Клиническое значение генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов при хроническом калькулезном холецистите

Демин, Сергей Сергеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Клиническое значение генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов при хроническом калькулезном холецистите
ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Клиническое значение генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов при хроническом калькулезном холецистите"

На правах рукописи

ДЁМИН Сергей Сергеевич

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОЛИМОРФИЗМОВ ФАКТОРОВ НЕКРОЗА ОПУХОЛИ И ИХ РЕЦЕПТОРОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ КАЛЬКУЛЁЗНОМ ХОЛЕЦИСТИТЕ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оп ^ ^ " 1

Москва-2011

4853720

Работа выполнена на кафедре медико-биологических дисциплин медицинского факультета Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Белгородский государственный университет»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Чурносов Михаил Иванович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Щипков Валерий Петрович

доктор медицинских наук,

профессор Зинченко Рена Абульфазовна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертации состоится «-/У »«с&н»ха2011 года в часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу:

117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу:

117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан « » 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

О.Б. Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Хронический калькулезный холецистит (ХКХ) — обменно-воспалительное заболевание бшшарной системы, характеризующееся образованием конкрементов в просвете жёлчного пузыря [Григорьев П.Я., 2001]. Среди болезней органов пищеварения ХКХ встречается достаточно часто: он составляет до 90% всех случаев желчнокаменной болезни (ЖКБ), заболеваемость которой в мире достигает 10% [Ивашкин В.Т., 2002; Полунина Т.Е.2005; Shaffer Е.А. 2006]. В России холецистэктомии по поводу ХКХ занимают второе место среди всех операций, ежегодно выполняемых населению. Соотношение заболеваемости мужчин и женщин составляет в среднем 1:5. При этом значительную долю заболевших составляет трудоспособное население [Дадвани С.А., 2000; Окороков А.Н., 2000].

Изучение факторов, определяющих формирование ХКХ, его клиническое течение, эффективность терапии является одной из важных задач для отечественных и зарубежных учёных [Мараховский Ю.Х., 2003; Григорьев П.Я., 2001; Ильченко А.А. 2004; Beckingham I.J., 2001; Bellows C.F., 2005; Grunhage F. et al., 2006]. Среди этих факторов, как свидетельствуют результаты ряда исследований [Tazuma S., 2006; Venneman N.G. et al., 2006; Hsing A.W., 2008], значимую роль играют генетические факторы. Показана роль отдельных генетических полиморфизмов, участвующих в регуляции воспаления, клеточной пролиферации, метаболизма липидов и жёлчных кислот в формировании ХКХ [Han Т. et al., 2000; Pullinger C.R. et al., 2002; Finzi L. et al., 2006].

Среди генов-кандидатов, регулирующих, преимущественно, процессы воспаления, важное значение имеют гены факторов некроза опухолей и их рецепторов [Gravestein L.A. et al., 1998; Majetschak M. et al., 2002]. Факторы некроза опухолей, взаимодействуя со специфическими рецепторами, являются одними их главных звеньев в воспалительном каскаде при ХКХ, изменяя интенсивность и длительность воспалительных, склеротических и литогенных процессов в жёлчном пузыре [Vishnoi М. et al., 2007].

Клинико-генетические работы, посвящённые молекулярно-генетическим аспектам ХКХ, в России немногочисленны и затрагивают преимущественно гены, влияющие на метаболизм холестерина и жёлчных кислот [Григорьева И.Н., 2001; Маев И.В. и др., 2004; Колчанов Н.А. и др., 2006]. При этом исследования роли полиморфных маркеров генов факторов некроза опухолей и их рецепторов в отношении ХКХ в нашей стране до сих пор не проведены.

Работа выполнена в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (гос. контракт № П384 «Разработка молекулярно-генетических основ мультифакториальной патологии человека (на модели генов цитокинов)».

Цель и задачи исследования: изучить генетические полиморфизмы факторов некроза опухоли, их рецепторов и рассмотреть их клиническое значение при хроническом калькулёзном холецистите.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить распространённость полиморфных маркеров генов фактора некроза опухоли а (-308 G/A TNFa), лимфотоксина a (+250 A/G Lta), рецептора фактора некроза опухоли первого типа (+36 A/G TNFR1), рецептора фактора некроза опухоли второго типа (-322 VNTR TNFR2) у больных хроническим калькулезным холециститом и в популяционном контроле.

2. Исследовать роль генетических маркеров в формировании хронического калькулезного холецистита.

3. Рассмотреть взаимосвязи генов-кандидатов с морфологическими характеристиками жёлчного пузыря при хроническом калькулёзном холецистите.

4. Оценить влияние генетических полиморфизмов на особенности клинического течения ХКХ.

5. Выявить молекулярно-генетические маркеры высокой степени операционно-анестезиологического риска

6. Провести анализ ассоциаций генетических вариантов факторов некроза опухоли и их рецепторов с интенсивностью послеоперационного болевого синдрома.

Научная новизна работы. Впервые изучен генетический полиморфизм фактора некроза опухоли a (-308 G/A TNFa), лимфотоксина a (+250 A/G Lta), рецептора фактора некроза опухоли первого типа (+36 A/G TNFR1) и рецептора фактора некроза опухоли второго типа (-322 VNTR TNFR2) у больных хроническим калькулезным холециститом, русской национальности, являющихся уроженцами Центрально-Чернозёмного района РФ.

Впервые определены генетические варианты фактора некроза опухоли а, опеределяющие риск развития хронического калькулезного холецистита.

Впервые установлены взаимосвязи генетических полиморфизмов с характером поражения жёлчного пузыря, особенностями клинического течения, эффективностью консервативной терапии и степенью операционно-анестезиологического риска при хроническом калькулёзном холецистите.

Впервые выявлены ассоциации молекулярно-генетических маркеров фактора некроза опухоли с послеоперационной гиперальгезией.

Научно-практическое значение. Результаты проведённого исследования расширяют представления о генетических детерминантах формирования и клинического течения хронического калькулезного холецистита. Полученные данные дают основание рекомендовать для определения индивидуумов с неблагоприятным клиническим течением ХКХ (перемежающееся течение, низкая эффективность консервативной терапии) проведение молекулярно-генетического тестирования генов фактора некроза опухоли a и лимфотоксина а. При оценке степени операционно-

анестезиологического риска, а также для прогнозирования развития послеоперационной гиперальгезии у пациентов с ХКХ могут быть использованы генетические полиморфизмы -308 G/A TNFa и +250 A/G Lta.

Положения, выносимые на защиту.

1. Полиморфные варианты гена фактора некроза опухоли a (-308 G/A TNFa) определяют риск формирования хронического калькулёзного холецистита.

2. Характер поражения жёлчного пузыря при ХКХ взаимосвязан с определёнными генетическими маркерами.

3. Молекулярно-генетические факторы влияют на особенности клинического течения ХКХ и эффективность его консервативной терапии.

4. Операционно-анестезиологический риск у больных ХКХ ассоциирован с генетическими полиморфизмами.

5. Генетические детерминанты послеоперационной гиперальгезии.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены и

обсуждены на: межрегиональной научно-практической конференции «Социальная экология в изменяющейся России: проблемы и перспективы» (Белгород, 2007), VIII международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007), III Международной Пироговской научной медицинской конференции, (Москва, 2008), I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине», (Курск, 2008), V съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров, (Москва, 2009), IV Международной Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2009), 63-й Итоговой научной конференции молодых учёных Ростовского государственного медицинского университета с международным участием, (Ростов-на-Дону, 2009), 43-й Всероссийской научной конференции с международным участием «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2009), IX окружной конференции молодых ученых «Наука и инновации XXI века», (Сургут, 2009), V Международной Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2010), VI Съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов - на-Дону, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, в том числе 4 в журналах из перечня ВАК.

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, описание использованных материалов и методов, результаты и их обсуждение, а также выводы, практические рекомендации, список литературы и приложения.

Материалы диссертации изложены на 140 страницах машинописного текста и содержат 26 таблиц и 26 рисунков. Библиографический указатель содержит 212 наименований, из которых 133 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Клиническая характеристика исследованных больных

Группу исследования составили 551 человек: 253 больных хроническим калькулёзным холециститом и 298 человек популяционного контроля. В неё включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья РФ и не имеющие родства между собой. Среди 253 больных ХКХ мужчин было 42 человека (16,60%), женщин - 211 (83,40%). В популяционной выборке (п=298) распределение по полу было аналогичным: мужчины - 50 человек (16,78%), женщины - 248 (83,22%) (р>0,05). Средний возраст больных составил 54,66±13,08 лет (варьировал от 23 до 85 лет), популяционной выборки -48,20±6,28 лет (варьировал от 18 до 79 лет) (р>0,05).

Клинико-лабораторное обследование пациентов проводилось на базе Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа. Клинические характеристики ХКХ определялись путём тщательного сбора анамнеза и физикапьного исследования, с выделением основных форм заболевания (по Ногаллеру: тяжелый, средней тяжести, лёгкого течения; монотонный, рецидивирующий, перемежающийся ХКХ) [Окороков А.Н., 2000; Мараховский Ю.Х., 2003; Маев И.В. и др., 2004].

Для диагностики ХКХ у всех обследованных применяли ультразвуковое сканирование. Оценивались следующие морфологические показатели жёлчного пузыря: толщина стенки, объём жёлчного пузыря, средний диаметр и объём желчных камней [Палмер П.Е.С., 2000; Блок Б., 2007]. Всем больным в плановом порядке была выполнена видеолапароскопическая холецистэктомия (ВЛХЭ). Оценка состояния пациентов перед операцией ВЛХЭ основывалась на классификации операционно-анестезиологического риска по МНОАР [Полушин Ю.С., 2004]. Оценка послеоперационного болевого синдрома осуществлялась с помощью визуально-аналоговых и цифровых шкал боли каждые 4 часа в первые и вторые сутки после операции [Корячкин В.А., Сграшнов В.И., 2004].

Всем больным с ХКХ и индивидуумам популяционной выборки проводилось типирование четырех молекулярно-генетических маркеров: диаплельные локусы генов фактора некроза опухоли a (-308G/A TNFa), лимфотоксина a (+250 A/G Lta), рецепторов фактора некроза опухоли первого (+36 A/G TNFR1) и второго типов (-322 VNTR TNFR2). Генотипирование осуществлялось в лаборатории «Молекулярной генетики человека» медицинского факультета Белгородского государственного университета.

Молекулярно-геиетические методы

Материалом для исследования послужила венозная кровь в объеме 4-5 мл, взятая из локтевой вены пробанда. Забор венозной крови производили в пробирки с консервантом, содержащим 0,5М раствор ЭДТА (рН=8.0).

Выделение геномной ДНК из периферической крови проведено методом фенольно-хлороформной экстракции [Mathew С.С., 1984]. Анализ

всех локусов (-308G/A TNFa, +250A/G Lta, +36A/G TNFR1, -322VNTR TNFR2) осуществлялся методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК. ПЦР локусов -308G/A TNFa, +250A/G Lta, -322VNTR TNFR2 проводилась на амплификаторе «Терцик-МС4» производства компании «ДНК-технология», а локуса +36A/G TNFR1 - на аппарате IQ5 (Bio-Rad) для ПЦР в режиме real time с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы «Силекс-М» и олигонуклеотидных праймеров и зондов, синтезированных фирмой «Синтол».

Генотипирование ДНК-маркеров производилось следующими методами: анализ дискриминации аллелей методом Taq Man зондов (+36 A/G TNFR1); анализ полиморфизма длины амплифицируемых фрагментов (-322 VNTR TNFR2); анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) продуктов ПЦР-амплификации специфических участков генома с использованием соответствующих ферментов рестрикции производства ООО "Сибэнзим" (Новосибирск) (-308 G/A TNFa, +250A/G Lta). Визуализация фореграмм осуществлялась в темном боксе с трансиллюминатором фирмы UVP (Швеция).

Статистические методы

Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.1». Определение фенотипических и генных частот проводили стандартными методами [Животовский Л.А., 1983]. Для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому, исходя из равновесия Харди-Вайнберга, использован критерий х2 [Вейр Б., 1995].

Ассоциации аллелей и генотипов изученных ДНК-маркеров с формированием ХКХ, а также с качественными признаками, характеризующими его клинические особенности, оценивали с помощью анализа таблиц сопряженности 2x2 с расчетом критерия у? с поправкой Иетса на непрерывность и отношения шансов (OR) с 95% доверительными интервалами (CI) [Schlesselman J., 1982]. При проведении множественных сравнений использовали поправку Бонферрони [Реброва О.Ю., 2006]. При изучении взаимосвязей генетических полиморфизмов с клинически значимыми количественными признаками ХКХ, в связи с тем, что их распределение отличалось от нормального, для описания признаков использовали медиану (Ме) и интерквартильный размах (Q25-Q75), а для сравнительного анализа применяли критерий Манна-Уитни [Реброва О.Ю., 2006].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Исследование ассоциаций генетических полиморфизмов с формированием хронического калькулёзного холецистита.

Изучение частот генотипов исследуемых генетических маркеров показало, что для всех рассмотренных локусов в популяционной выборке и в

группе больных ХКХ эмпирическое распределение генотипов соответствует теоретически ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (р>0,05). Уровень аллельного разнообразия по рассматриваемым локусам варьировал от Но=0,18 (для локуса -308 G/A TNFa) до Н0=0,49 (для локуса +36A/G TNFR1) в популяционной выборке и от Н0=0,2б (-308 G/A TNFa) до Но=0,53 (+36A/G TNFR1) среди больных ХКХ.

Установлено, что концентрация генетических маркеров -308 A TNFa и -308 A A TNFa среди больных ХКХ в 1,7 и 4,7 раза, соответственно, больше (табл. 1) по сравнению с контрольной группой (р=0,001 и р=0,016, с учётом поправки Бонферрони рсог=0,048, соответственно), а частота генотипа -308 GG TNFa - меньше, чем в контроле (р=0,006, рсог=0,018).

Полученные данные свидетельствуют о важной роли генетического полиморфизма -308G/A фактора некроза опухоли a в формировании хронического калькулёзного холецистита. Наличие маркеров -308А TNFa и -308АА TNFa, контролирующих высокую продукцию фактора некроза опухоли a [Kroeger К.М. et al., 2000; Majetschak M. Et al., 2002], обусловливает повышенный риск развития хронического калькулёзного холецистита (OR=l,85 и OR=4,89, соответственно), тогда как генетический маркер -308GG TNFa является протективным фактором по данной патологии (OR=Ô,56) (табл. 1). Полученные нами данные соответствуют литературным материалам о медико-биологическом значении фактора некроза опухоли в организме - данный цитокин обладает выраженным провоспалительным действием [Симбирцев А. С. и др., 2006; Vandenbroeck К., 2006] и может играть важную роль в этиопатогенезе хронического калькулёзного холецистита.

2. Молекулярно-генетические маркеры и морфологические характеристики жёлчного пузыря при ХКХ.

Анализ взаимосвязей полиморфных генетических маркеров факторов некроза опухолей и их рецепторов с морфологическими характеристиками жёлчного пузыря при ХКХ показал, что у пациентов, имеющих высокопродуктивный аллель А (генотипы АА и GA) по полиморфизму -308 G/A фактора некроза опухолей а (табл. 2), наблюдается увеличение толщины стенки желчного пузыря (на 33,34%), диаметра камня (на 3,33%) и объёма камня (на 5,88%) по сравнению с больными без этого аллеля (генотип -308 GG TNFa).

Выявлено, что у пациентов с ХКХ, имеющих маркеры +250 GG Lta и +250 AG Lta толщина стенки жёлчного пузыря (медиана 4 мм, интерквартильный размах 3-5 мм) на 25% больше по сравнению с больными с генотипом +250 АА Lta (медиана 3 мм, нижний квартиль 3 мм, верхний квартиль 4 мм, р=0,04). Следует отметить, что индивидуумы, имеющие одновременно в генотипе высокопродуктивные аллели -308 A TNFa и +250 G Lta, характеризуются значительно меньшим объёмом жёлчного пузыря (медиана 36,24 см3, интерквартильный размах 20,97-58,15 см3), чем больные без этих аллелей (медиана 48,09 см , интерквартильный размах 29,23-74,14 см3, р=0,02).

Таблица 1

Распределение полиморфных маркеров генов факторов некроза опухолей и их рецепторов среди больных ХКХ и в популяционном контроле (%)

Локус, Полиморфизм Аллели, генотипы, генетическое разнообразие Контрольная группа* (п=298) Больные ХКХ* (п=253) *2 (Р) (Ж (95% С1)

-3080 89,93 82,81 11,41 1,85

а ь г н -308а 10,07 17,19 (0,001) (1,28-2,68)

-30800 80,87(241) 70,36(178) 7,74 (0,006) 0,56 (0,37-0,85)

^ О -3080а 18,12(54) 24,90 (63) 2,72 (0,09) 0,29 (0,06-1,19)

00 о м 1 -308аа 1,01 (3) 4,74(12) 5,87 (0,016) 4,89 (1,27-22,1)

Но (Не) 0,18(0,18) 0,26(0,28)

+250а 74,75 72,97 0,35 0,66

в +25 ов 25,25 27,03 (0,55) (0,51-0,85)

-1 О +250аа 54,54 (162) 51,62(127) 0,35 (0,55) 0,89 (0,62-1,27)

Ъ о +250ас 40,4 (120) 42,68 (105) 0,20 (0,65) 1,09 (0,77-1,57)

с-1 + +25000 5,06(15) 5,7 (14) 0,02 (0,89) 1,13 (0,50-2,54)

Но (Не) 0,40(0,38) 0,42(0,39)

+36а 51,19 48,79 0,53 1,10

т—1 а +36в 48,81 51,21 (0,47) (0,86-1,40)

и. н +36аа 26,78 (79) 22,17(55) 1,29 (0,26) 0,75 (0,51-1,18)

и ^ +36ав 48,81 (144) 53,23 (132) 0,88 (0,35) 1,19 (0,67-1,52)

о ? 24,41 (72) 24,60(61) 0,00 (1,00) 1,01 (0,67-1,52)

Но (Не) 0,49(0,50) 0,53(0,49)

<ч т№к2*1 28,74 26,89 0,08 1,07

а ь г юта2*2 71,26 73,11 (0,78) (0,74-1,54)

н рй н чс > 1 т№к2 1/1 6,59(11) 9,78 (22) 0,88 (0,34) 1,53 (0,69-3,49)

тыря2 1/2 44,31 (74) 34,22 (77) 3,70 (0,07) 0,65 (0,42-1,00)

т№к2 2/2 49,10(83) 56,00 (126) 1,56 (0,21) 1,32 (0,86-2,01)

Но (Не) 0,44(0,41) 0,34(0,39)

Примечание: Н0 и Не - наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность; *- в скобках указаны объёмы выборок

Таблица 2

Значимые ассоциации генетического полиморфизма -308 в/А ТЫИа с морфологическими характеристиками жёлчного пузыря у больных хроническим калькулёзным холециститом, Ме (С225-<375)

Морфологические показатели Генотипы Р

-308 АА и -308 AG TNFa (п=75) - 308 GG TNFa (п=178)

Толщина стенки, мм 4,5 (4,0-5,0) 3,00 (3,00-4,00) 0,0001

Диаметр камня, мм 15,00 (12,00-22,00) 14,50 (10,00-18,00) 0,003

Объём камня, см3 1,77 (0,90-5,58) 1,60 (0,52-3,05) 0,003

Таким образом, генетические полиморфизмы фактора некроза опухоли а (-308G/A TNFa) и лимфотоксина a (+250A/G Lta) ассоциированы с морфологическими характеристиками жёлчного пузыря у больных ХКХ. В основе этих ассоциаций могут лежать механизмы провоспалительных и опосредованных ими склеротических процессов в стенке жёлчного пузыря, зависящих от TNFa и Lta [Царегородцева Т.М., 2005; Никитенко Т.М., 2006; Бурков С.Г., 2006].

3. Взаимосвязи генетических маркеров с клиническим течением и эффективностью консервативного лечения ХКХ.

При изучении ассоциаций полиморфизма -308 G/A гена фактора некроза опухоли a с клиническими особенностями ХКХ установлено, что у пациентов, имеющих высокопродуктивный аллель А (генотипы -308 АА TNFa и -308 GA TNFa), латентное (4,02%) и лёгкое (2,66%) течение ЖКБ наблюдалось в 13 и 9 раз, соответственно, реже, по сравнению с больными с генотипом -308 GG TNFa (53,37%, р=0,0005, рсог=0,002 и 23,60%, р=0,0007; рсог=0,0028, соответственно), тогда как ХКХ среднетяжёлого и тяжёлого течения среди индивидуумов с генотипами -308 АА TNFa и -308 GA TNFa (30,66% и 62,66%, соответственно) регистрировался в 2 и 8 раз, соответственно, чаще, чем у пациентов с генотипом -308 GG TNFa (15,17%, р=0,009; рсог=0,036 и 7,86%, р=0,0005; рсог=0,002, соответственно).

Выявлены взаимосвязи молекулярно-генетического маркера -308 G/A TNFa с характером течения ХКХ (табл.3): у больных с генотипами -308 АА TNFa и -308 GA TNFa латентное (4,02%) и рецидивирующее (5,33%) течение ХКХ отмечалось значительно реже, а перемежающееся течение заболевания, наоборот, чаще (83,99%) по сравнению с пациентами с генотипом -308 GG TNFa (42,13%, 39,32% и 2,80%, соответственно, р=0,0005; Рсог=0,002).

Таблица 3

Ассоциации генетического полиморфизма -308 G/A TNFa с клиническими группами хронического калькулёзного холецистита

Клиническая Генотипы Х2

группа ХКХ -308АА и -308 GA (п=75) -308 GG (п=178) (Р)

п % п %

Латентное течение 3 4,02 75 42,13 34,21 (0,0005)

Рецидивирующий холецистит 4 5,33 70 39,32 27,84 (0,0005)

Перемежающийся ХКХ 63 83,99 5 2,80 172,87 (0,0005)

Монотонный ХКХ 5 6,66 28 15,75 3,06 (0,08)

Итого 75 100,00 178 100,00

Анализ ассоциаций молекулярно-генетического маркера +250A/G Lta со степенью тяжести ХКХ (рис. 1) показал, что у пациентов, имеющих высокопродуктивный аллель +250 G (генотипы +250 GG Lta и +250 AG Lta), значительно чаще (в 3,2 раза) наблюдалось тяжёлое течение ХКХ (37,82%) и реже латентное течение заболевания (26,89%) в сравнении с индивидуумами без этого аллеля (генотип +250 АА Lta) (11,92%, р=0,0005; рсог=0,002 и 50,39%, р=0,0009, рсог=0,0036, соответственно). Установлены взаимосвязи генетического полиморфизма +250A/G Lta с характером течения ХКХ: перемежающийся характер заболевания у больных с генотипами +250 AG Lta и +250 GG Lta регистрировался в 4,4 раза чаще (45,37%), чем у пациентов с генотипом +250АА Lta (10,23%, р=0,0005; рооГ=0,002).

