Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Конструирование рекомбинантного штамма Escherichia coli, продуцирующего адгезин К88 и В-субъединицу холерного токсина

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Войтенко, Андрей Сергеевич

ВОЗБУДИТЕЛЯ К0ЛИБАКТЕРИ03 А.

1.1.1. Характеристика колибактериозов.

1.1.2. Основные этапы инфекционного процесса при коли-диареях.

1.1.3. Факторы патогенности энтеротоксигенных штаммов кишечной палочки (ЕТЕС).

7 1.1.4. Иммуногенный потенциал протективных антигенов энтеротоксигенных штаммов кишечной палочки.

1.2. Средства специфической профилактики диарейных заболеваний, вызываемых энтеротоксигенными штаммами кишечной палочки.

СОВСТВЕШШ ЙССЖД01АНЙЯ

ГЛАВА £. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды.

2.2. Питательные среды и реактивы.

2.3. Методы.

2.3.1. Коньюгационные скрещивания.

2.3.2. Изучение стабильности наследования плазмид в клетках кишечной палочки методом популяцион-ного анализа.

2.3.3. Изучение плазмидного состава полученных транс-коньюгантов Е. coli.

2.3.4. Реакция маннозорезистентной гемагглютинации

МГГП А \ СП ivlrx HJ

5. Определение продукции В-субьединицы холерного токсина

6. Определение безвредности штаммов шашечной палочки на модели лабораторных животных.

7. Определение колонизирующей способности штаммов кишечной палочки.

8. Изучение антигенных свойств рекомбинантного штамма Е.coli М17(рК88:¡mini-kan)(р1ЕМЗ).

8. Получение адсорбированной антисыворотки к ад~ гезину K8S и В-субьединице холерного токсина

10. ДОТ-иммукоанализ..

11. Определение б сыворотке крови ишунивированных животных антител к адгезину К88 о помощью реакции агглютинации.

12. Определение антитоксических антител в сыворотке крови шяуннизированных кроликов

КОНСТРУИРОВАНИЕ ДШЛАЗМИДН0Г0 ШТАМПА КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ М1?(рК88::mini-kan)(pIEMS), СОДЕРЖАЩЕГО РЕКОМВИНАЫТНЫЕ ПЛАЗМИДЫ С КЛОНИРОВАННЫМИ ГЕНАМИ АДРЕЗИНА К88 И В-СУБЬЕДИНШЩ ХОЛЕРНОГО ТОКСИНА. 50 . Коньюгациошюе введение в штамм кишечной палочки М17 плазмиды рК88: :rnlnl-kan и изучение стабильности ее наследования в клетках Е.coli М17. Изучение экспрессии плазмидных генов fas в клетках созданного штамма кишечной палочки М17(рК88::mini-kan)(pIEMS) и определение оптимальных условий для биосинтеза клетками адгезина К88.

3.3. Коньюгационное введение в штамм кишечной палочки М17(рК88: :iriini-kan) плазмиды р1ЕМЗ и изучение стабильности ее наследования в клетках Е.coli

М17(рК88::mini-kan) (PIEM3).

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ И СТАБИЛЬНОСТИ НАСЛЕДОВАНИЯ ВВЕДЕННЫХ ГЕНОВ ПРОТЕКТИВНЫХ АНТИГЕНОВ - АДГ ЕВИНА К88 И В-СУБЬЕЯИНИЦЫ ХОЛЕРНОГО ТОКСИНА В ШТАММЕ E.coli М17(рК88::mini-kan).(рIEM3)

4.1. Определение экспрессии генов В-субьединицы холерного токсина в клетках штамма E.coli М17(рК88::mini-kan) (р1ЕМЗ).

4.2. Определение экспрессии генов адгезина К88 в клетках £.coli М17(рК88::mini-kan)(pIEM3).

4.3. Стабильность наследования плазмид рК88::mini-kan и р1ЕМЗ штаммом E.coli М17 в условиях in vitro и in vivo.

ГЛАВА 5 ИЗУЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ, КОЛОНИЗИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ И АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ СКОНСТРУИРОВАННОГО ДИПЛАЗМИД-НОГО ШТАММА E.coli М17(рК88::mini-kan)(pIEM3). 86 5.1. Изучение безвредности штамма Е.coli М17(рК88::mini-kan) (pIEM3).

5.2. Определение колонизирующей способности штамма

Е. coli М17 (рК88::mini-kan) (pIEM3).

5.3. Изучение антигенных свойств штамма E.coli М17(рК88:: mini-kan) (pIEM3).

ОБСУЖДЕНИЕ..

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Конструирование рекомбинантного штамма Escherichia coli, продуцирующего адгезин К88 и В-субъединицу холерного токсина"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Инфекционные болезни, поражающие все виды домашних животных, а также птиц и вызывающие в ряде случаев их массовый падеж, приносят огромный экономический ущерб многим странам мира. Особую тревогу вызывает резкое ухудшение эпизоотической ситуации в России, обусловленное финансовыми трудностями, которые отражаются на обеспечении животноводческих хозяйств необходимыми диагностическими и профилактическими препаратами.

В структуре инфекционных болезней животных одно из ведущих мест занимает юлибактериоз - острое инфекционное заболевание молодняка сельскохозяйственных животных, которое вызывается патогенными штаммами кишечной палочки. Так, в отдельных животноводческих хозяйствах заболеваемость колибактериозом телят, ягнят и поросят в неонатальный период достигает 90% (Курашвили Т.К., Соколова H.A. 1891,1992; Субботин В.В., Степанов K.M. 1998; Shlager Т.к. et al. 1990). Одной из основных причин таких высоких показателей заболеваемости животных колибактериозом является сниженная резистентность поголовья к инфекционным агентам, которая обуславливается несоблюдением технологии выращивания молодняка и низким уровнем производимых ветеринарно-санитарных мероприятий. Другая не менее важная причина массового поражения молодняка колибактериозом заключается в отсутствии эффективных профилактических препаратов широкого спектра действия. Применяемые в настоящее время убитые вакцины не могут обеспечить у животных формирование длительного и напряженного иммунитета. При этом следует отметить тот факт, что применяемые вакцины не являются универсальными, поскольку способны защитить животных от заражения патогенными штаммами Escherichia соИ лишь определенных сероваров, тогда как для возбудителя колибактериоза характерна принадлежность к широкому диапазону сероваров - 02, 08, 09, 078, 0111, 0138, 0139 и др. Кроме того к настоящему времени стало известно, что парентеральное введение любых вакцин, включая и убитые, является малоэффективным. Самой простой и естественной является пероральная вакцинация, одно из достоинств которой, заключается в ее физиологичности, высокой производительности и возможности осуществления практически в любых условиях (Бондаренко В.М., 1998).

В этой связи для решения проблемы специфической профилактики необходимы разработка и изготовление оральных колибактериоз-ных вакцин, характеризующихся высокой эффективностью и безопасностью. К настоящему времени работа по созданию подобных вэкцин ведется в двух основных направлениях.

Во-первых, получают различные типы оральных цельноклеточных убитых вакцин, содержащих адгезивные антигены (Гутковский А. А., Дворкин Г.Л. 198?; Пирожков М.К., Тугаринов О.А. 1991; Соколова Н.А. с- соавт. 1993; Федоров Ю.Н. с соавт. 1997; Buttenshon Р.А. 1986; Gassier R.W. 1988). Теоретическим обоснованием для разработки таких вакцин служит тот факт, что развитие инфекционного процесса при колибактериозе начинается с поражения слизистой оболочки тонкого кишечника. Блокируя колонизацию, можно остановить развитие болезни на самых ранних этапах. Уже показана достаточно высокая протективная эффективность убитой вакцины, содержащей белки-адгезины К88 в пассивной защите поросят-сосунков

- 6

Пирожков M.K., Тугаринов O.A. 1991). Другой подход в указанных исследованиях заключается в использовании в качестве основного антигена иммуногенных В-субьединиц термолабильного токсина Е. coli или холерного токсина, имеющих обширную область гомологии, которые обеспечивают формирование антитоксического иммунитета при колибактериозе (Takahashi I. et al. 1996; Bernard! A. et al. 1997).

Во-вторых, проводятся интенсивные исследования по конструированию рекомбинантных живых оральных вакцин на основе авиру-лентных штаммов E.coli. Так, в 1991г. D.H. Francis и J.Willgohs сконструировали живую вакцину против диарей, вызываемых энтеро-токсигенными штаммами кишечной палочки, путем введения в авиру-лентный штамм Е.соЛ G58-1 рекомбинантных плазмид с генами адге-зина К88ас и В-субьединицы термолабильного токсина E.coli. Созданный штамм обеспечивал защиту у 70% иммунизированных поросят. Тем не менее, полученные вакцины имеют ряд существенных недостатков . Убитые вакцины остаются недостаточно эффективными, поскольку не могут обеспечить продолжительную и напряженную специфическую защиту, а живые вакцины имеют остаточную реактоген-ность. Кроме того, вакцины, разработанные в зарубежных лабораториях, являются недоступными для России.

Анализ вышеизложенных данных позволяет считать, что исследования, связанные с созданием рекомбинантных штаммов, продуцирующих основные протективные антигены, являются весьма актуальными, поскольку направлены на решение проблемы вакцинопрофилак-тики колибактериоза. 9

ЦЕЛЬ РАБОТЫ - на основе авирулентного штамма Е. coli М17 сконструировать рекомбинантный штамм с гомо- и гетероло-гичными генами основных протективных антигенов для последующего создания на его основе живой оральной вакцины против колибакте-риоза свиней.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Сконструировать диплазмидный штамм E.coli М17, содержащий гены, кодирующие биосинтез пилей адгезии К88 (фактора колонизации тонкого кишечника свиней) и В-субьединицы холерного токсина, являющихся протективными антигенами, формирующими антиадгезивный и антитоксический иммунитет.

2. Изучить стабильность наследования введенных гомологичных (гены пилей адгезии К88) и гетерологичных (гены В-субьединицы холерного токсина) генов в клетках штамма E.coli MI?.

3. Определить эффективность экспрессии генов, контролирующих продукцию адгезина К88 и В-субьединицы холерного токсина, в клетках нового хозяина E.coli М17.

4. Провести сравнительный анализ колонизирующей способности сконструированного диплазмидного штамма Е.coli Ml? (рК88::mini-kan) (pIEM3) и исходного штамма E.coli М17 на модели лабораторных животных.

5. Определить безвредность и изучить антигенные свойства ре-комбинактного штамма E.coli Ml7 (рК88::mini-kan) (pIEMS) в условиях in vivo.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

В результате проведенных экспериментов впервые в России на основs аЕИрулйНхНиГо ffix3i«MS E.coli Ml 7 сконструирован рекомби

- 10 нантный диплавмидный штамм Е. coli М17 (рК88::mini-kan) (pIEM3), содержащий гены основных протективных антигенов - фактора колонизации К88 и В-субьединицы холерного токсина. Впервые показано, что в клетках штамма E.coli Ml7 могут стабильно наследоваться и эффективно экспрессироваться гены фактора колонизации свиней К88 и В-субьединицы холерного токсина, локализованные на двух реком-бинантных плазмидах рК88::mini-kan и р1ЕМЗ, соответственно. Установлено, что оптимальными условиями для экспрессии адгевина К88 в клетках штамма E.coli М17 в условиях in vitro являются культивирование на агаре YT в течении 24 часов при 37°С. В этих условиях адгезивная активность клеток E.coli Ml7 с плазмидой рК88::mini-kan возрастает в 4-8 раз по сравнению с исходными штаммами.

На модели лабораторных животных (крольчата-сосунки) впервые проведено сравнительное изучение колонизирующей способности сконструированного рекомбинантного штамма E.coli М17 (рК88::mini-kan) (pIEM3). Установлено, что созданный штамм в 1000 раз активнее заселяет тонкий кишечник крольчат-сосунков по сравнению с исходным штаммом E.coli М17. Получены новые экспериментальные данные о том, что введение штамма E.coli М17(рК88::mini-kan)(pl-ЕМЗ) вызывает образование у привитых животных антител к адгезину К88 и Б-субьединице холерного токсина.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

В Государственной коллекции патогенных бактерий "Микроб" депонирован сконструированный рекомбинантный диплазмидный штамм E.coli Ml? (pKS8г:mini-kan) (р1ШЗ), а также моноплазмидный штамм Е.coli Ml7 (рК88:;mini-kan). Определена высокая антигенность иплазмидного штамма E.coli М17(рК88: :mini-kan) (pIEM3) для лабораторных животных, что указывает на перспективность дальнейших КЗ-следований его. иммунобиологических свойств с целью испытания сказанного штамма в качестве потенциальной живой вакцины против солибактериоза свиней.

Теоретически и практически значимые результаты диссертации включены в цикл лекций по биотехнологии для студентов СГАУ им. U1. Вавилова (1999-2000 гг.).

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА

ЗАЩИТ 7.

1. На основе авирулентного штамма E.coli М17 сконструирован з помощью молекулярно-генетических методов рекомбинантный дип-шзмидный штамм E.coli Ml? (рК88: :mini-kan) (pIEM3), содержащий гены двух основных протективных антигенов - адгезина К88ав, призу тствующег о в штаммах кишечной палочки, патогенных для свиней, а В-субьединицы холерного токсина.

2. Плазмидные гены, контролирующие биосинтез адгезина К88ав я В-субьединицы холерного токсина, стабильно наследуются и эффективно экспрессируются в клетках штамма E.coli М17.

3. Присутствие в клетках E.coli Ml? плазмиды рКВ8: :ininl-kan з генами, контролирующими продукцию адгезина К88ав, обеспечивает заметное повышение адгезивной способности созданного диплазмид-зого штамма по сравнению с исходным штаммом Е. coli М17.

4. Сконструированный рекомбинантный штамм Е.coli Ml? (pK88i :minl-kan) (р!ЕМЗ) по результатам лабораторных испытаний является безвредным и обладает антигенными свойствами.

- 12

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Основные результаты диссертационной работы были доложены на;

1. Научной конференции профессорско- преподаватель ског о состава и аспирантов СГАУ им. Н.И. Вавилова по итогам научно-исследовательской и учебно-методической работы за 1998 г. (Саратов, 1-5 февраля 1999 г.)

2. Научно-практической конференции РосНИПЧИ "Микроб" "Итоги и перспективы фундаментальных и прикладных исследований" (Саратов, 19-21 апреля 2000 г.).

3. Проблемной комиссии "Холера и патогенные для человека вибрионы" межведомственного научного совета по санитарно-эпидемической охране территории Российской Федерации (Ростов-на-Дону, 6-7 июня 2000 г.).

ПУБЛИКАЦИИ.

По теме диссертации опубликованы 4 научные работы.

- 13 fcrmiTuri TfH'i'i »i i а»»чип»

ОШОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Войтенко, Андрей Сергеевич

выводы

1. На основе авирулентного штамма E.coli М17 с помощью мо-лекулярно-генетических методов сконструирован рекомбинантный штамм Е.coli М17 (рК88::mini-kan)(pIEMS), содержащий две плазми-ды с генами, контролирующими продукцию пилей адгезии К88 (рК88:mini-kan) и В-субьединицы холерного токсина (р!ЕМЗ), которые являются основными протективными антигенами, обусловливающими формирование антиадгезивного и антитоксического иммунитета при колибактериозе свиней.

2. Установлено, что сконструированный штамм Е. coli Ml7 (рК88::mini-kan)(pIEMS) стабильно наследует в условиях in vitro и in vivo плазмидные гены fae и ctxB, ответственные за биосинтез пилей адгезии К88 и В-субьединицы холерного токсина.

3. Показано, что присутствие в клетках созданного штамма E.coli М17 (рК88::mini-kan)(pIEM3) двух, рекомбинантных плазмид с генами протективных антигенов обусловило высокий уровень продукции этим штаммом пилей адгезии К88 и В-субьединицы холерного токсина за счет эффективной экспрессии введенных генов fae и ctxB.

4. В опытах на лабораторных животных получены экспериментальные доказательства безвредности рекомбинанткого штамма Е. coli Ml7(pKS8::mini-kan)(pIEM3). Сконструированный штамм, введенный внутрибрюшинко белым мышам (1х107м.т.), а также внутрикишеч-но и внутрижедудочно кроль чатш-сосункам (1х109 и 5х109 м.т.), не вызывал заболевания, гибели животных иди макроскопических изменений в их кишечнике.

5. Установлено, что штамм E.coli М17 (рК88::mini-kan)(pIEMS)

- 105 способен к более эффективной колонизации тонкого кишечника крольчат-сосунков по сравнению с исходным беоплазмидным штаммом, что было выявлено путем подсчета количества клеток бактерий, находящихся на 1 омй поверхности тонкого отдела кишечника через 48 час, после заражения животных.

6. Рекомбинантный штамм E.coli М17(рК88: :mini-kan) (р1ЕШ) обладает выраженными антигенными свойствами. Двухкратная внутри-желудочная иммунизация взрослых кроликов живой культурой указанного штамма (5*1010 м.т.) вызывала образование в сыворотке крови специфических антитоксических и антиадгезивных антител в высоких титрах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1, На основании проведенных работ разработаны и утверждены Ученым Советом Института ветеринарной медицины и биотехнологии Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И.Вавилова Методические рекомендации: "Использование рекомбинантных плазмид для получения потенциально Еакцинных штаммов Escherichia coli" (протокол N36 от 15,05.2000).

Указанные методические рекомендации будут включены в план практических занятий по биотехнологии для студентов факультета ветеринарной медицины Института ветеринарной медицины и биотехнологии Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова.

2. Высокий уровень продукции протективных антигенов, безвредность для лабораторных животных и выраженная антигенность сконструированного рекомбинантного штамма E.coli М17(рК38::mi

- 105 и-кап)(рХЕМЗ) позволяют рассматривать его в качестве кандидата за живую вакцину против колибактериоза свиней и рекомендовать проведение дальнейших исследований указанного штамма как б лабораторных, так и в производственных, условиях о целью последующего внедрения этого- нового вакцинного препарата в практику животноводства.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Войтенко, Андрей Сергеевич, Саратов

1. Блохина И.Н., Дорофейчук В.Г. Дисбактериозы //Л. Медицина, 1979.- 176с.

2. Бондаренко В.М., Мавзютов А.Р., Габидуллин З.Г. Термолабильные энтеротокс-ины условно-патогенных представителей Eritero-bactericeae //ШЭИ.-1998.-N.3.-с. 104-107.

3. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса //ЖШИ.-1999.-М.5.-с.34-38.

4. Вельков В.В. Нестабильность рекомбинантных молекул //Генетика. -1983. -T.19.-N.10.-с.1573-1581.

5. Гнатенко Г.В., Сухарев Ю.С. Иммуногенные свойства препарата из коныогированных энтеротоксинов Escherichia coli //Ветеринария .-1992.-N.2.-с.27-29.

6. Головко А.Н. Антигенная вариабельность фимбриальных ад-гезинов Escherichia coli //'Ветеринария. -1997. N. 8. - с. 23-25.

7. Гутковский А.А. Иммунологическая эффективность вакцин против колибактериоза поросят //Сб. трудов Бел.НИИЭВ "Ветеринарная наука производству".-1988.-Вып.26.-с.62-70.

8. Гутковский А.А., Дворкин Г.Л. Совершенствование бактериологической диагностики колиэнтерита новорожденных телят //Сб. трудов Бел.НИИЭВ "Ветеринарная наука производству".-1988.-Вып.26.- с.58-62.

9. Езепчук ,Ю.В. Патогеннооть как функция биомолекул //М. Медицина,1985.-240с.

10. Качалова С.П. Новые зарубежные данные о колибактериозе поросят //Сельскохозяйственные наука и производство. Серия 2. "Экономика, кормопроизводство, животноводство".- М.-1987.- N. 6. -с.36-45.

11. Костюкова А.Н. Начальный этап инфекционного процесса -колонизация и пути ее предотвращения //ЖМЗИ.-1989. -N. 9. с.103 -109.

12. Куликовский А.В., Пашин А.Н., Сосина В.В. Токсигенные эшерихии- актуальная проблема ветеринарии и медицины //Ветеринария .-1997.-N.3.-c.25-27.

13. Курашвили Т.К., Соколова Н.А. Адгезивный антиген K88ad Escherichia coli //Ветеринария.-1991.-N.3.-с.26-28.

14. Левина Л.А., Зайцева Е.В., Темпер P.M. и др. Иммунологическая активность бактерий штамма Escherichia coli М17, используемого при изготовлении коммерческого препарата колибакте-рина //ШЭИ. -1994. N. 5. - с. 63- 66.

15. Лесь 0.Д. Профилактика желудочно-кишечных болезней телят //Ветеринария.-1993.-N.8.-C.5-6.

16. Наумов А.В., Белов Л.Г., Омариева З.Я. Экологические основы кишечного микробиоценова //Саратов. -РНИПЧИ "Микроб", 1997.-203с.

17. Петровская В.Г., Бондаренко В.М. Адгезины энтеротокси-генных кишечных палочек: роль в патогенезе диарей и генетический контроль /УЖМЭИ.-1990.-N.5.-c.110-117.

18. Пирожков М.К., Тугаринов О.А. Влияние адгезивного анти- 109 гена. K8S на иммуногенность вакцины против колибактериоза, поросят //Сб. науч.трудов ВГНКИ вет. препаратов.-1991.-N.53.-о.17-24.

19. Полоцкий Ю,Е., Авдеева Т.А. Адгезивность, инвазионность и энтеротоксигенность возбудителей кишечных инфекций //ШЭИ. -1981.-N.5.-с.23-32.

20. Разработка вакцин против холеры и диареи, вызываемой энтеротоксиг-енными Escherichia со И. Меморандум совещания ВОЗ. -1990.-Т.68.-N.3.-с.19-30.

21. Светоч З.А., Гусев В.В., Попов Е.й. Биологическая и генетическая характеристика возбудителя колибактериоза телят //Ветеринария. -1999.-N.5.-с.20-23.

22. Светоч Э.А., Попов Е.И., Гусев В.В. Фено- и генотипи-ческие свойства штаммов £,coli, продуцирующих антиген К88 //Ветеринария. -1997.-N.3.-с.19-23.

23. Соколова Н.А., Курашвили Т.К. Полиадгезивные штаммы Escherichia coli, выделенные от новорожденных поросят //Ветеринария .-1992.-N.1.-е.29-31.

24. Соколова Н.А., Шагидович Э.А., Гнатенко Г.В. Иммуноген-ные своцства вакцины против колибактериоза //Ветеринария.-1993.-N. 8.-с.7-10.

25. Субботин В.В., Степанов К.М. Влияние бифацидобактерина на кишечную микрофлору поросят //Ветеринария.-1998.-N.5.-с.24-26

26. Ушкалов В.А., Головко А.Н. Факторы патогенности Escherichia coli, выделенных от телят //Ветеринария.-1992.-N.4.-c.229Q

27. Чулков А.К. Эффективность фармакологических средств при терапии колибактериоза новорожденных телят /./Бюллютень ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко.-1983.-Вып.52.-с.27-30.

28. Baker D.R., Billey L.O., Francis D.H. Distribution of (88 Escherichia coli-adhesive and nonadhesive phenotypes among 3igs of four breeds //¥et.Microbiol.-1997.-V.54.-N.2.-p.l23-132.

29. Bakker D. Studies on the K88 fimbriae of entheropathören i с Escherichia coli //Drukkeriy Elinkwijk BY.-Utrecht.-1991.

30. Bakker D., Willensen P.T.J., Huisman T.T. et al. Identification of minor fimbrial subunits involved in biosynthesis jf K88 fimbriae //J.Bacteriol.-1992.-V.174.-p.6350-6358.

31. Baselski V.S., Medina P.A., Parker C.D. In vivo and in /itro characterization of virulence-deficient mutants of Vibrio :holerae //Infect. Iirmun.-1979.-V.24.-N. 1.-p. 111-116.

32. Bernard! A., Raimondi L., Zuccotto F. Simulation of protein-sugar interactions: a computational model of the complex between ganglioside GM1 and heat-labile enterotoxin of Escheric-hia coli //J.Med.Chem.-1997.-V.40.-N.12-p.1855-1862.

33. Billey L.O., Erickson A.K., Francis D.H. Multiple receptors on porcine intestinal epithelial cells for the three variants of Escherichia coli K88 fimbrial adhesin /'/Vet.Microbiol. -1998.-V.59.-N.2-3.-p.203-212.

34. BiJIsma I.G.W., de Niys A., Van der Meer C. et al. Different pig- phenotypes affect adherence of Escherichia coli to jejunal bruch borders by K88ab, K88ac, or KBSad antigen //Infect. Immun.-1982.-V.37.-N. 2. -p.891-894.

35. Blomberg L., Krivan H.C., Cohen P.S. et al. Piglet ileal mucus contains protein and glycolipid (galactosylceramide) receptors specific for Escherichia coli K88 fimbriae //Infect. Immun.-1993.-V.67.-p.2526-2531.

36. Boedeker E.G. Enterocyte adherence of Escherichia coli //Gastroenterol.-1982.-V.83.-p.489-492.

37. Bradley D.E., Taylor D.E., Cohen D.R. Specification of surface mating system among corgugative drug resistance in Escherichia coli K-12 //J.Baoteriol.-1980.-V.143.-N.3.-p.1466-1470.

38. Bramucci M.G., Holmes R.K. Radial passive immunohemolisis assay for detection of heat-labile enterotoxin produced by individual colonies of Escherichia coli and Vibrio choleras. //J.CIin.Microbiol.-1978.-V.2.-N.2.-p.252-255.

39. Buttenschon P.A. A fprovning pa besatningsplan af en Escherichia coli piIivaccine //Dansk.Veterinartidsskrift.-1986.- 112 1. V.69.-N.23.-p.1216-1221.

40. Caloca M.J., Soler J., Suarez S. Adhesion of KSSab to guinea pig erythrocytes: effect on membrane ensyme activities //Infect.Immun.-1996.-V.64.-N.8.-p.3416-3418.

41. Caloca M. J., Suarez S., Soler J. Metabolic changes in red ceils in response to adhesion of porcine K88 fimbriated Escherichia coli //Vet.Microbiol.-1997.-V.58.-N.1.-p.45-53.

42. Cassels F.J., Wolf M.K. Colonization factors of diarr-heagenic Escherichia coli and their intestinal receptors //J.Ind.Microbiol.-1995.-V.15.-N.3.-p.214-226.

43. Cass 1 er R.W. Sow and gilt bacterins /'/'Ag-ri-practice.-1986.-V. 7.-H. 3-4.-p. 66-69.

44. Cieplak W., Messer R.J., Konkel M.E. et al. Role a potential endoplasmis reticulum retention sequence (RDEL) and the Golgl complex in the cytotonic activity of Escherichia coli heat-labile enterotoxin //Mol.Microbiol.-1995.-V.16.-N.4.-p.789 -800.

45. Clements J.D. Construction of a nontoxic fision peptide for immunization against Escherichia coli strains that produce heat-labile and heat-stable enteretoxins //Infect.Immun.-1990. -V.58-N.5.-p.1159-1166.

46. Clements J.D., El-Morshidy S. Construction of a potential live oral bivalent vaccine for tiphoyd fever and cholera-Escherichia coli related diarrheas //Infect.Immun.-1984.-N.2. -p. 584-569.

47. Clements J.D., Lowe K.L., Bonhan L. Notes. Intracellular distribution of heat-labile enterotoxin in a clinical isolate of Escherichia coli //Infect.Immun.-1985.-N.l.-p.317-319.

48. Conway P.L., Weiin A., Cohen P.S. Presence of K88-specific receptors in porcine ileal mucus is age dependent //Infect. Immun.-1990.-V.58.-p.3178-3182.

49. Cray W.C., Tokunaga E., Pierce N.F. Successful colonization and immunization of adult rabbits by oral inoculation with Vibrio cholerae 01 //Infect.Immun.-1983.-V.41.-N.2.-p.735-741.

50. Dean E.A ., Isaacson R.E. Location and distribution of a receptor for the 987P pilus of Escherichia coli in small intestines //Infect.Immun.-1985.-V.47.-M.1.-p.145-148.

51. Dean E.A., Isaacson R.E. Purification an^, characterization of a receptor for the 987P pilus of Escherichia coli in small intestines //'Infect. Immun.-1985.-V.47.-N.l.-p.98-105.

52. Deneke C.F., McGowan K., Larson A.D. et al. Attachment of human and pig (KS8) enterotoxigenic Escherichia coli strains to ether human or porcine small intestinal cells //Infect.Immun. -1984.-V.45.-N.2.-p.522-524.

53. Deneke C.F., McGowan K., Thome G.M. et al. Attachmentof enterotoxigenic Escherichia coli to human intestinal cells /7 Infect.Immun.-1983.-V.39.-N.3.-p.1102-1106.

54. Donnenberg M.S., Kaper J.B. Entherapathog-enic Escherichia coli //Infect,Immun.-1992.-V.80.-p.3953-3961.

55. Dougan G. Molecular characterization of bacterial virulence factors .and the consequences for vaccine design //J.Gen. Microbiol.-1989.-V.135.-N.6.-p.1397-1406.

56. Dutta N. K., Habbu M.K. Experimental cholera in infant rabbitsi a method for chemotherapeutic investigation //Brit.J. Pharmacol.-V.256.-N.23.-p.12252-12256.

57. Ebel F., Deibel C., Kresse A.U. Temperature arid medium-dependent secretion of proteins by Shiga toxin-producing Escherichia coli //Infect.Immun.-1996.-V.64.-N.il.-P.4472-4479.

58. Edwards R. A., Schifferli D.M. Differential regulation of fasA and fasH expression of Escherichia coli 987P fimbriae by environmental ceils //Mol.Microbiol.-1997.-V.25.-N.4.-p.797-809.

59. Elwell L.P., Shipley P.L. Plasmid mediated factors associated with virulence of bacteria to animals //Ann.Rev.Microbiol . 1 980 . - V . 34 . - p . 465- 496.

60. Evans D.G., Evans D.J., TJoa W.S. et äl. Detection and char act er i zat. i on of colonization factor on enterotoxigenic Escherichia coli isolated from adults with diarrhea //Infect.Immun. -1978.-V.19.-p.727-736.

61. Evans D.G., Evans D.J., . Olegg S. et al. Purification and characterization of the CFAI antigen of enterotoxigenic Escherichia coli //Infect.Immun.-1979.-V.25.-p.738-748.

62. Fasano A., Kay B.A., Rüssel R.G. et al. Enterotoxin and cytotoxon production by enteroinvasive Escherichia coli //Infect .Immun.-1990.-V.58.-N.11.-p.3717-3723.

63. Fiederling F., Boury M., Petit C. et al. Adhesive factor/rabbi t2, a new fimbrial adhesin and a virulence factor from Escherichia coli 0103, a serogroup entheropathGgen ic for rabbits //Infect. Immun.-1997.-V.65.-N.2.-p.847-851.

64. Finlay B.B, Rosenshine I., Donnenberg M.S. et al. Cy-toskeletal composition of attaching: and effacing- lesions associated with en t er opat hogen i c Escherichia coli adherence to HeLa cells //Infect.Immun.-1992.-V.60.-p.2541-2543.

65. Francis D.H., Willgohs J. Evaluation of a live avirulent Escherichia coli vaccine for K88+LT+ enterotoxigenic coli-baoillosis in weaned pigs //Am.J.Vet.Res.-1991. -V.52.- N.7. -p.1051-1055.

66. Fukuta S., Twiddy E.M., Magnani J.L. Comparison of the carbohydrate binding specifities of cholera toxin and Escherichia coli heat-labile enterotoxins LTH-1, LT-la and LT-lb //Infect. Immun.-1988.-V.46.-p.1748-1753.

67. Gaastra W., Braaf F.K. Host-specific fimbrial adhesins //Microbial.Rev.-1982.-V.46.-p.129-161.

68. Gabor F., Bernkop-Schnurch A., Hamilton G. Bioadhesion intestine by means of Escherichia coli K99-fimbriae: gastrointestinal stability and specifity of adherence //Eur.J.Pharm.Sei. 1997.-V.5.-N.4.-p.233-239.

69. Garabal J. I., Vasques F., Blanco J.et al. Colonisation antigens of enterotoxigenic Escherichia coli strains isolated from piglets in Spain //Vet.Microbiol.-1997.-V.54.-N.3.-p.3211. DOQ1. JiwU *

70. Geary S. J., Marchlewich B.A., Finkelstein R.A. Comparison of heat-labile enterotoxins from porcine and human strains 3f Escherichia coli //Infect.Immun.-1982.-V.36.-N.1.-p.215-220.

71. Gennaro M.L., Greenway F.J., Broadhent D.A. The expression of biologically active cholera toxin in Escherichia coli // tfucl.Acid.Res.-1982.-V.10.-N.16.-p.4883-4890.

72. Gianelli V., Fontana M.R., Guigliani M.M. et al. Protease susceptibility and toxicity of heat-labile enterotoxins with a mutation in the active site or in the protease-sensitive loop //Infect.Immun.-1997.-V.65.-N.1.-p.331-334.

73. Gomes-Duarte O.G., Kaper J.B. A plasmid-encoded regulatory region activates chromosomal eaeA expression in enteropat-hogenic Escherichia coli //Infect.Immun.-1995.-V.63.-p.1757-1776.

74. Grance P.A., Mourioout M.A. Transferrin associated with the porcine intestinal mucosa is a receptor specific for K88ab fimbriae of Escherichia coli //Infect.Immun.-1996.-V.64.- N.2. -p.606- 610.

75. Green B.A., Weill R.J., Ruoechan W.T. et al. Evidence that a new enterotoxin of Escherichia coli which activates ade-nilate cyclase in eucaryotic target cells is not plasmid mediated //Infect.Immun.-1983.-V.41.-N.l.-p.383-390.

76. Grewal H.M.S., Volvatine H., Bhan M.K. et al. A new putative fimbrial colonization factor, CS19, of human enterotoxigenic Escherichia coli //Infect.Immun.-1997.-V.65.-N.2.-p.507 -151 c^»

77. Guidry J.J., Cardenas L., Cheng E. et al. Role of receptor binding in toxicity, immunogenicity and adyuvanticity of Escherichia coli heat-labile enterotoxin //Infect.Immun.-1997. -V.65.-N.12.-p.4943-4950.

78. Guigliano L.G., Ribeiro 3.T.G., Vainstein M.H. Free Secretory component and 1actoferrin of human milk inhibit the adhesion of enterotoxigenic Escherichia coli //J.Med.Microbiol.-1995.-V.42.-N.1.-p.3-9.

79. Hawkes R., Niday E., Gordon J. A dot immunobinding assay for monoclonal and other antibodies //Analit.Biochem.-1982.-V.119.-p.142-147.

80. Hicks S., Candy D.C.A., Phillips A.D. Adhesion of ente- 118 roaggregative Escherichia coli to pediatric intestinal mucosa in vitro //Infect.Immun.-1996.-V.64.-N.11.-p.4751-4780.

81. Hirst T.R., Nashar T.O., Eaglestone S.et al. Escherichia coli. Bacterial and host, interactions during the biogenesis, toxicity and immunogenecity of Escherichia coli heat-labile en

82. Honda T., Arista M., Miwatani T. Characterization of new hydrophobic pili of human enterotoxigenic Escherichia coli: a possible new colonization factor //Infect.Immun.-1984.-V.43.-p.959-965.

83. Honda T., Takeda Y., Miwatani T. Isolation of special antibodies which react only with homologous enterotoxins from Vibrio choleras and enterotoxigenic Escherichia coli /7Infect. Immun.-1981.-V. 34.-N. 2.-p. 333-336.

84. Honda T., Tsu,ii T., Takeda Y. Immunological nonidetity of heat-labile enterotoxins from human and porcine enterotoxigenic Escherichia coli //Infect.Immun.-1981.-V.34.-N.1.-p.337-340.

85. Huisman T.T. Regulation of expression of the K88 and K99 fimbrial operons in Escherichia coli //Drukkerij Elinkwijk BY.-Utrecht.-1995.

86. Huisman T.T., Bakker D., Klaasen P.et al. Leucine-responsive regulatory protein ISI insertions and the negative regulator FaeA control the expression fae (K88) operon in Escherichia coli //'Mol.Microbiol.-1994.-V. 11.-N.3.- p.525-536.

87. Huisman T.T., de Graaf F.K. Negative control of fae (K88) expression by the global regulator Lrp is modulated by the "local" regulator FaeA and affected by DNA methylation // Mol.MIcrobiol .-1995.-V.16.-N.5.-p.943-953.

88. Hunt P.D., Nardy S.J.S. Heat-labile enterotoxin can beealised from Escherichia coli cells by host intestinal factors /Infect.Immun.-1991.-¥.59.-N.1.-p.158-171.

89. Huott P.A., Liu W., McRoberts J.A. et al. Mechanism of .ction of Escherichia coli heat-stable enterotoxin in a human clonic cell line //J.Clin.Invest.-1988.-V.82.-p.514-523.

90. Ike K., Nakazawa M., Tsuchimolo M. Hemagglutination of ilus antigen 987P of enterotoxigenic Escherichia coli //Micro-'iol. Immunol. -1987. -V. 31. -p. 1255-1259.

91. Isaacson R.E. Regulation of expression of Escherichia oli pilus K99 //Infect.Immun.-1983.-V.40.-N.2.-p.633-639.

92. Isaacson R.E., Richter P. Escherichia coli 987P pilis: purification and partial characterization //J.Bacterid. -981.-V.146.-p.784-789.

93. Jacob C.H., Arnon R., Finkelstein R.A. Immunity to hell- labile enterotoxins of porcine and human Escherichia coli trains achieved with synthetic cholera toxin peptides //In--ect.Immun.-1986.-V.52.-N.2.-p 562.-567.

94. Jacobs A.A.O., Roosendaal B., Van Breemen J.F.L.et al. öle of phenylalanine-150 in the receptor binding domain of the 88 fibrillar subunit //J.Bacteriol.-1987.-V.169.-p.4907-4911.

95. Jacobs A.A.O., Simons L.H., de Graaf F.K. The role of ysine-132 and arginine-136 in the receptor-binding domain of he K99 fibrillar subunit //EMB0 J.-1987.-V.6.-p.1805-1808.

96. Jerse A.E., Gicquelais K.G., Kaper J.B. Plasmid and hromosomal elements involved in the patogenesis of attaching nd effacing Escherichia coli //Infect.Immun.-1991.-V.59.-p.3869 3875.

97. J et born M., Ähren C., Holmgren J. et al. Safety andirnmunogeneoity of an oral inactivated enterotoxigenic Escherichia coli vaccine //Vaccine.-1998.-V.18.-N.2-3.-p.255-261.

98. Jones S.W., Abrams G.D., Freter R. Adhesive properties □f Vibrio cholerae: adhesion to isolated rabbit brushborder membranes and hemagglutinating activity //Infect.Immun.- 1976.-V.14.-N.l.-p.232-239.

99. Jones S.W., Rutter J.M. Role of the K88 antigen in the pathogenesis of neonatal diarrhea caused by Escherichia coli in piglets //Infect.Immun.-1972.-V.6.-N.2.-p.918-927.

100. Josephsen J.» Hansen F., de Graaf F.K. The nucleotide sequence of the protein subunit of the K88ac fimbriae of porcine enterotoxigenic Escherichia coli //FEMS Microbiol.Lett.-1984. -V.37.-p.891-894.

101. Kado C. I., Liu 5.T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmid //J.Bacteriol.-1981.-V.145. -N.3.-p.1365-1373.

102. Kearns M.J., Gibbons R.A. The possible nature of the pig intestinal receptor for the K88 antigen to Escherichia coli //FEMS Microbiol.Lett.-1979.-V.6.-p.165-168.

103. Kehoe M., Winther M., Dougan G. Expression of a cloned KS8ac adhesion antigen determinant: identification of a new adhesion cistron and role of a vector encoded promoter //J.Bacterid .-1983.-V.155.-N.3.-p.1071-1077.

104. Klipstein F., Engert R.F., Clements J.D. Development of a vaccine of cross-linked heat-stable and heat-labile entero-toxins that protects against Escherichia coli producing either enterotoxin //Infect.Immun.-1982.-V.37.-p.550-557.

105. Klipstein F.A., Engert R.F., Clements J.D. et al. Vac- 121 cine for enterotoxigenic Escherichia coli based on synthetic heat-stable toxin cross-linked to the B-subunit of heat-labile toxin //J.Infect.Dis.-1982.-V.147.-p.318-328.

106. Klipstein F., Engert R.F., Hougten R.A. Properties of syntetically produced Escherichia coli heat-stable enterotoxin //Infect.Immun.-1983.-V.39.-N.1.-p.117-121.

107. Knutton S., Baldwin T., Haigh R.D. et al. Actin accumulation at sites of bacterial adhesion to tissue culture cells: basis of a new diagnostic test for enteropathogenic and entero-hemorragic Escherichia coli /7Infect.Immun.-1989.-V.44.- p.406-408.

108. Krause W.J. Distribution of heat-stable enteroto-xin/guanylin receptors in the intestinal tract of man and other mammals //J.Anat.-1994.-V.184.-p.407-417.

109. Lanne B., Uggla L., Stenhagen G. et al. Enhanced binding of enterotoxigenic Escherichia coli K99 to amide derivatives of the receptor ganglioside NeuGc-GM3 //Biochem.-1995.-V.34. -N.6.-p.1845-1850.

110. Laux D.C., McSweegan E.F., Williams T.J. et al. Identification and characterization of mouse intestine mucosal receptors for Escherichia coli K-12 (KS8ab) //Infect.Immun.-1986. -V.28.-N.1.—p.18—25.

111. Lebens M., Shahabi V., Backstrom M. et al. Synthesis of hybrid molecules between heat-labile enterotoxin and cholera toxin B-subunits: potential for use in a broad-spectrum vaccine //Infect.Immun.-1996.-V.64.-N.6.-p.2144-2150.

112. Lee J.H., Isaacson R.E. Expression of the gene cluster associated with the Escherichia coli pilus adhesin K99 //Infeet.Immun.-1995.-У.63.-N.10.-p.4143-4149.

113. Leite D.S., Yano T., Pestana de Gastro A.F. Production, purification and partial characterization of a new adhesive factor (F42) in enterotoxigenic Escherichia coli //Brasil.J.Genetics. -1987. -V. 4. -p. 635-646.

114. Levine M.M., Ristaino P., Sack R. et al. Colonization factor antigen I and II and type 1 somatic pili in enterotoxigenic Escherichia coli relation to enterotoxin type //Infect.Immun. -1983.-V.39.-N.2.-p.839-897.

115. Marphy G.L., Dallas W.S. Analisys of two genes encoding heat-labile toxins and located on a single Ent plasmid from Escherichia coli //Gene.-199x -V.103.-p.37-43.

116. Mekalanos J.J. Duplications and amplification of toxin renes in Vibrio choleras //Cell.-1983.-V.35.-N.1.-p.253-263.

117. Metcalfe J.W., Krogfelt K.A., Krivan H.C. et al. Cha--acterization and identification of a porcine small intestine iucus receptor for the KS8ab fimbrial adhesin //Infect.Immun. -.991.-V.59.-N.l.-p.91-96.

118. MiIon A. Mecanismes moleculaires de pathogenicite des Escherichia coli in ducteurs de diarrhees chez 1' homme et 1' ani-lal //Rev.Med.Vet.-1993.-V.144.-N.11.-p.857-878.

119. Middeldorp J.W., Witholt B. K88-mediated binding of Escherichia coli outher membrane fragments to porcine intestinal epithelial cell brush borders //Infect.Immun.-1981.-V.31.-N.l.-). 42-51.

120. Mol 0. Biosynthesis of K88 fimbriae of Escherichia coli: interaction of periplasmic chaperone FaeD with various K88 subunits //Drukkeriy Elinkwijk BV.-Utrecht.-1996.

121. Mol 0., Oud P.P.C., de Graaf F.K.et al. The Escherichia coll K88 periplasmis chaperone forms a heterodimeric complex rith the minor fimbrial component FaeH and with the minor fimb-•ial component Fael //Microbial.Path.-1995.-V.18.-p.115-128.- 124

122. Mol 0., Visschers R.W., de Graaf F.K. et al. Escherichia coli periplastic chaperone FaeE is a homodimer and the cha-perone K88 subunit complex is a heterotrimer /'/Mol.Microbiol.-1994.-V.U.-N. 2.-p. 391-402.

123. Mooi F.R., Harms N., Bakker D. Organization and expression of genes involved in the production of the K88ab antigen //Infect.Immun.-1981-V.32.-N.3.-p.1155-1163.

124. Mooi F.R., Van Buumen M., Koopman G. et al. K88ab gene of Escherichia coli encodes a fimbrial-like protein distipct from the K88ab fimbrial adhesin //J. Bacterid. -1984. -V.159.-p.482-488.

125. Moon H.W., Whipp S.O., Argenzio R.A. et al. Attaching and effacing activities of rabbit and human enteropathogenic Escherichia coli in pig and rabbit intestines //Infect.Immun .-1983.-V.41.-p.1340.-1351.

126. Morris J.A., Thorns C., Scott A.C. et al. Adhesion in vitro and in vivo associates with an adhesive antigen (F41) produced by a K99-mutant of the reference strain Escherichia coli B41 //Infect.Immun.-1982.-V.36.-p.1146.-1153.

127. Mouricout M., Julien R. Pilus mediated binding of bovine enterotoxigenic Escherichia coli to calf small intestinal mucins //Infect.Immun.-1987.-V.55.-N.3.-p.1216-1223.

128. Nashar T.O., Hirst T.R., Williams N. A. Modulation of- 125 -cell activation by the B-subunit of Escherichia coli enteroto-in: receptor interaction up-regulates MHO class II, B7, 0D40, D 25 and ICAM-1 //Immunol.-1997.-V.91.-N.4.-p.572-579.

129. Nataro J.P., Seriwatana J., Fasano A. et al. Identifiât ion and cloning of a novel piasmid-encoded enterotoxin of en-eroinvasive E.coli and Shigella strains //Infect.Immun.-1995. -.63.-p.4721-4728.

130. Norio A., Kohji M., Masayuki S. et al. Confirmed nuc-eotide sequence of FanF of Escherichia coli K99 fimbriae //Jap«. .Vet.Res.-1993.-V.41.-N.2.-p.97-99.

131. O'Brien A.D., LaVeck G.D. Purification and characteri-:ation of a Shigella dysenteriae 1-1ike toxin produced by Esche-ichia coli //Infect.Immun.-1983.-V.40.-N.2.-p.675-683.

132. Okamoto K., Fujii Y., Akashi N. et al. Identification tnd characterization of heat-stable enterotoxin 11 producing Escherichia coli from pacients with diarrhea /'/Microbiol. Immunol 1993.-V.37.-p.411-414.

133. Ono E., Abe E., Nakazawa M. Ganglioside epitope recog-lized by K99 fimbriae from enterotoxigenic Escherichia coli // infect.Immun.-1989.-V.57.-p.907-911.

134. Oudega B., de Graaf F.K., de Boer L. et al. Detection and identification of FaeG as a minor component of K88 fibrillae >f Escherichia coli //Mol.Microbiol.-1989.-N.3.-p.845-652.- 128

135. Parry S.H., Porter P. Immunological aspects of cell membrane adhesion demonstrated by porcine entheropathogenic Escherichia coli //Immunol.-1978.-V.34.-p.41-49.

136. Pearson D.N., Mekalanos J.J. Molecular cloning of Vibrio cholerae enterotoxin genes in Escherichia coli K-12 //Proc. Natl.Acad.Sei.USA.-1982.-V.79.-N.9-p.2978-2980.

137. Peterson J.W., Whipp S.O. Comparison of the mechanisms of action cholera toxin and the heat-stable enterotoxins of Escherichia coli //Infect.Immun.-1995.-V.63.-N.3.-p.1452-1461.

138. Picken R.N., Mazaitis A.J., Maas W.K. et al. Nucleotide sequence of the gene for heat-stable enterotoxin 11 of Escherichia coli //Infect.Immun.-1983.-V.42.-N.l.-p.269-275.

139. Pickett C.L.Twiddy E.M., Coker C. et al. Cloning nucleotide sequence and hybridization studies of the type lib heat-labile enterotoxin gen of Escherichia coli //J.Bacteri-Cl.-1989.-V.171.-p.4945-4952. )

140. Pierce N.F., Cray W.C., Kaper J.B. Determinants of im-munogenecity and mechanisms of protection by virulent and mutant Vibrio cholerae 01 in rabbits //Infect.Immun.-1988.-V.56.-N. 1.-p.142-148.

141. Qu Z.H., Boesman-Finkelstein M., Karemi M. Heterogeneity of immune-types of heat-labile enterotoxins of enterotoxigenic Escherichia coli of human origin //J. Inf.Dis.-1991.-V.164.-p.796 -799.

142. Rappaport R.S., Bonde G. Development of a vaccine against experimental cholera and Escherichia coli diarrheal disease //Infect.Immun.-1981.-V.32.-N.2.-p.534-541.

143. Roosendaal B., Van Bergen en Henengouwen P.M.P., de- 127 raaf F.K. Subcellular localization of K99 fimbria! subunits and ffect of temperature on subunit synthesis and assembly //J.Bac-eriol.-1986.-V.165.-p.1029-1032.

144. Sandkvist M., Hirst T.R., Bagdasarian M. Alterations t the carboxyl terminus change assembly and secretion properties of the B-subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin /'J. Bacterial. -1987. -V. 169.-N. 10. -p. 4570-4576.

145. Sansonetti P.J. Vaccination countre les enterobacteri->s responsables d' infections enteriques //Ann.Gastroenterol.Heat ol.-1994.-V.30.-p.60-63.

146. Schodel F., Will H., Johansson S. et al. Synthesis in 'ibrio choleras and secretion of hepatitis B virus antigens fused to Escherichia coli heat-labile enterotoxin subunit B //Gene •1991.-V.99.-p.255-259.

147. Schlager I.A., Wanke C.A., Guerrant R.L. Met fluid secretion and impaired villous function induced by colonization >f the small intestine by nontoxigenic colonizing Escherichia loli //Infect.Immun.-1990.-V.58.-N.4.-p.1337-1343.- 128

148. Sears C.L., Kaper J.B. Enteric bacterial toxins: mechanism of action and linkage to intestinal secretion //Microbial Rew.-1996.-V.80.-N.1.-p.167-215.

149. Seriwatana J., Echeverria P., Taylor D.N. et al. Type II heat-labile ent erotox in-producing Escherichia coli isolated from animals and humans //Infect.Immun.-1988.-V.56.-p.1158-1151.

150. Siitonen A. What makes Escherichia.coli pathogenic? // Ann.Med.-1994.-V.26.-N.4.-p.229-231.

151. Simons B.L., Wi Hemsen P.T.J., Bakker D. et al. Localisation and function of FanH and FanG, minor components of K99 fimbriae of enterotoxigenic Escherichia coli //Microb.Path.-1991 -V.11.-p.325-336.

152. Shroff K.E., Meslin K., Cebra J.J. Commensal enteric bacteria engender a self limiting humoral mucosal immune response while permanently colonizing the gut //Infect.Immun.-1995. -V.63.-N.10.-p.3904-3913.

153. Smith H.R., Geraldyne A., Willshaw G.A. et al. Mapping of a plasmid coding for colonization factor antigen I and heat-stable enterotoxin production, isolated from enterotoxigenic strain of Escherichia coli //J.Bacteriol. -1982.-V.149.-N.l. -p.264-275.

154. Smith H.W., Linggood M.A. Observations of the pathogelie properties of KB8, Hly and Ent Plasmids of Escherichia coli 1th special reference to porcine diarrhea //J.Med.Microbiol. -971.-V.4.-p.487-485.

155. So M., Crandall J.F.» Crosa J.H. et al. Extrachromoso-lal determinants which contribute to bacterial pathogenecity // Washington.-Microbiology.-1974.-p.16-28.

156. So M., McCarthy B.J. Nucleotide sequence of the bacte-•ial transposon Tnl681 encoding a heat-stable (ST) toxin and its dentification in enterotoxigenic Escherichia coli //Proc.Nat. iCad. Sei .USA.-1980.-V. 77.-p. 4011-4015.

157. Spangler B.D. Structure and function of cholera toxin rnd the related Escherichia coli heat-labile enterotoxin //Mic-•obial.Rew.-1992.-V.56.-p.622-647.

158. Staley T.E., Wilson I.B. Soluble pig intestinal cell lembrane components with affinities for Escherichia coli K88 an-,igen //Mol.Cell.Biochem.-1983.-V.52.-p.177-189.

159. Strockbine N. A., Marques L.R., Newland J.W. et al. Two ,oxin-converting phages from Escherichia coli 0157.-H7 strain 933 fiioode antigenically distinct toxins with similar biological activities //Infect.Immun.-1986.-V.53.-N.1.-p.135-140.

160. Stein M.Ä., Mathers D.A., Yan H. Ent eropathogen i c Escherichia coli markedly decreases the resting membrane potential )f 0aco-2 and HeLa human epethelial cells //Infect.Immun.-1996. •V.64.-N.ll.-p.4820-4825.

161. Svennerholm A.M., Holmgren J. Synergistic protective effect in rabbits of immunisation with Vibrio cholerae lipopoly-saccharide and toxin/toxoid //Infect.Immun.-1976.-V.13.-p.735-f40.

162. Takachashi I.f Riyono N., Jackson R.J., Fujihaohi K. ;t. al. Epitope maps of the Escherichia coli heat-labile toxin 3 subunit for development of a synthetic oral vaccine //Infect. Immun.-1996.-¥.64.-N.4.-p.1290-1298.

163. Takeda Y., Honda T., Sima H. et al. Analysis of antigenic determinants in cholera enterotoxin and heat-labile ente-rotoxins from human and porcine enterotoxigenic Escherichia coli V Infect.Immun.-1983.-V,41.-N.1.-p.50-53.

164. Thomas L.V., Graviota A., Scotland S.M. et al. Mew fimbrial antigenic type (E8775) that may represent a oolonizatifactor in enterotoxigenic Escherichia coli in humans //Infect. Immun.-1982.-V.35.-p.1119-1124.

165. Valent Q.A., Zaal J., de Graaf F.K. et al. Subcellular localization and topology of the K88 usher FaeD in Escherichia coli //Mol.Microbiol.-1995.-V.16.-N.6.-p.1243-1258.

166. Van der Woude M.W., Braster M. f Van Verseveld H.W.et al. Control and temperature dependent, synthesis of K99 fimbriae //FEMS. Microbiol.Lett.-1990.-V.68.-p.183-188.

167. Van Embden J.P.A. de Graaf F.K. Shouls L.M. Cloning and expression of a deoxyribonucleic acid fragment thatencodes for the adhesive antigen K99 //Infect.Immun.-1980.-V.29.-N¿3.-p.1125-1153.

168. Van Verseveld H.W., Bakker P., Van der Woude T. et al. Production of fimbria! adhesins K99 and F41 by enterotoxigenic Escherichia coli as a function of growth-rate domain //ln~ fect.Immun.-1985.-V.49.-N.1.-p.159-183.

169. Van Zij'derveld F.G., Anakotta J., Brouwers R.A.M. et al. Epitope analysis of the F4 (K88) fimbrial antigen complex ofenterotoxigenic Escherichia coli by using monoclonal antibodies //Infect.Immun.-1990.- V.58.-N.6.-p.1870-1878.

170. Vogeli P.B., Kuhn B., Kühne R. et al. Evidence for linkage between the swine L-blood group and the loci specifying the receptors mediating adhesion of K88 Escherichia coli pilus antigen //Animal Genet.-1992.-V.23.-p.19-29.

171. Waterman S., Small P.L.C. Characterization of the acid resistance phenotype and rpoS alleles of shiga-like toxin-producing Escherichia coli //Infect.Immun.-1996.-V.84.-M.7,-p.2808-2811.

172. Willemsen P.T.J. In search of receptors of enterotoxigenic Escherichia coli //Drukkeriy FEBO., Enschede.-1993.

173. Wilson M.R., Hoffmann A.W. Immunity to Escherichia coli in pigs: adhesion of enteropathogenic Escherichia coli to isolated intestinal epithelial cells //Infect.Immun.-1986.-V.10. -N,2.-p.776-782.

174. Wittig W., Klie H., Gallien P. et al. Prevalence of the fimbrial antigens F18 and K88 and of enterotoxins and vero-toxins among Escherichia coli isolated from weaned pigs //Zentralblatt . Bakteriol .-1995.-V.283.-N.1.-p.95-104.

175. Whipp S., Moon H.W., Argensio R.A. Comparison of enterotoxigenic activity of heat-stable enterotoxin from class 1 and class 2 Escherichia coli of swine origin //Infect.Immun.-V.31. -N.l.-p.245-251.

176. Wolf M.K. Occurence, distribution and associates of 0 and H serogroups, colonization factor antigens and toxins of enterotoxigenic Escherichia coli //Clin.Microbiol.Rev.- 1997. -V.10.-N.4.-p.569-584.- 132

177. Yamarnoto T., Goyobory I., Yokota T. Evolutoonary origin of pathogenic determinants in enterotoxigenic Escherichia coli arid Vibrio cholerae 01 //J.Bacterid,-"1387,-¥/189.-M.S.iOÜiv J.UÜI .

178. Yano T., Garsia M., Leite D.S. et al. Determination of the efficiency of K99-F41 fimbrial antigen vaccine in newborn calves //Brasil.J.Med.Vet.Biol.Res. -1995.-V.2S.-N.8.-p.851-654.