Бесплатный автореферат и диссертация по географии на тему

Кора и побеги облепихи крушиновидной - новый сырьевой источник биологически активных веществ

ВАК РФ 11.00.11, Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов

Автореферат диссертации по теме "Кора и побеги облепихи крушиновидной - новый сырьевой источник биологически активных веществ"

На правах рукописи

Азарова Ольга Васильевна

Кора и побеги облепихи крушиновидной - новый сырьевой источник биологически активных веществ

Специальность 11.00.11 - охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Барнаул - 1998

Работа выполнена в Алтайском государственном медицинском университете и в научно-исследовательском институте фармакологии Томского научного центра РАМН

Научный руководитель: Научный консультант:

кандидат фармацевтических наук, доцент Турецкова В.Ф. кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Зуева ЕЛ.

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, генеральный

директор ЗАО "Алгайвитаишш" Кош алев Ю.А.

кандидат биологических наук, доцент Терёхина Т.А.

Ведущая организация: НИИ садоводства Сибири им. Лисавенко М. А

Защита состоится " £ " СЧС/ПЛ^/ЬЯ- 1998 года в /2*°

на заседании диссертационного совета К 064. 45. 08 в Алтайском государственном

университете по адресу: 656099, г. Барнаул, ул. Димитрова, 66.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке АГУ

Автореферат разослан * 4 " егшплЯЫ. 1998 г.

Учёный секретарь диссертационного

совета, к. х. н., доцент ¿М ЕШ. Вайгант

Актуальность темы. Нерациональность использовании сырья и несовершенство гехгологий переработки в ряда отраслей народного хозяйства (химическая индустрия, шергетака, фармацевтическая промышленность и т.д.) обернулись для биосферы мощ-¡шш: антропогенным давлением: загрязнением промышленными отходами, снижением продуктивности возобновляемых биологических ресурсов, в том числе растительного происхождения. Поэтому в последнее время становится крайне актуальным рациональное и комплексное использование сырьевых источников, в частности, лекарственно-технического сырья. Одним из аспектов этой многоплановой проблемы является создание экономичных, малоотходных и экологически безвредных технологий переработки растительных материалов.

В свете такого комплексного подхода к использованию ценного лекарственно-технического сырья заслуживают внимания уникальные растения сибирской флоры, одним из которых является облепиха крушиновидная ШррорЬаё гЪашпоШев Ь., семейство лоховые (Б1аеа^1асеае), содержащая целый комплекс биологически активных и питательных веществ, обладающих ценнейшими биолого-фармакологическими свойствами. Однако, несмотря на содержание биологически активных веществ (БАВ) во всех частях растения, применение в медицинской, пищевой и косметической промышленности получили только плоды и листья облепихи (масло облегашэвое, аэрозольные препараты "Олазолъ" и "Гипозоль", сок облепиховый л т.д), в то время как кора и побеги растения практического применения не нашли и являются отходами плановых агротехнических мероприятий по возделыванию облепихи. Так, по данным НИИ садоводства Сибири им. М.А Лисавенко, ежегодный объём проводимой в садах промышленного назначения Алтайского края реконструкции позволяет иметь 230-350 тонн надземной биомассы облепихи крушиновидной, из которых с учетом влажности ежегодно можно получить до 35-50 тонн сухой смеси коры и побегов облепихи.

Все вышеизложенное, а также сведения этномедицгаш о применении коры и побегов облепихи при лечении заболеваний желудрчно-кипючного тракта свидетельствуют о целесообразности и своевременности проведения химических, технологических и биологических исследований для решения проблемы малоотходного комплексного использования ценнейшего растения Сибири - облепихи крушиновидной

Цель и задачи исследования. Целью настоящей диссертационной работы явилось теоретическое и экспериментальное обоснование возможности использования в качест-

ве сырья для производства противоязвенных препаратов отходов, получаемых при проведении плановых агротехнических мероприятий по возделыванию облепихи кру-шиновидаой, - коры и побегов.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

• провести изучениз химического состава лшюфильной и гидрофильной фракций БАВ коры и побегов облепихи;

• разработать ресурсосберегающие технологии масляного, жидкого и сухого экстрактов коры и побегов облепихи и провести их стандартизацию;

♦ предложил, схему комплексной переработай сырья облепихи;

* изучить защитное действие экстрактов коры и побегов облепихи на слизистую оболочку желудка животных при различных моделях экспериментальных язв.

Научная новизна исследований. Впервые проведено детальное изучение химического состава лшюфильной и гидрофильной фракций БАВ коры и побеге® облепихи, произрастающей на Алтае, по сравнению с официнальным сырьём обтепихи. Определены качественный состав и количественное содержание в исследуемом сырье суммы липофильных веществ и жирных кислот, тритерпенавых соединений, каротшюидов, кумаринов, алкалоид ов, дубильных веществ и флавоноидрв. Изучено влияние различных технологических факторов на процессы извлечения БАВ из ранее не исследованного сырья облепихи. Теоретически и экспериментально обоснован выбор показателей качества суммарных препаратов коры и побегов облепихи на основании данных о химическом составе сырья. Фармакологическими исследованиями установлено гастроза-щитное действие экспериментальных препаратов коры и побегов облепихи на слизистую оболочку желудка животных на фоне ульцерогенеза, вызванного ацетилсалициловой кислотой и нейрогенным воздействием.

Практическая значимость работы. Представленный в работе экспериментально-теоретический материал является доказательством и подтверждением возможности получения препаратов гастрозащшного действия из отходов, образующихся при проведении плановых агротехнических мероприятий но возделыванию промышленных шшпаций облепихи (коры и побегов). Предложены и экспериментально обоснованы ресурсосберегающие технологии масляного, жидкого и сухого экстрактов коры и побегов облепихи, а также показана возможность их стандартизации по предложенным показателям норм качества. Разработана схема комплексной переработки исследуемого

сырья. Полученные данные позволяют рекомендовать новые препараты коры и побегов облепихи для лечения язвенной болезни желудка. По результатам проведенных исследований экстрактов коры и побегов облепихи подготовлены материалы, характеризующие специфическую активность, для разрешения Фармакологическим комитетом МЗ РФ клинических испытаний.

Положения, выдвигаемые на защиту: • результаты фотохимических, технологических и фармакологических исследований отходов возделывания облепихи крупгшговидяой в качестве дополнительного источника БАВ для получения противоязвенных препаратов;

« теоретическое и экспериментальное обоснование возможности рационального комплексного использования коры и побегов облепихи для производства суммарных экстракционных препаратов.

Связь задач исследования с проблемными программами. Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ АГМУ на 1997 год.

Апробация. Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции НПК "Актуальные вопросы фармацевтической пауки и практики" (Курск, 1991г.), на НПК "Достижения фармацевтической науки и образования - практическому здравоохранению" (Пермь, 1997г.), на НПК "Достижения современной фармацевтической науки к практики на рубеже ХХЗ века" (Курск, 1997г.), на I межрегиональной фармацевтической конференции "Актуальные вопросы фармации на современном этапе" (Новосибирск, 1998г.), на V Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1998г.), на итоговой научной конференции молодых ученых "Актуальные проблемы медицины и фармации" (Курск, 1998).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 работ.

Структура и объём диссертации: Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав, общих выводов, списка цитируемой литературы (195 ссылок) и приложения. Материалы диссертации изложены ш/43 страницах машинописного текста, включающего 56 таблиц и 15 рисунков.

Исследования фармакологической активности препаратов облепихи проводили на базе НИИ фармакологии Томского научного центра РАМН под руководством ст. науч. сотр., канд. биол. наук Зуевой Е.П.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цели и задачи исследования, показаны научная новизна и практическая значимость работы.

Обзор литературы (глава 1) включает общие сведения о химической изученности БАВ облепихи крушиновидной, о применении растения в научной и народной медицине, а также данные о противоязвенной активности различных групп БАВ и препаратов растительного происхождения.

Глава 2 посвящена характеристике материалов (кора, побеги и смесь коры и побегов (2:8), собранные в фазу покоя в АОЗТ "Сибирское" и окрестностях города Барнаула в 1993-97 гг.), а также описанию химических, физико-химических и биологических методов исследования. Для удобства изложения часть данных о методах, используемых при разработке технологии препаратов, представлена в главе 3.

Изучение химического состава корн и побегов облепихи При комплексном фотохимическом исследовании БАВ коры и побегов облепихи, представляющих интерес с точки зрения их противоязвенной активности, обнаружены сумма липофильных веществ, в том числе жирных кислот (ЖК), тритсрпеновые соединения, сумма кароганоидов и кумаринов. При этом использовались гексановые, хлороформные, ацетоновые и этанолыше извлечения сырья.

Содержание суммы липофильных веществ определяли гравиметрическим методом после исчерпывающего экстрагирования н-гексаном. Показано, что значение данного показателя в коре варьирует от 0,73 до 0,85%, в побегах облепихи от 0,69 до 0,82%. При исследовании жнрнокислоткого состава липоф ильной фракции методом газожидкостной хроматографии на хроматографе "Хром-4" с пламенно-ионизационным детектором обнаружено 71,66% ненасыщенных кислот, большее количество из которых приходится на линолевую, олеиновую и пальмитоолеиновую кислоты (33,03; 15,82 и 13,03% соответственно). Насыщенные жирные кислоты, составляющие 27,40% от суммы всех ЖК, представлены преимущественно пальмитиновой кислотой (20,40%).

При хроматографировании извлечений в тонком слое сорбента на пластинках "Силуфол УФ-254" в системе растворителей циклогексан - диэ таловый эфир (80:20) установлено наличие 4 каротиноидов. Содержание суммы каротиноидов в пересчёте на Р-каротин, определенное по спекгрофотометрической методике ВНИИХТЛС, состав-

ляет 14,55...15,90 мг% в коре и 17,49...19,11 мг% в побегах, что сопоставимо со значением данного показателя в плодах среднекаротиноидных сортов облепихи (Мнлена Т.В., Лыкова Р.В., 1984; Новрузов Э.Н., 1981).

Результаты качественных реакций и хроматографирования извлечений сырья в тонком слое сорбента в системе растворителей бензол - ацетон (8:2) показали присутствие тритерпеновых. соединений. Подлинность урсоловой кислоты в составе фракции тритерпеновых соединений подтверждена данными спекгрофотометрического анализа. УФ-спектр поглощения урсоловой кислоты коры и побегов облепихи, выделенной и очищенной по методике Муравьёва И.А- Шатало В.В. (1972), имел максимум поглощения при длине волны 311 нм и характерный перегиб при 302-306 нм, что пошюстью совпадает со спектром поглощения стандартного образца урсоловой кислоты (рис.1).

Д 0,70,в]

220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 380 370 380 300 Л,нм

Рис.1. УФ-спектры поглощения продуктов взаимодействия урсоловой кислоты с концентрированной серной кислотой

1 - стандартный образец урсоловой кислоты; 2 - урсоловая кислота, выделенная из коры облепихи, 3 - урсоловая кислота, выд еленная из побегов облепихи

Количественное определение проводили по методике, основанной на спектрофотомет-рировании окрашенных продуктов взаимодействия урсоловой кислоты и концентрированной серной кислоты (Муравьёв И.А., Шатало В.В., 1972). Содержание урсоловой кислоты в коре облепихи алтайского региона (0,22...0,29%) несколько выше, чем в побегах (0,15...0,19%), что сопоставимо с ее содержанием в коре облепихи азербайджанских популяций (Новрузов Э.Н., 1979).

Идентификацию куиаринов, обнаруженных при проведении качественных реакций, осуществляли методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей а-

гексан - этилацетат (3:1) с использованием 14 стандартных растворов кумаринов. При этом установлено наличие в коре двух, а в побегах - трех кумаринов, один из которых в обоих видах сырья идентифицирован как пеораиен по совокупности качественных характеристик 0,66, голубая флюоресценция в УФ-свете и интенсивно-малиновый цвет пятна на хромагограмме после обработки диазореактивом). Для подтверждения подлинности псоралена проводили хроматоспекгрофотометрические исследования зта-нольных элюатов пятен кумаринов (В* 0,66), которые показали идентичность УФ-спектров поглощения стандартного образца псоралена и исследуемого кумарина из коры и из побегов облепихи (рис.2).

д аш -

0,70 ■

0,50 - ■ 0,4а ■■ цзо--0,200.10-

а,оо-1-1-1-1-(-1--1- а

216 226 236 2« 256 266 27в 286 л ,нм

Рис.2. УФ-спектры поглощения стандартного образца псоралена и элюата пятна кумарина с 0,66 из коры и побегов облепихи

1 - стандартный раствор псоралена; 2 - элюат пятна кумарина с 0,66 из коры облепихи; 3 - элюат пятна кумарина с Я{0,66 из побегов облепихи

Все объекты исследования имели максимум поглощения при длине волны 246 нм и характерный перегиб при 241 нм. Для количественного определения кумаринов в перо-счете на нсорачен использовали хроматоспектрофотометрическую методику (Георгиевский В.П., Комиесаренко Н.Ф., 1990). Установлена, что значение данного показателя в побегах облепихи несколько выше (0,37...0,44%), чем в коре (0,20...0,28%).

При изучении комплекса гидрофильных веществ коры и побегов облепихи особое внимание уделялось тем веществам, которые могут вносить определенный вклад в реализацию гастрозащигаого действия: флавоноиды и дубильные вещества. Кроме того, ввиду высокой физиологической активности веществ алкалоидной природы было проведено исследование данной группы веществ.

Присутствие флавоноидных соединений доказано с использованием комплекса качественных реакций и хроматограф ирования водных и зтанолышх извлечений сырья в тонком слое сорбента и на бумаге в системе растворителей ледяная уксусная кислота - вода (15:85). В коре и побегах облепихи обнаружено пять компонентов флаво-ноидной природы, которые по совокупности качественных характеристик (Н& цвет пятна на хроматограмме до и после обработки специфическими реактивами в УФ-свете) были отнесены к флавоноидам группы флавана. Отмечена идентичность флаво-ноидного состава хоры облепихи и побегов облепихи. Для дальнейшего изучения флавоноидов катехинового ряда, относящихся к группе флавана, из сырья выделяли и очищали фракцию катехинов по методике, в основе которой лежит экстракция данной фракции этилацетатом после удаления примесей липофильных веществ и ее осаждение при смене растворителя на хлороформ (Запрометов М.Н., 1964). Выделенная сумма катехинов использовалась для проведения качественных реакций с хромогеиными реактивами и для хроматоспектрофотометрических исследований. При разделении суммы катехинов в тонком слое сорбента в системе растворителей н-бутанол - уксусная кислота - вода (40:12:28) обнаружены два отдельных катехина в составе флавоноидов как коры, так и побегов облепихи. Анализ УФ-спектров этанольных эдгоатов пятен с хро-матограммы в диапазоне длин волн 220-370 нм показал идентичность флавоноидов группы катехина и в коре, и в побегах облепихи. Оба катехина имели характерные дог катехинов максимумы поглощения при длине волны 270 нм и 272 нм соответственно,

С помощью комплекса качественных реакций, традиционно использующихся в анализе дубильных веществ, установлено наличие дубильных веществ смешанной природа в водных извлечениях (1:10) и из коры, и из побегов облепихи. Принимая во внимание тот факт, что дубильные вещества и флввоноиды катехинового ряда относятся к легкоокиеляемым соединениям, для оценки количественного содержания дубильных веществ и флавоноидов в исследуемом сырье использовали такой показатель как "сумма окисляемых веществ". Содержание суммы окисляемых веществ, определенное по океидиметрической методике ГФ-Х1, довольно значительно и составляет 12,02...15,10% в коре и 9,62...12,16% в побегах облепихи.

Вещества алкалоидной природа в исследуемом сырье обнаружены при проведении качественных реакций с общеалкалоидными реактивами, наибольшую чувствительность из которых к алкалоидам коры и побегов облепихи показал реактив Зоннен-

штейна (раствор фосфорцомолибденовой кислоты). Методом бумажной хроматографии в системе растворителей н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5) доказана идентичность алкалоидного состава коры облепихи и побегов. На хроматограмме отмечены два индивидуальных пятиа, одно из которых по совокупности качественных характеристик (Дс 0,40 ..0,41; синий цвет пятна после обработки реактивом Зонненштейна) совпадает с пятном стандартного образца 5-охситршггаюша, выделенного из коры облепихи круппшоввдной. Количественное определение проводили по методике кафедры фармацевтической технологии АГМУ, основанной на слектрофотометрировании окрашенных продуктов взаимодействия алкалоидов сырья с реактивом Зонненштейна Содержание суммы алкалоидов в пересчёте на 5-оксшритамин варьирует в коре 0,82...1,09%, в побегах 0,57...0,74%. Несоответствие полученных данных с результатами Петровой М.Ф., Меньшикова Г.П. (0,3...0,4%) объясняется, на наш взгляд, большими потерями алкалоидов при гравиметрическом их определении и колебаниями в их содержании в зависимости от места произрастания.

В обобщенной таблице 1 представлены данные по содержанию БАВ коры и побегов облепихи. Результаты экспериментов обработаны статистически при помощи критерия Стыодеяга по стандартным методикам ГФ-Х1 (Р=95%).

Таким образом, установлено, что кора и побеги облепихи крутшшвкдпой алтайского региона являются богатым источником БАВ как липофильного, так и гидрофильного характера, большинство из которых - жирные кислоты, тритерпеновые соединения, каротаноиды, кумарины, флавоноиды и дубильные вещества, по данным литературы, обладают выраженным противоязвенным действием. Получение и изучение химического состава препаратов кори и побегов облепиха

Для достижения наиболее полного и быстрого извлечения БАВ из сырья было проведено изучение влияния технологических факторов на экстракционный процесс из коры и побегов облепихи с использованием математического метода планирования эксперимента при помощи латинского квадрата 3x3.

Исследования были проведены в условиях ряда постоянных факторов: растительное сырьё, способ экстрагирования и соотношение сырьё: экстрагент. В качестве сырья использовали смесь коры и одно- двухлетних побегов 2:8, поскольку данное соотао-

Таблица 1

Содержание БАВ липофильного и гидрофильного характера в коре и побегах облепихи

Наимено- Серия Содержание биологически активных веществ

вание сырья липофильного характера гидрофильного характера

сырья сумма липофиль-ных веществ, % сумма каротиноидов, ыг% урсоловая кислота, % сумма кумаринов, % сумма алкалоидов, % сумма окисляемых веществ, %

1 0,7310,02 15,9010,19 0,2510,008 0,2710,01 0,82+0,02 15,1010,33

Кора 2 0,85±0,04 14,9810,10 0,2710,009 0,20+0,01 1,0610,03 12,5710,21

облепихи 3 0,79±0,03 15,2510,15 0,29+0,011 0,2510,01 0,9510,02 13,0510,17

4 0,84±0,02 15,46+0,21 0,2210,005 0,2810,01 1,0910,04 12,0210,19

5 0,74±0,01 14,5510,14 0,26+0,004 0,2210,01 0,99+0,01 14,1910,24

1 0,76±0,01 17,8210,18 0,1510,003 0,3710,01 0,6110,02 12,1610,27

Побеги 2 0,81+0,03 17,4910,24 0,161:0,004 0,4210,02 0,64+0,01 10,7110,14

облепихи 3 0,7310,03 19,1110,16 0,194:0,005 0,38+0,01 0,5910,01 11,3410,17 .

4 0,69+0,02 17,96+0,10 0,19+0,008 0,39+0,01 0,7410,03 9,6210,11

5 0,82±0,04 17,5910,21 0,15+0,006 0,4410,02 0,5710,02 10,1210,23

Смесь 1 0,74±0,02 17,5010,41 0,17+0,006 0,3510,01 0,6410,01 12,8310,12 .

коры н 2 0,8010,03 16,9610,27 0,1810,003 0,3810,01 0,72+0,02 10,9810,18

побегов 3 0,7210,02 18,3410,11 0,2110,004 0,35+0,01 0,63+0,01 11,6710,09

облепихи 4 0,73±0,02 17,4210,17 0,1910,006 . 0,3710,01 0,80+0,03 10,2210,13

(2:8) 5 0,80±0,03 16,8710,21 0,1710,002 0,4010,62 0,63+0,02 10,9610,19

Примечание: Даны средние значения из 5 определений (в пересчёте на абсолютно сухое сырьё)

шение соответствует реалыю сформировавшемуся при проведении плановой реконструкции промышленных плантаций облепихи. Для смеси коры и побегав облепихи предварительно было определено содержание основных БАВ (табл. 1). Экстракционным способом на данном этапе был выбран способ мацерации, являющийся элементарным звеном всех методов извлечения. Соотношение сырьё: экстрагент, позволяющее создать "зеркало" над поверхностью сырья, было установлено экспериментально для каждого вида экстрагента и составляло 1:2,92 в системе сырьё: подсолнечное масло; 1:3,03 в системе сырьё: 40° этанол. Переменные факторы, выбранные с учётом ана-томо-морфологических особенностей сырья и химической природы БАВ, были следующие: измельченностъ сырья (5, 10, 15 мм), продолжительность однократного настаивания (б, 12, 24 часа), а также температура настаивания для липофилыюй фракции веществ (40°С, 50°С, 60°С) и характер экстрагента для веществ гидрофильного характера (20°, 40°, 60° этанол). Критерием эффективности экстрагирования служила количественная оценка истощенности сырья в первом случае по каротиноидам как наиболее термолабильной группы БАВ липофильного характера; во втором случае - по сумме окисляемых веществ.

Полученные в ходе эксперимента данные подвергались дисперсионному анализу. Установление значимости влияния на процесс экстрагирования вышеупомянутых технологических факторов, проведенное при сравнении полученных значений дисперсионных отношений с табличными значениями критерия Фишера, а также с использованием множественного рангового критерия Дункана, позволило выбрать оптимальные условия, обеспечивающие достаточно полное извлечение БАВ (табл. 2). Кроме того, время экстрагирования было уточнено в серии дополнительных опытов при изучении изменения истощ енности сырья во времени.

Таблица 2

Оптимальные условия извлечения гидрофильных и липофильных БАВ из коры и побе-

гов облепихи (однократное настаивание)

Вид экстракта Оптимальные условия

измельченностъ сырья, мм время одного настаивания, ч ' характер экстрагента температура, С

масляный экстракт 5 10 масло подсолнечное (ГОСТ 1129-93) 60й

жидкии экстракт 5 6 40°этиловый спирт -

С учётом полученных данных были разработаны и апробированы технологии масляного и жидкого экстрактов коры и побегов облепихи, в основу которых был положен один из наиболее эффективных способов экстрагирования - противоточное многоступенчатое экстрагирование в батарее из 6 диффузоров. Оценка рациональности разработанных технологий была сделана путем расчета выхода основных групп БАВ (табл. 3).

Таблица 3

Технологический выход БАВ при получении экстрактов коры и побегов облепихи

Вид экстракта Серия экстракта Выход rió основным БАВ, %

липойшльного хаоактеоа ! гшгооФильного характера

сумма каро-тиноидов урсоловая кислота кума- ¡ сумма рины окисляемых I веществ сумма алкалоидов

Масляный экстракт 1 2 3 4 5 95.1 1 95 16 91.02 91 37 95 08 "" 87Д2" ~ 85,19 82 77 85,08 80,68 87,92 8575 81 86 82 23 85 73

Жидкий экстракт i . 2 3 4 5 ..... 82,98 84 04 80 01 82,04 84'01 80.93 81 24 81.94 80,76 80,02

Сухой экстракт 1 2 ч 4 - 5 81,15 80,00 8401 8099 8227 53,88 51 17 5952 51 74 57 87

Данные таблицы показывают, что разработанные в ходе эксперимента технологии масляного и жидкого экстрактов позволяют достигнуть высокого выхода БАВ как ли-тофялыюго (80,68...95,16%), так гидрофильного характера (80.01... 84,04%). На основании этого был сделан вывод о рациональности разработанных технологий суммарных экстракционных препаратов коры и побегов облепихи, что особенно важно для решения проблем ресурсосбережения, определяющих в настоящее время рациональное природопользование.

С целью получения препарата, удобного при хранении и транспортировке, а также более устойчивого с микробиологической точки зрения, была разработала технология сухого экстракта. Для предотвращения окислительных и температурных деструк-ций БАВ гидрофильного характера сгущение этанолысого извлечения и. его последующее высушивание проводила в вакуум-сушильном шкафу марки ШСВ-45к У 4,2 при пониженном давлении 600-650 мм рт ст. Эффективность выбранного технологического режима была оценена по данным расчета практического выхода основных

БАВ. Достаточно высокий выход суммы окисляемых веществ (не менее 80,00%) свидетельствует о сохранении данного комплекса БАВ в процессе сгущения и высушивания. Более ншкий выход суммы алкалоидов (51,17... 59,52%) объясняется термолабильностью данной группы БАВ (табл. 3).

Химический анализ полученных препаратов показал идентичность качественного состава БАВ различных фракций, представляющих интерес с точки зрения противоязвенной активности, исходного сырья и экстракционных препаратов. Содержание суммы кароганоидов в масляном экстракте составляет 8,37...8,74 мг%, суммы кумаринов 0,15...0,18%, урсоловой кислоты 0,072.-0,091%. При количественном определении веществ гидрофильного характера в жидком и сухом экстрактах установлено содержание суммы окисляемых веществ 5,71...7,40% и 42,59... 52,23%. суммы алкалоидов 0,34...0.44% и 1,73...2,13% соответственно. С учётом полученных данных были разработаны показатели качества полученных, препаратов (описание, реакции подлинности, содержание БАВ, некоторые физико-химические показатели, регламентированные ГФ-X, XI и ОСТ 42-505-96), которые представлены в сводной таблице 4:

Таблица 4

Рекомендуемые показатели качества экстрактов коры и побегов облепихи

Показатели качества Вид экстракта

масляный | жидкий сухой

Описание Маслянистая жидкость красно-коричневого извета со слабым специфическим запахом, терпкого вкуса Прозрачная жидкость красновато-коричневого цвета, горьковато- вяжущего вкуса, со специфическим запахом Сыпучий порошок золотисто-коричневого цвета с характерным запахом, горького вкуса

Подлинность 1. Реакция с хлоридом сурьмы (каротиноиды) 2. Реакция Либермана-Бурхарда (урсоловая кислота} 3. Реакция образования азокрасителя(кумарины) 4. Лактонная проба (кумариньг) 1. Цимшдшювая проЬа (флавоноиды) 2. Реакция с жепезоаммонийными квасцами (дубильные вещества) 3. Реакция с фосфорномолибденовой кислотой (алкалоида)

Количественное содержание БАВ су»ша кумаринов 0,15...0,18% сумма окисляемых веществ, %

5,71...7,40 1 42,59...52,23

сумма алкалоидов, %

0,34... 0,44 1,73...2,13

Физико- химические показатели плотность 0,926...0,930 г/мл; показатель преломления 1,4739...1,4751; кислотное число 2,80...2,90 содержание этанола не менее 36% влажность 3,34...3,46%

содержание тяжелых металлов не более 0,01%

Сравнительный анализ данных по содержанию БАВ липофипьного характера в исходном сырье и шроте, полученном после экстрагирования гидрофильных веществ 40° этанолом, показал, что сумма лшюфильных веществ, каротиноидов, урсоловая кислота и кумарины остаются в шроте в количествах, сопоставимых с содержанием данных групп БАВ в исходной смеси коры и побегов облепихи (табл. 5), что позволяет использовать отходы фитохимического производства жидкого и сухого экстрактов в качестве источника данных веществ.

Таблица 5

Ссодтжанж ЕАВ лишфшьгога характера в жходгюм сырье и шроте коры и побегов облепихи

Серия Содержание БАВ лшюфильного характера

сырья сумма лшюфильных веществ, % сумма каротииои- дов, мг% урсоловая кислота, сумма кумаринов, %

1 2 13 1 ... ^ 3 1 2 3 1 2 3

1 0,74± 0,02 0,71±| 4,05 0,02 17,50± 0,41 17,24+ 0,79 1,49 0,17± 0,006 0,1*7+ 0,005 — 0,35± 0,01 0,34± 0,01 2,86

2 0,80± 0,03 0,76+ 5.00 0,03 | 16,96± 0,27 16,03+ 0,65 5,48 0,18± 0,003 0,17+ 0,008 5,56 0,3 8± 0,01 0,36+ 0,01 5,26

3 0.72± 6,02 0,71+ 1,39 0,02 18,34± 0,11 17,32+ 0,54 5,56 0,21± 0,004 0,20± 0,010 4,76 0.35± 0,01 0,35± 0,01

4 0,73± 0,02 0,73± -0.02 17,42± 0.17 1б,55± 0.49 4,99 0,19+ 0,006 0.18+ 0,007 5,26 0,37± 0,01 0,35+ 0,01 5,41

5 0,80± 0,03 0,78± 2,5 0,02 1 16,87± 0,21 16,58+ 0,63 1,72 0Д7± 0,002 0Д7± 0,004 — 0,40+ 0,02 0,38± 0,01 5,00

Примечание: Содержание липофилъных БАВ 1 - в сырье; 2 - в шроте; 3 - потери (%)

В связи с этим были получены 5 серий масляного экстракта по разработанной выше технологии с использованием в качестве сырья шрота, оставшегося после извлечения БАВ гидрофильного характера. Химический анализ БАВ масляного экстракта шрота и сопоставление полученных данных с аналогичными показателями масляного экстракта из исходной смеси коры и побегов (2:8) облепихи показали практически полную их идентичность в отношении содержания БАВ (7,90... 8.45 мг% и 8,37...8.74% суммы каротиноидов;! 0,072...0,086% и 0/372.,.0,091% урсоловой кислоты; 0,15...0,17% и 0,15...0,18% кумарннов соответственно).

С учётом результатов химико-технологических исследований была разработана схема комплексной переработки коры и побегов облепихи (рис. 3), предусматривающая последовательное получение препаратов, содержащих комплекс гидрофильных веществ (жидкий и сухой экстракта), и препарата на основе липофияьной фракции

(масляного экстракта), что является оправданным с точки зрения ресурсосберегающей концепции использования ценного сырья.

Кора облепихи

Побеги облепихи

Смесь коры и побегов облепихи (2:8)

Экстрагирование 40° этанолом

Этанольное извлечение

*'

Отстаивание (бсС), фильтрование

* 1

Сгущенке, сушка (50-60°С)

. '............

Шрот коры и побегов

Экстрагирование маслом подсолнечным

Отработанное сырьё

Экстрагирование маслом подсолнечным

т

Рис. 3. Схема комплексной переработки коры и побегов облепихи

Изучение противоязвенных свойств экстрактов кори и побегов облепихи Фармакологические исследования экстрактов коры и побегов облепихи были проведены с использованием нескольких моделей патологии, что дает возможность не только оценить и сравнить антиульцерогенное действие исследуемых препаратов, но и сделать попытку выяснить механизм их язвозаживдякяцвго эффекта. Спектр противоязвенной активности препаратов исследовали на моделях нейрогенной и ацетилсалициловой язвы. Эксперименты были выполнены на 87 беспородных белых крысах-самках массой 180-200 гита 170 беспородных мышах-самках и самцах массой 20-25 г.

Препараты из облепихи животные получали впутрижелудочно ежедневно с интервалом в 24 часа Продолжительность сроков введения и дозы изучаемых экстрактов изменялись в зависимости от модели язвы и используемого экстракта. Для оценки степени язвенного поражения определяли индекс Паулса и коэффициент противоязвенной активности. Обработку результатов проводили с использованием непараметрического критерия и Вилкоксона - Манна - Уиган и углового преобразования <р Фишера {Гублер Е.В., 1978}.

Установлено, что на фоне экспериментального ульцерогенеза, вызванного «рессорным воздействием, все исследуемые препараты обладают выраженной противоязвенной активностью, превышающей 2 единицы. При этом экстракты хоры и побегов облепихи можно разместить в следующий ряд в порядае увеличения их гастрозашит-ных свойств: сухой - жидкий - масляный (рис. 4).

40 т

1

I I

» 9

а 1

; Ю О

33,2

Ж

и

О масляный

экстракт

Я сухой

экстракт

Ш жидкий

экстракт

58 ■ 5>2

ЮОМГ/К- 200 мг/кг

ГЧс 4. Протволзэя! щ-акшвнхгь эклржтав гсрыиггйгсв

Интересно отметить, что увеличение дозы для сухош экстракта не приводит к значительному усилению противоязвенного эффекта, в то время как фармакологическая активность масляного к жидкого экстрактов /три повышении дозы в 5 раз (от 1 до 5 мл/кг) повышается в 2,7 и 2,0 раз соответственно.

Сравнительное изучение гастропротективной активности экстрактов коры и побегов облепихи на модели ацетилсалициловой язвы показывает выраженное анггиульце-рогенное действие масляного экстракта в дозах 0,5 и 2,5 мл/кг, а также сухого экстракта (50 мг/кг). Отмечено, что увеличение дозы масляного экстракта усиливает его защитное действие: коэффициент противоязвенной активности увеличивается от 2,3 до 3,5. Фармакотерапевтический эффект экстрактов реализуется преимущественно в ограничении генеза полосовидных и крупных язв. Так, при применении масляного экстрак-

та (0,5 мл/'кг) отсутствуют крупные, хорошо сформированные изъязвления слизисто! желудка. Сухой (50 мг/'кг) и масляный (2,5 мл/кг) экстракты коры и побегов облегаю достоверно снижают среднее количество точечных язв, при этом их количество уменьшается в 1,9 раз па сравнению с контролем (табл. б).

Сопоставляя химический состав разработанных экстрактов облепихи и фитопрепаратов, традиционно использующихся в терапии язвенной болезни, можно сделать вывод, что их защитное действие на данных моделях экспериментального повреждения слизистой оболочки желудка, объясняется поливалентным действием БАВ в составе препаратов коры и побегов облепихи. При этом не исключается системное влияние экстрактов на организм в целом.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. В коре и побегах облепихи крушиновидной, являющихся крупнотоннажными отходами реконструкции промышленных плантаций данной культуры в Алтайской крае, установлено наличие ценных БАВ липофильного характера. Содержанке в данных видах сырья каротиноидов колеблется в пределах 14,55—19,11 мг%; тригерпено-вых соединений 0,15—0,29%; кумаршюв 0,20...0,44% и суммы липофильных веществ 0,69-0,85%.

2. Показано, что кора и побеги облепихи крупшновидной являются потенциальным источником БАВ гидрофильного характера (флавоноиды, дубильные вещества и алкалоиды). Содержание в данных видах сырья суммы окисляемых веществ варьирует в пределах 9,62... 15,10%; суммы алкалоидов 0,57...1,09%.

3. С использованием метода математического планирования эксперимента определены оптимальные технологические параметры, обеспечивающие максимально полное извлечение БАВ из смеси коры и побегов облепихи (2:8). Для липофильных веществ: шмельченность 5 мм, время однократного настаивания 10 часов, температура 60°С; для веществ гидрофильного характера: нзмельчешюстъ 5 мм, время однократного настаивания б часов, экстрагент 40" этиловый спирт.

4. Разработаны ресурсосберегающие технологии суммарных неочищенных препаратов коры и побегов облепихи - масляного и жидкого экстрактов, с использованием способа многоступенчатого против отечного экстрагирования с законченным циклом, и проведена их стандартизация. Выход основных БАВ составляет не менее 91,02% при

Таблица б

Влиние экстрактов коры и побегов облепихи на развитие острой ацетилсалициловой язвы у беспородных крыс-самок

Группа наблюдения Режим введения: дозах количество введений Количество животных в группе Количество животных с язвами Среднее число язв на одно животное в груше (Х±»и) Индекс Паулса Противоязвенная. активность

крупные точечные псщосовидные всего

1. Контроль 10 100 1.Ш.02 9,7±2,3б 0,8±0,41 11, 6±2,37 И,6

2.Масшшый экстракт 0,5 мл/кгх7 8 75 м Ро<0,013 — 6,8±2,26 .— б,8±2,26 5,10 2,3

З.Масляный экстракт 2,5 мл/кгх7 ю 60 из Рш<0,001 0,2± 020 5,0+1,95 ,.эР1г<0,05 0,3±0,30 5,5±1,95 из Рц<0,05 3,30 3,5

4. Жидкий экстракт 0,5 мл/кгх7 9 100 0,1±0,11 9,1±1,80 — 9,2±2,3б 9,2 1.3

5. Жидкий экстракт 2,5 мл/кгх7 - 10 90 0Д±0Д1 7,2±1,54 0,2±0,20 7,5±1,64 6,75 1,7

б.Сухой экстракт 50 мг/кгх 7 10 80 Р ф <0,019 0,1±0,10 5,0±1,34 ,.бРп<0,05 — 5,1±1,34 ,.5 Рц<0,05 4,08 2,8

Примечание: перед уровнем значимости Р указаны номера сравниваемых груш

получении масляного экстракта и не менее 80,01% для жидкого экстракта.

5. Разработана ресурсосберегающая технология сухого экстракта коры и побегов облепихи, позволяющая добиться выхода суммы окисляемых веществ до 84,01%, и проведена его стандартизация по предложенным показателям качества. ~

6. Разработана схема комплексной переработки коры и побегов облепихи, которая предусматривает последовательное получение препаратов, содержащих комплекс ли-пофильных и гидрофильных веществ, обеспечивая тем самым повышение эффективности использования сырьевых ресурсов облепихи.

7. Изучены гастрозащкгаые свойства полученных препаратов на моделях жйро-генной к ацетилсалициловой язвы, которые выражались в снижении количества и площади деструкций. вызванных действием ульцерогена, а также в уменьшении числа животных с язвами. Установлено, что наиболее перспективными противоязвенными препаратами являются масляный и сухой экстракты коры и побегов облепихи.

Основное содержание изложено в работах

1. Турецкова В.Ф., Азарова О.В., Галочкина В.М. Определение подлинности и некоторых показателей доброкачественности коры и побегов облепихи крушиновидной И Актуальные вопросы фармацевтической науки и ярахтикк: Тез. докл. ШШ, посвященной 25-летию фарм. фак-та Курского мед. института / Курск, 1991. - С.250-251.

2. Азарова О.В., Турецкова В.Ф. Изучение биологически активных веществ липофиль-ной фракции коры и побегов облепихи крушиновидной. - М., 1996. - 8с. - Деп. и за-рег. в ЩНМБ 12.07.96 № 2472-В96.

3. турецкова В.Ф., Азарова О.В., Каледина Т.В. Определение урсоловой кислота в коре облепихи крушиновидной // Теоретические и практические аспекты изучения лекарственных растений: Сб. науч. ст. /Томск, 1996. -С: 170-172.

4. Турецкова В.Ф., Азарова О.В., Ильина Л.М. Изучение кумаринов коры и побегов облепихи крушиновидной // Достижения современной фармацевтической науки и практики на рубеже XXI века: Тез. докл. НИК, посвященной 30-летию фарм. фак-та Курского мед. университета / Курск, 1997. - С.175-176.

5. Турецкова В.Ф., Азарова О.В., Гультяева Г.И., Зуева Е.П. Исследования по разработке технологии жидкого экстракта коры и побегов облепихи крушиновидной // Достижения фармацевтической науки и образования - практическому здравоохране-

шло: Тез. докл. НПК, посвященной 60-летаю Пермской государственной фарм. академии / Пермь, 1997. - С. 166.

6. Азарова О.В., Турецкова В.Ф. Изучение липофильню. веществ коры и побегов облепихи крушиновидной. - М., 1998. - 8с. - Деп. и зарег. в ГЦНМБ 04.02.1998 № 295-В98.

7. Турецкова В.Ф., Азарова О.В., Зуева Е.П. Кора и побеги облепихи как источник веществ гидрофильного характера // Актуальные вопросы фармации на современном этапе: Тез. докл. I Межрегиональной фарм. конф. / Новосибирск, 1998. - С.47-48.

8. Зуева Е.П., Амосова E.H., Разина Т.Г., Крылова С.Г., Турецкова В.Ф., Азарова О.В., Гольдберг Е.Д. Возможность создания новых противоязвенных средств m растений Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. V Российского национального конгресса "Человек и лекарство" / Москва, 1998. - С.368.

9. Азарова О.В., Зуева Е.П., Амосова E.H., Разина Т.Г., Турецкова В.Ф. Изучение противоязвенного действия экстрактов коры и побегов облепихи И Актуальные проблемы медицины и фармации: Тез. докл. 63-й итоговой науч. конф. молодых ученых / Курск, 1398. - С. 184-185.

Подписано в печать 17.08-98. Тираж 100 экз. Заказ 395. Типография Издательства АГУ: Барнаул, ул. Димитрова, 66

Текст научной работыДиссертация по географии, кандидата биологических наук, Азарова, Ольга Васильевна, Барнаул

Алтайский государственный медицинский университет Научно-исследовательский институт фармакологии Томского

научного центра РАМН

На правах рукописи

АЗАРОВА ОЛЬГА ВАСИЛЬЕВНА

КОРА И ПОБЕГИ ОБЛЕПИХИ КРУШИНОВИДНОЙ - НОВЫЙ СЫРЬЕВОЙ ИСТОЧНИК БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

Специальность 11.00.11 - охрана окружающей среды и рациональное

использование природных ресурсов

Диссертация

на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Научный консультант:

Научный руководитель:

кандидат фармацевтических наук, доцент Турецкова В.Ф.

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Зуева Е.П.

Барнаул - 1998

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

ВВЕДЕНИЕ.....................................................................................................................4

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Облепиха крушиновидная как источник биологически активных веществ.............7

1.2. Фармакологические свойства препаратов облепихи и ее использование в народной медицине.................................................................................................................11

1.3. Препараты растительного происхождения, обладающие противоязвенной активностью ...........................................................................................................................16

1.4. Заключение...............................................................................................................24

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследования, используемые при изучении химического состава БАВ коры и побегов облепихи и стандартизации полученных препаратов.................................................................................................................................26

2.1.1. Методы исследования, используемые при изучении химического состава липо-фильной фракции БАВ...............................................................................................30

2.1.2. Методы исследования, используемые при изучении химического состава гидрофильной фракции БАВ................................................................................................39

2.1.3. Методы исследования, используемые при изучении физико-химических показателей.............................................................................................................................46

2.2. Материалы и методы исследования, используемые при изучении противоязвенной активности препаратов коры и побегов облепихи..............................................47

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТА

3.1. Изучение химического состава БАВ коры и побегов облепихи

3.1.1. Изучение химического состава БАВ липофильной фракции.................................51

3.1.2. Изучение химического состава БАВ гидрофильной фракции...............................60

3.2. Разработка технологии и стандартизация препаратов коры и побегов облепихи.72

3.2.1. Масляный экстракт коры и побегов облепихи........................................................73

3.2.2. Жидкий экстракт коры и побегов облепихи............................................................83

3.2.3. Сухой экстракт коры и побегов облепихи...............................................................92

3.2.4. Масляный экстракт шрота коры и побегов облепихи............................................97

3.3. Сравнительное изучение противоязвенных свойств экстрактов коры и побегов

облепихи

3.3.1. Нейрогенная язва желудка........................................................................................99

3.3.2. Ацетилсалициловая язва желудка...........................................................................103

3.3.3. Изучение влияния экстрактов коры и побегов облепихи на развитие реакции острого стресса у мышей................................................................................................105

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 109 ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 128

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 129

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Нерациональность использования сырья и несовершенство технологий переработки в ряде отраслей народного хозяйства (химическая индустрия, энергетика, фармацевтическая промышленность и т.д.) обернулись для биосферы мощным антропогенным давлением: загрязнением промышленными отходами, снижением продуктивности возобновляемых биологических ресурсов, в том числе растительного происхождения. Поэтому в последнее время становится крайне актуальным рациональное и комплексное использование сырьевых источников, в частности, лекарственно-технического сырья. Одним из аспектов этой многоплановой проблемы является создание экономичных, малоотходных и экологически безвредных технологий переработки растительных материалов.

В свете такого комплексного подхода к использованию ценного лекарственно-технического сырья заслуживают внимания уникальные растения сибирской флоры, одним из которых является облепиха крушиновидная КррорЬаё гЬатпо1ёез Ь., семейство лоховые (Ыаеаяпасеае), содержащая целый комплекс биологически активных и питательных веществ, обладающих ценнейшими биолого-фармакологическими свойствами. Однако, несмотря на содержание биологически активных веществ (БАВ) во всех частях растения, применение в медицинской, пищевой и косметической промышленности получили только плоды и листья облепихи (масло облепиховое, аэрозольные препараты "Олазоль" и "Гипозоль", сок облепи-ховый и т.д.), в то время как кора и побеги растения практического применения не нашли и являются отходами плановых агротехнических мероприятий по возделыванию облепихи. Так, по данным НИИ садоводства Сибири им. М.А. Лисавенко, ежегодный объём проводимой в садах промышленного назначения Алтайского края реконструкции позволяет иметь 230.. 350 тонн надземной биомассы облепихи крушиновидной, из которых с учетом влажности ежегодно можно получить до 35...50 тонн сухой смеси коры и побегов облепихи.

Все вышеизложенное, а также сведения этномедицины о применении коры и побегов облепихи при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта свидетельствуют о целесообразности и своевременности проведения химических, технологических и биологических исследований для решения проблемы малоотходного комплексного использования ценнейшего растения Сибири - облепихи крушиновидной.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей диссертационной работы явилось теоретическое и экспериментальное обоснование возможности использования в качестве сырья для производства противоязвенных препаратов отходов, получаемых при проведении пла-

новых агротехнических мероприятий по возделыванию облепихи крушиновидной, - коры и побегов.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

• провести изучение химического состава липофильной и гидрофильной фракций

БАВ коры и побегов облепихи;

• разработать ресурсосберегающие технологии масляного, жидкого и сухого экстрактов коры и побегов облепихи и провести их стандартизацию;

• предложить схему комплексной переработки сырья облепихи;

• изучить защитное действие экстрактов коры и побегов облепихи на слизистую оболочку желудка животных при различных моделях экспериментальных язв.

Научная новизна исследований. Впервые проведено детальное изучение химического состава липофильной и гидрофильной фракций БАВ коры и побегов облепихи, произрастающей на Алтае, по сравнению с официнальным сырьём облепихи. Определены качественный состав и количественное содержание в исследуемом сырье суммы липофильных веществ и жирных кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, кумаринов, алкалоидов, дубильных веществ и флавоноидов. Изучено влияние различных технологических факторов на процессы извлечения БАВ из ранее не исследованного сырья облепихи. Теоретически и экспериментально обоснован выбор показателей качества суммарных препаратов коры и побегов облепихи на основании данных о химическом составе сырья. Фармакологическими исследованиями установлено гастрозащитное действие экспериментальных препаратов коры и побегов облепихи на слизистую оболочку желудка животных на фоне ульцерогенеза, вызванного ацетилсалициловой кислотой и нейрогенным воздействием.

Практическая значимость работы. Представленный в работе экспериментально-теоретический материал является доказательством и подтверждением возможности получения препаратов гастрозащитного действия из отходов, образующихся при проведении плановых агротехнических мероприятий по возделыванию промышленных плантаций облепихи (коры и побегов). Предложены и экспериментально обоснованы ресурсосберегающие технологии масляного, жидкого и сухого экстрактов коры и побегов облепихи, а также показана возможность их стандартизации по предложенным показателям норм качества. Разработана схема комплексной переработки исследуемого сырья. Полученные данные позволяют рекомендовать новые препараты коры и побегов облепихи для лечения язвенной болезни желудка. По результатам проведенных исследований экстрактов коры и побегов облепихи

подготовлены материалы, характеризующие специфическую активность, для разрешения Фармакологическим комитетом МЗ РФ клинических испытаний. Положения, выдвигаемые на защиту:

• результаты фотохимических, технологических и фармакологических исследований отходов возделывания облепихи крушиновидной в качестве дополнительного источника БАВ для получения противоязвенных препаратов;

• теоретическое и экспериментальное обоснование возможности рационального комплексного использования коры и побегов облепихи для производства суммарных экстракционных препаратов.

Связь задач исследования с проблемными программами. Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ АГМУ на 1997 год.

Апробация. Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции "Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики "(Курск, 1991г.), на научно-практической конференции "Достижения фармацевтической науки и образования -практическому здравоохранению" (Пермь, 1997г.), на научно-практической конференции "Достижения современной фармацевтической науки и практики на рубеже XXI века" (Курск, 1997г.), на I межрегиональной фармацевтической конференции "Актуальные вопросы фармации на современном этапе" (Новосибирск, 1998г.), на V Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1998г.), на итоговой научной конференции молодых ученых "Актуальные проблемы медицины и фармации" (Курск, 1998).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ и 2 находятся в печати. В данных печатных работах изложено основное содержание диссертационной работы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. ОБЛЕПИХА КРУШИНОВИДНАЯ КАК ИСТОЧНИК БИОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

Облепиха крушиновидная (КррорЬаё гЬатпснёез Ь.) - кустарник или дерево семейства лоховых (Е1аеа§пасеае), высотой 1,5...6,0 м, с буро-зеленой или черной корой и многочисленными ветвями с колючками длиной 2...1 мм. Листья очередные, короткочерешковые, линейно-ланцетные, темно-зеленого цвета сверху и серебристые снизу. Цветки двудомные, мелкие и невзрачные, собраны в колосовидную кисть. Плоды - сочные оранжевые костянки, густо облепляющие концы ветвей. Цветет в апреле-мае одновременно с распусканием листьев, плоды созревают в августе-сентябре.

Ареал распространения облепихи крушиновидной весьма обширен и включает значительную часть Европы и Азии. В России облепиха произрастает во многих регионах, но основные ее массивы находятся на Алтае, в Туве, в южной части Бурятии [10]. Кроме этого, большие заросли имеются в Средней Азии, в южных областях Казахстана, на Кавказе, в дельте Дуная и на побережье Балтийского моря [58, 65].

Для большего удовлетворения потребности в плодах облепихи в 70...80-ых годах проведена всесторонняя селекционная работа по выведению новых перспективных её сортов, созданы высокопродуктивные промышленные насаждения облепихи [58, 151].

Технология выращивания культуры предусматривает ежегодную вырубку семи-восьмилетних малоплодоносящих деревьев и ежегодную обрезку одно-двухлетних побегов облепихи. Данный комплекс мероприятий повышает эффективность плодоношения и облегчает сбор плодов, но не предусматривает использования коры различных частей выкорчеванных растений, а также побегов, полученных при обрезке. Все это нельзя признать целесообразным в плане комплексной переработки сырья, так как и кора, и побеги облепихи содержат целый комплекс БАВ различной природы.

Использование облепихи как ценного лекарственного сырья обуславливает широкую изученность её химического состава, которая не равноценна для различных частей растения. В настоящее время довольно глубоко исследован состав БАВ плодов облепихи, значительно слабее изучен химический состав коры, листьев и других частей растения, причем большая часть работ, посвященных их изучению, появилась в последние два десятилетия [ЮЗ, 132, 153, 171].

По данным ряда исследователей, все части растения, в частности, плоды облепихи яв-

ляются поистине кладовой разнообразных БАВ [86, 113]. Большую ценность представляют плоды облепихи как редкое витаминосодержащее и масличное сырье, имеющее промышленное значение [9, 178]. В настоящее время в плодах установлено наличие 10 витаминов, из которых 6 водорастворимых и 4 жирорастворимых [25]. В плодах всех изученных сортов и популяций облепихи найдены каротиноиды, при этом их суммарное содержание подвержено значительной изменчивости: от 0,31 до 20,0 мг%. В состав каротиноидов плодов облепихи входят фитофлюин, (З-каротин, у-каротин, поли-цис-ликопин В, ликопин, зеаксантин, неокаротин, лютеин, криптоксантин, изокриптоксантин, виолаксантин, неоксантин [54, 102, 178, 192]. Кроме этого, в плодах идентифицированы витамин С и витамины группы В: Вь В2, Вб, в небольших количествах никотиновая и фолиевая кислоты, токоферолы, филлохи-ноны [29, 151, 178, 184].

Одним из важнейших показателей, определяющих качество плодов, является маслич-ность, которая колеблется в широких пределах: 1,89...13,70% для свежих и 16,16...41,90% для сухих плодов [35, 46, 178]. Детально изучен химический состав облепихового масла, в частности, его неомыляемой фракции, отвечающей за фармакологическую активность [37, 54, 70, 141]. В настоящее время установлен жирнокислотный состав облепихового масла [82, 83, 186] и соотношение между отдельными фракциями насыщенных и ненасыщенных жирных кислот [86, 96], общее число которых равно 20 [79].

В составе липофильной фракции плодов облепихи обнаружены тритерпеноиды ряда а-амирина, представленные урсоловой кислотой в количестве 1,34...1,60% [103, 165, 189].

В плодах облепихи найден ряд соединений фенольного характера, преимущественно фенолокислот: хинной, кофейной, хлорагеновой кислот [9, 25]. Количественное содержание дубильных веществ колеблется 0,025...0,530% [104, 177]. Плоды облепихи - богатый источник флавоноидов, которые представлены главным образом флавонолами подгруппы кверце-тина и изорамнетина в свободном виде и в виде З-О- и 7-О-гликозидов [121, 122, 190] и, в меньшей степени, катехинами и антоцианидинами, большинство из которых идентифицированы в настоящее время [151].

Высокое содержание органических кислот (1,04...4,46%) и Сахаров (1,00...3,26%), состав которых неоднороден, определяет использование плодов облепихи в качестве ценного пищевого продукта [1, 9, 177]. В плодах обнаружен также пектин [2, 150].

В результате изучения аминокислотного состава были выделены аланин, фенилаланин, глутамин, цистеин, лейцин и определено их количественное содержание [92, 148]. Исследование минерального состава позволило идентифицировать в плодах 15 микроэлементов,

среди которых железо, магний, алюминий, цинк, кобальт, марганец, медь и другие, а также соли натрия, калия и кальция [38]. Кроме того, обнаружены абсцизовая кислота [48] и предельные спирты нормального строения С18-С26 [140].

Из вышеизложенного следует, что в настоящий момент сравнительно хорошо известен химический состав плодов облепихи, являющих ценным масличным и витаминным сырьём, имеющим промышленное значение. Химический состав других частей ещё недостаточно изучен. Это относится, в частности, к изучению подземных органов облепихи. Исследование химического состава корней растения позволило обнаружить углеводы, лейкоантоцианы, катехины, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты и высшие жирные кислоты [86, 169].

Ряд работ посвящен изучению состава листьев облепихи, который весьма разнообразен. Особенно привлекает интерес исследователей липофильный комплекс из листьев как потенциальный заменитель масла плодов [52, 171]. Установлены качественные и количественные показатели содержания в листьях жирного масла и исследован его жирно-кислотный и триацилглицеридный состав. В состав масла входят фосфолипиды (1,4%), а-, (3-, у-каротины, а-, (3-, у- токоферолы, хлорофилл а и б, высшие жирные кислоты [76, 83].

Листья облепихи, как и плоды, богаты витаминами: витамином С [25, 86] и Е [139], каротиноидами, качественный состав которых несколько беднее по сравнению с плодами [139, 186]. При изучении состава тритерпеновых соединений листьев помимо урсоловой кислоты, содержание которой колеблется в пределах 0,29...0,39% [103], обнаружены тритер-пеновые соединения, отличные от тритерпеноидов плодов, в частности, олеаноловая кислота, а- и (3-амирин, лупеол, эритродиол, уваол и др.[139, 168]. Выявлено наличие в листьях квебрахита [131], а также высших алифатических спиртов нормального ряда