Изыскание методов оценки и средств повышения устойчивости иммунокомпетентных клеток к радиоиндуцированному апоптозу

Иванов, Иван Семенович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изыскание методов оценки и средств повышения устойчивости иммунокомпетентных клеток к радиоиндуцированному апоптозу
ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Изыскание методов оценки и средств повышения устойчивости иммунокомпетентных клеток к радиоиндуцированному апоптозу"

На правах рукописи

ИВАНОВ ИВАН СЕМЕНОВИЧ

ИЗЫСКАНИЕ МЕТОДОВ ОЦЕНКИ И СРЕДСТВ ПОВЫШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК К РАДИОИНДУЦИРО-

ВАННОМУ АПОПТОЗУ

03. 00. 01 - Радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2003

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте, Ижевской государственной сельскохозяйственной академии и Казанском физико-техническом институте КНЦ РАН.

Научный руководитель:

Научный консультант:

заслуженный деятель науки Республики Татарстан, доктор ветеринарных наук, профессор Низамов Рамзи Низамович академик АН УР, доктор биологических наук, профессор Трошин Евгений Иванович

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки Республики Татарстан, доктор биологических наук, профессор Тремасов Михаил Яковлевич

доктор ветеринарных наук, профессор Ежкова Маргарита Степановна

Ведущая организация:

Нижегородская сельскохозяйственная академия

Защита состоится » ¿^¿/¿¿¡¿М^ООЗ г. в /¿9часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при'Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (420075, г. Казань, Научный городок-2, ВНИВИ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан <.<% 3 » {Л&^Я 2003 г.

Ученый секретарь ^

диссертационного совета В.И. Степанов

" И ¿¿О

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы. В результате рада фундаментальных исследований, проведённых отечественными исследователями (Хансон К.П., Комар В.Е., 1978; Животовский Б.Д. и др., 1982; Москалёв А.А., Зайнуллин В.Г., 2001 и др.) было показано, что одним из ранних и опасных для макрооргангома последствий летального облучения является запуск генетически запрограммированной гибели иммунокомпетентных клеток органов системы иммунитета (лимфоцитов периферической крови, тимоцитов, спленоцитов) по пути радиоиндуцнрованного апоптоза. Результаты анализа экспериментальных данных позволили исследователям постулировать следующие положения, согласно которым: 1) ионизирующие излучения инициируют в облучённом организме апоптотическую гибель лимфоцитов; 2) апоптозный сигнал передаётся к генам от протеин - тирозин -киназы через Fas - антигены и факторы транскрипции; 3) продукты липоперокси-дации (липидные радиотоксины) являются необходимым фактором поддержания и усиления (триггер - эффект) радиоиндуцнрованного апоптоза; 4) применение адаптогенных и антиапоптогенных средств может оказать модифицирующий эффект на процессы радиоиндуцнрованного апоптоза путём блокирования запуска механизма гибели клеток или усиления элиминации апоптозных клеток из облучённого организма. Несмотря на большое количество исследований, посвященных изучению роли ряда морфологических (Киршин В.А., Бударков В.А., Жуков Е.Г., Великанов В.И., Ситдиков Р.И.), биохимических, цитологических, физиологических и функциональных показателей оценки апоптоза, до сих пор остаётся дискуссионным вопрос о выборе оптимальных критериев оценки этой формы патологии. В литературе отсутствуют также данные о методах и средствах, оказывающих модифицирующий эффект на процессы радиоиндуцнрованного апоптоза, ведущего к гибели облучённого макрооргангома.

Учитывая слабоизученность проблемы и отсутствие эффективных антиапоптогенных препаратов при радиационной патологии, нами предприняты настоящие исследования.

1.2. Цель и задачи. Целью настоящих исследований явилось изыскание методов оценки и средств повышения устойчивости клеток - мишеней (иммуноци-тов) к радиоиндуцированному апоптозу.

Исходя из цели, на разрешение были поставлены следующие задачи:

1) изучить морфогистологические изменения иммунокомпетентных органов у животных в процессе развития радиоиндуцнрованного апоптоза;

2) на основе сравнительного изучения различных методов отобрать наиболее характерные из них для оценки апоптоза клеток - мишеней ин витро;

3) провести оценку антиапоптогенных свойств препаратов антибактериальной и иммунотропной природы и отобрать из них наиболее активные в модельных опытах ин виво;

4) Испытать эффективность отобранных антиапоптогенов на летально облу-

ченных животных.

Работа выполнена в соответствии с тематическим планом института «Разработка высокоэффективных лечебно - профилактических средств при радиационных поражениях сельскохозяйственных животных», № госрегистрации 01990005332.

1.3. Научная новизна. Впервые на основании изучения морфогистологиче-ских и биохимических изменений в органах и тканях системы иммунитета: 1) получены данные о механизмах развития в облучённом организме радиоиндуци-рованного апоптоза; 2) отобраны оптимальные критерии прямой оценки состояния радиоиндуцированного апоптоза иммунокомпетентных клеток периферической крови; 3) на основании сравнительного изучения эффективности различных методов оценки состояния апоптоза разработана методика оценки эффективности радиопротекторов ин витро; 4) с использованием разработанного метода оценки состояния апоптоза отобраны радиопротекторы - антиапоптогены с высокой радиозащитной активностью; 5) в опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных показана высокая эффективность новых радиопротекторов, повышающих устойчивость животных к радиоиндуцированному апоптозу и обеспечивающих выживание животных в условиях летального облучения.

1.4. Научно - практическая значимость работы.

Совершенствование диагностики радиационных поражений, а также их адекватной терапии невозможно без глубоких знаний о патогенезе радиобиологических эффектов в органах-мишенях. Проведённые исследования по изучению процессов радиоиндуцированного апоптоза клеток - мишеней радиационного поражения - иммуноцитов, позволяют углубить представления о механизмах развития радиационной патологии. Модель оценки спонтанного и радиоиндуцированного апоптоза лимфоцитов может быть использована для направленного поиска фармакологических средств для защиты организма от радиационных поражений.

Практическая значимость работы определяется тем, что результаты проведённых исследований использованы при составлении нормативно - технических документов:

1. Временное наставление по применению противорадиационного микробного полиантигена - Утв. ВНИВИ 18.10. 2002 г.

2. Методические рекомендации по оценке радиоиндуцированного апоптоза - Утв. ВНИВИ 14.04. 2003 г.

3. Методические рекомендации по повышению устойчивости лимфоцитов к радиоиндуцированному апоптозу - Утв. ВНИВИ 14. 04. 2003 г.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Методы оценки радиоиндуцированного апоптоза иммунокомпетентных клеток у животных.

2. Методы и средства, повышающие устойчивость иммунокомпетентных клеток к радиоиндуцированному апоптозу.

практической конференции по актуальным проблемам болезней молодняка в современных условиях (г. Воронеж, 2002); Научно-практической межрегиональной конференции по перспективам развития регионов России в 21 веке (г. Ижевск,2002); Международной конференции, посвященной шестидесятилетию образования факультета ветеринарной медицины Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии (г. Ульяновск, 2003), на заседаниях учёного совета ВНИВИ (2001-2003).

1.7. Публикация результатов исследований. Основные результаты диссертационной работы опубликованы в 13 работах, в том числе 1 статья, 6 тезисов, 3 отчёта о НИР, 3 нормативно-технических документа

1.8. Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 150 страницах машинописного текста; включающих введение, обзор литературы, экспериментальной части, собственных исследований материалов и методов, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и приложений. Список литературы включает 212 работ отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 8 таблицами и 25 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Исследования выполнены в 2000-2003 г. г. в лаборатории радиоэкологии и радиационных методов исследований отдела контроля радиационной безопасности объектов ветеринарного надзора Всероссийского научно — исследовательского ветеринарного института (ВНИВИ) и на кафедре незаразных болезней и радиобиологии Ижевской государственной сельскохозяйственной академии (Иж-ГСХА).

В проведении ряда комплексных исследований принимали участие кандидаты биологических наук с.н.с. Ишмухаметов К.Т., Тарасова Н.Б., Титов A.C., Шашкаров В.П., Матвеева Е.Л., н.с. Гурьянова В.А., н.с. Нефёдова Р.В., аспиранты Мухамедшин И.Р., Шарифуллина Д.Т., которым автор выражает искреннюю благодарность за оказанную помощь и плодотворное сотрудничество.

2.1.1. Материалы

В экспериментальных исследованиях и комиссионных испытаниях были использованы:

Подопытные животные: 820 белых мышей живой массой 18-20 г., 340 белых крыс живой массой 180-200 г., 75 кроликов породы « Шиншилла » живой массой 2,5-3,5 кг, 34 овцы породы «Прекос» 1,5-2 - летнего возраста живой массой 35-50 кг и 12 подсвинков крупной белой породы 3-5 - месячного возраста и живой массой 38-45 кг.

Объекты исследования: пробы крови интактных и облучённых животных, пробы из тимуса, селезёнки, лимфатических узлов, пейеровых бляшек, костного мозга, лимфоциты из перечисленных органов и периферической крови, ядра клеток (тимоцитов, спленоцитов), продукты деградации нуклеотида (ПДН) и элек-

тронограммы ядер тимоцитов, спленоцитов, гистограммы из иммунокомпетент-ных и других органов, электрофореграммы фракций - продуктов деградации нук-леотида.

Потенциальные антиапоптогены: антибактериальный препарат МК-1, сульфид натрия, иммунотропные препараты «Иммуно-С», «Иммуно-Н», противорадиационный лечебный глобулин и их композиции в различных сочетаниях и соотношениях компонентов, иммунопрофилактический микробный полиантиген, экспериментальные образцы радиотоксина хиноидной природы.

Оборудование и реактивы: Для моделирования радиоиндуцированного апоптоза и лучевой болезни у лабораторных и сельскохозяйственных животных использовали гамма - установку «Пума» с источником излучения 137Сз. Для индукции радиотоксинов в объектах использовали гамма-установку "Исследователь" с источником излучения ^Со. Для приготовления гистосрезов использовали микротом ПСВ - 1, для микроскопирования их - световой и электронный микроскоп ПЭМ -100, а также гомогенизаторы, центрифуги, термостаты, водяные бани, трубки для полиакриламидного геля, сканирующий спектрофотометр «ТШегсИ МиШвкап », встряхиватель марки «2^гоп » и др.

В классических иммуногистохимических, биохимических исследованиях применяли стандартные, специальные химические реактивы и питательные среды.

2.1.2. Методы исследований

Моделирование радиоиндуцированного апоптоза лимфоцитов периферической крови и иммунокомпетентных оргапов осуществляли путём однократного облучения лабораторных и сельскохозяйственных животных на гамма - установке « Пума » при мощности экспозиционной дозы излучения 3,13 ' 10"5 Кл/(кг с) в - дозах соответственно 6,0-8,0 Гр (белые мыши), 7,0-9,0 Гр (белые крысы). 9,5-11,0 Гр (кролики), 6,0 Гр (овцы) и 4,2 Гр (подсвинки).

Диагноз лучевой болезни подтверждали путём проведения клинико - гематологических, аллергических, серологических, патолого - анатомических исследований. В периферической крови определяли общее количество лейкоцитов в камере Горяева, а также лейкограмму в мазках крови, окрашенных по Май -Грюнвальду. Содержание радиоиндуцированных антигенов определяли в РИГА с противолучевым антигенным эритроцитарным диагностикумом (АТЭД), пострадиационную аутосенсибилизацию - внутрикожной аллергической пробой. У павших и убитых в динамике ( на 1, 3, 7, 14, и 30 сут после облучения) животных изучали патоморфологические изменения во внутренних и иммунокомпетентных органах.

При морфологических исследованиях использовали методы, позволяющие оценить как общую картину изменений в исследуемых органах с помощью окраски препаратов гематоксилин - эозином, азур - П по Романовскому - Гимзе, по Ван - Гизону. Содержание РНК определяли по Браше, кислой фосфатазы - по Бертону, щелочной фосфатазы - по Гомори. Для оценки специфических гистохимических реакций использовали методические подходы, предложенные Э.А.

Пирсом (1962), Н. Майером (1960). Изучение Т-, В-клеток, макрофагов и плазмо-цитов осуществляли в соответствии с рекомендациями М. Бэрстона (1965) и F. Ahlqvist (1972). Для оценки интерфазной гибели облучённых клеток, лимфоциты выделяли из периферической крови путём дифференциального осаждения лейкоцитов в ступенчатом градиенте фиколл - пака по R.K. Kumar, A.W. Lykke (1980). Жизнеспособность клеток оценивали по включению флуоресцентного красителя -0,01-0,02 % эритрозина, изменение порозности клеточной мембран - по J. Ashwell et al, (1986). Культивирование клеток в питательной среде, облучение их и дальнейшую обработку проводили по методике, предложенной Н.В. Орловой и др.

