Изыскание радиозащитных средств из класса природных антиоксидантов

Юнусов, Ильнар Расимович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изыскание радиозащитных средств из класса природных антиоксидантов
ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Изыскание радиозащитных средств из класса природных антиоксидантов"

003467060

На правах рукописи

Юнусов Ильнар Расимович

ИЗЫСКАНИЕ РАД ИОЗАЩИТНЫХ СРЕДСТВ ИЗ КЛАССА ПРИРОДНЫХ АНТИОКСИДАНТОВ

03.00.01-Радиобиология 16.00.04 — Ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань-2009

003467060

Работа выполнена в-Федеральном государственном учреждении-«Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (ФГУ «ФЩРБ-ВНИВИ») г. Казань

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Низамов Рамзи Низамович

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор

Иванов Аркадий Васильевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Асланов Рашит Михайлович

доктор биологических наук, профессор Великанов Валериан Иванович

Ведущее учреяеденне: ФГОУ ВПО Ижевская государственная сельскохозяйственная академия

Защита диссертации состоится «_»_2009 г. в 10 ч на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (420075, г. Ка-зань-75, Научный городок-2, ФГУ «ФЩРБ-ВНИВИ»).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЩРБ-ВНИВИ» (г. Казань).

Автореферат разослан« » 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного

совета, кандидат ветеринарных наук, у

старший научный сотрудник В.И. Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ленных составляющих патогенеза ОЛБ является нарушение функции антиокси-дантной защиты (АОЗ) (Кудряшов Ю.Б., Гончаренко E.H., 1999; Лысенко Н.П. и др. 1999; Шатилов Н.В. и др., 2007), для коррекции которой предложены многокомпонентные смеси из апифитопродуктов (мед, прополис, фиточай из витаминных трав) (Бураев М.Э и др., 2005) и кормовая добавка «Вита-Форце» (Иванов A.B., Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., 2008).

зритроцитарно — тромбоцитарной массы, которая при изготовлении противорадиационного глобулина и сыворотки выбрасывалась как отход производства. Между тем известно, что эритроциты являются богатым источником антаокси-дантных ферментов (супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы), тиоловых антиоксидантов (SH-содержащих аминокислот: метионина, цистеина) и неферментных антиоксидантов (аскорбата, а - токоферола) (Костогорова С.А., 1999), а сочетанное применение эритроцитарно - тромбоцитарной массы с веществами микробного происхождения (например, антибиотиками), приводит к существенному повышению выживаемости летально облученных животных (Bums J., Evans С., 1988). Следовательно, создание многокомпонентной смеси из растительных и животных тканей и продуктов метаболизма микроорганизмов является теоретической основой для конструирования препарата - корректора функции АОЗ при радиационных поражениях, при которых РЗЭ сложных композиций связан с влиянием на организм не только одного, но и многих компонентов биологически активных веществ, находящихся подчас во взаимодополняющем или усиливающем взаимодействии, сбалансированных природой биогенных соединений (Кудряшов Ю.Б., Гончаренко E.H., 1999).

Однако эти исследования единичны и не вышли за рамки модельных опытов, что диктует необходимость и целесообразность углубленного изучения этой проблемы. Учитывая слабоизученность проблемы и отсутствие эффективных антиоксидантных препаратов - радиопротекторов из природного сырья, нами предприняты настоящие исследования.

1.2 Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований являлось изыскание радиозащитных средств из класса природных антиоксидантов. Исходя из цели, на разрешение были поставлены следующие задачи:

• провести скрининг потенциальных радиозащитных препаратов из класса веществ фитогенной, зоогенной и микробной природы по критерию стимуляции антиоксидантной активности их в in vitro тест-системе;

• составить многокомпонентную композицию на основе биологических ан-тиоксидантов;

• изучить влияние сконструированного препарата на организм;

• испытать радиозащитную эффективность препарата «Эра-ЖМ» на лабораторных и сельскохозяйственных животных.

1.3 Научная новизна. Впервые теоретически обоснована и практически подтверждена возможность Использования веществ фитогенной, зоогенной и микробной природы для конструирования многокомпонентного средства с целью коррекции системы антиоксидантной защиты при радиационном поражении организма. Показано, что для первичной оценки антирадикальной активности потенциальных антиоксидантов оптимальной является in vitro тест-система, обеспечивающая экзогенную генерацию супероксидных радикалов и ингибирование их в присутствии испытуемых препаратов. В опытах на лабораторных и с.-х. животных установлен высокий радиозащитный эффект сконструированного многокомпонентного средства «Эра-ЖМ», реализуемый по механизму перехвата и нейтрализации токсических продуктов модификации макромолекул и, блокируя тем самым, запуск радиоиндуцированного апоптоза.

Впервые установлена возможность конструирования модуля лечебно-профилактического надмолекулярного комплекса, состоящего из молекул экстрактивных веществ (витаминов, ферментов, флавоноидов и т.д.) и микрочастиц природного минерала-бентонита, для адресной доставки терапевтического (профилактического) агента к радиопоражаемым клеткам-мишеням и эффективной защиты их от радиационной гибели.

Научная новизна исследований подтверждена Патентом РФ № 2324361 от 20.05.2008г.

1.4 Практическая ценность работы определяется тем, что на основании проведенных исследований предложен для внедрения в ветеринарную практику биологический радиозащитный препарат для коррекции системы антиоксидантной защиты. По результатам исследований подготовлены «Методи-

ческие рекомендации по изготовлению и применению радиозащитного препарата на основе природных антиоксидантов».

1.5 Основные положения, выносимые на защиту.

• скрининг корректоров оксидативной модификации молекул, вызванной

' ионизирующей радиацией;

• разработка многокомпонентного растительно-животно-микробного средства с широким спектром фармакологической активности;

• коррекция системы антиоксидантной защиты организма при лучевой патологии.

1.6 Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных научных сессиях учёного совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2005-2008 гг., на научно-практических конференции молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦГРБ-ВНИВИ» (г. Казань, 2007—2008 г.), на Всероссийских научно-производственных и практических конференциях ФГУ ВПО «КГАВМ им Н.Э. Баумана (г. Казань, 2006-2007 г.), Российской научной конференции Воеппо-медицинской академии (Санкт-Петербург, 2008 г.), Междунар. науч.-практ. конф. (Воронеж, 2008 г.). Результаты основных этапов работы подтверждены внутрилабораторными комиссионными испытаниям с положительной оценкой.

1.7 Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в 8 научных работах, которые отражают содержание диссертации, в т.ч. 4-статьи в рекомендованных ВАК РФ изданиях «Учёных записках КГАВМ им. Н.Э. Баумана» (г. Казань, 2007-2008 г.), в журналах «Ветеринарный врач» (г. Казань, 2008 г.) и «Вестник военно-мед. Академии» (Санкт-Петербург, 2008 г.).

1.8 Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 148 страницах компьютерного текста, содержит 28 таблиц и включают общую характеристику работы, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, при-

ложения. Список литературы включает 241 библиографических источника, в т.ч. 77 -зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Диссертационная работа является разделом комплексной темы НИР ФГУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности животных» № государственной регистрации — 01200202604. Работа выполнена в 2005-2008 гг. отделе радиобиологии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»

2.1.1 Материалы

В экспериментальных исследованиях были использованы:

Подопытные животные 250 белых мышей живой массой 18 - 20 г, 316 белых крыс живой массой 180 - 200 г, 10 морских свинок, 13 овец породы «Прекос» средней живой массой 35 кг 18 - 24 -месячного возраста. Кормление животных осуществляли в соответствии с зоотехническими требованиями. На протяжении всего периода исследования опытные и контрольные животные находились в одинаковых условиях.

Штаммы микроорганизмов: Е. coli (шт. ПЛ - 6), Вас. subtilis (шт. 3) из коллекции лаборатории штаммов центра и В. bifidum - коммерческий (шт.1).

Фитозоомикробные препаратов: 61 вид биологического материала из растительного (56), животного (2), животно-растительного (1) и микробного (2) происхождения.

Оборудование и реактивы. Для моделирования лучевой болезни у лабораторных и с.-х. животных использовали гамма установку «Пума» с источником излучения 137Cs, при мощности экспозиционной дозы излучения (3,13*10"3 Кл/кг*С), гамма-установку «Исследователь» с источником излучения 60Со при мощности дозы 1,24*10"2 (Кл/кг*с), спектрофотометр СФ-46 отечественного производства, колориметр фотоэлектрический концентрационный, рефрактометр ИРФ-22, магнитные мешалки, а также холодильники, термостаты, водяные бани, центрифуги и т.д.

Для гематологических, биохимических, токсикологических, иммунологических и микробиологических исследований применяли стандартные растворы, питательные среды необходимые химические реактивы. В качестве контрольного (стандартного) антиоксиданта использовали коммерческий препарат «Мексидол», в качестве контрольного радозащитного препарата - противорадиационный лечебный глобулин (ПР ЛГ), в качестве стандартных фитопрепаратов для сочетанного применения их с ПРЛГ-препараты «Эраконд», «Эра-Н», разработанные проф. Ф.А. Сунагатуллиным и кормовую добавку «Вита-Форце», разработанную проф. A.B. Ивановым и др.

2.1.2 Методы исследований

Получение, подготовку и обработку технологического сырья из растительных, животных и микробных объектов для приготовления экстрактов проводили согласно рекомендациям Государственной Фармакопеи РФ, а также в соответствии с методическими рекомендациями Б.М. Авакянц и др. (2003). При выборе оптимальных условий экстрагирования растительного сырья использовали методы мацерации, перколяции и реперколяции (Николаева И.Г., 2007).

Моделирование экзогенной генерации супероксидных радикалов в in vitro тест - системе осуществляли путем облучения клеток периферической крови у-лучами на установке «Исследователь» в дозах от 0,023 до 0,5 Гр и последующего инкубирования их на питательной среде Игла с добавлением 2 мМ глутамина и 80 мкг/мл гентамицина. Об интенсивности образования супероксидных радикалов судили по накоплению в среде инкубации малонового диальдегида (МДА) согласно методике М.С. Гончаренко, A.M. Латинова, (1985) в модификации В.А. Гурьяновой и Е.И. Трошина (1997).

По степени торможения накопления МДА и сохранения активности антирадикального фермента-супероксиддисмутазы (СОД) в инкубационной среде в присутствии изучаемых экстрактов судили об их антиокислительной активности (АОА), определяемой в супернатантах клеток по методике I. Fridovich, (1995).

Для -экстренной оценки радиозащитной активности изучаемых-препаратов использовали вторую модельную in vitro тест-систему — инкубирование облученных в дозах 0,25-1,0*104 Гр микробных клеток (Е. coli, шт. ПЛ-6) в присутствии испытуемых экстрактов. Контроль эффективности экстрактов осуществляли по выживаемости летально облученных клеток по Э.Роуз (1971).

Отобранные в модельных in vitro тест-системах наиболее активные анти-оксиданты были использованы для составления многокомпонентной фитозо-омикробной композиции с последующим определением совместимости отдельных компонентов, безвредности, токсичности, раздражающего и эмбриотокси-ческого действия полученной композиции для теплокровных животных, руководствуясь при этом методическими рекомендациями Г.Н. Першина (1971), «Методическими указаниями по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию» (1986) и «Методическими указаниями к постановке исследования по изучению раздражающих средств и обоснованнию предельно допустимых концентраций избирательно-действующих веществ» (1989).

Влияния разработанного многокомпонентного средства «Эра-ЖМ» на организм интактных животных оценивали по клинико-гематологическим данным, содержанию гемоглобина, эритроцитов, тромбоцитов, Т-, В- лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров по И.П. Кондрахину, (1987), показателям неспецифической резистентности (лизоцимная и бактерицидная активность сывороток, фагоцитарная активность нейтрофилов), клеточности костного мозга и селезенки (Чертков И.Л., Гуревич С.А.,1984; Жербин Е.А., Чухловин A.B., 1989), а также стресспротективному действию- в иммобилизационном тесте (Николаева И.Г. и др., 2007).

Оценку радиозащитного эффекта разработанной фитозоомикробной композиции in vivo осуществляли путем однократного тотального облучения лабораторных (белых мышей, белых крыс) и сельскохозяйственных животных (овец) в дозах 8,0, 9,0 и 4,2 Гр соответственно и однократного подкожного введения 10 %-ного деалкоголизированного экстракта препарата в дозе 25 мг/кг до и

через 24 ч после летального облучения. В качестве критерия радиозащитного эффекта использовали 30-суточную выживаемость облученных животных, состояние прооксидантно-антиоксидантой системы (ЛАОС) - по уровню ТБК-австивных продуктов (МДА), хиноидных радиотоксинов (ХРТ) - в РНГА-тесте (Рыцай Т., 1960), содержание антирадикальных ферментов: супероксиддисму-тазы - по I. Fridovich (1995), каталазы - по М.А. Королюк (1988), глутатионпе-роксидазы - по М.Е. Anderson (1989).

Диагноз лучевой болезни подтверждали по результатам клинико-гематологаческих, биохимических, серологических и патоморфологаческих исследований, руководствуясь общепринятьши и вышеописанными методами

Полученный цифровой материал подвергали статистической обработке с использованием общепринятых параметрических методов, степень достоверности различий между сравниваемыми показателями определяли по t - критерию Стьюдента с применением пакета прикладных программ Microsoft Excel (2001).

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.2 Скрининг радиозащитных антиоксидантов в in vitro тест-системах

Для проведения исследований использовали растения (лекарственные и кормовые травы), плодовые и дикорастущие деревья «в окрестностях Научного городка ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» на территории Высокогорского района Республики Татарстан. Высушенное воздушным способом сырье из вышеназванных объектов в дальнейшем использовали для приготовления водных и спиртовых экстрактов.

Перечень использованных в опытах технологического сырья в качестве потенциальных антиоксидантов из объектов растительного, животного и микробного происхождения представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Перечень использованных в опытах фито-, зоо- и.микробных

экстрактов в качестве потенциальных антиоксидантов

№ п/п Сырье, из которого был приготовлен экстракт № п/п Сырье, из которого был приготовлен экстракт

1 Дуб (кора) 31 Петрушка кудрявая (листья)

2 Дуб (листья) 32 Крапива двудомная (листья)

3 Дуб (корень) ■ 33 Календула (цветы)

4 Осина (кора) 34 Бадан толстолистый (листья)

5 Осина (листья) 35 Аир болотный (корень)

6 Береза(листья) 36 Солодка(корень)

7 Береза (почки) 37 Девясил (корень)

8 Береза(чага) 38 Ромашка (цветы)

9 Липа (цветы) 39 Зверобой (цветы)

10 Липа (листья) 40 Душица (цветы)

И Ель (иголки) 41 Клевер (листья)

12 Сосна(иголки) 42 Люцерна (листья)

13 Кедр (иголки) 43 Фиточай (крапива+морковь+укроп-листья)

14 Туя (иголки) 44 Морковь (плоды)

15 Калина (листья) 45 Морковь (листья)

16 Калина (плоды) 46 Укроп (семена)

17 Рябина (листья) 47 Укроп (листья)

13 Рябина (плоды) . 48 Одуванчик (цветы)

19 Облепиха(плоды) 49 Расторопша (цветы)

20 Черника (листья) 50 Подсолнух (корзинка)

21 Черника(плоды) 51 Лук (листья)

22 Смородина (листья) 52 Лук (плоды)

23 Смородина (плоды) 53 Грейпфрут (плоды)

24 Малина (листья) 54 Чеснок (плоды)

25 Малина (плоды) 55 Пшеница пророщенная (семена)

26 Земляника (плоды) 56 Томаты (плоды)

27 Земляника (листья) 57 В.Ый<1ит (культуральная жидкость)

28 Боярышник (плоды) 58 Вас.зиЫШя (культуральная жидкость)

29 Шиповник (плоды) 59 Периферическая кровь (порошок)

30 Виноград (семена) 60 Эритроциты (порошок)

61 Вита-Форце (порошок)

Из данных таблицы видно, что всего в опытах был использован 61 вид сырья, в том числе: 56 растительных, 2 - микробных, 2 - животных и 1 вид животно-растительного происхождения.

Исходя из того, что опыты проводили со значительным количеством потенциальных антиоксидантов, для скрининговых исследований использовали модельную in vitro тест-систему-инкубирование интактных и облученных у-лучами клеток периферической крови на питательной среде в присутствии ис-

пытуемых фитозоомикробных экстрактов. Незначительная гибель клеток наблюдалась при облучении их у-квантами в дозе 50 сГр, а повышение акгивно-сти антирадикального фермента (СОД) - при внесении в инкубационную среду испытуемых экстрактов в количестве 0,5-1,0 мкг/мл (по сухому веществу) и экспозиции инкубировали 24 ч.

В качестве оценочного критерия для отбора наиболее активных антиок-сидантов использовали торможение накопление МДА и сохранение активности ключевого фермента антиоксидантной защиты — супероксиддисмутазы (СОД) в супернатантах инкубируемых клеток в присутствии испытуемых средств.

Результаты исследований показали, что из испытанных 56 видов фитопрепаратов наиболее высокими антиокбидантными свойствами обладали экстракты из фиточая (смеси листьев крапивы, укропа, моркови), которые ингиби-ровали концентрацию МДА на 99,8%. Почти аналогичной антиоксидантной активностью обладали экстракты из чаш березовой и хвои ели (99,7%), листьев и цветов зверобоя (99,6%), плодов рябины (99,3%), черники (95,6%), корзинок подсолнуха (91,3%), плодов калины (99,1%). Из 5 видов веществ зоогенногО и микробного происхождения наиболее активными антиоксидантными свойствами обладали экстракты эритроцитов (99,7%), культуральная жидкость B.bifidum (99,6%), экстракт «Вита-Форце» (99,3%) и культуральная жидкость Вас. subtilis (96,7%). Антиоксидантная активность контрольных препаратов составляла 91,5% (мексидол) 89,5% (противорадиационный глобулин).

Полученные в первой модельной in vitro тест-системе результаты послужили основанием для изучения радиозащитных свойств отобранных веществ. Для проведения следующей серии экспериментов по оценке радиозащитной активности изучаемых средств, использовали вторую модельную тест-систему-культивирование летально облученных клеток E.coli (шт. ПЛ-6) в присутствии изучаемых экстрактов из объектов растительного, животного и микробного происхождения. Выживаемость облученных в летальной дозе (1,0*104Гр) микробных клеток в присутствии фитозоомикробных экстрактов в концентрации

0,5-1,0 мкг/мл (по сухому веществу) выражали в % от контроля (интактных клеток).

Результаты радиомикробиологических исследований показали, что из испытанных 61 вида экстрактов 19 обладали радиозащитной активностью, обеспечивая выживание облученных клеток в пределах от 23,4 до 72,1%. При этом наиболее высокой радиозащитной активностью обладали экстракты «Вита-Форце» (72,1%) и фиточая (смесь листьев крапивы, укропа, моркови) (71,9%), березовой чаги (67,1%), травы зверобоя (69,3%), плодов калины (65,5%), продукты метаболизма B.bifidum (63,5%), Bac.subtilis (63,9%), хвои ели (63,5%), эритроцитарной массы (62,5%), плодов рябины (58,8%), хвои пихты (53,9%), туи (54,3%) и сосны (53,7%). Экстракты из осиновой коры (49,9%), плодов черники (45,9%) обеспечивали выживание более 40% клеток, а корзинок подсолнуха-32,8%.

При этом следует отметить, что экстракты из листьев укропа, крапивы и моркови в отдельности радиозащитной активностью не обладали, однако при сочетанном применении они проявляли высокую радиозащитную активность (71,9%), что свидетельствует о синергическом эффекте отдельных компонентов при сочетании их друг с другом.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что использование двух модельных in vitro тест-систем - инкубирование облученных клеток периферической крови и микробных клеток в присутствии потенциальных антиоксидантов дает объективную информацию о возможности модификации радиоиндуцированных нарушений прооксидантно-оксидантной системы (ЛАОС), что позволяет проводить экстренную оценку потенциальных радиозащитных веществ. С использованием указанных модельных систем проведен скрининг 61 потенциального антиоксиданта и отобраны 6 веществ фито-генного, 2-животного и 2-микробного происхождения, обладающие наиболее высокими антиоксидантными и радиозащитными свойствами.

4.3 Разработка лекарственных форм препарата «Эра-ЖМ» и изучение биологического действия его на организм

Учитывая, что биологически активные добавки с поливитаминные комплексы на основе продуктов пчеловодства и растениеводства обладают адапто-генными, иммуномодулирующими и метаболизм стимулирующими свойствами, проф. A.B. Ивановым и др. составлена натуральная биологически активная композиция «Вита-Форце» (Патент РФ №2324361, А23К 1/00, 20006), которая проявляла высокую антиоксидантную и радиозащитную активность в in vitro тест-системе.

Запатентованная формула «Виа-Форце» в качестве источника углеводов содержит мед (1,2-2,0 мас.%), антибактериальных и лекарственных веществ -прополис (2,0-2,5%), пергу (30-35%), пчелиный яд (0,5-1,0%), источника поливитаминов, микроэлементов, минеральных солей-цветочную пыльцу (обножку-15-17%), источника незаменимых аминокислот, жирных кислот, белка-пчелиный расплод (5,5-6,0%) и маточное молоко (3,5-4,0%), источника минеральных солей - воск и адаптогенных факторов-пчелиный подмор (7-8%), как дополнительного источника витаминов, микроэлементов, аминокислот, стимулятора обмена веществ-травяную муку (остальное-37,0-37,5%).

При разработке нового радиозащитного средства на основе препарата «Вита-Форце», в известную (запатентованную) формулу в части «Травяная мука», мы дополнительно вводили отобранные на предыдущем этапе работы наиболее активные антиоксиданты (смесь листьев укропа, крапивы, моркови), которые в условиях in vitro обладали достаточно высокими радиозащитными свойствами. Поскольку на долю травяной муки в формуле известного препарата «Вита-Форце» приходится 37% от остальных компонентов и она представлена, в основном, люцерной, согласно предлагаемой формуле травяная мука содержит 11,1% люцерны, 7,4% подсолнуха, 9,25% хвойной муки, 5,59% смеси листьев крапивы, укропа, моркови и 3,7% порошка калины. При этом следует отметить, что порошок люцерны является основой компонентой известного фи-тоадаптогена «Эраконд», порошок корзинок подсолнуха-основой компонентой

фитотерапевтического препарата «Эра-Н», которые, согласно данным сотрудников отдела радиобиологии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» д.б.н. Н.Б. Тарасовой и И.Н. Нигматуллина, обладает радиозащитными свойствами, а при сочетанном применении их наблюдается усиление радиозащитного эффекта противорадиационного глобулина. Поэтому в состав травяной муки препарата «Вита-Форце» включали компоненты известных препаратов «Эраконд» и «Эра-Н», а в качестве дополнительных антиоксидантов-порошок фиточая из листьев крапивы, укропа, моркови, источника токоферола-порошок из плодов калины и источника хитозана-хвою ели.

При составлении многокомпонентного фитозоомикробного средства мы также учитывали, что сочетанное применение препарата «Вита-Форце» с препаратами крови (сыворотка, глобулин), а эритроцитарно-тромбоцитарной мас-сы-с продуктами метаболизма микроорганизмов (Bac.subtilis, B.bifidum)(Burns J., Evans С., 1986) приводит к усилению радиозащитных свойств композиции, а сочетание продуктов метаболизма Bac.subtilis с природным минералом-бентонитом или цеолитом-способствует появлению важнейшего свойства-декорпорация тяжелых металлов и радионуклидов (препарата «Бактистатин»).

Поэтому порошок высушенной тромбоцитарно-эритроцитарной массы, которая при производстве противорадиационного глобулина выбрасывалась как отход производства, или порошка цельной крови-основного технологического сырья при производстве сывороточных препаратов (глобулинов, сыворток) или отходов на мясокомбинатах, использовали в качестве кровяной муки как источника антирадикалыюго фермента-супероксиддисмутазы, неферментного ан-тиоксиданта-аскорбата и тиоловых антиоксидантов (глутатиона, цистеина, ме-тионина). Для усиления радиозащитных свойств антиоксиданта животного происхождения (эритроцитарно-тромбоцитарной массы или цельной крови), в качестве источника антибиотиков использовали культуральную жидкость Bac.subtilis, содержащую бацитрацины А, В, С, D, Е, F1-F3, субтилин, прото-субтилин, а в качестве источника бифидогенных и цитокининдуцирующих фак-торов-культуральную жидкость B.bifidum. В качестве дополнительного источ-

ника микроэлементов, антитоксического, депонирующего и декорлорирующего фактора использовали легкую (1-ю) фракцию природного минерала-бентонита.

В результате проведенных исследований нами на основе кормовой добавки «Вита-Форце» составлено многокомпонентное лечебно-профилактическое средство, представляющее собой смесь апипродуктов (мед, перга, прополис, обножка, воск, пчелиный яд, пчелиный подмор), растительный сбор из кормовых и пищевых растений (люцерна, корзинки подсолнуха, крапива, укроп, морковь, хвоя ели), веществ животного (тромбоцитарно-эритроцитарная масса или кровяная мука) и микробного происхождения (метаболиты Вас.БиЫШз и В.ЫШит), а также природного минерала-бентонита.

На основе этих компонентов разработана сухая (порошковая) и жидкая (пероральная и инъекционная) лекарственные формы препарата, условно названного «Эра-ЖМ» (экстракт растительный, животный, микробный).

Для составления пероральной (порошковой) формы препарата брали 4 части препарата «Вита-Форце», по 2 части травяной муки и эритроцитарно-тромбоцитарной массы (кровяной муки), 1 часть бентонита, 0,6 частей леофи-лизированного порошка культуральной жидкости В.Ыйскдп и 0,4 части .уВас.зиЬиИз. После тщательного перемешивания компонентов смесь фасовали в л полиэтиленовые пакеты и хранили в сухом, защищенном от света месте при температуре не выше 20°С и относительной влажности воздуха не более 70%.

Для приготовления жидкой (пероральной) формы препарата брали 100г приготовленной по вышеуказанной рецептуре порошка «Эра-ЖМ», заливали до 1 л кипятком и кипятили в течение 3-5 мин, остужали, фильтровали через бумажный или ватно-марлевый фильтр, разливали во флаконы и использовали для выпойки животных, заменяя им обычную воду на экстракт. Эту форму препарата готовили в день или накануне перед применением препарата, предварительно разводя его до 0,1%-ной концентрации.

Для приготовления инъекционной формы препарата, ЮОг порошка «Эра-ЖМ» заливали до 1 л горячим водно-спиртовым раствором при концентрации этанола 40% и смесь подвергали перколяции и реперколяции в течение 0,5-1ч.

