Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Кардиопротекторный эффект пептида Семакс при развитии инфаркта миокарда у крыс
ВАК РФ 03.00.13, Физиология
Автореферат диссертации по теме "Кардиопротекторный эффект пептида Семакс при развитии инфаркта миокарда у крыс"
На правах рукописи
ГОЛУБЕВА АННА ВАЛЕРЬЕВНА
КАРДИОПРОТЕКТОРНЫИ ЭФФЕКТ ПЕПТИДА СЕМАКС ПРИ РАЗВИТИИ ИНФАРКТА МИОКАРДА У КРЫС
03.00.13 - физиология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
uudj 641ЭО
Москва 2008
003164190
Работа выполнена на кафедре нормальной и патологической физиологии ГУНУ Факультет фундаментальной медицины Московского государственного университета имени М В Ломоносова (заведующий кафедры - доктор биологических наук, профессор Владимир Борисович Кошелев)
НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ
Светлана Анатольевна кандидат биологических наук, доцент кафедры Гаврилова нормальной и патологической физиологии ГУНУ
Факультет фундаментальной медицины МГУ имени М В Ломоносова
ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ
Евгения Борисовна профессор, доктор биологических наук,
Манухина заведующая лабораторией регуляторных
механизмов адаптации в ГУ НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН
Иосиф Борисович профессор, доктор биологических наук, ведущий
Цорин научный сотрудник в лаборатории фармакологии
цереброваскулярных расстройств в ГУ НИИ фармакологии имени В В Закусова РАМН
ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И П Павлова
Защита диссертации состоится 25 февраля 2008 года в 15 часов 30 минут на заседании диссертационного совета Д 501 001 93 биологического факультета Московского государственного университета имени M В Ломоносова по адресу 119991, Москва, ГСП-1, Ленинские горы, МГУ, д 1, стр 12, аудитория М-1
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ имени M В Ломоносова
Автореферат разослан 25 января 2008 г
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук
Б А Умарова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы Открытие возможности быстрого восстановления кровотока (реперфузия) в ишемизированном участке миокарда явилось настоящим прорывом в лечении инфаркта миокарда, поскольку по своей эффективности в отношении снижения острой смертности и объема пораженной ткани реперфузия до сих пор не имеет равных себе среди других терапевтических подходов На настоящий момент реперфузия является приоритетной составляющей в терапии острого инфаркта миокарда Однако по мере накопления экспериментального и клинического материала, все более становилось очевидным, что восстановленный кровоток, снижая клеточную гибель в зоне ишемии, одновременно запускает в сердце процессы, оказывающие повреждающий эффект на миокард, - главным образом, окислительный стресс и воспаление
Отсутствие или недостаток кислорода в области ишемии приводит к увеличению «восстановительного потенциала» клеток миокарда вследствие накопления в них восстановительных эквивалентов (NADH, FADH2) и увеличения степени восстановленное™ дыхательной цепи митохондрий Восстановление кровотока в таких условиях приводит к массовому и неконтролируемому сбросу электронов на молекулярный кислород с образованием активных форм кислорода (АФК) (Zweier JL, 1988) Последние оказывают повреждающее действие на миокард, необратимо и неспецифически окисляя липиды, белки и нуклеиновые кислоты клеток Окислительный стресс является основной причиной синдрома «оглушенного» миокарда, когда восстановление кровотока и адекватная перфузия сердечной мышцы в течение длительного времени не сопровождается нормализацией сократительной функции миокарда (Bolly R , 1999)
Если при необратимой ишемии миокарда активация воспалительного процесса начинается в пограничной зоне и медленно распространяется вглубь ишемизированного очага, то восстановление кровотока приводит к быстрому распространению клеток воспаления по всей затронутой ишемией области (Reimer К А, 1977) Активированные нейтрофилы служат источником большого количества АФК, что усиливает повреждающий эффект воспаления на миокард (Hansen Р R , 1995, Duilio С , 2001) Кроме того, адгезия нейтрофилов к стенкам капилляров способна «механически» препятствовать току крови, а в сочетании с выделяемыми ими констрикторными и активирующими тромбоциты факторами, тканевым отеком и повреждением эндотелия - приводить к развитию синдрома «невосстановленного» кровотока, когда восстановление просвета крупных эпикардиальных коронарных сосудов не сопровождается адекватной перфузией ткани эндокарда (Ambrosio G , 2002) Подобное развитие событий губительно для миокарда потому, что по сути сводит эффективность реперфузии к нулю и затрудняет доставку лекарственных препаратов в зону ишемии
Сочетание реперфузии с терапией реперфузионного повреждения -антиоксиданты, противовоспалительные препараты, доноры оксида азота и др -значительно улучшает исход инфаркта миокарда в экспериментальных моделях, но не всегда эффективно в клинических исследованиях (Yellon D М, 2007) Причин этому много, но хотелось бы выделить наиболее важную — несоответствие длительности ишемии в эксперименте (30 - 60 минут) и в клинических условиях (2 — 6 часов) В то же время, тяжесть реперфузионного повреждения определяется именно длительностью ишемии (Heyndrickx G R, 2006) Например, 30-минутная реперфузия, следующая за 2-х часовой, но не за 30-минутной ишемией, приводит к развитию синдрома «невосстановленного» кровотока в миокарде кролика (Reffelmann Т, 2001)
Пептидный препарат Семакс (AKTr(4-7)-Pro-Gly-Pro) успешно применяют в клинической практике в терапии ишемических состояний мозга (Гусев Е И , 1999, 2001) Однако влияние пептида на течение инфаркта миокарда совершенно не изучено Вместе с тем, ряд предполагаемых механизмов, опосредующих действие Семакса в мозге, позволяет прогнозировать наличие защитного действия пептида и в отношении реперфузионного повреждения миокарда К этим механизмам прежде всего относятся - противовоспалитечьный эффект пептида (Гусев Е И, 2001, Скворцова В И, 1999, Асташкин ЕИ, 2001) и его способность предотвращать усиление генерации оксида азота в ишемизированном мозге (Фадюкова О Е , 2001) Оксид азота является важным медиатором окислительного стресса Во время ишемии в ткани миокарда показано накопление оксида азота (Zweier JL, 1995), образующегося путем энзиматического восстановления с помощью ксантиноксидоредуктазы из своих метаболитов - нитритов и нитратов -в условиях увеличения содержания восстановительных эквивалентов в цитоплазме и снижения pH (Li Н, 2001, 2003, Webb А, 2004) При восстановлении кровотока оксид азота взаимодействует с супероксид радикалом с образованием чрезвычайно токсичного соединения - пероксинитрита (Huie R Е, 1993) Пероксинитрит нарушает работу клеточных белков, инактивируя их Fe-S центры (Lancaster JR, 1990) или необратимо окисляя по остаткам тирозина (Ischiropoulos Н, 1998) Источником пероксинитрита также могут быть клетки воспаления (Hansen Р R , 1995)
Учитывая множественность мишеней Семакса в различных отделах ЦНС, не следует исключать возможность центрального действия пептида на нервную регупяцию работы сердца Важным фактором, отягощающим течение острого инфаркта миокарда, является болевой синдром, который также является одним из медиаторов, активирующих симпатическую нервную систему после повреждения сердечной мышцы (Albutahi I А М , 2003) Проблема эффективного купирования ощущения и проведения боли остается по-прежнему нерешенной В то же время, Семакс обладает ярко выраженными анальгетическими свойствами в моделях висцеральной боли (Левицкая Н Г, 2007) Семакс способен оказывать множественные эффекты — такая терапия является более эффективной для
снижения реперфузионного повреждения (Staat Р , 2005) Длительность действия пелтида даже после однократного введения составляет как минимум 24 часа (Ашмарин И П , 1997)
Данная работа являлась пилотной частью исследования кардиопротекторного действия пептидного препарата Семакс и была направлена на проверку гипотезы о том, способен ли Семакс оказывать защитный эффект на миокард крысы в модели ишемии/реперфузии Отдельной задачей стоял выбор адекватной длительности ишемии С одной стороны, ишемия миокарда не должна была быть слишком короткой, по литературным данным, длительность ишемии в исследованиях in vitro и in vivo составляла в среднем 30 - 60 минут Как уже упоминалось, полученные в таких исследованиях результаты трудно экстраполировать на клинические условия С другой стороны, длительность ишемии не должна была вызвать массовой гибели клеток миокарда, что нивелировало бы разницу между необратимой ишемией и ишемией с последующей реперфузией
Целью настоящей работы являлось исследование влияния пептида Семакс на структурные и функциональные изменения миокарда у крыс m vivo в условиях ишемии с последующей реперфузией
В работе решались следующие задачи
1) исследовать структурные изменения миокарда и функциональное состояние сердца в условиях острой необратимой ишемии миокарда,
2) оценить влияние пептида Семакс на морфофункциональные характеристики сердца в условиях острой необратимой ишемии миокарда,
3) исследовать структурные изменения миокарда и функциональное состояние сердца в условиях обратимой ишемии с последующей реперфузией,
4) оценить эффективность действия пептида Семакс на изменение морфофункциональных параметров миокарда в условиях обратимой ишемии с последующей реперфузией
Научная новизна работы В работе впервые показано, что пептидный препарат Семакс обладает кардиопротекторным эффектом при развитии инфаркта миокарда в модели обратимой ишемии с последующей реперфузией Впервые показано, что пептид оказал защитный эффект в отношении ишемизированного миокарда, отставив во времени появление патологических изменений в ультраструктуре ишемизированных кардиомиоцитов Семакс оказался неэффективным в отношении снижения реперфузионного повреждения клеток миокарда, однако модулировал работу сердца таким образом, что способствовал значительно большей сохранности сократительного потенциала поврежденного миокарда и нормализации ai-опосредованного гипертензивного эффекта Важно, что развитие инфаркта миокарда было изучено в данном исследовании как на микро-уровне (морфология и ультраструктура), так и на макро-уровне
(функциональное состояние сердца), что позволяло связывать структурные изменения сердца с его функцией
Практическая значимость работы Настоящее исследование расширило существующие представления о течении острой ишемии в миокарде крысы на структурном и функциональном уровнях Результаты, полученные в данной работе, дают основания предполагать наличие новых механизмов действия пептида в отношении сердечно-сосудистой системы в условиях острого инфаркта миокарда Семакс широко используется в клинической практике как антиишемический и ноотропный препарат Полученный в исследовании защитный эффект Семакса в отношении ишемизированного сердца может позволить расширить спектр применения пептида как препарата скорой помощи при острых ишемических состояниях миокарда, позволяющего увеличить длительность терапевтического окна для проведения реперфузии
Апробация материалов диссертации Основные результаты диссертационной работы были представлены на IX международной научно-практической конференции «Пожилой больной, качество жизни» (Москва, 2004), IV Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2005), X пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006), XX съезде физиологического общества имени И П Павлова (Москва, 2007), IV Всероссийской школе-конференции с международным участием по физиологии кровообращения (Москва, МГУ, 2008)
Публикации По материалам диссертации опубликовано 2 статьи и 5 тезисов
Объем и структура диссертации Материалы диссертации изложены на_
страницах Текст диссертации состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов, обсуждения полученных данных, заключения, выводов и списка литературы Работа проиллюстрирована 34
рисунками и 12 таблицами Список цитированной литературы включает _
источника
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование проводили на взрослых самцах белых беспородных крыс весом 350 - 450 г (п = 78)
Структура исследования Исследование включало в себя две серии экспериментов В первой серии моделировали необратимую ишемию миокарда длительностью 2 часа 30 минут (далее ИМ) В эксперименте участвовало 41
животное Через 2,5 часа после начала эпизода ишемии 12 крыс подвергались эвтаназии, у них забирали пробы миокарда из ишемизированной части левого желудочка на микроскопическое исследование Остальные животные (п = 29) участвовали в остром эксперименте in vivo по оценке функционального состояния сердечно-сосудистой системы измеряли основные параметры системной гемодинамики и сократимости миокарда в покое и на фоне фармакологических нагрузок По окончании эксперимента у всех крыс оценивали объем поражения Во второй серии моделировали обратимую ишемию миокарда с последующей реперфузией длительность ишемии составила 2 часа 30 минут, длительность реперфузии - 72 часа (далее И/Р) В эксперименте участвовало 37 животных На третьи сутки после операции у 9 усыпленных крыс отбирали пробы миокарда из зоны риска на микроскопическое исследование, а на 28 крысах проводили острый экс перимент in vivo и оценивали объем поражения миокарда
Исследуемые группы
В серии ИМ исследовали 4 группы животные с инфарктом миокарда -ИМ+ФР (получавшие стерильный 0,9 % NaCl, п=11) и ИМ+СМ (получавшие Семакс, п=9) Контролем к ним служили соответствующие группы с ложной операцией - ЛО+ФР (n=l 1) и ЛО+СМ (п=10)
В серию И/Р было включено 3 группы животные с ишемией/реперфузией миокарда - И/Р+ФР (получавшие стерильный 0,9 % NaCl, п=13) и И/Р+СМ (получавшие Семакс, п=13) В качестве контроля были использованы интактные крысы (п=11)
Схема введения Семакса была одинаковой в обеих экспериментальных сериях Семакс вводили животным внутрибрюшинно (в дозе 150 мкг/кг веса, разведение 300 мкг/мл дистиллированной воды) два раза - через 15 минут и 2 часа 15 минут после начала эпизода ишемии Схема и доза введения препарата были выбраны на основании экспериментальных и клинических исследований, показавших эффективность дробного и раннего применения пептида в условиях ишемии мозга (Фадюкова ОЕ, 2001, Яковлева ЕВ, 1999, Гусев ЕИ, 2001) Контрольным животным вводили физиологический раствор по той же схеме и в том же объеме, что и Семакс
Экспериментальные модели Ишемию миокарда моделировали путем окклюзии нисходящей ветви левой коронарной артерии на 3 - 4 мм апикальнее ушка левого предсердия так, чтобы зона ишемии затрагивала преимущественно переднюю стенку левого желудочка В серии ИМ ишемия была необратимой, в серии И/Р через 2 часа 30 минут восстанавливали кровоток В серии ИМ животных наркотизировали тиопенталом натрия (75 мг/кг, внутрибрюшинно), в серии И/Р - хлоралгидратом (400 мг/кг, внутрибрюшинно)
Оценка объема поражения В серии ИМ методом двойного окрашивания -мегиленовый синий и 2,3,5-трифенилтетразолий хлорид (ТТХ) - оценивали
размеры зоны риска и области инфаркта Для выявления зоны риска - области миокарда, лишенной кровоснабжения, - в правую яремную вену вводили 1,5 мл 2% раствора метиленового синего, окрашивающего в синий цвет только кровоснабжаемую часть миокарда После введения метиленового синего, сердце извлекали из грудной клетки, левый желудочек быстро замораживали при температуре -70°С Замороженные сердца нарезали на 8 - 9 колец толщиной 1 -1,5 мм и окрашивали в 1% растворе ТТХ в 0,2 М фосфатном буфере (рН = 7,3 -7,4) в течение 15 минут при температуре 37°С ТТХ позволяет выявлять область инфаркта в зоне риска, поскольку окрашивает живую ткань в красный цвет, а некротизированные участки остаются неокрашенными В серии И/Р оценивали только размер инфаркта с помощью ТТХ — окрашивания по аналогичному протоколу Срезы после покраски фиксировали в 10% формалине, раскладывали между предметными стеклами и сканировали с двух сторон Размеры зон риска и инфаркта оценивали планиметрически и представляли как процентное отношение их суммарных площадей к общей площади срезов левого желудочка, что хорошо отражает объем поражения органа
Проведение эксперимента ш vivo по оценке функционального состояния сердечно-сосудистой системы. Эксперимент в обеих сериях проводили на наркотизированных животных (тиопентал натрия, 75 мг/кг в/бр) с обязательной трахеотомией, но без искусственной вентиляции легких Для регистрации системного артериального давления в брюшную аорту имплантировали катетер через левую бедренную артерию Давление в левом желудочке сердца регистрировали с помощью миниатюрного датчика давления Millar Сигнал от датчиков давления оцифровывался с частотой 1000 Гц Программное обеспечение позволяло on-hne рассчитывать с кривой системного артериального давления - среднее артериальное давление (АДср), с кривой давления в левом желудочке - величины среднего (АДЛЖср), систолического (АДЛЖсист), диастолического (АДЛЖдиас) и конечно-диастолического (АДЛЖкдд) давления, максимальные скорости увеличения (+dP/dtmax) и уменьшения (-dP/dtmax) давления в левом желудочке и частоту сердечных сокращений (ЧСС)
После окончания всех необходимых манипуляций с животным, гемодинамические параметры стабилизировались в течение 30 минут Регистрацию проводили в состоянии покоя и в ответ на нагрузочные тесты следующими препаратами 1) донор оксида азота нитропруссид натрия в дозах 1, 2,3, 4,3, 6,5 и 12,6 мкг/кг*мин в серии ИМ и 3, 6, 9, 12 и 18 мкг/кг*мин в серии И/Р, 2) агонист pi-адренорецепторов добутамин в дозах 3, 6,5, 9,5, 19,7 и 27,5 мкг/кг*мин в серии ИМ и 1, 2, 3, 4,5 и 6 мкг/кг*мин в серии И/Р, 3) агонист al-адренорецепторов фенилэфрин в дозах 1,5, 2,3, 6,4, 13,3 и 18,6 мкг/кг*мин и 3, 7, 12, 18 и 25 мкг/кг*мин, соответственно Вещества инфузировали через левую бедренную вену в накопительном режиме в течение 3-х минут на каждую из пяти
доз вводимого препарата, суммарно 15 минут Дозу вводимого препарата увеличивали с помощью изменения скорости инфузии Общий объем вводимой жидкости за время инфузии составлял 300 мкл Препараты вводили в указанной последовательности, временной интервал между введениями составлял 20 минут Изменение регистрируемых параметров рассчитывали на плато реакции в ответ на каждую дозу Величина ответа представлена в Д % и в Д мм рт ст от исходного уровня перед соответствующим препаратом
Микроскопическое исследование миокарда левого желудочка сердца в зоне риска. Микроскопическая часть исследования была проведена на базе кафедры клеточной биологии и гистологии Биологического факультета МГУ, заведующий профессор Ю С Ченцов Работа была выполнена Липиной Татьяной Владимировной, Фоминых Еленой Сергеевной и Вареник Евгенией Николаевной под руководством Шорниковой Маргариты Васильевны
Световая микроскопия Фрагменты миокарда левого желудочка фиксировали по Карнуа, по стандартной методике обезвоживали и заливали в парафин Общую морфологию миокарда оценивали на срезах толщиной 4-6 мкм, окрашенных гематоксилином-эозином Число кровеносных капилляров на 1 кардиомиоцит и площадь поперечных сечений кардиомиоцитов подсчитывали на полутонких эпоновых срезах (фиксация описана ниже) толщиной 2 мкм, окрашенных метиленовым синим Для оценки наличия апоптотических клеток в миокарде применяли TUNEL-анализ (Tdt-mediated dUTP nick end labelling) на парафиновых срезах после фиксации 10%-нейтральным формалином, апоптотические ядра выявляли по пероксидазной метке
Электронная микроскопия Отдельные волоконца миокарда левого желудочка фиксировали 4% глутаровым альдегидом на 0 1 М фосфатном буфере (рН 7 2-7 4), дофиксировали 1% раствором 0s04, контрастировали 2%-ным урднилацетатом на 70 этаноле, по общепринятой методике обезвоживали и заьлючали в Эпон 812 Продольные ультратонкие срезы дополнительно контрастировали раствором уранилацетата и цитратом свинца по Рейнольдсу, просматривали в электронном микроскопе JEM-100C при 80 кВ По полученным фотографиям описывали ультраструктурные характеристики ядра, миофибрилл и митохондрий клетки Рассчитывали число межмитохондриальных контактов на 100 митохондрий в каждой из трех зон локализации митохондрий в клетке (околососудистой субсарколеммальной, межфибриллярной и околоядерной)
Статистический анализ Данные представлены в таблицах и графиках как среднее ± стандартное отклонение от среднего Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета программ «SPSS» Учитывая независимость выборок, значимость различий оценивали Н-тестом Крускала-Уоллиса с последующими попарными сравнениями критерием Манна-Уитни, Различия признавались значимыми при р<0,05
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Изменения структуры миокарда в зоне риска на светооптическом и ультраструктурном уровнях через 2 часа 30 минут после начала эпизода ишемии. Влияние пептида Семакс на течение острой ишемии миокарда
2,5-часовая ишемия не привела к гибели клеток миокарда крысы В результате необратимой окклюзии левой нисходящей коронарной артерии сформировалась область ишемизированного миокарда - или зона риска, -величина которой составила 29,8 ± 8,5 % от общей площади левого желудочка в группе ИМ+ФР и 33,6 ± 11,8 % в группе ИМ+СМ И у контрольных животных, и у животных, получавших пептид, ТТХ-окрашивание не выявило в зоне риска четко очерченных зон некроза Это косвенно свидетельствует о том, что 2,5-часовая ишемия миокарда не привела к массовой гибели клеток Действительно, при анализе состояния миокарда в зоне ишемии на светооптическом уровне не было обнаружено ни признаков некротической гибели клеток, ни увеличения числа апоптотических ядер (TUNEL-окрашивание), ни присутствия клеток воспаления В исследованиях, выполненных на такой же экспериментальной модели, TUNEL показал как наличие апоптоза через 2 часа после начала ишемии (Kajstura J , 1996), так и его отсутствие через 2 часа 45 минут (Fliss Н, 1996) По-видимому, 2-х часовая ишемия является переходным временным интервалом для запуска апоптоза в ишемизированном миокарде крыс, и отличия полученных в разных работах результатов могли зависеть от размера инфаркта или состояния животного (бодрствующее или наркотизированное) Таким образом, морфология миокарда в зоне риска через 2,5 часа после начала ишемии не отличалась от миокарда с сохранным кровообращением у ложнооперированных животных и от интактного миокарда (рисунок 1-А) Одним из наиболее вероятных механизмов, поддерживающих жизнь клетки в условиях ишемии, является адаптивное исключение ишемизированного участка миокарда из сокращения, что позволяет сберегать энергетические ресурсы - феномен «гибернации» миокарда, механизмы которого по-прежнему не ясны (Schulz R , 2000)
2,5-часовая ишемия вызвала появление паточогических нарушений в ультраструктуре кардиомиоцитов Как показал электронномикроскопический анализ миокарда в группе ИМ+ФР, ишемия длительностью 2 часа 30 минут явилась достаточной для возникновения значительных нарушений в ультраструктуре митохондриального и ядерного аппаратов кардиомиоцитов в зоне риска (сравнить рис 2-А и рис 1-Б) В более чем 50% ядер обнаружена конденсация хроматина - появился хорошо выраженный слой пристеночного хроматина с неровными очертаниями и крупные глыбки хроматина в центре ядра Большинство митохондрий имели просветленный матрикс и уменьшенное число крист, что косвенно свидетельствует о нарушении их нормальной активности Все
А Полутонкий поперечный срез, Б Электронная микрофотография
окраска метиленовым синим кардиомиоцита, околоядерная зона
Рисунок 1. Интактный миокард левого желудочка сердца крысы. Масштабная линейка - 50 мкм (А) и 1 мкм (Б)
А окклюзия коронарной артерии контроль
Б окклюзия коронарной артерии Семакс
Рисунок 2. Электронная микрофотография кардиомиоцита левого желудочка сердца из ишемизированной области через 2 часа 30 минут после начала эпизода ишемии. Околоядерная зона. Масштабная линейка - 1 мкм (А и Б). В группе ИМ+ФР (рис. 2-А) обнаружены митохондрии с просветленным матриксом и уменьшенным числом крист (черные стрелки)', в ядрах появлялся слой пристеночного хроматина с неровными очертаниями и крупные глыбки хроматина в центре ядра (белые стрелки). Обозначения: Я - ядро; М - митохондрии; МФ - миофибриллы.
эти изменения характерны для первых часов развития ишемии миокарда (Не§з1ас1 АС, 1999, Шаров В Г, 1988; Рил Р Б, 1975) Однако структура миофибриллярного аппарата оставалась сохранной Поскольку значимых изменений ультраструктуры клеток у ложнооперированных животных не обнаружили, то конденсация хроматина в ядре и набухание митохондрий, наблюдаемые в группе ИМ+ФР, были вызваны именно ишемией миокарда
Применение Семакса оказало протекторный эффект на сохранность ультраструктуры ишемизированных кардиомиоцитов Как видно на рисунке 2-Б, на фоне применения пептида в ишемизированных кардиомиоцитах отсутствовали нарушения в структуре ядра и митохондрий — хроматин и границы ядер оставались в пределах нормы, большая часть митохондрий имела нормальное число крист и не обнаруживала просветления матрикса То есть группа ИМ+СМ по ультраструктурным характеристикам была похожа на ложнооперированных животных и разительно отличалась от группы ИМ+ФР (сравнить рис 2-Б с рис 1-Б и рис 2-А) Как показало исследование структуры миокарда на 28 сутки после необратимой ишемии (результаты не вошли в автореферат), применение пептида не оказало эффекта на размер рубцовой ткани в отсроченный постинфарктный период (Гаврилова С А, 2006) Следовательно, Семакс не повлиял на клеточную гибель в зоне ишемии, но отсрочил появление патологических изменений в ультраструктуре ишемизированных клеток Этот эффект можно рассматривать как возможность расширения терапевтического окна для реперфузии у пациентов с острым инфарктом миокарда
Операционное воздействие оказало неспецифическое, не связанное с ишемией, влияние на миокард В таблице 1 представлены результаты морфометрического анализа размеров клеток Заметим, что по сравнению с интактным миокардом, средняя площадь поперечного сечения кардиомиоцитов во всех экспериментальных группах была увеличена, что может говорить о развитии клеточного отека. Однако равенство этого параметра в группах инфарктных и ложнооперированных животных свидетельствует о том, что наблюдаемый отек клеток был вызван не собственно ишемией
Таблица 1 Средняя площадь поперечного сечения кардиомиоцитов (Б) и число капилляров, приходящееся на 1 кардиомиоцит (И), в кардиомиоцитах левого желудочка через 2 часа 30 минут после операции и у интактных животных
Группы Интактные ЛО+ФР ИМ+ФР ЛО+СМ ИМ+СМ
в, мкм2 219,7 ±76,7 285,1±129,7# 304,8±147,8# 304,4±119,1# 318,4±134,3#
N 0,84 ±0,14 0,80±0,21 0,82 ±0,17 0,83±0,16 0,83±0,13
#р<0,05 для экспериментальных групп по сравнению с интактным контролем
Схожие результаты были обнаружены и при подсчете числа межмитохондриальных контактов (ММК) на электронномикроскопическом уровне, впервые проведенном в данной модели В целом, во всех трех зонах локализации митохондрий число ММК было одинаковым в экспериментальных группах, но сниженным на 17 - 30 % по сравнению с интактными животными (данные не представлены) ММК в миокарде связывают митохондрии в единое целое - митохондриом, и число ММК является лабильным критерием его функционального состояния (Шорникова М В, 2000) Следовательно, операционное воздействие несло в себе факторы, отличные от ишемии вследствие окклюзии, которые изменили функциональный статус митохондриома кардиомиоцитов, вызвали небольшие ультраструктурные изменения митохондрий (локальные разрушения крист и просветление матрикса в группах с ложной операцией) и привели к появлению клеточного отека Постоперационный пневмоторакс и отек легких могли спровоцировать развитие гипоксического состояния у животных после операции Показано, что гипоксия вызывала снижение числа ММК в сердце (Абдулла, 1991)
Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что через 2 часа 30 минут после начала эпизода ишемии в миокарде накапливались патологические изменения в ультраструктуре ядерного и митохондриального, но не сократительного аппаратов кардиомиоцитов Однако данная длительность ишемии оказалась недостаточной для провоцирования некротической гибели клеток и достижения поздних стадий апоптоза Семакс оказал ярко выраженный протекторный эффект на сохранность ультраструктуры кардиомиоцитов в острую фазу развития инфаркта миокарда, что согласуется с эффективностью раннего применения пептида при фокальных инсультах (Гусев ЕИ, 2001) Важно, что защитный эффект пептида оказался специфичным в отношении ультраструктурных нарушений, вызванных именно ишемией миокарда, поскольку он не повлиял на неспецифические изменения, характерные для всех групп животных
Измененне функционального состояния сердечно-сосудистой системы через 2 часа 30 минут после начала эпизода ишемии. Влияние пептида Семакс на течение острой ишемии миокарда.
2,5-часовая ишемия не привела к развитию сократительной дисфункции в работе сердца Значения гемодинамических параметров, регистрируемых в состоянии покоя после операции, представлены в таблице 2 Видно, что 2,5-часовая ишемия не вызвала значительных нарушений работы сердца В группе ИМ+ФР значения среднего артериального давления, а также параметров, характеризующих сократительную активность миокарда, - АДЛЖсист и +с!Р/с1ипах - имели тенденцию к снижению на 10 - 15 % по сравнению с группой
ЛО+ФР, но она не достигала уровня достоверности Подобные изменения характерны для развития инфаркта миокарда у крыс (Schoemaker RG, 1990, Curtis MJ, 1987) Интересно, что наиболее уязвимой к действию ишемии оказалась функция расслабления миокарда - у инфарктных животных наблюдали уменьшение -dP/dtmax на 538,3 мм рт ст/сек (18,7 %), что сопровождалось подъемом диастолического левожелудочкового давления на 6,2 мм рт ст (48,1 %) Фармакологические нагрузочные тесты не выявили различий в изменениях гемодинамических параметров между группами Животные с инфарктом миокарда адекватно реагировали как на стимуляцию сократительной активности миокарда, так и на уменьшение и увеличение системного давления (результаты не показаны), что говорит о сохранности сократительного резерва миокарда и способности регуляции его сократительной активности постнагрузкой
Таблица 2 Значения гемодинамических показателей и индексов сократимости миокарда в покое через 2 часа 30 минут после операции_
Группы ЛО+ФР ИМ+ФР ЛО+СМ ИМ+СМ
АДср, мм рт ст 133,2 ± 11,4 118,5 ± 12,2 128,0 ±20,1 120,0 ± 13,1
ЧСС, уд/мин 370,6 ±53,1 378,8 ± 16,3 370,0 ±31,8 367,5 ±41,9
АДЛЖср, мм рт ст 76,5 ± 13,3 80,0 ± 8,4 80,5 ± 8,2 80,5 ± 12,4
АДЛЖсист, мм рт ст 154,6 ± 14,9 136,6 ± 14,8 152,6 ±21,3 142,0 ± 10,6
АДЛЖдиас , мм рт ст 12,9 ±0,8 19.1 ±2,4** # 12,6 ± 1,6 15,7 ±4,7
+ dP/dtmax, мм рт ст /с 3038,3 ±334,5 2581,5 ± 388,4 3031,0 ±434,0 2746,3 ± 157,5
- dP/dtmax, мм рт ст /с 2874,6 ± 400,4 2336,3 ±264.1* 2757,2 ±478,2 2427,3 ± 150,8
АДср - среднее артериальное давление, ЧСС - частота сердечных сокращений, АДЛЖср , АДЛЖсист и АДЛЖдиас - среднее, систолическое и диастолическое давление в левом желудочке, соответственно, +dP/dtmax и -dP/dtmax - максимальные скорости увеличения и уменьшения давления в левом желудочке *р<0,05 и **р<0,01 для группы ИМ+ФР по сравнению с группой ЛО+ФР, #р<0,05 для группы ИМ+ФР по сравнению с группой ИМ+СМ
Применение Семакса на фоне ишемии уменьшило подъем АДЛЖдиас и падение ^РАШпах, так что эти параметры в группе ИМ+СМ уже не отличались значимо от ложнооперированного контроля Других гемодинамических изменений ни в состоянии покоя, ни на фоне нагрузок Семакс не вызвал, что
отчасти объясняется отсутствием функциональных нарушений в контрольной инфарктной группе (таблица 2)
Исходя из полученных в этой серии результатов, можно заключить, что выбранная нами длительность ишемии - 2 часа 30 минут - хорошо отвечала заявленным во введении требованиям С одной стороны, отсутствие клеточной гибели в зоне ишемии и выраженных нарушений работы сердца, а также сохранность числа открытых капилляров (таблица 1) методически оправдывала восстановление кровотока В противном случае была бы нивелирована разница между необратимой ишемией миокарда и ишемией с последующей реперфузией С другой стороны, мы увидели накопление в ишемизированных клетках миокарда патологических изменений на ультраструктурном уровне, то есть повреждение миокарда Показано, что в миокарде крысы уже 45-минутной ишемии было достаточно для развития синдрома «невосстановленного» кровотока спустя 4 часа после начала реперфузии (РЬбб Н, 1996) Учитывая, что в развитии этого синдрома ключевую роль играет активация нейтрофилов в зоне риска, мы можем с уверенностью говорить о вовлечении воспалительного процесса в реперфузионное повреждение миокарда в нашей модели
Изменения структуры миокарда в зоне риска на светооптическом и ультраструктурном уровнях через 72 часа после начала реперфузии. Влияние пептида Семакс.
Через 72 часа посче начала реперфузии, следующей за 2,5-часовой ишемией, клеточная гибечь в миокарде в зоне риска сопровождаюсь развитиел/ острой вое палите чьной реакции Окрашивание сердца с помощью ТТХ выявило в передней стенке левого желудочка зону инфаркта, составившую 14,2 ± 2,9 % от объема левого желудочка Анализ морфологии миокарда на светооптическом уровне показал, что гибель кардиомиоцитов в зоне риска имела неоднородный характер Встречались обширные участки миокарда, где произошла массовая гибель клеток (рис 3-А) На месте погибших кардиомицитов образовался очаг воспаления, состоявший главным образом из фибробластов и макрофагов и небольшого количества нейтрофилов Следовательно, 3 сутки после начала гибели клеток в миокарде крысы - это уже поздняя стадия острой воспалительной реакции в ткани миокарда, когда волна инфильтрации нейтрофилов спала, и происходит преимущественная инфильтрация макрофагов, участвующих в ремоделлинге поврежденного участка, а также пролиферация в зоне воспаления фибробластов В более сохранных участках миокарда доля погибших клеток была значительно меньше, а очаг воспаления выглядел как клеточный тяж между обширными участками живых кардиомиоцитов (рис 3-Б)
Через 72 часа посче начала реперфузиа в выживших в зоне риска кардиомиоцитах обнаружены ультраструктурные нарушения Анализ выживших после ишемии/реперфузии кардиомиоцитов на электронномикроскопическом уровне выявил значительные нарушения в ультраструктуре основных клеточных компонентов - ядра, миофибрилл и митохондрий (рис 4-А) Ядра клеток имели извилистые границы и большое количество глыбок гетерохроматина в толще ядра Встречались разнообразные нарушения структуры миофибрилл - разволокнения в районе Z-линии, размытые границы I- и А- дисков Большинство митохондрий были слабоконденсированными, эти изменения свидетельствуют о нарушении энергопродуцирующей функции митохондриома, поскольку морфологическую конденсацию митохондрий наблюдали в условиях разобщения окислительного фосфорилирования и повреждения митохондриальной мембраны (Амченкова А А, 1986) Анализируемые кардиомиоциты находились в зоне риска, поэтому они также подверглись реперфузионному повреждению, кроме того, выжившие клетки работали в условиях увеличенной сократительной нагрузки вследствие потери значительной части миокарда Эти факторы в совокупности могли привести к нарушению структуры клеток, разрушению миофиламентов, как это было показано на собаках в модели ишемии/реперфузии миокарда (Sherman A J , 2000), что, в свою очередь, могло послужить причиной уменьшения размеров кардиомиоцитов на 20 % по сравнению с интактными животными (таблица 3)
Таблица 3 Средняя площадь поперечного сечения кардиомиоцитов (S) и число капилляров, приходящееся на 1 кардиомиоцит (N), в миокарде левого желудочка через 72 часа после моделирования ишемии/реперфузии и у интактных животных
Группы Интактные И/Р+ФР И/Р+СМ
S, мкм2 219,7 ±76,7 176,5 ±54,7# 261,5 ±95,9
N 0,84 ± 0,14 0,91 ±0,42 0,86 ± 0,20
#р<0,05 для экспериментальных групп по сравнению с интактным контролем
Как известно, поражение сердечной мышцы и ухудшение насосной функции сердца вызывают быструю активацию симпатической нервной системы (Jardine D L , 2005, Graham L N , 2002), которая в целях поддержания системного давления увеличивает энергетическую и сократительную нагрузки на миокард (Smith J М , 2002) Увеличение нагрузки может оказаться фатальным для кардиомиоцитов с нарушенной ультраструктурой, учитывая, что избыточная адренергическая стимуляция способна оказывать цитотоксический эффект даже на здоровый миокард, провоцируя запуск апоптоза (Shizukuda Y , 1998) Снижение плотности иннервации в периинфарктной зоне, что могло бы снизить нагрузку на
А массовая гибель клеток миокарда Б участок погибших кардиомиоцитов
Рисунок 3. Миокард левого желудочка сердца в зоне риска через 72 часа после начала реперфузии. Поперечный срез, окраска гематоксилином-эозином. Инфильтрация клеток воспаления {звездочки) в пораженную ткань. Кардиомиоциты обозначены стрелками. На фоне применения Семакса картина идентична. Масштабная линейка - 50 мкм.
Рисунок. 4.
Электронная микрофотография
кардиомиоцита левого желудочка сердца из ишемизированной области через 72 часа после начала реперфузии. Околоядерная зона. Масштабная линейка - 1 мкм (А и Б).
В кардиомиоцитах обеих групп наблюдали слабоконденсированные митохондрии (черные стрелки), извилистые границы ядер (белые стрелки), нарушения структуры миофибрилл (звездочка).
А ишемия/реперфузия, контроль
Б ишемия/реперфузия, Семакс
поврежденный миокард, было показано только через 1 неделю после инфаркта (Li W, 2004)
Таким образом, из полученных результатов следует, что через 72 часа после начала реперфузии зона некроза в миокарде у крыс в основном уже сформирована Однако в выживших кардиомиоцитах обнаружены нарушения ультраструктуры важнейших клеточных компонентов Учитывая тот факт, что сохранный миокард работает в условиях повышенной физиологической нагрузки вследствие потери части миокарда и активации симпатической нервной системы, вероятна гибель наиболее поврежденных клеток
Семакс не оказал значимых эффектов на структуру миокарда в зоне риска через 72 часа после начала реперфузии Применение Семакса в модели ишемии/реперфузии миокарда не повлияло на размер поражения, зона инфаркта на третьи сутки составила 13,0 ± 3,4 % от объема левого желудочка На светооптическом уровне состояние миокарда на фоне применения пептида не отличалось от контрольной инфарктной группы - также встречались участки массовой и выборочной гибели кардиомиоцитов, замещенные очагами клеток воспаления На электронномикроскопическом уровне обнаружены схожие нарушения ультраструктуры ядерного, митохондриального и миофибриллярного аппаратов (рис 4-Б) Количественный подсчет степени выраженности воспалительного процесса и ультраструктурных нарушений в экспериментальных группах требует использования других методических подходов Однако на фоне применения Семакса не наблюдали уменьшения размеров выживших в зоне риска кардиомиоцитов, как это было в контрольной инфарктной группе (таблица 4)
Поскольку воспалительный процесс является важным медиатором реперфузионного повреждения, то противовоспалительная терапия, как правило, эффективна в отношении уменьшения области поражения миокарда в экспериментальных моделях ишемии/реперфузии (Hansen Р R., 1995, Bonvini R F., 2005) Следовательно, тот факт, что применение пептида не уменьшило размер инфаркта в нашей модели, дает основание полагать, что противовоспалительный эффект Семакса специфичен в отношении мозга (Гусев ЕИ, 2001, Скворцова В И ,1999) и не реализуется в миокарде С другой стороны, при интерпретации полученного результата необходимо учитывать разницу в длительности моделируемой ишемии в работе, выполненной на крысах, длительность ишемии составляла только 30 минут (Weisman Н F , 1990), у собак терапия, направленная на уменьшения числа или степени активации клеток воспаления в зоне риска, была эффективна при длительности ишемии 90 минут, но не 3 часа (Simpson Р J , 1988, Chatelain Р, 1987) Как было упомянуто во введении, несоответствие длительности ишемии в эксперименте с клиническими условиями часто служит причиной неэффективности многих терапевтических подходов при перенесении их в сферу клинических исследований (Yellon D М , 2007)
Изменение функционального состояния сердечно-сосудистой системы через 72 часа после начала реперфузии. Влияние пептида Семакс на течение ишемии/реперфузии миокарда.
Через 72 часа после начача реперфузии, счедующей за 2,5-часовой ишемией, гемодинамические измерения выявгпи значитечьное ухудшение работы сердца Результаты гемодинамических измерений представлены в таблице 4 На 3 сутки после ишемии/реперфузии у крыс наблюдали нарушения работы сердца максимальная сократительная способность миокарда (+dP/dtmax) уменьшалась на 24%, что сопровождалось снижением максимального давления, развиваемого левым желудочком во время систолы (АДЛЖсист), и среднего артериального давления (АДср ) на 10% Учитывая, что частота сердечных сокращений также имела тенденцию к снижению, то полученные изменения дают основание говорить об уменьшении сердечного выброса вследствие поражения значительной часги миокарда Подобные изменения характерны для данной модели и раззиваются уже в течение первых часов после начала реперфузии (Liu Р , 2002) В наибольшей степени оказалась нарушенной скорость расслабления левого желудочка сердца - -dP/dtmax уменьшилась на 53% Этот фактор, наряду с уменьшением сократительной способности миокарда, вносил, очевидно, свой вклад в значительное увеличение конечно-диастолического давления в левом желудочке - на 11 мм рт ст
Фармакочогические тесты выявили снижение [} ¡-опосредованного инотропного ответа миокарда и нарушение агопосредованного гипертензивного ответа через 72 часа после начала реперфузии
Инфузия агониста al-адренорецепторов фенилэфрина показала, что в контрольной инфарктной группе прирост среднего артериального давления был снижен на 16 - 20% по сравнению с интактными животными и сопровождался меньшим - на 10 - 37% - увеличением +dP/dtmax (рис 5 - А и Б) Чтобы отграничить инотропный ответ сердца от констрикторного ответа сосудистого русла, изменение сократительной активности пронормировали на изменение среднего артериального давления Как видно на рисунке 5 - В, увеличение сократительного индекса в ответ на единицу изменения системного давления было одинаковым в контрольной инфарктной и интактной группах на всех дозах препарата Эти данные свидетельствуют о том, что причина снижения гипертензивного ответа на фенилэфрин после инфаркта заключалась не в исчерпании сократительного потенциала поврежденного сердца, а в нарушении вазоконстрикторного ответа Снижение агопосредованной констрикции резистивных сосудов in vitro и ai-опосредованного гипертензивного ответа in vivo наблюдали спустя несколько недель после инфаркта миокарда при развитии сердечной недостаточности Эти изменения связывали как с уменьшением плотности al-адренорецепторов на гладкомышечных клетках, так и с процессами
их десенситизации (Feng Q Р , 1996, Stassen F R, 1997, Feng Q P , 1999, Leier С V , 1990) По литературным данным, увеличение симпатического тонуса и рост общего периферического сопротивления наблюдали уже через несколько часов после начала ишемии и ишемии/реперфузии миокарда (Jardine D L , 2005, Liu P , 2002) Следовательно, показанное в нашем исследовании нарушение прессорного ответа на 3 сутки после операции, то есть в острый постинфарктный период, могло быть обусловлено исходно увеличенным тонусом гладких мышц сосудов вследствие активации симпатической нервной системы после инфаркта миокарда
Меньший прирост системного давления в группе ИМ+ФР мог маскировать сократительную дисфункцию миокарда после инфаркта, поскольку создавал соответственно меньшее увеличение постнагрузки на сердце по сравнению с интактными животными Действительно, стимуляция сократительной активности агонистом ßi-адренорецепторов добутамином показала, что максимальный положительный инотропный ответ поврежденного миокарда составил 50% по сравнению со 130% у интактных животных, то есть был снижен на 80% (рис 6) Поскольку добутамин вызывал незначительное - менее 10% - и одинаковое в обеих группах снижение среднего артериального давления, то в данном случае увеличение сократительного индекса не нормировали на изменение системного давления
Семакс оказал модулирующее влияние на работу сердца через 72 часа после ишемии/реперфузии, нормачизовач а ¡-опосредованный гипертензивный ответ и увеличил ß¡-опосредованный инотропный ответа миокарда
Гемодинамические измерения в состоянии покоя показали (таблица 4), что на фоне применения пептида все регистрируемые параметры (кроме АДЛЖдиас и АДЛЖкдд ) снижены не только по сравнению с интактными животными, но и по сравнению с контрольной инфарктной группой эффект пептида составил 12-18 %, что является физиологически значимым изменением Напомним, что Семакс не вызвал увеличения объема пораженной ткани и тяжести ультраструктурных нарушений кардиомиоцитов Следовательно, полученный эффект пептида не может быть объяснен ухудшением состояния миокарда на структурном уровне
Стимуляция сократительной активности миокарда добутамином показала, что применение пептида увеличило максимальный ргопосредованный инотропный ответ миокарда на 20% (рис 6) Более того, в группе И/Р+СМ рост среднего артериального давления в ответ на фенилэфрин не отличался от интактных животных и сопровождался адекватным увеличением сократительной активности миокарда (рис 5 А-В) Эти данные говорят о том, что применение Семакса улучшило сохранность сократительного потенциала миокарда после инфаркта и, следовательно, снижение гемодинамических параметров в состоянии покоя в группе И/Р+СМ не могло быть обусловлено усугублением сократительной дисфункции работы сердца
Таблица 4 Значения гемодинамических показателей и индексов сократимости миокарда в покое через 72 часа после начала реперфузии и у интактных животных
Группы Интактные И/Р+ФР И/Р+СМ
\Дср, мм рт ст 131,5 + 9,1 118,6+ 13,2 4 101,1 + 13,6 и
ЧСС, уд/мин 363,5 ±41,3 335,7 + 26,8 = 268,8 ± 19,9 41
АДЛЖср , мм рт ст 91,3 ± 8,1 88,5 ± 11,3 = 73,4 ± 12,5 411
\ДЛЖсист, мм рт ст 163,5 ±9,1 148,2 ± 16,2 4 129,0 ± 14,6 п
\ДЛЖдиас , мм рт ст 3,7 ± 1,2 11,0 ±2,6 1 9,5 ± 2,0 1
ЛДЛЖкдд, мм рт ст 9,0 ± 2,9 20,0 ± 4,5 1 18,5 ±3,0 1
1- с1Р/с11тах, мм рт ст /с 10660,9 ± 1266,5 8079,4 ± 580,3 1 7091,0 ±731,9 41
с1Р/'сктах, мм рт ст /с 12290,2 ± 2351,6 5806,5 ± 598,6 4 4745,2 ± 647,5 41
АДср - среднее артериальное давление, ЧСС — частота сердечных
сокращений, АДЛЖср, АДЛЖсист, АДЛЖдиас и АДЛЖкдд - среднее, систолическое, диастолическое и конечно-диастолическое давление в левом желудочке, соответственно, +с1Р/Лшах и -с!Р/сктах — максимальные скорости увеличения и уменьшения давления в левом желудочке
4 р<0,05 для групп И/Р+ФР и И/Р+СМ по сравнению с интактным контролем
И- р<0,05 для группы И/Р+СМ по сравнению с группой И/Р+ФР
А 60
А Дор., дельта %
Б +с!Р/сктах, дельта % 80 -
0 5 10 15 20 25
Фенилэфрин, мкг/кг*мин
В +<1Р/сктах нормировано к АДср.
О 5 10 15 20 25
Фенилэфрин, мкг/кг*мин
Рисунок 6. Изменение максимальной скорости увеличения давления в левом желудочке (+с!Р/с11:тах) в ответ на внутривенную инфузию возрастающих доз агониста Р1 -адренорецепторов добутамина.
#р<0,05 для экспериментальных групп по сравнению с интактным контролем; *р<0,05 для групп И/Р+ФР и И/Р+СМ.
0 5 10 15 20 25
Фенилэфрин, мкг/кг*мин
Рисунок 5. А-Б - изменение величин среднего артериального давления (АДср.) и максимальной скорости увеличения давления в левом желудочке (+с!Р/с!1:тах) в ответ на внутривенную инфузию возрастающих доз агониста а 1-адренорецепторов фенилэфрина. В - увеличение сократимости сердца (-ЫР/сктах) пронормировано на соответствующее увеличение системного давления (АДср.)
Опираясь на полученные результаты, мы предположили, что Семакс оказал влияние на нервную регуляцию работы сердца, снизив степень активации симпатической нервной системы (СНС) после инфаркта Важнейшим фактором, активирующим симпатическую систему после инфаркта, является увеличение давления наполнения камер сердца и отходящих от них сосудов (МаШаш А , 1982, 2002) Важно, что по величине именно этих параметров - диастолического и конечно-диастолического давления в левом желудочке (таблица 4) - группы И/Р+ФР и И/Р+СМ не отличались, следовательно, интенсивность активирующего СНС сигнала идентична в обеих экспериментальных группах Однако, как следует из полученных результатов - сниженная сократительная активность миокарда и частота сердечных сокращений, - влияние СНС на сердце было ослаблено на фоне применения пептида Эффект Семакса мог быть реализован на двух уровнях -либо пептид оказал центральное модулирующее влияние, снизив тонус СНС, либо затруднил передачу адренэргического сигнала на периферии, на уровне сердечной мышцы Учитывая, что пептид обладает множественными мишенями в центральной нервной системе, включая пути проведения болевых импульсов (Левицкая Н Г, 2007), участвующих в активации СНС после повреждения сердечной мышцы (А1Ьи1а1и IА М, 2003), предпочтительным кажется центральное влияние Семакса на активность симпатической нервной системы В предложенную нами гипотезу укладывается также тот факт, что применение Семакса восстановило гипертензивный ответ на фенилэфрин до уровня интактных животных (рис 5 А-В) Нормализация ^-опосредованного прессорного ответа могла произойти вследствие исходно меньшего увеличения тонуса сосудов после инфаркта по сравнению с контрольными инфарктными животными
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В отличие от экспериментального инсульта, где Семакс уменьшал размер инфаркта коры головного мозга (Романова Г А, 2006), пептид оказался неэффективным в отношении объема поражения миокарда в модели ишемии с последующей реперфузией Учитывая, насколько велика роль воспаления в реперфузионном повреждении миокарда, влияние Семакса на воспалительный процесс в сердечной мышце кажется маловероятным По-видимому, предполагаемый противовоспалительный эффект Семакса (Гусев ЕИ, 2001, Скворцова В И, 1999) специфичен в отношении мозга, а прочие механизмы действия пептида - антикоагулянтный, фибринолитический и способность снижать дыхательный взрыв нейтрофилов - либо работают только в условиях in vitro (Асташкин ЕИ, 2001), либо эффективны лишь в отдельной экспериментальной модели (Черкасова К А , 2001)
С другой стороны, применение Семакса значительно увеличило максимальный Ргопосредованный инотропный ответ миокарда после инфаркта и нормализовало гипертензивный ответ на стимуляцию аЬадренорецепторов Учитывая изменения в состоянии сердечно-сосудистой системы в покое на фоне применения пептида - снижение сократительной активности миокарда, частоты сердечных сокращений и системного артериального давления - мы предположили, что полученный кардиопротекторный эффект Семакса был реализован косвенно, через нервную регуляцию работы сердца, а именно -сдерживание гиперактивации симпатической системы после инфаркта
Известно, что избыточная длительная катехоламинэргическая стимуляция сердца токсична для миокарда (БЬигик^а У , 1998, ОзаскИп О Е , 2007), поскольку приводит к увеличению сократительной и энергетической нагрузки на кардиомиоциты напрямую и косвенно, через увеличение общего периферического сопротивления и, как следствие, постнагрузки на миокард Необходимо учитывать, что выжившие после ишемии/реперфузии кардиомиоциты обнаруживали значительные нарушения ультраструктуры основных клеточных компонентов и работали в условиях увеличенной нагрузки вследствие потери значительной части левого желудочка Все эти факторы могли провоцировать клеточную гибель в условиях увеличения симпатического тонуса
Следовательно, хотя Семакс оказался неэффективным в отношении защиты сердца от собственно реперфузионного повреждения, протекторное действие пептида на сердечно-сосудистую систему могло реализовываться через снижение токсического действия симпатической нервной системы В этом плане эффект пептида имел ту же направленность, что и эффект блокаторов а- и (]-адренорецепторов, широко применяющихся в клинической практике при лечении как острого инфаркта миокарда, так и сердечной недостаточности Интересно, что аналогично (3-блокаторам, Семакс оказал положительное влияние на ремоделирование миокарда в отставленный постинфарктный период через 28 суток после инфаркта у животных, получавших пептид, не наблюдали развития значимой гипертрофии сердца, что сопровождалось снижением давления наполнения в левом желудочке сердца (Гаврилова С А , 2006)
выводы
1 Ишемия миокарда крысы длительностью 2 часа 30 минут не вызвала развития сократительной дисфункции работы сердца, что подтверждалось отсутствием признаков некротической и апоптотической гибели кардиомиоцитов в области ишемии, но спровоцировала накопление ультраструктурных нарушений ядерного и митохондриального аппаратов в ишемизированных кардиомиоцитах
2 Семакс оказал протекторный эффект на ишемизированное сердце, ограничив рост диастолического давления в левом желудочке и улучшив сохранность ультраструктуры кардиомиоцитов через 2 часа 30 минут после начала эпизода ишемии
3 Через 72 часа после начала реперфузии, следующей за 2,5-часовой ишемией, в миокарде сформировалась область инфаркта, составившая 15% от объема левого желудочка, что сопровождалось ухудшением насосной функции сердца, снижением Р|-опосредованного положительного инотропного ответа миокарда и нарушением а]-опосредованного гипертензивного ответа
4 Семакс оказался неэффективен в отношении снижения объема поражения миокарда в условиях ишемии с последующей реперфузией Семакс оказал модулирующее влияние на работу сердца, что способствовало нормализации а,-опссредованного гипертензивного ответа и увеличению Ргопосредованного положительного инотропного ответа миокарда
Автор глубоко признателен Т В Липиной, Е С Фоминых, Е Н Вареник и А Б Постникову за предоставленную помощь в проведении исследования и обсуждении результата, а также М П Давыдовой и Н С Самойленковой за неоценимую моральную поддержку Автор искренне благодарен своему научному руководителю доценту С А Гавриловой за то, что эта работа состоялась
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1 А В Голубева. С А Гаврилова, М В Шорникова, Т В Липина, В Б Кошелев, Ю С Ченцов Влияние Семакса на продукцию оксида азота, изменение параметров гемодинамики и сократимости миокарда у крыс в острый постинфарктный период // Клиническая геронтология - 2004 - Т 10, №9 -
2 CA Гаврилова, A.B. Голубева, М В Шорникова, Т В Липина, Ю С Ченцов, В Б Кошелев Влияние пептида Семакс на ультраструктуру и работу сердца крыс в острый и хронический постинфарктные периоды // В сб IV Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы функционирования висцеральных систем» Санкт-Петербург, 4-6 октября 2005,
3 А.В Голубева. С А Гаврилова, M В Шорникова, Т В Липина, Ю С Ченцов, В Б Кошелев Кардиопротекторный эффект пептида Семакс в острый и хронический постинфарктные периоды // В сб 10-ой Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» Пущино, 17-21 апреля 2006, С 133
4 A.B. Голубева, С А Гаврилова, Т В Липина, M В Шорникова, А Б Постников, Л А Андреева, Ю С Ченцов, В Б Кошелев Защитное действие пептида Семакс в острую стадию инфаркта миокарда крыс // Рос физиол журн им И M Сеченова - 2006 - Т 92, №6 - С 732-745
5 CA Гаврилова, А.В Голубева. Т В Липина, Е С Фоминых, M В Шорникова, А Б Постников, Л А Андреева, Ю С Ченцов, В Б Кошелев Протекторное влияние пептида Семакс на процессы ремоделирования миокарда и развитие сердечной недостаточности у крыс в отставленный постинфарктный период Рос физиол журн им ИМ Сеченова -2006 - Т 92, №11 - С 1305-1321
6 CA Гаврилова, А В. Голубева, Т В Липина, Е С Фоминых, M В Шорникова, Ю С Ченцов Кардиопротекторный эффект пептида Семакс в динамике развития инфаркта миокарда у крыс // В сб XX съезда физиологического общества имени И П Павлова Москва, 4-8 июня 2007, С 188
7 A.B. Голубева, С А Гаврилова, Т В Липина, Е С Фоминых, Е H Вареник, M В Шорникова, Ю С Ченцов, В Б Кошелев Кардиопротекторный эффект пептида Семакс в острый постреперфузионный период // В сб IV Всероссийской с международным участием школе-конференции по физиологии кровообращения Москва, 29 января - 1 февраля 2008, С 24-25
С 95
С 60
Заказ № 87/01/08 Подписано в печать 15 01 2008 Тираж 100 экз Уел пл 1,5
\ ООО "Цифровичок", тел (495) 797-75-76, (495) 778-22-20 \v\vw с/г ги , е-тш1 т/о@с/г ги
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Голубева, Анна Валерьевна
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Общая характеристика пептидного препарата Семакс и его свойств.
Механизмы действия пептида Семакс в ишемизированном мозге.
Обоснование возможности реализации кардиопротекторного действия • ) Ь 1 ' пептида Семакс в условиях инфаркта миокарда.
Участие симпатической нервной системы в развитии инфаркта миокарда
Изменение плотности симпатической иннервации миокарда после инфаркта.
Функциональная активация симпатической нервной системы после инфаркта миокарда.
Пути активации симпатической нервной системы после острого инфаркта миокарда и при развитии сердечной недостаточности.
Последствия активации симпатического тонуса после инфаркта миокарда для сердечно-сосудистой системы
Кардиотоксическое действие катехоламинов.
Изменение чувствительности и плотности а- и радренорецепторов в постинфарктном миокарде.
Изменение чувствительности и плотности а-адренорецепторов гладких мышц сосудов после инфаркта миокарда.
Увеличение симпатического тонуса после инфаркта миокарда является повреждающим фактором в отношении сердечнососудистой системы.
Участие системы оксида азота сердца в развитии инфаркта миокарда Участие оксида азота в регуляции работы сердца в нормальной физиологии.
Изменение системы оксида азота в условиях острой ишемии миокарда и ее участие в реперфузионном повреждении сердца.
Участие конститутивных изоформ >Ю-синтазы в развитии инфаркта миокарда.
Участие индуцибельной изоформы NO-синтазы в развитии инфаркта миокарда.
Участие воспалительного процесса в развитии инфаркта миокарда.
Оксид азота — защитный или повреждающий фактор в развитии острого инфаркта миокарда?.
ЦЕЛЬ и ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Содержание животных.
Структура исследования.
Экспериментальные модели
Моделирование ишемии миокарда.
Моделирование ишемии/реперфузии миокарда.
Оценка объема поражения миокарда
Оценка объема поражения миокарда через 2 часа 30 мин после начала эпизода ишемии.
Оценка объема поражения миокарда через 28 суток после моделирования инфаркта.
Оценка объема поражения миокарда через 72 часа после моделирования ишемии/реперфузии.
Проведение эксперимента in vivo по оценке функционального состояния сердечно-сосудистой системы
Регистрация и расчет параметров системной гемодинамики и работы левого желудочка сердца.
Проведение фармакологических нагрузочных тестов.
Протокол проведения эксперимента in vivo.
Микроскопическое исследование структуры миокарда левого желудочка сердца.
Определение содержания нитритов и нитратов в плазме крови и моче у крыс.
Статистический анализ.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование состояния миокарда крысы на структурном и функциональном уровнях через 2 часа 30 минут после начала эпизода ишемии. Влияние пептида Семакс на течение острой ишемии миокарда.
Оценка объема поражения.
Результаты микроскопического анализа миокарда левого желудочка.
Содержание нитритов и нитратов в плазме крови.
Результаты эксперимента in vivo по оценке функционального состояния сердечно-сосудистой системы.
Фармакологические нагрузочные тесты.
Исследование состояния миокарда крысы на структурном и функциональном уровнях через 28 суток после моделирования ишемии миокарда. Влияние пептида Семакс на течение отставленного постинфарктного периода.
Оценка области поражения миокарда.
Результаты микроскопического анализа миокарда левого желудочка.
Содержание нитритов и нитратов в моче.
Результаты эксперимента in vivo по оценке функционального состояния сердечно-сосудистой системы.
Результаты нагрузочного теста по снижению величины постнагрузки на миокард с помощью донора оксида азота нитропруссида натрия.
Результаты нагрузочного теста по увеличению величины постнагрузки на миокард с помощью агониста a¡адренорецепторов фенилэфрина.
Результаты нагрузочного теста по стимуляции сократительной активности миокарда и частоты сердечных сокращение с помощью агониста Р¡-адренорецепторов добутамина.
Исследование состояния миокарда крысы на структурном и функциональном уровнях через 72 часа после начала реперфузии, следующей за 2,5-часовой ишемией. Влияние пептида Семакс на течение ишемии/реперфузии миокарда.
Оценка объема поражения миокарда.
Результаты микроскопического анализа миокарда левого желудочка.
Результаты эксперимента in vivo по оценке функционального состояния сердечно-сосудистой системы.
Результаты нагрузочного теста по снижению величины постнагрузки на миокард с помощью донора оксида азота нитропруссида натрия.
Результаты нагрузочного теста по увеличению величины постнагрузки на миокард с помощью агониста a¡адренорецепторов фенилэфрина.
Результаты нагрузочного теста по стимуляции сократительной активности миокарда и частоты сердечных сокращений с помощью агониста ¡3¡-адренорецепторов добутамина.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Заключение Диссертация по теме "Физиология", Голубева, Анна Валерьевна
выводы
1. Ишемия миокарда крысы длительностью 2 часа 30 минут не вызвала развития сократительной дисфункции работы сердца, что подтверждалось отсутствием признаков некротической и апоптотической гибели кардиомиоцитов в области ишемии; но спровоцировала накопление ультраструктурных нарушений ядерного и митохондриального аппаратов в ишемизированных кардиомиоцитах.
2. Семакс оказал протекторный эффект на ишемизированное сердце, ограничив рост диастолического давления в левом желудочке и улучшив сохранность ультраструктуры кардиомиоцитов через 2 часа 30 минут после начала эпизода ишемии. Применение Семакса не повлияло на объем ишемического поражения миокарда, но скорректировало течение процесса ремоделирования миокарда левого желудочка в отставленный постинфарктный период.
3. Через 72 часа после начала реперфузии, следующей за 2,5-часовой ишемией, в миокарде сформировалась область инфаркта, составившая 15% от объема левого желудочка, что сопровождалось ухудшением насосной функции сердца, снижением -опосредованного положительного инотропного ответа миокарда и нарушением а!-опосредованного гипертензивного ответа.
4. Семакс оказался неэффективен в отношении снижения объема поражения миокарда в условиях ишемии с последующей реперфузией. Семакс оказал модулирующее влияние на работу сердца, что способствовало нормализации аг опосредованного гипертензивного ответа и увеличению (^-опосредованного положительного инотропного ответа миокарда.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В заключение, применение Семакса оказало ярко выраженный устойчивый защитный эффект в отношении сохранного после инфаркта миокарда левого желудочка крыс в двух моделях - при необратимой окклюзии коронарной артерии и ишемии с последующей реперфузией. При этом в сердце, в отличие от мозга [Романова Г.А., 2006], пептид оказался неэффективным в отношении снижения объема как ишемического поражения миокарда, так и реперфузионного повреждения сердечной мышцы. Учитывая, насколько велика роль воспаления в расширении повреждения при инфаркте миокарда любого патогенеза, влияние Семакса на воспалительный процесс в сердечной мышце в наших экспериментах кажется маловероятным. По-видимому, предполагаемый противовоспалительный эффект Семакса [Гусев Е.И., 2001; Скворцова В.И.,1999] специфичен в отношении мозга; а прочие механизмы действия пептида - антикоагулянтный, фибринолитический и способность снижать дыхательный взрыв нейтрофилов -либо работают только в условиях in vitro [Асташкин Е.И., 2001], либо эффективны лишь в отдельной экспериментальной модели [Черкасова К.А., 2001].
Совокупность полученных результатов позволяет предполагать, что основные протекторные эффекты пептида реализованы через влияние на симпатический отдел вегетативной нервной системы. Известно, что избыточная катехоламинэргическая стимуляция сердца токсична для миокарда: сократительный и энергетический стресс провоцирует некротическую и апоптотическую гибель кардиомиоцитов, что приводит в более отставленные сроки к развитию гипертрофии и нарушению насосной функции сердца [Shizukuda Y., 1998; Osadchii O.E., 2007]. В' условиях инфаркта миокарда, когда потеря значительной части левого желудочка увеличивает функциональную нагрузку на живые кардиомиоциты, активация симпатического тонуса является дополнительным повреждающим фактором для сердца; блокаторы ß-адренорецепторов эффективны в терапии острого инфаркта и хронической сердечной недостаточности у людей [ESC expert consensus document, 2004]. Фактически, в острый постинфарктный период - через 72 часа после начала реперфузии - пептид значительно увеличил сократительный потенциал миокарда. В отставленный постинфарктный период - через 28 суток после моделирования необратимой ишемии миокарда - Семаке скорректировал течение процесса ремоделирования постинфарктного сердца, предотвратив развитие гипертрофии рабочих кардиомиоцитов и обеспечив сохранность их ультраструктуры, что сопровождалось снижением давления наполнения в левом желудочке сердца.
Общую картину эффектов, оказанных Семаксом в отношении сохранного после инфаркта миокарда, дополнили следующие наблюдения: во-первых, через 72 часа после начала реперфузии у животных в состоянии покоя Семакс снизил величины сократительной активности миокарда и частоты сердечных сокращений; во-вторых, усиление а 1-опосредованного гипертензивного ответа после инфаркта на фоне применения пептида в обеих экспериментальных моделях было реализовано, скорее всего, на уровне гладких мышц сосудов. Принимая во внимание литературные данные, а также весь спектр полученных результатов, мы склоняемся к тому, что кардиопротекторный эффект Семакса был реализован косвенно, через нервную регуляцию работы сердца, а именно - сдерживание гиперактивации симпатической системы после инфаркта.
В дополнение к вышесказанному, сопоставление эффектов пептида, полученных в разных экспериментальных моделях, в данном случае оправдано, поскольку основным сигналом для увеличения симпатического тонуса после повреждения сердечной мышцы является снижение сердечного выброса- и увеличение давления наполнения камер сердца [Graham L.N., 2002; Rundqvist В., 1997; Malliani А., 2002]. Указанные нарушения были продемонстрированы во всех экспериментальных сериях, следовательно, активация симпатической системы равновероятна и при необратимой ишемии миокарда, и при ишемии с последующей реперфузией:
Суммируя сказанное, можно заключить, что пептидный препарат Семакс оказался неэффективным в отношении защиты сердца от собственно ишемического и реперфузионного повреждения; однако Семакс оказал устойчивый защитный эффект на сохранный после инфаркта миокард левого желудочка в острый и отставленный постинфарктный периоды. Кардиопротекторное действие пептида не зависело от экспериментальной модели и могло реализовываться через снижение токсического действия симпатической нервной системы на сердечно-сосудистую систему после инфаркта.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Голубева, Анна Валерьевна, Москва
1. Абдулла А. Ультраструктурная и морфометрическая характеристика хондриома кардиомиоцитов миокарда правого желудочка сердца крыс в норме и при гипобарической гипоксии. // Москва: Автореф. дисс. канд. биол. наук. 1992.
2. Амченкова A.A., Бакеева Л.Е., Драчев В.А., Зоров Д.Б. и Скулачев В.П. Митохондриальный электрический кабель. // Вестник МГУ. Сер. биол. 1986. — Т.З. - С.3-15.
3. Асташкин Е.И., Петров Е.А., Беспалова Ю.Б., Глезер М.Г., Гривенников И.А. и Грачев C.B. Изучение влияния аналога АКТГ(4-10) (пептида Семакса) на дыхательный взрыв нейтрофилов человека. // ДАН. 2001. - Т.378, №1. - С. 121— 123.
4. Волков A.B., Заржецкий Ю.В., Постнов А.Ю. и др. Результаты применения регуляторных пептидов при реанимации после остановки сердца* в эксперименте. // Москва: Ин-т общей реаниматологии РАМН. 1992. - С.69-76.
5. Гаврилова С.А., Загидуллин Т.Р., Липина Т.В., Фоминых Е.С., Голубева
6. A.B., Вареник E.H. и Парнес Е.Я. Протекторное действие ксефокама на развитие инфаркта миокарда у крыс в условиях ишемии и ишемии-реперфузии. // Кардиология. В печати.
7. Гривенников И.А. Молекулярно-генетические подходы к пептидной фармакотерапии нейродегенеративных заболеваний. // Москва: Диссертация на правах рукописи. 2006.
8. Гусев Е.И. и Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. // Москва: Медицина. 2001.
9. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Журавлева Е.Ю., Андреева Л.А., Незавибатько
10. B.Н., Гривенников И.А. и Мясоедов Н.Ф. Способ лечения ишемического инсульта. // Патент № 2124365. 1999. - Бюлл. 1.
11. Еремин К.О., Кудрин B.C., Гривенников И.А., Мясоедов Н.Ф. и Раевский К.С. Влияние Семакса на дофамин- и серотонинэргические системы мозга. // ДАН. 2004. - Т.394, №1. - С.130-132.
12. Каплан А.Я., Кошелев В.Б., Незавибатько В.Н. и Ашмарин И.П. Повышение устойчивости организма к гипоксии с помощью нейропептидного лекарственного препарата семакс. // Физиология человека. 1992. - Т. 18, №5. -С. 104-107.
13. Левицкая Н.Г. Физиологические эффекты синтетических аналогов меланокортинов: структурно-функциональное исследование. // Москва: Диссертация на правах рукописи. 2007.
14. Непомнящих Л.М. Морфология важнейших общепатологических процессов в сердце. // Новосибирск: Наука. 1991. - С.352.
15. Пономарева-Степная М.А., Незавибатько В., Антонова Л., Андреева Л., Алфеева Л., Потаман В., Каменский A.A. и Ашмарин И.П. Аналог АКТГ(4-10) стимулятор обучения пролонгированного действия. // Хим.-фарм. ж. 1984. - Т. 18, №7. - С.790-795.
16. Хлыстов В.В., Слепушкин В.Д., Павленко B.C., Хавинсон В.Х. и Морозов
17. B.Г. Ультраструктура околоинфарктной зоны при лечении кардиолином экспериментального инфаркта миокарда. // Архив патол. 1989. - Т.51, №9. —1. C.27-31.
18. Чичканов Г.Г., Цорин И.Б., Кирсанова Г.Ю. и др. Производные 2-меркаптобензимидазола новая группа специфических брадикардических средств. // Экспер и клин фармакология. - 1997. - Т.60, №3. - С.23-26.
19. Чичканов Г.Г., Цорин И.Б., Кирсанова Г.Ю. и др. Противоишемические свойства новых специфических брадикардических средств, производных 2-меркаптобензимидазола. // Экспер и клин фармакология. 1998. - Т.61*, №6. -С.20-24.
20. Шаров В.Г., Иргашев Ш.Б., Мавриди Д.И. и Могилевский Г.Н. Ультраструктура поврежденного кардиомиоцита. // Ультраструктура сердца. -Ташкент: Медицина. 1988. - Т.7. - С.53-69.
21. Шорникова М.В. Межмитохондриальные контакты в системе митохондриома кардиомиоцитов в норме, при физиологических нагрузках и в патологии. // Онтогенез. 2000. - Т.6. - С.470-475.
22. Akiyama K., Suzuki H., Grant P. and Bing RJ. Oxidation products of nitric oxide, N02 and N03, in plasma after experimental myocardial infarction. // J Mol Cell Cardiol. 1997. - V.29. -P.l-9.
23. Albutahi I.A.M., DeJongste MJ.L. and Foreman R.D. Angina pectoris: a neuroanatomical review of mechanisms and pathways. // Int J Pain Med Pall Care. — 2003.-Y.3.-P. 12-17.
24. Ambrosio G. and Tritto I. Myocardial reperfusion injury. // Eur Heart J Supplements. 2002. - V.4, Suppl. B. - P.28-30.
25. Ambrosio G., Weisman H.F., Mannisi J.A. and Becker L.C. Progressive impairment of regional myocardial perfusion after initial restoration of postishemic blood flow. // Circulation. 1989. -V.80. - P. 1846-1861.
26. Angus J.A., Ferrier C.P., Sudhir K., Kaye D.M. and Jennings G.L. Impaired contraction and relaxation in skin resistance arteries from patients with congestive heart failure. // Cardiovasc Res. 1993. - Y.27, N.2. - P.204-210.
27. Anversa P., Capasso J.M., Puntillo E., Sonnenblick E.H. and Olivetti G. Morphometric analysis of the infarcted heart. // Pathol Res Pract. 1989. - V.185. -P.544-550.
28. Ashmarin I.P., Nezavibat'ko V.N., Levitskaya N.G., Koshelev V.B., Kamensky A.A. Desing and investigation of ACTH(4-10) analog deprived of D-aminoacids and hydrophobic radicals. // Neuroscience Research Communications. 1995. - V.16. -P.105-112.
29. Azevedo E.R., Newton G.E., Floras J.S. and Parker J.D. Reducing cardiac filling pressure lowers norepinephrine spillover in patiens with chronic heart failure. // Circulation. 2000. - V. 101. - P.2053-2059.
30. Barber M.J., Mueller T.M., Henry D.P., Felten S.Y. and Zipes D.P. Transmural myocardial infarction in the dog produces sympathectomy in noninfarcted myocardium. // Circulation. 1983. - V.67. - P.787-796.
31. Beckmann J.S., Ye Y.Z., Anderson P.G., Chen J., Accavitti M.A., Tarpey M.M. and White C.R. Extensive nitration of protein tyrosines in human atherosclerosis detected by immunohistochemistry. // Biol Chem Hoppe Seyler. 1994. - V.375, N.2. - P.81-88.
32. Bolanos J. and Almeida A. Roles of nitric oxide in brain hypoxia-ischemia. // Biochem Biophys Acta. 1999. - V. 1411. -P.415-436.
33. Bolli R. and Marban E. Molecular and cellular mechanisms of myocardial stunning. // Physiol Rev. 1999. - V.79. - P.609-634.
34. Bonvini R.F., Hendiri T. and Camenzind E. Inflammatory response post-myocardial infarction and reperfusion: a new therapeutic target? // Eur Heart J. 2005. -Suppl.7.-P. 127-136.
35. Botting J.H., Johnston K.M., MacLeod B.A. and Walker M.J. The effect of modification of sympathetic activity on responses to ligation of a coronary artery in the conscious rat. // Br J Pharmacol. 1983. - V.79, N.l. - P.265-271.
36. Bouloumie A., Schini-Kerth V.B. and Busse R. Vascular endothelial growth factor up-regulates nitric oxide synthase expression in endothelial cells. // Cardiovasc Res. 1999. - V.41, N.3. - P.773-780.
37. Bredt D.S. Nitric oxide signaling specificity the heart of the problem. // J Cell Sci. - 2003. - V. 116. - P.9-15.
38. Brodde O.E. pi- and p2-adrenoceptors in the human heart: properties, function, and alterations in chronic heart failure. // Pharmacol Rev. 1991. - V.43. - P.203-242.
39. Brodde O.E. and Michel M.C. Adrenergic and muscarinic receptors in the human heart. // Pharmacol Rev. 1999. - V.51, N.4. - P.651-689.
40. Brown A.M. Excitation of afferent cardiac sympathetic nerve fibres during myocardial ischemia. // J Physiol. 1967. - V. 190. - P.35-53.
41. Brown G.C., Foxwell N. and Moncada S. Transcellular regulation of cell respiration by nitric oxide generated by activated macrophages. // FEBS Lett. 1998. -V.439. — P.321-324.
42. Brunner-La Rocca H.P., Vaddadi G. and Esler M.D. Recent insight into therapy of congestive heart failure: focus on ACE inhibition and angiotensin-II antagonism. // J Am Coll Cardiol. 1999. - V.33. - P.l 163-1173.
43. Chakraborti S., Chakraborti T. and Shaw G. p-Adrenergic mechanisms in cardiac deseases. A perspective. // Cellular Signalling. 2000. - V.12. -P.499-513.
44. Chan M.Y., Dai S. and Ko W.W. Effects of morphine on cardiovascular responses to acute myocardial ischemia in rats. // Br J Pharmacol. 1987. - V.90, N.3. -P.537-543.
45. Chatelain P., Latour J.G., Tran D., de Lorgeril M., Dupras G. and Bourassa M. Neutrophil accumulation in experimental myocardial infarcts: relation with extent of injury and effect of reperfusion. // Circulation. 1987. - V.75. - P.1083-1090.
46. Choate J.K. and Paterson D.J. Nitric oxide inhibits the positive chronotropic and inotropic responses to sympathetic nerve stimulation in the isolated guinea-pig atria. // J Auton Nerv Syst. 1999. - V.75. - P. 100-108.
47. Conlon K. and Kidd C. Neuronal nitric oxide facilitates vagal chronotropic and dromotropic actions on the heart. // J Auton Nerv Syst. 1999. - V.75. - P. 136-146.
48. Curtis M.J., MacLeod B.A. and Walker M.J. Models for the study of arrhythmias in myocardial ischemia and infarction: the use of the rat. // J Mol Cell Cardiol. 1987. -V. 19, N.4. -P.399-419.
49. Dae M.W., Herre J.M., O'Connell J.W., Botvinick E.H., Newman D. and Munoz L. Scintigraphic assessment of sympathetic innervation after transmural versus nontransmural myocardial infarction. // J Am Coll Cardiol. 1991. - V.17. - P.1416-1423.
50. DiBona G.F., Jones S.Y. and Brooks V.L. ANG II receptor blockade and arterial baroreflex regulation of renal nerve activity in cardiac failure. // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 1995. - V.269. - P.l 189-1196.
51. Dudek R.R., Wildhirt S.M., Conforto A., Pinto V., Suzuki H., Winder S. and Bing R.J. Inducible nitric oxide synthase activity in myocardium after myocardial infaction in rabbit. // Biochem Biophys Res Commun. 1994. - V.205. N.3. - P. 16711680.
52. Duilio C., Ambrosio G., Kuppusamy P., Dipaula A., Becker L.C. and Zweier J.L. Neutrophils are primary source of 02 radicals during reperfiision after prolonged myocardial ischemia. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2001. - V.280. - P.2649-2657.
53. Eisenhofer G., Friberg P., Rundqvist B., Quyyumi A.A., Lambert G., Kaye D.M., Kopin I.J., Goldstein D.S. and Esler M.D. Cardiac sympathetic nerve function in congestive heart failure. // Circulation. 1996. - V.93. - P. 1667-1676.
54. Engler R.L., Schmid-Schonbein G.W. and Pavelec R.S. Leukocyte capillary plugging in muocardial ischemia and reperfusion in the dog. // Am J Pathol. 1983. — V.111.-P.98-111.
55. ESC expert consensus document. Expert consensus document on p-adrenergic receptor blockers. The task force on beta-blockers of the European society of cardiology. // Eur Heart J. 2004. - V.25. - P. 1341-1362.
56. Feng Q.P., Bergdahl A., Lu X.R., Sun X.Y., Edvinsson L. and Hedner T. Vascular alpha-2 adrenoceptor function is decreased in rats with congestive heart failure. // Cardiovasc Res. 1996. - V.31, N.4. -P.577-584.
57. Feng Q.P., Lu X., Jones D.L., Shen J. and Arnold J.M.O. Increased inducible nitric oxide synthase expression contributes to myocardial dysfunction and higher mortality after myocardial infarction in mice. // Circulation. 2001. - V.104. - P.700-704.
58. Feng Q.P., Sun X., Lu X., Edvinsson L. and Hedner T. Decreased responsiveness of vascular postjunctional a\~, a2-adrenoceptors and neuropeptide Y1 receptors in rats with heart failure. // Acta Physiol Scand. 1999. - V.166. - P.285-291.
59. Ferdinandy P. and Schulz R. Nitric oxide, superoxide, and peroxynitrite in myocardial ischemia-reperfusion injury and preconditioning. // Br J Pharmacol. 2003. -V.138. -P.532-543.
60. Fliss H. and G'attinger D: Apoptosis in ischemic and reperfused rat myocardium. // Circ Res. 1996; - V.79. - P.949-956.
61. Floras J.S. Sympathetic activation in human heart failure: diverse mechanisms, therapeutic opportunities. // Acta Physiol Scand. 2003. - V.177. - P.391-398.
62. Foy S.G., Crozier I.G., Richards A.M., Nicholls M.G., Turner J.G., Frampton C.M. and Ikram H. Neurohormonal changes after acute myocardial infarction. // European Heart Journal. 1995. - V.16. -P.770-778.
63. Gillespie M.N., Kojima S., Kunimoto M. and Jay M. Coronary and myocardial effects of activated neutrophils in perfused rabbit hearts. // J Pharmacol Exp Ther. -1986. V.239. — P.836-840.
64. Giulivi C. Characterization and function of mitochondrial nitric oxide synthase. // Free Radic Biol Med. 2003. - V.34, N.4. - P.397^108.
65. Goldhaber J.I., Kim K.H., Natterson P.D., Lawrence T., Yang P. and Weiss J.N.i
66. Effects of TNF-alpha on Ca .i and contractility in isolated adult rabbit ventricular myocytes. //Am J Physiol Heart Circ Physiol. 1996. - V.271. -P.1449-1455.
67. Gottlieb R.A., Burleson K.O., Kloner R.A., Babior B.M. and Engler R.L. Reperfiision injury induces apoptosis in rabbit cardiomyocytes. // J Clin Invest. 1994. -V.94,N.4.-P. 1621-1628.
68. Graham L.N., Smith P.A., Stocker J.B., Mackintosh A.F. and Mary D.A. Time course of sympathetic neural hyperactivity after uncomplicated acute myocardial infarction. // Circulation. 2002. - V. 106. - P.793-797.
69. Granger D.L. and Lehninger A.L. Sites of inhibition of mitochondrial electron transport in macrophage-injured neoplastic cells. // J Cell Biol. 1982. - V.95. - P.527-535.
70. Granger D.L., Taintor R.R., Boockvar K.S. and Hibbs J.B. Measurement of nitrate and nitrite in biological samples using nitrate reductase and Griess reaction. // Methods Enzymol. 1996. -V.268. - P. 142-151.
71. Granger D.L., Taintor R.R., Cook J.L. and Hibbs J.B. Injury of neoplastic cells by murine macrophages leads to inhibition of mitochondrial respiration. // J Clin Invest. -1980. V.65, N.2. - P.357-370.
72. Griendling K.K., Sorescu D. and Ushio-Fukai M. NAD(P)H oxidase: role in cardiovascular biology and disease. // Circ Res. 2000. - V.86. - P.494-501.
73. Gryglewski R.J., Palmer R.M. and Moncada S. Superoxide anion is involved in the breakdown of endothelium-derived vascular relaxing factor. // Nature. 1986. -V.320, N.6061. -P.454-456.
74. Gu X.H., Kompa A.R. and Summers R.J. Regulation of p-adrenoceptors in a rat model of heart failure: effect of perindopril. // J Cardiovasc Pharmacol. 1998. - V.32, N.l. -P.66-74.
75. Hansen P.R. Role of neutrophils in myocardial ischemia and reperfusion. // Circulation. 1995. - V.91. - P. 1872-1885.
76. Harding S.E., Brown L.A., Wynne D.G., Davies C.H. and Poole-Wilson P.A. Mechanisms of beta adrenoceptor desensitisation in the failing human heart. // Cardiovasc Res. 1994. - V.28, N. 10. - P. 1451-1460.
77. Hartikainen J., Kuikka J., Mantysaari M., Lansimies E. and Pyorala K. Sympathetic reinnervation after acute myocardial infarction. // Am J Cardiol. 1996. -V.77, N.l. - P.5-9.
78. Heeneman S., Leenders P.J., Aarts P.J., Smits J.F., Arends J.W. and Daemen M.J. Peripheral vascular alterations during experimental heart failure in the rat: do they exist? // Arterioscler Thromb vase Biol. 1995. - V.15. - P. 1503-1511.
79. Heyndrickx G.R. Early reperfusion phenomena. // Semin Cardiothorac Vase Anesth. 2006, - V.10. - P.236-241.
80. Hibbs J.B., Taintor R.R., Vavrin Z. and Rachlin E.M. Nitric oxide: a cytotoxic activated macrophage effector molecule. // Biochem Biophys Res Commun. 1988. -V.157. - P.87-94.
81. Ignarro L.J. Endothelium-derived nitric oxide: actions and properties. // FASEB J. 1989. - V.3. -P.31-36.
82. Ikeda U., Maeda Y., Kawahara Y., Yokoyama M.and Shimada K. Angiotensin II augments cytokine-stimulated nitric oxide synthesis in rat cardiac myocytes. // Circulation. 1995. - V.92. - P.2683-2689.
83. Ikeda. U., Murakami Y. and Kanbe T. Alpha-adrenergic stimulation enhances inducible nitric oxide synthase expression in rat cardiac myocytes. // J Mol CelLCardiol. 1996. - V.28. - P.1539-1545.
84. Inoue H. and Zipes D.P. Time course of denervation of efferent sympathetic and vagal nerves after occlusion of the coronary artery in the canine heart. // Circ Res. -1988. V.62. — P.l 111—1120.
85. Ischiropoulos H., Zhu L. and Beckman J.S. Peroxynitrite formation from macrophage-derived'nitric oxide. // Arch Biochem, Biophys. 1992. - V.298, N.2. -P.446-451.
86. Jardine D.L., Charles C.J., Ashton R.K., Bennett S.I., Whitehead M., Frampton C.M. and Nicholls M.G. Increased cardiac sympathetic nerve activity following acute myocardial infarction in a sheep model. // J Physiol. 2005. - V.565. - P.325-333.
87. Johnston K.M., MacLeod B.A. and Walker M.J. Responses to ligation of a coronary artery in conscious rats and the actions of antiarrhythmics. // Can J Physiol Pharmacol.- 1983. V.61, N.ll.-P.1340-1353.
88. Kaul S. and Ito H. Microvasculature in acute myocardial ischemia: part II evolving concepts in pathophysiology, diagnosis and treatment. // Circulation. 2003. -V.109. — P.310—315.
89. Kelly R.A., Balligand J.L. and Smith T.W. Nitric oxide and cardiac function. // Circ Res. 1996. - V.79. - P.363-380.
90. Kloner R.A., Ganote C.E. and Jennings R.B. The "no-reflow" phenomen after temporary coronary occlusion in the dog. // J Clin Invest. 1974. - V.54, N.6. - P. 14961508.
91. Kloner R.A., Rude R.E., Carlson N., Maroko P.R., DeBoer L.W. and Braunwald E. Ultrastructural evidence of microvascular damage and myocardial cell injury after coronary artery occlusion: which comes first? // Circulation. 1980. - V.62. - P.945-952.
92. Lacza Z., Puskar M., Figueroa J.P., Zhang J., Rajapakse N. and Busija D.W. Mitochondrial nitric oxide synthase is constitutively active and is functionally upregulated in hypoxia. // Free Radic Biol Med. 2001. - V.31, N.12. - P. 1609-1615.
93. Lancaster J.R. and Hibbs J.B. EPR demonstration of iron-nitrosyl complex formation by cytotoxic activated macrophages. // PNAS. 1990. - V.87. - P.1223-1227.
94. Leenen F.H.H., Yuan B. and Huang B.S. Brain "ouabain" and angiotensin II contribute to cardiac dysfunction after myocardial infarction. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 1999. -V.277. - P. 1786-1792.
95. Leier C.V., Binkley P.F. and Cody R.J. a-adrenergic component of the sympathetic nervous system in congestive heart failure. // Circulation. 1990. .- V.82, Suppl.l. -P.68-76.
96. Levine B., Kaiman J. and Mayer L. Elevated circulating levels of tumor necrosis factor in severe chronic heart failure. //N Engl J Med. 1990. - V.323. -P.236-241.
97. Li W., Knowlton D., Van Winkle D.M. and Habecker B.A. Infarction alters both the distribution and noradrenergic properties of cardiac sympathetic neurons. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2004. - V.286. - P.2229-2236.
98. Li W., Knowlton D., Woodward W.R. and Habecker B.A. Regulation of noradrenergic function by inflammatory cytokines and depolarization. // J Neurochem. -2003. V.86, N.3. - P.774-783.
99. Liu P., Xu B., Cavalieri T.A. and Hock C.E. Age-related difference in myocardial function and inflammation in a rat model of myocardial ischemia-reperfusion. // Cardiovasc Res. 2002. - V.56, N.3. - P.443^153.
100. Liu Y.H., Xu J., Yang J.P., Yang F„ Shesely E. and Carretero O.A. Effect of ACE inhibitors and angiotensin II type 1 receptor antagonists on endothelial NO synthase knockout mice with heart failure. // Hypertension. 2002. - V.39. - P.375-381.
101. Lombardi F., Sandrone G., Spinnler M.T., Torzillo D., Lavezzaro G.C., Brusca A. and Malliani A. Heart rate variability in the early hours of an acute myocardial infarction. //Am J Cardiol. 1996. - V.77, N.12. - P. 1037-1044.
102. Malliani A. Cardiovascular sympathetic afferent fibers. // Rev Physiol Biochem Pharmacol. 1982. - V.94. - P. 11-74.
103. Malliani A. The elusive link between transient myocardial ischemia and pain. // Circulation. 1986. - V.73. - P.201-204.
104. Malliani A. and Montano N. Emerging excitatory role of cardiovascular sympathetic afferents in pathophysiological conditions. // Hypertension. 2002. - V.39. - P.63-68.
105. Malliani A., Schwartz P.J. and Zangchetti A. A sympathetic reflex elicited by experimental coronary occlusion. // Am J Physiol. 1969. - V.217, N.3. - P.703-709.
106. Manukhina E.B., Downey H.F. and Mallet R.T. Role of nitric oxide in cardiovascular adaptation to intermittent hypoxia. // Exp Biol Med. 2006. - V.231. -P.343-365.
107. Martinez L., Carmona L. and Villalobos-Molina R. Vascular a1D-adrenoceptor function is maintained during congestive heart failure after myocardial infarction in the rat. // Arch Med Res. 1999. - V.30, N.4. - P.290-297.
108. Massion P.B. and Balligand J.L. Modulation of cardiac contraction, relaxation and rate by the endothelial nitric oxide synthase (eNOS): lessons from genetically modified mice. // J Physiol. 2003. - V.546. - P.63-75.
109. McAlpine H.M., Morton J.J., Leckie B., Rumley A., Gillen G. and Dargie H.J. Neuroendocrine activation after acute myocardial infarction. // Heart. 1988. - V.60. -P.l 17-124.
110. McCall T.B., Boughton-Smith N.K., Palmer R.M., Whittle B.J. and Moncada S. Synthesis of nitric oxide from L-arginine by neutrophils. Release and interaction with superoxide anion. // Biochem J. 1989; - V.261, N. 1. - P.293-296.
111. McDonald K., Chu C., Francis G., Judd D., Carlyle W., Toher C., Hauer K. and Hartman Mi The effect of delayed reperfusion following infarction in the rat on structural changes in-viable myocardium. // Cardiovasc Res. 1997. - V.36, N.3. - P.347-353.
112. Miranda K.M., Espey M.G. and Wink D.A. A rapid, simple spectrophotometric method for simultaneous detection of nitrate and nitrite. // Biology and Chemistry. -2001. — V.5, N.l. -P.62-71.
113. Ninomiya I., Matsukawa K., Honda T., Nishiura N. and Shirai M. Cardiac sympathetic nerve activity and heart rate during coronary occlusion in awake cats. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 1986. - V.25 L - P.528-537.
114. Notarius C.F., Atchison D.J. and Floras J.S. Impact of heart failure and exercise capacity on sympathetic response to handgrip exercise. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2001. - Y.280. - P.969-976.
115. Ochoa J.B., Udekwu A.O., Billiar T.R., Curran R.D., Cerra F.B., Simmons R.L. and Peitzman A.B. Nitrogen oxide levels in patients after trauma and during sepsis. // Ann Surg. -1991. V.214. - P.621-626.
116. Oddis C.V. and Finkel M.S. Cytokine-stimulated nitric oxide production inhibits mitochondrial activity in cardiac myocytes. // Biochem Biophys Res Commun. 1995. -V.213, N.3. - P.1002-1009.
117. Ono K., Matsumori A., Shioi T., Furukawa Y. and Sasayama S. Cytokine gene expression after myocardial infarction in rat hearts: possible implication in left ventricular remodeling. // Circulation. 1998. - V.98. - P.149-156.
118. Pfeffer M.A., Pfeffer J.M., Fishbein M.C., Fletcher P.J., Spadaro J., Kloner R.A. and Braunwald E. Myocardial infarct size and ventricular function in rats. // Circ Res. -1979. V.44. - P.503-512.
119. Prahash A.J.C., Gupta S. and Anand I.S. Myocyte response to P-adrenergic stimulation is preserved in the noninfarcted myocardium of globally dysfunctional rat hearts after myocardial infarction. // Circulation. 2000. - V. 102. - P. 1840-1846.
120. Reffelmann T., Hale S.L., Li G. and Kloner R.A. Relationship between no reflow and infarct size as influenced by the duration of ischemia and reperfusion. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2002. - V.282. - P.766-772.
121. Reid I.A. Interactions between ANG II, sympathetic nervous system, and baroreceptor reflexes in regulation of blood pressure. // Am J Physiol Endocrinol Metab.- 1992. V.262. - P.763-778.
122. Reimer K.A., Lowe J.E., Rasmussen M.M. and Jennings R.B. The wavefront phenomen of ischemic cell death. Myocardial infarct size vs duration of coronary occlusion in dogs. // Circulation. 1977. - V.56, N.5. - P.786-794.
123. Reiter C.D., Teng R.J. and Beckman J.S. Superoxide reacts with nitric oxide to nitrate tyrosine at physiological pH via peroxynitrite. // J Biol Chem. 2000. - V.275, N.42. - P.32460-32466.
124. Rundqvist B., Elam M., Bergmann-Sverrisdottir Y., Eisenhofer G. and Friberg P. Increased cardiac adrenergic drive precedes generalized sympathetic activation in human heart failure. // Circulation. 1997. - V.95. - P. 169-175.
125. Saito T., Hu F., Tayara L., Fanas L., Shennib H. and Giaid A. Inhibition of NOS II prevents cardiac dysfunction in myocardial infarction and congestive heart'failure. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2002. - V.283. - P.339-345.
126. Saito T., Rodger I.W., Shennib H., Hu F., Tayara L. and Giaid A. Cyclooxygenase-2 (COX-2) in acute myocardial infarction: cellular expression and use of selective COX-2 inhibitor. // Can J Physiol Pharmacol. 2003. - V.81, N.2. - P.l 14-119.
127. Sanbe A. and Takeo S. Diminished responsiveness to cardiac pi-adrenoceptor agonists in rats with chronic heart failure following myocardial infarction. // Biol Pharm Bull. 1995. - V.18, N.10. - P.1362-1366.
128. Sarkela T.M., Berthiaume J., Elfering S., Gybina A.A. and Giulivi C. The modulation of oxygen radical production by nitric oxide in mitochondria. // J Biol Chem.- 2001. Y.276. - P.6945-6949.
129. Schoemaker R.G., Urquhart J., Debets J.J.M., Struyker Boudier H.A.J, and Smits J.F.M. Acute hemodynamic effects of coronary artery ligation in conscious rats. // Basic Res Cardiol. 1990. - V.85. - P.9-20.
130. Schulz R. and Heusch G. Hibernating myocardium. // Heart. 2000. - V.84. -P.587-594.
131. Schulz R., Nava E. and Moncada S. Induction and potential biological relevance of a Ca2+-independent nitric oxide synthase in the myocardium. // Br J Pharmacol. -1992. V.105. - P.575-580.
132. Schwarz P., Diem R., Dun N.J. and Forstermann U. Endogenous and exogenous nitric oxide inhibits norepinephrine release from rat heart sympathetic nerves. // Circ Res. 1995. — V.77. - P.841-848.
133. Selye H., Bajusz E., Grasso S. and Mendell P. Simple technique for the surgical occlusion of coronary vessel in the rat. // Angiology. 1960. - V.l 1, N.3. - P.398-405.
134. Shindo T., Ikeda U., Ohkawa F., Kawahara Y., Yokoyama M. and Shimada K. Nitric oxide synthesis in cardiac myocytes and fibroblasts by inflammatory cytokines. // Cardiovasc Res. 1995. - V.29. - P.813-819.
135. Shizukuda Y., Buttrick P.M., Geenen D.L., Borczuk A.C., Kitsis R.N. and Sonnenblick E.H. p-Adrenergic stimulation causes cardiocyte apoptosis: influence of tachycardia and hypertrophy. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 1998. - V.275. -P.961-968.
136. Smith J.M. and Pilati C.F. Effect of massive sympathetic nervous system activation on coronary blood flow and myocardial energy pool. // Exp Biol Med. 2002.- V.227, N.2.-P. 125-132.
137. Smith R.S.J., Agata J., Xia C.F. and Chao L. Human endothelial nitric oxide synthase gene delivery protects against cardiac remodeling and reduces oxidative stress after myocardial infarction. // Life Sci. 2005. - Y.76, N.21. - P.2457-2471.
138. Souza J.M., Choi I., Chen Q., Weisse M., Daikhin E., Yudkoff M., Obih M., Ara J., Horwitz J. and Ischiropoulos H. Proteolytic degradation of tyrosine nitrated proteins. // Arch Biochem Biophys. 2000. - V.380, N.2. - P.360-366.
139. Stuehr D.J. and Nathan C.F. Nitric oxide: a macrophage product responsible for cytostasis and respiratory inhibition in tumor target cells. // J Exp Med. 1989. - V.169. -P.1543-1555.
140. Tao L., Gao E., Hu A., Coletti C., Wang Y., Christopher T.A., Lopez B.L., Koch W. and Ma X.L. Thioredoxin reduces post-ischemic myocardial apoptosis by reducing oxidative/nitrative stress. // Br J Pharmacol. 2006. - V. 149. - P.311-318.
141. Thompson-Gorman S.L. and Zweier J.L. Evaluation of the role of xanthine oxidase in myocardial reperfusion injury. // J Biol Chem. 1990. - V.265, N.12. -P.6656-6663.
142. Tsao P.S., Ma X.L. and Lefer A.M. Activated neutrophils aggravate endothelial dysfunction after reperfusion of the ischemic feline myocardium. // Am Heart J. 1992. -V.123, N.6. - P. 1464-1471.
143. Turck D. and Dominiak P. Changes in cardiovascular adrenoceptor response in rats subsequent to myocardial infarction. // Basic Res Cardiol. 1987. - V.82, Suppl.2. -P.317-323.
144. Wang H., Huang B.S., Ganten D. and Leenen F.H.H. Prevention of sympathetic and cardiac dysfunction after myocardial infarction in transgenic rats deficient in brain angiotensinogen. // Circ Res. 2004. - V.94. - P.843-849.t \
145. Wang P. and Zweier J.L. Measurement of nitric oxide and peroxynitrite generation in the postischemic heart. // J Biol Chem. 1996. - V.271, N.46. - P.29223-29230.
146. Watson A.M.D., Mogulkoc R., McAllen R.M. and May C.N. Stimulation of cardiac sympathetic nerve activity by central angiotensinergic mechanisms in conscious sheep. // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2004. - V.286. - P. 1051-1056.
147. Webb A., Bond R., McLean P., Uppal R., Benjamin N. and Ahluwalia A. Reduction of nitrite to nitric oxide during ischemia protects against myocardial ischemia-reperfusion damage. // PNAS. 2004. - V. 101. - P. 13683-13688.
148. Weiss S .J., Young J., LoBuglio A.F. and Nimeh N.F. Role of hydrogen peroxide in neutrophil-mediated destruction of cultured endothelial cells. // J Clin Invest. 1981. -V.68, N.3. -P.714-721.
149. Wildhirt S.M., Dudek R.R., Suzuki H. and Bing R.J. Involvement of inducible nitric oxide synthase in the inflammatory process of myocardial infarction. // Int J Cardiol. 1995.- V.50.-P.253-261.
150. Wildhirt S.M., Dudek R.R., Suzuki H., Pinto V., Narayan K.S. and Bing R.J. Immunohistochemistry in the identification of nitric oxide synthase isoenzymes in myocardial infarction. // Cardiovasc Res. 1995. - V.29. - P.526-531.
151. Wildhirt S.M., Suzuki H., Horstman D., Weismuller S., Dudek R.R., Akiyama K. and Reichart B. Selective modulation of inducible nitric oxide synthase isozyme in myocardial infarction. // Circulation. 1997. - V.96. -P.1616-1623.
152. Xu K.Y., Huso D.L., Dawson T.M., Bredt D.S. and Becker L.C. Nitric oxide synthase in cardiac sarcoplasmic reticulum. // PNAS. 1999. - V.96. - P.657-662.
153. Xu L., Eu J.P., Meissner G. and Stamler J.S. Activation of the cardiac calcium release channel (ryanodine receptor) by poly-S-nitrosylation. // Science. 1998. - V.279. - P.234-237.
154. Yamamoto J., Ohyanagi M., Morita M. and Iwasaki T. Beta-adrenoceptor-G protein-adenylate cyclase complex in rat hearts with ischemic heart failure produced by coronary artery ligation. // J Moll Cell Cardiol. 1994. - V.26, N.5. - P.617-626.
155. Yellon D.M. and Hausenloy D.J. Myocardial reperfusion injury. // N Engl J Med. 2007. - V.357. - P. 1121-1135.
156. Zhang W., Huang B.S. and Leenen F.H.H. Brain renin-angiotensin system and sympathetic hyperactivity in rats after myocardial infarction. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 1999. - V.276. -P.1608-1615.
157. Zweier J.L. Measurement of superoxide-derived free radicals in the reperfused heart. // J Biol Chem. 1988. - V.263. N.3. - P.1353-1357.
158. Zweier J.L., Fertmann J. and Wei G. Nitric oxide and peroxynitrite in postischemic myocardium. // Antioxid Redox Signal. 2001. - V.3, N. 1. - P. 11-22.
159. Zweier J.L., Wang P. and Kuppusamy P. Direct measurement of nitric oxide generation in the ischemic heart using electron paramagnetic resonance spectroscopy. // J Biol Chem. 1995a. - V.270, N. 1. - P.304-307.
160. Zweier J.L., Wang P., Samouilov A. and Kuppusamy P. Enzyme-independent formation of nitric oxide in biological tissues. // Nat Med. 19995b. - V.l, N.8. - P.8042594.809.
-
Голубева, Анна Валерьевна
-
кандидата биологических наук
-
Москва, 2008
-
ВАК 03.00.13
- Кардиопротекторное действие семакса при ишемии и ишемии-реперфузии миокарда у крыс
- Влияние гептапептида семакс и его аналогов на болевую чувствительность животных: возможные механизмы действия
- Роль опиоидных рецепторов, протеинкиназы С, тирозинкиназ, PI3-киназы и NO-синтаз в реализации кардиопротекторного эффекта адаптации к непрерывной нормобарической гипоксии
- Влияние синтетических пептидов на межполушарную асимметрию мозга и активность карбоксипептидазы E при выработке условного пищедобывательного рефлекса у крыс
- Особенности экспрессии генов в мозге крыс в условиях неполной глобальной ишемии под действием пептидов семакс и Pro-Gly-Pro
