Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Комплексная лабораторная диагностика хламидиоза и ассоциированных с ним инфекций при эндоцервицитах

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Федина, Елена Дмитриевна

Введение.

Глава 1. Диагностика генитальных инфекций, вызванных Chlamydia trachomatis. Обзор литературы.

1.1. Биологические свойства хламидий и связанные с ними особенности развития и течения урогенитальных хламидиозов.

1.1.1 .Таксономия хламидий.

1.1.2. Морфология и цикл развития.

1.1.3. Персистентная инфекция.

1.2. Хламидийный цервицит.

1.2.1. Клиническая картина.

1.2.2.Осложнения цервицитов.

1.2.3. Иммунная реакция на хгшидийную инфекцию при эндоцервицитах.

1.3. Лабораторная диагностика хламидийных эндоцервицитов.

1.3.1. Микробиологические методы.

1.3.2. Иммунологические методы.

1.3.3. Генодиагностика хламидиозов.

1.1.4. Обнаружение хламидийных AT.

Глава 2. Материал и методы исследования.

2.1. Лабораторные методы исследования хламидийной инфекции.

2.1.1. Метод выявления АГ хламидий флюоресцирующими моноклональными AT.

2 Л .2. Выделение хламидий в культуре клеток.

2.1.3. ПЦР.

2.1.4. Метод определения AT к АГ хламидий в рНИФ.

2.2. Лабораторные методы исследования сопутствующей С. trachomatis бактериальной микрофлоры и дрожжеподобных грибов.

2.3. Принципы расчета диагностической чувствительности и специфичности методов лабораторной диагностики хламидийной инфекции.

2.4. Статистическая обработка результатов исследования.

Глава 3. Результаты собственных исследований

§

3.1. Сравнительная оценка значимости различных методов диагностики хламидийной инфекции.

3.2. Выявление хламидийной моно- и смешанной инфекции.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Комплексная лабораторная диагностика хламидиоза и ассоциированных с ним инфекций при эндоцервицитах"

Актуальность.

Урогенитальный хламидиоз остается одним из самых распространенных в мире заболеваний, передающихся половым путем. В здоровой популяции женщин России инфицированность хламидиями составляет 1-4%, а частота выявления их у гинекологических больных- 23-40%, в 2000 г. она составила 106,1 на 100000 населения [101].

По данным Всероссийского центра по хламидиозам при НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, хламидийная инфекция является причиной цервицитов в 22-42% случаев, сальпингитов - в 20-30%, бесплодия у женщин - в 50% [43].

Полиморфизм клинических проявлений, а также нередкое сочетание С. trachomatis с другими микроорганизмами значительно затрудняют клиническую диагностику хламидийных цервицитов, поэтому приоритет в этой области имеют лабораторные методы исследования.

Несмотря на появление в последние годы высокочувствительных диагностических тестов, они не всегда являются доступными из-за своей трудоемкости, дороговизны, отсутствия специального оборудования.

Анализ данных литературы показывает, что в настоящее время недостаточно изучен вопрос о качественном и количественном составе ассоциаций хламидий с представителями патогенной флоры при генитальной патологии у женщин, недостаточно разработаны критерии выявления возбудителя хламидиоза при смешанных инфекциях.

В конце XX века считали, что при такой форме патологии, как «негонококковый» цервицит, хламидийный агент выявляется в качестве моноинфекции в 20% случаев [см. ссылку 44]. Но позднее установили, что «негоноккокковый» цервицит обычно характеризуется не только неспецифичностью клинических проявлений, но и полиэтиологической природой, из-за чего не обеспечивается эффективной этиотропной терапией.

Поэтому разработка адекватного комплекса методов для диагностики именно хламидийных эндоцервицитов остается по прежнему актуальной проблемой.

Методы лабораторной диагностики хламидийной инфекции вообще достаточно хорошо разработаны к настоящему времени, однако до сих пор не удалось выявить наиболее оптимального диагностического теста (или комплекса таких тестов) для практической венерологии, который бы позволил решить проблему борьбы с хламидийными эндоцервицитами в условиях смешанной инфекции.

Цель исследования

Изучение диагностической ценности различных методов лабораторной диагностики урогенитальных хламидиозов, определение комплексов оптимальных методов для выявления хламидийной инфекции при эндоцервицитах.

Задачи исследования

1. Провести сравнительную оценку чувствительности и специфичности различных методов лабораторной диагностики хламидийных эндоцервицитов.

2. Разработать оптимальный подход к диагностике эндоцервицитов в условиях моно- и смешанной инфекции.

3. Установить удельный вес хламидийной инфекции среди больных "негонококковым" эндоцервицитом.

Научная новизна

Впервые проведена сравнительная оценка диагностической значимости методов прямой (РИФ) и непрямой (рНИФ) иммунофлюоресценции, метода выделения хламидий в культуре клеток, полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления С. trachomatis при эндоцервицитах, бесплодии и подозрении на хламидиоз.

С помощью впервые использованного комплекса этих методов проведена оценка распространенности С. trachomatis среди женщин с «негонококковым» эндоцервицитом, бесплодием, подозрением на хламидиоз. Установлено, что удельный вес хламидийной инфекции среди больных «негонококковым» эндоцервицитом составляет 42,9%, среди женщин с бесплодием - 46,2%, среди женщин с подозрением на хламидиоз - у 68,2%.

Проанализирован качественный состав и частота встречаемости ассоциированных с хламидиозом инфекций при «негонококковых» эндоцервицитах. Наибольшая распространенность установлена для хламидийно-гарднереллезной инфекции (36,1%). В сочетании с хламидиозом кандидоз встречался в 14,7% случаев, трихомониаз - в 13,1%, стафилококковая инфекция -в 11,4%, в сочетании с энтерококком C.trachomatis была обнаружена в 8,2%.

Практическая значимость

Подтверждена наибольшая целесообразность использования комплекса двух методов - культурального и ПЦР для диагностики С. trachomatis при эндоцервицитах. Для выявления хламидийной инфекции при бесплодии показана наибольшая эффективность комплекса рНИФ и ПЦР. При обследовании женщин, половыми партнерами которых являются мужчины с хламидийной инфекцией, наибольшую диагностическую эффективность подтвердили два комплекса методов: культуральный и ПЦР, РИФ и ПЦР. В группе здоровых женщин для выявления хламидийной инфекции достаточно использования одного метода - культурального или ПЦР.

Определено максимальное количество сопутствующей хламидийным эндоцервицитам бактериальной микрофлоры и дрожжеподобных грибов, при котором не снижается эффективность выявления хламидий в РИФ, культуре клеток и ПЦР при микст-инфекциях.

Апробация диссертации и публикации

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на YIII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002 г.), Всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Москва, 2002 г.), совместной научно-практической конференции кафедры микробиологии медицинского факультета Российского университета дружбы народов и лаборатории хламидиозов ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи.

По теме диссертации опубликовано 4 научных работы.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Федина, Елена Дмитриевна

Выводы

1. Установлено, что доля хламидийных эндоцервицитов среди среди женщин с «негонококковым» эндоцервицитом составляет 42,9%.

2. Подтверждена наибольшая диагностическая значимость комплекса культурального метода и ПЦР для диагностики С. trachomatis при эндоцервицитах, рНИФ и ПЦР - для выявления хламидийной инфекции при бесплодии, комплексов культурального метода и ПЦР, РИФ и ПЦР - для диагностики С. trachomatis у женщин с подозрением на хламидиоз, культурального метода или ПЦР - при обследовании здоровых женщин.

3. Установлена частота встречаемости хламидийной моноинфекции (44,3%) среди женщин с хламидийным эндоцервицитом.

4. Проанализирован качественный состав и частота встречаемости ассоциированных с хламидиозом инфекций при «негонококковых» эндоцервицитах. Наибольшая распространенность установлена для хламидийно-гарднереллезной инфекции (36,1%). В сочетании с хламидиозом кандидоз встречался в 14,7% случаев, трихомониаз - в 13,1%, стафилококковая инфекция - в 11,4%, в сочетании с энтерококком C.trachomatis была обнаружена в 8,2%.

5. Определено максимальное количество сопутствующей хламидийной инфекции бактериальной флоры и дрожжеподобных грибов, которое не влияет на эффективность ее выявления в РИФ, культуре клеток и ПЦР. Для энтерококка оно составило Зх103±103 КОЕ, для золотистого стафилококка -5х102±102КОЕ, для Candida albicans - 2хЮ5±105КОЕ.

6. Проведенные исследования позволили определить параметры, особенности и область применения каждого теста для эффективной диагностики хламидийной урогенитальной патологии у женщин в практической венерологии.

Заключение.

Урогенитальный хламидиоз остается одним из самых распространенных в мире ЗШШ. По данным ВОЗ [124], в США ежегодно регистрируется около 3 млн. новых случаев хламидиоза, в Европе этот показатель выше в 2 раза. В России ежегодно выявляется более 1 млн. больных хламидиозом, с каждым годом заболеваемость увеличивается, в 2000 г. она составила 106,1 на 100000 населения. По данным Всероссийского центра по хламидиозам, хламидийная инфекция является причиной цервицитов в 30-50% случаев, сальпингитов - в 2030%, бесплодия - в 50% [44].

Полиморфизм клинических проявлений, а также нередкое сочетание С. trachomatis с другими микроорганизмами значительно затрудняют клиническую диагностику урогенитальных хламидиозов, поэтому приоритет в этой области имеют лабораторные методы исследования.

Развитие лабораторных методов диагностики генитального хламидиоза самым непосредственным образом связано с познанием биологических особенностей хламидий, их антигенного строения, патогенезом инфекционного процесса, вызываемого этим возбудителем, с общим прогрессом в области диагностики инфекционных заболеваний. Если в недавнем прошлом простые цитоскопические методы казались достаточными, то применение различных лабораторных моделей для выделения в культуре хламидий уже оценивалось как "золотой стандарт". Однако возможность выявления антигенов хламидий прямо в тканях пораженного органа с помощью иммунофлюоресцентных методов или ДНК-зондов несколько поколебало положение "золотого стандарта", так как показало более высокую их чувствительность. Они существенно пополнили набор диагностических тестов в распознавании хламидиоза. Иммуноферментные методы определения как АГ хламидий, так и AT к ним практически получили широкое распространение в диагностике хламидиоза. Поэтому обсуждение достоинств и недостатков различных методов диагностики хламидиоза является весьма полезным, поскольку позволяет сделать выбор оптимальных методов из арсенала имеющихся.

Анализ данных литературы показывает, что в настоящее время недостаточно изучен вопрос о качественном и количественном составе ассоциаций хламидий при генитальной патологии у женщин, недостаточно разработаны критерии выявления возбудителя хламидиоза при смешанных инфекциях.

Поскольку цервициты являются самой распространенной урогенитальной патологией у женщин, вызываемой хламидиями [30], разработка комплекса оптимальных методов для диагностики именно хламидийных эндоцервицитов остается по прежнему актуальным вопросом.

Исходя из вышеизложенного, нами проведено исследование, целью которого явилось изучение диагностической эффективности различных методов лабораторной диагностики хламидиозов, разработка комплексов оптимальных методов для выявления хламидийной инфекции при эндоцервицитах и идентификация возбудителя хламидиоза при микст-инфекциях.

Имеющийся опыт диагностики других форм урогенитальных хламидиозов [7,13] позволил отобрать ряд диагностических методов, характеризующихся, по данным литературы, высокой чувствительностью, специфичностью, технической доступностью и сравнить диагностическую эффективность этих методов при этиологической диагностике хламидийных цервицитов.

Были изучены следующие методы:

-метод выявления АГ хламидий флюоресцирующим моноклональными AT в реакции прямой иммунофлюоресценции (РИФ);

-метод определения AT к АГ хламидий в реакции непрямой иммунофлюоресценции (рНИФ);

- метод диагностического выделения хламидий в культуре клеток;

-ПЦР.

Источником первичного инфекционного материала являлись соскобы из цервикального канала 142 женщин с первичным клиническим диагнозом "неспецифический" эндоцервицит, соскобы из цервикального канала и сыворотки крови 78 женщин с бесплодием, соскобы из цервикального канала 44 женщин, половых партнеров мужчин, инфицированными хламидиями и 20 условно здоровых женщин.

В первой группе хламидийная инфекция выявлена у 61 женщины (42,9%). Во второй группе - у 36 (46,2%). В третьей - у 30 (68,2%). В четвертой группе инфицированных хламидиями женщин не было. У женщин первой и третьей групп с неярко выраженной восходящей инфекцией мы не использовали метод определения антихламидийных AT из-за его низкой эффективности при этой патологии.

Сравнительная оценка диагностической специфичности и чувствительности каждого теста проводилась при сравнении данных, полученных с использованием этого теста, с данными, полученными так называемым "общепризнанным" тестом. В качестве истинно положительных и истинно отрицательных результатов "общепризнанного" теста были отобраны такие, в которых положительный или отрицательный результат был определен не менее чем двумя другими используемыми методами.

При апробации метода диагностического выделения хламидий в культуре использовали клетки McCoy, полученные из тканей синовиальных оболочек человека и образовавшие линию фибробластов. Для создания оптимальных условий культивирования с целью повышения чувствительности клеток к хламидиям., для лучшей адсорбции и проникновения хламидий в клетку хозяина проводили предварительное центрифугирование используемоего материала на монослой выращенных клеток и обработку монослоя циклогексимидом.

Положительные результаты диагностического выделения определялись индикацией цитоплазматических включений в культуральных препаратах при окраске моноклональными флюоресцирующими AT, специфичными к белковым АГ всех серотипов С. trachomatis. Видоспецифические моноклональные AT не взаимодействовали с АГ С. pneumoniae и С. psittaci. Оценку результатов выделения хламидий проводили через 48-72 ч после первичного заражения. Серийного слепого пассировантя материала не проводили.

Метод культуры клеток позволил выявить хламидийную инфекцию у 55 из 142 женщин с эндоцервицитом, у 36 из 78 пациенток с бесплодием, у 28 из 44 пациенток с подозрением на хламидиоз. В соскобах, полученных от условно здоровых женщин, хламидийная инфекция культуральным методом не выявлена. Таким образом, с помощью этого метода диагноз хламидийной инфекции был установлен соответственно у 38,7%, 46,1%, и 63,6% указанных групп обследованных.

Проведенный анализ диагностической специфичности и чувствительности показал, что для культурального метода их показатели были соответственно 100% и 91,0% в группе женщин с эндоцервицитом, 100% и 85,7% - у пациенток с бесплодием, 100% и 86,6% - у пациенток с подозрением на хламидиоз.

Полученные нами результаты выявили достаточно низкую диагностическую чувствительность культурального исследования во 2-й и 3-й группах. Возможно, у женщин с бесплодием и женщин - половых партнеров мужчин с хламидийной инфекцией мы не смогли идентифицировать возбудитель

6 ложноотрицательных результатов во 2-й и 2 - в 3-й группах) из-за контаминации соскобных образцов сопутствующей бактериальной флорой, которая вызвала дегенерацию клеток монослоя, в результате чего изменилась их способность к восприятию возбудителя хламидиоза.

Отмечая высокую специфичность и чувствительность культурального метода, следует отметить, что он трудоемок и требует дорогостоящего оборудования, высокой технической подготовки исполнителей, особого режима работы с возбудителем и особых условий транспортировки материала, позволяющих сохранить жизнеспособность микроорганизмов.

При использовании прямого иммунофлюоресцентного метода также использовалась окраска моноклональными флюоресцирующими AT, специфичными к белковым АГ всех серотипов С. trachomatis. Хламидийный АГ в эпителиальных клетках цервикального канала был выявлен у 65 из 142 пациенток с эндоцервицитом, у 38 из 78 женщин с бесплодием, у 31 из 44 пациенток с подозрением на хламидиоз. В аналогичных препаратах, полученных от лиц контрольной группы, АГ хламидий были выявлены в двух образцах.

Таким образом, диагноз хламидийной инфекции в РИФ установлен у пациенток с эндоцервицитом в 45,8%, в группе бесплодных женщин - в 48,7%, в группе женщин с подозрением на хламидиоз - в 70,5%, в контрольной группе - в 10%.

Для метода РИФ диагностическая специфичность и чувствительность составили 95,2% и 93,8% в первой группе женщин с эндоцервицитом , 95,5% и 91,7%- во второй группе бесплодных женщин, 93,3% и 96,7%- в третьей группе женщин с подозрением на хламидиоз. Диагностическая специфичность в 4-й группе составила 86,9%.

Поскольку в использованной нами тест-системе ХлаМоноСкрин-2 применялись строго видоспецифические моноклональные AT к С. trachomatis, перекрестные реакции с АГ других представителей семейства Chlamydiaceae можно было исключить. Однако часто наблюдалось неспецифическое свечение слизи, детрита, ядерных структур. Во избежание диагностических ошибок, положительными результатом РИФ мы признавали обнаружение свечения строго в цитоплазме эпителиальных клеток.

Достаточно низкая диагностическая чувствительность РИФ (91,7%) у женщин 2-ой группы могла быть связана с двумя ложноотрицательными результатами из-за недостаточного количества клеток цилиндрического эпителия в пробах.

Полученные данные свидетельствуют о том, что РИФ является специфичным и высокочувствительным тестом для диагностики хламидийной инфекции при разнообразной генитальной патологии.

Для постановки ПЦР была использована диагностическая тест-система ХламиАмплиТест, позволяющая выявлять специфическую ДНК С. trachomatis. Используемые в тест-системе праймеры давали возможность амплифицировать фрагмент гена, входящего в состав криптической плазмиды С. trachomatis. Данная тест-система дает возможность выявлять специфический фрагмент ДНК С. trachomatis в присутствии других представителей рода Chlamydiaceae, других микроорганизмов и клеток человека.

При использовании ПЦР хламидийная инфекция в первой группе была выявлена у 60(42,3%) из 142 женщин, во второй группе - у 35 (42,9%) из 78 пациенток, в третьей - у 30 (68,1%) из 44 женщин с подозрением на хламидиоз, в группе здоровых женщин хламидийная инфекция не выявлена.

Диагностическая специфичность и чувствительность ПЦР составили 98,7% и 98,4% в первой, 97,7% и 97,3%- во второй, 100% и 100%- в третьей группе соответственно.

Поскольку использованная тест-система высокоспецифична положительные результаты ПЦР (один в 1-й и один во 2-й группах) можно объяснить обнаружением хламидий, не выявляемых в РИФ и культуральном исследовании.

При оценке результатов серологического обследования мы обращали внимание не столько на общую частоту выявляемой серопозитивности, сколько на показатели ее интенсивности, определяемой по показателям титра AT.

Полученные результаты показывают, что наиболее часто встречающийся титр антихламидийных AT в сыворотках крови женщин с бесплодием - 1/128 (47,4%). Поскольку для С. trachomatis показатель диагностического титра составляет 1/64, при соответствующем клинико-эпидемиологическом анализе и учете анамнестических данных выявление хламидийных AT в титре 1/128 может иметь диагностическое значение, даже без исследования парных сывороток.

Кроме того, в группе бесплодных женщин в 13 случаях методы РИФ, ПЦР и культуры клеток показали отсутствие возбудителя хламидиоза, а в рНИФ отмечалось присутствие AT в титрах <1/128 (1/128-9 случаев, 1/256-2 случая, 1/512-2 случая). Можно сделать вывод, что у этих пациенток имелась хламидийная инфекция, которая, возможно, и являлась этиологическим фактором бесплодия, при элэм отсутствие возбудителя, его АГ и его ДНК непосредственно в исследованных образцах предполагало "высокую" локализацию патологического процесса с поражением органов малого таза.

У двух женщин методом ПЦР была выявлена ДНК возбудителя и титры AT составили 1/128 и 1/256, а результаты РИФ и культуры клеток были отрицательны. Возможно, в этом случае ПЦР выявляет ДНК некультивируемых форм хламидий. Еще у двух пациенток титры хламидийных AT оказались ниже диагностических (>1/64), но в реакции РИФ и ПЦР были обнаружены АГ и ДНК С. trachomatis. Это свидетельствует о наличии хламидийной инфекции, однако бесплодие может иметь другую природу.

При сравнении диагностической значимости использованных методов, рассчитанной при помощи коэффициента корреляции Спирмена, мы обнаружили высокую степень корреляции каждого метода. Таким образом, принимая во внимание показатели диагностической специфичности и чувствительности методов, а также степени их корреляции, мы подтвердили наибольшую целесообразность использования комплекса двух методов - культурального и ПЦР для диагностики С. trachomatis при эндоцервицитах. Для выявления хламидийной инфекции при бесплодии показана наибольшая значимость комплекса рНИФ и ПЦР. При обследовании женщин, половыми партнерами которых являются мужчины с хламидийной инфекцией, наибольшую диагностическую значимость подтвердили два комплекса методов: культуральный и ПЦР, РИФ и ПЦР. В группе здоровых женщин для выявления хламидийной инфекции достаточно использования одного метода -культурального или ПЦР.

Следующей задачей нашего исследования явилось изучение микробиоценоза урогенитального тракта у женщин с урогенитальным хламидиозом для установления наиболее часто встречающихся с хламидиями ассоциаций микроорганизмов среди женщин с негонококковым эндоцервицитом и разработка рекомендаций по их эффективной диагностике.

В результате проведенных исследований нами обнаружено, что у 27 (44,3%) из 61 обследованной женщины была выявлена хламидийная моноинфекция. У

18(29,5%) пациенток мы обнаружили ассоциацию хламидий только с одним микроорганизмом: у 8(13,1%)-с возбудителем гарднереллеза, у 4(6,5%) -с возбудителем стафилококковой инфекции, у 3(4,9%) - с возбудителем трихомониаза, и у 3(4,9%) - с возбудителем кандидоза. У 13(21,3%) пациенток с хламидийной инфекцией было обнаружено сочетание двух микрооганизмов: у 5(8,2%) пациенток обнаружены энтерококк и гарднереллы, у 3(4,9%) -гарднереллы и золотистый стафилококк, у 3(4,9%) - дрожжеподобные грибы и гарднереллы, у 2(3,3%)- дрожжеподобные грибы и трихомонады, у 2(3,3%) -трихомонады и гарднереллы. Только у 1(1,6%) женщины с хламидийной инфекцией выявлена ассоциация трех микроорганизмов - трихомонад, дрожжеподобных грибов и гарднерелл.

Таким образом, наиболее часто в ассоциации с хламидиями встречались гарднереллы - у 22(36,1%) из 61 человека. Дрожжеподобные грибы обнаружены у 9(14,7%) пациенток с хламидийной инфекцией, трихомонады -у 8(13,1%), золотистый стафилококк - у 7(11,4%) и энтерококк - у 5(8,2%).

С помощью бактериологического метода мы смогли осуществить количественный учет сопутствующей хламидиям бактериальной флоры и дрожжеподобных грибов. Это позволило установить то наибольшее количество микроорганизмов (энтерококков, стафилококков, дрожжеподобных грибов рода Candida), при котором возможна идентификация возбудителя хламидийной инфекции в культуре клеток, АГ в РИФ и ДНК в ПЦР.

Установлено, что эти методы дают возможность выявлять хламидии в присутствии энтерококков в

3 3 2 2 количестве 3x10 ±10 КОЕ, золотистого стафилококка - в количестве 5x10 ±10 КОЕ, Candida albicans - в количестве 2х105±105 КОЕ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Федина, Елена Дмитриевна, Москва

1. Анкирская А.С. Проблемы хронической (персистирующей) хламидийной инфекции. // Акуш.гинекол. 1999. - №32. - С. 8-10.

2. Багдасаров А.Б. Сравнительная лабораторная диагностика и клинические проявления хламидийных уретритов у мужчин. // Автореф. дис.канд. мед. наук. -М.- 1982.

3. Битти B.JL, Моррисон Р.П., Бирн Д.И. Персистенция хламидий: от клеточных культур до патогенеза хламидийной инфекции. // ЗППП. 1995. - № 6. - С.3-18.

4. Вард М.Е. Современные данные об иммунологии хламидийной инфекции.// ЗППП. 1996. - № 4. - С.3-6.

5. Гомберг М.А., Соловьев A.M. Вариант терапии неосложненной гонорейно-хламидийной инфекции. // ЗППП. 2000. - № 2. - С. 36-39.

6. Гомберг М.А., Соловьев A.M., Черноусов А.Д. Обоснование иммунотерапии при лечении рецидивирующего урогенитального хламидиоза. // ЗППП. 2000. - № 2. - С. 30-36.

7. Горовиц Э.С. Опыт серологической диагностики хламидиозов. // Актуальные микробиологические и клинические проблемы хламидийных инфекций. Под. ред. Шаткина А.А., Орфила Ж.М. 1996. - С. 107.

8. Гранитов В.М. Хламидиозы. М. - 2000.

9. Джалилова А.Н. Урогенитальный хламидиоз у женщин репродуктивного возраста (совершенствование методов диагностики и лечения). // Автореф. дис.канд. мед. наук. М. - 2001.

10. Заболевания шейки матки, влагалища и вульвы (клинические лекции) // Под.ред. Прилепской В.Н. М. - 1999. - С. 201-213, 300-316.

11. Земцов В.А. Современные методы лечения мочеполового трихомониаза и трихомонадно-хламидийной инфекции у женщин //Автореф. дис.канд. мед. наук.-М. 1998.

12. Ильин И.И., Ковалев Ю.Н., Лысенко О.В. Размышления о лечении урогенитального хламидиоза. // Вестн. дермат. 1994. - №1. - С. 30-33.

13. Козлова В.И., Пухнер А.П. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий. М. - 1997. - С. 305-426.

14. Коршукова О.А. Микробиологические и иммунологические аспекты урогенитального хламидиоза у женщин. // Автореф. дис.канд. мед. наук. -Владивосток. 1993.

15. Коэн К.Р., Бранэм Р.К. Патогенез воспалительных заболеваний органов малого таза хламидийной этиологии. // ЗШШ. 1999. - № 6. - С. 4-7.

16. Кудряшов А.Г., Кривенчук Н.А. и др. Урогенитальные хламидиозы. Эффективность комплексной ИФА-ДНК диагностики для результатов лечения.

17. Современные направления диагностики и лечения урогенитального хламидиоза. Тез. докл. Сибирской науч.-практ. конф. дерматовенерологов. Новосибирск. 1998. - С. 9-10.

18. Кузнецова Н.П., Якубович Н.И. Урогенитальный хламидиоз.// Методическое пособие. Новосибирск. - 1998. - С.34.

19. Мавров И.И., Кутовая В.В., Шаткин А.А. Хламидийные поражения парауретральных ходов и крипт у женщин. // Вестн. дермат.и венер. 1982. - №8. - С. 22-24.

20. Мавров Г.И. Электронная микроскопия маточных труб у больных хламидиозом. // Актуальные микробиологические и клинические проблемы хламидийных инфекций. / Под.ред. А.А. Шаткина, Ж.М. Орфила. М., 1990. -С.39-40.

21. Манухин И.Б., Минкина Г.Н., Коптелова Н.В. и др. Хламидийная инфекция у больных с заболеваниями шейки матки. // Акушер, гинекол. 1991. -№ 6. - С. 60-64.

22. Медведев Б.И., Астахова Т.В., Узлова Т.В., Канаева Е.Ю. и др. Использование методов диагностики хламидиоза у женщин с бесплодием трубно-перитонеального и трубно-эндокринного генеза.// Вести медицины. -1995,- № 8 С.40-42.

23. Мартынова В.Р., Колкова И.Н., Шаткин А.А. Хламидии и хламидиозы: клиника, биология и диагностика. // Росс. мед. вестн. 1997. - № 3. - С. 49-50.

24. Михайлов А.В., Гасанова Т.А. Распространенность урогенитального трихомониаза и особенности его лабораторной диагностики у женщин с хроническими воспалительными заболеваниями малого таза. // ЗППП. 2000. -№ 2. - С. 26-30.

25. Мортон Р.С., Кингхорн Дж. Р. Урогенитальная хламидийная инфекция: переоценка данных и гипотезы. // ИППП. 2000. - № 2. - С.4-15.

26. Орфила Ж.М. Современное состояние лабораторной диагностики хламидиозов. // Актуальные микробиологические и клинические проблемы хламидийных инфекций. Под. ред. Шаткина А.А., Орфила Ж.М. 1990. - С. 9-14.

27. Оссеваарде Дж. М. Новые методы диагностики и эпидемиологическое исследование инфекций, вызванных Chlamydia trachomatis. Поворот в сторону молекулярных методов. // ЗППП. 1996. - № 6. - С. 14-21.

28. Пилинг Р.В., Бранэм Р.С. Методы молекулярной биологии для лабораторной идентификации Chlamydia trachomatis. // ЗШШ. 1994. - № 6. -С.5-10.

29. Платонов А.Е. Статистичский анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы. // М.: Издательство РАМН, 2000.

30. Полканов B.C., Глазкова Л.К. и др. Генитальная хламидийная инфекция. Этиология, эпидемиология, патогенез, диагностика, клиника и терапия. (Руководство для врачей). Екатеринбург. - 1994. - С.90.

31. Попов B.JL, Бескина С.Р., Шаткин А.А. и др. Ультраструктура начальных этапов взаимодействия гальпровий (хламидий) с клеткой хозяина. // ЖМЭИ.-1980. -№8.-С. 28-32.

32. Попов B.JL, Шаткин А.А., Прозоровский С.В. Урогенитальные хламидиозы (гальпровиозы). Атипичные формы возбудителя и их возможное значение в этиологии и патогенезе инфекции. // Вестн. дермат.и венер. 1982. -№2. - С. 26-28.

33. Савичева A.M., Башмакова М.А. Урогенитальный хламидиоз у женщин и его последствия. // Под ред. Э.К. Айламазяна. Нижний Новгород. 1998.

34. Сидорович С.Ю. Культура клеток как инструмент для определения хламидийной инфекции. // Вестн. дермат.и венер. 2001. - № 6. - С. 20-25.

35. Тейлор-Робинсон Д. Диагностика хламидиоза: решают ли современные достижения проблемы клинической практики. // ЗППП. 1996. - № 6. - С.13-14.

36. Томчина А.В. Роль хламидий в возникновении заболеваний половых органов у женщин. //Автореф. дис.канд. мед. наук. Смоленск. - 1997.

37. Хиллис С., Блэк К., Ньюхолл Дж., Уолш К., Гросклоуз C.JI. Новые возможности для профилактики хламидийной инфекции: вклад науки в практическое здравоохранение. // 3111111. 1996. - № 1. - С. 13-20.

38. Шаткин А.А. Гальпровии (хламидии) и вызываемая ими патология. Гальпровиозы (хламидиозы) человека и животных. / Под ред. Барояна О.В. М. -1979.-С. 5-12.

39. Шаткин А.А. Исторические и эпидемиологические аспекты хламидийных инфекций в СССР. // Актуальные микробиологические и клинические проблемы хламидийных инфекций. Под. ред. Шаткина А.А., Орфила Ж.М. 1990. - С. 5-8.

40. Шаткин А.А., Мавров И.И. Урогенитальный хламидиоз. Киев.-1983.-С.200.

41. Шаткин А.А., Попов В.Л., Бескина С.Р. Урогенитальные гальпровиозы (хламидиозы). Морфологические и ультраструктурные особенности возбудителя. // Вестн. дермат.и венер. -1981. №1. - С. 24-28.

42. Щербакова Н.И., Брагина Е.Е. и др. О взаимоотношении Chlamydia trachomatis и Trichomonas vaginalis in vitro. II Вестн. дермат.-1989.-№ 3.- С. 17-19.

43. Эйдельштейн И.А. Фундаментальные изменения в классификации хламидий и родственных им микроорганизмов порядка Chlamydiales. // Клин микробиол. и антимикроб, терапия. 1999. - т.1. - № 1. - С. 5-10.

44. Allan I., Hatch Т.Р., Pearce J.H. / Influence of cysteine deprivation on chlamydial differentiation from reprodactive to infective life-cycle forms. // J. Gen. Microbiol. 1995. -Vol. 63. - № 1. - P.199-200.

45. Allan I., Pearce J.H. / Association of Chlamydia trachomatis with novel cultured cells. // In: Chlamydial infections. Cambridge, 1986. - P. 35-38.

46. Ballard R., Fehler H.G., Piot P. Chlamydial infections of the eye and genital tract in developing societies. // Chlamydial infections. Cambridg. - 1986. - P. 479486.

47. Batteiger B.E. / The major outer membrane protein of a single Chlamydia trachomatis serovar can possess more than one serovar- specific epitop. // Infect. Immun. 1996. -Vol. 64. - № 2. - P.542-547.

48. Batteiger B.E., Fraitz J., Newhall W.J., Katz B.P., Jones R.B. / Association of reccurent chlamydial infection with gonorrhea.// J. Infect. Dis. 1989. -Vol. 159 -P.661-669.

49. Beatty W.L., Belanger T.A., Desai A.A., Morrison R.P., Byrne G.I / Tryptophan depletion as a mechanism of gamma interferon-mediated chlamydial persistence. // Infect. Immun. 1994. -Vol. 62. - № 9. - P. 3705-3711.

50. Beatty W.L., Byrne G.I., Morrison R.P. / Morphological and antigenic characterisation of gamma interferon mediated persistent Chlamydia trachomatis infections in vivo. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. -Vol. 90. - P.3998-4402.

51. Beatty W.L., Byrne G.I., Morrison R.P. / Repeated and persistent infection with Chlamydia and the development of chronic inflammation and disease. // Trends Microbiol. 1994. -Vol. 2. - № 3. - P.94-98.

52. Beatty W.L., Morrison R.P., Byrne G.I. / Reactivations of persistent Chlamydia trachomatis infection in cell culture. // Infect. Immun. 1995. -Vol. 63. -№ 1. p. 199-200.

53. Beatty W.L., Stephens R.S. / CD8+ lymphocyte-mediated lysis of Chlamydia-infected L cells using an endogenous antigen pathway.// J. Immunol. -1994. -Vol. 153. № 10 - P. 4588-4595.

54. Berg E.S., Anestad G., Moi H., Storvold G., Skaug K. / False-negative result of a ligase chain reaction assay to detect Chlamydia trachomatis due to inhibitors in urine. II Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1997. - Vol 16. - P. 727-731.

55. Bircelund S., Johnsen H., Christiansen G. / Chlamydia trachomatis serovar L2 inducers protein tyrosine phosphorylation during uptake by HeLa cells. // Infect. Immun. 1994. -Vol. 62. - № 11. - P. 4900-4908.

56. Blanchard T.J., Mabey D.C. / Chlamydial infections. // Br. J. Clin. Pract. -1994. -Vol. 48. № 4. - P. 201-205.

57. Bowie W.R., Wang S.P., Russel E. / Etiology of nongonococcal urethritis. //J. Clin. Invest. 1977. - Vol. 54. - P. 568-574.

58. Brunham R.C., Martin D.H., Kuo C.C. et al. / Cellular immune during uncomplicated genital infection with Chlamydia trachomatis in human. // Infect. Immun. -1981. -Vol. 34. № 1. - P. 98-104.

59. Brunham R.C., Peeling R.W. / Chlamydia trachomatis antigens: role immunity and pathogenesis. // Infect. Ag. Dis. 1994. -Vol. 3. - № 5. - P.218-233.

60. Brunham R.C., Paavonen J., Kiviat N., Kuo С.- C., Holmes K.K. / Mucopurulent cervicitis the ignored counterpart of urethritis in men. // N. Engl. J. Med. 1984.-Vol. 311.-P. 1-6.

61. Bychkova N.Y., Shinsky G.E. / The results of the examination of children whose parents were diagnosed chlamydiosis. // Int. Congr. Clin. Dermatol. Canada. -1996.-P. 165.

62. Byrne G.I. / Interferons and immune response to chlamydial infections. // Microbiology. 1986. -Vol. 5. - P. 99-102.

63. Byrne G.I., Lehman L.K., Landry G.L. / Induction of tryptophan catabolism is the mechanism for gamma-interferon-mediated inhibition of intracellular Chlamydiapsittaci replication in T24 cells. // Infect. Immun. 1986. -Vol. 53. - № 1. - P. 347-351.

64. Campbell L.A., Patton D.L., Moore D.E., Cappuccio A.L., Mueller B.A., Wang S.-P. / Detection of Chlamydia trachomatis deoxyribonucleic acid in women with tubal infertility. // Fertil. Steril. 1993. - Vol. 59. - P. 45-50.

65. Campbell S., Richmond S.J., Yates P. / The development of Chlamydia trachomatis inclusions within the host eucaryotic cell during interphase and mitosis. // J. Gen. Microbiol. 1989. - Vol. 135. - P. 1153-1165.

66. Cates W. Jr., Ralf R.T., Aral S.O. / Sexually transmitted diseases, pelvic inflammatory disease, and infertility: an epidemiologic update. // Epidemiol. Rev. -1990.-Vol. 12.-P. 199-200.

67. Cates W. Jr., Wasserheit J.N. / Genital chlamydial infections: epidemiologic and reprodactive sequelae. // Am. Obstet. Gynecol. -1991. Vol. 164. - P. 1771-1781.

68. Chang J., Leonar K., Arad Т., Pitt Т., Zhang Y. / Structural studies of the outer envelope of Chlamydia trachomatis by electron microscopy. // J. Mol. Biol. -1982.-Vol. 161.-P. 579-590.

69. Chen J.C., Stephens R.S. / Trachoma and LGY biovars of Chlamydia trachomatis share the same glycosaminoglycan-dependent mechanism for infection of eucaryotic cells. // Mol. Microbiol. 1994. - Vol. 11. № 3 - P.501-507.

70. Chlamydial infection. // Infection diseases of the female genital tract. / III edition by Sweet R.L., Gibbs R.S. 1995. - P. 64-110.

71. Christiansen G., Bircelund S. / Surface structure of Chlamydia. II Proceedings fourth meetings of the European society for Chlamydia research. August 20-23,2000, Helsinki, Finland. P. 17-20.

72. Cohen C.R., Brunham R.C. / Pathogenesis of Chlamydia induced pelvic inflammatory disease. // Sex. Trans. Infect.- 1999. Vol 75. - P. 21-24.

73. Coles A.M., Reynolds D. J., Harper A., Devitt A., Pearce J.H. / Low-nutrient induction of abnormal chlamydial development: a novel component of chlamydial pathogenesis? // FEMS Microbiol. Lett.- 1993. Vol. 106. - P. 193-200.

74. Czelusta A. Yen-Moor A., van der Straten M., Carrasco D., Tyring K. S. / Sexually transmitted diseases in HIV-infected patients. // J Am Acad Dermatol. 2000. -Vol. 43. P.409-432.

75. Dunlop E.M.C. / In: recent advances in sexually Transmitted Diseases. Edited by R.S.Morton, J.R.W. Harris. 1975. - P.290.

76. Gump A.C. / Chlamydia trachomatis as a couse of prepubertal vaginitis. // Obstet. Gynecol. -1985. Vol. 65. - P. 384-388.

77. Hackstadt Т. / Identification and properties of chlamydial polypeptides that bind eucaryotic cell surface components. // J. Bacteriol. 1986. - Vol. 165. - P. 13-20.

78. Hatch T.P. / Metabolism of Chlamydia. II In: Microbiology of Chlamydia. Ed. by Barron A.L. Boca Raton FL., 1988. - P. 97-110.

79. Hatch T.P., Al-Hossainy Т., Silverman J.A. / Adenine nucleotide and lysine transport in Chlamydia psittaci. II J. Bacteriol. 1982. - Vol. 150. - P. 662-670.

80. Hatch T.P., Miseli M., Sublett J.E. / Synthesis of disulfide-bonded outer membrane proteins during the developmental cycle of Chlamydia psittaci and Chlamydia trachomatis. // J. Bacteriol. 1986. - Vol. 165. - P. 379-385.

81. Heinrich I., Stevens C.E. et al. / Colposcopic manifestation of cervical a vaginal infection. // Obstet. Gynecol. Surv. 1994. - Vol. 43. - P. 373-381.

82. Kaul R., Wenman W.M. / Eucaryotic- like histones in Chlamydia. II Front Biosci. •• 1998. -Vol. 2. № 3. - P .300-305.

83. Kiviat N., Wolner-Hanssen P., Peterson M. / Location of Chlamydia trachomatis infection by direct immunofluorescence and culture in pelvic inflammatory disease. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1986. - Vol. 154. - P. 865- 873.

84. Leinonen M., Linnanmaki E., Mattila K. et al. / Circulating immune complexes containing chlamydial lipopolysaccharide in acute myocardial infarction. // Microb Pathog. 1990. - Vol. 9. - P. 67-73.

85. Linnanmaki E., Leinonen M., Ecman M.R. et al. / Chlamydia pneumoniae specific circulating immune complexes in chronic coronary heart disease. // Circulation. 1993. - Vol. 87. - P. 1130-1134.

86. Lundermous A.G., Bircelund S., Larsen P.M. et al. / Characterisation and identification of early proteins in Chlamydia trachomatis serovar L2 by two-dimentional gel electrophoresis. // Infect. Immun. 1990. - Vol. 58. - P. 2478-2486.

87. Lundermous A.G., Bircelund S., Fey S.J., Larsen P.M., Christiansen G. / Chlamydia trachomatis contains a protein similar to the Legionella pneumophila mip gene product. // Mol. Microbiol. -1991. Vol. 5. P 109-115.

88. Majeed M., Ernst J.D., Magnusson K.E., Kihlstrom E., Stendahl O. / Selective translocation of annexins during intracellular redistribution of Chlamydia trachomatis in HeLa and McCoy cells. // Infect. Immun. 1994. -Vol. 62. - 1. - P. 126-134.

89. Majeroni B.A. / Chlamydial cervicitis: complications and new treatment options. I I Am. Fam. Physican.- 1994. Vol. 49. - P. 1825-1829.

90. Manor E., Sarov I. / Inhibition of Chlamydia trachomatis replication in HEp-2 cells by human monocyte-derived macrophages. // Infect. Immun. 1988.- Vol. 56. -P. 3280-3284.

91. Manzeniuk I.N., Vorobjova M.S. The present condition of Chlamydia trachomatis in Russian Federation. // Proceedings fourth meetings of the European society for Chlamydia research. August 20-23,2000, Helsinki, Finland. P.l 14.

92. Marcowska J., Fischer N., Filas V. / The role of Chlamydia trachomatis infection in cervical cancer development. // Eur. J. Gynaecol. Oncol. 1999. - Vol 20. -P. 144-146.

93. Mardh P.-A., Papa K.T., Swensson L., Westrom L. / Chlamydia trachomatis infection in patients with acute salpingitis.// N. Engl. J. Med. 1977. - Vol 296. - P. 1377.

94. Matsumoto A. / Structural characterisation of chlamydial bodies. // In: Microbiology of Chlamydia. Ed. by Barron A.L. Boca Raton FL., 1988. - P. 21-45.

95. Matsumoto A., Manire G. P. / Electron microscopic observation on the effect of penicillin on the morphology of Chlamydia psittaci. II J. Bacteriol. 1970. -Vol. 101.- P. 278-285.

96. Meyer К. F., Eddie В. / Latent psittacosis infection in shell parakeets. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1933. - Vol. 30. - P. 483-488.

97. Morrison R.P., Belland R. J., Lyng K., Caldwell H.D. / Chlamydial diseas pathogenesis. The 57-kD chlamydial hypersensitivity antigen is a stress respons protein. // J. Exp. Med. 1989. - Vol. 170. - P.1271-1283.

98. Moulder J.W. / Intracellular parasitism: life in extreme environment. // J. Infect. Dis. 1974. - Vol. 130. - P. 300-306.

99. Moulder J.W., Novosel D.L., Offiser J.E. / Inhibition of the growth of agents of the psittacosis group by D-cycloserine and its specific reversal by D-alanine. // J. Bacteriol. 1963. -Vol. 85. - P. 707-711.

100. Moulder J.W. et al. Genus Chlamydia II Bergey's Manual of Systematic Bacteriology.- 1984.-Vol. 1.-P.729-739.

101. Newhall W.J.V. / Biosinthesis and disulphide cross-linking of the outer membrane components during the growth cycle of Chlamydia trachomatis. II Infect. Immun. 1987.-Vol. 311.- P.l-6.

102. Newhall W.J.V. / Macromolecular and antigenic composition of Chlamydiae.il In: Microbiology of Chlamydia. Ed. by Barron A.L. Boca Raton FL., 1988.-P. 47-70.

103. Paavonen J. / Genital Chlamydia trachomatis infections in the female. // J. Infect. 1992. -Vol. 25. Suppl. I. - P.39-45.

104. Paavonen J. / Chlamydia trachomatis in acute salpingitis. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1980. - Vol. 138. - P.957-959.

105. Paavonen J. / Chlamydia and cancer. // Proceedings fourth meetings of the European society for Chlamydia research. August 20-23, 2000, Helsinki, Finland. -P.239-240.

106. Read T.D., Brunham R.C., Eisen J., Fraser C.M. / The genomics of Chlamydia species. // Proceedings fourth meetings of the European society for Chlamydia research. August 20-23,2000, Helsinki, Finland. P.29.

107. Sardinia L.M., Segal E., Ganem D. / Developmental regulation of the cystein-rich outer membrane proteins of murine Chlamydia trachomatis. // J. Gen. Microbiol. 1988. -Vol. 134. - P. 997-1004.

108. Schachter J., Hill E.C., King E.B. et al. / Chlamydial infection in women with cervical dysplasia. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1975. - Vol. 123. - P.753- 757.

109. Schramm N., Wyrick P.B. / Cytoskeletal requirements in Chlamydia trachomatis infection of host cells. // Infect. Immun. 1995. -Vol. 62. - № 1. - P. 324-332.

110. Shemer Y., Sarov I. / Inhibition of the growth of Chlamydia trachomatis by human gamma interferon. // Infect. Immun. 1985. -Vol. 48. - P. 592-596.

111. Stary A. / European guideline for management of chlamydial infection. // Int. J.STD & AIDS. 2001. - Vol.12. - P. 31-33

112. Stephens R.S., Wagar E.A., Fdman U. / Developmental regulation of tandem promoters for the major outer membrane protein gene of Chlamydia trachomatis. 11 J. Bacteriol. 1988. -Vol. 170. - P. 744-750.

113. Su H., Watkins N.G., Zhang Y.-X., Caldwell H.D. / Chlamydia trachomatis -host cell interaction: role of the chlamydial outer membrane protein as an adhesin. // Infect. Immun. -1990. Vol.58. - P. 1017-1025.

114. Swanson A.F., Kuo C.-C. / Identification of lectin-binding proteins in Chlamydial species. // Infect. Immun. 1990. -Vol. 48. - P. 502-507.

115. Ward M.E. / The chlamydial developmental cycle.// In A.L.Baron (ed.), Microbiology of Chlamydiae. CRC Press, Inc., Boca Raton, Fla. 1988. - P.71-95.

116. Wenman W.M., Meuser R.U. / Chlamydia trachomatis elementary bodies possess proteins which bind to eucariotic cell membranes. // J. Bacteriol.- 1986. Vol. 165.-P. 602-607.