Комплексная нитроксидергическая реакция организма на соединения бензофуроксанового ряда

Каримова, Руфия Габдельхаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Комплексная нитроксидергическая реакция организма на соединения бензофуроксанового ряда
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Комплексная нитроксидергическая реакция организма на соединения бензофуроксанового ряда"

На правах рукописи

Каримова Руфия Габдельхаевна

КОМПЛЕКСНАЯ НИТРОКСИДЕРГИЧЕСКАЯ РЕАКЦИЯ ОРГАНИЗМА НА СОЕДИНЕНИЯ БЕНЗОФУРОКСАНОВОГО РЯДА

03.03.01 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

2 3 ИЮН 2011

Казань - 2011

4850974

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Гарипов Талгат Валирахманович

Официальные оппоненты: доктор биологических.наук, профессор

Логинов Георгий Павлович

доктор биологических наук, профессор Ефремов Георгий Георгиевич

доктор биологических наук, профессор Нигматуллина Разина Рамазановна

Ведущая организация: Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» (ФГОУ ВПО «УГСХА»)

Защита состоится 1 июля 2011 года в « 13 » часов на заседании диссертационного совета Д 220.034.02 при ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» по адресу: 420029, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Автореферат разослан <л2?г> мая 2011 года.

Ученый секретарь диссертационно совета, профессор

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

D. Jothianandan, 1991). Выяснилось, что этот газ, молекула которого является короткоживущим и легко подвергающимся химическим трансформациям свободным радикалом, непрерывно ферментативно продуцируется в организме млекопитающих, оказывая воздействие на различные физиологические и патофизиологические процессы. Изучение роли N0 позволило установить, что оксид азота - газообразный мессенджер, выступающий в роли универсального модулятора разнообразных функций организма, включая регуляцию дыхания, поддержания сердечно-сосудистого гомеостаза, иммунного статуса организма, активности макрофагов, экспрессии генов, пластичности нервной ткани, памяти, высвобождения нейротрансмиттеров (S. Moneada, R.M.G. Palmer,

E.А. Higgs, 1991; Т.М. Dawson, S.H.. Snyder, 1994; Х.М. Марков, 1996). Оксид азота выполняет, роль нейромодулятора в центральной нервной системе и в нервно-мышечных синапсах (A.B. Турин, 1997; А.Х. Уразаев, А.Л. Зефиров, 1999; Г.Ф. Ситдикова, A.JI. Зефиров, 2006).

. . Открытие разнообразных физиологических ролей оксида азота в организме привело к широкому изучению и применению химических соединений, являющихся донорами или ингибиторами оксида азота (В.Г. Граник, Н.Б. Григорьев, 2002; Колосов Ю.А., Муляр А.Г., Гасанов М.Т. и др., 2006). ,,,..,

Экзогенные доноры оксида азота используются и для создания модельных систем, на которых изучаются эффекты влияния NO (Л.Л. Гудков, К.Б. Шумаев, Е.И. Каленикова и др., 2007). Такие модели упрощают имеющуюся в организме систему взаимодействия оксида азота с клетками, так как при использовании экзогенных доноров NO система оказывается независимой от NO-синтаз и их регуляции, и в этом случае отсекаются эффекты других сигнальных веществ.

Одним из классов гетероциклических соединений, производные которого проявляют NO-донорские свойства, являются фуроксаны (В.Г. Граник, 2003). Эти соединения представляют большую ценность тем, что в организме происходит их медленная трансформация, что позволяет избежать развития нитратной толерантности (A..Sankaranarayanan, 2003).

При этом остается актуальным изучение приспособительных нитроксидергических реакций целостного организма на поступление экзогенных доноров оксида азота. Выявление физиологических эффектов соединений фуроксанового ряда на различные системы организма позволит дать комплексное представление о роли оксида азота без учета влияния активности ферментов (NO-синтаз), а также раскроет пути дальнейшего исследования их в роли корректоров состояния нитроксидергической системы, послужит основой для создания новых биологически активных средств.

; ' Цель и задачи исследований. Целью исследования явилось изучение комплексной нитроксидергической; реакции организма' на внутрижелудочное введение соединений бензофуроксанового ряда.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Определить дйнамику изменения количества1 оксида азота в крови белых крыс при нагрузке бензофуроксанами в зависимости от пола и возраста.

2. Изучить физиологические эффекты бензофуроксанов на систему неспецифической резистентности организма. ]" ■ \'

3. Определить динамику изменения количества эритроцитов " и гемоглобина крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм белых крыс.

4. Изучить физиологические эффекты бензофуроксанов на деятельность сердца и функциональное состояние кровеносных сосудов.

5. Определить динамику изменения ферментов сыворотки крови, а также некоторых конечных и промежуточных продуктов обмена веществ: белкового -общего белка, белковых фракций, мочевины, мочевой кислоты, креатинина, углеводного - глюкозы, липидного - триглицеридов и холестерина, минерального - кальция и фосфора при длительном поступлении бензофуроксанов в организм белых крыс.

7. Изучить болевую чувствительность белых крыс при нагрузке бензофуроксанами.

8. Изучить поведенческие и условнорефлекторные реакции белых крыс при нагрузке бензофуроксанами.

Научная новизна исследования. Впервые изучена комплексная физиологическая реакция организма на введение соединений бензофуроксанового ряда и установлено, что смесь 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксана, 5,7-дихлор-б-нитробензофуроксана и 5,7-дихлор-4-нитробензофуроксана (тримиксан); 4-хлор-6,7-фуроксанобензофуразан (хлофузан); 5,7-бис(4-гидроксифениламино)-4,б-динитробензофуроксан

(фениксан) оказывают выраженный эффект на нитроксидергическое состояние организма.

•Впервые раскрыта динамика изменения количества метаболитов оксида азота, эритроцитов и гемоглобина, ферментов, конечных и промежуточных продуктов обмена веществ (белкового, углеводного, липидного и минерального) в крови крыс при длительном поступлении бензофуроксанов в организм. Определена ответная реакция системы неспецифической резистентности на введение в организм бензофуроксанов в дозах понижающих или повышающих количество метаболитов оксида азота в плазме крови. Установлено, что тримиксан (10 мт/кг) в дозе, снижающей образование оксида азота в организме, способствует снижению активности системы неспецифической резистентности, а нагрузка бензофуроксанами в дозе 1 мг/кг

сопровождается повышением лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови.

Выявлены отрицательный хронотропный, инотропный эффекты изученных,, бензофуроксанов в виде 0,01% концентрации и положительный инотропный эффект 0,00001 % тримиксана, 0,001 % раствора фениксана на изолированном сердце лягушки. Установлен вазодилятаторный эффект изученных соединений.

Изучены поведенческие реакции белых крыс при поступленнии бензофуроксанов и выявлено повышение исследовательской активности в поведенческих моделях "открытое поле" и приподнятый крестообразный лабиринт.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Соединения фуроксанового ряда - тримиксан, хлофузан, фениксан оказывают выраженный эффект на функциональное состояние нитроксидергической системы организма, зависящий от дозы бензофуроксанов: в малых (1 мг/кг) - стимулирующий, а в больших (10 мг/кг) - угнетающий.

2. Однократная нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг), повышающими образование Б-нитрозотиолов в 2 и более раза (тримиксан и хлофузан), способствует повышению факторов гуморального иммунитета. На многократную нагрузку бензофуроксанами в дозе 5 мг/кг организм белых крыс отвечает преимущественно снижением факторов неспецифической резистентности, а в дозе 1 мг/кг - повышением лизоцимной активности сыворотки крови при неизменности остальных факторов.

3. Бензофуроксаны в высоких концентрациях оказывают отрицательный инотропный и хронотропный, в малых - положительный инотропный эффект на деятельность сердца и стойкий вазодилятаторный эффект периферических кровеносных сосудов.

4." Соединения бензофуроксанового ряда оказывают проноцицептивный эффект и способствуют повышению исследовательской активности белых крыс при внутрижелудочном введении в организм в дозе 1 мг/кг.

Теоретическая и практическая значимость.

Результаты исследований носят фундаментальный характер и содержат новые решения актуальной научной проблемы выяснения роли нитроксидергической системы в развитии приспособительных . реакций организма. Установленные факты о высокой лабильности нитроксидергической системы в зависимости от пола и возраста животных позволяют научно обоснованно организовывать эксперименты и создавать,оптимальные условия для грамотной интерпретации полученных результатов. Выявленные закономерности изменения нитроксидергического состояния в норме и под влиянием нагрузок, связанных с фиксацией, внутрижелудочным введением различных веществ, расширяют наши представления о : ряде положений возрастной физиологии животных, состоянии клеточного'и гуморального

иммунитета, сердечно-сосудистой деятельности и позволят разработать эффективные способы их коррекции.

Физиолого-биохимические и поведенческие изменения в организме крыс под влиянием бензофуроксанов служат основой для создания нового класса соединений, влияющих на нитроксидергическую систему и через нее на функциональные системы, обеспечивающие гомеостаз.

Результаты исследований внедрены в учебный процесс в ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», ФГ0У ВПО «Ульяновская сельскохозяйственная академия», ФГОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия».

Апробация результатов исследования.

Основные результаты диссертационной работы доложены на научно-производственной конференции, по актуальным проблемам агропромышленного комплекса (Казань, 2003, 2004, 2006); Всероссийской конференции физиологов, повященной 100-летаю доктора биологических наук, профессора E.H. Павловского (Казань, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, составом рациона, продуктивностью, экологией и этологией» (Казань, 2006); Г съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); конференции молодых ученых и специалистов КГАВМ (Казань, 2006); Всероссийской дистанционной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России» (пос. Персиановский, 2009); VII Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 160-летию со дня рождения И.П. Павлова «Механизмы функционирования висцеральных систем», (Санкт-Петербург, 2009); конференции, посвященной 90-летию Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Москва, 2009); IV Съезде физиологов Урала (Екатеринбург, 2009); Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию со дня основания кафедры физиологии животных ФГОУ ВПО «Московская ветеринарная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» и присвоению ей имени профессора Голикова Александра Николаевича (Москва 2010); XXI съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Калуга, 2010); расширенном заседании кафедры физиологии и фармакологии ФГОУ ВПО «КГАВМ имени Н.Э. Баумана».

Публикации результатов исследования.

По материалам диссертации опубликовано 25 работ (из них 15 в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ).

Структура и объем диссертации.

Диссертация объемом 262 страницы состоит из введения, обзора литературы, изложения объектов и методов исследования, результатов

исследования и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Список цитируемой литературы включает 346 названий, из них 107 отечественных и 239 иностранных авторов. Диссертация содержит 113 рисунков и 16 таблиц.

2. МАТЕРИАЛ Й МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведены в условиях лаборатории кафедры физиологии и фармакологии ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» в периоде 2003 по 2011 годы. Общая схема проведенных исследований приведена на рисунке 1.

Исследования проведены на 575 белых беспородных крысах обоего пола массой тела 180-220 г, изолированном сердце и изолированных лапках 160 озерных лягушек - Rana ridibunda. В результате решения задач, поставленных в рамках данной работы, исследовали 1580 проб крови. Кровь брали из хвостовой вены в строго определенное время - 8-9 часов дня. Содержание животных соответствовало правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев), утвержденным МЗ СССР 06.07.73. Кормили животных натуральными и брикетированными кормами в соответствии с нормами, утвержденными приказом МЗ СССР от 12.-8.77. Экспериментальные группы животных формировали методом случайной выборки с учетом массы тела в качестве определяющего показателя. При проведении экспериментов были использованы физиологические, биохимические, морфологические, иммунологические, кардиографические, этологические и другие методы исследования.

Комплексную. нитроксидёргиЧескую реакцию организма определяли по полезному приспособительному результату - концентрации оксида азота в плазме крови, а также по физиологическим эффектам, свидетельствующим об изменении, состояния нитроксидергической системы. Такими эффектами являются изменение неспецифической резистентности организма, изменение деятельности сердца и сосудов, состояния обмена веществ, поведенческих и условнорефлекторных реакций организма (рис. 1).

Из соединений бензофуроксанового ряда были выбраны смесь 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксана, 5,7-дихлор-6-нитробензофуроксана и 5,7-дихлор-4-нитробензофуроксана (тримиксан); 4-хлор-6,7-

фуроксанобензофуразан (хлофузан); 5,7-бис(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксан (фениксан), синтезированные на кафедре ХТОСА ГОУ ВПО «Казанский государственный технологический университет»*.

Суммарную концентрацию нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови определяли путем восстановления нитратов в нитриты цинковой пылью и последующим определением концентрации нитритов спектрофотометрическим

* Выражаю благодарность за представленные соединения проф. Фаляхову И.Н. и проф. Юсуповой Л.М.

методом с использованием реактива Грисса на "Анализаторе биохимическом фотометрическом кинетическом Би-Ан" (Россия) при длине волны 540 нм (И.С. Веремей, А.П. Солодков, 1999).

Концентрацию S-нитрозотиолов в сыворотке крови определяли методом, основанным на их реакции с хлоридом ртути (И), в ходе которой происходит образование нитрита, который определяли спектрофотометрическим методом с использованием реактива Грисса при длине волны 540 нм (Методические рекомендации по определеншо стабильных метаболитов оксида азота в плазме (сыворотке) крови / Рецкий М. И. [ и др.]. М. РАСХН, 2007. С. 119-123).

О состоянии неспецифической резистентности организма белых крыс мы судили по результатам определения следующих факторов гуморального иммунитета: бактерицидной активности сыворотки крови, лизоцимной активности сыворотки крови, а также показателям, отражающим состояние клеточного иммунитета — количеству лейкоцитов, лейкоцитарной формуле, фагоцитарной активности нейтрофилов, количеству Т- и В-лимфоцитов.

Бактерицидную активность сыворотки крови крыс определили в отношении St. aureus по методике (М.П. Потапнев, С.Е. Буглова, М.А. Черновецкий и др., 2001).

Лизоцимнуго активность сыворотки крови крыс определили в отношении Micrococcus lisodecticus фотоэлектроколориметрическим методом по Дорофейчуку В.Г. (В.Г. Дорофейчук, 1968).

Количество лейкоцитов и эритроцитов подсчитывали в счетной камере Горяева. Лейкоцитарную формулу выводили по результатам подсчета 200 клеток в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза.

Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли в отношении Е. coli по методике Кост С.А. и Стенко М.И. (1974). О фагоцитарной активности нейтрофилов судили по следующим показателям: фагоцитарный индекс 30 и 120 (ФИ 30, ФИ 120) - процент клеток, вступивших в фагоцитоз, от общего их числа после 30- и 120-минутной инкубации соответственно, фагоцитарное число 30 и 120 (ФЧ 30, ФЧ 120) - среднее число бактерий, находящихся внутриклеточно (частное от деления общего числа поглощенных бактерий на число клеток, вступивших в фагоцитоз) после 30- и 120-минутной инкубации соответственно, коэффициент фагоцитарного числа (КФЧ) - отношение ФЧ 30 к ФЧ 120.

Для определения функционального состояния субпопуляций лимфоцитов в качестве критерия использованы количественные содержания высокоавидных, среднеавидных, низкоавйдных лимфоцитов, теофиллинчувствительных и теофиллинустойчивых Т-лимфоцитов, аутологичных Т-лимфоцитов, тотального и общего количества Т-клеток, общего количества B-клеток и нулевых лимфоцитов.

Определение комплексной нитроксидергической реакции организма на внутрижелудочное введение соединений бензофуроксанового ряда

X. Определение динамики изменения количества оксида азота в крови белых крыс при нагрузке бензофуроксанам и

Определение метаболитов оксида азота (нитрат-, нитрит-анионов, Б-нитрозотиолов) в плазме крови

Интактных крыс: • самцов • самок • крыс в возрасте 1,5-2 лет Контроль -нагрузка дистйллиров анн ой водой5 Положительный контроль -нагрузка . Ь-аргинином Нагрузка бензофуроксанами: • тримиксан • хлофузан • фениксан в разных дозах

Выбор доз введения бензофуроксанов в организм: и установление сроков исследования их физиологических эффектов

2. Изучение физиологических эффектов бензофуроксанов на систему неспецифической резистентности организма

Определение лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности нейтрофилов

• при однократной нагрузке

• ежедневном внутрижелудочном введении (21 день)

Определение общего количества лейкоцитов, лейкоцитарной формулы, Т- и В-лимфоцитов в крови

• ежедневном внутрижелудочном введении (30 дней)

3. Изучение количества эритроцитов, гемоглобина и биохимического состава крови при нагрузке бензофуроксанами

• ежедневном внутрижелудочном введении (30 дней)

4. Изучение физиологических эффектов бензофуроксанов на деятельность сердца и состояние кровеносных сосудов

5. Изучение болевой чувствительности, поведенческих и условнорефпекторных реакций при нагрузке бензофуроксанами

Рис. 1. Общая схема исследований

Содержание субпопуляций Т-лимфоцитов определяли с помощью реакции розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами морской свинки, В-лимфоцитов - с эритроцитами мыши (С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина, 1998)......

Количество гемоглобина в крови определяли с использованием гемометра Сали.

Состояние сердечной деятельности под влиянием бензофуроксанов изучено на изолированном сердце озерной лягушки (Rana ridibunda) и на белых беспородных крысах методом электрокардиографии.

Деятельность изолированного сердца изучали по методу (Г.И. Косицкий, И.Н. Дьяконова, 1970). Исследуемые вещества разводили в растворе Рингера для холоднокровных (NaCl - 0,900 %, KCl - 0,042 %, СаС12 - 0,024 %, ИаНСОз - 0,015 %). В экспериментах использовали адреналина гидрохлорид (Россия).

Электрокардиографию у белых крыс проводили с использованием электрокардиографа ЭК1Т-03М2. Электрокардиограммы снимали с помощью игольчатых электродов в стандартных отведениях (В.Н. Орлов, 1983). Определяли продолжительность зубца Р, интервала PQ, комплекса QRS, интервалов QT и RR, а также амплитуду зубцов Р, R, Т. По результатам электрокардиографии определяли частоту сердечных сокращений,

Физиологические эффекты соединений бензофуроксанового ряда на деятельность кровеносных сосудов изучены на изолированных лапках озерной лягушки (Rana ridibunda) осеннего улова. В экспериментах использовали адреналина гидрохлорид (Россия). О вазоконстрикторном и вазодшштаторном эффекте бензофуроксанов судили по скорости прохождения раствора Рингера через кровеносные сосуды изолированной лапки лягушки (капли/мин).

Количественную характеристику интенсивности периферического кровотока белых крыс изучили методом термометрии, исходя из существования тесной связи между интенсивностью подкожного кровотока и температурой кожи (R.J. Scudds, A. Helewa, R.A. Scudds, 1995).

Количество аспартат- и аланинаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, креатинфосфокииазы определяли спектрофотометрическим методом, альфа-амилазы прямым колориметрическим методом (К. Lorentz, 1998; F.A.Ying, 1998; С.А. Burtis, 2001; D.S. Yong, 2000). Концентрацию щелочной фосфатазы определяли реакцией Р-нитрофосфата, креатинина по методу Яффе (R.L. Henry, 1974; С.А. Burtis, 2001). Триглицериды в сыворотке крови определяли по классической РАР-реакции с 4 аминоантипирином, глюкозы глкжозооксидазным методом (С.А. Burtis, 2001; N.W. Tietz, 2006), фосфора и кальция - фотометрическим тестом, общего белка - биуретовой реакцией (N.W. Tietz, 2006). Уровень белковых фракций определяли унифицированным методом электрофоретического разделения на пленках из ацетата целлюлозы (N.W. Tietz, 2006). Высчитывали коэффициент Де Ритиса, как отношение активности аспартатаминотрансферазы к таковой аланинаминотрансферазы и индекс ферментемии (B.C. Камышников, 2000).

Болевую чувствительность белых крыс изучили методом отдергивания хвоста из воды с температурой 56 °С ("tail flick"). Тестирование на болевую чувствительность проводили в течение двух часов через каждые 10 минут. Далее высчитывали среднее значение латентного времени отдергивания хвоста по периодам продолжительностью 30 минут (итого 4 периода). С целью выявления наличия или отсутствия адаптации болевых рецепторов высчитывали коэффициент адаптации путем отношения латентного: времени отдергивания хвоста четвертого периода к аналогичному показателю первого периода. При коэффициенте 1 и более делали вывод о наличии адаптации болевых рецепторов, при значении коэффициента менее 1 - о повышении болевой чувствительности.

Поведенческие реакции животных оценивали в приподнятом крестообразном лабиринте и в тесте «открытое поле» (Я. Бурет, О. Бурешова, Д.П. Хьюстон, 1991). Условнорефлекторные реакции крыс изучили в тестах УРАИ (условная реакция активного избегания) и УРПИ (условная реакция пассивного избегания) (Я. Буреш, О. Бурешова, Д.П. Хьюстон, 1991).

Статистическую обработку результатов эксперимента проводили с использованием критерия Стыодента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Полезный приспособительный результат деятельности нитроксидергической системы

Полезным приспособительным результатом деятельности нитроксидергической системы является поддержание оптимальной для метаболизма концентрации оксида азота в крови и тканях органов.

Оксид азота (N0) — короткоживущая молекула, период полужизни которой не превышает 30 с, поэтому об интенсивности образования его в организме мы судили по содержанию в плазме крови продуктов его превращения — нитрит-анионов, нитрат-анионов и S-нитрозотиолов.

Для выявления половых и возрастных особенностей в содержании метаболитов оксида азота определили общее количество нитрит- и нитрат-анионов в плазме крови половозрелых самок, самцов 5-6-месячного возраста (п=10) и крыс в возрасте 1,5-2 лет (п=10).

Установили^ что суммарное количество нитрит- и нитрат-анионов в плазме крови половозрелых самок в 1,1 раза превышает таковое у половозрелых самцов (37,52±0,16 мкмоль/л против 34,41±0,21 мкмоль/л, Р<0,001). В то же время у крыс в возрасте старше 1,5 лет содержание метаболитов оксида азота достоверно ниже (в 1,2 раза, Р<0,001) и составляет 30,02±0,52 мкмоль/л.

Количество S-нитрозотиолов в плазме крови белых крыс также как и суммарное количество нитрат- и нитрит-анионов зависит от пола и возраста животного. Так, их содержание у самок белых крыс в 1,8 раз выше чем у

самцов (3,43±0,2б мкмоль/л против 1,89±0,34 мкмоль/л, Р<0,01). В крови крыс старше 1,5 лет содержание Б-нитрозотиолов составляет 0,85±0,04 мкмоль/л, что в 3,13 раза ниже (Р<0,005) среднего значения у половозрелых крыс и положительно коррелирует с содержанием нитрат и нитрит-анионов (г=1, Р<0,001). По-видимому, извлечение оксида азота из депо у старых животных осуществляется по нитрит- или нитратредуктазному механизму, так как содержание нитратов и нитритов с возрастом снижается в 1,2 раза, а Б-нитрозотиолов - в 3,13 раза.

Предварительное изучение состояния системы оксида азота в организме крыс в различные сроки после нагрузок не выявило зависимости полученных эффектов от пола и возраста животных, поэтому в дальнейших исследованиях -экспериментальные группы животных состояли как из половозрелых самцов, так и из половозрелых самок.

Система оксида азота является одной из стресслимитирующих систем организма (Е.Б. Манухина, И.Ю. Малышев, 2000), и доказано, что на длительное и сильное воздействие стрессора организм отвечает усиленной выработкой N0 (О. В. Глушковская-Семячкина, Т.Г. Анищенко, О.В. Лексина и др., 2006). Для выявления активности системы оксида азота при введении индифферентного вещества в желудок мы вводили белым крысам 3 мл дистиллированной воды и через 2 часа определяли количество метаболитов оксида азота.

Установлено, что суммарная концентрация нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови белых крыс после введения дистиллированной воды составляет 38,92±2,37 мкмоль/л, что достоверно не отличается от соответствующего показателя у интактных крыс (35,67±0,58 мкмоль/л). 1

Для определения времени проявления максимального эффекта Ь-аргинина концентрацию метаболитов оксида азота определяли через 0,5; 1; 2 и 3 часа после введения. В ходе экспериментов было установлено, что максимальное содержание нитрат- и нитрит-анионов достигается через два часа. Исходя из этого, физиологический эффект исследуемых соединений выявляли через 2 часа после введения их в желудок.

Для определения отаетаой реакции системы оксида азота на внутрижелудочное введение физиологического донора N0 - Ь-аргинина были созданы три группы крыс, состоящие из половозрелых самцов и самок (п=5). Первой группе белых крыс вводили Ь-аргинин в виде 10 % раствора в дозе 20 мг/кг, второй группе - в дозе 500 мг/кг и'третьей - в дозе 1000 мг/кг. Кровь для исследования брали через 2 и 4 часа после введения препарата.

I I

70 т

интакгные 20 500 1000

Доза Ь-аргинина, мг/кг

Рис 2. Уровень метаболитов оксида азота в плазме крови белых крыс при нагрузке Ь-аргинином в разных дозах (п=5).

