Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Клонирование и анализ генов иммуноглобулинов американской норки

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Наякшин, Александр Матвеевич

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Организация кластера генов тяжелых цепей.

1.2. Эволюция и классификация Ун-генов.

1.3. Организация генов /^-легких цепей

1.4. А5 и VpreB

1.5. Эволюция и классификация Х-генов.

1.6. Структура локуса к-легких цепей

1.7. Эволюция и классификация к-генов.

1.8. Генетика ИГ норки.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Животные.

2.2. Подготовка ДНК-зондов.

2.3. Выделение ДНК плазмид и бактериофагов.

2.4. Выделение поли (А+) РНК.

2.5. Конструирование кДНК-овой библиотеки.

2.6. Скрининг кДНК-овой библиотеки антителами.

2.7. Скрининг кДНК-овой библиотеки ДНК-зондами.

2.8. Мечение белка А радиоактивным 1251.

2.9. Определение нуклеотидной последовательности.

2.10. Выделение высокомолекулярной ДНК из крови.

2.11. Блот-гибридизация

2.12. Иммуноблоттинг и иммуноферментный анализ.'.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 3. КЛОНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ А.-ГЕНОВ НОРКИ

3.1. Клонирование Х-генов

3.2. Анализ первичной последовательности А.-генов.

3.3. Структура \/А,-локуса.

3.4. Структура СХ-локуса.

Глава 4 . КЛОНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ k-ГЕНОВ НОРКИ

4.1. Клонирование к-генов.

4.2. Структура локуса к-цепей.

Глава 5. КЛОНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ ГЕНОВ у-ТЯЖЕЛЫХ

ЦЕПЕЙ НОРКИ

5.1. Клонирование генов у-тяжелых цепей ИГ норки.

5.2. Анализ Ун-области.

5.3. Особенности первичной структуры Су-области.

5.4. Функциональные сайты Су-цепей норки.

5.5. Структура Су-локуса у норки.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клонирование и анализ генов иммуноглобулинов американской норки"

Актуальность исследования. Иммунный ответ у позвоночных представляет собой чрезвычайно сложный и многоступенчатый процесс, б основе обеспечения которого лежит не менее сложное и представительное надсемейство иммунологических рецепторов, включающее в себя мультигенное семейство иммуноглобулинов (ИГ). Характерными чертами этого семейства являются представленность на разных хромосомах, разнообразие форм генов, кодирующих отдельные цепи ИГ и их элементы, перестройка генов в ходе онтогенеза и иммунного ответа, избирательность экспрессии индивидуальных генов в синтезирующих ИГ клетках (Ноп]о et а1., 1989).

В совокупности эти свойства делают мультигенное семейство ИГ крайне интересным объектом для изучения различных аспектов эволюции генома эукариот, в частности, молекулярных механизмов эволюции, коэволюции стуктурных и регуляторных последовательностей, возникновения генов с новыми функциями и т.д. Решение этих проблем во многом зависит от таксономического расширения сферы исследований, т.е. вовлечения в нее новых видов животных, удаленных от традиционных объектов иммуногенетики, поскольку основные данные о принципах организации и экспрессии генов ИГ получены при изучении соответствующих локусов человека и мыши.

Проведенные в лаборатории иммуногенетики ИЦиГ СО РАН работы по генетике тяжелых цепей ИГ американской норки свидетельствовали о существовании особенностей, касающихся структуры и экспрессии генов ИГ. Как известно, у всех изученных до настоящего времени животных гены тяжелых (Н) и легких (Ь) цепей ИГ расположены на разных хромосомах. Гены различных классов и подклассов ИГ тесно сцеплены, а кодируемые аллелями разных локусов аллотипы внутривидовые антигенные детерминанты) наследуются в виде фиксированных комбинаций - аллогрупп (Honjo et al., 1983) . В противоречие с классической схемой, у аллотипов Н-цепей IgG норки не обнаружено ни тесного сцепления, ни аллелизма, а анализ количественного проявления аллотипов тяжелых цепей показал, что для некоторых из них характерна вариабельность количественной экспрессии и широкое распространение минорных концентраций (Фомичева, 1988). Кроме того, литературные данные свидетельствовали об отсутствии у норки, в отличие от других видов млекопитающих, к-легких цепей (Hood et.al., 1967).

Изучение причин этих отклонений от общепринятых представлений о структуре и экспрессии генов ИГ затруднялось полным отсутствием данных о строении этих генов на молекулярно-генетическом уровне. Необходимость получения такой информации определила постановку задач диссертационной работы.

Цели и задачи исследования. Цель данной работы заключалась в изучении на молекулярно-генетическом уровне структуры локусов, кодирующих тяжелые цепи иммуноглобулина класса G (у) , а также к- и

А-легкие цепи иммунноглобулинов американской норки. В ходе работы планировалось решить следующие конкретные задачи: 1) клонировать гены, кодирующие у-, к- и Х-цепи и определить их первичные последовательности, 2) провести анализ последовательностей с целью выявления характерных для норки особенностей, уровня гомологии по отношению к их аналогам у других видов млекопитающих и классификации вариабельных генов, 3) используя полученные специфические молекулярные зонды к различным участкам генов ИГ, оценить количество генов, входящих в у-, к- и А-локусы.

Научная новизна и практическая ценность. Все представленные в диссертации данные получены впервые. В результате работы клонированы и проанализированы гены легких и у-тяжелых цепей американской норки.