(2001). Апоптотическую гибель лимфоцитов периферической крови и спленоци-тов оценивали по морфологическим (световая, флуоресцентная и электронная микроскопия), биохимическим (распад и выход продуктов деградации хроматина по изменению спектра электрофореграмм ядерной субстанции) и радиометрическим (распределение 3Н - тимидина в отдельных фракциях нуклеосом) критериям. Ядра клеток выделяли по В.А. Поспелову и др. (1977), продукты деградации нук-леотида (ГЩН) из ядер экстрагировали 0,14 М Na CL, 0,05 трис - HCL рН 7,2 по Б.Д. Животовскому и др. (1980) и 0,7 мМ ЭДТА рН 8,0. Электрофоретическое разделение фрагментов ДНК после депротеинизации ПДН проводили в 8 % - ном ПААГ в присутствии 8 М мочевины в блоке (10х 16x0,12 см) по Н.Б. Звонаре-вой и др. (1987), в модификации P.M. Ахмадеева, Л.И. Зайнуллина, A.M. Алимова

(2002). Для световой и флуоресцентной микроскопии спленоциты фиксировали в метанол - уксусной кислоте. Для электронной микроскопии клетки и образцы органов фиксировали смесью 2,5 %— ного глутарового альдегида в 0,2 М фосфатном буфере в течение 2 ч, обезвоживали в спиртах. Срезы готовили на ультротоме LKB (Швеция), дополнительно контрастировали цитратом свинца и просматривали на микроскопе ПЭМ-100. Оценку изменений клеточной мембраны проводили по критериям увеличения объёма клеток и изменению величины плавучей плотности методом изоплотностного центрифугирования по Е.А. Жербину и др. (1982).

Для оценки антиапоптогенной активности испытуемых препаратов ин вит-ро, лимфоциты инкубировали с различными концентрациями указанных веществ до и после облучения клеток. Предварительно у испытуемых препаратов и их комбинаций определяли совместимость друг с другом, безвредность и токсичность в соответствии с методическими рекомендациями Г.Н. Першина (1971). Изменение содержания липидных радиотоксинов под воздействием антиапопто-генов контролировали путем определения концентрации малонового диальдегида по В.А. Гурьяновой и Е.И. Трошину (1997). Цифровые данные экспериментов обрабатывали статистически, достоверность результатов оценивали по критерию Стьюдента (Урбах В.Ю., 1962, Филимонов B.C., и др., 1987).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 .Сравнительный анализ маркеров спонтанного и радио-индуцированного апоптоза лимфоцитов периферической кровн и иммунокомпетентных органов у интактых и облученных животных

(

Учитывая, что признаки интерфазной гибели иммуноцитов отчетливо прослеживаются в патологии ядерных структур клеток: кариопикнозе (гомогениза- 1 ции) ядерного материала, распаде хроматина, фрагментации клеток с образованием так называемых апоптозных телец, интерфазную гибель клеток удобнее исследовать вне организма (ин витро), в условиях тканевой культуры. Исследования лимфоцитов в культуре ин витро позволяют оценить радиопоражаемость интер-фазно гибнущих клеток по апоггготическому пути, дают наиболее объективную информацию о динамике радиационного поражения на клеточном уровне.

Поэтому, на первом этапе работы проводили опыты в условиях ин витро на изолированных лимфоцитах. В связи с тем, что лимфоциты являются вполне доступными для исследования биологическим материалом в клинике (периферическая кровь, лимфатические узлы, миндалины) и в эксперименте (тимо- и спле-ноциты), в опытах ин витро использовали лимфоциты периферической крови интактных лабораторных животных, в качестве которых использовали 25 взрослых кроликов.

Результаты световой и флуоресцентной цитометрии окрашенных эритрози-ном облученных в дозах 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 Гр лимфоцитов периферической крови показали, что с увеличением дозы радиационного воздействия и срока инкубации облученных клеток пропорционально возрастало число нежизнеспособных клеток и при максимальной дозе (5,0 Гр) число жизнеспособных клеток не превышало 1,1-0,7 % от контрольных значений (табл. 1).

Таблица 1- Результаты прямой цитометрии интактных и облученных ин

витро лимфоцитов периферической крови кроликов (М + ш)

Лимфоциты Содержание клеток в % через

24 ч 48 ч

окрашенных (нежизнеспособных) неокрашенных (жизнеспособных) окрашенных (нежизнеспособных) неокрашенных (жизнеспособных)

Интактные 2,5 ±0,5 97,5 ±5,1 3,1 ±0,7 96,9 ±6,3

Облученные в дозах (Гр) 0,5 24,7 ± 3,5 х 75,3 ±6,1 38,3 ± 3,9 61,7 ±7,7

1,0 45,1 ±5,Iх 54,9 ±5,9 56,5 ±7,3 43,8 ±6,1

2,0 87,5 +7,9х 12,5 ±2,7 92,9 ±5,1 7,1 ±1,9

3,0 94,8 ± 7,7х 5,3 ± 1,2 96,5 ±6,3 3,5 ±0,7

4,0 97,9 ± 8,5х 2,05 ±0,5 98,8 ±7,9 1,2 ±0,09

5,0 98,9 ± 11,7х 1,1x0,3 99,3 ± 10,3 0,7 ±0,05

х - Р < 0,05

Результаты световой и флуоресцентной микроскопии показали также, что наряду с дозозависимым возрастанием доли окрашенных (нежизнеспособных) форм происходило увеличение среднего объема клеток. Эта комплексная мембранная патология связана, очевидно, с резким усилением порозности (проницае-

мости) клеточной стенки и цитоплазменной мембраны (Шевченко A.C., и др., 1997).

Известно, что в процессе утечки иопов и белков из поврежденных клеток изменяется их удельная плотность, которая является одним из характерных показателей степени созревания, а также жизнеспособности клеток, находящихся под воздействием на клетку (Брондз Б.Д., Рохлин О.В., 1978). В случае гибели клеток происходит изменение величины плавучей плотности, что сопровождается резким « утяжелением » клеток. С учетом изложенного нами были проведены опыты по определению величины плавучей плотности нормальных и облученных лимфоцитов.

Суспензию лимфоцитов в концентрации 8'105 кл/мл облучали в дозах 0,55,0 Гр и инкубировали при 37°С в среде с крысиной сывороткой в течение 24 ч. По истечении указанной экспозиции суспензию лимфоцитов смешивали с раствором фиколл - пака с соотношении 1:1 и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 15 мин. Гибель облученных клеток оценивали по количеству выпавших в осадок лимфоцитов в контрольных и облученных пробах. Результаты изогаготно-стного центрифугирования клеток представлены в таблице 2.

Таблица 2- Изменение плавучей плотности лимфоцитов после гамма -облучения

п = 3

Лимфоциты Кол-во погибших клеток (%) от общего выхода с градиента при инкубации клеток, ч

24 48

М + т Р М + т Р

Интактные (контроль) 43,5 ±5,1 - 51,3 ±6,5 -

Облучённые в дозе 0,5 Гр 46,7 ±9,5 >0,05 55,1 ±7,9 >0,05

1,0 50,3 ±8,9 >0,05 58,3 ±9,1 >0,05

2,0 52,5 ±9,1 >0,25 61,1 ± 10,3 >0,05

3,0 59,1 ±11,3 >0,05 64,8 ±9,8 >0,05

4,0 68,9 ± 13,1 >0,05 75,7 ±7,1 <0,05

5,0 74,8 ±9,5 <0,05 80,9 ±5,9 <0,05

Из данных таблицы видно, что спонтанная гибель клеток в контрольных образцах составляют 43,5-51,3 % от общего выхода с градиента. Инкубация клеток, облученных гамма - лучами в дозах 4,0-5,0 Гр, сопровождалась их гибелью и резким повышением доли « тяжелых » лимфоцитов (до 74,8-80,9 % от общего градиента, Р < 0,05).

Следовательно, изоплотностное центрифугирование облученных клеточных суспензий является вполне эффективным способом выявления радиочувствительности, уровня и динамики гибели клеток ин витро. Кроме этого, с помощью этого метода можно разделить погибшие и выжившие клетки для

последующего биохимического, электронномикроскопического и иммунологического анализа клеток.

Известно, что пикноз ядер (кариопикноз) является одним из характерных признаков интерфазной гибели клеточных популяций костного мозга, тимуса, селезёнки и периферической крови. В настоящее время дискутируется вопрос о взаимоотношении пикноза (морфологически определяемого распадом ядерного хроматина) и так называемого апоптоза (микроскопически наблюдаемой фрагментацией ядер и клеток).

Одними из продуктов распада ядерного материала интерфазно гибнущих клеток являются продукты деградации нуклеотида - полидезоксинуклеотиды (ПДН), которые представляют собой растворимые фрагменты хроматина, содержащие в своем составе ДНК и некоторых ядерных белков. Повышение концентрации ПДН в облученных клетках служит биохимическим маркером кариопикноза и апоптоза клеток.

Таким образом, пикноз ядер или его отсутствие в жизнеспособных клетках можно считать весьма информативным показателем, поскольку есть основание считать, что гшкноз ядер и образование апоптозных телец или фрагментов, патологией , имеющей общее происхождение (Хансон К.П., Комар В.Е., 1977).

Для выяснения некоторых сторон рассматриваемого радиобиологического феномена, нами были проведены опыты по сравнительному изучению морфологических и биохимических проявлений гибели лимфоцитов периферической крови у интактных и облученных лимфоцитов кроликов ин витро.

Результаты электронномикроскопических исследований показали, что при облучении сублетальными дозами радиации в ядрах лимфоцитов выявляется картина гомогенизации ультраструктуры, свойственная пикнозу, а с увеличением дозы радиационного воздействия приводило к фрагментации ядра - кариорексису, которая, вероятно, предшествует формированию апоптозных телец. Облучение лимфоцитов ин витро в летальной дозе (5,0 Гр) оказывало значительное повреждающее действие на клетки - наряду с обычными для лимфоцитов распределением конденсированного хроматина выявлялось большое количество клеток с неравномерно конденсированным хроматином в ядре.

Весьма характерным для таких псевдонормальных клеток является также нарушение целостности митохондрий и наличие в цитоплазме (кариоплазме) множественных вакуолей, что получило в радиобиологии как « взорванный лимфоцит » (Тронов В.А. и др., 1977).

Полученные данные электронномикроскопических исследований по изучению динамики гибели клеток, облученных ин витро позволяет заключить, что механизм гибели лимфоидных клеток при повреждающем воздействии ионизирующих излучений неодинаков. При умеренной степени воздействия (сублетальные дозы) процесс протекает под контролем ядра и выражается в индукции генетической программы клеточной гибели по пути апоптоза. В условиях облучения клеток в летальных дозах определяющая роль принадлежит поражению множест-

венных цитоплазматических структур клетки, когда процесс уже не может контролировать ядром из-за его деградации.

Продолжая исследования по изучению влияния ионизирующих излучений на клетки-мишени радиационного поражения - лимфоциты, проводили биохимическую оценку гибели этих клеток путем измерения количества продуктов деградации хроматина - полидезоксинуклеотида (ПДН) методом электрофореза.

Результаты анализа элеюрофореграмм ядер интактных и облученных лимфоцитов показали, что нуклеосомы из ядер облученных лимфоцитов сразу разделились на 5 фракций, в то время как у интактных клеток выявлялось одна фракция.

Результаты параллельного изучения распределения [3Н] тимидина по фрагментам хроматина на элекгрофореграмме после 15 - минутной инкубации показали, что Локализация радиоактивности полностью совпадает с положением электрофоретических фракций ядерного хроматина. Следовательно, вновь синтезированный хроматин даже после 15-минутного включения [3Н] тимидина, когда синтезируются относительно короткие фрагменты ДНК, имеет субъединичнуто структуру, характерную для всего хроматина (Seale R. I., Simpson R. Т., 1975).