Нагрузка Ь-аргинином в дозе 20 мг/кг сопровождается повышением ; концентрации метаболитов оксида азота в организме с 35,28±0,62 мкмоль/л до | 59,04±1,8 мкмолв/л (Р<0,001). Концентрация нитрат- и нитрит-анионов сохранялась на этом уровне в течение двух часов, а затем снижалась до исходного уровня (рис. 2). На Ь-аргиЙин в дозе 500 мг/кг организм отвечает проявлением тенденции к увеличению продукции оксида азота (38,83±1,85 мкмоль/л). На нагрузку 1.-аргинином в дозе 1000 мг/кг организм отвечает снижением концентрации нитрит и нитрат-анионов до 28,01 ±0,8 мкмоль/л ; (Р<0,001).

Концентрация Б-нитрозотиолов повышается при внутрижелудочном введении Ь-аргинина в дозе 20 мг/кг с 2,66±0,40 мкмоль/л до 15,1±0,4 мкмоль/л (Р<0,001), в дозе 500 мг/кг проявляется тенденция к снижению продукции оксида азота (1,89±0,34 мкмоль/л). Увеличение нагрузки в 2 раза (1000 мг/кг) ; вызывает обратный эффект — снижение концентрации 8-нитрозотиолов до ! 0,78±0,02 мкмоль/л (Р<0,005).

Вещества фуроксанового ряда: тримиксан, хлофузан, фениксан вводили ; в желудок белых крыс в виде 0, ] % суспензии в дозах 10, 5 и 1 мг/кг.

Нагрузка организма крыс соединениями бензофуроксанового ряда ; сопровождалась дозозависимым изменением функциональной активности ' системы оксида азота.

О I 2 3 4 5 , i¡; •• Время после введения

Время после введения '" соединений,ч

соединений, ч ■ ,.. ■ .

Рис. 3 Уровень метаболитов оксида Рис- 4 УРовень метаболитов оксида

азота в плазме крови белых крыс при 2130X3 в ллазме КР0ВИ белых КРЫС ПРИ

поступлении в организм фуроксанов поступлении в организм фуроксанов

в дозе 1 мг/кг в дозе 1 мг/кг 1 - тримиксан, 2 - хлофузан, 3 - фениксан

При введении указанных соединений в дозе 10 мг/кг содержание нитрат и нитрит-анионов в плазме крови снижается, а введение фуроксанов в дозе 5 и 1 мг/кг способствует повышению концентрации метаболитов оксида азота (рис, 3, 4). Нагрузка тримиксаном в дозе 10 мг/кг сопровождалась снижением продукции оксида азота в 1,2 раза по сравнению с исходным уровнем (30,09±0,67 мкмоль/л против 36,19±0,21 мкмоль/л, Р<0,001), хлофузаном - в аналогичной дозе снижала концентрацию нитратов и нитритов в плазме крови в 1,1 раза (31,77±1,01 мкмоль/л против 35,54±0,21 мкмоль/л, Р<0,05), а фениксаном - в 1,2 раза (29,96±1,36 мкмоль/л против 35,02±0,53 мкмоль/л, Р<0,01). Суммарное количество нитрат- и нитрит-анионов возвращалось в норму через 4 часа после введения исследуемых соединений.

Нагрузка тримиксаном в дозе 1 мг/кг сопровождалась повышением продукции оксида азота в 1,6 раз (57,61±2,57 мкмоль/л против 36,19±0,36 мкмоль/л, Р<0,001) по сравнению с исходным уровнем, хлофузаном - в аналогичной дозе увеличивала количество нитратов и нитритов в плазме крови в 1,1 раза (39,69±1,57 мкмоль/л против 35,54^0,59 мкмоль/л, Р<0,05), а фениксаном - в 2,7 раза (95,003±1,306 мкмоль/л против 35,02±0,53 мкмоль/л, Р<0,001).

Концентрация метаболитов оксида азота в плазме крови крыс через 4, часа после внутрижелудочного поступления хлофузана в дозе 1 мг/кг в составляет 36,66±1,37 мкмоль/л, что свидетельствует о возвращении активности системы оксида азота на исходный уровень (рис.4). Содержание нитратов и нитритов в крови через 4 часа после поступления в организм фениксана в дозе 1 мг/кг составило 59,04±1,8 мкмоль/л, через 6 часов — 46,4±1,17 мкмоль/л, через 8 часов — 35,67±0,48 мкмоль/л. Следовательно,

повышенная концентрация оксида азота после введения фениксана в плазме крови крыс сохраняется не более 6 часов.

Повышенная концентрация оксида азота после введения тримиксана в желудок белых крыс сохраняется в плазме крови в течение 4 часов, о чем свидетельствует концентрация метаболитов оксида азота в плазме крови через 4 часа после поступления исследуемого соединения в дозе 1 мг/кг в желудок -46,4±1,17 мкмоль/л (Р<0,05), а через 6 часов - 35,67±0,48 мкмоль/л.

Таким образом, все изученные соединения (в дозе 1 мг/кг) способствуют повышению концентрации нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови. Наибольшую МО-донорскую активность проявляет фениксан, что предположительно связано с наличием нитрб- и гидрокси-групп в молекуле соединения. Хлофузан и тримиксан являются хлорзамещенными бензофуроксана и активируют нитроксидергическую систему в меньшей степени, причем наименьшую МО-донорскую активность проявляет хлофузан, который содержит только одну фуроксановую группу и не содержит нитрогруппы в молекуле в отличие от тримиксана. Следовательно, нитрозамещенные бензофуроксана активируют нитроксидергическую систему в большей степени, чем хлорзамещенные.

3.2. Состояние нёспецифической резистентности белых крыс

: 3.2.1 Состояние бактерицидной активности сыворотки крови

Бактерицидная активность сыворотки крови (БАС) животных изучена в зависимости от времени года, возраста и другик факторов. Нами установлено, что БАС крови крыс достигает своего максимального значения в мае и достоверно снижается в 1,14 раза к августу (42,37±0,47 % против 48,42±0,76 %, Р<0,001). В декабре бактерицидная активность сыворотки крови повышается до 47,76±1,42 % (в 1,13 раза больше, чем в августе, Р<0,005) и на этом уровне сохраняется до мая следующего года.

Достоверной зависимости БАС белых крыс от пола не выявлено, исходя из чего экспериментальные группы животных состояли как из самцов, так и из самок.

Ранее было установлено; что введение в желудок белых крыс веществ и манипуляции, сопровождающие. < этот процесс, являются фактором, изменяющим активность нитроксидергической системы. В связи с этим вызывает интерес выраженность бактерицидной активности сыворотки крови при однократном и многократном (21 день) введении в желудок дистиллированной воды.

На однократное введение дистиллированной воды в желудок организм белых крыс через два часа после введения реагирует снижением бактерицидной активности сыворотки крови на 17,92 % (1,21 раза) от первоначального значения (с 42,07±1,18 % до-34,53±1,24 %, Р=0,01). При многократном введении дистиллированной воды бактерицидная активность сыворотки крови на седьмой день эксперимента увеличивается в 1,14 раза (на 13,92 %), на 21 день

— в. 1,11 раза (на 10,93 %) и составляет 49,5±1,54 % (РЮ.005), 48,2±1,92 % (Р<0,05) соответственно.

Бактерицидная активность сыворотки крови крыс через 2 часа после введения Ь-аргинина составила 34,63±1,93 %, что на 22 % ниже первоначального уровня (Р<0,05). Такая же динамика отмечается и в контрольной группе.

Ранее было установлено, что поступление в организм белых крыс тримиксана, хлофузана и фениксана в дозе 10 мг/кг сопровождается снижением суммарного количества нитрит- и нитрат-анионов в плазме крови. Характер изменений в содержании нитритов и нитратов плазмы крови не зависел от вводимого соединения, в указанной дозе. Исходя из этого, бактерицидная активность сыворотки ;крови изучена только при нагрузке тримиксаном в дозе 10 мг/кг в виде 0,1 % суспензии.

Рис. 5. Бактерицидная активность сыворотки крови белых крыс после однократного введения тримиксана в дозе 10 мг/кг (п=5)

На однократное введение 0,1 % суспензии тримиксана в желудок организм белых крыс через 2 часа реагирует снижением бактерицидной активности сыворотки крови на 22,13 % (1,28 раза) от первоначального значения (с 48,97±1,57 % до 38,13±3,34 %, Р<0,05) (рис. 5). Через 5 дней сниженная бактерицидная активность компенсируется повышением ее до 70,93^0,72 % (в 1,45 раз от первоначального показателя и в 1,86 раз от показателя, отмеченного после манипуляций с введением дистиллированной воды, Р<0,001).

Отмечается положительная корреляция (г=1) между изменением бактерицидной активности сыворотки крови при однократном введении тримиксана (10 мг/кг) и Ь-аргинина (20 мг/кг). Следовательно, снижение

о контроль Штримиксан

до введения через 2 часа через 5 дней

содержания экзогенного оксида азота в организме сопровождается снижением бактерицидной активности сыворотки крови.

Нагрузка тримиксаном и хлофузаном в дозе I мг/кг не вызвала достоверных изменений бактерицидной активности и составила 42,40±1,49 % и 42,90±0,24 % соответственно (против 42,53±0,67 % и 42,50±1,29 % до введения соединений). Нагрузка фениксаном сопровождалась снижением бактерицидной активности сыворотки крови на 12,8 % (38,97±0,84 % против 44,69±2,02 % до нагрузки, Р=0,05).

Таким образом, на!рузка фениксаном (1 мг/кг) вызывает аналогичное контрольной группе изменение бактерицидной активности, причиной которой являются манипуляции, проводимые с крысой — фиксация, введение металлического зонда и веществ в желудок. Тримиксан и хлофузан при введении в организм в дозе I мг/кг способствуют сохранению бактерицидной активности сыворотки крови на первоначальном уровне. Этот факт можно объяснить различным содержанием нитрозотиолов в плазме крови крыс при введении в организм указанных соединений. При поступлении в организм тримиксана содержание нитрозотиолов через 2 часа составляет 5,91±0,4 мкмоль/л, при введении хлофузана — 7,63±0,58 мкмоль/л, а при введении фениксана только 4,57±0,4 мкмоль/л. Следовательно, повышенное содержание нитрозотиолов обеспечивает повышение бактерицидной активности сыворотки крови, оказывая защитное действие влиянию стресс-факторов.

Выявлена умеренная корреляция между бактерицидной и лизоцимной активностью сыворотки крови (ЛАС) интактных белых крыс (г=-0,32, Р=0,001) согласно классификации корреляционных связей (Э.В. Ивантср, A.B. Коросов, 1992).

3.2.2 Состояние лизоцимной активности сыворотки крови

На однократное введение 3 мл дистиллированной воды в желудок организм белых крыс реагирует повышением лизоцимной активности сыворотки крови на 13,65 % (1,16 раза) от первоначального значения (с 34,97±0,33 % до 40,50±0,74 %, Р<0,005) через два часа после введения. Через 5 дней лизоцимная активность сыворотки возвращается к исходному уровню и составляет 32,70±2,33 %. ЛАС при однократном введении дистиллированной воды в желудок белых крыс положительно коррелирует с содержанием нитрит-и нитрат -анионов в сыворотке крови (г=0,98) и отрицательно коррелирует с БАС (i=-0,96), причем в обоих случаях корреляция сильная.

При многократном введении дистиллированной воды в организм проявляется положительная корреляция между ЛАС и БАС (г=0,99).

Лизоцимная активность сыворотки крови крыс через 2 часа после нагрузки L-аргинином (20 мг/кг внутрижелудочно) составила 42,75±0,89 %, что на 49,48 % выше первоначального уровня (Р<0,0001). При ежедневной нагрузке L-аргинином лизоцимная активность сыворотки крови крыс также достоверно повышается по отношению к исходному значению. Так, к 7 дню эксперимента

лизоцимная активность сыворотки крови крыс увеличилась на 26,32 % (с 28,68±1,00 % до 36,23±0,89 %, Р=0,005), к 14 дню — на 23,81 % (до 35,51±0,89 %, Р<0,01), к 21 дню — на 18,72 % (до 34,05±0,89 %, Р=0,0.1).

На однократное введение тримиксана (10 мг/кг) в виде 0,1 % суспензии в желудок организм белых крыс реагирует повышением лизоцимйой активности сыворотки крови на 31,19 % (1,31 раза) от первоначального значения (с 32,70±2,33 % до 42,90±1,71 %, Р<0,001) через два часа после введения. Лизоцимная активность сыворотки восстанавливается к исходному уровню через 5 дней.

При нагрузке тримиксаном и хлофузаном в дозе 1 мг/кг лизоцимная активность через 2 часа достоверно увеличилась (рис. 6) и составила 54,63±1,72 % (Р<0,001) и 53,00±0,71 % (Р<0,001) соответственно (против 35,50 % и 34,50±1,47 % до введения соединений). Нагрузка фениксаном не вызвала достоверных изменений в лизоцимной активности сыворотки крови белых крыс (30,13±1,52% против 26,74±1,49 % до нагрузки). . ....

»П5К-0.

К о

I е-

з а зо

Е 5

я о-

5 о

о й

3 а

4 10

к-

до введения

¿Т

через 2 часа

□ консоль Штримиксан Пхяофузан Ь'фениксан

Рис. 6. Лизоцимная активность сыворотки крови белых крыс после однократного введения бензофуроксанов в дозе 1 мг/кг (п=5)

Ежедневная нагрузка организма белых крыс исследуемыми бензофуроксанами (1 мг/кг) сопровождается достоверным повышением лизоцимной активности сыворотки крови на 7 день эксперимента. При нагрузке тримиксаном она увеличилась на 54,98 % (с 36,07±0,57 % до 55,90±1,71 %, Р<0,001), фениксаном — на 54,4 % (с 34,80±0,92 % до 53,73±1,2 %,'Р<0,001), а хлофузаном — на 54,4 % (с 34,30±0,61 % до 51,93±1,96 %, Р<0,001).

На 14-й день сохраняется повышенная лизоцимная активность сыворотки крови: при нагрузке тримиксаном (1 мг/кг) ЛАС в 1,5 раза (Р=0,001) выше исходного уровня, хлофузаном (1 мг/кг) - в 1,12 раза (Р=0,01), фениксаном(1 мг/кг) - в 1,5 раза (Р=0,005). ........ - ■ . - ............

Следовательно, при повышении содержания оксида азота в организме возрастает лизоцимная активность сыворотки крови, причем отмечается следующая зависимость: чем больше суммарная концентрация нитрозотиолов, нитрат- и нитрит-анионов в крови, тем выше активность ЛАС.

3.2.3 Состояние клеточного иммунитета при нагрузке бензофуроксанами

Для изучения динамики изменения общего. количества лейкоцитов, лейкоцитарной формулы, количества Т- и В- лимфоцитов в крови белых крыс разделили на четыре группы: животных первой группы подвергали ежедневной нагрузке дистиллированной водой в объеме 3 мл внутрижелудочно в течение 30 дней, крысам второй, третьей и четвертой групп вводили тримиксан, хлофузан и фениксан соответственно в дозе 1 мг/кг в виде 0,1 % суспензии. Кровь брали на 10-й, 20-й и 30-й дни эксперимента.

В течение эксперимента количество лейкоцитов достоверно не отличалось от первоначального значения, по имеется тенденция к повышению на десятый и тридцатый дни эксперимента.

На ежедневную ' внузрижелудочиуго нагрузку тримиксаном организм белых крыс отвечает тенденцией к повышению общего количества лейкоцитов на 10-й день эксперимента (с 10,72* 109±0,73/л до 12,07*109±0,65/л) и возвращением к исходному уровню на 20-й день. К тридцатому дню нагрузки тримиксаном (1 мг/кг) общее количество лейкоцитов снижается в 1,29 раза по сравнению с исходным уровнем: (8,32*109±0,74/л против 10,72*109±0,73/л, Р=0,05) ив 1,45 раза по сравнению с уровнем, отмеченным на 20-й день эксперимента (8,32*109±0,74/л протав 12,07*109±0,65/л, Р=0,01).

Введение хлофузана сопровождается аналогичными изменениями: на 10-й день отмечается тенденция к повышению общего количества лейкоцитов (12,10*109±0,37/л против 10,98*109±0,66/л), а на 30-й - тенденция к снижению (9,43* 109±0,66/л против 10,98* 109±0,б6/л).

Введение фениксана способствует повышению общего количества лейкоцитов в 1,23 раза (Р=0,06) на десятый день эксперимента с сохранением тенденции к повышению на 20-й день (12,43* Ю9±0,72/л против 10,45* 109±0,8/л до введения). К тридцатому дню исследуемый показатель возвращается к исходному уровню (табл. 1).

Таким образом, длительная нагрузка бензофуроксанами сопровождается снижением относительного количества лимфоцитов (хлофузан и фениксан) и повышением количества моноцитов при введении фениксана и снижением при нагрузке хлофузаном.

Таблица 1 - Количество лейкоцитов при ежедневной нагрузке организма бензофуроксанами (п=5)

Показатель Группа животных

контроль тримиксан (1 мг/кг) хлофузан (1 мг/кг) фениксан (1 мг/кг)

до введения

Общее количество лейкоцитов, 109/л 10,72±0,41 10,72±0,73 10,98±0,46 10,45±0,8

Палочкоядерные нейтрофилы, % 6,00±0,71 6,00±0,71 5,67±0,41 6,00±0,71

Сегментоядерные нейтрофилы, % 22,67±0,41 21,33±1,08 22,33±0,82 23,00±0,00

Эозинофилы, % 2,33±0,41 2,00±0,00 1,33±0,41 2,00±0,00

Моноциты, % 2,00±0,71 1,33±0,41 2,67±0,41 2,33±0,41

Лимфоциты,% 67,00±0,71 69,33±0,41 68,00±1,22 66,67±0,41

через 10 дней

Общее количество лейкоцитов, 105/л 11,93±0,85 12,07±0,б5 12,1±0,37 12,88±0,57

Палочкоядерные нейтрофилы, % 8,00±1,41 7,00±0,00 7,33±1,47 8,00±0,71

Сегментоядерные нейтрофилы, % 23.67il.08 25,33±2,48 26,00±1,87 27,33±1,47

Эозинофилы, % 3,33*1,08 2,67±0,41 3,33±1,08 3,33±1,47

Моноциты, % 2,67±0,82 2,00±0,00 2,33±0,41 2,00±0,71

Лимфоциты,% б2,00±2,55 63,00±2,55 60,67±2,48* 59,67±1,08*

через 20 дней

Общее количество лейкоцитов, 109/л 10,08=Ь0,9 10,93±1,18 10,10±0,6 12,43±0,72

Палочкоядерные нейтрофилы, % 6,33±0,41 5,б7±0,41 5,33±1,08 5,67±1,08

Сегментоядерные нейтрофилы, % 22,67±0,41 23,67±0,82 24,33±1,08 23,67±2,68

Эозинофилы, % 2,00±0,71 2,б7±0,41 3,33±0,41 2,00±0,71 г.

Моноциты, % 2,33±0,41 2,67±1,08 1,33±0,41 * 4,00±0,00*

Лимфоциты,% 66,67±1,08 65,33±0,41 65,67±1,47 64,67±1,08

* - достоверно при Р<0,05

Фагоцитарная активность нейтрофилов крови крыс, а именно фагоцитарный индекс как после 30, так и после 120 минутной экспозиции не

изменился через 2 часа после однократного введения Ь-аргинина (20 мг/кг) по отношению к фоновому значению. Фагоцитарное число 30 и 120 снизилось на 15,61 % (Р<0,05) и 16,99 % (Р=0,01) соответственно по отношению к первоначальному уровню. При ежедневном введении Ь-аргинииа фагоцитарная активность нейтрофилов крови крыс достоверно не изменялась по отношению к первоначальному значению.

Нагрузка тримиксаном и хлофузаном в дозе 1 мг/кг не вызвала достоверных изменений фагоцитарной активности нейтрофилов, хотя при 120-минутной инкубации наметилась тенденция к повышению фагоцитарного индекса: при нагрузке тримиксаном - на 1,47 %, хлофузаном - на 2,24 % от исходного уровня. При нагрузке фениксаном отмечалась тенденция к повышению как фагоцитарного индекса 30, так и ФИ 120 на 2,93 % и 0,72,% соответственно.

Фагоцитарное число 30 при однократной нагрузке тримиксаном (1 мг/кг) и фениксаном (Г мг/кг) достоверно не изменяется, а при нагрузке хлофузаном (1 мг/кг) повышается на 15,3 % (5,80±0,07 против 5,03±0,15 до нагрузки, Р<0,1). Фагоцитарное число 120 при нагрузке фениксаном не изменяется, при нагрузке тримиксаном достоверно снижается на 8,7% (Р=0,01), а при нагрузке хлофузаном отмечается лишь тенденция к снижению на 6,8 %.,

Для определения функционального состояния субпопуляций лимфоцитов в качестве критерия использованы количественные содержания высокоавидных, средиеавидных, иизкоавидных лимфоцитов, теофиллинчувствительных и теофиллинустойчивых Т-лимфоцитов, аутологичных Т-лимфоцитов, тотального и общего количества Т-клеток, общего количества В-клеток и нулевых лимфоцитов.

Тотальное количество Т-лимфоцитов достоверно не: изменилось в результате эксперимента ни в одной из экспериментальных групп. Отмечается тенденция к повышению количества тотальных Т-лимфоцитов к 30-му'дню эксперимента при поступлении в организм тримиксана (с 71,67±4,81 %гДо 79,00±1,22 %) и фениксана - (с 74,67±2,94 % до 79,67±1,63 %). При поступлении хлофузана наоборот количество тотальных Т-лимфоцитов снижается на уровне тенденции (69,00±0,71 % против 75,67±6,01 % до. введения).

Общее количество Т-лимфоцитов повышается к 20-му дню эксперимента в 1,08 раза в контрольной группе и в 1,13 раза при введении хлофузана на уровне тенденции. При введении тримиксана и фениксана к этому сроку отмечается снижение общего количества Т-лимфоцитов: у крыс, получавших тримиксан - в 1,07 раза на уровне тенденции, а у крыс получавших фениксан - в 1,12 раза (Р=0,01). В остальные сроки исследования изменения не отмечены, кроме контрольной группы, где исследуемый показатель повышается в 1,15 раза на уровне тенденции к 30-му дню исследования цо сравнению с исходным уровнем. В результате на тридцатый день введения бензофуроксанов общее количество Т-лимфоцитов у , крыс, получавших

хлофузан в 1,17 раза (Р<0,05), а фениксан - в 1,14 раза (Р<0,05) меньше, чем у крыс контрольной группы.

Следовательно, при поступлении хлофузана и фениксана в организм белых крыс в течение 30 дней общее количество Т-лимфоцитов не изменяется в течение эксперимента, тогда как у крыс контрольной группы при ежедневном введении дистиллированной воды исследуемый показатель повышается. Повышение общего количества Т-лимфоцитов связано с возбуждением симпатической нервной системы при длительном действии комплексного раздражителя слабой силы на организм (фиксация, введение веществ в желудок).

Общее количество В-лимфоцитов при введении тримиксана в организм на 30-й день эксперимента снижается в 1,17 раза (Р<0,05), а при введении хлофузана - повышается в 1,43 раза (Р<0,05). Длительное поступление фениксана в . организм белых крыс достоверных изменений количества В-лимфоцитов не вызывает, такая же картина характерна и для контрольной группы. При 30-дневном поступлении в организм тримиксана общее количество В-лимфоцитов достоверно не отличается от контрольной группы, у крыс, Получавших хлофузан - в 1,3 раза больше (Р<0,05), ау получавших фениксан - в 1,22 раза (Р<0,05) меньше, чем у крыс контрольной группы.

Количество нулевых лимфоцитов и Т-хелце ров при введении тримиксана, фениксана, а также у крыс контрольной группы в течение эксперимента достоверно не изменяется.

Количество теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов или 'Г-супрёссоров повышается в контрольной группе с 21,33±8,2 % до введения дистиллированной воды до 29,00±1,87 % к тридцатому дню на уровне тенденций. К 30-му дню исследования содержание Т-супрессоров в крови крыс, получавйгих хлофузан ниже в 1,5 раза (Р=0,01), а у получавших фениксан - в 1,32 раза (Р<0,05), чем у крыс контрольной группы. Повышение относительного количества Т-супрессоров связано, вероятно, с повышенным тонусом симпатической нервной системы при длительном ежедневном действии комплексного раздражителя. Избыточная активность Т-сунрсссоров может привести к быстрому подавлению иммунного ответа и даже явлениям иммунологической толерантности. Поступление в организм бензофуроксанов способствует сохранению соотношения Т-хелперы/Гтсупрессоры на оптимальном уровне и предотвращению нежелательных последствий стрессовой реакции.

