Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Криптоспоридиоз и эзофагостомоз свиней при моноинвазиях и паразитоценозе

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Криптоспоридиоз и эзофагостомоз свиней при моноинвазиях и паразитоценозе"

ОД

/ 6 и:оя 1998

На правах рукописи

ВАСИЛЬЕВА Валентина Алексеевна

Криптоспоридиоз 11 эзофагостомоз свиней при моноинвазиях и паразитоценозе

Специальность 03.00.19 — паразитология, гельминтология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

МОСКВА 1998 г.

Работа выполнена в Мордовском государственном университете имени Н.П. Огарева и в лаборатории экспериментальной технологии кулыур тканей, питательных сред и клеточной биотехнологии Всероссийского научно-исследовательского института имени Я.Р. Коваленко (ВИЭВ, г. Москва).

Научный консультант — Заслуженный деятель науки Российской федерации, доктор биологических наук, профессор ДЬЯКОНОВ Л.П.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор НИКИТИН В.Ф.

(ВИГИС),

доктор ветеринарных наук ШУБИН В .А.

(ВИЭВ),

доктор ветеринарных наук, профессор АКБАЕВ М.Ш

(МГАВМБ).

Ведущая организация — Московская государственная академия прикладной биотехнологии.

Защита диссертации состоится "_/_" июля 1998 г. в часов на заседании диссертационного совета Д02.04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И.Скрябина (ВИГИС).

Адрес: 117259, Москвв, Б. Черемушкинская ул. д., 28.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС.

Автореферат разослан " "/ " Ш-оНлЛ-1993 г

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук В.К. БЕРЕЖКО

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы.

Первые сведения об ассоциативных (смешанных) болезнях животных появились более 100 лет назад (H.A. Холодковский, 1896; В. А. Догель, 1927; Ch. Elton, 1927 и др.).

Организм животного в процессе эволюции превратился в среду обитания как для полезных, так и для патогенных видов микроорганизмов, вирусов, простейших, гельминтов и членистоногих на разных стадиях развития.

В патологии человека, животных и растений паразитизм занимает значительное место, и поэтому вопрос о взаимоотношениях между паразитом и хозяином при моно- и ассоциативных (смешанных) инвазиях - инфекциях в каждом конкретном случае представляется интересным и важным не только с общебиологической, но и с практических точек зрения.

Паразитоценозы и ассоциативные болезни представляют серьезную научную и производственную проблему в свиноводческих хозяйствах с высокой концентрацией поголовья и особенно при нарушен™ ветеринарно-санитарных правил содержания животных.

Изучение паразитоценозов имеет важное значение для организации лечебно-профилактических мероприятий и уменьшения экономических потерь в животноводстве (Hegner, 1926; E.H. Павловский, 1955; Т. Арнастаускене, 1964; Л.П.Дьяконов, 1973; Д.И. Панасюк и др., 1975; Д.И. Панасюк, 1978; P.A. Радионов, 1980; А.П. Маркевич, 1982; Л.П. Дьяконов, 1984; В.В. Филиппов, Э.Х. Даугалиева, 1984; Ю.В. Петров, 1988; В.-К.И. Пауликас, 1990; С.А. Сулейманов, 1993; Р.Т. Сафиуллин, 1995) и др.

В последние 10-15 лет интерес исследователей привлекла проблема Криптоспоридиоза у разных видов животных и человека (I. Pavlasek, V.F. Nikitin, 1983; Ю.К. Горбов и др., 1984; Т.В. Бейер, 1987; Т.А. Шибалова, И.Ф. Павласек, Н.В. Касаткина, 1993; С.А. Acedo et al., 1995; A.M. Запруднов, Л.Н. Мазанкова, 1997; T.B. Бейер, 1998; и др.).

Установлено, что криптоспоридии вызывают тяжелое заболевание у тех животных, у которых имеется иммунная не-

достаточность (иммунодефицит) (R. Fayer, S. Ungar, 1986; T.B. Бейер и др., 1987; и др.).

Следует отметить, что наименее изученным является крипто-споридиоз свиней.

Эзофагостомоз свиней, по данным многих авторов, является опасным гельминтозом (А.П. Матусявичюса, 1983; Б.К. Пауликаса, 1990 и др.), при котором происходит значительное снижение естественной резистентности животного.

Поэтому изучение распространения и клинического проявления часто встречающихся одновременно криптоспоридиоза и эзофагостомоза поросят имеет большое теоретическое и практическое значение, как и разработка методов лечения и мер борьбы при моно- и смешанных инвазиях.

1.2. Цель и задачи исследований.

Целью нашей работы явилось изучение распространения и эпизоотологии криптоспоридиоза и эзофагостомоза свиней, а также клинического и патологоморфологического проявления, вызванных криптоспоридиями и некоторыми гельминтами, и разработка способов лечения и мер борьбы с заболеваниями.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить литературные данные о криптоспоридиозе (C.parvum) и некоторых гельминтозах свиней и их паразитоценозах.

2. Изучить распространение и сезонную динамику криптоспоридиоза и эзофагостомоза свиней в хозяйствах республики Мордовия.

3. Изучить сезонную и возрастную динамику ассоциативных инвазий криптоспорвдий и гельминтов у поросят.

4. Изучить симптомокомплекс, патологоморфологические и некоторые гистохимические изменения в органах и тканях поросят при естественном и экспериментальном заражении криптоспоридиями и эзофагостомами.

5. Изучить проявление криптоспоридиоза у экспериментально зараженных мышей и развитие криптоспоридий.

6. Изучить чувствительность культур клеток животных в возбудителе криптоспоридиоза свиней и развитие криптоспоридий in vitro.

7."Испытать эффективность некоторых препаратов для терапии при моно- и ассоциативных инвазиях у свиней и разработать меры борьбы.

1.3. Научная новизна исследований.

Впервые в хозяйствах республики Мордовия изучена в сравнительном аспекте экстенсивность и интенсивность моно- и ассоциативных инвазий криптоспоридий и эзофагостом у свиней различного возраста, изучена сезонная и возрастная динамика.

Впервые при криптоспоридиозе и эзофагостомозе у поросят прослежена динамика патологоморфологических изменений. Изучены патологоморфологические изменения в лимфатических узлах, селезенке, печени, сердце, почках, легких, кишечнике. Показано, что при ассоциативной инвазии (криптоспоридиоз и эзофагостомоз) в подвздошной и ободочных кишках установлено острое—катарально-геморрагическое воспаление; в печени, почках, миокарде—явления зернистой паренхиматозной дистрофии и инфильтрации соединительной ткани этих органов макрофагами, лимфоцитами и гистиоцитами; в селезенке — гиперплазия лимфоидной ткани; в легких — очаговая серозно-катаральная бронхопневмония.

На основе использования гистохимических методов исследования впервые получены данные по изменению содержания гликогена в клетках печени и липидов в надпочечниках при криптоспоридиозе и эзофагостомозе.

Расшифровка патологоморфологических и гистохимических изменений в динамике болезни позволили расширить существующие представления о патогенезе криптоспоридиоза поросят.

Получены данные по симптомокомплексу криптоспоридиоза поросят при экспериментальном и естественном заражении. Экспериментально воспроизведено заболевание криптоспоридиозом белых мышей 1-14-дневного возраста, изучены патологогисто-логические изменения в кишечнике и внутренних органах, выявлены стадии развития С.рагаипв желудочно-кишечном тракте, некоторых внутренних органах и фекалиях.

Получены новые данные по культивированию С.ратнп и развитию их в культурах клеток легкого плода коровы (ЛЭК), почке

эмбриона свиньи (СПЭВ), клеток сосудов сердца теленка (КСТ), тестикул быка (ТЭБ), почке хомячка (ВНК).

Установлена лечебно-профилактическая и экономическая эффективность новых препаратов — фенбендазола при эзофагосто-мозе, цигро и кокцидиовита в сочетании с витамином В,2 при крипто-споридиозе и их смешанной инвазии и предложены меры борьбы.

1.4. Практическая ценность работы.

Изучение распространения криптоспоридиоза и эзофагосто-моза у поросят, а также сезонной и возрастной динамики заболеваний в трех агроклиматических зонах республики Мордовия послужили основой для определения эпизоотической ситуации по указанным инвазиям и паразитоценозам и необходимости разработки мер борьбы.

Для свиноводческих хозяйств рекомендованы новые лечебные препараты: кокцидиостатики и антгельминтики, которые эффективны при моно- и ассоциативных инвазиях, которые широко применяются в хозяйствах республики Мордовия и рекомендуются для других регионов. Разработано 4 методических рекомендаций и указаний по диагностике, лечению и профилактике криптоспоридиоза и ассоциативных инвазий (1996-1998 гг.).

Результаты исследований по патологоморфологическим и гистохимическим изменениям в организме поросят при моно- и смешанной инвазии, а также по патогенезу криптоспоридиоза, эзофагостомоза и их паразитоценозах рекомендуются для использования при чтении лекций в ВУЗах и техникумах по курсу "паразитология" и при переиздании учебников по паразитологии и патологической анатомии животных.

Для изучения развития криптоспоридий in vitro рекомендуется использовать культуры клеток СПЭВ, ЛЭК и ТЭБ, как наиболее чувствительные к этому возбудителю. Белые мыши в возрасте от 1 до 14 дней могут быть использованы в качестве экспериментальной модели для изучения криптоспоридиоза свиней.

1.5. Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены:

• на научно-производственной конференции по итогам научно-исследовательских работ за 1985 год (май 1985), г. Саратов и г. Ульяновск;

• па конференции молодых ученых г. Белая Церковь, 1986 г.; « на научно-производственной конференции молодых ученых

г. Куйбышев (сентябрь 1987 г. );

• на заседании Ученою совета вет. факультета (г. Ульяновск, 1991);

• на XXII, XXIII, XXIV, XXV, XXVI Огаревских чтениях Мордовского госуниверситета за 1993 г., 1994 г., 1995 г., 1996 г.,

1997 г. (г. Саранск);

• на Всероссийской научно-производственной конференции по протозоологии "Диагностика, терапия и профилактика прогозой-ных болезней животных" (г. Москва, ноябрь 1997 г.);

в на межкафедралыюм совещании Аграрного института Мордовского государственного университета (г. Саранск, апрель

1998 г.).

1.6. Публикация результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано 18 работ.

1.7. Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 238 страницах машинописного текста и включает разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения. Диссертация содержит 20 таблиц и 63 рисунка. Список литературы включает 357 источников на русском и иностранных языках.

1.8. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Распространение криптоспоридиоза и эзофагостомоза у поросят в республике Мордовия.

2. Сезонная и возрастная динамика криптоспоридиоза и эзофагостомоза свиней при моно- и смешанных инвазиях.

3. Патогенное влияние moho- и смешанной инвазии (крипто-споридиоз, эзофагостомоз) на организм животных по данным клинического, патологоморфологического и гистохимического методов исследований.