Таким образом, в результате проведенных исследований в модельных опытах ин витро на интактных и облученных лимфоцитах периферической крови изучены процессы спонтанного и радиоиндуцированного апоптоза клеток-мишеней радиации с использованием морфологических (световая, флуоресцентная и электронная микроскопия), биохимического (ПААГ - электрофорез ядерного хроматина) и радиометрического (методом изучения распределения в продуктах деградации хроматина с помощью [^Н] тимидина) критериев оценки апоптоза

Принимая во внимание, что адаптационные реакции организма на экологические факторы различной природы сопровождаются изменениями клеточного состава центральных и периферических органов иммунитета [Юнусова P.M., и др., 1991], целью исследований данного раздела работы явилось изучение морфо-гистологических особенностей различных иммунокомпетентных органов у крыс в процессе поражения их внешними гамма - лучами.

Опыты проводили на 90 нелинейных белых 1фысах-самцах 3 месячного возраста разводки вивария ВНИВИ. Облучение животных проводили на установке «Пума» (источник излучения 137Cs, мощность экспозиционной дозы 7,29 Р/мин) в дозах 7,0 и 9,0 Гр. Через 1, 3, 7, 14 и 30 сут после облучения животных убивали и проводили морфологическое исследование центральных (костный мозг, тимус) и периферических (селезенка и лимфатические узлы) органов иммунитета, а также кусочков кожи облученных животных. Контрольную группу составили 10 необлученных крыс того же пола и возраста, у которых исследовали аналогичный же материал.

Результаты патоморфологических исследований состояния иммунокомпетентных органов в динамике развития лучевой болезни у лабораторных животных, облученных в дозах 7,0 Гр (ЛД50) и 9,0 Гр (ЛДюо) показали, что характер и глубина патологоанатомических и патогиотологических изменений в организме имели дозовую зависимость. Эти изменения сопровождались гемодинамическими

расстройствами, разрежением клеточных элементов, уменьшением герминативных центров, исчезновением фигур митоза и ингибированием процесса бласт-трансформации лимфоцитов. Среди оголенной ретикулярной основы в иммуно-компетентных органах (тимуса, селезенки, лимфатических узлов) находились патологические лимфоциты, имеющие неправильно-угловатой формы (кометапо-тобные) клетки с явлениями апоптоза.

Таким образом, полученные нами данные морфологических исследований подтверждают, что внешнее гамма-облучение в больших дозах вызывает существенное изменение в органах системы иммунитета, морфологическим проявлением которых, являются нарушения цитоархитектоники центральных и периферических органов, проявляющиеся в основном, опустошением лимфоидных клеток указанных органов, элиминацией пораженных ионизирующей радиации лимфоцитов из них, изменениями субпопуляционного состава последних, со значительным увеличением содержанием клеток лимфоидного ряда в коже и усиления реакции тканевых базофилов.

Для подтверждения полученных иммуноморфологических данных о том, что радиационная гибель иммунокомпетентных клеток - лимфоцитов в центральных и периферических органах иммунитета реализуется по апоптотическому пути, нами были продолжены опьггы по изучению клеточного состава иммунокомпетентных органов у облученных крыс в дозах 7,0 и 9,0 Гр.

С этой целью у облученных и контрольных крыс через 4 и 24 ч тотально извлекли тимус, проводили взвешивание органа, затем ткань измельчали в 10 объемах 0,23 М сахарозы, приготовленной на 0,01 М буфере трис - НСЬ, рН 7,5, в присутствии ЗмМ Мд СЬг. После фильтрации через марлю и капрон ядра осаждали цешрифугированием в растворе для гомогенизации, который включал дополнительно 0,5 % - ный тритон X - 100. Отмытые затем от детергента ядра использовали для приготовления мазков для световой микроскопии. Тимоциты фиксировали в метанол - уксусной кислоте. При микроскопировании мазков учитывали количество нормальных, пшснотичных, апоптотических клеток и клеток стромы. Результаты выражали в % от объема общего количества сосчитанных (100) клеток на каждый вариант опыта.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице 3

Таблица 3- Клеточный состав тимуса (%) после облучения животных в до-

зах 7,0 и 9,0 Гр.

Доза облуче ния (Гр) Срок после облучения,ч Пикнотич-ные клетки Нормальные клетки Апоптоти— ческие клетки Клетки стромы

7,0 4 44,2 ±1,6 45,0 ±0,6 10,8 ±2,0 0

24 46,8 ±7,1 22,6 ± 5,4 12,8 ± 3,0 17,7 ±3,8

9,0 4 64,1 ±3,2 28,0 ± 2,0 7,3 ± 1,3 0,4 ±0,3

24 70,5 ± 5,0 0,5 ± 0,3 25,7 ±4,8 2,8 ±1,1

Контроль 16,4 ±5,1 80,5 ±6,1 3,1 ± 1,0 0

Из данных таблицы видно, что уже через 4 ч после облучения в дозах 7,0 и 9,0 Гр начинается клеточное опустошение тимуса облученных животных. Наряду с данными о динамике гибели лимфоидных элементов, происходит также и гибель самого органа, о чем свидетельствует факт нарастания 24 ч после облучения относительного количества клеток стромы. Весьма характерным для обеих доз является резкое увеличение количества клеток с фрагментированными (кариорек-сис) и пикнотическими (распад) ядрами (таблица 3, колонка Ш), что вероятно, предшествует формированию апоптозных телец (таблица 3, колонка V).

Таким образом, результаты цитоморфологических исследований, проведённых как ин витро, так и ин виво, показали, что как облучение интактных иммуно-компетентных клеток вне организма, так и облучение самого макроорганизма индуцирует (запускает) генетическую программу гибели клеток - мишеней радиационного поражения - лимфоцитов иммунокомпетентных органов, глубина, степень и скорость гибели которых имеет пропорциональную зависимость от дозы апоптозиндуцирующего фактора.

3.2. Отбор оптимальных методов оценки радиовндуцированного апоп-тоза на клеточном уровне

Опьтгы, проведенные ин виво в модельных опытах на облученных различными дозами ионизирующих излучений белых крысах полностью подтвердили результаты опытов с изолированными лимфоцитами ин витро. На основании сравнительного анализа различных методов оценки радиоиндуцированного апоп-тоза установлено, что наиболее простым, доступным и адекватным методом оценки клеточной гибели лимфоцитов является суправитальная окраска клеток эозином (эритрозином или трипановым синим), для дальнейших исследований он был отобран в качестве основной тест-системы для скрининговой оценки потенциальных радиопротекторов - антиапоптогенов.

33. Изучения возможности повышения устойчивости иммуноцитов к радиоиядуцированному апоптозу в опытах ин витро

В литературе имеются сообщения о том, что предварительное введение в инкубационную среду некоторых химических или биологических веществ может модифицировать апопггогенный эффект, усиливая процесс апоптоза или, наоборот, уменьшить количество апоптозных клеток в этой среде (Бойчук С. В , 2002). Следовательно, логично было предположить, что предварительное (до) или после облучения введение испытуемых средств - потенциальных модификаторов апоптоза могло бы дать важную информацию о наличии или отсутствии у них радиозащитных свойств.

Для решения этой задачи, в инкубационные среды вносили отобранные препараты - потенциальные радиопротекторы в количествах от 0,1 до 50 мг/мл, затем в них вносили взвесь лимфоцитов, облученных гамма - лучами в дозе 5,0 Гр с конечным титром [5-6]' 105 кл/мл и инкубировали в течение 4, 24,48 часов. По

истечении указанной экспозиции готовили мазки лимфоцитов, которые после фиксации в метанол - уксусной кислоте окрашивали фикоэритрозином и проводили микроскопическую цитометрию, определяя количество нормальных и окрашенных клеток в контрольных и опытных препаратах.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице 4.

Таблица 4- Влияние испытуемых препаратов на апоптотическую гибель облученных клеток ин витро (на 24 ч инкубации)

Инкубационная среда Содержание клеток (в %) среди

интактных облученных

окрашенные неокрашенные окрашенные неокрашенные

Контрольная (не содержащая радиопротекторы) 2,5 ±0,5 97,5 ±5,1 98,9 ±11,7 1,1 ±0,3

Содержащая МК-1(35 мг/мл) 3,1 ±0,7 96,9 ±3,9 98,5 ±9,1 1,5 ±0,5

Содержащая N328 (10 мг/мл) 1,5 ±0,3 98,5+3,1 58,5 ± 9,5х 41,5 ± 7,7х

Содержащая «Иммуно Н» (3,12 мг/мл) 3,2 ±0,8 96,8 ±4,5 20,5+5,3х 79,5 ± 10,1х

Содержащая «Иммуно С» (3,12 мг/мл) 2,7 ±0,5 97,3 ± 3,5 9,9 ± 2,5х 70,1 ± 8,8х

Из приведенных в таблице материалов видно, что предварительное внесение в инкубационную среду препарата МК - 1 не оказывало радиозащитного эффекта на облученные лимфоциты - процент жизнеспособных клеток в исследуемых пробах при этом не превышало 1,5 %.

Предварительное введение в среду инкубации препарата в количестве 10 мг/мл оказывало существенное влияние на жизнеспособность клеток - 58,5 % их оказались жизнеспособными (Р < 0,05). Наиболее высокую радиозащитную способность проявляли иммунотропные препараты «Иммуно Н » и «Иммуно С», при внесении которых в инкубационную среду количество жизнеспособных клеток возросло до 79,5 и 70,1 % соответственно (Р < 0,01).

Продолжая изучение радиозащитной активности иммунотропных препаратов, во втором варианте опыта вышеуказанные препараты в тех же количествах вводили в инкубационную среду после облучения тест - клеток.

Для этой цели суспензию облученных в дозе 5,0 Гр лимфоцитов вносили в инкубационную среду с титром [5-6]' 105 кл/мл и сразу же после этого в инкубационную среду с лимфоцитами вносили испытуемые препараты в дозах от 0,1 до 50 мг/мл и инкубировали в течение 4,24 и 48 ч.

Методика дальнейших исследований мазков и оценка результатов исследований были аналогичны таковым, описанным выше. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 5.

Таблица 5- Влияние последующего за облучением внесения радиозащитных препаратов в инкубационную среду на апоптотическую гибель клеток ии витро

Инкубационная среда Содержание клеток (в %) среди

интактных облученных

окрашенные неокрашенные окрашенные неокрашенные

Контрольная (не содержащая радиопротекторы РП) 2,5 ±0,5 97,5 ±5,1 98,9 ±11,7 1,1 ±0,3

Содержащая МК-1(35 мг/мл) 2,1 ±0,7 97,9 ± 3,9 20,3 ±5, Iх 79,7+9,8х

Содержащая Ка2Б (10 мг/мл) 3,2 ±0,9 96,8 ±6,7 40,1 ± 7,3х 59,9 ± 7,9х

Содержащая «Иммуно Н» (3,12 мг/мл) 2,1 ±0,5 97,9 ±5,8 98,5 ± 10,1 1,5 ± 0,5

Содержащая «Иммуно С» (3,12 мг/мл) 2,6 ±0,9 97,4 ± 6,6 97,9 + 9,5 2,1 ±0,3

РП - радиопротектор, экспозиция - 24 ч

Из представленных в таблице материалов видно, что последующее за облучением внесение испытуемых средств оказывало также радиозащитный эффект, однако последний зависел от природы химического и биологического препарата.

Так, препарат МК - 1, внесенный в инкубационную среду с облученными лимфоцитами, оказывал значительный радиозащитный эффект (79,7 %), а при предварительном (до облучения) введении таким эффектом он не обладал.

Другое химическое соединение - На2Б также обладал радиозащитной активностью - количество жизнеспособных клеток при последующем за облучением внесении в инкубационную среду этого препарата в количестве 10 мг/мл обеспечивало 59,9 % - ную защиту лимфоцитов от аноптотической гибели.

В отличие от химических соединений, иммунотропные препараты «Иммуно С» и «Иммуно Н» при последующем за облучением внесения в инкубационную среду радиозащитным эффектом не обладали - количество окрашенных клеток было на уровне облученного контроля.

С учетом изложенного нами были составлены композиции этих препаратов: «Иммуно С» + МК-1 и «Иммуно Н» + МК-1. При этом объемное соотношение препаратов имело весьма широкий диапазон - от 0,1 до 0,9 первого и наоборот, от 0,9 до 0,1 - второго компонентов. Препараты в указанных сочетаниях были внесе-

ны в инкубационные среды с облученными в дозе 5,0 Гр лимфоцитами как до, так и после облучения клеток. Условия культивирования, оценка и учет результатов антиапоптогенного действия испытуемых композиций были аналогичны таковым, как и при изолированном применении препаратов.

Результаты проведенных исследований приведены в таблице 6.

Таблица 6- Влияние различных композиций испытуемых препаратов на апоптотическую гибель лимфоцитов ин витро (М + м)

Инкубационная среда Содержание клеток (в %) среди

интактных облученных

окрашенные неокрашенные окрашенные неокрашенные

Контрольная (не содержащая радиопротекторы РП) 2,5 ±0,5 97,5 ±5,1 98,9 ±11,7 1,1 ±0,3

Содержащая «Иммуно С»+МК-1 (1,6+17мг/кг) 2,1 ±0,7 97,9 ±7,9 39,9 ±5,5 60,1 ±7,5

Содержащая «Иммуно Н»+МК-1 (1,6+17мг/мл) 2,7 ±0,9 97,8 ±6,8 29,5 ±6,1 70,5 + 8,9

Препараты вносили как до, так и после облучения лимфоцитов.

Из представленных материалов видно, что внесение композиций «Иммуно С»+МК-1 и «Иммуно Н»+МК-1 в инкубационную среду как до, так и после облучения лимфоцитов в летальной дозе (5,0 Гр) предотвращало массовую гибель клеток - количество жизнеспособных лимфоцитов при этом составило 60,1 - 70,5 % от облученного контроля. При этом сочетание компонентов «Иммуно Н»+МК-1 наблюдается более высокий процент защиты (70,5 %) по сравнению с сочетанием «Иммуно С»+МК-1 (60,1 %), эффективная защитная доза отдельных компонентов сократилась в 2 раза (фактор уменьшения дозы ФУД=2,0). Сочетанное применение препаратов «Иммуно С» и «Иммуно Н» с МК-1 (1:1) оказывало существенное влияние на их радиозащитный эффект - последний у обоих иммуно-тропных препаратов в таком сочетании проявлялся как до, так и после летального облучения клеток при одновременном увеличении фактора уменьшения дозы -ФУД=2,0.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлена возможность оценки радиозащитной активности испытуемых препаратов ин витро в тесте - цитометрического анализа (ЦА) окрашенных эозином (или эритрозином, или трипановым синим) мазков клеток периферической крови.

3.4. Оценка антиаптогенной активности отобранных препаратов на сельскохозяйственных животных

Перед проведением завершающих опытов на сельскохозяйственных животных по оценке антиаптогенной активности отобранных препаратов, необходимо было выяснить радиозащитные свойствах на лабораторных животных. Поэтому предварительные опыты по оценке радиозащитной активности отобранных препаратов проводили на белых мышах и белых крысах.

В опытах на белых мышах использовали 180 животных, которые были разделены на две группы. Первую группу животных (90 мышей) разделили на 9 подгрупп: 1-я - получавшая препарат МК - 1 в дозе 35 мг/кг до облучения, 2-я -«Иммуно С» - 50 мг/кг, 3-я - «Иммуно Н» - 50 мг/кг, 4-я - МагБ - 10 мг/кг, 5-я -«Иммуно С» + МК-1 (25 мг/кг + 17.5 мг/кг), 6-я - «Иммуно Н» + МК-1 (25 мг/кг + 17,5 мг/кг), 7-я - противорадиационный глобулин (50 мг/кг), 8-я - биологический контроль, 9-я контроль облучения (7,7 Гр).

Через 24 ч после однократного подкожного введения перечисленных препаратов животные всех групп (за исключением 8-й группы) были подвергнуты однократному внешпему гамма облучению в дозе 7,7 Гр и в течение 30 суток за ними вели клиническое наблюдение, регистрируя павших и выживших по соответствующим группам.

Вторая группа животных в количестве 90 мышей также была разделена на соответствующих 9 подгрупп, которым через 24 ч после облучения однократно подкожно вводили перечисленные препараты в аналогичных же дозах и условиях.

Результаты проведенных исследований представлены на рис.1. Из его данных видно, что применение препарата МК - 1 до облучения радиозащитного эффекта не оказывало, из 10 облученных животных пали все. Предварительное применение препарата Иа28 также было сравнительно малоэффективным -процент выживших при этом не превышал 40 %.

Наиболее высоким радиозащитным эффектом обладал препарат «Иммуно Н», который обеспечил 80 % - ную защиту летально облученных мышей. Препарат «Иммуно С» незначительно (на 10 %) уступал по активности предыдущему. Однако сочетанное применение указанных иммунотропных препаратов с малоактивным МК -1 приводило к существенному изменению радиозащитного эффекта препарата, когда сочетание его с обоими препаратами в соотношении 1:1 приводило к 70 % - ному защитному эффекту.

Аналогичный потенцирующий эффект радиозащиты наблюдался при соче-танном применении препарата МК-1 и иммунотропных препаратов «Иммуно С» и «Иммуно Н». Так, оба указанных препарата были неэффективными при последующем за облучением применения иммунотропных средств, однако сочетание их с препаратом МК-1 в соотношении 1:1 приводило к резкому возрастания у них радиозащитного эффекта - процент защиты при этом составлял 60 - 70 % соответственно.

100-, 903* 80-

| 30

100-

1 2 3 4 5 6 7 8

■ - до облучения □ - после облучения

Рисунок 1- Радиозащитная активность препаратов при предварительном (за 24 ч) и последующем (через 24 ч) облучении (ЛД юсюо) белых мышей: 1- МК-1; 2- Иммуно С; 3- Иммуно Н; 4- Иа^; 5- Иммуно С + МК-1; 6- Иммуно Н + МК-1; 7- ПРЛГ; 8- Биологический контроль

При повторении этих опытов на другом виде лабораторных животных - 90 белых крысах, которым как до, так и после облучения в летальной дозе (9,0 Гр) вводили перечисленные на рис.1. препараты в той же последовательности и в тех же дозах, были получены аналогичные результаты - процент зашиты от радиационной гибели животных составлял в пределах 70 - 80 %.

Таким образом, установлено, что препарат МК - 1 обладал высоким радиотерапевтическим эффектом при лечебном применении и слабом радиопрофилактическом действии при предшествующем облучению применении. Последний может быть модифицирован в высокоактивный лечебно-профилактический противорадиационный препарат в сочетании с иммунотропными средствами, например с препаратами «Иммуно С», «Иммуно Н», а так же регламентированным противорадиационным лечебным глобулином.

Для подтверждения полученных в предыдущих опытах результатов исследований, следующую серию экспериментов проводили на мелком рогатом скоте. В опытах использовали - 34 овцы породы «Прекос» 1,5-2-х летнего возраста живой массой 35-50 кг. При этом радиационные поражения организма моделировали путем внешнего облучения животных гамма-лучами в дозе 5,2 Гр (ЛДюо), вызывающей острую лучевую болезнь тяжелой степени. Развитие лучевой болезни оценивали по клинико - гематологическим, иммуноморфологическим, гистологи-

ческим показателям, а повышение устойчивости клеток к радиоиндуцированному апоптозу - по ингибированию гибели лимфоцитов, сохранению архитектоники иммунокомпетентных органов и выживаемости животных при применении отобранных радиозащитных средств. Анализ полученных данных клинико - гематологических и патологоанатомических изменений позволяет заключить, что при облучении овец (контрольные животные без применения радиозащитных препаратов) в дозе 5,2 Гр развивалась острая лучевая болезнь тяжелой степени. Полученные нами результаты по развитию и течению острой лучевой болезни овец согласуются с дапными других исследователей (Белов А.Д., Киршин В.А., 1987, 1999; Киршин В.А., Бударков В.А., 1990). Результаты сравнительного изучения состояния периферической крови у облученных, обработанных радиозащитной композицией до и после облучения овец показали, что применение препарата «Иммуно С» + МК-1 оказывало существенное влияние на гематологические показатели животных.

Применение радиозащитного препарата как до, так и после облучения оказывало ингибирующее действие на процессы лейко-, лимфопении и содержания малонового диальдегида, когда снижение лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови не превышало 20 % и 28 % соответственно (Р < 0,05), а содержание продуктов липопероксидации - на 10-12 % против 20 % в контроле.

Результаты сравнительных клинико - гематологических, патоморфологиче-ских и гистологических исследований были подтверждены при оценке радиозащитной эффективности испытуемых препаратов по главному критерию - выживаемости животных, что иллюстрируется данными на рис.2.

с4-03

Й о о

<и

(Я

к «

100 80 60 40 20 0

Рисунок 2- Выживаемость облученных и обработанных радиозащитной композицией овец (ЛД юо/зо)'- 1-облученные; 2- обработанные за 24 ч до облучения композицией Иммуно Н+ МК-1; 3- обработанные через 24 ч после облучения композицией Иммуно Н + МК-1; 4- контрольные (необлученные)

Из представленных на рис.2, данных явствует, что как предварительное, так и последующее за летальным облучением применение радиозащитной композиции обеспечивает 80 % - ную выживаемость животных при 80 % - ной гибели необработанных препаратом овец.

Таким образом, применение радиозащитной композиции «Иммуно Н» + МК-1 как до (за 24 ч), так и после облучения (через 24 ч) в летальной дозе инги-бирует процесс запуска программированной гибели клеток по апоптотическому пути, уменьшая поражение иммунокомпетентных органов ионизирующей радиацией и усиливая элиминацию апоптозных клеток из организма с участием тканевых макрофагов. Ингибирование апоптоза иммунокомпетентных клеток на фоне поражения организма ионизирующими излучениями обеспечивает большую выживаемость летально облученных животных.

ВЫВОДЫ

1. На основании сравнительного изучения эффективности различных методов (морфогистологических, биохимических, радиометрических) оценки интерфазной гибели облученных ин витро лимфоцитов, отобрана оптимальная тест-система - суправитальная окраска клеток флуоресцентными красителями (эозином, эритрозином, трипановым синим) с последующей микроскопической цитометрией апоптозных клеток.

2. Установлено, что облучение лимфоцитов периферической крови как ин витро, так и ин виво в сублетальных дозах гамма-лучей ускоряет частоту интерфазной гибели клеток в 9,8 раза, а в условиях летального облучения выживает не более 0,7-1,1 % клеток.

3. Интерфазная гибель облученных клеток реализуется по пути апоптоза, включающего распад ядерного хроматина (кариопикноз) и фрагментацию ядра (кариорексис). Указанные формы кариопатологии наблюдаются как в условиях культур клеток (ин витро), так и при облучении самого макроорганизма.

4. Феноменология интерфазной гибели лимфоидных клеток в облученном организме имеет некоторые особенности, наиболее ранним признаком которой является вакуолизация ядра с последующим появлением полусферических глыбок - апоптозных телец.

5. Усиленный распад ядер (кариорексис) и самих клеток (цитолиз) под воздействием ионизирующих излучений сопровождается опустошением лимфоидной ткани центральных и периферических органов иммунной системы, появлением в синусах лимфоузлов розеткообразующих макрофагов с повышенной активностью фермента щелочной фосфатазы, свидетельствующие о развитии в облученном организме аутоаллергии, фагоцитоза, пиноцитоза апоптотических процессов.

6. Установлено, что предварительное или последующее за облучением введение в инкубируемую лимфоцитов среду испытуемых потенциальных радиопротекторов - антиапоптогенов в отобранной тест-системе позволяет проводить быструю (за 1-2 суток) скрининговую оценку эффективности радиозащитных

^ средств без использования лабораторных животных с последующим 30-суточным

1 наблюдением за ними для получения окончательного ответа.

7. С использованием отобранной тест-системы по оценке апоптозного поражения облученных клеток проведены скрининговые исследования по поиску антиапоптогенных средств. Установлено, что из испытанных 4 потенциальных радиозащитных средств и 2 сочетаний их отобраны 2 препарата «Иммуно Н» и МК-1, на основе которых сконструирована композиция, применение которой в модельных опытах ин витро как до (24 ч), так и после (через 24 ч) облучения в летальной дозе (5,0 Гр) способствовало к повышению устойчивости лимфоцитов к радиоиндуцированному апоптозу, значительно увеличивая число жизнеспособных клеток.

8. Применение сконструированного радиозащитного препарата за 24 ч до и через 24 ч после летального облучения на овцах в дозе 25 мг/кг («Иммуно Н») и 17 мг/кг (МК-1) оказывало радиомодифицирующий эффект на течение и исход лучевой болезни, обеспечивая более благоприятное ее течение (менее выраженные лейко- и лимфопепия, сохранение архитектоники иммунокомпетентных органов, ингибирование процессов опустошения лимфоидной ткани и уменьшения количества апоптозных клеток) и большую выживаемость (до 80 %) облученных и обработанных препаратом животных.

9. Антиапоптогенное действие сконструированного радиозащитного препарата, по-видимому реализуется блокированием механизма запуска программированной гибели клеток - мишеней апоптоза лимфоцитов путем:

-нейтрализации липидных радиотоксинов и ингибирования активности фермента липоксигеназы, участвующих в усилении и поддержании апоптозного сигнала;

- повышением устойчивости клеток-мишеней апоптоза лимфоцитов их ци-топлазматических ферментов под воздействием иммунотропного препарата («Иммуно Н»), сочетанного с антибактериальным средством (МК -1).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований позволили рекомендовать методы оценки радиоиндуцированного апоптоза и средство для повышения устойчивости клеток - мишеней апоптоза - лимфоцитов, применение которых регламентируется следующими нормативно - техническими документами:

1. Временное наставление по применению противорадиационного микробного полиантагена - Утв. ВНИВИ 18.10. 2002 г.

2. Методические рекомендации по оценке радиоиндуцированного апоптоза - Утв. ВНИВИ 14.04.2003 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Е.И. Трошин, Р.Н. Низамов, И.С. Иванов. Влияние противорадиационных лечебно-профилактических препаратов на иммуноморфологию облученных животных. Отчет о НИР за 2001 г. - Ижевск - Казань. - 2001. - 8 с.

2. И.С. Иванов. Влияние потенциальных радиопротекторов на развитие пострадиационных патоморфологических изменений в органах облученных животных II Матер, научн.-произв. конф. по акт. пробл. ветеринарии и зоотехнии. -Казань, 2002. - 4.2. - С. 96.

3. И.С. Иванов. Изучение радиозащитных свойств высокоочищенного глобулина «Иммуно С» и препарата МК-1 // Матер, научн.-произв. конф. по акт. пробл. ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 2002. - 4.2. - С. 97.

4. И.С. Иванов. Влияние потенциальных радиопротекторов на развитие пострадиационных патоморфологических изменений у облученных мышей // Матер, конф.: Тез. докл. 8-10 октября. - Ижевск, 2002. - С. 115-116.

5. И.С. Иванов, Е.И. Трошин. Изучение радиозащитных и терапевтических свойств препаратов «Иммуно С» и «МК-1» при облучении крыс в летальных дозах // Матер, конф.: Тез. докл. 8-10 октября. - Ижевск, 2002. - С. 116-118.

6. И.С. Иванов, Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов, Е.И. Трошин, К.Т. Ишмухаметов. Радиозащитное действие препаратов МК-1, «Иммуно С» и «Иммуно Н» при остром сублетальном облучении // Матер, междунар. научн.-практ. конф. по акт. пробл. болезней, молодняка. - Воронеж, 2002. - С. 280.

7. А.С. Титов, Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов, Н.Б. Тарасова, И Р. Мухаметшин, И.С. Иванов. К вопросу о защитном действии препарата Т-1 при общем гамма-облучении // Матер, междунар. научн.-практ. конф. по акт. пробл. болезней, молодняка. - Воронеж, 2002. - С. 584.

8. Г.В. Конюхов, Р.Н. Низамов, Н.Б. Тарасова, И.Р. Мухаметшин, Р.Ш. Давкаев, И.С. Иванов, Г.З. Шигапова. Разработка высокоэффективных лечебно-профилавсшчсских средств защиты животных от ионизирующих излучений: отчет о НИР (заключительный) / Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт; № гос. регистрации 01990005332. - Казань, 2002. - 36 с.

9. Временное наставление по применению противорадиационного микробного полиантигена. - Утв. Директором ВНИВИ 27.10.2002 г. - Казань, 2002. - 3 с.

10. Р.Н. Низамов, Е.И. Трошин, Г.В. Конюхов, И.С. Иванов. Методические рекомендации по оценке радиоиндуцированного апоптоза. - Утв. ВНИВИ 14.04.2003 г. - Казань. - 2003. - 3 с.

11. Р.Н. Низамов, Е.Н. Трошин, Г.В. Конюхов, И.С. Иванов. Методические рекомендации по повышению устойчивости лимфоцитов к радиоиндуцированному апоптозу. - Утв. ВНИВИ 14.04.2003 г. - Казань. - 2003. - 5 с.

12. И.С. Иванов, Р.Н. Низамов, Е.И. Трошин, Г.В. Конюхов. Изыскание средств, обладающих антиапоптогенным действием при пострадиационной интерфазной гибели лимфоцитов // Матер, конф.: Тез. докл. 26-28 февраля. - Ижевск, 2003. - С. 92-93.

13. Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов, Е.И. Трошин, И.С. Иванов. Изыскание методов и средств для ингибирования радиоиндуцированного агюптоза клеток иммуно-компетентных органов. - Вет. врач (в печати).

Подписано к печати 17.07.2003, формат бумаги 60x90 1/16. Усл. Печ. л. 1,31 Заказ № 37. Тираж 100 экз. Отпечатано на офсетном участке ВНИВИ Адрес: 420075, Казань, Научный городок-2

П"Zùo 166 0

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Иванов, Иван Семенович

Стр.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Радиационная патология, вызванная ионизирующими излучениями.

2.2. Иммунопатология радиационного поражения организма.

2.2.1. Молекулярно - клеточные механизмы патологии иммунной системы при радиационных поражениях.

2.2.2. Радиоиндуцированные патоморфологические изменения на клеточном и органном уровнях,.

2.2.3. Интерфазная гибель клеток по механизму радиоиндуцирован-но'гоапоптоза,.,.'.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы исследований.

3.1.1. Материалы.

3.1.2. Методы исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1.Сравнительный анализ маркеров спонтанного и радиоиндуцированного апоптоза лимфоцитов периферической крови и иммунокомпетентных органов у интактных и облучённых животных.

4.1.1. Спонтанный и радиоиндуцированный апоптоз лимфоцитов ин вйтро.

4.1.2. Радиоиндуцированный апоптоз лимфоцитов иммунокомпетентных органов у облучённых животных ин виво.

4.1.3. Отбор оптимальных методов оценки радиоиндуцированного апоптоза на клеточном уровне.

4.1.4. Изучение возможности повышения устойчивости иммуноцитов ^ к радиоиндуцированному апоптозу в опытах ин витро.

4.1.5. Оценка антиапоптогенной активности отобранных препаратов на сельскохозяйственных животных.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

6. ВЫВОДЫ.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изыскание методов оценки и средств повышения устойчивости иммунокомпетентных клеток к радиоиндуцированному апоптозу"

1.2. Цель и задачи. Целью настоящих исследований явилось изыскание методов оценки и средств повышения устойчивости клеток - мишеней (иммуно-цитов) к радиоиндуцированному апоптозу.

Исходя из цели, на разрешение были поставлены следующие задачи:

1) на основе сравнительного изучения различных методов отобрать наиболее характерные из них для оценки апоптоза клеток - мишеней ин витро;

2) изучить морфогистологические изменения иммунокомпетентных органов у животных в процессе развития радиоиндуцированного апоптоза;

4) испытать эффективность отобранных аити ап о птоге н о в на. летально облученных животных.

1.3. Научная новизна. Впервые на основании изучения морфогистологических и биохимических изменений в органах и тканях системы иммунитета: 1) получены данные о механизмах развития в облучённом организме радиоиндуцированного апоптоза; 2) отобраны оптимальные критерии прямой оценки состояния радиоиндуцированного апоптоза иммунокомпетентных клеток периферической крови; 3) на основании сравнительного изучения эффективности различных методов оценки состояния апоптоза разработана методика оценки эффективности радиопротекторов ин витро; 4) с использованием разработанного метода оценки состояния апоптоза отобраны радиопротекторы - антиапоптогены с высокой радиозащитной активностью; 5) в опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных показана высокая эффективность новых радиопротекторов, повышающих устойчивость животных к радиоиндуцированному апоптозу и обеспечивающих выживание животных в условиях летального облучения.

1.4. Научно - практическая значимость работы.

Совершенствование диагностики радиационных поражений, а также их адекватной терапии невозможно без глубоких знаний о патогенезе радиобиологических эффектов в органах-мишенях. Проведённые исследования по изучению процессов радиоиндуцированного апоптоза клеток-мишеней радиационного поражения - иммуноцитов, позволяют углубить представления о механизмах развития радиационной патологии. Модель оценки спонтанного и радиоиндуцированного апоптоза лимфоцитов может быть использована для направленного поиска фармакологических средств для защиты организма от радиационных поражений.

Практическая значимость работы определяется тем, что результаты проведённых исследований использованы при составлении нормативно — технических документов:

1. Временного наставления по применению противорадиационного микробного полиантигена - Утв. ВНИВИ 18. 10. 2002 г.

2. Методических рекомендаций по оценке радиоиндуцированного апоптоза - Утв. ВНИВИ 14. 04. 2003 г.

3. Методических рекомендаций по повышению устойчивости лимфоцитов к радиоиндуцированному апоптозу - Утв. ВНИВИ 14. 04. 2003 г.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Методы оценки радиоиндуцированного апоптоза иммунокомпетентных клеток у животных.

2. Методы и средства, повышающие устойчивость иммунокомпетентных клеток к радиоиндуцированному апоптозу.

1.6. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на: Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (г. Казань, 2002); Международной научнопрактической конференции по актуальным проблемам болезней молодняка в современных условиях (г. Воронеж, 2002); Научно-практической межрегиональной конференции по перспективам развития регионов России в 21 веке (г. Ижевск,2002); Международной конференции, посвященной шестидесятилетию образования факультета ветеринарной медицины Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии (г. Ульяновск, 2003), на заседаниях учёного совета ВНИВИ (2001-2003).

1.8. Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 150 страницах машинописного текста включающих введение, обзор литературы, собственных исследований материалов и методов, обсуждения полученных результатов, выводов5 практических предложений и приложений. Список литературы включает 212 работ отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 8 таблицами и 25 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Иванов, Иван Семенович

6. ВЫВОДЫ

6. Установлено, что предварительное или последующее за облучением введение в инкубируемую лимфоцитов среду испытуемых потенциальных радиопротекторов — антиапоптогенов в отобранной тест-системе позволяет проводить быструю (за 1-2 суток) скрининговую оценку эффективности радиозащитных средств без использования лабораторных животных с последующим 30-суточным наблюдением за ними для получения окончательного ответа.

8. Применение сконструированного радиозащитного препарата за 24 ч до и через 24 ч после летального облучения на овцах в дозе 25 мг/кг («Иммуно Н») и 17 мг/кг (МК-1) оказывало радиомодифицирующий эффект на течение и исход лучевой болезни, обеспечивая более благоприятное ее течение (менее выраженные лейко- и лимфопения, сохранение архитектоники иммунокомпетентных органов, ингибирование процессов опустошения лимфоидной ткани и уменьшения количества апоптозных клеток) и большую выживаемость (до 80 %) облученных и обработанных препаратом животных.

9. Антиапоптогенное действие сконструированного радиозащитного препарата реализуется блокированием механизма запуска программированной гибели клеток - мишеней апоптоза лимфоцитов путем:

- нейтрализации липидных радиотоксинов и ингибирования активности фермента липоксигеназы, участвующих в усилении и поддержании апоптозного сигнала;

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований позволили рекомендовать методы оценки радиоиндуцированного апоптоза и средство для повышения устойчивости клеток — мишеней апоптоза — лимфоцитов, применение которых регламентируется следующими нормативно - техническими документами:

1. Временное наставление по применению противорадиационного микробного полиантигена - Утв. ВНИВИ 18.10.2002 г.

2. Методические рекомендации по оценке радиоиндуцированного апоптоза - Утв. ВНИВИ 14. 04. 2003 г.

3. Методические рекомендации по повышению устойчивости лимфоцитов к радиоиндуцироваиному апоптозу - Утв. ВНИВИ 14. 04. 2003 г

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Иванов, Иван Семенович, Казань

1. Акоев И.Г., Максимов Г.К., Тяжелова В.Г. Количественные закономерности радиационного синдрома//М.: Энергоиздат, 1981. 112 с.

2. Ариэль Б.М. О повреждении миокарда под влиянием рентгеновских лучей в условиях функционального отягощения сердечно-сосудистой системы: Дис. . канд. мед. наук. Л., 1965 (ЦНИРРИ). 123 с.

3. Ахмадеев P.M., Зайнуллин Л.И., Алимов A.M. Методические рекомендации по определению электрофоретических и антигенных свойств полипептидов сальмонелл методами диск —электрофореза в ПААГ ДСН и иммуноблотин-га. - Казань, 2002.-24с.