Относительное количество активных Т-лимфоцитов достоверно снижается в 1,15 раза (24,67±0,41 % против 28,33±0,41 %, Р<0,005) к 20-му дню введения фениксана в организм белых крыс с восстановлением до исходного уровня к 30-му дню эксперимента (рис. 7). В остальных группах этот показатель достоверно не изменяется в течение эксперимента. Тенденция к повышению активных Т-лимфоцитов в контрольной группе и; при введении хлофузана приводит к тому, что к 30-му дню эксперимента у крыс, получавших тримиксан, этот показатель достоверно ниже, чем в контрольной группе.

Рис. 7. Относительное количество субпопуляхшй лимфоцитов крови белых крыс на 30-й день ежедневного введения бензофуроксанов в дозе 1 мг/кг (п=5)

При длительном ежедневном внутрижелудочном введении тримиксана (1 мг/кг) к тридцатому дню эксперимента отмечается повышенное содержание низкоавидных Т-лимфоцитов (Р=0,01) и меньшее количество активных Т-лимфоцитов (Р=0,01) по сравнению с контролем (рис. 7). Остальные субнопуляции лимфоцитов не отличаются от таковых контрольной группы. Более низкое содержание активных Т-лимфоцитов связано с их повышением в контрольной группе, тогда как при введении тримиксана их относительное количество осталось неизменным.

У крыс, получавших хлофузан, к концу эксперимента снижено количество общего количества Т-лимфоцитов (Р<0,05) за счет снижения Т~супрессоров (Р=0,01) и повышено общее количество В-лимфоцитов (Р<0,05) по сравнению с контрольной группой.

Повышение количества В-лимфоцитов при одновременном снижении Т-супрессоров является показателем активизации клеточного иммунитета, следовательно, длительное поступление хлофузана в организм оказывает стимулирующее влияние на систему клеточного иммунитета.

3.3. Содержание эритроцитов и гемоглобина в крови белых крыс при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

Для изучения динамики изменения количества эритроцитов и гемоглобина в крови белых крыс разделили на четыре группы: животных

первой группы подвергали ежедневной нагрузке дистиллированной водой в объеме 3 мл внутрижелудочно в течение 30 дней, крысам второй, третьей и четвертой групп вводили тримиксан, хлофузан и фениксан соответственно в дозе 1 мг/кг в виде 0,1 % суспензии. Кровь брали на 10-й, 20-й и 30-й дни эксперимента.

В контрольной группе крыс, получавших ежедневно дистиллированную воду, количество эритроцитов достоверно повышается в 1,14 раза (Р<0,05) к 10-му дню эксперимента, возвращается к исходному уровню к двадцатому и сохраняется на этом уровне до конца эксперимента. У крыс после нагрузки тримиксаном количество эритроцитов снижается на уровне тенденции к 10-му дню эксперимента (с 7,3±0,22*1012/л до 6,81±0,22*10|2/л), возвращается к исходному уровню к 20-му дню и сохраняется на этом уровне к 30-му дню. Динамика изменения количества эритроцитов при нагрузке хлофузаном аналогична динамике при нагрузке тримиксаном за исключением того, что снижение исследуемого показателя к 10-му дню происходит достоверно в 1,2 раза (6,53±0,53*10'2/л против 7,87±0,18*1012/л до введения, Р<0,05). При нагрузке фениксаном (1 мг/кг) количество эритроцитов достоверно не изменяется.

Рис. 8 Среднее содержание гемоглобина в одном эритроците (пг) крови белых крыс при ежедневном введении бензофуроксанов в дозе 1 мг/кг (п-5)

Среднее содержание гемоглобина в одном эритроците достоверно снижается на десятый день ежедневной нагрузки дистиллированной водой в 1,3 раза (15,31±0,76 пг против 20,00±1,12 пг, Р<0Д)5),, .доретанавливается до исходного уровня к 20-му дню и сохраняется на этом уровне до конца эксперимента^ (рис. 8). Нагрузка фениксаном и хлофузаном способствует повышению среднего содержания гемоглобина в одном эритроците к 10-му

дню эксперимента на уровне тенденции (с 21,9±1,2 пг до 23,56±3,99 пг и с 19,52±1,45 пг до 22,98±2,42 пг соответственно).

Следовательно, введение, .бензофуроксанов в организм обеспечивает поддержание на оптимальном ^уровне среднего содержания гемоглобина в эритроците при длительном действии раздражителя.

3.4. Физиологические реакции сердца и сосудов на бензофуроксаны.

Физиологические эффекты (хронотропный и инотропный) соединений бензофуроксанового ряда на деятельность сердца изучены на изолированном сердце озерной лягушки (Rana ridibunda) осеннего улова в виде 0,01 %, 0,001 %, 0,0001 %, 0,00001 % растворов.

Физиологический эффект хлофузана на сердце зависит от концентрации раствора. В 0,01 % концентрации проявляется ярко выраженные отрицательные хронотропный и инотропный эффекты с последующей остановкой сердца в диастоле. Отмеченные эффекты -обратимы. Растворы хлофузана в 0,001 % и 0,0001 % концентрацшрс оказывают ртрицательный хронотропный эффект, но остановку сердца не вызывают, при чем отмеченный эффект усиливается при снижении концентрации хлофузана. При воздействии раствором адреналина частота сердечных сокращений.: восстанавливается на 42,27±0,84 %, а амплитуда сокращений не , изменяется. Следовательно, хлофузан в 0,0001 % концентрации блокирует инотропное влияние адреналина, несмотря на то, что сам не оказывает инотропного действия. Хлофузан в виде 0,00001 % концентрации не оказывает физиологического действия на деятельность сердца. Это утверждение дополнительно подтверждается проявлением как инотропного, так и хронотропного влияния раствора адреналина на фоне перфузии хлофузаном в отмеченной концентрации.

Раствор тримиксана в 0,01% концентрации оказывает на сердце отрицательный инотропный и хронотропный эффекты, также как и хлофузан в аналогичной концентрации. Остановка сердца отмечается в диастоле. Отмеченные эффекты обратимы, при перфузии, раствора Рингера восстанавливается и сила и частота сердечных сокращений через 2 минуты. ;> Время восстановления сердца после воздействия тримиксаном более продолжительное, чем при воздействии хлофузаном,. Раствор тримиксана в 0,001% концентрации также вызывает отрицательный хронотропный и инотропный эффекты, только остановки сердца^е отмечается. Восстановление при этом происходит быстрее - в течение первой минуты перфузии раствором Рингера. 0,0001 % и , 0,00001 % растворы тримиксана не проявляют хронотропного влияния, но проявляют выраженное положительное инотропное действие. Действие адреналина при этом не проявляется, исходя из чего, можно сделать предположение, что инотропный эффект тримиксана осуществляется за счет взаимодействия с адренорецепторами.

Фениксан проявляет хронотропный эффект только в 0,01 % концентрации. Инотропный эффект зависит от концентрации растворов фениксана: в 0,01 % и 0,001 % концентрациях проявляет отрицательный инотропный эффект, а в 0,0001 % концентрации,. - положительный. Отрицательный инотропный эффект частично снимается адреналином -амплитуда сердечных сокращений восстанавливается на 53,87±2,49 %. Фениксан в 0,00001 % концентрации блокирует действие адреналина, хотя сам при этом не проявляет ни хронотропного, ни инотропного действия. Возможно, в указанной концентрации фениксан является блокатором адренорецепторов миокарда.

Растворы тримиксана, хлофузана. и фениксана в концентрации 0,01% проявляют вазодилятаторный эффект -. после пропускания растворов исследуемых веществ скорость протекания раствора Рингера через сосуды изолированной лапки лягушки повышается на 20 % от исходного уровня.

. Бензофуроксаны в 0,001 % и 0,00001 % концентрациях не оказывают физиологического эффекта на состояние кровеносных сосудов изолированной лапки лягушки.

Тримиксан в виде 0,0001 % раствора способствует повышению скорости протекания раствора Рингера. на 66,7, % от исходного уровня, хлофузан в аналогичной концентрации - на 63,3 %, фениксан - на 66,7 %.

Таким образом, , тримиксан, хлофузан и фениксан оказывают вазодилятаторный эффект на кровеносные сосуды изолированной лапки лягушки в концентрации 0,0001 %.

3.5. Биохимический состав крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

У интактных белых крыс активность общей альфа-амилазы в крови составляет 31,99±1,21 мг/(с*л). В контрольной группе животных активность фермента снижается в 1,18 раза (Р=0,004)на десятый день ив 1,17 раза (Р=0,09); на 20-й день введения дистиллированнойводы. На тридцатый день исследований активность альфа-амилазы повышается в 1,2 раза (Р=0,002). "

Гипоамилаземия отмечается в организме при повышении утилизации" глюкозы в тканях. Поскольку на 10-й день эксперимента концентрация глюкозы снижена в 1,4 раза (4,77±0,24 ммоль/л против 6,70±0,24 ммоль/л,. Р=0,001) мы можем сделать вывод о том,; что на ежедневное введение дистиллированной воды с предварительной фиксацией и введением зонда в желудок организм крыс через 2 часа после манипуляций отвечает повышением утилизации глюкозы, что является одним из показателей повышения тонуса парасимпатической нервной системы. Гиперамилаземия, отмечаемая на 30-й

день эксперимента, по-видимому, связана со сниженной концентрацией глюкозы в крови (5,07±0,13 ммоль/л на двадцатый день против б,70±0,24 ммоль/л до введения, Р<0,001) в течение длительного времени, на что организм отвечает повышением активности фермента и как следствие концентрации глюкозы в сыворотке крови.

У крыс, получавших ежедневно тримиксан (1 мг/кг), на 10-й день эксперимента активность общей альфа-амилазы снижается в 1,41 раза по сравнению с исходным уровнем (Р<0,001). Интенсивность снижения активности изучаемого фермента выше, чем в контрольной группе в 1,12 раза (Р=0,02). На 30-й день исследований активность общей альфа-амилазы остается сниженным и достоверно отличается от уровня контрольной группы в 1,35 раза (28,59±1,05 мг/(с*л) против 38,60±0,85 мг/(с*л), Р<0,001). ■ I

Известно, что оксид азота ограничивает выброс симпатических-медиаторов. Из установленных ранее фактов о том, что введение тримиксана/ повышает образование оксида азота в организме, можно сделать вывод, что гипоамилаземия при введении тримиксана объясняется" снижением тонуса симпатической и повышением тонуса парасимпатической йервной систем. Это подтверждается и снижением концентрации глюкозы в крови'при введении1!) тримиксана на 10-й день в 1,71 раза (Р<0,001), на 20-й день ^'в 1,24 раза: ч (Р<0,01), 30-й день - в 1,18 раза (Р<0,01).

После ежедневного введения хлофузана (1 мг/кг) активность альфа-амилазы на десятый день эксперимента снижается в 1,53 раза (Р=0,002) -интенсивнее, чем в контрольной группе (в 1,26 раза, Р=0,02) и группе крыс, получавших тримиксан (в 1,13 раза на уровне тенденции). Это можно объяснить тем фактом, что при введении хлофузана концентрация нитрозотиолов (депонированная форма оксида азота) увеличивается в 2,87 раза, тогда как при введении тримиксана только в 2,22 раза. Длительное поступление в организм доноров оксида азота, повышающих образование N0 более чем в 2,5 раза, ингибирует активность КЮ-синтаз по механизму отрицательной обратной связи. В результате повышается тонус симпатической нервной системы, что подтверждается увеличением концентрации глюкозы в крови с 4,76±0,19 ммоль/л на десятый день исследования до 5,78±0,44 ммоль/л - на двадцатый ив 1,47 раза на тридцатый день (Р<0,001).

При поступлении фениксана в организм отмечается тенденция к снижению активности общей альфа-амилазы в 1,19 раза на 10-й день исследования и в 1,1 раза на 30-й день исследования.

В сыворотке крови белых крыс, получавших тримиксан (1 мг/кг), на 30-й день исследований активность щелочной фосфатазы снижается в 1,48 раза (Р=0,002), при введении хлофузана - на 1,31 раза (Р=0,001). Оксид азота является физиологическим регулятором метаболизма, кальция, а именно повышает освобождение его из депо, что является:'следствием снижения активности щелочной фосфатазы - фермента остеобластов в ответ на длительное введение тримиксана в организм.

Коэффициент Де Ритиса у интактных белых крыс составляет 1,67±0,05. В контрольной группе животных на десятый день эксперимента исследуемый коэффициент повышается в 1,54 раза (2,57±0,22 против 1,67±0,05 до введения, Р=0,004), на 20-й день - в 1,38 раза (Р=0,01), а к 30-му дню отмечается тенденция к снижению. Высокий коэффициент Де Ритиса за счет снижения активности АЛТ в сыворотке крови ра 10-й и 20-й дни эксперимента свидетельствует о том, что в клетке происходит торможение периферических путей обмена (гликолиза, цикла Кори и т.д.) при неизменных центральных путях обмена веществ. " •

У крыс, получавших тримиксан (1 мг/кг), на 10-й день эксперимента коэффициент Де Ритиса повышается в 1,12 раза на уровне тенденции, на 20-й день - снижается в 1,26 раза (Р=0,006), индекс ферментемии - снижается в 1,21 раза (Р=0,005). Это свидетельствует о повышениии активности периферических путей обмена, тогда как активность цикла трикарбоновых кислот остается неизменной.

При ежедневном введении хлофузана (1 мг/кг) в организм на 10-й день эксперимента отмечается снижение коэффициента Де Ритиса в 1,33 раза (Р=0,03),.на 20-й день - в 1,26 раза (Р=0,03), а на 30-й день возвращается на , исходный уровень, индекс ферментемии снижается в 1,23 раза (Р=0,04) на 10-й день эксперимента и достоверно не изменяется в остальные сроки исследования, что свидетельствует о смешанном; рше ферментемии.

При поступлении фениксана в организм наблюдается следующая динамика изменения коэффициента Де Ритиса: на 20-й - снижается в 1,33 раза (Р=0,001), на 30-й день снижается на уровне тенденции, йндекс ферментемии на 10-й день снижается в 1,29 раза (Р<0,001), на 20-й - в 1,3 8 раза (Р<0,001).

Таким образом,'1 при длительном поступлении в организм бензофуроКсанов - доноров оксида азота обмен веществ клетки сдвигается в сторону анаболизма (анаэробная ферментемия). При этом отмечается следующая зависимость: чем лучше выражена МО-донорская активность, тем ярче проявляется отмеченный физиологический эффект.

3.6. Болевая чувствительность белых крыс при нагрузке бензофуроксанами

По результатам изучения болевой чувсвительности белых крыс делили на две группы: крысы с высокой степенью адаптации и крысы с низкой степенью адаптации болевых рецепторов. Далее каж^укр группу крыс делили на четыре подгруппы. Первой подгруппе V вводили;, дистиллированную воду внутрижелудочно в объеме 3 мл (контроль),; второй V Ьтарпшин в дозе 20 мг/кг в виде 10 % раствора, третт>е^ в дозе 20 мт/вд,,,четвертой, пятой,

шестой - тримиксан, хлофузан и фениксан- соответственна в .дозе 1. мг/кг в виде 0,1% суспензии, седьмой, восьмой и девятой подгруппам г тримиксан, хлофузан и фениксан соответственно в дозе 10 мг/кг в виде 0,1% суспензии. Тест на болевую чувствительность проводили через 2 часа после введения соединений.

Таблица 2 - Продолжительность латентного периода отдергивания хвоста у крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов (п=б)

Группа животных Латентное время отдергивания хвоста, с

1 период 2 период 3 период 4 период

1 (вода) до введения 2,41±0,24 2,62±0,08 2,71±0,27 2,б5±0,1

после введения 2,23±0,12 2,25±0,12* 1,74*0,14"' 1,2б±0,11*

2 (Ь-аргинин 20 мг/кг) до введения 2,78±0,12 3,00±0,14 2,85±0,19* 3,17±0,08*

после . введения 2,57±0,24 2,5б±0,21 2,0±0,14 1,83±0,23

3 (Ь-ИАМЕ 20мг/кг) до введения 3,8б±0,06 3,9б±0,49 4,52±0,34 4,27±0,04

после введения 3,38±0,33 3,19±0,2 3,43±0,09 4,13±0,19

' 4 (тримиксан I мг/кг) ДО введения 5,06±0,64 6,0б±0,46 4,89±0,08 6,5±0,42

после введения ■ 3,76±0,29* 2,81±0,05* 3,94±0,11* 3,17±0,12*

5 (тримиксан ШмгЛсг) ДО введения 2,82±0,12 2,94±0,28 3,48±0,15: 3,83±0,29

после введения 2,94±0,28 3,02±0,14 3,62±0,05 3,94±0,11 ~~4,48±0,13~

6 (хлофузан 1 мг/кг) До введения 3,69±0,06 5,33±0,77 4,26±0,1б

после введения 4,42±0,18* 3,9б±0,28 4,14±0,21 4,54±0,29

7 (хлофузан ДОмгЛсг) №. введения 2,82±0,12 2,94±0,28 3,48±0,15 3,83±0,29

после введения 2,74±0,4 2,03±0,3б* 2,14±0,21* 1,87±0,19*

8 до введения 3,02±0,14 1,97±0,13 1,94±0,15 3,13±0,11

1 мг/кг) после введения 2,77±0,2 2,19±0,24 1,85±0,15 1,71±0Д5*

9 ДО введения 2,90±0,20 2,бЗ±0,09 2,87±0,14 3,62±0,05

10 мг/кг) после введения 2,05±0,07* 3,5±0,48 2,89±0,2 2,74±0,1*

* - достоверно по отношению к исходным данным. Р<0,01

У крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов после введения дистиллированной воды болевая чувствительность повышается, о чем свидетельствует снижение латентного периода отдергивания хвоста на 34,1 % (Р<0,05) во втором, на 35,8 % (Р=0,01) - в третьем и на 52,4 % (Р<0,001) четвертом периоде эксперимента (табл. 2). Коэффициент адаптации при этом снижается до 0,57±0,06, что свидетельствует о повышении болевой чувствительности крыс после введения дистиллированной воды в организм и связанных с этой процедурой манипуляций.

У крыс с низкой степенью адаптации болевви рецепторов время отдергивания хвоста в первые два периода повышается (на 14,8 % и 17,4 % соответственно, Р<0,05), а в последующие сроки исследования (табл. 2) снижается (на 23,1 % и 36,3 % соответственно, Р<0,001). Коэффициент адаптации снижается с 0,94±0,02 до 0,53±0,03, так же как у крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов. Следовательно, отлов, фиксация и введение дистиллированной воды в желудок крыс способствует повышению болевой чувствительности, что связано с повышением активности симпатической нервной системы.

У крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов после введения Ь-аргинина болевая чувствительность повышается в третий и четвертый периоды исследования, о чем свидетельствует снижение латентного периода отдергивания хвоста на 29,8 % (Р=0,005) в третьем и на 42,3 % (Р<0,001) четвертом периоде эксперимента (табл. 2). Коэффициент адаптации при этом снижается до 0,7¡±0,06, что свидетельствует о. повышении болевой чувствительности крыс после введения Ь-аргинина.

У крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов время отдергивания хвоста после введения Ь-аргинина не изменяется в течение всего эксперимента (табл.3).

Введение тримиксана (1 мг/кг) крысам с высокой степенью адаптации болевых рецепторов сопровождается снижением латентного времени отдергивания хвоста в течении всего эксперимента (на 25,7 % в первом, на 53,6 % во втором, на 19,4 % в третьем и на 51,2 % в четвертом периодах, Р<0,001). У крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов продолжительность латентного периода отдергивания хвоста снижается на 38,5 % (Р<0,001), а в последующие сроки отмечается лишь тенденция к снижению (табл. 3). Коэффициент адаптации болевых рецепторов у крыс с повышенной чувствительностью болевых рецепторов снижается на 35,3 % (Р<0,005) через 2 часа после введения тримиксана, а у крыс с высокой степенью адаптации повышается на 42,2 % (Р=0,001).

Введение тримиксана (10 мг/кг) крысам с высокой степенью адаптации болевых рецепторов не изменяет латентное время отдергивания хвоста в течении всего эксперимента (табл. 2). У крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов продолжительность латентного периода отдергивания хвоста снижается на 37,75 % (Р<0,0001) в третий период и на 36,55 % (Р<0,0001) в четвертый период эксперимента (табл. 3). Коэффициент адаптации

болевых рецепторов у крыс с повышенной чувствительностью болевых рецепторов снижается на 14,2 % на уровне тенденции через 2 часа после введения тримиксана.

Таблица 3 - Продолжительность латентного периода отдергивания хвоста' у крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов (п=б)

Группа животных Латентное время отдергивания хвоста, с

1 период | 2 период 3 период 4 период..,

1 (вода) ДО введения 2,8440,12 2,1940,13 2,5540,02 1,9640,07* 2,6740,07; Г;,

после введения 3,2&Ю,16* 2,5740,04* 1,740,09*

2 (Ь-аргинин 20мпкг) ДО введения 5,7Ш,18 4,7540,94 43340,76 4,92±1,03* .

после введения 6,7842,02 6,140,77 5,7741,07 5,744137

3 (ЫМАМЕ 20мг/кг) до введения 6,4Ш,45 > : : 4,7340,59 4,574037 3,9440,45

после введения 33140,26* ¡< 5,8940,55 3,8440,55 3,6±0,42

4 (тримиксан 1 мг/кг) ДО введения 5,5640,29 4,444031 3,554032 4^&±0,13

после введения 3,42±0,07* 43940,13 3,2940,1 4,064031

5 (тримиксан 10 мг/кг) ДО введения ' 5,Ш,22 4,6340,4 4,040,22 3,9540,23

после введения 4,13±# 2,640,17 2,4940,14* 2,5! ±0,04*

6 (хлофузан 1 мг/кг) ДО введения 4,0140,19 3,6340,2 3,0240,14 3,2140,22

после введения 3,71±0,17 3,2440,52 3,224034 23140,27* .

7 до введения 2,8040,05 2,5640,06 2,6440,06 , 2,2940,08

Юмпкг) после введения 2,1740,06* 1,7640,06* 2,2340,08* 2,1740,05

8 ДО введения 5,14*0,54 2,98±0,18 2,674033.. 2,8540,47 :

(фешжсан 1 мг/кг) после введения ЗЗШ.44* 2,4140,1* 2,8440,13 1,8840,43

* - достоверно по отношению к исходным данным, Р<0.01

Через 2 часа после введения хлофузана (1 мг/кг) у крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов латентное время отдергивания хвоста повышается на 19,8 % (Р<0,005) в первый период исследования, а в последующие периоды отмечается тенденция к повышению болевой чувствительности (табл. 2). У крыс с низкой адаптацией болевых рецепторов продолжительность латентного периода отдергивания хвоста снижается к четвертому периоду эксперимента на 28 % (Р<0,05), а в первые три периода отмечается лишь тенденция к снижению. Коэффициент адаптации болевых рецепторов снижается на 15,6 % (Р<0,005) у крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов и на 23,5 % (Р=0,05) у крыс с низкой степенью адаптации.

Черкез 2 часа после введения хлофузана (10 мг/кг) у крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов латентное время отдергивания хвоста снижается на 30,95 % (Р<0,05) во второй период исследования, на 38,5 % (Р=0,001) в третий период и на 51,17 % (Р<0,0001) в четвертый период эксперимента (табл. 2). У крыс с низкой адаптацией болевых рецепторов продолжительность латентного периода отдергивания хвоста снижается на 23,92 % (Р<0,0001) в первый период исследования, на 31,25 % (Р<0,0001) во второй период и на 15,5 % (Р<0,005) в третий период эксперимента (табл. 3). Коэффициент адаптации болевых рецепторов снижается на 68,0 % (Р<0,005) у крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов и повышается на 21,95 % (Р<0,01) у крыс с низкой степенью адаптации.

На введение фениксана (1 мг/кг) крысы с высокой степенью адаптации болевых рецепторов реагируют снижением латентного периода отдергивания хвоста на 45,4 % к четвертому периоду эксперимента, тогда как в первый и третий периоды отмечается тенденция к повышению болевой чувствительности, а во второй период - тенденция к ее снижению. У крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов продолжительность латентного периода отдергивания хвоста снижается на 35,6 % (Р<0,05) в первый период, на 19,1 % (Р=0,01) во второй период эксперимента и достоверно не изменяется к третьему и четвертому периодам. Коэффициент адаптации болевых рецепторов снижается на 41,3 % (Р=0,001) у крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов и повышается на 21,4 % (Р<0,05) у крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов.

На введение фениксана (10 мг/кг) крысы с высокой степенью адаптации болевых рецепторов реагируют снижением латентного периода отдергивания хвоста на 29,31 % к первому периоду эксперимента и на 24,3 % к четвертому периоду, тогда как во второй и третий периоды отмечается тенденция к повышению болевой чувствительности. Коэффициент адаптации болевых рецепторов повышается на уровне тенденции у крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов.

На введение Ь-ЫАМЕ (20 мг/кг) - неспецифического блокатора N0-синтазы крысы с высокой степенью адаптации болевых рецепторов реагируют снижением латентного периода отдергивания хвоста на 24,1. % (Р=0,01) к

третему периоду эксперимента, в остальные периоды отмечается только тенденция к снижению. У крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов продолжительность латентного периода отдергивания хвоста снижается на 48,76 % (Р<0,0001) в первый период, достоверно не изменяется ко второму, третьему и четвертому периодам. Коэффициент адаптации болевых рецепторов повышается на 12,6 % (Р<0,1) у крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов и на 80,0 % (Р<0,0001) у крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов.

Из результатов исследований следует, что введение в организм соединений бензофуроксанового ряда в дозе 1 мг/кг оказывает проноцицептивный эффект независимо от первоначальной степени болевой чувствительности. Исключением является лишь хлофузан, который способствует снижению болевой чувствительности у крыс с первоначально высокой степенью адаптации болевых' рецепторов. Известно, что введение в организм тримиксана способствует повышению концентрации нитрат - и иитрит-анионов в сыворотке крови в 1,6 раза (Р<0,0001), хлофузана - в 1,1 раза (Р<0,0001) и фениксаиа - в 2,7 раза (Р<0,0001). Следовательно, повышение сывороточной концентрации нитрат- и нитрит-анионов более чем в 1,5 раза способствует повышению болевой чувствительности крыс, а меньшее содержание нитратов и нитритов сопровождается активацией антиболсвой системы. Такая зависимость характерна для крыс с высокой степенью адаптации болевых рецепторов. В организме крыс с низкой степенью адаптации болевых рецепторов все вводимые соединения проявляют проноцицептивный эффект, который наиболее ярко выражен у хлофузана. Это можно объяснить повышением концентрации нитрозотиолов сыворотки крови через 2 часа после введения хлофузана в 2,87 раза (Р<0,0001), фениксаиа - в 1,72 раза (Р<0,0001) и тримиксана - в 2,22 раза (Р<0,0001). Следовательно, чем больше концентрация нитрозотиолов в сыворотке крови, тем выраженное проявляется проноцицептивный эффект соединений в организме крыс с первоначально низкой степенью адаптации болевых рецепторов.

Таким образом, соединения бензофуроксанового ряда оказывают проноцицептивный эффект при внутрижелудочном введении в организм в дозе 1 мг/кг. Выраженность проноцицептивного эффекта зависит от степени повышения концентрации нитрозотиолов в сыворотке крови: чем больше, их концентрация, тем более выражен эффект. Внугрижсяудочкое введение хлофузана в дозе 1 мг/кг сопровождается снижением болевой чувствительности у крыс с первоначально высокой степенью адаптации болевых рецепторов.

3.7. Поведенческие и условнорефлскторныс реакции крыс при внутрижелудочном введении беизофуроксанов

Однократная нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг) способствует повышению исследовательской активности (повышение количества вертикальных стоек, заглядываний за бортик) и снижению тревожности

(снижение актов незавершенного груминга, актов замирания) белых крыс в приподнятом крестообразном лабиринте.

В поведенческой модели «открытое поле» тримиксан повышает количественную интенсивность норкового рефлекса при уровне тревожности аналогичном контролю.

ВЫВОДЫ

1. Соединения фуроксанового ряда - тримиксан, хлофузан, фениксан оказывают выраженный эффект на функциональное состояние нитроксидергической системы организма.

2. Нитроксидергическое состояние организма белых крыс высоколабильно, зависит от возраста и пола. В плазме крови самок белых крыс 5-6 месячного возраста суммарное количество нитрит- и нитрат-анионов в 1,1 раза (37,52±0,16 мкмоль/л против 34,41±0,21 мкмоль/л, Р<0,0001), а содержание 8-нитрозотиолов в 1,8 раза (3,43±0,26 мкмоль/л против 1,89±0,34 мкмоль/л, Р<0,005) больше, чем,.у самцов такого же возраста. У крыс старше 1,5 лет содержание метаболитов оксида азота ниже, чем у молодых и составляет: нитрат- и нитрит-анионов - 30,02±0,52 мкмоль/л (Р<0,0001), Б-нитрозотиолов -0,85±0,34 мкмоль/л (Р<0,005). .

3. Нафузка организма белых крыс бензофуроксанами в дозе 1 мг/кг сопровождается повышением количества стабильных метаболитов оксида азота в крови, а в дозе 10 мг/кг - снижением. Введение тримиксана в дозе 10 мг/кг приводит к снижению количества нитрит- и нитрат-анионов в 1,2 раза (Р<0,0001), хлофузаном - в 1,1 раза (Р<0,05), а фениксаном - в 1,2 раз (Р<0,01) по сравнению с исходным уровнем. Нагрузка тримиксаном в дозе 1 мг/кг сопровождается повышением количества стабильных метаболитов в 1,6 раз (Р<0,0001), хлофузаном - в 1,1 раза (Р<0,05), а фениксаном - в 2,7 раза (Р<0,001). Количество депонированного оксида азота в крови повышается при поступлении тримиксана в дозе 1 мг/кг в 2,22 раза, хлофузана - в 2,87 раза, фениксана - в 1,72 раза (Р<0,001).

4. Нитрозамещенные бензофуроксана обеспечивают преимущественно окисление образовавшегося оксида азота до нитрит- и нитрат-анионов, а хлорзамещенные - депонирование его в организме в виде Б-нитрозотиолов.

5. На однократную нагрузку, связанную с отловом, фиксацией и введением в желудок дистиллированной воды при помощи металлического зонда организм крыс отвечает снижением БАС в 1,21 раза (Р=0,01), повышением ЛАС в 1,16 раза (Р=0,01). На многократные манипуляции (21 день) организм реагирует увеличением БАС на 7-й день в 1,14 раза (Р=0,005), ЛАС - в 1,26 раза (Р<0,05), на 21-й день - увеличением БАС в 1,11 раза (Р<0,05), ФИ 30 - в 1,03 раза (Р<0,05).

6. На однократную нагрузку Ь-аргинином (20 мг/кг) организм реагирует повышением ЛАС в 1,49 раза (Р=0,0001), снижением БАС в 1,28 раза (Р=0,01).

При ежедневной нагрузке L-аргинином ЛАС белых крыс на 7-й день эксперимента в 1,1 раза ниже (Р<0,05), чем в контроле.

7. При однократной нагрузке тримиксаном (10 мг/кг), приводящей к снижению оксида азота в организме, показатели системы неспецифической резистентности снижаются: БАС - в 1,28 раза (Р<0,05), ФЧ 30- в 1,46 раза (Р<0,001), ФЧ 120 - в 1,48 раза (Р<0,005), а ЛАС повышается в 1,31 раза (Р<0,005).

8. Однократная нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг), повышающими образование S-нитрозотиолов в 2 и более раза (тримиксан и хлофузан), способствует повышению факторов гуморального иммунитета: БАС - в 1,22 -1,24 раза (Р<0,001) и ЛАС в 1,3-1,34 раза (Р<0,001). На многократную нагрузку (21 день) бензофуроксанами в дозе 5 мг/кг организм белых крыс отвечает преимущественно снижением факторов неспецифической резистентности, а в дозе 1 мг/кг - повышением ЛАС при неизменности остальных факторов.

9. При внутрижелудочной нагрузке бензофуроксанами (1 мг/кг) общее количество лейкоцитов остается неизменным, за исключением нагрузки тримиксаном, сопровождающейся их снижением в 1,41 раза (Р<0,01). В лейкоформуле увеличивается относительное количество моноцитов на 20-й , день (нагрузка фениксаном), лимфоцитов на 10-й день (нагрузка тримиксаном). Многократная нагрузка хлофузаном (30 дней) оказывает стимулирующее влияние на систему клеточного иммунитета, что проявляется повышением количества В-лимфоцитов (Р<0,05) при одновременном снижении Т-супрессоров (Р=0,01).

10. Обратимые отрицательные инотропный и хронотропный эффекты бензофуроксанов на изолированное сердце лягушки проявляются при перфузии 0,01% раствора, положительный инотропный эффект - при воздействии 0,00001 % раствора тримиксана и 0,001 % раствора фениксана. Хлофузан проявляет только отрицательный инотропный эффект во всех концентрациях. Бензофуроксаны проявляют стойкий вазодилятаторный эффект периферических кровеносных сосудов.

11. Длительное введение бензофуроксанов (1 мг/кг) сопровождается снижением активности общей альфа-амилазы, щелочной фосфатазы во все сроки исследования и повышением активности АЛТ и ACT на 20-й день и возвратом до исходного уровня к концу эксперимента.

12. Нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг) способствует поддержанию концентрации al-глобулинов и мочевины в крови на оптимальном уровне во все сроки исследования по сравнению с контролем, где уровень al -глобулинов снижается в 1,2 раза (Р<0,005), а мочевины повышается в 1,8 раза (Р<0,005) в ответ на нагрузку дистиллированной водой. Концентрация мочевой кислоты в ' сыворотке крови белых крыс повышается при нагрузке тримиксаном в 1,18 раза (Р<0,005), фениксаном - в 1,6 раза (Р<0,005) и снижается при нагрузке хлофузаном в 1,26 раза (Р<0,005) на 20-й и 30-й дни эксперимента. , Концентрация триглицеридов в сыворотке крови белых крыс снижается при

нагрузке тримиксаном в 4,08 раза (Р<0,05), фениксаном - в 3,13 раза (Р<0,05) на 30-й день эксперимента.

13.. Бензофуроксаны оказывают проноцицелтивный эффект при внутрижелудочном введений в организм в дозе 1 мг/кг.

14. Однократная нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг) способствует повышению исследовательской активности (повышение количества вертикальных стоек, заглядываний за бортик) и снижению тревожности (снижение актов незавершенного груминга, актов замирания) белых крыс в приподнятом крестообразном лабиринте.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гарипов, ТВ. Направленный синтез химических соединений -основной путь создания новых лекарственных средств / Т.В. Гарипов, Р.Г. Каримова, Д.Р. Ишкаева, М.К. Шйндала, М.Ю. Кленков // Ученые записки КГАВМ имени Н.Э. Баумана.- 2003: - Т.177. - С.27-33 *

2. Левинсон, Ф.С. Синтез и биологическая активность ариламинозамещенных нитробензодифуразана / Ф.С. Левинсон, М.И. Евгеньев, Е.А. Ермолаева, С.И. Ефимов, Т.В. Гарипов, Р.Г. Каримова // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. -Т.37. - №10. - С. 12-15. *

3. Левинсон, Ф.С. Синтез и биологическая активность замещенных бензодяфуразанов / Ф.С. Левинсон, М.И. Евгеньев, Е.А. Ермолаева, С.И. Ефимов, Т.В. Гарипов, Р.Г. Каримова // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. - Т.З7. -№11.-С.14-16. *

4. Каримова, Р.Г. Влияние хлофузана на эмбриогенез белых крыс / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Материалы научно-производственной конференции, по актуальным проблемам агропромышленного комплекс а. - Казань, 2003. - С. 224216

5. Каримова, Р.Г. Формирование сенсорно-двигательных рефлексов белых крыс в ранний постнатальный период онтогенеза под влиянием фуроксанов / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2004. - Т. 179. - С. 177-182 *

6. Каримова, Р.Г. Исследовательское поведение белых крыс иод влиянием хлофузана / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Научные труды 1 съезда физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс 19-23 сентября 2005 года) - Москва, 2005. - Т. 1. -С. 45

7. Каримова, Р.Г. Ориентировочно-исследовательское поведение белых крыс в условиях введения в организм химических соединений из ряда фуроксанов / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2006. - Т. 183.-С. 102-108 *

8. Каримова, Р.Г'. Становление нервной системы белых крыс в ранний постнатальный период под влиянием хлофузана / Р.Г. Каримова // Материалы конференции молодых ученых и специалистов КГАВМ. - Казань, 2006. - С.38-40.

9.; Каримова, Р.Г. Этологический анализ груминга белых крыс в различных условиях / Р.Г. Каримова // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. -2006. - Т. 185.-С. 134-138 *

10. Каримова, Р.Г. Поведение белых крыс в лабиринте в зависимости от степени болевой чувствительности / Р.Г. Каримова // Ученые записки КГАВМ

. им. Н.Э. Баумана. - 2008. - Т. 192. - С. 319-323 *

11. Каримова, Р.Г. Состояние неспецифической резистентности организма белых крыс после введения тримиксана /.Р.Г. Каримова // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2009. - Т. 197. - С. 248-253 *

12. Каримова, Р.Г. Система оксида азота белых крыс0при однократном ~ поступлении тримиксана в организм / Р.Г. Каримова // Ученые записки КГАВМ

им. Н.Э. Баумана. - 2009. - Т. 197. - С. 253-258 * г. !

13. Каримова, Р.Г. Влияние фуроксанов на нитроксидергическую систему / Р.Г. Каримова // Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России. Материалы шестой Всероссийской дистанционной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. - пос. Персиановский, 2009. - С. 54-55

14. Каримова, Р.Г. Влияние нитробензофуроксанов на систему оксида азота белых крыс / Р.Г. Каримова // Механизмы функционирования висцеральных систем:VII Всероссийская конференция с международным участием,посвященная 160-летию со дня рождения И.П. Павлова. Тезисы докладов. - СПб.: Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, 2009. - С. 189190.

15. Каримова, Р.Г. Факторы неспецифической резистентности белых крыс под влиянием нитробензофуроксанов / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов И Механизмы функционирования висцеральных систсм:УН Всероссийская конференция с международным участием, посвященная 160-летию со дня рождения И.П. Павлова. Тезисы докладов. - СПб.: Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, 2009. - С. 191-192.

16. Каримова, Р.Г. Нитроксидергическая система: влияние соединений фуроксанового ряда / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Ветеринарная медицина домашних животных. Сборник статей. - Казань, 2009. - С. 85-88.

17. Каримова, Р.Г. Физиологические эффекты замещенного динитробензофуроксана на неспецифическую резистентность крыс / Р.Г. Каримова // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. Сборник научных трудов, посвященный 90-летию Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина. - М., 2009. -С. 116-118

18. Каримова, Р.Г. Содержание оксида азота и иитрозотиолов в крови крыс под влиянием замещенного бензодифуразана / Р.Г. Каримова // Вестник Уральской медицинской академической науки. -2009. -№ 2(25). - С. 231. *"

19. Каримова, Р.Г. Поведение белых крыс в приподнятом крестообразном лабиринте при нагрузке фуроксанами / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Адаптация и становление физиологических функций у животных.

Сборник научных тезисов Междун. научно-практ. конф., посвященной 90-летию со дня основания кафедры физиологии животных ФГ'ОУ ВПО «Московская ветеринарная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» и присвоению ей имени профессора Голикова Александра Николаевича (Москва, ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 12-16 апреля 2010 года).-М.,2010.-С. 69-72.

20. Каримова, Р.Г. Поведение белых крыс в приподнятом крестообразном лабиринте при нагрузке фениксаном / Р.Г. Каримова // XXI съезд физиологического общества имени И.П. Павлова. Тезисы докладов. - М. - Калуга: Типография ООО «БЭСТ-принт», 2010. - С.263-264

21. Каримова, Р.Г. Полезный приспособительный эффект нитроксидергической системы / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Известия Самарской сельскохозяйственной академии. - 2011. - № 1. - С.42-46 *

22. Каримова, Р.Г. Состояние гуморального иммунитета при поступлении замещенного безодифуразана в организм белых крыс / Р.Г. Каримова// ВёстнИк Казанского государственного аграрного университета. -2011.-Х» 1 (19)-С. 123-124 *

23. Каримова, Р.Г. Интенсивность метаболизма организма крыс при длительном поступлении замещенного бензодифуразана / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Вестник Казанского государственного аграрного университета. -2011.I (19)-С. 123-124 *

24. Каримова, Р.Г. Состояние метаболизма белых крыс под влиянием смеси нитробензофуроксанов / Р.Г. Каримова // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2011. - Т. 206. - С. 93-98 *

25. Каримова, Р.Г. Функциональное состояние изолированного сердца лягушки под влиянием бензофуроксанов / Р.Г. Каримова, Т.В. Гарипов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2011. - Т. 206. - С. 98-103 *

*- публикации в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ

Подписано к печати 25. 05. Н. Заказ 83 Тираж 100 Бумага офсетная

Формат 60x84/16 Усл. печ.л. 2.0 Печать ИЗО

Цент информационных технологий КГАВМ 4200074, Казань, Сибирский тракт, 35

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Каримова, Руфия Габдельхаевна

Список основных сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Физиологическая роль оксида азота в организме

1.1.1 Физико-химические свойства оксида азота (II) и образование 15 его в организме

1.1.2 Физиологические эффекты оксида азота на систему крови и кровообращения

1.1.3 Физиологические эффекты оксида азота на нервную систему

1.1.4 Физиологические эффекты оксида азота на систему дыхания

1.1.5 Физиологические эффекты оксида азота на систему пищеварения

1.1.6 Физиологические эффекты оксида азота на систему выделения

1.1.7 Роль оксида азота в регуляции сократительной активности гладких мышц

1.2 Доноры оксида азота 41 2 Собственные исследования

2.1 Материалы и методы исследований

2.2 Результаты исследований 53 2.2.1 Полезный приспособительный результат деятельности нитроксидергической системы 53 2.2.1.1. Полезный приспособительный результат деятельности нитроксидергической системы в организме интактных белых крыс

2.2.1.1.1 Содержание суммарного количества нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови интактных белых крыс

2.2.1.1.2 Содержание 8-нитрозотиолов в плазме крови интактных белых крыс

2.2.1.2 Уровень оксида азота в организме белых крыс при нагрузке Ь-аргинином

2.2.1.2.1 Содержание суммарного количества нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови белых крыс при нагрузке Ь-аргинином

2.2.1.2.2 Содержание 8-нитрозотиолов в плазме крови белых крыс при нагрузке Ь-аргинином

2.2.1.3 Уровень оксида азота в организме белых крыс при нагрузке бензофуроксанами

2.2.1.3.1 Содержание суммарного количества нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови белых крыс при нагрузке бензофуроксанами

2.2.1.3.2 Содержание 8-нитрозотиолов в плазме крови белых крыс при нагрузке фуроксанами

2.2.2 Состояние неспецифической резистентности белых крыс

2.2.2.1 Факторы гуморального иммунитета белых крыс '

2.2.2.1.1 Бактерицидная активность сыворотки крови

2.2.2.1.1.1 Бактерицидная активность сыворотки крови 71 интактных белых крыс

2.2.2.1.1.2 Бактерицидная активность сыворотки крови 72 белых крыс при нагрузке дистиллированной водой

2.2.2.1.1.3 Бактерицидная активность сыворотки крови белых крыс после нагрузки Ь-аргинином

2.2.2.1.1.4 Бактерицидная активность сыворотки крови белых крыс после нагрузки бензофуроксанами в разных дозах

2.2.2.1.2 Лизоцимная активность сыворотки крови

2.2.2.1.2.1 Лизоцимная активность сыворотки крови интактных белых крыс

2.2.2.1.2.2 Лизоцимная активность сыворотки крови белых крыс при нагрузке дистиллированной водой

2.2.2.1.2.3 Лизоцимная активность сыворотки крови белых крыс после нагрузки Ь-аргинином

2.2.2.1.2.4 Лизоцимная активность сыворотки крови белых крыс после нагрузки бензофуроксанами 87 2.2.2.2 Факторы клеточного иммунитета белых крыс

2.2.2.2.1 Динамика изменения количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.2.2.2 Фагоцитарная активность нейтрофилов крови белых крыс

2.2.2.2.2.1 Фагоцитарная активность нейтрофилов крови интактных белых крыс

2.2.2.2.2.2 Фагоцитарная активность нейтрофилов крови белых крыс при нагрузке дистиллированной водой

2.2.2.2.2.3 Фагоцитарная активность нейтрофилов крови белых крыс после нагрузки Ь-аргинином

2.2.2.2.2.4 Фагоцитарная активность нейтрофилов крови белых крыс после нагрузки фуроксанами

2.2.2.2.3 Динамика изменения количества Т- и В-лимфоцитов при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.3 Содержание эритроцитов и гемоглобина в крови белых крыс при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.4 Функциональные показатели деятельности сердца и сосудов под влиянием бензофуроксанов

2.2.4.1 Функциональные показатели деятельности сердца под влиянием бензофуроксанов 134 2.2.4.1.1 Функциональные показатели деятельности изолированного сердца лягушки под влиянием бензофуроксанов

2.2.4.2 Функциональные показатели деятельности сердца белых крыс под влиянием бензофуроксанов

2.2.4.2 Функциональные показатели деятельности кровеносных сосудов под влиянием бензофуроксанов

2.2.4.2.1 Функциональные показатели деятельности кровеносных сосудов изолированной лапки лягушки озерной под влиянием бензофуроксанов

2.2.4.2.2 Функциональные показатели деятельности кровеносных сосудов белых крыс при введении бензофуроксанов

2.2.5 Биохимический состав крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.5.1 Ферментный состав крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.5.2 Динамика изменения содержания общего белка и белковых фракций в сыворотке крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.5.3 Динамика изменения содержания мочевины, мочевой кислоты и креатинина в сыворотке крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.5.4 Динамика изменения содержания триглицеридов и холестерина в сыворотке крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.5.5 Динамика изменения содержания глюкозы в сыворотке крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.5.6 Динамика изменения содержания кальция и фосфора в сыворотке крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм

2.2.6 Болевая чувствительность белых крыс при нагрузке бензофуроксанами 200 2.2.6 Поведенческие реакции белых крыс при нагрузке бензофуроксанами 210 2.2.6.1 Поведенческие реакции белых крыс в приподнятом крестообразном лабиринте при нагрузке бензофуроксанами 210 2.2.6.1 Поведенческие реакции белых крыс в открытом поле при нагрузке бензофуроксанами 212 2.2.7 Условнорефлекторные реакции белых крыс при нагрузке бензофуроксанами

Введение Диссертация по биологии, на тему "Комплексная нитроксидергическая реакция организма на соединения бензофуроксанового ряда"

Актуальность исследования. В конце XX столетия было установлено, что оксид азота (N0) является одним из универсальных и необходимых регуляторов клеточного метаболизма (L. J. Ignarro, P. A. Bush, G.M. Buga, 1990; L. J. Ignarro, F. Murad, 1995; R.F. Furchgott, D. Jothianandan, 1991). Выяснилось, что этот газ, молекула которого является короткоживущим и легко подвергающимся химическим трансформациям свободным радикалом, непрерывно ферментативно продуцируется в организме млекопитающих, оказывая воздействие на различные физиологические и патофизиологические процессы. Изучение роли NO позволило установить, что оксид азота — газообразный мессенджер, выступающий в роли универсального модулятора разнообразных функций организма, включая регуляцию дыхания, поддержания сердечно-сосудистого гомеостаза, иммунного статуса организма, активности макрофагов, экспрессии генов, пластичности нервной ткани, памяти, высвобождения нейротрансмиттеров (S. Moneada, R.M.G. Palmer, Е.А. Higgs, 1991; Т.М. Dawson, S.H. Snyder, 1994; X.M. Марков, 1996). Оксид азота выполняет роль нейромодулятора в центральной нервной системе и в нервно-мышечных синапсах (A.B. Турин, 1997; А.Х. Уразаев, А. Л. Зефиров, 1999; Г.Ф. Ситдикова, A.JI. Зефиров, 2006).

Открытие разнообразных физиологических ролей оксида азота в организме привело к широкому изучению и применению химических соединений, являющихся донорами или ингибиторами оксида азота (В.Г. Граник, Н.Б. Григорьев, 2002; Колосов Ю.А., Муляр А.Г., Гасанов М.Т. и др., 2006).

Экзогенные доноры оксида азота используются и для создания модельных систем, на которых изучаются эффекты влияния NO (JI.JI. Гудков, К.Б. Шумаев, Е.И. Каленикова и др., 2007). Такие модели упрощают имеющуюся в организме систему взаимодействия оксида азота с клетками, так как при использовании экзогенных доноров N0 система оказывается независимой от МЮ-синтаз и их регуляции, и в этом случае отсекаются эффекты других сигнальных веществ.

Одним из классов гетероциклических соединений, производные которого проявляют 1ЧО-донорские свойства, являются фуроксаны (В.Г. Граник, 2003). Эти соединения представляют большую ценность тем, что в организме происходит их медленная трансформация, что позволяет избежать развития нитратной толерантности (А. Запкагапагауапап, 2003).

При этом остается актуальным изучение приспособительных нитроксидергических реакций целостного организма на поступление экзогенных доноров оксида азота. Выявление физиологических эффектов соединений фуроксанового ряда на различные системы организма позволит дать комплексное представление о роли оксида азота без учета влияния активности ферментов (ЬЮ-синтаз), а также раскроет пути дальнейшего исследования их в роли корректоров состояния нитроксидергической системы, послужит основой для создания новых биологически активных средств.

Цель и задачи исследований

Целью исследования явилось изучение комплексной нитроксидергической реакции организма на внутрижелудочное введение соединений бензофуроксанового ряда.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Определить динамику изменения количества оксида азота в крови белых крыс при нагрузке бензофуроксанами в зависимости от пола и возраста.

2. Изучить физиологические эффекты бензофуроксанов на систему неспецифической резистентности организма.

3. Определить динамику изменения количества эритроцитов и гемоглобина крови при длительном поступлении бензофуроксанов в организм белых крыс.

5. Определить динамику изменения ферментов сыворотки крови, а также некоторых конечных и промежуточных продуктов обмена веществ: белкового - общего белка, белковых фракций, мочевины, мочевой кислоты, креатинина; углеводного - глюкозы; липидного - триглицеридов и холестерина; минерального - кальция и фосфора при длительном поступлении бензофуроксанов в организм белых крыс.

6. Изучить болевую чувствительность белых крыс при нагрузке бензофуроксанами.

7. Изучить поведенческие и условнорефлекторные реакции белых крыс при нагрузке бензофуроксанами.

Научная новизна исследования

Впервые изучена комплексная физиологическая реакция организма на введение соединений бензофуроксанового ряда и установлено, что смесь 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксана, 5,7-дихлор-6-нитробензофуроксана и 5,7-дихлор-4-нитробензофуроксана (тримиксан); 4-хлор-6,7фуроксанобензофуразан (хлофузан); 5,7-бис(4-гидроксифениламино)-4,6-динитробензофуроксан (фениксан) оказывают выраженный эффект на нитроксидергическое состояние организма.

Впервые раскрыта динамика изменения количества метаболитов оксида азота, эритроцитов и гемоглобина, ферментов, конечных и промежуточных продуктов обмена веществ (белкового, углеводного, липидного и минерального) в крови крыс при длительном поступлении бензофуроксанов в организм. Определена ответная реакция системы неспецифической резистентности на введение в организм бензофуроксанов в дозах понижающих или повышающих количество метаболитов оксида азота в плазме крови. Установлено, что тримиксан (10 мг/кг) в дозе, приводящей к снижению оксида азота в организме, способствует снижению показателей системы неспецифической резистентности, а нагрузка бензофуроксанами в дозе 1 мг/кг сопровождается повышением лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови.

Выявлены отрицательный хронотропный, инотропный эффекты изученных бензофуроксанов в виде 0,01% концентрации и положительный инотропный эффект 0,00001 % тримиксана, 0,001 % раствора фениксана на изолированном сердце лягушки. Установлен вазодилятаторный эффект изученных соединений.

Изучены поведенческие реакции крыс при поступлении бензофуроксанов и выявлено повышение их исследовательской активности в поведенческих моделях «открытое поле» и приподнятый крестообразный лабиринт.

Основные положения, выносимые на защиту

2. Однократная нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг), повышающими образование 8-нитрозотиолов в 2 и более раза (тримиксан и хлофузан), способствует активации факторов гуморального иммунитета. На многократную нагрузку бензофуроксанами в дозе 5 мг/кг организм белых крыс отвечает преимущественно снижением факторов неспецифической резистентности, а в дозе 1 мг/кг - повышением ЛАС при неизменности остальных факторов.

4. Соединения бензофуроксанового ряда оказывают проноцицептивный эффект и способствуют повышению исследовательской активности белых крыс при внутрижелудочном введении в организм в дозе

1 мг/кг.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Результаты исследований носят фундаментальный характер и содержат новые решения актуальной научной проблемы выяснения состояния нитроксидергической системы организма. Установленные факты о высокой лабильности нитроксидергической системы в зависимости от пола и возраста животных позволяют научно обоснованно организовывать эксперименты и создавать оптимальные условия для грамотной интерпретации полученных результатов. Выявленные закономерности изменения нитроксидергического состояния в норме и под влиянием нагрузок, связанных с фиксацией, внутрижелудочным введением различных веществ, расширяют наши представления о ряде положений возрастной физиологии животных, состоянии клеточного и гуморального иммунитета, сердечно-сосудистой деятельности и позволят разработать эффективные способы их коррекции.

Результаты исследований внедрены в учебный процесс в ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», ФГОУ ВПО «Ульяновская сельскохозяйственная академия», ФГОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия».

Апробация результатов исследования

Основные результаты диссертационной работы доложены на научно-производственной конференции, по актуальным проблемам агропромышленного комплекса (Казань, 2003, 2004, 2006); Всероссийской конференции физиологов, повященной 100-летию доктора биологических наук, профессора E.H. Павловского (Казань, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, составом рациона, продуктивностью, экологией и этологией» (Казань, 2006); I съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); конференции молодых ученых и специалистов КГАВМ (Казань, 2006); Всероссийской дистанционной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России» (пос. Персиановский, 2009); VII Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 160-летию со дня рождения И.П. Павлова «Механизмы функционирования висцеральных систем», (Санкт-Петербург, 2009); конференции, посвященной 90-летию Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Москва, 2009); IV Съезде физиологов Урала (Екатеринбург, 2009); Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию со дня основания кафедры физиологии животных ФГОУ ВПО «Московская академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» и присвоению ей имени профессора Голикова Александра Николаевича (Москва 2010); XXI съезде физиологического общества имени

И.П. Павлова (Калуга, 2010); расширенном заседании кафедры физиологии и фармакологии ФГОУ ВПО «КГАВМ имени Н.Э. Баумана».

Публикации результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 26 работ (из них 15 в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ)

Объем и структура диссертации

Диссертация объемом 272 страницы состоит из введения, обзора литературы, изложения объектов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Список цитируемой литературы включает 328 названий, из них 97 отечественных и 231 иностранных авторов. Диссертация содержит 116 рисунков и 16 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Каримова, Руфия Габдельхаевна

выводы

2. Нитроксидергическое состояние организма белых крыс высоколабильно, зависит от возраста и пола. В плазме крови самок белых крыс 5-6 месячного возраста суммарное количество нитрит- и нитрат-анионов в 1,1 раза (37,52±0,16 мкмоль/л против 34,41±0,21 мкмоль/л, Р<0,0001), а содержание 8-нитрозотиолов в 1,8 раза (3,43±0,26 мкмоль/л против 1,89±0,34 мкмоль/л, Р<0,005) больше, чем у самцов такого же возраста. У крыс старше 1,5 лет содержание метаболитов оксида азота ниже, чем у молодых и составляет: нитрат- и нитрит-анионов - 30,02±0,52 мкмоль/л (Р<0,0001), 8-нитрозотиолов - 0,85±0,34 мкмоль/л (Р<0,005).

3. Нагрузка организма белых крыс бензофуроксанами в дозе 1 мг/кг сопровождается повышением количества стабильных метаболитов оксида азота в крови, а в дозе 10 мг/кг - снижением. Введение тримиксана в дозе 10 мг/кг приводит к снижению количества нитрит- и нитрат-анионов в 1,2 раза (Р<0,0001), хлофузаном - в 1,1 раза (Р<0,05), а фениксаном - в 1,2 раз (Р<0,01) по сравнению с исходным уровнем. Нагрузка тримиксаном в дозе 1 мг/кг сопровождается повышением количества стабильных метаболитов в 1,6 раз (Р<0,0001), хлофузаном - в 1,1 раза (Р<0,05), а фениксаном - в 2,7 раза (Р<0,001). Количество депонированного оксида азота в крови повышается при поступлении тримиксана в дозе 1 мг/кг в 2,22 раза, хлофузана - в 2,87 раза, фениксана - в 1,72 раза (Р<0,001).

6. На однократную нагрузку Ь-аргинином (20 мг/кг) организм реагирует повышением ЛАС в 1,49 раза (Р=0,0001), снижением БАС в 1,28 раза (Р=0,01). При ежедневной нагрузке Ь-аргинином ЛАС белых крыс на 7-й день эксперимента в 1,1 раза ниже (Р<0,05), чем в контроле.

8. Однократная нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг), повышающими образование 8-нитрозотиолов в 2 и более раза (тримиксан и хлофузан), способствует повышению факторов гуморального иммунитета: БАС - в 1,22 -1,24 раза (Р<0,001) и ЛАС в 1,3-1,34 раза (Р<0,001). На многократную нагрузку (21 день) бензофуроксанами в дозе 5 мг/кг организм белых крыс отвечает преимущественно снижением факторов неспецифической резистентности, а в дозе 1 мг/кг - повышением ЛАС при неизменности остальных факторов.

9. При внутрижелудочной нагрузке бензофуроксанами (1 мг/кг) общее количество лейкоцитов остается неизменным, за исключением нагрузки тримиксаном, сопровождающейся их снижением в 1,41 раза (Р<0,01). В лейкоформуле увеличивается относительное количество моноцитов на 20-й день (нагрузка фениксаном), лимфоцитов на 10-й день нагрузка тримиксаном). Многократная нагрузка хлофузаном (30 дней) оказывает стимулирующее влияние на систему клеточного иммунитета, что проявляется повышением количества В-лимфоцитов (Р<0,05) при одновременном снижении Т-супрессоров (Р=0,01).

11. Длительное введение бензофуроксанов (1 мг/кг) сопровождается снижением активности общей альфа-амилазы, щелочной фосфатазы во все сроки исследования и повышением активности AJIT и ACT на 20-й день и возвратом до мсходного уровня к концу эксперимента.

12. Нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг) способствует поддержанию концентрации а 1-глобулинов и мочевины в крови на оптимальном уровне во все сроки исследования по сравнению с контролем, где уровень al-глобулинов снижается в 1,2 раза (Р<0,005), а мочевины повышается в 1,8 раза (Р<0,005) в ответ на нагрузку дистиллированной водой. Концентрация мочевой кислоты в сыворотке крови белых крыс повышается при нагрузке тримиксаном в 1,18 раза (Р<0,005), фениксаном - в 1,6 раза (Р<0,005) и снижается при нагрузке хлофузаном в 1,26 раза (Р<0,005) на 20-й и 30-й дни эксперимента. Концентрация триглицеридов в сыворотке крови белых крыс снижается при нагрузке тримиксаном в 4,08 раза (Р<0,05), фениксаном - в 3,13 раза (Р<0,05) на 30-й день эксперимента.

13. Бензофуроксаны оказывают проноцицептивный эффект при внутрижелудочном введении в организм в дозе 1 мг/кг.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Приспособительные реакции системы оксида азота на различные раздражители необходимо учитывать при планировании и организации экспериментов.

2. Результаты исследований рекомендуется использовать при создании лекарственных средств, корректирующих состояние нитроксидергической системы и функциональных систем организма.

3. Установленные в работе приспособительные реакции системы оксида азота могут быть использованы при подготовке научной, учебно-методической литературы и в учебном процессе при подготовке и переподготовке специалистов в профильных ВУЗах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

О роли оксида азота в организме стало известно только в конце XX столетия. Ряд ученых сообщили, что оксид азота (II) является одним из универсальных и необходимых регуляторов клеточного метаболизма [L. J. Ignarro, P. A. Bush, G.M. Buga, 1990; L. J. Ignarro, F. Murad, 1995; R.F. Furchgott, D. Jothianandan, 1991], принимающий участие в регуляции системы дыхания, крови, кровообращения, нервной системы и др. [S. Moneada, R.M.G. Palmer, Е.А. Higgs, 1991; Т.М. Dawson, S.H. Snyder, 1994; X.M. Марков, 1996]. О том, что оксид азота выполняет роль нейромодулятора в центральной нервной системе и в нервно-мышечных синапсах, было сообщено A.B. Гуриным, 1997; А.Х. Уразаевым, А.Л. Зефировым, 1999; Г.Ф. Ситдиковой, А.Л. Зефировым, 2006.

Открытие разнообразных физиологических ролей оксида азота в организме привело к широкому изучению и применению химических соединений, являющихся донорами или ингибиторами оксида азота [Граник В.Г., Григорьев Н.Б., 2002; Колосов Ю.А., Муляр А.Г., Гасанов М.Т. и др., 2006].

Экзогенные доноры оксида азота используются и для создания модельных систем, на которых изучаются эффекты влияния NO [Гудков Л.Л., Шумаев К.Б., Каленикова Е.И. и др., 2007]. Такие модели упрощают имеющуюся в организме систему взаимодействия оксида азота с клетками, так как при использовании экзогенных доноров NO система оказывается независимой от NO-синтаз и их регуляции, и в этом случае отсекаются эффекты других сигнальных веществ.

Одним из классов гетероциклических соединений, производные которого проявляют NO-донорские свойства, являются фуроксаны [Граник В.Г., 2003]. Эти соединения представляют большую ценность тем, что в организме происходит их медленная трансформация, что позволяет избежать развития нитратной толерантности [Бапкагапагауапап А., 2003].

При этом остаются не изученными приспособительные нитроксидергические реакции целостного организма на поступление экзогенных доноров оксида азота. Выявление физиологических эффектов соединений фуроксанового ряда на различные системы организма позволяет дать комплексное представление о роли оксида азота без учета влияния активности ферментов (!чЮ-синтаз), а также раскрывает пути дальнейшего исследования их в роли корректоров состояния нитроксидергической системы.

В работе изучены приспособительные реакции целостного организма на поступление бензофуроксанов. Показано, что экзогенный оксид азота при введении бензофуроксанов в зависимости от применямой дозы и кратности принимает участие в регуляции состояния функциональных систем, обеспечивающих постоянство состава крови, обмена веществ, поведенческие реакции, постоянство температуры тела и других.

Комплексное исследование динамики нитроксидергической реакции организма при различных нагрузках включало в себя многочисленные физиологические, биохимические, морфологические, этологические, иммунологические, кардиографические и другие методы, которые позволили нам получить достаточно полные и объективные результаты в соответствии с поставленной целью и задачами.

Результаты наших исследований отличаются новизной, имеют важное теоретическое значение в познании в полном объеме значимости нитроксидергичесих реакций в общей схеме деятельности функциональных систем организма.

Нами впервые установлено, что бензофуроксаны в дозе 1 мг/кг стимулируют активность нитроксидергической системы, причем повышают депонирование оксида азота в виде 8-нитрозотиолов, а они образуют циркулирующий пул в физиологических условиях и способны выделять N0 при их необходимости. Из изученных соединений наибольшую МО-донорскую активность проявляет фениксан, что можно связать с наличием нитро- и гидрокси-групп в молекуле соединения. Хлофузан и тримиксан являются хлорзамещенными бензофуроксана и активируют нитроксидергическую систему в меньшей степени, причем наименьшую МО-донорскую активность проявляет хлофузан, который содержит только одну фуроксановую группу и не содержит нитрогруппы в молекуле в отличие от тримиксана, где присутствуют N02 группы. Концентрация 8-нитрозотиолов, нитрат- и нитрит- анионов в крови повышается и при нагрузке Ь-аргинином (20 мг/кг) - субстратом для МО-синтазы, а увеличение нагрузки (1000 мг/кг) вызывает обратный эффект.

Сравнительный анализ результатов исследований свидетельствует о том, что Ь-аргинин в дозе 20 мг/кг повышает в организме содержание нитрозотиолов в 5,67 раза, тогда как концентрация нитратов и нитритов увеличивается только в 1,67 раза, что свидетельствует о депонировании образовавшегося оксида азота путем реакции N0 с цистеиновыми остатками субъединиц гемоглобина или же N0 с другими тиолсодержащими молекулами (цистеин, глутатион). Снижение содержания нитрозотиолов и нитрит- и нитрат-анионов при поступлении в организм высоких доз Ь-аргинина (1000 мг/кг) объясняется снижением количества депонированного оксида азота при угнетении активности МО-синтаз. Следовательно, в организме в первую очередь оксид азота извлекается из нитрозотиолов и именно они являются физиологическим депо N0. Тогда как восстановление же оксида азота из нитратов и нитритов происходит при сильном дефиците N0 в организме. Это утверждение согласуется и с результатами исследований других авторов [Ивашкин В.Т., Драпкина О.М., 2001].

Снижение содержания нитрат и нитрит-анионов и нитрозотиолов в плазме крови отмечается и при нагрузке бензофуроксанами (10 мг/кг), что свидетельствует о саморегуляции активности нитроксидергической системы. Повышение концентрации оксида азота снижает активность >Ю-синтаз предположительно за счет синтеза конкурентного ингибитора — АДМА. При этом не отмечается зависимость ответной реакции нитроксидергической системы от структуры вводимого соединения.

Анализируя роль оксида азота в системе поддержания и регулирования естественной резистентности в организме нами установлено, что лизоцимная активность сыворотки крови повышается при введении в организм бензофуроксанов в дозах, понижающих содержание оксида азота (тримиксан - 10 мг/кг) и отрицательно коррелирует с БАС (г=-0,64).

Бактерицидная активность сыворотки крови крыс при однократной нагрузке Ь-аргинином на 22 % ниже исходного уровня (Р<0,05). Положительная корреляция (г=1) между изменением бактерицидной активности сыворотки крови при однократном введении тримиксана (10 мг/кг) и Ь-аргинина (20 мг/кг) дает основание для вывода о том, что снижение концентрации нитрозотиолов (депо оксида азота) в 1,58 раза на уровне тенденции и повышение в 5,68 раза (Р<0,00001) приводит к снижению БАС в 1,28 раза (Р=0,04). Следовательно, как угнетение активности нитроксидергической системы, так и ее гиперактивность сопровождаются снижением бактерицидной активности сыворотки крови.

Нагрузка фениксаном (1 мг/кг) вызывает аналогичное контрольной группе изменение бактерицидной активности, причиной которой являются манипуляции, проводимые с крысой — фиксация, введение металлического зонда и веществ в желудок. Тримиксан и хлофузан при введении в организм в дозе 1 мг/кг способствуют сохранению бактерицидной активности сыворотки крови на первоначальном уровне. Этот факт можно объяснить различным содержанием нитрозотиолов в плазме крови крыс при введении в организм различных бензофуроксанов. При поступлении в организм тримиксана содержание нитрозотиолов через 2 часа составляет 5,91±0,4 мкмоль/л, при введении хлофузана — 7,63±0,58 мкмоль/л, а при введении фениксана только 4,57±0,4 мкмоль/л. Следовательно, повышенное содержание нитрозотиолов обеспечивает повышение бактерицидной активности сыворотки крови, оказывая защитное действие влиянию стресс-факторов.

Активация нитроксидергической системы сопровождается повышением лизоцимной активности сыворотки крови, причем отмечается следующая зависимость: чем больше суммарная концентрация нитрозотиолов, нитрат- и нитрит-анионов в крови, тем выше ЛАС.

Общее количество лейкоцитов при ежедневной нагрузке тримиксаном снижается в 1,29 раза на тридцатый день эксперимента по сравнению с исходным уровнем (Р=0,08) и в 1,45 раза по сравнению с уровнем, отмечаемым на 20-й день эксперимента (Р=0,01). Введение хлофузана сопровождается аналогичными изменениями, а нагрузка фениксаном способствует повышению общего количества лейкоцитов в 1,23 раза (Р=0,06) на десятый день эксперимента и возвращением к исходному уровню — на 30-й день. Повышение содержания оксида азота в крови способствует снижению количества лейкоцитов по принципу обратной связи, что согласуетс и с исследованиями Голикова П.П., Николаевой Н.Ю., Матвеева С.Б. и др., 2003, сообщающих о том, что лейкоциты способны продуцировать оксид азота.

Снижение общего количества лейкоцитов крови происходит за счет снижения количества лимоцитов и моноцитов. Так, содержание лимфоцитов при нагрузке тримиксаном снижается в 1,1 раза (Р=0,07) на 10-й день эксперимента и в 1,06 раза (Р=0,002) - на 20-й день, а к 30-му дню возвращается к исходному уровню. Ежедневное внутрижелудочное введение как хлофузана, так и фениксана вызывает снижение содержания лимфоцитов в 1,12 раза (Р<0,05) на 10-й день исследований. В лейкоцитарной формуле при нагрузке тримиксаном, также как и в контрольной группе отмечается тенденция к повышению содержания моноцитов на 10-й день исследования.

Нагрузка хлофузаном способствует снижению моноцитов на 20-й день эксперимента в 2 раза (Р=0,08), а нагрузка фениксаном - повышению количества моноцитов в 1,72 раза (Р=0,01) в тот же срок исследования.

При нагрузке Ь-аргинином (20 мг/кг) снижается фагоцитарная активность нейтрофилов крови крыс, а именно фагоцитарное число 30 и 120 снизилось на 15,61 % (Р=0,04) и 16,99 % (Р=0,01) соответственно по отношению к первоначальному уровню.

На однократное введение 0,1 % суспензии тримиксана в желудок организм белых крыс реагирует повышением фагоцитарной активности нейтрофилов через два часа после введения, в частности фагоцитарный индекс 30 увеличивается на 5,6% (Р=0,04), а фагоцитарный индекс 120 — на 3,76 % (Р=0,01) от первоначального значения. Фагоцитарное число через 2 часа после нагрузки тримиксаном (10 мг/кг) достоверно снижается по сравнению с исходным уровнем: ФЧ 30 — на 31,54 % (Р=0,006), а ФЧ 120 — на 32,48 % (Р=0,002).

Нагрузка организма белых крыс исследуемыми фуроксанами меньшей дозы (1 мг/кг) не вызвала достоверных изменений фагоцитарной активности нейтрофилов крови крыс в течение эксперимента.

Тотальное количество Т-лимфоцитов достоверно не изменилось при изменении активности нитроксидергичемской системы. Общее количество Т-лимфоцитов в контрольной группе крыс повышается в 1,15 раза на уровне тенденции к 30-му дню исследования по сравнению с исходным уровнем. В результате на тридцатый день введения бензофуроксанов общее количество Т-лимфоцитов у крыс, получавших хлофузан в 1,17 раза (Р=0,036), а фениксан - в 1,14 раза (Р=0,024) меньше, чем у крыс контрольной группы. Следовательно, при поступлении хлофузана и фениксана в организм белых крыс в течение 30 дней общее количество Т-лимфоцитов не изменяется в течение эксперимента, тогда как у крыс контрольной группы при ежедневном введении дистиллированной воды исследуемый показатель повышается. Повышение общего количества Т-лимфоцитов связано с возбуждением симпатической нервной системы при длительном действии комплексного раздражителя слабой силы на организм (фиксация, введение веществ в желудок) рпгёаш 8. БЬаЬЬаг, КаукЬа УЪ-ууапаШап, 2005].

Общее количество В-лимфоцитов при введении тримиксана в организм на 30-й день эксперимента снижается в 1,17 раза (Р=0,08), а при введении хлофузана - повышается в 1,43 раза (Р=0,07) по сравнению с исходным уровнем. Длительное поступление фениксана в организм белых крыс достоверных изменений количества В-лимфоцитов не вызывает, такая же картина характерна и для контрольной группы. После 30-дневного поступления в организм бензофуроксанов общее количество В-лимфоцитов у крыс, получавших тримиксан достоверно не отличается от контрольной группы, у крыс, получавших хлофузан в 1,3 раза больше (Р=0,037), а у получавших фениксан - в 1,22 раза (Р=0,08) меньше, чем у крыс контрольной группы. Отмечается снижение количества нулевых лимфоцитов на 20-й день поступления хлофузана в организм крыс в 8,6 раза по сравнению с исходным уровнем (РИ),08). Снижение количества нулевых лимфоцитов сопровождается повышением количества В-лимфоцитов. Это является благоприятным фактором и свидетельствует о повышении резистентности организма к действию различных раздражителей, так как нулевые лимфоциты включают в себя незрелые клетки, стареющие, дефектные, киллерные и другие лимфоциты, не имеющие на мембранной поверхности определяемых рецепторов из-за блокирования их или временной утраты.

Количество теофиллинустойчивых Т-лимфоцитов или Т-хелперов достоверно не изменяется в течение эксперимента у белых крыс всех исследуемых групп. Количество теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов или Т-супрессоров повышается в контрольной группе с 21,33±8,2 % до введения дистиллированной воды до 29,00±1,87 % к тридцатому дню введения на уровне тенденции. У крыс, получавших бензофуроксаны, относительное количество Т-супрессоров не изменяется в течение эксперимента. В результате к 30-му дню исследования содержание Т-супрессоров в крови крыс, получавших хлофузан ниже в 1,5 раза (Р=0,01), а у получавших фениксан - в 1,32 раза (Р=0,03), чем у крыс контрольной группы. Повышение относительного количества Т-супрессоров связано, вероятно, с повышенным тонусом симпатической нервной системы при длительном ежедневном действии комплексного раздражителя. Избыточная активность Т-супрессоров может привести к подавлению иммунного ответа. Поступление в организм бензофуроксанов способствует сохранению соотношения Т-хелперы/Т-супрессоры на оптимальном уровне и предотвращению нежелательных последствий стрессовой реакции.

При длительном ежедневном внутрижелудочном введении тримиксана (1 мг/кг) к тридцатому дню эксперимента отмечается повышенное содержание низкоавидных Т-лимфоцитов (Р=0,01) и меньшее количество активных Т-лимфоцитов (Р=0,01) по сравнению с контролем. Остальные субпопуляции лимфоцитов не отличаются от таковых контрольной группы. Более низкое содержание активных Т-лимфоцитов связано с их повышением в контрольной группе, тогда как при введении тримиксана их относительное количество осталось неизменным.