По истечению указанной экстракции вытяжку сливали, спирт удаляли на вакуумном испарителе, определяя в вытяжке содержание сухого вещества. Концентрированный экстракт стандартизировали по сухому веществу путем разведения его стерильной водой, содержащей 1% суспензиобразующей фракции бентонита и смесь подвергали стерилизации одним из общепринятых способов (ав-токлавирование, кипячение, лучевая стерилизация), разливали в стерильные флаконы и использовали для парентерального введения.

При этом следует отметить, что оптимальные соотношения компонентов разработанного средства установлены экспериментальным путем и любые изменения их соотношений (в сторону увеличения или уменьшения) не приводят к усилению лечебно-профилактического эффекта препарата. Установлено также, что при использовании метода холодного экстрагирования фитозоомикроб-ной смеси оптимальная концентрация экстрагента составляет 70% этанола, при длительности экстракции 20-21 день, а при горячем экстрагировании (перколя-ции и реперколяция) - 40%. Установлено также, что ни кипячение экстракта, ни автоклавирование при'стерилизации не ведут к снижению биологической активности препарата, что согласуется с данными фотохимического анализа экстрактов, полученными в химикофармацевтических лабораториях по производству фитопрепаратов (Магомедова Э.Ф. и др.).

4.3.1 Изучение токсичности препарата «Эра-ЖМ»

Перед началом основных опытов по оценке радиозащитных свойств полученного многокомпонентного средства, необходимо было изучить влияние препарата на организм интактных животных. При изучении токсичности препарата в опытах использовали 100 белых мышей живой массой 18 - 20 г обоего пола, разделенных на 10 групп по 10 животных в каждой. Первые 6 групп животных являлись опытными: мышам 1-й группы препарат вводили в дозе 500 мг/кг, 2-й -1000, 3-й - 1500,4-й - 2000, 5-й - 2500, 6-й - 3000 мг/кг, 7-й - 3500 мг/кг, 8-й - 4000 мг/кг, 9-й - 4500 мг/кг, 9-я группа животных служила контролем. Препарат давали внутрь в объеме от 0,1 до 0,5 мл. Установлено, что в первых 4 группах мышей гибель животных не наблюдалась, а в группе животных,

получавших 2500 мг/кг препарата наблюдали гибель двоих из 10 использованных животных. Проведенные по Г.Н. Першину расчеты показали, что ЛД50 для белых мышей при пероральном поступлении препарата составляла 3039 мг/кг.

Во втором варианте опыта (100 белых мышей) препарат инъецировали подкожно в вышеуказанных дозах. Установлено, что при однократном подкожном введении препарата ЛДз0 для белых мышей составила 2554 мг/кг. Полученные данные свидетельствуют о низкой токсичности испытуемых лечебного средства «Эра-ЖМ».

4.3.2. Изучение безвредности многокомпонентного средства на организм ... Оценку безвредности препарата «Эра-ЖМ» на интактных животных проводили по изменению клинико-гематологических, росто-весовых, имунологи-ческих, адаптогенных и патоморфологических показателей.

Для изучения влияния препарата при длительном поступлении в организм, опыты проводили на 20 крысятах-отъемышах исходной живой массой 42±2г. Крысят^ 1-й группы получали обычный рацион, 2-й группы препарат «Эра-ЖМ» из расчета 0,1г/кг корма в течение 30 суток. ¡.

Установлено, что крысята опытной группы с охотой принимали корм с добавкой, проявляли повышенный аппетит, были более активны, имели более опрятный внешний вид, темпы роста у подопытных крысят была выше на 13,2%, а привесы - на 16,9%, чем в контрольной группе.

Длительное скармливание крысятам препарата гематоксического эффекта не оказывало, скорее наоборот, наблюдалось стимулирующее влияние на гемо-поэз, увеличивая содержание клеток как эритроидного (в 1,04 раза), так и лейкоцитарного (в 1,05 раза) ряда.

Изучение аллергизирующих свойств «Эра-ЖМ», проведенное на 10 морских свинках путем подкожного введения раствора гистамина в дозе 5 мг/кг через 1,2 и 3 ч после орального введения животным терапевтической дозы (25 мг/кг) изучаемого препарата показало, что последний не предотвращает гибели животных от гистаминного шока и не ускоряет ее по сравнению с контролем.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии аллергизирующих-свойств испытуемого средства.

Втирание в кожу кроликов препарата «Эра-ЖМ» в течение 14 дней из расчета 25 мг/см2 площади выстреженного участка (7* 8см) не вызывало местных реакций на препарат, что свидетельствует об отсутствии у него раздражающего действия.

Результаты изучения эмбритоксического действия «Эра-ЖМ», проведенного на 20 крысах-самках, которые получали в течение 15 дней внутрижелу-дочно жидкую (оральную) форму препарата в дозе 25 мг/кг с последующим подсчетом в матке живых и мертвых плодов, а также желтых тел у убитых на 15-й и 20-й дни беременности показали, что введение препарата беременным животным не оказывало отрицательного влияния на клиническое состояние и эмбриогенез, отсутствие дефектов развития плодов и матки.

Учитывая, что при конструировании противорадиационных лечебно-профилактических препаратов необходимо учитывать их влияние на неспецифическую резистентность организма, были проведены опыты на 24 белых крысах, разделенных на 2 группы по 8 в каждой, которые в течение 7 сут внутри-желудочно получали жидкую форму препарата «Эра-ЖМ» в дозе 25 мг/кг.

Результаты исследований показали, что пероральное поступление испытуемого препарата в организм в вышеуказанной дозе оказывало ¡стимулирующее влияние на факторы неспецифической защиты, увеличивая содержание общего белка в 1,14 раза, альбуминов-1,04, а-глобулинов-1,05, р-глобулинов-1,22, у-глобулинов-1,20, бактерицидной активности-1,06, лизоцимной-1,11, фагоцитарной активности нейтрофилов-1,04 и фагоцитарного числа-в 1,05 раза по сравнению с контролем.

В следующей серии экспериментов, проведенных на 20 крысятах-отьемышах, изучали влияние «Эра-ЖМ» при ежедневном внутрижелудочном поступлении препарата в дозе 25 мг/кг на иммуноморфологаческий состав крови растущих животных.

Установлено, что 10-кратное поступление препарата в организм растущих крысят в лечебной дозе (25мг/кг) оказывало гемостимулируюхций эффект, увеличивая на 5-й и 10-й дни опыта содержание эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, лимфоцитов при одновременном уменьшении юных форм нейтрофилов, эозинофлов и базофилов.

Результаты изучения показателей, характеризующих состояние иммунной системы организма, выявили, что использованный препарат оказывал иммуностимулирующий эффект на растущий организм, что выражалось в постепенном, по мере поступления изучаемого препарата в растущий организм, увеличении иммунорегуляторного индекса (ИИ)-соотношения Т-хелперов и Т-супрессоров (ТЬ/Тэ) до 1,52, против 1,38 в исходе.

Учитывая, что одним из путей решения проблемы повышения резистентности организма к стрессорным факторам является применение фармакологических средств-адаптогенов, представленных как синтетическими, так и средствами природного происхождения, нами были проведены опыты по изучению адаптогенной (антистрессорной) активности многокомпонентного фитозоомик-робного препарата на организм животных.

В опытах на 46 белых крысах на модели иммобилизационного стресса путем фиксации животньп: в положении на спине в течение 12 ч после 7-дневного внутрижелудочного поступления препарата в лечебной дозе (25мг/кг) с последующим определением выраженности гипертрофии надпочечников, инволюции тимуса, выраженности деструктивных повреждений в слизистой оболочке желудке, интенсивности накопления супероксидных радикалов (МДА) и состояния системы антиоксидантной защиты.

Установлено, что превентивное введение препарата «Эра-ЖМ» оказывало антистрессорное действие, сопровождающееся у стрессированных животных уменьшением массы надпочечников в 1,43 раза, увеличением массы тимуса в 1,27 раза и селезенки в 1,36 раза, с одновременным гастропротективным действием, выражавшемся в задержке развития глубоких деструктивных поражений слизистой желудка, а также ингибированием нарушения системы антиокси-

дантной защиты на фоне снижения концентрации МДА-с одновременным ув-личением содержания антиоксидантных ферментнов: каталазы, супероксид-дисмутазы и глутатионпероксидазы.

Результаты изучения влияния препарата на организм интактных (здоровых) животных показали, что одно- и многократное поступление растительно-животно-микробной композиции в лечебных дозах отрицательного влияния на организм не оказывало; при этом установлено стимулирующее влияние композиции на росто-весовые качества растущих животных, стимулирующее влияние на иммуногематологические показатели, а также установлено стресспротектив-ное (адаптогенное) действие препарата на животных, что явилось основанием для изучения радиозащитных свойств препарата «Эра-ЖМ».

4.4 Оценка радиозащитного действия композиции «Эра-ЖМ» на животных

Оценку радиозащитного действия «Эра-ЖМ» проводили на 160 белых мышах живой массой 18-20г, 80 белых крысах живой массой 170-180г и ,13 овцах обоего пола породы «Прекос» со средней живой мабсой 35±3кг. Моделирование радиоиндуцированного оксидативного стресса у животных осуществляли путем однократного внешнего облучения на у-установке «Пума» в летальных дозах (ДДюо) 7,7Гр (белые мыши), 9,0Гр (белые крысы) и 4,2Гр.(овцы).

В опытах на белых мышах, разделенных на 8 групп по 20 животных в каждой, изучали радиозащитную эффективность препарата, используя при этом 7 вариантов (схем) применения «Эра-ЖМ». Условия постановки опытов и полученные результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Выживаемость летально облученных мышей в зависимости от схе-__ мы применение препарата «Эра-ЖМ» в %_

Вариант Группа Срок наблюдения, сут

опыта 3 6 10 14 21 30

I 1-я (1 кратное п/к. введение инъ-екц. формы препарата за 24 ч до облучения) 20 100 20 100 19 95 18 90 16 80 15 75

II 2-я (1-кратное п/к введение через 24 ч после облучения) 20 100 20 100 19 95 18 90 17 85 16 80

III 3-я (ежедневное введение перо-ральной формы препарата за 15 сут до и в теч. 15 сут после облучения) 20 100 .20 100 16 80 14 70 13 65 12 60

IV 4-я (скармливание порошковой формы препарата в течение 30 сут за 15 дней до и в теч. 15 дней после облучения) 20 100 20 100 17 85 15 75 13 60 13 65

V 5-я (скармливание пероральной формы препарата в теч. 30 сут до облучения) 20 100 20 100 18 90 15 75 13 65 12 60

VI 6-я (скармливание пероральной формы препарата в теч. 30 сут после облучения) 20 100 20 100 17 85 13 65 8 40 7 35

VII 7-я (облученная - контроль облучения) 20 100 18 90 11 55 4 20 1 5 0

VIII 8-я (необлученная-биологический контроль) 20 100 20 100 20 100 20 100 20 100 20 100

Числитель-количество выживших ж-х, знаменатель-% выживаемости

Из данной таблицы видно, что наиболее удобным и эффективным является парентеральное (подкожное) применение препарата как до (за 24 ч), так и после (через 24 ч) облучения животных, которое обеспечивало выживание 75% мышей, получавших испытуемое средство в профилактическом (схема I) и

80%-в лечебном варианте (схема II) применения. Варианты III и IV, обеспечивали 60%-ную выживаемость летально облученных животных.

Результаты динамического наблюдения за животными на фоне профилактического и лечебного применения как пероральной, так и инъекционной форм препарата показали, что последний, наряду с увеличением выживаемости летально облученных животных, оказывал существеннное влияние и на сроки -продолжительности жизни (СПЖ) павших животных. Так, если СПЖ у павших животных 1-й группы составлял 15,9±1,65 дней, 2-й-17,2±2,39, 3-й-13,1±1,51, 4-й-14,8±2,15, 5-й-13,9±1,95 и 6-й-12,7±1,15, то у только облученных животных этот показатель составлял 7,8±2,32 дней, что свидетельствует о достоверном увеличении СПЖ у получавших испытуемый препарат животных.

На фоне лечебного и профилактического применения препарата, сопровождающегося уменьшением клинических проявлений ОЛБ, была выявлена тенденция к снижению содержания оксидативных макромолекул (МДА) при одновременном увеличении концентрации антиоксидантных ферментов, когда (на 10-е сут) активность СОД превышала таковую облученного контроля в 1,30 и КАТ-в 1,13 раза.

Учитывая, что основной мишенью атаки пероксирадикалов при радиационном стрессе является система гемопоэза, параллельно у подопытных мышей были изучены изменения в системе крови под воздействием препарата «Эра-ЖМ». При этом в периферической крови животных определяли количество эритроцитов, гемоглобина, нейтрофилов, лимфоцитов, а в пунктатах костного мозга-общее число клеток (миелокариоцитов), эритроидных, нейтрофильных, лимфоидных клеток в костном мозге бедренной кости, массу и массовый коэффициент тимуса.

Установлено, что однократное подкожное применение «Эра-ЖМ» как до, так и после облученная животных оказывало гемопротекторный эффект: содержание миелокариоцитов в костном мозге у получавших препарат за 24ч до облучения в период разгара ОЛБ было выше в 1,25 раза, эритроидных клеток-в 1,27, нейтрофильных-в 1,57, лимфоидных-в 1,74 раза (Р<0,01), чем у только об-

лученных животных. Миелопротекторное действие препарата сопровождало увеличение количества эритроцитов (на 7%), нейтрофилов (на 5,8%), лимфоцитов (на 2,6%) и гемоглобина (на.3%) в периферической крови с одновременным увеличением массового коэффициента тимуса на 40% (Р<0,01).

Таким образом, введение в организм мышей фитозоомикробного препарата «Эра-ЖМ» как до (за 24ч), так и после (через 24ч) летального облучения оказывало радиозащитный эффект, который реализовался путем коррекции системы антиоксидантной защиты (ингибирование образования супероксидных радикалов с одновременной активацией антиоксидантных ферментов, что приводило к активации элементов кроветворного микроокружения: ранних гемо-этических клеток-предшественников и клеток стромального микроокружения.

Повторение аналогичных опытов на другой биологической модели-облученных в дозе ЛДюо (9,0Гр) белых крысах, имеющих более высокую радиорезистентность, показало, что животные, длительно (в течение 30 дней) получавшие оральную (порошок или водный раствор экстракта) форму препарата, отличались от контрольных и только облученных животных повышенным аппетитом, менее выраженной потерей живой массы, адекватной реакцией на внешние раздражители, имели более опрятный внешний вид, а шерстный покров приобретал блеск.

Применение препарата «Эра-ЖМ» оказывало существенное влияние на выживаемость и продолжительность жизни, животных увеличивая эти показатели на 70-80% и в 1,27-1,95 раза соответственно при применении испытуемого средства по I и II схемами. Повышение выживаемости облученных животных на фоне применения препарата сопровождалось ингибированием радиоиндуци-рованного гемотоксического эффекта, предупреждая катастрофическую панци-топения при этой патологии.

Результаты параллельных биохимических исследований, включающих определение концентрации супероксидных радикалов (МДА) и ключевых ферментов антиоксдидантной защиты (СОД, КАТ, ГП) показали, что испытуемый препарат при всех вариантах применения оказывал существенное влияние на

функционирование прооксидантно-антиоксидантной системы (ПАОС) организма, снижая уровень радиомодифицированных оксидативных молекул и повышая активность антирадикальных ферментов.

Таким образом, добавление к рациону облученных крыс даже такого незначительного количества «Эра-ЖМ» (0,1 г/кг корма) дают достаточно выраженный лечебно-профилактический эффект. Кроме того, очевидно, что одна-кратное подкожное введение инъекционной формы препарата с профилактической целью (за 24 ч до облучения) дает максимальный радиозащитный эффект, обеспечивая защиту 80% летально облученных крыс. Хотя профилактически вариант применения препарата незначительно (на 5%) уступает лечебному, однако этот вариант для экстренной профилактики является более целесообразным, чем пролонгированное поступление препарата в виде кормовой добавки.

На заключительном этапе работы, проведенной на облученных в дозе 4,2 Гр 13 овцах, получавших однократно инъекционную форму препарата в дозе 25 мг/кг (по сухому веществу) в количестве 8,2-9,0 мл экстракта на голову, подтверждено, что «Эра-ЖМ» оказывает радиозащитный эффект. Реализация последнего происходит путем снижения интенсивности свободнорадикальных процессов и сохранения активности антиоксидантных ферментов (СОД, КАТ, ГП), т.е. путем коррекции прооксидантно-антиоксидантной системы (ПАОС) организма в условиях радиоиндуцированного оксидативного стресса. Предотвращение накопления оксидативных макромолекул в облученном организме на фоне применения многокомпонентного фитозоомикробного препарата способствует нивелированию последствий окислительного стресса и клиническому выздоровлению от ОЛБ, обеспечиваявыживаемость 66,6% летально облученных овец.

Применение фитозоомикробного экстракта как с профилактической, так и лечебной целью, оказывало модифицирующее действие на течение и исход ОЛБ-она характеризовалось более благоприятным течением болезни на фоне уменьшения геморрагического синдрома, меньшего угнетения системы кроветворения и системы иммунитета, предотвращая нарушение субпопуляционного

индекса-ТМ^, способствуя тем самым, стабильности функционирования Т-клеточной системы иммунитета.

Таким образом, на трех видах лабораторных (белые мыши, белые крысы) и сельскохозяйственных (овцы) животных, подвергшихся радиогенному окси-дативному стрессу, показано, что препарат «Эра-ЖМ», содержащий (согласно литературным данным) фармакологически активные вещества: флавоноиды (кверцетины, дигидрокверцетин, апигенин, изокверцетин, гиперозид, рутин), фенолы, органические кислоты (м-гидроксибензойная, салициловая, анисовая, бензойная, галловая, гентизиновая, феруловая, хлоргеновая, кофейная, хииная, аскорбиновая), кумарины (эскулетин), насышешше и ненасыщенные жирные кислоты, дубильные вещества гидролизируемой группы, сапонины стеридной природы, заменимые и незаменимые аминоксилоты, а-токоферолы, хитозаны, антибиотики, бифидогенные и цитокин стимулирующие факторы и т.д., обладает адаптогенным (стресспротективным), гемопротективным, иммуно- и гемо-поэзрегулирующим, антиоксидантным и радиозащитным эффектами.

4. ВЫВОДЫ

1. Разработаны оральная (в виде порошка) и инъекционная (в виде 10%-ного водно-этанолового экстракта) лекарственные формы фитозоомикробной композиции «Эра-ЖМ», состоящей из 4 частей апипрепарата «Вита-Форце», 2 частей травяной муки, 2 частей тромбоцитарно-эритроцитарной массы (кровяной муки), 1 часть бентонита, 0,6 частей лиофилизированной культуральной жидкости В. Ыйс1ит и 0,4 части продуктов метаболизма Вас. виЫШз, обладающие адаптогенным, гемопротективным, иммуно-гемопоэзирующим, антиоксидантным и радиозащитным эффектами.

2. В опытах на белых мышах, белых крысах и крысятах, морских свинках установлено, что при пероральном и подкожном введении препарат является малотоксичным (ЛДзо для белых мышей 2950 мг/кг при пероральном и 2600 мг/кг - при подкожном введении), не обладает тератогенным, эмбриотоксиче-ским и раздражающим действиями; в дозе 25 мг/кг (по сухому веществу) пре-

парат оказывает лечебно-профилактическое действие на пораженных радиацией, а также стимулирующее действие на интактных животных.

3. При длительном (в течение 30 суток) скармливании препарата в дозе 0,1 г/кг корма у опытных животных наблюдалось увеличение живой массы на 13,2 %, привесов-на 16,9 %, гемоглобина-на 4,8 %, общего белка-на 8,9 %, лейкоци-тов-на 4,5 %, эритроцитов-на 4,2 %, нейтрофилов-на 3 %, тимусного и селезе-

- ночного индексов-на 0,23 и 0,38 соответственно, иммунорегуляторного индекса (ТЬ/ТбЭ-в 1,17 раза.

4. Профилактическое пероральное применение препарата «Эра-ЖМ» в дозе 25 мг/кг на фоне 12 часового иммобилизационного стресса оказывает выраженное стресспротективное действие, уменьшая выраженность дегенеративных ка-таболических изменений во внутренних органах белых крыс, снижая концентрацию пероксирадикалов (МДА) на 20 % при одновременном повышении содержания антиоксидантных ферментов (СОД, КАТ) на 20 % соответственно.

5. Однократное подкожное введение инъекционной формы «Эра-ЖМ» в дозе 25 мг/кг (0,25 мл/кг) за 24 ч до и через 24 после летального облучения обспе-чивало выживаемость 75 % и 80 % животных соответственно при 100 % гибели контрольных (облученных) животных.

6. Повышение выживаемости летально облученных лабораторных и с.-х. животных (овец) на фоне лечебно-профилактического применения препарата «Эра-ЖМ» в дозе 25 мг/кг сопровождалось более легким клиническим течением острой лучевой болезни; меньшим угнетением содержания лейкоцитов (в 1,6 раза), эритроцитов (в 1,1 раза), лимфоцитов (в 1,5 раза) по сравнению с животными только облученных групп; предупреждением снижения активности антиоксидантных ферментов в 2,10 (СОД), 1,87 (КАТ) и 3,68 раза (111) при одновременном ингибировании концентрации супероксидных радикалов (МДА) в 2,14 раза, по сравнению с только облученными животными.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ Для лечения и профилактики радиационных поражений и коррекции системы антиоксидантной защиты облученного организма, в ветеринарную прак-

тику предложена многокомпонентная фитозоомикробная композиция «Эра-

ЖМ», в дозе 25 мг/кг (0,25мл/кг для подкожного) и 0,1 г/кг корма (для перо-

рального применения).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Юнусов И.Р. Антиоксидантное действие фитопрепаратов при острой лучевой болезни /И.Р. Юнусов, P.P. Гайнуллин //Материалы научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии» от 29 июня 2007 Казань ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 2007-С. 96-98.

2. Юнусов И.Р. Диагностикум для индикации радиоиндуцированных токсических соединений /P.P. Гайнуллин, И.Р. Юнусов //Материалы научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы ветеринарии» от 29 июня 2007 Казань ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 2007-С. 33-35.

3. Юнусов И.Р. Противолучевые терапевтические свойства многокомпонентного фитозоопрепарата /Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов, И.Р. Юнусов И.Н. Нигматуллин //Вестник Российской военно-медицинской академии. - 2008, -№3 (23).-С. 221.

4. Юнусов И.Р. Новая тест система для ранней диагностики лучевого поражения /A.B. Иванов, P.P. Гайнуллин, Р.Н. Низамов, Я.М. Курбангалеев, И.Р. Юнусов //Вестник Российской военно-медицинской академии. - 2008. - № 3 (23).-С. 177.

5. Юнусов И.Р. Оценка антиоксидантных и радиопротекторных свойств фитопрепаратов /И.Р. Юнусов, Н.Н Хазипов //Ветеринарный врач. - 2008. - № 5. -С. 14-17.

6. Юнусов И.Р. Увеличение уровня экзогенных антирадикальных ферментов как фактор повышения радиорезистентности организма /И.Р. Юнусов, P.P. Гайнуллин //Матер. Всеросс. науч.-практ. конф. КГАВМ - Казань, 2007. - С. 120-121.

7. Юнусов И.Р. Изучение возможности использования бентонита в качестве иммуносорбента для конструирования противорадиационного антительного диагностикума /P.P. Гайнуллин, И.Р. Юнусов //Матер. Всеросс. науч.-практ. конф. КГАВМ-Казань, 2007.-С. 109-111.

8. Юнусов И.Р. Изыскание средств коррекции антиоксидантной защиты при лучевой болезни / A.B. Иванов, И.Р. Юнусов, Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов / Матер. Междунар. науч.-практ. конф. Воронеж, 2008. - С. 149-153.

Юнусов Ильнар Расимович

ИЗЫСКАНИЕ РАДИОЗАЩИТНЫХ СРЕДСТВ ИЗ КЛАССА БИОЛОГИЧЕСКИХ АНТИОКСИДАНТОВ

03.00.01 - Радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань-2009

Подписано в печать 23.01.09 Сдано в набор 24.01.09 Заказ №17

Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman Усл. печ. л. 1,0. Бумага офсетная. Тираж 100 экз. Отпечатано с оригинал-макета в типографии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 420075, г. Казань-75, Научный городок-2

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Юнусов, Ильнар Расимович

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Патогенетические (пусковые) механизмы развития лучевой болезни.j.

2.2 Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул при радиоиндуцированном окислительных стрессах.

2.3. Физиологические механизмы антирадикальной защиты и пути ее коррекции при радиационной патологии.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Материалы и методы исследований.

3.1.1 Материалы.

3.1.2 Методы исследований.

4 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1 Подготовка и получение технологического сырья из растительных и животных объектов для изготовления фито- и зооэкстрактов - потенциальных антиоксидантов

4.2 Скрининг радиозащитных антиоксидантов в in vitro тест-системах

4.3 Разработка лекарственных форм препарата «Эра-ЖМ» и изучение биологического действия его на организм.

4.3.1 Изучение токсичности и безвредности многокомпонентного средства «Эра-ЖМ».

4.3.2 Оценка влияния препарата «Эра-ЖМ» на неспецифическую резистентность организма.

4.3.3 Влияние препарата «Эра-ЖМ» на иммуногематологические показатели животных.

4.3.4 Изучение стресспротекторного (адаптогенного) действия 75 фитозоопрепарата «Эра-ЖМ».

4.4 Оценка радиозащитных свойств многокомпонентной композиции «Эра-ЖМ» на белых мышах.

4.5 Оценка радиозащитной активности композиции «Эра-ЖМ» на белых крысах.

4.6 Изучение антиоксидантных свойств фитозоомикробной композиции на пораженных радиацией овцах.

5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

6 ВЫВОДЫ.

7 ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изыскание радиозащитных средств из класса природных антиоксидантов"

1.1 Актуальность проблемы. Полувековые исследования в области разработки методов и средств противорадиационной защиты привели к созданию из многих тысяч соединений лишь несколько разрешенных медициной и ветеринарией препаратов от острой лучевой болезни (ОЛБ) (Владимиров В.Г. с соавт., 1997; Васин М.В. соавт., 2004; Киршин В.А., Бударков В.А., 1991; Зен-кин A.C., 2003; Bacq Z.M., 1965). В последние годы при изучении различных аспектов механизма противолучевого действия наметились новые перспективы в области терапии и профилактики радиационных поражений с использованием препаратов из веществ зоогенной, фитогенной и микробной природы (Авилов В.М., Киршин В.А. и др., 2001; Низамов Р.Н., Тарасова Н.Б., 2004; Конюхов Г.В. и др., 2005). При этом было установлено, что ключевым звеном многочисленных составляющих патогенеза ОЛБ является нарушение функции антиокси-дантной защиты (АОЗ) (Кудряшов Ю.Б., Гончаренко E.H., 1999; Лысенко Н.П. и др. 1999; Шатилов Н.В. и др., 2007), для коррекции которой предложены многокомпонентные смеси из апифитопродуктов (мед, прополис, фиточай из витаминных трав) (Бураев М.Э. и др., 2005) и кормовая добавка «Вита-Форце»

Иванов A.B., Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., 2008).

Учитывая, что радиозащитный эффект (РЗЭ) у сложных многокомпонентных препаратов из растительных, животных и микробных клеток значительно выше, чем у отдельных компонентов смеси (Кудряшов Ю.Б., Гончаренко E.H., 1999), исследованиями сотрудников ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» установлено, что сочетанное применение препаратов крови (сыворотка, глобулин) с фитоэкстрактами «Эра-Н» и «Вита-Форце», (Тарасова Н.Б., Нигматуллин И.Н., 2007) приводит к повышению радиозащитной активности отдельных компонентов. Однако при этом этом оставались окончательно нерешенные вопросы, касающиеся оптимальных соотношений компонентов, их совместимость при одновременном или раздельном применении. При этом открытым оставался также вопрос о возможности использования не менее ценной компоненты крови - эритроцитарно — трмбоцитарной массы, которая при изготовлении противорадиационного глобулина и сыворотки выбрасывалась как отход производства. Между тем известно, что эритроциты являются богатым источником анти-оксидантных ферментов (супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксида-зы), тиоловых антиоксидантов (SH-содержащих аминокислот: метионина, цис-теина) и неферментных антиоксидантов (аскорбата, а - токоферола) (Костого-рова С.А., 1999), а сочетанное применение эритроцитарно - тромбоцитарной массы с веществами микробного происхождения (например, антибиотиками), приводит к существенному повышению выживаемости летально облученных животных (Burns J., Evans С., 1988). Следовательно, создание многокомпонентной смеси из растительных и животных тканей и продуктов метаболизма микроорганизмов является теоретической основой для конструирования препарата - корректора функции АОЗ при радиационных поражениях, при которых РЗЭ сложных композиций связан с влиянием на организм не только одного, но и многих компонентов биологически активных веществ, находящихся подчас во взаимодополняющем или усиливающем взаимодействии, сбалансированных природой биогенных соединений (Кудряшов Ю.Б., Гончаренко E.H., 1999).

• составить многокомпонентную композицию на основе биологических ан-тиоксидантов;

• изучить влияние сконструированного препарата на организм;

1.3 Научная новизна. Впервые теоретически обоснована и практически подтверждена возможность использования веществ фитогенной, зоогенной и микробной природы для конструирования многокомпонентного средства с целью коррекции системы антиоксидантной защиты при радиационном поражении организма. Показано, что для первичной оценки антирадикальной активности потенциальных антиоксидантов оптимальной является in vitro тест-система, обеспечивающая экзогенную генерацию супероксидных радикалов и ингибирования их в присутствии испытуемых препаратов. В опытах на лабораторных и с.х. животных установлен высокий радиозащитный эффект сконструированного многокомпонентного средства «Эра-ЖМ», реализуемый по механизму перехвата и нейтрализации токсических продуктов модификации макромолекул и, блокируя тем самым, запуск радиоиндуцированного апоптоза.

Научная новизна исследований подтверждена патентом РФ № 2324361 от 20.05.2008г.

1.5 Основные положения, выносимые на защиту.

• скрининг корректоров оксидативной модификации молекул, вызванной ионизирующей радиацией;

• коррекция системы антиоксидантной защиты организма при лучевой патологии.

1.6 Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных научных сессиях учёного совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2005-2008 гг., на научно-практических конференции молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань, 2007-2008 г.), на Всероссийских научно-производственных и практических конференциях ФГУ ВПО «КГАВМ им Н.Э. Баумана» (г. Казань, 20062007 г.), Российской научной конференции Военно-медицинской академии (Санкт-Петербург, 2008 г.), Междунар. науч.-практ. конф. (Воронеж, 2008 г.). Результаты основных этапов работы подтверждены внутрилабораторными комиссионными испытаниями с положительной оценкой.

1.8. Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 150 страницах компьютерного текста, содержит 28 таблиц и включают общую характеристику работы, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, приложения. Список литературы включает 241 библиографических источника, в т.ч. 77 -зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Юнусов, Ильнар Расимович

6 ВЫВОДЫ

1. Разработаны оральная (в виде порошка) и инъекционная (в виде 10%-ного водно-этанолового экстракта) лекарственные формы фито- зоомикробной композиции «Эра-ЖМ», состоящей из 4 частей апипрепарата «Вита-Форце», 2 частей травяной муки, 2 частей тромбоцитарно-эритроцитарной массы (кровяной муки), 1 часть бентонита, 0,6 частей лиофилизированной культуральной жидкости В. ЬШскип и 0,4 части продуктов метаболизма Вас. эиЫШэ, обладающие адаптогенным, гемопро-тективным, иммуно-гемопоэзирующим, антиоксидантным и радиозащитным эффектами.

2. В опытах на белых мышах, белых крысах и крысятах, морских свинках установлено, что при пероральном и подкожном введении препарат является малотоксичным (ЛД50 для белых мышей 3039 мг/кг при пероральном и 2554 мг/кг — при подкожном введении), не обладает тератогенным, эм~ бриотоксическим и раздражающим действиями; в дозе 25 мг/кг (по сухому веществу) препарат оказывает лечебно-профилактическое действие на пораженных радиацией, а также стимулирующее действие на интактных животных.

3. При длительном (в течение 30 суток) скармливании препарата в дозе 0,1 г/кг корма у опытных животных наблюдалось увеличение живой массы на 13,2 %, привесов-на 16,9 %, гемоглобина-на 4,8 %, общего белка-на 8,9 %, лейкоцитов-на 4,5 %, эритроцитов-на 4,2 %, нейтрофилов-на 3 %, ти-мусного и селезеночного индексов-на 0,23 и 0,38 соответственно, имму-норегуляторного индекса (ТЬ/Тб) - в 1,17 раза.

4. Профилактическое пероральное применение препарата «Эра-ЖМ» в дозе 25 мг/кг на фоне 12 часового иммобилизационного стресса оказывает выраженное стресспротективное действие, уменьшая выраженность дегенеративных катаболических изменений во внутренних органах белых крыс, снижая концентрацию пероксирадикалов (МДА) на 20 % при одновременном повышении содержания антиоксидантных ферментов (СОД, КАТ) на 20 % соответственно.

5. Однократное подкожное введение инъекционной формы «Эра-ЖМ» в дозе 25 мг/кг (0,25 мл/кг) за 24 ч до и через 24 после летального облучения обспечивало выживаемость 75 % и 80 % животных соответственно при 100 % гибели контрольных (облученных) животных.

6. Повышение выживаемости летально облученных лабораторных и с.-х. животных (овец) на фоне лечебно-профилактического применения препарата «Эра-ЖМ» в дозе 25 мг/кг сопровождалось более легким клиническим течением острой лучевой болезни; меньшим угнетением содержания лейкоцитов (в 1,6 раза), эритроцитов (в 1,1 раза), лимфоцитов (в 1,5 раза) по сравнению с животными только облученных групп; предупреждением снижения активности антиоксидантных ферментов в 2,10 (СОД), 1,87 (КАТ) и 3,68 раза (ГП) при одновременном ингибировании концентрации супероксидных радикалов (МДА) в 2,14 раза, по сравнению с только облученными животными.

7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для лечения и профилактики радиационных поражений и коррекции системы антиоксидантной защиты облученного организма, в ветеринарную практику предложена многокомпонентная фитозоомикробная композиция «Эра-ЖМ», для подкожного в дозе 25 мг/кг (0,25мл/кг) и перорального (0,1 г/кг корма).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Юнусов, Ильнар Расимович, Казань

1. Авилов, В.М. Способ лечения радиационных поражений организма и способ получения препарата для лечения радиационных поражений организма /В.М. Авилов, В.А. Киршин, Р.Н. Низамов и др.// Патент РФ № 21695 72, А 61 К 35/28. Бюлл. № 18 27.06.2001.

2. Акоев, И.Г. Лучевое поражение млекопитающих и статистическое моделирование /И.Г. Акоев М.: Атомиздат, 1972. С. 190-246.

3. Акперова, Г.А. Модификация эффекта гамма облучения экстрактом из плодов киви /Г.А.Акперова // Тез. Докл. V-ro съезда по радиационным исследованиям — М.: - 2006 - т. 2. - Библиогр.: - с. 23.

4. Андрушенко, В.Н. Противолучевое действие веществ микробного происхождения /В.Н. Андрушенко, A.A. Иванов, В.Н. Маньцев // Радиац. Биол. Радиоэкол. 1996. - Т. 36. - Вып. 2. - С.185 - 207.

5. Аполонова, JI.А. Механизмы действия радиации малых доз и низкой интенсивности /Л.А. Аполонова // Тез. Докл. V-ro съезда по радиационным исследованиям М.: 2006 - т. 1. - Библиогр.: - с. 141.

6. Арчаков, А.И. Микросомальное окисление / А.И. Арчаков М. Наука, -1978.

7. Бак, 3. Основы Радиобиологии / 3. Бак, П. Александер. М., 1963.

8. Барабой, В.А. Перекисное окисление и радиация /В.А.Барабой, Е.Е. Чеботарев // Радиобиология. 1986. - Т. 26, - Вып. 5,6.

9. Барабой, В.А. Перекисное окисление и радиация /В.А.Барабой, В.Э. Орел, И.М. Каравух. Киев: Наукова думка, - 1991. - 256 с.

10. Барабой, В.А. Окислительно-антиоксидантный гомеостаз в норме и патологии /В.А. Барабой, Д.А. Сутковой. Киев: Наук. Дума, 1997. - 419 с.

11. Барабой, В.А. Стресс в развитии радиационного поражения. Роль регу-ляторных механизмов /В.А. Барабой, С.А. Олейник // Радиац. Биол. Ра-диоэкол. 1999. - Т. 39. - № 4. - С.431 -443.

12. Белоусова, О.И. Адаптация и система крови /О.И. Белоусова, П.Д. Горизонтов, М.И. Федотова. М.: - 1979. - 291с.

13. Брауштеин, А.Е. Процессы и ферменты клеточного метаболизма. /А.Е. Брауштеин. -М.: Наука, 1987. 44с.

14. Бураев, М.Э. Базовый комплекс биологически активных пищевых добавок и способ их применения для реабилитации облученных /М.Э. Бураев, О.Г. Макеев, В.В. Котомцев //Патент на изобретение №2004109896/13. Положительное решение на выдачу патента 10.10.2005.

15. Бурлакова, Е.Б. О специфичности действия излучения в процессе образования токсических продуктов в жирах /Е.Б. Бурлакова, Б.Г. Дзанкиев, Г.Б. Сергеев, Н.М. Эмануэль // Научн. докл. высш. шк. Сер. биол. 1960. -Т. 1. - № 1.-С. 145- 150.

16. Бурлакова, Е.Б. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты /Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпова // Усп. химии. 1985. - Т. 52.-№9.-С. 1540- 1558.

17. Бурлакова, Е.Б. Система окислительно восстановительного гомеостаза в радиационно-индуцированной нестабильности /Е.Б. Бурлакова, В.Ф. Михайлова, В.К. Мазурик // Радиац. биология. Радиоэкология. - 2001. -Т. 41.-№5.-С. 489-499.

18. Владимиров, Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран /Ю.А. Владимиров // Биофизика. 1987. - Т. 32. - № 5. - С. 830 - 844.

19. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в живых системах /Ю.А. Владимиров, O.A. Азизова, А.И. Деев и др. // Итоги науки и техники. Биофизика. 1991. - Т. 29. - С. 3 - 250.

20. Владимиров, Ю.А, Свободные радикалы и антиоксиданты /Ю.А. Владимиров // Вестн. РАМН. 1998. - № 7. - С. 43 - 51.

21. Владимиров, Ю.А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции /Ю.А. Владимиров // Соросовский Образовательный ж л. - 1999. - № 6. -С. 25-32.

22. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах /Ю.А. Владимиров // Соросов, образоват. ж л. - 2000. - Т. 6. - С. 13 -19.

23. Варфоломеев, С.Д. Простагландины новый тип биологических регуляторов /С.Д. Варфоломеев // Соросовский образовательный журнал. 1996. - № 1.-С. 40-47.

24. Веселова, М.В. Антиоксидантная активность полифенолов из Дальневосточных растения тиса одноконечного /М.В. Веселова, С.А. Федорова, H.A. Василевская и др. // Химико-фармац. Ж-л. 2007. - Т. 41. - №2. - С. 29-33.

25. Воскресенский, О.Н. Антиоксидантная система, онтогенез и старение /О.Н. Воскресенский, И.А. Жутаев, В.И. Бобырев, Ю.В. Безуглый // Вопр. мед. хим. 1982. - Т. 28. - В. 1. - С. 15 - 27.

26. Галицкий, Э.А. Влияние внутреннего ионизирующего излучения на содержание липидов в различных тканях крыс /Э.А. Галицкий, М.И. Сяле-вич // Изд. АН Беларуси. Серия биол. наук. 1992. - № 3 - 4. - С. 43 - 46.

27. Гамалей, И.А. Перекись водорода как сигнальная молекула /И.А. Гамалей, И.В. Клюбин // Цитология. 1996. - 38 (12) С. 1233 - 1248.

28. Гацко, Г.Г. Перекисное окисление липидов в крови облученных крыс /Г.Г. Гацко, JI.M. Мажуль, О.В. Шаблинский, А.Р. Гаврилова, В.Р. Валы-хина // Вести АН Беларуси. Серия биол. наук, 1989. - № 5 - 6. - с. 106 -108.

29. Гамалей, И.А. Перекись водорода как сигнальная молекула /И.А. Гамалей, И.В. Клюбин // Цитология. 1996. - Т. 38. - № 12. - С. 1233 - 1248.

30. Гончаренко, E.H. Химическая защита от лучевого поражения /E.H. Гон-чаренко, Ю.Б. Кудряшов. М. - 1985. —

31. Горлов, И.Ф. Способ получения пищевых биологической добавки /И.Ф.Горлов, Т.В. Кареичная, A.A. Маслов и др. // Патент РФ №2220616 -2002.

32. Григлевски, P.E. Участие свободных радикалов в преображениях эндо-телиального простациклина и окиси азота /P.E. Григлевски // Новости фармации и медицины 1997. - № 1 - 2. - С. 2 — 8.

33. Гусев, В.А. Супероксидный радикал и супероксиддисмутаза в свободно-радикальной теории старения /В.А. Гусев, Л.Ф. Панченко // Вопр. мед. хим. 1982. - Т. 28. - В. 4. - С. 8 - 25.

34. Давыдов, Б.И. Ионизирующие излучения и мозг: поведенческие и структурно-функциональные котерны /Б.И. Давыдов, И.Б. Ушаков // Итоги науки и техники. Радиац. Биол. М.: ВИНИТИ. - 1987. - т. 8. - 336 с.

35. Дегтярева, И.И. Уровень перекисного окисления липидов и концентрация витамина Е при лечении больных язвенной болезнью /И.И. Дегтярева, Э.Ц. Тотева, Э.В. Литинская и др. // Клин. Мед. 1991. - № 7. - С. 38 -42.

36. Долгушин, И.И. Роль нейтрофилов в регуляции иммунной реактивности и репаративных реакциях поврежденной ткани. /И.И. Долгушин, A.B. Зурочка, A.B. Чукичев и др. // Вестн. РАМН. 2000. - № 2. - С. 14 - 17.

37. Дубинина, Е.Е. Фундаментальные и прикладные системы современной биохимии /Е.Е. Дубинина. Санкт - Петербург. - 1998. - В. 2. - С. 386 -398.

38. Дубинина, Е.Е. Роль активных форм кислорода в метаболизме тканей при состояниях стресса /Е.Е. Дубинина // Вопр. мед. хим. 2001. - Т. 47. - № 6. - С. 561 -581.

39. Жаворонок, Т.В. Механизм антиперекисной защиты и системы глутати-он /Т.В. Жаворонок, О.Л. Носарева, А.П. Помогаева //Эпидемиология и инфекционные болезни. 2006. - №2. С. 28 - 31.

40. Журавлев, А.И. Развитие идей Б.Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии /А.И. Журавлев // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука, - 1982. - С. 3 - 36.

41. Зинчук, В.В. Роль кислородсвязывающих свойств крови в содержании прооксидантно антиоксидантного равновесия организма /В.В. Зинчук, М.В. Борисюк // Тр. Грудненского мед. ин-та. - Гродно, - 1999. - Т. 17. -С. 1 - 14.

42. Иванов, A.B. Натуральная биологически активная кормовая добавка «Вита-Форце» /A.B. Иванов, Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов и др. // Патент РФ № 2 324 361, А 23 К 1/00 Бюлл № 14. 10.10.2006.

43. Иванов, A.B. Способ получения препарата для профилактики или лечения радиационных поражений организма /A.B. Иванов, Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов и др.// Патент РФ № 2 338 546 А 61 К 36/00, 3/64, А 61 Р 39/06. Бюлл. № 32. 20.11.2008.

44. Ильин, Л.А. Лечебно-профилактические свойства низкомолекулярного хитозана при экспериментальном лучевом поражении /Л.А. Ильин, Андрианова И.Е., Глушков В.А. и др. // Радиац. Биол. Радиоэкол. 2004. -Т.44. - № 5 - С. 547-549.

45. Каган, В.Е. Проблема анализа эндогенных продуктов ПОЛ /В.Е. Каган, О.Н. Орлов, Л.Л. Прилипко. М.: ВИНИТУ, серия биофизика. - 1986. -197 с.

46. Калмыкова, В.И. Антиоксиданты в терапии атеросклероза /В.И. Калмыкова // Биоантиоксиданты в регуляции метаболизма в норме и патологии. Москва; Черноголовка, - 1978. - С. 22.

47. Камышников, B.C. Справичник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. /B.C. Камышников М.: МЕДпресс-информ - 2004. - 920 с. ил. С. 579 - 585.

48. Капелько, В.И. Активные формы кислорода, антиоксиданты и профилактика заболеваний сердца /В.И. Капелько // Русский медицинский журнал.-2003.-Т. 11.-№21.-С. 11-21.

49. Карпенко, Л.Ю. Состояние антиоксидантной системы при нефронатиях. /Л.Ю. Карпенко, A.A. Бахта // Материалы 14-го международного московского конгресса по болезням мелких домашних животных. 22 24 апреля 2006. - Москва - С. 36.

50. Кемертелидзе, Э.П. Химический состав и фармакологическая активность растений /Э.П. Кемертелидзе, В.Н. Сыров, М.Д. Алания и др. // Химико-фармац. Ж-л. 2008. - Т. 42. - №6. - С. 28 - 31.

51. Кеэп, Т.В. О физико-химических изменениях в липидной фазе ядерных мембран на начальной стадии радиационного поражения /Т.В. Кеэп, Н.В. Архангельская, Ю.И. Дахер // Инф. Бюлл. Научн. Сов. АН СССР по пробл. Радиобиол. 1983. - № 27. С. 61.

52. Клебанов, Г.И Клеточные механизмы праиминга и активации фагоцитов. /Г.И. Клебанов, Ю.А. Владимиров // Успехи совр. биол. 1999. - В. 119.- № 5. С. 462-475.

53. Кожокару, А.Ф. Исследование механизма действия радиации и некоторых радиопротекторов с помощью комплексного биофизического экспресс-метода/ А.Ф. Кожокару // Тез. Докл. У-го съезда по радиационным исследованиям М.: - 2006. - т. 2. - Библиогр.: - С. 39.

54. Коломийцева, И.К. Радиационная биохимия мембранных липидов. /И.К. Коломийцева. -М.: Наука, 1989. - 181 с.

55. Кольтовер, В.К. Надежность ферментативной защиты клетки от супероксидных радикалов и старение. /В.К. Кольтовер // Докл. АН СССР. — 1981.-Т. 256.-С. 199-202.

56. Кольтовер, В.К. Детерминированнная надежность ферментов и стохастическая природа старения. /В.К. Кольтовер // Надежность биологических систем. Киев: Наукова думка. - 1985. - С. 148 - 161.

57. Кольтовер, B.K. Свободнорадикальная теория старения /В.К. Кольтовер // Усп. геронтол. 2000. - Т. 3. - Вып. 4. - С. 273 - 280.

58. Кольтовер, В.К. Свободнорадикальная теория старения /В.К. Кольтовер // Усп. геронтол. 2002. - Т. 3. - С. 38 - 49.

59. Кондрахин, И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики /И.П. Кондрахин, A.B. Архипов, В.И. Левченко и др. // Справочник М.: Колос, - 2004. - № 4. - 520 с.

60. Кондрусев, А.И. Витамины и ионизирующая радиация /А.И. Кондрусев, В.Б. Спиричев, К.С. Чертков, Т.В. Рымаренко // Вопросы питания. -1990. -№1.-С.4-12.

61. Кудряшов, Ю.Б. Гончаренко E.H. Роль биологически активных веществ (радиотоксинов) в лучевом поражении /Ю.Б. Кудряшов E.H. Гончаренко // Радиобиология. 1980. - Т. 10. - № 2. - С. 212 - 229.

62. Кудряшов, Ю.Б. Роль липидных радиотоксинов в лучевого токсического эффекта /Ю.Б. Кудряшов // Инф. бюлл. радиобиол. 1985. - Вып 31. - С. 20-21.

63. Кудряшов, Ю.Б. Лучевое поражение «критические системы» /Ю.Б. Кудряшов // Лучевое поражение: Сборник Под ред. Ю.Б. Кудряшова М.: Изд-во МГУ, - 1987. - С. 3 - 72.

64. Кудряшова, Н.Ю. Влияние ионизирующих излучений на ДНК мембранные комплексы /Н.Ю. Кудряшова // Лучевое поражение. - М: Изд-во МГУ., - 1987. - С. 93 - 98.

65. Кудряшов, Ю.Б., Гончаренко E.H., Роль радиотоксинов в реализации лучевого поражения /Ю.Б. Кудряшов, E.H. Гончаренко // Инф. биол. радиобиол. 1984. - В. 30. - С. 3 - 5.

66. Кудряшов, Ю.Б. Лучевое поражение «критические системы» /Ю.Б. Кудряшов // Лучевое поражение: Сборник Под ред. Ю.Б. Кудряшова М.: Изд-во МГУ, 1987. - С. 3 - 72.

67. Кудряшов, Ю.Б. Современные проблемы противолучевой химической защиты организмов /Ю.Б. Кудряшов, E.H. Гончаренко // Радиол. Биол. Радиоэкол. 1999. - Т. 39. - № 2 - 3. - С. 197 - 211.

68. Кузин, A.M. Структурно метаболическая теория в радиобиологии /A.M. Кузин. - М.: Наука. - 1986. - 284 с.

69. Кузин, A.M. Особенности механизма действия радиации на биоту в любых благоприятных для нее дозах /A.M. Кузин. Пушино: Ин - т. биол. физики. — 1989. - 23 с.

70. Кузин, A.M. Ведущие механизмы радиационного организма /A.M. Кузин // Изв. АНСССР., сер. биол. 1993. - № 6. - С. 824 - 832.

71. Кузин, A.M. Идеи радиационного организма в атомном веке /A.M. Кузин. -M.: Наука, 1995. - 158 с.

72. Кузин, A.M. Нативный белок возбужденный у -радиацией в малых дозах как источник вторичных биогенных излучений /A.M. Кузин, Г.Н. Сурки-нова, А.Ф. Ревин // Радиац. блок. Радиоэкол. 1996. - Т. 36. - В. 2. - С. 224-280.

73. Кузин, A.M. Вторичное биогенное излучение у облучений крови человека /A.M. Кузин, Г.Н. Суркинова, A.B. Будоголовский и др.// Рад. биол. Радиоэкол. - 1997. - Т. 37. - Вып. 6. - С. 134 - 138.

74. Кулинский, В.И. Успехи соврем, биологии /В.И. Кулинский, JI.C. Колесников. 1990. - Т. 110. - Вып. 1(4). - С. 20 - 33.

75. Кулинский, В.И. Метаболизм активных форм кислорода /В.И. Кулинский, JI.C. Колесников // Успех соврем, биол. 1993. - Т. 113. - В. 1. - С. 107-122.

76. Кулинский, В.И. Лекционные таблицы по биохимии /В.И. Кулинский // Биохимия регуляции. Иркутск: Иркут. мед. ин-т, 1994. - Вып. 4. - 94 с.

77. Кулинский, В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита /В.И. Кулинский // Соросов, образоват. ж л. - 1999. - № 1. - С. 2 - 7.

78. Ланкин, В.З. Роль свободных радикалов при различных формах патологии /В.З. Ланкин // Укр. биохим. журнал. 1984. - Т. 56. - № 3. - С. 317 -331.

79. Литвинова, Е.Т. Исследование активности СОД при лучевом поражении и в условиях различной природной и модифицированной радиорезистентности организмов /Е.Т. Литвинова // Автореф. дис.канд. биол. наук. -~М. 1985.

80. Лукьянова, Д.Л. Кислородзависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние /Д.Л. Лукьянова, А.Т. Уголев. М., - 1982. - 221 с.

81. Лю, Б.Н. Мембранотоксическая активность неоплазмы как один изпато-генетических факторов изменения клеток крови и опухолевого роста /Б.Н. Лю // Пат. физиол. и экстер. теория 1987. - В. 1. - С. 86 - 92.

82. Маркелов, Д.А. Сравнительное изучение адсорбентной активности медицинских сорбентов /Д.А. Маркелов, О.В. Ницак, И.И. Геращенко // Химико-фармац. Ж-л. 2008. - Т. 42. - №7. - С. 30 - 33.

83. Машковский, М.Д. Лекарственные средства М.Д. Машковский Пособие для врачей. Том 1-2. 14-е издание, переработанное исправленное и дополненное. Москва, «новая волна» - 2000.

84. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге /А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск, Наука, - 1989.

85. Меерсон, Ф.З. физиология адаптационных процессов /Ф.З. Меерсон. -М.: Наука, 1986. - С. 77 - 123.

86. Меньшикова, Е.В. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов /Е.В. Меньшикова, Н.К. Зинков // Усп. сов. биол. — 1993. Т. 113. - № 4. - С. 442 - 453.

87. Морозов, В.П. Перекисное окисление липидов в крови и тканях у боль-ных-язвенной болезнью /В.П. Морозов, В.Г. Перелыгин, В.М. Савранский и др. // Клин. мед. 1992. - №2. - С. 75 - 77.

88. Нейфах, Е.А. Чернобыльский биохимико-физический патогенный синдром и его соматические последствия/ Е.А. Нейфах // Тез. Докл. V-ro съезда по радиационным исследованиям М.: - 2006 - Т. 1. - Библиогр.: - С. 159.

89. Нейфах, Е.А. Радиотехногенная акселерация старения и его нормализация биоантиоксидантами/Е.А. Нейфах, Г.К. Люман // Тез. Докл. V-ro съезда по радиационным исследованиям М.: 2006 - т. 1. - Библиогр.: С. 160.-М.: 2006.

90. Никитченко, Ю.В. Влияние у-излучения и алиментарных факторов на прооксидантную систему печени и крови крыс /Ю.В. Никитченко, В.И. Падалко, В.Н. Ткаченко и др. // Радиац. Биол. Радиоэкол. 2008. - Т.48. -№ 2 - С. 171-176.

91. Николаева, И.Г. Разработка растительного средства обладающего стресспротективныем действием /И.Г. Николаева // Химико-фарм. ж-л. -2007, т.41. - №11. - С.43-45.

92. Обухова, JI.K., Эмануэль Н.М. Роль свободнорадикльных реакций окисления в молекулярных механизмах старения живых организмов /Л.К. Обухова, Н.М. Эмануэль // Успехи химии. 1983. - Т. 52. - С. 353 -372.

93. Обухова, Л.К. Вклад академика Н.М. Эмануэля в развитие отечественной геронтологии: свободнорадикальные механизмы в процессе старения. /Л.К. Обухова // Успехи геронтологии. 1999. - Т. 3. - С. 27 - 31.

94. Оганесян, Н. М. Применение антиоксидантных препаратов при лучевых поражениях /Н.М. Оганесян, И. Эмери, A.C. Погосян, А.К. Абрамян, К.В. Асрян // Тез. Докл. 3-го съезда по радиационным исследованиям — Пушино.: 1997 - Т. 1. - Библиогр.: - С. 201.

95. Олейников, Д.Н. Методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов в листьях подорожника большого /Д.Н. Олейников, Л.М. Танхаева // Химико-фармац. Ж-л. 2008. - Т. 42. - №4. - С. 40-42.

96. Оксенгендлер, Г.И. Человек и противоокислительные вещества Г.И. Ок-сенгендлер. Л.: Наука, 1985. - 230с.

97. Ормацадзе, Г.Л. О механизмах радиационного поражения эритроцитов /Г.Л. Ормацадзе // Радиац. Исслед. 1989. - № 5. - С.5-17.

98. Осипов, А.Н. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита железа /А.Н. Осипов, Э.Ш. Якутова, Ю.А. Владимиров // Биофизика. 1993. - Т. 38. - № 3. - С. 390 - 396.

99. Первичные радиобиологические процессы/ Под ред. Н.В. Тимофеева -М.: Атомиздат, 1973. - 297 с.

100. Пескин, A.B. Взаимодействие активного кислорода с ДНК /A.B. Пескин //Биохимия. 1997. - Т. 62. - № 12. - С. 1571 - 1578.

101. Петренев, Д.Р. Отдаленные эффекты воздействия ионизирующего излучения, роль активации фагоцитов /Д.Р. Петренев, Д.В. Сухарева, О.В.

102. Лукьяненко, Д.А. Господарев // Тез. Докл. V-ro съезда по радиационным исследованиям М.: - 2006 - Т. 1. - Библиогр.: - С. 109.

103. Петрик, O.A., Васильев А.Н. Состояние перекисного окисления липидов в лимфоцитах гвинейских свинок в условиях лучевого поражения /O.A. Петрик, А.Н. Васильев // Врач. дело. 1992. - № 4. - С. 52-53.

104. Петров, Е.Е. Антиоксидантная обеспеченность организма и перекисное окисление липидов у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки /Е.Е. Петров // Врач. дело. 1996. - № 7. - С. 15-17.

105. Петухова, Н.М. Изучение биологической активности масляного экстракта яснотки белой /Н.М. Петухова, A.B. Бурякина, Е.Л. Авенирова и др. // Химико-фармац. Ж-л. 2008. - Т. 42. - №6. - С. 43 - 45.

106. Плехова, Н.Г. К вопросу о взаимодействии нейтрофилов и макрофагов в системе антиинфекционной защиты /Н.Г. Плехова, Л.М. Исачкова // Журн. микробиол. 1997. - № 5:- С. 70-73.

107. Плехова, Н.Г. Бактерицидная активность фагоцитов /Н.Г. Плехова // ШМЖ. 2006. - №6. - С. 89 - 96.

108. Поставный, В.Е. Состояние перекисного окисления липидов у больных хроническим гастритом /В.Е. Поставный // Врач. дело. 1998. - № 1. - С. 86-88.

109. Прайор, У. Роль свободнорадикальных реакций в биологических системах /У. Прайор // Свободные радикалы в биологии. М.: Мир, - 1979. -Т. 1.-С. 13-67.

110. Проданчук, Г.Н. Окислительный стресс в формировании гемолитической анемии при токсическом воздействии гидроксиламина /Т.Н. Проданчук, Г.М. Балан // Совр. проблемы токсикол. 2003. - № 3. - С. 71 - 76.

111. Разоренова, В.А. Результаты и перспективы применения веществ микробного происхождения /В.А. Разоренова, В.Н. Мальцева, И.Е. Андрианова и др. // Бюл. Радиац. Мед. 1978. С. 21 - 32.

112. Рубина, Х.М. Биохимия эритроцитов /Х.М. Рубина // Физиология системы крови. Л.: Наука, 1987. - С. 211 - 232.

113. Руднева, И.И. Ответные реакции антиоксидантной системы морских гидробионтов на действие гамма-облучения/И.И. Руднева // Тез. Докл. V-ro съезда по радиационным исследованиям М.: - 2006. - Т. 2. - Биб-лиогр.: - С. 141.

114. Рыскулова, С.Т. Радиационная биология плазматических мембран /С.Т. Рыскулова. М.: Энергоатомиздат - 1986.

115. Рябченко, Н.И. Радиация и ДНК /Н.И. Рябченко. М., 1979.

116. Савич, A.B. Радиационно-химические превращения и радиочувствительность биологических макромолекул /A.B. Савич // Лучевое поражение. -М.: Изд-во МГУ, 1987 - С. 73 - 83.

117. Сала, A.C. Биохимия /A.C. Сала. М. - 1998. - Т. 63. - № 1.-С. 101-110.

118. Саркиз, Я.И. Хемилюминисценция крови при радиационном воздействии /Я.И. Саркиз, H.A. Дружина, А.Н. Криенко, И.О. Павленко, И.Ф. Плумукова. Киев: Наукова Думка, - 1989. -173 с.

119. Семенов, H.H. Цепные реакции /H.H. Семенов. М.: Наука, - 1986. - 535 с.

120. Сизова, Н.В. Содержание антиоксидантов в экстрактах растительного сырья, полученных методом сверкритеических экстракции /Н.В. Сизова, И.Ю. Попова // Химико-фарм. ж-л. 2006. - Т.46. - № 4. С. 29-33.

121. Скулачев, В.П. Нефосфорилирующее дыхание как механизм, предотвращающий образование активных форм кислорода /В.П. Скулачев // Молекулярная биология. 1995. - Т. 29. - № 6. - С. 1199 - 1209.

122. Скулачев, В.П. Кислород в живой клетке: Добро и зло /В.П. Скулачев // Соросовск. Образоват. журнал. 1996. - № 3. - С. 4 - 10.

123. Скулачев, В.П. Феноптоз: Запрограммированная смерть организма /В.П. Скулачев // Биохимия. 1999. - Т. 64. - № 12. - С. 1679 - 1688.

124. Соколовский, В.В. Тиоловые антиоксид анты в молекулярных неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие /В.В. Соколовский // Вопр. мед. хим. 1988. - Т. 34. - В. 10. - № 4. - С. 2. - 11.

125. Тарусов, Б.Н. Первичные процессы лучевого поражения /Б.Н. Тарусов. -М.: Госатомиздат, 1962. - С. 96.

126. Тимочко, М.Ф. Особенности кислородного баланса в эстремальных условиях /М.Ф. Тимочко, Я.И. Алексеевич, Ю.Г. Бобков и др. // Hypoxia Medical J. 1996. - № 3. - С. 8 - 12.

127. Турпаев, К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов /К.Т. Турпаев // Биохимия. 2002. - Т. 67. - Вып. 3. - С. 339 - 352.

128. Уманский, С.Р. Генетическая программа клеточной гибели /С.Р. Уман-ский // Усп. сво. биол. 1982. - Т. 93. - В. 1. - С. 139 - 148.

129. Фоменко, Б.С. Радиобиология /Б.С. Фоменко, Акоев И.Г. М.: - 1984. Т. 24. Вып 1.

130. Фролкис, Б.В. Экспериментальные пути продления жизни /Б.В. Фролкис, Х.К. Мурадян. Л.: Наука, - 1988. - 248 с.

131. Хаитов, P.M. Современные представления о защите организма от инфекции /P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. - № 1.- С. 61 -64.

132. Хансон, К.П. Молекулярные механизмы радиологической гибели клеток /К.П. Хансон, В.Е. Комар. -М.: Энерго. издат. 1985. - 148 с.

133. Хансон, К.П. Роль апоптоза в старении и возрастной патологии. /К.П. Хансон // Успехи геронтологии. 1999. - Вып. 3. - С. 103 - 110.

134. Хафизов, А.Ш. Изыскание радиозащитных препаратов из класса веществ микробногопроисхождения /А.Ш. Хафизов // Автореф. Канд. Дисс. Казань., 2007. - 23 с.

135. Хочачка, П. Биохимическая адаптация П. Хочачка, Дж. Семеро. М.: Мир, - 1988.-568 с.

136. Щербова, E.H. Роль кроветворных и сосудистои систем в костномозговой гибели животных /E.H. Щербова // Инф. бюлл. радиобиол. 1984.1. B. 30.-С. 21-22.

137. Щербова, E.H. Причины вызванных различий в радиочувствительности млекопитающих /E.H. Щербова // Лучевое поражение. М.: Изд-во МГУ, - 1987.-С. 138-148.

138. Шатилов, A.B. Роль антиоксидантов в норме и патологии /A.B. Шатилов, О.Г. Богданова, A.B. Коротов // Ветеринарная патология. 2007. - № 2.1. C. 207-211.

139. Штаркман, И.Н. Антиоксидантные свойства свободных радикалов в растворах белка и аминокислот под воздействием рентгеновского излучения и др. /И.Н. Штаркман, C.B. Гудков, A.B. Черников, В.И. Брусков // Тез.

140. Докл. V-ro съезда по радиационным исследованиям М.: - 2006. - Т. 1. -Библиогр.: - С. 48.

141. Эйдус, JI.X. Кислород в радиобиологии /JI.X. Эйдус, Ю.Н. Корыстов. -М.:- 1984.-337 с.

142. Эмануэль, Н.М. Цепные реакции окисления углеводородов в жидкой фазе /Н.М. Эмануэль, Е.Т. Денисов, З.К. Майзус. М.: Наука, - 1965. - 376 с.

143. Эмануэль, Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов /Н.М. Эмануэль. М. - 1977. - 207 с.

144. Arena, V. Ionizing Radiation and Life. /V. Arena // Sf. Lois, 1971. - P. 444.

145. Alper, T. Nature /Т. Alper. 1968. - V. 217. P. 862 - 864.

146. Ames, B.N. Oxidants antioxidants and the degenerative diseases of aging /B.N. Ames, M.K. Shigenaga, T.M. Hägen // Proc. Natl. Acad. Sei USA. -1993. - Vol. 90. - № 17. - P. 7915 - 7922.

147. Babior, B.M. Investigating antibody catalyzed ozone generation by human neutrophils. /В.М. Babior, C. Takeuchi, J. Ruedi et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. - USA. - 2003. - V. 100. - P. 3031 - 3034.

148. Bagchi, D. Molecular mechanisms of cardioprotection by a novel grape seed proanthocyanidin extract /D. Bagchi, CK. Sen, SD. Ray, DK. Das, M. Bagchi, HG. Preuss, JA. Vinson // Mutat Res 2003. - V. 523 - 524.- P. 87 - 97.

149. Beckmann, J.S. Nitric oxide, superoxide and peroxynitrie: the good, the bad and ugly. /J.S. Beckmann, W.H. Koppenol // Am. J. Physiol. 1996. - V. 271. -P. 1424-1437.

150. Borregaard, N. Granules of the human neutrophilic polymorphonuclear leukocytes. /N. Borregaard, J.B. Cowland // Blood. 1997. - V. 89. № 10. - P. 3503 -3521.

151. Bors, W. The basis of free radicals pathology /W. Bors, Ch. Michel, M. Saram, E. Longtelder // Biochim. biophys. Acfa. 1978. - V. 540. - № 1. - P. 162-172.

152. Bray, S.E. The Challenge of p53. Linking Biochemistry, Biology, and Patient Management /S.E. Bray, C. Schort, P.A. Hall // Stem Cells. 1998. - V. 16. -№4.-P. 248-260.

153. Burgner, D., Rockett K., Kwiatkowski D. Nitric oxide and Infectious diseases /D. Burgner, K. Rockett, D. Kwiatkowski // Arch. Dis. Child. 1999. - V. 8. -№2.-P. 185- 189.

154. Boveris, A. The mitochondrial generation of hydrogen peroxide. General properties and effect of hyperbaric oxygen /A. Boveris, B. Chance // Biochem. J. 1973. - V. 134. - № 3. - P. 707 - 716.

155. Chozaskin, E. Antioxidants in health and dissase /E. Chozaskin // J. Am. Op-tom Assoc. 1996. - V. 67. - № 1. - P. 50 - 57.

156. Commoner, B. Free radicals in biological material /B. Commoner, J. Tom-nend, G.E. Pake // Nature. 1954. - V. 174. - P. 689 - 691.

157. Cryns, V., Yuan J. Proteases to die for /V. Cryns, J. Yuan // Gen. Devel. -1998. V. 12. - № 11. - P. 1551-- 1570.

158. Dean, R.T. Reactive Oxygen and Nifrose in Biology and Medicine /R.T. Dean, Sh. Fu, R. Stocker, MJ. Davies // Biochem J. 1997. - Vol. 324. - № l.-P. 1-18.

159. Dean, R.T. Radiation induced mutations in unirradiatioeeds DNA /R.T. Dean, Sh. Fn, R. Stocker, M.E. Davies // Riachem. J. 1997. - Vol. 324. - № 1. - P. 1-18.

160. Demopoulos, H.B. The basis of free radical pathology /H.B. Demopoulos // Fed. Proc.,- 1973.-V. 32.-N8.-P. 1859- 1861.

161. Demopoulos, H.B. The free Radical pathology and the microcirculation in the major central nervous system disorders /H.B. Demopoulos, E.S. Flamm, D.D. Pretronigro et al.// Acta Physiol Scand. 1980. - V. 492. - P. 91 - 119.

162. Druge, W. Free radicals in the physiological control of cell function . /W. Drage // Physiol. Rev. 2002. - V. 82. - № 1. - P. 47 - 95.

163. Engler, C. Sanerstoff radikale: Pathopysioloqie, klinische Relevanz and Therapie /C. Engler, W.Wild // Berl. Df. Chim. ges. 1897. - V. 30. - P. 1669-1686.

164. Franke, W.Z. Antioxidation der ungesattigen Fettsauren. Justus Liebige /W.Z. Franke // Ann. Chem., - 1932. - V. 498. - № 213. - P. 129 - 165.

165. Fridovich, I. Superoxide dismutases and related watters /1. Fridovich // J. Biol. Chem. 1970. - V. 245. - P. 4053 - 4057.

166. Fridovich, I. Superoxide anion radical (02 radical - anion), superoxide dismutases and related matteres /1. Fridovich // J. Biol. Chem. - 1997. - V. 272. — P.48515 — 18517.

167. Fridovich, I. Superoxide discusitase I. Fridovich // Ann. Red. Biochem. -1975.-V. 44.-P. 147- 159.

168. Friedman, M. The Chemistry and Biochemistry of the Sulfhydril Group in Animo Acida. /M. Friedman // Depticles and Protein. — Oxford, 1973. - 2931. P

169. Galley, H.F. Total antioxidant capacity and lioid peroxidation luring liver trancplantation /H.F. Galley, N. Richardson, P.D. Howdle et al. // Clin. Sei. Colch. 1995. - V. 89. - № 3. - P. 329 - 332.

170. Gaziano, J.M. Antioxidants in cardiovascular disease /J.M. Gaziano // ran- , domized trials. Nutrition 1996. - V. 12 - № 9. P. 583 - 588.

171. Getteridge, J.M.C. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of tissue damage /J.M. Getteridge // Clinical Chemistry. 1995. - V. 41. - № 12. - P. 1819-1828.

172. Ghiselli, A.D. The antioxidant potential of the Mediterranean diet. /A.D. Ghiselli, A. Amicis, A. Giacosa// Eur J Cancer Rpev 1997 V. 6. Suppl P. 15 -19.

173. Gilhert, D.L. Effect of various substances on survival times of mice to deffer-ent high oxigen tensions /D.L. Gilhert // Am. J. physiol. 1958. - V. 192. - № 3.-P. 563-571.

174. Gilhert, D.L. The role of prooxidants and antioxidants in oxiqen toxicity /D.L. Gilhert // Rad. res. 1963. - № 3. - P. 44 -51.

175. Gilbert, D.L. (ed.).Oxygen and Living Processes /D.L. Gilbert // An interdisciplinary approach. New York: Springer - Verlag, - 1981. - 401 p.

176. Goscin, S.A. Superoxide anion radical, superoxide dismutase, and refated matters /S.A. Goscin, I. Fridovich // Rad. Res. 1973. - V. 56. - P. 565 - 569.

177. Guest, J.R. The Leeuwenhoek, 1995. Adaptation to life wi thout oxygen /J.R. Guest // Phill. Trans. R. Soc. Lond. B. 1995. - V. 350. - P. 189 - 202.

178. Harman, D. Aging: A theory based on free radicals and radiation chemisry. /D. Harman // J. Gerontol. 1956. - V. 11. - P. 298 - 300.

179. Harman, D. The biological clock: The mitochondria? /D. Harman // J. Geriatrics. Soc. 1972. - V. 20. - P. 145 - 147.

180. Harman, D. Free radical theory of aging: Beneficial efects of adding antioxidants to the material mouse diet on the life span of offspring; possible explanation of the sexx difference in longevity. /D. Harman // Age. 1979. - V. 2. -P. 109- 122.

181. Harman, D. Free radical theory of aging: History. /D. Harman // Free Radicals and Aging (ed. I.Emerit and B. Chance). Basel: Birkhauser, - 1992. - P. 1 -10.

182. Harman, D. Aging: Minimizing free radical damag. /D. Harman // J. Anty -Aging Medicine. 1999. - V. 2. - P. 15 - 36.

183. Harris, E.D. Regulation of antioxidant enzymes /E.D. Harris // FASEB J. -1992. V. 6. - № 9. - P. 2675 - 2683.

184. Hartwell, L.H. From molecular to modular cell biology /L.H. Hartwell, J.J. Horfield, S. Leibler, A.W. Murray, // Nature. 1999. - V. 402. - № 6761. Suppl. - P. 47-52.

185. Hartz, J.W. Radiosensytive depedense of human tissue of superoxide dismutase concentration /J.W. Hartz, H.E. Deutsch, S. Funakosi // Clin. chim. Acfa. 1973. - V. 46.-P. 125-132.

186. Hassan, H.M. Free radicals in- molecular biology, aging and disease /H.M. Hassan // Ed.by D.Armstrong et.al. New York: Raven press, 1984. - P.77-86.

187. Haunstetter, A. Apoptosis. Basic mechanisms and implications for cardiovascular desease /A. Haunstetter, S. Izumo // Circulât. Res. 1998. - V. 81. - № 11.-P. 1111-1129.

188. Hayashi, O. Biochemical and Medical Aspecs of Active Oxyqen /0. Hayashi, K.A. Azada Balti. - 1977. - P. 209 - 225.

189. Ju, S.T. Molecular and cellular mechanisms regulating T and B cell apoptosis through fas FasL interaction /S.T. Ju, K. Matsui, M. Ozdemirli // Int. Rev. Immunol. 1999. - V. 18.-№5-6.-P. 485-513.

190. Koltover, V.K. Reliahility concert as a frend in biophysics of aqing /V.K. Kol-tover // J. Theor. Riol. 1997. - V. 184. - № 2. - P. 157 - 163.

191. Kritharides, L. The use of antioxidant supplement sincoronary heart disease. /L. Kritharides, R. Stocker // Athorosclerosis 2002; V. 164.- № 2. - P. 211 -219.

192. Landa, H.M. Free Radicals in the Brian. Aging, Nevrological and Mental Disordas /H.M. Landa // FASEB J. 1997. - Vol. 11. - № 1. - P. 118 - 104.

193. Lea, D.E. Direct and inderect actions of radiation on viruses and enzymes: the foxic action and oxidation in the cell /D.E. Lea // Brid. J. Radiol. 1968. -Vol. 11.-P. 489-492.

194. Lollike, K., Kjeldsen L. et. al. Lysozyme in human neutrophils and plasma. A parameter of myelopoietic activity. /K. Lollike, L. Kjeldsen et. al. // Leukemia. 1995, - V. 9.-P. 159-171.

195. Marini, F. Laltra faccia dellossigeno /F. Marini, S. Radin, P. Tenchini et. al. // Chir. ital. 1985. - V. 37. - № 5. - P. 517 - 524.

196. McCord, J.M. Oxidative stress and superoxide dismutase /J.M. McCord, I. Fridovich // J.Biol. Chem. 1969. - V. 244. - P. 6049 - 6055.

197. McCord, J.M. Superoxide and Superoxide Dismutases. /J.M. McCord // Sience New York. 1974. - V. 185. - P. 529 - 531.

198. McCord, J.M. Superoxide radicalcontroversises, contradiction and paradoxes /J.M. McCord // Proc. Soc.Exp. Biol. Med. 1995. - V. 209. - № 2. - P. 112 -117.

199. Meek, D.W. New development in the multi — site phosphorylation and integration of stress signalling at p53 /D.W. Meek // Int. J. Radiat. Biol. 1998. -V. 74. - № 6. - P. 729 - 737.

200. Misra, H.P. The role of superoxide dismutases in radioresistence of E. coli /H.P. Misra, W.S. Fridovich // Acfa Biocheem. 1976. - V. 176. - P. 481 -577.

201. Petkau, A. Effects of superoxide dismutase on zadorasistance of E. coli /A. Petkau, W.S. Chelack // luf. J. Rad. Biol. 1974. - V. 26. - P. 421 - 426.

202. Petkau, A. The effect of superoxide dismitase on irradiation animals /A. Petkau, W.S. Chelack S.D. Peeskach et al. // Biochem. Biohys. Res. Comuu. -1975.-V. 65.-P. 886-893.

203. Petkau, A. The cellular respouse to radiooxidative stress /A. Petkau, W.S. Chelack // Biochemm. Biophys. Acfa. 1976. - V. 433. - P. 445 - 456.

204. Pollak, J.K. The biochemistry of give expresión in higer organisms /J.K. Pol-lak, I.W. Lee.- 1972.-322 p.

205. Pryor, W.A. Free Radical in Biology /W.A. Pryor. New York, - 1976. - V. 1. -P. 239-277.

206. Priestley, J. Experiments and Observations of Different kinds of air /J. Priestley. L., - 1775.

207. Roberts, L.J. The generation and actions of isoprostanes /L.J. Roberts, J.D. Morrow // Biochim. Biophys. Acta. 1997. - V. 1345. - № 2. - P. 121 - 135.

208. Ronal, Eva The inhibitory effect of succinate on radiation-enhanced mitochondrial lipid perocsidation /Eva Ronal, Laszlo Tretter, Gyorgy Szadados, Istvan Horvath // IntJ.Radiat.Biol. 1987. - V. 51. - № 4. - P. 611 - 617.

209. Schaeffer, H. Mitogen Aktivated Protein Kinases: Specific Messages from Ubiquitous Messengers /H. Schaeffer, M.J. Weber // Mol. Cell. Biology. -1999. - V. 19. - № 4. - P. 2435 - 2444.

210. Stark, G. The effect of ionizing radiation on lipid membranes /G. Stark // Bio-chem. et Biophys.Asta. Rev. Biomembranes. 1991. - V. 1071. - № 2. - P. 103 - 133.

211. Suzuki, VJ. Regulation of antioxidant enzymes /V.J. Suzuki, H.J. Forman, A. Sevanian // Free Radical Biol. Med. 1996. - Vol. 22. - № 1 - 2. - P. 269 -285.

212. Tolmasoff, J. Superoxide dismutase: correlation with life span and specific metabolic rate in primate species /J. Tolmasoff, T. Ouo, R.G. Cutler // Proc. Nat. Acad Sci. USA. - 1980. - Vol. 77. - P. 2777 - 2781.

213. Vaca, C. Lipid peroxidation in liver homogenates: effects of membrane lipid composition and -irradia-tion /C. Vaca, M. Harms-Ringdahl // Int. J. Radiat. Biol. 1984. - V. 46. - № 6. - P. 795.

214. Weisburger, J.H. Lifestyle, health and disease prevention: the undeplying mechanisms. /J.H. Weisburger, // Eur J Cancer Prev 2002. V. 11.- Suppl 2 -P. 1 - 7.

215. Wiseman, H. Effect of High oxiqen fen on caucer cells /H. Wiseman, B. Hal-liwell // Biocheen. J. 1996. - Vol. 313. - № 2. - P. 17 - 29.

216. Witko, SarsatV. Neutrophils: molecules, functions and pathophysiological aspects /S.V. Witko, P. Rieu, L.B. Descamps et al. // Labor. Investig. - 2000. -V. 80.-P. 617-653.

217. Zalkin, H. Studies of the mechanism of vitamin E. Action. Selenite and toko-pherol inhibition of lipid peroxidation in the chick Arch. /H. Zalkin, A.L. Tappel, J.P. Lordan // Biochem and Biophys . 1960. - V. 91. № 1. - P. 117 -129.

218. Zhang, H. BAR: An apoptosis regulator at the intersection of caspases and bcl 2 family proteins /H. Zhang, Q. Xu, S. Krajewski, et al. // Proc. Natl. Acad Sei. - USA. - 2000. - V. 97. - № 6. - P. 2597 - 2602.

Информация о работе

Юнусов, Ильнар Расимович
кандидата биологических наук
Казань, 2009
ВАК 03.00.01

Диссертация

Изыскание радиозащитных средств из класса природных антиоксидантов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы