Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Лигнинолитическая активность Cerrena unicolor 062 при твердофазной ферментации обрезков виноградной лозы

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Лигнинолитическая активность Cerrena unicolor 062 при твердофазной ферментации обрезков виноградной лозы"

ТБИЛИССКИ ГОСУДАРСТВЕШШГ» УНИВЕРСИТЕТ ИМ. И. ДЗАВАИПВИЛИ

Ка правах рукописи УДК 577.152:582.20

ЗАКАРИАШЕ11ЯИ КИНО ГЕРМАНОВНА « '

ЛИГНИНОЛИТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ~ CE R?.EN A UNICOLOR 0S2 ПРИ ТВЕРДОФАЗНОЙ ФЕРМЕНТАЦИИ ОБРЕЗКОВ ВИНОГРАДНОЙ ЛОЗЫ, 03.00.07 - Микробиологи»

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ТБИЛИСИ - 1992

Работ? 'выполнена в лаборатории сяоконверсии рс.'::,. -лыив субстратов Института 'биохимии. растений им. С.В.Дурмивидэа AI Республики Грузия. •

Научни. г г -юьодитель - кандидат биологических наук. стараий-

.-» .:'• научный• сотрудник Элисашйили 3-И. -Научный консультант ■-. доктор биологических наук, -академик АН.IT,.

■ . -профессор Квзситадзе Г.К. : .

^.фициальние оппоненты -доктор биологических наук,:профессор .

• - '

Цэрцидза М. А., : "• 0

... ' '. ... ■ • ' ' кандидат биологических наук, старший • научный сотрудник Лонтатидзе э.Ш. .'.■-. • • •

Ведущая организация - Институт, ботаники имени Н. Г. Холо^ого " .

- Ай Украини , -

«

3cuüHTa диссертации состоится jü. Ü-lQH'h 1892 г. б /¿L час. на заседании специализированного совета К 057.03.17 Тбилисского госудзистеенвого университета (360043, .Тбилиси, ул. ." -УЕиазрсите> екая, 2>.

. С диссертацией можно оэлакоьшться в иаучной библиотеке " оилисского государственного -университета. .-

AbTopest-"-;-т разослан /d. (М1092 г.-

Учоиод секретарь , .

специализированного • «е«ета, .'

кандидат биологических. наук /'tli-C-07iU^eS'( ЦННЦЛД35 H.H.

■ ,, • СШАЛ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАЕОТЫ.

■'.:'■' ЛГ^УальносТо ГГРОблемч. йдсвиа .базия^.т-.нкв гриба, благод-.;-.--наличию широкого спектра внеклеточных гидр' пит'.г-.гс^чу.. » . саисяя-. ■ тельных Ферментов и' высокой проиккепаей «юесби.^ети мицаяия и -гуе-■ : страт, разлагают все биополимеры :. растительной . биомлосм, -.включая лигяин, и поэтому могут быть использохяш для угвл'к .шия огромр.'гч ресурсов, раститзлыюго сырья - • • сельскохозяйствен!!^, промыиленныг и других ,о-лходоэ - к . получения из их. основе- путём ■ Сиокспеэрсии -полноценного пицеаогс и 'кормового -.бэлка,.. Физиологически"* актйгяих .

, соединений, аидксто и газообразного -топлива.';'..-

.• ... .... Несмотря на сравнительно медленный роет 6азидиом::!детоэ процессы биокошгерсни растительного • сырья •• с их участием могут '.---п,

• экономически илхщшеад пси условии одноврекскного -получения, аа-

• пример«; гзшребного бэлка и -ксмплекм'с^-'ря'-этоэ,-..-•■ лстачал С>ерйв1лм .'^ »!гш<кдлитичас;:ог.о -комплекса, -уш«алы;'Ч1. /им 'высвиг .- •«■атидиальдох'

грибов Агэрьбзтка таких ч-иотахэтлогий требует погк.-«я -активных продуцентов ферментов, исследования их-..•фиэаологе~сно»а:ических .^с0с-с[-;!0стей и законоиэрност.»"* ячп:-угл/ямэ::ы ра?;.

распггвлг-шх озг-С-тр-тоя.' '

' И "'инсслддоэа^д. &ель:р*;зотаг состояла .в иеслэяозл- , ян-кгчкх-гитичесгоЯ яктш;кг-.сти г>-ид\;м;:цетов. 1мг.:; яс-

• ставлены -сладуал!.* ьзд!ч<л-.. .'

.'. .* - провести скрининг: бзй'.аиомкцетов, ■ способных пр5дуц:'рсеьть снеклв-сч;:чо .т„-.чкаэу, лиг:-:>;::азу я п.- ^сксидз-у,

а такжз окгащатъ протеином растительны..- -г;ссдь! пр.;

- их-'биококе-ерски; ■■. -• - . . - .... ;.• -

- -изучить динамику • роста »-г ферментативной а;:тивиссти с'.05т-.-.ч~' . аого атгзмиа - Сеггепа ип1оо1ог • 052- - • ври- твердофазной'' ф-'-р» -'-.''• мевтадии ."о'брвэкоа- викогргшной.'лоэ!*: -' * ■

- 'Исследовать '--Двтраяапио - .«эллюлс-знсго и лигнинового

:£омлоиентов растительного субстрата; - определить' условия культааироаания отобранного проауцыта,

благоприятствующее обрэ-чованию целевых продуктов. Научазя новизна Работы. Впердаа проведаны, сравнительны::. ис-. следован-я роста и ферментативной активности высших базидиокц.-детс» при твердофазной ферментации обрезков виногрэдкой лозы (ОВЛ). Показана их способность к биокоааерсии этого раетительк ого субатрз-та, обогавгиию его ^протеином и накоплению в^э;слеточ;.их якгнинолч-тических• ферментов. •. ,

« В. результате работи отобран вйвый сррйиитег.ько быстро расту-

щий продуцент комплекса Ферментов - C.unicolor 062. Впервые исие-дс-ващд лахказная, Hn-пероксидазкая и лигниказная активности этого базидиомицета. Установлена ьоэнояность физиологической рёгуляций в

luipoidix пределах- ферментативной активности исследуемой культура

»

гри$а. Показано, что легкекетаболизируемые углеводы,: а , таете ис-точиики азота и ; феэдяьше -соединения стимулируют», образовало лвкказы, Мп-пероксидаза и лигникаэы._ . •'

- Практическая значимость работы. Выявлены культуры баэадиоми-цетов, которые могут.найти применение для 'получения.- • ■нихробиъгъ протеина, феркентшк препаратов, делигнифидации. древесных субстратов, .очистки сточных вед. Доказана целесообразность использоЕапнй ОБЛ s качестве субстратов для получения ферментов и протеин®1 Базндиомицетов. Полученные результаты являются научным вкладом в информациомньЛ банк данных о культурах'базидиальных грибов. '

. Апробация' Работы. Материала диссертации были доложены аа V Всесоюзном с .;оэиуме по'Финальным соединениям (Таллина. 1837), Всвсоознсй -коифвренаии "Биосинтез ферментов микроорганизмами" (Ташкент, 1SSS), на Республиканских конференциях "Микроорганизмы s сельском хозяйстве" (Кишинев, 1988,.- 18S1), на 3-м научном семинаре дам (Рига, 16Q3), ва советско-финском семинаре (Риге, 198Э), VII.

- s

Beee. сммпоэ. "Ияагеиервая энзюязяогия" (Sfcei-aa, 1991). '

£ Заикании. По и-ггегкалаи дясс&ртаат сяувяикяраво'8 раЗот. Структура и объем работа. диссертация изложена ад /^У страницах машинописного текста, содераит 30 таел-щ и 2 рисунка и сосюит иг введения, обзора литературы» экса<?„:..-ьлгслшсп части, обсу-г • икя результатов,' выводов и списка цитир«згшнсй .ччтвратуры. который включает ftyf ссылок, из них 59- 1,3 русском яз.кка.

озъекты и методы kcoleksaísiü. •

05ьрктани исс-тапсвания служили-Т? штаямов выявих баэидиалыявс грибов. Посевной материал выращивали в точение 5-7 сутск яа гмчзл-ке, огязерсакщеЯ 200 оС/мич, а колбах на 750 ¡¿л, содержась 150 мл • среда c-nsaywisro состава (г/л): глюкозя - :с.0; ВЯ4Я0э - 2.0; ¿h2pc¿ 0.s; kajspq* - о.4; х 7яй0 0.5; 2nsg4 :: ТЛлО -

0.001; Fs304 х'7Н»0 - 0.0005; CaCi2 х 2HS0 - О.СЗ; дроя-овой экстракт - 2.0; рН среда 5.8-е.О. ЬЬт&плА гокагв-^иаирсг-лди- и суспян-эло использовали в кзчс-с-.-вз поганого изтвр'-^яа.

Твердофазна ферментацию (ТФ®> пр~^сднли п27^ а яа-^гх r«s ICO wi, сореркввд« 4 г no абсолютно еухсму весу (ДСП) опилок об-psr.v.-á гмксгрздвой лозп <рагкэр частац 0.5-2. ггн>, узлизневных 1" мл уя&заяной выае сред» саз источника >гя*рояа. з ряде экспериментов использовали опилки обрезков виноградной лоэи С ОЛЛ), стаытие от экстрактивных вещагтэ. -Для этого р&е-ттелышй субстрат смячт»-ли дисгиллирсванкой водой нз расчета 100 ил so.oi иг 10 г С5.1, стерилизовали при'1 ати в течение 1 часа, затек сусстрат с.иывэ-í.»! ЮГ мл горячей воды, отживали и высупмвали при 80°.

По скончании Т<К> честь прсгосгг;й грчбрг..! иикалкам "чйяссы -растительно-белковый продукт (РБП) - выося^залч при для определения АСЕ и протеина, а остальную бис.-.<зсзу чегтк-сегда • чрою^а:пл 20 мл дистиллированной водь: ,* отсидели. S.-íctp?¡:t« цектрифугирэ-

иал.1, "sr. .tmsuu — oí? •.üikkíj'i е>1лът^_ , .--

. вдев» источника Ферментов.. Б цроэкстретауюш^зэи Fell .содврваенэ целлюлозы й лкгиииг - , •

• Содержание протеина в биомассах определяли .cu патоку I^-сл;.-'зь-•ля с .исг-'льзовзкигм реактива Ьесслора и козффицнйша 0.25. определения истинного поотеиаа биомассу Ьредьа'-^геяьггэ • обск^тыгаЛг.-0.5* трихлоруксусвой кислотой в твч&гие 15 шз аа кияядан kw^ís-бане, цеетрифугировг'-ли, промызали 88S(-bic: -стартсм ■ и: аысуыкБег;.-: ( Термхитарсра, • кульга, 1874). -Содервааие qejuuoj;c3:i к биогягссах оп-о ределяли по• Асдэграфу- (Utduárbfr, 19S8>, а : содерагзие .лигзина •• ьесовимкэтодсм. с кааольэоБауьчгм .722-ко;; сепной кислоты.-' .

В otfiojil-rccíi сории опыгох! i¡p>[ юучеьц-.i ш..:Гг ,;г доас.чччтслы!:": иэто-шм^оъ углерода и мота ка Оорг-.с „ггатк^ья; акпй»:ос". _ \Jt¡rrt.r, unicolor 032,-.-помимо ОВЛ,."Проводили глубинное 'КУяътиэирсв®«» . грибе. ». каабах.- на ?S0 -ып,- ■■содергвдас 1D0 среда с- -43 ОВЛ, -с-, качалке, соЕерйакацой 200 .oS/t-;ra>*. .

А»иагккть лакказц -определяли по -окисление саринга«йг;:-.йа . (Lecriouics,.'.Окумстсг,' 19Й1), .лигк^нвоооксидазну» актксломь -по сжиздзздЕэ герггрилавох-о -спирта (Тjen. Kirk,. 1SG4; Gold et ■ t:¿ , 18SÍ) . .-Дигниназную активность определяли также по полимерного краегиталя ftesiaaol Bx-illiant Slue-R-(Sigaa, Cl.'A/-\ЧИвог -e t 6-1., 19S4). ..-Активной«.- Nn<-зйбиси.чо'л ■ •¡¡врохсндазь'.. определяли so окислении К.ЧДй (/issda et al., =1S37). • 1 -. ■■••-■ .-.-'■■- " ;

Опыты сили .постгвлевя в 3-5 поыториостях, получ-гднне рел\'ль-тзта oí>pa6ct¿iitij ■ статистически ■■ \ здан-Пуакиаа и. др. , I87 ч у.

: . РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ СЁСЛЕДЕНИЗ.

. Скрининг базноиомиоето» показал,' что исследовании.'.; грибе значительной степени отличались мезду собой по способности -разлагать ОМ и-Ъс^ггдать и;-: протеином. -Бол1да«:ств0 исследовааных куль-

тур бзсияиалыахх грибов характеризовались одоовр чеиисй деградацией обе—а основных комновектеэ ОВЛ « «и одна у.ультура, эа исключением Marasaius alliaoeas 07Ой, ве отличалась гтреимуще<;твениой деградацией лигнина при слабом разложении целлг'ябза. Штаммы Phsnero-chaete ohryaosporiun наиболее активно разлагали наллтмо^у и лигнин ОВЛ - 341—155 нг' и 28*3-309 иг, гоота?тстгенно, эа 14 суток ТФФ. Рид изученных грибов сокорзенно но разлагали литсюаый компонент ОВЛ з те-:<?:.ие первой недели фернентаорч суt страта; хотя разложение целлюлозы происходило. -г

Лучшим продуцентом лаккаэц и лигниказы. (Кемгэ1~О'Явсцпечива<0-цля активность) оказалась культура Cerrena «nicolor 032 С таблица 1). Ряд культур сов«гяаиио не проявляли лаккаэяой и лигминазной • лктиизостей через .7 и 14 суток ТФ© ОВЛ. Наибольшая Нп-элгисимзя пврохйидззнпп активность Шла выявлена при ОВЛ кулъту-

роП Plçurotus estreatus КБК-191 - 3300 погуг РЗП ч^рээ 7 суок-й»-евциваиил. Высокая Йп-пороксидазиая актисвоать <Ц<ла выявлена также в куя»лтеах Л.ввИса 035S и Н.ьеогсаьл1из ОлЗЗ. Ut! одна.из иссяв-,;с-зачну.; кул).тур 5а.зидмоммаетсэ не прэяит.-.ла zr,: ■ лкгни.з-

перочеида?1:.:^ ïlwîijhoctm. фер"зктат;--в;!эя га.янпрсст;» бдзкх.н-злькь-х х-ршзов зависши» от зроволхителыюсто фэршады ОИД.

По результатам скрининга для дальнейшей pafiovu нами была отмерена культура Cerrena unitïolor С02. • Исследование дкггв«яси ТвФ ОВЛ .доказало, что ч те ¡эние первых двух сугок ■ >сулътквироэаяия гриб густот сг5сг:,итсльг:-> »яйпсяно, дгмя приг-~'-" лрстеи>!.ч ча 0.3%. ч последующие дзоо суток прирост крзгвмял составляя утя 0.61. и после Ï5 суток культура, по-суиэству, "ходила б стациоиьрнуж фазу роста, увеличивая содержание протеина ^ 7,6! чорз- 28 фермьнтегйи.

Дэградашя целлалозы наиболоо интенсигзно происходила г» гечо-•кие первой недели тфзрдофазиой• в^гмвитгшии. За это время C.ariec.-lor 05?. раалатгла около 13* целлюлозм,' тогда как т> т®«:«.-ыие stojjoS

- о -

. ТаСлиаа 1.

-Внеклеточный лакказяая и лигвйягэнзя активности 6озидио;шцётс"-при твер,хФ£.ъаой ферментации оброзков. виеограяасй лозы (п-4).

Культура грибо .

Сутки Дахкгэа, Лигь^ааза,-Нп-пороксида-

иОЕ/г Р'ПБ ед/г РПБ з£,иед/г

с . ип ¿со!'"** 062 7 1780 + 140 ; 158 + в ' 550 + .20

14 3200 + 114 223 + 25 1330 + 180

с. ь1гяи 1:"с 060 -7 ОБО 50 , 32 + 1 . £10 4- 20

14 - 810 4- 70 . ■"' :зо + - 5. 1070 4- • 50

с . гопаьий 095 7 ' 590 -+ 20 40 + 7 300 + ' 0

14 870 + 160 24 1 .1050 ■ 70

.0 . соптгайоь'а 0288 7 . 62.0 + 40. ' -14 + ■■лч 290 4- 10

14 ' . . 220 +: 30 16 + 2 ,-.■: 550 4 . .22

к.пи^ыпе 0720 7 0 6 V • 0

• • 14 0 ' , 20 - ' а : 600 50

И-вШ?ееиз' 0708 ... 7 190 + 40 '■ 45 4- 7* , ■ 240 40

14 ' ». 730 + 30 35 ' 2670 4 440

й , зсэгос!оп 0420 • '' 7; .70 + ■ 10 72 6 0

: :2йо -г " 40,: '' ;... 29 4- 8 ■аЗОО 4- ' 250

рь .сьгуоозр.огхиа 0754 ' 7 0 0 210 Ч • 20

1-1 0 0 000 ■ 4- 210

рь. сьгуео^согдиа изр-1 7 ! - + : 10 . . 0 . - 570 + 100

1-5 . ' 140 .4- : гэ 53 ■+ . 16 v 370 4- 35

Гь. г иг!.:.( >. 75 . 7. . 1750 +' 310 ' 65 4- 470 + ■ 20

' : ' 7:1-140' & .'-50.'.- 47 + 2 340 + 50

^:оз1.гпа1ие'.я6к-291 /' 7'. <20 во • + .. в ■Л азоо + 420

■14 190 -к 20 0 2800 —: 74.0

Р. ри 1г-1опагЮ5 ИБХ-111 ' 7 . У'ЗбО. 4- 100* . ■•;. 4-6 ■-+ 1 " 130 4- 1С

14 50 4. ■ ■10 0 .120 4- 20

недели - около 8,"!, - а эа две ; $%■■ целлюлозы от исходнЬго -ее

гаследующие недели .ферментации . дашь содёркания в субстрате. В протиеопо-

лсеность целлюлозе, деградация гзажмпа, • по-сущоству, от7у?сгзова^-л 8 .течёте пергьк .четырех 'дней культивирования гри?з. Па-ем нрсис-'холило интенсивно* разлсжзяие .тя-нина. тек что ц 9»:*эу второй неферментации содержание этого компонента ОЗЯ сбивалось па 13*, • а через 20 дней'- йа 22S.

Лаккззная и лигниназная • активности постают» . возрастали, соответственно, с 0..5Э ед/г и СБ ед/г РЕП чег^з даа для культивирования гриба до.5.1^-5.08 ед/r и Í53-4S8-ел/г - черед 2&-30 суто<{ Оерментапии ОВЛ. Следовательно, синтез этих "Сэрневтов . происходя иак. в стадии ект:к!його роста культуры,. так и пря его эанедле^ии.

Лигнкнпероксегззйая и Mn-пероксидазндя активности .обязружигз-. лиеь в культуре С.unicolor 062 на 4-5 сутки-й»сг.-кэитации ОВЛ. Лиг, нм«/гроксидззная' о,^тивзостъ оставалась а тачание всего периода культгамрованмя гриба очтзь ниэкг*», нз nn<?ra!t<fi>>.ü аод/r гШ. В *.о . яе время, Нп-гароксидаэкая активаос::-. после .4 суток Тв?> постепенно возрастала от Й8 до 1450 п«?д/г РБП, достигая глчсм»-.:-^ ¡за "4 су. ;;и v.4ьтиi"íроргг чя грибз, л 5ат<?:; в гэчс::и-? .-ослелую^и:*. s»,oyx »•' - ".-.» ферментации сго.-якяась до Э20 еод/г РРП. •••

'Нави исслздочавия показали, что обр^зул Еикограднсй лоза :-soryT слоить бтагоприлтяым субстратом - \ культиьиромния грибов и получения путем их бкокотюрсниразличию: ферменте:?. Сава ко' ОВЛ содержат небольшое количество сво&од'-гыхуг^¡звсдся., а • по-л^-сы. .згидл с. t-í.-ргл?. и азот --гут исполъзс.?г/а-ел .микг'.-егхсг"- -«¡"ii только по-мере деградации растительного квтчрияла. • 3 es па с -¡тип исследовали влияние яспслнителыг.« источников углерода я с -эта :• i рост С.unicolor 0G2 и её ферментативную активность. -Било устаяов--гно. что культиЕмрог;*..;^ С .un-г Ос" отмыто" .еру» с ¡;¡i „~í " эосг гриба и обогащение субстрата протеином по ср&еневии - с *жс> I. Из испытанных четоч-ч <коэ углерод? • то/» ко глкаоза' в.. йейоль-' ;ой ■■степени повышала содержание протеина s РЕП. Внесениеt глюкоз".

600 мг/Ч i ' ОВЛ целлобиозы и в ещо большей степени ш»:ц&,.э сн..*.гло скорость разложения целлюлозы. Разложение лигнина наиболее .:ktk..„-io происходило при культивировании С.unicolor 062 ка яесткыпос РШ. Через 2 i декь ТвФ ОВЛ степень разложения лигнина в присутствии низких концентраций источников углерода преклаала контрольиые варианты опыта. Добавление 600 мг авицел£/й г СВЛ приводило к преимущественной деградации лигнина над целлюлозой.

Экстрагирование растворимых веществ из СВЛ приводило к снигс-нию всех ферментативных активностей С.unicolor 082 по сравнении с контролен I (таблица 2). Добавление к контролю 11 глюкозы и целло-биоэы ь концентрации В00 кг/4 г ОВЛ стимулировало продукцию лакка-зы и лигнинаэы, тогда как авицел снижал их активность. Hn-пероксидазная активность возрастала по сравнению с контролем только при добавлении в культуру 600 мг глюкозы.

Культивирование базидиомицота в присутствии ряда испытвшса; неорганических и органических азотсодержащих соедиазний ъ концентрации 30 ми по азоту/4 г ОВЛ усиливало рост С.unicolor 0S2 и приводило к 3-4-кратному увеличению прироста истинного протеина яо сравнению с контрольным вариантом опыта (таблица 3).

Глютамин, аспарагин и глютаминовая кислота стимулировали разложение целлюлозного компонента ОВЛ, тогда как гидролизат казеияа и в меньшей степени пептон подавляли этот процесс. Культивирование С.unicolor 062 в присутствии дополнительных источников азота подавляло деградацию лигнин» в течение первой недели ТФФ ОВЛ во все/, вариантах епы-ч, а в средах с солодовым экстрактом, пептоном и гидролизгтом казеина в течение Есего периода ферментации ОБЛ.

Самая высокая лакказная активность - 6793-8982 юед/г РЕП бьиа зипь-ченэ в результате выраяиванил гриба на средах с сульфатом аммония i. глютамикок. Однако рлечет лакказнэй активности на • прирост протеина гриба показал, что дахо в зтих вариантах опыте спешки-

Таблица 2

ВРэклетоЧвая феркэнтатиявая активность С.unicolor С82 при ТФФ отмшюс ОЯЛ в зазиатости от десолг-мтельно: о источника углерода » питательной срзд<з <т>=4).

Источник углерода, Сутки Лаккааз, Лигнивазэ, ¡'п-пороксидаэа,

нг/4 г ОВЛ вед/г РБП ед/г Г7П ' тед/г РБП

Лоза' 7 606 + 54' 54 4 i ü 118 + 49

(контроль I) 14 1366 + 374 250 + 34 ■seo + 17

21 2020 4 342 300 4 34 520 4 35

Отмытая лоза 7 05 4 5 0 320 4 3

(контроль 11), 14 277 4 27 ■¡с t 2' 302 4 15

21 103 + £в 10_ 4 , р — "^86 4 Г} т

Контроль 11 .7 240 4 15 09 + 9 3S0 4 13

- 200 иг глюкозы 14 129 4 20 23 2 27S ■5- 16

21 70 4 11 3 4 0 . SOO 4 10

Контроль 11 • 7 145 4 15 23 5 S25 + 31

• 600 мг глюкозы ■14' 417 15 43 + 3 ' 734 4 s6

21 769 4 85 153 4 11 379 4 13

Контроль П 7 10 4 2 0 195 4 8

200 мг неялоеиозн 14 120 4 22 • U 4 о 109 4 17

21 113 + 6 7 4 1 343 4 17

Контроль IX 7 1172 4 22В 134 4 21 277 4 -UJ

600 мг це,;лсбяози 14 435 + 33 ЗБ + 7 150 4 30

21 ; 537 4 24 132 + 11 "02 4 15

Ксятроль 11 7 0 0 1ВЗ 27

200 мг асицзда• 14 0 п 135 + ?

21 230 4 18 за 4 7 £50 4

Контроль IX 7 22 '4 2 0 122 4 ^

600 кг аэияела 14 9 4 1 0 Z 05 4 а

21 142 i 46 • 0 24'J 4 . и

?схая активность а небольшой степени прег-ызала аналогичнк': пока-этель в контроле через 21 сень ферментации.: Слэдсвчтельно, еолг.-ч-йсокая ферментативная активность при яырепиэанки грие-а в средах с ютсодарзшдозд соединениями обесле'чкзалась sa счет 'лучшего рост.ч

Tagf„. ч 3.

Лип^инолитическая активность С.unicolor 062 t зависимости от дополнительного источника азота в питательной среде (п=4).

Источник азота

Прирост Лигнин, Лаккаэа, Нп-пероксч-Сутки протер-", дэза, мг убыль, кг^___аед/г РБП

Контроль 7 3 42+ 8.4 1553 + 208 . 568 ¿52

14 6 106+18.0 1287 + ,120 405 + 63

21 7 158+26.8 2033 + 124 402 4- 55

ЛНлК02 ■ 7 _ 8 29+ 6.9 1570 + 176 565 32.

14 14 110+20.8. 2878 + 180 1441 + ■302*

21 19 ■ 152+27.1 7438 + 645 1056 Т 12Е

7 ' 10 21+ 3.6 1621 + 273 160 + 10

14 18 88+13.4 4622 + 257 800 + 123

21 24 143+19.8 8783 + 679 1073 + 156

Солодоьцй 7 13 35+ 4.8 577 + 161 510 • + 80

экстракт 14 18 85+ 8.3 1607 + 130 690 + 108

21 21 134+16.8 3674 + 363 718 + 93

Пептон 7 ' 15 20+ 2.4 1740 + 483 ' 365 + 42

14 22 75+15.0 2137 + 451 14Е? + 103

21 26 Í26+11.4 6307 + 528 11S0 + 214

Гидролизат 7 14 22+ 2.8 1201 + 340 420 + 29

казенна 14 24 84+15.1 1497 + 152 1255 + es

21 27 123+24.3 6393 + 321 1134 + 171

Глютамин 7 14 20+ 3.6 500 + S3 216 + 46

14 24 89+16.0 . 3497 + 477 Í214 + lie

21 28 171+35.в .. 8982 + 904 1051 168

Глктамиковая 7 10 31+ 5.3 2078 + 470 378 + 44

кислота 14 20 105+18.3 474S + 314 1436 пг 67

2! 30 155+25.7 7040 + 950 1013 + .146

Аспарлг-ин 7 14 40+ 5.2 883 + 264 367 + 59

- 14 21 120+33.6 36S6 + 381 1104 + 128

21 28 185+16.1 5859 253 1348 + 189

продуцента. Уровень Мп-зависимой песокеидагной активности через 14 и 21 день Т4>1> ОВЛ в 2-3 раза превыиал ферментативную активность

Твблиг: в..

Я;1Гнинолиткчес;:йл активность С.unicolor 062 при ТФФ ОВЛ в прнсутствич окэогет?ых Ознольпьк соединений (п=3).

Вариакт опыта Сутки лигнин. Лаккаэа, Кг.-г.-£ 3 убыль, мг взд/гРЗП

Лоза СИ) 7 34 693+ 25 100S+lt.3 0. ,0+0. .51

14 74 1340+217 82*. + 19* 5. .6+0, ,42

Сгл-итая лоза (JCII > 7 10 60+ 21 327-í 49 3+0. .31

14 59 215+ ео 401+ 36 4. . 2.+ 0. .50

7.11 + .ферулогпя 7 47 114+ 24 477+ 26 12. ■ 2+1- .11

КИСЛОТ! - 14 143 184+ 42 -- 688+102 6, ,0+0. .60

KIX + ванклиповгп 7 10 124+ 21 404 + 24 5, ,4+0, ,90

• кислота 14 57 222+ 56 764+ ЭЭ 12. .0+3. .60

ГС1 + ванилин 1 9 161+ 53 216+ 15 13. .7+1 .02

■14 . 61 176+ 32 6Ы2+ 19 ■ . 14 , ,4+4, . 10

ГС1Х + гзгякел 7 56 ' 121+ 23 184+ 13 4 . 0+0 .71

14 • 141 27 е+ 53 418+ 36 ■:7. .7+0. .52

KII + тдупт А? 7 ' 49 3ÍH 15' 289-í- 39 17 , 0<:. .21

14 100 ?с+ 3 610 + ее ■ 1í.° .02

:а I + кератрмяоэгЛ 7 104 09П+ 13 250+ 0 . S-. 3. .11

спирт 14 15В 1416+125 327+ . 29 .; и. .5+1. . 23

культурн, ядоацэниой в среде без дополнительного источника аэот^-Рсе азотсодержащие соединяют бяагопрйятсгг:оаали валоплеяеэ лигни-

назчсй активности в ферментированном субстрате, v¡o среди них ли«ь аспарагин м азотнокислый' аммсяий в небольшой степени увеличивши« лигчиппероксидаэную активность культуры.

Мы предположили также, что в процессе термообработки' ОВЛ возможна экстракция из субстрата фэаолышх соединена, кгториэ могут стимулировать продукции фе.рмзитсз. Поэтому в следу ¿ща'! с-^рии опытоэ изучили влияние отдельных фенсльных соединений в кспвчясй кояв'.:3~ •грации 0.1 i'M/4 г ОЗЛ на яиг;5иетяитическук> активность С.unicolor

062. Было установлено, что ванилин,' а такав индулин осоСеьно сильно снижали разложение целлюлозы, В то se время, а присутствии вэ-ратрилового спирта и ферулсой кислоты наблюдалось усиление размножения этого компонента ОВЛ. Вое йкэогенныа фэиольныэ соединения, за иск точением ванилина и ванилиновой кислоты, стимулировали пг ,;"-мушсственную деградацию лих'ниаа. 'в присутствии плрятрилозого спирта и гваякола убыль лигнина почти в три раза превышала аналогичный показатель в контроле'П. '

Внесение в среду фенольнык соединений повышало л&кказыугз и лагнивазную активности культуры во всех вариантах опыта на седьмые сутки ТФФ по сравнению с контролем II (таблица 4). Однако только вератриловый спирт стимулировал продукцию лакказы и лигаинвэа вэ-столько, что уровни активностей этих ферментов даже превышали лак-каэную и лигнинаэную активности в контроле I. Рост гриба S при~ -. -ствии феруловой и ванилиновой кислот, а также ванилина и икд^-лкг.а, благоприятствовал повышению Hn-пероксидазной активности культуры.

Так как дополнительный источник азота может в значительной степени влиять на ферментативную активность С.unicolor 062 исследовали влияние концентрации одного из-них - аспарагияа - на гост гриба и его ферментативную активность. Было ' установлено, что с увеличением концентрации азота в среде от О. до ВО мМ/4 г ОВЛ прирост протеина .через 21 день ферментации увеличивался о 7 до 28 мг, т.е. в четыре раза по сравнению с контролем, культивирование С.unicolor 082 при концетрацикх аспарагина 30-60 мМ по азот стимулировало изложение целлюлозного компонента ОВЛ по сравнению с контрольным вариантом опыта. Деградация лигнина не отличалась существенно -от контроля. Однако самая высокая в опыте концентрация аспарагина - 120 мН по аэоту/4 г ОВЛ - подавляла разложение литникового компонента 'ОВЛ . особенно в течение игрвой ~йеде-чи ТФФ.

Влияние источника азота ва ферментативную активкссть обнаружн-

Тлелкаа 5

Ф<*рмевтатив:;зя активность С.unicolor 062 в зависимости эт концентрации acnapari.aa а питательной срэдэ при ТФХ> ОБЛ (п~4>.

Суткь

Acneрагик, кМ азота/4 г ОВЛ

лагкгза, кп-персаскдаэа. Лигниьлерзксй-аед/г FHH пел/г РБЛ дьза,пед/г РЕП

0 1 1341 + 1за 743 + 41 2, 8 + 0.32

14 i317 ■V 177 445 51 Л .7 + 0.53

21 ¿033 + 144 536 + 70 .0 í 0.34

15 ' 7 1194 + 104 403 / '»S tí. ,G + 0.15

l'J • 1502 + 132 310 z 3. ,4 + 0.21

* 21 1732 166 454 + ■ 7. ' - 0.92

30 7 1216 + 83 - 234 ■¡ 38 4. .1 + 0.38

14 3025 + 166 ' 646 + . 47 Э, , n + 0. C2

21 3752 + 264 603 -f SI B. . 1 + 0.02

60 7. 1434 + 96 254 23 ■ 3 .7 + 0.15

14 7532 + S01 _ 973 «ft 13, . 0' 0.61

21 0222 + 78Е 1053 232 , 1 + 0.74

120 7 493 + 95 4S3 •t SI . ¿ i + 0.3 ó

14 1632 ; .126 564 . -V С'i • 2 i 0.4 i

2Г 278S г 152 63« + SO .3 - 0.20

валось теяысо через 14-21 день.ТОФ ОВЛ. Уровень «гккаьной «к-тоь-кости чэреэ 21 день ферментации в среде с 60 им азота а в р£.з прг. -вьиал Ферментативную активвость культуры в контрольном *>»-.шантв опыта (таблица 5), сераэоэакие Ип-зависикой перохекпакгей еугив-ностя подавлялось при всех исследованных концентрациях аскарагииа б течкиие первой надели Ф&гмэнтации по срааиенип с контролем. -синальвая схтианость этого фермента, а «х« лпгникаэи а ,-жгйш-пероксидээи была гиявлеяа а результате культивирозакия ' с^'-.-г DS2 при концентрации азота 60 кг/4 г ОйЯ.

Далее исследовали ТвФ СЕЯ и фер*й«гат:<вн$» ¿.кп.гисг,• ь C.unico-lor 082 во время культивирования гриба при одновременном лрисутст-нки в среде, г.оиимо аспарагинч, допелиительноге, логком-гтаеоллзи-руомго источника углерода - глвксэы, четеркй способен скаоглиго-

вать рост базвдиоиицета в начальный net-иод его кульпдаирсз. жл' и,

таким образом, обеспечивать быстрое проиизываииа кицелио« я дегра-

■ •

. даци» субстрата. Аспарагин в, осили в ш*гателыа» среду в количестве S6 кг (60 мМ по азоту)/4 г ОБЛ. а глюкозу - в количестве 72 >■■ ■ 600 t:r, г ОЕЛ.

Оказалось, что внесение сахара одновременно с аспарагивсы сча- . . мало стчмулирухвдий эффект .аминокислоты - на разложение целлклоэа, во не влипло на-деградацию лигнина. Аспарагин-по. отдольности, е в комбинации с глюкозой, стимулировал продукцию лакхази, особенно к 14 суткам тфф ОВЛ. так как специфическая яакказная. активно .-яь культуры возрастала с 51 до 143-225 лед/иг протеина. В результата уровень• лакказнои активности -C.anieolor 062 в присутствии .аспарагина возрастал с 1383 вед в контроле до 7858 «¡ед/г РБП. Ввесеаи« г-среду; -помимо аспарагина, 600 мг глюкоэи еще болызе : увеличяв&л^ лакказну» активность -культуры .по «р&внеяи» с • контролем! в £ --.рга--, через 4 . дня .ферментации и в 6.5 раз - через --14, -суток -.культиаироях.-. ния.' В отношении: • лигнинаэвой -активности,- '-<бцли' выяалены," существу,- .те же _ закономерности." ЛигниВпероксидаэиая ' актквжхг: ^ также • сгимулировалась; при ТФФ ОВД.. . в присутствии':. аспарагл». Нг1-пврс:сидаз.чая активность при концентрации глюкозы 600 M.-/-J ;.• ОЕЛ а:;ачительЕ10 превышала уровень активности культуру в . контроле. -. :Совместное внесение в питательную среду глюкозы и аспарагина обеспечивало наибольшую Нп-пероксидаэную активностьС. uniea 1с.; 062 1С58 яед/Г РБП. , -

Далее исследовали ТФФ преэкстрагированных и .отмытых водой ОВЛ •культурой• С.anioelpt.06S-, растущей э' присутствии .указанных ваше .аспарагина и.глюкозы. Результаты этого опыта показали, что еспара-гин и в .случае отмытого субстрата стимулировал продукцию всех ис~ огеповашшх Ферментативных активностей С.unicolor 062;-.. значительна ' восстанавливая. по ряду ферментов продуцирующую способность культу-

■ •- ■ „ '■.-'■..' ' - Таг-лица ñ.

<Г-*рментативная актизйсгть' С. un i'c о 1 о г СС2' э зависимости ст дополнительных источн.-:;;зв углерода'и «гаот,». яря ,ТФФ отмытых ОЗЛ.

Вариант chura Сутки

Лакказа, лед/г Р~П

Липжааэа, ©ч/г РГ?П

Нп- пзроксияаза.

aef/í РБП

Лога (К) 4 ; 537 + ' 73 • 144 + 24 . . 274 .57 ■-

7 235 + ■ ño 61 + 1". 454 1 5S

' 14 109 18 ' 18 3 '- / + 29 .

;< + яр vp 4 ; 5.06 + :io 114 8 У У 15

. асяаргтика • : ■7 ■ - S53 >■. 87 183 + • 7 " 33J- - 50

* i: . .'•'4523 + ■15.3 ' ■. -JOS t- UÍ f 120

' « + '■ 72 МГ ', '"'■. 4 . SOS ЗЬ"" *"..,' 117 5 Ь94. +

7 465 + : 34 . + 5 .. f;ö7 + 35-.

-. ■:< -i- ¿СО яг • 14 í00 + .84' -149' •x' ■ .ей- J. 18 ''

: -î ■ . ".'•' È32- +.' 20 .132 4 19 507. + ; .

' - *ч + M S3' ■r. ' c-.' - SS'; V .'34

; ■ : 14 • ■ зеа + '■■' 47 - , - .--y z 3 л' -.-'..: ÎCOU - : u '

■ % f lä ;••• ' 4 + 35 :■ ■ îf.2 k 0

7 .327 + ■ '47 : .214 'v ' ' f" _ ' sc... r '.¿'8

12 иг íO.:-:b!j 14 , 4232 * 615 '. - 373 .24 ' briS' ■ Ч'1 ■'

г: ■ Si'- . ' Ш A 503 "'2

rcnsssariît'Y + "fSJ-Tl 2S1 V 1С. .'Pi -

i.- мг глакоза 14 ■'.;'SS57 + 295 . ' 495 ;-2 '. .756 75 -

л по ctcsüsmoo с контролен <TS&«ftí-s.¿> . . .'■■ Например, '".-'eneas- •

■ 'i'-. : • . ' . ;'.. ■ • ' ..■•'.■'■• ■ » у '

': лаккаэй&я 'вхтятугь куяьтат«, каросвеЯ р ъ-у-ячгкяалА. 38. иг асда-

..уыггйа, vap&a 14 • -суток- йс-раент-аиум состзеылр ; С 3 " сюД/мг.. протеина, тогда Еаагролэ'тёмй' скяаая?сь & зтому. ./-гремею» . .5-.я^д';?!"

■ t'povoHr.'ä. ■ .ov'»;cc!:nti г.гкчеозы. в сроду с OT.virroÄ ••/■ssefi- з© ~ -¡ос-• стглаяливая-Г! лакказну» атгязглсть ' С, иг. io-olor.:,'082, .но .'пчнюял-•яо ©<s прсц«аени» 'иад -фермектатярной акталаость». культу!-")« в ¿«н-TFояа.-; •■Совмйотноа добайл^нкэ аг;:-а^сислотЦ ил стмэтсму рас-', титульному"'.субстрату приводило и. дальнейшему .'гювигкияз ' ' ЛахкаэрО'}, а такав' лигЕиназяой\активасста C.uníoaior 302 "' i.ä : .четагртий '

день ТФФ ОВЛ,

Кул ьтиьирование гриба на стматой лозе снижало лигпккя«.«-дазную активность С,unicolor 462 практически до нуля, хотя ьнесе ние в среду с ОВЛ аспарагина в небольшой степени стииулировз* продукл"ч> фермента "культурой, В отличие от лигнинперо-ссидази Ип-пероксидазная "ахтивность С.unicolor 0S2 в присутствии глюроэ возрастала, в 2-4 раза по сравнению с контролем, достигая 100 вед/г Р£П через 14 суток роста в присутствии 600 мг глюкозы/4 овл. Культивирование' гриба в среде с 72 мг глюкозы/4 г ОВЛ ужо ?¡ е 4-е сутки обеспечивало, самую высокую продуцирующую спосоЗност С.unicolor 062 - 58 юод/мг протеина.

Исследование влияния глюкозы и аспарагина на ферментативву активность C.uriicolor 062 при их внесении в растущую культуру гри бд через трое суток ТОО ОВЛ показало, "что дополнительней источки азота, но не углерода, стимулировал лакказную и лигниназную актив ности С.unicolor 062. Одна'ко, совместное введение в среду аспора гина и глюкозы повышало продукцию обоих ферментов не только ti¡ сравнению с контролем, но и с вариантом опыта с ;аспарагином. СС. вещества Kaií по отде.гьпи.гги, так и в комбинации, стимулировал; продукцию Kn-пероксидаэы и лигнинпероксидазьг. Однако самая висскс.: Mn-пероксидаэная активность - 670 оед'г РБП - была выявлена sope; 14 суток ТФФ ОВЛ в среде с 600 мг глюкозы, а самая высокая лигнии-• пероксидизная активность - в культуре, выращенной в приоутствт аспарагина и глк^озн. При этом лигнинпероксидазная активность в Í •раз. превышала величину аналогичной активностц в контроле.

Из литературы известно (Качлишвили, 1992), что способ культи-виров^ния 6a3t ,;¡:íu;bHbtx грибов в большой стеленн определяет кх . 6¡ го-синтетическую активность. Результаты, представленные в таблице 7; свидетельствуют о том, «то глубинное культивирование С,unicolor 062 оаеспечивгло хороший рост гриба — прирост протеина в контроле

Таблица .

Рост И фармент/з-; И.-К-ЗЛ ÉKT>.íBÍSCV> C.-'—i.'N' ; ; ï;S2 Zj ЭЕЕИСИИССТИ CT дог -лнителы&я углерода п i-лз ярд глубин?.-".-й

■ ■ фс-ркентаи::.* -сбрсгхсп j лгяи (п=3).

Вариант ¿'утки Прирост ' Ласк?-;.., Hn-t-c-t-c-cti-asa, , опыта протеида, гег . - 4 .и / г и

Лоза (К) - i 15 ■■■ 1 . 23 + ; j .5

■у i . a 1С í ■ ;. .3 - .0

11 • ' ?А ■ - i. Л ■■ ; 2 + С + e

к--» o;oes* 1 Ч + 1. -Г 4- ; ■> .5 0 .7

■1 i ó .. 35 i 7 Э t -4 . 0

I1 75 +. n ó 151 V • — ''j л + 15 -,

+ Л V 1 17 » V - "IB i. +- t о

• '- .\»¿ . * J. . 5 ' -14 О i

' f 11 А 4 4 + i Л :>

г i 0 v-S' 1 Г' z o - 4C V - ■. . t 7 .8

а o "j. ■ ... . j T 9 . 0

i. . * - - •flC л i ' 1 l'

К + t c 1 ■ ' 4 ó "45 с '-. -. . 1

Л 0 27 .1

us .-11 - r^ 120

. rcop Л ? ; П a ■ 'J .. - S

I' • Г.Ш.Л : i 0. 3 536 .

• öÄnsew. -. 14 Ve î 0. j i 33 ',3 Ç.

a-—- i еутс 1С. - t !'" i t V,

O i С s < .-i : - - i.. 1 АГб-Ш- _ сг jj !чС1

1 Ь - i > 1- • г, с ^ ' '

i - _ лОгТ^Г Г V - г. ■i. s - О -: I'M ! f ■

— i О "Г «с <~ V I _ s-. г !

- Т. - , « » - ■ : • S ft H 1 И t ÍÜ2 J U

ЛЧГ-1* (Я Й

всаорзгкч. в присутс-г^^ч чо-орог::-_ ¡г - tri pj ci м - i

joolr _ 'j 7) »-i»

a -

r .. >■ . „и . .-1 . >О ..-4 ■ с - f I

С -i -4. z С* г

mil

-го-

де, содержащей одновременно глюкозу и аспарагин, резко с- л я-лс продукцию фермента: специфическая лакказне • акт;шность C.unicoioj 062 достигала 7-24 сед/мг протеина, тогда как в контроле она а« превышала 1.4 юед/мг протеина. Аналогичная корреляция зьздг-.енг между лигнчназвой активностью С.unicolor 062 и наличием в средь дополнительных источников углерода и азота.

Добавление к отмытой лозе раствора ве5?оств, зкстрагирог-зшьгх .из ОВЛ, также стимулировало лакказнум и яигниназную активнееги С.unicolor 062 по сравнению с контролем. Наконец, цадо отметить несколько неожиданный факт, а именно, сравнительно очень высокую лаккаэную и лигниназную активности С.unicolor 062, выраярннум ис растворе экстрактивных веществ в отсутствие лигноцеллюлозк. В stops варианте опыта была выявлена самая высокая продуцирующая способность гриба: 44.9 вед/кг протеина по лакказе и 5.58 ед/мг протеина - по лигниказе. Мп-перокекдазная активность С.unicolor ÇS2 такхе возрастала при добавлении к растительному субстрату аепдрагина се отдельности или в комбинации с глюкозой - уэовзнь ферментативаей активности увеличивался по сравнению с контролем, соответственкс. более чем в 5 и 8 раз через 13 суток культивирования гриба. Реет С.unicolor 062 на среде, с OBI + раствор экстрактивных вецеств •на среде с экстрактивными веществами также сопровождался значительным няк.о1:лением внеклеточной Нл-дерсксидазной активности, как видно. б;'.агсдарл высокой продуцирующей способности гриба. Однако, надо отметить, что при глубинном культивировании С.unicolor 062 на среде с зкетрахтигкими веществами, Б отличие от других вариантез опыта, Кп-перохсвдазная активность ¡1° обнаруживалась, по крайпзи мере,.s течение 4 суток выращивания.

Сравнение продукции ферментов культурой С.unicolor 062 в условиях тЕвкДсф'з?ной и глубинкой фзрментации отмытых водой ОЗЛ показало, чте глубинное культивирование гриба обеспечивало пониягняу;;

- гх -

лзккаэтую и Мп-г?г*?тсидаааую £ктяввости'С.unicolor С62 по сра^в--. нию ТФФ. В то же время, повышение oíх-их ферментативных активностей при глубинной ферментации ОВЛ по сравнению с твердофазной имо-ло место при культивировании С.unicolor 0S2 и присутствии сдноара- -менно глпкозы -и аспарагина. ' "'4- . . •

■ ' ' ВЫВОДЫ. • ■■■"'■ ■

1. Проведен скрининг 17витамме® лнсыих базкпиальных грибоа -продуцентов лигнишлитических Ферментов пэи„твердофазной ферментации образков виноградной лооа, !'аия^чсим дастчуйггэром лигн;п;опого ■ компонента субстрата оказались Ьйгамии ?hanerochaet.e cbrysosporiu», разлагавшие 285-309 . мг лигнина за 14 суток ТСФ. C-orioïus ccnatus .035 лучше других грибов обогаяал субстр-т ирзтсшво:-; - мг • за 7-суток ферментации. Нэнлучким '.npQjfcrçcwjb» лг^гказы и.лигниназн оказалась Сеггепя unicolor, QG2, -,а Кг.-эаьисл'.'.кэГ! nepcnc:y,.v¿i — Pleurotos' cstreatus ÍSr-151. Все иссяьдсзанкм^ культуры грибсз проявляли низкую лигнинязроксидаэяу» активность.

.• 2. Исследозаиь дчааника Т'ФФ СЯ?г отобравши '.ятажсм . гри&д -, C.ar.icoli»? 062. .Деградация яеляюлози ахяболи*) s-гтивко .ироисходила в тэчекие перзой надели ферментации.-''Лигнкз на- разлагглсн р 'течение первых 4 су*го;-, и чгамзояео активное-- его • разложение прсисхсй'лс

при замедлении р5ета культуры. Синтез лакхазы и лигниа&зы яиявява; . • - *

з.периог аэтиаасго роста;Гр;гва и в. с.'БЦ>;снарной- .Оаэе, достигая

»ахсииума •через 4 кёдели ферментации субстрата. Максимум

■ ' ■ * ■ .

Нп-пероксидазной активности обнаружен яа 14-й день ТСО с.йд,

3.Устаиозяеяо, что дополнительные .источники углерода - глюкоза, целлобиоэа и авиЬел - подааяйют* разложение, целлюлоз.-. Добаал---ние. авнцепа к ростовому субстрату способствовало преимущостЕ-енной деградации лигнина. Глюкоза -и цел ло&иозз •стимулирсззд: • лвкк.-гэную активность С.unicolor 062. Глако^-а спвгоприятстяорала такае обра-

зованикз ün-пероксидазы. -

■4. Источники азота в концентрации СО иМ по азоту/4 г G-iii по давляли деградацию лигнина в течение первой недапи ТФФ. Оерподас лый аь.чокий и глютамин обеспечивали наибольшую лакказвую, а г.зст •< нокислий'<шконий и пептон - tin-пероксидазную активности C.unicoln -062. Установлено, что оптимальной для продукции ферментов яьллет.: концентрация аспарагина, .равная 60 мЯ по азоту. •;..■

Совместное введение глюкозы -и аспарагина • •• способствовало • преимущественной деградации лигнина, комбинация -этих соединений .,.; {»несколько раз стимулировала продукцию лигпинолитических . фермеито при твердофазной и глубинной ферментации ОВЛ.-

5. Установлено, что экзогенные февольные соединения - феруло бэя кислота, пваякол, вератрилйвый спирг, индулин AT - в 2-3 раз стимулировали разложение лигнина. Вератриловый спирт в 4,-1 раз ьсг вьппал лакказн> и лигниназную-активности С.unicolor. Ф&рупопгх ванилиновая кислоты благоприятствовали образованию Нп-пероксидгзс;

■ 6. Показано, что выход Ферментов при ТСООВЛ не уступает глу винному культивированию по их активности.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ. 1. Качлишвили Е.Т., Квеситадзе Г.И., Элисашвили Б.И.» Бзгсд вили■ Г. К., Закариашвили H .Г., Сараули Ц.Г. Делигнификация растительного сырья базддиальными грибами .// Тезисы докл. V Beer. сим-поз. по фенольным. соед.: - Таллинн, 1S67, В.2, С. 136-137. .

• • 2. • Элисаивили Закариашвили-Н.Г., Бегашвили М.Г., Кечлн-

швили -Е.Т.,. Гчпвситадэе • Г. И: Оксидоред^ктазы дереворазрушаюиих -сь-зидиомицетов-у/. Тезисы докл. IV Всес. конф. "Биосинтез ферменто: микреюрг. ' - Ташкент, 198ÍJ, С. 168.

i. -¿лисашвили В.И., Квеситадзе Г. И. , Качлиатили-—Е.Т., Зака-риашеили -Н.-Г. ,• Кикнадзе М.О. , Несхи 3. А. Твердофазная ферментг-Ц!г!

- ;<" - _ . •

обрезков вивограян«' '' лсмл оп^ияиси^г^тг» л - i';ctoi::k:: бгыпгсяи-Фэркенп к препэратсз // Превращения дрег гс/аы при знгинатич. н микробиол.'Ьоздействиях. - Рига, 1988,; С. 133-190. ; • - .

4. EUsashvili V., Besashvili И;, Kachliohvili-" В.; Kihnadsa • ' tl., Zakariustrrili.ti., Kv'esitsdae Q.- Ba;iM?.c.ri700tes cultivation о;. • ояа еучг vine cuttings for' the production of i r.tein end ex- '

tracellular enzyses ')/ Bioconversion of Pleat - -îîaw . Materials by Microorganisms. - Pushchino, 1389; ?.12£'-i;.}. ''

■ ' 5. .;Злисазс-1 ВЛ1., йггр.ад-.га! ¡S.r.', "Качливгоили Ки:с-

гздэо M.p..,• Бегсс;и»ги M. Г., 'Квеситадз!?"Г.IT, «оркеи-т до-аворазру -.'¡jsKBtl« грибов // 'Косф. '-микробиологов Зт-гРчся. .- Тбилисл: Моцдаерэ5а, 1Е39, С; 130-144. ' • ' *,,>

6. JSUsastwiU -'7.1.',. Zakariaahv'ili' 8.G., Sachlisbvili •. Е.Т., ,4ikn,:dze H. 0..,'.' ïusishvili Kh, A., OlenU П.'!., Pirtskhr.laishvili 3.0.. Datuashvili Е.Л. Regulation.of 'libMocellulolyti-? entivity -of basidioayictes -'during bioccr.versicu pJnr.t. sut. .ti-ates // Russian Biochea- Pi'jtechru;!., 1ЯЭ1, 7. S,'S2/3, ?. Cl.- '. - '..' .

Пипепл OftitotVi &-2-Л, '(^б^п^г^-^л С(

j/bol -»б^с^оз^Ь