4. Белов А.Д., Киршин В.А. Ветеринарная радиобиология, М.: Колос, 1981. -250 с,

5. Белов А.Д., Киршин В.А. Ветеринарная радиобиология // 2-е изд. псрер. и доп. /Учебники и учебное пособие для студентов высших учебных заведений. М.: Агропромиздат, 1987. - 287 с.

6. Белов АД., Киршин В.А., Лысенко И.П., Пак В.В. Радиобиология. М.: Колос, 1999. - 384 с.

7. Белоусова О.И., Горизонтов П.Д., Федотова М.И. Радиация и система крови. -М.: Атомиздат, 1979. 125 с.

8. Боднарчук И.А. Гипотеза о механизме индукции адаптивного ответа при облучении клеток млекопитающих в малых дозах // Радиационная биология. Радиоэкология. 2002. - Т.42. - №1. - С. 36 - 43.

9. Боднарчук И.А. Анализ роли репарации ДНК, регуляции клеточного цикла и апоптоза в радиационно-индуцированном адаптивном ответе клеток млекопитающих // Радиационная биология. Радиоэкология. 2003. - Т.43. - №1. - С. 19 - 28.

10. Ю.Бойчук C.B. Механизмы апоптоза лимфоцитов при атопических заболеваниях: Автореф. дис. .д-ра мед. наук. Казань, 2002. - 38 с.

11. Бонд В., Флиднер И., Аршамбо Д. Радиационная гибель млекопитающих /

12. Пер. с англ. А.Г. Свердлова и др. М.: Атомиздат, 1971. - 317 с.

13. Брондз Б.Д. Рохлин О.В. Молекулярные и клеточные основы иммунологического распознавания. М.: Наука, 1978. - 336 с.

14. Бронштейн М.И. Гистохимические особенности лейкоцитов крови и костного мозга в норме // Руководство по гематологии. М.: Медицина, 1985. - Т.1. - С. 110.

15. Н.Бурлакова Е.Б., Шишкина JI.H. Репарация клеточных мембран и ее значение в лучевом поражении // Проблемы природной и модифицированной радиочувствительности. М.: Наука, 1983. - С. 29-43.

16. Бэрстон М. Гистохимия ферментов, М.: Мир, 1965. - С, 143-144,

17. Вайль С.С. Функциональная морфология нарушений деятельности сердца. П.: Медгиз, 1960. С. 109-121, 141=164.

18. Валькович A.A., Долгопетова М.А., Хансон К.П. Молекулярные механизмы радиационной гибели лимфоидных клеток // Радиобиология. 1981. = Т. 21. -Вып; 1.-С. 14-17.

19. Веленчик М.М. Нестабильность ДНК и отдаленные последствия воздействия излучений. М.: Энергоатомиздат, 1987. - 192 с.

20. Воккен Г.Г. Радиобиология / Учебное пособие для ветеринарных институтов и факультетов. М.: Высшая школа, 1967. - 381 с.

21. Воккен Г.Г. Ветеринарная радиология. JL: Колос, 1973. - 248 с.

22. Воробьев Е.И., Бессонов H.H., Степанов Р.П., Мочалова И.Н., Фомина Э.В., . Яковлева Л.А. Очерки радиационной кардиологии. М.: Атомиздат, 1978.253 с.

23. Галитовский В.Е., Гогвадзе В.Г. Влияние энергетического состояния митохондрий на межнуклеосомную фрагментацию ДНК в тимоцитах после облучения // Радиобиология. 2001. - Т. 41. - № 2. - С. 137-140.

24. Гашек М., Ленгерова А. Иммунология // Механизмы радиобиологического эффекта / Пер. с англ. под ред. A.B. Лебединского. М.: Гостамиздат, 1962. -Т.2-С. 186-204.

25. Гемпельман Л., Лиско Г., Гофман Д. Острый лучевой синдром / Перев. с. англ.- М., 1954. 230 с.

26. Гончаренко E.H., Кудряшов Ю.Б. Химическая защита от лучевого поражения. М., 1985. - 279 с.

27. Горизонтов П.Д. Патологическая физиология и экспериментальная терапия, 1968. -Т.12. -№4. -С. 5-11.

28. Гудков И.Н. Основы общей и сельскохозяйственной радиобиологии. Киев: Изд-во УСХА, 1991. - 328 с.

29. Гуськова А.К., Байсоголов Г.Л. Лучевая болезнь человека. М.: Медицина, 1971.- 384 с.

30. Гурьянова В.А., Трошин Е.И. Содержание продуктов перекисного окисления липидов в периферической крови крыс как индикатор лучевого поражения // Матер, Респ. научн,- произв. конф, по акт, пробл. ветер, и животноводства, -Казань, 1997,-С. 112.

31. Гуценко А.К., Иванов A.A., Клемпарская H.H. и др. Противолучевое действие иммуноглобулинов при экспериментальной острой лучевой болезни // Противолучевые эффекты иммуноглобулинов. М.: Энергоиздат, 1990. - С. 22-60.

32. Давыдов A.C. Солитон в молекулярных системах // Тр., Ин-та теор. физики АН УССР. Киев, 1983. - 53 с.

33. Джаналиев Б.Р., Золотаревский В.Б., Попова И.В., Радионов К.В. Морфологическая характеристика дисплазии гепатоцитов // Арх. пат. 1990. - № 8. -С. 17-22.

34. Егоров А.П., Бочкарев В.В. Кровь и ионизирующая радиация. М., 1954. -259 с.

35. Жербин Е.А., Хансон К.П., Рещиков A.M. и др. Разделение популяции тимо-цитов крыс в градиенте фиколл-пака // Цитология. 1982. - № 6. - С. 699-703.

36. Животовский Б.Д., Воскобойников Г.В., Хансон К.П. Молекулярные механизмы интерфазной гибели облученных лимфоидных клеток // Радиобиология. 1982. - Т.22. - Вып. 6. - С. 312-357.

37. Жорова Е.С., Заликин Г.А., Анисимов П.Г. Гистопатология легких при инкорпорации плутония 238 // Радиобиология. - 1989. - Т.29. - № 2. - С. 202206.

38. Жукова A.A., Гогвадзе В.Г. Влияние сверхвысоких доз у радиации на энергетику митохондрий печени крыс // Радиационная биология. Радиоэкология. - 1997. - Т.37. - № 3. - С. 382-386.

39. Иванов A.A. Повышение выживаемости облученных животных введением гетерологичных сывороток после облучения // Радиобиология. 1972. - Т. 12. -Вып.2.-С. 317-319.

40. Иванов A.A. Анафилактоидные механизмы первичной реакции на облучение // Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни / Под ред. H.H. Клемпарской, = Мл Энергоиздат, 1981. = С, 32-43.

41. Иванов А,А, Влияние радиации на систему иммунитета и иммунологические методы модификации радиорезистентности // Лучевое поражение / Под ред. проф. Ю.Б. Кудряшова. М.: Изд-во МГУ, 1987. - С. 154-161.

42. Иванов A.A. Иммунный статус и радиация // Сб. тез. науч. конф. М., 1991. -С. 15.

43. Иванов А.Е. Патологоанатомические изменения в легких собак при общем облучении рентгеновыми лучами // Архив патологии. 1957. - Т. 19. - №1. -С. 31-36.

44. Иванов А.Е., Куршакова H.H. Гистохимические исследования окислительных ферментов в легочной ткани при лучевой болезни, вызванной инкорпорированными радиоактивными веществами // Арх. пат. -1961,- №6.-С. 31 -38.

45. Иванов А.Е., Куршакова H.H. Гистохимическое изучение экспериментальной пневмонии при острой лучевой болезни // Арх. пат. 1962. - №8. - С. 28-37.

46. Иванов А.Е., Куршакова H.H., Шиходыров В.В. Патологическая анатомия лучевой болезни. М.: Медицина, 1981. - 304с.

47. Ивницкий Ю.Ю., Носов A.B., Малоховский В.Н. Механизмы церебральноголучевого синдрома//Радиобиология. 2001. - Т. 41. - № 1. - С. 48-53.

48. Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни // Под ред. H.H. Клемпарской. М.: Энергоиздат, 1981. - 103 с.

49. Ишмухаметов К.Т., Конюхов Г.В., Низамов Р.Н. и др. Влияние длительного у-облучения на субпопуляции Т- и В- лимфоцитов кроликов // Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. Пугцино, 1997. - Т.1. - С. 55-56.

50. Ишмухаметов К.Т., Тюменев P.C., Покровский Б.С. Особенности развития лучевого поражения у животных на следе аварии чернобыльской АЭС // Матер. Респ. науч.-произв. конф. по скот, пробл. ветерин. и зоотехн. Казань, 1996.-С. 102.

51. Казаева Ф.М. Клинико-гёматологические особенности течения острой лучевой болезни у ягнят, = Алма-Ата, 1970. = 79 с.

52. Караваев В.М,, Косяков В .Л., Коржавенко Г.И., Ильин ВТ. Защита животных от поражения ядерным оружием, М.: Колос, 1970. - 400 с.

53. Карташов П.А. Лучевая болезнь овец // Вестник сельскохозяйственной науки. 1970.-№ 6. - С. 74-78.

54. Карташов П.А. Ранняя диагностика острой лучевой болезни овец // Ветеринария. 1970. -№ 8. - С.82-84.

55. Карташов П.А., Киршин В.А., Ильин В.Г., Бурба П.Г., Песков П.Г., Голосной В.Т. Лучевая болезнь сельскохозяйственных животных // М.: Колос. 1978. -272 с.

56. Квачева Ю.Е. Морфологические типы радиационно-индуцированной гибели клеток кроветворной ткани, ее биологическая суть и значимость на различных этапах развития острого радиационного поражения // Радиобиология. -2002. Т. 42. -№ 3. - С. 287-292.

57. Кирик О.В., Степанов Р.П. Структурные изменения в тканях почки у крыс, вызванные малыми дозами ионизирующего излучения // Тез. докл. 4-го съезда по рад. иссл. Москва, 2001. - T.l. - С.348.

58. Киршин В.А. Обеспечение радиационной безопасности с.-х. животных /

59. Ветеринарная патология. 2002. - № 3. - С. 51-57.

60. Киршин В.А., Белов А.Д., Бударков В.А. Ветеринарная радиобиология. М.: Агропромиздат, 1986. - 175 с.

61. Киршин В.А., Бобрьппев К.П., Бударков В.А. и др. Радиобиологические эффекты у животных. М.: МГАВМиБ. - 1999. - 196 с.

62. Киршин В.А., Бударков В.А. Ветеринарная противорадиационная защита. -М.: Агропромиздат, 1990. 158 с.

63. Клемедсон К.И., Нельсон А. Общая радиобиология. Биологическое действие излучений на взрослый организм // Механизмы радиобиологического эффекта / Пер. с англ. под ред. A.B. Лебединского. М.: Госатомиздат, 1962. - Т. 2. -С. 87-185.

64. Клемпарская H.H. и др, Аллергия, и радиация. = М.: Медицина, 1968, 239 с.

65. Клемпарская H.H. и др. Радиоактивные изотопы и иммунитет, М,: Атомиз-дат, 1969.- 183 с.

66. Клемпарская H.H. Аутоантитела облученного организма. М.: Атомиздат. -1972.-280 с.

67. Клемпарская H.H. Аутосенсибилизация облученного организма // Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни / Под ред. H.H. Клемпар-ской. М.: Энергоиздат, 1981. - С. 5-14.

68. Клемпарская H.H., Петров Р.В. Инфекция и иммунитет у облученных организмов // Радиационная медицина / Под ред. А.И. Бурназяна и A.B. Лебединского. М.: Госатомиздат, 1963. - С. 232-256.

69. Клемпарская H.H., Раева Н.В., Сосова В.Ф. Антибактериальный иммунитет и вакцинация. М.: Медицина, 1963. - 120 с.

70. Клемпарская H.H., Шальнова Г.А. Нормальные аутоантитела как радиозащитные факторы. М.: Атомиздат, 1978. - 132 с.

71. Комар В.Е., Хансон К.П. Информационные макромолекулы при лучевом поражении клеток. М.:,Атомиздат, 1980. - 251 с.

72. Коноплянников А.Г. Радиобиология стволовых клеток. М.: Энергоатомиздат, 1984. 119 с.

73. Конюхов Г.В., Низамов Р.Н., Новиков H.A. и др. Влияние хронического гамма-облучения в малых дозах на костный мозг и эритроциты крови кроликов // Тез. докл. 3-го съезда по рад. исслед. Пущино, 1997. - Т.1. - С. 407408.

74. Корупу В.Я. Электронно-микроскопические исследования печени при общем рентгеновском облучении // Вопросы биофизики и механизма действия ионизирующей радиации. Киев, 1964. - С.57-64.

75. Корыстов Ю.Н., Шапошникова В.В. Радиационный апоптоз тимоцитов: инициация и передача сигнала к генам // Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. -Пущино, 1997.-Т.1.-С. 117-118.

76. Краевский H.A. Очерки патологической анатомии лучевой болезни. М.: -1957.-231 с.

77. Краевский H.A., Иванов А.Е. Воспаление и проникающее ионизирующее излучение // Архив патологии. 1963. - Т.25. - № 6. - № 8. - С. 3-13.

78. Кругликов Б.П. Радиочувствительность сельскохозяйственных животных // Сельскохозяйственная биология. 1986. - № 11. - С. 91-96.

79. Кругликов Б.П., Васильев A.B., Шевченко A.C. Действие ионизирующих излучении на сельскохозяйственных животных // Сельскохозяйственная радиоэкология / Под ред. P.M. Алексахина, H.A. Корнеева. М.: Экология, 1991.-С. 174-195.

80. Кудряшов Ю.Б., Береифельд Б.С. Основы радиационной биофизики. М.: Изд-во МГУ, 1982. - 302 с.

81. Кудряшов Ю.Б. Лучевое поражение "критических систем" // Лучевое поражение / Сб. под ред. Ю.Б. Кудряшова. М.: Изд-во МГУ, 1987. - С. 5-72.

82. Кузин A.M. Основные регуляторные системы клетки и молекулярные механизмы влияния на них ионизирующей радиации // Тез. докл. Всесоюз. сим-поз. "Влияние радиации на регуляторные процессы в клетке". Пущино, 1976.-С. 3-4.

83. Кузин A.M. Структурно-метаболическая теория в радиобиологии. М.: Наука, 1986, - 284 с.

84. Кузин A.M. Проблемы современной радиобиологии,- М,; Знание, 1987,-64 с.

85. Кузин А,М, Радиационный гормезис в иммунологии // Сб. тез. Всесоюз. научн. конф.-М., 1991.-С. 17-18.

86. Кузин A.M. Природный радиоактивный фон и его значение для биосферы Земли. М.: Наука, 1991. - 177 с.

87. Кузин A.M., Копылов В.А. Радиотоксины. М.: Наука, 1983. - 173 с.

88. Купер Э. Сравнительная иммунология. М.: Мир, 1980. - 418 с.

89. Куршакова H.H. Изучение содержания нуклеиновых кислот при острой лучевой болезни у обезьян при помощи гистохимических методов // Бюлл. экс-пер. биол. 1961. - №1. - С. 31-35.

90. Лаврентьев Л.И. Патоморфологические изменения // Биологическое действие продуктов ядерного деления. М., 1975. - С. 203-212.

91. Люлько A.B., Люлько A.A., Струсь В.П. Морфофункциональное состояние почек крыс после острого и хронического воздействия ионизирующей радиации. Днепропетровск, 1989. - 23 с.

92. Май ер Н. Практическая гистохимия. М.: Мир, 1969. - С. 426-427.

93. Мальцев В.Н. Иммунохимические свойства белков элюатов из тканей внутренних органов, содержащих аутоантитела // Аутоантитела облученного организма / Под ред. H.H. Клемпарской. М.: Атомиздат, 1972. - С. 60-65.

94. Маркевич JI.H. Количество липидов в печени крыс в отдаленные сроки после фракционированного воздействия у-излучения // Радиационная биология. Радиоэкология. 1995. - Т.35. - № 6. - С. 857-859.

95. Медуницин Н.В., Литвинов В.И., Мороз A.M. Медиаторы межклеточного взаимодействия. = М.: Медицина, 1980. 256 с.

96. Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве. М., 1988, - 17 с,

97. Москалев Ю.И. Отдаленные последствия ионизирующих излучений. М.: Медицина, 1991. - 464 с.

98. Москалев Ю.И., Стрельцова В.Н. Отдаленные последствия радиационного поражения. Неопухолевые формы // Итоги науки и техники. Сер. Радиационная биология. М.: ВИНИТИ, 1987. - Т. 5. - 214 с.

99. Мудрецов Н.И. Патологоанатомическая характеристика легочных осложнений экспериментальной острой лучевой болезни // Тр, Всесоюз. конф. по мед. радиологии. М., 1957. - С. 208-213.

100. Непомнящих Г.И., Непомнящих JI.M. Прижизненная патологоанатомиче-ская диагностика и прогноз хронических воспалительных процессов в легких // Арх. патологии. 1990. - Т. 52. - № 2. - С. 30-35.

101. Новикова А.Н. Изменения органов выделения // Многотомное руководство по патологической анатомии. М,э 1962. - Т.8. - Кн,2. - С. 149-159.

102. Окада Ш. Радиационная биохимия клетки / Пер. с англ. М.: Мир, 1974. -407 с.

103. Орлова Н.В., Смирнова С.Г., Замухаева И.А, и др, Апоптоз лимфоцитов периферической крови здоровых и больных раком лиц после воздействия у-излучения in vitro // Рад. биол. и радиоэкол. 2001. - Т. 41. -№ 4. - С. 366372.

104. Остапченко Л.И., Ручко М.В., Кучеренко Н.Е. Нарушение в системе фос-фолирования лимфоидных клеток тимуса и селезенки // Иммунный статус человека и радиации / Сб. тез. Всесоюз. науч. конф. М., 1991. - С.50.

105. Петров Р.В. Иммунология острого лучевого поражения. М.: Госатомиз-дат, 1962.-426 с.

106. Петров Р.В. Иммунология. М.: Медицина, 1987. - 416 с.

107. Пирс Э.А. Гистохимия.- М.: Иностр. лит-ра, 1962. 596 с.

108. Пожарисская Т.Д., Лаврентьева Т.Д. Восстановление клеточного состава различных зон коры лимфатического узла после общего и частичного облучения // Радиобиология. 1987. - Вып. 1. - С. 51-55.

109. Покровский Б.С. Субпопуляционный состав Е- и ЕАС розеткообразую-щих лимфоцитов периферической крови индеек при воздействии малых доз гамма- квантов // Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. - Пущино, 1997. - Т. 1. -С. 34-35.

110. Покровский Б.С. Физиологическое состояние сельскохозяйственной птицы при воздействии малых доз ионизирующих излучений: Дис. докт, биол/наук, = Боровск, 1997. = 397 с,

111. Поспелов В.А,, Светликова QB,, Воробьев В.И. Электрофоретическое изучение гетерогенности субъединиц хроматина // Мол. Биол. 1977. - Т.11. -Вып.4.-С. 781-789.

112. Предпосевное гамма-облучение семян сельскохозяйственных культур / Под ред. А.Н. Кузина, Н.М. Березиной, Д.А. Каушанского. М.: Атомиздат, 1976.- 149 с.

113. Пристер Б.С., Лощилов H.A., Немец О.Ф., Поярков В.А. Основы с.-х. радиологии. К.: Урожай. - 1991. - 472 с.

114. Притулин П.И. Влияние ионизирующих излучений на инфекцию и иммунитет //Ветеринария. 1965. - № 12. - С. 9-11.

115. Прищеп С.Г. Структурно-функциональная модификация мембран клеток костного мозга крыс при действии хронического и острого гамма-облучения // Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. Пущино, 1997. - Т. 1. - С. 129-130.

116. Рабинович P.M., Шапиро И.В. Рентгенологическая семиотика лучевых повреждений легких // Вестник рентг. и радиол. 1976. - №2. - С. 15-20,

117. Рапопорт Я.Л., Основные вопросы современной иммуноморфологии //

118. Патофизиология и экспериментальная терапия. 1965. - Т.П. - 1. С. 26 - 35.

119. Резункова О.П., Сунгуров А.Ю. О некоторых закономерностях лучевого поражения мембран лимфоцитов тимуса // Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. Пущино, 1997. - Т. 1. - С. 71 -72.

120. Решл М., Петырек П., Куна П. Морфология изменений в легких после общего однократного гамма-облучения кроликов // Радиобиология. 1987. -Т.27. - №4. - С. 532-535.

121. Романцев Е.Ф. Радиация и химическая защита. М.: Атомиздат, 1968.-24 с.

122. Рыбак П.Я. Основы радиационной патологии у животных. М.: Сельхозгиз, 1959. = 297 с.

123. Рыскулова С.Т. Радиационная биология плазматических мембран. М.: Медицина, 1986. 271 с.

124. Салимов А.Г., Карпухин A.B., Кузьмина И.В., Синтковский Д.М. Малые дозы и радиации индуцируют изменение положения хромосом в интерфазных ядрах лимфоцитов человека // Тез докл. 3-го съезда по рад. иссл. Пущино, 1997. - С. 40-41.

125. Серкиз Я.И., Пинчук В.Г., Пинчук Л.Б. Радиобиологические аспекты аварии на Чернобыльской АЭС. Киев, 1992.-172 с.

126. Сисев В.А., Должанов А.Я., Давыдова O.E. Иммунокомпетентные клетки слизистой тощей кишки при воздействии ионизирующего облучения // Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. Пущино, 1997. - Т.1. - С. 73-74.

127. Сыпин В.Д., Бижанов Б.Р., Егоров В.Г. Влияние гамма-излучения на Т- и В-системы лимфоцитов в периферической крови овец // Иммунный статус человека и радиации / Сб. тез. Всесоюз. науч. конф. М., 1991. - С. 112.

128. Талько B.B. Лизосомальные гидролитические ферменты и нуклеазы имму-нокомпетентных клеток при активации их лектинами у лиц, перенесших острую лучевую болезнь // Иммунный статус человека и радиации / Сб. тез. Всесоюз. научн. конф. М., 1991. - С. 33.

129. Тимохин A.A. Лечебно-профилактическая эффективность диэтиламмоние-вой соли 1Ч-бензилиденамино-1-фенилменсульфоновой кислоты: Авт. дис. . канд. вет. наук. Казань, 2002. - 19 с.

130. Тихонова Н.М., Фрумкис Э.М. Морфологическая характеристика лимфоид-ных органов при острейшей лучевой болезни // Сосудистая и нервная система в норме и патологии. Томск, 1975. - С. 59-63.

131. Троицкий В.Л., Туманян М.А. Влияние ионизирующих излучений на иммунитет, М.: Медгиз, = 1958.- С. 50-55.

132. Троицкий В.Л, Нарушение образования антител под влиянием облучения и влияние радиации на различные фазы антителообразования // Радиационная иммунология. М.: Медицина, 1965. - С. 143-172.

133. Тронов В.А., Коноплянников М.А., Никольская Т.А. и др. ДНК-кометы как маркер клеточной гибели // Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. ПуЩино, 1997. -Т.1. - С. 132-133.

134. Уланова A.M. Выявление клеточной лучевой аутоаллергии у мышей с помощью метода ингибиции миграции лимфоцитов // Радиобиология. 1974. -Т. 14.-Вып. 1,-С. 88-91.

135. Уманский С.Р. Генетическая программа клеточной гибели: гипотеза и некоторые положения//Усп. совр. биол. -1982. Т. 93. - Вып. 1.-С. 139-148.

136. Урбах В.Ю. Вариационная статистика для биологов и медиков. М.: Изд-во АН СССР. - 1962. -322 с.

137. Урнышева В.В., Гуляева О.Н., Кушнирева Е.В., Шишкина Л.Н. Влияние антиоксидантного статуса на характеристики липидов в тканях животных после острого облучения в сублетальных дозах // Радиобиология. 2002. -Т.42. - №5. - С. 481-487.

138. Федоренко Б.С., Опарина Д.Я. Структурные изменения в печени животных в отдаленном периоде поражения протонами высоких энергий // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. -Томск, 1971,- Т.З.- С. 29-34.

139. Федоренко Б.С., Шиходыров В.В. Патологоанатомические изменения почек у собак в отдаленном периоде после облучения протонами высоких энергий //Космическая биол. 1970. - №6. - С. 14-18.

140. Федоров Е.А., Пристер Б.С., Буров Н.И. и др. Биологическое действие молодых продуктов деления на молочный скот и их переход в продукцию животноводства // Радиобиология и радиоэкология с.-х. животных. М.: Атомиздат, 1973, - С. 71-139.

141. Фрадкин Г.Е. О лучевом поражении критических систем // Инф. бголл. радиобиол. = 1985. -'Вып. 6L С. 7-9.

142. Хансон К.П. Генетическая гипотеза интерфазной гибели лимфоидных клеток // Интерфазная гибель облученных клеток. Обнинск НИИ мед. радиол АМН СССР, 1978. - С. 80-82.

143. Хансон К.П., Комар В.Е. Молекулярные механизмы радиационной гибели клеток. М.: Энергоатомиздат, 1985. - 148 с.

144. Хансон К.П., Комар В.Е. Биохимические аспекты действия ионизирующей радиации на живой организм. Л.: Медицина, 1977. - 322 с.

145. Харлова Г.В. Регенерация лимфоидных органов у млекопитающих. М.: Медицина. - 1975. - С. 91-98.

146. Шальнова Г.А., Кузьмина Т.Д., Уланова A.M., Добронравова H.H. Сывороточные глобулины как противолучевые препараты // Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни / Под. H.H. Клемпарской. М.: Энергоатомиздат, 1981. - С. 15-31.

147. Шапошникова В.В., Эйдус Л.Х., Добровинская O.P., Корыстов Ю.Н. Межклеточные взаимодействия при интерфазной гибели облученных тимоцитов // Иммунный статус человека и радиации / Сб. тез. научн. конф. М., 1991.1. С. 59.

148. Шарифуллина Д.Т. Разработка методов и средств для выявления лучевой аллергии у животных: Автореф. дис. . канд. биол. наук.-Казань, 2002.- 23с.

149. Шевченко A.C., Кобялко В.О., Шевченко Т.С. Нарушения плазматической мембраны для Ca 2+ при радиационно-индуцированном апоптозе тимоцитов // Тез. докл.3-го съезда по рад. иссл. Пущино, 1997. - Т.1. - С. 142-143.

150. Шубик В.М. Ионизирующие излучения и иммунитет. М.: Атомиздат, 1977. - 148 с.

151. Шубик В.М, Иммунологические исследования в радиационной гигиене. -М.: Энергоатомиздат, 1987. 144 с.

152. Шутко А.Н., Шатинина H.H., Комар В.Е. и др. Поздние субпопуляционные отклонения в периферических лимфоцитах человека после облучения в малых дозах // Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. Пущино, 1997. - Т.1. - С. 50-51.

153. Эйдус JI.X. Неспецифическая реакция клеток и радиочувствительность. -М.: Атомиздат, 1977. 151 с.

154. Эйдус JI.X. Интерфазная гибель облученных тимоцитов результат «эффекта свидетеля» // радиобиология. - 2002. - Т. 42. - № 3. - С. 284-286.

155. Юнусова P.M., Ильина А.Н., Архипов Н.И., Бударков В.А., Зенкин A.C. Морфологические изменения с иммунокомпетентных органах жвачных животных, находящихся в зоне аварийного выброса ЧАЭС // Иммунный статус человека и радиация. М., 1991. - С. 113-114.

156. Яковлева JI.A. Сравнительное исследование лучевой болезни и ее последствий. Л., 1966. - 157 с.

157. Ярилин A.A. Динамика популяции В- и Т- лимфоцитов в облученном организме // Мед. радиол. 1978. - №1. - С. 37-40.

158. Ярилии А.А. Нарушение и восстановление взаимосвязей популяций лимфоцитов после облучения: Автореф! дис. . докт. мед. наук. Д., 1981.

159. Ярилин А.А. Радиация и иммунитет. Современный взгляд на старые проблемы // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997.- Т.37. - Вып.4. — С. 597-603.

160. Ярмоненко С.П. Радиобиология человека и животных. Изд. 1-е. - М.: Высшая школа, 1977. - 368 с.

161. Ярмоненко С.П. Радиобиология человека и животных. Изд. 2-е. - М.: Высшая школа, 1988. - 424 с,

162. Ahlqvict J. Endocrine influences on limphatic organs inflamation and autoimmunity // Strain Technol, 1972. ^ V. 7. - N i. - P. 17-27.

163. Applefeld M.M. Radiation-induced cardiac disease // Primary Cariol. 1986, -V.12. - РЛ59-162, 148, 150, 153455, 164-170.

164. Ashwell J. D., Schwart R.H., Mitchell J. В., Russo A. Effect of y-radiation on resting B-lymphocytes // J. Immunol. 1986. - V. 136. - P. 3649-3656.

165. Bacg Z. M. and Herve A. Sur un noureon protecteur contre la rayonnement x. // Scweiz med Wschr . 1952. - V.40. - P. 1018.

166. Bond V. P., Robinson С. V. A mortality determinant in nonuniform exposures of the mannual. Schweiz. med Wschz. - 1967, Sappl., - V.7. - P. 265 - 275.

167. Bustad L. K. et. al. Effect of stabile iodine on uptake of radioiodihe in sheep // Am. J. Vet. Res. 1985. - V. 19. - N 73. - P. 893-894.

168. Burkart W. Radiation biology of the lung: recent progress in understanding cancer induction and nonstochastic effects of ihaled radon daughters, hot particles and other radionuclides // Sci. Total Environm.- 1989.- V. 89. N 112. - 216 c.

169. Burnet F.M. Cellular Immunology. Melbourne: Acad. Press, 1969. - 650 p.

170. Casarett G.W., Waeburq H.E. Radiation histopathology // Boca Raton: CRC Press.- 1980. V.I. - 160 p.; V.2-176 p.

171. Clark A. Cieneral pharmacology Handbuch der Experimentellen Pharmokologie, Erganzungswerk, IV Berlin, Sprinder, 1936. P. 123.

172. Damage to Livestock from Radioactive Fallout in Event of Nuclear War // Nat. Acad. Sci. Nat. Res. Council. Washington. 1963. - 1078 p.

173. Drewinko B., Humphrey R. Repair mechanisms in humans lympoid cells // Int. J. Radiat. Biol. 1971. - V.20. - P. 149-171.

174. Durum S.K., Gengozian N. The comparative radiosensitivity of T- and B-lymphocytes // Iht. J. Radiat. Biol. 1978. - V.34. - P. 1-15.

175. Fajardo L., Brown J., Glatstein E. Glomerular and juxtaglomerular lesions in radiation nephropathy //Radiat, Res. 1976, - V.68. - P. 177-183.

176. Glatstein E,, Fajardo L,, Bown J. Radiation injury in the mouse kidney. I. Sequential light mieroscopie study // Tnt.,1.Radiat. Oncol., Biol., Phy.s., 1977. -V.2. P. 933-943.

177. Iseki S., Mori T. Actidated mouse lymphocyte release factors witch modulate the proliferative responses of other lymphocytes // Histochem. Cytochem. 1966 - V. 37.-N 5.-P. 177-189.

178. Hampton J. Acute radiation effects in kidney // Radiat. Res. 1972. - V.52. - P. 316-323.

179. Ju S.T., Matsui K., Ozdemirli M. Molecular and cellular mechanisms regulating T and B cell apoptosis through Fas/ FasL interaction // Int. Rev. Immunol. -1999. V. 18. - N 5-6. - P. 485-513.

180. Kindt A., Sattler E.L., Schraub A. Radiation-indiced anorexia in Syrian hamsters // Radiat. and Environ. Biophys. 1980. - V.18. - N 2. - P. 149-155.

181. Kumar R.K., Lykke A.W. Granulocyte contamination of separated blood mononuclear cells // Brit J. Concer. 1980. - V. 42. - P. 794-796.

182. Mays C.W., Lioyd R.D., Marshall J.H. Malignancy risk to humans from total body gamma rays // Proc. 3 rd. Int. Rad., protect. Assoc.- 1973.- P. 9-14.

183. Naomi H. Interaction of particles with bronchial cells // Ibid.- 1988.- 55. —N 4.-P. 665-669.

184. Olinic A., Rusu M. Dinamic modificarilor fosfatazei alcaline si fosfatazei acide in rini chiul de sobolan iradiax // Clujul med. 1976. - V.49. - P. 88-94.

185. Planel H., Soleilhavoup J.P., Cottin F. et. ' al. Etude de la croissance de Paramecium aurelia et P. caudatum en latoratoir // C. R. Acad. Ski. 1969. - V. 269. - P. 1697-1701.

186. Polyak K., Xia Y., Zweier J.L., et al. A model for p53-induced apoptosis // Na-ture.-1997.- V. 389.- N 6648.- P. 300-303.

187. Pontes P.I. Efeito dos raios-X sobre o tubulo contorcide proximal de rim de camundango (Mus muscular) // Rev. Brasil. Biol. 1977. - V.37. - P. 457-462.

188. Ragowski F. Citco A. Oddzialywanie promieniowania jonizujacego na ludzi i zwierreta // Zesz nauk. P Bialosy Elek. 1988. - V.8. - P. 89-101.

189. Robins M.E., Campling D,, Rezvani M., Golding S J,, Hopewell J.M. Radiation nephropathy in mature piqs following the irradiation of both kindneys // Int. J, Radiat. Biol. 1989. - V.56. - P. 83-98.

190. Rüssel L.B., Bussel W.L. Radiation harards to the embryo and fetus // Radiology. 1952.-V.58.-P. 3.

191. Schouse S.S., Warren S.L., Whipple G.H. Aplasia of morrow and fatal intoxication in dogs produced by roentgen radiation of all bones // J. du tissue Exp. Med. 1931. - V.53. - P. 421-435.

192. Schock E., Pattie R.E., Creasey M. Methods for electron microscopy of the La-mellated osmiophilic bodies of the long // J. Microse. Gr. Brit. 1973.- 97.- N 3.-P. 321-330.

193. Seale R.L., Simpson R.T. The preparation of peptide and protein componeuts // J. Mol. Biol. 1975. - V. 94. - P. 479-501.

194. Sharplin J. Franko A. A quantitative histological study of strain-dependeni differences in thr effects of irradiation on mouse lung during the early phase // Radiat. Res. 1989. - V. 119. - N1. - P. 1-14.

195. Simonnet H., Demaux G., Kahn T. Recherches experimentales sur les reactions splenique a Jirradiation. Rate en plase dans Jorganisme irradie in tato et rate exteriorisce//C. R. Soc. Biol. 1955. - 1949. - V.ll-12. - P. 1183-1186.

196. Tullis J.L. and Warren S. Gross autopsy observations in animals exposed at Bikini preliminary report//J.A.M.A. 1947. - V.134. - P. 1155-1159.

197. Tzuzuki M. Eyperimentsl studies on the biological action of hard roentgen rays // Am.J.Roentgen. 1926. - V.16. - P. 134-150.

198. Vlachaki M.T., Meyn M.D., Meyn R.E. Astro research fellowship: the role of bcl-2 and gluthatione in an atioxidant pathway to present radiation-induced apoptosis // Int. J. Radiat. Bioolloogy.- 1999.- V. 42. N 1.- P. 185-190.

199. Virsik R, Reineske K., Wolf T., Harder D. Absenct of fractionation, protaction, radiation quality and radical scavender effects on radiation induced interphase death of human G0 lymphocytes in vitro // Stxahlenterapie, 1980,- Bd. 156. - P, 830-844.

200. Wang J.F., Jerrells T.R., Sprizer J.J. Descreaset production of reactive oxygen intermediates is an early event during in vitro apoptosis of rat thymocytes // Free radical Biol. Med.- 1996.- V. 20. N 4. - P. 533-542.

201. Warren Sh. Effects of radiation on normal tissues // Arch. Pathol., 1942. V.34. -P. 562-608.

202. Watters D. Molecular mechanisms of ionizing radiation-induced apoptosis Immunol. Cell. Biol.- 1999.-V. 77.- N 3,- P. 263-271.

203. Wilkinson M. Changes in the phagocytic activiti of polymorphonuclear lewkocytes following total body x-irradiation in the rat // Blood. The J. Hematology. 1954. - V.9. - P. 8.

204. Yeung T.K., Lauk S., Simmonds R.H., Hopewell J.W., Tpott K.R. Morphological and functional changes in the rat heart after x-irradiation: Strain, differences // Radiat. Res. 1989. - V.119. - N.3. - P. 489-499.

Информация о работе

Иванов, Иван Семенович
кандидата биологических наук
Казань, 2003
ВАК 03.00.01

Диссертация

Изыскание методов оценки и средств повышения устойчивости иммунокомпетентных клеток к радиоиндуцированному апоптозу - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы