Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Клеточная селекция яровых твердых и мягких пшениц на устойчивость к засолению

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Клеточная селекция яровых твердых и мягких пшениц на устойчивость к засолению"

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А. ТИМИРЯЗЕВА

На ¡травах рукописи ДИАС Фердинандез Тамара

КЛЕТОЧНАЯ СЕЛЕКЦИЯ ЯРОВЫХ

ТВЕРДЫХ И МЯГКИХ ПШЕНИЦ НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ЗАСОЛЕНИЮ

Специальность 03.00.23 — биотехнология

' Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 1994

Работа выполнена на кафедре сельскохозяйственной биотехнологии ТСХА.

Научный руководитель — кандидат биологических наук И. Д. Никифорова.

Официальные оппоненты — доктор биологических наук 3. Б. Шамина, кандидат биологических наук В. А. Аветисов.

Ведущее учреждение — Московский государственный университет (биологический факультет). • 0

Защита состоится 4 апреля 1994 г. в на заседании

специализированного ученого совета Д. 120.35.07 в Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева.

Адрес: 127550, г. Москва, ул. Тимирязевская, 49, отдел защиты диссертаций.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке ТСХА.

Автореферат разослан марта 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета — л. кандидат биологических наук Л й /■//'{[

¿7 ( Л (С ¿'У ) А. С. Лосева

Актуальность проблемы. Изменяющийся климат планеты, вызванный влиянием жизнедеятельности человека, ставит перед селекционерами задачи создания новых форм культурных растений, устойчивых к экстремальным факторам окружающей среды (засухе, засолению почв, низким температурам). Кроме того, возрастающие потребности в пище и потери земли из-за засоления вследствие орошения требуют создания высокопродуктивных и устойчивых форм культурных растений.

Одним из путей для решения подобных задач может быть расширение арсенала методов повышения генетического разнообразия за счет применения культивируемых клеток растений. В настоящее время методами клеточной селекции уже созданы новые солеустойчивые формы люцерны, риса, томатов и других растений. Повышение устойчивости растений пшеницы к абиотическим стрессам позволит сократить потери урожая от воздействия неблагоприятных факторов окружающей среды.

Методы культуры клеток для гексаплоидной пшеницы достаточно хорошо разработаны и уже применяются для создания исходных форм для селекции. Тетраплоидные пшеницы, до последнего времени были трудной культурой в биотехнологии. Исследователям удавалось получать каллусную ткань, которая через два-три месяца культивирования теряла способность к морфогенезу. Поэтому, создание системы для длительного культивирования клеток тетраллоидных пшениц и включения их в биотехнологический процесс является особенно актуальным. Кроме того, это даст возможность изучать физиологические особенности клеточного ответа на различные стрессы и проводить эксперименты по клеточной селекции.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы было создание новых форм твёрдой пшеницы и изучение особенностей ответа на солевой стресс на клеточном уровне у твёрдых и мягких пшениц.

Для достижения поставленный целей было необходимо:

- разработать систему, позволяющую культивировать клетки твёрдых сортов пшеницы длительное время без потери ими способности к морфогенезу;

- оценить вклад физиологического состояния исходного растения в поцесс формирования каллусной ткани;

- г -

- провести сравнительное • изучение влияния солевого и осмотического стресса на формирование каллусной ткани и рост уже сформированного каллуса у ТЕёрдых и мягких сортов .пшеницы;

- отселектировать_ устойчивые к засолению клеточные линии й получить из них растения регенеранты;

- провести лабораторную оценку растений-регенерантов.

Научная новизна. Впервые разработана система позволяющая длительное время (более полутора лет) культивировать каллусные ткани твёрдых сортов пшеницы способные к регенерации целого растения. Показано, что в ответе на солевой стресс на клеточном уровне не существует принципиальных различий мевду двумя видами пшеницы (Triticum aestivum и Triticum durum). Впервые показано, что ср^ди сортов твердой пшеницы встречаются сорта, которые по устойчивости к засолению на клеточном уровне превосходят сорта мягкой пшеницы. Впервые, проведена клеточная селекция на устойчивость к засолении на сортах тетраплоидной пшеницы и получены растения -регенеранты. Методом регистрации кинетики замедленной флуоресценции среди растений-регенерантов выявлены формы превосходящие по устойчивости исходный сорт.

Практическая значимость. Созданные в результате работы новые формы твёрдой и мягкой пшеницы могут слугкить основой для создания новых сортов, обладающих устойчивостью к засолению и осмотическому стрессу, что позволит сократить потери урожая от -воздействия неблагоприятных факторов окружающей среды. I

Апробация работы/ Результаты исследования представлены на II Российском симпозиуме "Новые методы биотехнологии растений" в 1993 году, на конференции молодых ученых Московской сельскохозяйственной академии им. К А. Тимирязева 1993 года, на заседании кафедры сельскохозяйственной биотехнологии ТСХА.

Публикации. По материалам диссертации опубликована одна работа. •

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, методической части,

результатов и обсуждения. Материалы диссертации изложены на й-с&О страницах текста, содержат /¿Гтаблиц, /¿2, рисунков и /р фотографий. Библиография содержит 220 источников отечественной и зарубежной литературы.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве объектов исследования были использованы сорта яровой гексаплоидной пшеницы (Тписшп аеэиуит) селекции Севере-Казахстанского селекционного центра (Каз. НИ-ИЗХ) Ишимская 90 , и сорта тетраплоидной пшеницы - Беэен-чукская 139 и ДамсинскаяЭО.

Каллусную ткань получали из незрелых зародышей (14-16 дней после . цветения) на модифицированной среде Мураси-ге-Скуга (МС) с добавлением 2 мг/л 2,4-Д. Следует отметить, что для индукции каллуса использовали зародыши из зерновок расположенных только в средней части колоса. Культивирование проводили при температуре 27'с и тгостоянном освещении. Пересадки на свежую питательную среду осуществляли каждые 4 недели. Интенсивность роста каллуса обозначали как относительный рост и определяли, как отношение прироста каллуса к весу экспланта Вес экспланта обычно составлял 20-30мг. Прирост биомассы 5 стрессовых условиях выражали как 7. к контролю, т. е. к росту каллуса данной линии на неселективной среде.

Морфогенный потенциал ткани оценивали визуально по шестибальной системе, по которой морфогенным считался каллус, состоящий более чем на 30% из плотных структурированных тканей.

Клеточную селекцию проводили по различным схемам. Растения- регенеранты из отселектированных клеточных линий получали как в селективных условиях, так и на обычных средах.

Тестирование на солеустойчивость растений-регенерантов проводили с помощью регистрации замедленной флуоресценции (ЗФ), которую проводили на первом листе 10-дневных проростков. Солевому стрессу подвергали как целые проростки ( про-

- 4 - •

ращивание в 171 мМ растворе NaCl), так и срезанные листья, которые за 24 часа до регистрации ЗФ инкубировали в растворе NaCl. Контролем служили проростки или листья инкубированные в воде. Регистрацию ЭФ проводили на кафедре биофизики МГУ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Генотипические особенности формирования каллусной ткани у твёрдых и мягких пшениц.

Солеустойчивость у гексаплоидной пшеницы Tnticum aGStivum (геном АА ВВ DD) контролируется множеством генов, проявляющихся, как на клеточном уровне, Tai: и на уровне целого растения. В работах Gorham с соавторами показано, что за контроль целого, организма над транспортом ионов натрия в надземную часть побега у гексаплоидных пшениц отвечают гены расположенные в длинном плече хромосомы 4D. Тетраплоидные пшеницы (Triticum durum L.), обладающие геномом ААВВ, лишены организменного механизма противостояния солевому стрессу вследствие отсутствия D генома. В этом случае на передний' план выходят клеточные механизмы устойчивости. Поэтому изучение ответа на солевой стресс на клеточном уровне твёрдых и мягких пшениц и попытка селекции клеток твёрдых ншениц устойчивых к засолению приобретает не только теоретическое но практическое значение.

Как уже отмечалось, работа по культуре:клеток твёрдых пшениц сопряжена с определенными тудностями. Многие исследователи отмечают, что не удается культивировать каллусную ткань, полученную из незрелых зародышей до'таточно долго без потери ею способности к морфогенезу. Поэтому, в своей работе мы особое внимание уделили первым этапам образования и культивирования каллуса и проанализировали влияние генетических и физиологических факторов на процесс формирования каллусной ткани.

Под влиянием 2,4-Д ткани незрелого зародыша начинают неорганизованно делиться, образуя каллусную ткань. Чашо

всего каллусная ткань бывает неоднородной и состоит из рыхлых, водянистых участков и более плотных, структурированных тканей с выраженными меристематическими очагами. При сравнении морфологии каллуса твёрдой и мягкой пшеницы мы обнаружили, что морфогенные каллусные ткани твёрдых сортов пшеницы более плотные имеют более насыщенный желтый цвет. Результаты оценки морфогенного потенциала в конце нулевого пассажа представлены в таблице 1.

Табл. 1. Оценка морфогенного потенциала каллусных тканей твердой и мягкой пшеницы.

сорт условия число индук. всего морфог. X образ.

опыта экспл. 7. каллусов МК

Дам. 92 тепл. 130 100 78 60+4,3

Без. »1 601 100 356 59+2,0

Ишим. И 515 100 278 54+2,2

Дам. 92 пол. 157 100 62 40+3,9

Без. и 116 100 54 47±4,6

Ишим. 148 100 54 37+4,0

Дам. 93 пол. 124 100 69 56+4,5

Без. и 127 100 72 57+4,4

Ишим. 1« 134 93 32 24+3,7

± стандартная ошибка

В таблице 1 представлены два варианта выращивания до-норных растений (в теплице и в поле). Следует отметить, что два варианта полевых экспериментов сильно отличались между собой по климатическим условиям - лето 1992 года было жаркое и острозасушивое, а лето 1993 года было холодное и дождливое.,

Как видно из представленных данных,индукция каллуса на среде МС с добавлением 2 мг/л 2,4-Д практически для всех сортов и во все испытанные годы проходила со стопроцентным

' - 6 - .

успехом. Однако, на образование морфогенного каллуса существенное влияние оказывал генотип исходного растения. Сорта тетраплоидной пшеницы (Безенчукская 139 и Дамсинская 90) при всех вариантах выращивания донорных растений по способности образовывать морфогенный каллус превосходили сорт, гексаллоидной пшеницы (Ишимская 90). Эффективность образования мораогешюго каллуса у сортов твёрдых пшениц примерно одинакова (56-60%) как для тепличных растений, так и для полевых 1993 года и снижалась до 40-47Х, когда донорные растения испытывали засуху в 1992 году. Для' сорта мягкой пшеницы Ишмская 90 наиболее удачным источником незрелых зародышей служили растения выращенные в теплице.

Кок мы 'уже отмечали выше, при, индукции каллуса наблюдаются различия между зародышами по способности формировать тот или иной тип каллуса При оценке итенсивнссти каллусо-гекеза было установлено, что в популяции зародышей встречаются экземпляры, способные к высокой пролиферации каллусной ткани (до 240 мг.) в то время как другие-практически не образуют каллуса. Анализ частоты распределения зародышей по интенсивности каллусогенеэа (см. диссертацию) показал, что мезду видами существуют различия в зоне максимального прироста. Так для твёрдых пшениц максимальный' прирост каллуса дотигал 200 мг. , тогда как для мягкой пшеницы 250 мг. В зависимости от условий йыращивания донорных растений модальный класс мог сдвигаться или в сторону увеличения пролиферации (сорта Дамсинская 90 и Безенчукская 139 в полевых условиях), или в сторону понижения пролиферации (сорт Ишимская 90 Ь полевых условиях)

Для того, чтобы ответить на вопрос, в какой мере такая гетерогенность ответа зародыней на условия индукции каллуса внутри сорта обусловлена физиологической или генетической неоднородностью исходного материала, мы сравнили способ--ность к каллусогенезу у зародышей внутри семей и между рад-личными семьями. Для этого оценивали интенсивность каллусо-гонеза и морфогенный потенциал по индивидуальным колосьям. Результаты этого эксперимента представлены на рисунке 1.

Из представленных данных видно, что у твёрдых сортов

а

Рис. 1.2,.

1 2

1. ..10

3456789 10 Б - 138

123456789

Д "90

1 2 3 4 5 8 7 ИШ " 90 -

□ Инт. роста ■ МП Сравнение индукции каллуса и морфогенного потенциала у зародышей по семьям. - N0. колоса.

пшеницы наблюдается сущестренные различия между колосьями по индукции каллуса из' незрелых зародышей. Так у сортов Бе-8енчукская 139 и Дамсинская 90 выявлялись семьи, которые по способности к каллусогенезу различались в 3-5 раз. Интересно, что у сорта Ишимская 90 наблюдалась достаточно однородная реакция среди семей на индукцию каллуса. Следовательно, большие различия между зародышами по способности к формированию каллуса (от 19 до 236 мг.) обусловлены скорее всего физиологической неоднородностью зерновок в одном колосе, чем генетической неоднородностью сорта. В случае твёрдых пшениц можно предположить наличие генетической неоднородности сортов по этому признаку. Оценка морфогенного потенциала в этом эксперименте показала, что интенсивность роста каллусов при индукции не всегда корелирует с его морфоген-ной способностью.

На основании полученных данных можно заключить, что на процесс формирования морфогенного каллуса существенное влияние оказывают генотип исходного растения и его физиологическое состояние, что хорошо согласуется с имеющимися в литературе данными. Правда существуют данные о преимуществах использования в биотехнологии именно полевых растений (При-ходысо 1987), что не реализуется в варианте с сортом Ишимская 90. Но, на наш взгляд, это скорей всего исключение , обусловленное крайне неблагоприятными климатическими условиями для этого сорта

Влияние аасоления на индукцию каллусу у твёрдой и мягкой пшеницы.

Известно, что действие солевого стресса на растительные 1слетки складывается из двух компонентов - осмотического и токсического. Для решения поставленных перед нами задач было необходимо оценить влияние солевого и осмотическрго стресса на процесс формирования каллусных тканей у трёх сортов пшеницы. В работе, выпоненной ранее на кафедре биотехнологии ТСХА (Еаттатхоттам 1991) было показано, что процесс дедифференциации более чувствителен к солевому стрес-

- е -

су, чем рост уде сформированных каллусных тканей, и было показано, что концентрация 0,3% ИаС1 является в этом случае сублетальной. Поэтому мы использовали для индукции каллуса из незрелых зародышей эту концентрацию соли и соответствующую ей по осмотическому потенциалу концентрацию неионного осмотика маннита-0,1 М. Результаты этих экспериментов приведены в таблице 2.

Таблица 2.

Индукция каллуса в стрессовых условиях.

сорт условия опыта . контроль МаС1 маннит

прирост (мг) X прирост (мг) % К кон. прирост (мг) X к кон.

Даме. 53+3,07 100 37+1,60 70 - _

Без. тепл. 77+2,49 100 38+1 ,'50 49 - -

Ишим. 75+3,04 100 49+2,13 65 - -

Даме. 91+2,79 100 83*2,87 91 68+2,58 75

Без. поле 82+3,62 100 75*2,70 92 63+3,64 77

Ишим. 1993 58+3,23 100 75+3,50 129 66+4. 56 114

± стандартная ошибка

Из представленных данных видно, что добавление к среде 0,3% МаС1 существенно угнетало формирование каллускых тканей у всех сортов, когда источником зародышей служили растения, выращенные в теплице. В том случае, когда источником зародышей служили растения, выращенные в поле, у сортов тетраплоидной пшеницы наблюдалось незначительное ингибиро-вание индукции каллуса, менее 10 % по сравнению с контролем, а у мягкой пшеницы данная концентрация соли стимулировала прирост каллусной ткани. Стимуляция роста каллусяой ткани низкими концентрациями солей отмечалась ранее в литературе на каллусных тканях различных растений. Объясняют это явление облегчением поступления питательных веществ в клетки при повышении ионной силы среды. В нашем случае мож-

но сказать, что в некоторых случаях стимуляция возможна и при формировании каллусной ткани.

Изоосмотическая концентрация неионного осмотика манни-та в этих условиях значительно сильнее ингибировала процесс дедифференциации у пшеницы твёрдых сортов, чем хлорид натрия.- А для сорта Ишимская 90 увеличение осмотического потенциала в среде также привело к стимуляции каллусогенеза, хотя и не такой значительной, как соль. Как было показано ранее на различных видах растений (Еаттатхотам 1991, Дридзе 1989), осмотический стресс в меньшей степени угнетает рост пассируемого каллуса, чем солевой стресс в изоосмотической концентрации; Забегая вперед, можем сказать, что рост пассируемого каллуса использованных в нашей работе сортов пшеницы также в меньшей степени ингибировался 0,3 М маннитом, чем изоосмотической концентрацией NaCl (171mM), что вполне логично, так как к осмотическому стрессу добавляется еще и токсическое действие ионов натрия. Результаты, полученные 'при индукции каллуса не вписываются в эту логику. Можно только предположить, что физиологическое состояние донорно-го растения влияет не только на процесс формирования каллуса из незрелых зародышей, но и на ответ на солевой и осмотический стресс.

Можно предположить, что изменение балланса эндогенных гормонов у зародышей сформированных в различных климатических условиях позволяет им с различной интенсивностью образовывать каллусную ткань а также по-разному противостоять солевому стрессу. Конечно нельзя сказать, что климатические условия лета 1993 года были оптимальны для сортов Безен-чукская 139, Дамсинская 90 и Ишимская 90. Эти сорта предназначены для регионов с более сухим и жарким климатом.

Таким образом, оценивая результаты полученные на теп-•Личнах и полевых растениях, можно заключить, что в отношении к солевому стрессу на клеточном уровне сорт Ишимская 90 (Triticum aestivum) показал большую толерантность, чем сорта твёрдой пшеницы (Triticum durum). Кроме того, физиологическое состояние донорного растения в значительной мере

влияет на процесс дедифференциации клеток незрелого зародыша в стрессовых условиях.

Влияние генотипа на морфогенный потенциал культивируемых тканей двух видов пшеницы.

Известно, что культивирование каллусних тканей пшеницы (особенно твёрдой) часто приводит к снижению её морфогенно-го потенциала и большое влияние на этот процесс оказывает генотип. В нашей работе мы культивировали каллусные ткани пшеницы на той же среде, на которой проводили индукцию каллуса из зародышей, то есть на среде МС, содержащей 2 мг/л 2,4-Д. Для гексаллоидной пшеницы, как это было показано ранее, такие условия культивирования являются оптимальными.

Культивирование в таких условиях ¡саллусных тканей твёрдой пшеницы сорта Дамсинская 90 показало, что наряду с пролиферацией каллуса происходит регенерация растений. Причем с увеличением времени культивирования пролиферация каллуса снижается, а регенерация возрастает. Для другого сорта твёрдой пшеницы Безенчукская 139 таких явлений не наблюдалось, но морфогенный потенциал по мере субкультивирования ткани значительно снижался. Увеличив концентраш'ч 2,4-Д в среде до 2,5 мг/л мы практически исключили преждевременную регенерацию у сорта Дамсинская 90 , а у сорта Безенчукская 139 удалось избежать снижения морфогенного потенциала. Это позволило нам поддерживать дедифференцированное состояние в культуре клеток твёрдых сортов пшеницы.

На рисунке 2 представлены результаты оценки морфогенного потенциала тканей трёх сортов пшеницы при длительном культивировании в присутствии 2,5 мг/л 2,4-Д. Как мы отмечали выше, субкультивированию подвергались только морфоген-ные участки каллусной ткани. В процессе пролиферации в течение пассажа происходит размножение как морфогенных участков, так и неморфогенных. Оценка морфогенного потенциала в конце каждого пассажа дает нам возможность проследить динамику изменения этого фактора при культивировании.

Из представленных данных видно, что у всех сортов

Время культивирования ( месяц ).

- Б - 139 — Д - 90 ____ Иш - 90

Рис. 2. Изменение морфогенного потенциала каллусов при длительном культивировании.

твёрдой пшеницы морфогенный потенциал ткани колеблется от пассажа к пассажу, особенно первые месяцы культивирования. Однако, через пол-года культивирования удаётся существенно повысить морфогенный потенциал тетраплоидной пшеницы ( до 90%) относительно его начального состояния (60%) и сохранять его на этом уровне длительное время (1,5 года). Мэрфо-генный потенциал каллусной ткани мягкой пшеницы не подвержен столь сильным колебаниям. Мы видим, что длительное субкультивирование только морфогенных частей каллуса мягкой пшеницы позволяет значительно повысить морфогенный потенциал ткани с 28% при индукции до 88% уже во втором пассаже и сохранять его на этом уровне длительное время.■ Способность к морфогенезу определялась не только визуально по морфологии каллуса, но и получением растений-регенератов в каждом пассаже.

Таким образом, можно заключить, что нам удалось создать систему, позволяющую длительное время культивировать высокоморфогенные каллусные ткани твердых сортов пшеницы.

Влияние солевого стресса на пролиферацию каллуса твёрдой и мягкой пшеницы.

Изучение влияния слабого солевого стресса на процесс формирования каллусной ткани из незрелых зародышей показало, что на индукцию каллуса существенное влияние оказывает физиологическое состояние донорного растения. При оценке влияния засоления на рост каллусных тканей, которые культи-• вировались в системе in vitro 4-5 месяцев, можно рассчитывать на то, что влияние физиологического состояния исходного растения будет исключено.

Анализ влияния хлоридного засоления на рост каллусной ткани трёх сортов пшеницы показал (Рис. За), что на низких концентрациях NaCl (85,5mM) выявляются видовые различия в ответе на солевой стресс на клеточном уровне. Эта концентрация соли стримулмровала рост клеток сорта Ишимская 90, но угнетала рост клеток твёрдых сортов пшеницы. По-видимому, стимуляция роста каллусных клеток низкими концентрациями

Относительный рост

( % к контролю ).

И è S S § !

МаС1 является характерной чертой для сорта Ишимская 90, т.к как индукция каллуса также стимулировалась добавлением соли.

Повышение концентрации соли до 171 тМ приводило к ревкому снижения интенсивности роста (на 40-50%) гак'у сорта Дамсинская 90, так и у сорта Ишимская 90, и только на 10% снижался рост клеток сорта Еезенчукская 139. Дальнейшее повышение концентрации ИаС1 в среде приводило к снижению интенсивности роста клеток всех сортов,, причем рост клеток сортов Еезенчукская 139 и Ишимская 90 ингибирбвался практически одинаково, но не так резко, как рост клеток сорта Дамсинская.

Как видно из рисунка 36 сульфатное засоление в низких концентрациях (35 мМ) оказывало стимулирующее действие на рост культивируемых клеток сорта Дамсинская 90. При пошдме-нии концентрации соли наблюдается более резкое угнетение роста каллусних тканей у всех сортов, чем при хлори/шом засолении. Так И)-50 для хлоридного засоления у испытанных сортов располагается в пределах 160-240 мМ НаС1, а для сульфатного 85-130 мМ.

Дисперсионный анализ, полученных данных, проведенный по трем факторам: сорт, тип соли и концентрация соли, ползал, что обнаруженные нами различия между сортам« в отпето на солевой стресс являются достоверными на 0,05л уровне значимости.

На основании полученных данных можно предположить, что по-видимому не существует принципиальных различий в механизмах ответа на солевой-стресс на клеточном уровне неаду твёрдыми и мягкими пшеницами. Клетки сортов Еезенчукская 139 и Дамсинская 90 более устойчивы к хлоридному засолению, чем клетки сортов Саратовская 29 и Московская 35. Отсутствие у тетраплоидных пшениц генов, обеспечивамдих организме нный уровень устойчивости к засолению- по-видимому никак не сказывается на клеточных механизмах ответа на солевой стресс, что позволяет надеяться на то, что повышенная в результате клеточной селекции устойчивость к засолению в дальнейшем реализуется на уровне целого растения.

- 16 -

Кл«гоч|1а!С солокцаа на устойчивость к засолению.

Ьч-и.ду того, что ми по обнаружим принципиальных отличий ь огыям на соли 1>о.1 са'росс на клеточном уровне между Д1.'У'|<! ьиламп гн!и.'и'11Ц|1, клеточную селекцию мы проводили ПО урлди.1йошшм схемчм начинал с кулевого или более поздних иассга^'Н. Основном принципом селекции было длительное куль-ТП^НрОК.ШК.- кл-.-ток в стрессовых условиях. Для исключения шунлмюсти отоора адаптированных линий, клетки способные расти ь условиях иаеолешш возвращали в неселективные усло-ияя и ьитом продолжали селекцию. Регенерацию растений из отсосанных клеточных линий старались вести- также в присутствии селектирующего Актора. В результате проведенной работы нами получены раетония-регень-ранты из всех, использованных в [заботе сортов пшеницы. Б таблице 3 представлены данные о числе полученных неточных линий и раСТеНИЙ-реГе-

НС'раНТОВ.

еелектир. число, число

сорта 4актор клеточных полученных

линии регенерантов

Дамсин. ЫаС1 1 3

18 21

Еезенчук. МаС1 1. 6

Ка220+ 2 13

Лшимск. МаС1 5 19

8 15

Из представленных данных видно, что наибольшее количество клеточных линий и регенерантов получено после селекции у сорта мягкой пшеницы Ишимская 90 и меньше всего у сорта Еезенчукекая 139, что отражает по-видимому их отношение к засолению. Кроме того, видно, что с большей эффективностью отбираются клетки устойчивые к сульфатному засолению чем к хлоридному у сорта Дамсинская 90, что лишний раз подтверждает данные о большей устойчивости этого сорта к

сульфатному засолению. Такг.м обрчзсм, па»! у.'ьч.пооъ отоСг«тъ клеточные линии устойчивые к апсолетк» поручить р-кчч'тч -регенеранты.

Анализ'растений регенерчиточ.

Проблема тестирования растениЯ-регонсрантов тг>к :•;> < тро стоит для биотехнологов, как и для селокцтоиг-роп. Р.-оо-ходимость массового и раннего тсстиропанил колучлип-дго иа-териала, потребность в доказательстве роалппацнп вркчи-.ип отобранного на клеточном уровне в целом растении и )? поколениях. - заставляет искать адекватнш методы <ш<?1>ки.

В последнее время резко увеличилось когичостм исс.с>(-дований с использованием замедленной флуоресценции дда т>;е-тирования физиологической реакции Фотосмнтатнческого аппарата на различные стрессы (холод, засуха, ?аоо;чаи<и). и работах Мэппеуеих (1390) проведенных на проростках контрастных по чувствительности к засолению сортах троглоп ¡куницы было показано, <гго изменение параметров индукип^ьчей кривой замедленной флуоресценции коалирует с но-к-ыл! устойчивостью к засолению. Поэтому одним из методов тестирования растений-регенерантов на солеустойчивосгь мы попользовали метод регистрации замедленной флуоресценции.

На рисунке 5а представлены типичные кривые заш дленной флуоресценции листа пшеницы в норме и после инкубации срезанных листьев в растворе Иа01 (171пМ). Все описанные участки этой кривой, её форма и основные параметры сильно варьируют в зависимости от состояния фотосинтетического аппарата В стрессовых условиях изменяется высота пика индукции свечения и меняется время затухания свечения, что говорит о нарушениях в электронтранспортной цепи.

На рисунке 56 представлены результаты обсчета кинетик замедленной флуоресценции по параметру .^/2 - полуширине пика, то есть ширине пика на уровне соответствующем спаду свечения в » раза Из представленных данных видно, что инкубация листьев исходных сортов в растворе хлорида натрия приводит к увеличению показателя ^/2. Причем у мягкой пае-

ж К

КС ф

ж

ф

ё

о о ж ь о

СЧ2 \

Д 1 2 3 4 Д-9 О

12 3 4 Б - 1 3 9 И-ИаС1 И + К а СI

3 4 5 6 7 иш - 3 О

Рис. 4а Кривые замедленной флуоресценции в норме (1) и

в присутствии N301 (2). Рис. 46. Анализ растений-регенерантов с помощью измерения

замедленной флуоресценции. Д, Б, И - Сорта. 1.2,... 8- N0. Регенеранта.

ницы этот показатель больше, чем у сортов твёрдой пшеницы. Можно предположить, что фотосинтетический аппарат сорта Ишимская 90 более подвержен солевому стрессу, чем у сортов .Безенчукская 139 и Дамскнская 90.

Среди растений-регенерантов, обозначенных на данном рисунке номерами, мы видим различные варианты реакции фотосинтетического аппарата на солевой стресс. Особенно интересными представляются номера 3 и 5 у сорта Бооончукская 139, у которых полуширина пика в присутствии соли не отличается от полуширины пика флуоресценции в норме. Очень интересные результаты получены при анализе регенерантов- сорта Ишимская 90. Почти у всех регенерантов солевой стресс . не вызывал значительных изменений полуширины пика флуоресценции, как это происходит у исходного сорта. Можно предположить, что растения-регенеранты обладают большей устойчивостью к засолению. К сожалению, ввиду нехватки времени нам удалось проанализировать только часть полученных нами растений.. Для детального анализа растений-регенерантов и полевых испытаний будут проведены дополнительные исследования.

ВЫВОДЫ

1. Формирование каллусной ткани из незрелых зародышей двух видов пшеницы/в нормальных я стрессов!« условиях существенным образом зависит от генотипа и физиологического состояния исходного растения.

2. Изменение содержания 2,4-Д в среде позволило создать систему для длительного культивирования тканей тетраплоидной пшеницы без потери ими способности к морфогенезу.

3. При работе с сортовым материалом необходимо иметь ввиду генетическую неоднородность некоторых сортов, для чего предпочтительнее вести работу на колосовом материале.

4. Изучение влияния хлориднбго и сульфатного засоления на индукцию и пролиферацию каллуса выявило различия по чувствительности между сортами к разным типам солей.

5. В результате проведенной клеточной селекции на ус-

тойчивость к засолению на сортах тетраплоидной и гексапло-идной пшеницы получении устойчивые клеточные линии и расте-нпн-регенеранты.

■ 6. Тестирование на солеустойчивость первого семенного поколения растений-регенерантов методом регистрации замедленной флуоресценции показало, что фотосинтетический аппарат некоторых' растений-регенерантов по устойчивости к засолению превосходит исходный сорт.

Публикации.

Диас Т. Никифорова И. Д. 1993 Особенности роста каллус-ных тканей твёрдых и мягких пшениц в условиях засоления. II российский симпозиум "Новые методы биотехнологии растений"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Диас Фердинандез, Тамара

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Влияние засоления почв на растения.

1.2. Действие соли на точку роста растения.

1.3 Сравнение действия хлоридного и сульфатного засоления на рост растений.

1.4. Механизмы солеустойчивости у растений.

1.5. Биохимические основы солеустойчивооти.

1.6. (^неустойчивость у пшеницы.

1.7. Регистрация флуоресценции хлорофилла, как тест на устойчивость к стрессам.

1.8. Культура клеток и клеточная селекция на солеустойчивость.

1.9. Особенности культуры тканей и морфогенеза у мягких и твёрдых пшениц.

Глава II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ II.1. МАТЕРИАЛУ И МЕТОДЫ

11.1.1. Характеристика исходных сортов.

II 1.2. Получение и поддержание культуры клеток пшеницы.

II. 1.2.1. Экспланты и среды.

11.1.2.2. Определение интенсивности роста каллуса пшеницы.

II.1.3. Условия регенерации растений и адаптация регенерантов в почве.

II. 1.4. Определение энергии прорастания семян.

II.1.5. Анализ растений - ренерантов с помощью мето да замедленной флуоресценции.

II.Z. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

11.2.1. Генотипические особенности формирования каллусной ткани у твердых и мягких пшениц.

11.2.2. Влияние засоления на индукцию каллуса у твердой и мягкой пшеницы.

11.2.3. Влияние генотипа на морфогенный потенциал культивируемых тканей двух видов пшеницы.

11.2.4. Влияние солевого стресса на пролиферацию каллуса у сортов твердой и мягкой пшеницы.

11.2.5. Влияние солевого и осмотического стрессов на рост каллусных клеток пшеницы.

11.2.6. Влияние света на рост каллусных тканей пшеницы в нормальных и стрессовых условиях

11.2.7. Клеточная селекция на устойчивость к засолению.

11.2.8. Анализ растений-регенерантов.

I1.2.8.1. Оценка солеустойчивости сортов по энергии прорастания семян.

11.2.8.2. Тестирование растений-pereнерантов с помощью индукции каллуса в стрессовых условиях.

11.2.8.3. Тестирование растении-регенерантов с помощью регистрации замедленной флуоресценции.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клеточная селекция яровых твердых и мягких пшениц на устойчивость к засолению"

Изменяющийся климат планеты, вызванный влиянием жизнедеятельности человека, ставит перед селекционерами задачи создания новых форм культурных растений, устойчивых к экстремальным факторам окружающей среды (засухе, засолению почв, низким температурам). Кроме того, возрастающие потребности в пище и потери земли из-за засоления вследствие орошения требуют создания высокопродуктивных и устойчивых форм культурных растений.

В последние годы активно развиваются исследования в области солеустойчивости во многих странах мира: США, Канаде, Англии, Индии, Мексике, Австралии, Саудовской Аравии, Сирии. Проводится отбор солеустойчивых образцов из мировой коллекции семян. Проводятся работы по локализации генов солеустойчивости на хромосомах, для чего создаются межвидовые гибриды и замещенные линии. Целью этих работ является повышение продуктивности растений для получения пищи, сырья и энергии в аридных и полуаридных зонах земледелия.

Использование устойчивых к засолению генотипов позволит вовлечь в сельскохозяйственную практику новые земли и снизить потери урожая от неблагоприятных климатических условий.

Пшеница - одна из важнейших зерновых культур в мире. На её долю приходится почти одна четверть из мирового пищевого продукта. В основном, культурные сорта пшеницы (особенно твердой) не обладают устойчивостью к засолению. Поэтому, изучение механизмов и повышение солеустойчивости пшеницы имеет не только теоретическое, но и практическое значение.

Одним из путей для решения подобных задач может быть расширение арсенала методов повышения генетического разнообразия за счет применения культивируемых клеток растений. В настоящее время методами клеточной селекции уже созданы новые солеустойчивые формы люцерны, риса, томатов и других растений. Повышение устойчивости растений пшеницы к абиотическим стрессам позволит сократить потери урожая от воздействия неблагоприятных факторов окружающей среды.

Солеустойчивость у гексаплоидной пшеницы Triticum aestivum (геном АА ВВ DD) контролируется множеством генов, проявляющихся, как на клеточном уровне, так и на уровне целого растения. В работах Gorham с соавторами (1987) показано, что за контроль целого организма над транспортом ионов натрия в надземную часть побега у гексаплоидных пшениц отвечают гены расположенные в длинном плече хромосомы 4D. Тет-раллоидные пшеницы (Triticum durum L.), обладающие геномом ААВВ, лишены организменного механизма противостояния солевому стрессу вследствие отсутствия D генома. В этом случае на передний план выходят клеточные механизмы устойчивости. Поэтому изучение влияния солевого стресса на рост клеток твердых и мягких пшениц и селекция устойчивых к засолению клеточных линий с последующей регенерацией измененных растений приобретает не только теоретическое но практическое значение.

Методы культуры клеток для гексаплоидной пшеницы достаточно хорошо разработаны и уже применяются для создания исходных форм для селекции. Тетраплоидные пшеницы, до последнего времени были трудной культурой в биотехнологии. Исследователям удавалось получать каллусную ткань, которая через три-четыре месяца культивирования теряла способность к морфогенезу. Поэтому, создание системы для длительного культивирования клеток тетраплоидных пшениц и включения их в биотехнологический процесс является особенно актуальным.

Целью данной работы было создание новых форм твердой пшеницы и изучение особенностей ответа на солевой стресс на клеточном уровне у твердых и мягких пшениц.

Для достижения поставленных целей было необходимо:

- разработать систему, позволяющую культивировать клетки твердых сортов пшеницы длительное время без потери ими способности к морфогенезу;

- оценить вклад физиологического состояния исходного растения в поцесс формирования каллусной ткани;

- провести сравнительное изучение влияния солевого и осмотического стресса на формирование каллусной ткани и рост уже сформированного каллуса у твердых и мягких сортов пшеницы;

- отселектировать устойчивые к засолению клеточные линии и получить из них растения регенеранты;

- провести лабораторную оценку растений-регенерантов.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Диас Фердинандез, Тамара

выводы

1. Формирование каллусной ткани из незрелых зародышей двух видов пшеницы в нормальных и стрессовых условиях существенным образом зависит от генотипа и физиологического состояния исходного растения.

2. Изменение содержания 2,4 Д в среде позволило создать систему для длительного культивирования тканей тетраплоидной пшеницы без потери ими способности к морфогенезу.

3. При работе с сортовым материалом необходимо иметь ввиду генетическую неоднородность некоторых сортов, для чего предпочтительнее вести работу не колосовом материале.

4. Изучение влияния хлоридного и сульфатного засоления на индукцию и пролиферацию каллуса выявило различия по чувствительности между сортами к разным типам солей.

5. В результате проведенной клеточной селекции на устойчивость к засолению на сортах тетраплоидной и гексапло-идной пшеницы получении устойчивые клеточные линии и растения- регенеранты.

6. Тестирование на солеустойчивость первого семенного поколения растений-регенерантов методом регистрации замедленной флуоресценции показало, что фотосинтетический аппарат некоторых растений-регенерантов по устойчивости к засолению превосходит исходный сорт.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Создание новых форм растений через систему культуры in vitro в настоящее время широко применяется в мировой практике. Культуру клеток применяют как для повышения устойчивости растений к экстремальным факторам окружающей среды, так и для улучшения качетва культурных растений (Akbar et al.,1990, Carver and Johnson 1989,Rosarin et al.,1988, Дридзе 1990,1992).

Известно, что культивирование соматических тканей приводит к различным изменениям генетического аппарата клетки: хромосомным аберрациям, обменам сестринских хромотид, деле-циям, амплификации повторяющихся последовательностей, активации перемещающихся элементов, точечными мутациями. Кроме того, происходят наследуемые изменения в геномах хлороплас-тов и митохондрий (Lapitan et al.,1988, Morrison et al.,1987, Phillips and Peschke 1988, Mohanty et al.,1986, Becraft and Taylor 1989). Полагают, что главную роль в повышении частоты хромосомных нарушений играют экзогенные ауксины, добавляемые в культуральные среды (Zienddin and Kasha 1990, Murata, 1989).

Следовательно, для создания новых форм растений методами культуры in vitro необходимо создать систему, в которой соматические клетки растений длительное время размножаются в дедифференцированном состоянии под влиянием экзогенных регуляторов роста. В этом случае клетки накапливают генетические изменения, которые в последствии могут реализоваться в целом растении.

В нашей работе, одной из задач было создание подобной системы для соматических клеток твердой пшеницы (Triticum durum). Литературные данные убеждали нас в том, что сорта твердой пшеницы значительно труднее поддаются культивированию, чем сорта мягкой пшеницы (см. обзор литературы). Быстрая потеря способности к морфогенезу тканями твердой пшеницы не позволяла проводить работы по клеточной селекции. Результаты нашей работы показали, что для создания технологии длительно культивируемых клеток твердой пшеницы не требуется больших изменений уже существующих. Повышение концентрации 2,4 Д в среде позволило избежать преждевременного проратстания соматических эмбриоидов у сорта Дамсинская 90 и поддерживать каллусные ткани в дедифференцированном состоянии. Такой успех можно было бы отнести за счет удачно подобранных генотипов, однако работа Шаяхметова (1988), который использовал сорт Безенчукская 139 и получал регенерацию только в из первичного каллуса, убеждают нас в том, что дело не только в генотипе, но и в системе.

Созданная нами система, позволила нам провести клеточную селекцию. Кроме того, появилась возможность изучения особенностей ответа на солевой стресс на клеточном уровне у двух видов пшеницы Triticum aestivum и Triticum durum.

Тот факт, что для работы были использованы растения, выращенные в различных климатических условиях, позволил нам выявить огромное влияние физиологического состояния донор-ного растения не только на процесс дедифференциации, но и на реакцию на солевой и осмотический стресс в процессе дедифференциации. Вероятно, балланс эндогенных гормонов в незрелых зародышах у некоторых генотипов может значительно изменяться под влиянием окружающей среды, что приводит к изменению реакции на условия культивирования.

Полученные на базе сомаклональной вариабельности новые формы растений отличались от исходных сортов по различным параметрам:

1. По морфологии - растения-регенеранты сорта Безенчукская 139 и их потомство отличались от исходного сорта по характеру остистости. У сорта Безенчукская 139 ости располагаются параллельно оси колоса, а у растений-регенерантов ости расходящиеся (Фото 8).

- 110

2. По способности индуцировать морфогенный каллус иэ незрелых зародышей. Потомство линии 16 сорта Ишимская превосходило исходный сорт по этому признаку. Охранение признака в потомстве свидетельствует о его генетической природе. Согласно Kaleikau (1989) признак способности к развитию в культуре in vitro контролируется основными генами (TCR-ген), расположенными в длинном плече хромосомы 2D и малыми TCR-генами, расположенными в хромосомах 2А и 26. Можно предположить, что при культивировании ткани сорта Ишимская 90 произошла мутация в каком-либо из этих генов и закрепилась в линии 16.

3. По реакции фотосинтетического аппарата на солевой стресс. Регистрация замедленной флуоресценции позволила выявить среди растений-регенерантов формы, у кторых кинетика замедленной флуоресценции в стрессовых условиях практически не отличается от кинетики ЗФ в контроле, что может свидетельствовать в пользу большей устойчивости к стрессу у некоторых растений.

Для детального анализа влияния засоления на рост и продуктивность растений-регенерантов необходимы дополнительные исследования и полевые испытания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Диас Фердинандез, Тамара, Москва

1. Бабаева С.А.Г.К. Сомаклональная изменчивость твердой и мягкой пшеницы, (автореферат) Москва 1993.

2. Бутенко Р.Г., Джардемалиев Ж.К., Гаврилова Н.Ф. Каллу-сообразуюшря способность эксплантов из разных органов различных сортов пшеницы Triticum aestivum // Физиология растений. -1986. -Т. 33, вып.2-С.350.

3. Бутенко Р.Г., Джардемалиев Ж.К., Гаврилова Н.Ф. Регенерация растений из каллусных тканей полученных из различных органов озимой пшеницы // Физиология растений.-1986.-Т. 33,вып.33-С.837-842.

4. Гапоненко Ф.К., Мутян М.А., Маликова Н.И. Регенирация растений различных генотипов пшеницы Triticum aestivum L. in vitro // Док. АН ССОР.-1984.-Т.278.-N5.-С.1231.

5. Дридзе И.Л. Использование аналога пролина для отбора стрессоустойчивых вариантов в культуре тканей сои и табока: Афтореф. дис. на соискание степ. канд. биол. наук:-М.,1990.

6. Еаттатхоттам Д.Д.Клеточная селекция яровой пшеницы на устойчивость к стрессам, (автореферат) Москва 1991.

7. Керимов Ф., Кузнецов В.В., Шамина З.Б. Организменный и клеточный уровни солеустойчивости двух сортов хлопчатника (133, ИНЭБР-85) // Физиология растений. 1993. - Т. 40 -N.1 - С.128-131.

8. Комизерко Е.И. Действие NaCl Na SO на рост тканей разных экологических групп в культуре in vitro // Физиология растений.-1969.-Т.16.-N4.-C.633-637.

9. Кулиева Ф.Б., Шамина З.Б., Строганов Б.П. Действие высоких концентраций NaCl на размножение клеток Crepis capillaris in vitro // Физиология растений.-1975.-Т.22.-N1.-С.131-135.

10. Маэин В.В., Турганобаева Б.А., Клеточная селекция люцерны на устойчивость к комплексному сульфатно-хлоридному засолению // Тез.док. Всесоюзн. Конф. по генетике соматических клеток в культуре.-1989-М.-С. 83-84.

11. Майсурян А.Н., Хадеева Н.В., Дридзе И.Л. Селекция и изучение свойств клеточных линий сои и табака устойчивых к Ь-азетин-2-карбоновой кислоте // Тез. докл. Всесоюзн. конференции по генетике соматических клеток в культуре.-Звенигород. 1986.

12. Мезенце А.В., Карелина Влияние генотепических особенностей исходного материала и различного уровня засоленности среды на эффективность каллусо- и эмбриогенеза у люцерны // Информ. бюл. СЭВ.-1981.-М.,С.57-60.

13. Ошмарина В.И., Шамина З.Б. Культура клеток Nicotiana sylvestris: характеристика роста и селективная система для выделения солеустойчивых вариантов //Физиология растений. -1982.-Т.29.вып.1-С.161-167.

14. Ошмарина В.И., Шамина З.Б., Бутенко Р.Г. Получение резистентных к NaCl и этионину клеточных линий Nicotiana sylvestris и их характеристика // Генетика.-1983.-Т.XIX, N. 5 -С.822-827.

15. Строганов Б.П., Физиологические основы солеустойчивос-ти растений.-М.:Изд-во Акд. наук СССР, 1962.

16. Строгонов Б.П., Кабанов В.В., Шевякова Н.И. и др. Структура и функции клеток растений при засолении.-М.: Наука,^©.

17. Строгонов Б.П. Метаболизм растений в условиях засоления. -XXXIII Тимирязевское чтение. М.:Наука,1973.- 114

18. Удовенко Г.В. Определение солеустойчивости сортов пшеницы по прорастанию семян и росту проростков на солевых растворах // методическое указание. Ленинград. -1972. -С. 5-11.

19. Удовенко Г.В. Солеустойчивость культурных растений.-Л.: Колос,1977.

20. Удовенко Г.В., Синельникова В.Н.,Давыдова Г.В. Оценка солеустойчивости растений // Методическое руководство: Ди1. W М W .агностика устойчивости растении к стрессовым воздействиям / ВИР.-Ленинград:1988.-С.85-97.

21. Удовенко Г.В. Механизмы адаптации растений к засолению почвы: физиологические и генетические аспекты солеустойчивости. Проблемы солеустойчивости растений:Сб. науч. тр./Инт. Эксп. биол. раст. АН УзССР;Ред. А.И. Имамали-ев.-Ташкент: ФАН, 1989.

22. Шаяхметов И.Ф., Иштерякова Ф.К., Хабирова М.М. Особенности каллусообразования и регенирации растений в культуре незрелых зародышей яровой твердой пшеницы.//Сельскохозяйственная биология.-N4.-1988.

23. Юркова Г.Н., Левенко Б.А., Новожилов 0.В. Плоидность каллусной ткани твердой и мягкой пшеницы.// Цитология и генетика, 1985, Т.19, N. 4, С. 264-267

24. Akbar М, Gena К.К.,Seshu D.V. Effect of salinity on mitotic index in rice cultivars // Oryza.- 1987.- V.24.- P. 374-375.

25. Armstrong- C.L., Phillips R.L. Genetic and cytogenetic variation in plants regenerated from organogenic and friable embryogenic tissue cultures of maize // Crop. Sci.-1988.- V.28.- P.363-369.- 115

26. Asana R.D., Kale V.R. A study of salt tolerance of four varieties of wheat // Indian J. Plant Physiol.-1965.-4.8.- P.5-22.

27. Ayers A.D. Seed germination as affected by soil moisture and salinity // Agron. J.- 1952.-V.44.- P.82-84.

28. Azhar P.M., McNeilly T. The genetic basis of variation for salt tolerance in Sorghum bicolor (L.) Moensch seedlings // Plant Breed.- 1988.- V.101.- P.114-121.

29. Bajaj Y.P.S. In vitro regeneration of diverse plants and the cryopreservation of germplasm in wheat (Triticum aestivumL.) // Cereal Res. Commun.-1986.- V.14.-P.305-311.

30. Ben-Hayyim G., Relationship between salt tolerance and resistance to polyethylene glycol-induced water stress in cultured citrus cells // Plant Physiol.- 1987.- V.85.-P.430-433.

31. Ben-Hayyim G., Goffer J. Plant regeneration from a NaCl-selected salt-tolerant callus culture of Shamouti orange (Citrus sinesis L. Osbeck) // Plant Cell Rep. -1989. V.7, N8. - P.680-683.

32. Ben-Hayyim G., Kochba J. Growth characteristics and stability of tolerance of citrus callus cells subjected to NaCl stress //Plant. Sci.Lett. 1982.- V.27.- P.87-94.

33. Ben-Hayyim G., Zelcer A. Potential use of tomato root cultures for selection of increased tolerance to salinity / /' Abstr. 6 Intl* Congress on plant Tissue and Cell Culture, Amsterdam. 1990.

34. Bennici A., D'Amato F. In vitro regeneration of durum wheat plants. 1.chromosome numbers of regenerated- 116 plantlets.//Z.Pflanzenzuchtg., 1978, v.81, P. 305-311.

35. Bennici A., Baroncelli S., D'Amato F. Cytogenetics of durum wheat plants regenerated in vitro .// In: Jar- Ital Joint Meet Genet. Breed Crop Plant. 1st. Sperimentale CerealiсоIt , Rome: 1979, P.177-188.

36. Bennici A. Durum wheat (Triticum durum Desf.). // In. Biotechnology in Agriculture and Forestry v.2: Crops 1 (ed. by X.P.S. Baiaj) Springer Verland Berlin Heidelberg: 1986, P.89-104.

37. Bennici A., Caffaro L., Dameri R.M., Gastaldo P., Profumo P. Callus formation and plantlet regeneration from immature Triticum durum Desf. embryos //

38. Euphyt ica. -1988.-V.39-P.255-263.

39. Ben-Zioni A., Itai C., Vaadia Y. Water and salt stresses, Kinetin and protein in tobacco leaves // Plant Physiol.- 1967.- V.42.- P.361.

40. Ben-Zioni A., Mizrahi Y., Richmond A. Effect of kinetin on plant response to salinity // New Phytol.-1974.-V.73.- P.315-319.

41. Bernstein L. Salt tolerance of plants // Agric.Inf. Bull.- 1965.- N.283, USDA.

42. Bhaskaran S., Smith R.H., Schertz K.F. Sodium chloride tolerant callus of Sorghum bicolor (L) Moench // Z. Pflanzenphysiol.-1983.- V.122.-S.459-463.

43. Bhaskaran S., Smith R.H., Schertz K.F. Progeny screening of sorghum plants regenerated from sodium chloride-selected callus for salt tolerance // J. Plant. Physiol.-1986.- V.122.- P.205-210.

44. Binarova P., Novotny F., Nedbalkova B. Selection and- 117 characterization of alfalfa cell line resistant to lysine+threonine and/or ethionine // Biochem. and Physiol. Phlanz.-1989.- V.185.- N1-2.- P.99-107.

45. Binzel M.L., Hasegawa P.M., Handa A.K.,Bressan R.A. Adaptation of tobacco cells to NaCl // Plant Physiol.-1985.- V. 79.- P. 118-125.

46. Borowitzak L,J. Solute accumulation and regulation of cell water activity // In: The Physiology and Biochemistry of Drought Resistance in Plants, paleg L.G., Aspinal D. (Eds.) Academic Press, Sydney. 1981.- P.97-130.

47. Bressan R.A., Hasegawa P.M., Handa A.K. Resistance of cultured higher plant cells to polyethylene glycol-induced water stress // Plant Sci. Lett.- 1981.- V.21.- P.23-30.

48. Bressan R.A., Sing N.K., Handa A.K. Stable and unstable tolerance to NaCl in cultured tobacco cells // Plant Genetics.- New York:Liss,1985.- P.755-769.

49. Brown C., Brooks F.J., Pearson D., Mathias R.J. Control of embryogenesis and organogenesis in immature whea embryo callus using increased medium osmolarity and abscisic acid // J. Plant Physiol. 1989 - V. 133. - N.6. - P.727- 733.

50. Butenko R.G., Nikiforova I.D., Chernov V.A. Growth and morphogenesis in cell cultures of spring wheat under stress conditions and selection of tolerant cell lines // pros. Inter. Conf. Potsdam. 1988.- P.9-19.

51. Carver B.F., Johnson В.В. Partitioning of variation derived from tissue culture of winter wheat //Theor. and Appl. Genet. 1989 - V. 78. - No.3. - P. 405-410

52. Catarino F.M., Trewaras A.J. Metabolic changes in- 118 nucleic acids associated with the development of succulence // Phytochemistry.-1970.- V.9.- P.1807-1809.

53. Chandler S.F., MandalB.B., Thorpe T.A. Effect of sodium sulphate on tissue cultures of Brassica napus cv Westar and Brassica campestris L. cv Tobin // J. Plant Physiol.- 1986.- V.126.- P. 105-117.

54. Chandler S.F., Thorpe T.A. Characterization of growth, water relations, and proline accumulation in sodium sulphate tolerant callus of Brassica napus L.cv Wester ( Canola) // Plant Physiol.- 1987.- V.84.- P.106-111.

55. Chandler S.F., Peak K.J., HacheyJ.E., Thorpe T.A. Sodium sulphate tolerance in Beta vulgaris (sugar beet) callus cultures /7 Bot. Gaz.- 1989.- V.150.- P. 247-250.

56. Croughan T.P, Stavarek S.J., Rains D.W. Selection of NaCl tolerant line of cultured alfalfa cells // Crop Sci.-1978.- V.18.- P. 959-963.

57. Daines R.J., Gould A.R. The cellular basis of salt tolerance studied with tissue cultures of the halophytic grass Distichlis spicata // J. Plant Physiol.-1985.-V.199.-P.269-280.

58. Dekeyser A., Lhoest J., Van Caneghen L., Bouharmont J. Sel- ection and characterization of cold- and salt tolerant- 119 rice varieties by in vitro culture techniques // Med. Fac. Landbouww. Rijksuniv. Gent.- 1987.- V.52.- P.1439-1448.

59. De Paepe R., Prat D., Huquet T. Heritable nuclear DNA changes in doubled haploid plants obtained by pollen culture of Nicotiana sylvestris // Plant Sci. Lett.-1982.-V.28.- P.11-28.

60. Dhillon S.S., Wersman E.A., Miksche J.P. Evolution of nuclear DNA and heterochromatin changes in anther-derived dihaploids of tobaco (nicotiana tabacum) cv.Coker. // Can. J. Genet. Cytol.- V.25.-P.169-173.

61. Dix P.J., Street H.E. NaCl-resistant cultured cell lines from Nicotiana sylvestris and Capsicum annum // Plant Sci. Lett.- 1975.- V.5.- P.231-237.

62. Dix P.J., Pearce R.S. Proline accumulation in NaCl-resistant and sensitive cell lines of Nicotiana sylvestris // Z. Pflanzenphysiol.-1981.- V.102.-P.243-248.

63. Downton W.J.S., Millhouse J. Turgor maintenence during salt stress prevents loss of variable fluorescence in grapevine leaves. //Plant Science Letters. 1983 - V. 31. - P. 1-7.

64. Eapen S., Rao P.S. Plant regeneration from callus cultures of Durum and Emmer. wheat.// Plant Cell Rep., 1982, V.l, P. 215-218.

65. Eaton F.M. Toxicity and accumulation of chloride and sulphate salts in plants // J. Agric. Res.-1942.-V.64.-P.357-399.

66. El Mekkaoui M., Monneveux P., Damania A.B. Chlorophyll fluorescence as a predictive test for salt tolerance in cereals .-Preliminary results on durum wheat. //Rachis- 120 1989 V.8. - No.2 - P.16-19.

67. El Mekkaoui M. Etude des mecanismes de tolerance a la salinite chez le ble dur (triticum durum Desf.) et l"org:e (hordeum vulgare L.) .-Recherche de tests precices de selection //These ENSA Motpellier, 1990.-P.193.

68. Epstein E. Responses of plant to saline environments / / In: Genetic Engineering of Osmoregulation: Impact on Plant productivity for Food, Chemicals and Energy. Rains D. W., Valetine R.C., Hollaender A. (Eds.). Plenum Press, New York. 1980.-P.7-21.

69. Epstein E., Norlyn J.D., Seawater based production: a feasibility // Science.-1977.-V.197.-P.249-251.

70. Epstein E., Norlyn J.D., Rush D.W., Kingsbury R.W., Kelley D.B., Cunningham G.A., Wrona A.F. Saline culture of crops: A genetic apporoach // Scince. 1980. - V.210. -P.399-404.

71. Ericson M.C., Alfinto S.H. Proteins produced during salt stress in tobacco cell cultures // 1984.- Plant Plant Physiol.- V.74.- P.506-509.

72. Eshan B.A., Nazir Ahmad., Piracha I.A., Khan M.A. Salt tolerance of three wheat varieties // J. agric. Res. Pakistan.- 1986.- V.24.- P.53-58.

73. Feldman M., Sears E.r. The wild gene resoureses of wheat // Sci. Am.-1981.-V.244.-P.98-109.

74. Flowrs T.J. Troke P.F., Yeo A.R. The mechanisms of salt tolerance in halophytes // Ann. Rev. Plant Physiol.-1977.- V.28.-P.89-121.

75. Flowrs Т., Lachno D., Flowers S., Yeo A. Some effects of NaCl on cells of rice cultured in vitro // Plant- 121 -Sci.-1985.- V.39.-P.205-211.

76. Forster B.P., Gorham J., Miller Т.Е. Salt tolerance of an amphiploid between Triticum aestivum and Agropyron junceum // Plant Breeding:.- 1987.- V.98.- P. 1-8.

77. Forster B.P., Miller Т.Е. A 5B deficient hybrid between Triticum aestivum and Agropyron junceum // Cer. Res. Commun.-1985.- V.13.- P.93-95.

78. Froster B.P., Miller T.S., Law C.N. Salt tolerance of two wheat- Agropyron junceum disomic addition lines // Genome. 1988. - V.30. - P.559-564.

79. Galiba G., Yamada Y. A novel method of increasing the frequency of somatic embryogenesis in wheat tissue culture by NaCl and KCl supplementation // Plant Cell Rep.- 1988.4.7.- P.57-58.

80. Galiba G., Kovacs G., Sutka J. Substitution analysis of plant regeneration from callus culture in wheat // Plant Breed.- 1986.- V.97.- P.261-263.

81. Garcia-reina G., Moreno " '<ugue A. Seleunun for NaCl toleranuw in cell culture of three Canary Island tomato land races. 1. Recovery of tolerant plantlets from NaCl- tolerant cell strains // J. Plant Physiol.- 1988.- V. 133.- P.1-6.

82. Gorham J. Salt tolerance in the Triticeae: Solute accumulation and Distribution in an amphidiploid derived from Triticum aestivum cv. Chinese Spring and Thinopyrum bessarabicum. //Journal of Experimental Botany. 1986 - V. 37 No. 183. P. 1435-1449.

83. Gorham J., Hardy c., Wyn Jones R.G., Joppa L.R., Law C.N. Chromosomal location of a K/Na discrimination- 122 character in the D genome of wheat. // Theor. Appl. Genet.- 1987 V. 74. P. 584-588.

84. Gorham J. Salt tolerance in the Triticeae: K/'Na discrimination in Aegilops Species. // Journal of Experimental Botany. 1990 - V.41. No.226. P.615-621.

85. Gorham J. Salt tolerance in the Triticeae: K/Na discrimination in synthetic hexaploid wheats. // Journal of Experimental Botany. 1990 - V.41. No.226. P. 623-627.

86. Gorham J., Wyn Jones R.G., Bristol A. Partial characterization of the trait for enhanced K+ Na+ discrimination in the D genome of wheat. // Planta. - 1990- V.180. P. 590-597.

87. Gosch-Wackerle G., Avivi L., Galun E. Induction, Culture and Differentiation of Callus from Immature Rachises, Seeds and Embryos of Triticum // Z.Pflanzenphysiol. 1979 - Bd. 91. P. 267-278.

88. Govindjee, Downton W.J.S., Fork D.C., Armond P.A. Chlorophyll a fluorescence transient as an indicator of water potential in leaves.//Plant Science Letters. 1981 -V.20. - P.191-194.

89. Greco B., Tanzarella O.A., Blanco A. Plant regeneration from leaf base callus in durum wheat (Triticum durum desf.) //Cereal Res. 1984 - V.12.- No.3-4. P.171-177.

90. Greenway H., Munns R. Mechanisms of salt tolerance in non-halophytes. // Ann. Rev. Plant Physiol. 1980 - V. 31. P. 149-190.

91. Gupta S.C., Srivastava J.P. Effect of salt stress on morpho-physiological parameters in wheat // Indian J. Plant- 123

92. Physiol.- 1989.- V.32.- P.169-171.

93. Hagemann К. M., Cantrell and Deckard E.L. Tissue culture in Triticum turgidum L. var. durum // Seventh international Genetics Symposium. 1988 - V.l. - P. 741-744.

94. Hampson C.R., Simpson G.M. Effects of temperature, salt, and osmotic potential on early growth of wheat (Triticum aestivum). 1.Germination // Canadian J. Bot.-1990.- V.68.- P.524-528.

95. Hampson C.R., Simpson G.M. Effects of temperature, salt, and osmotic potential on early growth of wheat (Triticum aestivum). 11.Early seedling growth // Canadian J. Bot.-1990.- V.68.- P.529-532.

96. Handa A.K., Bressan R.A., Handa S., Hasegawa P.M. Characteristics of cultured tomato cells after prolonged exposure to medium containing polyethylene glycol // Plant Physiol.- 1982.- V.71.- P.514-521.

97. Handa A.K. Bressan R.A., Handa S., Hasegawa P.M. Clonal variation for tolerance to polyethylene glycol induced stress in cultured tomato cells // Plant Physiol.-1983.- V.72.- P.645-653.

98. Hanning G., Nabors M. In vitro tissue culture selection for sodium chloride (NaCl) tolerance in rice and the performance of the regenerants under saline conditions. // Review of advances in plant biotechnology. 1988 -C.239-248

99. Hanson A.D., Nelson C.E., Everson E.H. Evaluation of free proline accumulation as index of drought resistance using two contrasting barley cultivars // Crop. Sci.1977.- V.-17.- P.720-726.

100. Harms С.Т., Oertli J.J. The use of osmotically adapted cell cultures to study salt tolerance in vitro // J. Plant Physiol.- 1985.- V.120.- P.29-38.

101. Hasegawa P.M., Bressan R.A., Handa A.K. Growth characteristics of NaCl-selected cells of Nicotiana tabaccum L. // Plant Cell Physiol.- 1980.- V.21.-P.1347-1355.

102. Hasegawa P.M., Bressan R.A., Handa S., HAnda A.K. Cellular mechanisms of tolerance to water stress // Hort. Sci.- 1984.- V.19.- P.371-377.

103. Hasegawa P.M., Bressan R.A., Handa A.K. Cellular mechanisms of salinity tolerance // Hort. Sci.- 1986.-V.21.- P.1317-1324.

104. Havaux M., Ernez M., Lannoye R. Selection de varietes de ble dur (Triticum durum Desf.) adaptees a la secheresse par la mesure de 1'extinction de la fluorescence de la chlorophylle in vivo. //Agronomie 1988 - V.8.- No.3 -P.193-199.

105. Havaux M., Lannoye R. Drought resistance of hard wheat cultivars measured by a rapid chlorophyll fluorescence test. // Journal of Agricultural science. 1985 - V.104 -P.501-504.

106. HeyserJ.W., Nabors M.W. Osmotic adjustment of cultured tobacco cells (Nicotiana tabaccum var. Samsum grown on NaCl. // Plant Physiol. 1981.- V.67.- P.720-727.

107. Higgins P., Mathias R.J. The effect of the 4B chromosomes of hxaploid wheat on the growth and regeneration of callus cultures. // Theor. Appi. Genet.-1987. V.74. - P. 439-444.

108. Joshi Y.C., Dwivedi S.R. Quadar A., Bal A.R. Salt tolerance in diploid, tetraploid, and hexaploid wheat // Indian J. Plant Physiol.- 1982.- V.25.- P.421-422.

109. Kaleikau E.K., Sears R.G., Gill B.S. Monosomic analysis of tissue culture response in wheat (Triticum aestivum L.) //Theor. and Appl. Genet. 1989 - Y.78. -No.5 - P.625-632.

110. Kaleikau E.K., Sears R.G., Gill B.S. Control of tissue culture response in wheat (Triticum aestivum L.) //Theor. and Appl. Genet. 1989 - V.78. - No.6 - P.783-787.- 126

111. Katz A., Tal M. Salt tolerance in the wild relatives of the cultivated tomato:proline accumulation in callus tissue of Lycopersicom esculentum L.and peruvianum // Z.pflanzenphysiol. 1980. - V.98. - P.429-435.

112. Kavikishor P.B. Effect of salt stress on callus cultures of Oryza sativa L. //J. Exp. Bot.- 1988.- V.39.-P.235-240.

113. Kavikishor P.B. Salt stress in callus cultures of rice // Abstr.6 Intl* Congress on Plant Tissue and Cell Culture, Amsterdam. 1990.

114. Keck R.W., Boyer J.S. Chloroplast response to low leaf water potentials. 111. Differing inhibition of electron transport and photophosphorylation.//Plant Physiology.-1974 V.53. - P.417-479.

115. Kemal-Ur-Rahim K. The effects of salinity on photosynthesis and other physiological processes in spring wheat varieties //Dissertation Abstracts International.-1988.- V.49.- P.1470.

116. Key J. L., Lin C.Y., Chen Y.M. Heat shok protiens of higher plants.// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1981. V.78 -P.3526-3530.

117. Kim Y.H., Chung T.Y., Choi W.Y. Increased regeneration from NaCl tolerant callus in rice // Euphytica.- 1988.-V.39.- P.207-212.

118. King J., Khanna V. A Nitrate reductase less variant isolated from suspension cultures of Datura innoxia // Plant Physiol.- 1980.- V.66.- P.632-636.

119. King G.J., Hussey C.E., Turner V.A. Aprotein induced by NaCl in suspension cultures of Nicotiana tobaccum- 127 accumulates in whole plant roots //Plant Mol.Biol.- 1986.-V.7.- P.441-449.

120. Kingsbury R.W., Epstein E., Pearchy. Physiological responses to salinity in selected lines of wheat //Plant Physiol. 1984 - V.74. - P.417-423.

121. Kingsbury R.W., Epstein E. Salt sensitivity in wheat. // Plant physiology. 1986 - V. 80. P. 651- 654.

122. Kingsbury R.W., Epstein E. Selection for salt-resistant spring wheat //Crop Sci.- 1984.- V.24.-P.310-315.

123. Kirkham M.B.,Gardner W.B., Gerloff G.C. International water status of Kinetin-treatd, salt stressed plants // Plant Physiol.- 1974.- V.53.- P.241.

124. KochbaJ., Ben-Hayyim G., Saad S., Neumann H. Selection of stable salt-tolerant callus cell lines and embryos in Citrus sinensis and Citrus aurantium // Z. Pflanzenphysiol.- 1982.- V.106.- P.111-118.

125. Kononowicz A.K., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Chromosome number and nuclear DNA content of tobacco plants regenerated from salt adapted plant cells // Plant Cell Rep.- 1990.- V.8.- P.676-679.

126. Kosuge Т., Bruening G., Harada J., Hollander J. tailoring genes for crop improvement: An Agricultural perspective, Proceedings. University of California, Davis. 1986.

127. Maas E.V., Hoffman G.J. Crop salt tolerance:- 129 evaluation of existing data // In: Managing saline Water for Irrigation. H.E. Dregre(ed.),Proo. Int. Conf. Texas Technical Univ. 1976.- P.187-198.

128. Marschner H., Kylin A., Kuiper P.J.C. Differences in salt tolerance of three sugar beet genotypes // Physiol. Plant.- 1981.- V.51.- P.234-238.

129. Mass E.Y. Nieman R.H. Physiology of plant tolerance to salinity // In: crop tolerance to suboptimal land conditions. Ed. Jung G.A. American Soc. Agron.- Publ.-32.-1978.- P.277-299.

130. Mass E.V., Poss J.A. Salt sensitivity of wheat at various growth stages // Irrigation Science.- 1989.- V.10.-P.29-40.

131. Massoud F. I. Salinity and alkalinity as soil degradation hazards // FAO/UNEP Expert Consultation on Soil Degradation, 1974.- FAO, Rome.

132. Mathias R.J. Fukui K. The effect of specific chromosome and cytoplasm substitution on the tissue culture response of wheat (Triticum aestivum L.) callus. //Theor. Appl. Genet. 1986 - V.71., P. 797-800.

133. McCoy T.J. Tissue culture evaluation of NaCl tolerance in Medicago species: Cellular versus whole plant response // Plant Cell Rep.-1987.- V.6.- P.31-34.

134. McHughen A., Rowland G. Canadas' first biotic crop variety: an early maturing,rust resistant flax from cellular selection for salt tolerance // Genome.- 1988.-V.30.- P.469.

135. Meiri A., Kamburoff J., Poljakoff-Mayber A. Response of bean plants to NaCl and Na SO salinization // Ann. Bot.1971.- V. 35.- P.837-847.

136. Munns R., Greenway H., Delane R., Gibbs J. Ion concentration and carbohydrate status of the elongating leaf tissue of Hordeum vulgare growing at high external NaCl. 11. Cause of the growth reduction // J. Exp. Bot.-•1982.- V.33.- P. 574-583.

137. Munns R., Greenway H., Kirst G. 0. Halotolerant eukaryotes. In Encyclopedia of Plant Physiology, New Series,V.12C.-Physiological Plant Ecology, lll.ds. Lange 0. L., Nobel P.S., Osmond C.B., Ziegler H.

138. Springier-Verleg,Berlin. 1983.-P.59-135.

139. Murashige T., Skoog F. A revised medium for repid growth and bio-assay with tobacco tissue cultures // Plant Physiol.-1962.-V.15.-P.473-479.

140. Nabors M.W., Daniels A., Nadolny L., Brown C. Sodium chloride tolerant lines of tobacco cells // Plant Sci. Let. -1975-V.4-P.155-159.

141. Nabors M.W., Daniels A., Nadolny L., Brown C. NaCl-tolerant cell lines of tobacco cells // Plant Sci. Lett.-1975-V.4.-P. 155-159.

142. Nabors M.W., Gibbs S.В., Bernstein С.S., Meis M.E. NaCl-tolerant tobacco plants from cultured cells // Z.Pflanzenphysiol.- 1980.- V.97.- P.13-17.

143. Nabors M.W., Heyser J.W.,Dykes T.A., DeMott K.J.//Long- 131 duration, high-frequency plant regeneration from cereal tissue cultures.//Planta 1983 - V.157.- N.5 - P. 385-391.

144. Narayanan K.K., Sree Rangasamy S.R. Inheritance of salt tolerance in progenies of tissue culture selected variants of rice // Curr. Sci.- 1989.- V.58.- P.1204-1205.

145. Nieman R.H. Expension of bean leaves and its suppression by salinity // Plant Physiol.-1965-V.40.- P.156 -161.

146. Nierman R.H., Maas E.V. The energy change of salt stressed plants // Sixth Internl. Biophysics Cong. Abst.-1978.- P. 121.

147. Norlyn J.D., Epstein E. Variability in salt tolerance of four triticale lines at germination and emergence // Crop Sci.-1984.- V.24.- P.1090-1092.

148. Ojha R.J., Bhargava S.C. Genotypic differences in salt tolerance of wheat // Annals Agri.Res.- 1988.-V.9.-P.76-81.

149. Orton T.J. Comparison of salt tolerance between Hordeum vulgare and Hordeum jubulatum in whole plants and callus cultures // Z.Pflanzenphysiol. 1980-V.98.-P.105-118.

150. Orton T.J. Genetic instability in celery tissue and cell cultures // Iowa State J. Res.-1987-V.61.- P.481-498.

151. Paek K.Y., Chandler S.F., Thorpe T.A. Physiological effects of Na SO and NaCl on callus cultures of Brassica compestris (Chinese cabbage) // Physiol. Plant.- 1988.-V.72.- P.160-166.

152. Pandey R., Ganapathy P.S. Isolation of NaCl-tolerant callus line of Cicer arietinum L. cv.BG-203 //Plant Cell

153. Rep. -1984- V.3.- P.45-47.

154. Pandey R., Ganapathy P.S. The proline enigma: NaCl-tolerant and NaCl-sensitive callus lines of Cicer arietinum // Plant Sci. -1985.- V.40. P13-17.

155. Parasher A., Varma S.K. Effect of рге-sowing seed soaking in gibberellic acid on growth of wheat (Triticum aestivum L.) under different saline conditions // Indian J. Exp. Biol.- 1988.- V.26.- P.473-475.

156. Pastore D., Flagella Z., Rascio A., CedolaM.C., Wittmer G. Field studies on chlorophyll fluorescence as drought tolerance test in Triticum Durum Desf. genotypes.// Journal of Genetics and Breeding. 1989 - ЧЛЗ. P.45-51.

157. Pollard A., Wyn Jones R.G. Enzyme activities in concentrated solutions of glycinebetaine and others solutes // Plants.-1979- V.144. P.291-298.

158. PrakashK.S., Padayatti J.D. Transfer of saline tolerance from one strain of rice to another by injection of DNA // Curr. Sci. -1989- V.58.- P.991-993.

159. PuaE.C., Ragolsky E., Chandler S.F., Thorpe T.A. Effect of sodium sulphate on in vitro organogenesis of tobacco callus // Plant Cell Tissue Organ Culture.- 1985.-V.5.- P.55-62.

160. Pua E.G., Thorpe T.A. Differential Na SO tolerance in tobacco plants regenerated from Na SO -grown callus // Plant Cell Envt.- 1986.- V.9.- P.9-16.

161. Pua E.C., Thorpe T.A. Differential response of nonselected and Na SO -selected callus cultures of Beta vulgaris L. to salt stress // J. Plant Physiol.- 1986.-V.123.- P.241-248.- 133

162. Purnhauser L., Medgyesy P., Czaco M., Dix P.J.,Marton L. Stimulation of shoot regeneration in Triticum aestivum and Nicotina plumbaginifolia Viv. tissue cultures using the ethylen inhibitor AgNO // Plant Cell Rep. 1987 - V.6- P.l -4.

163. Quershy R.H., Ahemd R., Ilyas M., Aslam Z. Screening of wheat (Triticum aestivum L.) for salt tolerance // Рак. J. Agri. Sci.- 1980 P.3-4.

164. Rahman M.M., Kaul K. Differentiation of NaCl-tolerant cell lines of tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) cv. Jet Star // J. Plant Physiol. 1989 - V.133.- P.710-712.

165. Ramagopal S. Protein synthesis in a maize callus exposed to NaCl and mannitol // Plant Cell Rep. 1986 - V. 5 - P.430-434.

166. Ramagopal S. Salinity stress induced tissue-specific proteins in barley seedling // Plant Physiol.- 1987.- V.84. P.324-331.

167. Rana R.S. Genetic diversity of salt-stress resistance of wheat in India // Rachis.- 1986.- V.5.- P.53-57.

168. Reuveny Z., Filner P. Regulation of adenosine triphosphate sulfurylase in cultured tobacco cells // J.Biol. Chem. 1977 - V.252. - P.1858-1864.

169. Rosen A., Tal M. Salt tolerance in wild relatives of- 134 the cultivated tomato: response of naked protoplasts isolated from leaves of Lycopersicon esculentum and L.peruvianum to NaCl and proline // Z. Pflanzenphysiol. -1981 V.102. - P.91-94.

170. Sayed J. Diversity of salt tolerance in a germplasm collection of wheat (Triticum spp.) // Theor. Appl. Genet.-1985.- V.69.- P.651-657.

171. Schreiber U., Bilger W. Rapid assessment of stress effects on plant leaves by chlorophyll fluorescence measurements. In: Proceedings of a Nato Advanced Research Workshop. 1985 - Sesimbra. Portugal. Springer. Berlin.

172. Sears R.G., and Decard Tissue culture variability in wheat: Caiius induction and plant regeneration // Crop.Sci. 1983 - V.22.- P.546-550.

173. Setter T.L., Greenway H., Kuo J. Inhibition of cell division by high external NaCl concentration in synchronised cultures of Chlorella emersonii // Aust. J. Plant Physiol. 1982 - V.9. - P.176-196.

174. Shah S.H., Gorham J., Forster B.P., Wyn Jones R.G. Salt tolerance in the Triticeae: The contribution of the D genome to cation selectivity in hexaploid wheat. // Journal of Experimental Botany. 1987 - V.38. P.254-269.

175. Sharma K.D., Datta K.S., Varma S.K. Effect of chloride and sulphate types of salinity on some metobabolic drifts in chickpea, Cicer arietinum L. // Indian J. Exp.Biol. -1990.- V.28.- P.890-892.

176. Sharma S.K. Effect of salinity on growth,ionic and water relations of three wheat genotypes di ng in salt tolp""~?-e // Indian J. rxcuiu Physiol.- 1989.- V.32.- P.200sos.

177. Shimada Т. Plant regeneration from the callus indased from wheat embryo // Jap. J. Genet.- 1978 -V.53.-P.371-374.

178. Shoe M.G.T., Gale G. Effects of NaCl stress and nitrogen source on raspiration, growth and photosynthesis in lucerne (Medicago sativa L.) // J. Exp. Bot. 1983.- V. 34. - P.1117-1125.

179. Singh N.K., Handa A.K., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Proteins associated with adaption of tobacco cells to NaCl // Plant Physiol.- 1985.- V.79.- P.126-137.

180. Singh N.K., Nelson D.E., Kuhn D., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Molecular cloning of osmotin and regulation of its expression by abscisic acid and adaptation to low water potential // Plant Physiol.- 1989.- V.90.- P.1096-2001.

181. Smillie R.P., Nott R. Salt tolarent in crop plant monitored by chlorophyll fluorescence in vivo.//Plant Physiology. 1982 - V.70. P.1049-1054.

182. Smith M.K., McComb J.A. Effect of NaCl on the growth of whole plants and their corresponding callus cultures // Aust. J. Plant Physiol. 1981 -V.8.- P.267-275.

183. Smith M.K., McComb J.A. Selection for NaCl tolerance in cell cultures of Medicago sativa and recovery of plants from a NaCl- tolerant cell line // Plant Cell Rep.- 1983.-V.2.- P.126-128.

184. Srivastava J.P., Gupta S.C., Lai P., Muralia R.N. Effect of salt stress on physiological and biochemical parameters of wheat // Annals of Arid Zone.- 1988.- V.27.-P.197-204.- 136

185. Stavarek S.J., Rains D.W. Mechanisms for salinity tolerance in plants // Iowa State J. Res.-1983.-V.57.-P.457 -476.

186. Strogonov B.P. Salt tolerance in isolated tissue and cells // In: Structure and function of plant cell in saline habitats, Gollek B. (Ed.) Israeli Programme for Scientific Translations, Jerusalem. 1973.- P.1-33.

187. Subhashini K., Reddy G.M. In vitro selection for salinity and regeneration of plants in rice // Curr. Sci. -1989.- V.58.-P.584-586.

188. Subhashini K., Reddy G.M. Evalution of the progeny under stress of regenerated salt tolerant rice // J. Genet. Breed.-1989.-V.43.- P.125-130.

189. Subhashini K., Reddy G.M. Effect of salt stress on enzyme activities in callus cultures of tolerant and susceptible rice cultivars // Indian J. Exp. Biol.- 1990.-V.28.- P.277-279.

190. Tal M., Heikin H., Dehan K. Salt tolerance in the wild relatives of the cultivated tomato: responses of callus tissue of Lycopersicon esculentum,L.peruvianum and Solanum pennellii to high solinity // Z. Pflanzenphysiol. 1978 -V .86.- P. 231-240.

191. Tanzarella 0.A., Greco B. Clonal propagation of triticum durum Desf. From immature embryos and shoot base- 137 explants. // Euphytica.-1985.-V.34-P.273-277.

192. Termaat A., Passioura J.В., Munns R. Shoot turgor does not limit shoot growth of NaCl-affected wheat and barley // Plant Physiol.- V.77.- P.869-872.

193. Tonelli C., Gavazzi G., Arreghini E. Induction of salt and water stress tolerance in tomato through samoclonal variation and chemical mutagenesis // Abstr. 6 Intl Congress on Plant Tissue and Cell Culture, Minnesota, USA. 1986.- P.76.

194. Tyagi A.K., Rashid A., Maheshwari S.C. Sodium chloride resistant cell line from haploid Datura innoxia Mill. //Protoplasma.-1981.- V.105.- P.327-332.

195. Vertucci C.W., Ellenson J.L., Leopold A.C. Chlorophyll fluorescence characteristics associated with hydration level in pea cotlydons.// Plant Physoilogy. 1985 - V.79.-P.248-252.

196. WatadA.A., Reinhold L., Lerner H.R. Comparison between a stable NaCl-selected Nicotiana cell line and the wild type // Plant Physiol.- 1985.- V.73.- P.624-629.

197. Weimberg R., Lerner H.R., Poljakoff-Mayber A. Changes in growth and water-soluble solute concentrations in Sorghum bicolor stressed with sodium and potassium salts // Physiol. Plant.-1984- V.62.-P.472-480.

198. Wetlzien E., Winslow M.D. Resistance of durum wheat genotypes to saline-drought field conditions // Rachis.-1984.- V.3.-P.34-36.

199. Widholm J.M. Selection and characterisation of amino and acid analog resistant plant cell cultures // Crop Sci.-1977.- V.17. P.597-600.- 136

200. Winicov I., Button J.D. Photosynthesis gene induction in salt tolerance of cultures of alfalfa // J. Cell Biochem. -1989.- V.13D.Suppl. P.328.

201. Winicov I. Gene expression in salt tolerant alfalfa cell cultures and the salt tolerant plants regenerated from these these cultures // Abstr. 6 Intl Congress on Plant Tissue and Cell Culture, Amsterdam. 1990.

202. Wyn Jones R.G., Brady C.J., Speirs J. Ionic and osmotic relations in plant cells // In: Recent advances in the biochemistry of cereals, Laidman D.L., Wyn Jones R.G.(Eds.) Academic Press, London. 1979.-P.63-103.

203. Wyn Jones R.G., Gorham J. Osmoregulation // In: Encyclopedia of Plant Physiology, New Series, Physiological Plant Ecology. Lange 0.I., Nobel P.S., Osmond

204. C.B.(Eds.).Springer-Verlag, Berlin. 1980.- V.12C.- P.35-58.

205. Wyn Jones R.S., Pollard A. Proteins, enzymes and inorganic ions // In: Encyclopedia of Plant Physiology, New Series, Inorganic Plant Nutrition Lauchli A., Bieleski R.L. (Eds). Springer-Verlag, Berlin.1983- V.15B.- P.528-562.

206. Yeo A.R. Salt tolerance in the halophyte Suaeda maritima L. Dum.: Intracellular compartmentation of ions // J. Exp. Bot. -1981- V.32.- P.487-497.

207. Yeo A.R. Flowers . Accumulation and localisation of sodium ions within the shoots of rice(Oryza sativa) varieties differing in salinity resistance //Physiol. Plant.- 1982.- V.56.- P.343-348.

208. Yeo A.R. Salinity resistance: Physiological and prices // Physiol. Plant.- 1983 V.58. - P.214-222.

209. Zenk M.H. Haploids in physiological and biochemical- 139 research // In: Haploids in Higher Plants, Kasha K.J.(Ed),Univ. of Guelph Press, Canada. 1974.- P.339-353.i