Установлено, что геном американской норки содержит 6-7 CA.- генов, при этом как минимум три из них функциональные и один, вероятно, является псевдогеном. Подгруппа VA-генов, к которой принадлежат клонированные гены, содержит не менее 15 членов и входит в III группу по принятой на данный момент классификации.

Обнаружена, в отличие от ранее опубликованных в литературе данных, экспрессия у норки к-цепей. Соответствующий локус содержит 1 константный и по меньшей мере 7 вариабельных генов.

Константные у-гены, количество которых оценивается в 4-6 членов, при учете данных по уровню гомологии и расположению опорных аминокислот наиболее близки к Су~областям овцы и быка. Подгруппа Ун-генов, в которую входят клонированные гены, насчитывает не менее 21 члена и вероятно, является наиболее представительной среди других подгрупп \/н-генов норки.

Проведенные исследования структуры и организации генов иммуноглобулинов вносят вклад в частную генетику американской норки и расширяют наши представления о строении одного из наиболее сложных мультигенных семейств генома эукариот. Полученные в процессе работы молекулярные зонды могут быть использованы для дальнейшего изучения генов ИГ норки, в частности для их хромосомной локализации и определения тонкой структуры локуса. Практический эффект от исследования генов иммуной системы, учитывая экономическую важность вида, может быть связан в первую очередь с определением генетических маркеров устойчивойсти к различным инфекционным заболеваниям . 8

Автор выражает благодарность научному руководителю работы А.В.Таранину, а также сотрудникам лаборатории иммуногенетики Е.С.Белоусову, Б.Ю.Алябьеву, Л.А.Бовкун и В.В.Перемыслову за боль шую помощь в работе.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Наякшин, Александр Матвеевич

86 ВЫВОДЫ

1. С помощью моноклональных антител идентифицированы и выделены к-и А-типы легких цепей иммуноглобулинов американской норки. Количественное соотношение к/А цепей в иммуноглобулинов сыворотки крови составляет в среднем 46:54. Установлено, что ранее обнаруженные аллотипы легких цепей иммуноглобулинов норки L1-L5 являются маркерами А-типа.

2 . Иммуноскрининг кДНКовых библиотек селезенки норки позволил клонировать кДНК, кодирующие А,-, к-, и у-цепи иммуноглобулинов этого вида. Определены последовательности кДНК, проведен сравнительный анализ различных сегментов генов иммуноглобулинов норки и других млекопитающих. Проведена оценка количества V и С-генов в различных локусах методом Саузерн-блот анализа.

3. Геном норки содержит 6-7 СА-генов, при этом как минимум три из них являются функциональными. Семейство УА,-генов, к которому принадлежат клонированные гены, содержит не менее 11 членов и относится к III группе.

4. к^локус норки содержит единственный С-ген и не менее 7 V-генов, относящихся к подгруппе II. В отличие от других млекопитающих, к-цепи которых имеют на СООН-конце цистеин, СООН-концевым аминокислотным остатком к-цепей норки является глутамин.

5. Локус тяжелых цепей иммуноглобулинов норки содержит от 4 до 6 Су-генов. Наиболее представительная подгруппа Ун-генов норки насчитывает не менее 21 члена и относится к наиболее древнему III клану Ун-генов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Наякшин, Александр Матвеевич, Новосибирск

1. Баранов O.K., Таранин A.B., Фомичева И.И. Генетика и эволюция иммуноглобулинов у Mustelidae // Проблемы генетики и эволюционой теории (Под ред. Шумного В.К. и Рувинского А.О.)Новосибирск, " Наука" - 1991. - С. 163-176.

2. Волкова О.Ю. Генетика легких цепей иммуноглобулинов американской норки // Кандидатская диссертация, Институт цитологии и генетики. 1993,- С.148.

3. Кхунь Т.В., Янг Р., Дэвис Р. Конструирование и скрининг библиотек кДНК в векторах XgtlO и À,gtll. // Клонирование ДНК. Методы. (Под ред. Гловера Д.М.), М: Мир, Москва.- 1988. С. 71-106.

4. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование // М. : Мир.- 1984.- С.477.

5. Таранин A.B. Сравнительное иммуногенетическое исследование у цепей иммуноглобулинов куницеобразных // Кандидатская диссертация, Институт цитологии и генетики 1988.- С.108.

6. Фомичева И.И. Анализ молекулярного распределения аллотипов иммуноглобулина G ( IgG) у американской норки // Иммунология.- 1988. N.1 - С.23-27.

7. Чувпило С.А., Кравченко В.В. Твердофазный метод определения нуклеотидной последовательности ДНК // Биоорган, химия. 1983. -Т.9, N. 12 - С.1634-1637.

8. Akimenko M.A., Heidmann О., Rougeon F. Complex allotypes of the rabbit immunoglobulin kappa light chain are encoded by structural alleles // Nucleic Acid Res.- 1984.- V.12, N.llp.4691-4701.

9. Anderson M.L.M., Szajnert M.F., Kaplan J.C., McColl L. Young B.D. The isolation of a human Ig Va gene from a recombinant library of chromosome 22 and estimation of its copy number // Nucleic Acid Res.- 1984.- V.12, N.17 p.6647-6661.

