Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изыскание радиозащитных средств из класса веществ микробного происхождения

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Изыскание радиозащитных средств из класса веществ микробного происхождения"

Хафизов Айрат Шарафетдинович

ИЗЫСКАНИЕ РАДИОЗАЩИТНЫХ СРЕДСТВ ИЗ КЛАССА ВЕЩЕСТВ МИКРОБНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

03 00 01 - Радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань-2007

003059105

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (ФГУ «ФТЦРБ-ВНИВИ») г Казань

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

Низамов Рамзи Низамович

Официальные оппоненты - доктор биологических наук, профессор

Тремасов Михаил Яковлевич

- доктор биологических наук, профессор Фролов Виктор Петрович

Ведущее учреждение Ижевская государственная сельскохозяйственная академия

Защита диссертации состоится «3О» /ИОЛ 2007 г в 10 часов на заседании диссертационного совета Д-220 012 01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (420075, г Казань-75, Научный городок-2, ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г Казань)

Автореферат разослан «26"-»д/тре^уЯ 2007 г

Ученый секретарь диссертационного

совета, кандидат ветеринарных наук, /7 _ ~

старший научный сотрудник с^Щтаггтгтпп^-^ ц и Степанов

1. ВВЕДЕНИЕ

1.1. Актуальность темы. Полувековые исследования в области разработки радиозащитных средств (Владимиров В.Г. и др., 1978, 1989, 1997, Васин М В и др, 1998, 2004, Киршин В А, 1998, Сургучева Л М, Бударков В А, 1998, Зинкин А С., 2003 и др.) привели к созданию лишь нескольких разрешенных медицинских и ветеринарных препаратов от острой лучевой болезни

Ведя целенаправленный поиск радиопротекторов в классе веществ микробного происхождения, сотрудниками ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» был разработан биорадиопротектор - микробный полиантиген, обеспечивающий пролонгированную (до 90 сут) защиту животных от летального облучения (Конюхов Г.В, Низамов РН, 2001) Однако, достаточный уровень защиты (70%) у иммунизированных указанным препаратом животных формируется не раньше, чем через 13-14 сут, что не удовлетворяет требованиям ветеринарной науки и практики Одним из перспективных направлений поиска новых средств для экстренной профилактики лучевой болезни является использование пробиотических бактерий, обладающих широким спектром действия, включая цитокининдуцирующую, антирадикальную и антиинфекционную защиту, гемо-и иммунорегулирующую активность (Зинченко Е В , Панин А Н, 2000) По литератрным данным некоторые пробиотические бактерии (бификол, биоспорин), а также убитые культуры лактобацил, введенные однократно подкожно за несколько часов и суток до облучения, повышали выживаемость мышей на 60-80% (Бижанов Б Р., 1991; Степанов А В и др , 1997, Жолус Р Б и др, 1997, Будагов Р С и др, 1997), проявляя тем самым эффект «ранней (экстренной) иммунизации» При этом механизм радиозащитного эффекта пробиотиков, авторы связывают с индукцией ими цитокинов, осуществляющих регуляцию гемо-и иммунопоэза, однако эти исследования проведены только на лабораторных животных и при поражениях организма в дозах ЛД7о/зо

Учитывая изложенное, поиск биопротекторов среди веществ микробного происхождения, представляется актуальной проблемой ветеринарной радиобиологии.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований ^вилось изыскание радиозащитных средств среди веществ микробного происхождения (ВМП) В соответствии с целью и государственной темой «Разработка высокоэффективных лечебно - профилактических средств при радиационных поражениях с -х животных», были поставлены следующие задачи

1 Провести скрининг радиозащитных препаратов из класса ВМП в модельных опытах

2 Изучить радиозащитную активность отобранных пробиотических бактерии на лабораторных животных

3 Оценить радиозащитную активность отобранных пробиотиков на сельскохозяйственных животных.

1.3. Научная новизна. Впервые теоретически обоснована и практически подтверждена возможность повышения радиорезистентности организма путем применения облученного бифидумбактерина Впервые изучено радиозащитное действие бифидумбактерина на лабораторных и с -х. животных и показана возможность применения его с профилактической целью при острой лучевой болезни путем подкожного однократного введения препарата за 1-10 сут до летального облучения Для первичной экстренной оценки интерфероногенной активности индукторов синтеза медиатора отобрана оптимальная тест-система, обеспечивающая экстренное определение концентрации интерферона без использования вирусов

1.4. Теоретическая ценность работы. Полученные данные указывают на фундаментальное значение состояния цитокиновой системы, участвующей в регуляции процессов гемопоэза и иммуногенеза, претерпевающих значительный дисбаланс при радиационном поражении и возможность защиты системы иммуногемопоэза при ОЛБ с помощью индукторов геморегуляторных

цитокинов и интерферона Выбранная модель оценки индукторов интерферона может быть использована для направленного поиска радиозащитных средств из различных классов

1.5. Практическая значимость работы определяется тем, что на основании проведенных исследований предложен для внедрения в ветеринарную практику биологический радиопротектор - бифидумбактерин для профилактики острой лучевой болезни По результатам исследований разработаны «Методические рекомендации по получению и применению облученного бифидумбактерина для экстренной профилактики острой лучевой болезни животных».

1.6. Основные положения диссертации, выносимые на защиту: коррелятивная зависимость между интерфероногенной и

радиозащитной активностью;

- бифидумбактерин - индуктор медиатора межклеточного взаимодействия - интерферона,

радиопротекторная эффективность бифидумбактерина при острой лучевой болезни животных.

1.7. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных научных сессиях ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2003-2006 гг, на Всероссийских научно-производственных и практических конференциях (г. Казань, 2004- 2005 гг, Воронеж, 2005г)

Результаты основных этапов работы подтверждены внутрилабораторными комиссионными испытаниями с положительной оценкой

1.8. Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в 6 научных работах, которые отражают содержание диссертации, в т ч в рекомендованных ВАК РФ «Ученых записках КГАВМ им. НЭ Баумана», а также опубликованы в научно-производственном журнале «Ветеринарный врач» (г Казань, 2005 г)

1.9. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 136 страницах компьютерного текста, содержит 22 таблицы и включает- общую характеристику работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения Список литературы включает 224 библиографических, источников, в т.ч 67 зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в отделе радиобиологии ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных»

В экспериментальных комплексных исследованиях были использованы - Подопытные животные' 483 белых мышей живой массой 18-20 г, 260 белых крыс живой массой 180-200 г, 48 морских свинок живой массой 280-350 г, 36 кроликов породы «Шиншилла» живой массой 3,5-4,5 кг, 13 овец породы «Прекос» средней живой массой 42,3 кг 18-24-месячного возраста;

- Штаммы микроорганизмов, пробиотики Е coli (шт ПЛ-6), полученные из лаборатории эпизоотологии, Вас. subtilis, штЗ из коллекции лаборатории штаммов центра и В bifidum коммерческий (шт.1) В качестве потенциальных радиопротекторов использовали 12 коммерческих препаратов: бификол, бифидумбактерин, биоспорин, бактисубтил, субтилакт, бактистатин, лактобактерин, лактобифид, споролакт, споробактерин, лактоферон, энтероспорин. Последний препарат разработан в отделе токсикологии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» и был любезно предоставлен проф. М Я Тремасовым

- Оборудование и реактивы. Для облучения микроорганизмов и пробиотиков использовали гамма-установку «Исследователь» с источником излучения 60Со. Для проведения физических исследований использовали стационарный спектрометр «Titertech Multiscan» (Англия), радиоспектрометр «Varian Е-12», встряхиватель марки «Zezon» (Венгрия), спектрометры «Hitachi» (Япония), «Sumal» (Швейцария), СФ-16, СФ-46 отечественного производства,

фотоколориметр КФК-2-4ХЛ, холодильники, термостаты, водяные бани, центрифуги, световой микроскоп, камеру Горяева и т.д

В микробиологических и иммунологических исследованиях применяли стандартные растворы, питательные среды, метаболиты, необходимые химические растворы, сыворотки и антисыворотки

Моделирование лучевой болезни у лабораторных и сельскохозяйственных животных осуществляли путем облучения их на гамма-установке «Пума» с источником излучения 137Сз Животных облучали однократно при мощности экспозиционной дозы излучения 3,13 10'5Кл/(кгс) в дозах соответственно 7,7 Гр (белые мыши), 9,0 Гр (белые крысы), 6,0 Гр (морские свинки), 11,0 Гр (кролики) и 6,0 Гр (овцы).

Влияние профилактического применения изучаемых препаратов на статус облученных животных оценивали по гематологическим показателям — количеству форменных элементов периферической крови (Кудрявцева А А и др, 1969), количеству клеток в различных популяциях лейкоцитов — Т- и В-лимфоциты, Т-хелперы, Т-супрессоры (Новиков ДК., 1987), а также количеству эритроцитов, ретикулоцитов, тромбоцитов и гемоглобина. Неспецифическую антиинфекционную резистентность изучали путем определения лизоцимной и бактерицидной активности сывороток крови, фагоцитарную активность нейтрофилов в НСТ-тесте, а также по количественному составу аутофлоры кишечника по Н Наепе1 е1 а1 (1956) в модификации Ахметзянова ФХ (1966) Пробы фекалий, отобранные в динамике, разводили физиологическим раствором 1.10000 и по 0,1 мл засевали на среду Эндо Число колониеобразующих единиц микробов (КОЕм) кишечной палочки подсчитывали после суточного выдерживания проб в термостате при 37°С. Иммунокоррегирующую активность потенциальных радиопротекторов оценивали по «экстренной» фазе регенерации тимуса — определенного количества теофиллинчувствительных (Е-РОК-ТФЧ) и

теофиллинрезистентных (Е-РОК-ТФР) клеток - аналогов Т-хелперов и Т-супрессоров методом розеткообразования с эритроцитами барана по

Рассказчиковой ЕС и др (1998), способность последних синтезировать медиаторы гемопоэза и иммуногенеза - интерферона in vitro и m vivo — по степени деструкции культивируемых клеток при добавлении полирибоинозиновой (поли И) и полирибоцитидиловой (поли Ц) кислот - по Stewart WD et al (1974)

В качестве имитационной модели радиационного поражения и радиозащиты in vitro использовали метод культивирования облученных лимфоцитов в специальных питательных средах, содержащих испытуемые радиопротекторы (Иванов И С, 2003). В качестве критерия радиозащитного эффекта использовали степень ингибирования апоптотической гибели клеток -мишеней радиационного поражения - облученных лимфоцитов от присутствия в среде культивирования потенциальных радиозащитных средств и зависимость этого эффекта от концентрации индуцированных испытуемыми радиопротекторами медиатора гемопоэза и иммуногенеза - интерферона (Соловьев В Д., Бектимиров Т А, 1981)

Полученный цифровой материал подвергали статистической обработке с использованием общепринятых параметрических методов, степень достоверности различий между сравниваемыми показателями определяли по t-критерию Стьюдента с применением пакета прикладных программ Microsoft Excel (2000)

Автор искренне благодарит д в н НС. Садыкова, д б н. H.A. Хисматуллину, кандидатов биологических наук, с нс. АС. Титова, НБ Тарасову, В П Шашкарова, к ф -м, аспиранта И Н. Нигматуллина, за оказанную помощь и плодотворное сотрудничество

2.2. Результаты исследований 2.2.1. Скрининг пробиотических препаратов по способности индуцировать ими интерферон Учитывая, что лимфоциты являются более доступным для исследования биологическим материалом, чем макрофаги, в модельных опытах in vitro по изучению цитокининдуцирующей активности испытуемых потенциальных

радиопротекторов - пробиотиков использовали лимфоциты периферической крови интактных лабораторных животных - кроликов

Для выделения лимфоцитов у животных проводили отбор крови внутривенной пункцией в объеме 15-25 мл, которую смешивали в соотношении 20 1 с 27% раствором ЭДТА, используемым в качестве антикоагулянта Лимфоциты выделяли центрифугированием на градиенте плотности фиколл -верографин при 700 % в течение 25 мин при комнатной температуре, предварительно осадив эритроциты 4,5% раствором декстрана Т-300 Мононуклеары, полученные с интерфазы, дважды отмывали фосфатно-солевым буфером, не содержащим ионы Са2+ и М&2+ Чистота выделения клеток варьировала от 23 до 95% Жизнеспособность клеток оценивали по включению флюоресцирующего красителя - 0,01-0,02%-ого эритрозина с последующей оценкой методом световой и флюороресцентной микроскопии

Клетки культивировали в питательной среде, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки с добавлением 20 мкг/мл гентамицина, 2 ммоль/л глутамина до конечной концентрации 8 105 кл/мл Предварительно изучали возможность влияния испытуемых средств на жизнеспособность клеток (лимфоцитов) и определяли оптимальные концентрации их, не оказывающих угнетающего действия на клетки в процессе совместного культивирования

Лимфоциты, полученные согласно описанной методике, инкубировали с испытуемыми (в различных концентрациях от 101 до 106 КОЕ/мл) пробиотиками в течение 4, 24, 48 ч Влияние испытуемых препаратов на лимфоциты в клеточной культуре оценивали по наличию или отсутствию окрашенных эозином лимфоцитов в контрольных и опытных образцах-мазков

Установлено, что внесение в инкубационную среду испытуемых препаратов в вышеуказанных концентрациях токсического влияния на лимфоциты не оказывало - увеличение количества нежизнеспособных (окрашенных флуоресцирующими красками) клеток в опытных мазках по сравнению с контролем не было выявлено

После установления отсутствия токсического влияния испытуемых пробиотиков на физиологические параметры лимфоцитов, в следующей серии опытов проводили отбор оптимальной тест-системы для индикации штерферона в среде культивирования лимфоцитов При этом учитывали (итературные данные о высокой радиозащитной роли медиаторов иммуногенеза (цитокинов, интерферона и тд) С целью оценки цитокининдуцирующей способности испытуемых пробиотиков, отбора наиболее активных индукторов интерфероногенеза из них, т е. для осуществления предварительного скрининга пробиотиков, необходимо было отобрать наиболее оптимальную тест-систему для индикации медиатора в исследуемых пробах in vitro и in vivo.

Поэтому, продолжая поиск объективных тест-систем для использования iix при скрининге радиопротекторов из класса пробиотиков in vitro, изучали возможность и целесообразность использования других приемлемых тест-систем При этом мы учитывали литературные данные о том, что за рубежом разработан оригинальный метод титрования мышиного интерферона (Stewart W и соавт, 1974) Он основан на том, что обработка клеток интерфероном повышает их чувствительность к токсическому действию полирибонуклеотидного комплекса (полирибоинозина — полиИ и лолирибоцитозина - полиЦ) При этом добавление индикаторного вируса не требуется, т. к степень деструкции клеток при постоянной дозе полиИ + полиЦ зависит от концентрации интерферона На основании повреждения клеток титр интерферона может быть определен уже через 6 ч после внесения полиИ + полиЦ По данным авторов метод усиления интерфероном токсического действия полиИ + полиЦ значительно чувствительнее метода титрования по подавлению цитопатического действия тест-вируса

Для определения интерферониндуцирующей способности испытуемых потенциальных радиопротекторов, лимфоциты после совместного культивирования с определенными концентрациями пробиотиков в течение 4,

24, 48 ч, центрифугировали при 1500 оборотов в течение 15 мин и супернатанты использовали в качестве интерферонсодержащих проб

Результаты определения интерферона методом титрации с помощью полиИ и полиЦ показали, что при совместном культивировании лимфоцитов с испытуемыми пробиотиками наблюдается увеличение содержания интерферона Пик интерферона регистрируется через 24 ч, затем количество экскретируемого медиатора снижается до 2-4 1о§2 ЕД/мл и остаётся на этом уровне 48 ч (срок наблюдения) При этом установлено, что наиболее высокой интерферониндуцирующей способностью обладали (в порядке убывания активности) бифидумбактерин, бификол, биоспорин, бактистатин, лактобактерин, субтилакт, бактисубтил, лактобифид, споролакт, споробактерин, лактоферон, энтероспорин

2.2.2. Оценка радиозащитной активности отобранных пробиотиков на белых мышах, белых крысах, морских свинках и кроликах

Бифидумбактерин в промышленных условиях получают путем выращивания бифидобактерий штамм 1 на казеиново-дрожжевой среде Препарат выпускают в полиэтиленовых пакетиках по 5 доз Одна доза препарата содержит 108 КОЕ живых бифидобактерий Перед применением одну дозу препарата растворяют в 5 мл кипяченой воды и применяют внутрь (перорально)

Учитывая то, что пробиотики применяют внутрь по 3-4 раза в день в течение недели, мы испытывали парентеральные пути применения отобранных пробиотиков, а именно, подкожный и внутрибрюшинный методы введения, которые предусмотрены при использовании вакцинных препаратов.

С этой целью препараты растворяли в стерильной воде согласно инструкциям применения пробиотиков Разводили их в концентрациях 103, 104, 105, 106, 107 и вводили животным в объемах 0,1; 0,15; 0,20, 0,25; 0,30, 0,35; 0,40, 0,45 и 0,50 мл подкожно и внутрибрюшинно

В 30 вариантах опытов (по 10 разведений на 3 вида пробиотиков) использовано 160 белых мышей (по 6 животных на вариант), которым испытуемые концентрации препаратов вводили однократно подкожно За животными вели наблюдения в течение 30 сут, изучая характер изменения общего состояния, клинико-гематологических показателей, выживаемости животных Установлено повышение уровня Т-лимфоцитов, пик которого отмечался на 5 сут, а для В-клеток - на 10 сут после введения пробиотиков Концентрация Т- и В-лимфоцитов возвратилась к исходному к 15 суткам

Заметные изменения произошли и в содержании субпопуляции Т-лимфоцитов На 7 сут отмечалось повышение концентрации Т-хелперов на 31%, что сопровождалось увеличением и их абсолютного количества

Результаты предварительных опытов по изучению влияния бифидобактерий на интактных животных при подкожном применении бифидумбактерина послужили основанием для испытания препарата на облученных в летальных дозах животных

В опытах использовали 40 белых мышей, 40 белых крыс, 24 морских ' винок и 24 кролика, которые были разделены на 4 группы Животным 1-й группы подкожно однократно вводили бифидумбактерин нативный в дозе 1,4 107 КОЕ в объеме 0,1 мл (белые мыши), 0,25 мл (белые крысы), 0,3 мл {морские свинки) и 1,0 мл (кролики), животным 2-й группы в тех же объёмах и в тех же дозах вводили облученный в дозе 14 Гр бифидумбактерин Животные 7-й и 8-й групп никакому воздействию не подвергались и они служили контролем облучения (3-я группа) и биологическим контролем (4-я фуппа)

Через 24 ч после однократного подкожного введения пробиотиков, животные 1—3-й групп были подвергнуты однократному внешнему гамма-облучению в дозе 7,7 Гр (белые мыши), 9,0 Гр (белые крысы), 6,0 Гр (морские свинки) и 11,0 Гр (кролики) (ЛДюо/зо) и в течение 30 сут после облучения за ними вели клиническое наблюдение, регистрируя павших и выживших.

Установлено, что предварительное облучение бифидумбактерина в дозе 14 Гр повышало радиозащитные свойства препарата и обеспечивало

выживаемость 80% животных при гибели всех контрольных (нерадиопрофилактированных). При использовании нативного варианта препарата, радиозащитный эффект был ниже и составил 66,6-70%

В опытах на кроликах, кроме изучения динамики гибели в течение 30 сут после облучения, определяли гематологический статус- содержание эритроцитов, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови, а также клеточность костного мозга, содержание эритроидных гранулоцитов и лимфоидных клеток. Кровь для гематологических исследований брали из ушной вены, а пунктат для исследований костного мозга - из проксимальной трети бедренной кости. Результаты гематологических исследований показали, что характерным гематологическим нарушением у облученных животных была панцитопения, выражавшаяся в снижении уровня циркулирующих лейкоцитов (в 5,3 раза), лимфоцитов (в 4,4 раза), нейтрофилов (в 5,6 раза), тромбоцитов (в 3,2 раза) и эритроцитов (в 1,16 раза) Эффект начал развиваться уже в 1-е сут и постепенно достиг максимальных значений к 3 сут и удерживался на этом уровне до конца опытов У животных, получавших пробиотик, снижение изученных показателей по всем срокам были значительно ниже, чем у не защищенных

Таким образом, результаты исследований, проведенных на 4 видах лабораторных животных (белые мыши, белые крысы, морские свинки и кролики) показали, что из испытанных пробиотиков наиболее высокой радиозащитной способностью обладает бифидумбактерин, однократное подкожное введение которого за 24 часа до летального облучения предохранял от радиационной гибели 70% белых мышей и белых крыс, 66,6% морских свинок и кроликов Радиационная обработка бифидумбактерина гамма-лучами в дозе 14 Гр оказывало радиомодифицирующий эффект на иммунопробиотик -использование биопрепарата в качестве радиозащитного средства в аналогичных условиях обеспечивало 80-83,3% при выживаемости летально облученных белых мышей, белых крыс, морских свинок и кроликов.

2.2.4. Формирование радиорезистентности у сельскохозяйственных животных на фоне применения бифидумбактерина

Для изучения механизма формирования радиорезистентности после применения отобранного пробиотика, были проведены 2 серии опытов на сельскохозяйственных животных, в качестве которых использовали 6 овец обоего пола породы «Прекос» 18-24 - месячного возраста средней живой массой 42,5 кг В первой серии опытов изучали влияние бифидумбактерина на интактных овец Животные были разделены на 2 группы (опытная -1 и контрольная - 2) по 3 овцы в каждой Животным 1-й группы подкожно однократно вводили облученный бифидумбактерин в дозе 5,0 см (108 КОЕ) Животные 2-й группы служили биологическим контролем. При оценке реактогенного действия препарата учитывали общую и местную реакцию организма животных, состояние системы крови и иммунитета, а также влияние препарата на факторы неспецифической резистентности организма

В ходе опытов на интактных животных выявлено, что однократное подкожное введение бифидумбактерина оказывало иммунотропный эффект, что сопровождалось усилением бластгрансформирующей активности лимфоцитов (Р<0,05) и способности иммунокомпетентных (В-лимфоцитов) клеток синтезировать иммуноглобулины класса О.

Учитывая, что одним из механизмов противолучевой защиты организма является усиление активности радиорезистентных макрофагов, моноцитов и нейтрофилов, ограничивающих экспансию условно-патогенной микрофлоры в условиях депрессии кроветворной и иммунной систем, нами были продолжены опыты по изучению влияния биопрепарата на некоторые показатели неспецифической резистентности организма интактных овец.

Установлено, что однократная подкожная инъекция бифидумбактерина интактным овцам оказывала стимулирующее действие на показатели неспецифической резистентности организма, повышая лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови, а также фагоцитарный индекс нейтрофилов Показано, что повышение показателей неспецифической

резистентности наступало на 10 сут после введения биопрепарата и максимальных значений они достигали к 20 дню, превышая контрольные Значения

Полученные в 1-й серии опытов на интактных овцах данные о том, что однократное подкожное введение иммунопробиотика оказывает иммунотропный и гемостимулирующий эффект, послужили основанием для испытания радиозащитной способности биопрепарата на облученных в летальных дозах животных.

Во второй серии опытов использовали 13 овец, которые были разделены на 3 группы по 5 животных в 1-й и 2-й группах и 3 овцы - в 3-й. Животным первой группы за 5 сут до облучения однократно подкожно вводили бифидумбактерин в объеме 5,0 см3, животным 2-й группы в тех же условиях вводили физиологический раствор (контроль облучения) Животным 3-й группы препараты не вводили и их не облучали (биологический контроль)

Через 5 сут после введения бифидумбактерина животных 1-й и 2-й групп подвергали тотальному гамма-облучению в дозе, вызывающей тяжелую (6,0 Гр, ЛДюо/зо) степень острой лучевой болезни Радиозащитный эффект бифидумбактерина изучали в динамике по изменению общего состояния, температуры тела, выживаемости, средней продолжительности жизни, содержанию форменных элементов периферической крови, уровню гемоглобина, содержанию лучевых антигенов - радиотоксинов, состоянию факторов клеточного иммунитета (интерфероногенез, фагоцитоз, бактерицидность, лизоцимную активность сывороток, Т- и В- клеток, Т-хелперов, Т-супрессоров, соотношение Ть/Т5, общую численность лимфоцитов), состояние неспецифической антиинфекционной резистентности (иммунореактивность) по количественному составу аутомикрофлоры кожи.

Результаты опытов показали, что профилактическое применение бифидумбактерина за 5 сут до облучения оказывало существенное модифицирующее влияние как на течение острой лучевой болезни овец, так и на иммуно-гематологические показатели организма

Положительное влияние бифидумбактерина проявлялось, прежде всего, в снижении выраженности ОЛБ — лучевая болезнь тяжелой степени развивалась в 25% случаев, в то время как у контрольных облученных овец аналогичная картина поражения наблюдалась у всех животных.

Более благоприятное течение ОЛБ на фоне предварительного применения бифидумбактерина сопровождалось уменьшением геморрагического синдрома, что нашло отражение в степени угнетения кроветворения, а также в степени нарушения системы иммунитета. Наиболее характерным показателем иммунопатологии при этом являлся дисбаланс в Т-системе иммунитета, в частности, нарушение субпопуляционного соотношения ТУТ,,, который наблюдался только у облученных овец Профилактическое применение бифидумбактерина за 5 сут до летального облучения предотвращало нарушение субпопуляционного соотношения ТУТ5, способствуя, тем самым, сохранению функционирования Т-клеточной системы иммунитета

Использование в опытах иммунорадиопротектора бифидумбактерина оказывало защитное действие и на способность Т-лимфоцитов продуцировать медиатор межклеточного взаимодействия - интерферон.

С целью выявления нарушений в состоянии иммунопробиотической реактивности облученного организма и возможности коррегирующего влияния радиозащитного препарата на этот показатель, проводили микробиологические исследования характера изменений аутофлоры как индикатора общей резистетности макроорганизма

В соответствии с поставленной целью у интактных, облученных и радиопрофилактированных овец в динамике брали пробы фекалий и подвергали их микробиологическому анализу. При этом определяли общее число микробов, выраставших на посеве различных разведений фекалий на среду Эндо

Результаты микробиологических исследований показали, что предварительная иммунизация животных биопрепаратом ведет к

ингибированию усиленного размножения условно — патогенной микрофлоры в облученном организме, модифицируя течение и исход лучевой болезни.

Результаты проведенных нами исследований по изысканию радиозащитных средств из класса пробиотиков, изучению интерфероногенной и антиапоптогенной активности in vitro, а также радиопрофилактической эффективности препарата in vivo, были использованы при разработке «Методических рекомендации по получению и применению облученного бифидумбактерина для экстренной профилактики острой лучевой болезни животных»

ВЫВОДЫ

1 В результате скрининга 12 потенциальных радиозащитных средств из класса веществ микробного происхождения отобран бифидумбактерин для профилактики острой лучевой болезни

2 На культивируемых лимфоцитах периферической крови установлено, что внесение в инкубационную среду бифидобактерий и продуктов их метаболизма из расчета 104 м к/мл или (10-20 мкг/мл по сухому веществу) оказывает радиозащитный эффект, предохраняя от радиационной гибели 70% летально облученных клеток

3 Установлено, что наиболее оптимальным способом применения бифидумбактерина в качестве радиозащитного средства является парентеральный метод, при котором микроорганизмы значительнее быстрее метаболизируются макрофагами и все компоненты (бифидогенные факторы) препарата за более короткие сроки достигают клеток-мишеней гемо- и иммунопоэза

4 Однократное подкожное введение нативного или облученного вариантов бифидобактерина в составе среды выращивания в дозе 1,43 10б мк/кг за 1-11 сут до облучения, предохраняет 70-80% летально облученных лабораторных (белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов) и с х (овец) животных

5 Радиозащитный эффект биопрепарата проявляется в более легком течении острой лучевой болезни, меньшей выраженности панцитопении (в 1,13-1,21 раза против 2,7-4,9 раза в облученном контроле) и миелосупрессии (в 1,17-1,23 раза против 3,1-3,07 соответственно), предотвращения дисбаланса иммунорегуляторного индекса (ТУТ5=2,36 против 1,13 в контроле облучения), сохранении лизоцимной (0,36 ед против 0,19 у облученных) и бактерицидной (0,9 ед против 0,23 у облученных) активности, снижении количества условно-патогенных энтеробактерий (2,2 против 4,9 ^ у облученных) в кишечнике.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для профилактики острой лучевой болезни с -х животных (овец) предлагается пробиотик - радиобифидумбактерин, для подкожного применения в дозе 1,43 106мк/кг

Результаты исследований вошли в «Методические рекомендации по получению и применению облученного бифидумбактерина для экстренной профилактики острой лучевой болезни животных»

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Хафизов, А Ш Оценка радиозащитных свойств некоторых пробиотиков на облученных в летальных дозах ионизирующих излучений животных Материалы международного симпозиума /А Ш Хафизов, А С Титов / Казань -2005 -С 401-403

2 Низамов, Р Н Получение бактериального препарата и изучение его радиозащитных свойств Материалы Всеросс наун -практ. конф , посвященной 45-летию ФГНУ-ВНИВИ 14-15 апреля 2005г. /РН Низамов, Г В Конюхов, А С.Титов, Н Б.Тарасова, А.Ш Хафизов / - Казань. -2005. - С.203-206

3. Низамов, РН Пути создания радиозащитных средств на основе изучения молекулярно - биологических и патогенетических механизмов лучевого поражения организма /Р.Н.Низамов, Г В Конюхов, Л М Сургучева, А С Титов, А Ш Хафизов / Ветеринарный врач - Казань -2005. -№1. -С 35-40

4 Рожденствснскии, И К Биопрепарат на основе Е Coli - новое радиозащитное средство Материалы Всероссийской научн Конференции / И К Рожденственский, А С Титов, Р Н Низамов, Г Р Юсупова, А Ш Хафизов / -2006г - Казань -С 86-88

5 Хафизов, А III Радиопротективные свойства веществ микробного происхождения /А III Хафизов, Р Н Низамов, Г В Конюхов, И Н Нигматуллин // Ученые записки КГАВМ - Казань, 2006 -Т 187 -С 203-211

6 Нигматуллин, И Н Противолучевые терапевтические свойства индукторов цитокинов при поражении животных гамма-лучами в костномозговом диапазоне доз /И Н Нигматуллин, Р Н Низамов, Г В Кошохов, А Ш Хафизов / Ученые записки КГАВМ - Казань, 2006 -Т 187 -С 53-60

Хафизов Аират Шарафегдиновнч

ИЗЫСКАНИЕ РАДИОЗАЩИТНЫХ СРЕДСТВ ИЗ КЛАССА ВЕЩЕСТВ МИКРОБНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

03 00 01 - Радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань-2007

Подписано в печать 24 04 2007 Сдано в набор 25 04 2007 Заказ № 41

Формат 60x84/16 Гарнитура Times New Roman Уел печ л 1,25 Бумага офсегная Тираж 100 экз Отпечатано с оригинал-макета в типографии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 420075, г Казань-75, Научный городок-2

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Хафизов, Айрат Шарафетдинович

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Современное состояние проблемы пробиотиков и механизм их действия.

2.2. Применение бактериальных препаратов в качестве радиозащитных средств.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1 Материалы и методы исследований.

3.1.1. Материалы.

3.1.2. Методы исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Скрининг иммунопробиотических препаратов по способности индуцировать ими интерферон.

4.2. Выбор оптимального метода применения пробиотиков для изучения их радиозащитных свойств на животных.

4.2.1 Оценка радиозащитной активности отобранных пробиотиков на белых мышах.

4.3. Оценка радиозащитной активности отобранных пробиотиков на белых крысах.

4.3.1. Оценка радиозащитной активности отобранных пробиотиков на морских свинках и кроликах.

4.3.2. Изучение продолжительности радиорезистентности у животных на фоне применения бифидумбактерина.

4.3.3. Изучение формирования радиорезистентности у сельскохозяйственных животных на фоне применения бифидумбактерина.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

6. ВЫВОДЫ.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изыскание радиозащитных средств из класса веществ микробного происхождения"

1.1. Актуальность темы. Полувековые исследования в области разработки радиозащитных средств (Владимиров В.Г. и др., 1978,1989,1997; Васин М.В. и др., 1998, 2004; Киршин В.А., 1998; Сургучева Л.М., Бударков В.А., 1998; Зенкин А.С., 2003 и др.) привели к созданию лишь нескольких разрешенных медицинских и ветеринарных препаратов от острой лучевой болезни.

Ведя целенаправленный поиск радиопротекторов в классе веществ микробного происхождения, сотрудниками ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» был разработан биорадиопротектор - микробный полиантиген, обеспечивающий пролонгированную (до 90 сут) защиту животных от летального облучения (Конюхов Г.В., Низамов Р.Н., 2001). Однако, достаточный уровень защиты (70%) у иммунизированных указанным препаратом животных формируется не раньше, чем через 13-14 сут, что не удовлетворяет требованиям ветеринарной науки и практики. Одним из перспективных направлений поиска новых средств для экстренной профилактики лучевой болезни является использование пробиотических бактерий, обладающих широким спектром действия, включая цитокининдуцирующую, антирадикальную и антиинфекционную защиту, гемо- и иммунорегулирующую активность (Зинченко Е.В., Панин А.Н., 2000). По литератрным данным некоторые пробиотические бактерии (бификол, биоспорин), а также убитые культуры лактобацилл, введенные однократно подкожно за несколько часов и суток до облучения, повышали выживаемость мышей на 60-80% (Бижанов Б.Р., 1991; Степанов А.В. и др., 1997; Жолус Р.Б. и др., 1997; Будагов Р.С. и др., 1997), проявляя тем самым эффект «ранней (экстренной) иммунизации». При этом механизм радиозащитного эффекта пробиотиков авторы связывают с индукцией ими цитокинов, осуществляющих регуляцию гемо-и иммунопоэза, однако эти исследования проведены только на лабораторных животных и при поражениях организма в дозах ЛД70/30.

Учитывая изложенное, поиск биопротекторов среди веществ микробного происхождения, представляется актуальной проблемой ветеринарной радиобиологии.

1.2. Цель и задачи исследований.

Целью настоящих исследований явилось изыскание радиозащитных средств среди веществ микробного происхождения (ВМП). В соответствии с целью и государственной темой «Разработка высокоэффективных лечебно -профилактических средств при радиационных поражениях с.-х. животных», были поставлены следующие задачи:

1. Провести скрининг радиозащитных препаратов в модельных опытах.

2. Изучить радиозащитную активность отобранных пробиотиков на лабораторных животных.

3. Оценить радиозащитную активность отобранных пробиотиков на сельскохозяйственных животных.

Работа выполнена в соответствии с тематическим планом федерального центра «Разработка высокоэффективных лечебно -профилактических средств при радиационных поражениях с.-х. животных», № госрегистрации 01990005332.

1.3. Научная новизна. Впервые теоретически обоснована и практически подтверждена возможность повышения радиорезистентности организма путём применения облученного бифидумбактерина. Впервые изучено радиозащитное действие бифидумбактерина на лабораторных и с.-х. животных и показана возможность применения его с профилактической целью при острой лучевой болезни путём подкожного однократного введения препарата за 1-10 сут до летального облучения. Для первичной экстренной оценки интерфероногенной активности индукторов синтеза медиатора отобрана оптимальная тест-система, обеспечивающая экстренное определение концентрации интерферона без использования вирусов.

1.4. Теоретическая ценность работы. Полученные данные указывают на фундаментальное значение состояния цитокиновой системы, участвующей в регуляции процессов гемопоэза и иммуногенеза, претерпевающих значительный дисбаланс при радиационном поражении и возможность защиты системы иммуногемопоэза при ОЛБ с помощью индукторов геморегуляторных цитокинов и интерферона. Выбранная модель оценки индукторов интерферона может быть использована для направленного поиска радиозащитных средств из различных классов.

1.5. Практическая значимость работы определяется тем, что на основании проведённых исследований предложен для внедрения в ветеринарную практику биологический радиопротектор - бифидумбактерин для профилактики острой лучевой болезни. По результатам исследований разработаны «Методические рекомендации по получению и применению облученного бифидумбактерина для экстренной профилактики острой лучевой болезни животных».

1.6. Основные положения, выносимые на защиту: корреляция между интерфероногенной и радиозащитной активностью; бифидумбактерин - индуктор медиатора межклеточного взаимодействия - интерферона;

- радиопротекторная эффективность бифидумбактерина при острой лучевой болезни животных.

1.7. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных научных сессиях учёного совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2003-2006 гг., на Всероссийских научно-производственных и практических конференциях (г. Казань, 20042005 гг., Воронеж, 2005г.), а также опубликованы в научно-производственном журнале «Ветеринарный врач» (г. Казань, 2005 г.).

Результаты основных этапов работы подтверждены внутрилабораторными комиссионными испытаниями с положительной оценкой.

1.8. Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в 6 научных работах, которые отражают содержание диссертации, в т.ч. в рекомендованных ВАК РФ «Учёных записках КГАВМ им. Н.Э. Баумана», а также опубликованы в научно-производственном журнале «Ветеринарный врач» (г. Казань, 2005 г.).

1.9. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах компьютерного текста, содержит 22 таблицы и включает общую характеристику работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы и практические предложения. Список литературы включает 224 библиографических источников, в т.ч. 67 -зарубежных авторов.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Хафизов, Айрат Шарафетдинович

6. ВЫВОДЫ

1. В результате скрининга 12 потенциальных радиозащитных средств из класса веществ микробного происхождения отобран бифидумбактерин для профилактики острой лучевой болезни.

2. На культивируемых лимфоцитах периферической крови установлено, что внесение в инкубационную среду бифидобактерий и продуктов их метаболизма из расчета 104 м.к./мл или (10-20 мкг/мл по сухому веществу) оказывает радиозащитный эффект, предохраняя от радиационной гибели 70% летально облученных клеток.

3. Установлено, что наиболее оптимальным способом применения бифидумбактерина в качестве радиозащитного средства является парентеральный метод, при котором микроорганизмы значительнее быстрее метаболизируются макрофагами и все компоненты (бифидогенные факторы) препарата за более короткие сроки достигают клеток-мишеней гемо- и иммунопоэза.

4. Однократное подкожное введение нативного или облученного вариантов бифидумбактерина в составе среды выращивания в дозе 1,43*106 КОЕ/кг за 1-11 сут до облучения, предохраняет 70-80% летально облученных лабораторных (белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов) и с.х. (овец) животных.

5. Радиозащитный эффект биопрепарата проявляется в более легком течении острой лучевой болезни, меньшей выраженности панцитопении (в 1,13-1,21 раза против 2,7-4,9 раза в облученном контроле) и миелосупрессии (в 1,17-1,23 раза против 3,1-3,07 соответственно), предотвращения дисбаланса иммунорегуляторного индекса (Th/Ts=2,36 против 1,13 в контроле облучения), сохранении лизоцимной (0,36 ед. против 0,19 у облученных) и бактерицидной (0,9 ед. против 0,23 у облученных) активности, снижении количества условно-патогенных энтеробактерий (2,2 lg КОЕ против 4,9 lg у облученных) в кишечнике.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для профилактики острой лучевой болезни с.-х. животных (овец) предлагается пробиотик - радиобифидумбактерин, для подкожного применения в дозе 1,43-106 м.к./кг.

Результаты исследований вошли в «Методические рекомендации по получению и применению облученного бифидумбактерина для экстренной профилактики острой лучевой болезни животных».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Хафизов, Айрат Шарафетдинович, Казань

1. Авербах, М.М. Показатели продукции интерлейкинов 1, 2 и 4 и титры специфических антител у мышей с оппозитной чувствительностью к стафилококковой инфекции /М.М.Авербах, В.Ф.Салов, С.И.Агальцова / ЖМЭИ. 1996. - Вып. 2. -С. 79-81.

2. Андрианова, И.Е. Влияние дрожжевого полисахарида маннака на кроветворение интактных мышей /Радиобиология. -1976. -Т. 16. -№5. -С. 703-706.

3. Андрианова, И.Е. Влияние иммуномодулятора глюкозаминил-мурамилдипептида на кроветворение мышей с экспериментальной цитопенией /И.ЕАндрианова, Г.И.Филимонова, Т.М.Андронова /Радиобиология. -1992. -Т. 32. -Вып. 4. -С. 566-570.

4. Андрущенко, В.Н. Клиническое применение зимозана и изучение механизма его действия /В.Н.Андрущенко, Ю.Ю.Преображенский /Рига: Рижск. мед. ин-т. -1982. -С. 145-148.

5. Андрущенко, В.Н. Тез. докл. X науч. конф. "Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях" /В.Н.Андрущенко, К.С.Чертков, Т.А.Нестерова СПб., -1992.-С. 3-4.

6. Андрущенко, В.Н. Противолучевое действие веществ микробного происхождения /В.Н.Андрущенко, А.А.Иванов, В.Н.Мальцев /Радиац. биол. Радиоэкол. 1996. - Т. 36. - Вып. 2. - С. 195-208.

7. Ахметзянов, Ф.Х. Микрофлора желудочно-кишечного тракта свиней в норме и при некоторых заболеваниях. -Казань. -1996. 279с.

8. Банникова, Л.А. Микробиологические основы молочного производства /Л.А.Банникова, Н.С.Королева, В.Ф.Семенихина/-М., 1987.

9. Барановский, А.Ю. Дисбактериозы и дисбиоз кишечника /А.Ю. Барановский, Э.А.Кондрашина /- СПб., -2004.

10. Ю.Бисенбина, Г.Ж. Влияние лечебно профилактической иммунокоррекции на динамику иммунологических нарушений у ликвидаторов последствийаварий на ЧАЭС /Г.Ж.Бисенбина, С.Б. Калимолдаев / Тез. докл. 4-го съезда по рад. иссл. М. - 2001 - Т. 1. - 275с.

11. Бижанов, Б.Р. Состояние Т- и В-системы иммунитета при острой лучевой болезни овец /Дисс. канд. биол. наук. -М. 1991. - 108с.

12. Блохина, И.Н. Дисбактериозы /И.Н.Блохина, В.Г.Дорофейчук /-Л., Медицина. -1979. 176с.

13. Бляхер, М.С. Характер влияния биоспорина на некоторые показатели иммунитета /М.СБляхер, Т.К.Лопатина, ИМ.Федорова /Проблемы инфекционных болезней. Сб. статей, посвящ. 100-летию со дня рождения Г.Н. Габрического. М., -2004. - С.23-27.

14. Бойко, В.Н. Исследование терапевтической эффективности иммуномодуляторов в качестве средств раннего лечения острой лучевой болезни /В.Н.Бойко, Н.Г.Чигарева /Сб. тезисов Всесоюз. научн. конф., М., -1991.-С. 155-156.

15. Бондаренко, В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры /В.М.Бондаренко, В.Г.Петровская /Вестник РАМН. -1997. №3. - С.7-10.

16. Будагов, Р.С. Биопрепарат на основе Lactobacillus Acidophilus новое средство раннего лечения комбинированных радиационных -термических поражений /Р.С.Будагов, Л.П.Ульянова, В.В.Поспелова /Радиобиология. -1997. -Т.37. -№5. -743с.

17. Будагов, Р.С. Изучение роли интерлейкина-6 в патогенезе комбинированных радиационно-термических поражений /Р.С.Будагов, Л.П.Ульянова /Радиац. биол. Радиоэкол. -2004. Т. 44. - № 4. - С. 398-402.

18. Васильева, Г.Н. Сравнительная оценка цитокининдуцирующей активности исходных и модифицированного липополисахарида V. Pestis

19. Г.Н.Васильева, Т.Д.Ермоненко, Н.Н.Беспалова /ГИМЭИ. -1997. -Вып.З. -С.109-110.

20. Васин, М.В. Классификация средств профилактики лучевых поражений как формирование концептуального базиса современной радиационной фармакологии /Радиац. биол. Радиоэкол. 1999. - Т.39. - №2. - С. 212-222.

21. Вершигора, А.Е. клеточные и молекулярные основы местного иммунитета /А.Е.Вершигора, В.В.Овод /Успехи современной биологии. -1981. -Т. 91. -Вып. 3. -С. 393-405.

22. Владимиров, В.Г. Актуальные проблемы военной радиологии. М.: Воениздат. -1991. 152с.

23. Владимиров, В.Г. О патогенезе и ранней терапии острых лучевых поражений/Воен.-мед. журн. -1991. -№9. С. 25-27.

24. Воробьев, А.А. Дисбактериозы актуальная проблема медицины /А.А.Воробьев, Н.А.Абрамов, В.М.Бондаренко, Б.А.Шендеров /Вестник РАМН.- 1997. -№3.-С.4-7.

25. Воробьев, А.А. бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства, защитные функции /А.А.Воробьев, Е.А.Лыкова /Журн. микробиол. 1999. - №6. - С.192-195.

26. Гончаренко, М.С. Методика определения малонового диальдегида в сыворотке животных /М.С.Гончаренко, A.M. Латипова /Лабораторное дело.-1985.-№1.-С.60-61.

27. Гончарова, Г.И. Исследование радиопротективных свойств антигенов шигелл /Радиобиология. -1981. -Т.21. -№4. -С. 591-594.

28. Гончарова, Г.И. Микробная экология кишечника в норме и при патологии /Г.И.Гончарова, В.Г.Дорофейчук, А.З.Смолянская /Антибиотики и химиотерапия.- 1989.-34. -№6. -С.462-466.

29. Гончарова, Г.И. Бифидобактерии и их значение для организма человека /Г.И.Гончарова, А.М.Лянная, Л.П.Семенова /Химия, биохимические функции и применение пантотеновой кислоты. -Минск. -1977. -С. 33-34.

30. Гончарова, Г.И. Бифидофлора человека, ее нормализующее и защитные функции /ПИГончарова, Л.П.Семенова /Антибиотики и медицинская биотехнология. -1987. №3. -179с.

31. Гордеева, М.С. Действие полисахарида из бактерий брюшного тифа на стволовые кроветворные клетки /М.С.Гордеева, А.В.Извекова, М.А.Туманян /Бюл: эксперим. биологии и медицины. 1975. -Т. 79. -№ 3. -С. 66-68.

32. Горизонтов, П.Д. Проблема патогенеза острой лучевой болезни в патофизиологическом аспекте /Радиобиол. и рад. мед. М.: Медгиз. -1960.- 325с.

33. Гурьянова, В.А. Изыскание уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ) в тканях крыс после облучения /В.А.Гурьянова, Е.И.Трошин /Акт. пробл. ветеринарии и зоотехнии.: Матер, произв. конф. -Казань. -1996. 97с.

34. Гумеров, Н.К. Изучение интерферогенности вирусов /Автореф. дисс. канд. вет. наук. -Казань. -1968. 18с.

35. Гуценко, А.К. Противолучевое действие иммуноглобулинов при экспериментальной острой лучевой болезни /А.К.Гуценко, А.А.Иванов, Н.Н.Клемпарская /Противолуч. эфф. иммуноглобулинов. М.: Энергоиздат. - 1990.-С.22-40.

36. Гуськова, А.К. Лучевая болезнь человека /А.К.Гуськова, Г.Л.Байсоголов /- М.: Медицина. -1971.-384с.

37. Диковенко, Е.А. О влиянии бактериальных полисахаридов на гемопоэз при их введении после облучения /Е.А.Диковенко, Ж.В.Елистратова /Радиобиология. -1971. -Т. И. -Вып. 2. -С. 207-210.

38. Дуда, В.И. Радиозащитное действие спор некоторых анаэробных бактерийпри лучевом поражении животных /В .И.Дуда, К.А.Калунянц, Г.П.Гоенко /Радиобиология. -1980. -Т. 20. -Вып. 6. -С. 929-932.

39. Дуплищева, А.П. Влияние антигенов и продуктов их деградации на радиорезистентность облученных животных /А.ПДуплищева, Н.Г.Синилова, К.К.Иванов /Радиобиология. -1965. -Т. 5. -Вып. 2. -С. 243252.

40. Дуплищева, А.П. Радиорезистентность животных при введении полисахаридов О соматических антигенов бактерии кишечной группы /А.П.Дуплищева, К.К.Иванов /Радиобиол., радиотерапия. -1972. -Т. 13. -№1. -С. 103-112.

41. Дыгай, А.М. Роль лимфоцитов в регуляции гемопоэза в условиях лучевой болезни /Мед. радиология. -1984. -Т.29. -№3. -С. 64-70.

42. Емченко, Н.В. Влияние бактериальных препаратов на выживаемость облученных животных. /Н.В.Емченко, В.Н.Мальцев, К.К.Гуценко /Радиац. биология. Радиоэкология. 1994. - Т. 34. - Вып. 4-5. - С. 578-581.

43. Егоров, Н.С. Бактериоцины. Образование, свойства, применение /Н.С.Егоров, И.П.Баранова /Антибиотики и химиотерапия. 1999. - №6. -33с.

44. Ермолаев, З.В. Влияние пострадиационного применения продигиозана на выживаемость и систему крови облученных животных // Антибиотики. -1972. -Т. 17 -№6. -С. 517-522.

45. Ибрагимова, М.И. Исследование радиотоксинов в крови животных методом ЭПР /Совр. развитие магнитно-резонансной топографии и спектроскопии. Тез. докл. Междунар. семинара /М.И.Ибрагимова, В.ЮЛетров, Е.П.Жеглов /- Казань, -2003. С. 79-83.

46. Иваницкая, А.Ф. Об ослаблении радиационных поражений мышей при помощи Ви-антигена S. TYPHI и колибактерина /Докл. АН СССР. -1968. -Т. 182.-№3.-С. 701-705.

47. Иванов, А.А. Гипотеза анафилактоидного механизма первичной реакции на облучение /Радиация, микробиология и иммунология. М.: ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. -1977. - С. 26-27.

48. Иванов, А. А. Влияние радиации на систему иммунитета и иммунологические методы модификации радиорезистентности /Лучевое поражение / Под ред. проф. Ю.Б. Кудряшова. М.: Изд-во МГУ, -1987. -С. 154-161.

49. Иванов, А.А. Противолучевые эффекты иммуноглобулинов /А.А.Иванов, Н.Н.Клемпарская, Г.А.Шальнова / М.: Энергоатомиздат, -1990. - 176с.

50. Иванов, А.А. Иммунный статус и радиация /Сб. тез. науч. конф. М., -1991.-15с.

51. Иванов, А.А. Противолучевой защитный эффект грипозной вакцины /Иммунный статус человека и радиация: Тез. докл. Всесоюзн. научн. конф., Гомель, сентябрь 1991 /А.А.Иванов, А.М.Уланова / М., -1991. -158с.

52. Иванов, А.А. Противолучевые терапевтические свойства лейкинферона /А.А.Иванов, ВЛКузнецов /Радиац. биол. Радиоэкол. 1998. - т.38. -Вып.1.-С.62-70.

53. Иванов, И.С. Изыскание методов оценки и средств повышения устойчивости иммунокомпетентных клеток к радиоиндуцированному апоптозу: Автореф. канд. биол. наук. -Казань. -2003. -23с.

54. Карсонова, М.И. Иммуностимулирующая активность мурамилдипептида /М.И.Карсонова, Т.М.Андронова, Б.В.Пинегин/Журн. микробиол. 1999. - №3. - 105с.

55. Каулен, Д.Р. Влияние гуморальных факторов, Т-лимфоцитов и инфекционных антигенов на диффференцировку стволовых клеток и иммуногенез /Д.Р.Каулен, А.В.Санин /Итоги науки и техники. -Т. 10. Иммунология. М.: ВИНИТИ. -1982. -С. 54-79.

56. Квасников, Е.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. /Е.А.Квасников, О.А.Нестеренко /- М., -1975.

57. Клемедсон, К.И. Общая радиобиология. Биологическое действие излучений на взрослый организм /К.И.Клемедсон, А.Нельсон /Механизмы радиобиологического эффекта / Пер. с англ. под ред. А.В. Лебединского. -Т. 2.-М.: Госатомиздат, -1962.-С. 87-185.

58. Клемпарская, Н.Н. Вопросы индикации, иммунитета и аллергии при острой лучевой болезни /Н.Н.Клемпарская, О.Г.Алексеева, В.В.Петров, В.Ф.Сосова /Под. ред. Н.Н. Клемпарской. М., Медгиз, -1959.

59. Клемпарская, Н.Н. Биологическое действие клеточных структур нормальных и облученных кроликов /Н.Н.Клемпарская, Р.В.Петров, Л.И.Ильина /Мед. радиология. -1958. № 1. - С. 31-34.

60. Клемпарская, Н.Н. Антибактериальный иммунитет и радиорезистентность /Н.Н.Клемпарская, Н.В.Раева, В.Ф.Сосова/-М.: Медгиз, -1963. -78с.

61. Клемпарская, Н.Н. Повышение радиорезистентности организма к облучению путем предварительной иммунизации вакциной БЦЖ /Н.Н.Клемпарская, Н.В.Раева, И.Н.Усачева /Радиобиология. -1963. -Т. 3. -Вып. 4.- С. 557-561.

62. Клемпарская, Н.Н. Аллергия и радиация. М.: Медицина, -1966. -239с.

63. Клемпарская, Н.Н. Нормальные аутоантитела как радиозащитные факторы /Н.Н.Клемпарская, Г.А.Шальнова / М.: Атомиздат, -1978. -132с.

64. Клемпарская, Н.Н. Аутосенсибилизация облученного организма /

65. Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни // Под ред. Н.Н. Клемпарской. -М.: Энергоиздат, -1981.-С. 5-14.

66. Клемпарская, Н.Н. Нормальные аутоантитела и специфический иммуногенез /Журн. эпидемиол., микробиол., иммунолог. 1982. - Т. 26. -№ 4.-С. 426-431.

67. Коваленко, Н.К. Бактериоциногенная и лизоцимсинтезирующая активность молочно кислых бактерии /Журн. микробиол. 1999. - №6. -42с.

68. Конопляников, А.Г. Стволовые клетки самообновляющихся систем как детерминанты выживаемости животных в острый период поражения /Итоги науки и техники/ ВИНИТИ. Радиац. биология. -1980. -Т.З. -С. 5-38.

69. Копылов, В.А. Проблема радиотоксинов /В.А.Копылов, А.М.Кузин, А.ИМедведев /Биофизика сложных систем и радиационных нарушений. -М.: Наука,-1977.-С. 176-188.

70. Коршунов, В.М. Коррекция дисбиотических нарушений вагинальной микрофлоры с помощью препарата из высокочувствительных лактобактерии /В.М.Коршунов, Л.И.Кафарская, Н.Н.Володин /Журн. микробиол. 1990. - №7. - С.17-19.

71. Коршунов, В.М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника /Журнал микробиология. -1995. №3. - С.48-55.

72. Коршунов, В.М. Характеристика биологических препаратов и пищевых добавок для функционального питания и коррекции микрофлоры кишечника /В.М.Коршунов, Б.А.Ефимов, А.П.Пикина /Журн. микробиол. -2005. №3. - С.86-91.

73. Кругликов, В.Д. Возможность приживления Lactobacillus acidophilus в кишечнике белых мышей на фоне бактериальной терапии / В.Д. Кругликов, Р.И.Цураева, И.В.Рыжиков /Журн. микробиол. 1997. - №1. -С.67-69

74. Крузе, X. Метод ЕН-розеток. Иммунологические методы /Х.Крузе, Г.Эггере / пер. с англ. Медицина, -1987. - С. 269-271.

75. Кудрявцева, А.А. Состав, свойства крови и костного мозга у здоровых лабораторных животных /ААКудрявцева, ЛЛКудрявцева, Т.И.Привольнов / -М. -1969. -С.16-17.

76. Кудрявцев, В.А. Влияние живых культур Bacillus subtilis на неспецифическую резистентность организма /В.А.Кудрявцев, Л.А.Сафронова, А.И.Осадчая /Микробиол. журн. 1996. - №2. - С.46-55.

77. Кудряшов, Ю.Б. Современные проблемы противолучевой химической защиты организмов /Ю.Б.Кудряшов, Е.Н.Гончаренко /Рад. биол. Радиоэкол. 1998. - Т. 39. - № 3. - С. 197-211.

78. Кузнецова, Г.Г. Результаты применения бифидумбактерина при лечении больных с хроническими заболеваниями толстой кишки /Г.Г.Кузнецова, Л.П.Семенова, Г.А.Григорьева /Сб. научн. работ. Москва. НИИЭ и М. -1975.-Т. 15. -С. 171-173.

79. Легеза, В.И. Новая классификация профилактических средств /В.И.Легеза, В.Г.Владимиров / Радиац. биол. Радиоэкол. -1998. Т. 38. - В. 3. - С. 416425.

80. Лепцнер, А.А. Лактофлора и колонизационная резистентность /А.А.Лепцнер, Х.П.Лепцнер, М.Э.Микельсаар /Антибиотики и медицинские биотехнологии.- 1987.- 32. -№3. С. 173-179.

81. Литусов, Н.В. Перспективы использования эубиотика «Биоспорин» в практике здравоохранения и военно-медицинской службы /Н.В.Литусов, И.А.Поберий / Екатеринбург. -1997.- С. 6-10.

82. Лопатина, Т.К. Иммуномодулирующее действие препаратов эубиотиков /Т.К.Лопатина, М.С. Бляхер, В.Н.Николаенко /Вестник РАМН. -1997. -№3. - С.30-34.

83. Лукашин, Б.П. Противолучевая эффективность гепарина в сверхмалых дозах /Б.П.Лукашин, В.Г.Улитин /Тез. докл. 4-го съезда по рад. иссл. М. -2003-Т. 2.-428с.

84. Мальцев, В.Н. Радиация и вакцинация /В.Н.Мальцев, О.В.Смирнова, В.А.Стрельников, Л.И.Муравьева / М.: Медицина, -1976. -156с.

85. Мальцев, В.Н. Бактериотерапия острой лучевой болезни /В.Н.Мальцев,

86. B.М.Коршунов, В.А.Стрельников, Т.Б.Иконникова /Радиобиология. -1978. -Т. 18. -Вып. 5. -С. 757-760.

87. Мальцев, В.Н. Количественные закономерности радиационной иммунологии. -М.: Энергоатомиздат. -1983. -217с.

88. Мальцев, В.Н. Количественные закономерности радиационной иммунологии. М.: Энерргоиздат. -1983. - 137с.

89. Мальцев, В.Н. Влияние бактериальных препаратов на выживаемость облученных животных /В.Н.Мальцев, К.К.Гуценко, Н.В.Емченко /Радиац. биология. Радиоэкология. -1994. -Т. 34. -Вып. 4-5. -С. 578-581.

90. Малычева, В.И. Особенности формирования противовирусной устойчивости при местном применении индуктора интерферона ридостина / В.ИМалычева, Е.Д.Даниленко, Г.М.Игнатьев /Вопросы вирусологии. -1997. -№3. -С.126-128.

91. Мухаметшин, И.Р. Изыскание средств профилактики радиационных поражений: Дисс. канд. биол. наук. Казань, -2002. - 177с.

92. Низамов, Р.Н. Изучение радиопротекторных свойств антигенов микробного происхождения /Р.Н.Низамов, Г.В.Конюхов, А.С.Титов, ИР.Мухаметшин, Н.Б.Тарасова /Тез. докл. IV съезда по рад. иссл. М., -2001.-Т.2. -457с.

93. Низамов, Р.Н. Методические рекомендации по оценке радиоиндуцированного апоптоза /Р.Н.Низамов, Е.Н.Трошин, Г.В.Конюхов, И.С.Иванов / -Казань, Ижевск. -2003.- 8с.

94. Николаева, И.В. Частота колонизации стафилококками кишечника у детей с явлениями дисбактериоза /И.В.Николаева, В.М.Бондаренко /Журн. микробиол. 2004. - №1.- 17с.

95. Новиков, Д.К. Справочник по клинической иммунологии и аллергологии. -Минск: «Беларусь». -1987. -223с.

96. Олейник, С.А. Фармакологическая защита личного состава, задействованного на мероприятиях по ликвидации последствий ядерных аварий /Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. Пущино. -1997. - Т. 2. - 202с.

97. Паласиоз, Р. Определение активности интерлейкинов-1, 2, 3 /Иммунологические методы исследований /Под ред. И.Лефковитса, Б. Перниса: М.: Мир, -1988. - С. 269-314.

98. Пелевина, И.И. Выживаемость облученных клеток млекопитающих и репарация ДНК /И.И.Пелевина, А.С.Саенко, В.Я.Готлиб, Б.И.Сынэыныс / М.: Энергоатомиздат, -1985. -120с.

99. Петров, Р.В. Иммунология острого лучевого поражения. М.: Госатомиздат, -1962. - 426с.

100. Петров, Р.В. Костномозговые клетки-супрессоры (В-супрессоры) /Р.В.Петров, Р.М.Хаитов /Итоги науки и техники. -Т. 10. Иммунология. М.: ВИНИТИ, -1982. 6-30с.

101. Петрушева, Е.В. Микроэкологические нарушения при экспериментальном дисбактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина: Автореф. дисс. канд. биол. наук. Волгоград. -2006. -23с.

102. Пинегин, В.Н. Дисбактериозы кишечника /В.Н.Пинегин, В.Н.Мальцев, В.М.Коршунов / М.: Медицина, -1984. - 143с.

103. Петровская, В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии /В.Г.Петровская, О.П.Марко / М., Медицина, -1976. - 231с.

104. Покровская, М.П. Антагонистическая активность кишечной палочки (штамм М-17) и бифидобактерии (штамм-1) по отношению к холерным эмбрионам Эль-Тор in vitro /М.П.Покровская, Ф.В.Эпштейн-Литвак, Ф.ЛБильшанская/Микробиология. -1972. -№10. -С. 54-59.

105. Равилов, А.З. Способ лечения радиационных поражений организма и способ получения препарата для его осуществления /А.З.Равилов, В.А.Киршин, Р.Н.Низамов /Патент РФ № 2169572 от 27.06.2001.

106. Равилов, А.З. Способ специфической профилактики радиационных поражений организма /А.З.Равилов, Р.Н.Низамов, Г.В.Конюхов /Патент РФ № 2226160. Бюллетень №18,2003., Бюллетень №9,2004.

107. Рассказчикова, Е.С. Защитное действие лейкинферона при лучевом лечении онкологических больных /Е.С.Рассказчикова, В.П.Кузнецов, Л.И.Коробкова /Радиац. биол. Радиоэкология. -1998.-Т.38.-Вып.5.-С. 684688.

108. Рахимова, Н.Г. Комплексный биологический препарат бификол и его особенности /Сб. научн. работ. Москва. НИИЭ и М. -1975. Т. 15. - С. 113-116.

109. Резник, С.Р. Влияние перорального введения бактерии рода Bacillus на фагоцитарную активность лейкоцитов крови /С.Р.Резник, В.В.Смирнов, А.К.Волынец, В.А.Вьюницкая /Журн. микробиол. 1982. - 44, №4. - С.51-54.

110. Рыцай, Т. Реакция непрямой гемагглютинации для определения антигена /Бюлл. Польск. Акад. Наук. -1956. -Огд.2. -Т.4 -С.341-344.

111. Рябченко, Н.И. Использование модификаторов продукции оксида азота для защиты организма от лучевых повреждений и стрессовых воздействий /Н.И.Рябченко, А.Г.Конопляников, Б.П.Иванник, В.И.Рябченко,

112. А.Коноплянникова /Тез. докл. 4-го съезда по рад. иссл. М. - 2004 - Т.1. -433с.

113. Савельева, Р.А. О влиянии ионизирующего излучения на течение вакцинальной туляремии и напряженность иммунитета в эксперименте /Мед. радиология. -1960. -Т.5. -Вып.8. -С. 82-83.

114. Святухин, М.В. Влияние нативного декстрана и пирогенного полисахорида обыкновенного протея на выживаемость белых мышей после общего облучения /М.В.Святухин, В.М.Шилов, А.А.Бондарев /Бюл. эксперим, биологии и медицины. -1959. -Т. 47. -№ 5. -С. 72-74.

115. Семенец, Т.Н. Пострадиационное восстановление кроветворения у мышей под влиянием иммуномодулятора неогена /Т.Н.Семенец, О.В.Семина, В.И.Дейгин / Тез. докл. 4-го съезда по рад. иссл. М. - 2005 -Т. 1.-434с.

116. Семенов, В.В. Влияние Lactobacillus acidophilus «Solco» на иммунологические показатели тотально деконтоминированных мышей в условиях общей гнотобиологической изоляции /В.В.Семенов, Н.Н.Мальцев, В.М.Коршунов /Клин, микробиол. -1992. Т.2.- С. 12-14.

117. Сёмина, О.В. Синтетический D-пептид тимодепрессин защищает КОЕ-С от воздействия ионизирующей радиации /О.В.Сёмина, В.И.Дейгин, Т.Н.Семенец /Тез. докл. 4-го съезда по рад. иссл. М. - 2004 - Т. 1. - 435с.

118. Силедовкин, Г.Д. Патогенетические методы лечения гемобластозов и костномозгового синдрома острой лучевой болезни и крайне тяжелой степени: Автореф. дисс. докт. биол. наук. -М.: МЗРФ ИБФ. -1994. 35с.

119. Синельникова, Т.А. Репарация ДНК и антиоксидантная защита в репарационно дефектных клетках человека при действии у-радиации /Т.А.Синельникова, А.Н.Семечкина, Г.ДЗасухина /Радиац. биол. Радиоэкол. -2006. -Т.45. -№2. -С.145-148.

120. Соловьев, В.Д. Интерфероны в теории и практике медицины /В.Д.Соловьев, Т.А.Бектимиров / М., 1981. -399с.

121. Сорокулова, И.Б. Теоретическое обоснование и практика применения бактерии рода Bacillus для конструирования новых пробиотиков: Дисс. на соиск. канд. биол. наук. Киев. -1998. -156с.

122. Смирнов, В.В. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ /В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.А.Василевская / - Киев: Наукова думка, -1982. -321с.

123. Смирнов, В.В. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерии рода Bacillus /В.В.Смирнов, С.Р.Резник, В.А.Выоницкая /Журн. микробиол. 1993. -№4.-С.92-112.

124. Соколов, В.Е. Проблемы и задачи радиоэкологии животных /В.Е.Соколов, А.И.Ильенко /- М.: Наука, 1980. 256с.

125. Степанов, А.В. исследование радиомодифицирующих свойств препарата «Биоспорин» /А.В.Степанов, Н.В. Литусов, И.А.Поберий /Сб. матер, научно-практ. конф. Екатеринбург. - 1997. - С. 42-45.

126. Степанов, А.В. Применение биоспорина в сочетании со средствами специфической профилактики /А.В.Степанов, А.Ж.Василенко, О.П.Мисников /Научно-практ. конф. -Екатеринбург, -1997.-С.42-45.

127. Стрельников, В.А. О лечебном действии перорального введения культуры кишечной палочки при острой лучевой болезни /Радиобиология. -1974. -Т. 14. -Вып. 3. -С. 421-423.

128. Стрельников, Ю.Е. Сравнительное исследование биологических свойств ряда бактериальных полисахоридов /Ю.Е.Стрельников, Н.И.Либикова, Е.И.Малевский /Радиобиология. -1986. -Т. 26. -Вып. 3. -С. 323-328.

129. Суднов, A.M. Влияние предварительной иммунизации живыми вакцинами на течение и исход лучевой болезни у кроликов /Мед. радиол. -1963.-Т.8. №11.-С. 55-59.

130. Сыпин, В.Д. Методы выделения и идентификации Т-и В-лимфоцитов (Е-РОК и ЗСз РОК) и субпопуляции Т-лимфоцитов - Т-хелперов и Т-супрессоров в периферической крови овец: Методические рекомендации /В.Д.Сыпин, Н.И.Блинов, В.Г.Егоров / -М., -1990. -10с.

131. Талаш, М. Противолучевая эффективность индукторов интерфероногенеза /М.Талаш, О.Солгаи /Тез. докл. IX симпоз. По космической биологии и медицине. Будапешт. -1976. - С. 32-33.

132. Тараканов, Б.В. Механизм действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных /Ветеринария. 2000. -№1.-С.47-54.

133. Тараканов, Б.В. Новые биопрепараты для ветеринарии /Б.В.Тараканов, Т.А.Николичева /Ветеринария. -2005. -№7. -С. 45-50.

134. Терехов, И.А. Определение токсичности радиотоксинов по изминению кислотных эритрограмм /И.А.Терехов, И.И.Гительзон /Биофизика. 1957. - № 2. - С. 259-261.

135. Тлеулиева, Р.Т. Моноклональные антитела к стафилококковому энтеротоксину А и иммуноферментные тест-системы на их основе /Р.Т.Тлеулиева, С.А.Синенко, Н.Н.Беляев / ГИМЭИ. -1997. -Вып.З. -С.110-111.

136. Трембовля, С.И. Значение биологических препаратов в общем комплексе терапии острой дизентерии у детей /С.И.Трембовля, О.А.Коншина, М.ЕЛаперно /Сб. научн. Работ. Москва. НИИЭ и М. -1975. -Т. 15.-С. 169-171.

137. Туманян, М.А. Радиационная стериализация /М.А.Туманян, Д.А.Каушанский / М.: Атомиздат. -1974. - 302с.

138. Филиппов, В.А. Некоторые свойства бактериоцинов лактобацилл подрода Streptobacterium /Антибиотики. 1980. -№11. -837с.

139. Харечко, А.Г. Эубиотики для профилактики, лечения и реабилитации больных при инфекционных заболеваниях и дисбактериозах. Методические рекомендации /А.Г.Харечко, Л.П.Ларионов, Н.В.Литусов / -Екатеринбург, -1998. -15с.

140. Чертков, К.С. Лечение облученных морских свинок полисахоридом продигиозаном /К.С.Чертков, З.М.Мосина, В.П.Храмченкова /Радиобиология. -1976. -Т. 16. -Вып. 1. -С. 88-91.

141. Чертков, И.Л. Стволовая кроветворная клетка и ее микроокружение

142. И.Л.Чертков, О.А.Гуревич / М., - 1984. -236с.

143. Чигарева, Н.Г. Средства ранней патогенетической терапии радиационных поражений: проблемы перспективы /Н.Г.Чигарева, В.И.Легеза, И.Ш.Галлеев и др. /Тез. докл. IV съезда по радиац. иссл. М. -2001.-Т. 2. —426с.

144. Шальнова, Г.А. Сравнительная противолучевая эффективность нативного и облученного in vitro иммуноглобулина сыворотки крови лошадей /Г.А.Шальнова, Н.Н.Клемпарская, Н.Н.Добронравова /Радиобиол. 1984. - Т. 24. - Вып. 5. - С. 682-686.

145. Шаталов, Е.В. Сравнительная характеристика влияния некоторых иммуномодуляторов на показатели неспецифической защиты организма и структуру популяции возбудителей при смешанных инфекциях /Журн. микробиол. -1996. №3. -54с.

146. Шварцман, Я.С. Местный иммунитет /Я.С.Шварцман, Л.Б.Хазенсон -М.: Медицина, -1978. 224с.

147. Шевелев, А.С. Вакцинальная туляремийная инфекция у белых мышей в условиях лучевого поражения /Мед. Радиология. -1958, -Т.З. -№4. -С. 5056.

148. Шендеров, Б.А. Значение колонизационной резистентности в патогенезе инфекционных заболеваний /Иммунология инфекционного процесса. М., -1994. - С. 112-121.

149. Шендеров, Б.А. Нормальная микрофлора кишечника и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии /Антибиотики и медицинская биотехнология,- 1987.- №3.- С. 164-170.

150. Шендеров, Б.А. Пробиотики и функциональное питание /Б.А.Шендеров, Л.ПМаквелова, Ю.Б.Степанчук, И.Э.Скиба /Антибиотики и химиотерапия. -1997. №7. - С.30-34.

151. Щербаков, И.Т. Теоретические и практические проблемы гнотобиологии /И.Т.Щербаков, А.В.Новикова, И.Г.Фридовская М., Агропромиздат. -1986.

152. Эйдус, JI.X. Кислород в радиобиологии /Л.Х.Эйдус, Ю.Н.Корыстов -М.: Энергоатомиздат. -1984. -177с.

153. Эпштейн-Литвак, Р.В. Итоги 20-летнего изучения нарушенного биоценоза кишечника на его функциональную деятельность / Р.В.Эпштейн-Литвак, Ф.Л.Волыпанская / Сб. научн. трудов. Моск. НИИЭ и М., И. -1979.-Т.22.-С. 167-175.

154. Adams, M.R. Growth inhibition of food-born pathogens by lactic and acetic acids and their mixtures /M.R. Adams, C.J. Hall Ant. J. Food. Sci. Technol. -1988.-V.23.-P. 287-292.

155. Ainsworth, E. Effect of microbial antigens on irradiation mortality in mice / E. Ainsworth, H. Chase / Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -1959. -V.102.-P. 483488.

156. Ainsworth, E. The effect of Proteus morgani endotoxin on radiation mortality in mice / E. Ainsworth, M. Hatch /Rad. Res. -1960. -V.13. -№4. -P. 632-638.

157. Ainsworth, E. The effect of Pseudomonas pyrogen on survival of irradiated mice/E. Ainsworth, P. Forbes /Rad. Res. -1961. -V.14. -№6. -P. 767-774.

158. Ainsworth, E. Endotoxin protection in X-irradiated dogs / E. Ainsworth, F. Mitchell /Rad. Res. -1965. -V.25. -№1. -P.171.

159. Ainsworth, E. Radiobiolology Decreased Radiation Mortality in Dogs treated with Typholid-Paratyphoid Vaccine / E. Ainsworth, F. Mitchell /Nature. -1966. -V. 216. -№ 5033. -P. 321-323.

160. Ainsworth, E. Postirradiation leukocyte Patterrs in Mice and Dogs Treated with Endotoxin /Е. Ainsworth, F. Mitchell /Radiat. Res. -1968. -V. 33. -№ 2. -P. 325-336.

161. Alak, J.I.B. Effect of Lactobacillus reuteri on intestinal resistance to Cryptosporidium parvum infection in a murine model of aquired immunodeficiency syndrome /J.I.B.Alak, B.W.Wolf, E.G.Mdurvwa / J. Infect, deseases. -1997. -V.175. №1.-P. 218-221.

162. Ali, S. Characterization of diacetin B, a bacteriocin from Lactococcus lactis subsp lactis bv. diacetilactis UL 720 /S.Ali, C.Lacrpix /Can. J. Microbiol. -1995.-V.41.-№9.-P. 832-841.

163. Armstrong, D.G. Gut active growth promoters // Control and Manipulation of Animal Growth. Proceeding og the University of Nottergham 43rd Easter Scool. -1985.-P. 21-37.

164. Axelsson, L. Characterization and DNA homology of Lactobacillus strains isolated from pig intestine / L.Axelsson, S.Lindgren /J. Appl. Bacteriol. -1987,-V.62.-P. 433-440.

165. Axelsson, L. lactobacillus reuteri, a member of the gut bacterial flora. Studies of antagonism, metabolism and genetics / Tryck: SLU Repro, Uppsaia, -1990. Dissertacion.

166. Bach, J. Apperance of T-cell markers in Bore marrow Rosette Forming cells after incubation with Thymosin, a Thymic Hormone /Proc. Nat. Acad. Sci. USA.

167. Barrow, P A. The attachment of bacteria to the gastric epithelium of the pig and its importance of the intestine /P.A.Barrow, B.E.Brooker, R.Fuller/J. Appl. Bacteriol. -1980. -V.96.-P. 161-169.

168. Behling, U. Beneficial Effects of Endotoxins. N. Y.; L.: Pergamon Press, -1983. -P. 127-148.

169. Blazsek, J. Anterleukes and immunosuppressive factors regulatory system /J.Blazsek, J.Mathe/Biomed. et. pharmacother. -1983. -V.37.-№6. -P.258-265.

170. Bloksma, N. Effects of lactobacilli on parameters of non specific resistance of mice /N.Bloksma, H.Ettekoven, F.M.Hothuis /Med. Microbiol. Immun. -1981.-V.170.-P. 45-53.

171. Bohnhoff, M. Effect of streptomycin on susceptibility of the intestinal tract to experimental salmonella infection /M.Bohnhoff, B.L.Drane, C.P.Miller /Proc. Souc. Exp. Med. -1954.-V.8.-P. 132-137.

172. Brockett, M. Dietary components influence tissue associated lactobacilli in the mouse stomach / M.Brockett, G.W.Tannok /Can. J. Microbiol. -1981.-V.27.-P. 452-455.

173. Chirigos, M.A. Macrophage activation by lymphocyte mediators / M.A.Chirigos, C.Sinione /Mediators of Luflamation. -1993. -V. 2. -P. 5-10.

174. Cole, C.B. The effect of yogurt on the growth, lactose utilizing gut organisms and ^-glucuronidase activity of caecal contenst of a lactose - fed, lactasa - deficient animals /Food Nicrobiol. -1984.-V.1.-P. 217-222.

175. Collins, E.V. Production og hydrogen peroxide by Lactobacillus acidophilus / E.V.Collins, K.Aramaki /J. Dairy Sci. -1980.-V. 63.-P. 353-357.

176. Condon, S. Responses of lactic acid bacteria to oxygen /FEMS Microbiol. Rev. -1987.-V.46.-P. 269-280.

177. Corlett, Jr. pH and acidity / Jr.Corlett, M.N.Brown /Microbial Ecology of Food. N. J. Acad. Press. -1980.-P. 91-111.

178. Dubos, R.J. Staphylococci and infection immunity /Amer. J. Diuseases Children. -1963.-V.105.-P. 643-645.

179. Eliason, J. Thymocytes and the Selfrenewae capacity of hemopoetic stem cells /Ann. Immunoll. -1984. -V.135. -№2. -P. 263-265.

180. Firon, N. Carbohydrate bindings sites of mannose - specific fimbrial lectins of enterobacteria / N.Firon, I.Oftek, N.Sharon /Infect. Immun. -1984.-V.43.-P. 1088-1090.

181. Fuller, R. Probiotics /J. Appl. Bacterid. Symposium Supplment. -1986. 1S-7S.

182. Fuller, R. The attachment of bacteria to the squamous epithelial cells and its importance in the microecology of the small intestine /R.Fuller, B.E.Brooker /Microbian Adhesion to Surfaces. -N.Y. -1980.-P. 495-507.

183. Gabler, E. Der gezielte Schok als therapeutisches Mittel nach letaler Ganzkorperbestrahlung /E.Gabler, W.Stockal /Stralilentherapie. -1967. -V.133. -№1. -P. 117-125.

184. Goodman, J. Thymic lymphocytes and haemopoesis /J.Goodman, S.Shinpock/Ann. Immunol. -1984. -V.135. №2. -P. 268-272.

185. Impty, C.B. Competitive exlusion of salmonellas from the chiecaecum dosing a defined mixture of bacterial culture from the caecal microflora of an adult bird /C.B.Impty, G.C.Mead, S.M.George /J. Hyhyene. -1982.-V.89.-P. 479-490.

186. Ishisaki, A. Natural rubber serum that contains a special growth promoter for Bifidobacterium /Bioscei. Biotech. Biochem. -1994. -№9,56(6).-P. 1150-1151.

187. Jay, J.M. Antimicrobial properties of diacetil /Appl. Environ. Microbiol. -1982.-V.44.-P. 525-532.

188. John, W. Sissons Potential of Probiotic Organisms to Prevent Diarrhoea and Promote Digestion in Farm Animals A Review / J. Sci. Food Agric. -1989.-V.49.-P. 1-13.

189. Jonsson, E. The effect of perfonmance, health and faecal microflora of feeding Lactobacillus strains to neonatal calves /Е.Jonsson, I.Ollson /Swedish J. Agric. Res. -1985.-V.15.-P. 71-76.

190. Ledney, D. Protection induced byfacterial endotoxin aqainst whole body X-irradiation germfree and conventionale mice /D.Ledney, R. Wilson /Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. -1965. -V.l 18. -№4. -P.1062-1065.

191. Longland, A.C. Contribution on carbohydrate fermentation to energy balance in pigs /A.C.Longland, A.G.Low, W.H.Close /Proc. 4th Seminar on Digestive Physiology of the Pig. -1989.

192. Kandler, O. Regular, non-sporing gram-positive rods / O.Kandler, N.Weiss Лп Bergey's Manual of System Bacterid. -1986.-V.2.-P. 1208-1234.

193. Kato, I. Macrophage activation by Lactobacillus casei in mice /I.Kato, T.Yokokyra, M.Mutai /Microbiol. Immun. -1983.-V.27.-P.611-618.

194. Klaenhammer, T.R. Bacteriocins of lactic acid bacteria /Biochim. -1988.-V.70.-P. 337-349.

195. Krisrian, L. Purification and partial amino acid sequence of curvaticin FS47, a heat stable bacteriocin produced by Lactobacillus curvatus FS47 /L.Krisrian, M.Carvel and Peter /Appl. Envenroment. Microbiol. -1994.-V.60.№6.-P. 2191-2195.

196. Matsubaru, T. Monoclonal antibodies and enzyme immunoassay test systems on thes antibodies /Nippon Riusho. 2002 - V. 60. - № 3. - P.578-584.

197. Metha, A.M. Isolation and purification of an inhibitory protein from Lactobacillus acidophilus AC. /A.M.Metha, K.A.Patel, P.J.Dave /Microbios. -1983.-V.37.-P. 37-43.

198. Miller, B.R. A transient hypertensirivity to dietary antigens in the early weaned pig: a factor in the aetiology of post weaning diarrhea / B.R.Miller, A.Phillips /Proc. 3rd Int. Seminar on Digestive Physiology of the Pig. -1985.-P. 65-68.

199. Muralidhara, K.S. Effect of feeding lactobacilli on the coliform and lactobacilli flora of intestinal tissue and from piglets /K.S.Muralidhara, G.G.Sheggeby, P.R.EUicer/J. Food Protection. -1977.-V.40.-P. 288-295.

200. Neta, R. Interleukin is a radioprotector / R.Neta, S.Donches /J. Imm. -1986. - Vol. 46. - P. 4677-4684.

201. Perdigon, G. Systematic augmentation of the immune response in mice by feeding fermented milks with Lactobacillus casei and Lactobacillus acidophilus / G.Perdigon, M.E.N.Macias, S.Alvarez /Immunol. -1988.-V.63.-P. 17-23.

202. Perdigon, G. Effect of mixture of Lactobacillus casei and Lactobacillus acidophilus administred oraliy on the immune system in mice /G.Perdigon, M.E. Nader de Marcias, S.Alvarez /J. Food Prot. -1986.-V.49.-P. 986-989.

203. Pluznik, D. /Beneficial Effects of Endotoxins. N. Y.; L.: Pergamon Press, -1983. P. 124-128.

204. Pollmann, D.S. Influence of Lactobacillus acidophilus inoculum on gnotobitic and conventional pigs /D.S.Pollmann, D.M.Danielson /J. Anim. Sci. -1980.-V.51.-P. 629-637.

205. Ratcliffe, B. The effect of soya bean protein on intestinal morphology, absorption and enzyme activity in gnotobiotic pigs at three weeks of age /B.Ratcliffe, M.W.Smith, B.G.Miller, F.J.Bourne /Proc Nutr. Soc. -1987.-V.46.-P. 101A.

206. Reiter, B. The antibiotic of the lactoperoxidase thiocyanate-hydrogen peroxide system in the calf abomasums /B.Reiter, V.M.Marshall, S.M.Phillips /Res. Vet. Sci. -1980.-V.28.P. 116-122.

207. Roach, S. Indigenous bacteria that influence the number of Salmonella typhimurium in the spleen of intravenously challenged mice /S.Roach, G.W. Tannock/Can. J. Microbiol. -1980.-V.26.-P. 408-411.

208. Rusch, V. Die diagnostike Bedeutung der Stuhlflora /Mikrookol und Ther. 1977. -V.7. -P.62-79.

209. Rusch, V. Okologische Asperte der Dysbiosetherapie /Mikrookol und Ther. -1978. -V.8. -P. 18-31.

210. Satio, H. Protective and therapeutic efficacy of Lactobacillus casei against experimental murine infections due to Mycobacterium fortuitum complex /H.Satio, H.Tomioka, K.Nagashima /J. General Microbiol. -1987.-V.133.-P. 2843-2851.

211. Savaiano, D.A. Lactose malapsorption from yogurt, pastweurized yogurt, sweet acidophilus milk, and cultured milk in lactese deficient individuals /D. A. Savaiano, E.I.Abou, A. Anouar/Amer. J. Clin. Nurt. -1984.-V.40.-P. 1219-1223.

212. Smulders, F. J.M. Review: Lactic acido considerations in favour of its acceptance as a mean decontaminant /F.J.M.Smulders, P.Barendsen, J.G. van Logtestijn /J. Food Technol. -1986.-V. 21.-P, 419-436.

213. Stevenson, A. Radioprotective and hemopoetic effects of some lipopolysacharidos from Rhodospirillacsae species in mice /A.Stevenson, H. Monig /Experientia. -1981. -V.37. -№12. -P.1331-1332.

214. Stewart, W.D. Relationship of cytotoxicity and interferon inducing activity of poliriboinosinic acid poliribocytidylic homopolymers /W.D.Stewart, E. De Clercg /J.Gen. Virol. -1974. -V. 23.-P. 83-89.

215. Talon, R. Characterization on the inhibitory power of Lactobacillus on meat origin /R.Talon, J.Labadie, J.P.Larpent /Zentralb. Bacteriol., I. Abt. Orig. -1980. -V.B.I 70.-P. 133-142.

216. Tannock, G.M. The Normal Microflora New Concepts in Health Promotion // Mikrobiologinal Sciness.- 1988. V.5.

217. Toht, L. Die wirkung von Erytropoetin und Salmonella thypi-Endotoxin auf das Uberleben von besthralung Mausen /L.Toht, I.Jeher /Strahlentherapie. -1968. -V.136.-№3.-P. 360-364.

218. Wren, W.B. Probiotics. Fact or fiction // Large Animal Veterinarian. November December. -1987. - P. 28-30.

219. Zweiach, B. Resistance to whole body X-irradiation in rats made tolerant to bacterial endotoxins / B.Zweiach, E.Kivy-Rosenberg, N.Nageer /Am. J. Physiol. -1959. -V.59. -№6. -P. 1364-1370.