’ ед/г РЕП ’зед/г РКП

Лоза (контроль I)

7

14

21

608 + 54

1366 + 374 2020 + 342

64 + 15 250 + 24300 + 34

418 + 49 460 + 17 520 + 35

Отмытая лоза (контроль II),

7

14

21

85+ 5.

277 +; 27 1СЗ +56

О

£5 + ' 10 +.

320 + 3

302 + 15

''068 + II-

контроль II '

+ 200 мг глюкогы

7

1.4

21

240 + ~15 123 + 20

70 + 11

ее +

23 + 3 +

308 + 13 276 » \о 300 + 13

Контроль II ■ + £30 мг глвкога

7 _ ‘ 14' 21

145 +15 417 ^ 15

768 '+ 35

23

43

153 + 11

Б25 + £1 764 + 85 379 + 19

Контроль II + 2С0 нг селлобиозь:

7 10 + г

14 12в + гг

21 : 118 + 3

о

11 +

195 + а 109 + 17 343 + 17

■ Кантрел*» II ■ . У + 600 нг реллоблозы

7

14

21

1172 + 228 485 + 33

597 + 24

134 + 21 36 + . 7

152 < II

2?Ч + 40 150 + 30 302 + 15

Контроль II , 200 нг авка«ла;

7

14

21

0

’• о;

26С + 13

О

о

вв

аео ± г?

7:5П 4 17

' Контроль II + 600 нг авипога

7

14

21

22+ 2

8 1 1 142 + 4В

1’йГ + 4

205 + 3

248 + Э

чеехзя активность' в небслывей степени прегъая&ла аналогичны,-* показатель в контрола чеввэ 21 дэаь ферментации. Слэдсса'геяькэ, еоявэ высокая ферментативная акткап'сть при вырггзцзгиии гриба в срздзн с азотссшеравдияи '„■оедиизгаше* обеспечивалась за счгт лучаего роста

. • Та«.%. э 3

Лиг::.-ыалитическая активность С.ипісоїог 062 в агга*ск юсти -дол-злнитеяьного источника азота в пи-.-м-ельной среде

7Шэс2эа7

Источник

азота

: Прирост Лйгвйк,

Сутки ПрОТЄИ!-"\

мг убыль,кг

Тїіі-йерокси-даза,

авд/г РёП

Контроль 7 3 42+ 8.4 1Ь5а + 208 . 568 и £

14 6 106+18.0 1297 + 120 495 + 63

21 7 159+28.8 203С + 124 402 + і.Ь

ЛН4Н0э • 7 . 8 29+ 6.9 1570 + 175 565 + Э2_

14 14 110+20.9. 2878 + 180 1441 +

21 19 -152+27.1 7438 + 645 1056 + 12Й

(КН^О* 7 ' 10 21+ 3.6 ' 1621 + 273 160 + 10

14 16 98*13.4 4622 + 257 ' 800 + 123

21 24 143+19.0 6783 4 678 1073 + 15в

Солодэгаай 7 13 35+ 4.8 577 + 161 510 ■+ 80

экстракт 14 1В 85+ В.З 1607 + 130 690 + 103

21 21 134+16.8 3374 + 363 713 + 83

Пептон 7 ' 15 20+ 2.4 1740 + 483 ' 365 + 42

14 22 75+15.0 2137 + 451 143? + 103

21 25 128+11.4 Є307 + 528 1120 І 214

Гидролиэат 7 14 22+ 2.0 1201 + 340 420 + 26

казеина 14 24 84+15.1 14Э7 + 152 1255 + 88

21 27 123+24.3 6393 + 321 1X34 + 171

Глютамин 7 14 20+ 3.6 500 + 53 216 + 46

14 24 89+16.0 3497 .+ 477 І214 + 116

21 28 171+35.8 8932 + 904 1051 +" 168

Глутаминовая 7 10 31+ 5.3 2078 + 470 378 + 44

кислота 14 20 105+18.9 4746 + 314 1438 67

21 30 155+25.7 7040 + 950 1013 + .146

Аспарпгин 7 . - 14 40+ 5.2 933 + 264 337 + 58

■ - 14 21 120+33.6 3536 + 361 11С4 + 129

21 28 185+16.1 5859 ■» 253 1346 + ХЬу

“ "

ьрсду_ента. Уровень Міі- зависимой песоксндагной активности через 14 » 21 день ТФФ ОЗЛ в 2-3 раза превышал ферментативную активность-

Т55ЛИ"-. 4.

Лигнинолиткчзская актиъность С.ап1со1ог 062 при ТОФ ОВЛ В присутствии ЗКЗОГвКИЧХ фСГ.ЭХЫЛХХ СС’ГИНений <п=3>.

Вариант опита Сутки . Лигнии, Лзккеэз, йп-2|р§кси-.$.,^^{Щ}'-^

■ . убиль, мг кэд/гРСП

Лоэа <КГ> • 7 14 34 74 693+ 25 1340+2 ; юсз+хез 97 М'и 0.0+0.51 . С+0. *! 2

'Откьггая лоза (XII) 7 14 10 59 80+21 21£+ 80 327+ 49 401+ Зв 4.8+0.31 4.2.+0. 50

£11 + .феруловдя кислота 7 14 47 143 114+ 24 134+ -12 ■*77+ ■•в -• ?:ВЗ+1С2 „„Л2.2+1'. 11 в.0+_Р.‘ :

»<Г1 + панияияочся кислота 7 14 10 57 " 124+ 21 222+ 56 ■104+ 24 784+ 63 З^+С.'ГО • гг.о+г.с;

хи + ратгкин / ? 14 9 61 181+ 58 17С+ 32 216* 15 682+ 18 13.7+1.02 . 14.4+4.10

121 ; гззкяол . 7 14 56 ■ 141 ' 12% 23 . 370* ь? . 184+ 13 Л18+ 33 4.3+0.71 •17.7jC.52

ЯГ * издул;:н АТ 7 14 ’ т 100 39+ 13 . 20+ 5 235+ ’5 310+ 3? "’’.0+2.21 23.1+0. 8 Г;

кл + аератоигэзый спирт 14 114 153 333+ 13 141С+125 26П4_ г. ?2?-’- ь« 15. <: 30.5+1.23

культуры, ;;ара:гснксЯ в среде вез дополнительного источвика агот.ч Р;е азотсодержащие с~са.-дайя:от благоприятствовала вмодовчия ягятш:-г.ач-гой акпшкоо-ш в фет>:внти1х:вс.ккои субстрате, ко сред! пик <яул, асагржгма и азсткозсислай амкон^Я и ньеолывс"? степ~;:а уве,:.-1уа яигкикпарокс-.чялзиую активность куль г^ри.

Км предположил* тагоса, что э процессе термэобработ:’.’!' ези з<п-ютна экстракция из субстрата феодяыяас еоедю«егий, «оторыч нопт стимулировать продукций ферментов. Позг-Лу в сяедзг.х.- .1: с^а-.и опытов изучили аг.хянйе отдельных Фэнолышх соединений э конеччсл жлим:.--трчцки 0.1 мМ/4 г ОВЛ на лигдиколитичесжую ектизпость С.игиео’о-

0Б2. Было установлено, что ванилин,' в также индулин особенно сильно спихали разложение целлюлозы, В то же гремя, в присутствии вз-ратрилового спирта и Феруле^ой кислоты наблюдалось усиление разложения этого компонента ОВЛ. Все Экзогенные фенольные соединек::я. за иск точением ванилина и ванилиновой кислоты, стимулировали преимущественную деградацию лигнина. 'в присутствии вератрилоэого схир-та и гваякола убыль лигнина почти в три раза превышала аналогк^'йй

показатель в контроле II. ' .

' ' . • • _ » ' ' ' - - ,

Внесение в среду фенольных соединений повышало лакхазную я

лигвдшазную активности культуры во всех вариантах опыта ва седы-аг» сутки Т©Ф по сравнению с контролем II (таблица 4). Однако только ' вератриловый спирт стимулировал продукцию лакказы и.лигнивааг ка-столько, что уровни активностей этих ферментов даже превыщаки лш-казную и лигниназную активности в контрола I. Рост гриба в присяг— стбии феруловой и ванилиновой кислот, а так*е ванилина,-и индалка^. благоприятствовал повышению Ип-пероксияаэной актйввости культура.'

Так как дополнительней источник азота может в зкачитальдоЗ степени влиять на ферментативную активность С.ипісоїог 062 иссль--довали влияние концентрации одного из-них - аспарагина - на рост гриба и его ферментативную активность. Было ; установлено, , что с увеличением концентрации азота в среде от О. до 60 нН/4 г ОВЛ пси-рост протеина .через 21 день ферментации увеличивался с 7 до 28 кг, т.е. в четыре раза по сравнению с контролем. Культивирована© С.ипіосіог 062 при концетрациях аспарагина 30-60 ИМ по азе":.' стимулировало • изложение целлюлозного компонента ОВЛ по - сравнению с контрольным вариантом опыта. Деградация лигнина не отличалась су-щественно'от контроля. Однако самая’высокая в опыте концентрация аспарагина - 120 им по азоту/4 г ОВЛ - подавляла разложение литии-нового компонента 'ОВЛ, особенно в течение иервой"Недели ТФФ.

Влияние источника азота на ферментативную активность ебнаруяи- •

, Тяблица

Ферйвятаткпшя активность С.ипісоїсг 052 » "ависимоети от концентрации аспарагина ь питательной средэ при тгз ОВЛ (п=4>.

Аспарагин, ііМ азота/4 г ОВЛ ' СуТпМ Лакка; аед/г 5-і, РБЛ Ь гі - г;е рс * :с ^ Л;-- э а, сел/г гЗП Лій .“л^лероксл-дгза.сед/г РЕП

0 ' 7 13-11 ■? 138 КЬ + 2.0 * 0.32

14 1317 + 177 443 2.7 + 0.53

21 1039 + 144 536 і 70 <2.3 < 0.34

. 15 ' 7 1194 + 104 403 <■ й& " . В + 0. 15

14 • 1502 4. 132 310 - 107 3.4 + 0.21

21 1732 + 1Є6 454 г £1 . -7. 0.92

30 7 1216 + 63. - 294 і 38 4Л + 0.38

14 3025 + 180 346 + . 47 0.8 + 0.82

21 3752 + 284 ваз + 81 8.1. 4 0.92

во ? . 1434 + 83 254 ф 28 3.7 * 0.15

/ ■ 14 ' 7532 + Є01 Ц'73 4> . 13.0 + 0.61

21 6222 + 725 1СЬЗ * 3*32 15-3 і 0.74

120 7 •198 + 95 «і І 51 ■і.г ^ 0.35

14 ■ 1Е32 Л .126 634. .+ . 2.6 + 0.42

21" 2733 + 152 634 + во % .з ^ 0.20

” “

алось толь го *.-гр#а 'і-і-21 двяь ?ФФ ШЧ'. Уоотень г. аккаггой а.гі'.-а-;ссти через 21 тнь фер^онтэдии в ср^де с 60 кН азота г. З раз прз-жяал Ферментативную активность культуры в контрольном я*--ибате

пота (твбяны-. 5), Сьрчэаавекъ; ^п-ззвйс.г.яй тарокслпазвск ектиу-юстк подавлялось при зев* исследоздят™ концентрациях аспаргина . тспекю первой иедв.П!1 фврКвЙТЫШ? ПО срвшен№1 С У.ОЙТрС--ИеМ. ?<ак-икальяаа г.хтизиость этого фермента, а также лигшюазы и липаия-ерохскд&эы бала вшсвлена в результата культкздрогакнл С.»:л1оо1ог 82 при коядвнтрадии азота 60 иг/4 г ОВЛ.

Далее исследовали ‘Гв® ОВЛ и фериеатгтаэпук акт;»1.оэть С.игЛсо-вг 0В2 эо время культкзмрования гриба при однсврекгкнок присутствии в среде, помимо аспарагина, дополнительного, легксметаболизи-/еиого источииг.л утхсрй/за - глюкоз», кстэгкй способен стимулмро-

вать рост еазидиомицета в начальный период его культизирс-ї. <кя' и, таким образом, обеспечивать екстрое про:.изызакда иицелиэ** и деграда да» субстрата. А'спарагин в. зсили в питательные среда-з количестве 06 кг (60 мМ по азоту)/4 г ОБЛ, а глюкозу - в количеств 72 г:

■ 600 ИГ, . г ОВЛ. ' ■ : ; . . . • ■ і ■ ■ ■ ;

Оказалось, .-что -внесение сахара одновременно с еспарагилсм снимало симулирующий зфієкт аминокислоты на разложение и,апгк;лэа, но не влияло на -деградацию • лигнине'. Аспарагин -по отдельноети, с 7сккп. 8 комбинации с гляжоэой, стимулировал продукцию лакказы, особензо -.-к -14 суткам ТФФ ОВЛ, тйк как специфическая яаккаэная. активность ;культуры возрастала с5,1 до 143-2.25 тед/мг.протеина., В результата уровень лаккаэной активности C.unioolor 0Б2 в присутствии /аспарагина возрастал с ,1333 «азд в контроле до 7358 шєд/г РБП. Внесение среду і .помимо аспарагина, 600 мг глюкозы еще - больше . увеличу.//;., лаккззную активность культури по сравнению с контролен; е 2 реэа через 4 дня ферментации и в 6.5 .раз - через 1-3 суток культи прсе;,-ния. В отношении, лигиинаэной активности били ьиявлены, сосуществуете. же закономерности.' Лигнинпероксидазаая активность • также стимулировалась . ари .' ТФФ <53Л в присутствии аспарагин,. Нп'Перо'-.сидаэная активность при концентрации глюкозы 300 - иг/4 г ОБЛ значительно превышала уровень активности культуры е контра». Совместное внесение в питательную среду глюкозы и аспарагина обеспечивало наибольшую Нп-реррксидазную активность С.unicolc;: .062 -

1658 віед/Г РБП. : : • - ■

Далее исследовали ТФФ проэкстрагированных и отмытых водой ОЗЛ культурой С.unicelpr. Обі; растущей з присутствии указаниях вмиэ аспарагина и' .глюкозы. Результаты этого опита показали, что- аеззра-гин и в .случае отмытого субстрата стикулировал продукцию везх кс; суедовашгих ферментативних активностей С. un icolcr aSZy- значительно ; восстенанлишія. по ряду Ферментов продуцирую’дув способность культу-

■ - „ • " ■ . ' ї'їОгмца' в.

. елрмввтативнвя активность 'С. univ-olor;С32‘ э зависимости Вт ...

. дополнительных истсчзкхза углерода - и аэотг ор:< отмитых СЗЛ.

Вариант опыта Сутки■ Лак:-.~.з&, ses/r ГСП . 1\л гнинэзл,.. fj.Vr РБП . Нп - іУір:хсидаза, ГТ.П ,

Лоза ПО : 4 ;■ ' 537 +■'.'; 7£ 144 +• .24 _ . 274 -> 57 ;

. .7 238+ 60 . 81 ■+ ,іЬ4 ч <36

14 ' ' 108 ~ ХВ 18 I 7. 2*ч; 29 ■

k + 9Р мг ' . <5 Г)СП • 10 '. 114 У В - 90 + lS •

, Аспарагина1'■ 7 • ..■ ■653 * 87 133 + •■ 7 " ■ 3 z-^j 50

14. • -;.:п + 15.3 --А05 Z зі-----' ' "003 ’ 120

■ К * 72 «г . ■ 1 . гое +■;■ ЗЬ'- ' 117 ■г г '■ . ЬЭ4 + 125 ■ ■

і ^^і:сг’ ’•{Є5 + ■■.34 125 ■+ ■5 :вГ7 + 35 . .

* .♦ ‘ ' 4С0 +* , 84 -140 + 23 . ■ : iSl't 18 ;

'. /і ■’'ZOZ ИТ, ' ьог +. го / .122 V Л9 . . Г: 07 1

""чозм ' ? - 2ЪА j 14' ЗЭ + '. ' ' 559 + м ..-

14- ■ "■' 38В + 47 ■ - S3 «• . І ; ЛСС0 j-

і. f -5 о .•сЛГ .' 'Л :5ЭЗ + - ■ 25 ■ V.''-. ..352 і f. и

£спз>х*Г'\;. * 7 '*•27 ^ 4 7 ■. -■ , * (S' зг>г + 5У

's'1 >♦»*• .1 Т--'? ^ З‘і • з.": ?4 ■ ‘ С55: ♦ ІІІ ' • ■

X - ЗЯ ь; i'-Ju ; •’ -. - ' '220 - 5 воз + S2 ■■■'.'■

йспарагиич * 7 '■""і л ;’8, 271 4 3S і ..'24.; . '■

сС.0 w гя" :• -г 14 "SG? *_ 2ВІ « 485 Л 12 .rt:> •* : ^6 : :

-'і сг~ї ч.с игг”л-г’.ч (т^Л 0). 1:. Гр'.'ї": ■І, С.К .! , ,-№СгЛПЯ

і ак-иазогтъ культура, п-.росввй в пд--:<гут<г.'эи< С > иг зепа-

рггкг.ч ’-'г'ї И сугічї ^орментгшим состолкла 1C? г.е.к.-мг грогаии», "~_,гда.-. как а 'кзгерола -сяА. свижимись к -sway .••:-врсияіам г” 5 *• д. •• «и* ' кг.. L .‘jwи гявкч- . ctc-'.t ; гголькс ■ ..ос-

Ч; злизало яакхаэауч? активность C..»ii.et>Jor. 0В2. -ь-о ,да*е-.п.-;--ходи-

ло к с-г r»sc* *-■-'« :‘v »:зд g эрк^нтат:'3(гс.й " 'Аь-гурь? я ;с:ч-

тро-т:-.•.'■Совместное яс.б.-г'-’гл.кэ ьь-ги-ю -.'тс--’ к сі-гсрл, іФшгс гу peb-'гительпоку eyscrpaVy приводило к дальнейшие оокіЗ^ймо'.' іикнізкой , а также лигя««>а»':?Л актигзости C.unioolor u82 У-se : аз : чйтвгрг>:-і

день T&w СЕЛ. ■ ■

КультизированИе гриба на отньггой лозе снижало лигаинп* у <и дазную активность С.unicolor ^62 практически до нуля, хотя снес ние в среду с СВЛ аспарагина в небольшой степени стинулироа; продуки—о фермента 'культурой. В отличив от лигнинперохсигс!: Kn-пероксидаэная активность С.unicolor 0S2 в присутствии глорс. возрастала, в 2-4 раза по сравнению с контролам, достигая . 10 оед/г РБ0 через 14 суток роста г присутствии 600 мг глюко:зд/4 овл. КультигироЕание гриба в среде с 72 мг глюкозд/4 г ОВД узга о 4-е сутки обеспечивало, самую . высокую продуцирующую ■ епособнос C.unicolor 062 -г 58 юед/'мг протеина. , . •

Исследование ьлияния глюкозы и аспарагина на ферментативн активность С. uni color 062 при их внесении в. растущую культ^фу гр: 6й через трое суток ТФФ ОВЛ по'.сгі-іало, M-ro дополнительный источь

• зэота, но не углерода, стимулировал лакхазную и липгивазную акта

■ ности С.unlcolor 062: Однако, совместное введение в среду аспар.

. гина и глюкозы повышало продукцию обоих. .ферментов не только ;

сравнению с контролем, но и с вариантом опита с ,аспарагином. . С<

. вещества Karf по отдельности, так я®в комбинации, cTHMynnpoaaj продукцию Мп-пероксидаэы и лигнинперохсидазы. Однако самая висока Нп-пероксидазнйя активность - S70 пед/r Р5П - была выявлена «sept 14 суток Т0Ф ОВЛ в среде с 600 мг глюкозы, а самая высокая лигниі *. пероксидазная активность * в культуро, виргщенвой;в , приоутстви аспарагина и глщ<озн. При .этом лигнинпероксидаэная активность в раь прєвьшіалз величину аналогичной активності^ в: контроле.

Но литератур известно (Качлншвили, 1992), что способ культи вяровзиия базы .дльных. грибов в большой степени определяет их. био синтетическую активность. Результати, представленные в таблице 7 свидетельствуют о том, что глубинное культивирование С.unicci о 062 обеспечивало хороший рост гриба — прирост протеина 6 контрол.

. Ті.йлгаіа 7.

Рост .ч Оормвктатигпач :л: Ппчксс-г::. .С. упісоі .:>•;■ -'22 в зе£ио:«іоєти сг? . . дог -лвительнмя не :-зчкиі:сз углзрйза п ?;~-Угв при глубминой .

- - ферментації с.т;г-таг -сбрезксв г"'::--.. .-чї'-юй лози (п=3), .

Еарий>;у Ч спита

Сутан Пргрсот

■ ' -рОГОІЖСіГ, «Ґ

Л&і- ЦЗо-З,

. 1.: і* П

Нп-ги-’роквидаза,

7 ?5П

Лоза (Я)

:: + ■ о. одр'с •їсаарагика

-і т і-г'т.-.т

1

А

11

1

"4

:11

11

1Є + 1-а

IV; + 2. ,3 2-і -1,2

1Р + 1..-Ї

'и + :. :•)

75 + я,г.

.? ; 2.? 33;+ і. 5

-І4 . + В. 4

.1 -і? г \2 ■1 2.5

і;*' 107 5і;.*

і .і7--+.'4'.0 ' І ?/ <- . > 32 ■:• Р. •

■.?ЕС*! -XV. . .,ЙЛ'РЛІ,'СУС4..‘^і

11

7 0.6

■; ^.3 ІЬ 0.1

23

ІВ

65 +

: 35 X 151 +

- 'І В :+

; м +

4 ■+

405 +

еп ■>.-*

177

120

25а

г.з&

і Ті і

■з0

131 и $ ■ .?Г!

70

їй

••'.І ; 1..5

' '2 + 1.-0

-".О + ' 1

І2.5 + .'0.7

23.9 ♦ І,С

іь..4

- я +

8,0 + А. і ч-

1^.7 +

З' -3 т '

■г.г ■ 1.2

. 1.0

7, а 9.0

МЗ.О 4- і:і т 3.1

' ;:.5 ■З-/..?, зо.;.

.о

зй "і сутои/24- нг. . ЕйС-Ог- кая .■! '.ч у.-чл'л-

V ;- і-./СТ С-.»;пі:ч-1''г"’’3?. Г.тог.о:- 5сіумч:;:-'~ с? .чДУ. н ионі*":.!

лом ’. . ай сроду^!:и,о-пи;'сі;!іого ка йсірмсі-т;^ гю

.:'';..:>;'ї-'ЦАс!.:с. чоагрлт«м.';'і5ь» ..ї.г'/угс'лег,.:;^-'^ кго с;- ;кз (.'.уьясн<-'і-;ий

■ Гіг . чтігл;<;<я мо.;.і’Т Сьггь ■с&топи-зільеб ийЗкая ;>ол-.-тнз р,, с;л-р,- *

,авїлегОЯ^М'ІТ".'!..: ііПі ■ -%ТЄЗЗ.;Г:< С-З'Ї/С»»-.V'.. '

.икв!<тнв$.;ют <.;:'.вто'5ирсж?2.£■; ■ то >.і асаараїіш. « іЧ^с*"Г.тте;;и і'стс^яо рВ ерчда пос-гя- гл ,

; з'К'/іге.мьной степоки стимг.ііірог,’- ч 'ї^.рмс,;:гег:іьяую чкткь'.-.-г; .ія’с;Ц: Сй: (тайлі'Ці 7>. Культкги^ег^ш'ї- С ипіеоі&г і:-С2''!;а йг-з-

5

де, содержащей одновременно глюкозу и аспарагин, резко яоі -ааі продукцию фернєвта: специфическая лакказнид активность C.unicolc 062 достигала 7-24 вед/мг протеина, тогда как в контроле она і превышала 1.4 сея/мг протеина. Аналогичная корреляция зыя*лаь между лигкчназвсй активностью С.unicolor 082 и наличием в с ре; дополнительных источников углерода я вэота.

Добавление к отмытой лоэз раствора ведеств, зкстрагироваі ■

из ОВЛ, также стимулировало лакказную и лигнияазную активнс>ст

■ . ' ■ * ■ ■ '

С.unicolor 062 по сравнении с контролем. Наконец, надо отматит

несколько неожиданный факт, а инекно, сравнительно очень високу лакказную и лигнинаэную активности С .unicolor 082, выргедгнг.у» а. расТЕоре экстрактивных вещестр в отсутствие лигноцеллюлозы. Б это, варианте опыта оыла выявлена самая высокая продуцирующая способность гриба.- 4-і.9 шед./мг проі-еинз по лакказе и 5.58 ед/мг протеии;

- по лигнкназе. Мп-пёроксидаэная активность С.unicolor 062 та:ж возраст ала при добавлении.к растительному субстрату лспдрагина Пс отдельности, или в комбинации с глюкозой - уровень ферментативної активности увеличивался по сравнению с контролем, соответственно., болэе чем в Ь и 8 раз чареэ 13 суток культивирования гриба. Рост C.unicolor 062 на среда, с ОЗЛ + раствор экстрактивных веществ ил* на среде с зкстрактив'шми веществами также сопровождался значительным накоплением внеклеточной Hn-пероксидазной активности, как віуию.' благодаря высокой продуцирующей способности гриба. Однако, надо отметить, что при глуоивном к ул ьтие ирова н ии С.unicolor 052 на среде с Екстрактивними веществами, в отличие от других вариантов опыта. Кп-перг-;;сидазная активность пе обнаруживалась, по крайней мере, б течение 4 суток Еыращисания. . '

Сравнение продукции Ферментов культурой С.unicolor 062 в условиях твв^дсФзэной и глубинкой Фзрмэнтации отмітгах водой ОЗЛ показало, чтс глубинное культивирование гриба обеспечивало пониженную