Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Клонирование генов, активируемых в эмбриональных стволовых клетках мыши, индуцированных к дифференцировке in vitro

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Якубович, Елена Игоревна

Список сокращений и обозначений

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Дифференцировка эмбриональных стволовых 10 клеток

1.1. Культура эмбриональных стволовых клеток

1.2. ЭСК как модельная система для изучения 13 ранних стадий эмбриогенеза

1.3. Дифференцировка ЭСК in vitro в 17 специализированные типы клеток

1.3.1. Дифференцировка кроветворных клеток

1.3.2. Дифференцировка мышечных клеток ,. 22 1.3.3 Дифференцировка нервных клеток

2. Молекулярные механизмы ретиноид- 26 зависимых сигнальных путей

2.1. Ретиноиды и их рецепторы

2.2. Взаимодействие ретиноидных рецепторов с 30 другими биологическими факторами

2.3. Участие ретиноидов в процессах 35 пролиферации, дифференцировки и апоптоза.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Конструирование клонотек кДНК.

2. Конструирование субтрактивных клонотек кДНК

3. Анализ клонированных последовательностей.

4. Анализ генов, активируемых в результате 63 индукции дифференцировки ЭСК

4.1. Гены, гомологичные митохондриальным генам

4.2. Новые гены

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клонирование генов, активируемых в эмбриональных стволовых клетках мыши, индуцированных к дифференцировке in vitro"

Проблема клеточной дифференцировки, т.е. процесса функциональной и структурной специализации клеток, является одной из важнейших в современной биологии. В основе этого сложного процесса лежит генетическая программа дифференциальной активности генов. Установлено, что в процессе дифференцировки участвует множество генов, и что генетический контроль может осуществляться на разных уровнях: транскрипции, процессинга мРНК, трансляции и посттрансляционной модификации белка. Большое значение в понимании молекулярных механизмов, регулирующих процессы дифференцировки и развития, имеет открытие так называемых сигнальных путей - каскада белок-белковых взаимодействий, конечным звеном которого, как правило, являются транскрипционные факторы, непосредственно регулирующие транскрипционную активность генов. В настоящее время охарактеризованы десятки таких сигнальных путей, активация которых определяется множеством факторов, как внеклеточных, так и внутриклеточных.

Успехи в развитии новых биотехнологий позволяют проводить исследования в этой области на качественно новом уровне. Это прежде всего технологии рекомбинантных ДНК и получения трансгенных животных. Кроме того, открытие способа культивирования in vitro эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) дало дополнительные экспериментальные возможности для изучения молекулярных механизмов дифференцировки клеток млекопитающих. ЭСК представляют собой плюрипотентные клетки, способные длительное время оставаться в культуре в недифференцированном состоянии, но при определенных условиях дифференцироваться в различные специализированные типы клеток (Robertson, 1987;

Mummery et al., 1990; Smith, 1991; Wells, 1993). При этом дифференцировка ЭСК в культуре во многом аналогична дифференцировке клеток в эмбриогенезе (Wulf et al., 1993; Keller et al., 1993; Keller, 1995). В настоящее время культуры ЭСК широко используются в качестве модельной системы для изучения ранних стадий эмбрионального развития, а также механизмов регуляции ранних этапов клеточной дифференцировки (Bain et al., 1995; Fraichard et al., 1995; Grabel et al., 1998). Кроме того, способность ЭСК после их слияния с бластоцистами участвовать в образовании всех типов клеток развивающегося эмбриона, в том числе и половых, позволяет использовать их для идентификации и анализа новых генов, вовлеченных в различные сигнальные пути, а также исследования биологических функций уже известных генов в процессе эмбрионального развития, вводя изменения в генетический материал на уровне ЭСК (Zambrowicz et al., 1998; Ding et al., 1998; Niederreither et al., 1999; Fan et al., 1999). Несмотря на то, что проблемой клеточной дифференцировки занимаются давно и интенсивно, многие вопросы, касающиеся конкретных молекулярных механизмов регуляции этого процесса, остаются невыясненными. В значительной степени это относится к самым ранним этапам дифференцировки клеток, поскольку постановка эксперимента до недавнего времени была затруднительна по чисто техническим причинам, в частности из-за невозможности получить достаточное количество исходного материала. В связи с этим, ЭСК представляются нам наиболее адекватной экспериментальной моделью для изучения ранних стадий дифференцировки.

Цели и задачи исследования

Целью данной работы были поиск и анализ генов, экспрессия которых активируется на начальных этапах индуцированной in vitro дифференцировки ЭСК (линия ССЕ). Дифференцировка индуцировалась двумя способами: 1 - воздействием на монослойную культуру ЭСК ретиноевой кислоты, являющейся естественным морфогеном и играющим важную роль в эмбриогенезе позвоночных; 2 - культивированием клеток в суспензии в условиях, приводящих к образованию так называемых эмбриоидных телец, аналогичных по своей структуре раннему мышиному эмбриону.

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

1. Конструировать клонотеки кДНК контрольных и индуцированных к дифференцировке ЭСК.

2. С помощью метода вычитательной гибридизации получить субтрактивные клонотеки, обогащенные последовательностями, экспрессируемыми на ранних этапах дифференцировки ЭСК.

3. Провести дифференциальный анализ (скрининг) клонотек, определить первичную структуру (секвенировать) и проанализировать с помощью специальных компьютерных программ нуклеотидные последовательности отобранных клонов в банках данных для установления гомологий с известными генами.

4. Изучить экспрессию выделенных последовательностей на уровне транскрипции в постэмбриональном периоде развития мыши.

Научная новизна полученных результатов

В результате проведенной работы впервые получен набор субтрактивных клонотек из эмбриональных стволовых клеток мыши, обогащенных последовательностями, экспрессируемыми на ранних этапах их дифференцировки; клонированы и проанализированы гены, уровень транскриптов которых увеличивается в индуцированных к дифференцировке ЭСК. Среди клонированных генов выявлено 7 новых, функции которых пока не выяснены. Проведен анализ их транскрипции в различных тканях взрослой мыши, выявивший для трех последовательностей ярковыраженный тканеспецифичный характер экспрессии. Новые последовательности зарегистрированы в банке данных GenBank с присвоением им идентификационных номеров.

Теоретическое и практическое значение работы

Исследование относится к разряду теоретических работ. Дифференцировка представляет собой сложный процесс, в котором участвует множество различных генов. К настоящему времени выделена и функционально проанализирована только малая их часть. Клонирование и анализ генов, экспрессия которых изменяется в процессе дифференцировки эмбриональных стволовых клеток, вносит свой вклад в изучение молекулярных механизмов регуляции функциональной и структурной специализации клеток

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались на VI и VIII Международной Конференции "СПИД, РАК И РОДСТВЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ"(С-Петербург, 1998, 2000 г.), а также были представлены на XII Всероссийском Симпозиуме "Структура и функции ядра" (С-Петербург, 1996), на VII Международной Конференции "СПИД, РАК И РОДСТВЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ" (С-Петербург, 1999), на Всероссийском Симпозиуме "Биология клетки в культуре"(С-Петербург, 1999).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 105 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов,

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Якубович, Елена Игоревна

ВЫВОДЫ

1. Предложен ряд методических усовершенствований конструирования субтрактивных клонотек кДНК в системе X гАРП/рВШеэспр* (БК-), позволяющих работать с малыми количествами РНК.

2. Получены и проанализированы три новые субтрактивные клонотеки кДНК из ЭСК мыши, обогащенные копиями транскриптов генов, активируемых на начальных стадиях дифференцировки, индуцированной ретиноевой кислотой и в процессе формирования простых эмбриоидных телец в суспензии.

3. Среди активируемых в процессе дифференцировки генов выявлены как уже идентифицированные, так и новые, для которых не обнаружено значимых гомологий с известными нуклеотидными последовательностями. В банке данных СепВапк зарегистрировано восемь новых последовательностей, экспрессируемых в дифференцирующихся ЭСК.

4. Показано, что, независимо от типа индуктора, на ранних стадиях дифференцировки ЭСК происходит активация транскрипции как ядерных, так и митохондриальных генов, что указывает на непосредственное участие митохондрий в процессе дифференцировки.

5. Анализ транскрипции новых генов в постэмбриональном периоде развития мыши выявил для трех из них ярковыраженный

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Якубович, Елена Игоревна, Санкт-Петербург

1. Евтушенко В. И. Клонирование в системе X ZAPII/pBluescript. Конструирование обычных клонотек кДНК // Молекулярная биология. 1994. Т. 28. С. 778-789.

2. Маниатис Т., Фрич Э. и Сэмбрук Дж. // Молекулярное клонирование М.: Мир, 1984. С. 291-332.

3. Минченко А. Г. Экспрессия митохондриального генома у человека и животных // Митохондриальный геном. Новосибирск: Наука, 1990. С. 7-40.

4. Adamson Е., Ayers S. The localization and synthesis of some collagen types in developing mouse embryos // Cell. 1979. V. 16. P. 953-965.

5. Alland L, Muhle R., Нои H. et al. Role for N-CoR and histone deacetylase in Sin3-mediated transcriptional repression // Nature. 1997. V. 387. P. 49-55.

6. Allenby G., Bocquel M-T., Saunder M. et al. Retinoic acid receptors and retinoid X receptors: interactions with endogenouse retinoic acids // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. V. 90. P. 30-34.

7. Bain G., Kitchens D., Yao M. et al. Embryonic stem cells express neuronal properties in vitro II Dev. Biol. 1995. V. 168. P. 342-357.

8. Bain G., Ray W.J., Jao M., Gottlieb D. Retinoic acid promotes neural and represses mesodermal gene expression in mouse ES cells in culture // Biochem. Biophys. Res. Com. 1996. V. 223. P. 691-694.

9. Barres В., Raff M. S., Gaese F. et al. A crucial role for neurotrophin-3 in oligodendrocytes 11 Nature. 1994. V. 367. P. 371-375.

10. Beddington R. Cripto-analysis of embryonic codes // Nature. 1998. V. 395. P.641-642.

11. Belhumeur P., Lussier M. and Skup D. Expression of naturally occuring RNA molecules complementary to the murine L27 ribosomal protein mRNA // Gene. 1988. V. 72. P. 277-285.

12. Benezra R., Davis RL, Loskshon D. et al. The protein Id: a negative regulator of helix-loop-helix DNA binding protein // Cell. 1990. V. 61. P. 49-59.

13. Bentley D. and Groudine M. A block to elongation is largely responsible for decreased transcription of c-myc indifferentiated HL-60 cells // Nature. 1986. V. 321. P. 702-706.

14. Bollag W. and Peck R. Modulation of growth and differentiation by retinoids and cytokines II Retinoids: 10 years on / Ed. Saurat J-H. Karger, Basel., 1991. P. 127-138.

15. Bradley A. Embryonic stem cells: proliferation and differentiation // Curr. Opin. Cell Biol. 1990. V 2. P. 1013-1017.

16. Brand N., Petkovich M., Krust A. et al. Identification of a second human retinoic acid receptor // Nature. 1988. V. 332. P. 850853.

17. Britten R. J., KohneD. E. Repeated sequences in DNA // Science. 1968. V. 161. P. 529-540.

18. Brotherton T., Chui D., Gauldie J. Patterson M. Hemoglobin ontogeny during normal mouse fetal development // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. V. 76. P. 2853-2855.

19. Calabress C., Barbey S., Venturini L et al. In vitro treatment with retinoids or the topoisomerase inhibitor, VP-16, evidences different functional apoptotic pathways in acute promyelocytic leukemic cells // Leukemia. 1995. V. 9. P. 2049-2057.

20. Chambon P. A decade of molecular biology of retinoic acid receptors // FASEB J. 1996. V. 10. P. 940-954.

21. Chen U., Kosco M., Staerz U. Establishment and characterization of lymphoid and myeloid mixed-cell populations from mouse late embryoid, 'embryonic-stem-cell fetuses' // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992 V. 89. P. 2541-2545.

22. Clerc P., Avner P. Role of the region 3' to Xist in the counting process of X-chromosome inactivation // Nature Genet. 1998. V. 19. P. 249-253.

23. Conover J., Ip N., Poueymirou W. et al. Ciliary neurotrophic factor maintains the pluripotentiality of embryonic stem cells // Development. 1993. V. 119. P. 559-565.

24. Cossio G., Tajbakhsh S., Buckingham M. How is myogenesis initiated in the embryo? // Trends Genet. 1996. V. 12. P. 218-223.

25. Dahlstrand J., Lardelli M., Lendahl V. Nestin mRNA expression correlates with the central nervouse system progenitor cell state in many, but not all regions of developing central nervouse system // Brain Res. Dev. Brain Res. 1995. V. 84. P. 109-129.

26. Dani C., Chambers I., et al. Paracrine induction of stem renewal by LIF-deficient cells: a new regulatory pathway // Dev. Biology, 1998. V. 203. P. 149-162.

27. Deveraux Q., Takahashi R., Salvesen G., Reed J. X-linked IAP is a direct inhibitor of cell-death proteases. // Nature. 1997. V. 388. P. 300-304.

28. Ding J., Yang Lu, Yan Y-T. et al. Cripto is required for correct orientation of the anterior-posterior axis in the mouse embryo // Nature. 1998. V. 395. P. 702-707.

29. Desbois C. Retinoid receptors and their role in cellular proliferation and differentiation // Nucleic acid and molecular biology/ Ed. Ecksteein F. and Lilley D., Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 1993. V. 7. P. 148-157.

30. Desbois C., Aubert D., Legrand C., Pain B., Samarut J. A novel mechanism of action for v-ErbA: abrogation of the inactivation of transcription factor AP-1 by retinoic acid and thyroid hormone receptors // Cell. 1991. V. 67. P. 731-740.

31. Doetschman T., EistetterH., Katz M., Schmidt W., KelmerR. The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell line: formation of visceral yolk sac, blood island and myocardium //J. Embryol. Exp. Morphol. 1985. V. 87. P. 27-45.

32. Duguid J. and Dinauer M. Library subtraction of in vitro cDNA libraries to identify differentially expressed genes in scrapie infection // Nucleic Acids Res. 1989. V. 18. P. 2789-2792.

33. Engeiender S.,Kaminsky Z., Guo X. et al. Synphilin-1 associates with a-Synuclein and promotes the formation of cytosolic inclusions//Nature Genetics. 1999. V. 22. P. 110-114.

34. Evans M.J., Kaufman M.H. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos // Nature. 1981. V. 292. P. 154-156.

35. Fan Y., Melhem M. and Chaillet R. Forced expression of the homeobox-containing gene Pem blocks differentiation of embryonic stem cells // Dev. Biol. 1999. V. 210. P. 481-496.

36. Fenderson B., Holmes E. Fukushi Y. and Hakomori S. Coordinate expression of X and Y haptens during murine embryogenesis // Dev. Biol. 1986. V. 114. P. 12-21.

37. Forman B., Umesono K., Chen J., Evans R. Unique response pathways are established by allosteric interactions among nuclear hormone receptors // Cell. 1995. V. 81. P. 541-550.

38. Fraichard A., Chassande O., Billaut G. et al. In vitro differentiation of embryonic stem cells into glial cells and functional neurons // J. Cell Sci. 1995. V. 108. P. 3181-3188.

39. Galau G.A., Britten R.J. and Davidson E.H. Studies on nucleic acid reassociation kinetics: rate of hybridization of excess RNA with DNA, compared to the rate of DNA renaturation //

40. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1976. V. 74. P. 1020-1026.

41. Gebert J., Moghal N., Frangioni J. et al. High frequency of retinoic acid receptor (3 abnormalities in human lung cancer // Oncogene. 1991. V. 6. P. 1859-1868.

42. Geradts J., Chen J -Y., Russell Ed. et al. Human lung cancer cell lines exhibit resistance to retinoic acid treatment // Cell Growth Differ. 1993. V. 4. P. 799-809.

43. Gilchrest B. Anti-sunshine vitamin A. // Nature Medicine. 1999. V. 5. P. 376-377.

44. Goumans M-J., Oostwaard D, Wianny F. et al. Mouse embryonic stem cells with aberrant transforming growth factor p signalling exhibit impaired differentiation in vitro and in vivo II Differentiation. 1998. V. 63. P. 101-113.

45. Grabel L., Becker S., Lock L, Maye P., Zanders T. Using EC and ES cell culture to study early development: recent observation on Indian Hedgehog and Bmps // Int. J. Dev. Biol. 1998. V. 42. P. 917-925.

46. Grignani F., Matteis Sm, Nervi C. et al. Fusion proteins of the retinoic acid receptor-a recruit histone deacetylase in promyelocyte leukaemia // Nature. 1998. V. 391. P. 815-818.

47. Grunstein M. Histone acetylation in chromatin structure and transcription // Nature. 1997. V. 389. P. 349-352.

48. Gutierrez-Ramos J. and Palacios R. In vitro differentiation of embryonic stem cells into lymphocyte precursors able to generate T and B lymphocytes in vivo II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992 V. 89. P. 9171-9175.

49. Hauser H., Bardroff M. Pyrowolakis G. and Jentsch S. A giant ubiquitin-conjugating enzyme related to IAP apoptosis inhibitors//J. Cell Biol. 1998. V. 15. P. 1415-1422.

50. Heddi A., Faure-Vigny, Wallace D. and Stepien G. Coordinate expression of nuclear and mitochondrial genes involved in energy production in carcinoma and oncocytoma // Biochim. Biophys. Acta. 1996. V. 1316. P. 203-209.

51. Heinzel Th., Lavinsky R., Mullen T-M. et al. A complex containing N-CoR, mSin3 and histone deacetylase mediates transcriptional repression // Nature. 1997. V. 387. P. 43-48.

52. Hengartner M. Death cycle and Swiss army knives // Nature. 1998. V. 391. P. 441-442.

53. Herrmann B., Labeit S., Poustka T. et al. Cloning of the T gene required in mesoderm formation in the mouse // Nature. 1990. V. 343. P. 617-622.

54. Heyman R., Mangelsdorf D., Dyck J. et at. 9-cis-Retinoic acid is ahigh affinity ligand for the retinoid X receptor // Cell. 1992. V. 68. P. 397-406.

55. Hirose T., Austin S. and Jeffen A. Identification of a transposon-related RNA down regulated by retinoic acid in embryonic and embryonal carcinoma cells // Exp. Cell Res. 1995. V. 221. P. 294300.

56. Horlein A. Ligand-independent repression by the thyroid hormone receptor mediated by a nuclear receptor co-repressor

57. Nature. 1995. V. 377. P. 397-404.

58. Hu G. and Thilly W. Evolutionary trail of mitochondrial genome as based on human 16S rDNA pseudogenes // Gene. 1994. V. 147. P. 197-204.

59. Jaffey P., Chan L-N., Shao J. et al. Retnoic acid inhibition of serum-induced c-fos transcription in fibrosarcoma cell line // Cancer Res. 1992. V. 52. P. 2384-2388.

60. Jansa P. and Forejt J. A novel type of retinoic acid response element in the second intron of the mouse H2K" gene is activated by the RAR/RXR heterodimer // Nucleic Acids Res. 1996. V. 24. P. 694-701.

61. Johansson B. and Wiles M. Evidence for involvement of activin A and bone morphogenetic protein 4 in mammalian mesoderm and hematopoietic development // Mol. Cell. Biol. 1995. V. 15. P. 141-151.

62. Jentsch S. and Uirich H. Ubiquitous deja vu // Nature. 1998. V. 395. P. 321-322.

63. Kaiser A., Brembick F., Nicke B. et al. All-trans-retinoic acid-mediated growth inhibition involves inhibition of human kinesin-related protein HsEg5 // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 18925-19017.

64. Kastner P. et al. Genetic evidence that the retinoid signal is transduced by heterodimeric RXR/RAR functional units during mouse development// 1997. Development. V. 124. P. 313-326.

65. Keller G. In vitro differentiation of embryonic stem cells // Curr. Opin. Cell Biol. 1995. V 7. P. 862-869.

66. Keller G., Kennedy M., Papayannopoulou T., Wiles M. Hematopoietic commitment during embryonic stem cell differentiation in culture II Mol. Cell Biol. 1993. V. 13. P. 473-486.

67. Kindy M., McCormack J., Buckler A. et al. Independent regulation of transcription of the two strands of the c-myc gene // Mol. Cell Biol. 1987. V. 7. P. 2857-2862.

68. Kitabayashi I., Kawakami Z., Chiu R. et al. Transcriptional regulation of the c-jun gene by retinoic acid and E1A during differentiation of F9 cells// EMBO J. 1993. V. 11. P. 167-175.

69. Ko M. An "equalized cDNA library" by the reassociation of short double-stranded cDNAs // Nucleic Acid Res. 1990. V. 18. P. 5705-5711.

70. Kurokawa R., DiRenzo J., Boehm M. et al. Regulation of retinoid signalling by receptor polarity and allosteric control of ligand binding // Nature. 1994. V. 371. P. 528-531.

71. Kwon B., Kim G., Prystowsky B. et al. Isolation and initial characterization of multiple species of T-lymphocyte subset cDNA clones // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. V. 84. P. 28962900.

72. Laabi Y., Gras M-P., Brouet J-C. et al. The BCMA gene, preferentially expressed during B lymphoid maturation, is bidirectionally transcribed // Nucleic Acids Res. 1994. V. 22. P. 1147-54.

73. Laeng H., Shneider E., Bolli E. et al. Participation of mitochondrial proliferation in morfological differentiation of murine mastocytoma cells // Exp. Cell Res. 1988. V. 179. P. 222232.

74. Langstone A. and Gudas L. Identification of retinoic acid response enhancer 3' of the murine homeobox gene Hox 1.6 II

75. Mech. Dev. 1992. V. 38. P. 217-228.

76. Larsen R., Ernst L, Nair R. and Lowe J. Molecular cloning, sequence, and expression of a human GDP-L-fucose:j3-D-galactoside 2-a-L-fucosy¡transferase cDNA that can form the H blood antigen // Proc. Natl. Acad. Sci. 1990. V. 87. P. 6674-6678.

77. Lebeau M-C., Alvarez-Bolado G., Wahli W. and Catsicas S. PCR driven DNA-DNA competitive hybridization: a new method for sensitive differential cloning // Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 4778.

78. Lee J., Davidow L., Warshawsky D. Tsix, a gene antisense to Xist at the X-inactivation centre // Nature Genet. 1999. V. 21. P. 400404.

79. Lee R., Feinbaum R. and Ambros V. The C. elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin-14 II Cell. 1993. V. 75. P. 843-854.

80. Leid M., Kastner P., Lyons R. et al. Purification, cloning,and RXR identity of the HeLa cell factor with wich RAR or TR heterodimerizes to bind targed sequences efficiently // Cell.1992. V. 68. P. 377-395.

81. Leid M., Kastner Ph., Durand B. et al. Retinole acid signal trunsduetion pathways // Annals New York Academy of sciences.1993.

82. Levin A., Sturzenbecker L, Kazmer S. et al. 9-cis-Retinoic acid stereoisomer binds and activates the nuclear receptor RXR alpha II Nature. 1992. V. 355. P. 359-361.

83. Li W.-B., Gruber C., Lin J. et al. The isolation of differentially expressed genes in fibroblast growth factor stimulated BC3H1 cells by subtractive hybridization // BioTechniques. 1994. V. 16. P. 722-729.

84. Lin J., Smith M., Jessee J. and Bloom F. DH11S: A competent cell host for preparation of single-stranded DNA from phagmid vectors // Focus. 1991. V. 13. P. 96-98.

85. Lindahl K.-F., Hermel E., Loveland B. and Wang C-R. Maternally transmitted antigen of mice: a model transplantation antigen // Annu. Rev. Immunol. 1991. V. 9. P. 351-372.

86. Lindenbaum M. and Grosveld F. An in vitro globin gene switching model based on differentiated embryonic stem cells II Genes Dev. 1990. V. 4. P. 2075-2085.

87. Lockett T. and Sleigh M. Oncogene expression in differentiating F9 mouse embryonal carcinoma cells // Exp. Cell Res. 1987. V. 173. P. 370-378.

88. Macdonald P., Dowd D., Shigeo N. et al. Retinoid X receptors stimulate and 9-cis-retinoic acid inhibits 1,25-dihydroxyvitamin D3-activated expression of the rat osteocalcin gene // Mol. Cell Biol. 1993. V. 13. P. 5907-5917.

89. Mader S., Chen J-Y., Chen Z. et al. The patterns of binding of RAR, RXR and TR homo- and heterodimers to direct repeats are dictated by the binding specificities of the DNA binding domains//EMBO J. 1993. V. 12. P. 5029-5041.

90. Mangelsdorf D. and Evans R. The RXR heterodimers and orphan receptors // Cell. 1995. V. 83. P. 841-850.

91. Mangelsdorf D., Borgmeyer U., Heyman R. et al. Characterization of three RXR genes that mediate the action of 9-cis-retinoic acid // Genes Dev. 1992. V.6. P. 329-344.

92. Mangelsdorf D., Umesono K., Evans R. The retonoids receptors // The retinoids: biology, chemistry and medicine / Eds. Sporn M., Roberts A., Goodman D. N. Y. : Raven Press, 1994. P. 319-349.

93. Marshall H. et al. A conserved retinoic acid response element required for early expression of the homeobox gene Hoxb-1 II Nature. 1994. V. 370. P. 567-571.

94. Marti E., Bumcrot R., Takada R., McMahon A. Requirement of 19k form of Sonic hedgehog for induction of distinct ventral cell types in CNS explants // Nature. 1995. V. 375. P. 322-325.

95. Martin G. et al. X-chromosome inactivation during differentiation of female teratocarcinoma stem cells in vitro // Nature. 1978. V. 271. P. 329-333.

96. Martin G. Isolation of pluripotent cell line from early mouse embryose cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. V 78. P. 7634-7638.

97. McClannahan T., Dalrymple S., Barkett M., Lee F. Hematopoietic growth factor receptor genes as markers of lineage commitment during in vitro development of hematopoietic cells//Blood. 1993. V.81. P. 2903-2915.

98. McMaster G. and Carmichael G. Analysis of single and double-stranded nucleic acids on polyacrilamide and agarose gels by using glyoxal and acridine orange // Proc. Natl. Acad. Sci. 1977. V. 74. P.4835-4840.

99. Mertz L., Westfail B., Rashtchian A. PCR nonradioactive labeling system for synthesis of biotinylated DNA probes // Focus. 1993. V.16. P.49-51.

100. Miller W., Moy Jr., Li D. et al. Retinoic acid induces down-regulation of several growth factors and protooncogenes in a human embryonal carcinoma cell line // Oncogene. 1990. V. 5. P. 511-517.

101. Milner J., Ceccini £., and Dominy P. A kinetic model for subtractive hybridization // Nucleic Acids Res. 1995. V. 23. P. 176-187.

102. Moasser M., Reuter V., Dmitrovsky E. Overexpression of the retinoic receptor y directly induses terminal differentiation of human embryonal carcinoma cells // Oncogene. 1995. V. 10. P. 1537-1543.

103. Mummery C., Feyen A., Freund E. ands Shen S. Characteristics of embryonic stem cell differentiation: a comparsion with two embryonal carcinoma cell lines // Cell Differ. Dev. 1990. V. 30. P. 195-206.

104. Nagpal S., Friant S., Naksharti H., Chambon P. RARs and RXRs: evidence for two autonomous transactivation function (AF-1 and AF-2) and heterodimerization in vivo II The EMBO. 1993. V. 12. P. 2349-2360.

105. Nakano T., Kodama H., Honjo T. Generation of lymphohematopoietic cells from embryonic stem cells in culture//Science. 1994. V. 265. P. 1098-1101.

106. Nemetz C., Hocke G. Transcription factor Stat5 is an early marker of differentiation of murine embryonic stem cells // Differentiation. 1998. V. 62. P. 213-220.

107. Niederreither K., Subbarayan V., Dolle P. and Chambon P. Embryonic retinoic acid synthesis is essential for early mouse post-implantation development // Nature Genet. 1999. V. 21. P. 444-448.

108. Nuoffer C., Wu S-K., Dascher Ch. and Balch IN. MSS4 does not function as exchange factor for Rab in endoplasmic reticulum to Golgi transport// Mol. Biol. Cell. 1997. V.8. P. 1305-1316.

109. Okamoto K., Okazaswa H., Okuda A. et al. A novel octamer binding transcription factor is differentially expressed in mouse embryonic cells. // Cell. 1990. V. 60. P. 461-472.

110. Padmanaban G., Venkateswar V. and Rangarajan P. Haem as a multifunctional regulator 11 Trends Biochem. Sci. 1989. V.14. P. 492-496.

111. Perlmann T. and Jansson L. A signaling mediated by RXR heterodimerization with NGFI-B and NURR1 11 Genes Dev. 1995. V. 9. P. 769-782.

112. Perny L., Simon M., Robertson E. et al. Erythroid differentiation in chimaeric mice blocked by a targeted mutation in the gene for transcription factor GATA-1 // Nature. 1991. V. 349. P. 257260.

113. Peters J-M. Proteasomes: protein degradation machines of the cell //Trends Biochem. Sci. 1994. V. 19. P. 377-382.

114. Piko L. and Taylor K. Amounts of mitochondrial DNA and abudance of some mitochondrial gene transcripts in early mouse embryos // Development. 1987. V. 123. P. 364-374.

115. Pinkas-Kramarski R., Eilam R., Sppiegler R. et al. Brain neurons and glial cell express new differentiation factor/heregulin: a survial factor for astrocytes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V. 91. P. 9387-9391.

116. Popperl H., Featherstone M. Identification of retinoic acid response element upstream of the murine Hox-4.2 gene // Mol. Cell Biol. 1993. V. 13. P. 257-265.

117. Porter J., EkkerS., Park W-J. et al. Hedgehog patterning activity: role of a lipophilic modification mediated by the carboxy-terminal autoprocessing domain // Cell. 1996. V. 86. P. 21-34.

118. Pratt M., Kralova J., Mcburney M. A dominant negative mutation of the a retinoic acid receptor gene in a retinoic acid-nonresponsive embryonal carcinoma cell // Mol. Cell Biol. 1990. V. 10. P. 6445-6453.

119. Rathjen P.O., Nichols J., Toth S. et.al. Developmental^ programmed induction of differentiation inhibiting activity and control of stem cell populations // Genes Dev. 1990. V. 4. P. 2308-2318.

120. Risau W. Mechanisms of angiogenesis // Nature. 1997. V. 386. P. 671-674.

121. Roberts D., Jonson R., Burke A. et al. Sonic hedgehog is an endodermal signal inducing BMP-4 and Hox genes during induction and regionalization of the chic hindgut //

122. Development. 1995. V. 121. P. 3163-3174.

123. Robertson E. Embryo derived stem cells // Teratocarcinomas and Embryonic stem cells: A Practical Approach / Eds. Robertson E.J. Oxford : IRL Press, 1987. P. 71-112.

124. Rubenstein J., Brice El., Ciaranello R. and Denney D. Subtractive hybridization system using single-stranded phagmids with directional inserts // Nucleic Acids Res. 1990. V. 18. P. 48334842.

125. Sagerstron C.,Sun B. and Sive H. Subtractive cloning: Past, Present, and Future // Annu. Rev. Biochem. 1997. V. 66. P. 751783.

126. Schmitt R., Bruyns E., Snodgrass H. Hematopoietic development of embryonic stem cells in vitro: cytokine and receptor gene expression // Genes Dev. 1991. V. 5. P. 728-740.

127. Schweinfest CI., Hendereson K., Gu J-R. et al. Subtraction hybridization cDNA libraries from colon carcinoma and hepatic cancer // Genet. Annal. Techn. Appl. 1990. V. 7. P. 64-70.

128. Sista N., Barry Ch., Sampson K., Pagano J. Physical and functional interaction of the Epstein-Barr virus BZLF1 transactivator with the retinoic acid receptors RARa and RXRa // Nucleic Acids Res. 1995. V. 23. P. 1729-1736.

129. Smith A. Culter and differentiation of embryonic stem cells // J. Tiss. Cult. Meth. 1991. V. 13. P. 89-94.

130. Smith A.G., Hooper M.L. Buffalo rat liver cells produce a diffusible activity which inhibits the differentiation of murine embryonal carcinoma and embryonic stem cells // Dev. Biol. 1987. V. 121. P. 1-9.

131. Smith M, Thomas W. and Patton J. Mitochondrial DNA-like sequence in the nuclear genome of an akodontine rodent // Mol. Biol. Evol. 1992. V. 9. P. 204-215.

132. Spillantini M., Shmidt M., Lee V. et al. a-Synuclein in Lewy bodies. // Nature. 1997. V. 388. P. 839-840.

133. Sporn M., Roberts A., Goodman D. The retinoids: biology, chemistry and medicine. N. Y. : Raven Press, 1994.

134. Steele F. Researchers discover RARE sequences in mammalian homeobox genes // J. NIH. Res. 1994. V. 6. P. 31-33.

135. Strickland S. and Madhavi V. The induction of differentiation interatocarcinoma stem cells by retinoic acid // Cell. 1978. V.15. P. 393-403.

136. Swaroop A., Xu JAgarwaI N. and Weissman Sh. A simple and efficient cDNA library subtraction procedure: isolation of human retina-specific cDNA clones // Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 1954.

137. Thiele C., Deutsch L., Israel M. a The expression of multiple proto-oncogenes is differentially regulated during retinoic acid induced maturation of human neuroblastoma cell lines // Oncogene. 1988. V. 3. P. 281-288.

138. Thiele C.,Cohen P., Israel.M. b Regulation of c-myb expression in human neuroblastoma cells during retinoic acid-induced differentiation // Mol. Cell Biol. 1988. V. 8. P. 1677-1683.

139. Tontonoz P., Gravers R., Budvari A. et at. Adipocyte-specific transcription factor ARF6 is a heterodimeric complex of two nuclear hormone receptors, PPAPy and RXRa // Nucleic Acids Res. 1994. V. 22. P. 5628-5634.

140. Torroni A., Stepien G., Hodge J. and Wallace D. Neoplastic transformation is associated with coordinate induction of nuclear and cytoplasmic oxidative phosphorylation genes // J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 20589-20593.

141. Umesono K., Giquere V., Glass C. et al. Direct repeats as selective response elements for the thyroid hormone, retinoic acid, and vitamin D3 receptors // Cell. 1991. V. 65. P. 1255-1266.

142. Varlet I., Collignon J., Roberson E. Nodal expression in the primitive endoderm is required for specification of the anterior axis during mouse gastrulation // Development. 1997. V. 124. P. 1033-1044.

143. Vasios G., MaderJ., Gold J. etal. The late retinoic acid induction of laminin B1 gene transcription involves RAR binding to the responsive element// EMBO J. 1991. V. 10. P. 1149-1158.

144. Vayssiere J., Cordeau-Lossouarn L, LarcherJ. etal. Participation of the mitochondrial genome in the differentiation of neuroblastoma cells // In vitro Cell. Dev. Biol. 1992. V. 28. P. 763772.

145. Wallington L, Bunce C., Durham J., Brown G. Particular combinations of signals, by retinoic acid and 1a, 25 dihydroxyvitamin D3, promote apoptosis of HL60 cells //1.ukemia. 1995. V. 9. P. 1185-1190.

146. Wang X., Penzes P., Napoli J. Cloning of a cDNA encoding an aldehyde dehydrogenase and its exspression in E. coli // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. P. 16288-16293.

147. Wang Z., Bongjelal M., Kang M. et al. Ultraviolet irradiation of human skin causes functional vitamin A deficiency, preventable by all-trans retinoic acid pre-treatment // Nature Medicine. 1999. V. 5. P. 418-422.

148. Weaver T., Fredrick W. From RAGs to stitches // Nature. 1997. V. 388. P. 428-429.

149. Weber E., Dieckmann C. Identification of CBP1 polypetide in mitochohdrial extracts from Saccharomyces cerevisiae // J.

150. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 1594-1600.

151. Wells D. The in vitro isolation^ murine embryonic stem cells // Methods in molecular biology: Transgenesis techniques: Principles and Protocols / Eds. Murphy D. and Carter D. Totowa, NJ: Human Press Inc., 1993. V. 18. P. 183-216.

152. Wiles M., Keller G. Multiple hematopoietic lineages develop from embryonic stem (ES) cells in culture // Development. 1991. V. 111. P. 259-267.

153. Williams J. The preparation and screening of a cDNA clone bank.

154. Genetic engineering / Eds Willamson R. N. Y.: Academic Press., 1981. V.1. P. 2.

155. Wolffe A. Sinful repression // Nature. 1997. V. 387. P. 16-17.

156. Wulf G., Adra C., Lim B. Inhibition of hematopoietic development from embryonic stem cells by antisense vav RNA // EMBO J. 1993. V. 13. P. 5065-5074.

157. Xiong J-W., Leahy A., Leeéi-H, Stuhlmann H. Vezfl: A Zn finger transcription factor restricted to endothelial cells and their precursors.

158. Dev. Biol. 1999. V. 206. P. 123-141.

159. Zambrowicz B., Fredrich G. et al. Disruption and sequence identification of 2,000 genes in mouse embryonic stem cells // Nature. 1998. V. 392. P. 608-611.

160. Zelent A., Krust A., Petkovich M., Chambón P. Cloning of murine a and ß retinoic acid receptors and a novel receptor y predominantly expressed in the skin // Nature. 1989. V. 339. P. 714-715.

161. Zhang R., Tsai F-Y., Orkin S. Hematopoietic development of vav-I- mouse embryonic stem cells // Proc. Natl. Acad. Sei. USA . 1994. V. 91. P. 12755-12795.

162. Zhang X-K., Lehmann J., Hoffmann B. et ai. Homodimer formation of retinoid X receptor induced by 9-cis -retinoic acid // Nature. 1992. V. 358. P. 587-591.

163. Zhao D. et al. Molecular identification of a major retinoic-acid synthesizing enzyme: a retinaldehyde-specific dehydrogenase // Eur. J. Biochem. 1996. V. 240. P. 15-22.

164. Zhou H., Manji S., Findlay D. et al. Novel action of retinoic acid // J. Biol. Chem. 1994. V. 269. P. 22433-22439.

165. Zimmermann J. and Schultz R. Analysis of gene expression in the preimplantation mouse embryo // Proc. Natl. Acad. Sei. 1994. V. 91. P. 5456-5460.

166. Zmuidzinas A., Fischer K-D., Lira S. et al. The vav proto-oncogene is required early in embryogenesis but not for hematopoietic development in vitro II EMBO J. 1995. V.14. P. 111.