10. Auadi H., Marche P.N.,Cazenave P.-A. Evolution of the rabbit immunoglobulin k chain genes // Immunogenetics.- 1991,- V.34,1. N.1.- p.201-207.

11. Aviv H., and Leder P. Purification of Biologically active globin messenger RNA by chromatography on oligothymidilic acid-cellulose // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1972,- V.69, N.6- p.1408-1412 .

12. Battey J., Max E.E., McBridge W.O., Swan D. and Leder P. A processed human immunoglobulin 8 gene has moved to chromosome 9 // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1982.-V.79, N.19 p.5956-5960.

13. Bauer S.R., Huebner K., Budarf M et al. The human VpreB gene is located on chromosome 22 near a cluster of VAl gene segment // Immunogenetics.- 1988.- V.28, N.5 p. 328-333.

14. Bauer S.R., Kudo A., Melchers F. Structure and pre-B lymphocyte restricted expression of the VpreB gene in humans andconservation of its structure in other mammalian species // EMBO J.- 198 8.- V. 7 , N . 1.- p.111-116.

15. Bauer T.R., Blomberg B. The human /1 L chain Ig locus: Recaracterization og JCÀ.6 and identification of a functional JCÂ7 // J.Immunol. 1991.- V,146, N.8. - p.2813-2820.

16. Bech-Hansen N.T., Linsley P.S. and Cox D.W. Restrrction fragment length polymorphism associated with immunoglobulin Cy genes reveal linkage disequilibrium and genomic organization // Proc.Nat1.Acad.Sci.USA.-1983.-V.80, N.22 p. 6952-6956.

17. Belyaev D.K., Fomicheva I.I., Baranov O.K., Taranin A.V Genetic polymorphism of IgG in mink. II. A genetic analysis of allotypes // Expl Clin. Immunogenet.- 1986b. V.3, N.2 - p.65-74.

18. Belyaev D.K., Fomicheval.I., Taranin A.V., Baranov,O.K. Genetic polymorphism of IgG in mink.I. Identification of 8 allotypes // Expl.Clin.Immunogenet. 1986a. - V.3, N.l - p.10-19.

19. Benammar A., Cazenave P.-A. A second rabbit kappa isotype // J.Exp.Med.- 1982,- V.156, N.2 p.585-595.

20. Bennamar A., Brezin C., Cazenave P.-A. Rabbit immunoglobulin allotype: a sixth allele at the b locus (b95) // Mol.Immunol.-197 9.- V.16, N.5 p.98 3-98 7.

21. Bentley D.L. and Rabbits T.H. Cell humans V immunoglobulin gene number: implication for the origin of antibody diversity // Cell. 1981.- V.24, N.3 - p.613-623.

22. Bernard 0.,Hozumi N., Tonegawa S. Sequences of mouse immunoglobulin light chain genes before and after somatic changes // Cell.- 1978.- V.15, N.4.- p.1133-1144.

23. Blomberg B., Traunecker A., Eisen H.N., Tonegawa S. Organization of four mouse A, light chain immunoglobulin genes // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1981.-V.78, N.6.- p.3765-3769.

24. Bonhomme F., Catalan J., Britton-Davidian J., Chapman V.M., Morivaki K., Nevo E., Thaler L. Biochemical diversity and evolution in the genus Mus // Biochem.Genet.- 1984.- V.22, N.3/4 -p.275-303.

25. Bothwell A.L.M., Paskind M., Reth M., Imanishi-Kari T., Rajewsky K. and Baltimore D. Heavy chain variable region contribution to the NP family of antobodies: Somatic mutation evident in a y2a variable region // Cell.- 1981.- V.24, N.3- p. 625- 637.

26. Bovkun L.A., Peremislov V.V., Nayakshin A.M. Belousov E.S., Mechetina L.V., Aasted B., Taranin A.V. Expression of immunoglobulin kappa and lambda chains in mink // Eur.J.Immunol.-1993.- V.23, N.8 p.1929-1934.

27. Brockley F. , Alexandre D., Chuchana P., Huck S., Lefranc G., Lefranc M.-P. First nucleotide, sequence of a human immunoglobulin variable X gene belonging to subgroup II // Nucl.Acid Res.- 1989.-V. 17, N. 10.- p.3976-3982.

28. Broeder P.H., Osman G.E., Mackle J.J. and Lalor T.M. The organization of the mouse Igh V locus // J.Exp.Med.- 1988.- V.168, N . 10 p. 2261-2270.

29. Broeder P.H., Thompson M.A. and Riblet R.J. The content and organization of mouse Igh-V families // In Regulation of the Immune System. UCLA Symposia on Molecular and Cellular Biology, New series, New York, eds.Liss A.R. Inc.- V.18 1984, p.445.

30. Bruggeman M., Free J., Diamond A., Howard J., Cobbold S. and Woldmann H. Immunoglobulin heavy chain locus of the rat: Striking homology to mouse antibodies gene // Proc.Natl. Acad.Sci.USA.-198 6.- V.8 3, N.16- p. 6075-6079.

31. Burton D.R. Immunoglobulin G: functional sites // Mol. Immunol.- 1985 V.22, N.3 - p.161-206.

32. Carson S. and Wu G.E. A linkage map of the mouse immunoglobulin lambda chain locus // Immunogenetics.- 1989.- V.29, N.3.- p.173-179.

33. Chang H., Dmitrovsky E., Hieter P.A., Mitchell K., Leder P., Turoczi L., Kirsh I.R., Hollis G.F. Identification of three new Ig like genes in man // J.Exp.med.- 1986.- V.163, N.2. - p.425-435.

34. Chomczynski P., and Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidine thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal.Biochem.- 1987,- V.162, N.l p.156-159

35. Christoph T. and Krawinkel U. Physical linkage of variable, diversity and joining gene segments in immunoglobulin heavy chain locus of the mouse // Eur.J.Immunol.- 1989.- V.19, N.8 p. 15211523.

36. Chuchana P., Blancher A., Brockly F., Alexandre D., Lefranc G., Lefranc M.-P. Definition of the human immunoglobulin variablelambda (IGLV) gene subgroup // Eur.J.Immunol.- 1990,- V.20, N.7 -p.1317-1325.

37. Combriato G., and Klobeck H.-G. VÀ. and JÀ.-CÀ. gene segments of the human immunoglobulin A,-light chain locus are separated by 14 kb and rearrange by a deletion mechanism // Eur.J.Immunol.- 1991.1. V.21, N. 8 p.1513-1522.

38. Cory S. Immunoglobulin variable region genes // Surv.Synth. Pathway Res.- 1984,- V.3, N.l p.149-164.

39. Cory S., Tyler B.M., Adams J.M. Sets of immunoglobulin V genes homologues to ten cloned Vk sequences; implications for the numberof germline Vk genes // J.Mol.Appl.Genet.- 1981.- V.l, N.l.- p.103-116.

40. D'eustachio P., Bothewell A., Takaro T.,Baltimore D., Ruddle F. Chromosomal locations of structural genes encoding murine immunoglobulin X light genes: genetics of murine X light chains // J. Exp. Med.- 1981.- V.153, N.4 p.793-800.

41. D'eustachio P., Pravtcheva D., Marcu K. and Ruddle F.H. Chromosomal location of the structural gene cluster encoding murine immunoglobulin heavy chains // J.Exp.Med.- 1980,- V.151, N. 6 p.1545-1550.

42. D'Hoostelaere L.A., Bauer S.R., Melchers F. Restriction fragment analysis of VpreB and X5 within the genus Mus // Eur.J.Immunol.- 1989.- V.19, N.l.- p.37-42.

43. Deev S.M., Combriato G., Kl'obeck, H. G. , Zachau H.G. Reciprocal recombination products of Vk-Jk joining reactions in human lymphoid cell lines // Nucleic Acid Res.- 1987.-V.15, N.I.- p.1-14.

44. Diesenhofer J. Crystallographic refinement and atomic models of a human Fc fragment and its complex with fragment B of protein A from Staphylococcus aureus at 2.9 and 2.8 A resolution // Biochemistry.- 1981.- V.20, N.8 p.2361-2370.

45. Dildrop R., Gause A., Muller W., RajewskyK. A new V gene expressed in lambda-2 light chains of the mouse // Eur.J.Immunol.-1987,- V.17, N.5 p.731-734.

46. Dover G. Molecular drive: a cohesive mode of species evolution // Nature.- 1982.- V.299, N.5879, p.111-117.

47. Duncan A.R., and Winter G. The binding site for the Clq on IgG // Nature. 1988. - V.332, N.6166 - p.738-740.

48. Duncan A.R., Woof J.M., Partridge L.J., Burton D.R., Winter G. Localization of the binding site for the human high affinity Fc receptor on IgG // Nature.- 1988.- V.332, N.6164 p.563-564.

49. Durdik J., Moore M.W., Seising E. Novel k light-chain gene rearrangments in mouse A light chain-producing B lymphocytes // Nature.- 1984.- V.307, N.5953 p.749-752.

50. Duvoism R.M., Hayzer D.J., Belin D., Jaton J.-C. A rabbit IgA L chain C region gene encoding C21 allotypes // J.Immunol.- 1988.-V.141, N. 7 p.1596-1601.

51. Duvoisin R.M., Heidmann 0., Jaton J.-C. Characterization of four rabbit immunoglobulin X light chain constant region genes // J.Immunol.- 1986,- V.136, N. 11 p.4297-4302.

52. Duvoisin R.M., Jaton J.-C. Nucleotide sequence of a cDNA clone encoding a rabbit immunoglobulin-^ light chain: the VA. region differs markedly from that of other species // J.Immunol.- 1987,-V . 138, N.7 p.2316-2322.

53. Dyrberg T., and Billestrup N. Preparation of 1251-protein A usable for up to 10 months in immunoassay // J.Immunol.Meth. -1984.- V.71, N.2 p.193-201.

54. Edelman G.M., Gunningham B.A., Gall W.E., Gottlieb P.D., Rutisha user U. and WaxdalM.J. The covalent structure of an entire XC immunoglobulin molecule //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1969.- V.63, N. 1 - p. 78-85.

55. Emorine L., Dreher K., Kindt T.J., Max E.E. Rabbit immunoglobulin k gene: Structure of a germ line b4 allotype J-C locus and evidence for several b4-related sequences in the rabbit genome // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1983.- V.80, N.18- p.5709-5713.

56. Erikson J., Martinis J., Croce C.M. Assignment of the genes for the human X immunoglobulin chains to chromosome 22 // Nature.-1981.-V.294, N.58 37 p.173-175.

57. Falkner F.G. and Zachau H.G. Correct transcription of an immunoglobulin k gene requires un upstream fragment containing conserved sequence elements // Nature.- 1984,- V.310, N.5972 -p.71-74.

58. Feinberg A.P., Vogelstein B.A. A technique for radiolabeling DNA restriction endonuclease fragments to high specific activity // Anal.Biochem.- 1983.- V.132, N.l p.6-13.

59. Frank M.B., Gutman G.-A. Two pseudogenes among three rat immunoglobulin lambda chains genes // Mol.Immunol.- 1988.- V.25, N . 10.- p.953-960.

60. Ghaffari S. H., and Lobb C.J. Cloning and sequence analysis of channel catfish heavy chain cDNA indicate phylogenetic diversity within the IgM immunoglobulin family.// J.Immunol.- 1989 V.142,1. N.6 p.1356-1365.

61. Gimble J.M., Levens D. and Max E.E. B-cell nuclear protein's binding in vivo to the human immunoglobulin k enhancer: Localization by exonuclease protection // Mol.Cell.Biol.- 1987,-V.7, N. 5 p.1815-1822.

62. Gubler U., and Hoffman B.J. A simple and very efficient method for generating cDNA libraries // Gene. 1983. - V.25, N.2p.263-269.

63. Gustafson S., Proper J., Bowie E.J.W., Sommer S.S. Parameters affecting the yield of DNA from human blood // Anal.Biochem.1987. V.16 5, N.2 - p.294-299.

64. Gutman G.A., Besta R.M., Frank M.B. and Baverstock P.R. Duplication of Jk genes within genus Rattus // Immuno- genetics.-1987. V.26, N.l/2 - p. 14-20.

65. Hayser D.J. Immunoglobulin lambda light chain evolution : IgA. and IgA.-like sequences from three major groups // Immunogenetics.-1990.- V.31, N.3. p.157-174.

66. Hayzer D.J. and Jaton J.-C. Cloning and sequencing of two functional rabbit germ-line immunoglobulin VA. genes // Gene. -1989. V.80, N.2- p.185-191.

67. Hayzer D.J., Duvoisin R.M., Jaton J.-C. c DNA clones encoding rabbit immunoglobulin X chains: evidence for length variation of the third hypervariable region and for a novel constant region // Biochem. J.- 1987,- V.245, N.3 p.691-697.

68. Heidmann 0. and Rougeon F. Immunoglobulin Klight chain diversity in rabbit is based on the 3' length heterogenity of germ-line variable genes // Nature.- 1984,- V.311, N.5981 p.74-76. "

69. Hesse J.E., Lieber M.R., Gellert M. and Mizuuchi K.

70. Extrachromosomal DNA substrates in pre-B cells undergo inversion or deletion at immunoglobulin V-(D)-J joining signals. // Cell.-1987.- V.4 8, N.6 p. 775-783.

71. Hieter P.A., Hollis G.F. Korsmeyer S.J. Woldmann T.A. and Leder P. Clustered arrangment of immunoglobulin X constant region genes in man // Nature. 1981.- V.294, N.5841 - p.536-540.

72. Holmes D.S., and Quigley M. A Rapid boiling method for the preparation of bacterial plasmid // Anal.Biochem.- 1981.- V.114, N. 1 p.193-197.

73. Honjo T., Shimuzu A. and Yaoita Y. Constant-region genes of the immunoglobulin heavy chain and molecular mechanism of class switching.// In " Immunoglobulin genes" , ed Honjo T., 1989, Academic Press, New York.-1989.- p.124-149.

74. Hood L., Cray W.R., Sanders B.G. and Dreyer W.J. Light chain evolution // Cold Spring Harb.Symp.quant.Biol.- 1967,- V.32p.133-146.

75. Hood L., Kronenberg M. and Hunkapiller T. T cell antigen receptors and the immunoglobulinsupergene family // Cell.- 1985.-V.40, N. 2 p. 225-229.

76. Kabat E.A., Wu T.T., Reid-Miller M. et al. Sequences of Protein of Immunological Interest // 4th Edn. US department of' Health and Human Services, NIH, Bethesda, MD.- 1987.

77. Kelley D.E., Coleclough C. and Perry R.P. Functional significance and evolutionary development of the 5'-termini regions of immunoglobulin variable- region genes // Cell.- 1982.-V. 29, N. 2 p.681-689.

78. Kindt T.J., Gris C., Guenet J.L., Bonhomme F., Cazenave P.-A. Lambda light chain constant gene complements in wild-derivedxnbred mouse strain // Eur.J.Immunol.- 1985.- V.15, N.3 p.535-54 0.

79. Kirsch I.R., Morton C.C., Nakahara K. and Leder P. Human immunoglobulin heavy chain genes map to a region of translocation in malignant B lymphocytes // Science.- 1982,- V.216, N.4543p.301-303.

80. Klobeck H.-G., Solomon A., Zachau H.G. Contribution of human VkII germ-line genes to light-chain diversity // Nature. 1984.-V.309, N. 5963 - p.73-76.

81. Klobeck H.G. and Zachau H.G. The human Ck gene segment and the kappa deleting element are closely linked // Nucl.Acids.Res.-1986,- V.14, N.ll p. 4591-4603.

82. Klobek H.G., Meindl A., Combriato G., Solomon A. and Zachau H.G. Human immunoglobulin kappa light chain genes of subgroupsll and III // Nucl.Acid.Res.- 1985,- V.13, N.18 p.6499-6513.

83. Kodaira M., Kinashi T., Umemura I., Matsuda F. , Noma T., Ono Y. and Honjo T. Organization and evolution of variable region genes of the human immunoglobulin heavy chain // J.Mol.Biol.-1986.- V.190, N.4.- p. 529-541.

84. Krawmkel U., Christoph T. and Blankenstein T. Organization of the Ig Vh locus in' mice and human.// Immunol.Today.- 1989.- V.10, N10 p.339-344.

85. Kroemer G., Helmberg A., Bernot A., Auffray C., Kofler R. Evolutionary relationship between human and mouse immunoglobulinkappa light chain variable region genes // Immunogenetics.- 1991.-V.33, N. 1 p.42-49.

86. Kudo A., and Melchers F. A second gene, VpreB in the X5 locus of the mouse, which appears to be selectively expressed in pre-B lymphocytes // EMBO J.- 1987b.- V.6, N.9 p.2267-2272.

87. Kudo A., Sakaguchi N., Melchers F. Organization of the murine Ig-related X5 gene transcribed selectively in pre-B lymphocytes // EMBO J.- 1987a.- V.6, N.l p.103-107.

88. Lim N.M., Pene J.J. Optimal conditions for supercoil DNA sequencing with the Escherichia coli DNA polymerase I large fragment // Gene Anal.Techn.- 1988 V.5, N.l - p.32-39.

89. Livant D., Blatt C., Hood L. One heavy chain variable region gene segment subfamily in the BALB/c mouse contains 500-1000 or more members // Cell 1986.- V.47, N.3 - p. 461-470.

90. Lotscher E., Grzeshick K.-H., Bauer H.G., Pohlenz H.-D., Straubinger B., Zachau H.G. Dispersed human immunoglobulin k-light chain genes // Nature.- 1986.- V.320, N.6061- p.456-458.

91. Lotscher E., Zimmer F.-J., Klopstock Th., Grzeshick K.-H., Jaenichen R., Straubinger B., Zachau H.G. Localization, analysis and evolution of transposed human immunoglobulin Vk genes // Gene.-1988,- V.69, N.2- p.215-223.

92. Mami F., Cazenave P.-A., Kindt T.J. Conservation of the immunoglobulin CA.5 gene in the Mus genus // EMBO J.- 1988,- V.7, N.l p.117-122.

93. Max E.E., Seidmann J.C.,Leder P. Sequences of five potential recombination sites encoded close to an immunoglobulin k constant region gene // Proc.Nat1.Acad.Sci.USA. 1979.- V.76, N.7.p.3450-3454.

94. Max E.E./Maizel J.V., Leder P. The nucleotide sequence of a 5.5 kilobase DNA segment containing the mouse k immunoglobulin J and C region genes // J.Biol.Chem.- 1981.- V.256, N.10 p.5116-5120 .

95. Maxam A.M., Gilbert W. Sequencing end-labelled DNA with base specific cleavage// Methods in Enzyrnology 1980,- V.65, Pt 1 -p.499-560.

96. Medveczky P., Chang C.W., Oste C. et al. Rapid vacuum driven transfer of DNA and RNA from gels to solid support // BioTechniques. 1987.- V.5, N.2 - p.242-246.

97. Melchers F., Karasuyama H., Haasner D., Bauer S., Kudo A., Sakagashi N., Jameson B. and Rolink A. The surrogate light chain in B-cell development // Immunology Today.- 1993.- V.14, N.2 -p.60-68 .

98. Miller J., Bothwell A., Storb U. Phisical linkage of the constant region genes of immunoglobulin I and III //

99. Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1981.- V.78, N.6 p.3829-3833.

100. Milner E.C.B., Willems K., van Dijk, and Sasso E.H. The human VH locus // In Molecular Mechanisms of Immune Regulation.

101. R. Srivastava, B.P.Ram, and P.Tyle, editors. VCH Publishers, New York 1991 . - p.135-158.

102. Natvig J.B. and Kunkel H.G. Human immunoglobulin: classes, subclasses, genetic variants and idiotypes // Adv.Immunol, ed. Kunkel H.G. and Dixon F.J., Academic Press, New York.-19731. V. 16,- p.1-59.

103. Parvari R., Ziv E., Lentner F., Tel-Ors., Burstein Y. and Schecter I. Analyses of chicken immunoglobulin light chain cDNA clones indicate a few germline VA, genes and allotypes of the CX locus // EMBO J.- 1987.- V.6, N.l p.97-102.

104. Peremislov V.V., Mechetina L.V. and Taranin A.V. Monoclonal antibody against heavy and light chainsof domestic mink IgG // Hybridoma.- 1992,- V.ll, N.5 p.629-638.

105. Picard D., Schaffner W. A lymphocyte-specific enhancer in themouse immunoglobulin k gene // Nature.- 1984.- V.307, N.5946 -p. 80-82.

106. Poljak R.J., Amzel L.M., Avey H.P., Chen B.L, Phizackerely R.P. and Saul F. The three dimensional structure of the Fab' fragment of a human myeloma immunoglobulinat 2.0-A resolution // Proc.Natl.Sci.USA.-1974.- V.71, N.9 p.3440-3445.

107. Rathbun G., Berman J., Yancopouls G. and Alt F.W. Organization and expression of the mammalian heavy-chain variableregion locus.// in "Immunoglobulin genes", ed.Honio, Academic Press, New York.-1989 p.63-89.

108. Ravetch J.V., Siebenlist U., Korsmeyer S., Waldmann T. and Leder P. Structure of the human immunoglobulin fi locus:

109. Characterization of embrionic and rearranged J and D genes // Cell.- 1981.- V.27, N.3- p. 583-591.

110. Reddy K.J., Kuwabara T., Sherman L.A. A simple and efficient prosedure for the isolation of high- quality phage X DNA using DEAE-cellulose column // Anal.Biochem.- 1988.- V.168, N.2 p.324-331 .

111. Reth M., Jackson N. and Alt F.W. VhDhJh formation and DJh replacement during pre-B differentiation: non-random usage of gene segments // EMBO J.- 1986.- V.5, N p.2131-2138.

112. Reynaud C.-A., Anquez V., Grimal H., Weill J.-C. A hyperconversion mechanism generates the chicken light chain preimmune repertoire // Cell.- 1987,- V.48, N.3 p.379-388.

113. Reynaud C.-A., Mackay C.R., Muller R.G. and Weill J.C. Somatic generation of diversity in a mammalian primary lymphoid organ: The sheep ileal Peyer's patches // Cell 1991.- V.64, N.5 - p.995-1005.

114. Reynaud C.A., Anques V., Dahan A., Weill J.C. A single reaarangment event generats most of the chicken immunoglobulin light chain diversity // Cell.- 1985.- V.40, N.2- p.283-291.

115. Sakaguchi N., Melchers F. A.5, a new light chain-related locus selectively expressed in pre-B lymphocyte // Nature.- 1986.

116. V. 324, N. 6097- p.579-582.

117. Sakano H., Huppi K., Heinrich G., Tonegawa S. Sequences at the somatic recombination sites of immunoglobulin light-chains genes // Nature.- 1979,- V.280, N.5720 p.288-294.

118. Sanchez P. and Cazenave P.-A. A new variable region in mouse immunoglobulin X light chains //J.Exp.Med.- 1987.- V.166, N.lp.265-270.

119. Sanchez P., Marche P.N., Rueff-Juy D., Casenave P.-A. Mouse VA,x gene sequence generate no junctional diversity and is conservec in mammalian species // J.Immunol.- 1990.- V.144, N.12 p. 28162820 .

120. Sanger F., Nicklen S., and Coulson A.R. DNA sequencing with chain terminating inhibitors // Proc. Natl. Acad.Sci.USA. 1977-V. 74, N.12 - p.5463-5467.

121. Sasso E.H., Silverman G.J., and Mannik M. Human IgA and IgG F(ab)'2 that bind to staphylococcal protein A belong to the VHIII subgroup // J.Immunol.- 1991. V.147, N.6 - p.1877-1883.

122. Sasso E.H., Silverman G.J., and Mannik M. Human IgM molecules that bind Staphylococcal protein A contain VHIII H chains //

123. J.Immunol.- 1989.- V.142, N.12 p.2778-2784.

124. Schiff C., Milili M. and Fougereau M. Interstain conservation of the murine polyglutamic acid-60-alanine-30-tyrosine-10-tyrosine-10 specific antibody Vk repertoire as analysed at the germline gene level // EMBO J.- 1983.- V.2, N.10 p.1771-1776.

125. Schiff C., Milili M., Fougereau M. Isolation of early immunoglobulin A.-like gene transcripts in human fetal liver // Eur.J.Immunol.- 1989,- V.19, N.10 p.1873-1878.

126. Schroeder H., Hillson J.L. and Perlmutter R. Early restriction of the human antibody repertoire // Science.- 1987.-V.238, N. 4828- p. 791-793.

127. Schroeder H., HillsonJ., Perimutter R. Structure and evolution of mammalian Vh families // Int. Immunol.- 1989.- V.2,1. N.l.- p. 41-50.

128. Scott C.L., Mushinki J.F., Huppi K., Weigert M., Potter M. Amplification of immunoglobulin A. constant genes in populations of wild mice // Nature.- 1982.- V.300, N.5894 p.757-760.

129. Seising E., Durdik J., Moore M. and Persiani M. Immunoglobulin lambda genes // In "Immunoglobulin genes", ed.by Honio, Academic Press, New York.- 1989,- p.111-122.

130. Seising E., Miller J., Wilson R. and Storb U. Evolution of mouse immunoglobulin X genes // Proc.Nat1.Acad.Sci.USA.- 1982.-V. 79, N. 15 p.4681-4685.

131. Seppala I., Kaartinen M., Ibrahim S., and Makela 0. Mouse Ig coded by VH families S107 or J606 bind to protein A // J.Immunol.-1990.- V.14 5, N.14 p.2989- 2993.

132. Shamblott M.J.,and Litman G.W. Complete nucleotide sequence of primitive vertebrate immunoglobulin light chain genes // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1989.- V.86, N.12- p.4684-4688.

133. Shimizu A., Takahashi N., Yaoita Y. and Honjo T. Organization of the constant-region gene family of the mouse immunoglobulin heavy chain // Cell.- 1982.- V.28, N.3- p.499-506.

134. Shroeder H.W., Hillson J.L., and Perlmutter R.M. Structure and evolution of mammalian VH families // Int.Immunol.- 1990. -V. 2, N,1 p.41-50.

135. Shulz G.E. and Schirmer R.H. Principles of Protein Structure //Springer-Verlag, Berlin.- 1979 p.235.

136. Siebenlist U., Ravetch J.V., Korsmeyer S., Waldmann T., Leder P. Human immunoglobulin D segments encoded in tandem multigenic families // Nature.- 1982.- V.294, N.5842- p. 631-635.

137. Southern E. Detection of specific sequenses among DNA fragments separated by gel electrophoresis // J.Mol.BioI.- 1975.-V . 98, N.3 p.503-514.

138. Stavnezer J., Kekish 0., Batter D., Greneir J., Balazs I., Henderson E and Zegers B.J.M. Abberant recombination events in B cell lines from a k-deficient human // Nucl.Acid.Res.- 1985.

139. V.13, N. 10 p. 3495-3514 .

140. Steen M.-L., Hellman L. and Pettersson U. The immunog lobulin lambda locus in rat consist .of two CA and a single VX gene //J Gene.- 1987,- V.55, N.l p.75-84.

141. Steen M.-L., Hellman L., Petterson U. The immunoglobulin lambda locus in rat consists of two CX genea and a single VX gene // Gene.- 1987,- V.55, N.l p.75-84.

142. Storb U., Haash D., Arp B., Sanches P., Cazenave P.-A. Physical linkage of mouse A. genes by pulsed-field gel electrophoresis suggests that the rearrangment process favors proximate target sequences // Moll.Cell.Biol.-1989.- V.9, N.3 -p.711-720.

143. Stratagene. ZAP-cDNA synthesis kit // Instruction manual.-1990 .

144. Straubinger B., Thiebe R. , Huber C., Osterholzer E. and Zachau H.G. Two unusual human immunoglobulin Vk genes.// Biol.Chem.Hoppe Seyler.- 1988.- V.369, N.2 p. 601-607.

145. Strohal R., Helberg A., Kroemer G., Kofler R. Mouse Vk gene classification by nucleic acid sequence similarity // Immunogenetics.- 1989.- V.30, N.3- p.475-493.

146. Tao and Morrison S.L. Studies of aglycosylated chimeric mouse-human IgG. Role of carbohydrate in the structure andeffector functions mediated by .the human IgG constant region // J.Immunol.- 1989,- V.143, N.8 p.2595-2601.

147. Taub R.A., Hollis G.F., Hieter P.A., Korsmeyer S., Waldman T.A., Leder P. // Variable amplification of immunoglobulin A, light-chain genes in human population // Nature.- 1983.- V.304, N.5922 -p. 172-174.

148. Tutter A. and Riblet R. Conservation of an immunoglobulin variable-region gene family indicates a specific noncoding function // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1989.- V.86, N.19 J p. 7460-7464.

149. Tutter A. and Riblet R. Duplication and deletions of Vh genes in inbred strains of mice // Immunogenetics.- 1988.- V.28, N.2 -p.125-135.

150. Tutter A., Broeder P., ShlomchikM., and Riblet R. Structure, map position and evolution of two newly diverged mouse Ig Vh gene families // J. Immunol.- 1991,- V.147, N.9 p. 3215-3223.

151. Udey J.A. and Blomberg B.B. Human X light chain locus: organization and DNA sequences of three genomic J regions // Immunogenetics.- 1987,- V.25, N.l p.63-70.

152. Vasicek T.J. and Leder.P. Structure and expression of the human immunoglobulin X genes // J.exp.Med.- 1990.- V.172, N.3 -p.609-620.

153. Waldman A.S. and Liskay R.M. Dependence of intrachromosomal recombination in mammalian cells on uninterrupted homology // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1987.- V.84, N.15 - p.5340-5348.

154. Wood C. and Tonegawa S. Diversity and joining segments of' mouse immunoglobulin heavy chain genes closely linked and in the same orientation: Implication for the joining mechanism // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1983,- V.80, N.10 p.3030-3034.

155. Wu G., and Cannon R.E. An economical large scale procedure to purify E.coli arrtplifiable plasmids for DNA sequencing, in vitro transcription and in vitro mutagenesis // Experimentia.- 1985.1. V. 41, N.8 p.1488-1490.

156. Yamasaki N., Komori Sh., Watanable T. Complementary DNA for a human subgroup IV immunoglobulin A.-chain // Mol. Immunol. 1987,1. V. 24, N. 9 p.981-985.

157. Yancopoulos G.D., Desiderio S.V., Pasking M., Kearney J.F., Baltimore D. and Alt F.W. Preferential utilization of the most Jh-proximal Vh gene segments in pre-B-cell lines // Nature.- 1984.-V.311, N.5988- p.727 -729.

158. Zachau H.G. Immunoglobulin light chains genes of the k type in man and mouse// In " Immunoglobulin genes", ed.by Honio, Academic Press, New York.-1989. p.92-107.

159. Zachau H.G.The human immunoglobulin k locus and some of its acrobatics // Biol.Chem.Hoppe-Seyler.- 1990.- V.371, N.I.- p.1-6.108

160. Zimmer F.G., Huber C., Quenzel M., Scheck H., Stiller C. Thiebe R. and Zachau H. Evolution of a group of transposed human Vk genes.// Biol.Chem.Hoppe Seyler.- 1990,- V.371, N3 p.283-290.