Исследование клинического значения парных сочетаний генетических полиморфизмов -308 G/A TNFa и +250A/G Lta показало, что у пациентов, имеющих одновременно высокопродуктивные аллели по этим локусам (генотипы -308АА, -308GA TNFa и +250 GG, +250AG Lta), в 10 раз чаще регистрируется тяжёлое течение ХКХ (64,29%), а латентное течение заболевания отмечается в 15 раз реже (3,57%), чем у больных без этих аллелей (генотипы -308 GG TNFa и +250 АА Lta) (6,14%, р=0,0005, рсог=0,002 и 55,26%; р=0,0005, рсог=0,002, соответственно).

100% 93% 80% 70% 60% 5Э% 40% 30% 20% 10%

Латентное течение

Лёгкое течение

Среднетяжёлое течение

Тяжёлое течение

Генотипы +250 вй и +250 Ав На

Генотип +250 АА Ыа

Рис. 1 Ассоциации генетического полиморфизма+250 А/в 1Ла с тяжестью течения ХКХ

Также выявлены различия между сравниваемыми группами больных по характеру течения ХКХ: у пациентов, имеющих одновременно высокопродуктивные аллели -308 А ТЫРа и +250 й Ыа, существенно реже наблюдаются латентная стадия ЖКБ (3,57%) и рецидивирующий ХКХ (5,36%), но значительно чаще регистрируется перемежающийся характер течения заболевания (83,93%) по сравнению с больными без этих аллелей (44,74%, р=0,0005, рсог=0,002; 37,72%, р=0,0005, рсог=0,002 и 2,63%, р=0,0005, рсоГ=0,002, соответственно)

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о важном клиническом значении генетических полиморфизмов -308 в/А ТОТа и +250АЛЗ 1Ла при хроническом калькулёзном холецистите. Пациенты с высокопродуктивными аллелями по этим локусам отличаются волнообразным тяжёлым течением хронического калькулёзного холецистита, с постоянно выраженной клинической симптоматикой и немногочисленными ремиссиями.

При анализе ассоциаций генетического маркера +250АЛЗ Ьйх с эффективностью консервативного лечения ХКХ установлено, что у пациентов, имеющих высокопродуктивный аллель в (генотипы +25000 На и +250АС На), положительный эффект от консервативной терапии наблюдался лишь у 44,44% пациентов, тогда как у больных с генотипом +250 АА Па данный показатель был в 1,6 раз выше и равнялся 72,50% (^=7,29; р=0,008). У больных, имеющих

одновременно высокопродуктивные аллели -308А ЮТа и +25СЮ 1Ла, отмечалось существенное снижение эффекта от консервативной терапии — положительный эффект регистрировался лишь у 33,33% пациентов, тогда как у индивидуумов без этих аллелей данный показатель составлял 66,67% (х2=20,94; р=0,0005).

4. Ассоциации полиморфизмов генов фактора некроза опухоли а и лимфотоксина а с операционно-анестезиологическим риском при ХКХ.

Проведён анализ ассоциаций полиморфного маркера -308С/А гена фактора некроза опухоли а со степенью операционно-анестезиологического риска (по шкале МНОАР) у пациентов с ХКХ при выполнении им ВЛХЭ в условиях ТВВА с ИВ Л и миоплегией. Установлено (рис. 2), что у 73,33% пациентов, имеющих высокопродуктивный аллель -308А ТОТос (генотипы -308АА и -308СА ТИРа) определялась III (высокая) степень операционно-анестезиологического риска, тогда как у большинства больных с генотипом -308 вв ШБа (52,25%) регистрировалась II (умеренная) степень операционно-анестезиологического риска (%2=4,95; р=0,026).

III степень II степень

во. 00%

70.06»

60.08%

55,00%

40,00*

30,00%

амхйь

Рис.2 Ассоциации генетического полиморфизма -308 G/A TNFa со степенью операционно-анестезиологического риска по шкале МНОАР

Генотип -308 GG TNFa

Генотипы -308 А А и -308 GA TNFa

При изучении совместного действия генетических полиморфизмов -308 G/A TNFa и +250 A/G Lta выявлено, что частота III (высокой) степени операционно-анестезиологического риска являлась максимальной у пациентов с маркерами -308 АА TNFa, -308GA TNFa и +250AG Lta и +250GG Lta (80,36%) в сравнении с пациентами без данных маркеров (50,00%) (х2=13,18; р=0,001).

Таким образом, наличие у пациентов с ХКХ высокопродуктивных аллелей -308A TNFa и +250G Lta обусловливает значительное повышение степени операционно-анесгезиологического риска (до высокой), в сравнении с больными без этих аллелей, что, в конечном итоге, влияет на прогноз и летальность при ХКХ [Полушин Ю.С., 2004].

5. Изучение влияния генетических полиморфизмов на интенсивность послеоперационного болевого синдрома у больных ХКХ.

Изучен болевой синдром в раннем послеоперационном периоде после операции ВЛХЭ в условиях ТВВА с ИВЛ и миоппегией в зависимости от генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов.

Для выявления характера болевого синдрома использовались визуально-аналоговые (цифровые) шкалы боли [Корячкин В.А., Страшнов В.И., 2004]. Интенсивность болевых ощущений пациентов оценивалась в баллах (от 0 -слабая боль, до 10 - невыносимая боль) при движении через каждые 4 часа в первые сутки и после сна на вторые сутки после ВЛХЭ.

При анализе взаимосвязей полиморфизма -308G/A гена фактора некроза опухоли a (табл.4) с интенсивностью болевого синдрома в послеоперационном периоде получено, что у пациентов, имеющих высокопродуктивный аллель А (генотипы -308АА TNFa и -308GA TNFa) наблюдается значительно более выраженный (на 33-100%, р<0,000002) послеоперационный болевой синдром по сравнению с больными без этого аллеля (генотип -308 GG TNFa). При этом, следует отметить, что если у пациентов с генотипом -308 GG TNFa интенсивность болевого синдрома в течение суток после операции и к 12 часам следующего дня уменьшилась в 3 раза (с 6 до 2 баллов), то у индивидуумов с генотипами -308 АА TNFa и -308 GA TNFa — лишь в 2 раза (с 8 до 4 баллов). Аналогичные данные получены и по генетическому полиморфизму +250A/G лимфотоксина а. Установлено, что у пациентов с генотипами +250GG Lta и +250AG Lta регистрируется более интенсивный послеоперационный болевой сивдром (на 17-50%, р<0,00006), и его динамика в течение первых суток после операции менее выражена (уменьшился в 2,3 раза с 7 до 3 баллов к 12 часам следующего дня после ВЛХЭ), чем у индивидуумов с генотипом +250АА Lta (интенсивность боли уменьшилась в 3 раза с 6 до 2 баллов).

В основе выявленных взаимосвязей могут лежать следующие медико-биологические механизмы. Факторы некроза опухолей (TNFa и Lta), повышенная продукция которых ассоциирована с генотипами -308АА и -308GA TNFa и +250GG и +250AG Lta [Brinkman в.М. et al., 1995; Kroeger K.M. et al., 2000; Majetschak M. Et al., 2002], являются алгогенами,

активируют процессы возбуждения в сенсорных нейронах и играют, тем самым, важную роль в формировании болевой чувствительности при хирургической агрессии [Sommer С. et al. 2004; McMahon S.B. et al. 2006; OkuseK., 2007].

Таблица 4

Значимые ассоциации генетических полиморфизмов -308 G/A TNFa и +250A/G Lta с интенсивностью болевого синдрома (в баллах) у пациентов с ХКХ после ВЛХЭ, Me (Q25-Q75)

Время измерений интенсивности боли -308 G/A TNFa +250A/G Lta

-308 АА и -308GA (п=75) -308 GG (п=178) Р +250 GG и +250 AG (п=119) +250 АА (п=127) Р

14 ч 8,00 (8,00-8,00) 6,00 (6,00-7,00) 0,000002 7,00 (6,00-8,00) 6,00 (6,00-7,00) 0,0000006

18 ч 8,00 (7,00-8,00) 5,00 (5,00-6,00) 0,000001 7,00 (5,00-8,00) 5,00 (4,00-6,00) 0,0000001

22 ч 7,00 (6,00-7,00) 4,00 (3,00-5,00) 0,000001 6,00 (4,00-7,00) 4,00 (3,00-5,00) 0,0000007

8ч 5,00 (4,00-5,00) 3,00 (2,00-3,00) 0,000002 4,00 (3,00-5,00) 3,00 (2,00-3,00) 0,000003

12 ч 4,00 (3,00-4,00) 2,00 (2,00-2,00) 0,000001 3,00 (2,00-4,00) 2,00 (2,00-2,00) 0,000001

16 ч 3,00 (2,00-3,00) 2,00 (1,00-2,00) 0,000002 2,00 (2,00-3,00) 2,00 (1,00-2,00) 0,00006

ВЫВОДЫ

1. Генетические полиморфизмы фактора некроза опухолей a (-308G/A TNFa) и лимфотоксина a (+250 A/G Lta) ассоциированы с формированием хронического калькулезного холецистита, характером поражения жёлчного пузыря, клиническими проявлениями заболевания и интенсивностью послеоперационного болевого синдрома.

2. Молекулярно-генетическими маркерами повышенного риска развития хронического калькулезного холецистита являются -308А TNF a (OR=l,85, р=0,001) и -308 АА TNF a (OR=4,89, р=0,048), а протективным фактором - -308GG TNF a (OR=0,56, р=0,018).

3. Больные хроническим калькулезным холециститом с высокопродуктивными аллелями -308A TNFa и +250G Lta, имеют большую толщину стенки жёлчного пузыря, увеличенный диаметр и объём жёлчных камней и меньший объём жёлчного пузыря.

4. Генетические маркеры -308 АА, -308 GA TNFa и +250GG, +250 AG Lta, их сочетания ассоциированы с перемежающимся (р=0,002) и

тяжёлым (р=0,002) течением хронического калькулезного холецистита и низкой эффективностью консервативного лечения заболевания.

5. Высокая степень операционно-анестезиологического риска у больных хроническим калькулезным холециститом с высокопродуктивным аллелем -308А TNFa или его сочетанием с аллелем +250G Lta (73,33-80,36%) наблюдается в 1,5 раза чаще по сравнению с пациентами без этих аллелей (47,75-50,00%, р<0,001).

6. Послеоперационный болевой синдром наиболее выражен (на 17-100%, р<0,0001) и его динамика менее значительна у пациентов с хроническим калькулезным холециститом, имеющих генетические маркеры -308А TNFa и +250G Lta.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для выявления индивидуумов группы повышенного риска развития хронического калькулезного холецистита следует проводить молекулярно-генетическое тестирование гена фактора некроза опухоли а (-308G/A TNFa).

2. При обследовании пациентов с хроническим калькулёзным холециститом в качестве маркеров более выраженного поражения жёлчного пузыря, тяжёлого течения заболевания и его низкоэффективной консервативной терапии, а также высокого операционно-анестезиологического риска использовать генетические полиморфизмы -308G/A TNFa и +250A/G Lta.

3. При проведении анестезиологического пособия больным хроническим калькулезным холециститом во время операции видеолапароскопической холецистэктомии следует учитывать развитие гиперальгезии у пациентов с генетическими маркерами -308А TNFa и +250G Lta.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Lta — лимфотоксин а

TNFa — фактор некроза опухоли а

TNFR1 — рецептор фактора некроза опухоли первого типа

TNFR2 — рецептор фактора некроза опухоли второго типа

VNTR — вариабельное число тандемных повторов

ВАШ — визуально-аналоговая шкала

ВЛХЭ — видеолапароскопическая холецистэктомия

ЖКБ — желчнокаменная болезнь

ИВЛ — искусственная вентиляция лёгких

МНОАР — Московское научное общество анестезиологов и реаниматологов

ПЦР — полимеразная цепная реакция

ТВВА — тотальная внутривенная анестезия

УЗИ — ультразвуковое исследование

ХКХ — хронический калькулёзный холецистит

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Дёмин С.С. Желчнокаменная болезнь в рамках сохранения социального и биологического здоровья населения: структура заболеваемости, клиническое течение, современные подходы к хирургическому лечению / С.С. Дёмин // Социальная экология в изменяющейся России: проблемы и перспективы: Материалы межрегиональной научно-практической конференции. - Белгород, 2007. -Часть 1.-С. 297-304.

2. Дёмин С.С. Клинические особенности желчнокаменной болезни у населения Белгородской области / С.С.Дёмин, М.И. Чурносов, В.А. Ежов // Научные труды VIII международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации». - Москва, 2007. - С. 235

3. Дёмин С.С. Клинические аспекты желчекаменной болезни у населения Белгородской области / С.С. Дёмин // Вестник РГМУ. - Москва, 2008. -№2 (61). - С. 282. (из списка ВАК)

4. Дёмин С.С Роль наследственных факторов в формировании клинических особенностей желчнокаменной болезни у населения Белгородской области / С.С. Дёмин, М.И. Чурносов // Молодёжная наука и современность: Материалы I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине». - Курск, 2008. - С. 89

5. Дёмин С.С. Изучение роли наследственных факторов в формировании клинических особенностей хронического калькулёзного холецистита / С.С.Дёмин, И.П. Парфёнов // Материалы V съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров, ч. 1. - Москва, 2009. - С. 6

6. Дёмин С.С. Роль наследственных факторов в формировании болевого синдрома при оперативном лечении хронического калькулёзного холецистита / С.С. Дёмин И Материалы 63-й Итоговой научной конференции молодых учёных Ростовского государственного медицинского университета с международным участием. - Ростов-на-Дону, 2009. - С. 124.

7. Дёмин С.С. Полиморфизм гена фактора некроза опухоли и клинические особенности хронического калькулёзного холецистита / С.С. Дёмин // Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации: Материалы 43-й всероссийской научной конференции студентов и молодых учёных с международным участием, Тюмень, 2009.-С. 265.

8. Калмыкова Е.В. Распространенность полморфизмов -308G/A TNFa, -250G/A Lta, -869Т/С TGFB1, С-703Т IL-5, -4257 G/A IL-13 среди населения Центральной России / E.B. Калмыкова, М.И. Чурносов, О.Б. Алтухова, O.A.

Конева, С.С. Дёмин // Наука и инновации XXI века: материалы IX окружной конференции молодых ученых. - Сургут, 2009. - С. 77-78.

9. Дёмин С.С. Популяционно-генетический анализ полиморфизма гена лимфотоксина-а / С.С. Дёмин, О.Б. Алтухова, O.A. Конева, Е.В. Калмыкова // Вестник РГМУ, 2009. - №3. - С. 22. (из списка ВАК)

10. Калмыкова Е.В. К вопросу о полиморфизме гена фактора некроза опухоли-а среди населения / Е.В. Калмыкова, О.Б. Алтухова, O.A. Конева, С.С. Дёмин // Вестник РГМУ, 2009. - №3. - С. 34. (из списка ВАК)

П.Калмыкова Е.В. Молекулярно-генетические маркеры цитокинов: популяционная распространенность и связь с мультифакториальной патологией / Е.В. Калмыкова, Т.С. Тикунова, И.А. Юшина, С.С. Дёмин, С.С. Сиротина, E.H. Крикун, М.И. Чурносов // Вестник РУДН. Серия «Медицина», 2009. - С. 617-618. (из списка ВАК)

12. Дёмин С.С. Роль полиморфизма гена фактора некроза опухолей-а в формировании послеоперационного болевого синдрома / С.С. Дёмин, М.И. Чурносов // Медицинская генетика: материалы VI Съезда Российского общества медицинских генетиков. - Ростов-на-Дону, 2010. - С.53.

Дёмин Сергей Сергеевич (Россия) Клиническое значение генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов при хроническом калькулёзном холецистите

Изучено распределение полиморфизмов генов фактора некроза опухоли а, лимфотоксина а, рецептора фактора некроза опухоли 1 типа, рецептора фактора некроза опухоли 2 типа у больных хроническим калькулёзным холециститом (ХКХ) и в популяционной выборке, оценены их взаимосвязи с формированием и клиническим течением ХКХ. Выявлены генетические варианты фактора некроза опухоли а, определяющие повышенный риск развития хронического калькулёзного холецистита. Установлены взаимосвязи генетических полиморфизмов с характером поражения жёлчного пузыря, особенностями клинического течения, эффективностью консервативной терапии и степенью операционно-анестезиологического риска при хроническом калькулёзном холецистите. Выявлены ассоциации молекулярно-генетических маркеров фактора некроза опухоли с послеоперационной гиперальгезией.

Dyomin Sergey Sergeevitch (Russia) Clinical significance of genetic polymorphisms of tumor necrosis factors and their receptors in chronic calculous cholecystitis

Distribution of polymorphism of genes tumor necrosis factor a, lymphotoxin a, receptor of the tumor necrosis factor 1st type, receptor of the tumor necrosis factor 2nd type in chronic calculous cholecystitis (CCC), and in popular selection has been investigated. Their correlation with formation and clinical course of calculous cholecystitis are valued. Genetic variants of tumor necrosis factor a that determinate the risk of development of chronic calculous cholecystitis were identified. Genetic polymorphisms correlations with gall bladder lesion character, clinical course properties, conservative therapy efficiency and surgery and anesthesia risk in chronic calculous cholecystitis were determined. Molecular genetic markers of tumor necrosis factor and postoperative hyperalgesia correlations were identified.

Подписано в печать 20.12.2010. Гарнитура Times New Roman. Формат 60x84/16. Усл. п. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 231. Оригинал-макет подготовлен и тиражирован в издательстве Белгородского государственного университета 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Демин, Сергей Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1 Молекулярные о сновы этиопатогенеза, клиники и лечения хронического калькулезного холецистита

1.2 Факторы некроза опухолей и их рецепторы: молекулярно-генетические характеристики и медико-биологические эффекты ■

1.3 Генетические исследования хронического калькулезного холецистита

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1 Характеристика обследованных групп

2.2 Молекулярно-генетические методы

2.3 Биометрические и генетико-статистические методы

ГЛАВА 3. Исследование ассоциаций генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов с формированием хронического калькулёзного холецистита

3.1 Анализ взаимосвязей молекулярно-генетических маркеров с возникновением хронического калькулёзного холецистита

3.2 Ассоциации генетических полиморфизмов с морфологическими характеристиками жёлчного пузыря при хроническом калькулёзном холецистите

3.3 Генетические полиморфизмы и биохимические показатели больных хроническим калькулёзным холециститом

ГЛАВА 4. Изучение клинических особенностей хронического калькулёзного холецистита в зависимости от полиморфных маркеров генов факторов некроза опухоли и их рецепторов

4.1 Молекулярно-генетические маркеры и клинические характеристики хронического калькулёзного холецистита

4.2 Ассоциации генетических полиморфизмов с интенсивностью болевого синдрома у больных хроническим калькулёзным холециститом в раннем послеоперационном периоде

ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клиническое значение генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов при хроническом калькулезном холецистите"

Актуальность проблемы. Хронический калькулезный холецистит (ХКХ) — обменно-воспалительное заболевание билиарной системы, характеризующееся образованием конкрементов в просвете жёлчного пузыря [Григорьев П.Я., 2001]. Среди болезней органов пищеварения ХКХ встречается достаточно часто: он составляет до 90% всех случаев желчнокаменной болезни (ЖКБ), заболеваемость которой в мире достигает 10% [Ивашкин В.Т., 2002; Полунина Т.Е.2005; Shaffer Е.А. 2006]. В России холецистэктомии по поводу ХКХ занимают второе место среди всех операций, ежегодно выполняемых населению. Соотношение заболеваемости мужчин и женщин составляет в среднем 1:5. При этом значительную долю заболевших составляет трудоспособное население [Дадвани С.А., 2000; Окороков А.Н., 2000].

Среди генов-кандидатов, регулирующих, преимущественно, процессы воспаления, важное значение имеют гены факторов некроза опухолей и их рецепторов [Gravestein L.A. et al., 1998; Majetschak M. et al., 2002]. Факторы некроза опухолей, взаимодействуя со специфическими рецепторами, являются одними их главных звеньев в воспалительном каскаде при ХКХ: при этом может изменяться интенсивность и длительность воспалительных, склеротических и литогенных процессов в жёлчном пузыре [Yishnoi M. et al., 2007].

Клинико-генетические работы, посвященные молекулярно-генетическим аспектам ХКХ в России немногочисленны и затрагивают преимущественно гены, влияющие на метаболизм холестерина и жёлчных кислот [Григорьева И.Н., 2001; Маев И.В. и др., 2004; Колчанов Н.А. и др., 2006]. При этом исследования роли полиморфных маркеров генов факторов некроза опухолей, и их рецепторов в отношении ХКХ в нашей стране до сих пор не проведены.

Работа выполнена в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013' годы (гос. контракт № ГО 84 «Разработка молекулярно-генетических основ мультифакториальной патологии человека (на модели генов цитокинов)»

Цель исследования: изучить генетические полиморфизмы факторов некроза опухоли, их рецепторов и рассмотреть их клиническое значение при хроническом калькулёзном холецистите.

Задачи исследования:

1. Изучить распространённость полиморфных маркеров генов фактора некроза опухоли а (-308 G/A TNFa), лимфотоксина a (+250 A/G Lta), рецептора фактора некроза опухоли первого типа (+36 A/G TNFR1), рецептора фактора некроза опухоли второго типа (-322 VNTR TNFR2) у больных хроническим калькулёзным холециститом и в популяционном контроле. 2. Исследовать роль генетических маркеров в формировании хронического калькулёзного холецистита. ч

4. Оценить влияние генетических полиморфизмов на особенности клинического течения ХКХ.

5. Выявить молекулярно-генетические маркеры высокой степени операционно-анестезиологического риска

Научная новизна работы. Впервые изучен генетический полиморфизм фактора некроза опухоли а (-308 G/ATNFa), лимфотоксина a (+250 A/G Lta), рецептора фактора некроза опухоли первого типа (+36 AJG TNFR1) и рецептора фактора некроза опухоли второго типа (-322 VNTR TNFR2) у больных хроническим калькулёзным холециститом русской национальности, являющихся уроженцами Центрально-Чернозёмного района РФ.

Впервые определены генетические варианты фактора некроза опухоли а, определяющие риск развития хронического калькулёзного холецистита.

Впервые выявлены ассоциации молекулярно-генетических маркеров факторов некроза опухоли с послеоперационной гиперальгезией.

Научно-практическое значение. Результаты проведённого исследования расширяют представления о генетических детерминантах формирования и клинического течения хронического калькулёзного холецистита. Полученные данные дают основание рекомендовать для определения индивидуумов с неблагоприятным клиническим течением ХКХ (перемежающееся течение, низкая эффективность консервативной терапии) проведение молекулярно-генетическош тестирования генов фактора некроза опухоли a и лимфотоксина а.

При оценке степени операционно-анестезиологическош риска, а также для прогнозирования развития послеоперационной шперальгезии у пациентов с ХКХ могут быть использованы генетические полиморфизмы -308 G/A TNFa и +250 A/G Lta.

Положения, выносимые на защиту

1. Полиморфные варианты гена фактора некроза опухоли а (-308 G/A TNFa) определяют риск формирования хронического калькулёзного холецистита.

2. Характер поражения жёлчного пузыря при ХКХ взаимосвязан с определёнными генетическими маркерами.

4. Операционно-анестезиологический риск у больных ХКХ ассоциирован с генетическими полиморфизмами.

5. Генетические детерминанты послеоперационной гиперальгезии.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на: межрегиональной научно-практической конференции «Социальная экология в изменяющейся России: проблемы и перспективы» (Белгород, 2007), VTII международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007), III международной Пироговской научной медицинской конференции, (Москва, 2008), I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине», (Курск, 2008), V съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров, (Москва, 2009), IV Международной Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2009), 63-й Итоговой научной конференции молодых учёных Ростовского государственного медицинского университета с международным участием,

Ростов-на-Дону, 2009), 43-й всероссийской научной конференции с международным участием «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2009), IX окружной конференции молодых ученых «Наука и инновации XXI века», (Сургут, 2009), V Международной Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2010), VI Съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов - на — Дону, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, в том числе 4 в журналах из перечня ВАК.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Демин, Сергей Сергеевич

выводы

1. Генетические полиморфизмы фактора некроза опухолей а (-308G/A TNFa) и лимфотоксина a (+250 A/G Lta) ассоциированы с формированием хронического калькулезного холецистита, характером поражения жёлчного пузыря, клиническими проявлениями заболевания и интенсивностью послеоперационного болевого синдрома.

2. Молекулярно-генетическими маркерами повышенного риска развития хронического калькулезного холецистита являются -308A TNF a (OR=l,85, р=0,001) и -308 АА TNF a (OR=4,89, р=0,048), а протекгивным фактором - -308GG TNF a (OR-0,56, р=0,018).

3. Больные хроническим калькулезным холециститом с высокопродуктивными аллелями -308А TNFa и +250G Lta, имеют большую толщину стенки жёлчного пузыря, увеличенный диаметр и объём жёлчных камней и меньший объём жёлчного пузыря.

4. Генетические маркеры -308 АА, -308 GA TNFa и +250GG, +250 AG Lta, их сочетания ассоциированы с перемежающимся (р=0,002) и тяжёлым (р=0,002) течением хронического калькулезного холецистита и низкой эффективностью консервативного лечения заболевания.

5. Высокая степень операционно-анестезиологического риска у больных хроническим калькулезным холециститом с высокопродуктивным аллелем -308 A TNFa или его сочетанием с аллелем +250 G Lta (73,3380,36%) наблюдается в 1,5 раза чаще по сравнению с пациентами без этих аллелей (47,75-50,00%, р<0,001).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

3. При проведении анестезиологического пособия больным хроническим калькулёзным холециститом во время операции видеолапароскопической холецистэктомии следует учитывать развитие гиперальгезии у пациентов с генетическими маркерами -308А Т№а и +2500 Па.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Демин, Сергей Сергеевич, Москва

1. Актуальные вопросы диагностики и лечения больных, микрохоледохолитиазом / Ю.А. Нестеренко и др. // Анналы хирургической гепатологии.- 2007 г.- т. 12, № 2, С. 62— 68:

2. Белоусов А.С. Диагностика, дифференциальная диагностика и лечение болезней органов пищеварения / А.С. Белоусов, В.Д. Водолагин, В. П. Жаков.- М.: Медицина, 2002.- 424 с.

3. Биохимические особенности состава пузырной желчи при патологии желчевыводящих путей / Е.Ю. Плотникова и др. // Клин. лаб. диагн.- 2007.- №6.- С. 33-36.

4. Блок Б. УЗИ внутренних органов // Б. Блок; пер. с нем.- М.: Медпресс-информ.- 2007.- 256 с.

5. Богатырева О.Е. Морфологическая характеристика холестероза желчного пузыря / О.Е. Богатырева, В.В. Гуляев // Рос. гастроэнтерол. журн.- 2000.- №4.- С. 107.

6. Бурков С.Г. О последствиях холецистэктомии или постхолецистэктомическом синдроме / С.Г. Бурков // Consilium medicum.-2004.-т.6, №2.- С. 12-15.

7. Бурков С.Г. Ультразвуковая диагностика заболеваний жёлчного пузыря / С.Г. Бурков // Русский медицинский журнал.- №3,- 2006.- С. 3-7.

8. Вейр Б. Анализ генетических данных / Б. Вейр; пер. с англ.-М.: Мир, 1995.- 400с.

9. Гейниц О.А. Цитокиновый статус у пациентов с хронической-почечной недостаточностью / О.А. Гейниц, В.В. Калюжин, Ю.Д. Пак //

10. Сборник трудов XII ежегодного Санкт-Петербургского нефрологическош семинара. Санкт-Петербург, 2004. - С.ЗЗ.

11. Генетика / Б. Гуттман и др.; пер. с англ. О. Перфильева.- М.: ФАИР-ПРЕСС, 2004.- 448 с.

12. Генные сети липидного обмена / Колчанов H.A. и др. // Бюллетень СО РАМН.- 2006.- №2 (210).- С. 29-42.

13. Гинтер Е.К. Эволюция представлений о генетической природе мультифакториальных заболеваний / Е.К. Гинтер // Мед. генетика.- 2003,-т.2,№4.-С. 146-156.

14. Григорьев П.Я. Желчнокаменная болезнь и последствия холецистэктомии: диагностика, лечение и профилактика / П.Я. Григорьев, И.П. Солуянова, A.B. Яковенко // Лечащий врач.- 2002.- №6.- С. 26-32.

15. Григорьев П.Я. Клиническая гастроэнтерология / П.Я. Григорьев, A.B. Яковенко. М.: МИА, 2001. - С. 693.

16. Григорьева H.H. Липиды, липопротеиды и дополнительные факторы риска желчнокаменной болезни (эпидемиологическое исследование): дис. . д-ра мед. наук / И.Н Григорьева.- Новосибирск, 2001. -363 с.

17. Григорьева И.Н. Основные факторы риска желчнокаменной болезни / И.Н Григорьева // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии,- 2007.-t.17.- № 6.- С. 17-21.

18. Громова А.Ю. Полиморфизм генов семейства IL-1 человека / А.Ю. Громова, A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. 2005. - т. 4, № 2. - С. 3-12.

19. Демьянов A.B. Цитокины / A.B. Демьянов, А.Ю. Котов, A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление.- 2003.- №2.- С. 20-35.

20. Елисеев М.С. Роль фактора некроза опухоли-а (ФНО-а) в развитии обменных нарушений и атеросклероза и влияние на них ингибиторов ФНО-а у больных ревматическими заболеваниями /

21. М.С.Елисеев, В.Г. Барскова, E.JI. Насонов // Научно-практическая ревматология.- 2009.- № 2.- С. 67-72.

22. Желчнокаменная болезнь / С.А. Дадвани е.- М.: Видар-М; 2000.315 с.

23. Желчнокаменная болезнь в пожилом и старческом возрасте / Завьялов В.М. и др. // Медицинская сестра.- 2008.- №5.- С.13-14.

24. Животовский Л.А. Статистические методы анализа частот генов в природных популяциях. Итоги науки и техники. Общая генетика / Л.А. Животовский. М., ВИНИТИ.- 1983.- С. 76-104.

25. Завьялов В.П. Цитокины и их роль в межклеточных взаимодействиях / В.П. Завьялов // Вестн. Рос. АМН.-1995.-№2.- С.8-10.

26. Иванов В.П. Полиморфизм гена NAT 2 при инфекционно-аллергической бронхиальной астме и его связь с возрастом манифестации и степенью тяжести заболевания / В.П. Иванов, A.B. Полоников // Мед. генетика.- 2004.-T.3.- №4.-С. 480-483.

27. Иванченкова P.A. Патогенез холестероза желчного пузыря / P.A. Иванченкова, A.B. Свиридов, C.B. Грачев // Клин. Мед. 2002.- №2.- С.14-19.

28. Иванченкова P.A. Хронические заболевания желчевыводящих путей / P.A. Иванченкова.- М.: Атмосфера, 2006.- 416 с.

29. Ивашкин В.Т. Болезни печени и желчевыводящих путей: руководство для врачей / под ред. В.Т. Ивашкина. М.: Изд. дом «Вести»,2002.-416 с.

30. Ильченко A.A. Желчнокаменная болезнь / A.A. Ильченко.- М.: Анахарсис.- 2004.- 200 с.

31. Ильченко A.A. Желчнокаменная болезнь / А.А.Ильченко // Медицинская газета.- 2004.- № 25.- С. 2-8.

32. Ильченко A.A. Основные успехи билиарологии / A.A. Ильченко // Экспер. и клин, гастроэнтерол. 2007.- №2.- с. 45-54.

33. Калинин A.B. Функциональные расстройства билиарного трактаи их лечение / A.B. Калинин // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии.- 2002.- №3.- С. 25-34.

34. Калькулезный холецистит: послеоперационные осложнения, микробиологический мониторинг / Н.Ф. Сивец и др. // Мед. Новости. -2004.- №11.-С.98- 101.

35. Кетлинский С.А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина//Иммунология.- 1995.- №3.- С.30-44.

36. Кетлинский С.С. Цитокины / С.С. Кетлинский, A.C. Симбирцев.-М.: Фолиант, 2008.- 552 с.

37. Комаров Ф.И. Руководство по гастроэнтерологии. В 2 т. Т. 2. Болезни печени и билиарной системы / под. ред. Ф.И. Комарова, A.JI. Гребенева. М.: Медицина, 1995. - 528 с.

38. Короваев В.М. Желчнокаменная болезнь в вопросах и ответах / В.М. Короваев. СПб.: «Вектор».- 2005. - 192 с.

39. Коршунова Е.Ю. Цитокиновый профиль у больных с рубцово-спаечными эпидуритами / Е.Ю. Коршунова, JI.A. Дмитриева, Е.А. Сороковиков // Неврологический вестник.- 2009.- т. XLI.- вып. 2.- С. 29-33.

40. Корячкин В.А. Анестезия и интенсивная терапия: справочник / В.А. Корячкин, В.И. Страшнов.- Спб.: Санкт-Петербургское медицинское издательство.- 2004. 480 с.

41. Лейшнер У. Практическое руководство по заболеваниям желчевыводящих путей / У. Лейшнер.- М.: ГЭОТАР-Мед.- 2001.- 264 с.

42. Ли Ч. Введение в популяционную генетику /Ч. Ли. -М.: Мир, 1995.- 555 с.

43. Лоранская И.Д. Билиарные дисфункции: диагностика, лечение: учебное пособие / И. Д. Лоранская, Е. В. Мошарова. М., 2004.- 20 с.

44. Маев И.В. Достижения молекулярной генетики в области гастроэнтерологии / И.В. Маев, В.М. Говорун // Рос. Журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии.- 2004.- т. 14, №3.- с. 13-21.

45. Маев И.В. Коррекция проявлений холестаза у больных с калькулезным холециститом, перенесших холецистэктомию / И.В. Маев, Е.С. Вьючнова, Е.Г. Лебедева // Практикующий врач.- 2006.- №1.- С. 29.

46. Мажратка 3. М. Практическая гастроэнтерология / 3. М Мажратка.: Бином.- 1999. 402 с.

47. Майстренко H.A. Гепатобилиарная хирургия. Руководство для врачей / под ред. H.A. Майстренко, А.И. Нечая. — СПб.: Специальная литература, 2002.- 508 с.

48. МакНелли П.Р. Секреты гастроэнтерологии / П.Р. МакНелли; пер. с англ.- М- СПб.: ЗАО «Издательство БИНОМ», «Невский Диалект».-1998.- 1023 с.

49. Мараховский Ю.Х. Желчнокаменная болезнь: современное состояние проблемы / Ю.Х. Мараховский // Российский журналгастроэнтерологии гепатологии и колопроктологии. 2003.- т. 13, № 1.- С. 81-92.

50. Метаболические факторы защиты коренного населения севера при ИБС и холелитиазе / В.В. Цуканов и др. // Бюллетень СО РАМН.-2006.-№3 (120).- С. 100-104.

51. Мироджов Г.К. Цитокины в патогенезе и патогенетической терапии хронического вирусного гепатита С / Г.К. Мироджов // В кн. Клинические очерки по гепатологии и гастроэнтерологии. Душанбе.-2006. - С. 74-84.

52. Морган Дж. Э. Клиническая анестезиология. В 3 т. Т. 2 / Дж. Э. Морган, С. М. Мэгид // Изд. 2-е, испр.— Пер. с англ. — М.—СПб.: Издательство БИНОМ-Невский Диалект.- 2001.- 396 с.

53. Никитенко Т.М. Показатели литогенности желчи, липидов сыворотки крови и воспаление слизистой жёлчного пузыря у женщин с холестериновой желчнокаменной болезнью / Т.М. Никитенко // Бюллетень СО РАМН.- 2006.- №4 (122).- С. 160-163.

54. Окороков А.Н. Диагностика болезней внутренних органов. В 11 т. Т.1. Диагностика болезней органов пищеварения / А.Н. Окороков. М.: Мед. лит.- 2000.-560 с.

55. Острый период инфаркта миокарда и генетическая предрасположенность. Полиморфизмы фактора некроза опухолей альфа (ЮТ-а) / В.Я. Плоткин и др. // Вестник Санкт-Петербургского универститета.- 2007.- серия 11.- вып. 3.- С. 11-20.

56. Палмер П.Е.С. Руководство по ультразвуковой диагностике / под. ред. П.Е.С. Палмера; пер. с англ.- М.: Медицина.- 2000.- 334 с.

57. Пальцев М.А. Цитокины и их роль в межклеточных взаимодействиях / М.А. Пальцев // Арх. Патологии.- 1996.- №6.- С. 3-7.

58. Парахонский А.П. Роль цитокинов в патогенезе заболеваний / А.П. Парахонский // Успехи современного естествознания.- 2005.- № 4.- С.63.64.

59. Петухов В. А. Желчнокаменная болезнь и синдром нарушенного пищеварения / В. А. Петухов. М.: ВЕДИ, 2003. - 128 с.

60. Полиморфные варианты генов провоспалительных цитокинов как маркеры предрасположенности к хронической обструктивной болезни лёгких / О.В. Байнак и др. // Успехи современного естествознания.- 2005.-№4.-С. 43.

61. Полунина Т.Е. Желчнокаменная болезнь / Т.Е. Полунина // Лечащий врач.- 2005.- № 2.- С. 27- 32.

62. Полушин Ю.С. Анестезиология и реаниматология / под общ. ред. Ю.С Полушина. СПб.: Элби-СПб.- 2004. - 720 с.

63. Распространенность холелитиаза по данным ультразвуковогоsисследования желчевыделительной системы / Максимов В.А. и др. // Практикующий врач,- 1999.- №13.- С. 27-28.

64. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ Statistica / О.Ю. Реброва.- М.: Медиа Сфера, 2006. 312 с.

65. Родионов В. В. Калькулезный холецистит (осложненный механической желтухой) / В. В. Родионов, М. И. Филомонов, В.М. Могучее. — М.: Медицина.- 2001. 98 с.

66. Роль и место холецистэктомии в хирургическом лечении острого калысулезного холецистита / С.А. Гешелин и др. // Украинский журнал хирургии.-2008.-№.1.-С. 14-17.

67. Савельев B.C. Холестероз желчного пузыря / B.C. Савельев, Петухов В.А., Б.В. Болдин.- М.: Веди, 2002.- 192 с.

68. Симбирцев А. С. Роль полиморфизма генов цитокинов в регуляции воспаления и иммунитета / Симбирцев А. С., Громова А. Ю., Рыдловская А. В.// Медицинский академический журнал. 2006. - т. 6, №1. - С. 144-149.

69. Сопоставление генетических маркеров с результатами инструментальных методов у пациентов с ИБС / Назаренко Г.И: и др. // Материалы III Национального конгресса терапевтов- М.: «Бионика».-2008.- С. 173-174.

70. Титов В.Н. Роль макрофагов в становлении воспаления, действиеtинтерлейкина-1, интерлейкина-6 и активность гипоталамо-гипофизарной системы (обзор литературы) / В.Н. Титов // Клиническая лабораторная диагностика.- 2003,- №12.- С. 3-12.

71. Фармакогенетика, фармакогеномика в свете проблем, связанных с эссенциальной гипертензией / A.B. Тимофеева и др. // Кардиологический, вестник.- 2007.- т.2, №1.- С. 5-12.

72. Хендерсон Дж. Патофизиология органов пищеварения / Дж. Хендерсон; пер. с англ. под ред. Ю.В. Наточина.- М.: Бином, СПб.: Невский диалект.- 1997. 234 с.

73. Холестероз и хронический холецистит: сравнительный анализ состояния стенки жёлчного пузыря / М.Б. Щербинина и др. // Морфология.- 2007.- т.1, №3.- С. 94-100.

74. Хоронько В.Д. Справочник по неотложной хирургии / В.Д. Хоронько, С.Б. Савченко.- М.: Элиста: АПП «Джангар», 2002.- 464с.

75. Хронические заболевания, печени и билиарной системы / Радченко В.Г. и- др. // Приложение к журналу «Новые Санкт-Петербургские врачебные ведомости». 2002. — № 3-4. - С. 3-78.

76. Царегородцева Т.М. Цитокины при гастроэнтерологической патологии / Т.М. Царегородцева // Медицинская газета.- 2005.- № 63.- С. 3-4.

77. Шерлок Ш. Заболевания печени и желчных путей / Ш. Шерлок, Дж. Дули; пер. с англ. / под ред. Апросиной З.Г., Мухина H.A. М.: ГЭОТАР-МЕД.- 2002. - 676 с.

78. Шулутко А.М Хирургическое лечение желчнокаменной болезни.50 лекций по хирургии / A.M. Шулутко М.: Медиа Медика.- 2003.- 206 с.

79. A cascade of cytokines mediates mechanical inflammatory hypernociception in mice / T.M. Cunha et. al. // ProcNatl Acad Sei U S A.-2005.-Vol.102.-P. 1755-1760;

80. A TNFR1 genotype with protective role in familial rheumatoid arthritis / DieudeP. et al. //Arthritis and rheumatism.- 2004.- V. 50.- Issue 2.-P. 413-419.

81. ABCB4 gene mutation-associated cholelithiasis in adults. / O. Rosmorduc et al. // Gastroenterology.- 2003.- V.125.- P. 452-459.

82. Abraham L.J. Impact of the -308 TNF promoter polymorphism on the transcriptional regulation of the TNF gene: relevance to disease / L.J. Abraham, K.M. Kroeger // J Leukoc Biol.- 1999.- N.66.- P. 562-566.

83. Acalovschi M. Cholesterol gallstones: from epidemiology to prevention / M. Acalovschi // Postgrad. Med. J.- 2001.- V. 77.- P. 221-229.

84. Afdhal H. Gallbladder and Biliary Tract Diseases (Gastroenterology and Hepatology) / H. Afdhal.- Informa HealthCare.- 2000.- P. 881.

85. Aggarwal B.B. TNF Receptors. In: Cytokine Reference- / B.B. Aggarwal, A. Samanta, M. Feldmann, M.A. Burlington.- Academic Press.- P. 1619-1632.

86. Altered Kupffer cell function in biliary obstruction / Minter R.M. et. al. // Surgery. 2005. - V.138.- N.2. - P. 236 - 245.

87. Angwafo F.F. 3rd Determination of chemical composition of gall bladder stones basis for treatment strategies in patients from Yaounde, Cameroon / F.F. 3rd Angwafo, S. Takongmo, D. Griffith // World J Gastroenterol.- 2004.- N.10.- P. 303-305.

88. Apolipoprotein B-100 gene Xbal polymorphism and cholesterol gallstone disease / T. Han et al. // Clin. Genet.- 2000,- V. 57.- P. 304-308.

89. Apolipoprotein E polymorphism and gallstones / A. Bertomeu et al. //Gastroenterology.- 1996.-V. 111.-P. 1603-1610.

90. Association of cytokine gene polymorphisms with bronchial asthma in Macedonians / D. Trajkov et al. // Iran J Allergy Asthma Immunol.- 2008.-N.7.- P. 143-156.I

91. Association of two polymorphisms of tumor necrosis factor gene with acute biliary pancreatitis / D.L. Zhang et al. // World J Gastroenterol.- 2003.-V.9.- N.4.-P. 824-828.

92. Beckingham I.J. ABC Of Liver, Pancreas and Gall Bladder // Edited by IJ. Beckingham.- BMJ Books, BMA House, Tavistock Square, London.-2001. P. 54.

93. Bellows C.F. Management of gallstones / C.F. Bellows, D.H. Berger, R.A. Crass // Am Fam Physician. 2005. - V. 72(4). - P. 637 - 642.

94. Berger M.Y. Abdominal symptoms: do they disappear after cholecystectomy? / M.Y. Berger, T.C. Olde Hartman, A.M. Bohnen// Surg Endosc.- 2003.- N.17.- P. 1723-1728.

95. Biliary lipid composition in monozygotic and dizygotic pairs of twins/Y.A. Kesaniemi et al. //Gut.- 1999.-V.30.-P. 1750-1756.

96. Biliaiy sludge: the sluggish gallbladder / P. Pazzi et al. // Digestive and Liver Disease.- 2003.- V.35.- Suppl. 3.- P.39-45.

97. Bouchier I.A. The formation of gallstones / I.A. Bouchier // Reio. J. Med.- 1992.-Y.41.-N.1.-P. 1-5.

98. Brian E.C. Peripheral receptor targets for analgesia: novel approaches to pain treatment / edited by E.C. Brian. John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey.- 2009. - P. 553.

99. Chan F.M. Signaling by the TNF receptor superfamily and T cell homeostasis / F.M. Chan, R.M. Siegel, M.J. Lenardo // Immunity.- 2000.- N.13.-P. 419-422.

100. Cholesterol saturation rather than phospholipid/bile salt ratio or protein content affects crystallization sequences in human gallbladder bile / N.G. Venneman et al. // Eur J Clin Invest.- 2004.- N.34.- P.656-663.

101. Coinheritance of Gilbert syndrome increases the risk for developing gallstones in patients with hereditary spherocytosis / Del Giudice E.M. et al. // Blood.- 1999.- V. 94.- P. 2259-2262.

102. Comprehensive Clinical Hepatology / B.R. Bacon et al..- Mosby.-2005.- P.744.

103. Crucial step in cholesterol homeostasis: sterols promote binding of SCAP to INSIG-1, a membrane protein that facilitates retention of SREBPs in ER / T. Yang et al. // Cell. 2002. - V. 110. - N.4. - P. 903-908.

104. Dancygier H. Clinical Hepatology: Principles and Practice of Hepatobiliary Diseases / H. Dancygier.- Springer.- 2000. V.2.- P. 1000.

105. Damay B.G. Signal transduction by tumour necrosis factor and tumour necrosis factor related'ligands and their receptors / B.G. Darnay, B.B. Aggarwal //AnnRheum Dis.- 1999.-V.58.- Suppl.l.-P. 2-13.

106. Dinarello C.A. Immunological and inflammatory functions of the interleukin-1 family / C.A. Dinarello // Annu Rev Immunol.- 2009.- V. 27.- P. 519-550.

107. Do TNFA -308 G/A and IL6 -174 G/C Gene Polymorphisms Modulate Risk of Gallbladder Cancer in the North Indian Population? / M. Vishnoi et al. //Asian Pacific Journal of Cancer Prevention.- 2007.- V.8.- P. 567-572.

108. Down-Regulation of CXCR2 Expression on Human Polymorphonuclear Leukocytes by TNF-a / Asagoe K. et al. // The Journal of Immunology.- 1998.-V. 160.-P.-4518-4525.

109. Dray A. Inflammatory mediators of pain / A. Dray // British Journal of Anaesthesia.- 1995.-V.75.-P. 125-131.

110. Drossman D. A. The functional gastrointestinal disorders. Second edition / D. A. Drossman 2000.- P. 764.

111. Effects of stimulus and cell type on the expression of the -308 tumour necrosis factor promoter polymorphism / K.M. Kroeger et al. // Cytokine.-2000.-N.12.-P. 110-119.

112. Eissner G. Ligands working as receptors: reverse signaling by members of the TNF superfamily enhance the plasticity of the immune system / G. Eissner, W. Kolch, P. Scheurich // Cytokine Growth Factor Rev.- 2004.- V. 15.- P.353-366.

113. Enhanced tumor necrosis factor in the serum and renal hypoperfusion in nephrosis associated with focal segmental glomerulosclerosis / N. Futrakul et al. // Ren. Fail.- 2000.- V.22.- N.22.- P.213-217.

114. Fletcher D.R. Gallstones. Modern management / D.R. Fletcher //Aust Fam Physician.- 2001.- V.30.- N.5.- P. 441-445.

115. GCF2/LRRFIP1 Represses Tumor Necrosis Factor Alpha Expression / A.R. Suriano et al. // Molecular and Cellular Biology.- 2005.- V.25.- N.20.- P. 9073-9081.

116. Gene polymorphisms of TNF-alpha(-308), IL-10(-1082), IL-6(-174), and IL-lRa(VNTR) related to susceptibility and severity of rheumatic heart disease / A. Settin et al. // Pediatr Cardiol.- 2007.- V.28.- N.5.- P. 363-371.

117. Granulocyte macrophage colony-stimulating factor delays neutrophil constitutive apoptosis through phosphoinositide 3-kinase and extracellular signal-regulated kinase pathways / J.B. Klein et al. // J Immunol.-2000.-V.164.-P. 4286-4291.

118. Gravestein L.A. and Borst J. Tumor necrosis factor receptor family members in the immune system / L.A. Gravestein, J. Borst // Semin. Immunol.-1998.- V. 10.-P. 423-434.

119. Greenberger N. Current Diagnosis and Treatment in Gastroenterology, Hepatology, and Endoscopy / N. Greenberger, R. Blumberg, R. Burakoff.

120. McGraw-Hill Medical.- 2009.- P.605.

121. Grunhage F. Pathogenesis of gallstones: a genetic perspective est Practice & Research Clinical Gastroenterology / F. Grunhage, F. Lammert.-2006.-V. 20.- N.6.-P. 997-1015.

122. Gupta S.K. Silent gallstones: a therapeutic dilemma / S.K. Gupta,V.K. Shukla // Trop Gastroenterol.- 2004.- V.25.- N.2.- P. 65-68.

123. Guraya S.Y. Reappraisal of the management of cholelithiasis in diabetics / S.Y. Guraya // Saudi Med J.- 2005.- Vol.26.- N.ll.- P. 1691-1694.

124. Gustafsson U. High level of deoxycholic acid in human bile does not promote cholesterol gallstone formation / U. Gustafsson, S. Sahlin, C. Einarsson // World J Gastroenterol.- 2003.- N.9.- P. 1576-1579.

125. Hajeer A.H. Influence of TNF alpha gene polymorphisms on TNF alpha production and disease / A.H. Hajeer, I.V. Hutchinson // Hum Immunol.2001.- N.62.-P.1191-1199.

126. Highly increased levels of tumor necrosis factor-alpha and other proinflammatory cytokines in psoriatic arthritis synovial fluid / G. Partsch et al. // J Rheumatol.- 1997.- V. 24.- P. 518-523.

127. Hollegaard M.V. Cytokine gene polymorphism in human disease: online databases, Supplement 3 / M.V. Hollegaard, J.L. Bidwell // Genes Immun.-2006.- V.7.- N.4.- P. 269-276.

128. Human cholesterol 7a-hydroxylase (CYP7A1) deficiency has a hypercholesterolemic phenotype / C.R. Pullinger et al. // J. Clin. Invest.-2002.- V.U0.-P. 109-117.

129. Idriss H.T. TNF alpha and the TNF receptor superfamily: structurefunction relationship / H.T. Idriss, J.H. Naismith // Microsc. Res. Tech.- 2000.-V.50.-N.3.-P. 184-95.

130. Impact of iriterleukin-1 receptor antagonist and tumor necrosis factor-alpha gene polymorphism on IgA nephropathy /, K.IT. Shu ct al.J // Kidney. Int.-2000.- V.58.- No.22.- P.783-789.

131. Impaired:human gallbladder lipid absorption in cholesterol gallstone: disease and?its effect on cholesterol solubility in bile / S.G. Corradini et al. //

132. Is complicated gallstone disease preceded by biliary colic? / M.G. Besselink et al. // J Gastrointest Surg.- 2009.- V. 13.- N.2.- P. 312-317.

133. Jazrawi R.P. Measurement of gallbladder motor functions: an overview / R.P. Jazrawi // Dig Liver Dis.- 2003.- V.35.- Suppl 3.- P.51-55.

134. Jones D.B. Laparoscopic Surgery: Principles and Procedures, Second Edition, Revised and Expanded / D.B. Jones.- Informa Healthcare.- 2004.-P.608.

135. Keen L.J. The extent and analysis of cytokine and cytokine receptor, gene polymorphism / L.J. Keen 7/ Transplant.Immunology.- 2002.- V.10, Issues2.3.- Р.143-146.

136. Ksontini R. Revisiting the role of tumor necrosis factor alpha and the response to surgical injury and inflammation / R. Ksontini, S.L. MacKay, L.L. Moldawer// Arch Surg.- 1998.-V. 133.- P.558-567.

137. Kullak-Ublick G.A. Enterohepatic bile salt transporters in normal physiology and liver disease / G.A. Kullak-Ublick, B. Stieger, PJ. Meier // Gastroenterology.- 2004.- N.126.- P.322-342.

138. Kuntz E. Hepatology, Principles and practice: history, morphology, biochemistry, diagnostics, clinic, therapy / E. Kuntz, H.D. Kuntz— Berlin Heidelberg New York Springer. Verlag.- 2000.- P. 825.

139. Lack of association of TNF -238 a and -308 a in Japanese patients with psoriasis vulgaris, psoriatic arthritis and generalized pustular psoriasis / A. Nishibu et al. // J. Dermatol. Sci.- 2002.- V.29.- P. 181-184.

140. Lammert F. Mechanisms of disease: the genetic epidemiology of gallbladder stones / F. Lammert, T. Sauerbruch // Nat. Clin. Pract. Gastroenterol. Hepatol.- 2005.- V. 2.- N.9.- P. 423-433.

141. Locksley R.M. The TNF and TNF receptor superfamilies: Integrating mammalian biology / R.M. Locksley, N. Killeen, M.J. Lenardo // Cell.- 2001.1. N.104.-P. 487-501.

142. Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eukaryotic DNA / C.C. Mathew // Methods in Molecular Biology.- Ed. Walker J.M., N.Y., L.: Human Press. 1984.- V.2. - P.31-34.

143. Matsuda T. Cytokine Reference / T. Matsuda, T. Hirano.- Burlington, MA: Academic Press.- 2000.- P. 537-563.

144. McMahon S.B. Inflammatory mediators and modulators of pain / S.B. McMahon, D.L.H. Bennett, S. Bevan // Textbook of Pain.- Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone.- 2006.- P.49-72.

145. Mentula P. Markers of Inflammation and Immunosupression as Predictors of Organ Failure in Human Acute Pancreatitis / P. Mentula //

146. Academic dissertation. Helsinki.- 2005.

147. Meshikhes A.W. Asymptomatic gallstones in the laparoscopic era / A.W. Meshikhes // J R Coll Surg Edinb.- 2002.- V.47.- N.6.- P. 742-748.

148. Mishra R.R. Helicobacter species and pathogenesis of gallbladder cancer / R.R. Mishra, M. Tewari, H.S. Shukla // Hepatobiliary Pancreat Dis Int.-2010.-V. 9.-N.2P. 129-134.

149. MUC5AC, a Gel-Forming Mucin Accumulating in Gallstone Disease, Is Overproduced via an Epidermal Growth Factor Receptor Pathway in the Human Gallbladder/L. Finzi et al. //Am. J. Pathol.- 2006 V. 169(6).- P. 20312041.

150. Nagata S. Apoptosis by death factor / S. Nagata // Cell.- 1997.- V.88.-P. 355-365.

151. Nationwide epidemiological study of severe gallstone disease in Taiwan / J. Huang et al. // Gastroenterol.- 2009.- N.9.- P.63.

152. Okuse K. Pain signalling pathways: from cytokines to ion channels / K. Okuse // Int J Biochem Cell Biol.- 2007.- V.39.- P. 490-496.

153. Osteoporotic fractures are associated with an 86-base pair repeat polymorphism in the interleukin-1—receptor antagonist gene but not with polymorphisms in the interleukin-1 beta gene / L. Langdahl et al. // J. Bone Miner Res.- 2000. -N.15. P. 402-414.

154. Paigen B. Gallstones / B. Paigen, M.C. Carey // In: The genetic basis of common diseases. 2-nd ed. Oxford: Oxford University Press.- 2002.- P. 298—335.

155. Papadakis K.A. Tumor necrosis factor: biology and therapeutic inhibitors / K.A. Papadakis, S.R. Targan // Gastroenterol.- 2000.- N.119.- P. 1148-1157.

156. Pediatric gallstone disease in familial hypobetalipoproteinemia / S. Lancellotti et al. // J. Hepatol.- 2005.- Vol. 43.- P. 188-191.

157. Polymorphism of cytokine genes (TGF-betal, IFN-gamma, IL-6, ILIO, and TNF-alpha) in patients with chronic pancreatitis / M.T. Bendicho et al.

158. Pancreas.- 2005.- V.30.- N.4.- P.333-336.

159. Polymorphisms at cholesterol 7alpha-hydroxylase, apolipoproteins B and E and low density lipoprotein receptor genes in patients with gallbladder stone disease / Z.Y Jiang, et al. // World J. Gastroenterol.- 2004.-V.10.- P. 1508-1512.

160. Polymorphisms of tumor necrosis factor (TNF) a and P genes in Korean patients with psoriasis / T. Kim et al. // Arch. Dermatol. Res.- 2003.-V.295.-P. 8-13.

161. Portincasa P. Cholesterol gallstone diasease / P. Portincasa, A. Moschetta, G. Palasciano // Lancet- 2006.- V.368.- P.230-239.

162. Predictors of gallstone composition in 1025 symptomatic gallstones from Northern Germany / C. Schafmayer et al. // Gastroenterol.- 2006.- N.6.-P. 1-9.

163. Puggioni A. A meta-analysis of laparoscopic cholecystectomy in patients with cirrhosis / A. Puggioni, L.L. Wong // J Am Coll Surg.- 2003.- N.197.- P. 921926.

164. Purification of two types of TNF inhibitors in the urine of the patient with chronic glomerulonephritis / J. Suzuki et al. // Nephron.-1998.-V.66.-N.24.-P.3 86-390.

165. Quasney M. Increased frequency of alleles associated with elevated tumor necrosis factor-a levels in children with Kawasaki decease / M. Quasney et al. //Pediatric Research.- 2001.- V. 49.- P. 686-690.

166. Relation between Tumor necrosis factor polymorphism TNF alpha-308 and risk of asthma / J.S. Witte et al. // J Hum Genet.- 2002.-N.10.- P. 8285.

167. Relevance of the tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) -308 promoter polymorphism in TNF alpha gene regulation / B.M. Brinkman et al. // J Inflamm.- 1995.- V.96.- N.46(1).- P. 32-41.

168. Reverse signaling through transmembrane TNF confers resistance tolipopolysaccharide in human monocytes and macrophages / G. Eissner et al. // J Immunol.- 2000.- V.164.- P.6193-6198.

169. Rhee H. Med.Ref.SNP: a database of medically investigated SNPs / H. Rhee, J.S. Lee // Hum Mutat.- 2009.- V.30.- N.3.- P. 460-466.

170. Ridlon J. M. Bile salt biotransformation by human intestinal bacteria / J. Mi Ridlon, D. J. Kang, P. B. Hylemon // J Lipd Res. 2006. - V.47.- N.2.- P. 241-59.

171. Saklatvala J. Interleukin 1 (IL-1) and tumour necrosis factor (TNF) signal transduction / J. Saklatvala, W. Davis, F. Guesdon // Philos Trans R Soc Lond B Biogr Sci.- 1996.- V. 351.- P. 151-157.

172. Sandler R.S. The burden of selected digestive diseases in the United States 1 R.S. Sandler, J.E. Everhart, M. Donowitz // Gastroenterology.- 2002.-N.122.-P.1500-1-511.

173. Schirmer B.D. Cholelithiasis and cholecystitis / B.D. Schirmer, K.L. Winters, R.F. Edlich // J Long Term Eff Med Implants.- 2005.- V.15.- N.3.-P.329-338.

174. Schlesselman J. Case control studies. Design, conduct, analisis / J. Schlesselman. - New York: Oxford University Dress., 1982.-P. 58-96.

175. Serum tumor necrosis factor in mesangial IgA glomerulonephritis with macroscopic hematuria in children / S. Inaba et al. // Nephron.- 1996.-V.72,-N.24.-P.518-522.

176. Shaffer E.A. Gallstone disease: Epidemiology of gallbladder stone disease / E.A. Shaffer // Best Pract Res Clin Gastroenterol.- 2006.- V.20.- N.6.-P. 981-996.

177. Sheeran P. Cytokines in anaesthesia / P. Sheeran, G.M. Hall // British Journal of Anaesthesia.- 1997.- V.78.- P. 201-219.

178. Significant association of the tumor necrosis factor receptor 2 (TNFR2) gene with human narcolepsy / H. Hohjoh et al.j // Tissue Antigens.-2008.- V.56.- Issue 5.- P. 446-448.

179. Silva M.A. Gallstones in chronic liver disease / M.A. Silva, T. Wong // J Gastrointest Surg.- 2005.- V.9.- N.5.- P. 739-746.

180. Small gallstones are associated with increased risk of acute pancreatitis: potential benefits of prophylactic cholecystectomy? / N.G. Venneman et al. // Am J Gastroenterol. 2005. - V.100.- N.ll.- P. 2540 -2550.

181. Smith C.A. The TNF receptor superfamily of cellular and viral proteins: activation, costimulation and death / C.A. Smith, T. Farrah, R.G. Goodwin // Cell.- 1994.- V. 76. P. 959-962.

182. Sommer C. Recent findings on how proinflammatory cytokines cause pain: peripheral mechanisms in inflammatory and neuropathic hyperalgesia / C. Sommer, M. Kress// Neurosci Lett.- 2004.- V. 361.- P. 184-187.

183. SREBP-1, a membrane-bound transcription factor released by sterol-regulated proteolysis /X. Wang et al. // Cell.- 1994.- V. 77.- N.I.- P. 53-62.

184. Strong association of a tumor necrosis factor-alpha promoter allele with cerebral malaria in Myanmar / R. Ubalee et al. // Tissue Antigens.- 2001.-N.58.-P. 407-410.

185. Surgical practice in symptomatic and asymptomatic gallstone disease / Jayanthi V. et al. // Indian J Gastroenterol.- 2002.- V.21.- N.4.- P. 142-144.

186. Symptomatic, non-complicated gallbladder stone disease. Operation or observation? A randomized clinical study/ M. Vetrhus et al. // Scand J

187. Gastroenterol.- 2002.- N.37.- P. 834-839.

188. Tazuma S. Gallstone disease: Epidemiology, pathogenesis, and classification of biliary stones (common bile duct and intrahepatic) / S. Tazuma // Best Pract Res Clin Gastroenterol.- 2006.- V. 20.- N.6.- P.1075-1083.

189. The differential contribution of tumour necrosis factor to thermal and mechanical hyperalgesia during chronic inflammation / J.J. Inglis et. al. // Arthritis Res Ther.- 2005.- V.7.- P. 807-816.

190. The Liver: Biology and Pathobiology // I. Arias et al..- Wiley. -2010.-P. 1216.

191. The reassessment of indications in laparoscopic cholecystectomy / V. Prunoiu et al. // Chirurgia (Bucur).- 2009.- V.104.- N.4.- P. 377-379.

192. The type 1 receptor (CD 120a) is the high-affinity receptor for soluble tumor necrosis factor / M. Grell et al. // Proc Natl Acad Sci U S A.- 1998.-V.95.-P. 570-575.

193. Therapy of asymptomatic gallstones: indications and limits / R. Picci et al. // Chir Ital.- 2005.- V.57.- N.I.- P. 35-45.

194. Thomson A.B.R. First Principles of Gastroenterology: The Basis of Disease and an Approach to Management Third edition / A.B.R. Thomson, E.A. Shatter. AstraZeneca. Canadian Association of Gastroenterology. - 2004. - P. 440-451.

195. TNF-alpha receptors simultaneously activate Ca2+ mobilisation and stress kinases in cultured sensory neurones / J. Pollock et al. // Neuropharmacology 2002.- V.42.- P.93-106.

196. TNF-alpha stimulates monocyte adhesion to glomerular mesangial cells. The role of intercellular adhesion mole-cule-1 gene expression and protein kinasesi / Pai R. et al. // J. Immunol.- 1996.- V. 156.- P. 2571-2579.

197. TNFR2 gene polymorphism in coronary artery disease / V.H. Sankar et al. // Indian Journal of Medical Science.- 2005.- V.59.- Issue 3.- P. 104-108.

198. Trauner M. Bile salt transporters: molecular characterization, function,and regulation / M. Trauner, J.L. Boyer // Physiol Rev.- 2003.- N.83.- P.633-671.

199. Tumor necrosis factor (TNF)-TNF receptor gene polymorphisms and their serum levels in Korean women with endometriosis / J.C. Soo et al. // Am J Repr Immunol.- 2008.- V. 60.- P. 432-439.

200. Tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) and TNF-beta and their receptors in experimental cutaneous leishmaniasis / S. Kossodo et al. // Infectology and immunology.- 1994.- V. 62.- N.4.- P. 1414-1420.

201. Tumor Necrosis Factor Gene Polymorphisms, Leukocyte Function, and Sepsis Susceptibility in Blunt Trauma Patients / M. Majetschak et al. // Clin Diagn Lab Immunol.- 2002.- V. 9.- N.6.- P. 1205-1211.

202. Ursodeoxycholic acid alone or with chenodeoxycholic acid for dissolution of cholesterol gallstones: a randomized multicentre trial. The British-Italian Gallstone Study group / M.L. Petroni et al. // Aliment Pharmacol Ther.-2001.- N.15.- P.123-128.

203. Vandenbroeck K. Cytokine gene polymorphisms in multifactorial conditions // Edited by K. Vandenbroeck.- CRC Press Taylor & Francis Group, Boca Raton, FL.- 2006. P. 447.

204. Variants in Inflammation Genes and the Risk of Biliary Tract Cancers and Stones: A Population-Based Study in China / A.W. Hsing et al. // Cancer Res.- 2008.-V. 68.- N.15.- P. 6442-6452.

205. Venneman N.G Gallstone disease: Primary and secondaiy prevention / N.G Venneman, K.J. van Erpecum // Best Pract Res Clin Gastroenterol.- 2006.-V.20.-N.6.-P. 1063-1073.

206. Vogt D. Gallbladder Disease: An update on diagnosis and treatment / D. Vogt // Cleveland Clinic Journal of Medicine.- 2002.- V.69.- N.12.- P. 977-984.

Информация о работе

Демин, Сергей Сергеевич
кандидата медицинских наук
Москва, 2011
ВАК 03.02.07

Диссертация

Клиническое значение генетических полиморфизмов факторов некроза опухоли и их рецепторов при хроническом калькулезном холецистите - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы