Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Коринебактерии женских гениталий

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Коринебактерии женских гениталий"

ггз с л

J На правах рукописи

¡\]APT7iKAÍÍHjH Зинавда 1\1иха&лоЕна

К0Р1ШБАКТ2РИИ ЖШК ГЕНИТАЛИИ 03.00.07. - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 1S96

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта РАГ.Н.

Научный руководитель: доктор медицинских наук А.ГЛ.Савичева

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор А.Ы.Корояюк доктор медицинских наук, профессор К.О.Гранстрем

Ведущзе учреждение: Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования.

на заседании Диссертационного согета Д.001.23.02. по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Научно-ис-следоЕательском институте экспериментальной медицины РАМН / 193376, Санкт-Петербург, ул. акад. И.П.ПавлоЕа, д.12 /

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института.

Защита состоится

к

часов

Автореферат разослан

i

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор медицинских наук Л.А.Бурова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Кожные покровы и слизистые оболоч-г человека населены различными микроорганизмами. Каждая по-эсть представляет собой отдельную экологическую нишу со свойст-енным ей микробиоценозом. Одной из таких полостей является вла-алище женщин.

Разнообразная микрофлора женских гениталий, с точки зре-ия классической микробиологии, делится на три категории: пато-еиные, непатогенные и условнопатогенные микроорганизмы. Истори-ески максимум внимания уделяли изучению биологических свойств особенностей бактерий первой категории, хотя еще на заре мик-обиологических исследований отмечалась роль палочек Додерлейна Ю.В.Цвелев с соавт., 1995). Только в 60-70 года нашего столетия ыла детально разработана микробиология генитальных лактоба-,илл - антагонистов патогенных видов микроорганизмов. Значитель-

0 менее изучена группа коринеформных бактерий, которую также ¡читают одной из доминирующих в составе нормальной микрофлоры 1лагалища (С.Нейчев, 1977; § (к<вЛ. ) 1977). Они часто [рисутствуют во влагалище в высоких концентрациях (О.Н.Костюков-:кая с соавт., 1992). Известно, что среди указанных микроорга-¡измов есть как комменсалы, так и условнопатогенные виды СИ1. (лС-

а£.} 1986). Вместе с тем, детальной микробиологии гениальных коринебактерий (дифтероидов) не существует. В отечественной и зарубежной литературе крайне недостаточно сведений о юли этих бактерий в микробиоценозе влагалища, особенно при за-Золеваниях гениального тракта небеременных, беременных женщин

1 родильниц. Не указаны условия, при которых некоторые виды этих ликрооргакизмов способны проявлять патогенное действие. Поэтому азучение этих вопросов актуально для охраны здоровья женщин и юзволит расширить знания о данной группе бактерий - представителей вагинального микробиоценоза.

Цель настоящего исследования состояла в определении видового состава и ряда биологических особенностей коринебактерий женских гениталий, а также в уточнении роли дифтероидов в микробиоценозе влагалища разных групп женщин.

В задачи исследования входили:

1. Подбор условий выделения и культивирования коринебактерий, вегетирующих на слизистых оболочках женских гениталий.

2. Разработка рациональных методов количественного учета и схемы дифференциации коринебактерий, доступных для работы в диагностических лабораториях.

3. Определение видового состава и варьирования численности коринебактерий у беременных и небеременных женщин, а также у родильниц в первые дни после родов.

4. Создание собственного представления о физиологической роли коринебактерий, населяющих гениталии женщин.

Научная новизна. Впервые представлена рациональная схема идентификации генитальных коринебактерий на основании выявленных биологических особенностей.

Отмечена важная физиологическая роль генитальных коринебактерий как представителей нормальной резидентной микрофлоры влагалища в установлении массивного защитного барьера против патогенных и других микроорганизмов.

Показана ведущая роль дифтероидов в запуске механизмов восстановления микробиоценоза влагалища в раннем послеродовом периоде.

Научно-практическая значимость заключается в раскрытии закономерностей расселения коринебактерий в зависимости от физиологического состояния и патологических процессов гениталий у беременных и небеременных женщин, а также у родильниц в раннем послеродовом периоде.

Знание биологических особенностей, использование разработанной схемы идентификации генитальных коринебактерий облегчит врачам-микробиологам бактериологических лабораторий больниц и роддомов трудную задачу определения видовой принадлежности выделенных дифтероидов. Дополнительный количественный учет обнаруженных коринебактерий с использованием представленных рекомендаций поможет правильно оценить экологическую и этиологическую роль этих микроорганизмов в каждой конкретной ситуации. Часто встречаемые среда генитальных коринебактерий виды: С.гр.Г 2, С.л^ил^йи/)-) ^..пи-ти-унг>1и,>1 могут быть рекомендованы для производства новых эубдатических препаратов.

Положения. Еыносимые на защиту:

1. Присутствие коринебактерий в .головых органах разных категорий женщин неодинаково. У небеременных эти микроорганизмы |бнаружены в 23,321,9$ проб, у беременных - в 6,6^0,8$ и у ро-щльниц - в 34,?±2,1$, что связано с условиями вагинальной среды.

2. Количество дофтероидов на слизистой оболочке женских гениталий 10^-10® и более КОЕ/мл тлеет важное физиологическое значение.

3. Обнаруженные виды генитальяых коринебактерий следует >тнести К' нормальной резидентной микрофлоре влагалища. С помощью ферментных систем эти микроорганизмы разлагают имеициеся в вагине углеводы до кяслотц, понижая значение рН, что благоприятно цля вагинального шкробиоценоза.

4. Коринебактерии одними из первых микроорганизмов заселяет слизистую оболочку гениталий родильниц и играют важную роль в запуске механизмов восстановления вагинального микробиоценоза в раннем послеродовом периоде.

Апробация и внедрение результатов -работы. Материалы диссертации обобщены в 5 печатных работах и доложены на совместном заседании лаборатории микробиологии и клинических отделений Научно-исследовательского института акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта РАМН (1995). Результат исследований и основные рекомендации, вытекающие из них, внедрены в практику лечебно-диагностической работы НИИАГ, используются при чтении лекций для врачей акушеров-гинекологов в НИИАГ и врачей-микробиологов на кафедре микробиологии и микологии СПМАПО и на кафедре микробиологии и иммунологии СППМА.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на III страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов и заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 12 рисунками, список литературы содержит 87 источников, из них 25 отечественных и 62 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы

Всего исследовано 2222 клинические пробы от женщин репродуктивного возраста: 519 проб - от небеременных, 1000 проб - от беременных и 703 пробы - от родильниц. Женщины находились в стационаре Института или обратились туда амбулаторно. Помимо этого материалы поступали из других лечебных учреждений Санкт-Петербурга: ряда поликлиник, женских консультаций и родильных домов.

Материалами для микробиологического исследования служили отделяемое цервикалыюго канала и заднего свода влагалища, а также лохии в раннем послеродовом периоде. Взятие проб проводили в зеркалах сухим стерильным ватным тупфером, вмонтированным в пробирку, и доставляли в лабораторию в течение 1-2 часов. В серии опытов у родильниц исследовали также смывы с кожи паховых и и подмышечных складок, и под молочными железами. Для этого использовали стерильные ватные тупферы, помещенные в 1% пептонную воду.

Для первичного посева материала использовали кровяной агар с 5% дефибринированной донорской крови человека. Основу среды составлял сухой питательный агар для культивирования микроорганизмов НПО "Питательные среды" г. Махачкала (рН 7,1-5-7,5). При исследовании смывов с кожи для первичных посевов применяли сывороточный агар. В сухой питательный агар добавляли Ъ% сыворотки плодов коров. Чашки инкубировали 48 часов в микроаэрофильных условиях (в эксикаторе со свечой при концентрации СО2 5-10$) при 37°С. Количество всех выросших колоний подсчитывали ориентировочно, руководствуясь рекомендациями приказа № 535 МЗ РФ. Подсчет проводили для каждого вида колоний отдельно.

С целью более точного количественного учета микрофлоры параллельно часть посевов осуществляли с использованием метода калиброванных петель (по В.В.Акользину, 1992).

Идентификацию выросших микроорганизмов проводили общепринятыми методами. Использовали рецепты приготовления питательных сред и реактивов, рекомендуемые А.С.Лабинской, 1978. При бактериологическом изучении культур применяли доступные и простые в постановке физиологические и биохимические тесты.

Из всех выросших на агаре разновидностей колоний готовили 1зки и окрашивали их по Граму и по Нейссеру.

При микроскопическом исследовании окрашенных препаратов об-эдали внимание на расположенные "палисадом" или "частоколом", в аде "римской пятерки" или буквыполиморфные ("булавы", "боч-1") 1рамположительные палочки с одним, но чаще двумя зернами гранулами) волютина на концах клеток. По размерам и форме коло-дй, образованных этими микроорганизмами, на кровяном агаре разжали "макрокоринеформы" и "микрокоринеформы".

У обнаруженных коринеформннх бактерий, в первую очередь, оп-эделяли гемолитическую и каталазную активность, а также цито-ромоксидазу и подвижность для дифференциации коринебактерий от норовых палочек, лактобацилл и листерий.

К рода Смц№$а<ЯсГ'-им относили неподвижные, каталазоголо-ительные, цитохромоксидазоотрицательные, негемолитические бакте-ии.

Для видовой дифференциации штаммы коринебактерий исследова-и на наличие нитратредуктазы, уреазной активности, цистиназы, елатиназы, ферментации сахарозы, глюкозы, лактозы, мальтозы, рахмала.

Чувствительность- к антибиотикам определяли методом диффузии агар на среде АГВ НИИ питательных сред г.Махачкала, с добавле-ием Ъ% человеческой донорской крови. Использовали бумажные диски отечественными антибиотиками Московского завода медггрепаратов ■ 2.

Для выявления возможного антагонизма бактерий применяли ме-■од посева перпендикулярными шлихами штамма-антагониста и тест-[Шфобов на плотную питательную среду. При этом использовали агар 'Д" Дагестанского НИИ питательных сред, обогащенный Ъ% донорской :рови. Предполагаемые штаммы-антагонисты (пять видов коринебакте->ий) выделены из гениталий женщин. Тест-мшдюбами были референс-¡таммы других микроорганизмов из Государственного НИИ стандарти-!ации и контроля медицинских биологических препаратов имени Л.А. :арасевича: Ь\имЯа силгелМ МЧ^мО'тъ. лабора- _

горные штаммы, выделенные из гениталий женщин: <х.т¡/иЫи,

ИаШЛосссси^. Ли ггш ^¡игпиеи-х

хШл^Иол ¿р.; <ц>. ы, ишсШ^

Для выяснения роли выделенных коринебактерий в микробиоценозе влагалища провели ретроспективный анализ историй болезни и родов тех женщин, у которых в первичном посеве отделяемого гениталий обнаружены дифтероиды, подвергшиеся дальнейшему исследованию. При этом представляли интерес:

а) среди небеременных женщин - пациентки с кольпитом различной этиологии;

б) среди беременных - случаи угрозы прерывания беременности на разных сроках;

в) среди родильниц - женщины с отягощенным течением пуэр-перия (субинволюция матки, лихорадка в послеродовом периоде, метро эндометрий ,

Все перечисленные диагнозы отражали патологическое состояние вагинального микробиоценоза.

Цифровой материал полученных результатов подвергли статистической обработке.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

■ Коринебактерии обнаружены в 17,8±0,6% исследованных материалов. Подробно изучены 360 проб с ростом этих микроорганизмов в первичном посеве.

Количество дифтероидов в пробах варьировало от менее Ю2 до Ю6 и более КОЕ/мл, но достоверно чаще (р< 0,001) эти бактерии обнаружены численностью от Ю^-104 (в 42,8±2,6$) до Ю5-Ю6 КОЕ/мл (в 39^¿2,6$), по сравнению с количеством, < ГО2 КОЕ/мл (в 17,5±2,0$ исследованных проб).

Данные о точном числе дифтероидов получены при посеве методом калиброванных петель. С помощью этого метода изучены 147 клинических проб от разных групп женщин. Параллельно проводили посевы обычным способом. При сравнении результатов использования двух методов выяснили, что количеству меньшему или равному Ю2 КОЕ/мл, соответствовал скудный рост, 103-Ю4 КОЕ/мл - умеренный рост, 10^ и более КОЕ/мл - обильный рост микроорганизмов.

Колонии-коринебактерий на кровяном агаре-непрозрачные, серые или кремовые (иногда желтоватые), диаметром 1-4 мм, чаще с неровными, нередко "ажурными" щ>аями и выпуклым в виде "шарика"

диаметром 0,5 мм бёлым центром, матовые, сухие, ломкие (/£ -форма) , или реже серые, гладкие с ровными краями и белым выпуклым центром, блестящие, влажные, немного вязкие (¿-форма).

Среди выделенных и исследованных 446 штаммов дифтероидов удалось идентифицировать 5 видов. Один вид, по наличию нитратре-дуктазы и уреазы схожий с 0,\>ми^<><1'\рМЫгИ^сит, но ферментирующий глюкозу и мальтозу, не укладывался в известные схемы идентификации, поэтому ему не удалось дать видовое название.

Ключевыми тестами для видовой дифференциации генитальных коринебактерий оказались: редукция нитратов в нитриты (Н), разложение мочевины под действием уреазы (У) и ферментация сахарозы (С). Комбинации результатов положительных (+) и отрицательных (-) реакций тестов НУС составили авторскую схему идентификации обнаруженных видов. Нелатиназа и цистиназа у всех исследованных штаммов отсутствовали. Детальное изучение ферментативных свойств показало, что все исследованные штаммы коринебактерий утилизировали глюкозу и мальтозу, не ферментировали лактозу и не разлагали крахмал. Частота обнаружения отдельных видов дифтероидов и их отличительные видовые признаки представлены в таблице I.

Среди коринебактерий, выделенных из гениталий, достоверно чаще (рс 0,001) встречали уреазоотрицательные вида (С.хр.Г2,

С. гпФьсЬыЬпит, С. Хммй, чем уреазоположитель-ные С.Ъаш, СЯр. Этот момент важен при рассмотрении воп-

роса о возможных патогенных свойствах данных микроорганизмов.

Некоторые исследователи ( Т.^ИС^ес €¿42> 1992) связывают наличие фермента уреазы у таких биохимически инертных видов, как С.гепа1с и С. и.геа1у£сшпи с их патогенностыо. Они объясняют это тем, что при разложении мочевины до ионов аммония и СО2 происходит ощелачивание среды. Патогенность обнаруженных нами уреазоположительных дифтероидов не доказана, так как они биохимически активны и, наравне с уреазоотрицательными видами, участвуют в разложении углеводов до молочной кислоты и сдвиге рН среды в кислую сторону, что благоприятно для вагинального микробиоценоза.

Чувствительность выделенных коринебактерий к антибиотикам определяли: у 364 штаммов - к бензилпенициллину, ампициллину, оксациллину, мономицину, неомицину, эритромицину, олеандомицину, левомицетину, тетрациклину, линкомицину, ристомицину, у 334

Таблица I

Частота выделения и ключевые видовые характеристики генитальных коринебактерий, обнаруженных у женщин

Виды корине-бактерии

Всего изучено штаммов _п_=_446___

__из них

абс

Ключевые Отношение Форма и осо-

тесты_ к кисло- бенности ко-

роду лоний на кроН У С вяном агаре

УРЕА300ТРИ-ЦАТЕЯЬНЫЕ

с.гр.Гг

С, еищлЫсим

Смпий'мСлтт

С.хег&и

УРЕА30П0Л0-ЖИТЕШЫЕ

373 83,6±1,8 134 30,0±2,2 +

- - аэроб

+ микро-аэрофил

119 26,7±2,1 -94 21,1^1,9 - - - аэроб 26 5,8±1,1 +

Я -форма, кремовые с шариком в центре или выпуклым центром

5-форма, серые с белым выпуклым центром

Ц-форма, серые с белым выпуклым центром

+• микро- 5-форма аэрофил

73 16,4±1,8 22 4,9±1;0 51 П,4±1,5

- + - аэроб + + - азроб

Ц-форма Ц -форма

штаммов - к карбеницаялину и гевтамицину и у 30 штаммов - к ри-фампицину и канамицину. При этом установлена высокая степень чувствительности (р ^ 0,01) изученных штаммов к отечественным антибиотикам: чувствительными оказались 59,6±2,7$, умеренно устойчивыми - 8,9±1,4/£ и резистентными - 31,5±1,2$ исследованных культур. Причем только 7,7±1,4/? штаммов были высоко резистентными (устойчивыми к 7 и более антибиотикам).

Таким образом, для обнаруженных в гениталиях женщин коринебактерий характерны: массивность обсеменения слизистых от 10^

£

цо 10 КОЕ/мл, ферментативная активность, преобладание уреазоне-гативных видов и высокая степень чувствительности к отечественным антибиотикам, что отличает их от дифтероидов других сред обитания, например, кожи или урогенитального тракта мужчин. Рост коринебактерий в монокультуре при первичном посеве отмечали более, чем в 1/4 изучошшх проб. Это явление было характерно больше для уреазонегативных видов Сл/^иаХ^сШп) с.хр.Х2 и СПШгий'а/т ит, Обнаружение двух видов коринебактерий одновременно в одной пробе встречали также почти в 1/4 изученных проб. При этом взаимоотношение между видами коринебактерий в двойных сочетаниях носили комменсальный характер, что позволило видам существовать совместно в одной экологической нише.

Достоверно чаще (в 73,3±2,3$ проб) (р <1 0,001) при первичном посеве на кровяном агаре наблюдали рост коринебактерий в ассоциации с другими микроорганизмами в разных сочетаниях, по сравнению с отмеченным ростом монокультур дифтероидов (в 2&,7-2,3%). Наиболее часто коринебактерии встречали со ^арЬ-^ес-СУе-С-И^- -фх-сОггпиШи (в Ы,0-2,3% проб), реже (р 0,001). ^^«дг^сгс -

£Щ гр. 2) (4:{гЩ^СОССШ ^олссОм1 ¿-6г-еф{0ССъса4 -^сы'ипг),

№гг,(>Ь)сОссМ (СигаМ (в 18,1-1,8% проб) и е«?//

(в 16,5±1,7$ проб), и крайне редко (р^ 0,001) - с

(в 2,420,7% проб), а также с С&ьШсЬ. аЫ+с&М (в 3,5±0,9$ проб), сиа-ом (Б 1,б±0,6$ проб),

О^аШгСси^ (гр. В) (в 1,3±0,5^ проб), Я^ЫпьгШа лга^п^и (в 1,3^0,5% проб), ¡сили^евя рммпччиеи, (в 1,1±0,5% проб) и Ар* (в 0,2±0,2^ проб). Различий в частоте обнаружения сочетаний разных видоа коринебактерий с эпидермальными стафилококками, энтерококками и кишечными палочками не выявлено (р^-0,05). В серии опытов по выявлению возможного антагонизма мевду штаммами коринебактерий и штаммами других микроорганизмов, выделенных из влагалища, а также референс-штаммами ни в одном случае не было отмечено задержки роста тест-микробов. Отсюда следует, что коринебакте-рии Ш ТгЧго не проявляют антагонистических свойств по отношению к другим представителям вагинального микробиоценоза.

Коринебактерии выделяли из гениталий разных групп женщин репродуктивного возраста с различной частотой. Наиболее часто (р /10,001) дифтероиды обнаружены в гениталиях родильниц (в

34,7±2,1$ проб , по сраЕиению с другими группами обследованных жэнщин. У небеременных эти микроорганизмы встречали б 23,3+1,9% проб, т.е. достоЕэрно чаще (рг.0,001), чем ео всей выборке, женщин е 17,8±0,6$ проб . Бвделеше коринебактерий из гениталий беременных было крайне редким ( р^-0,001) ("в 6,6±0,8^ проб] ж носило случайный характер.

Таким образом, полученные значения частот обнаружения дифтероидов е гениталиях небеременных женщин и родильниц при условии 25%¿.Ш±)пСЬи?о давали возможность рассматривать коринебакте-рии как дополнительные еиды Еагинального микробиоценоза. Эти. микроорганизмы, наряду с постоянными! видами (^¿.м >50$), еходили е доминантный состав резидентной микрофлоры Елагалища этих групп женщин (по "классификации еидоб, населяющих данный биотоп", описанной. С.И.Ситником, 1994 г.) . У беременных частота обнаружения дифтероидоЕ е гениталиях была меньше 25$, поэтому эти бактерии 05 несли к случайным видам е Еагинальной микрофлоре данной группы.

Частота обнаружения разного количества дифтероидов в изученных пробах соответствовала кривой нормального распределения. Б целом, для небеременных женщин был. характерен умеренный рост коринебактерий, обнаруженный достоЕерно(ча1це р ¿0,001) , чем обильный или скудный.

В цервикальном канале и во Елагалище (рис. 1) разные количества дифтероидов встречали с одинаковой частотой.^р >0,05): скудное - е 12,1+5.,7% и 20,5+4,3$, умеренное - е 57,6±8,6$ а 51,1+5,3$ и обильное - е 30,3+8,0$ и 28,4±4,8 проб соответственно.

Среда.обнаруженных шести видов коринебактерий преобладали дифтероиды без уреазной активности (р<0,001). Наиболее часто у небеременных женщин обнаружен шкроаэрофильный вид С.ХЬфШлсиМ.

При рассмотрении, вопроса о роли коринебактерий в вагинальном микробиоценозе при нормальном и. патологическом, его состоянии сравнит степень колонизации гениталий коринебактерияш у женщин с кольпитами различной этиологии и здороеых женщин.

В посаЕах КГ контрольной группы, умеренный рост дифтероидов (10З-1С& КОЕ/г/л] наблюдали е 56,9+6,1$ проб, т.е. достоверно чаще (р<С0,001) , чем обильный {>,1$ К0Е/мл], обнаруженный в 26,2+5,5$ проб, или скудный (¿102 К0Е/мл) , отмеченный е 16,9±4,6% проб. При этом обильный рост этих микроорганизмов

Рис. . Количество коринебактерий а цервикальном канале и заднем своде влаг-*лии(анагерененних женцич.

встречали чаще (р < 0,05), чем скудный.

Б посевах ОГ (основной группы) умеренный рост коринебак-терий, обнаруженный в 48,2±6,7% проб, наблюдали одинаково часто (р > 0,05), что и обильный (в 32,2-&,2$, проб) и значительно чаще (р< 0,001), чем скудный (в 19,6^5,3$ проб).

Таким образом, характерное для нормального микробиоценоза влагалища небеременных женщин умеренное количество дифтероидов при кольпите имело тенденцию к возрастанию.

У беременных женщин, также, как у небеременных, умеренный рост дифтероидов наблюдали достоверно (р 0,001) чаще, чем обильный или скудный, и с одинаковой частотой (р^> 0,05) на всем протяжении беременности. Видовой состав корияебактерий был достаточно разнообразный и представлен шестью видами. Наиболее часто встречали уреазонегативные виды: млкроаэрофил; С.й^и^'сит и аэробы С.ХЛШЛимли^, и С.хр.12.

На рис. 2 представлены результаты сравнения количества дифтероидов у беременных женщин с угрозой прерывания беременности (основная группа) и без у1розы прерывания (контрольная группа). Воспалительных заболеваний гениталий у этих женщин не было. В посевах КГ умеренный рост дифтероидов встречали в 53,6±6,7$ проб, т.е. значительно чаще (р 0,05), чем скудный, обнаруженный в 30,4^6,проб, или обильный, отмеченный в 16,0^,9^ проб (р < 0,001).

Иную картину наблюдали у женщин с угрозой прерывания беременности. В посевах 0Г в 60,0215,5$ проб обнаружен обильный рост коринебактерий, т.е. достоверно чаще (р<10,001), чем умеренный или скудный, которые встречали с одинаковой частотой -в 20,0±12,6# проб.

Таким образом, количество этих микроорганизмов, умеренное на всем протяжении беременности, значимо возрастало при угрозе ее прерывания.

Количество дифтероидов в лохиях родильниц было значительное (рис. 3): достоверно чаще (р 0,001) обнаружен обильный рост этих микроорганизмов, который встречали в 53,8^3,8$ проб, нежели умеренный, наблюдаемый в 33,5±3,6$ проб, или скудный, отмеченный в 12,7±2,5$ проб. В свою очередь, умеренный рост встречали значительно чаще (р < 0,001), чем скудный.

При сравнении количества этих микроорганизмов в генитали-

Рис-у . Количество коринебактерии в гениталиях контрольной группы беременных денцин и групп« женщин с угрозой прерывания беременности.

Частотэ.

обнаружения * 'о>

ео-

ЧО-

30-

20-

40-

Количество микроорганизмов ( КОЕ/мп •)

¿О Ю Ю 10* 1СГ ХО Рис.3. Количество ксринебактерий в лохиях в раннем

послеродовом периоде.

разных 1рупп обследованных женщин нужно отметить, что у небе-менных, в отличие от родильниц, чаще оно было умеренным. Обиль-е количество коринебактерий наблюдали в 28,9±4,1$ проб отделяете гениталий небеременных и в 22,7^5,2$ проб от беременных, что стоверно реже (р < 0,001), чем в лохиях родильниц.

Разнообразие коринебактерий в лохиях представлено шестью дами. В значительной степени преобладали (р^. 0,001) дифтероиды з уреазной активности.'Наиболее часто обнаружен' аэроб:. С.гр.12.

Рассматривали степень колонизации коринебактериями генита-й родильниц с отягощенным течениемяуарперия и с физиологически отекающим послеродовом периодом.

В посевах лохий КГ умеренный и обильный рост этих микрооргазмов наблюдали с одинаковой частотой. При этом скудный рост отдали достоверно реже (р 0,01).

В посевах лохий ОГ обильный рост коринебактерий обнаружен ачительно чаще (р < 0,001), чем умеренный или скудный. В свою [ередь, умеренный рост встречали достоверно чаще (р С 0,001), :м скудный.

Таким образом, количество дифтероидов в лохиях было чаще ¡ильное как при физиологическом, так и при отягощенном течении 'эрперия.:

Заслуживают отдельного рассмотрения особенности восстанов-шия микробиоценоза влагалища после родов. В первые сутки последового периода микрофлора во влагалище родильниц отсутствует 5-за механического вымывания, а также из-за бактерицидного дей-гвия лохий. Начиная со 2 дня, постепенно идет процесс заселения штериями этой экологической ниши.

Для выяснения мест локализации генитальных видов коринебак-зрий на различных участках тела женщины в течение первой недели >слеродового периода, а также рассмотрения сроков заселения вла-алища этими микроорганизмами дополнительно исследованы лохии « дыв(7 с кожи паховых и подмышечных складок, а также под молочны-I железами у 51 родильницы с нормально протекающим пуэрперием. эринебактерии выделяли из лохий в 60,8±6,8$ случаев, с кожи паевых складок - в 54,9±7,0$ случаев, под молочными железами - в ,3^3,3% случаев, в подмышечной области - в 2,0±2,0$ случаев.

Разнообразие коринебактерий было представлено: в лохиях и аховых складках - 6 видами, под молочными железами - 2 видами и

в подмышечной области - I видом. При этом во всех материалах преобладали (р^. 0,001) уреазонегативные аэробы (С'.пинипифииУЬ) С.гр._Т 2). Показано, что в лохиях и в смывах, взятых из паховых складок, в разные сроки пуэрперия обнаружены корияебактерии одних и тех же видов с одинаковой частотой.

В результате исследований обнаружено также, что в первые два дня после родов эти микроорганизмы выделяли из лохий с частотой 27,3±13,4%. На 3-4 день пуэрперия частота выделения дифтерои-дов из лохий максимальна (р «¿0,01) и составила 72,2±Ю,6%. На 5-6 день наблюдали незначительное снижение (р>0,05) частоты выделения этих ми кр о орган и з:ло в (68,2^9,9$). В эти же сроки в составе лохий в 14% случаев обнаружены лактобациллы.

Так™ образом, высокая частота обнаружения коринебактерий в лохиях и в смывах с кожи паховых складок указывала на постоянный характер присутствия этих микроорганизмов в гениталиях и окологе-нитаяьных областях родильниц. Выделение дифтероадов из подмышечной области и из-под молочных желез носило случайный характер. В первые два дня после родов содержание коринебактерий во влагалище минимально. Дифтероиды находят благоприятные условия выживания в паховых складках. С 3-4 дня пуэрперия происходило заселение влагалища коринебактериягли из паховых областей кожи и их интенсивное размножение. На 5-6 день послеродового периода с появлением лактобацилл начиналось восстановление микробиоценоза влагалища.

Коринебактерии, в процессе своей жизнедеятельности сдвигая рН среды в кислую сторону, способствуют размножению лактобацилл, т.е. играюг. важную роль в запуске механизмов восстановления микро биоценоза слизистой гениталий в раннем послеродовом периоде.

В заключении нужно отметить, что при выборе рациональной , антибиотикотерапии для лечения кольпитов и послеродовых осложнений, вызванных патогенными и условнопатогенными микроорганизмами, помимо антибиотикочувствительности выделенного возбудителя, необходимо учитывать и чувствительность к выбранным препаратам обнаруженной сопутствующей нормальной микрофлоры, в частности, коринебактерий.

' В .свою очередь, такие вида генитальных дифтероидов, как С.гр.Х2, С^ЦА^сеит, С.тш&илсмит могут быть рекомендованы для создания новых эубиотических препаратов.

вывода

1. Коринебактерии в гениталиях общей популяции женщин при-'тствуют в 17 ^¿0,6$. У разных групп обследованных женщин они ¡наружены с различной частотой, чаще всего - в лохиях родильниц ! 34,7±2,7$), реже (р < 0,01) - у небеременных (в 23,3±2,4$) и >айне редко (р< 0,001) - у беременных (в 6,6^0,6$).

2. Количество коринебактерий в исследованных пробах варьи-?ет от Ю2 до Ю6 КОЕ/мл. У небеременных и беременных женщин эти актерии достоверно часто (р0,001) обнаружены в умеренном [03-Ю4 КОЕ/мл) количестве, у_родильвиц - значительно чаще

р < 0,001) в обильном (Ю5-106ГКОЕ/мл).

3. Разнообразие генитальных коринебактерий представлено зстью видами, которые обладают различной ферментной активностью. ?и этом все виды разлагают глюкозу и мальтозу, не ферментируют актозу и крахмал. Отличительными или ключевыми признаками для их яфференциации оказались: редукция нитратов в нитриты (Н), разло-эние мочевины под действием уреазы (У) и ферментация сахарозы 3), которые и составили основу идентификационной схемы.

4. Выделение одновременно двух видов коринебактерий из одой пробы отмечено в 1/4 исследованных проб. Наиболее часто

р с 0,01) встречали сочетание С,й^иа±1сит (Н-У-С+) -Н+У-С-) (почти в половине случаев). Ферментные системы данных ифтероидов допускают совместное существование на правах "биохи-ически совместимых" видов или комменсалов.

5. Среди выделенных видов преобладали (р< 0,001) корине-актерии без уреазной активности: С.ъциа&сит, С.пипи1сМ1тиМ

.гр.Г2, С.хеге*и. , '

Уреазогозитивные виды : С,-6ош , были также биохи-

ически активны и■участвовали в разложении углеводов и закислении агинальной среды.

Отмечено превалирование отдельных видов дифтероидов у раз-ых групп обследованных женщин: С.П^и&^иим^ (р<£ 0,01) - у непременных, С,/ С.1р.х2 (р<0,001) -' беременных, С.гр.Х2 (р ¿0,001) - в лохиях родильниц, что за-щсело от условий вагинальной среды: наличия субстратов питания, шачения рН, аэрации.

6. Обнаруженные виды коринебактерий следует рассматривать

как резидентных представителей нормальной вагинальной микрофлоры. При патологическом состоянии (кольпите различной этиологии, угрозе прерывания беременности) количество коринебактерий возрастает, что указывает на важную физиологическую роль этих микроорганизмов как массивного защитного барьера на пути проникновения патогенных бактерий.

Коринебактерии играют ведущую роль в запуске механизмов восстановления микробиоценоза слизистой гениталий в раннем послеродовом периоде.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Колонии коринеформных бактерий на кровяном агаре могут быть двух видов: "макрокоринеформы" и "микрокоринеформы". "Макро-коринеформы" - чаще средние или крупные, диаметром 1-4 мм, непроз рачные, серые или кремовые (иногда желтоватые), чаще с неровными, нередко "ажурными" краями и выпуклым в виде "шарика" диаметром 0,5 мм белым центром, матовые, сухие, ломкие, крошащиеся -форма) , или серые, гладкие с ровными краями и белым выпуклым центром блестящие, влажные, немного вязкие (С[ -форма). "Микрокоринеформы" - мелкие, диаметром 0,5-1,0 мм, белого и серого цвета с сереб ристым оттенком, выпуклые с ровными краями.

2. У этих микроорганизмов определяют, в первую очередь, ка-талазу, цитохромоксидазу и подвижность для дифференциации коринебактерий от споровых палочек, лактобацилл и листерий.

К роду Г ¡им относят каталазо положительные, ци-

тохромоксидазоотрицательные, неподвижные бактерии. Гемолиз для ге нитальных коринебактерий не характерен.

Для видовой дифференциации штаммы коринебактерий необходимо исследовать на наличие нитратредуктазы, уреазы, ферментации сахарозы, глюкозы, лактозы, мальтозы, крахмала и, дополнительно (для "микрокоринеформ"), фруктозы.

3. Среди дифтероидов слизистой половых органов женщин наиболее часто выделяют уреазонегативяые видыС, т1 ПаИа1тмп, С.гр.1 2. Эти и другие "макрокорин еформы" относят к представителям нормальной резидентной микрофлоры влагалища. Количество их в пробах из цервикального канала и заднего свода влагал ща чаще умеренное (Ю^-Ю^ КОЕ/мл), в лохиях - чаще обильное

> I05-I06 КОЕ/мл).

"Микрокоринеформы", представители корин ебактерий группы тХ - часто встречающиеся обитатели кожных покровов. Условно-ато генные виды C.gzrUfzjjurri и С, .fxeudoqevutaCiuin - их биотипы эстаточно часто выделяют из урогенитального тракта мужчин и ред-э - из половых органов женщин. Эти микроорганизмы являются тран-аторными для влагалища и из-за ферментной массивности не могут уществовать в условиях нормальною вагинального биоценоза.

4. Частота обнаружения "макрокоринеформ" в гениталиях отли-ается у разных групп женщин. Чаще всего эти микроорганизмы стречают в лохиях родильниц (в 34,7±2,7$), реже - у небеременных в 23,3±2,4$) и крайне редко - у беременных (в 6,6^0,6%).

5. Коринебактерии чаще встречают при нарушении нормальных икробиотических связей (бактериальный вагиноз, вагинит), когда исло лактобавдлл резко снижается. Возрастание количества "макро-оринеформных" бактерий в пробах указывает на важную физиологи-ескую роль этих микроорганизмов в качестве массивного защитного арьера на пути проникновения патогенных и других бактерий.

У родильниц эти коринебактерии занимают ведущую роль в засеке механизмов восстановления микробиоценоза слизистой генита-шй в раннем послеродовом периоде.

6. Часто встречающиеся виды генитальных "макрокоринеформ": :.ip.j2, С. Щ-uatuam, С.mihuiiA^Lmutriрекомендованы для созда-1ия новых эубиотических препаратов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДТССЕРТАЦИИ:

1. Мартикайнен З.М., Чуранова З.И. Биохимическая дифференци-щия коринебактерий женского мочеполового тракта. // Клин.лаб. щагностика, 1992, № 3-4, с. 4-6.

2. Мартикайнен З.М., Чуранова З.И. Коринебактерии слизистой кенеких гениталий и их физиологическая роль в биоценозе влагалища. 36. "Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщин", С.-Пб, 1992, с. III-II4.

3. Мартикайнен'З.М., Савичева A.M. Коринебактерии в раннем зослеродовом периоде. Сб. "Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщины", С.-Пб, 1994, с. 135-137.

4. Мартикайнен З.М. Коринебактерии, обнаруженные цри кольпя-

тах и пуэрперальных осложнениях // Клин. лаб. диагностика, 1995, № 4, с. 45-48.

5. Мартшсайнен З.М., Савичева A.M. Коринебактерии гениталий при беременности. Сб. "Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщины", С.-Пб, 1995, с. 138-140.