Также введение бензофуроксанов в организм обеспечивает поддержание на оптимальном уровне среднего содержания гемоглобина в эритроците при длительном действии раздражителя.

Физиологический эффект бензофуроксанов на изолированное сердце лягушки зависит от концентрации раствора. Хлофузан и тримиксан в 0,01 % концентрации проявляют ярко выраженные обратимые отрицательные хронотропный и инотропный эффекты с последующей остановкой сердца в диастоле. Время восстановления сердца после воздействия тримиксаном более продолжительное, чем при воздействии хлофузаном. Растворы хлофузана в 0,001 % и 0,0001 % концентрациях оказывают отрицательный хронотропный эффект, но остановку сердца не вызывают, при чем отмеченный эффект усиливается при снижении концентрации хлофузана. Хлофузан в 0,0001 % концентрации блокирует инотропное влияние адреналина, несмотря на то, что сам не оказывает инотропного действия. 0,0001 % и 0,00001 % растворы тримиксана не проявляют хронотропного влияния, но проявляют выраженное положительное инотропное действие. Действие адреналина при этом не проявляется, исходя из чего, можно сделать предположение, что инотропный эффект тримиксана осуществляется за счет взаимодействия с адренорецепторами. Фениксан проявляет хронотропный эффект только в 0,01 % концентрации. Инотропный эффект зависит от концентрации растворов фениксана: в 0,01 % и 0,001 % концентрациях проявляет отрицательный инотропный эффект, а в 0,0001 % концентрации - положительный. Отрицательный инотропный эффект частично снимается адреналином - при воздействии на сердце раствором адреналина амплитуда сердечных сокращений восстанавливается 53,87±2,49 %. Фениксан в 0,00001 % концентрации блокирует действие адреналина, хотя сам при этом не проявляет ни хронотропного, ни инотропного действия. Возможно, в указанной концентрации фениксан является блокатором адренорецепторов миокарда.

Методом электрокардиографии установили, что при длительном поступлении фениксана в организм отмечается достоверное повышение продолжительности зубца Р на пятый день эксперимента (Р=0,09) и на 35-й день (Р=0,04). Поскольку зубец Р представляет собой суммарное отображение прохождения синусового импульса по проводящей системе предсердий с поочередным возбуждение сначала правого (восходящее колено зубца Р), а затем левого (нисходящее колено зубца Р) предсердий, то повышение его продолжительности свидетельствует об увеличении продолжительности потенциала действия предсердий, отсутствие этого эффекта у крыс, получавших тримиксан и хлофузан, объясняется повышением образования оксида азота в организме. Такое же изменение деятельности предсердий у крыс после ежедневной нагрузки дистиллированной водой связано, по-видимому, с длительным тонусом симпатической нервной системы. А отсутствие этого эффекта у крыс, получавших тримиксан и хлофузан, объясняется повышением образования оксида азота в организме.

В контрольной группе крыс отмечается достоверное снижение интервала PQ: в 1,35 раза (Р=0,04) к десятому и пятнадцатому дням, в 1,48 раза (Р=0,02) к двадцатому дню, в 1,29 раза (Р=0,08) к 25-му и 30-му дням и в 1,07 раза (Р=0,02) к концу эксперимента. При длительном поступлении бензофуроксанов в организм продолжительность интервала PQ не изменяется в течение эксперимента. Интервал PQ характеризует время прохождения нервного импульса по атриовентрикулярному узлу проводящей системы сердца, исходя из чего, можно сделать вывод о замедлении скорости возбуждения при длительном действии раздражителя на организм (контрольная группа). При введении бензофуроксанов - экзогенных доноров оксида азота продолжительность возбуждения не изменяется по сравнению с исходным уровнем.

Продолжительность комплекса QRS в контрольной группе крыс достоверно повышается в 1,42 раза (Р=0,031) на пятый и тридцатый дни эксперимента. В фазовой структуре сердечного цикла комплекс QRS ЭКГ соответствует наиболее ранним процессам систолы - фазам асинхронного и синхронного изометрического сокращения периода изометрического сокращения [Ройтберг Г.Е., Струтынский A.B., 2007]. В фазу асинхронного сокращения электрическое возбуждение быстро распространяется по миокарду желудочков и инициирует сокращение отдельных мышечных волокон. Это сокращение, в соответствии с определением, является асинхронным. При нем внутрижелудочковое давление не возрастает, но форма желудочков существенно меняется, подготавливая их к изгнанию крови. В фазу синхронного изометрического сокращения происходит быстрое нарастание давления в полостях желудочков, и с его превышением давления крови в легочном стволе и аорте начинается их гетерометрическое сокращение с изгнанием (начало периода изгнания) [Морман Д., Хеллер Л., 2000]. Следовательно, увеличение продолжительности комплекса (ЗЯБ объясняется замедлением внутрижелудочковой проводимости [Кушаковский М.С., 1992]. Длительное поступление бензофуроксанов (1 мг/кг) достоверных изменений продолжительности комплекса С^ЯБ не вызывает в течение всего эксперимента.

Продолжительность интервала (^Т отражает время реполяризации желудочков сердца, следовательно, длительная ежедневная нагрузка хлофузаном повышает время реполяризации желудочков.

Амплитуда зубца Р, характеризующая силу возбуждения предсердий, достоверно не изменяется во всех исследуемых группах в течение всего эксперимента. Тенденция к увеличению исследуемого показателя отмечается на пятый день эксперимента при нагрузке бензофуроксанами, а при нагрузке тримиксаном эта тенденция сохраняется и на десятый день.

Амплитуда зубца Я является показателем сократительной активности миокарда, следовательно фениксан и хлофузан, способствующие снижению его при внутрижелудочном введении оказывают отрицательный инотропный эффект.

Вазодилятаторный эффект бензофуроксанов также свидетельствует об активации нитроксидергической системы при внутрижелудочном их введении в дозе 1 мг/кг.

Ферментный состав крови отражает характер метаболизма в организме. При поступлении в организм бензофуроксанов активность альфа-амилазы снижается. Оксид азота ограничивает выброс симпатических медиаторов [Ивашкин В.Т., Драпкина О.М., 2001], исходя из чего гипоамилаземия при введении бензофуроксанов объясняется снижением тонуса симпатической и повышением тонуса парасимпатической нервной систем. Это подтверждается и снижением концентрации глюкозы в крови при введении бензофуроксанов. Повышение количества нитрозотиолов в 1,72 раза способствовало снижению активности щелочной фосфатазы в 1,57 раза (при введении фениксана), в то время как увеличение нитрозотиолов сыворотки в 2,87 раза (при введении хлофузана) снижает сывороточную концентрацию щелочной фосфатазы, только в 1,24 раза. Это, по-видимому, связано с отсутствием необходимости угнетать деятельность остеобластов при повышенной концентрации кальция в крови.

Активность креатинфосфокиназы снижается при поступлении в организм доноров оксида азота и при этом выявляется следующая зависимость: при повышении содержания метаболитов оксида азота в два и более раз (при введении хлофузана и фениксана) отмечается снижение активности изучаемого фермента в течение всего периода исследования, а при повышении метаболитов оксида азота в крови менее чем в два раза незначительное повышение активности креатинфосфокиназы (в первые 10 дней) затем сменяется его понижением.

Активность ACT у крыс, получавших ежедневно тримиксан (1 мг/кг), фениксана (1 мг/кг) и хлофузан (1 мг/кг), на 10-й и 30-й дни эксперимента не изменяется, а на двадцатый день введения активность ACT повышается (Р=0,02). У крыс, получавших тримиксан (1 мг/кг) и хлофузан (1 мг/кг), на 10-й день эксперимента активность AJIT снижается в 1,14 раза (Р=0,06) по сравнению с исходным уровнем. На 20-й день активность AJIT повышается в 1,46 раза (Р<0,001). На 30-й день исследований активность AJIT снижается в 1,29 раза (Р=0,01) по сравнению с уровнем, отмеченным на 20-й день. При поступлении фениксана в организм на 10-й день активность AJIT снижается в 1,27 раза (Р:=0,002) к 30-му дню возвращается на исходный уровень.

Коэффициент Де Ритиса при введении тримиксана повышается в 1,12 раза на уровне тенденции, на 20-й день - снижается в 1,26 раза (Р=0,006), что свидетельствует о повышении активности периферических путей обмена, тогда как активность цикла трикарбоновых кислот остается неизменной. Повышение активности как AJ1T, так и ACT при поступлении хлофузана в организм свидетельствует о повышении интенсивности обмена веществ в клетке как в цитоплазме, так и в митохондриях. Это можно объяснить более сильной NO-донорской активностью хлофузана по сравнению с тримиксаном. При поступлении фениксана сдвиг метаболизма оксида азота в сторону образования нитратов и нитритов способствует снижению интенсивности клеточного обмена (10-й день эксперимента) с последующим компенсаторным повышением (20-й день).

При длительном поступлении в организм бензофуроксанов - доноров оксида азота обмен веществ клетки сдвигается в сторону анаболизма (анаэробная ферментемия). При этом отмечается следующая зависимость: чем лучше выражена NO-донорская активность, тем ярче проявляется отмеченный физиологический эффект.

Нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг) способствует снижению концентрации белка сыворотки крови и поддержанию концентрации al-глобулинов в крови на оптимальном уровне во все сроки исследования по сравнению с контролем, где уровень a 1-глобулинов снижается в 1,2 раза (Р<0,005) в ответ на нагрузку дистиллированной водой. Также внутрижелуд очное введение бензофуроксанов (1 мг/кг) способствует поддержанию концентрации мочевины в крови на оптимальном уровне во все сроки исследования по сравнению с контролем, где уровень мочевины повышается в 1,8 раза (Р<0,005) в ответ на нагрузку дистиллированной водой. Концентрация мочевой кислоты в сыворотке крови белых крыс повышается при нагрузке тримиксаном в 1,18 раза (Р<0,005), фениксаном - в 1,6 раза (Р<0,005) и снижается при нагрузке хлофузаном в 1,26 раза (Р<0,005) на 20-й и 30-й дни эксперимента. Концентрация триглицеридов в сыворотке крови белых крыс снижается при нагрузке тримиксаном в 4,08 раза (Р<0,05), фениксаном - в 3,13 раза (Р<0,05) на 30-й день эксперимента.

Нагрузка бензофуроксанами (1 мг/кг) способствует снижению концентрации глюкозы, повышению концентрации кальция и фосфора в сыворотке крови.

Изучение болевой чувствительности показало, что соединения бензофуроксанового ряда оказывают проноцицептивный эффект при внутрижелудочном введении в организм в дозе 1 мг/кг. Выраженность проноцицептивного эффекта зависит от степени повышения концентрации нитрозотиолов в сыворотке крови: чем больше их концентрация, тем более выражен эффект. Внутрижелудочное введение хлофузана в дозе 1 мг/кг сопровождается снижением болевой чувствительности у крыс с первоначально высокой степенью адаптации болевых рецепторов.

Результаты изучения поведенческих реакций показывают, что бензофуроксаны влияют на функциональную активность нервной системы, увеличивают исследовательскую активность белых крыс в поведенческой модели "открытое поле". Повышение активности нитроксидергической системы как за счет экзогенного (нагрузка бензофуроксанами), так и за счет эндогенного оксида азота (нагрузка Ь-аргинином) приводит к повышению вертикальной и горизонтальной исследовательской активности и снижению тревожности белых крыс в поведенческой модели приподнятый крестообразный лабиринт.

Изучение условнорефлеторной деятельности крыс показало, что при нагрузке тримиксаном латентный период захода белых крыс в темный отсек камеры (УРПИ) повышается в 1,16 раза (Р<0,01), а при нагрузке хлофузаном - в 1,27 раза (Р<0,01). Это свидетельствует о наличии ноотропоподобных свойств у изученных бензофуроксанов. В условной реакции активного избегания при нагрузке тримиксаном и хлофузаном процент положительных реакций на условный раздражитель к концу эксперимента в 1,09 раза (Р<0,01) и 1,11 раза (Р<0,01) выше, чем в контроле.

Установленные факты о высокой лабильности нитроксидергической системы в зависимости от пола и возраста животных позволяют научно обоснованно организовывать эксперименты и создавать оптимальные условия для грамотной интерпретации полученных результатов. Выявленные закономерности изменения нитроксидергического состояния в норме и под влиянием нагрузок, связанных с фиксацией, внутрижелудочным введением различных веществ, расширяют наши представления о ряде положений возрастной физиологии животных, состоянии клеточного и гуморального иммунитета, сердечно-сосудистой деятельности и позволят разработать эффективные способы их коррекции.

Поскольку нашей целью явилось изучение комплексной нитроксидергической реакции организма на внутрижелудочное введение соединений бензофуроксанового ряда, остались неизученными эти реакции при других путях введения их в организм, остаются открытыми вопросы состояния нитроксидергической системы других видов животных. Надеемся на продолжение этой работы, где будут установлены новые факты о роли нитроксидергической системы, о ее связях с функциональными системами организма.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Каримова, Руфия Габдельхаевна, Казань

1. NO-донорные свойства химиотерапевтического средства «Метронидазол» / А.П. Арзамасцев и др. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2002. - № 4. - С.10-14

2. Анитиоксидантное и прооксидантное действие доноров и метаболитов оксида азота / JI.JI. Гудков и др. // Биофизика. 2007. - Т. 52, №3.-503-509.

3. Аргинин в медицинской практике / Ю.М. Степанов и др. // Журнал АМН Украины. 2004. - Т.10 - №2. - С. 339-351.

4. Башкатова В.Г., Микоян В.Д., Косачев Е.С. Оксид азота и его свойства//Нейрохимия. 1996. - Т. 13, № 2. - С. 115-120.

5. Ванин А.Ф. Оксид азота в биомедицинских исследованиях // Вестник РАМН. 2000. - № 4. - С. 3-5.

6. Ванин А.Ф. Динитрозильные комплексы железа и S-нитрозотиолы — две возможности формы стабилизации и транспорта оксида азота в биосистемах // Биохимия. — Т. 63, вып. 7. — С. 924-938.

7. Ванин А.Ф. Оксид азота в биологии: история, состояние и перспективы исследований // Биохимия. — 1998. Т. 63, вып. 7. - С. 867-869.

8. Ванин А.Ф. Оксид азота и его обнаружение в биосистемах методом электронного парамагнитного резонанса. // Успехи физиологических наук. 2000. - Т. 170, №.4. - С.455-458.

9. Васильева Е.М., Баканов М.И., Марков Х.М. Влияние системы L-аргинин-NO на активность АТФаз и ПОЛ эритроцитов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 1999. - Т. 128, № 9. - С. 321-323.

10. Веремей И.С., Солодков А.П. Восстановление N03 в N02 цинковой пылью в присутствии аммиачного комплекса сульфата меди // Сборник научных трудов. Витебск, 1999. - С. 274-277

11. Влияние ингибиторов фосфодиэстераз циклических нуклеотидов на электрическую и сократительную активность гладкомышечных клеток / И.В. Ковалев и др. // Бюл. эксп. биол. и мед. — 2002. Т. 133. - С. 47-50.

12. Влияние нитропруссида натрия на мембранный потенциал и механическое напряжение гладкомышечных клеток аорты крысы / И.В. Ковалев и др. // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1997. - Т. 83. - С. 70-76.

13. Влияние нитросоединений на электромеханическое сопряжение гладкомышечных клеток мочеточника / И.В. Ковалев и др. // Бюл. эксп. биол. и мед. 2000. - Т. 129. - С. 539-541.

14. Влияние эндогенного оксида азота на функцию нервно-мышечного синапса / А. Л. Зефиров и др. // Рос. физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 2001. - № 4. - С. 499-506.

15. Внутриклеточные сигнальные системы в эпителии и гладких мышцах воздухоносных путей / М.Б. Баскаков и др. // Пульмонология. -1997.-Т. 2.-С. 72-76.

16. Внутриклеточные сигнальные системы в эпителий- и эндотелийзависимых процессах расслабления гладких мышц / Л.В. Капилевич и др. // Успехи физиол. наук 2001. — Т. 32. — С. 88-98.

17. Воротников A.B., Крымский М.А., Ширинский В.П. Внутриклеточная сигнализация и фосфорилирование белков при сокращении гладких мышц //Биохимия. — 2002. — Т. 67. Вып. 12. С. 1587-1610.

18. Генерация оксида азота лейкоцитами периферической крови в норме и при патологии / П.П. Голиков и др. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 2003. — № 4. — С. 11-13

19. Гилинский М. А., Брусенцев Е. Ю. Эндогенная регуляция биодоступности оксида азота. Клинические корреляты и подходы к анализу // Бюллетень Сибирского отделения Российской Академии медицинских наук: научно-теоретический журнал. — 2007. № 3. - С. 109-115

20. Гоженко А.И., Котюжинская С.Г., Котюжинский А.И. Роль оксида азота в регуляции микроциркуляции и агрегатного состояния крови // Украинский медицинский альманах. 2000. - Т. 3, № 1. — С. 197-200.

21. Горрен А.К.Ф., Майер Б. Универсальная и комплексная энзимология синтазы оксида азота // Биохимия. — 1998. Т. 63, №7. - С. 870880.

22. Граник В.Г., Григорьев Н.Б. Экзогенные доноры оксида азота (химический аспект). // Известия Академии наук. Серия химическая 2002. --Т. 8.-С. 1268- 1311.

23. Грибкова И.В., Шуберт Р., Серебряков В.М. NO активирует выход Са2+активируемого К+тока гладкомышечных клеток хвостовой артерии крысы через cGMP // Кардиология. 2002. - Т. 42. - С. 34—38.

24. Григорьев Н.Б., Шварц Г.Я., Григорьев Д.А. Взаимодействие нитроглицерина с тиоловыми соединениями // Хим. фарм. журн. — 1991. Т. 25.-С. 12-14.

25. Гуревич К.Г., Шимановский H.JI. Оксид азота: биосинтез, механизмы действия, функции // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. — 2000. № 4. С. 16-22.

26. Гурин A.B. Функциональная роль оксида азота в центральной нервной системе // Успехи физиологических наук. — 1997. — Т. 28. С.53-60.

27. Депонирование оксида азота у крыс различных генетических линий и его роль в антистрессорном эффекте адаптации к гипоксии / М.Г. Пшенникова и др. // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 2000. -Т. 86, №2. - С. 174 - 181.

28. Донор оксида азота, активирующий растворимую форму гуанилатциклазы, ингибирующий агрегацию тромбоцитов и обладающий спазмолитическим и сосудорасширяющим действием: патент 2208438 Рос. Федерация. № 02208438; опубл. 20.07.2003, 4с.

29. Дорофейчук В.Г. Определение лизоцима нефелометрическим методом // Лабораторное дело. — 1968. №1. — С. 28 - 30.

30. Дробинская О.В., Максимович Я.С., Остапченко Л.И. Влияние ингибиторов оксида азота на процессы изъязвления // Ученые записки Таврического национального университета имени В.И. Вернадского. 2007. -Серия «Биология, химия». - Т. 20 (59), № 1. - С. 151-156

31. Дьяконова И.Н., Косицкий Г. И., Кузнецова Т. Е. Регуляция деятельности сердца, системного и коронарного кровообращения // Превентивная кардиология. М., 1977. С. 85-136.

32. Журавлева И. А., Мелентьев И. А., Виноградов Н. А. Роль окиси азота в кардиологии и гастроэнтерологии // Клин. мед. 1997. - № 4. - С. 1821.

33. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., Реутов В.П. >Ю-синтазы в норме и при патологии различного генеза // Вестник РАМН. 2000. - № 4. - С. 30-35.

34. Зефиров А.Л., Халиуллина Р. Р., Анучин А. А. Эффекты экзогенного оксида азота на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 1999. — № 8.-С. 144-147.

35. Зефиров А.Л., Ситдикова Г.Ф. Газообразные посредники в нервной системе // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. Т. 97, №7. - 2006. - С. 872-882.

36. Зуга М. В., Мотавкин П. А. Нитрооксидсинтетаза нейронов блуждающего нерва животных и человека // Морфология. 1998. - № 3. — С. 51.

37. Ивашкин В. Т., Драпкина О. М. Оксид азота в регуляции функциональной активности физиологических систем // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. — 2000. — № 4. С. 1621.

38. Иммунологические методы / под. ред. X. Фримеля. М., Мир, 1979.- 156 с.

39. Исследование механизмов NO-зависимого расслабления гладких мышц аорты крысы с помощью нитросоединений / И.В. Ковалев и др. // Эксп. и клин, фармакол. — 2001. Т. 64. - С.33-36.

40. Исследование роли внутриклеточного пула Ca в релаксирующем эффекте нитропруссида натрия в гладкомышечных полосках аорты крысы / И.В. Ковалев и др. // Бюл. эксп. биол. и мед. 1999. - Т. 127. — С. 177-179.

41. Калинкина М. А. Исследование фармакологических свойств новых химических соединений потенциальных доноров оксида азота: дис. . канд. биол. наук. М., 2001. 165с.

42. Каменский А. А., Савельева К. В. Оксид азота и поведение. М.: Изд-во НЦССХ им. А. Н. Бакулева РАМН, 2002. - 156 с.

43. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2 т. Минск: Беларусь, 2000. - Т. 1. - 496 е.;

44. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2 т. Минск: Беларусь, 2000. - Т. 2. - 463 с.

45. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врача. -СПб.: «Гиппократ», 1998. 156 с.

46. Кленова H.A., Языкова М.Ю. Влияние экзогенных нитрозотиолов на состояние гемоглобина эритроцитов человека // Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии. Сборник научных работ. Томск, 2004.

47. Клещев A.JL, Демидов М.Я., Седов K.P. Биохимические аспекты действия натрия нитропруссида // Эксп. и клин, фармакол. 1994. -Т. 57. - С. 74-78.

48. Кондратюк Т.М., Курский М.Д. Мембранные механизмы релаксирующего воздействия цАМФ в гладкомышечных волокна миометрия // Докл. РАН. 1992. - Т. 324. - С. 220-223.

49. Коржевский Д. Е. Синтаза окиси азота в формирующейся коре большого мозгачеловека // Морфология. — 1996. — № 5. — С. 20-22.

50. Косенков А.Я., Ливинцов Н.И. Влияние электротатуировки на физическое и иммунологическое состояние свиней. // Сб. науч. тр. Дон. СХИ, 1976. ~Т. 11, вып. З.-С. 50-53.

51. Кост А., Стенко М.И. Определение фагоцитарной активности лейкоцитов // Клиническая гематология животных. — М.: Колос, 1974. С. 99100.

52. Котюжинская С. Г., Котюжинский А. И. Влияние оксида азота на фибринолитическую систему // Ф{зюл. журн. 2000. - № 2. - С. 8-9.

53. Кушаковский М.С. Аритмии сердца. СПб.: «Гиппократ», 1992.464 с.

54. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Наука, 1984. 351с.

55. Лебедев К. А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике. М., Наука. - 1990. - 224 с

56. Лунгина О.Г., Островский М.А., Каламкаров Г.Р. Действие оксида азота на ответы фоторецепторных клеток сетчатки лягушки // Сенсорные системы. 2002. - Т. 16, № 2. - С. 116-120.

57. Малышев И.Ю., Малышева Е.В. Белки теплового шока и защита сердца// Бюл. эксп. биол. и мед. — 1998. -Т. 126. —С. 604-611.

58. Малышев И.Ю., Смирин Б.В., Манухина Е.Б. Гипоксия и оксид азота // Вестник Российской АМН. 2000. - № 9. - С. 44-48.

59. Манухина Е.Б., Малышев И.Ю. Стресс-лимитирующая система оксида азота // Росс, физиол. ж. 2000. - Т. 86, № 10. - С. 1283-1292.

60. Марков X. М. Оксид азота и ишемическая болезнь сердца // Вестник Российской АМН. 2009. - № 2. - С. 40-46.

61. Марков Х.М. О биорегуляторной системе Ь-аргинин-окись азота // Патол. физиология и эксп. терапия. 1996. - С. 34—39.

62. Марков Х.М. Оксид азота и оксид углерода новый класс сигнальных молекул. // Успехи физиол. наук - 1996. -Т. 4 - С. 30-43.

63. Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., Реутов В.П. Оксид азота и N0-синтазы в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях // Биохимия. 2000. - Т.65, № 4. - С. 485-503.

64. Методические рекомендации по оценке гуморального иммунитета при острых лейкозах у детей /М.П. Потапнев и др.. Минск, 2001,- 24с.

65. Методы изучения метаболизма оксида азота / Т.В. Звягина и др. // Вестник гигиены и эпидемиологии. — 2001. — Т.5, №2. С. 253-256.

66. Механизмы регуляции функций гладких мышц вторичными посредниками / М.Б. Баскаков и др.. Томск: Гавань, 1996. — 154 с.

67. Механизмы регуляции электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток: роль цитоскелета / М.А. Медведев и др. //Бюллетень Сибирской медицины. 2008. - № 4. - С. 31-36.

68. Миогенные эффекты циклического гуанозинмонофосфата в гладкомышечных клетках. Роль протеинкиназы С / И.В. Ковалев и др. // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2003. - Т. 89. - С. 436-446.

69. Морман Д., Хеллер Л. Физиология сердечно-сосудистой системы. СПб.: Издательство «Питер», 2000. - 256 с.

70. Невзорова В.А., Зуга М.В., Гельцер Б.И. Роль окиси азота в регуляции легочных функций // Тер. арх. 1997. - Т. 69 (3). - С. 68-73.

71. Оксид азота и иммунная система организма / А. И. Гоженко и др. // Мед. юм1я. 2001. - № 3. - С. 5-9.

72. Определение параметров состояния окислительного стресса в гладкомышечных клетках при воздействии экзогенного нитрозоглутатиона ИМ

73. VITRO / JI. В. Капилевич и др. // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова 2007. - Том 93, № 8. - С. 898-904.

74. Орлов В.Н. Руководство по электрокардиографии. М.: МИА.1997.528 с.

75. Особенности регуляции гладких мышц сосудистой стенки легочной артерии кролика / Л.В. Капилевич и др. // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2002. - Т. 83. - С. 452-458.

76. Парахонский А.П., Тертышная Г.В. Изучение активности ферментов крови при хронических заболеваниях печени // Фундаментальные исследования — 2004. — № 6. — С. 55.

77. Петренко Ю.М., Шашурин Д.А., Титов В.Ю. Новые источники оксида азота, их возможная физиологическая роль и значение // Эксп. и клин, фармакол. 2001. - Т. 26. - С. 72-80.

78. Поленов М.А. Окись азота в регуляции функции желудочно-кишечного тракта // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 1998. -С. 53-61.

79. Раевский К.С. Оксид азота новый физиологический мессенджер: возможная роль при патологии центральной нервной системы // Бюл. экспер. биол. и мед. - 1997. - Т. 123. - С. 484-490.

80. Раевский К.С., Башкатова В.Г., Ванин А.Ф. Роль оксида азота в глутаматергической патологии мозга // Вестник РАМН. -2000. № 4. - С. 1115.

81. Реутов В.П., Орлов С.Н. Физиологическое значение гуанилатциклазы и роль окиси азота и нитросоединений в регуляции активности этого фермента // Физиология человека. — 1993. Т. 19. - С. 124-137.

82. Реутов В.П., Сорокина Е.Г. NO-синтазная и нитритредуктазная компоненты цикла оксида азота // Биохимия. 1998. - Т.63., №7. - С.1029-1040.

83. Рецкий М.И., Близнецова Г.Н. Методические рекомендации по определению стабильных метаболитов оксида азота в плазме (сыворотке) крови // Новые методы исследований по проблемам ветеринарной медицины». М.: РАСХН, 2007. С. 119-123.

84. Ройтберг Г.Е., Струтынский A.B. Внутренние болезни. Сердечнососудистая система. М.: Бином-пресс, 2007. 856 с.

85. Роль оксида азота во внутриклеточной регуляции гладкомышечных клеток / JI.B. Капилевич и др. // Вестник СибГМУ. 2000. -№ 1.-С. 7-19.

86. Салей А.П., Рецкий М.И. Роль оксида азота в формировании мотивационного поведения и обучения // Вестник ВГУ Серия химия, биология фармация. 2003. - № 1. - С. 75-80.

87. Северина И.С. Оксид азота. Роль растворимой гуанилатциклазы в механизмах его физиологических эффектов // Вопросы медицинской химии.2002. -Вып 1. С.4-30.

88. Сезонные колебания неспецифической активности и сопротивляемости осмотическим и механическим воздействиям лейкоцитов периферической крови / М.З. Федорова и др. // Педагогический вестник,2003. №2. — С.4-11.

89. Сосунов A.A. Оксид азота как межклеточный посредник // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т.6, № 12. — С. 27-34.

90. Уразаев А.Х., Зефиров A.JI. Физиологическая роль оксида азота // Успехи физиол. наук 1999. - Т. 30, № 1. - С. 54 - 72.

91. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитащих/В.П. Реутов и др.. М.: Наука, 1998. 159 с.

92. Экспериментальная оценка фармакологической активности новых доноров оксида азота / Ю.А. Колосов и др. // Нижегородский медицинский журнал. 2006.-№ 8. - С. 178-180.

93. Эпителиально-гладкомышечное взаимодействие в регуляции тонуса воздухоносных путей / JI.B. Капилевич и др. // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1995. - Т. 81. - С. 99-105.

94. Эффекты L-аргинина и его функционального антагониста N-нитро-Ь-аргинина на поведение / В. А. Дубынин и др. // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1995. - № 11. - С. 465-468.

95. Яковлев А.В., Ситдикова Г.Ф. Зефиров A.JI. Внутриклеточные пресинаптические механизмы эффектов оксида азота (II) в нервно-мышечном соединении лягушки // Нейрохимия. — 2004. — Т.21, №4. — С.325-331.

96. Яковлев А.В., Ситдикова Г.Ф., Зефиров A.JI. Роль циклических нуклеотидов в эффектах оксида азота (II) на секрецию медиатора и электрогенез двигательного нервного окончания // Доклады Академии Наук. 2002. - Т. 382, №2. - С. 273-276.

97. Яковлев В.А., Ситдикова Г.Ф., Зефиров A.JI. Циклические нуклеотиды в эффектах оксида азота на нервно-мышечную передачу // Функциональная роль монооксида азота и пуринов / под ред. В.Н. Турина). Минск. 2001. С. 208-211.

98. A new class of furoxanderivatives as NO donors: mechanism of action and biological activity / R. Ferioli et al. // British journal of pharmacology. -1995 -V. 114.-P. 816-820.

99. A redox-based mechanism for the contractile and relaxing effects of NO in the guinea-pig gall bladder / S. Alcyn et al. // J. Physiol. 2001. - V. 532. -P. 793-810.

100. Abdel-Latif A. Cross talk between cyclic nucleotides and polyphosphoinositide hydrolysis, protein kinases and contraction in smooth muscle // Exp. Biol. Med. 2001. - V. 226. - P. 153—163.

101. Akopova O.V., Kharlamova O.N., Vavilova G.L. Effect of L-arginine on Na+,K+-ATPase activity in rat aorta endothelium // Biochemistry -2002. Vol. 67, №9.-P. 1058-1061.

102. Ambiel C.R., Alves-Do-Prado W. Neuromuscular facilitation and blockade induced by L-arginine and nitric oxide in the rat isolated diaphragm // Gen. Pharmacology. -1997. Vol. 28, № 5. - P.789-794.

103. Amir S. Nitric Oxide in the Nervous System. N. Y. Academic Press. (Eds. Vincent S.),1995. P. 151-162.

104. Anderson R.G. Caveolae: where incoming and outgoing messengers meet // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1993.-Vol. 90.-P. 10909-10913.

105. Anggard E. Nitric oxide: mediator, murderer and medicine // Lancet. -1994.-№343.-P. 1199-1206.

106. Antiproliferative effect in human prostatic smooth muscle cells by nitric oxide donor / J. Guh et al. // Mol. Pharmacol. 1998. - V. 53. - P. 467-474.

107. Apparent hydroxyl radical production by peroxynitrite: implications for endothelial injury from nitric oxide and superoxide / J.S. Beckman et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -1990. Vol. 87. - P. 1620-1624.

108. Arginine enhances wound healing and lymphocyte immune responses in humans / A. Barbul et al. // Surgery. 1994. - 108. - P. 331-337.

109. Arnelle D. R., Stamler J. S. NO+, NO-, and NO-donation by S-nitrosothiols: implications for regulation of physiological functions by S-nitrosylation and acceleration of disulphide formation // Arch. Biochem. Biophys. 1995.-Vol. 318.-P. 279-285.

110. Artinian L.R., Ding J.M., Gillette M.U. Carbon monoxide and nitric oxide: interacting messengers in muscarinic signaling to the brain's circadian clock // Exp. Neurol. 2001. - Vol. 171. - P. 293-300.

111. Atherosclerosis and the two faces of endothelial nitric oxide synthase / M.F. Robert et al. // Circulation. 1998. - Vol. 97. - P. 108-112.

112. Bachmann S., Mundel P. Nitric oxide in the kidney: synthesis, localization, and function //Am. J. Kidney Dis. 1994. - Vol. 24. - P. 112-129.

113. Barbul A. Arginine and immune function // Nutrition. — 1990. 6, № 1.-P. 53-62.

114. Barnes P.J. Cyclic nucleotides and phosphodiesterases and airway function // Eur. Respir. J. 1995. - Vol. 8. - P. 457-462.

115. Battinelli E., Loscalzo J. Nitric oxide induces apoptosis in megakaryocyte cell lines // Blood. 2000. - Vol. 95. - P. 3451-3459.

116. Beckman J.S., Koppenol W.H. Nitric oxide, superoxide and peroxynitrite: the good, the bad and the ugly // Am. J. Physiol. 1996. - Vol. 271. -P. 1424-1437.

117. Bialecki R.A., Stinson-Fisher C. K-Ca channel antagonists reduce NO donor-mediated relaxation of vascular and tracheal smooth muscle // Am. J. Physiol. 1995.-Vol. 268.-P. 152-159.

118. Biochemical evidens for impaired nitric oxide synthesis in patients with peripheral arterial occlusive disease / R.H. Boger et al. // Circulation. 1997. -Vol. 95.-P. 2068-2074.

119. Bishop A., Anderson J.E. NO signaling in the CNS: from the physiological to the pathological // Toxicology. 2005. - Vol. 208. - P. 193-205.

120. Blood flow regulation by S-nitrosohemoglobin in the physiological oxygen gradient / J.S. Stamler et al. // Science 1997. - Vol. 276. - P. 2034-2037.

121. Bredt D.S. Nitric oxide signaling specificity the heart of the problem // J. Cell Science. 2003. - Vol. 116. - P. 9-15.

122. Bredt D.S., Snyder S.H. Nitric oxide, a novel neuronal messenger // Neuron. 1992.-Vol. 8, № 1. - P. 3-11.

123. Brown G.C., Cooper C.E. Nanomolar concentration of nitric oxide reversibly inhibit synaptosomal respiration by competing with oxygen at cytochrome oxidase // FEBS Lett. 1994. - Vol. 356. - P. 295-298.

124. Busse R., Fleming I. Regulation and functional consequences of endothelial nitric oxide formation //Ann. Med. 1995. - 27. - R 331-340.

125. Busse R., Mulsch A. Induction of nitric oxide synthase by cytokines in vascular smooth muscle cells // FEBS Lett. 1990. - Vol. 275. - R 87-90.

126. Campbell D., Stampler J.S., Strauss H. Redox modulation of L-type calcium channels in ferret ventricular myocytes — dual mechanism regulation by nitric oxide and S-nitrosothiols // J. Gen. Physiology. -1996. Vol. 108. - P. 277293.

127. Carbon monoxide induces vasodilation and nitric oxide release but suppresses endothelial NOS / C. Thorup et al. // Am. J. Physiol. 1999.- Vol. 277. - P. 882-889.

128. Carter R.W., Begaye M., Kanagy N. Acute and chronic NOS inhibition enhances alpha (2)- adrenoreceptor-stimulated RhoA and Rho kinase in rat aorta // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2002. - Vol. 283. - P. 13611369.

129. Central inhibition of nitric oxide synthase preferentially augments release of oxytocin during dehydration / J.Y. Summy-Long et al. // Neurosci. Lett. 1993.-Vol. 152.-P. 190-193.

130. Central serotoninergic system involvement in the anorexia induced by NG-nitro-L-arginine, an inhibitor of nitric oxide synthase / F. Sguadrito et al. // J. Pharmacol. 1994. - Vol. 255. - P. 51-55.

131. Characteristics of nitric oxide-mediated cholinergic modulation of calcium current in rabbit sino-atrial node / X. Han et al. // J. Physiology. 1998. -Vol. 509, №3.-P. 741-54.

132. Characterization of three inhibitors of endothelial nitric oxide synthase in vitro and in vivo / D.D. Rees et al. // Br. J. Pharmacol. 1990. - Vol. 101. - P. 746-752.

133. Chaudhari K., Wisniewski N.H., Bearden S.E. Role of sex and eNOS in cystathionine-y-lyase expression in mouse heart, brain and skeletal muscle // FASEB Journal. -2007. Vol. 21. - P. 577.

134. Chesnais J.M., Fischmeister R., Mery P.F. Positive and negative inotropic effects of NO donors in atrial and ventricular fibers of the frog heart // J. Physiology. 1999. - Vol. 518, № 2. - P. 449-461.

135. Chiodera P., Volpi R., Coiro V. Inhibitory control of nitric oxide on the arginine-vasopressin and oxytocin response to hypoglycaemia in normal men // NeuroReport. 1994. - Vol. 5. - P. 1822-1824.

136. Chitaley K., Webb R. Nitric oxide induces dilation of rat aorta via inhibition of rho-kinase signaling // Hypertension. 2002. - Vol. 39. -P. 438-442.

137. Cisarpide and structural analogs selectively enhance 5-hydroxytryptamine (5-HT) induced purinergic neurotransmission in the guinea pig proximal colon / M.R. Briejer et al. // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1995. - Vol. 274(2).-P. 641-648.

138. Cloned and expressed macrophage nitric oxide synthase contrasts with the brain enzyme / C. J. Lowenstein et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. -1992. -Vol. 89.-P. 6711-6715.

139. Colocalization and non-colocalization of heme oxygenase-2 and nitric oxide synthase 1 in rat and mouse skeletal muscle / R. Gossrau et al. // The biology of nitric oxide. 1998. - Vol. 6. - P. 334.

140. Control of cardiac muscle cell function by an endogenous nitric oxide signaling system / J.L. Balligand et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. -Vol. 90.-P. 347-351.

141. Cynober L. Can arginine and ornithine support gut functions? // Gut. Suppl.- 1994. -N. 35 P. 42-45.

142. Danson E.J., Choate K., Paterson D.J. Cardiac nitric oxide: Emerging role for nNOS in regulating physiological function // Pharmacol Ther. — 2005.-Vol. 106-P. 57-74.

143. Dawson T. M, Snyder S. H. Gases as biological messengers: Nitric oxide and carbon monoxide in the brain // J. Neurosci. 1994. - Vol. 14. -P. 5147-5159.

144. De Luca B., Monda M., Sullo A. Changes in eating behavior and thermogenic activity following inhibition of nitric oxide formation // Am. J. Physiol. 1995.-Vol. 268.-P. 1533-1538.

145. Descarries L.M., Cai S., Robitaille R. Localization and characterization of nitric oxide synthase at the frog neuromuscular junction // J. Neurocytology. -1998. Vol. 27. - P. 829-840.

146. Diego M.A., Field T., Hernandez-Reif M. Vagal activity, gastric motility, and weight gain in massaged preterm neonates // J. Pediatr. 2005. - Vol. 147-P. 50-55.

147. Differential expression and induction of mRNA encoding two inducible nitric oxide synthases in rat kidney / M.G. Mohaupt et al. // Kidney Int. 1994. - Vol. 46. - P. 653-665.

148. Diffusion-limited reaction of free nitric oxide with erythrocytes / X. Liu et al. // J. Biol Chem. 1998. Vol. 273. - P.18709-18713.

149. Ding Y., McCoubrey W.K., Maines M.D. Interaction of heme oxygenase-2 with nitric oxide donors. Is the oxygenase an intracellular 'sink' for NO // Eur. J. Biochem. 1999. - Vol. 264. - P. 854-861.

150. Direct in situ measurement of nitric oxide in mesenteric resistance arteries: increased decomposition by superoxide in hypertension / M.R. Tschude et al. // Hypertension. 1996. - Vol. 27. - P. 32-35.

151. Disruption of Fas receptor signaling by nitric oxide in eosinophils / H. Hebestreit et al. // J. Exp. Med. 1998. - Vol. 187. - P. 415-425.

152. Does nitric oxide modulate transmitter release at the mammalian neuromuscular junction / T J. Nickels et al. // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. -2007.-Vol. 34, Issue 4.-P. 318-322.

153. Double blind placebo controlled study on the effect of the nitric oxide donor molsidomin and the 5-HT3 antagonist ondansetron on human esophageal motility / S. Willis et al. // Gastroenterol. 1994. - Vol. 32(11). - P. 632-636.

154. Drewett J.G., Garbers D.L. The family of guanylyl cyclase receptors and their ligands // Endoc. Rev. 1994. - V. 15 - P. 135-162.

155. Dual effects of nitric oxide on the large conductance calcium-activated potassium channels of rat brain / J.E. Lee et al. // J. Biochem. Mol. Biol. 2006. -Vol. 39,№ 1.-P. 91-96.

156. Edwards R. M., Stack E. J., Trizna W. Interaction of L-arginine analogs with L-arginine uptake in rat renal brush border membrane vesicles // JPET. 1998. - Vol. 285,№.3. - P. 1019-1022.

157. Effects of amylin on appetite regulation and memory / J.E. Morley et al. // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1995. - Vol. 73. - P. 1042-1046.

158. Effects of L-arginine on spontaneous contraction of the rat portal vein / K. Shimamura et al. // Pflugers Arch. Eur. J. Physiol. 2003. - Vol.446. - P. 3035. /.)r,

159. Effects of nitric oxide on adenylyl cyclase stimulation in N18TG2 neuroblastoma cells / Y.P.Tao et al. // J. Pharmacol Exp Ther. 1998. - V. 286. -№ 1. -P.298-304.

160. Electron paramagnetic resonance spectral evidence for the formation of a pentacoordinate nitrosylheme complex on soluble / J. R. Stone et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. - Vol. 207. - P. 572-575.

161. Endogenous dimethylarginine as an inhibitor of nitric oxide synthesis. / P. Vallance et al. // J. Cardiovas. Pharmacol. 1992. - Vol. 20. - P. 560-562.

162. Endogenous nitrogen oxides and bronchodilator S-nitrosothiols in human airways / B. Gaston et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - V. 90. -P. 10957- 10961.

163. Endothelium-derived relaxin factor and nitroprusside. Compared in noradrenaline and K+contracted rabbit and rat aortae / P. Collins et al. // J. Phisiol.- 1988. V. 400. - P. 395-404.

164. Endothelium-derived relaxing factor produced and secreted from artery and vein is nitric oxide / L. Ignarro et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1987. V. 84. - P. 9265-9269.

165. Enleral nutrition with supplemental arginine, RNA, and omega-3 fatty acids in patients after operation: immunologic, metabolicand clinical outcome / J. M. Daly et al. // Surgery. 1992. - Vol. 112. - P. 56-67.

166. Erusalimsky J. D., Moncada S. Nitric oxide and mitochondrial signaling: from physiology to pathophysiology // Arterioscler. Thromb. Vase. USA.- 2007. № 21. - P. 2524-2531.

167. Erxleben C., Hermann A. Nitric oxide augments voltage-activated calcium currents of crustacea (Idotea baltica) skeletal muscle // Neurosciensce Letters.-2001.-Vol. 300.-P. 133-139.

168. Esplugues J.V. NO as a signaling molecule in the nervous system // British. J. Pharmacol. 2002. - Vol. 136. - P. 1079-1095.

169. Etherington S.J., Everett A.W. Postsynaptic production of nitric oxide implicated in long-term depression at the mature amphibian (Bufo marinus) neuromuscular junction // J.Physiol. 2004. - Vol. 559, № 2. - P. 507-517.

170. Evans R.G., Fitzgerald S.M. Nitric oxide and superoxide in the renal medulla: a delicate balancing act. // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 2005. - Vol. 14.-P. 9-15.

171. Evidence that nitric oxide can act centrally to stimulate vasopressin release / M. Ota et al. // J. Neuroendocri. 1993. - Vol. 57. - P. 955 - 959.

172. Fan J., Du J. B. A new way for the treatment of pulmonary hypertension: effectiveness of inhalation ofnebulized NO donor // Zhonghua Er. Ke Za. Zhi. 2004. - № 42 (3). - P. 225-226.

173. Fas-induced caspase denitrosylation / J.B. Mannick et al. // Science 1999. - Vol. 284(5414). - P.651-654.

174. Firdaus S. Dhabhar, Kavitha Viswanathan Shot-term stress experienced at time of immunization induced a long-lasting increase in immunologic memory // Am. J. Physiol. Regul. Comp. Physiol. Vol. 289. - 2005. -P. 738-744

175. Formation and release of dinitrosyl iron complexes by endothelial cells / A. Mulsch et al. // Biochem. Biophys. Res. Communs. 1993. - 196, N 3. -P. 1303- 1308.

176. Fujimori H., Pan H.H. Effect of nitric oxide on L-glutamate binding to rat brain synaptic membranes // Brain Res. 1991. - Vol. 19. - P. 355-357.

177. Furchgott R.F. Vasodilatation, vascular smooth muscle, peptides and endothelium. New York: Raven Press. 1998. - P. 401-414.

178. Furchgott R.F., Jothianandan D. Endothelium-dependent and independent vasodilatation involving cyclis GMP: relaxation induced by nitric oxide, carbon monoxide and light // Blood Vessels. 1991. - V.28. - P. 52-61.

179. Furchgott R.F., Zawadzki J.W. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of vascular smooth muscle by acetylcholine. // Nature. 1980. -Vol. 286.-P. 373-376.

180. Furoxans as nitric oxide donors. 4-Phenyl-3-furoxancarbonitrile: thiol-mediated nitric oxide release and biological evaluation / C. Medana et al. // J Med Chem.- 1994.-Vol. 37-P. 4412-4416

181. Garthwaite J. Concepts of neuronal nitric oxide-mediated transmission // Eur. J. Neurosci. 2008. - V. 27. - P. 2783-2802.

182. Garthwaite J., Boulton C.L. Nitric oxide signaling in the central nervous system //Ann. Rev. Physiol. 1995. - Vol. 57. - P. 683-706.

183. Gaston B. Nitric oxide and thiol groups // Biochimica et Biophysica Acta. 1999.-Vol. 1411-P. 323-333.

184. Genoveva M., Gromez M., Gromez J. Nitric oxide as a regulator of hemodynamic changes in pregnancy // Ginecol. Obstet. Mex. 1999. - Vol. 67. -P. 29—36.

185. Gossrau R., Richter H. Nitric oxide synthase (NOS I) and carbon monoxide synthase (COS-2) are not everywhere co-localized in rat skeletal muscle //Acta Physiol. Scand. 1999. - Vol. 645. - P. 166-167.

186. Gow A.J., Stamler J.S. Reaction between nitric oxide and haemoglobin under physiological conditions // Nature. — 1998. Vol. 391. - P. 169 - 173.

187. Goyal R., He X. Evidence for NO redox form of nitric oxide as nitrergic inhibitory neurotransmitter in gut //Am. J. Physiol. — 1998. V. 275. — P. 1185-1192.

188. Grinder J.R. Interplay of VIP and nitric oxide in regulation of the descending relaxation phase of peristalsis //Amer. J. Physiol. 1993. - Vol. 264. -P. 334-340.

189. Hartsfield C.L. Cross talk between carbon monoxide and nitric oxide //Antioxid Redox Signal. 2002. - Vol. 4. - P.301-307.

190. Hassall C.J., Hoyle C.H. Heme oxygenase-2 and nitric oxide synthase in guinea-pig intracardiac neurons // Neuroreport. 1997. — Vol. 8. - P. 10431046.

191. Hebeiss K., Kilbinger H. Nitric oxide sensitive guanylyl cyclase inhibits acetylcholine release and excitatory motor transmission in guinea-pig ileum //Neuroscience. 1998. - Vol. 82, № 2. - P. 623-29.

192. Heeringa P., Goor H., Itoh-Lindstrom Y. Lack of endothelial nitric oxide synthase aggravates murine accelerated anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis //Am. J. Pathol. 2000. - Vol. 156. - P. 879-888.

193. Hein T., Kuo L. CAMP-independent dilation of coronary arterioles to adenosine: role of NO, G proteins, and K(ATP) channels // Circ. Res. -1999. — Vol. 85.-P. 634-642.

194. Hermann A., Erxleben C. Nitric oxide activates voltage-dependent potassium currents of crustacea skeletal muscle // Nitric oxide: Biology and Chemistry. 2001. - Vol. 5, № 4. - P. 361-369.

195. Hopper R.A., Garthwaite J. Tonic and phasic nitric oxide signals in hippocampal long-term potentiation // The Journal of neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience. 2006. - Vol. 26 (45). P. 11513-21.

196. Hopper R.A., Garthwaite J. Tonic and phasic nitric oxide signals in hippocampal long-term potentiation // J. Neuroscience. 2006. - Vol. 26, №45. -P. 11513-11521.

197. Hyperthermia stimulates nitric oxide formation: electron paramagnetic / D.M. Hall et al. // Physiol. 1994. - Vol. 77. - P. 548 - 553.

198. Ignarro J. Biosynthesis and metabolism of endothelium-derived nitric oxide //Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. -1990. Vol. 30. - P. 535-560.

199. Ignarro L, Murad F. Nitric Oxide: Biochemistry, Molecular Biology and Therapeutic Implications //Adv. Pharmacol. 1995. - Vol. 34. - P. 1-516.

200. Ignarro L., Cirino G., Casini A. Nitric oxide as a signaling molecule in the vascular system: an overview // J. Cardiovasc. Pharmacol. — 1999. — V. 34. — P. 879-886.

201. Immune and metabolic effects of arginine in the surgical patient / J. M. Daly et al. //Ann. Surgery. 1988. - 206, № 4. - P. 512-523.

202. In vivo expression of inducible nitric oxide synthase in the human fetus (abstract 3) / S.A. Baylis et al. // Presented at the First International Conference on Biochemistry and Molecular Biology of Nitric Oxide, Los Angeles, California. 1994. P. 66.

203. Inhibition of mammalian nitric oxide synthases by agmatine, an endogenous poly amine formed by decarboxylation of arginine / E. Galea et al. // Biochem. J. 1996. - Vol. 316. - P. 247-249.

204. Interaction of nitric oxide synthase with the postsynaptic density protein PSD-95 / J.E. Brenman et al. // Cell. 1996. - Vol. 84. - P. 757-767.

205. Kannan M., Johnson D. Modulation of nitric oxide-dependent relaxation of pig tracheal smooth muscle by inhibitors of guanylyl cyclase and calcium activated potassium channels // Life Sci. — 1995. V. 56. - P. 2229-2238.

206. Kazuhiro S., Michel T. Expression and regulation of endothelial nitric oxide synthase. // TCM. 1997. - Vol. 7(1). - P. 28-37.

207. Kelly R.A., Baffigand J.L., Smith T.W. Nitric oxide and cardiac function // Circulat. Res. 1996. - Vol. 79. - P. 363-380.

208. Kelm M., Yoshida K. Methods in NO research. Wiley&Sons Ltd., London, UK. 1996. 126 p.

209. Khan S.A., Hare J.M. The role of nitric oxide in the physiological regulation of Ca2+ cycling // Curr Opin Drug Discov Devel. 2003. - Vol. 6, N5. -P.658-666.

210. Kilbinger H. Modulation of acetylcholine release by nitric oxide // Prog. Brain. Res. 1996. - Vol. 109. - P. 219-224.

211. Kim S.F., Huri D.A., Snyder S.H. Inducible nitric oxide synthase binds, S-nitrosylates, and activates cycIooxygenase-2 // Science. 2005. - V. 310. P. 1966—1970.

212. Kim S.J., Song S.K., Kim J. Inhibitory effects of nitric oxide on voltage-dependent calcium currents in rat dorsal root ganglion cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - Vol. 271. - P.509-514.

213. Klink M., Swierzko A., Sulowska Z. Nitric oxide generation from hydroxylamine in the presence of neutrophils and in the cell-free system //APMIS. -2001,- Vol. 109. P. 493-499.

214. Kojda G., Kottenberg K., Noak E. Inhibition of nitric oxide synthase and soluble guanylyl cyclase induced cardiodepressive effects in normal rat hearts //Eur. J. Pharmocol. 1997. - Vol. 334. - P.181-190.

215. Konturek S.K., Konturek P.C. Role of nitric oxide in the digestive system // Digestion. 1995 - Vol. 56(1). - P. 1-13.

216. L-Arginine produces NO-independent increases in dopamine efflux in rat striatum / M.T. Silva et al. //. Neuro Report. 1998. - Vol. 9. - P. 149-152.

217. L-arginine stimulates host defenses in patients with breast cancer / , J. Brittenden et al. // Surgery. 1994. - 115, № 2. - P. 205-212.

218. L-arginine uptake, the citrulline-NO cycle and arginase II in the rat brain: an in situ hybridization study / O. Braissant et al. // Mol Brain Res. -1999-Vol. 70, № 2. P. 231-241.

219. Liauder L., Soriano F.G., Szabo C. Biology of nitric oxide signaling // Crit. Care Med. 2000. - Vol. 28. - 37-52.

220. Lonart G., Wang J., Johnson K.M. Nitric oxide induces neurotransmitter release from hippocampal slices // Eur. J. Pharmacol. 1992. — Vol. 220.-P. 271-272.

221. Lorentz K . Approved recommendation on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 9. IFCC method for a-amylase (1,4-a-D-glucan 4-glucanohydrolase, EC 3.2.1.1) // Clin Chem Lab Med. 1998.-Vol. 36.-P. 185 -203.

222. Loscalzo J. Nitric oxide insufficiency, platelet activation, and arterial thrombosis // Circ. Res. 2001. - № 88. - P. 756-762.

223. Lovren F., Triggle C. Involvement of nitrosothiols, nitric oxide and voltage-gated K+ channels in photorelaxation of vascular smooth muscle // Eur. J. Pharmacol. 1998. -V. 347. - P. 215—221.

224. Lowenstein C.J., Dinerman J.L., Snyder S.H. Nitric oxide: a physiologic messengers // Ann. intern. Med. 1994. - Vol.120. - P. 227-237.

225. Lu G., Mazet B., Sarr M., Szurszewski J. Effect of nitric oxide on calcium-activated potassium channels in colonic smooth muscle of rabbits // Am. J. Physiol. 1998. - V. 274. - P. 848-856.

226. Mannick J.B. Immunoregulatory and antimicrobial effects of nitrogen oxides // Proc Am Thorac Soc. 2006. - Vol.3(2). P.161-165

227. Mechanisms of nitric oxide releasefrom the vascular endothelium / R. Busse et al. // Circulation. 1993. - Vol. 87 - P. 18-25.

228. Meffert M.K., Premack B.A., Schulman H. Nitric oxide stimulates Ca -independent synaptic vesicle release // Neuron. 1994. — Vol. 12, №6. - P. 12351244.

229. Metabolic effect of arginine on malignant tissues / G. Caso et al. // Clin Nutr. 1996. - Vol. 15. - P. 89-90.

230. Metabolic fate of nitric oxide / K. Yoshida et al. // Int. Arch. Occup. Environ. Health. 1980. - Vol. 46. - P. 71-77.

231. Michel T., Feron O. Nitric oxide synthases: which, where, how and why // J.Clin. Invest. 1997. - Vol. 100, № 9. - P. 2146-2152.

232. Modulation of neuronal nitric oxide release by soluble guanyly cyclase in guinea pig colon / K. Hallen et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -2001.-Vol. 280.-P. 1130-1134.

233. Moncada S., Bolanos J.P.J. Nitric oxide, cell bioenergetics and neurodegeneration // J. Neurochem. 2006. - Vol. 97. - P. 16761689. •

234. Moncada S., Higgs A. Mechanisms of disease: the L-arginine nitric oxide pathway // New Engl. J. Med. - 1993. - Vol. 329. - P. 2002-2012.

235. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: a physiology, pathophysiology and pharmacology // Pharmacol. Rev. 1991. - Vol.43. - P. 109-142.

236. Mori M., Gotoh T. Regulation of nitric oxide production by arginine metabolic enzymes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - Vol. 275. - P. 715-719.

237. Morley J.E., Flood J.E. Evidence that nitric oxide modulates food intake in mice // Life Sci. 1992. - Vol. 51. - P. 1285-1289.

238. Morley J.E., Mattammal M.B. Nitric oxide synthase levels in obese Zucker rats // Neurosci Lett. 1996. - Vol. 209. - P. 137 - 139.

239. Murphy T., Hart K., Samson W.K. Nitric oxide stimulates water drinking in the rat // FASEB J. 1994. - Vol. 8., N 4. - P.314- 313.

240. Nakaki T. Physiological and clinical significance of NO (nitric oxide) a review. // Keio J. Med. - 1994. - Vol. 43. - P. 15-26.

241. Nathan C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. // FASEB J. -1992. Vol.6. - P. 3051-3064.

242. Nathan C., Xie Q. Nitric oxide synthases: roles, tolls and controls. // Cell. 1994.-Vol. 79.-P. 915-918.

243. Nitric Oxide / L.G. Que et al. // Biology and Chemistry. 2002. -Vol. 6, №1. - P. 1-8

244. Nitric oxide and carbon monoxide produce activity dependent long-term synaptic enhancement in hippocampus / M. Zhuo et al. // Science. — 1993. — Vol. 260.-P. 1946-1950.

245. Nitric oxide and cyclic GMP formation upon electrical field stimulation cause relaxation of corpus cavernosum smooth muscle / L. J. Ignarro et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990. - Vol. 170. - P. 843-850.

246. Nitric oxide and endothelin in pathophysiological settings / T.E. Hunley et al. // Pediatr. Nephrol. 1995. - № 9. - P. 235-244.

247. Nitric oxide controls feeding behavior in the chicken / Y.L. Choi et al. // Brain Res. 1994. - Vol. 654. - P. 163-166.

248. Nitric oxide directly activates calcium-dependent potassium channels in vascular smooth muscle / V.M. Bolotina et al. // Nature. 1994. Vol. 368, № 6474.-P. 850-853.

249. Nitric oxide directly activates large conductance Ca-activated K channels (rSlo) / S.Y. Jeong et al. // Mol Cells. 2001. - Vol. 12, № 1. - P. 97102.

250. Nitric oxide donors chemical activities and diological applications / P.G. Wang et al. // Chem. Rev. 2002. - Vol. 102. - P. 1091-1134.

251. Nitric oxide in skeletal muscle / L. Kobzik et al. // Nature. 1994. -Vol. 372.-P. 546-549.

252. Nitric oxide in the developing kidney / M.J.Solhaug et al. // Pediatr. Nephrol. 1996.-Vol.10.-P. 529-539.

253. Nitric oxide increases excitability by depressing a calcium activated potassium current in snail neurons / A. Zsombok et al. // Neurosci. Lett. 2000. -Vol. 295, №3.-P. 85-88.

254. Nitric oxide inhibits caspase-3 by S-nitrosation in vivo / L. Rossig et al. // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P. 6823-6826.

255. Nitric oxide modulates the release of vasopressin from rat hypothalamic explants / S. Yasin et al. // Endocrinology. 1993. - Vol.133. - P. 1466-1469.

256. Nitric oxide regulates endocytosis by S-nitrosylation of dynamin / G. Wang et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. - Vol. 103, №5. - P. 12951300.

257. Nitric oxide regulates excitatory amino acid release in a biphasic manner in freely moving rats / J. Segieth et al. // Neurosci. Lett. 1995. - Vol. 200.-P. 101-104.

258. Nitric oxide relaxes human myometrium by a cGMP-independent mechanism / K. Bradley et al. //Am. J. Physiol. 1998. - Vol. 275. - P. 16681673.

259. Nitric oxide signaling: systems integration of oxygen balance in defense of cell integrity / L. Gong et al. // Curr Opin Hematol. 2004. -Nil.-P. 7-14.

260. Nitric oxide synthase and cyclic GMP-dependent protein kinase concentrated at the neuromuscular endplate / D.S. Chao. et al. // Neuroscience. 1997. Vol. 76, № 3. - P. 665-672.

261. Nitric oxide synthase in rat neuromuscular junction and in nerve terminals of Torpedo electric organ: Its role as regulator of acetylcholine release / J. Ribera et al. //J. Neuroscience Res. 1998. - Vol. 51. - P.51-102.

262. Nitric oxide synthase increases in hypothalamic / M.J. Villar et al. // Brain Res. 1994. - Vol. 644(2). - P. 273-281.

263. Nitric oxide synthase isozymes, characterization, purification, molecular cloning and function / U. Forstermann et al. // Hypertension. 1994. -Vol. 23.-P. 1121-1131.

264. Nitric oxide, cell signaling and cell death / G.A. Blaise et al. // Toxicology. 2005. - Vol. 208, № 2. - P. 177-192.

265. Nitric oxide: from molecular biology to clinical nephrology / A. Friedman et al. // Pediatr.Nephrol. 1998. - Vol. 12., № 6. - P 504-511.

266. Nitric oxide-dependent pro-oxidant and pro-apoptotic effect of metallothioneins in HL-60 cells challenged with cupric nitrilotriacetate / S. X. Liu et al. // Biochemical J. 2001. - Vol. 354 (Pt 2). - P. 397-406.

267. Nitric oxide-epoxygenase interactions and arachidonate-induced dilation of rat renal microvessels / I.T. Udosen et al. // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 2003. - Vol. 285, №5. - P. 2054-2063.

268. Nitric oxide-induced motility in aortic smooth muscle cells: role ¿of' protein tyrosine phosphatase SHP-2 and GTP-binding protein Rho / Y. Chang et al. // Circ. Res. 2002. - Vol. 91. - P. 390-397.

269. Nitrosyl hemoglobin production during reperfusion after focal cerebral ischemia in rats / E. Kumura et al. // Neurosci. Lett. 1994. - V. 177, №1-2.-P. 165-167.

270. Nitrous oxide reverses the increase in striatal dopamine release produced by N-methyl-D-aspartate infusion in the substantia nigra pars compacta in rats / N. Balon et al. // Neurosci. Lett. 2003. - Vol. 343 - P. 147-149.

271. Opposite action of nitric oxide on cholinergic synapses: which pathways / J.P. Mothet et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93. - P. 8721-8726.

272. Oral L-arginine improves endotheliumdependent dilation in hyperchoteslerolemic young adults / P. Larkson et al. // J. Clin. Invest. 1996. -97, №8.-P. 1989-1994.

273. O'Shea R.D., Gundlach A.L. Food or water deprivation modulate nitric oxide synthase (NOS) activity and gene expression in rat hypothalamic neurones: correlation with neurosecretory activity // J. Neuroendocrinol. 1996. — Vol.8.-P.417-425.

274. Oxygen upregulates nitric oxide synthase gene expression in bovine fetal pulmonary artery endothelial cells / A.J. North et al. // Am. J. Physiol. — 1996.-V.270-P. 643-649.

275. Palmer R.M.J., Ferrige A.G., Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor. // Nature. 1987. - Vol. 327. - P. 534-526.

276. Pan Z.H., Segal M.M., Lipton S. Nitric oxide-related species inhibit evoked neurotransmission but enhance spontaneous miniature synaptic currents in central neuronal cultures // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1996.-Vol. 93. - P. 1542315428.

277. Pannen B.H., Bauer M. Differential regulation of hepatic arterial and portal venous vascular resistance by nitric oxide and carbon monoxide in rats // Life Sci. 1998. - Vol. 62. - P. 2025-2033.

278. Paracrine role of adventicial superoxide anion in mediating spontaneous tone of the isolated rat aorta in angiotensin II-induced hypertension / H. Di Wang et al. // Hypertension. 1999. Vol. 33. - P. 1225-1232.

279. Paulus W. J., Vantrimpont P. J., Shah A. M. Acute effects of nitric oxide on left ventricular relaxation and diastolic distensibility in humans // Circulation. 1994. -Vol. 89. - P. 2070-2078.

280. Pepper C.B., Shah A.M. Nitric oxide: from laboratory to bedside. // Spectrum Int. 1996. - Vol. 36 (2) - P. 20-23.

281. Pineda J., Kogan J.H., Aghajanian G.K. Nitric oxide and carbon monoxide activate locus coeruleus neurons through a cGMP-dependent protein kinase: involvement of a nonselective cationic channel // J. Neurosci. — 1996. -Vol.16.-P.1389-1399.

282. Prast H., Philippu A. Nitric oxide as modulator of neuronal function // Progr. Neurobiol. 2001. - Vol. 64. - P. 51-68.

283. Radomski M.W., Palmer R.M., Moncada S. An L-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990.-Vol. 87.-P. 5193-5197.

284. Rand M.J., Li C.G. Nitric oxide as a neurotransmitter in peripheral nerves: nature of transmitter and mechanism of transmission // Ann. Rev. Physiol. 1995. - Vol. 57. - P. 659-682.

285. Reactive oxygen species and nitric oxide mediate plasticity of neuronal calcium signaling / O. Yermolaieva et al. // Proct. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. Vol. 97. - P 448-453.

286. Reconstitution of apo-superoxide dismutase by nitric oxide-induced copper transfer from metallothioneins / S. X. Liu et al. // Chemical research in toxicology. -2000. Vol. 13 (9). - P. 922-931.

287. Reid M.B. Reactive oxygen and nitric oxide in skeletal muscle // News in Physiol. Sci. 1996.-Vol. 11. - P. 114-119.

288. Renganathan M., Cummnis T.R., Waxman S.G. Nitric oxide blocks fast, slow and persistent Na+channels in C-type DRG neurons by S-nitrosylation // J. Neurophysiology. 2002. - Vol. 87, № 2. - P. 761-775.

289. Rhokinase and nitric oxide modulate the agonist-induced pulmonary artery diameter response time / C. Boer et al. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2002. - Vol. 282. - P. 990-998.

290. Role of phosphodiesterase and protein kinase G on nitric oxide-induced inhibition of prolactin release from the rat anterior pituitary / M.O. Velardez et al. // Eur. J. Endocrinol. 2000. - Vol. 143. - P. 279-284.

291. Role of the enzyme calmodulin-binding domain in membrane association and phospholipid / R.C. Venema et al. // J. Biol. Chem. 1995. - Vol.270.-P. 14705-14711.

292. Schuman E.M., Madison D.V. Nitric oxide and synaptic function // Annu. Rev Neurosci. 1994. - Vol. 17. - P. 153-183.

293. Schweighofer N., Ferriol G. Diffusion of nitric oxide can facilitate cerebellar learning: A simulation study // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000. - Vol. 97, № 19.-P. 10661-10665.

294. Schwingshackl A., Moqbel R., Duszyk M. Nitric oxide activates ATP-dependent K+ channels in human eosinophils // J. Leukoc. Biology 2002. - Vol. 71, № 5. - P.807-12.

295. Scudds R.J., Helewa A., Scudds R.A. The effects of transcutaneous electrical nerve stimulation on skin temperature in asymptomatic subjects.// PhysTher- 1995 -Vol.75(7) P. 621-628.

296. Shaul P.W., Smart E.J., Robinson L.J. Acylation targets endothelial nitric oxide synthase to plasmalemmal caveolae. // J. Biol. Chem. 1996. - Vol.271.-P. 6518-6523.

297. Sigmon D.H., Beierwaltes W.H. Degree of renal artery stenosis alters nitric oxide regulation of renal hemodynamics // J. Am. Soc. Nephrol. — 1994. -Vol. 5.-P. 1369-1377.

298. S-nitrosohaemoglobin: a dynamic activity of blood involved in vascular control / L. Jia et al. // Nature. 1996. - Vol. 380. - P. 221 - 226.

299. Snyder S.H. Janus faces of nitric oxide //Nature. 1993. - Vol. 364.1. P. 577.

300. Stampler J.S., Meissner G. Physiology of nitric oxide in skeletal muscle // Physiology Rev. 2001 - Vol. 81, № 1 - P. 209-237.

301. Stimulation of the nitric oxide synthase pathway in human hepatocytes by cytokines and endotoxin / A.K. Nussler et al. // J.Exp. Med. -1992.-Vol. 176.-P. 261-264.

302. Stoos B.A., Carretero O.A., Garvin J.L. Endothelial-derived nitric oxide sodium transport by affecting apical membrane channels in cultured collecting duct cells // J. Am. Soc. Nephrol. 1994. -Vol. 4. - P. 1855-1860.

303. Taira J., Misik V., Riesz P. Nitric oxide formation from hydroxylamine by myoglobin and hydrogen peroxide // Biochim. Biophys. Acta. — 1997. Vol. 1336, №3.-P. 502-508.

304. Takeuchi K., Ohuchi T., Okabe S. Effects of nitric oxide synthase inhibitor NG-nitro-L-arginine methyl ester on duodenal alkaline secretory and ulcerogenic responses induced by mepirizole in rats // Dig. Dis. Sci. 1995. - Vol. 40(3). - 670-677.

305. Taoka S., Banerjee R. Characterization of NO binding to human cystathionine P-synthase: possible implications of the effects of CO and NO binding to the human enzyme // J. Inorg. Biochem. — 2001. — Vol. 87. — P. 245251.

306. Targeted disruption of the neuronal nitric oxide synthase gene / P.L. Huang Dawson et al. // Cell. 1993. - Vol. 75. - P. 1273-1286.

307. The oxyhemoglobin reaction of nitric oxide / A.J. Gow et al. // Biochemistry. 1999. - Vol. 96. - P. 9027 - 9032.

308. The relationship between L-arginine-dependent nitric oxide synthesis, nitrite release and dinitrosyl-iron complex formation by activated macrophages / A.F. Vanin // Biochim. Biophys. Acta. 1993. -Vol. 1177. - P. 37-42.

309. Thio-mediated generation of nitric oxide accounts for the vasodilator action of furoxans / Feelisch et al. // Biochem. Pharmacol. 1992.- Vol. 44(6). -P. 1149-1157.

310. Upchurch G.R., Welch G.N., Loscalso J. The vascular biology of S-nitrosothiols, nitrosated derivatives of thiols // Vascular Med. —1996. — P. 25-33.

311. Use of benzofuroxan derivatives as antiplatelet agents: pat. 2003053439 World Intellectual Property Organization; publ. 03.07.2003. 43 p.

312. Vanin A. F., Malenkova I. V., Serezhenkov V. A. Nitric oxide // Biol. Chem.- 1997.-Vol. l.-P. 191-203.

313. Vascular smooth muscle cell membrane depolarization after NOS inhibition hypertension / I. Bratz et al. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. — 2002. Vol. 282. - P. 1648-1655.

314. Vincent S.R., Kimura G.K. Histochemical mapping of nitric oxide synthase in the rat brain // Neuroscience. 1992. - Vol. 46. — P. 755-784.

315. Wang D., Wei J., Hsu K. Effects of nitric oxide synthase inhibitors on systemic hypotension, cytokines and inducible nitric oxide synthase expression and lung injury following endotoxin administration in rats // J. Biom. Sci. —1999. -V. 6. -P. 28-35.

316. Wang T., Xie Z., Lu B. Nitric oxide mediates activity-dependent synaptic supression at developing activity-dependent synaptic supression at developing neuromuscular synapses //Nature. — 1995. — Vol. 374. P.262-266.

317. Wang Y., Marsden P.A. Nitric oxide synthases: biochemical and molecular regulation. // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1995. - Vol:4. - P. 1222.

318. Water soluble furoxan derivatives as NO prodrugs / G. Sorba et al. // J. Med. Chem. -1997. Vol. 40 - P. 463-469.

319. West A.R., Galloway M.P. Nitric oxide and potassium chloride-facilitated striatal dopamine efflux in vivo: role of calcium- dependent release mechanisms //Neurochem. Int. -1998. Vol. 33. - P. 493-501.

320. Wiesinger H. Arginine metabolism and the synthesis of NO in nervous system // Prog Neurobiol. 2001. - Vol. 64, № 4. - P. 365391.

321. Wildemann B., Bicker G. Nitric oxide and cGMP induced vesicle release at Drosophila neuromuscular junction // J. Neurobiol. 1999. - Vol. 39, № 3.-P. 337-346.

322. Wolin M.S. Interactions of oxidants with vascular signaling systems // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2000. - Vol. 20. - P. 1430-1442.

323. Wu X., Somlyo A.V., Somlyo A.P. Cyclic GMP-dependent stimulation reverses G-protein-coupled inhibition of smooth muscle myosin light chain phosphate // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - V. 220. -P. 658-663.

324. Yamakage M., Hirshman C.A., Croxton T. Sodium nitroprusside stimulates Ca "activated K channels in porcine tracheal smooth muscle cells // Am. J. Physiol. -1996. -V. 270. P. 338-345.

325. Zhang J., Snyder S.H. Nitric oxide in the nervous system // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1995. - Vol. 35. - P. 213-233.

326. Zhao X. J., Sampath V., Caughey W. S. Infrared characterization of nitric oxide bonding to bovine heart cytochrome c oxidase and myoglobin // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1994. - Vol. 204. - P. 537-543.

327. Zhuo M., Laitinen J.T., Li X., Hawkins R.D. On the respective roles of nitric oxide and carbon monoxide in long-term potentiation in the hippocampus // Learn. Mem. 1999. - Vol. 6, № 1. - P. 63-76.1. СПРАВКА

328. УТВЕРЖДАЮ Проректор по учебной работе Ф170У ВПО «Ульяновская государствен- ^наяхей^Ькохозяйственная академия», /М.В. Постнова1. КАРТА ОБРАТНОЙ СВЯЗИ

329. Материалы диссертации рассмотрены на заседании кафедры протокол № 14 от «31» марта 2011 года1. УТВЕРЖДАЮ»

330. ВПО «Чувашская государственная |ая\ академия»ц1. Кириллов II.К. 201 1 г.1. КАРТА ОБРАТНОЙ СВЯЗИ

331. Материалы диссертации рассмотрены па заседании кафедры протокол № оч' 201 1 года1. Заведующий кафедрой

332. Г.Х-С-Х 2- С.-- ч', ■-<!- с ^-¿с- /-у"1. Ц' (С кподписьX.^-Сг^/'а; / г^/нли

Информация о работе

Каримова, Руфия Габдельхаевна
доктора биологических наук
Казань, 2011
ВАК 03.03.01

Диссертация

Комплексная нитроксидергическая реакция организма на соединения бензофуроксанового ряда - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы