Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Клинико-морфологическая диагностика опухолей семенников у кобелей

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Клинико-морфологическая диагностика опухолей семенников у кобелей"

На правах рукописи

СЕДЕГОВ СЕРГЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ОПУХОЛЕЙ СЕМЕННИКОВ У КОБЕЛЕЙ

06.02.01 - Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

2 ОКТ 2014

005552983

Саранск-2014

005552983

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы исследования. Онкология как самостоятельная наука стала развиваться в ветеринарной медицине сравнительно недавно. Ее знания постепенно пополняются, а методы диагностики, используемые ветеринарными врачами, постоянно усовершенствуются. Современная неблагоприятная экологическая обстановка в мире, постоянные стрессы и прочие факторы урбанизации, негативно влияют не только на здоровье людей, но и животных, проживающих в непосредственной близости с ними (Велыпер JI.3., 2009; Йин С., 2008; Уайт, А.С., 2003). Число онкологических больных животных в нашей стране неуклонно растёт (Чегодаева МП, Татарникова Н.А., 2011, 2012, 2013). В борьбе за здоровье животных необходимо своевременно изучать и анализировать постоянно изменяющуюся онкологическую ситуацию, изобретать новые методы диагностики и лечения различных неоплазий у домашних животных.

Широкое распространение у собак получили онкологические заболевания органов репродуктивной системы, в частности семенников (Фелдмен Э., Нельсон Р., 2008). Данная группа заболеваний способна нанести существенный вред племенному разведению служебных, охотничьих и декоративных собак. По данным Дж. Симпсон, Г. Ингланда, М. Харви (2005) опухоли семенников у собак встречаются чаще, чем у других домашних животных и по распространенности занимают второе место после опухолей кожи. Частота встречаемости опухолей семенников у кобелей по данным К. McEntee (1990) и D. O'Keefe (1995) составляет 5 - 15% от числа всех неоплазий. Несмотря на широкое распространение и большой интерес практикующих ветеринарных врачей к данной теме, имеется лишь небольшое количество работ отечественных и зарубежных авторов, в которых описаны основные аспекта диагностики опухолей семенников у собак (Йин С., 2008; Целищев JI. Й., 1982; Baumans V., 1981; Crow S. Е, 1980; Dhaliwal R.S., 1999).

Остро стоит вопрос о распространении крипторхизма среди кобелей (Мемон М., 2004). По научным данным, представленным в работе Э. Фелдмен, Р. Нелсон (2008), крипторхизм передается по наследству и является аутосомным рецессивным признаком, сцепленным с полом. Данная патология рассматривается нами как возможная причина возникновения онкологических заболеваний семенников, и её распространение стимулирует рост случаев тестикулярной неоплазии среди кобелей.

Согласно изложенным аспектам, становится ясной актуальность работы, поскольку знание онкологических заболеваний семенников различного характера позволит предпринять целый ряд комплексных и адекватных диагностических мероприятий по их выявлению у собак.

1.2. Степень разработанности темы. В результате научных исследований внедрены методы диагностики разных видов новообразований семенников у собак (Баранов С.В., 1991; Уайт А.С., 2003; Волченко Н., 2005; Байнбридж Д., Эллиот Д., 2008). Однако для практикующих ветеринарных врачей необходимы рациональные методы диагностики простые в методике и объективные в работе, этому вопросу посвящено наше исследование. Нами разработана диагностика тестикулярных неоплазий семенников у кобелей в соответствии международной классификации TNM [6].

Работа является частью комплексных исследований кафедры инфекционных заболеваний животных ФГБОУ ВПО Пермской государственной сельскохозяйственной академии имени академика Д.Н. Прянишникова в соответствии с государственным планом НИОКР (номер государственной регистрации 01201151683 - «Разработка комплекса мероприятий по диагностике, профилактике и лечению инфекционных, инвазионных и незаразных болезней животных»).

и. Цель и задачи исследования. Разработать наиболее простую клинико-морфологическую диагностику различных тестикулярных неоплаз ий и предопухолевых состояний семенников у собак.

В соответствии с целью научной работы поставлены следующие задачи:

- определить основные клинико-морфологические признаки диагностики опухолей и предопухолевых состояний семенников у собак, а именно: подробно охарактеризовать патогистологическую картину различных заболеваний органа;

- выявить основные факторы способствующие возникновению онкологических заболеваний семенников у собак;

- изучить концентрацию эстрадиола и тестостерона в сыворотке венозной крови собак для оценки влияния онкологического процесса в семенниках на гормональный фон собак;

- разработать перспективную рекомендацию для практикующих ветеринарных врачей по дифференциальной диагностике заболеваний семенников опухолевой природы.

1.4. Научная новизна. Описана распространенность различных опухолей семенников у обследованных собак г. Перми. Представлена подробная патогистологическая характеристика различных онкологических и неонкологических заболеваний семенников у кобелей. Выявлено влияние некоторых тестикулярных неоплазий и предопухолевых состояний на гормональный фон пациентов. Определены критерии риска возникновения онкологических заболеваний семенников. Разработана перспективная рекомендация по диагностике опухолей семенников у собак на основе международной системе ШМ для практикующих ветеринарных врачей.

Положения выносимые на защиту:

1. Клинико-морфологическая диагностика тестикулярных опухолей у собак.

2. Этиологические факторы способствующие возникновению новообразований семенников у кобелей.

3 .Патофизиологическая взаимосвязь концентрации эстрадиола и тестостерона венозной крови с тестикулярными неоплазиями у собак.

4. Критерии дифференциальной диагностики различных опухолей и предопухолевых состояний семенников у кобелей.

1.5. Теоретическая и практическая значимость. Полученные в ходе исследования клинико-морфологические данные позволят практикующим ветеринарным врачам - клиницистам осуществлять более точную дифференциальную диагностику онкологических заболеваний семенников у кобелей. Представленные в работе описания патогистологической картины различных тестикулярных патологий являются наглядным пособием для работников ветеринарных гистопатологических лабораторий.

Материалы научных исследований используются в учебном процессе при проведении лекционных лабораторно-практических занятий на факультетах ветеринарной медицины: Пермской ГСХА, Костромской ГСХА, Ивановской ГСХА, Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева, Государственного аграрного университета Северного Зауралья и в практической деятельности ветеринарных клиник г. Перми («Фауна», «ВетОптТорг», «Семейный любимец»).

Составлена учебная коллекция гистологических препаратов и микрофотографий заболеваний семенников различной этиологии у кобелей.

По результатам исследования разработаны рекомендации для ветеринарных специалистов «Гистопатологическая диагностика основных опухолей семенников собак» (2014г.) [6].

1.6. Методология и методы исследований. Исследованию подвергнуты семенники кобелей разных пород и возрастов. Проведены визуальные, биометрические, цитологические, патогистологические, люминисценгао-микроскопические исследования опухолевых узлов, выведена классификация опухолей семенников у собак по системе ТЫМ. Сделан анализ концентрации

, эстрадиола и тестостерона в венозной крови у кобелей с различными онкологическими заболеваниями семенников. Разработана упрощенная практическая диагностика тестикулярных опухолей у кобелей разных пород и возрастов для ветеринарных врачей.

1.7. Степень достоверности и апробация. Основные положения исследования доложены и одобрены на Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных, аспирантов и студентов «Молодёжная наука 2011. Технологии. Инновации» (Пермь, 2011), Международной научно-практической конференции «Современные направления в диагностике, профилактике и терапии заболеваний животных» (Ставрополь, 2011), Международной научно-практической конференции «Современные тенденции ветеринарной медицине» (Ставрополь, 2013), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Биология. Ветеринария. Безопасность продукции животноводства» (Орёл, 2014).

1.8. Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ (общий объём 36 печатных листов, в то числе 5 работ в журналах, входящих в перечень ведущих научных журналов и изданий, определённых ВАК России).

1.9. Структура н объём диссертации. Работа изложена на 137 страницах компьютерного текста и включает: общую характеристику работы; обзор литературы; результаты собственного исследования; обсуждение результатов исследования; выводы и практические предложения. Работа иллюстрирована 74 рисунками и 8 таблицами.

2. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

2.1. Анализ состояния вопроса, задача исследования и перспектива её решепия. В настоящее время ветеринарная онкология стремительно развивается. Появляются новые данные о различных опухолях у животных. Возможность диагностики новообразований мелких домашних животных для многих российских ветеринарных врачей остаётся малодоступной из-за недостаточного количества

специализированной литературы с описанием практических методов диагностики данной группы заболеваний, отсутствия диагностического оборудования и высокой стоимости исследований. Разработка и внедрение в практическую работу отечественных ветеринарных врачей методов диагностики тестикулярных неоплазий является первостепенной задачей нашей научной работы. Полученные в ходе исследования данные помогут провести дифференциальную диагностику различных опухолей семенников у собак в условиях небольшой ветеринарной клиники. В перспективе данная работа может являться практическим диагностическим руководством для практикующих ветеринарных врачей.

2.2. Материалы и методы исследования. Исследование проводилось на собаках в период с сентября 2010 г. по декабрь 2013 года в ветеринарных клиниках города Перми («Фауна», «ВетОпгТорг», «Семейный любимец»), в которых выполнялась билатеральная орхидэктомия (кастрация) кобелей и игловая биопсия семенников. Было обследовано 87 породных и беспородных собак в возрасте от 8 месяцев до 11 лет. Каждой собаке присваивался порядковый номер, который сохранялся за конкретным животным на протяжении всех этапов исследования. Разделение животных на группы происходило по результатам физикального обследования (устанавливалось месторасположение тестикула) и гистопатологического диагноза экцезированных семенников. Каждый семенник рассматривался как отдельно взятая единица.

Билатеральную орхидэкгомию (кастрацию) у собак проводили под общей анестезией с предварительно проведенной премедикацией. Для премедикации пациентам, за 20 минут до инъецирования средств для общей анестезии, вводились следующие препараты: атропина сульфат (в дозе 0,04 мг на 1 кг массы тела животного, подкожно), димедрол (в дозе 0,04 мг на 1 кг массы тела животного, подкожно), дицинон (в дозе 0,05мг на 1 кГ массы тела животного, подкожно).

Общая анестезия производилась внутримышечным введением препарата Золетил-100 в дозе 5 мг на 1 кг массы тела животного, в сочетании с ксилозином в дозе 2 мг на 1 кг массы животного.

Игловую биопсию проводили с помощью иглы Арехтес1 014 по стандартной технике: игла вводится в толщу исследуемой ткани, поворачивается на 360 градусов и извлекается с тканевым образцом. Эксцизионная биопсия явилась методом выбора при проведении исследования. Данный метод биопсии заключается в полном хирургическом удалении (иссечении) опухолевой ткани и исследуемого органа Это позволяет более точно установить гистопатолотический диагноз, поскольку исследуется весь тестикул с прилегающими тканями и образцы для гистологического исследования можно взять из разных участков опухоли, используя маркировку объектов.

После оперативного вмешательства, семенник подвергался биометрическому исследованию, в процессе которого проводилось измерение размеров органа и имеющихся в толще неопластических узлов, определялась его форма, цвет и консистенция, наличие и сохранность наружной оболочки и основных структурных элементов.

Прошедший визуальный осмотр тестикул помещался в 10% раствор формальдегида. Взятые для исследования кусочки вставляли в пластмассовые кассеты

для вырезки оперативно удаленных объектов размерами 2,8*4*0,5 см. Далее осуществлялась проводка операционного материала по спиртам возрастающей крепости для обезвоживания и уплотнения ткани с использованием гистопроцессора -автомата LEICA TP 1020 с заданным циклом проводки 18 часов.

После проводки кусочки подвергались заливке в особо чистый парафин (среда гистомикс) с температурой плавления 56 градусов. Для этого использовался аппарат для заливки кусочков в парафин Thermo scientific Histostar. С полученных парафиновых блоков изготавливались срезы толщиной 2-3 микрона на микротоме-полуавтомате Microm HM 325.

Срезы и биопсийный материал окрашивались (Семченко В.В., 2006):

1) Гематоксилином и эозином (обзорная методика);

2) Окраска ван Гизон;

3) Акридином оранжевым (люминесцентная микроскопия).

Полученные срезы исследовались на световом микроскопе фирмы Axioscop 40 с окуляром хЮ, при увеличениях объектива 4х; 10х; 40х; ЮОх. В процессе изучения гистологического образца проводилось подробное описание его морфологического строения, на основании которого определялся заключительный гистопатологический диагноз. Все полученные данные, включая микрофотографии, сохранялись на USB-флеш-накопителе и анализировались с использованием системы визуального анализа изображения Infinity Analyze Image с видеокамерой Infinity 1.

Люминесцентно-микроскопическое исследование проводилось по рекомендации Л.П. Тельцова (1997) с использованием флуорохрома - акридин оранжевый (производство: Actos organics) в разведении 1:10000 в цитратно-фосфатном буфере с pH 5 и pH 6. Экспозиция от 30 секунд до 10 минут. Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) и двуцепочная рибонуклеиновая кислота (РНК) окрашивается акридиновым оранжевым в светло-зелёный или зелёно-желтый цвет, а РНК, одноцепочная ДНК и полисахариды в красный, оранжево-красный. Идентификация ДНК и РНК (контроль) осуществлялась выдерживанием гистологических препаратов в 1 М растворе соляной кислоты при 37°С и экспозиции 1 час для ДНК и 3 часа для РНК. После чего проводилась вторичная окраска гистологического среза по вышеизложенной технике. Исследование проводилось на люминесцентном микроскопе OLYMPUS СХ 41 с окуляром 10х и объективами 4х; 10х.; 40х.; ЮОх.

Параллельно с гистопатологическим исследованием семенников, проводилось иммуноферментный анализ для определения концентрации эстрадиола и общего тестостерона в венозной крови собак.

Забор венозной крови производился из вены предплечья (Vena cephalica) с помощью стерильной одноразовой инъекционной иглы типа "Луер" (0,9 х 40 мм) и стерильной вакуумной пробирки. Свежую венозную кровь отстаивали при комнатной температуре 30 - 60 минут, после чего её центрифугировали 10 минут со скоростью 1500 оборотов в минуту. Отцентрифугированную сыворотку собирали с помощью дозатора Nichiryo Le в стерильную микропробирку. Анализ концентрации эстрадиола и тестостерона проводился на хемилюминесцентном анализаторе Architect i2000SR (фирмы Abbott, США). Метод основан на конкурентном связывании тестостерона (эстрадиола) исследуемой сыворотки и коньюгата тестостерона-ПХ (эстрадиола - ПХ) с постоянным количеством кроличьего антитестостерона (ангиэстрадиола). В ячейки,

покрытые антикроличьими IgG, вносят по 10 мкл тестостероновых (эстрадиоловых) стандартов, контролей и исследуемых проб сыворотки, добавляют 100 мкл конъюгата тестостерона-ПХ (эстрадиола - ПХ) и 50 мкл кроличьего антитестостеронового (ангиэстрадиолового) реагента Инкубируют при 37 °С. Во время инкубации известное количество меченного ПХ тестостерона (эстрадиола) конкурирует с эндогенным тестостероном (эстрадиолом) в стандарте, пробе или контрольной сыворотке за определенное число мест связывания на специфических антителах к тестостерону (эстрадиолу). При этом количество связанного меченного пероксидазой тестостерона (эстрадиола) обратно пропорционально содержанию эндогенного тестостерона (эстрадиола) в исследуемой сыворотке. Несвязанный конъюгат меченого тестостерона (эстрадиола) вымывают из ячеек. После этого в ячейки добавляют ТМБ-реагенг. Развитие окраски прекращают добавлением стоп-раствора (кислоты хлористоводородной) и снимают показания (Кондрахин И.П.^Архипов A.B., 2004).

23. Исследования макропрепаратов различных опухолей семенников у кобелей. Биометрия опухолевых узлов. В ходе исследования визуальному осмотру подверглись 174 эксцизированных семенника собак. Из общего количества было выявлено 65 (37,3%) семенников с различной патологией. Изменение размера органа было отмечено в 39 тестикулах с признаками патологии (60% от общего числа семенников с патологией), из которых 26 (66,7% от общего числа семенников с измененными размерами) были увеличены, а 13 (33,3%) уменьшены в размерах. Измерение проводилось с помощью линейки и штангенциркуля. В большинстве случаев при онкологических заболеваниях отмечалось увеличение семенника. Оценивалась их подвижность, консистенция, спаянность с окружающими тканями и вторичные изменения на коже. Как правило, опухоли, связанные с кожей и подлежащими тканями, мягкие наощупь, с участками изъязвления в кожных покровах являлись злокачественными. Уплотнение органа может происходить по причине выраженных склеропластических изменений при хронической форме воспалительной реакции или при онкологической патологии с преобладанием стромальных элементов в опухоли. При наличии в паховой зоне опухолевого образования наблюдалось развитие распространенного отека мягких тканей.

При пальпаторном исследовании пациентов выявлялось изменение консистенции семенников. Флюктуация отмечалась в случаях образования различной величины кист в опухолях семенников или при скоплении крови (гематоцеле), патологической жидкости (гидроцеле) в полости мошонки. Оценка формы проводилась по средствам осмотра эксцезированного семенника. Изменение формы органа в виде бугристости было отмечено на 17 (26,1%) семенниках.

Изменение цвета поверхности органа было выявлено в 35 (53,8%) случаях. Также было обнаружено изменение консистенции тестикула (размягчение, уплотнение, геморрагии и пр.) в 39 (60%) случаях. Изменение цвета и консистенции, как правило, свидетельствует о развитии вторичных явлений в ткани опухоли (некроз, кровоизлияния, отек, ослизнение, петрификация и др.). Данные изменения указывают на вовлечении в опухолевый процесс сосудистого русла при прогрессирующем росте новообразования, что характерно для злокачественных образований, обладающих инфильтрирующим типом роста

При обследовании пациентов с подозрением на онкологическую патологию семенников уделялось повышенное внимание симптомам, связанным с эндокринной активностью ряда тестикулярных неоплазий (симметричные билатеральные алопеции, гинекомастия, отвисание полового члена). Таким образом, можно заподозрить гистологическую принадлежность опухоли семенника и разработать методы лечения.

2.4. Патогистологический и люмниесцентно-мнкроскопическин методы исследования различных опухолей и опухолеподобных состояний у собак. С целью выявления основных форм патологии семенников у кобелей весь материал был разделён на группы (Табл. ]).

Таблица 1. - Группы патологии семенников у обследованных собак.

Группа Форма патологии Количество семенников в группе (1ИТ.) % от общего числа семенников С») Число пациентов с доброкачественными опухолями в группе Число пациентов со »»качественными опухолям« в группе

1 ! 2 3 14; 5 6

\ Без ; патология 1 | 105 ; бо,з 1 -

2 | Семимома 24 1 13,8 7 (43,7%) | 9 (56,3%)

3 | Сертолиома 5 | 5,7 1(20%) | 4(80%)

4 : Лейдигома ! 4 I ! 2,9 2 (66,7%) I 1 (33,3%)

5 | Дегенерация | 9 5,2 |

6 Гипоплазия \ 11 6,3 -

7 Хронический | орхит | 5,2 . -

Примечание: в таблице не учитываются семенники с гидроцеле, гематоцеле и атрофиеи сперматогениого эпителия неясной этиологии.

Группа 1 - Семенники без гистопатологнческнх изменений

Данные полученные при обследовании группы животных оцениваются в качестве физиологической нормы. При исследовании семенных канальцев в данной группе животных чётко прослеживалась структура слоев сперматогениого эпителия. Хорошо просматриваются базальная мембрана и основные тины клеток, принимающих участие в процессе сперматогенеза. Наружная оболочка представлена зрелой волокнистой тканью, в которой проходят толстостенные щелевидные сосуды неравномерного кровенаполнения. Семенные канальцы расположены упорядоченно, имеют округлую форму с сохранением всех слоев сперматогениого эпителия. При детальном изучении микропрепарата прослеживаются все стадии сперматогенеза вплоть до зрелых сперматозоидов, которые расположены в просвете канальцев в центральной их части. Строма семенника рыхлая, нежноволокнистая, в ней проходят тонкостенные кровеносные сосуды и немногочисленные лимфатические сосуды.

При люминесцентной микроскопии гистологических срезов здоровой тестикулярной ткани отмечается интенсивная люминесценция молекулярных компонентов. Зелёное свечение в большей степени излучает окрашенная флуорохромом ДНК, а оранжево-красное или красное свечение РНК. Свечение акридина оранжевого в ткани сперматогенного эпителия здорового семенника распределяется относительно равномерно.

Цитологическая картина при игольной биопсии здорового семенника у кобеля представлена основными клетками сперматогенеза. Особое внимание следует уделять наличию зрелых сперматозоидов. Следует учитывать возможность появления в цитологическом препарате эритроцитов и других клеток крови занесённые при проколе капилляров кожи мошонки иглой.

Группа 2 - Семенники с семнномой

Образование характеризуется ограниченным ростом в виде узла опухоли или диффузным ростом с полным поражением органа. Возможно билатеральное поражение или поражение одного из семенников. Заподозрить наличие семиномы можно по внешнему виду пораженного органа. Определяется узел или узлы, расположенные в ткани семенника под наружной оболочкой или в толще органа, отграниченные от окружающих тканей, мягкие, беловато - розоватого цвета. В зоне роста ткани опухоли, непосредственно за пределами ее внешней границы, нормальная структура органа изменена (уплотнена и деформирована).

Отмечается отёк сгромы (от умеренного до ярко выраженного) с участками кровоизлияний. В относительно сохранной ткани близ места локализации опухоли сперматогенез в канальцах значительно ослаблен или полностью отсутствует. В зоне роста опухолевой ткани обнаруживаются атипичные, полиморфные клетки с округлыми, часто крупными ядрами с различными фигурами митоза, в том числе и атипичного. В некоторых местах в подобных клетках просматриваются множественные ядрышки. В других полях зрения, местами в капсуле, местами за её пределами, располагаются поля и группы мономорфных клеток со светлой цитоплазмой, чёткими границами клеточной стенки. Цитоплазма их местами вакуолизирована или оптически прозрачна. Клетки располагаются диффузно или в виде небольших (чаще тубулярного строения) комплексов, ограниченных волокнистой тканью, в которых определяется большое количество зрелых лимфоцитов.

В процессе прогрессирующего роста ткани опухоли отмечалось нарушение стромально - паренхиматозного соотношения. Выявляются лимфоцитарные скопления в строме опухоли.

В ходе исследования было отмечено, что при высокозлокачественных вариантах опухоли лимфоцитарные инфильтраты в строме выражены минимально. Наблюдается появление зрелых лимфоцитов вокруг кровеносных сосудов, что является «сторожевой реакцией» при распространении гематогенных метастазов. Выявляется апоптоз. При окраске гематоксилином и эозином он определяется в единичных клетках или небольших группах клеток. Апоптотические клетки выглядят как округлые или овальные скопления интенсивно эозинофильной цитоплазмы с плотными фрагментами ядерного хроматина.

Менее дифференцированные варианты семиномы характеризуются быстрым ростом и обширными метастазами.

Анапластический (высокозлокачественный) вариант семиномы

микроскопически характеризуется повышенной митотической активностью (3 и более митозов в поле зрения) и ядерным полиморфизмом. Анапластический вариант семиномы отличается более агрессивным течением.

В случае интраканаликулярной семиномы рост атипичных клеток ограничен базальной мембраной канальца. Отмечается отсутствие нормальной структуры сперматогенного эпителия, наличие атипичных (полиморфных, многоядерных с большим количеством митозов) клеток. В процессе пролиферации атипичные опухолевые клетки полностью заполняли просвет канальцев, вследствие чего последние увеличивались в размерах и кистозно изменялись.

Исследования показали, что в результате роста семиномы изменению подвергаются также рядом расположенные участки органа. В результате давления растущей опухоли на здоровую ткань в последней развиваются патологии кровообращения, отек, с дальнейшим нарушением структуры спераматогенного эпителия и утратой его функциональной активности.

Сперматогенный эпителий подвергается дистрофическим изменениям. Наиболее длительно остаются сохранными клетки - сустентоциты. В ряде случаев также отмечено прорастание ткани опухоли в капсулу. При этом наблюдается инвазия элементов опухоли в кожу мошонки, опухоль становится неподвижной, в кожных покровах прослеживаются участки изъязвления и воспаления.

При люминесцентной микроскопии гистологических срезов с семиномой отмечается изменение соотношения флюоресцирующих цветов в пораженной ткани. Основными являются оранжево-красный и красный цвета с незначительными включениями зелёного цвета. После проведения контроля с помощью 3 часовой экспозиции в 1 М растворе соляной кислоты визуализируется полное отсутствие свечения свойственное для ДНК (зеленое) и РНК (оранжево-красное, красное) в семенных канальцах, что подтверждает способность акридинового оранжевого специфически окрашивать тестикулярную ткань

Группа 3 - Семенники с сертолиомой

Опухоль из клеток Сертоли (сертолиома) относится к производным гонадной стромы полового тяжа. Выявлена следующая патоморфологическая картина: опухоль в капсуле, имеет тубулярное строение (мелкие трубочки, разделенные тонкими волокнистыми соединительнотканными прослойками). В ней визуализируются железистые структуры, имеющие два типа клеточного строения (клетки с оптически пустой цитоплазмой и мелкие клетки с гиперхромными ядрами и наличием митозов).

Опухолевые клетки расположены на базальной мембране канальца. Опухоль образована преимущественно канальцевыми структурами. Клетки крупные, с четко различимой структурой ядер и выраженным ободком цитоплазмы. Ядра крупные, отличаются умеренным полиморфизмом, в них различимы ядрышка В структуре | опухолевой ткани клетки расположены беспорядочно, местами свободно лежат в ' просветах канальцев в виде небольших групп.

На уровне роста опухолевой ткани проявляются признаки инвазивного роста с нарушением структуры базальной мембраны. Имеются признаки клеточного

атипизма в виде ядерного и клеточного полиморфизма. Сперматогенез отсутствует во всех полях зрения.

Канальцы увеличиваются в размерах, клеточный состав их становится мономорфным с преобладанием атипичных клеток. Строма опухоли представлена волокнистыми соединительнотканными прослойками, в которых расположены сдавленные щелевидные, часто запустевшие, сосуды.

При микроскопии материала взятого у девятилетнего французского бульдога были выявлены диффузные внутриканальцевые пролифераты. Просветы семенных канальцев заполнены светло - розовым содержимым (окраска эозином и гематоксилином). Сперматогенный эпителий полностью отсутствует. В некоторых канальцах можно различить узловатую структуру содержимого, что свидетельствует о нескольких очагах разрастания ингратубулярной массы. Строма органа представлена истонченной структурой со сдавленными кровеносными сосудами и обширными зонами внутритканевого отека. При изучении препаратов при малом увеличении микроскопа ткань семенника имела вид пены (вакуольная дистрофия). При большом увеличении можно было выявить единичные клетки Лейдига в состоянии десквамации или дистрофии. Окончательный гистопатологический диагноз поставлен после обнаружения в некоторых из канальцев атипичных клеток Сертоли.

В цитологическом препарате полученном с помощью игольной биопсии выявляются атипичные клетки Сертоли.

При люминесцентной микроскопии гистологических срезов с сертолиомами также отмечается специфическая окраска патологической ткани со скудным содержанием РНК особенно в центральных частях опухолевых узлов. Флуорохромом акридиновый оранжевый так же позволяет выявлять вакуолизацию семенных канальцев.

Группа 4 - Семенники с лейдигомой

В строме прослеживается умеренный отёк. Структура сперматогенного эпителия почти во всех полях зрения стерта за счбт дистрофии и десквамации клеток. Сперматогенез значительно ослаблен или полностью нарушен. Визуализируются узлы с четкими или стертыми границами из волокнистой ткани, построенные из диффузно растущих клеток овальной или полигональной формы со светлой, неравномерно окрашенной, местами вакуолизированной цитоплазмой. Обнаруживаются интенсивно окрашенные (фиолетовые) мелкие гранулы. В клетках местами различимы светлые, оптически пустые, ядра или ядра с наличием ядрышек Клеточные элементы расположены тесно, элементы стромы прослеживаются минимально.

Клетки разных размеров, полиморфны, имеют крупные, неравномерно окрашенные ядра, что является признаком клеточного атипизма и указывает на злокачественный характер неоплазии.

Для лейдигом характерен четко видимый ядерный атипизм - разные размеры ядер, неравномерное окрашивание, зернистое расположение хроматина, наличие нескольких ядрышек и особенно - атипичные митозы.

Изменяется соотношение между ядром и цитоплазмой в сторону ядра Цитоплазма клеток опухоли выражена неравномерно, часто слабо эозинофильна. {Снеточная стенка довольно четко выражена.

В структуре элементов опухоли можно проследить клетки, лишенные ядер или клетки с остатками ядерного вещества в виде мелкой пылевидной зернистости. Встречаются элементы апоптоза.

Группа 5 - Семенники с дегенеративными процессами

Дегенерация семенников представляет собой структурное разрушение тканей семенника (семенных канальцев, интерстадиальных клеток, сперматогоний и прочих элементов) после воспалительного или невоспалительного процесса в семенниках.

У животных из данной группы в паренхиматозной зоне семенников обнаруживаются очаговые процессы дискомплексации эпителиальных клеток, дистрофические изменения в них. Стенки сосудов утолщены, просвет их неправильной формы. В интер стации обнаруживаются периваскулярные и внутритканевые отеки. Отмечается ослабление сперматогенеза. Клетки Лейдига претерпевают изменения по типу кариопикноза и кариолизиса. Границы между клетками сперматогенного эпителия теряют свою четкость. В сперматогенном эпителии канальцев нередко визуализируются полости округлой формы.

Отличительной чертой дегенеративного процесса в семенниках является отсутствие клеточного атипизма и митотической активности ядер.

Группа б - Семенники с гипоплазией

Гипоплазия семенника - это аномалия, при которой одно или оба органа недоразвиты и уменьшены в размерах. Двухстороннее недоразвитие семенников ведет к гормональной недостаточности. Исходя из полученных нами данных, следует считать крипторхизм основным предрасполагающим фактором гипоплазии семенника.

Выявляется недоразвитие сперматогенного эпителия, местное отсутствие или истончение базальной мембраны семенных канальцев. Нарушается стратификация слоев сперматогенного эпителия с утратой наиболее функционально активных элементов (клетки поверхностных слоев канальцев слущиваются в просвет). Интерстициальная ткань находится в состоянии дистрофия. Стенки кровеносных сосудов истончены.

В тяжелых случаях (при абдоминальном крипторхизме) канальцы заполнены аморфной массой эозинофильного оттенка окраски. Сохранены отдельные клетки с базальным расположением.

При длительно существующей эктопии семенников сперматогенный эпителий полностью утрачен, базальная мембрана канальцев истончена. Канальцы подвергаются кистозной трансформации, строма выражена неравномерно, часто расширена за счет склероза, в том числе и на уровне сосудистых стенок с формированием редукции кровеносного русла.

Группа 7 - Семенники с хроническим орхитом

В процессе развития острой воспалительной реакции сменяются тканевые реакции альтерации, экссудации и пролиферации нередко с исходом в склероз. В фазе альтерации преобладают сосудистые нарушения с развитием тяжелого распространенного отека стромы. В фазе экссудации - отеки, дилатация кровеносных сосудов и клеточная инфильтрация, представленная нейтрофилами, макрофагами и лимфоцитами. В исходе острого воспаления нередко формируется волокнистая ткань по типу распространенного или очагового склероза. Кровеносные сосуды расширены,

полнокровные, иногда с облитерацией просветов. Базальная мембрана семенных канальцев утолщена, их диаметр уменьшен. Сперматогенез ослаблен.

В случаях тяжелого хронического орхита ткань семенника полностью склерозируется, среди плотной волокнистой ткани прослеживаются одиночные, резко деформированные, сдавленные канальцы.

В придатке семенника также формируется волокнистая ткань, эпителий протока страдает вторично вследствие тяжелого распространенного склероза, проток местами расширен с признаками кистозной трансформации.

Таблица 2. - Основные диагностические находки при исследовании опухолей семенников гистопатологическим, цитологическим и люминесцентным методами._

Вид опухоли

Гистопатологическое исследование

Цитологическое исследование (игольная биопсия)

Люминесцентная микроскопия

1

Семинома

Стратификации слоев сперматогенного эпителия отсутствует или значительно нарушена. Полное

отсутствие или истончение базальной мембраны

семенных канальцев.

Редукция кровеносного русла в строме органа и прогрессирующий склероз. Сперматогенез существенно снижен или полностью отсутствует.

Единичные или

множественные очаги

атипичных, полиморфных клеток с округлыми, часто крупными ядрами и мелкими ядрышками с различными фигурами митоза. Клетки располагаются или

диффузно, или в виде небольших (чаще

тубулярного строения) комплексов, ограниченных волокнистой тканью, в которых определяется

большое количество зрелых лимфоцитов.

В случае

интраканаликулярной семиномы рост атипичных

Обнаруживаются атипичные, полиморфные клетки с округлыми, часто крупными ядрами с различными фигурами митоза, в том числе и атипичного. Большое количество зрелых

лимфоцитов

Изменение соотношения флюоресцирующих цветов в пораженной ткани. Основными являются оранжево-красный и красный цвета с

незначительными включениями зелёного цвета. После проведения контроля с помощью 3 часовой экспозиции в 1 М растворе соляной кислоты

визуализируется полное отсутствие свечения свойственное для ДНК (зеленое) и РНК (оранжево-красное, красное) в семенных канальцах, что

подтверждает способность акридинового оранжевого специфически окрашивать тестикулярную ткань.

Продолжение таблицы 2

клеток ограничен базальной мембраной канальца. Анапластический (высокозлокачественный) вариант семиномы микроскопически характеризуется повышенной митотической активностью (3 и более митозов в поле зрения) и ядерным полиморфизмом.

Сертолиома Наличие железистых («вспененных») структур, состоящих из клеток с оптически пустой цитоплазмой и мелких клеток с гиперхромными ядрами и наличием митозов. Визуализируются железистые структуры, имеющие два типа клеточного строения (клетки с оптически пустой цитоплазмой и мелкие клетки с гиперхромными ядрами и наличием митозов). Опухолевые клетки расположены на базальной мембране канальца. Опухоль образована преимущественно канальцевыми структурами. Выявляются атипичные клетки Сертоли. Отмечается специфическая окраска патологической ткани со скудным содержанием РНК особенно в центральных частях опухолевых узлов. Флюорохром акридиновый оранжевый так же позволяет выявлять вакуолизацию семенных канальцев.

Лейдигома Клеточные элементы расположены тесно, элементы стромы прослеживаются минимально. Ядерный атипизм (разные размеры ядер, неравномерное окрашивание, зернистое расположение хроматина, наличие нескольких ядрышек и особенно -атипичные митозы). Встречаются элементы апоптоза. Обнаруживаются клетки, лишенные ядер или клетки с остатками ядерного вещества в виде мелкой пылевидной зернистости. Ткани со скудным содержанием РНК особенно в центральных частях опухолевых узлов.

2.5. Исследование концентрации эстрадиола и тестостерона в крови у животных с различными онкологическими заболеваниями семенников. Для

более удобного учета и последующего анализа при исследовании концентрации эстрадиола и тестостерона в сыворотке венозной крови все исследуемые собаки были

15

разделены на группы. Значением группировочного признака являлась патология, выявленная у собаки при гистопатологическом исследовании семенников. В данной группировке учувствовали животные с одним видом патологии. Собаки с двумя и более патологиями семенников, выявленными при микроскопии гистологического материала, в данном исследовании не учитывались.

Группа 1 - Животные без признаков патологий семенников (контрольная группа) - 46 собак;

Группа 2 - Животные с семиномой -13 собак;

Группа 3 - Животные с сертолиомой - 4 собаки;

Группа 4 - Животные с лейдигомой - 3 собаки;

Группа 5 - Животные с дегенеративными изменениями в семенниках - 3 собаки;

Группа 6 - Животные с гипоплазией семенников - 8 собак;

Груша 7 - Животные с хроническим орхитом - 5 собак.

Для того чтобы понять как изменяется концентрация эсградиола и тестостерона при различных заболеваниях семенников у собак мы определили минимальное и максимальное значение, а также вычислили среднее значение концентрации (СЗК) эсградиола и тестостерона в сыворотке венозной крови в каждой группе по формуле:

Сумма концентрации гормона в крови у животных

СЗК= --

Количество животных в группе

СЗК - среднее значение концентрации гормона в сыворотке венозной крови в группе. Сумму концентрации гормона в крови в группе вычисляли суммированием концентрации гормона (эсградиола или тестостерона) у всех представителей в конкретно взятой группе.

Средняя концентрация эсградиола у животных без признаков патологий семенников (группа 1- контрольная) составила 18,4 ± 0,83 (р < 0.05) пг/мл, а тестостерона 1,87 ± 0,11 (р < 0.05) нг/мл. Данные значения использовали для сравнительной характеристики при описании возрастания и снижения концентрации данных половых гормонов у пациентов с различной патологией семенников.

Снижение средней концентрации эсградиола в венозной крови, по сравнению со средней концентрацией в контрольной группе (группа 1) - 18,4 ± 0,83) пг/мл (р < 0.05), было выявлено у животных с семиномой (группа 2) - 13,4 ± 1,96 пг/мл (р < 0.05), с лейдигомой (группа 4) - 12,63 ± 1,61 пг/мл (р < 0.05), с дегенеративными изменениями в семенниках (группа 5) - 14,5 ± 2,34 пг/мл (р < 0.05), с гипоплазией семенников (группа 6) -13,0 ± 1,92 пг/мл (р < 0.05), с хроническим орхитом (группа 7) -13.78 ± 1,89 пг/мл (р < 0.05).

Увеличение средней концентрации эсградиола в венозной крови было выявлено в группе 3 (серголиома) - 27,3 ± 4,67 пг/мл (р > 0.05) (Рис. 1).

45 40

35 %

25 20 15 10 5 0

Группа 3

ЖА

\ЬА 1 рУппа 2 Группа 4 14,5 группа в 13,78

1 13,4 12,63 13

| 1

I

| 1 1

Группы животных

■ Группа 1 Собаки без признаков патологии семенников (контрольная) Ш Группа 2 Собаки с семиномой

Ш Группа 3 Собаки с сертолиомой

■ Группа 4 Собаки с лейдигомой

■ Группа 5 Собаки с дегенеративными изменениями в семенниках О Группа 6 Собаки с гипоплазией семенников

И Группа 7 Собаки с хроническим орхигом

Примечание: пг/мл - пикограмм в одном миллилитре

Рис. 1. - Гистограмма концентрации эстрадиола в венозной крови у собак разных групп.

Уровень средней концентрации тестостерона в контрольной группе (группа 1) составил 1,87 ± 0,11 нг/мл. По сравнению с этим показателем снижение средней концентрации данного гормона было выявлено в группе 3 (сертолиома) - 0,63 ± 0,25 нг/мл (р < 0.05), в группе 4 (лейдигома) - 1,67 ± 0,34 нг/мл (р < 0.05), в группе 5 (дегенеративные изменения в семенниках) - 1,07 ± 0,6 нг/мл (р < 0.05), в группе 6 (гипоплазия семенников) - 1,16 ± 0,35 нг/мл (р < 0.05), в группе 7 (хронический орхит) - 1,53 ± 0,1 нг/мл (р < 0.05).

Увеличение средней концентрации тестостерона в венозной крови было выявлено у собак в группе 2 (семинома) - 2,51 ± 0,73 нг/мл (р < 0.05) (Рис. 2).

2.6. Исследования по выявлению породной и возрастной предрасположенности собак к онкологическим заболеваниям.

В исследовании приняло участие 87 собак 38 различных пород и возрастных групп. Всех животных в зависимости от массы тела мы разделили на 4 группы (Табл. 3).

Рассматривая крипторхизм как главный фактор, провоцирующий опухоли семенников мы определили количество здоровых собак и крипторхов среди представителей различных пород и породных груш (в зависимости от массы тела). Из 87 обследованных собак у 21 кобеля был выявлен крипторхизм, что составляет 24,1% от общего числа кобелей участвовавших в исследовании. Наибольшее количество крипторхов было выявлено среди собак мелких пород - 14 животных (35,9 % от общего числа собак мелких пород), из ни 6 собак с ингуинальным (15,4 % от общего

числа собак мелких пород) и 8 с абдоминальным крипторхизмом (20,5 % от общего числа собак мелких пород).

з 2,8 2,6 2,4 2,2 2 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 ОД О

Группа 2

2.51

руппа 1

1,83 Группа л Груши 7

1 ля 1.53

Группа 5 Группа 6

1,07 1,16

Группа 3

0.63

1

1

Группы животных

■ Группа 1 Собаки без признаков патологии семенников (контрольная) 13 Группа 2 Собаки с семиномой а Груша 3 Собаки с сертолиомой ■Группа 4 Собаки с лейдигомой

■Группа 5 Собаки с дегенеративными изменениями в семенниках □ Группа 6 Собаки с гипоплазией семенников 9 Группа 7 Собаки с хроническим орхитом

Примечание, нг/мл - нанограмм в одном миллилитре

Рис. 2 - Гистограмма концентрации тестостерона в венозной крови у собак с различной патологией семенников.

Таблица 3. - Группы собак в зависимости от массы тела животного.

Группа собак Количество собак в группе % от общего числа собак

1 2 3

Мелкие собаки (масса тела менее 10 кг) 39 44,8

Средние собаки (масса тела 10-25 кг) 24 27,6

Крупные собаки (масса тела 25 - 45 кг) 20 23

Очень крупные (гигантские) собаки (масса тела 45 - 90 кг) 4 4,6

В группе собак средних пород 4 кобеля страдавших крипторхизмом (16,7 % от общего числа собак средних пород), из них обнаружен один случай ингуинального (5,3% от общего числа собак средних пород) и 3 случая абдоминального (10,5 % от общего числа собак средних пород) крипторхизма.

В группе собак крупных пород было выявлено три кобеля страдавших крипторхизмом (15 % от общего числа собак крупных пород), го них один случай ингуинального (5 % от общего числа собак крупных пород) и два случая абдоминального крипторхизма (10 % от общего числа собак крупных пород) соответственно.

У очень крупных (гигантских) пород собак крипторхов выявлено не было.

Среди пациентов с выявленной эктопией одного или обоих семенников гистологическим методом были выявлены следующие патологии: опухоли семенников - 8 случаев; тестикулярная гипоплазия - 7 случаев; дегенерация семенника - 2 случая; атрофия сперматогенного эпителия (невыясненной этиологии) 1 случай.

Сопоставив количество случаев тестикулярной неоплазии с размерами пациентов и наличием у них крипторхизма, сложилось представление о взаимосвязи породы собаки с опухолями семенников (Таблица 3).

Таблица 3. - Соотношение случаев тестикулярной неоплазии с размерами собак и наличием у них крипторхизма.

Породная группа собак (в зависимости от массы тела) Общее количество собак в группе Количество кобелей -крипторхов в группе Количество собак с неоплазией семенников в группе

Всего собак с неоплазией в группе Из них собаки с крипторхизмом

1 2 3 5 6

Мелкие собаки (масса тела менее 10 кг) 39 14 9 3

Средние собаки (масса тела 10 -25 кг) 24 4 5 3

Крупные собаки (масса тела 25 -45 кг) 20 3 5 2

Очень крупные (гигантские) собаки (масса тела 45 -90 кг) 4 0 1 0

Данные в таблице указывают, что из девяти представителей мелких пород страдающих тестикулярной неоплазией трое являются крииторхами. Среди собак средних пород 5 онкологических больных из них 3 крипторха. В группе крупных собак 5 пациентов с опухолями семенников и 2 из них с признаками крипторхизма. Собак очень крупных пород с крипторхизмом не выявлено и один случай тестикулярной неоплазии зарегистрирован в данной группе

Различные опухоли семенников были выявлены у 23 представителей следующих пород: американский стаффордщирский терьер, немецкий боксёр, чау-чау, французский бульдог, русский той - терьер, ротвейлер, бульмастиф, пекинес, даяматин, американский кокер спаниель, мопс.

В диаграмме (Рисунок 3) представлены данные о количестве собак с различными опухолями семенников в зависимости от весовых групп:

О Мелкие собаки (масса тела менее 10 кг) - 45% Ш Средние собаки (масса тела 10 - 25 кг) - 25%

□ Крупные собаки (масса тела 25 - 45 кг) - 25%

□ Очень крупные (гигантские) собаки (масса тела 45 - 90 кг) - 5%

Примечание: кг - килограмм.

Рис. 3. - Встречаемость онкологических заболеваний семенников у собак различных весовых групп

Следующим этапом исследования было определение зависимости между породой собаки и тестикулярной гипоплазией. Из 87 обследованных собак 9 имели гипоплазию одного или обоих семенников. Почти все пациенты с тестикулярной гипоплазией, относятся к группе собак мелких пород (8 собак) и одна собака к представителям крупных пород (немецкая овчарка).

Тестикулярная гипоплазия в ходе исследования зарегистрирована у следующих пород собак брюссельский грифон, йоркширский терьер, малый пудель, немецкая овчарка, пекинес, пти брабансон, стандартная такса, чихуахуа.

При исследовании частоты встречаемости различных онкологических I заболеваний семенников у кобелей мы установили возрастную зависимость для некоторых патологий (Рис. 4).

У молодых животных в первые два года жизни чаще других патологий встречается гипоплазия семенников (9 пациентов). Пик заболеваемости различными онкологическими заболеваниями семенников у кобелей приходиться на вторую половину жизни (6-11 лет). Так, семиномы были диагностированы у кобелей с 5 -летнего возраста. Наибольшее число пациентов с диагнозом семинома было выявлено в возрасте семи лет (6 случаев). Сертолиома была выявлена у 5 кобелей, младшему из которых 4 года. Лейдигомы диагностирована у 3-х собак в возрасте от 4 до 10 лет. Дегенерация сперматогенного эпителия начала прослеживаться лишь у возрастных животных (5-9 лет). Хронический орхит встречался в единичных случаях как у молодых (3 года), так и у более возрастных собак (5, 9, 10 лет).

1- Семинома 2- Сертолиома 3- Лейдигома 4- Гипоплазия 5- Дегенерация 6- Хронический орхит 7- Прочие патологии

1

4

4

7 б 1 1 1 1

2 3 6 2 12 5 2 5 7. 5 23 5 6 3 6 7

1 III |И ПИ III III 1

123456789 10 11 Возраст животного (лет)

Рис. 4. - Гистограмма частоты встречаемости заболеваний семенников у собак разного возраста.

Рассматривая гипоплазию семенников в качестве одной из причин способной спровоцировать опухолевой рост (предрак) в семеннике мы составили график частоты встречаемости гипоплазии и опухолей семенников в зависимости от возраста исследованных пациентов (Рис. 5).

Все пациенты с гипоплазией тестикула, участвовавшие в нашем исследовании, имели возраст до трёх лет. Важно отметить, что с трёхлетнего возраста нами не было выявлено ни одного случая гипоплазии.

Выведение классификации опухолей семенников у собак по системе ШМ

Опираясь на классификацию, разработанную Международным противораковым союзом (ШСС), и на данные, полученные в процессе нашего исследования, мы разработали систему стадирования онкологического заболевания семенников у кобелей.

Т - первичная опухоль.

ТО - первичная опухоль не определяется.

Т1 - непалышруемая опухоль, но выявляется ультразвуковым методом исследования. Клинических проявлений нет.

рТ1 - опухоль ограничена пределами тестикула и придатка без поражения кровеносных и лимфатических сосудов. Возможно поражение белочной оболочки, влагалищная оболочка при этом интактна.

рТ2 - опухоль ограничена пределами тестикула и придатка с поражением кровеносных и лимфатических сосудов. Поражает белочную оболочку и распространяется на влагалищную оболочку семенника.

рТЗ - опухоль поражает семенной канатик с поражением или без такового кровеносных и лимфатических сосудов.

Т4 - опухоль поражает прилегающие органы и ткани.

N - регионарные лимфатические узлы.

N0 - нет признаков поражения регионарных лимфатических узлов.

N1 - обнаружены метастазы в одном или нескольких регионарных лимфатических узлах размерами два и менее сантиметра в наибольшем измерении.

N2 - обнаружены метастазы в одном или нескольких регионарных лимфатических узлах размерами 2-5 см в наибольшем измерении.

N3 - обнаружены метастазы в регионарных лимфатических узлах размерами более 5 см в наибольшем измерении.

М - отдаленные метастазы.

МО - нет признаков отдаленных метастазов.

М1 - имеются отдаленные метастазы.

М1а - метастазы в отдаленные лимфатические узлы и легкие.

Mlb - метастазы в другие отдаленные органы и ткани

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. В ходе проведенного комплексного обследования семенников у 87 кобелей визуальными, биометрическими, цитологическими, патогистологаческими, люминисцентно-микроскопическими, биохимическими методами было выявлено, что основной группой заболеваний семенников у кобелей являются тестикулярные опухоли (60,5 % от общего числа тестикулярных болезней) среди которых преобладают герминогенные опухоли - семиномы (65,2% от общего числа онкологических заболеваний семенников у собак). Среди опухолей стромы полового тяжа диагностированы сертолиомы (21,7% случаев от общего числа онкологических заболеваний семенников у собак) и лейдигома (13,04%). Малигнизация выявлена в 56,3% случаев семином, 80% случаев сертолиом и 33,3% случаев лейдигом. Пик онкологических заболеваний семенников у собак приходится на возрастной период от 5 до 11 лет.

2. Крипторхизм зарегистрирован у 24,1% обследованных кобелей. Данная патология чаще встречается у собак мелких пород (массой тела до 10 кг), чем у представителей средних, крупных и гигантских пород. Из 21 кобеля с крипторхизмом у 8(38%) диагностированы опухоли семенников, у 7 (33,3%) тестикулярная гипоплазия. Крипторхизм у собак следует считать одним из основных факторов риска возникновения тестикулярной гипоплазии и как следствие опухолей семенников.

3. Гистоморфологическая картина злокачественной семиномы представлена очагами атипичных, полиморфных клеток с округлыми, часто крупными ядрами и мелкими ядрышками с различными фигурами митоза Клетки располагаются диффузно или в виде небольших (чаще тубулярного строения) комплексов, ограниченных волокнистой тканью, в которых определяется большое количество зрелых лимфоцитов. В цитологическом препарате семиномы полученном с помощью тонкоигольной биопсии также обнаруживаются атипичные, полиморфные клетки с округлыми, часто крупными ядрами и фигурами митоза Отличительной особенностью является визуализируются зрелых лимфоцитов. При люминесцентной микроскопии гистологических препаратов семиномы окрашенных акридиновым оранжевым наблюдается Изменение соотношения флюоресцирующих цветов в опухолевой ткани. Основными являются оранжево-красный и красный цвета с незначительными включениями зелёного цвета После проведения контроля с помощью 3 часовой экспозиции в 1 М растворе соляной кислоты визуализируется полное отсутствие свечения свойственное для ДНК (зелёное) и РНК (оранжево-красное, красное) в семенных канальцах, что подтверждает способность акридинового оранжевого специфически окрашивать тестикулярную ткань.

Характерным гистологическим признаком сертолиомы является железистые («вспененные») структуры, состоящие из клеток с оптически пустой цитоплазмой и мелких клеток с гиперхромными ядрами и наличием митозов. Злокачественный вариант сертолиомы представлен диффузно растущими клетками со светлой вакуолизированной цитоплазмой и мелкими ядрышками. Цитологическая картина представлена атипичными клетками Сертоли. При люминесцентной микроскопии отмечается специфическая окраска патологической ткани со скудным содержанием РНК (оранжево - красная) особенно в центральных частях опухолевых узлов. Флюорохром акридиновый оранжевый так же позволяет выявлять вакуолизацию семенных канальцев.

Ткань лейдигомы гистологически представлена тесно расположенными клеточными элементами стромы семенника. Выявляется ядерный атипизм (разные размеры ядер, неравномерное окрашивание, зернистое расположение хроматина, наличие нескольких ядрышек и особенно - атипичные митозы). Цитологически обнаруживаются клетки, лишенные ядер или клетки с остатками ядерного вещества в виде мелкой пылевидной зернистости. При люминесцентном исследовании выявляются ткани со скудным содержанием РНК особенно в центральных частях опухолевых узлов.

4. Определение концентрации эстрадиола и тестостерона в венозной крови у собак можно рассматривать как дополнительный метод диагностики при подозрении на тестикулярную неоплазию у кобелей. В ходе исследования у пациентов с сертолиомой регистрировались значительное повышение концентрации эстрадиола (27,3 ± 4,67 пг/мл) по сравнению со средним значением концентрации в контрольной группе (18,4 ± 0,83 пг/мл) на фоне резко выраженной гипотестостеронемии (0,63 ± 025 нг/мл). Снижение концентрации тестостерона в крови так же было отмечено при тестикулярной гипоплазии (1,16 ±0,35 нг/мл).

РЕКОМЕНДАЦИИ И ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ

ТЕМЫ

Фактический материал диссертационной работы может быть использован:

- в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий в профильных высших учебных заведениях по онкологии и патологической анатомии животных.

- при написании соответствующих разделов учебных и справочных руководств и пособий по патологии животных.

- практикующими ветеринарными специалистами

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Седегов, C.B. Клинико-морфологическое проявление опухолей и опухолеподобных состояний семенников и яичников у собак/ C.B. Седегов, H.A. Татарникова//Вестник ветеринарии. - Ставрополь, 2012. - № 1 (60). - С. 26 - 29.

2. Седегов, C.B. Ультразвуковое исследование различных онкологических заболеваний семенников у кобелей/С.В. Седегов, H.A. Татарникова//Акгуальные вопросы ветеринарной биологии. - Санкт-Петербург, 2012. - №2 (14). - С.64 - 67.

3. Седегов C.B. Патогистологическое исследование различных неоплазий у кобелей/ C.B. Седегов, H.A. Татарникова// Ветеринария и кормление. - Москва, 2012.-№4 - С. 40 - 41.

4. Седегов C.B. Клинический случай эмбриональной карциномы и сертолиомы у собаки/ C.B. Седегов, H.A. Татарникова// Вестник ветеринарии. -Ставрополь, 2013. - №1 (64). - С. 38 - 40.

5. Седегов, C.B. Распространение неопластических заболеваний семенников у кобелей/ C.B. Седегов, H.A. Татарникова//Вестник ветеринарии. - Ставрополь, 2014. -№2(69).-С. 66-68.

6. Седегов C.B. Гистопатологическая диагностика основных опухолей семенников у собак/ C.B. Седегов, H.A. Татарникова. - Пермь. - Пермь.: ИПЦ Прокрость, 2014. -20с.

Подписано в печать 12.09.2014. Формат 60х841/16.Усл. печ. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ № 72

ИПЦ «ЗТрокростЪ»

Пермской государственной сельскохозяйственной академии имени академика Д.Н. Прянишникова, 614090, Россия, г. Пермь, ул. Петропавловская, 23 тел. (342)210-35-34