4. Изучение чувствительности культур клеток животных к криптоспоридиям.

5. Внедрение в ветеринарную практику комплексной терапии при моно- и смешанной инвазии (криптоспоридиоз, эзофагостомоз).

6. Совершенствование методов диагностики и мер борьбы с криптоспоридиозом и смешанными инвазиями.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследований.

Исследования по теме диссертации проводились с 1985 по 1997 гг. Экспериментальная часть работы выполнена на кафедре патанатомии, инфекционных и инвазионных болезней сельскохозяйственных животных Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева, в лаборатории экспериментальной технологии культур тканей, питательных сред и клеточной биотехнологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ, г. Москва), а также в хозяйствах республики Мордовия.

В опытах по воспроизведению гельминтозов и крипто-споридиоза использовано 45 поросят от 3 -х до 60-дневного возраста, для изучения экспериментального криптоспоридиоза у лабораторных животных—103 белых мышей 1-14 дней. Подвергнуто гельминтологическому вскрытию по К.И. Скрябину (1928) 3597 поросят разного возраста, копрологически исследованы пробы фекалий от 15 609 свиней в хозяйствах и на мясокомбинатах республики.

Копрологические исследования на выявление яиц гельминтов проводили по методу Дарлинга в модификации B.JI. Якимова (1931), Г.А. Котельникова и В.М. Хренова (1973) и Фюллеборна.

Для обнаружения ооцист криптоспоридий готовили мазки фекалий от больных и подозреваемых в заболевании поросят и мышей в изотоническом растворе хлорида натрия, фиксировали

смесыо Никифорова или на пламени горелки и окрашивали карбол-фуксином по Цилю—Нильсену.

Для изучения стадий развития криптоспоридий в организме мышей их убивали на 7-9 день после заражения, готовили препараты из содержимого желудка и разных отделов кишечника, печени, селезенки, легких, сердца. Препараты фиксировали и окрашивали карбол-фуксином по Цилю—Нильсену и Романовскому—Гимзе.

Всего было обследовано 15 609 свиней разного возраста из трех агроклиматических зон республики Мордовия. Интенсивность инвазии определяли по количеству обнаруженных ооцист криптоспоридий. За слабую интенсивность принимали наличие (до 5 ооцист) в 100 полях зрения микроскопа, среднюю (до 1 в поле зрения) и сильную (более 5 в поле зрения) при увеличении 90 х 10.

Суспензия ооцист C.parvum (син. C.muris) была получена из фекальных масс методом флотации от больных криптоспоридиозом поросят. В качестве флотационного раствора использовали смесь БРЕза, состоящую из сульфата магния и тиосульфата натрия (плотность раствора 1,25-1,3 г/см3).

Применение указанных флотационных растворов позволяет получить изолят ооцист возбудителя. В последующем собранный материал методом центрифугирования с добавлением дистиллированной воды в десятикратном объеме отмывали от флотационных растворов (1,5 тыс. об/мин в течение 15 минут).

Полученную биомассу возбудителя сохраняли в 2,5% растворе бихромата калия или с добавлением антибиотика гентамицина в бытовом холодильнике ( t° = +4+80 С).

При подборе поросят для экспериментов по криптоспоридиозу копрологические исследования проводили за 6 и 3 дня до заражения, через каждые 24 часа до 12 суток и затем на 16, 25, 30, 40 и 45 сутки после заражения.

Гематологические исследования в динамике криптоспори-диоза проводили в первые 5 суток через каждые 24 часа, в динамике смешанной инвазии в 30-60-суточном возрасте, в динамике эзофагостомоза на 3,6, 8, 12,16,23 и 45 суток после заражения.

Яйца эзофагостом культивировали по методу В.А. Капитоновой (1980).

Изучение возрастной и сезонной динамики криптоспоридиоза и эзофагостомоза свиней проводили на фермах колхоза "Родина" Ромодановского района и свинокомплексе "50 лет ВЛКСМ" Чамзинского района республики Мордовия. Животных обследовали один раз в месяц.

Симптомы болезни при паразитоценозе (криптоспоридиоз+ эзофагостомоз) изучали на 45 поросятах от 3-дневного до 60-дневного возраста, которые были разделены на три подопытные группы по десять животных в каждой и одну контрольную (15 животных). Животные до заражения были трижды подвергнуты индивидуальному клиническому обследованию, а также копроскопическому исследованию на наличие яиц гельминтов и ооцист криптоспоридий. Поросятам первой подопытной группы ввели пероралыю по 4,0 тыс. ооцист криптоспоридий на 1 кг массы тела. Животным второй группы также перорально ввели по .2,0 тыс. инвазионных личинок эзофагостом на 1 кг массы тела. Для воспроизведения ассоциированной инвазии поросят третьей группы заразили одновременным введением по 4,0 тыс. ооцист криптоспоридий и 2,0 тыс. инвазионных личинок эзофагостом на 1 кг массы тела. Животные четвертой группы служили контролем.

Поросята для опытов были приобретены в хозяйствах, благополучных по инфекционным и инвазионным болезням. В течение опыта для предупреждения естественного заражения эндопаразитами поросят содержали в отдельных станках изолированно, в одинаковых условиях. Клетки, кормушки и поилки подвергали механической очистке. Пол, стены клеток и инвентарь дезинвазировали два раза в неделю горячим 5%-ным раствором едкого натрия. Кормовые рационы были сбалансированы по всем основным элементам питания в соответствии с нормами (М.Ф. Томме, 1963). По мере роста поросят рационы кормов увеличивали. Подопытные и контрольные животные были сгруппированы по принципу аналогов.

Убой поросят, инвазированных ооцистами криптоспоридий, проводили на 2,5,9,12,16 сутки после заражения, а при заражении личинками эзофагостом убой животных проводили на 22-28 день. При смешанной инвазии (эзофагостомоз + криптоспоридиоз) убой

осуществляли на 6, 10, 13, 14, 15, 26 сутки после заражения. При вскрытии животных брали кусочки тканей из различных органов (печень, легкие, почки, селезенка, надпочечник, кишечник), которые фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. После фиксации освобождали от фиксирующей жидкости, промывая их в проточной воде в течение нескольких часов. После промывки материал уплотняли путем обезвоживания в спиртах и по общепринятой методике заливали в парафин, затем делали срезы и подвергали дальнейшей обработке и окрашиванию.

Убой лабораторных животных проводили через 1-9 суток после заражения чистой культурой С. раг/игп.

Сравнительную лечебную эффективность препаратов цигро и кокцидиовита совместно с витамином В]2 при криптоспоридиозе поросят изучали на 75 естественно инвазированных животных от 3-х -до 30-дневного возраста (с предварительным исследованием на 15 поросятах) в условиях свиноводческого хозяйства колхоза "Родина" Ромодановского района республики Мордовия в весенне-летний период.

Сравнительную антгельминтную эффективность фенбенда-зола, тиабендазола и пиграна и комплексного применения антгель-минтиков и кокцидиостатиков при смешанной инвазии (эзофагостомоз, криптоспоридиоз) изучали на 500 естественно инвазированных поросят 3-х до 60-дневного возраста (с предварительным исследованием на 30 поросятах), на свинокомплексе "50 лет ВЛКСМ" Чамзинского района.

При выполнении работы использовали следующие методы:

• подсчет лейкоцитов и выведите лейкограммы (П.П. Кондра-хин и др. 1985);

• определение количества эритроцитов в крови путем подсчета в камере Горяева и на ФЭКе по методу В.Ф. Полякова (1964);

» чистую культуру ооцист криптоспоридий получали по методу, описанному Т.А. Шибаловой (1968 а; 1968 б; 1969 а;1969 б; 1974 а), который она использовала для кокцидий рода Еипспа; и по методу Т.В. Бейер (1994);

• для культивирования были использованы различные клеточные культуры: постоянные линии клеток свиней (СПЭВ),

крупного рогатого скота (КСТ, ЛЭК, ТЭБ) и сирийского хомяка (ВНК). Поддержание и пересев перевиваемых клеток осуществляли по методикам, описанным Л.П. Дьяконовым и др. (1986,1988);

•патологоморфологические изменения в органах и тканях изучали после окраски срезов гематоксилин-эозином и азур-эозином;

•липиды определяли флюрохромированием фосфином ЗР по методу Фолька и Поппера (X. Луппа, 1980);

•гликоген определяли по Мак—Манус (Г.И. Роскин, Л.Б. Левинсон, 1957);

•внутриклеточную локализацию гликогена выявляли по методам М.В. Кудрявцевой, Е.Э. Завадской (1982); К.И. Быковской и др. (1981).

Результаты исследований обработаны статистически по методу Стьюдента (Ю.К. Баюн, 1989).

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Распространение криптоспоридиоза, эзофагостомо-за поросят и в смешанной инвазии.

Для выяснения распространения криптоспоридиоза и эзофагостомоза свиней в хозяйствах республики проводили анализ данных ветеринарной отчетности республики Мордовия и результатов копрологических исследований 15 609 животных.

Наши исследования показали, что распространение криптоспоридиоза и эзофагостомоза свиней в обследованных хозяйствах из всех климато-географических зон республики неодинаково (рис. 1). Экстенсивность инвазии свиней в хозяйствах, где проведены исследования, варьировала от 0,1 до 44,5% при криптоспоридиозе и от 1,86 до 33,1 при эзофагостомозе.

Из 15 609 исследованных свиней зараженными криптоспо-ридиозом оказались 1476 свиней (9,45%), наибольшую зараженность животных выявили в хозяйствах Большеберезниковского, Ельниковского, Ковылкинского (44,5; 21,2;19,0%), наименьшую — Октябрьского, Ромодановского, Торбеевского (0,1; 0,9; 1,52%) районов.

Эзофагостомозом из 15 609 исследованных животных инвазированными оказались 1891 свиньи (12,1%), наибольшая

им^^Г V 1 /•5,5 . >«7,е

\ Ллеяюаио»

(ай Т < \«

(

\

СМ

V Ч*«^? \

0

>5,7 ЧУ С >22,7

л; г

л

А

I ¡¿лслм-сгчз

) Л

1

{[^окихц ^

N

- ' О Г

-ЛС *14'/ С - А19|2- - ^

влл л

I ^„л/ х

I еп-ёбОлсинс

-----х " ^

;• 2,.^ га

/ * Г>19,-0,

; с* 3 л

• ( • 0 9 - ° / —С^* 5.8 ^

(

) ь^лУц« Ч Г- •

- ¿ШйсгГ^ ^ '

¿ч^у I I / -V

' \ 5 \ А а а

г/; рч /

Ос ^,03 \

Условные обозначения: е- криптоспоркдиоз " а- ээофагостомоа-

Ркс.2. ИнвазироЕанность свиней криптоспоридиоэом и ээофагостомозом з районах республики Мордовия/в % .. /.

инвазированность животных эзофагостомозом выявлена в хозяйствах Атюрьевского, Темниковского, Зубовополянского, Ковылкинского, Атяшевского, Краснослободского (33,1; 22,7; 21,3; 19,2; 19,0; 18,9%), наименьшая—Старошайговского, Ичалковского, Инсарскош, Большеберезниковского (1,86; 3,3; 3,03; 3,6%) районов.

Анализируя зараженность свиней криптоспоридиозом и эзофагостомозом в отдельных хозяйствах, находящихся в разных географических зонах, мы видим, что она неодинакова.

Во-первых, это объясняется разницей природно-климатических условий в местах расположения хозяйств, так как эти факторы влияют на жизнеспособность ооцист криптоспоридий и яиц эзофагостом, находящихся во внешней среде и являющихся источником заражения свиней.

Во-вторых, разница в зараженности объясняется разными условиями содержания и кормления животных. Например, высокая зараженность свиней криптоспоридиями и яйцами эзофагостом обнаруживалась там, где животные содержатся в примитивных, тесных, сырых, грязных и плохо вентилируемых помещениях. Выгулы и вся окружающая фермы территория загрязнены навозом. В этих условиях понижается резистентность организма животных.

В хозяйствах, где установлена наименьшая пораженность, условия содержания и кормления в большей мере соответствуют зоотехническим и ветеринарно-санитарным требованиям, определенное значение также имеют и климато-географические условия. В ходе исследований мы изучали и паразитоценозы поросят. В результате было установлено, что у поросят паразитируют аскариды, трихоцефалы, стронгилоиды, эзофагостомы, эймерии и криптоспоридии.

Анализ копрологических исследований показал, что смешанные инвазии встречаются почти во всех исследованных районах.

Наиболее распространенными во всех хозяйствах являются криптоспоридии и эзофагостомы; эймерии и эзофагостомы; криптоспоридии и трихоцефалы; эзофагостомы и аскариды и паразиты в других сочетаниях. Заболевания проявляются как в острой, так и в хронических формах и вызывают иногда гибель поросят.

2.2.2. Сезонная н возрастная динамика криптоспоридиоза и эзофагостомоза свилей.

Для обоснования наиболее целесообразных сроков проведения лечебно-профилактических мероприятий животных при криптоспоридиозе и эзофагостомозе свиней необходимо было иметь данные сезонной и возрастной динамики тизазированности с учетом географических особенностей зон.

В связи с этим, нами проводилось обследование животных с учетом их возраста на наличие криптоспоридий и эзофагостом в различное время года, путем копрологических исследований больных и результатов вскрытий павших животных.

Результаты наших исследований зараженности свиней ооцистами криптоспоридий по свинокомплексу "50 лет ВЛКСМ" различного возраста по сезонам года показали, что у поросят от 1 до 10-дневного возраста наиболее высокая экстенсивность зараженности отмечается в октябре и апреле — 98,1% и 96,0% и наиболее низкая в июле (20,0%), тогда как у 10-20-дневного возраста самая высокая экстенсивность наблюдается в апреле (39,1%) и самая низкая в июне (7,5%). Молодняк от 20-ти до 30-дневного возраста имел максимум зараженности также в апреле, мае (30,0; 27,6%) и минимум — в июне (5,7%). Наиболее высокая экстенсивность инвазии ооцистами криптоспоридий свиней от 6 мес. и старше установлена в сентябре-октябре (26,6; 21,8%), тогда как число хряков-производителей и свиноматок были высоко инвази-рованы во все сезоны года (Рис. 2, 3).

Исследования зараженности свиней эзофагостомозом различного возраста по тому же свинокомплексу по сезонам года показали, что у поросят от 30-ти до 60-дневного возраста в осенне-весенний период экстенсивность инвазии увеличивается и достигает максимума в сентябре (60,8%), а наиболее низкая отмечена в декабре (15,6%), тогда как у 2-4-месячных поросят самая высокая зараженность в апреле (34,7%) и самая низкая — в июле (10,0). Максимум зараженности у молодняка от 4 до 6 месяцев и старше установлен в апреле и июне (27,5; 26,1%) и минимум — в июле месяце (8,5%) (Рис. 4).

Наиболее высокую экстенсивность заражения крипто-споридиями свиней по колхозу "Родина" отметили у поросят от 1 до

Сентябрь Октябрь Нойбоь Декабрь Январь Февраль Март Апрель Май Июнь Июль Август

| ППоросята от 1 до 10 дней МПоросятз от 10 до 20 дней • □ Поросята от 20 до 30 дней__'

Рис. 2 - Сезонная и возрастная динамика кнвазированности свиней криптоспоридиями различных возрастных групп по свинокомплексу "50 лет ВЛКСМ"

ПЗ месяце» и старше Я свиноматки Охрит- производители

Рис. 3. Сезонная и возрастная динамика ннвазированности свиней различит возрастных групп криптоспоридиями по свинокомплексу "50 лет ВЛКСМ"

ЕЗЗО - 60 дней 02-4 месяца П4 - 6 месяцев

Рис. 4.Сезонная и возрастная динамика инвазнрованности евшей различных возрастных групп эзофагостомами по свинокомплексу "50 лет ВЛКСМ"

10-дневного возраста в ноябре и феврале (85,4; 63,2% соответственно) и наиболее низкую в июле (25,7%, а у 10-ти до 20-дневного возраста — самая высокая зараженность наблюдается начиная с апреля, что составляет 38,4%, и второй подъем наблюдается в сентябре-октябре месяце(28,5; 28,2% соответственно), а самая низкая — в августе (11,5%). У молодняка от 20-ти до 30-дневного возраста максимум зараженности выявили в сентябре (36,9%) и октябре (25,0%) и минимум — в июле (10,3%). Наибольшая инвазированность у молодняка от 6 месяцев и старше установлена в апреле, октябре (32,3; 30,0% соответственно), и наименьшая в январе (12,8%), тогда как свиноматки и хряки-производители имели высокий процент зараженности во все времена года. (Рис. 5, 6).

У поросят от 30-ти до 60-дневного возраста высокая зараженность эзофагостомозом наблюдается в сентябре (58,0%) и апреле (56,6%) и самая низкая в августе (22,7%), у 2-4-месячных поросят подъем наблюдается в мае и июне месяце (34,6; 32,0% соответственно), тогда как у молодняка 4-6-месячного возраста — в апреле, июне (33,3; 33,3%) и наименьшая зараженность — в августе (11,1%) (Рис 7).

Таким образом, наиболее высокая зараженность криптоспо-ридиями свиней всех возрастов в обследованных нами хозяйствах по сезонам года отмечена в основном в весенне-осешшй период. В этот период создаются самые благоприятные условия для заражения поросят: наличие восприимчивых животных и контакт с паразитоносителями.

Изучая зараженность поросят криптоспоридиями и эзофаго-стомами, мы одновременно учитывали и интенсивность инвазии. Количество ооцист криптоспоридий у поросят от 1 до 10-дневнош возраста колебалась от 2 ооцист до 120,8 в одном поле зрения микроскопа, у 10-20-дневного возраста до 25,0, у 20-30-дневного возраста до 16, а у свиноматок и хряков-производителей от 2 ооцист и выше в поле зрения. Интенсивность заражения эзофагостомами варьировала в одном поле зрения микроскопа от 1 до 15 яиц.

Пропедено также изучение зараженности 3648 павших и убитых свиней разных возрастных групп в течение десяти лет (19851995 гг.).

ППооосята от 1 ло 10 дмей «Поросята от 10;о 20;н»й ПГюросэта от 20 го 30 дней

Рис, Сезонная и возрастная динамика инвазировзниости свиней различных возрастных групп криптослоридиями по колхозу «Родина»

Сентябрь Октябрь Ноябрь Декабрь

Явварь Февраль Март Апрель м«й Июнь

:06 месяцев и старше И свиноматки Пхрят- лрошводетели'

Рис.6.. Сезонная и возрастная динамика ш,Базированное свиней различных возрастных групп криптоспоридия ми по колхозу «Родина«

Рис. 7. Сезонная и возрастав динамика инвазированности свиней различных возрастных групп эзофагостомами по колхозу «Родина»

Исследованию подвергались животные, поступившие из различных районов республики на Саранский, Торбеевский, Атяшевсьсий и Ульяновский мясокомбинаты в разные сезоны года. Диагноз устанавливали путем обнаружения паразитов и узелков на слизистой кишечника при эзофагостомозе; при трихоцефалезе путем выявления паразитов, которые имеют характерную хлыстообразную форму; при аскаридозе на основании обнаружения паразитов в тонком отделе кишечника, а также по результатам исследования легочной ткани на личинки аскарид по методу Бермана; при криптоспоридиозе путем приготовления нативных мазков со слизистой кишечника с последующей окраской карбол-фуксином по Цшпо-Нильсену или по Романовскому—Гимзе; при кокцидиозе путем исследования фекалий методом Дарлинга на наличие ооцист.

Было подтверждено, что эзофагостомоз и криптоспоридиоз молодняка в республике Мордовия распространены повсеместно. Эти заболевания регистрируются как в специализированных, так и на обычных свинофермах в течение всех сезонов года во всех возрастных группах.

При вскрытии пораженных животных установили, что моноинвазии (криптоспоридиоз, эзофагостомоз, аскаридоз, трихоцефа-лез, кокцидиоз) встречались крайне редко, только в 24 хозяйствах республики из 71 исследованных. Во всех остальных 47 хозяйствах встречались смешанные инвазии. Среди моноинвазий чаще встречается криптоспоридиоз, затем эзофагостомоз, аскаридоз и трихоцефалез.

2.2.3. Результаты гематологических исследований в динамике криптоспоридиоза, эзофагостомоза и смешанной инвазии.

С целью изучения патогенного действия криптоспоридий и эзофагостом на поросят были поставлены опыты по экспериментальному заражению животных в возрасте от 3-х до 60-дневного возраста каждым из возбудителей или в ассоциации.

В период проведения опытов учитывали клиническое состояние животных, а также проводили гематологические и копрологические исследования.

У поросят, зараженных С. ратин, первые клинические признаки заболевания отмечали, начиная с 4-го дня. Симптомы

болезни характеризовались повышением температуры тела до 40,6 °С в течение трех-четырех дней, диареей, которая выражалась в следующем: фекалии были водянистыми с гнилостным запахом, иногда в фекалиях обнаруживали кусочки слизистой оболочки кишечника с прожилками крови. По мере развития болезни у животных выделение фекалий происходило самопроизвольно, при этом поросята почти не принимали пищу и воду, затем происходило снижение массы тела. Поросята находились в угнетенном состоянии. Единичные ооцисты в фекалиях появились у поросят на 3-й — 6-й день после заражения. Наибольшее количество ооцист С. ратша поросята выделяли с 7 по 10 день. Учет выделения ооцист проводили путем микроскопии на окрашенных препаратах.

У поросят; зараженных ооцистами криптоспорвдий, на 4-й день после инвазирования количество эритроцитов уменьшалось до 6,534 млн/мкл ± 0,73 (по сравнению с контрольной группой), количество лейкоцитов возросло до 21,19 тыс/мкл ± 0,25.

Максимальное уменьшение количества эритроцитов отмечено на 6-й день заражения ооцистами криптоспоридий, когда этот показатель достиг соответственно 5,761 ± 0,58 млн/мкл.

Количество лейкоцитов на 6-й день инвазии достигло 25,53 ± 0,22 тыс/мкл.

Уровень эритроцитов на 10-й день инвазии несколько повысился н составил 6,060 ± 0,70 млн/мкл.

Уровень лейкоцитов несколько уменьшился и на 10-й день составлял 20,10 ± 0,24 тыс/мкл. В последующие дни число лейкоцитов имело тенденцию к стабилизации.

На третий день после инвазирования ооцистами криптоспоридий относительное количество эозинофилов в крови опытных поросят повысилось до 8,9%, а на 6-й день достишо максимума — 15,2%. В последующие дни количество эозинофилов приблизилось к контрольным показателям.

У поросят, зараженных СЫе^аШт, первые клинические симптомы в виде беспокойства, ухудшения аппетита появились на 2—3-й день после инвазирования. На 4-й день инвазии у всех подопытных животных зарегистрирована сильная диарея. Фекалии при этом были жидкие, темно-бурого цвета, зловонные. На 6-8-й день у всех подопытных поросят отмечена депрессия, они были

малоподвижными. С 10-11 -го дня интенсивность диареи уменьшалась и на 19-й день понос прекращался.

На 5-й день после инвазирования поросят появилась лихорадка, которая продолжалась до 13-го дня инвазии. Максимальное увеличение температуры отмечено на 9-й день инвазии.

У поросят, зараженных эзофагосгомами, некоторые изменения в морфологическом составе крови наблюдалось на 6-й день после инвазирования: количество эритроцитов уменьшалось до 6,07 ± 0,49 млн/мкл (по сравнению с контрольной группой), количество лейкоцитов возросло до 28,1 ± 0,21 тыс/мкл.

Максимальное уменьшение количества эритроцитов отмечено на 12-й день после заражения эзофагосгомами, когда этот показатель достиг соответственно 3,1 ± 0,59 млн/мкл. Количество лейкоцитов на 12-й день достигло 32,12 ± 0,17 тыс/мкл.

Уровень эритроцитов на 16-й день инвазии несколько повысился, а максимальное увеличение числа лейкоцитов отмечено на 16-й день после заражения эзофагостомозом, уровень лейкоцитов повысился до 32,31 ± 0,14 тыс/мкл. В последующие дни число лейкоцитов имело тенденцию к стабилизации.

На 6-й день после инвазирования эзофагосгомами относительное количество эозинофилов в крови подопытных поросят повысилось до 10,3 ± 0,80%, а на 12-й день достигло максимума — 12,0 ± 0,96%. На 16-й и 23-й день отмечено уменьшение эозинофилов соответственно до 10,1 ± 0,62% и 8,2 ± 0,58%. На 45-й день этот показатель у подопытных поросят составил 7,2 ± 0,32%, а у контрольных 4,0 ± 0,38%. На 60-й день инвазии количество эозинофилов приблизилось к контрольным показателям.

При смешанной инвазии (криптоспоридиоз + эзофагостомоз) гематологические изменения были более выраженными.

2.3. Патологоморфологические и гистохимические изменения в отдельных органах поросят при экспериментальном заражении С.рагуит, О.ёе^аШт.

2.3.1. Патологоморфологические изменения у поросят, экспериментально иноазировапных ооцистами С. рагуит,

Патологоморфологические исследования органов и тканей поросят, инвазированных ооцистами криптоспоридий в дозе 4,0 тыс.

на 1 кг массы тела, показали, что уже в начальной стадии развития заболевания наблюдаются изменения в кишечнике и в других органах на введение болезнетворного агента.

Наиболее выраженные изменения были выявлены у поросят, убитых на пятый день после инвазирования ооцистами крипто-споридий.

В миокардиоцитах сердца были обнаружены явления зернистой дистрофии; морфологические изменения печени характеризовались круглоклеточной инфильтрацией в соединительнотканной основе органа, наличием большого числа двуядерных гепатоцитов, около кровеносных сосудов скопление лимфоцитоподобных клеток, на периферии дольки найден только один участок микронекроза с полной стертостью рисунка, по периферии его отмечается зона нетрофильных гепатоцитов, в области триады, там, где расположены крупные желчные протоки с наличием в них просвета, явлений образования ложных желчных протоков, свойственных алиме-тарному циррозу не отмечается; в лимфатическом узле выявлены явления лимфостаза, паренхима их сочная, выбухает из капсулы; в легких межальвеолярные стенки местами утолщены, бронхиолы сдавлены, в просвете содержат слущенные эпителиальные клетки, кровеносные сосуды микроциркуляторнош типа с явлениями дисто-нии и отечности периваскулярной соединительной ткани; в селезенке фолликулы белой пульпы гиперплазированы, реактивные центры расширены; в почках эпителий извитых канальцев в состоянии зернистой дистрофии; в кишечнике выявили набухание слизистой оболочки тощей и подвздошной кишок, обусловленное выраженной в разной степени инфильтрацией собственной пластинки слизистой оболочки лимфоцитами и эозинофилами. В энтероцитах некоторых ворсинок видны ооцисты С.рагуит на разных стадиях развития.

2.3.2. Патологоморфологические изменения у 60-дневных поросят, экспериментально шшазированных О.йспГа^нп.

Инвазированные животные в дозе 2,0 тыс. личинок эзофаго-стом на 1 кг массы тела были убиты на 22-28 день после заражения.

Патогенное действие было наиболее выражено у поросят, убитых на 28 день после инвазирования.

На данный срок исследования в сердечной мышце отмечены выраженные явления атрофии кардиомиоцитов из-за уменьшения цитоплазмы; в почках радиальные артерии запустевшие, вены слабо заполнены кровью, извитые канальцы выстланы однослойным эпителием; в печени рисунок дольчатого строения нарушен из- за развившегося цирроза. Ложные дольки различной величины, число эозинофилов невелико и они обнаруживаются в синусоидных капиллярах. Явлений образования ложных желчных протоков, свойственных алиментарному, или портальному циррозу, не отмечается; в селезенке лимфатические фолликулы без светлых центров, центральные артерии сужены и запустевшие.

В легких межальвеолярные перегородки утолщены за счет клеточной инфильтрации, особенно в маловоздушных участках. В содержимом альвеол находятся клеточные элементы, состоящие из нейтрофилов, лимфоцитов. Бронхи как среднего, так и мелкого калибра, имеют значительно суженные просветы, их эпителий секретирует муцин.

В толстом отделе кишечника ободочная кишка на значительном протяжении лишена эпителиального покрова, при этом эпителий десквамирует целыми пластами. Эпителиальный покров крипт характеризуется усиленным слизеобразованием, просветы некоторых крипт расширены и заполнены муцином. Слизистая оболочка кишечника отечна, разрыхлена, инфильтрирована лимфоцитами, плазматическими клетками и единичными эозинофилами.

2.3.3. Патологоморфологическне изменения при ассоциированной инвазии (криптоспорндиоза и ззофагостомоза) поросят.

У поросят, экспериментально шпшированных смешанной инвазией наиболее характерные изменения были выявлены при убое на 5, 6, 9, 10 и 13 день.

У поросят, убитых на 6 день после инвазирования (по сравнению с контролем), установлены следующие изменения. В сердце миокардиоциты имеют хорошо выраженную продольно-поперечную исчерченность сарколеммы. Рисунок хроматина ядер не изменен.

Соединительная ткань интерстиция нежная, умеренно выражена. Кровеносные сосуды микроциркуляторного русла умерен-

но заполнены кровью; гепатоциты центральной часта печени имеют зернистую цитоплазму, центральная вена и межбалочные капилляры умеренно заполнены кровью. Междольковая соединительная ткань рыхлая, имеет в небольшом количестве инфильтраты лимфоидно-гистиоцитарных клеток; в легких рисунок альвеолярного и бронхиального строения несколько разрушен, стенки отдельных альвеол имеют разрывы, в результате чего возникают большие полости, заполненные воздухом. Бронхиолы расширены, слизистая обильно покрыта муцином. В просвете некоторых бронхиол содержится десквамированный эпителий и бластные клетки. В селезенке фолликулы белой пульпы содержат умеренное количество лимфоидных клеток, красная пульпа содержит умеренное количество эритроцитов, сидерофагов и бластных элементов. В почках почечные клубочки несколько уменьшены в размерах, просветы капсул Шумлянского расширены, выстилающий их эпителий уплощен. Эпителий Юкстагранулярного аппарата имеет четко выраженный хроматин ядра, отдельные извитые канальцы выстланы эпителием, имеющим зернистую цитоплазму, просвет таких канальцев заполнен белковой массой. Стенки отдельных артериол утолщены, их эндотелий имеет пикнотичные ядра. В толстом отделе кишечника поверхностный слой эпителия слизистой местами десквамирован. Слизистая покрыта катаральным экссудатом, содержащим большое количество клеточных элементов. Эпителий крипт пролиферирует особенно в местах локализации гельминта. В тонком отделе кишечника слизистая утолщена, ворсинки деформированы, в них видны ооцистыС.ратшг Клетки кишечного эпителия находятся в состоянии слизистой дистрофии.

При исследовании на 9,10 дни после заражения (по сравнению с контролем) было установлено следующее. В сердце мышечные волокна потеряли исчерченность. Ядра кардиомиоцитов темные, небольшого размера. Капилляры полнокровны, эритроциты имеют вид "монетных столбиков". В печени рисунок балочного строения сохранен. Гепатоциты центральной части имеют зернистую цитоплазму, в междольковой соединительной ткани выявляются множественные эозинофилы с явлениями дегрануляции. В селезенке фолликулы белой пульпы содержат разреженные клеточные элементы, красная пульпа содержит эритроциты; трабекулы местами

инфильтрированы лимфоидно-гистиоцитарными клетками. В почках почечные клубочки неправильной формы, эндотелий капилляров пролиферирует, эпителий некоторых извитых канальцев набухший, выступает в просвет полости канальцев, которые заполнены белковозернистой массой. В легких стенки альвеол утолщены, инфильтрированы клетками, в отдельных участках просвет расширен в связи с разрывом перегородок, другие участки уплотнены. Бронхиолы имеют набухший эпителий, в отдельных участках он десквамирован, в просвете содержится катаральный экссудат. В толстом отделе кишечника слизистая утолщена, инфильтрирована лимфоидными гистиоцитарными клетками. В подслизистой имеются инкапсулированные участки некроза с прилегающими к нему прослойками лимфоидной ткани, образующим иногда фолликулы. Подслизистая соединительная ткань отечна, разрыхлена, кровеносные сосуды полнокровны, иногда с явлениями дистрофии.

У поросят, убитых на 13 день после инвазирования (по сравнению с контролем), было установлено следующее.

В сердце миокардиоциты имеют признаки зернистой дистрофии. Иптерстиций миокарда отечен. В интерстиции по ходу волокон Пуркинье иногда обнаруживаются скопления лимфоидных, гистиоцитарных клеток.

В печени балочная структура сохранена, ядра гепатоцитов округлые. Междольковые вены, артерии, центральные вены спавшиеся, запустевшие.

В селезенке лимфатические фолликулы без светлых центров, центральные артерии сужены и запустевшие. Венозные синусоидные капилляры красной пульпы спавшиеся пли в той иной мере переполнены кровью.

В почках просвет проксимальных извитых канальцев расширен, эпителий утолщен. Эндотелий капилляров клубочков имеет признаки пролиферации, ядра эндотелиальных клеток содержат нежную сеточку хроматина. Кровеносные сосуды полнокровны, стенка сосудов микроциркуляции находится в состоянии мукоидного набухания и фиброидного некроза.

В легких пери бронхиальная лимфоидная ткань слабо выражена. Междольковая соединительная ткань отечна. Изредка встреча-

ются круглоклсточные инфильтраты с единичными эозинофилами.

В толстом отделе кишечника слизистая утолщена, инфильтрирована лимфоидными гистиоцитарными клетками. В под-слизистой имеются инкапсулированные участки некроза с прилегающими к нему прослойками лимфоидной ткани, образующими иногда фолликулы. Подслизистая соединительная ткань отечна, разрыхлена, кровеносные сосуды полнокровны, иноща с явлениями дистрофии.

Таким образом, при смешанной инвазии по сравнению с моноинвазией развиваются более обширные и отягчающие патологические процессы, которые по патологоморфологической картине наиболее выражены в период интенсивного развития крипто-споридий (на 5-13 день).

2.3.4. Гистохимические изменения при экспериментальном заражении поросят в моно- и в смешанной инвазии.

Гистохимические исследования показали, что гликоген в гепатоцитах печени животного контрольной группы распределен в виде гранул равномерно по всей цитоплазме клетки. Концентрация гликогена в гепатоцитах равна 66,1 ± 0,38.

Снижение количества гликогена в гепатоцитах печени у животных, экспериментально зараженных ооцистами крипто-споридий, по сравнению с контрольной группой наблюдается через 5 дней и равно 57,7 ± 0,76 = 8,4 (Р < 0,001).

На 9 день после инвазирования концентрация гликогена в гепатоцитах также снижена по сравнению с гепатоцитами контрольного животного и равна 56,7 ± 0,86 = 9,33 (Р < 0,001).

Первое снижение гликогена в гепатоцитах печени у поросят, экспериментально инвазированных личинками эзофагостом, происходит на 22 день после заражения, концентрация равна 58,86 ± 0,83 =7,24 (Р < 0,001).

Второе снижение количества гликогена в гепатоцитах печени происходит на 28 день после заражения личинками эзофагостом, концентрация равна 55,36 ± 0,62 = 10,74 (Р < 0,001).

Концентрация гликогена в гепатоцитах печени у поросят на 6-й день заражения ассоциированной инвазией снижена по сравнению с гепатоцитами контрольного животного и равна 46,1 ± 0,99 = 20,0.

На 10 день заражения, концентрация гликогена в гепатоцитах печени еще более снижена по сравнению с животными предыдущей группы и равна 43,28 ± 0,78 = 22,82 (Р < 0,001).

На 13 день у животных, зараженных С.раганп и О.скг^аШт, концентрация гликогена в гепатоцитах печени резко снижена по сравнению с гепатоцитами контрольного животного и равна 36,16 ± 1,02 = 29,94 (Р < 0,001).

Таким образом, наши исследования показали, что у зараженных ооцистами криптоспоридий животных концентрация гликогена в гепатоцитах снижается в среднем на 9,33%, а у ин-вазировапных личинками эзофагостом на 10,74%.

Ассоциированная инвазия приводила к снижению гликогена в гепатоцитах печени от 20,0% до 29,94% в зависимости от сроков заражетш животных.

Инвазирование поросят как одним из возбудителей С.ратнп илиО.скШаПлт, так и в ассоциации приводит к снижению функции надпочечников, о чем свидетельствует уменьшение концентрации лшшдов.

2.4. Экспериментальное воспроизведение крипто-спорндиоза у белых мышей после заражения ооцистами С.рагуига от свиней.

2.4.1. Патологоморфологическне изменения в органах мышат при экспериментальном заражении.

Моделью для воспроизведения и изучения криптоспо-ридиозной инвазии служили беспородные белые мыши в возрасте до 14 дней, доза заражения для мышат была постоянной в течение всех опытов и составляла 300 и 600 тыс. ооцист на животное соответственно.

Со второго дня после заражения всех животных обследовали по методу И. Павласека (1990) на наличие ооцист криптоспоридий в фекалиях.

В течение всего исследуемого периода (15 дней) выделение возбудителя С.ратип с фекалиями у экспериментальных мышат происходило на 4-7 сутки после заражения и в последующие дни.

Морфологически ооцисты, полученные от лабораторных животных, не отличались от ооцист, полученных от поросят. Пик

выделения ооцист приходился на 8-10 сутки после заражения. В это время в одном поле зрения микроскопа обнаруживали более 50 ооцист. Затем количество их снижалось и на 12-15 день обнаруживали в фекалиях единичные ооцисты.

Животных убивали в динамике развития заболевания (на 4,5, 7,8,9,11 сутки после заражения), готовили гистологические препараты и соскобы из различных органов (желудок, тонкий и толстый кишечник, слепая кишка, печень, селезенка, легкие) и окрашивали карбол-фуксином по Цилю-Нильсену и Романовскому-Гимзе.

Наиболее выраженные изменения были выявлены у мышат, убитых на 8 и 9 день после инвазирования, которые по сравнению с контролем выражались в следующем.

В сердце продольная и поперечная исчерченность сердечной мышцы выражена. Капиллярная сеть заполнена кровью; в печени имеются некоторые утолщения междольковой соединительной ткани, в цитоплазме гепатоцитов отложения жира, капилляры обескровлены. В мазках-отпечатках ооцисты С. ратдт.

В почках эпителий извитых канальцев в состоянии зернистой дистрофии, встречаются участки кистознообразно расширенных канальцев. Эндотелий капилляров клубочков с явлениями пролиферации, клубочки анемичны.

В селезенке фолликулы белой пульпы гиперплазированы, содержат значительное количество бластовидных клеток с выраженным митозом. В красной пульпе отмечено опустошение фолликулов, их своеобразное разрыхление.

В легких межальвеолярные стенки местами утолщены, бронхиолы сдавлены, стенки отдельных сосудов находятся в состоянии мукоидного набухания. Перибронхиальная лимфоидная ткань гиперплазирована. В мазках-отпечатках единичные ооцисты.

В тонком отделе кишечника слизистая утолщена за счет инфильтрации ее лимфоидно-гистиоцитарными клетками, эозинофилами и отечности соединительнотканной основы ворсинок. Ворсинки деформированы, в апикальной части их часто обнаруживаются явления десквамации эпителия. Видны ооцисты и шизонты С.рапщш в ворсинках кишечника и мерозоиты в межворсинчатых пространствах, спорозоиты.

- > "VI

- < ' * -

•? -Ч Г.. - ■ I . „ ♦ _

■V * - < ' ••• .

' < -.л • . ,

»$•- . • *„ » • • * е.* . • » . «

Рис.8. Тонкостенные и толстостенные ооцисты и шнзонты С ратин в фекалиях экспериментально зараженной мыши, 9 суток. Окраска по Романовскому-Гимзе. Ув.: 100 х 10

Рис.9. Тонкостенные и толстостенные ооиисты и шнзонты С ратин в фекалиях экспериментально зараженной мыши, 9 суток. Окраска карбол-фуксином по Цилю-Нильсену. Ув.: 100 х 10

На рис. 8 и 9 показана интенсивность поражения крипто-споридиями содержимого кишечника экспериментально зараженных мышей (окраска по Романовскому—Гимзе и Цилю—Нильсену).

2. 5. Изучение чувствительности культур клеток животных к криптоспоридиям и их развития in vitro.

Для изучения возможности культивирования и развития С. parvum, выделенных от свиней в культурах клеток использовали постоянные линии клеток свиньи (СПЭВ), крупного рогатого скота (ЛЭК, КСТ, ТЭБ) и сирийского хомяка (ВНК).

Культуры выращивали на покровных стеклах в пени-циллиновых флаконах. Ооцисты и другие стадии развития, выделенные из кишечника поросят или мышей после отмывания от дебриса в растворах сахарозы плотностью 0,25 мг/мл в растворе Хенкса в присутствии антибиотиков (пенициллин, стрептомицин, гента-мицин), вносили в культуру на монослой из расчета 150-300 тыс. на см3 питательной среды. В одних опытах через 2,5 часа внесенный инокулят удаляли и заменяли свежей питательной средой с 10% сыворотки, в других — оставляли для последующего культивирования без смены среды.

Через 3, 12, 24, 48, 72, 96 часов от начала культивирования криптоспоридий покровные стекла извлекали, фиксировалм клетки метиловым спиртом или смесью Никифорова и окрашивали гематоксилин-эозином, или по Романовскому-Гимзе или карбол-фуксином по Цилю-Нильсену. В исследованных цитологических препаратах через 2-24 часа находили свободно лежащие или присоединенные к мембране клетки ооцисты, а также стадии развития С. parvum-шизонты, содержащие мерозоиты, иногда свободные мерозоиты или спорозоигы, а также зиготы (около клетки и в цитоплазме) и различные стадии формирования ооцист. Через 48 часов наблюдали аналогичный процесс, но число ооцист и стадий развития увеличивалось, и скопление шизонтов и ооцист выявляли как бы над поверхностью клеток. Лучшими клеточными моделями для изучения развития C.parvum оказались ЛЭК и ТЭБ. Частичное нарушение целостности монослоя отмечали в культурах клеток ЛЭК и ТЭБ через 48 часов, а в дальнейшем дегенеративные процессы

нарастали, и через 72 - 96 часов монослой был в значительной степени разрушен. В первые 24 часа после внесения ооцист отмечали некоторую активизацию клеточного деления - возрастало количество клеток в митозе. Через 48 часов отмечали округление клеток, появление гигантских клеток в виде шаровидных тел с просветленной или вакуолизированной цитоплазмой и оттесненным к периферии ядром. Через 48-72 часа ядра многих клеток как бы просветлялись и становились сетчатыми, а в других наблюдалось фрагментация хроматина без формирования хромосом.

В питательной среде накапливались ооцисты криптоспоридий.

Проведенные исследования показали, что С.ратнп, развиваясь в культурах клеток, вызывают цитопатогенное действие, проявляющееся в вакуолизации цитоплазмы, нарушении деления клеток и последующей дегенерации монослоя.

Вывлены основные стадии развития криптоспоридий: споро-зоиты, шизонты с мерозоитами, макрогаметы, зиготы, молодые ооцисты и сформированные тонкостенные и толстостенные ооцисты.

Подобные результаты получены А. Алиевым (1993) при изучении развития С.рагушп от телят в культуре клеток "Таурус-1" и другими исследователями.

2. 6. Изыскание эффективных кокцидиостатнков и антгельмшггаков при криптоспоридиозе, эзофагостомозе и смешанной инвазии.

В опытах по определению лечебно-профилактической эффективности препаратов цигро и кокцидиовита при криптоспоридиозе было использовано 75 естественно больных и 15 экспериментально зараженных поросят.

Испытание препаратов у поросят, обработанных цигро в дозе О, 3 г/кг массы тела по 1 разу в день, в течение пяти дней подряд совместно с внутримышечным введением витамина В,2 из расчета 5 мг/кг, показало 80%-ю экстенсэффективность при криптоспоридиозе. А кокцидиовит в такой же дозировке оказался менее эффективным при криптоспоридиозе, ЭЭ равнялась 60,0 %.

При эзофагостомозе свиней были испытаны фенбендазол, тиабендазол и пигран. Опыты, проведенные в общей сложности на 530 свиньях, показали, что фенбендазол в дозе 5 мг/кг массы тела

по 1 разу в день 3 дня подряд показал 98, 9%-ю ЭЭ и 99, 0% -ю интенсэффективность при эзофагостомозе, 65,6%-ю эффективность при эймериозе, 98,9%-ю экстенсэффекгавносгь и 99,0%-ю интенсэффективность при трихоцефалезе и 45,1%-ю эффективность при криптоспоридиозе; пигран и тиабендазол в принятых дозах были менее эффективными при эзофагостомозе и трихоцефалезе поросят (ЭЭ - 73,8% и 81, 3% соответственно) и совершенно неэффективными при криптоспоридиозе и эймериозе.

Эффективность применения фенбендазола в дозе 5 мг/кг совместно с препаратом цигро в дозе 0, 3 г/кг по 1 разу в день 3 дня подряд составила при эзофагостомозе 97,8% и ИЭ 98,6%, а при криптоспоридиозе - 78,3%-ю экстенсэффективность, пигран в дозе 250 мг/кг по ДВ и препарат цигро в дозе 0,3 г/кг по 1 разу в день 3 дня подряд был менее эффективным и ЭЭ при эзофагостомозе составляла 93,7% и ИЭ 94,3%, а при криптоспоридиозе ЭЭ достигала 77,5%.

Результаты опытов по испытанию препаратов позволяют сделать заключение, что использованные лечебные средства с успехом можно применять для обработки животных групповым методом в условиях промышленного свиноводства.

Таким образом, результаты проведенных опытов показали, что из испытанных препаратов наиболее эффективны при криптоспоридиозе поросят препарат цигро совместно с внутримышечным введением витамина В|2 в течение 5 дней подряд, а при эзофагостомозе - фенбендазол, примененный 3 дня подряд.

Для комплексной терапии наиболее целесообразно применять смесь кокцидиостатика цигро с фенбендазолом.

Эти препараты могут быть рекомендованы для групповой обработки животных в крупных свиноводческих хозяйствах.

3. выводы.

1. Криптоспоридиоз широко распространен в мире и представляет серьезную проблему, вызывая патологию у разных видов животных и человека. Криптоспоридийная инвазия свиней изучена недостаточно.

2. Проведенные исследования показали, что криптоспоридиоз свиней широко распространен в хозяйствах республики Мордовия, однако пораженность животных была неодинаковой в различных природно- климатических зонах и интенсивность инвазии находилась в зависимости от условий введения свиноводства.

3. Эпизоотологическими и лабораторными исследованиями установлено, что в наибольшей степени криптоспоридиозом поражаются поросята от 3-х до 10-дневного возраста. Максимальная ин-вазированность отмечается осенью и весной и составляет 84,8%, что, вероятно, связано с туровыми опоросами, в другие сезоны года она не превышает 42,1% .

4. В специализированных хозяйствах зараженность поросят криптоспоридиозом ниже и в среднем составляет 29%, на свинофермах с небольшим количеством поголовья пораженность достигает 52,8%.

5. Клинически криптоспоридиоз у поросят проявляется кратковременным повышением температуры тела, угнетением общего состояния, диареей, слабостью, потерей аппетита. Падеж поросят чаще всего отмечается в случаях ассоциированной инфекции- инвазии с патогенными вирусами и бактериями.

6. В свиноводческих хозяйствах республики Мордовия часто регистрируются паразитоценозы в различных сочетаниях: крипто-споридии и эзофагостомы; криптоспоридии, эзофагостомы и аскаридии; криптоспоридии, эзофагостомы и трихоцефалы. Ассоциированная инвазия криптоспоридиоза с эзофагостомозом встречается наиболее часто у поросят в возрасте старше 30 дней. По результатам вскрытия павших или убитых животных в 71 хозяйстве моноинвазии зарегистрированы в 24, а смешанные инвазии в 47 хозяйствах.

7. Клинически ассоциированная инвазия криптоспоридиоза и эзофагостомоза поросят характеризуется более тяжелым

проявлением с повышением температуры тела до 40,6 0 С, угнетением общего состояния, анорексией, повышенной жаждой, диареей.

8. Патологогистологические изменения характеризуются катаральным - геморрагическим воспалением кишечника, зернистой дистрофией печени, почек и миокарда, серозно-катаральной бронхопневмонией.

9. Гистохимическими исследованиями выявлено снижение гликогена в печени при моноинвазиях до 10,74%, а при паразитоценозе до 29,94%. В надпочечниках отмечено снижение количества липидов.

10. Экспериментальной моделью для изучения диагностики криптоспоридиоза свиней могут служить беспородные белые мыши. Криптоспоридии выявлены на разных стадиях развития экспериментально зараженных мышей в желудке, тонком и толстом кишечниках, в фекалиях, а также в печени и легких.

11. Изучена чувствительность к криптоспоридиям постоянных линий клеток ЛЭК, ТЭБ, КСТ, СПЭВ и ВНК и показано, что различные стадии развития C.parvum наиболее четко выявляются в культурах клеток ЛЭК, ТЭБ и СПЭВ. Цитопатогенное действие криптоспоридий характеризуется развитием интенсивной вакуолизации цитоплазмы клеток, появлением гигантских клеток с последующим частичным разрушением монослоя через 48-96 часов и нарушением процессов деления клеток.

12. Испытания противококцидийных препаратов цигро- и коцидиовита в дозе 0,3 г/кг в сочетании с внутримышечным введением витамина В12 при пятикратном применении 1 раз в сутки показали их высокую эффективность для лечебно-профилактического применения при криптоспоридиозе поросят.

13. Фенбендазол - высокоэффективный лечебный препарат при эзофагостомозе в дозе 0, 005 г/кг в течение трех дней с интервалом 24 часа

14. При смешанной инвазии (криптоспоридии и ззофагостомы) наиболее эффективным оказалось комбинированное применение фенбендазола с препаратом цигро в дозах, рекомендуемых при моноинвазиях. Экстенсэффективность при этом составила 97,9 -78,3%.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Проведенные исследования позволили рекомендовать для использования в практике:

1. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации дизентерии свиней в хозяйствах республики Мордовия (в соавторстве). Утверждены Коллегией ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Мордовия от 27. 09. 96 г.

2. Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике диарей новорожденного молодняка криптоспори-дийно- эшерихиозной этиологии (в соавторстве). Утверждены Коллегией ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Мордовия от 29. 10. 97 г.

3. Методические указания по основным гельминтозам свиней и борьбе с ними в условиях комплексов и специализированных хозяйств (в соавторстве). Утверждены Коллегией ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Мордовия от 12. 01. 98 г.

4. Методические указания по диагностике, лечению и профилактике криптоспоридиоза свиней. Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ (г. Москва, 1998г. ).

5. Использовать белых мышей как лабораторную модель для изучения криптоспоридиоза свиней и культуры клеток ЛЭК, ТЭБ и СПЭВ для изучения развития C.parvum in vitro.

Материалы диссертации используются:

1. Для диагностики криптоспоридиоза, эзофагостомоза и других желудочно - кишечных заболеваний поросят.

2. Для лечения и профилактики этих заболеваний.

3. При чтении лекций студентам ветеринарных вузов и техникумов по курсу паразитологии и на курсах переподготовки и повышения квалификации ветеринарных специалистов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Васильева В. А., Люжанов А. П. Лечение свиней при смешанных инвазиях (аскаридоз, эзофагостомоз, трихоцефалез) // Информационный листок Мордовск. ЦНТИ. 1988. № 83-88. -2с.

2. Васильева В. А., Козлов В. М. Лечение свиней при трихо-цефалезе //Информационный листок Мордовск. ЦНТИ. 1989. № 5089. -2с.

3. Васильева В. А., Горбов Ю. К., Мачинский А. П. Методические указания по учебно-клинической практике по паразитологии для студентов специальности "Ветеринария". -Саранск, 1989. -36с.

4. Васильева В. А. Паразитоценозы кишечникау свиней// Деп. в ВНИИТЭИ агропром №408 ВС-89. Паразитарные болезни животных.-1989. № 10. -9с.

5. Сковородин Е. Н., Васильева В. А. Влияние аскаридозной инвазии на качество свинины //Деп. в ВНИИТЭИ агропром № 452 ВС-89. Паразитарные болезни животных. -1989. № 11. -6с.

6. Васильева В. А., Сковородин Е. Н., Горбов Ю. К. Патоморфологические исследования органов и тканей поросят при экспериментальном паразитоценозе //Онтогенез, профилактика и лечение с.-х. животных. Сб. науч. тр. ИвСХИ,- Москва.1993 - С. 29.

7. Васильева В. А., Небайкина Л. А. Основные методы диагностики смешанных инвазий свиней //Информационный листок Мордовск. ЦНТИ. 1994. № 2-94. -2с.

8. Васильева В. А., Небайкина Л. А. Сравнительная антгельминтная эффективность некоторых препаратов при эзофагостомозе свиней //Информационный листок Мордовск. ЦНТИ. 1994. № 3-94. -2с.

9. Мачинский А. П., Горбов Ю. К., Васильева В. А. Опыт борьбы с аскаридозом свиней в хозяйствах Мордовии //Тез. науч. конф. XXII Огаревские чтения. -Саранск. -С. 207.

10. Васильева В. А. Смешанные инвазии свиней, вызываемые простейшими и гельминтами //Возрастная морфофизиология и профилактика болезней животных в с/х предприятиях различного типа. Сб. науч. тр. ИвСХИ. -Москва.-1994. -С. 134-136.

11. Васильева В. А., Небайкина Л. А. Криптоспоридиоз животных в республике Мордовия //Ветеринария. -1995. № 6. -С. 45-47.

12. ВасильеваВ. А., Мачинский А. П., Небайкина Л. А. Методические указания "Дегельминтизация животных и внешней среды (дезинвазия)". - Саранск.-1996. -29с.

13. Васильева В. А., Небайкина Л. А. Патологогистологи-ческие исследования органов мышей при экспериментальном заражении С.рагуит. //Тез. науч. конф. к 40-летию Аграрного института МГУ им. Н. П. Огарева (ХХУ1 Огаревские чтения Э.Саранск.-1997. -С. 10.

14. Васильева В. А. Клиническое проявление болезни при спонтанном и экспериментальном криптоспоридиоэе поросят //Тез. науч. конф. к 40-летию Аграрного института МГУ им. Н. П. Огарева (Огаревские чтения ). - Саранск. -1997. -С. 11.

15. ВасильеваВ. А., Небайкина Л. А. Культивирование крипто-споридий в культурах клеток животных //Тез. докл. первой конф. молод, ученых МГУ. -Саранск. -1997. Т. 2. -С. 497.

16. Васильева В. А. Комплексный метод терапии при смешанной инвазии (эзофагостомоз + криптоспоридиоз) //Информационный листок Мордовск. ЦНТИ. 1998. № 77-98. -2с.

17. Васильева В. А. Лечение и профилактика криптоспори-диоза поросят // Информационный листок Мордовск. ЦНТИ. 1998. № 78-98. - 2с.

18. Васильева В. А. Криптоспоридии в этиологии диарей новорожденных поросят //Вестник ветеринарии.- Ставрополь. 1998. В печати.

Текст научной работыДиссертация по биологии, доктора ветеринарных наук, Васильева, Валентина Алексеевна, Москва

уУ." /¿Г/ и-О

МИНИСТЕРСТВО ОБЩЕГО И ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МОРДОВСКИЙ ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени Н, П.ОГАРЕВА ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ ИМЕНИ Я. Р. КОВАЛЕНКО'

На правах рукописи

ВАСИЛЬЕВА ВАЛЕНТИНА АЛЕКСЕЕВНА

КРИПТОСПОРИДИОЗ И ЗЗОФАГОиТиМОЗ СВИНЕЙ ПРИ МОНОИНВАЗИЯХ И

ПАРАЗИТОЦЕНОЗЕ

03,00.19 - паразитология

ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Научный консультант - Лауреат премии Совета Министров СССР. Заслуженный деятель науки Российской Федерации. Член - корреспондент Академии Естествознания, действительный член Нью- Йоркской Академии наук, профессор Л.П.ДЬЯКОНОВ

Москва - 1998

ОГЛАВЛЕНИЕ

отр.

В В Е Д Е Н И Е ............... 4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Возбудители криптоопоридиоза животных 5 систематика и жизненный цикл,,,,,,=,,,=,,,,=,,=.,.,,,,,,,,,,== 10 1 = 2, Распространение и сезонная динамика

криптоопоридиоза животных, .........................15

1=3= Распространение ззофагостомоза свиней, его сезонная и возрастная динамика,,=..,..,.,............=.....=SO

1,4= Паразитоценозы гельминтов и гельминтов с криптоопо-ридиями у свиней, ........................................26

1.5. Патогенез при криптоспоридиозе и ззоФагоотомозе о.-

х, животных=,==,=,,=,,==,.,,,,=,,=,==.,,=,,,,=,,=. 34

1.6. Терапия и профилактика при криптоспоридиозе с,- х, животных.........,.,...,..«...„..=....,....,,......41

1.7. Терапия при ззоФагоотомозе поросят,,==.,,=,,,,,,,,46

2, СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1, Краткая клима,то-географическая характеристика зон республики Мордовия.,..,............=.........,... 51

2.2, Материалы и методы исследований............................53

2.3, РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.3.1, Распространение криптоспоридиозе, ззофагостомоза поросят к в смешанной инвазии,...................80

2.3.2, Сезонная и возрастная динамика криптоспоридиоза и ззофагостомоза свиней,,,,,,==,,,,,,=,,,,,,,,,,=,,69

2.3.3, Результаты патологе-анатомического исследования 88 2=3,4, Результаты гематологических исследований в динамике криптоспоридиоза, ззофагостомоза и смешанной инвазии,.........................................107

2=4. Патодогоморфологические и гистохимические изменения в отдельных органах поросят при экспериментальном заражении O.parvuni, 0, dent at um.................... 116

2.4.1. Патологоморфологичеокие изменения у поросят экспериментально инвазированных ооцистами 0. parvurn. 116

2.4.2. Патодогоморфологические изменения у 60-ти дневных поросят экспериментально инвазированных

и, dentatuin....................................... 118

2.4.3. Патодогоморфологические изменения ассоциированной инвазии (криптоопоридиоза.эзофагостомоза) поросят 120

2.4.4. Гистохимические изменения при экспериментальном заражении поросят моно- и в смешанной инвазии 129

2.5. Экспериментальное воспроизведение криптоопори-диоза у белых мышей после заражения ооцистами

С.parvurn от свиней ............................... 140

2.5.1. Патодогоморфологические изменения в органах

мышат при экспериментальном заражении и.parvurn ...140

2.6. Изучение чувствительности культур клеток животных к криптоопоридиям и их развития in vitro 152

2=7= Сравнительная лечебно - профилактическая эффективность некоторых лекарственных препаратов при крип-

тоопорндиозе поросят............................165

2.8. Испытание эффективности фенбендазола, тиабендазола

и пиграна при эзофагоотомозе поросят............. 170

2.9. Эффективность лечения поросят при смешанной инвазии и. parvurn и С), dentatum .................... 175

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ..................... 180

ВЫ В 0 Л Ы.......................................... . 192

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.............................. 195

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ...................... 196

ПРИЛОЖЕНИЯ............................................ 239

ВВЕДЕНИЕ Первые сведения об ассоциативных /смешанных/ болезнях животных появились более 100 лет назад / Н.А.Холодково-кий, 1896; В.А.Догель, 1927; ОЬ.ЕНоп, 192? и др./.

Организм животного в процессе эволюции превратился в среду обитания как для полезных, так и для патогенных видов микроорганизмов, вирусов, простейших, гельминтов и членистоногих на разных стадиях развития,

В патологии человека, животных и растений паразитизм занимает значительное место и поэтому вопрос о взаимоотношениях между паразитом и хозяином при моно - и ассоциативных /смешанных/ инвазиях - инфекциях в каждом конкретном случае представляется интересным и важным не только с общебиологической, но и с практической точек зрения,

Паразитоценозы и ассоциативные болезни представляют серьезную научную и производственную проблему в свиноводческих хозяйствах о высокой концентрацией поголовья и особенно при нарушении ветеринарно-санитарных правил содержания животных ,

Изучение паразктоценозов имеет важное значение для организации лечебно - профилактических мероприятий и уменьшения экономических потерь в животноводстве / Недпег,1926; Е,н,Павловский,1955; Т.Арнастаускене,1984; Л.П.Дьяконов ,1973; Д.И.Панасюк и др.,1975; Д.И.Панаоюк,1978; Р.А.Ра-дионов,1980; А.П.Маркевич,1982; Л.П.Дьяконов,1984; В.В.Филиппов, Э.X.Даугалиева,1984; Ю.В.Петров,1988; В,- К.И.Паули-као,1990; С.А.Сулейманов,1993; Р.Т.Сафиуллин,1995 / и др.

В последние 10-15 лет интерес исследователей привлекла проблема криптоопоридиоза у разных видов животных и человека / I.РауХазек, ¥,Е.ШкШп, 1983; Ю.К.Горбов и др. ,1984;

Т.А.Шибалова, Я.Ф.Павласек, Н.В.КасаткинаЛ993; и.A.Acedo et al.,1995; А.М.Залруднов, Л.Н.Мазанкова,1997; Т.В.Бейер, 1998;и ДР./.

Установлено, что криптоспоридии вызывают тяжелое заболевание у тех животных, у которых имеется иммунная недостаточность /иммунодефицит/ /Р.Payer, S.Ungar,1986; Т.В.Вейер и др.,1987; и др./.

Следует отметить, что наименее изученным является крип-тоспоридиоз свиней.

Ззофагоотомоз свиней по данным многих авторов является опасным гельминтозом /А.П.Матуоявичюоа.1983; Б.К.Паулика-са,1990 и др./ при котором происходит значительное снижение естественной резистентности животного.

Поэтому изучение распространений и клинического проявления, часто встречающихся одновременно криптоспоридиоза и эзофагоотомоза поросят имеет большое теоретическое и практическое значение, как и разработка методов лечения и мер борьбы при моно ~ и смешанных инвазиях.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение распространения и эпизоотологии криптоспоридиоза и эзофагоотомоза свиней, а также клинического и патологоморфо-логичеокого проявления, вызванных криптоспоридиями и некоторыми гельминтами и разработка способов лечения и мер борьбы с заболеваниями,

В связи с этим были поставлены следующие задачи: 1. Изучить литературные данные о криптоопоридио-зе / С.parvurn / и некоторых гельминтозах свиней и их парази-тоценозах =

2. Изучить распространение и сезонную динамику криптоопоридиоза и ззофагостомоза свиней в хозяйствах республики Мордовия,

3. Изучить сезонную и возрастную динамику ассоциативных инвазий криптоопоридий и гельминтов у поросят,

4. Изучить оимптомокомплекс, патологоморфологи-ческие и некоторые гистохимические изменения в органах и тканях поросят при естественном и экспериментальном заражении криптоспоридиями и эзофагостомами,

5. Изучить проявление криптоопоридиоза у экспериментально зараженных мышей и развитие криптоопоридий,

6. Изучить чувствительность культур клеток животных в возбудителе криптоопоридиоза свиней и развитие криптоопоридий in vitro,

7. Испытать эффективность некоторых препаратов для терапии при моно - и ассоциативных инвазиях у свиней и разработать меры борьбы.

Научная новизна исследований. Впервые в хозяйствах республики Мордовия изучена в сравнительном аспекте экстенсивность и интенсивность моно -и ассоциативных инвазий криптоопоридий и эзофагоотом у свиней различного возраста, изучена сезонная и возрастная динамика.

Впервые при криптоспоридиозе и эзофагоотомозе у поросят прослежена динамика патологоморфологических изменений. Изучены патологоморфологические изменения в лимфатических узлах, селезенке, печени, сердце, почках, легких, кишечнике. Показано, что при ассоциативной инвазии /звофагоотомоз и

кркптоопорйдиоз / в подвздошной и ободочных кишках установлено острое катарально - геморрагическое воспаление; в печени, почках, миокарде - явления зернистой паренхиматозной дистрофии и инфильтрации соединительной ткани этих органов макрофагами, лимфоцитами и гистиоцитами; в селезенке - гиперплазия лимшоидной ткани; в легких - очаговая оерозно -катаральная бронхопневмония.

На основе использования гистохимических методов исследования впервые получены данные по изменению гликогена в клетках печени и липидов в надпочечниках при криптоспоридио-зе и эзофагоотомозе.

Расшифровка патологоморфологических и гистохимических изменений в динамике болезни позволили расширить существующие представления о патогенезе криптоспоридиоза поросят.

Получены данные по симптокомплексу криптоспоридиоза поросят при экспериментальном и естественном заражении, Экспериментально воспроизведено заболевание криптоспоридиозом белых мышей 1-14 дневного возраста, изучены патологогистологи-чеокие изменения в кишечнике и внутренних органах, выявлены стадии развитие u.parvuin в желудочно - кишечном тракте, некоторых внутренних органах и фекалиях.

Получены новые данные по культивированию С.parvurn и развитию их в культурах клеток легкого плода коровы / ЛЭК /, почке эмбриона свиньи / СПЗВ /, клеток сосудов сердца теленка / КОТ /,тестикул быка / ТЗЕ /, почке хомячка / ВНК /.

Установлена лечебно - профилактическая и экономическая эффективность новых препаратов - Фенбендазола при эзофагоотомозе, цигро и кокцидиовита с витамином Big при криптоопори-

диозе и их смешанной инвазии и предложены меры борьбы.

Практическая ценность работы. Изучение распространения криптоопоридиоза и ззофагостомоза у поросят, а также сезонная и возрастная динамика заболеваний в трех агроклиматических зонах республики Мордовия послужили основой для определения эпизоотической ситуации по указанным инвазиям и пара-зитоценозам и необходимости разработки мер борьбы.

Для свиноводческих хозяйств рекомендованы новые лечебные препараты: кокцидиоотатики и антгельминтики, которые эффективны при моно - и ассоциативных инвазиях, которые широко применяются в хозяйствах республики Мордовия и рекомендуются для других регионов, Разработаны 4 методических рекомендаций и указаний по диагностике, лечению и профилактике криптоопоридиоза и ассоциативных инвазий /1996-1998 гг./,

Результаты исследований по патоморфологичеоким и гистохимическим изменениям в организме поросят при моно - и смешанной инвазии, а также по патогенезу криптоопоридиоза, ззофагостомоза и их паразитоценозах рекомендуются для использования при чтении лекций в ВУЗах и техникумах по курсу "паразитология" и при переиздании учебников по паразитологии и патологической анатомии животных.

Для изучения развития криптоопоридий in vitro рекомендуется использовать культуры клеток СПЗВ, ЛЗК и ТЗБ, как наиболее чувствительные к этому возбудителю. Белые мыши в возрасте 1 до 14 дней могут быть использованы в качестве экспериментальной модели для изучения криптоопоридиоза свиней.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены: на научно-производственной конференции по

итогам научно-иоодедоватедъскнх работ за 1985 год /май 1985/, г.Саратов и г,Ульяновск; на конференции молодых ученых г,Белая Церковь, 1986г.; на научно-производственной конференции молодых ученых г.Куйбышев /сентябрь 1987г./; на заседании Ученого совета вет.факультета /г,Ульяновск, 1991г./; на XXII, XXIII, XX 1¥, ХХ¥, ХХ¥1 игаревоких чтениях Мордовского госуниверситета за 1593г., 1994г., 1995г., 1996г., 1997г./г.Саранск/; на Всероссийской научно-производственной конференции по протозоологии "Диагностика, терапия и профилактика протозойных болезней животных" /г.Москва, ноябрь 1997г./; на межкафедраньном совещании Аграрного института государственного университета /г.Саранск, апрель 1998г./

Публикации, По материалам диссертации опубликовало 18 работ.

На защиту выносятся следующие положения;

1, Распространение криптоопоридиоза и ззофагостомоза у поросят в республике Мордовия,

£, Сезонная и возрастная динамика криптоопоридиоза и ззофагостомоза при моно - и смешанных инвазиях,

3. Патогенное влияние моно - и смешанной инвазии /крип-тоспоридиоз, эзофагоотомоз/ на организм животных по данным клинического, патологоморфологичеокого и гистохимического методов исследований,

4. изучение чувствительности культур клеток животных к криптоопоридиям.

5. Внедрение в ветеринарную практику комплексной терапии при моно - и смешанной инвазии /криптоопоридиоз, эзофагоотомоз/ ,

6= Совершенствование методов диагностики и мер борьбы с криптоспоридиозом и смешанными инвазиями,

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Возбудители криптоспоридиоза животных, систематика и жизненный цикл,

Криптоспоридиоз - малоизученное паразитарное заболевание человека и позвоночных животных. Болезнь протекает обычно в форме гастроэнтерита, при котором нарушается всасывательная функция кишечника и нередко происходит значительное обезвоживание организма,

Криптоопоридии встречаются у млекопитающих, птиц, рептилий и рыб. Возбудители криптоспоридиоза - паразитические простейшие /кокцидии/ рода Cryptosporidium - обладает широкой хозяинной специфичностью в пределах классов позвоночных хозяев /S,Tzipori et al., 1981; 1982; 1983; J.Heine, J.Boch, 1981; K.W.Angus et al., 1982; W.Anderson, 1982; N.Reese et al., 1982; H.Moon et al,; 1982; L.vokipil et al. 5 1983; R.Petras et al, , 1983; W.l.Current, 1983; С,Hart et al., 1984; K.W.Angus et al., 1984; P.I.0.Donoghue5 1985; H.Moon et al. 51986; P.J .Donoghue et al.} 1987; Т.В.Бейер, 1988; Я,П.Литвинокий, 1992; и др./.

Описано свыше SO видов Oryptosporidiuim С.muris /Е.А.Tizzer, 1910/;

C.parvurn /Р. A, Tizzer, 1912/;

0,vulpis /I.Weitz et al,. 1986/;

O.meleagridis /.D.Slavin, 1955/;

C.tizzeri /N.D.Levine, 1973/;

C.lampropeltis /В,Anderson, 1981/;

C.nasorum /D,Hoover et al,, 1981/;

C.beileyi /W.Current et al.,1988/ и другие.

По современной классификации /М.В,Крылов, 1996/ существует 5 видов рода Cryptosporidium /табл.1/, а остальные сведены в синонимы.

Ключ для определения видов рода Cryptosporidium Признаки

Ряд I, Стенка ооциот :

1 - однослойная;

2 двухслойная.

Ряд II. Размеры длины ооциот:

1 - до 7,2 мкм;

2 - 12-17 мкм;

3 - свыше 25 мкм.

Ряд III. место эндогенного развития:

1 - железистый желудок;

2 - тонкая кишка, респираторные органы;

3 - подвздошная и толстая кишки, клоака, фабрициева сумка, синус, трахея, конъюктива.

Ряд IV. Хозяева: 1 - птицы;

2 - млекопитающие.

Таблица I

Определительная таблица видов рода Cryptosporidium

Виды I II III IV

1. и, mûris 1 1 1

о С, meleagridis 1 1 53 1

3, С. pellerdyi 1 iv.- - 2

4, С. bai leyi 1 1 3 1

5 = С, сигуi о 3 -

1. Cryptosporidium muris Tizzer, 1910 Syn, : Cryptosporidium agni Barker« Carbonell, 1974; С, bovis Barker, Carbonell, 1974; С, cum oui us Inrnan, Takeuohi 1979; O.garnharni Bird,1981; C.parvum Tizzer,1912; C. rhesi Levine, 1981; C,wraisi vent er ling:, Jervis, Merrill, Sprinz, 1971, Распространение: всесветное.

Хозяева: Mus rnusoulus (мышь домовая) < Bos taurus (крупный рогатый окот ), uapra hircus ( коза ), Cavia corcellus (морская свинка), uervus elaphus (благородный олень), Eguus caballus ( лошадь ), Felis oatus ( кошка 5, Homo sapiens (человек). Macaca mulata (макака резус), Mesoorioetus aura-tus (золотистый хомячок), Dryotolagus ouniculus (кролик), Ovis aries (овца). Sus scrofa domestica (свинья), Battus norvégiens (серая крыса),

2, Cryptosporidium meleagridis Slavim, 1955

Syn, : Cryptosporidium anseriurn Proctor, Kemp, 1974;

0.tyzzeri Levine, 1961,

Распространение: всесветное.

Хозяева; Me leap4 is gallopavo (индейка), Anser anser (гусь), Coturnix coturnix (перепел), Qallus gallus (курица), Pavo oristatus (павлин).

3= Cryptosporidium pellerdyi (Pande, Bhatia, Chauhan, 1973; Krishna, 1985

Syn.: Hoareosporidiurn pellerdyi Pande, Bhatia, Chauhan, 1973,

Распространение; Индия.

Хозяин: Canis familiaris (собака),

4, Cryptosporidium baileyi Current, Upton, Haynes, 1986

Распространение: Алабама (США), предположительно всесветное.

Хозяева: Gallus gallus (курица). Экспериментально заражены: однодневные Anas platyrhynchos (утка), двухдневные Anser anser (гусь); у пяти из двенадцати Meleargis gmllopavo (индейка) двухнедельного возраста, зараженных большим числом ооциот, обнаружена слабая инвазия. Не удалось заразить подсосных Mus musoulus var. albinos (мышь домовая альбинос), Capra hireus (коза), двух - и трехнедельных Colinus virgini-anus (куропатка виргинская),

5, Cryptosporidium curyi Ogassawara, Behassi, Larsson, Hagiwara, 198?

Распространение; Бразилия,

Хозяин: Felis catus (кошка).

Развитие криптоопоридий в организме животных протекает следующим образом /рис,I/,

Рис. 1. Схема жизненного цикла крштсхшоридий (по Т.В.Бейер, 1987. )

1-спорозоит; молодой трофозоит /меронт/; 3-растущий многоядерный меронт; 4-сегментированный меронт с мерозоитами 1-го типа; 5-7- рост и сегментация меронта 3-го типа; 8-мно-гоядерный микрогамонт; 9-микрогамонт с микрогаметами; 10-мо-лодой микрогамонт; 11- зрелая микрогамета; 12-микрогзмета в момент оплодотворения макрогаметы /13/; 14-тонкостенная спору лированная ооциста, локализованная еще внутри клетки; стрелка указывает путь обособления такой ооцисты /15/ после разрыва энтероцита и выход спороэоитов /1/ после разрушения тонкостенной ооцисты /16/; 17-толстостенная спорулированная внутриклеточная ооциста; 18- толстостенные ооцисты вне энте-роцитов; 19-толстостенные ооцисты во внешней среде.

Следует иметь ввиду, что раввитие криптоопоридий происходит как бы зкстрацитшшторно, но паразитоформкой в вакуоле, образуемой микроворсинками кишечника,

Спорозоит внедряется в межворсинчатую ткань или клетку кишечника, где превращается в трофозоит /меронт/, Далее последовательно развивается многоядерный меро