Клинико-лабораторные особенности острых кишечных инфекций, вызванных условно патогенными энтеробактериями у детей и подростков

Жеребцова, Надежда Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Клинико-лабораторные особенности острых кишечных инфекций, вызванных условно патогенными энтеробактериями у детей и подростков
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Клинико-лабораторные особенности острых кишечных инфекций, вызванных условно патогенными энтеробактериями у детей и подростков"

На правах рукописи

□03068083

Жеребцова Надежда Юрьевна

КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫМИ ЭНТЕРО-БАКТЕРИЯМИ У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ

03.00.07 - микробиология 14.00.10 - инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2006

003068083

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университете (г.Уфа).

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Мавзютов Айрат Радикович доктор медицинских наук, профессор Валишин Дамир Асхатович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Пашков Евгений Петрович доктор медицинских наук, профессор Филиппов Павел Геннадьевич

Ведущая организация: Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН

Защита состоится «_» _2007 года, в 14 часов на заседании

Диссертационного совета Д.208.040.08 в Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова по адресу:! 19992, Москва, ул. Трубецкая, д.8, стр.2

С диссертацией можно ознакомиться в центральной научной медицинской библиотеке Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова (117998, Москва, Нахимовский пр., д.49).

Автореферат разослан «_»_2006 года.

Ученый секретарь Диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Миронов Андрей Юрьевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Острые кишечные инфекции (ОКИ) в общей структуре детской инфекционной патологии остаются одной из основных проблем, занимая по частоте второе место после острых респираторных вирусных инфекций [Нисевич Н.И., 2001]. Заболеваемость ОКИ в Российской Федерации за последние годы составила 414,6 - 457,9 случаев на 100 тыс. населения и не имеет тенденции к снижению [Учайкин В.Ф., 2004]. При этом возрастает эпидемиологическая роль условно-патогенных микроорганизмов, в том числе энтеробактерий [Покровский В.И., Черкасский Б. Л.,1999]. В структуре ОКИ у детей и подростков на долю заболеваний, вызванных условно-патогенными Enterobacteriaceae (УПЭ), приходится от 3,1% до 38,2% [Грекова А.И. и др., 2003; Учайкин В.Ф., 1995; Боковой А.Г., 1991], а у детей первого года жизни - от 66,6% до 78,5% [Нисевич Н.И., 1995; Гизатуллина С.С., 1989].

Относительно этиологической роли УПЭ при ОКИ мнение исследователей разноречивы [Литинский Ю.И. и др., 1988; Феклисова Л.В. и др., 1988]. На современном этапе диагностика ОКИ, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, основывается на оценке клинических и лабораторных данных, включающих определение вида микроба и микробной обсемененности, однако, факт выделения УПЭ не всегда свидетельствует о его роли при данном заболевании [Воротынцева Н.В., Мазанкова Л.Н., 2001]. В этой связи активно разрабатываются и совершенствуются методы оценки этиологической значимости данных микроорганизмов, в частности, через обнаружение мобильных генетических элементов (в т.ч. «островов» патогенности), с которыми связывают эволюцию условно-патогенных видов и появление патогенных клонов [Мавзютов А.Р., 2002; Бондаренко В.М., 2001; Воробьев A.A. и др., 2000].

Сведения об особенностях ответной реакции организма на внедрение УПЭ не многочисленны [Maaser С. et al., 2004; Higgins L.M. et al., 1999]. Научный и практический интерес представляет характеристика патогенетических возможностей УПЭ и сопряженных с ними иммунных реакций организма. Изу-

чение продукции цитокинов и белков острой фазы позволяет установить особенности системной воспалительной реакции при острых кишечных инфекциях у детей и подростков, связанных с УПЭ.

Цель исследования

Оценить роль условно-патогенных микроорганизмов семейства Ег^его-Ьайепасеае в развитии острых кишечных инфекций у детей и подростков на основании исследования генетических маркеров «островов» патогенности и их взаимосвязи с антибиотикорезистентностью выделенных штаммов, с ответной реакцией иммунной системы и с особенностями клинических проявлений заболеваний.

Задачи исследования

1. Установить видовой состав условно-патогенных ЕгНегоЬа^епасеае, выделяемых при острых кишечных инфекциях у детей и подростков, фенотипи-ческие особенности и антибиотикорезистентность клинических штаммов.

2. Установить наличие и частоту встречаемости фрагментов генов «островов» патогенности у клинических штаммов условно-патогенных энтеробактерий, выделенных при острых кишечных инфекциях у детей и подростков. Определить характер взаимосвязи между наличием генов «островов» патогенности и антибиотикорезистентностью выделенных культур.

3. Выявить особенности течения острых кишечных инфекций, вызванных условно-патогенными энтеробактериями, в различных возрастных группах детей и у подростков.

4. Определить характер изменения уровней провоспалительных цитокинов: интерлейкина-1Р, интерлейкина-6, фактора некроза опухоли-а в сыворотке крови больных кишечными инфекциями, вызванными патогенными и условно-патогенными энтеробактериями.

5. Провести анализ мультифакторных связей между фенотипическими и гено-типическими характеристиками культур и клинико-иммунологическими особенностями вызываемых ими кишечных инфекций у детей и подростков.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Условно-патогенные Enterobacteriaceae, вызывающие острые кишечные инфекции у детей и подростков, преимущественно относятся к родам Klebsiella spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Morganella morganii, Hafhia alvei, Proteus spp. и наиболее актуальны в развитии кишечных инфекций у детей раннего возраста.

2. Клинические штаммы условно-патогенных энтеробактерий, выделенные от детей и подростков при ОКИ, являются потенциально патогенными, поскольку отличаются наличием генетических маркеров - «островов» патоген-ности. Определение «островов» патогенности у клинических штаммов условно-патогенных энтеробактерий свидетельствует об их этиологической значимости.

3. Острофазный ответ организма при внедрении УПЭ аналогичен таковому при инфекциях, вызываемых патогенными энтеробактериями.

Научная новизна исследования

Впервые показано, что клинические штаммы УПЭ, выделенные от детей и подростков с ОКИ, несут фрагменты ДНК «островов» патогенности, гомологичные известным генам кластеров патогенности Escherichia coli. У 32,6% бактерий обнаружено присутствие фрагментов генов, определяющих способность бактерий синтезировать фимбрии типа S (sfaG), а-гемолизин (hlyA и hlyB), ци-тотоксический некротизирующий фактор (cnfl) и термостабильный энтероток-син b (estB). Обнаружены достоверные связи между частотой обнаружения генетических маркеров «островов» патогенности в парах: cnfl - hlyB и hlyA -sfaG. Показана связь между наличием у возбудителя фрагментов генов «островов» патогенности и клиническими проявлениями ОКИ.

Впервые определена динамика и связи между уровнями сывороточных провоспалительных цитокинов при ОКИ, вызванных условно-патогенными энтеробактериями у детей и подростков. Показано, что внедрение данных возбудителей в организм так же, как при шигеллезах и сальмонеллезах, индуцирует системную воспалительную реакцию, которая сопровождается увеличением уровня провоспалительных цитокинов интерлейкина-lß (ИЛ-lß), интерлейки-

на-6 (ИЛ-6) и фактора некроза опухоли-a (ФНО-а). Степень изменения концентраций цитокинов коррелирует с тяжестью заболевания.

Впервые при ОКИ, вызванных условно-патогенными энтеробактериями у детей и подростков, показаны связи между биологическими и молекулярно-генетическими характеристиками возбудителей, уровнями сывороточных про-воспалительных цитокинов и клиническими проявлениями заболеваний.

Практическая значимость работы

Определены генетические маркеры (cnfl, ЫуВ, hlyA, sfaG, estB), информативные при оценке этиологической значимости и расшифровке вспышек ОКИ, вызванных условно-патогенными энтеробактериями у детей и подростков. Изучена диагностическая ценность определения цитокинового профиля сыворотки крови (ИЛ-1р, ИЛ-6 и ФНО-а) в остром периоде и периоде реконва-лесценции у детей и подростков с кишечными инфекциями. Определены кли-нико-иммунологические показатели, прогнозирующие течение ОКИ у детей и подростков.

Внедрение результатов работы в практику

Результаты исследований внедрены в работу МУ Инфекционная клиническая больница №4 г.Уфы, используются в учебном процессе на кафедрах инфекционных болезней с курсом дерматовенерологии ИПО, детских инфекционных болезней и лабораторной диагностики ИПО Башкирского государственного медицинского университета.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на Республиканской конференции молодых ученых РБ «Медицинская наука-2004» (Уфа, 2004); Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (Санкт-Петербург, 2004); XIII международной конференции «Ферменты микроорганизмов: структура, функции, применение» (Казань, 2005); Республиканской конференции молодых ученых РБ «Медицинская наука-2005» (Уфа, 2005); Всероссийской научно-практической конференции «Терапия инфекционных заболеваний у детей: нерешенные вопросы» (Санкт-Петербург, 2005); II

международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2005); Российской научно-практической конференции «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины» (Санкт-Петербург, 2006), Национальных днях лабораторной медицины России (Москва, 2006).

Работа апробирована на совместном заседании кафедр инфекционных болезней с курсом дерматовенерологии ИПО, микробиологии с иммунологией и вирусологией, инфекционных болезней, детских инфекционных болезней, лабораторной диагностики ИПО Башкирского государственного медицинского университета 9 июня 2006г.

Личный вклад автора. Диссертация представляет собой анализ и обобщение результатов исследований, полученных автором лично. В работах выполненных в соавторстве, вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 3 - в центральных журналах.

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», трех глав собственных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, приложений. Работа изложена на 145 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц, 23 рисунка. Список литературы включает 226 источников: 75 отечественных и 151 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В соответствии с целью диссертационной работы исследования выполнялись в три этапа. На первом этапе проводился клинический отбор больных из числа детей и подростков, госпитализированных в 2004 году в МУ ИКБ №4 г.Уфы с диагнозом «острая кишечная инфекция». Общее количество детей, находившихся на стационарном лечении составило 2421 человек, их них 310 перенесли ОКИ, вызванную УПЭ. Объектом непосредственного диссертационного исследования явились 157 человек, находившихся на стационарном лечении

в период с февраля по август 2004 года. Для постановки диагноза использовались клинические, бактериоскопические, бактериологические, серологические, иммунологические методы исследования. Обследование больных проводили в соответствии с республиканскими медико-экономическими стандартами: общий анализ крови, общий анализ мочи, копроцитологическое и бактериологическое исследование испражнений. Клинический материал: испражнения, рвотные массы и промывные воды желудка исследовали на наличие патогенной и условно-патогенной флоры. Бактериологическими методами выявляли Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Escherichia coli, Campylobacter jejuni, Staphylococcus spp., условно-патогенные Enterobacteriaceae, неферментирующие грамотрицательные палочки; для качественного выявления в испражнениях ро-тавирусного антигена использовали иммуноферментный метод. Бактериоскопи-ческий метод применяли для обнаружения цист лямблий и яиц гельминтов.

При обнаружении УПЭ всем больным проводилась РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с шигеллезными (Sh.flexneri, Sh.sonnei) и сальмоне-лезными диагностикумами. Выборочно сыворотки 43 детей с ОКИ, вызванными УПЭ, исследованы в реакции агглютинации (РА) на наличие антител к ау-тоштамму. Для этого из клинических штаммов УПЭ (концентрация 106 и выше) готовили взвесь живой 20-часовой культуры для обнаружения Н-агтлютинации, а из кипяченой суточной агаровой культуры - для обнаружения О - агглютинации. Исследовались сыворотки, полученные в течение 72 часов и через 7-10 дней с момента заболевания.

На втором этапе осуществлялась этиологическая расшифровка патологии микробиологическими и молекулярно-генетическими методами. Для сбора коллекции клинических штаммов УПЭ исследовали клинический материал: испражнения, рвотные массы и промывные воды желудка. Выделение чистой культуры микроорганизмов осуществляли по общепринятой методике, с использованием отечественных питательных сред. Посевы инкубировали при 37°С в течение суток, и при необходимости - дополнительно при комнатной температуре. Подозрительные колонии дифференцировали макроскопически по

морфологии и микроскопически - после окраски препаратов по методу Грама. Биохимическую идентификацию осуществляли при использовании сред Гисса, СИБ (системы индикаторные бумажные), ПБДЭ (пластины биохимические для дифференциации энтеробактерий) («Диагностические системы» г.Н.Новгород) и системы «Enterotest» («Chemapol», Чехия). Антибиотикочувствительность клинических штаммов оценивали дискодиффузионными методом с дисками, содержащими ампициллин, карбенициллин, гентамицин, тетрациклин, левоми-цетин, полимиксин, канамицин, цефалексин, нитрофурантоин.

Тотальную бактериальную ДНК выделяли из суточной агаровой культуры, используя стандартные наборы для выделения ДНК («Интерлабсервис», Россия). Для избирательной амплификации in vitro определенных участков ДНК был использован метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР проводилась в амплификаторе МС-16 «Терцик» («ДНК-технология», Россия). Для выполнения работы использовали праймеры к ряду генов, обнаруженных в составе «островов» патогенности у E.coli, определяющих способность бактерий синтезировать фимбрии типа S (sfaG), а-гемолизин (hlyA и hlyB), цитотоксиче-ский некротизирующий фактор (cnfl) и термостабильный энтеротоксин b (estB). Праймеры синтезированы в НПФ «ДНК-технология» (Россия).

На третьем этапе изучалась активность некоторых провоспалительных цитокинов (ЦТ) в сыворотке крови больных ОКИ. Цитокиновый профиль количественно оценивали твердофазным иммуноферментным методом при исследовании сыворотки крови в динамике: первая - в период 72 часов от начала заболевания и вторая - через 7-10 дней. В контрольной ipynne, которую составили 15 здоровых детей, сыворотка исследовалась однократно. Для измерения уровня ЦТ использовали стандартные тест системы РгоСоп (ООО «Протеиновый контур», Россия). При этом непосредственно определяли содержание в крови ИЛ-lp, ИЛ-6 и ФНО-а. Для сравнения изменений показателей ЦТ при ОКИ, вызванных УПЭ, исследовали уровень аналогичных ЦТ в сыворотке детей с бактериологически подтвержденными диагнозами шигеллеза и гастроинтести-нальной формой сальмонеллеза.

Статистическую обработку данных проводили с использованием программы Statistica for Windows (v. 5.11).

Результаты исследования и их обсуждение

Среди госпитализированных в МУ. ИКБ №4 г.Уфы детей с диагнозом «острая кишечная инфекция» за период 2002 - 2004гг. удельный вес пациентов с ОКИ, вызванными УПЭ, составил 12,8 - 21,2%. При этом чаще выделялись Klebsiella spp. (41,1-51,6%) и Proteus spp. (14,5-30,2%), несколько реже Citrobacter spp. (9,3-12,1%), Enterobacter spp. (6-11,9%), Morganella morganii (8,111,3%) и Hafiiia alvei (2,1-3,9%).

В 2004 году в ИКБ №4 г.Уфы на стационарном лечении с диагнозом ОКИ, вызванные УПЭ, находилось 310 детей. В ходе обследования больных была собрана коллекция из 89 клинических штаммов УПЭ: Klebsiella spp. (37шт), Citrobacter spp. (9шт), Enterobacter spp. (17urr), Hafhia alvei (1шт), Morganella morganii (11шт), Proteus spp. (14шт). Все выделенные культуры обладали типичной биохимической активностью. Определение чувствительности культур к антибиотикам показало, что 80 штаммов (90%) были резистентны к 4-7 препаратам, в то время как 7 культур (7,8%) резистентны к 1-3 препаратам и лишь 2 штамма (2,2%) - Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae были чувствительны ко всем антибиотикам. Наибольшая резистентность наблюдалась к нит-рафурантоину, левомицетину, тетрациклину и ампициллину, наименьшая - к гентамицину и цефалексину. Различия превалирующей антибиотикорезистент-ности у клинических штаммов различных родов были несущественны.

Методом ПЦР в 29 (32,6%) случаях было установлено наличие у собранных клинических штаммов УПЭ фрагментов ДНК, специфичных известным генам кластеров патогенности E.coli. В общем пуле исследуемых кулыур образование искомых ампликонов при использовании праймеров к hlyA имели место в 9 (10,1%), ЫуВ - 10 (11,2%), sfaG - 8 (9%), cnfl - 9 (10,1%), estB - 3 (3,4%) случаях, соответственно. Встречаемость фрагментов генов «островов» патогенности по родам представлена в таблице 1. Различия по частоте обнаружения соответствующих фрагментов генов у различных родов исследованных штаммов

ставителей семейства Enterobacteriaceae. Но показана прямая корреляционная связь между адгезивной активностью и резистентностью к антибиотикам у Morganella morganii, выделенных при кишечных и урологических инфекциях [Гашимова Д.Т. и др., 1998], также показана прямая связь детерминированных R-плазмидой адгезинов с наличием Р-лактамазы у мультирезистентных (амок-сициллин, цефалотин, цефотаксим, канамицин, амикацин, хлорамфеникол, тетрациклин, налидиксовая кислота) Klebsiella pneumoniae, выделенных при нозо-комиальных инфекциях [Livrelli V. et al., 1996].

Статистический анализ наличия фрагментов генов «островов» патогенно-сти, полирезистентности культур и клинических проявлений заболеваний показал существование прямых корреляционных связей между фрагментами генов hlyB, sfaG, cnfl и синдромом интоксикации, уровнем и продолжительностью лихорадки, присутствием патологических примесей в испражнениях (табл.2).

Таблица 2

Корреляционные связи между фрагментами генов «островов» патогенно-сти и аитибиотикорезистентиостью штаммов и клиническим» снмптома-_ми острых кишечных инфекций__

Клинические симптомы ЫуВ sfaG cnfl полирезистентность

степень подъема температуры 0,27 0,16 0,24 0,12

продолжительность лихорадки 0,16 0,27 0,15 0,10

уровень СОЭ - 0,14 - 0,15

интоксикация 0,16 0,13 0,16 0,30

продолжительность рвоты 0,12 - 0,19 -

частота стула - 0,22 0,13 -

продолжительность диареи 0,25 0,04 0,22 -

Патологические примеси в испражнениях:

зелень 0,24 0,05 0,25 0,11

лейкоциты 0,10 - 0,36 -

слизь 0,29 - 0,14 -

Факторный анализ также показал сопряженность синдрома интоксикации и детерминант ЫуВ (г=0,36), спП (г=0,29) и яГаО (г=0,12). Одновременно наличие данных генов сочеталось с появлением в стуле патологических примесей (слизь, лейкоциты, зелень), что указывало на развитие инфекционно - воспалительного типа диареи. Наши данные сопоставимы с данными других исследователей, которые продемонстрировали в экспериментальной модели (перевязан-

ная петля кишечника кролика) развитие диареи воспалительного типа при инфицировании штаммами E.coli, содержащими гены hly и cnfl в сочетании и по отдельности. При этом во всех случаях наблюдалось накопление жидкости в тонком и толстом кишечнике со слизью и кровью, а гистологическое исследование выявляло мультифокальные участки эрозий, гиперемию, отек и гиперплазию бокаловидных клеток толстого кишечника, а также инфильтрацию по-лиморфноядерными лейкоцитами собственной пластинки тонкого кишечника [Elliott S.J. etal., 1998].

Среди детей, госпитализированных с диагнозом ОКИ, вызванная УПЭ, большую часть (63%) составили пациенты до 3-х лет (до года - 32% и 1-3 года - 31%), дети 4-7 лет - 14,4%, 8-14 лет - 12%, подростки - 10,6%. Заболевания чаще протекали в легкой (40%) и среднетяжелой (57,1%) форме, с поражением верхних отделов желудочно-кишечного тракта в виде гастроэнтерита (86,6%). Среди 157 пациентов с учетом особенностей клинической симптоматики были выделены три группы больных.

Первую группу составили дети раннего возраста - 16 (10,2%) человек, заболевание которых характеризовалось постепенным началом - с поражения желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) в виде затяжного гастроэнтероколита. Стул был жидкий, малыми порциями, 6-8 раз в сутки и более, с патологическими примесями в виде комочков слизи, зелени, продолжительность диареи всегда была более 7-10 дней. Отмечалась нечастая, упорная рвота, умеренное вздутие живота. Повышение температуры наблюдалось позднее и в половине случаев до субфебрильных значений, в то же время у всех детей наблюдались симптомы интоксикации: они становились капризными, беспокойными или, наоборот, сонливыми, вялыми, всегда снижался аппетит, появлялось срыгивание.

Вторую группу составили дети всех возрастов - 112 (71,3%) человек, у которых отмечалось острое начало заболевания с одновременным развитием общеинфекционного синдрома (интоксикация и лихорадка) и поражения ЖКТ в виде гастроэнтерита или гастроэнтероколита: повторной, но кратковременной рвоты, диареи. Стул был жидкий, каловый, чаще (92,8%) без патологических

примесей, у подавляющего большинства пациентов наблюдались частота стула до 5 раз в сутки (88,4%) и продолжительность диареи до 7 дней (98,2%). Симптомы интоксикации были умеренно выражены и проявлялись в виде вялости, слабости, недомогания, снижения аппетита, дети раннего возраста становились капризными, беспокойными. Температура, как правило (76%), не превышала 38,5°С и нормализовалась к 4-му дню заболевания (91,1%).

Третью группу составили дети старше 3-х лет и подростки - 29 (18,5%) человек, у которых ОКИ протекали по типу пищевой токсикоинфекции (ПТИ) - острый гастроэнтерит с доминированием синдромов интоксикации и/или обезвоживания [Ющук Н.Д., 2000]. При этом заболевание характеризовалось бурным началом - болями в животе, многократной рвотой (более 10 раз), выраженной интоксикацией, которая проявлялась резкой слабостью, недомоганием, головной болью, наблюдалось повышение температуры до субфебрильных цифр у 62,1% пациентов и фебрильных цифр - у 37,9% больных. Пациенты жаловались на сухость во рту, жажду. Острый период был кратковременным и у 51,7% составил одни сутки (абортивное течение). В картине ЖКТ расстройств доминировали симптомы диспепсии: тошнота, позывы на рвоту, урчание в животе, схваткообразные боли различной интенсивности. Диарея была умеренной: стул оценивался как водянистый в 31%, жидкий в 31% и кашицеобразный в 27,7% случаев, частотой от 1 до 5 раз в сутки, продолжительностью 1-3 дня. У 3 (10,3%) больных стул оставался оформленным. У всех пациентов из испражнений, а также рвотных масс и промывных вод желудка высевались УПЭ.

Выборочно сыворотки 43 детей различных возрастов исследовали на наличие антител в РА с аутоштаммом (Н- и О-агглютинации). При выявлении Klebsiella spp. исследовалась способность только к О-агглютинации. У 23 детей проводилось исследование с парными сыворотками, у 20 - исследовали сыворотку, взятую в периоде реконвалесценции. У всех больных первые порции сыворотки показали отрицательные результаты, из 43 вторых порций сывороток 37 (86%) - положительную реакцию. При среднетяжелой форме ОКИ (67,4% обследованных) антитела к аутоштамму при О-агглютинации в среднем опре-

делялись в титрах 1:400, при Н-агтлютинации - 1:80. При легкой форме заболевания (27,9%) в половине случаев антитела не определялись, а образовавшиеся антитела присутствовали в низких титрах: 1:100 и 1:20, соответственно. При тяжелой форме болезни (4,7%) также обнаруживался низкий титр антител: 1:100 и 1:20, соответственно. У б человек (14%) антитела не обнаружены, это были дети школьного возраста и подростки с легкими формами и абортивным течением ОКИ, что согласуется с данными других авторов [Боковой А.Г., 1991].

Анализ цитокинового профиля при инфекционных заболеваниях вносит понимание в механизмы функционально-морфологических изменений в органах и тканях и раскрывает их связь с клиническими проявлениями. Мы изучили динамику изменения концентраций провоспалительных цитокинов: ИЛ-lß, ИЛ-6 и ФНО-а в сыворотке крови детей и подростков с ОКИ, вызванными УПЭ и патогенными энтеробактериями (ПЭ). Под наблюдением находились 73 человека в возрасте от 3 до 17 лет. Из них 41 больной с ОКИ, вызванными УПЭ: 15 - Klebsiella spp., 5 - Proteus spp., 7 - Morganella morganii, 5 - Citrobacter spp. 8 -Enterobacter spp., 1 - Hafhia alvei. Остальные 32 пациента с ОКИ, вызванными ПЭ: 8 - Salmonella spp., 24 - Shigella spp. Все пациенты имели легкую и средне-тяжелую формы заболеваний, гладкое течение. Шигеллез протекал в энтероко-литическом варианте, где лишь у одного ребенка имел место гемоколит, саль-монеллез - в гастроэнтеритическом варианте. Кишечные инфекции, вызванные УПЭ, у детей дошкольного и школьного возраста проявлялись в виде гастроэнтерита (или гастроэнтероколита), у подростков протекали по типу Ii i И.

Развитие заболеваний сопровождалось существенным повышением уровней ЦТ (табл. 3, 4). Анализ динамики значений ЦТ между острым периодом и периодом реконвалесценции выявил достоверное снижение концентраций всех ЦТ в обеих сравниваемых группах. Примечательно, что только значения ИЛ-б в периоде реконвалесценции снижались до нормы во всех группах и независимо от формы тяжести ОКИ. При шигеллезах и сальмонеллезах концентрации всех ЦТ в остром периоде заболеваний были достоверно выше (Р<0,001), чем при ОКИ, вызванных УПЭ. Известно, что УПЭ размножаются на поверхности эпи-

были несущественны. Выявлены прямые средние значения коэффициентов парной корреляции между генетическими детерминантами ЫуВ и спП (г=0,59; Р<0,01), ЫуА и БГаО (г=0,42; Р<0,05). В 65,5% случаев фрагменты генов обнаружены у культур, выделенных у детей до 3-х лет, причем фрагменты гена езШ присутствовали только у штаммов, выделенных у детей до 3-х лет. У культур этой же возрастной группы обнаружены 66,7% детерминант ЫуА, 70,9% - ЫуВ, 55,5% - спП, 75% - БГав. В то время как у штаммов, выделенных у детей 4-7 лет выявлены фрагменты только ЫуА, ЫуВ и спП, а у детей 8-14 лет и подростков - лишь ЫуА и б Гай. Чаще (79,5%) фрагменты генов обнаружены у штаммов, полученных при среднетяжелых и тяжелых формах ОКИ.

Таблица 1

Частота обнаружения фрагментов генов «островов» патогенности у клинических штаммов условно-патогенных энтеробактернн, выделенных при

УПЭ n(%) ЫуА n(%) ЫуВ n(%) sfaO n(%) cnfl n(%) estB n(%)

Klebsiella spp. 37(41,6) 1(11,1) 4 (40,0) 3 (37,5) 5 (55,6) 0

Citrobacter spp. 9(10,1) 3 (33,3) 0 2 (25,0) 0 0

Enterobacter spp. 17(19,1) 3 (33,3) 0 2(25,0) 0 0

Hafoia alvei 1 (1,1) 1(11.1) 0 0 0 0

Morganella morganii 11 (12,4) 0 3 (30,0) 1 (12,5) 2 (22,2) 2(66,7)

Proteus spp. 14(15,7) 1(11,1) 3 (30,0) 0 2 (22,2) 1 (33,3)

Итого 89 (100) 9(100) 10(100) 8 (100) 9(100) 3 (100)

Обнаружено, что штаммы, несущие фрагменты генов «островов» патогенности, в 98,9% обладали множественной антибиотикоустойчивостью. Анализ сопряженности присутствия фрагментов генов «островов» патогенности и антибиотикорезистентности энтеробактерий показал наличие слабой прямой связи между наличием генов йГав и устойчивостью к тетрациклину(г=0,21) и левомицетину (г=0,35); ез!В - гентамицину (г=0,12) и карбенициллину (г=0,18); ЫуА - ампициллину (г=0,13) и левомицетину (г=0,14); ЫуВ - ампициллину (г=0,18) и цефазолину (г=0,11), спП - ампициллину (г=0,13). В доступной нам литературе мы не нашли данные о взаимосвязи резистентности к данным антибактериальным препаратам и наличием генов «островов» патогенности у пред-

телия слизистой кишечника без повреждения эпителиоцитов или с развитием умеренного воспаления, а инфекции, вызываемые Shigella spp. и Salmonella spp, характеризуются резко выраженным воспалением слизистой [Бондаренко В.М., 1999; Полоцкий Ю.Е. и др., 1992], где большую роль играют ЦТ [Fleckenstein J.M., 2001; KagnoffM.F., 1997]. При изучении шигеллеза, показано, что локальный цятокиновый ответ зависит от гистологической картины в кишечнике: в биоптатах прямой кишки с нейтрофильной инфильтрацией и микроязвами уровень ИЛ-1, ИЛ-б, ИЛ-10, ИЛ-8 и ФНО-а был значительно выше, чем в биоптатах с катаральным воспалением. Здесь же обнаружено, что одновременное содержание ЦТ в плазме в 100 раз ниже, чем в фекалиях [Raqib R. et al., 1995].

Таблица 3

Концентрации сывороточных цитокинов при острых кишечных инфекци-_ях, вызванных условно-патогенными энтеробактернямп_

Цитокияы М±т, пг/мл Контрольная группа, пг/мл (п=15) Р<

Острый период | Выздоровление

Легкая форма (п=22)

ИЛ-lß 236,88 ±120,01* 27,45 ±12,56 24,18 ± 15,7 0,001

ФИО а 280,13 ± 141,06* 15,46 ±5,46 13,96 ±6,8 0,001

ИЛ-б 5,86 ±4,32* 0,00 0,00 0,001

Среди етяжелая форма (п=19)

ИЛ-lß 838,04 ±253,78* 29,29 ±17,65 24,18 ± 15,7 0,001

ФИО а 811,87 ±385,38* 120,11 ±56,78* 13,96 ±6,8 0,001

ИЛ-б 35,38 ± 17,24* 0,00 0,00 0,001

Примечание.* - Р<0,001 достоверность различий с группой здоровых лиц.

Таблица 4

Концентрации сывороточных цитокинов при острых кишечных ннфекци-_ ях, вызванных патогенными энтеробактериями_

Цитоишы М±ш, пг/мл Контрольная группа, пг/мл (п=15) Р<

Острый период | Выздоровление

Легкая форма (п=!4)

ИЛ-lß 393,14 ±151,84* 24,41 ±9,14 24,18 ±15,7 0,001

ФИО а 722,32 ±342,51* 22,2 ±8,32** 13,96 ±6,8 0,001

ИЛ-б 27,64 ±11,49* 0,00 0,00 0,001

Среднетяжелая форма (п=18)

ИЛ-lß 1287,72 ±271,49* 54,39 ±28,09* 24,18 ±15,7 0,001

ФИО а 1784,21 ±688,96* 164,68 ±79,05* 13,96 ±6,8 0,001

ИЛ-6 86,91 ±36,92* 0,00 0,00 0,001

Примечания: * - Р<0,001 достоверность различий с группой здоровых лиц;

** - Р<0,05 достоверность различий с группой здоровых лиц.

В наших исследованиях достоверные различия в уровнях ЦТ при ОКИ, вызванных патогенными и УПЭ, могут, по-видимому, указывать на различную глубину поражения слизистой оболочки кишечника. Сравнение уровней ЦТ между легкой и среднетяжелой формами заболеваний показало, что концентрации ЦТ при среднетяжелой форме достоверно выше в обеих сравниваемых группах, что также может указывать на различную глубину поражения слизистой оболочки кишечника. Такие же данные получены при изучении у детей шигеллеза [De Silva D.G. et al., 1993] и брюшного тифа [Bhutta Z.A. et al., 1997; Butler T. et al., 1993].

Амплитуда значений изученных ЦТ представлена на рис. 1.

с s

£ IT

го о.

ZS X

о bi

10000 1000 ■ 100 10 1 0,1

• ПЭ о УПЭ

ИЛ-Iß

ФНО-а

ИЛ-6

Рис. 1. Колебания значений ИЛ-ip, ФНО-а и ИЛ-6 у детей и подростков с острыми кишечными инфекциями, вызванными патогенными (ПЭ) и условно-патогенными (УПЭ) энтеробактериями

Концентрации ИЛ-1(3 и ФНО-а сопоставимы, а ИЛ-6 значительно ниже. Аналогичные результаты были получены при изучении способности человеческих мононуклеарных клеток периферической крови продуцировать данные ЦТ. Было установлено, что при воздействии различных стимулов: липополиса-харид, фитогемагглютинин, Staphylococcus epidermidis секреция ИЛ-6 всегда в несколько раз ниже, чем секреция ИЛ-ip и ФНО-а, и высоко коррелирует с ними [Schindler R. et al., 1990]. Нами также выявлены прямые корреляционные

связи: ИЛ-IP и ФНО-а (г=0,74), ИЛ-6 и ФНО-а (г=0,71) ИЛ-1(3 и ИЛ-б (г=0,61). Прямые корреляционные связи указывают на однотипную направленность действия данных ЦТ и их взаимозависимость.

Статистический анализ корреляционных связей ЦТ и клинических проявлений ОКИ, выявил сильную прямая связь между ИЛ-ip, ФНО-а и степенью интоксикации (г=0,65 и г=0,59, соответственно), величиной и продолжительностью лихорадки (г=0,86 и г=0,6б, соответственно), прямую связь средней силы с продолжительностью рвоты (г=0,48 и г=0,41, соответственно), длительностью синдрома диареи (г=0,37 и г=0,54, соответственно), воспалительными изменениями картины крови: количеством лейкоцитов (г=0,40 и г=0,52, соответственно) и СОЭ (г=0,65 и г=0,52, соответственно). Для ИЛ-б выявлена прямая средняя связь с уровнем интоксикации (п=0,40), величиной и продолжительностью лихорадки(г=0,45), количеством лейкоцитов (г=0,44) и уровнем СОЭ (г=0,42). Выявленные высокие корреляционные связи ИЛ-ip и ФНО-а (ведущих медиаторов развития местной воспалительной реакции и острофазного ответа на уровне организма) с синдромом интоксикации, в том числе, близкая по значениям к сильной прямая корреляция с уровнем СОЭ, которое отражает наличие в крови острофазных белков, и лихорадки указывает на участие данных ЦТ в патогенезе названных синдромов [Маянский А.Н., 1999; Лрилин А.А., 1997; Henderson В. et al., 1996]. При изучении белков острой фазы воспаления при ОКИ у детей, показано, что в 87,5%, независимо от этиологии, отмечается изменения данных агентов, что свидетельствует об активации иммунной защиты, в том числе цитокинового звена [Каротам П.А. и др., 2005].

Факторный анализ также показал взаимосвязь ИЛ-ip, ФНО-а и, в меньшей степени, ИЛ-6 с тяжестью течения ОКИ, которая, в свою очередь, определялась синдромом интоксикации (величиной и продолжительностью лихорадки, длительным сохранением рвоты, воспалительными изменениями картины крови) и длительностью диареи, причем, имелась взаимосвязь как острофазных концентраций ЦТ, так и уровней в периоде ранней реконвалесценции.

Известно, что локально синтезированный ИЛ-6 лишь в небольших коли-.

чествах поступает в системный кровоток [Roth J. et al., 2001], высокие концентрации сывороточного ИЛ-6 обнаруживаются при генерализованных процессах - шоке и сепсисе [Barton В.Е. et al., 1993]. Опираясь на многочисленные исследования функции ИЛ-6 в разных тканях и при различных заболеваниях, в настоящее время полагают, что именно ИЛ-6 является ключевым ЦТ в патогенезе многих заболеваний, включая ОКИ [Vaisman N. et al., 2003]. Так, изучение секреции сывороточных ЦТ при шигеллезе и брюшном тифе у детей показало, что уровень ИЛ-6 различался при осложненных (лейкемоидные реакции, тромбо-цитопении, затяжной колит, гемолитико-уремический синдром) и гладких течениях инфекций (Р<0,001), в то время как значения ФНО-а были повышены, но достоверно не различались [Bhutta Z.A. et al., 1997; De Silva D.G. et al., 1993].

Учитывая меньшую связь ИЛ-6 с общеинфекционным синдромом и снижение концентрации ИЛ-6 в периоде ранней реконвалесценции до показателей нормы у всех больных, в отличие от ИЛ-lß и ФНО-а, а также гладкое течение ОКИ у пациентов, вошедших в исследование и данные литературы, можно предположить, что низкие показатели ИЛ-6 в периоде выздоровления свидетельствуют об отсутствии осложнений и гладком течении ОКИ, и наоборот, сохраняющиеся высокие значения ИЛ-6 в периоде ранней реконвалесценции могут указывать на затяжное течение инфекции и/или наличие осложнений.

Анализ мультифакторных связей между фенотипическими и генотипиче-скими характеристиками культур и клинико-иммунологическими особенностями вызываемых ими ОКИ у детей и подростков показал, что тяжесть заболевания определяется вкладом микро- и макроорганизма: наличие у возбудителя фрагментов генов hlyB, sfaG и cnfl, а также множественной устойчивости к антибиотикам сопряжено с возрастанием тяжести проявлений ОКИ, а именно, усилением синдрома интоксикации, увеличением продолжительности лихорадки, пропорциональным возрастанием концентраций сывороточных цитокинов ИЛ-Iß, ФНО-а и ИЛ-6 и увеличением длительности диареи инфекционно-воспалительного типа. В большей степени данные взаимосвязи отражаются на течении кишечных инфекций у детей раннего возраста.

Выводы

1. Условно-патогенные Enterobacteriaceae, выделенные при острых кишечных инфекциях у детей и подростков, относились к родам Klebsiella spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Morganella morganii, Proteus spp., Hafnia alvei. Выделенные культуры обладали типичной биохимической активностью, 90% отличались полирезистентностью - устойчивостью к 4-7 препаратам, одновременно, штаммы, несущие фрагменты генов «островов» патогенности, в 98,9% обладали множественной антибиотикоустойчивостью.

2. В 32,6% случаев у тестируемых бактерий выявлены фрагменты ДНК, специфичные для известных генов кластеров патогенности. Искомые амплико-ны при использовании праймеров к hlyA обнаружены в 10,1% случаев, ЫуВ - в 11,2%, sfaG - в 9%, cnfl - в 10,1%, estB - в 3,4%. Отмечены парные корреляции между генетическими детерминантами hlyB и cnfl (п=0,59; Р<0,01), hlyA и sfaG (г=0,42; Р<0,05), но не estB и другими генами. Обнаружены прямые корреляционные связи между наличием фрагментов генов, детерминирующих адгезины типа S (sfaG), и устойчивостью к тетрациклину (г=0,21) и левомицетину (r=0,35), estB - карбенициллину (r=0,18), hlyB - ампициллину (г=0,18).

3. Острые кишечные инфекции, вызванные условно-патогенными Enterobacteriaceae, составили 12,8-21,2% среди детей и подростков, госпитализированных в стационар с диагнозом «острая кишечная инфекция», чаще болели дети до трех лет (63%). Преобладали легкие (40%) и среднетяжелые (57,1%) формы. Клинические проявления зависели от возраста заболевших и протекали у детей до трех лет в виде затяжного гастроэнтероколита (18%) и острого гастроэнтерита (82%), у детей дошкольного и школьного возраста по типу пищевых токсикоинфекций (31,4%) и острого гастроэнтерита (или гастроэнтероколита) (68,5%) и у подростков - чаще по типу ШИ (76,5%).

4. Внедрение условно-патогенных энтеробактерий в организм индуцирует системную воспалительную реакцию, сопровождающуюся увеличением концентраций сывороточных цитокинов ИЛ-lß, ИЛ-6 и ФНО-а пропорционально форме тяжести, при этом изменение уровней ИЛ-1 ß и ФНО-а сопряжено со сте-

пенью интоксикации и лихорадкой, низкие значения ИЛ-6 сопровождают неос-ложненные формы. Возрастание уровней ИЛ-1Р и ФНО-а сопоставимы, ИЛ-6 -значительно ниже. Выявлены прямые корреляционные связи всех цитокинов между собой.

5. Наличие у возбудителя фрагментов генов ЫуВ, sfaG, спП, а также множественной устойчивости к антибиотикам сопряжено с возрастанием тяжести кишечных инфекций: усилением синдрома интоксикации, проявляющегося высокими значениями и длительным сохранением лихорадки, упорной рвотой, воспалительными изменениями картины крови и пропорциональным возрастанием уровней сывороточных цитокинов ИЛ-ф, ФНО-а, ИЛ-6, а также увеличением длительности диареи инфекционно-воспалительного типа (наличие в стуле слизи, зелени и лейкоцитов).

Практические рекомендации

1. Для расшифровки внутрибольничных кишечных инфекций и групповых вспышек острых кишечных инфекций, вызванных условно-патогенными энтеробактериями у детей и подростков, рекомендуется определение генетических маркеров спП, ЫуВ, ЫуА, вГаО, еБ®.

2. Для оценки тяжести острых кишечных инфекций у детей дошкольного, школьного возраста и подростков и прогнозирования течения заболевания рекомендуется определения сывороточных цитокинов ИЛ-10, ИЛ-6 и ФНО-а в остром периоде и периоде реконвалесценции. Значения цитокинов в течение 072 часа от начала заболевания, соответствующие легкой форме: ИЛ-1Р = 120360 пг/мл; ФНО-а = 140-420 пг/мл; ИЛ-6 = 2-10 пг/мл. Значения цитокинов в течение 0-72 часа от начала заболевания, соответствующие среднетяжелой форме: ИЛ-1Р = 580-1100 пг/мл; ФНО-а = 720-1200 пг/мл; ИЛ-6 = 20-55 пг/мл. Значения цитокинов на 10-12 день болезни соответствующие неосложненному течению: ИЛ-ф менее 50 пг/мл; ФНО-а менее 170 пг/мл; ИЛ-6 менее 2 пг/мл.

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Жеребцова Н.Ю., Мавзютов А.Р., Валишин Д.А., Лопатина Т.К., Куликова М.В., Асадуллина О.А., Сюндюкова Л.А. Антибиотикорезистентность энтеро-

бактерий, выделенных при острых кишечных инфекциях у детей в МУ г.Уфы ИКБ №4 // Медицинская наука-2004: мат. Респ. конф. молодых ученых РБ / Гос. образоват. учреждение Башк. гос. мед. ун-т. - Уфа, 2004. - С.62-63.

2. Жеребцова Н.Ю., Валишин Д.А., Хейфец Б.Х., Аюпова Н.Г., Просвиркина Т.Д., Мосунова А.Ш., Батыргареева А.Х. Характеристика острых кишечных инфекций, вызванных условно-патогенными энтеробактериями, по данным МУ г.Уфы ИКБ №4 // Медицинская наука-2004: мат. Респ. конф. молодых ученых РБ /Гос. образоват. учреждение Башк. гос. мед. ун-т. - Уфа, 2004. - С.63-64.

3. Жеребцова Н.Ю., Валишин Д.А., Лопатина Т.К., Куликова М.В., Асадул-лина O.A., Сюндюкова Л.А., Петрова Е.Б. Антибиотикорезистентность условно-патогенных энтеробактерий, выделенных в г.Уфе // Узловые вопросы борьбы с инфекцией: мат. Рос. науч.-практ. конф., 1-2 декабря 2004. - Санкт-Петербург, 2004. - С.93-94.

4. Жеребцова Н.Ю., Валишин Д.А., Хейфец Б.Х., Петрова Е.Б. Клинические особенности острых кишечных инфекций, вызванных условно-патогенными энтеробактериями, у детей и подростков // Узловые вопросы борьбы с инфекцией: мат. Рос. науч.-практ. конф., 1-2 декабря 2004. - Санкт-Петербург, 2004. - С.94.

5. Жеребцова Н.Ю., Савина И.А., Баймиев А.Х., Мавзготов А.Р. Распространение генетических маркеров, ассоциируемых с продукцией ферментов агрессии, среди клинических штаммов Enterobacteriaceae, выделенных при кишечных инфекциях у детей // Ферменты микроорганизмов: структура, функции, применение: сб. докл. XIII межд. конф, 4-8 апреля 2005. - Казань, 2005. - С.72-74.

6. Жеребцова Н.Ю., Валишин Д.А., Савина И.А., Кудакаева Р.Х., Корюкова Т.С., Мавзютов А.Р. Условно-патогенные энтеробактерии в этиологии острых кишечных инфекций у детей и подростков // Молекулярная медицина и биобезопасность: мат. П межд. конф., 21 октября 2005. - Москва, 2005. - С.131.

7. Жеребцова НЛО., Валишин Д.А., Савина И.А., Кудакаева Р.Х., Корюкова Т.С., Просвиркина Т.Д., Мавзютов А.Р. «Острова» патогенности и антибиоти-коустойчивость условно-патогенных энтеробактерий, выделенных при кишечных инфекциях // Терапия инфекционных заболеваний у детей: нерешенные

вопросы-, мат. Всерос. науч.-практ. конф, 11-13 октября 2005. - Санкт-Петербург, 2005. - С.50.

8. Жеребцова Н.Ю., Мавзютов А.Р., Валишин Д.А. Иммунный ответ при острых кишечных инфекциях, вызванных условно-патогенными энтеробакте-риями, у детей и подростков // Медицинская наука-2005: мат. Респ. конф. молодых ученых РБ / Гос. образоват. учреждение Башк. гос. мед. ун-т. - Уфа, 2005. -С.59-60.

9. Жеребцова Н.Ю., Мавзютов А.Р., Савина И.А., Валишин Д.А. Оценка вирулентности условно-патогенных штаммов Enterobacteriaceae, выделенных при кишечных инфекциях у детей через обнаружение «островов» патогенности // Медицинская наука-2005: мат. Респ. конф. молодых ученых РБ / Гос. образоват. учреждение Башк. гос. мед. ун-т. - Уфа, 2005. - С.60-61.

10. Жеребцова Н.Ю., Валишин Д.А., Мавзютов А.Р. Цитокины при острых кишечных инфекциях у детей // Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины: мат. Рос. науч.-практ. конф., 22-24 марта 2006. - Санкт-Петербург, 2006. - С. 116-117.

11. Валишин Д.А., Жеребцова Н.Ю., Мавзютов А.Р. Клинико - иммунологические параллели при кишечных инфекциях у детей, обусловленных условно-патогенными и патогенными энтеробактериями // Клиническая лабораторная диагностика. - 2006. - №9. - С.49.

12. Жеребцова Н.Ю., Валишин ДА., Мавзютов А.Р. Перспектива генетической оценки потенциальной патогенности условно-патогенных энтеробактерий, выделенных при острых кишечных инфекциях // Клиническая лабораторная диагностика. - 2006. - №9. - С.50-51.

13. Мавзютов А.Р., Жеребцова Н.Ю., Валишин Д.А. Антитела к аутоштам-мам условно-патогенных энтеробактерий в диагностике кишечных инфекций у детей // Клиническая лабораторная диагностика. - 2006. - №9. - С.51.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт ИЛ-1 р - интерлейкин -1 р ИЛ-6 - интерлейкин - 6

МУ ИКБ №4 г.Уфы - Муниципальное учреждение инфекционная

клиническая больница №4 г.Уфы

ОКИ - острые кишечные инфекции

ГГГИ - пищевая токсикоинфекция

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПЭ - патогенные энтеробактерии

РА - реакция агглютинации

СОЭ — скорость оседания эритроцитов

УПМ - условно-патогенные микроорганизмы

УПЭ - условно-патогенные энтеробактерии

ФНО-а - фактор некроза опухоли - а

ЦТ - цитокины

cnfl — цитотоксический некротизирующий фактор 1

estB - термостабильный энтеротоксин b

ЫуА - а-гемолизин

ЫуВ - а-гемолизин

sfaG - фимбрии типа S

ММЛ им. II. M. Сеченной I lonmicnno в нечпть 2006 г.

Тираж IUUэкэемпллрип

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Жеребцова, Надежда Юрьевна

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль условно-патоген иых энтеробактсрий в развитии острых кишечных инфекций.„»„.к.И

12. Факторы патогеиности условно-патогенных зктсробзктсрин и их участие в развитии дкарейного синдрома.

1.3, Роль цитокннового звена иммунитета в развитии диарейного синдрома.„„.<.„ t-4. Клиника, диагностика и классификация острых кишечных инфекций» вызванных условно-патогенными энтеробактернямн.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1, Общая характеристика исследованных объектов.

22. Кл ннико-лабораторное обследование больных.

2.3. Реакция агглютинации с аутоштаммом.„.

2.4. Сбор коллекции клинических штаммов.„„.„„„.„„♦♦♦»«

2.5. Определение чувствительности к антнбиотнхам.

2.6. Выделение бактериальной ДНК.„,.

2.7. Амплификация участков ДНК «островов» патогеиности методом полимеразной цепной реакции.

2.8. Количественное определение цитокинов в сыворотке крови.

2.9. Методы статистической обработки.

ГЛАВА 3. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ПАТОГЕИНОСТИ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ ПРИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ.

3.1. Фенотипнческая характеристика кяинических штаммов.

3.2. Гены «островов» патогенностн клинических шпшмов.(,»„.„(„,.

3,3. Взаимосвязь наличия фрагментов генов «островов» патогенности, антнбнотикореэнстентностн выделенных штаммов и клинических проявлений заболеваний.„

ГЛАВА 4 КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫМИ

ЭНТЕРОБАКТЕРИЯМИ У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ.

4Л. Общая характеристн ка кишечных инфекций, вызван пых условнопатогенными энтеробактериями.

4,2, Клнннко-лабораторнаи характеристика обследованных больных. ,,,66 4,3- Результаты реакции агглютинации с аутоштаммом у обследованных бол ьных,.♦.„. „.

44, Терапия острых кишечных инфекций, вызнанных условнопатогенным и знтеробактериями.

ГЛАВА 5. АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМИ

КИШЕЧНЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ.

5.1 - Показатели цитокннового профиля.

52. Статистический анализ взаимосвязей уровней цнтокинов и клинической картины заболеваний, корреляционные связи между цитокинами.-.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клинико-лабораторные особенности острых кишечных инфекций, вызванных условно патогенными энтеробактериями у детей и подростков"

Актуальность проблемы

Острые кишечные инфекции а общей структуре детской инфекционной патологии остаются одной нз основных проблем, занимая по частоте второе место после острых респираторных вирусных инфекций [41]. Заболеваемость острыми кишечными инфекциями в РФ за последние годы составила 414,6 - 457,9 случаев на 100 тыс. населения н не имеет тенденции к снижению [26; 62], Возрастает эпидемиологическая роль условно-патогенных микроорганизмов, в тон числе энтеробактерий [50; 51]. В структуре острых кишечных инфекций у детей и подростков lia долю заболеваний, вызванных условно-патогенными Enierobactcriaccae, приходится от 3,1% до 38,2% [3; 17; 43; 61], а у детей первого года жизни - от 66,6% до 78,5% [17; 40].

Относительно этнологической роли условно-патогенных энтеробак-терий при кишечных инфекциях мнение исследователей разноречивы [35; 69], На современном этапе диагностика острых кишечных инфекций, вызванных условно-патогеннымн микроорганизмами, основывается на опенке клинических и лабораторных данных, включающих определение вида микроорганизма н микробной обссмененности, однако факт выделения условно-патогенного микроорганизма не всегда свидетельствует о его роли при данном заболевании [14]. В этой связи активно разрабатываются и совершенствуются методы оценки этиологической роли данных микроорганизмов, в частности, через обнаружение мобильных генетических элементов (в т.ч. «островов» патогенностн), с которыми связывают эволюцию условно-патогенных видов и появление патогенных клонов [в; 12; 36; 132; 180].

Сведения об особенностях ответной реакции организма на внедрение условно-патогенных бактерий не многочисленны [102; 104]. В настоящее время научный н практический интерес представляет характеристика патогенетических возможностей данных микроорганизмов и сопряженных с ними иммунных реакций организма, Изучение продукции цнтокинов и белков острой фазы позволяет установить особенности системной воспалительной реакции при кишечных инфекциях у детей и подростков, связанных с условно-патогенными эктсробактсриямн,

Цель исследования

Оценить роль условно-патогенных микроорганизмов семейства En-tcTobactcriaccac в развитии острых кишечных инфекций у детей н подростков на основании исследования генетических маркеров «островов» нато-геиностн и их взаимосвязи с антибиотнкорезнстентностыо выделенных штаммов, с ответной реакцией иммунной системы и с особенностями клинических проявлений заболеваний.

Задачи исследования

1. Установить видовой состав условно-патогенных Enterobacteriaceae, выделяемых при острых кишечных инфекциях у детей к подростков, фс-нотнпнческне особенности и антибнотикорезистентностъ клинических штаммов,

2. Установить наличие и частоту встречаемости фрагментов генов «островов» патогснности у клинических штаммов условно-патогенных Enterobacteriaceae, выделенных при кишечных инфекциях у детей и подростков. Определить характер вданмоснязн между наличием генов «островов» патогснности и аитнбиотнкорсзнстентностью выделенных культур.

3. Выявить особенности течения острых кишечных инфекций, вызванных условно-патогенными энтеробактернямн, в различных возрастных группах детей и у подростков

4, Определить характер изменения уровней провоспалительных цитокн-нов: ннтерлейкина-1 ß* иитерлейкнна-6, фактора некроза опухолн-а в сыворотке крови больных острыми кишечными инфекциями, вызванными патогенными и условно-патогенными энтеробактериямн,

5. Провести анализ мультифакгорных связей между фенотипически ми и геиоткпическнми характеристиками культур и клннико-иммунологическими особенностями вызываемых ими кишечных инфекций у детей и подростков.

Основные положения, выпоенные на защиту

1. Условно-патогенные Enterobacteriaceae, вызывающие острые кишечные инфекции у детей и подростков, преимущественно относятся к ролам Klebsiella spp., Citrobacter spp,, Enterobacter spp-, Morganella morganii, Hafnia aJvei, Proteus spp. и наиболее актуальны в развитии кишечных инфекций детей раннего возраста.

2. Клинические штаммы условно-патогенных эитеробактеркй, выделенные от детей н подростков при острых кишечных инфекциях, являются потенциально патогенными, поскольку отличаются наличием генетических маркеров - «островов» гштогекности. Определение «островов» па-тогенностн у клинических штаммов условно-патогенных эитеробакте-рнй свидетельствует об их этиологической значимости.

3- Острофазный ответ организма при внедрении условно-патогенных эн-теробактерий аналогичен таковому при инфекциях, вызываемых патогенными энтсробактернями.

Научная новизна исследован на

Впервые показано, что клинические штаммы условно-патогенных эитеробактсрий, выделенных от детей и подростков с острыми кишечными инфекциями, несут фрагменты ДНК «островов» пагогснкостн гомологичкые известным генам кластеров патогенности E.coli. У 32,6% бактерий обнаружено присутствие генов» определяющих способность бактерий синтезировать фимбрин типа S (sfaG>, гемолизин (hlyA и htyB). цитотокенче-скнй некротнзнрующий фактор (спП) и термостабнльный энтеротоксин b (ейВ). Обнаружены достоверные связи между частотой обнаружения генетических маркеров «островов» патогенности в парах: спП - ЫуВ н ЫуА -sfaG. Показана связь между наличием у возбудителя генов «островов» патогенности и клиническими проявлениями кишечных инфекций.

Впервые определена динамика н связи между уровнями сывороточных провоспалительных цнтокинов при острых кишечных инфекциях, вызванных условно-патогенными вдтсробактернямн у детей и подростков. Показано, что внедрение данных возбудителей в организм так же, как и при шигеллезах н с ал ьм он ел лезах > индуцирует системную воспалительную реакцию» которая сопровождается увеличением уровня лровосналитель-ных цитокиной: ннтерл ейки на-1 р, интерлейкння-б, фактора некроза опухо-лич*. Степень изменения концентраций цнтокинов коррелирует с тяжестью заболевания.

Впервые при острых кишечных инфекциях, вызванных условно-патогенными энтеробактериями, показаны связи между биологическими и молекулярио-генетическнмн характеристиками возбудителей, уровнями сывороточных проноспалнтелъных цитокинов н клиническими проявлениями заболеваний.

Практическая значимость работы

Определены генетические маркеры (cnfl, HlyB, hlyA, sfaG, cstB), информативные при оценке этиологической значимости и расшифровке вспышек острых кишечных инфекций, вызванных условно-патогенными знтеробактернями у детей и подростков. Изучена диагностическая ценность определения цчтокинового профиля сыворотки крови (интерлейкнл а-111, ннтсрлейкнна-6, фактора некроза опухоли-а) в остром периоде и периоде реконвалесценцнн у детей и подростков с кишечными инфекциями. Определены клннико-нммунологическне показатели, прогнозирующие течение кишечных инфекций у детей н подростков.

Внедрен не результатов работы в практику

Результата исследований отражены в 13 публикациях, в том числе 9 - в центральной печати, внедрены в работу МУ Г-Уфы Инфекционная клиническая больница №4, используются в учебном процессе на кафедрах инфекционных болезней с курсом дерматовенерологии ИПО, детских инфекционных болезней и лабораторной диагностики ИПО ГОУ ВПО «Ьлшкир-ский государственный медицинский университет Росздрава».

Апробации работы

Основные положения диссертации доложены на Республиканской конференции молодых ученых Республики ¡Башкортостан «Медицинская наука - 2004» (Уфа, 2004); Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией»(Санкт-Петербург, 2004); XIII международной конференции «Ферменты микроорганизмов: структура, функции, применение» (Казань, 2005); Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука - 2005» (Уфа, 2005); Всероссийской научно-практической конференции «Терапия инфекционных заболеваний у детей: нерешенные вопросы» (Саикт-Пе-ербург, 2005); II международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Моеква, 2005); Российской научно-практической конференции «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения н военной медицины» (Санкт-Петербург, 2006); симпозиуме в рамках Национальных дней лабораторной медицины России (Москва, 2006).

Работа апробирована на совместном заседании кафедр ннфекционних болезней с курсом дерматовенерологии ИПО, микробиологии с иммунологией и вирусологией* инфекционных болезней, детских инфекционных болезней, лабораторной диагностики ИПО ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росзлрава».

Структура и объём диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», трех глав собственных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, приложений. Работа изложена из 145 стран нцах машинописного текста, содержит 14 таблиц, 23 рисунка. Список литературы включает 226 источников: 75 отечественных и 151 зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Жеребцова, Надежда Юрьевна

104 ВЫВОДЫ

L Условно-патогенные Enterobactcriaceae, выделены при острых кишечных инфекциях у детей и подростков, откосились к родам Klebsiella spp,, Citrobacter spp., Enterobacter spp,, Morganelta morganii, Proteus spp., Mafnia atvei. Выделенные культуры обладали типичной биохимической активностью, 90% отличались полирезистентностыо - устойчивостью к 4-7 препаратам, одновременно, штаммы, несущие фрагменты генов «островов» патогенности, в 98,9% обладали множественной антнбнотикоустой-чивостью.

2. В 32*6% случаев у тестируемых бактерий выявлены фрагменты ДНК, специфичные для известных генов кластеров патогенности. Искомые ампликоиы при использовании праймеров к ЫуА обнаружены в 10,1% случаев, НЕуВ - в 11,2%* sfaG - в 9%, cnft - в 10,1%, estB - в 3,4%, Отмечены парные корреляции между генетическими детерминантами ЫуВ н спЛ (г = 0,59; Р<0,01), ЫуА и sfaG (г = 0,42; Р<0,05), но не estB н другими генами, Обнаружены прямые корреляционные свази между наличием фрагментов генов, детерминирующих адгезнны типа S (sfaG), и устойчивостью к тетрациклину (г ■ 0,21) и левомнцетнну (г » 0,35), estB - к карбеннциллину (г = 0,18), ЫуВ - к ампициллину (г - ОД 8),

3. Острые кишечные инфекции, вызванные условно-патогенными Enterabacteriaceac, составили 12,8-21,2% среди детей и подростков, госпитализированных в стационар с диагнозом «острая кишечная инфекция», чаще болели дети до трех лет (63%), Преобладали легкие (40%) н срсдне-тяжслые (57,1%) формы. Клинические проявления зависели от возраста заболевших и протекали у детей до трех лет в виде затяжного гастрознтсро-копкта (18%) и острого гастроэнтерита (82%), у детей дошкольного и школьного возраста по типу пищевых токсиконнфекций (31,4%) и острого гастроэнтерита (гастрознтероколита) (68,5%) и у подростков - чаще по типу ГГГИ (76,5%).

4. Внедрение условно-патогенных энтсробактсрий в организм индуцирует системную воспалительную реакцию, сопровождающуюся увеличением концентраций сывороточных цитокииов ИЛ-1р, ИЛ-6 и ФНО-а пропорционально форме тяжести, при этом изменение уровней ИЛ-1р и ФНО-а сопряжено со степенью интоксикации и лихорадкой, низкие значения ИЛ-6 сопровождают неосложненныс формы. Возрастание уровней ИЛ] р и ФНО-а сопоставимы, ИЛ-б - значительно ниже. Выявлены прямые корреляционные связи всех цитокннов между собой.

5. Наличие у возбудителя фрагментов генов ЫуВ, зГай. спЯ, а также множественной устойчивости к антибиотикам сопряжено с возрастанием тяжести кишечных инфекций: усилением синдрома интоксикации, проявляющегося высокими значениями и длительным сохранением лихорадки, упорной рвотой, воспалительными изменениями картины крови и пропорциональным возрастанием уровней сывороточных цитокннов ИЛ-10, ФНО-а, ИЛ-6, а также увеличением длительности диареи ннфекционно-воспалительного типа (наличие в стуле слизи, зелени и лейкоцитов).

П РАКТИЧЕСКИЕ PF. КОМ F. Н ДАЦИИ

1. Для расшифровки внутрибольничных кишечных инфекций и групповых вспышек острых кишечных инфекций, вызванных условно-патогенными энтеробактернями у детей и подростков, рекомендуется определение генетических маркеров cnfi, hlyB, hJyA, sfaG, estB,

2. Для оценки тяжести острых кишечных инфекций у детей дошкольного, школьного возраста и подростков и прогнозирования течения заболевания рекомендуется определения сывороточных цнтокинов ИЛ-Iß, ИЛ-б и ФНО-а в остром периоде и периоде рсконвалесцснцни. Значения цнтокинов в течение 0-72 часа от начала заболевания соответствующие легкой форме; ИЛ-Iß = 120-360 иг/мл; ФНО-а = 140-420 пг/мл; ИЛ-б = 2-10 пг/мл. Значения цитокннов в течение 0-72 часа от начала заболевания, соответствующие среднетяжелой форме; ИЛ-Iß ■ 580-1100 пг/мл; ФНО-а = 7201200 пг/мл; ИЛ-б = 20-55 пг/мл. Значения цнтокинов на 10-12 лень болезни соответствующие неосложненному течению: ИЛ-1 ß менее 50 пг/мл; ФНО-а менее 170 пг/мл; ИЛ-б менее 2 Л г/мл.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Острые кишечные инфекции у детей остаются актуальной проблемой, поскольку наносят большой ущерб здоровью детей и экономике страны. В настоящее время имеются многочисленные данные об этнологической роли условно-патогенных микроорганизмов, в том числе, представителей семейства ВтегоЬас(еласеае в развитии данных заболеваний у детей и подростков. Рост числа ОКИ, вызванных УПЭ, многие исследователи связывают с изменением патогенностн микроорганизмов, в том числе, на молскулярно-генетнческом уровне [8; 12; 36; 60].

В основе изменения патогенностн лежит структурная модификация ДНК, связанная с миграцией генетических детерминант «островов» патогенностн между бактериями [В}. Особенности структурной организации этих мобильных генетических элементов определяют высокую вероятность их экспрессии, а обнаружение нуклеотидных последовательностей ДНК, ассоциированных с генами «островов» патогснности может свидетельствовать об этнопатогенетической значимости клинического нзолята р«]

Накопленные многочисленные данные об этнологической роли ус-лов но-патогенных ЁШегоЬасСепасеае п ри диарейных заболеваниях могут указывать на наличие у них дискретных генов патогенностн, У патогенных вариантов гены патогенностн сгруппированы в составе мобильных генетических элементов - «островов» патогенностн, которые дегермннируют ключевые этапы взаимодействия возбудителя с макроорганизмом, включая адгезию, продукцию токсинов, ферментов «агрессин» [8]. Обнаружение «островов» патогенностн позволяет выявить группу энтеропатогенных бактерий, потенциально ответственных за развитие патологии в желудочно-кишечном тракте у детей. Показано наличие у клинических штаммов УПЭ, выделенных при ОКИ у детей и подростков, генетических детермннапт к некоторым факторам ггатогенностм, собранным в «острова» патогенное™ н обнаруживаемым у E.colj [30], Показана связь клнннчеекмх проявлений ОКИ у летей (синдрома интоксикации и типа диареи) с наличием у возбудителя ряда факторов - фрагментов генов hlyB, sfaG, cnfl и множественной устойчивости к антибактериальным препаратам.

Одной из важнейших в инфекционной патологии является проблема механизмов взаимодействия микро- и макроорганнзма. Регуляция иммунное ответа в ходе нормального функционирования иммунной системы осуществляется с помощью ЦТ. Хорошо известно, что любые инфекционные агенты, попадающие в организм, изменяют нормальное функционирование цитокн новой сети, вызывая в клетках-мишенях выработку определенного набора ЦТ, которые, в свою очередь, активируют клеточные популяции, участвующие в формировании иммунитета [27; 87; 224]. При внедрении возбудителя в организм синтезируются ряд про воспалительных ЦТ, среди которых ИЛ-ip, ИЛ-6, ФНО-а являются ведущими и определяют дальнейший прогноз заболевания. Показано, что острофазный ответ организма при неосложненных кишечных инфекциях сопровождается увеличением уровня провоспалительных цитокинов ИЛ-lp, ИЛ-6 и ФНО-а пропорционально тяжести заболевания, а также характеризуется быстрым развитием и коротким течением. Также показано, что при ОКИ у детей, независимо от -этиологического фактора, обнаруживаются однотипные изменение иммунологических показателей, которые являются отражением нормально реагирующей иммунной системы организма на внедрение бактериальных патогенов.

Анализ мультифакторных связей между феиотипнческнмн и геноти-пическими характеристиками культур и клннико-нмму но логическими особенностями вызываемых ими кишечных инфекций у детей показал, что тяжесть ОКИ определяется вкладом микро- и макроорпттма: наличие у возбудителя фрашентов генов hlyB, sfaG и cnfl, а также множественной устойчивости к антибиотикам сопряжено с возрастанием тяжести проявлений кишечных инфекций, а именно, усилением синдрома интоксикации, который в свою очередь проявляется величиной и продолжительностью лихорадки, длительным сохранением рвоты, воспалительными изменениями картины крови (повышением уровня СОЭ, количества лейкоцитов), пропорциональным возрастанием концентраций сывороточных цитоккнов ИЛ-10, ФНО-о и ИЛ-б и увеличением длительности диареи ннфекнионно-воспалнтсльного типа, на который указывает появление в стуле патоотогк-ческих примесей слизн, зелени и лейкоцитов, В большей степени данные взаимосвязи отражаются на течении кишечных инфекций у детей раннего возраста.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Жеребцова, Надежда Юрьевна, Москва

1. Андрейчнн, М-А. Бактериальные лиарсн ¡ М.А. Андрейчнн. ОЛ. Ива-хив. ■ Киев: Здоров'я, 1998. 412с,

2. Антнбнотнкорезистеитиость условно-патогенных эктсробактернй, выделенных в г.Уфе / А.К. Булгаков, ЗХ. Габидуллин, Т.С. Корюкова № др. // Актуальные вопросы инфекционной патологии: сб. научн. тр. -Уфа, 1998. С.98-99.

3. Боковой, А.Г, Роль условно-патогенных микроорганизмов в этиологии острых кишечных инфекций и проблема дисбактериоза кишечника у детей: автореф, дне. докт. мед, наук. М., 1991. - 35с.

4. Бондаренко, В.М. Гемолизины энтсробатерий и их связь с вирулентностью возбудителя / В.М. Бондаренко, В.В. Голубев // Журн. мнкребнол.- 1988, -№ПСЛОМ09.

5. Бондаренко, В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно-патогенных бактериях /В.М. Бондаренко // Журн. мнкробиол. 1997.- №4, С,20-2б.

6. Бондаренко, В,М. Факторы патогениости бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса / В.М. Бондаренко // Журн. мнкробиол. 1999,- №5. С.34-39,

7. Бондаренко, В.М, «Острова» патогениости бактерий i В.М. Бондаренко U Журн. мнкробиол. 2001, - №. - С.67-74.

8. Булгаков, А.К, Актибиотикоустойчивость условно-патогенных энтеро-бактерий / А-К- Булгаков, З.Г. Габидуллин // Здравоохранение Башкортостана. 2000. - №3. - С.55-58.

9. Бухарин, О.В. Перенстенция патогенных бактерий / О.В, Бухарин. М. Медицина, 1999. - С.370.

10. Васильев, Б.Я. Острые кишечные заболевания. Ротавнрусы и ротави-рус нам инфекция / Б.Я, Васильев, Р,И. Васильева, Ю.В, Ло&зин- СПб.: 2000,-272с.

11. Воробьев, А.А. Микробиология на рубеже XXI века / А.А. Воробьев, А.Л. Гинцбург, В М. Бондаренко // Врач. 2000. - №8.-С-3-7.

12. П.Воротынцева, Н.В. О классификации острых желудочно-кишечных инфекций у детей / Н.В. Воротыниева, J1.H. Милютина, О.А. Каншнна // Вопр. охраны материнства и детства. 1985. - Хяб- - С.63-67.

13. Н.Воротынцева, Н-В. Острые кишечные инфекции у детей / Н В. Воротыниева, JUL Маэанкова, М.: Медицина, 2001- - 480с,

14. Е7.Ппатуллина С.С. Условно-патогенные энтсробактсрнн при острых кишечных инфекциях у детей раннего возраста и совершенствование нх микробиологической диагностики: авторсф, дис. ,„ канд. мед. наук. -М., 1989. 24с.

15. Диагностика н комплексная терапия острых кишечных инфекций у детей / Пособие для врачей, Москва, 2000, - 50с.

16. Диагностика, прогнозирование течения и лечение острых кишечных инфекций условно-патогенной и смешанной этиологии / Методические рекомендации. Ленинград, 1990. - 28с.

17. Значение белков острой фазы воспаления в патогенезе острых кишечных инфекций / П-А. Каротам, Л.Н. Мазанкова, Т.Э. Боровик, М.И. Баканов // Детские инфекции. 2005. - №4. - С.24-28.

18. Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации за 2005 год // Детские инфекции. 2006. - №1. - С.З.

19. Кетлинский, С.А. Иммунология для врача / С.А. Кетлинский, М.Н. Калинина. СПб.: ТОО издательство «Гиппократ», 1998. - 156с.

20. Киселев, В.П. Кликнко-эпидемиологнческне особенности протейных поражений желудочно-кишечного тракта у детей раннего возраста / В.П. Киселев, В.А. Новиков, С.В. Левина 11 Острые кишечные инфекции у детей: респ. сб, науч. тр. Москва, 1989, - С. 104-107,

21. Клиника, диагностика, лечение, эпидемиология и противоэпидемические мероприятия при острых кишечных инфекциях, вызванных условно-патогенными бактериями у детей раннего возраста / Методические рекомендации. Москва, 1988. - 26с.

22. ЗО.Клиннко-микробнологнческие особенности острой кишечной микст-инфекции, вызванной бактериями Найна а Кта и ротавнрусом! Н М

23. Грачева, H,И. Леонтьева, В.М. Бондаренко и др. // Журн. микробнол. -2003 -Jfe2 ,-С,62-65.

24. Клнинио~эпидемиологическая характеристика заболеваний, вызванных бактериями рода Провнденция / C.B. Мартынов, Г.Н. Лунянова, Ф.С, Шлекская и др. Н Острые кишечные инфекции: респ. сб. науч. тр. -Ленинград, 1982,-Вып.б,-С,152-154,

25. Клнннческая лабораторная аналитика, В 4 т. T. IV. Частные клинические технологии в клинической лаборатории / под ред. В.В. Мельникова. М.: Агат-Мед, 2003. - 81бс.

26. Красноголовец, В Н. Клебсиеллезныс инфекции / В.Н. Красноголовец, B.C. Киселева. M., 1996. - 254с.

27. Лаборзторко-клнннчсскос изучение клебсиеллезов у детей раннего возраста / И.МХомснко, В. П. Каминская, Л Л. Тупицнна и др.| И Острые кишечные инфекции: респ. сб. науч. тр. Ленинград, 1985 - Вып.9. -СЛ 49-151,

28. ЗЗ.Лтннскнй, Ю.И. Трудности лабораторио-этиодогической диагностики спорадических днарейных заболеваний / Ю.И, Литннский, Л .П. Юрко, U.M. Юдицкая И Острые кишечные инфекции вирусно-бактернальной природы: сб. науч. тр. М., 1988. - С.61 -66.

29. Мавзютов, А.Р. «Острова» патогенности условно-патогенных эптеро-бактерий / А.Р. Мавзютов, C.B. Фиалкнна, В.М. Бондаренко И Журн. микробиол. 2002, - №6. - С,5-9,

30. Маянскнй, А.Н. Микробиология для врачей (очерки патогенетической микробиологии) / А.Н. Маянскнй, Нижний Новгород: НГМА, 1999. -400с.

31. В. Маянскнй, А.Н. Реактивность и медиаторные функции ннтсстинальных эпителиощггов в системе мукозального гомеостаза / А.Н. Маянскнй, И В. Маянская // Иммунология. 2004. - №3. - С. 185-191.

32. Ос-фые кишечные инфекции, вызванные условно-патогенными микроорганизмами / Бсрнасовская Е,П„ Бычковский В.Н., Бндненко С,И- и др.. Кнев: Здоров1*, 1984. - 152с,

33. Патогенетическое значение микробного протеолнза при кишечных инфекциях у детей / Л,Н- Мазанкова, А Н, Запрудиов, Е,М. Горская. H B. Вороты ицева // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1997. - №3. -С.28-32,

34. Пстровская, В.Г. Адгезнны знтеротокснгеиных кишечных палочек: роль в патогенезе диарей и генетический контроль / В.Г. Петровская, В М Бондаренко // Жури, мнкробнол, 1990. - №5, - С. 110-117.

35. Пстровская, В.Г. Энтеротокснны энтеротокенгенных Escherichia coli: характеристика, механизм действия и теистический контроль / В.Г. Петровская, В.М, Бондаренко // Жури, мнкробнол. 1990. - №7. - С92-98,

36. Петровская, В,Г. Общие принципы генетического контроля патогенно-сти бактерий / В.Г. Петровская, В.М Бондаренко // Журн, мнкробнол -1994. №3, - С. 106-110.

37. Плазмида резистентности Klebsiella pneumoniae, контролирующая цнто-токсическую активность / КВ Калнин, Л.И. Глатман, В.М. Бонщаренко и др. Ч Жури. Мнкробиол, 1992. - №2, - С. 12-14.

38. Поли карпов. H.A. Биологические свойства условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от больных острыми кишечными заболеваниями / H.A. Поликарпов // Жури, мнкробиол. 1987- - №8. - С. 19-23.

39. Полоцкий, Ю.Е. Патогенез кишечных инфекций и морфологическая оценка вакцин / Ю.Е. Полоцкий, В.М. Бондаренко, В.Е. Ефремов // Журн мнкробиол. 1992. - №5. - С.51-57,

40. Практические аспекты современной клинической микробиологии t Л.З. Скала, С В. Сидоренко, АХ. Нехорошева и др.. Москва, 2004, - 312с.

41. Роль условно-патогенных микроограннзмов в возникновении острых кишечных заболеваний / Л.И. Бахарева, Л,Я, Эберт, ГЛ. Черепанова и др. / Клин. Медицина. 1983, - №6, - С.74-78.

42. Ряпнс, Л.А. Микробиологические и популяцнонно-генетнческне аспекты патогенностн бактерий / Л-А. Ряпис, A.B. Лнтникнй Ii Журн, Мнкробиол- 1998.-,№6.-С.109-113.

43. Сергевннн, В.И Этиологическая структура и этиологическая классификация острых кишечных инфекций / В.И. Сергевннн И Эпидемиология н инфекционные болезни. 1997. - №6. - С.8-10.

44. Способность штаммов Citrobacter freundii, выделенных при острых кишечных инфекциях, к LT энтеротокеннообразованкю / В.М. Бондаренко, И.Т. Тимофеева, С.А. Колесников и др. Н Жури- мнкробиол. 1986. - №11.-С.12-15.

45. Сравнительное изучение диагностических методов при кишечных инфекциях у детей раннего возраста / Л,Н. Пайманова, H.A. Бударина, Р.И. Рудакова и др. // Съезд врачей-инфекционистов в г.Суздале: мат. съезда. Москва - Киров, 1992. - Т. I. - С.296.

46. Тец, В,В. Борисов Л,Б. Влияние R плазмнд на популяционную изменчивость бактерий / Острые кишечные инфекции: респ. сб, науч. тр. Л., Изд. инст. им Пастера, 1985, - Вып. 9, - С.98-103.

47. Учайкнн, В.Ф. Новые технологии в диагностике, лечении и профилактике инфекционных болезней у детей / В.Ф. Учайкин // Педиатрия. -1995, №4. - С.37-44.

48. Учайкнн, В.Ф. Решенные и нерешенные проблемы инфекционной патологии у детей / В.Ф, Учайкин // Педиатрия. 2004. - №4. - С.7-11.

49. Ферменты патогенности клинических штаммов Klebsiella pneumoniae f О,В, Люпова, В.М Бондаренко, H.A. Поликарпов и др. И Жури, мик-робиол. 1999. - №2. - C.5-S.

50. Фролов, А.Ф. Новые принципы н критерии оценки патогенных и условно-патогенных микроорганизмов I А.Ф. Фролов, A.M. Зарнцкнй, IO.M. Фельдман Н Журн. мнкробиол, 1986. - №9. - С-93-97,

51. Хаитов, P.M. Современные представления о защите организма от инфекции ! Р.М, Хаитов, Б,В. Пннсгии И Иммунология. 2000. - №1- -С.61-64.

52. Характернстика адгезивных свойств бактерий рода Morganetla morgan» I Д.Т. Гзшнмова, З.Г. Габидуллнн, А.Р. Мавзютов, А,К. Булгаков II Актуальные вопросы инфекционной патологии: сб. научн. тр. Уфа, 1998. • С 100-101.

53. Частота обнаружения клебсиелл н протеев в фекалиях детей, больных кишечными инфекциями / Л.В. Феклисова, Н.А. Курносова, В.М. Ше-бекова (и др. // Острые кишечные инфекции вирус но-бактернальиой природы: сб. науч. тр. М„ 1988. - CJ2I-24.

54. Черкасский, БЛ Эпидемиология зшерихиозов в Российской Федерации / Б .Л, Черкасский // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2002. -№5.- С,б-10.

55. Шаханика, И,Л. «Стандартные» величины экономического ущерба, наносимого инфекционными болезнями I ИЛ. Шаханииа, Л,А, Осипов» Н Эпидемиология и инфекционные болезни. 1999. - №5, - С Л 4.

56. Эпидемиологическая характеристика клебсиеллезиых кишечных инфекций у новорожденных / И.Г. Техова, Л.П, Зуева, Р.Х- Яфаев и др. Н Острые кишечные инфекции: респ. сб. науч. тр. Ленинград, 1990. -Вып.13. -С.10-12.

57. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий I В.Ю. Лнт&ин, А.Л. Гннцбург, В.М. Пушкарсва (н др.. Москва: Фарм ару с - принт, 1997. -226с.

58. Ющук, Н.Д. Острые инфекционные диареи / Н-Д, Ющук, Л.Е. Бродов // Рос. журн. гастрознтерол., гепатол., колопроктол. 2000. - №6. - С-22-27,

59. Ярнлнн, А.А. Система цнтокииов н принципы ее функционирования в норме и патологии / А.А, Ярнлин // Иммунология. 1997. - №5. - С.7-14.

60. A betwecn~specic3 comparison of antimicrobial resistance in enterobacteria in fecal flora / M- 6stcrbtad, A. Hakanen, R. Manninen Jet al,. И Antira-icrob. Agents Chemother- 2000. - Vol. 44. - P. 1479-1484.

61. A distinct array of proinflammatory cytokines is expressed in human colon epithelial cells in response to bacterial invasion / H.C. Jung, L. Eckmann» S.K. Yang et ai. //1, Clin. Invest, 1995. - Vol. 95. - P.55-65.

62. A small outbreak of third generation cerhem-resistant Citobacter freundii infection on a surgical ward / T. Nada, IL Baba, K.Kawamura et al.J U Jpn. J. Infect. Djs. 2004, - Vol. 57. - P. 181-182,

63. Age-dependent levels of select immunological mediators in sera of healthy children / IL Sack, U. Burkhardt, M. Borte el al.J // Clin. Diagn. Lab. immun. -1998. Vol. 5, No. 1. - P.28-32.

64. Age-related differences in receptors for E.coli heat-stable enterotoxin in small and large intestine of children / N-B. Cohen, A. Cuarino, R. Shulka, R.A. Gianetla // Gastroenterology, 1988, - Vol. 94. - P.367-373.

65. A!-Awqati, Q. Alternative treatment for secretory diarrhea revealed in a new class of CFTR inhibitors / Q. Al-Awqati fl J. Clin, invest 2002. - Vol. 110, No, 11.-P.I599-16Q1.

66. Albert, MX Association of Providencia alcalifaciens with diarrhea in children / M.J. Albert, A.S.G. Faroque, D.Mahalanabis H J. Clin. Microbiol, -1998. Vol. 36, No. 5. - P. 1433-1435.

67. Ananthan, S- Enteroxigenicily of Klebsiella pneumoniae associated with childhood gastroenteritis in Madras, India / S. Ananthan, S, Raju, S, Ala-vandi //Jpn. J. Infect. Dis. -1999. Vol. 52. - P. 16-11.

68. Archer, D.L. Contemporary issues: diseases with a food vector / D.I. Archer, F.E. Young // Clin. Microbiol. Rev. 1988. - Vol. 1, No. 4. - P377-398.

69. Bacteria! ltpopolysaccharidc-induced intestinal microvascular lesions leading to aculc diarrhea / V.J. Mathan, G.R. Penny, M M, Maüian, D. Row-ley! // J. Clin. Invest. 1988.-Vol, 82.-P.I 714-1721.

70. Bacterial modultns: a novel class of virolence factors which cause host tissue pathology by inducing cytokine syntesis / B. Henderson, S. Poole, M. Wilson // Microbiol. Rev, 1996. - Vol. 60, No. 2. - P.316-341.

71. Betleyt MJ. Genetics of bacterial enterotoxins f M.J. Betley, V.L. Miller, J J. Mekalanos tl Ann. Rev. Microbiol. 1986. - Vol. 40, - P577-605.

72. Bhutla, 2. A. Plasma cytokines in paediatric typhoidal salmonellosis: correlation with clinical course and outcome / Z.A. Bhutta. N. Mansoorali, R. Hus-sain // J. Infect. 1997. - Vol. 35, No, 3. - P.253-256.

73. Biochemical identification of new species and biogroups of Enterobacte-riaceae isolated from clinical specimens / JJ. Farmer III, B.R. Davis, F.W, Hickman-Brenner et al. II I Clin. Microbiol. 1985. - Vol. 21, No. I, -P.46-76,

74. Bloody diarrhea caused by Klepsiella pneumoniae: a new mechanisms of bacterial virulence / F. Guerin, C. Le Bouguenec, J. Gilquin et al. ft Clin, infect. Dis 1998 . - Vol. 27, -P 648-649.

75. Bouvet, J.-P, Diversity of antibody-mediated immunity at the mucosal barrier / J.-P. Bouvet, V.A. Fischetti II Infect, Immun. 1999. - Vol. 67, No. 6. -P.2687-2691.

76. Braun, V. Serratia marcescerw forms a new type of cytolysin / V. Braun, S. Hobbie, R- Ondraczek // FEMS Microbiol. Lett. 1992. - Vol. 100, No. 13. -P.299-305.

77. Casadcvall, A. Host-pathogen interactions: basic concepts of microbial commensal ism. colonization, infection, and disease / A. Casadevall, L.-A, Pi-rofski//Infect. Immun. -2000. Vol. 68,No. 12.- P.65H-6518.

78. Characteristics and mechanism of action of a heat-stable entcrotoxin produced by Klebsiella pneumoniae from infants with secretory diarrhea / A. Guarino, S. Guandalini, M. Alessio {et al.J // Pediatric research. 1989. -Vol. 25.-P.514-518.

79. Characterization of the roles of hemolysin and other toxins in enteropathy caused by atpha-hemolytic Escherichia coli linked to human diarrhea / S.J. Elliott, s. Srinivas. M.J, Albert et al.J // Infect. Immun. 1998, - Vol. 66, No. 5. - P.2040-2051,

80. Chen, H.D. Enteropathogenic Escherichia coli: unravelling pathogenesis I H.D, Chen, G, Frankel // FEMS Microbiol. Rev. 2005. - Vol. 29, No. 1. -P.83-98.

81. Citrobacter rodentium espB is necessary for signal transduction and for infection of laboratory mice / J,V, Newman, B,A, Zabel, S.S. Jha. D.B. Seauer// Infect. Immun. -1999, Vol. 67, No. 11, - P.6019-6025.

82. Citrobacter rodentium infection in mice elicits a mucosal Thl cytokine response and lesions simitar to those in murine inflammatory bowel disease / L.M. Higgins, G, Frankel, G, Douce et at. И Infect, Immun, 1999. - Vol, 67, No, 6. - P 3031-3039.

83. Clearance of Citrobacter rodentium requires В cells but not secretory immunoglobulin A (igA) or IgM antibodies ! C. Maaser, M.P. Housley, M. Iimura et al.J // Infect. Immun. 2004, - Vol. 72, No. б. - P.3315-3324.

84. Concentrations of intcrleukin 6 and tumour necrosis factor in scrum and stools of children with shigella dysenteriae 1 infection / D,G. De Silva, L.N. MendisT N. Sheron fet al. // GuL 1993. - Vol. 34, No. 2. - P.194-198.

85. Creating and maintaining the gastrointestinal ecosystem: what we know and need to know from gnolobiology i P.G. Falk, L.V. Hooper, T. Midtvedt, JX Gordon // Microbiol. Molec. Biol. Rev. 1998. - Vol. 62, No. 4. -P.U57-II70,

86. Cytokine secretion in acute shigellosis is correlated to disease activity and directed more to stool than to plasma / R, Raqib, B. Wrctlind, J. Andersson, A.A. Lindberg U J. Infect Dis. 1995. - Vol. 171, No. 2. - P.376-384.

87. Cytokines as mediators for or effectors against rotavirus disease in children / B. Jiang, L. Snipes-Magaldi, P. Dennehy et al. // Clin, Diagn. Lab. Tmmun, 2003. - Vol 10, No. 6. - P.995-1001.

88. Davcy, M.E- Microbial bioPlms: from ecology to molecular genetics / M E. Davcy. G.A. OToole U Microbiol. Molec. Biol. Rev. 2000. - Vol. 64, No. 4. - P.847-867.

89. Dinarello, C A. Fever: links with an ancient receptor / C.A. DinarelEo, S, Gatti, T. Bartfai II Current Biology. 1999. - Vol. 9. -P,RI47~RI50.

90. Distribution of heat-stable enterotoxin / guanylin receptor in the intestinal tract of man and other mammals / WJ. Krause, GX. CulHngford, R.H. Freeman fet al. // J, Anal, 1994. - Vol, 184. - P.407-417,

91. Dubreuil, J.D. Escherichia coli STb cnterotoxin / J,D, Dubreuil ff Microbiology.- 1997.— Vol. 143. P.l 783-1795,

92. Eädels, L. Membrane receptors for bacterial toxins / L. Eidels, R,L Proia,, D.A. Hart ii Microbiol. Rev. 1983, - Vol. 47, No. 4. -P,596-620.

93. Enterotoxic activity of Klebsiella oxytoca cytotoxin in rabbit intestinal loops ! J. Miriami, S.-I. Katayama, O, Matsushita et al. // Infect Immun. -1994, Vol. 62, No. 1.-P. 172-177.

94. Enteroloxicity and cytotoxicity of Vibrio parahaemotyticus thermostable direct hemolysin in vitro systems / F. Raimondi, J.P.Y. Kao, C- Fiorentini (et al. // Infect. Immun, 2000. - Vol 68, No. 6, - P.3180-3185.

95. Expression of inümin g from enterohemorrhagic Escherichia coli in Citrobacter rodentium / E.L, Hartland, V. Hunter, L.M. Higgins et al.j U Infect Immun. 2000. - Vol. 68. No. 8. - P.4637^»646.

96. Expression of P* S, and F1C adhesins by cytotoxic necrotizing factor 1-producing Escherichia coli from septicemic and diaiTheic pigs / C.M. Dozois,

97. S, Clément, C. Desautels et al. // FEMS Microbiol, Lett, 1997. - Vol 152.-P.307-312.

98. Feranchak, A.P, Ion channels in digestive health and disease / A.P. Feranchak //}. Pediatr. Gastroenter. Nutr. 2003. - Vol. 37. - P.230-241.

99. Field, M. Intestinal ion transport and the pathophysiology of diarrhea / M. Field //J. Clin, Invest 2003. - Vol. Ill, No. 7.-P.931-943.

100. Fini ay, BB. Common themes in microbial pathogenicity / B,B, Finlay, S. Falkow // Microbiol. Rev. -1989. Vol. 53t No. 2, - P.210-230.

101. Finlay, B.B. Common themes in microbial pathogenicity revîsited / B.B. Finlay, S. Falkow U Microbiol. Molec. Biol. Rev . 1997. - Vol. 61, No. 2. -P, 137-169.

102. Fleckenstein, J.M. Breaching the mucosal barrier by stealth: an emerging pathogenic mechanism for enteroadherent bacterial pathogens ! J.M. Fleckenstein, DJ. Kopecko !l J. Clin. Invest, 2001. - Vol. 107, No , 1, - P.27-30.

103. Guarner, F. Gut flora in health and disease ( F. Guamer. J.-R. Malagelada tl LanceL 2003. - Vol, 360. - P.512-519.

104. Guerrant, RX. Practice guidelines for the management of infectious diarrhea 1 R.L. Guerrant, T. Van Gilder, T.S. Steiner U Clin, Infect. Dis. 2001 -Vol. 32.-P.331-350,

105. Hacker, J. Pathogenicity i$lands and the evolution of microbes / J. Hacker, LB Kaper U Annu- Rev. Microbiol, 2000, - Vol. 54. - P 641-679.

106. Hafnia alvei in stool specimens from patients with diarrhea and healthy controls J J. RidcJI, A. Sirionen, L. Paulin fei al.J №. Clin. Microbiol, 1994 -Vol, 32, No. 9. - P.2335-2337.

107. Hafnia alvei, a probable cause or diarrhea in humans / MX Albert, K. Atam, M- Islam et al. // Infect, Immun, 1991. - Vol. 59, No. 4. - P.5017-5024.

108. Harrison, L.M. Regulation of proinflammatory cytokine expression by shiga toxin 1 and/or lipopolysaccharides in the human monocytic cell line THP-I / L.M. Harrison, W.C.E. Van Haaftcn, V.L. Tesh // Infect. Immun. -2004. Vol, 72, No. 5. - P.261 £-2627,

109. Heterogeneity in phenotypic and genotypic characteristics among strains of Hafnia alvei / A- Ismaili, B. Bourke, J.C.S- De Azavedo cl al.J //J. Clin, Microbiol. 1996. - Vol. 34, No. 12. - P.2973-2979.

110. Host susceptibility to the attaching and effacing bacterial pathogen Citro-bacter rodentium / B.A. Val lance, W. Deng, K. Jacobson, 8-B. Frnlay // In-fed. Immun. 2003 . - Vol. 71. No. 6, - P.3443-3453.

111. Human monocytes kill shigella flexrveri but then die by apoptosis associated with suppression of proinflammatory cytokine production / L.J, Hathaway, G.E. Griffin, P.J, Sansonetti, J.D. Edgeworth // Infect, Immun, 2002. -Vol. 70, No. 7. - P.3833-3842.

112. Hurley. J.C. Endotoxemia: methods of detection and clinical correlates / J.C. Hurley //Clin. Microbiol. Rev. 1995, - Vol. 8, No. 2. - P.268-292.

113. Inierleukin-6, gamma interferon and tumor necrosis factor receptors in typhoid fever related to outcome of antimicrobial therapy / T. Butter, M. Ho, G, Acharya (et al,J t! Antimicrob. Agents Chemother, 1993. - Vol. 37, No. 11. - P.2418-2421,

114. Intestinal epithelial responses to enteric pathogens; effects on the light junction barrier, ion transport, and inflammation / J, Berkes, V.K Viswana-than, S.D. Savkovic, G. Hecht // Gut 2003, - Vol. 52, -P.439-451.

115. Intimin-specifk immune responses prevent bacterial colonization by the attaehing-efTacing pathogen Citrobacter rodentium / M- Ghacm-Maghami, C.P. Simmons, S. Danictl et al,. // Infect, Immun. 2001. - Vol, 69, No, 9. -P.5597-5605.

116. Isolation of Providencia heimbachac from human feces t C.M. O'Hara, AG, Steigerwalt, D, Green et al. ft J. Clin, Microbiol 1999. - Vol. 37, No. 9, - P J 048-3050.

117. KagnofT, M.F, Epithelial cells as sensors for microbial infection ! M.F. Kagnoff, L, Eckmann Hi, Clin. Invest. 1997. - Vol. 100, No. 1.-P.6-10.

118. Kaltenbach, G. Antibiotic-associated diarrhea in the elderly / G, Kaltenbach, D, Heitz U La revue de médecine interne. 2004, - Vol. 25. - P.46-53.

119. Kandil, H.M. Tumour necrosis factor alpha changes porcine intestinal ion transport through a paracrine mechanism involving prostaglandins / H.M, Kandil, H.M. Berechneter, R.A. Argenzio // Gut. 1994, - Vol. 35, - P.934-940.

120. Klebsiella oxytoca as an agent of antibiotic-assoc i ated hemorrhagic colitis / L. Beaugerie, M, Metz, F.Barbut ct al,. tl Clin. Gastroent. Hepatol, 2003. - Vol, l. No. 5.- P.370-376.

121. Klebsiella pneumoniae gastroenteritis masked by Clostridium perfringens / R.P. Rennte, C.M. Anderson, B.G. Wensley jet al.J //J. Clin. Microbiol. -1990. Vol. 28t No. 2. - P216-219,

122. Klipstein, F.A. Purification and properties of Klebsiella pneumoniae heat-stable enteroioxin / FA. Klipstein, R.F, Hngert // Infect- Immun, 1976. -Vol. 13, No. 2.-P, 373-381.

123. Klipstein, F.A. Partial purification and properties of Enterobacter cloacae heat-stable enterotoxin / F.A. Klipstein, RF. Engen H Infect- Immun, 1976. -Vol, 13, No, 5,-P. 1307-1314.

124. Klipstein, F.A. Immunological interrelationships between cholera toxin and the heat-labile and heat-stable enteroLoxins of coliform bacteria / F.A. Klipstein, RF. Engcrt// Infect- Immun. -1977. Vol, 18, No. I. - P.l 10-117.

125. Klipstein, F.A. Immunological properties of purified Klebsiella pneumoniae heat-stable / F.A Klipstein, R.F. Engen, R.A. Houghten // infect. Immun. 1983. - Vol, 42, No. 2. - P.838-841,

126. Kunzelmann, K. First encounter: how pathogens compromise epithelial transport t K. Kurizelmann, B. McMorran U Physioligy. 2004. - Vol. 19. -P.240-244.

127. Kutukculer, N. Tumor necrosis factor-oi and interieukin-6 tn stools of children with bacterial and viral gastroenteritis / N. Kutukculer, 5. Caglayan I! L Pediatr, Gastr, Nutrition. 1997. - Vol. 25, No. 5. - P556-557.

128. Lipopotysaccharide from Klebsiella pneumoniae inhibits Na* absorption in canine tracheal epithelium / J, Tamaoki, N. Sakai, K. bono et al,. // Infect, Immun 1991. - Vol. 59, No. 2. - P.7I6-7I7.

129. Lucey, D.R- Type 1 and type 2 cytokine dysrcgulation in human infectious, neoplastic, and inflammatory diseases / D.R. Lucey, M. Clerici, G.M. Shearer //Clin. Microbiol. Rev. 1996, - Vol. 9. No, 4. - P.532-562.

130. Mammarappallil, J.G. Epithelial cell adherence mediated by the enterotoxigenic Escherichia coli tia protein / J.G. Mammarappallil, E-A. Elsing-horst// Infect. Immun. 2000. - Vol, 68, No, 12. - P.6595-6601,

131. Martinez, J,L, Interactions among strategies associated with bacterial infection: pathogenicity, epidemicity and antibiotic resistance / LL. Martinez. F. Baqucro // Clin. Microbiol. Rev. 2002, - Vol. 15. No. 4. - P.647-679.

132. McCracken. VJ. The gastrointestinal ecosystem: a precarious alliance among epithelium, immunity and microbioia / V.J. McCracken, R-G. Lorenz // Cell. Microbiol, 2001. - Vol, 3, No, 1. - P. 1 -11.

133. McKay, D.M. Cytokine regulation of epithelial permeability and ion transpon / D.M. McKay, A.W. Baird // Gut- 1999. - Vol. 44. - P,283-289.

134. Mechanisms and management of antibiotic-associated diarrhea I C. Ho-genauer, RF. Hammer, G.J. Krejs, E.C, Reisinger // Clin. Infect. Djs, 1998. -Vol. 27.-P.702-710.

135. Mecsas, J. Molecular mechanisms of bacterial virulence: type III secretion and pathogenicity islands I J. Mecsas, E.J. Strauss // Emerging Infectious Diseases, 1996. - Vol, 2, No. 4. - P.271-288.

136. Microbial contamination of enteral feeding formulas and diarrhea I T. Okuma, M. Nakamura, H. Totake, Y. Fukunaga // Nutrition. 2000. - Vol, I6,-P.7l9w722.

137. Müller, ELE. Occurrence and pathogenic role of Morganella-Proteus-Providencia group bacteria in human feces / H.E, Müller // J. Clin. Microbiol, 1986. - Vol. 23, No. 2. - P.404-405.

138. Nalaro, LP. Diarrheagentc Escherichia coli / LP, Nataro, LB. Kaper H Clin, Microbiol. Rev, 1998. - Vol. 11, No. I. - P. 142-201.

139. Necrotising enterocolitis: is there a relationship to specific pathogens? / C-S. Peter, M, Feuerhahn, B. Bohnhorst (ei al.J I I Eur. J. Pedlatr. 1999. -Vol. 158. - P.67-70,

140. O'Bbrien, A.D. Shiga and shiga-likc toxins / A.D. O'Bbrien, R.K, Holmes t! Microbiol. Rev. 1987. - Vol. 51. No. 2, - P.206-220,

141. Oprins, J.CÍ. TNF-a potentiates the ion secretion induced by muscarinic receptor activation in HT29cl.l9A cells / J.CJ. Oprins, HP. Meijer, J.A. Groot // Am. J, Physiol. Cell Physiol. 2000. - Vol. 278. - PC463-C472.

142. Outbreak of infection with extcnded-spcctrum lactamase-producing Klebsiella pneumoniae in a Mexican hospital f J. Silva, R. Gatica, C. Aguí Jar et at . HI Clinic. Microbiol, 2001, - Vol. 39, No. 9. - P.3193-3196.

143. Outbreak of necrotizing enterocolitis associated with Enterobacter saka-zakii in powdered milk formula / J.V. Acker, F. De Smet, G. Muyldermans et al .//J. Clin. Microbiol,-2001.- Vol. 39,No. I.- P.293-297.

144. Owens, D.R. Isolation of Edwardsiella tarda from swine / D,R, Owens, S.L. Nelson, J.B. Addison U Appl. Microbiol. 1974. - Vol. 27, No. 4. -P.703-705.

145. Pathogenesis of Providencia alcalifaciens-induccd diarrhea / MJ. Albert, K. Alam, M. Ansaruzzaman et al.) H Infect. Immun. 1992. - Vol. 60, No. 12. - P.5017-5024.

146. Pathogenic properties of Edwardsiella spccies / J.M- Janda, S.L, Abbott, S. Kroske-Bystrom et aL. H L Clin. Microbiol. 1991. - Vol. 29, No. 9. -P. 1997-2001.

147. Pathogenicity islands of virulent bacteria: structure, function and impact on microbal evolution / J. Hacker, G. Blum-Oehler, I. Mulhldorfer, H. Tschape II Mol, Microbiol. -1997. Vol. 23, No. 6. - P. 1089-1097.

148. Paton, J.C, Pathogenesis and diagnosis of shiga toxin-producing Escherichia coti infections / J.C Paton, A.W. Paton // Clin. Microbiol. Rev. -1998. Vol 11, No. 3. - P.450-479.

149. Persistence of local cytokine production in shigellosis in acute and convalescent stages / R. Raqib, A.A. Lindberg, B, Wretlind et al.J // Infect. Immun 1995. - Vol, 63, No . 1. - P.289-296.

150. Production and purification of beat-stable entcrotoxin b from a porcine escherichia coli strain / J.D. Dubreuil, J.M. Fairbrodier, R. Lallier, S. Lariviere// Infect. Immun. 199 L - Vol. 59T No. I. - P.398-203.

151. Production of acylated homoscrine lactones by psychrotrophic members of the Enterobacteriaceae isolated from foods / L. Gram, A.B. Christensen, L. Ravn {et al.J // Appl. Envir. Microbiol. 1999. - Vol. 65, No. 8. - P.3458-3463,

152. Production of Escherichia coll STa-like heat-stable entcrotoxin by Citrobacter frcundii isolated from humans / A. Guarino, G. Capano, B, Mala-misura et al.J // J. Clin. Microbiol. 1987. - Vol. 25, No. I. - P. 110-114.

153. Protective role of interleulrin-6 during Yersinia cntcrocolitica infection is mediated through the modulation of inflammatory cytokines / P.H. Dube, S.A. Handley, J. Lewis, V.L. Miller // Infect. Immun. 2004. - Vol. 72, No 6. - P.3561-3570.

154. Rate of occurrence and pathogenic effect of enteroaggregative escherichia coti virulence factors in international travelers / Z.-D, Jiang, D. Grccnberg, J.P. Nataro et al.J it J. Clin. Microbiol. 2002. - Vol. 40, No. 11. - P.4I85-4190.

155. Ratnam, S, Eliotogic role of Hafhia aJvei in human diarrheal illness; letter to the editor / S. Ratnam // InfecL Immun. 1991. - Vol. 59T No.12, - P.4744.

156. E9., RcctaJ nitric oxide gas and stool cytokine levels during the course of in* feet ions gastroenteritis / A. Enocksson, J. Lundberg, E. Weiteberg et al J II Clin. Diagn. Lab, Immun, 2004, - Vol. 11. No. 2. - P.250-254.

157. Role of Proteeae in diarrheal disease; letters to the editor / P.M. Hawkey, J. Haynes, J. Heritage, LL. Penner // J. Clin, Microbiol. 1986, - Vol. 24. -P.504.

158. Role of the ceram i de-signaling pathway in cytokinr responses to P-ftmbriated Escherichia coli / M. Hedlund, M. Svensson, A, Nüsson, R.-D. Duan III Exp. Med. -1996. Vol 183. - P. 1037-1044.

159. Roth, J, Fever induction pathways; evidence from responses to systemic or local cytokine formation / J. Roth, G.E.P. De Souza ft Brazil. J, Med. Biol. Res. 2001, - Vol. 34. - P JO 1-314.

160. Rózalski, A. Potential virulence factors of Proteus bacilli / A. Rózalski, Z. Sidorczyk, K Kotelko 1/ Microbiol. Molec. Biol. Rev. 1997. - Vol. 61. No. 1.-P.65-89.

161. Safdar, A. Infectious diarrhea in the Southeastern United Slates 19982000 / A. Safdar // Clin. Infect. Dis. 2003. - Vol. 36. - P533-534.

162. Sanders. W.E. Enterobacter spp.: pathogens poised to flourish at the turn of the century / W.E. Sanders, CC. Sanders ft Clin. Microbiol. Rev. 1997. -Vol. 10, No, 2. - P.220-24I.

163. Savkovic, S.D. Activation of NF-kB in intestinal epithelial cells by en-teropathogenic Escherichia coli f S.D. Savkovic, A. Koutsouris, G. Hecht ft Am. J, Physiol, -1997. Vol. 273. - P.CI 160-Cl 167,

164. Schauer, D,B, Attaching and effacing locus of a Citrobacter freundii biotype that causes transmissible murine colonic hyperplasia / D.B. Schauer, S, Falkow // Infect, Immun, 1993. - Vol. 61, No. 6. - P.2486-2492.

165. Schmitt, C-K- Bacterial toxins: friends or foes? / C .K.Schmitt, K.C. Mey-sick, A.D. O'Brien H Emerging Infectious Diseases. 1 999. - Vol. 5, No. 2. -P.224-233.

166. Sears, C.L. Enteric bacterial toxins: mechanisms of action and linkage to intestinal secretion / C.L. Scars, JB. Kaper // Microbiol. Rev. 19%. - Vol. 60, No. 1. - P. 167-215.

167. Shiga toxins stimulate secretion of interleukin-8 from intestinal epithelial cells I C.M. Thorpe, B.P. Hurley, L.L. Lincicome et ah. // Infect. Immun. -1999. Vol. 67, No. 11 - P.5985-5993.

168. Shiga-like toxin il-relaled cytotoxins in Citrobacter freundii strains from humans and beef samples / H Schmidt, M. Montag, J. Bockemuhl et ah. // Infect- Immun. 1993. -Vol. 61, No. 2. -P.534-543.

169. Simmons, C P. Understanding mucosal responsiveness: lessons from enteric bacterial pathogens / C-P. Simmons, S. Clare, G. Dougan // Seminars in Immunology. 2001. - Vol. 13. - P.201-209.

170. Soto, G.E. Bacterial adhesins: common themes and variations in architecture and assembly / G.E. Soto, SJ. Hultgren // J. Bacteriol. 1999. - Vol. 181, No. 4. -P. 1059-1071.

171. Srinivasa, R.P.S. Functional genomics approach to the identification of virulence genes involved in Edwardsiella tarda pathogenesis / R.P.S. Srinivasa, T.M, Um, K.Y. heung // Infect. Immun. 2003 - Vol. 71, No. 3. -P. 1343—3 351

172. Strauss, E J. An Edwardsiella tarda strain containing a mutation in a gene with homology to shlB and hpmB is defective for entry into epithelial cells in culture / EJ. Strauss, N. Ghori, S. Palkow // Infect, Immun. 1997, - Vol. 65. - P.3924—3932,

173. Structural and functional features of modified heat-stable toxins produced by cntcropathogenic Klebsiella cells / F. Albano, M.R. Thompson, S, Orru Jet ah. // Pediatr. Res. 2000. - Vol. 48. No. 5. - P,685-690.

174. Structure of the bundle-forming pilis from enteropathogenic Escherichia coli I S, Ramboarina, P.J, Femandes. S, Daniel 11 el al. // J. Biol. Chem. -2005- Vol. 280, No. 48. - P.40252-40260,

175. Swiatlo, E. Role of Proteeae in diarrheal disease; letters to the editor / E, Swiatlo // J. Clin. Microbiol, 1986. - Vol. 24. - P.5Q4.

176. T cell activation causes diarrhea by increasing intestinal permeability and inhibiting epithelial Na7K+-ATPase / M.W, Müsch, L.L, Clarke, D. Mamah et al .II J. Clin. Invest 2002. - Vol. 110, No. 11. - P. 1739-1747.

177. Tato, C.M- Host-pathogen interactions; subversion and utilization of the NF-kB pathway during infection / C.M. Tato, C.A. Hunter // Infect. Immun. 2O02. - Vol, 70, No. 7, - P.3311-3317.

178. The involvement of IL-6 and IL-8 in acute invasive gastroenteritis of chi t-dren / N, Vaisman, E, Leibovitz, R, Dagan. V. Barak // Cytokine. 2003. -Vol. 22. - P.194-197.

179. The safe toys study group, toys in a pediatric hospital; arc they a bacterial source? / M.L, Avila-Agüero, G, German, M.M, Paris, J.P, Herrera II Am, J. Infect. Control. 2004. - Vol. 32. - P.287-290,

180. The treatment of diarrhoea. A manual for physicians and other senior health workers, WHO, 2003. - 47p.

181. Thiazolidinone CFTR inhibitor identified by high-throughput screening blocks cholera toxin-induced intestinal fluid secretion / T. Ma, J.R. Thiagara-jah, H. Yang {et al. // J, Clin. Invest. 2002. - Vol. 110, No. I L - P. 1651 -1658.

182. Three consecutive outbreaks of Serratia marcescens in a neonatal intensive care unit I F. Fleisch, U. Zimmermann-Bacr, RR, Zbinden {et al. // Clinical Infectious Diseases, 2002. - Vol. 34. - P.767-773,

183. Vandejmte, J Human ed^ardsiellosis i-acci: (o onwncntsl I 'I'. / J. Vairdepille. P Lemmens.L. De Swerl II}, Clin. Microbiol. .9t3.- Vol 17, No. I.-P.I65-167.

184. Vassclon, T. Toll receptors: a central elemein in innate minium- respond I T. Vasselon, P.A. Detmtra It Infect. Immun, 2002. - Vol. 70, V' 3. -P.I 033-1041.

185. Virulence of cnieropathogenic Escherichia colt, a global paOiofien / S.C. Clarke. R D Heigh, P P.E. Freestone, P.H. Williams II Clin. Microbiol. Rev -20<B.-Vnl. 16, No. 3. -P.365-378.

186. Wagner, P.L. Bacieriophage control of bacteria. virulence I P.L. Warner, M.K. Waldor H Infect. Immun.-2002.-Vol. 70, No. 3,- P3985-3993

187. Wilton. M. Bacterial perturbation of cytokine networks I M- Wilson, R Seymour, B- Henderson /1 Infect. Immun. 1998. - Vol. 66, No. 6. - P.240I-2409.

188. Wyait. L.E. Edwanlsiella tarda in frcshwalcr catfish and (heir environment /I: SVy.t . R. Nickclson II C- VaiiderzanLAppl. Envir. Microbiol. -1979.-Vol. 38, Mo. 4,-P.710-714,

189. Yuan, Q, Innate immunity of the gut: mucosa. defense in health and diseased Yuan, W.A. Walter 111 Pedialr, Gastr, Nutrition. 2004 - Vol. 38. - P.463—473• •

Информация о работе

Жеребцова, Надежда Юрьевна
кандидата медицинских наук
Москва, 2007
ВАК 03.00.07

Диссертация

Клинико-лабораторные особенности острых кишечных инфекций, вызванных условно патогенными энтеробактериями у детей и подростков - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Клинико-лабораторные особенности острых кишечных инфекций, вызванных условно патогенными энтеробактериями у детей и подростков - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы