Изучение свойств пробиотических молочнокислых бактерий как биологически активных компонентов пищи

Ускова, Мария Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение свойств пробиотических молочнокислых бактерий как биологически активных компонентов пищи
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изучение свойств пробиотических молочнокислых бактерий как биологически активных компонентов пищи"

□034Э4132

УСКОВА МАРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ИРОБИОТИЧЕСКИХ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ КАК БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КОМПОНЕНТОВ ПИЩИ

Специальность 03.01.04 - «Биохимия»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 5 МДР 2010

Москва-2010

003494132

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте питания РАМН

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор,

академик РАМН

Тутельян Виктор Александрович

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ,

доктор биологических наук, профессор Спиричев Владимир Борисович

доктор биологических наук, профессор Коничев Александр Сергеевич

Ведущая организация:

Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-нсследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича РАМН

Защита состоится 19 апреля 2010 г. в 14-00 на! заседании

Диссертационного Совета Д001.002.01 в Учреждении РАМН НИИ питания

РАМН по адресу:

Москва, Устьинский проезд, д. 2/14

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения РАМН НИИ питания РАМН.

Автореферат разослан '^5"марта 2010 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор ^Со^»"^®4' В.М.Коденцова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Полезные для здоровья человека свойства молочнокислых бактерий (МКБ), впервые описанные И. И. Мечниковым, спустя столетие вновь стали объектом интенсивного изучения. В настоящее время широко используется понятие «пробиотик» для обозначения живых микроорганизмов (преимущественно МКБ), употребление которых с пищей в достаточных количествах оказывает благоприятное действие на здоровье [Re!d G., 2001]. К пробиотикам относятся главным образом представители родов Lactobacillus и Bifidobacterium, а также отдельные штаммы некоторых видов Streptococcus, Lactococcus, Enterococcus, Bacillus и Saccharomyces [Шендеров Б. А., 1998; Holzapfel W. Н. et al., 2001].

Наиболее хорошо документированы положительные эффекты пробиотиков и пробиотических продуктов при профилактике и лечении хронических воспалительных и инфекционных заболеваний желудочно-кишечного тракта [Шендеров Б. А., 1998; Бондаренко В. М. и соавт., 2004; Alvarez-Olmos М. I. et al., 2001; Agarwal К. N. et al., 2002]. В то же время накапливаются доказательства их значительно более широкой функциональной активности: наряду со способностью нормализовать функции кишечной микрофлоры пробиотики могут способствовать усилению иммунитета, ослаблению проявлений пищевой аллергии, облегчать симптомы непереносимости лактозы, оказывать гипохолестеринемическое, антиканцерогенное и антимутагенное действие [De Vrese М. et al., 2001; Isolauri E. et al., 2001; PereiraD.I. et al., 2002; Gill H.S. et al., 2004].

В последнее время появляются сообщения об обнаружении у некоторых МКБ антиоксидантных свойств, которые сохраняются и даже усиливаются в составе пищевых продуктов, ферментированных или обогащенных ими [Kaizu Н. et al., 1993; Wang Y. С. et al., 2006; Virtanen T. et al., 2007; Mikelsaar M. et al., 2009]. В ряде исследований была показана способность различных штаммов МКБ подавлять процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) микросом и липопротеидов низкой плотности, захватывать свободные радикалы, усиливать

экспрессию генов ферментов антиоксидантной защиты в различных тканях и повышать их антиоксидантную емкость [Kaizu H. et al., 1993; Lin M. Y. et al., 1999; Stecchini M. L. et al., 2001; Saide J. A. O. et al., 2005; Aoi W. et al., 2007; Mikelsaar M. et al., 2009].

Не менее актуальной тематикой является исследование ферментативной активности пробиотических штаммов, включая ферменты антиоксидантной защиты и гидролитические ферменты. Некоторые виды микроорганизмов, используемых в качестве пробиотиков и йогуртных заквасок, могут являться «носителями» гликозил-гидролаз, отсутствующих или недостаточно активных у человека [Шендеров Б. А., 1998; Pedrosa M. С. et al., 1995; Honda H. et al., 2007]. Увеличение активности а-галактозидазы, обеспечивающей гидролиз а-галактоолигосахаридов, но отсутствующей у млекопитающих, и [Î-галактозидазы (лактазы), недостаточность которой приводит к явлениям непереносимости лактозы, обнаруживали в содержимом кишечника людей в период употребления кисломолочных продуктов [Marteau P. et al., 1990; De Vrese M. et al., 2001; LeBlanc J. G. et al., 2005]. Бактериальным гликозил-гидролазам микрофлоры желудочно-кишечного тракта отводится важная роль в метаболизме многих биологически активных соединений растительного происхождения (флавоноиды, изофлавоны) [Шендеров Б. А., 1998; Nemeth К. et al., 2003; Crazier A. et al., 2009].

Исследование проводили в соответствии с планом НИР НИИ питания РАМН по теме № 093 «Изучение роли некоторых минорных компонентов пищи в формировании адаптационного потенциала организма» (2008-2010 гг.).

Цель и задачи исследования

Целью работы являлось изучение характера антиоксидантного действия и ферментативных свойств пробиотических штаммов молочнокислых бактерий и йогуртных заквасок.

Задачи исследования: 1. Провести сравнительное изучение антиоксидантных свойств молочнокислых бактерий различных таксономических групп в модельных системах in vitro;

2. Изучить влияние штамма пробиотических молочнокислых бактерий Lactobacillus casei 114001 и содержащего его кисломолочного продукта на антиоксидантный статус крыс;

3. Изучить антиоксидантные и гепатопротекторные свойства/,, casei 114001 в условиях индуцированного окислительного стресса;

4. Оценить спектр энзиматической активности молочнокислых бактерий различных таксономических групп;

5. Изучить влияние L. casei 114001 на формирование энзиматической активности слизистой оболочки кишечника и микробиоты толстой кишки при внутрижелудочном введении пробиотика лабораторным животным;

6. Изучить влияние L. casei 114001 на биологическую активность рутина (кверцетин-З-О-Р-глюкозо-а-Ь-рамнозида).

Научная новизна работы

Впервые дана характеристика антиоксидантных и энзиматических свойств ряда штаммов МКБ. Установлено, что штаммы L. casei и штамм L. fermentum МЕ-3 обладают выраженной способностью к подавлению свободнорадикалыюго окислеиия (СРО) люминола и ПОЛ микросом. Показано наличие высокой а- и Р-глюкозидазной и а-галактозидазной активности у штамма L. fermentum МЕ-3 и некоторых штаммов L. casei. Впервые обнаружено, что штамм L. casei 114001 и молочнокислый продукт с его содержанием оказывают активирующее действие на систему антиоксидантной защиты крыс, проявляющееся в уменьшении накопления продуктов ПОЛ (МДА) в плазме крови крыс на фоне повышения общей антиоксидантной емкости плазмы крови, цитозоля печени и слизистой оболочки тонкого кишечника. Впервые выявлено антиоксидантное и гепатопротекторное действие штамма L. casei 114001 на модели токсического поражения печени, индуцированного четыреххлористым углеродом. Показано, что штамм L. casei 114001 подавляет Р-глюкуронидазную активность микрофлоры толстого кишечника. При совместном поступлении с пищей L. casei 114001 усиливает вызванное рутином улучшение антиоксидантного статуса крыс.

Практическая значимость работы

Сформированный и апробированный в работе комплекс биохимических показателей может быть использован при поиске, селекции и оценке эффективности штаммов МКБ для промышленного применения при разработке заквасок и пробиотических профилактических и лечебных препаратов и продуктов функционального питания. Полученные данные об энзиматической и антиоксидантной активности штаммов МКБ могут быть использованы в научно-исследовательской работе. Новые экспериментальные данные об антиоксидантных и гепатопротекторных свойствах штамма L. casei 114001, а также его модулирующему воздействию на активность ферментов кишечника и микробиоты, являются дополнительным подтверждением его полезных для макроорганизма свойств и пробиотического статуса.

Апробация работы

Апробация работы состоялась 25 января 2010 года на межлабораторной конференции НИИ питания РАМН. Материалы диссертации доложены на IX, X и XI Всероссийских конгрессах диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, 2007, 2008, 2009), 3-м Съезде токсикологов России (Москва, 2008), Научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2009» (Санкт-Петербург, 2009), Ежегодной конференции молодых ученых НИИ питания РАМН (Москва, 2009), V Всероссийском форуме «Здоровье нации -основа процветания России» (Москва, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 3 статьи в научных рецензируемых журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 178 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, включает 35 таблиц и иллюстрирована 40 рисунками. Указатель литературы включает 43 отечественных и 280 зарубежных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовали штаммы Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Streptococcus themophilus и Lactobacillus casei, предоставленные исследовательским центром Дапон (Франция) и штамм Lactobacillus fermentum МЕ-3, полученный из коллекции Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSM 14241). Штаммы хранились в средах с добавлением 20% глицерина или 5,3% ДМСО при -70°С. Для исследований штаммы выращивали в жидких средах, чистоту суспензий проверяли микроскопически. Процесс получения бесклеточных экстрактов включал следующие стадии: центрифугирование суспензии бактериальных клеток, промывание осадка, ресуспендирование и стандартизацию концентрации (109 КОЕ/мл), обработку ультразвуком и центрифугирование. Бесклеточные экстракты хранили при -70°С.

Методы исследования in vitro. Для оценки антиоксидантной активности бесклеточлых экстрактов штаммов МКБ использовали систему НЬ-Н202-люминол [Теселкин 10. О. и соавт., 1997, 1998] и модель НАДФН-Ре2+ -индуцированного ПОЛ микросом, выделенных из печени крыс-самцов Вистар [Владимиров 10. А. и соавт., 1972]. Fe3+ - восстанавливающую активность бесклеточных экстрактов штаммов МКБ определяли в системе FRAP (ferric reducing antioxidant power) по методу [Benzie F. F. I. et al., 1990]. Супероксиддисмутазную активность исследуемого материала определяли по методу [Nishikimi М. et al., 1971].

Полуколичественную оценку энзиматической активности штаммов МКБ осуществляли с использованием наборов API ZYM (BioMerieux, Франция). В бесклеточных экстрактах штаммов МКБ определяли активность а-глюкозидазы [Kim К. Y. et al., 2008], ß-глюкозидазы [Djouzi Z. et al., 1997], а-галактозидазы [Yoon M. Y. et al., 2008], ß-галактозидазы [Martini M. С. et al., 1991], ß-глюкуронидазы [Djouzi Z. et al., 1997].

Методы исследования in vivo. Эксперименты in vivo проводили с использованием половозрелых крыс-самцов Вистар, получающих полноценный полусинтетический рацион.

Для изучения влияния Lactobacillus casei 114001 на показатели антиокеидантного статуса крыс, а также на активность гидролитических ферментов слизистой оболочки тонкого кишечника и микробиоты слепой кишки, крысам опытной группы в течение 14 дней вводили внутрижелудочно (в/ж) по 0,5 мл суспензии лактобацилл в физиологическом растворе (2-10® КОЕ/крысу), крысам контрольной группы вводили равное количество физиологического раствора.

При сравнительном изучении влияния штамма L. casei 114001 и кисломолочного продукта, его содержащего, на интегральные показатели антиокеидантного статуса крыс животным 1-й опытной группы вводили в течение 21 дня в/ж ежедневно по 0,5 мл суспензии лактобацилл в физиологическом растворе (108 КОЕ/крысу), 2-й опытной группы - 0,5 мл кисломолочного продукта «Актимель» (ООО «Данон Индустрия»), содержащего L. casei 114001 (108 КОЕ/крысу) и йогуртную закваску. Животным контрольной группы вводили равное количество физиологического раствора.

Для оценки антиоксидантных и гепатопротекторных свойств L. casei 114001 в условиях индуцированного окислительного стресса использовали модель токсического поражения печени четыреххлористым углеродом. В течение 8 дней крысам контрольной и 1-й опытной групп вводили в/ж 0,5 мл физиологического раствора, 2-й опытной группы - взвесь L. casei 114001 в физиологическом растворе в количестве 2,8-Ю10 КОЕ/крысу. За 24 ч до умерщвления животным опытных групп вводили однократно внутрибрюшинно (в/б) раствор CCI4 в оливковом масле (1:1) в дозе 0,5 мл на 1 кг массы тела, животным контрольной группы - равное количество масла. Предварительно на 5-ти группах крыс проводили исследования по отработке модели окислительного стресса. Несколько дней животные получали полусинтетический рацион. За 24 часа до забоя животным опытных групп вводили в/б однократно СС14 в дозе 0,05, 0,10, 0,25 и 0,50 мл/кг массы тела в виде 2,5, 5,12,5 и 25% раствора в оливковом масле.

Для изучения влияния L. casei 114001 на биологическую активность рутина крысам опытных групп вводили рутин в рацион в количестве 0,4%. В

течение 14 дней крысам контрольной и 1-й опытной групп вводили в/ж 0,5 мл физиологического раствора, 2-й опытной группы - взвесь L. casei 114001 в физиологическом растворе в количестве 2-10' КОЕ/крысу.

За 12 ч до умерщвления животных лишали пищи. Животных подвергали декапитации, для исследований отбирали кровь, печень, тонкий кишечник и содержимое слепой кишки.

В плазме крови определяли содержание МДА [Uchiyama M. et al., 1978]. AOE и восстанавливающую активность плазмы крови, цитозоля печени и слизистой оболочки тонкого кишечника определяли по методам [Теселкин 10. О. и соавт., 1997, 1998] и [Benzie F. F. I. et al., 1990], соответственно. AOE плазмы крови определяли также в системе TAS (Total Antioxidant Status) с использованием наборов RANDOX (Randox Laboratories, Великобритания). В цитозольной фракции печени и слизистой тонкого кишечника определяли активность каталазы [Aebi H. Е., 1984], супероксиддисмутазы [Nishikimi M. et al., 1971], глутатионпероксидазы [Flohe L. et al., 1984], глутатионтрансферазы [Habig W. H. et al., 1974], глутатионредуктазы [Cai Q. et al., 1996], хинонредуктазы [Benson A. et al., 1980], УДФ-глюкуронозилтрансферазы [Burchell B. et al., 1981], ксантиноксидазы [Lin W. et al., 2005]. В гомогенате и цитозоле печени определяли неседиментируемую активность ферментов лизосом [Дингл Г., 1980]1. В цитозоле слизистой тонкого кишечника и содержимом слепой кишки крыс определяли активность а- и Р-глюкозидаз, а- и Р-галактозидаз и [3-глюкуронидазы [Djouzi Z. et al., 1997]. В содержимом слепой кишки определяли содержание флавонольпых метаболитов рутина [Manach С. et al., 1995]. Содержание белка определяли по методу [Lowry О. H. et al., 1951].

Статистическую обработку данных проводили методом дисперсионного анализа ANOVA с использованием t-критерия Стьюдента при помощи компьютерной программы "Statistica".

1 Совместно с в.н.с., к.м.н. Кравченко Л.В. и ст.н.с., к.м.н. Авреньевой Л.И.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Скрининг антиоксидантной активности штаммов МКБ в различных модельных системах in vitro

Полученные данные показали, что все изученные штаммы МКБ в определенной мере проявляли антиоксидантную активность in vitro (табл. 1). Все штаммы обладали высокой супероксидцисмутазной и восстанавливающей активностью. Способность подавлять СРО люминола и индуцированное ПОЛ микросом печени крыс у штаммов различных таксономических видов существенно различалась. Бесклеточные экстракты штаммов L. casei и L. fermentum подавляли СРО люминола на 43 - 65,8% и ПОЛ микросом на 57,9 -89,5%, a L. bulgaricus и S. thermophilics - не более чем на 15,9 и 17,9%, соответственно.

Табл. 1. Антиоксидантная емкость (АОЕ), восстанавливающая и супероксиддисмутазная активности бесклеточных экстрактов штаммов молочнокислых бактерий

Штамм Восстанавливающая активность, мМ Fe2+-3KB. АОЕ, % подавления ХЛ Подавление ПОЛ микросом, % Активность СОД, Ед/Ю'КОЕ

L. bulgaricus 100182 0,337 5,7 4,9 21,6

L bulgaricus 100508 0,225 11,1 3,7 9,7

I., bulgaricus 100479 0,733 11,5 14,3 22,2

L bulgaricus ¡00504 0,248 14,4 17,90 16,8

I,, casei 114001 0,254 43,0 57,9 17,3

L casei 153 0,390 62,1 88,5 5,5

L casei 154 0,319 65,8 89,5 20,4

L. fermentum ME-3 0,260 53,3 72,8 24,4

S. 1hemophilus 001618 0,177 7,8 4,3 28,8

S. thermophilus 001358 0,367 10,7 9,6 35,2

S. thermophilus 001646 0,272 0,7 0 28,3

S. thermophilus 001642 0,284 12,8 8,5 31,9

S. thermophilus 001614 0,449 15,9 8,6 33,9

S. thermophilus 001519 0,296 8,7 0 28,0

Изучение влияния штамма L. casei 114001 на антиоксидантный статус крыс

Введение в/ж лабораторным животным в течение 14 дней L. casei 114001 в количестве 2-109 КОЕ/крысу вызывало достоверное улучшение показателей антиоксидантного статуса крыс. В плазме крови крыс опытной группы (рис. I) повышалась АОЕ в системе TAS на 7% и снижалось содержание МДА па 30%, что свидетельствует о подавлении процессов ПОЛ. В печени (рис. 2) обнаружено значительное возрастание АОЕ (на 92%) и восстанавливающей активности (на 56%), что сопровождалось повышением активности глутатиокпероксидазы (на 21%) и хинонредуктазы (на 72%). У крыс, получавших L. casei, возрастала АОЕ и восстанавливающая активность слизистой оболочки тонкого кишечника (рис. 3).

Полученные результаты свидетельствуют, что штамм L. casei 114001 сохраняет свои ангиоксидантные свойства in vivo, и они проявляются не только на местном уровне, в желудочно-кишечном тракте, но и носят системный характер.

FFWP TAS ЮЕ, *5шК ВДА

подавление аскорбатных ХЛ эк в.

Здесь и далее различия между значениями, обозначенными разными буквами статистически достоверны, р < 0,05

Рис. 1. Восстанавливающая активность (FRAP), общий антиоксидантный статус (TAS), общая антиоксидантная емкость (АОЕ) и содержание МДА в плазме крови крыс получавших L.casei

FRAP AOE КАТ СОД ГП ГТ УР УДФ-ГпТ

Рис. 2. Восстанавливающая активность (FRAP), АОЕ и активность ферментов антиоксидантной защиты в печени крыс, получавших L. casei

FRAP АОЕлодаял ХЛ AOE, A3

Рис. 3. Восстанавливающая активность (FRAP) и AOE слизистой оболочки тонкого кишечника крыс, получавших L. casei

Сравнительное изучение влияния L. casei 114001 и кисломолочного продукта, его содержащего, на показатели антиоксидантного статуса крыс

Введение в/ж лабораторным животным в течение 21 дня L. casei 114001 в количестве 108 КОЕ/крысу (1-я опытная группа) или кисломолочного продукта с равным количеством L. casei 114001 (2-я опытная группа), вызывало сходные изменения интегральных показателей антиоксидантного статуса крыс (табл. 2). АОЕ плазмы крови крыс 1-й и 2-й опытных групп возрастала на 28 и 32%, соответственно, при снижении в плазме содержания МДА на 26 и 18%, соответственно. В печени крыс 1-й и 2-й опытных групп обнаружено возрастание АОЕ на 29 и 15% (недостоверно) и восстанавливающей активности

на 34 и 30%, соответственно. АОЕ слизистой оболочки тонкого кишечника

возрастала у крыс 1-й и 2-й опытных групп на 31 и 30%, соответственно.

Табл. 2. Показатели антиоксидантного статуса крыс, получавших Л. сазе1 (1-я опытная группа) или кисломолочный пробиотический продукт (2-я опытная группа)

Показатель Группа животных

Контрольная 1-я Опытная 2-я Опытная

Плазма крови

Восстанавливающая активность (FRAP), мМ Fe2* эквивалентов 0,268 ± 0,005 0,267 ±0,011 0,258 ± 0,007

АОЕ, % подавления XJI 31,5 ±2,6° 40,3 ± 1,3" 41,6 ±0,9"

МДА, имоль/мл 4,11 ± 0,25" 3,05 ± 0,08" 3,35 ±0,18"

Печень

Восстанавливающая активность (FRAP), мМ Fe2* эквивалентов 8,13 ±0,46' 10,91 ±0,27ь 10,60 ±0,39"

АОЕ, % подавления ХЛ 27,2 ± 2,6' 35,0 ±1,7" 31,3 ±3,2'

Слизистая оболочка тонкого кишечника

Восстанавливающая активность (FRAP), мМ Fe2* эквивалентов 10,14 ±0,42 9,83 ±0,11 9,49 ±0,10

АОЕ, % подавления XJ1 16,1 ± 1,8' 21,1 ± 1,9" 21,0 ± 1,3"

Здесь и далее данные представлены в виде А/ ± т.

Полученные результаты позволяют заключить, что L. casei 114001 в составе кисломолочного продукта сохраняет способность оказывать системное влияние на антиоксидантный статус крыс.

Характеристика острого токсического действия четыреххлористого углерода как модели окнелнтельного стресса

Однократное внутрибрюшинное (в/б) введение крысам ССЦ в дозах 0,05, 0,10, 0,25 и 0,50 мл/кг массы тела приводило к дозозависимому возрастанию в плазме крови активности аланинаминотрансферазы (до 475% от контроля при максимальной дозе ССЦ), активности арилсульфатазы (до 180% от контроля при максимальной дозе ССЦ) и уровня МДА (до 177% от контроля при максимальной дозе ССЦ).

Однократное введение крысам ССЦ приводило к зависимому от дозы снижению восстанавливающей активности цитозоля печени и сопровождалось снижением активности ключевых ферментов антиоксидантной защиты -

каталазы, СОД, глутатионтрансферазы, хинонредуктазы и УДФ-глюкуронозилтрансферазы (рис. 4). Содержание в печени восстановленного глутатиона достоверно возрастало в зависимости, обратной от дозы.

* здесь и далее - р < 0,05 по отношению к контролю

Рис. 4. Восстанавливающая активность (FRAP) и активность ферментов антиоксидантной защиты в печени крыс через 24 часа после в/6 введения CCU в дозе от 0,05 до 0,50 мл/кг м.т.

Результаты изучения влияния СС14 на общую (в гомогенате) и неседиментируемую (в цитозоле) активность ферментов лизосом выявили зависимое от дозы СС14 снижение общей активности Р-глюкуронидазы и арилсульфатазы при одновременном возрастании неседиментируемой активности (рис. 5), что свидетельствует о нарушении стабильности лизосомальной мембраны в условиях окислительного стресса.

Арилсульс(йтазы А и В р-Глюкуронидаза

Рис. 5. Неседимеитируемая активность лизосомальных ферментов печени крыс через 24 часа после в/б введения СС14 в дозе от 0,05 до 0,50 мл/кг м.т.

Таким образом, результаты исследований показали, что однократное введение ССЦ приводит к быстрому развитию токсического поражения печени и окислительного стресса, которые характеризовались нарушением целостности лизосомальной и плазматической мембран и значительными изменениями антиоксидантного статуса крыс. Для последующих экспериментов была выбрана доза 0,05 мл ССЦ/кг м.т.

Оценка антноксндантных и гепатопротекторных свойств штамма Lactobacillus casei 114001 на модели токсического поражения печени, индуцированного четыреххлористым углеродом

Токсическое действие СС14 (1-я опытная группа) характеризовалось потерей массы тела, увеличением относительной массы печени на 30%, а также наличием макроскопических изменений печени у 8 из 8 крыс в группе, снижением восстанавливающей активности и АОЕ плазмы крови.

Восстанавливающая активность и АОЕ цитозоля печени крыс при этом снижались по сравнению с контролем на 56 и 40%, соответственно (рис. 6). Это сопровождалось снижением активности каталазы на 23%, глутатионредуктазы на 15%, глутатионтрансферазы на 22%, УДФ-глюкуронозилтрансферазы на 35%. В печени крыс, получавших ССЦ, повышалось содержание восстановленного глутатиона на 39%.

При введении СС14 крысам, получавшим L. casei 114001 (2-я опытная группа) изменения весовых показателей были выражены в меньшей степени, видимые изменения печени наблюдались только у 3 из 8 крыс в группе. АОЕ цитозоля печени восстанавливалась до уровня контроля, частично нормализовалась сниженная СС14 активность антиоксидантных ферментов в печени - каталазы, глутатионредуктазы, глутатионтрансферазы и хинонредуктазы. При этом уровень активности ГР и ГТ статистически не отличался от контрольных значений.

FRAP AOE КАТ СОД ГП ГР ГТ ХР УДФ- GSH КсО

ГлТ

Рис. 6. Восстанавливающая активность (FRAP), AOE и активность ферментов антиоксидантной защити в печени крыс через 24 часа после введения СС14 (1-я опытная группа) или CCI4 + L.casei (2-я опытная группа)

Особенно стоит отметить достоверное снижение в группе животных, получавших СС14 совместно с L. casei 114001, неседиментируемой активности лизосомальных ферментов, по сравнению с показателями группы, получавшей только СС14 (рис. 7), что свидетельствует о снижении мембраноповреждающего действия ССЦ

Арилсульфатазы А и В р-глюкуронидаэа

Рис. 7. Неседиментируемая активность лизосомальных ферментов печени крыс через 24 часа после введения ССи (1-я опытная группа) или ССЦ+ £.с<ве[ (2-я

опытная группа)

Полученные результаты позволяют заключить, что пробиотический штамм Ь. сазе1 114001 уменьшает тяжесть индуцированного ССЦ поражения печени и значительно снижает степень выраженности окислительного стресса.

Скрининг активности конститутивных ферментов молочнокислых бактерий

Скрининг энзиматической активности штаммов МКБ проводили вначале полуколичественным методом с использованием наборов API ZYM (19 различных гликозил-гидролаз, пептидаз и эстераз), а затем данные уточняли при помощи количественных методов с использованием специфических субстратов.

В результате проведенных исследований было обнаружено, что штаммы L. casei и L. fermentum в целом обладают более выраженной и разнообразной гликозил-гидролазной активностью по сравнению со штаммами L. bulgaricus и S. thermophilus (табл. 3). L. fermentum МЕ-3 проявлял высокую а-галактозидазную активность, что является ценной характеристикой при селекции микроорганизмов для ферментирования соевого молока. Штаммы L. casei и L. fermentum МЕ-3 также обладали выраженной а- и Р-глюкозидазной активностью, которая участвует в расщеплении гликозидов разнообразных биологически активных соединений, включая флавоноиды и изофлавоны. В то же время способность к гидролизу лактозы, присутствующая у всех исследованных штаммов, была наиболее выражена у видов L. bulgaricus и S. thermophilus.

Табл. 3. Активность гликозил-гидролаз бесклеточных экстрактов штаммов

молочнокислых бактерий

Штамм Фермент

а-Галактозидаза, нмоль/мин-мг белка РН6.5 |}-Галактозцдаза, нмоль/мин-мг белка рН 7,0 а-Глюкозидаза, нмоль/мин-мг белка рН 7,0 0- Глюкозвдаза, нмоль/мин-мг белка рН 7,4 Р-Глюкуронвдаза, нмоль/мин-мг белка рН 6,5

L. casei 114001 0 0,6 77,7 6,3 0,7

L. casei 153 3.9 24,5 54,4 28,9 5,2

L. casei 154 3,8 23,3 7,5 32,1 3,1

L, fermentum ME-3 94,2 59,7 2,1 0,8 0,4

L. bulgaricus ¡00504 1,0 63,4 0,2 0 0,1

L. bulgaricus 100182 0,6 61,8 0,2 0 0,1

L. bulgaricus 100479 0,1 93,1 0,4 0 0,1

L. bulgaricus 100508 0,1 108,4 0 0 0,2

S. thermophilus 001618 0 104,2 0 0 0

S. thermophilus 001642 0 89,7 0,3 0 0,1

Изучение влиянии Lactobacillus casei 114001 на ферментативную активность слизистой оболочки тонкого кишечника и микробиоты крыс

При введении в/ж крысам в течение 14 дней L. casei 114001 в количестве 2-109 КОЕ/крысу выявляли тенденцию к возрастанию активности р-глюкозидазы, Р-галактозидазы, [З-глюкуронидазы и УДФ-глюкуронозилтрансферазы в слизистой оболочке тонкого кишечника (рис. 8).

В микробиоте слепой кишки крыс, получавших L. casei 114001, изменения активности а- и Р-галактозидаз были небольшими и статистически недостоверными, в то время как активность p-глюкуронидазы была снижена до 52% от контрольного уровня (рис. 9). Поскольку высокая Р-глюкуронидазная активность в микрофлоре кишечника ассоциируется с высоким риском развития рака толстой кишки, её снижение рассматривается многими исследователями в качестве маркера антиканцерогенного действия МКБ [Gorbach S.L. et al., 1990; Rowland I.R. et al., 1998; Karthik kumar V. et al., 2009].

Р-Глк

р-Гал

Р-Глкр УДФ-ГлТ

Рис. 8. Активность гидролиз гликозидов

и УДФ-глюкуронозилтрансферазы в слизистой оболочке тонкого кишечники крыс, получавших I. са$е1114001

а-Глк р-Глк а-Гап р-Гал р-Глкр

Рис. 9. Активность гликозил-гидролаз и ¡1-глюкуронидазы микробиоты толстого кишечника крыс, получавших L. casei 114001

Изучение влияния Ь. са$е1 114001 на биологическую активность рутина

Целью данного раздела явилось изучение влияния штамма Ь. са5е1 114001, обладающего антиоксидантной активностью, вырабатывающего ряд гликозил-гидролаз и оказывающего модулирующее действие на ферменты тонкого кишечника и кишечной микробиоты, на биологическую активность рутина

(кверцетин-З-О-р-глюкозо-а-Ь-рамнозида), оцениваемую по его антиоксидантным эффектам.

Введение 0,4% рутина в рацион крыс приводило к возрастанию общего аптиоксидантпого статуса (на 10%) и АОЕ плазмы крови (на 27%) и к снижению в ней продуктов ПОЛ (на 19%) (рис. 10). В печени при этом значительно возрастала восстанавливающая активность (на 36%) и АОЕ (на 68%) (рис. 11). Аналогичные изменения этих показателей выявлены и в слизистой оболочке тонкого кишечника (рис.12).

АОЕ, АОЕ.мкМ МДА подавление аскорбатчых

Рис. 10. Восстанавливающая активность (FRAP), общий антиоксидантный статус (TAS), АОЕ и содержание МДА в плазме крови крыс получавших рутин (1-я опытная группа) или рутин + L. casei (2-я опытны группа)

FRAP АОЕ

ГТ УДФ-ГлТ ХР

Рис. 11. Восстанавливающая активность (FRAP), АОЕ и активность ферментов антиоксидантной защиты в печени крыс, получавших рутин (1-я опытная группа) или рутин + L.casei (2-я опытная группа)

FRAP А О E , А О E , KAT CQQ Г П Г T XP

п о д а в л miM АЭ ХЛ

Рис. 12. Восстанавливающая активность (FRAP), АОЕ и активность ферментов антиоксидантиой защиты в слизистой оболочке тонкого кишечника крыс получавших

рутин (1-я опытная группа) или рутин + L. casei (2-я опытная группа)

При комбинированном действии рутина и L. casei прослеживается усиление антиоксидантных эффектов, наблюдаемых у животных, получающих только рутин. АОЕ плазмы крови возрастала до 45% за счет усиления антирадикальной активности и на 21% за счет усиления подавления СРО, характерного для антиоксидантиой активности штамма L. casei 114001. Восстанавливающая активность печени возрастала до 61%, АОЕ - до 94%. При этом активность антиоксидантных ферментов не отличалась от активности ферментов, определяемой в печени крыс, получавших только рутин. В значительно большей степени, по сравнению с 1 -й опытной группой, возрастала восстанавливающая активность цитозоля слизистой тонкого кишечника (на 18%) и АОЕ - как за счет антирадикальной активности - до 42% от контрольного уровня, так и за счет усиления подавления СРО - на 13%.

В слизистой тонкого кишечника крыс, получавших рутин или рутин совместно с L. casei 114001, наблюдалось значительное возрастание активности УДФ-глюкуронозилтрансферазы до уровня 176 и 200% от контрольного, соответственно (рис. 13). Активность (3-глюкозидазы у крыс, получавших рутин вместе с лактобациллами, снижалась по сравнению с крысами, получавшими только рутин.

Результаты изучения активности гликозил-гидролаз в содержимом слепой кишки (рис. 14) показали, что включение 0,4% рутина в рацион крыс приводит

к достоверному снижению активности р-глюкуронидазы на 42% по сравнению е контролем. При комбинированном действии рутина и ¿. ¿те/ активность а- и Р-галактозидаз в микробиоте слепой кишки крыс снижалась более чем в 2 раза, а активность Р-глюкуроиидазы составляла всего 17% от уровня контроля.

0-Глк р-Гал УДФ-ГпТ р~Глкр

Рис. 13. Активность гликозил-гидролаз в слизистой оболочке

тонкого кишечник и крыс, получивших рутин (1-я опытная группа) или рутин + Д. саза (2-я опытная группа)

а-Гпк {3-Гпк а-Г ал р-Гал Р-Глкр

Рис. 14. Активность гликозил-гидролаз микробиоты слепой кишки крыс получавших рутин (1-я опытная группа) или рутин + £. сага (2-я опытная группа)

Обнаружено снижение (на 37%) содержания рутина и его флавонольных метаболитов в содержимом слепой кишки крыс, получавших рутин совместно с Ь. сазе1., что может быть результатом повышения биодоступности рутина, либо усиления процесса расщепления флавонольных соединений под действием ферментов кишечной микрофлоры.

выводы

1. Впервые показано, что изученные штаммы молочнокислых бактерий различных таксономических групп (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, L. casei, L. fermentum, Streptococcus salivarius subsp. thermophilus) обладают высокой супероксиддисмутазной и восстанавливающей активностью, но только представители L. casei и L. fermentum проявляют выраженную способность подавлять процессы свободно-радикального окисления.

2. Внутрижелудочное введение крысам пробиотического штамма молочнокислых бактерий L. casei 114001 и содержащего их кисломолочного продукта приводит к системному улучшению антиоксидантного статуса крыс за счет возрастания активности антиоксидантных ферментов - глутатионпероксидазы (на 21%) и хинонредуктазы (на 72%) - в печени, увеличения антиоксидантной емкости и восстанавливающей активности цитозоля печени и слизистой оболочки тонкого кишечника, а также снижения в плазме крови уровня МДА (на 30%).

3. L. casei штамм 114001 снижает степень окислительного стресса и тяжесть поражения печени крыс, индуцированные СС14. Это выражается в полном восстановлении антиоксидантной емкости цитозоля печени и частичном восстановлении в печени активности антиоксидантных ферментов (глутатионредуктазы, глутатионтрансферазы и УДФ-глюкуронозилтрансферазы), в повышении антиоксидантной емкости и восстанавливающей активности слизистой оболочки тонкого кишечника, а также в уменьшении повреждающего действия ССЦ на плазматические и лизосомальные мембраны.

4. Охарактеризован ферментный профиль штаммов молочнокислых бактерий видов L. bulgaricus, L. casei, L. fermentum, S. thermophilus. Обнаружена высокая а- и ß-глюкозидазная и а-галактозидазная активность у представителей L. casei и L. fermentum.

5. Внутрижелудочное введение L. casei 114001 сопровождается возрастанием активности УДФ-глюкуронозилтрансферазы (на 29%) в слизистой оболочке тонкого кишечника и снижением "проканцерогенной" активности микрофлоры толстого кишечника за счет снижения активности Р-глюкуронидазы (на 45%).

6. При совместном поступлении штамм L. casei 114001 усиливает антиоксидантное действие рутина, что проявляется в усилении вызванного рутином возрастания антиоксидантной емкости плазмы крови и снижении в ней содержания МДА, возрастании восстанавливающей активности и антиоксидантной емкости печени и слизистой оболочки тонкого кишечника.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК

1. Ускова М.А., Кравченко Л.В. Антиоксидантные эффекты молочнокислых бактерий - пробиотиков и йогуртных заквасок. // Вопр. питания -2009.- №2. -С. 18-23.

2. Ускова М.А., Васильева М.А., Трусов Н.В., АвреньеваЛ.И., Гусева Г.В., Аксенов КВ., Кравченко Л.В. Оценка антиоксидантных и гепатопротекторных свойств штамма Lactobacillus casei 114001 на модели токсического поражения печени, индуцированного четыреххлористым углеродом. // Вопр. питания. -2009. - № 5. - С. 24-30.

3. Кравченко Л.В., Трусов Н.В., Ускова М.А., Аксенов И.В., Авреньева Л.И., Гусева Г.В., Васильева М.А., Селифанов А.В., Тутельян В.А. Характеристика острого токсического действия четыреххлористого углерода как модели окислительного стресса.// Токсикол. вестник - 2009. — №1. -С. 12-18.

Материалы научных конференций

4. Ускова М.А., Авреньева Л.И., Кравченко Л.В. Пробиотики -антиоксиданты? // Материалы IX Всероссийского Конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье». Москва, 2007. - С.86.

5. Ускова М.А. Оценка антиоксидантной активности молочнокислых бактерий в модельных системах in vitro. // Материалы X Всероссийского

Конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье». Москва, 2008. -С.111-112.

6. Кравченко Л.В., Трусов Н.В., Ускова М.А., Аксенов И.В., Гусева Г.В., Васильева М.А., Селифанов А.В. Характеристика окислительного стресса, индуцированного четыреххлористым углеродом. // Материалы 3-го Съезда токсикологов России. Москва, 2008. - С. 154.

7. Ускова М.А. Биохимические свойства молочнокислых бактерий, используемых в качестве йогуртных заквасок и пробиотиков. II Материалы научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2009». С.-Петербург, 2009. - С.19-20.

8. Ускова М.А., Васильева М.А. Влияние пробиотических молочнокислых бактерий на окислительный стресс, вызванный четыреххлористым углеродом. // Материалы ежегодной конференции молодых ученых НИИ питания РАМН. Москва, 2009.- С.73-74.

9. Кравченко JI.B., Ускова М.А., Авреньева Л.И. Влияние пробиотика Lactobacillus casei ¡14001 на активность гидролитических ферментов кишечника и кишечной микробиоты крыс. // Материалы XI Всероссийского Конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье». Москва, 2009. -С.78.

10. Ускова М.А., Авреньева Л.И., Кравченко Л.В. Влияние пробиотика Lactobacillus casei 114001 на биологическую активность рутина. // Материалы XI Всероссийского Конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье». Москва, 2009. - С. 169-170.

11. Ускова М.А., Васильева М.А., Авреньева Л.И., Гусева Г.В., Трусов Н.В., Аксенов КВ., Кравченко Л.В. Новое в изучении биологической активности молочнокислых бактерий, используемых в качестве йогуртных заквасок и пробиотиков. // Материалы научно-практических мероприятий V Всероссийского Форума «Здоровье нации - основа процветания России». Москва, 2009.-С.122-124.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АОЕ - общая антиоксидантная емкость

АЭ - аскорбатные эквиваленты

а-Гал - а-галаетозидаза

Р-Гал - (5-галактозидаза

а-Глк - а-глюкозидаза

(5-Глк - (5-глюкозидаза

(5-Глкр - (5-глюкуронидаза

ГП - глутатионпероксидаза

ГР - глутатионредуктаза

ГТ - глутатиоитрансфераза

ДМСО - диметилсульфоксид

КАТ - каталаза

КОЕ - колониеобразующие единицы

КсО - ксантиноксидаза

МДА - малоновый диальдегид

МКБ- молочнокислые бактерии

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СОД - супероксиддисмутаза

СРО - свободнорадикальное окисление

УДФ-ГлТ - уридиндифосфат-глюкуронозилтрансфераза

XJ1 - хемилюминесценция

ХР - хинонредуктаза

FRAP - feme reducing antioxidant power

GSH - глутатион восстановленный

TAS - total antioxidant status

Принято к исполнению 13/03/10 Исполнено 13/03/10

Заказ № 574 Тираж 100 экз.

Отпечатано «АллА Принт», г. Москва, Лубянский проезд, д.25 Тел.: (495) 625-92-05 Факс: (495) 624-47-81 www.allaprint.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ускова, Мария Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 СОСТАВ И ФУНКЦИИ МИКРОФЛОРЫ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА.

2.2 ПРОБИОТИКИ КАК КОМПОНЕНТЫ ПРОДУКТОВ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ПИТАНИЯ.

2.2.1 Основные характеристики пробиотических микроорганизмов.

2.2.2 Биохимические характеристики пробиотических микроорганизмов.

2.2.3 Пробиотические пищевые продукты.

2.3 ХАРАКТЕРИСТИКА И ПРОБИОТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ШТАММА LACTOBACILLUS CASEI114001.

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1.1 Штаммы молочнокислых бактерий.

3.1.2 Экспериментальные животные и условия экспериментов.

3.1.3 Подготовка материала для исследований.

3.1.4 Биохимические методы исследования.

3.1.5 Статистические методы.

3.2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.2.1 Изучение антиоксидантных свойств молочнокислых бактерий.

3.2.1.1 Скрининг антиоксидантной активности штаммов молочнокислых бактерий в различных модельных системах in vitro.

3.2.1.2 Изучение влияния штамма Lactobacillus casei 114001 на антиоксидантный статус крыс.

3.2.1.3 Сравнительное изучение влияния штамма Lactobacillus casei 114001 и кисломолочного продукта, его содержащего, на показатели антиоксидантного статуса крыс.

3.2.1.4 Характеристика острого токсического действия четыреххлористого углерода как модели окислительного стресса.

3.2.1.5 Оценка антиоксидантных и гепатопротекторных свойств штамма Lactobacillus casei 114001 на модели токсического поражения печени, индуцированного четыреххлористым углеродом.

3.2.2 Энзиматическая характеристика молочнокислых бактерий.

3.2.2.1 Скрининг активности конститутивных ферментов молочнокислых бактерий.

3.2.2.2 Изучение влияния Lactobacillus casei 114001 на ферментативную активность слизистой оболочки тонкого кишечника и микробиоты крыс.

3.2.3 Изучение влияния L. casei 114001 на биологическую активность рутина.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение свойств пробиотических молочнокислых бактерий как биологически активных компонентов пищи"

Актуальность темы

Полезные для здоровья человека свойства молочнокислых бактерий (МКБ), впервые описанные И. И. Мечниковым, спустя столетие вновь стали объектом интенсивного изучения. В настоящее время широко используется понятие «пробиотик» для обозначения живых микроорганизмов (преимущественно МКБ), употребление которых с пищей в достаточных количествах оказывает благоприятное действие на здоровье [269]. К пробиотикам относятся главным образом представители родов Lactobacillus и Bifidobacterium, а также отдельные штаммы некоторых видов Streptococcus, Lactococcus, Enterococcus, Bacillus и Saccharomyces [43,148].

Наиболее хорошо документированы положительные эффекты пробиотиков и пробиотических продуктов при профилактике и лечении хронических воспалительных и инфекционных заболеваний желудочно-кишечного тракта [2,43,47,51]. В то же время накапливаются доказательства их значительно более широкой функциональной активности: наряду со способностью нормализовать функции кишечной микрофлоры пробиотики могут способствовать усилению иммунитета, ослаблению проявлений пищевой аллергии, облегчать симптомы непереносимости лактозы, оказывать гипохолестеринемическое, антиканцерогенное и антимутагенное действие [99,119,158,260].

В последнее время появляются сообщения об обнаружении у некоторых МКБ антиоксидантных свойств, которые сохраняются и даже усиливаются в составе пищевых продуктов, ферментированных или обогащенных ими [163,221,312,313]. В ряде исследований была показана способность различных штаммов МКБ подавлять процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) микросом и липопротеидов низкой плотности, захватывать свободные радикалы, усиливать экспрессию генов ферментов антиоксидантной защиты в различных тканях и повышать антиоксидантную емкость последних [53,163,192,221,283,297]. Поиск новых штаммов, обладающих антиоксидантными свойствами, и их изучение вызывают повышенный интерес в связи со значительным количеством заболеваний человека, в развитии которых важную роль играют окислительные повреждения тканей.

Не менее актуальной тематикой является исследование ферментативной активности пробиотических штаммов, включая ферменты антиоксидантной защиты и гидролитические ферменты. Некоторые виды микроорганизмов, используемых в качестве пробиотиков и йогуртных заквасок, могут являться «носителями» гликозил-гидролаз, отсутствующих или недостаточно активных у человека [43,150,257]. Увеличение активности а-галактозидазы, обеспечивающей гидролиз а-галактоолигосахаридов, но отсутствующей у млекопитающих, и р-галактозидазы (лактазы), недостаточность которой приводит к явлениям непереносимости лактозы, обнаруживали в содержимом кишечника людей в период употребления кисломолочных продуктов [99,183,211]. Бактериальным гликозил-гидролазам микрофлоры желудочно-кишечного тракта отводится важная роль в метаболизме многих биологически активных соединений растительного происхождения (флавоноиды, изофлавоны и другие) [43,94,229].

Кроме того, работы по исследованию антиоксидантных свойств пробиотических микроорганизмов, а также их ферментной активности привлекают исключительное внимание, поскольку это может дать дополнительное понимание механизмов их действия.

Цель и задачи исследования

Цель работы: Изучить характер антиоксидантного действия и ферментативные свойства пробиотических штаммов молочнокислых бактерий и йогуртных заквасок. Задачи исследования:

1. Провести сравнительное изучение антиоксидантных свойств молочнокислых бактерий различных таксономических групп в модельных системах in vitro;

3. Изучить антиоксидантные и гепатопротекторные свойства L. casei 114001 в условиях индуцированного окислительного стресса;

4. Оценить спектр энзиматической активности молочнокислых бактерий различных таксономических групп;

6. Изучить влияние L. casei 114001 на биологическую активность рутина (кверцетин-З-О-р-глюкозо-а-Ь-рамнозида).

Научная новизна работы

Впервые проведена характеристика антиоксидантных и энзиматических свойств ряда штаммов МКБ. Установлено, что штаммы L. casei и штамм L. fermentum МЕ-3 обладают выраженной способностью к подавлению свободнорадикального окисления люминола и ПОЛ микросом. Показано наличие высокой а- и Р-глюкозидазной и а-галактозидазной активности у штамма L. fermentum МЕ-3 и некоторых штаммов L. casei. Впервые показано, что штамм L. casei 114001 и молочнокислый продукт с его содержанием оказывают активирующее действие на систему антиоксидантной защиты крыс, проявляющееся в уменьшении накопления продуктов ПОЛ (МДА) в плазме крови крыс на фоне повышения общей антиоксидантной ёмкости плазмы крови, цитозоля печени и слизистой тонкого кишечника. Впервые обнаружено антиоксидантное и гепатопротекторное действие штамма L. casei 114001 на модели токсического поражения печени, индуцированного четыреххлористым углеродом. Показано, что штамм L. casei 114001 подавляет (3-глюкуронидазную активность микрофлоры толстого кишечника. При совместном поступлении с пищей L. casei 114001 усиливает вызванное рутином улучшение антиоксидантного статуса крыс.

Практическая значимость работы

Данные о ферментной и антиоксидантной активности штаммов МКБ могут быть использованы в научно-исследовательской работе, а также в пищевой промышленности при разработке заквасок и создании пробиотических функциональных продуктов питания. Полученные экспериментальные данные об антиоксидантных и гепатопротекторных свойствах штамма L. casei 114001, а также его модулирующему воздействию на активность ферментов кишечника и микробиоты, являются дополнительным подтверждением его полезных для макроорганизма свойств и пробиотического статуса.

Апробация работы

Апробация работы состоялась 25 января 2010 года на межлабораторной конференции НИИ питания РАМН. Материалы диссертации доложены на IX Всероссийском конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, 2007), X Всероссийском конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, 2008), 3-м Съезде токсикологов России (Москва, 2008), Научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2009» (Санкт-Петербург, 2009), Ежегодной конференции молодых ученых НИИ питания РАМН (Москва, 2009), XI Всероссийском конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, 2009), V Всероссийском форуме «Здоровье нации - основа процветания России» (Москва, 2009).

Публикации

Структура и объем диссертации

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Ускова, Мария Александровна

5. ВЫВОДЫ

1. Впервые показано, что изученные штаммы молочнокислых бактерий различных таксономических групп (Lactobacillus delbrueckii subsp. bidgaricus, L. casei, L. fermentum, Streptococcus salivarius subsp. thermophilus) обладают высокой супероксиддисмутазной и восстанавливающей активностью, но только представители L. casei и L. fermentum проявляют выраженную способность подавлять процессы свободно-радикального окисления.

2. Внутрижелудочное введение крысам пробиотического штамма молочнокислых бактерий L. casei 114001 и содержащего их кисломолочного продукта приводит к системному улучшению антиоксидантного статуса крыс за счет возрастания активности антиоксидантных ферментов - глутатионпероксидазы (на 21%) и хинонредуктазы (на 72%) - в печени, увеличения антиоксидантной емкости и восстанавливающей активности цитозоля печени и слизистой оболочки тонкой кишки, а также снижения в плазме крови уровня МДА (на 30%).

3. L. casei штамм 114001 снижает степень окислительного стресса и тяжесть поражения печени крыс, индуцированные СС14. Это выражается в полном восстановлении антиоксидантной емкости цитозоля печени и частичном восстановлении в печени активности антиоксидантных ферментов (глутатионредуктазы, глутатионтрансферазы и УДФ-глюкуронозилтрансферазы), в повышении антиоксидантной емкости и восстанавливающей активности слизистой оболочки тонкого кишечника, а также в уменьшении повреждающего действия СС14 на плазматические и лизосомальные мембраны.

4. Охарактеризован ферментный профиль штаммов молочнокислых бактерий видов L. bulgaricus, L. casei, L. fermentum, S. thermophilus. Обнаружена высокая а- и ß-глюкозидазная и a-галактозидазная активность у представителей L. casei и L. fermentum.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Применение пробиотиков и пробиотических функциональных продуктов питания с целью профилактики и лечения заболеваний, связанных с нарушением баланса кишечной микрофлоры, получило в последнее время широкое распространение. Наиболее хорошо документировано влияние пробиотиков на течение хронических воспалительных и инфекционных заболеваний ЖКТ. В то же время накапливаются доказательства их значительно более широкой функциональной активности. Установлено, что наряду со способностью нормализовать функции микрофлоры кишечника, пробиотические молочнокислые бактерии могут способствовать усилению иммунитета, ослаблению проявлений пищевой аллергии, облегчать симптомы непереносимости лактозы, оказывать антимутагенное, гепатопротекторное, антиканцерогенное и гипохолестеринемическое действие [99,119,158,260]. Колонизируя нижние отделы кишечника, пробиотические микроорганизмы способны продуцировать значительное количество антиоксидантов, медиаторов, гормоноподобных веществ и ферментов, принимающих участие в метаболических процессах макроорганизма [43,239,318].

Данная работа посвящена изучению антиоксидантных и энзиматических свойств молочнокислых бактерий, используемых в составе пробиотических кисломолочных продуктов. Объектом исследования in vitro стали 14 штаммов, относящихся к различным видам - Lactobacillus bulgaricus, L. casei, L. fermentum и Streptococcus thermophilus, среди которых 2 штамма (L. casei 114001 и L. fermentum ME-3) обладают доказанными пробиотическими свойствами и широко используются в составе кисломолочных продуктов. Для исследований in vivo был выбран штамм L. casei 114001.

Результаты скрининга антиоксидантной активности в ряде модельных систем in vitro показали, что все изученные штаммы МКБ в определенной мере проявляли антиоксидантную активность. Все изученные штаммы обладали высокой восстанавливающей и супероксиддисмутазной активностью. Супероксиддисмутазная активность была несколько выше у стрептококков, чем у лактобацилл. В то же время способность подавлять свободнорадикальное окисление люминола и индуцированное перекисное окисление липидов микросом у штаммов разных видов МКБ существенно различалась. Представители L. casei и L. fermentum МЕ-3 подавляли окисление люминола на 43 - 65,8% и ПОЛ на 57,9 - 89,5%, в то время как остальные штаммы - не более чем на 15,9% и 17,9%, соответственно. Установлена тесная корреляция (г = 0,95) между способностью штаммов тормозить СРО люминола и подавлять ПОЛ микросом, что указывает на общий механизм их действия в обеих модельных системах.

Антиоксидантная характеристика изученных штаммов МКБ (за исключением L. fermentum МЕ-3) дается впервые. Что касается антиоксидантных свойств L. fermentum МЕ-3, то они показаны как in vitro, так и in vivo [175,176,221]. Штамм отличается высокой резистентностью к действию свободных радикалов кислорода, его лизаты подавляют перекисное окисление линоленовой кислоты, содержат значительное количество глутатиона и обладают активностью СОД.

Несмотря на обнаруженную, согласно литературным данным, у многих штаммов МКБ способность подавлять ПОЛ микросом и ЛПНП, захватывать свободные радикалы, хелатировать ионы металлов переменной валентности [163,173,175,184,190,192-194,283,297,322], остается неизученным, какие компоненты и метаболиты МКБ участвуют в данных процессах. В связи с этим следует отметить, что бактериальные клетки обладают собственной системой антиоксидантной защиты - некоторые штаммы МКБ обладают способностью продуцировать Mn-содержащие каталазу и СОД, накапливать высокие внутриклеточные концентрации Mn2+, а также продуцировать восстановленный глутатион, его предшественник - y-Glu-Cys и полиамины в значительных количествах [109,178,221,230,242,258,259,322].

Полученные результаты свидетельствуют, что штамм L. casei 114001 сохраняет свои антиоксидантные свойства in vivo, и они проявляются не только на местном уровне, но и носят системный характер.

Введение в/ж крысам в течение 2-х или 3-х недель L. casei 114001 в

О Я количестве 2-10 КОЕ или 10 КОЕ, соответственно, а также кисломолочного о продукта содержащего L. casei 114001 в количестве 10 КОЕ в течение 3-х недель приводило к достоверному улучшению антиоксидантного статуса животных. Это выражалось в возрастании АОЕ и восстанавливающей активности плазмы крови, цитозоля печени и слизистой тонкого кишечника, при одновременном снижении содержания МДА в плазме крови.

В/ж введение крысам L. casei 114001 вызывало повышение в печени активности ферментов антиоксидантной защиты - глутатионпероксидазы и хинонредуктазы и сопровождалось тенденцией к увеличению активности тех же ферментов в слизистой оболочке тонкого кишечника.

Полученные в настоящей работе экспериментальные данные свидетельствуют, что в условиях окислительного стресса, вызванного четыреххлористым углеродом, пробиотик L. casei 114001 оказывал определенное антиоксидантное и гепатопротекторное действие. Это проявлялось в снижении степени выраженности биохимических показателей, характеризующих токсическое действие ССЦ. У животных, получавших L. casei 114001, существенно уменьшалось мембраноповреждающее действие токсина: в плазме крови была ниже активность аланинаминотрансферазы -показателя степени токсического поражения печени и повреждения плазматической мембраны, а в печени - достоверно ниже неседиментируемая активность ферментов лизосом - показателя степени нарушения стабильности лизосомальной мембраны. Введение L. casei 114001 способствовало частичному восстановлению сниженной ССЦ активности отдельных антиоксидантных ферментов и полному восстановлению АОЕ цитозоля печени.

К возможным механизмам гепатопротекторного действия L. casei можно отнести во-первых его антиоксидантные свойства. Кроме того, в литературе присутствуют данные о способности L. casei 114001 подавлять ех vivo и in vitro экспрессию провоспалительных цитокинов ФНО-а, ИЛ-1(3 и ИЛ-6 [197,303]. При этом в ряде исследований показано, что токсическое действие СС14 на печень сопровождается активацией купферовских клеток и усилением секреции вышеперечисленных цитокинов, потенцирующих токсичность СС14 [185,265].

Известно, что молочнокислые бактерии продуцируют ряд ферментов для обеспечения собственной жизнедеятельности. Так, у некоторых видов МКБ обнаружен широкий спектр гидролитических ферментов (а- и галактозидазы, (3-глюкозидаза и т.д.), отсутствующих или недостаточно активных у человека, но занимающих ключевое место в метаболизме таких распространенных компонентов растительной пищи как полифенольные соединения и неперевариваемые олигосахариды [43,150,257]. Бактериальные гидролитические ферменты могут повышать биодоступность и усиливать действие биологически активных соединений пищи (например, флавоноидов) за счет превращения их гликозидов в агликоны [94,287]. Способность пробиотических бактерий изменять состав кишечной микрофлоры и её ферментную активность может влиять не только на процесс пищеварения, но и на метаболизм эндогенных и экзогенных токсических соединений. Так, микробной Р-глюкуронидазе отводят важную роль в образовании и печеночно-кишечной циркуляции токсических и канцерогенных соединений [28,87,113,153,165,317].

В результате проведенного скрининга энзиматической активности 10 штаммов МКБ было обнаружено, что штаммы L. casei и L. fermentum в целом обладают более выраженной и разнообразной гликозил-гидролазной активностью по сравнению со штаммами L. bulgaricus и S. thermophilics. L. fermentum MES проявлял высокую а-галактозидазную активность, что является ценной характеристикой при селекции микроорганизмов для ферментирования соевого молока. Штаммы L. casei и L. fermentum MES также обладали выраженной а- и (3-глюкозидазной активностью, которая участвует в расщеплении гликозидов разнообразных биологически активных соединений, включая флавоноиды и изофлавоны. В то же время способность к гидролизу лактозы, присутствующая у всех исследованных штаммов, была наиболее выражена у видов L. bulgaricus и S. thermophilus.

В/ж введение крысам суспензии!,, casei 114001 в количестве 2-109 КОЕ в течение 2-х недель приводило к незначительным изменениям активности [3-глюкозидазы, Р-галактозидазы и Р-глюкуронидазы в слизистой оболочке тонкого кишечника и вызывало значительное, но недостоверное, возрастание (на 29%) активности УДФ-глюкуронозилтрансферазы, одного из главных ферментов фазы конъюгации в процессе метаболизма большинства чужеродных и многих эндогенных соединений. Особое место этот фермент занимает в метаболизме и обеспечении биодоступности биологически активных соединений пищи. Большинство растительных БАС, включая флавоноиды, попадают в кровоток и циркулируют в плазме крови исключительно в виде конъюгатов, преимущественно глюкуронидов [94,287].

В микробиоте кишечника не обнаружено влияния L. casei 114001 на активность а- и Р-глюкозидаз. Изменения активности а- и Р-галактозидаз были небольшими и статистически недостоверными, в то время как активность Р-глюкуронидазы была снижена до 52% от контрольного уровня. Поскольку высокая p-глюкуронидазная активность в микрофлоре кишечника ассоциируется с высоким риском развития рака толстой кишки, её снижение рассматривается многими исследователями в качестве маркера антиканцерогенного и детоксифицирующего действия МКБ.

Известно, что флавоноиды - наиболее многочисленный и широко распространенный в растительном мире класс биологически активных соединений, поступают в организм в виде гликозидов. Рутин (кверцетин-З-О-Р-глюкозо-а-Ь-рамнозида) является наиболее распространенной формой кверцетина, флавоноида с хорошо изученными антиоксидантными свойствами. Ключевым этапом процесса усвоения гликозидов БАС, включая рутин, является дегликозилирование, осуществляющееся под действием ферментов кишечника и кишечной микрофлоры. Принимая во внимание, что пробиотические молочнокислые бактерии L. casei 114001 оказывают влияние на энзиматическую активность тонкого кишечника и микрофлоры толстой кишки, мы предположили, что их введение в рацион может повлиять на метаболизм и биологическую активность рутина.

Включение рутина в рацион крыс в количестве 0,4% рациона приводило к уменьшению накопления продуктов ПОЛ в плазме крови, возрастанию антиоксидантной емкости цитозоля печени и слизистой оболочки тонкого кишечника, возрастанию в печени и слизистой тонкого кишечника активности антиоксидантных ферментов -глутатионпероксидазы, глутатионтрансферазы, хинонредуктазы. В слизистой тонкого кишечника значительно возрастала активность УДФ-глюкуронозилтрансферазы - основного фермента конъюгации флавоноидов и их агликонов в кишечнике. При этом активность Р-глюкуронидазы в кишечной микробиоте была снижена.

У крыс, получавших рутин вместе с L. casei 114001, усиливались проявления антиоксидантной активности рутина - количество продуктов ПОЛ в плазме крови было ниже, антиоксидантная емкость цитозоля печени и слизистой тонкого кишечника возрастала. Введение L. casei 114001 приводило к еще большему увеличению (до 200% от контрольной величины) активности УДФ-глюкуронозилтрансферазы в слизистой оболочке тонкого кишечника. В содержимом кишечника снижалось суммарное количество рутина и его флавонольных метаболитов, а активность Р-глюкуронидазы составляла 17% от контроля.

Таким образом, результаты проведенных исследований позволяют заключить, что некоторые штаммы МКБ, наравне со способностью оказывать оздоравливающее действие на состав микрофлоры ЖКТ, обладают более широким спектром действия. Так, широко используемый в пищевой промышленности штамм Ь. саяе1 114001, способен снижать риск накопления активных форм кислорода в организме и оказывать благоприятное влияние на его антиоксидантный статус, а также модулировать энзиматическую активность тонкого кишечника и кишечной микрофлоры организма хозяина и оказывать влияние на метаболизм веществ, в усвоении которых важную роль отводят бактериальным ферментам.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ускова, Мария Александровна, Москва

1. Андреева И.В. Пробиотики в клинической практике // Клин. Микробиол. Антимикроб. Химиотер. 2006. - Т. 8, № 2. - С. 151-172.

2. Бондаренко В.М., Воробьев A.A. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией // Журн. микробиол. 2004. - № 1. — С. 84-92.

3. Бондарь Т.Н., Ланкин В.З., Антоновский В.Л. Восстановление органических гидропероксидов глутатионпероксидазой и глутатион-S-трансферазой: влияние структуры субстрата // Доклады АН СССР. 1989. -Т. 304, № 1.-С. 217-220.

4. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т. 6, № 12. - С. 13-19.

5. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1971.-252с.

6. Горелов A.B., Усенко Д.В. Влияние пробиотического продукта «Актимель» на состояние здоровья детей // Вопр. совр. педиатр. 2003. -Т. 2, № 4. - С. 87-90.

7. Горелов A.B., Усенко Д.В., Елезова Л.И. и совт. Использование пробиотических продуктов в лечении кишечных инфекций у детей // Вопр. совр. педиатр. 2005. - Т. 4, № 2. - С. 47-52.

8. Гришина И.А., Данилина A.M., Яковлев В.П. Влияние антибиотиков на адгезию микроорганизмов // Антибиот. и химиотер. — 1990. Т. 35, № 3. -С. 50-53.

9. И.Коровина H.A., Захарова И.Н., Костадинова В.Н., Гетманова И.В., Малова Н.Е., Скуинь H.A. Пребиотики и пробиотики при нарушениях кишечного микробиоценоза у детей. М., 2004. - 158 с.

10. Н.Коршунов В.М., Володин H.H., Агафонова С.А., Коршунова О.В. Влияние пробиотиков и биотерапевтических препаратов на иммунную систему организма-хозяина // Педиатрия. 2002. - Т.5. — С. 92-100.

11. Куваева И.Б. Обмен веществ организма и кишечная микрофлора. М.: Медицина, 1976.

12. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей. М.: Медицина, 1991 - 239 с.

13. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Соросовский образовательный жернал. 1999. - №1. - С. 2-7.

14. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона // Успехи соврем, биол. 1990. - Т. 110, вып. 1. - С. 20-33.

15. Ладодо К.С. Кисломолочные продукты и пребиотики в питании детей раннего возраста // Детский доктор. 2001. - №2. - С. 52-54.

16. Ляхович В.В., Вавилин В.А., Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б. Активная защита при окислительном стрессе. Антиоксидант-респонсивный элемент // Биохимия. 2006. - Т. 71, вып. 9. - С. 1183-1197.

17. Мечников И.И. Этюды о природе человека. М.: Издательство академии наук СССР, 1961.

18. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Микробиология. М.: Академия, 2006 - 352 с.

19. Никоненко А.Г. Микробиологическая терапия. Киев: Книга плюс, 2006 -87 с.

20. Парфенов А.И., Ручкина И.Н., Царегородцева Т.М., Серова Т.И. Клиническая эффективность продукта «Актимель» у больных с синдромом раздраженного кишечника с преобладанием поносов // Экспер. и клинич. гастроэнтер. — 2005. — № 5. — С. 45-52.

21. Петров А.Н., Григоров Ю.Г., Козловская С.Г. и соавт. Геродиетические продукты функционального питания.- М.: Колос-пресс, 2001. С. 61-67.

22. Пинегин Б.В., Коршунов В.М., Иванова Н.П. и соавт. Изучение приживления антибиотикоустойчивых бифидобактерий в кишечнике обычных и стерильных животных // ЖМЭИ. 1983. - № 6. - С. 41-46.

23. Сеньчукова М.А., Стадников A.A. О роли бактерий в этиологии и патогенезе злокачественных новообразований // Сибирский онкологический журнал. 2009. - Т.2, №3. - С. 79-85.

24. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксид анты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие // Вопр. Мед. Химии. 1988.-№6.-С. 2-11.

25. Степанчук Ю.Б., Шендеров Б. А. Роль микрофлоры кишечника в метаболизме оксалатов // Микробиология, эпидемиология и иммунология. 1992.-№5.-С. 58-61.

26. Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Любицкий О.Б. и соавт. Ингибирование сывороточными антиоксидантами окисления люминола в присутствии гемоглобина и пероксида водорода // Вопр. Мед. Химии. 1997. - Т. 43, №2.-С. 87-93.

27. Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Любицкий О.Б. и соавт. Определение антиоксидантной активности плазмы крови с помощью системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол // Вопр. Мед. Химии. 1998. -Т. 44, № 1.-С. 70-76.

28. Трушина Э.Н., Мустафина O.K., Никитюк Д.Б. и соавт. Иммуностимулирующее влияние перорального введения бифидобактерий различных штаммов в эксперименте // Вопросы питания. 2006. - Т. 75, №5. -С. 70-74.

29. Тутельян В.А., Батурин А.К., Мартинчик Э.А. Флавоноиды: содержание в пищевых продуктах, уровень потребления, биодоступность // Вопросы питания. 2004. - Т. 73, № 6. - С. 43-48.

30. Усенко Д. А. Применение пробиотического продукта, содержащего Lactobacillus casei Imunitass, в клинической практике // Вопросы современной педиатрии. 2006. - Т. 6, № 2. - С. 54-56.

31. Усенко Д.В. Пробиотики и пробиотические продукты // Вопросы детской диетологии. 2006. - Т. 4, № 6. - С. 36-43.

32. Усенко Д.В., Горелов A.B. Возможности и перспективы применения пробиотиков и пробиотических продуктов в клинической практике // Инфекционные болезни. 2006. - Т. 4, № 2. - С. 68-74.

33. Усенко Д.В., Горелов A.B., Шабалина C.B. Опыт применения кисломолочного пробиотического продукта в лечении острых кишечных инфекций у детей с атопическим дерматитом // Педиатрия. 2008. - Т. 87, № 4. - С. 85-90.

34. Ускова М.А., Кравченко Л.В. Антиоксидантные эффекты молочнокислых бактерий пробиотиков и йогуртных заквасок // Вопросы питания. - 2009. -Т. 78, №2.-С. 18-23.

35. Хавкин А.И., Бельмер C.B. Микроэкология кишечника: методы неспецифической коррекции // РМЖ. 2003. - № 12. - С. 181-185.

36. Хавкин А.И. Жихарева Н.С. Влияние продуктов питания, обогащенных пробиотиками, на функцию кишечника // Вопросы современной педиатрии. 2003. - Т.2. №1

37. Шевелева С.А. Пробиотики, Пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса // Вопросы питания. 1999. - № 2. - С. 32-40.

38. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. М.: ГРАНТ, 1998, ЗТ.

39. Adawi D., Molin G., Jeppsson B. Inhibition of nitric acid oxide production and the effects of arginine and lactobacillus administration in and acute liver injury model // Ann. Sur. 1998. - Vol. 228 (6). - P. 748-755.

40. Aebi H. Catalase in vitro // Methods Enzymol. 1984. - Vol. 105. - P. 121126.

41. Afanaseva I.B., Ostrakhovitch E.A., Mikhal'chik E.V. et al. Ehnancement of antioxidant and anti-inflamatory activities of bioflavonoid rutin by complexation with transition metals // Biochem. Pharmacol. 2001. - Vol. 61 (6)-P. 677-684.

42. Agarwal K.N., Bhasin S.K. Feasibility studies to control acute diarrhea in children by feeding fermented milk preparations Actimel and Indian Dahi. // Eur. J. Clin. Nutr. 2002. - Vol. 56 (suppl. 4). - P. S56-S59.

43. Ahotupa M., Saxelin M., Korpela R. Antioxidative properties of Lactobacillus GGII Nutr. Today Suppl. 1996. - Vol. 31. - P. S51- S52.

44. Aleksunes L.M., Manautou J.E. Emerging role of Nrf2 in protecting against hepatic and gastrointestinal disease // Toxicol. Pathol 2007. - Vol. 35 (4). - P. 459-473.

45. Alia M., Mateos R., Ramos S. et al. Influence of quercetin and rutin on growth and antioxidant defense system of a human hepatoma cell line (HepG2) // Eur. J. Nutr. 2006. - Vol. 45 (1). - P. 19-28.

46. Alvarez-Olmos M. I., Oberhelman R. A. Probiotic agents and infectious diseases: a modern perspective and traditional therapy // Clin. Infect. Dis. -2001.-Vol. 32 (11).-P. 1567-1576.

47. Alvaro E., Andrieux C., Rochet V. et al. Composition and metabolism of the intestinal microbiota in consumers and non-consumers of yogurt // Br. J. Nutr. -2007. Vol. 97 (1). - P. 126-33.

48. Aoi W., Naito Y., Nakamura T. et al. Inhibitory effect of fermented milk on delayed-onset muscle damage after exercise // J. Nutr. Biochem. 2007. - Vol. 18 (2).-P. 140-145.

49. Archibald F.S., Fridovich I. Manganese, superoxide dismutase and oxygen tolerance in some lactic acid bacteria // J. Bacteriol. 1981. - Vol. 146 (3). - P. 928-936.

50. Aruoma OI, Kaur H, Halliwell B. Oxygen free radicals and human diseases // J RSoc Health. -1991. -Vol. Ill (5).-P. 172-177.

51. Backhed F., Ding H., Wang T. et al. The gut microbiota as an environmental factor that regulates fat storage // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2004. - Vol. 101 (44).-P. 15718-15723.

52. Backhed F., Manchester J.K., Semenkovich C.F., Gordon J.I. Mechanisms underlying the resistance to diet-induced obesity in germ-free mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2007. - Vol. 104 (3). - P. 979-984.

53. Baek S.-H., Park M., Suh J.-H. et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2008. -Vol. 72.-P. 1176-1182.

54. Bailey R. Functional foods developments in Japan // Int. Rev. Food Sci. Technol. - 2002. - Vol. 1. - P. 30-31.

55. Bay B.H., Lee Y.K., Tan B.K. et al. Lipid peroxidative stress and antioxidative enzymes in brains of milk-supplemented rats // Neurosci. Lett. — 1999. — Vol. 277(2).- P. 127-130.

56. Begley M., Hill C., Gahan C.G.M. Bile salt hydrolase activity in probiotics. Applied and Environmental Microbiology // 2006. Vol. 72 (3). - P. 17291738.

57. Bezkorovainy A. Probiotics: determinants of survival and growth in the gut // Am. J. Clin. Nutr. 2001. - Vol. 73 (Suppl. 2). - P. 399S-405S.

58. Blaut M. Relationship of probiotics and food to intestinal microflora // Eur. J. Nutr.-2002.-Vol. 41 (Suppl. 1)-P. 11-16.

59. Blaut M., Schoefer L., Braune A. Transformation of flavonoids by intestinal microorganisms // Int. J. Vitam. Nutr. Res. 2003. - Vol. 73 (2). - P. 79-87.

60. Boge T., Remigy M., Vaudaine S. et al. A probiotic fermented dairy drink improves antiobody response to influenza vaccination in the elderly in two randomized controlled trials // Vaccine. 2009. - Vol. 27 (41). - P. 5677-5684.

61. Bokkenheuser V.D., Shackleton C.H.L., Winter J. Hydrolysis of dietary flavonoid glycosides by strains of intestinal Bacteroides from humans // Biochemistry. 1987. - Vol. 248 (3). - P. 953-956.

62. Borruel N., Carol M., Casellas F. et al. Increased mucosal tumour necrosis factor alpha production in Crohn's disease can be downregulated ex vivo by probiotic bacteria // Gut. 2002. - Vol. 51 (5). - P. 659-664.

63. Borruel N., Casellas F., Antolin M. et al. Effects of nonpathogenic bacteria on cytokine secretion by human intestinal mucosa // Am. J. Gastroenterol. 2003. -Vol. 98 (4).-P. 865-870.

64. Boyle S.P., Dobson V.L., Duthie S.J. et al. Bioavailability and efficiency of rutin as an antioxidant: a human supplementation study // Eur. J. Clin. Nutr. -2000. Vol. 54 (10). - P. 774-782.

65. Braune A., Gutschow M., Engst W. et al. Degradation of quercetin and luteolin by Eubacterium ramulus II App. Enrivon. Microbiology. 2001. - Vol. 67(12). -P. 5558-5567.

66. Bugaut M., Bentejac M. Biological effects of shor-chain fatty acids in nonruminant mammals // Annu. Rev. Nutr. 1993. - Vol. 13. - P. 217-241.

67. Bullen C.L., Tearle P.V., Stewart M.G. The effect of "humanized" milks and supplemented breasfeeding on the faecal flora of infants // J. Med. Microbiol. -1977.-Vol. 10 (4).-P. 403-413.

68. Burchell B., Weatherill P. 4-Nitrophenol UDP-glucuronyltransferase (rat liver) // Methods Enzymol. 1981. - Vol. 77. - P. 169-176.

69. Burton J.P., Tannock G.W. Properties of porcine and yogurt lactobacilli in relation to lactose intolerance // J. Dairy Sci. 1997. - Vol. 80 (10). - P. 23182324.

70. Cai Q., Wei H. Effect of dietary genistein on antioxidant enzyme activities in SENCAR mice // Nutr. Cancer. 1996. - Vol. 25 (1). - P. 1-7.

71. Carbonaro M., Grant G., Pusztai A. Evaluation of polyphenol bioavailability in rat small intestine // Eur. J: Nutr. 2001. - Vol. 40 (2). - P. 84-90.

72. Carol M., Borruel N., Antolin M. et al. Modulation of apoptosis in intestinal lymphocytes by a probiotic bacteria in Crohn's disease // J. Leukoc. Biol. -2006.-Vol. 79 (5).-P. 917-22.

73. Cebra J.J. Influence of microbiota on intestinal immune system development // Am J. Clin. Nutr. 1999. - Vol. 69 (5). - P. 1046S-1051S.

74. Chadwick R.W., George S.E., Claxton L.D. Role of the gastrointestinal mucosa and microflora in the bioactivation of dietary and environmental mutagens or carcinogens // Drug Metab. Rev. 1992. - Vol. 24 (4). - P. 425-492.

75. Chance B., Herbert D. The enzyme substrate compounds of bacterial catalase and peroxides // Biochem. J. 1950. - Vol. 46 (4). - P. 402-414.

76. Chien H.L., Huang H.Y., Chou C.C. Transformation of isoflavone phytoestrogens during the fermentation of soymilk with lactic acid bacteria and bifidobacteria // Food Microbiol. 2006. - Vol. 23 (8). - P. 772-778.

77. Chipman J.K. Bile as a source of potential reactive metabolites // Toxicology -1982. Vol. 25 (2-3). - P. 99-111.

78. Chun J., Kim G.M., Lee K.W. et al. Conversion of isoflavone glucosides to aglycones in soymilk by fermentation with lactic acid bacteria // J. Food Sci. 2007. Vol. 72 (2). - P. M39-44.

79. Chung T.C., Alexsson L., Lindgren S.E. et al. In vitro studies on reuterin synthesis by Lactobacillus reuteri // Microb. Ecol. Health Dis. 1989. - Vol. 2 (2).-P. 137-144.

80. Clifford M.N. Diet-derived phenols in plasma and tissues and their implications for health // Planta Med. 2004. - Vol. 70 (12). - P. 1103-1114.

81. Cobo Sanz JM, Mateos JA, Munoz Conejo A. Effect of Lactobacillus casei on the incidence of infectious conditions in children // Nutr. Hosp. 2006. - Vol. 21 (4).-P. 547-551.

82. Cook S.I., Sellin J.H. Short chain fatty acids in health and disease // Aliment. Pharmacol. Ther. 1998. - Vol. 12 (6). - P. 499-507.

83. Crozier A., Jaganath I.B., Clifford M.N. Dietary phenolics: chemistry, bioavailability and effects on health // Nat. Prod. Rep. 2009. - Vol. 26 (8). -P. 1001-1043.

84. Day A.J., Canada F.J., Diaz J.C. at al. Dietary flavonoid and isoflavone glycosides are hydrolyzed by the lactase site of lactase phlorizin hydrolase // FEBS Letters. 2000. - Vol. 468 (2-3). - P. 166-170.

85. Day A.J., DuPont M.S., Ridley S. at al. Deglycosylation of flavonoid and isolavonoid glycosides by human small intestine and liver (3-glucosidase activity // FEBS Letters. 1998. - Vol. 436 (1). - P. 71-75.

86. De Preter V., Raemen H., Cloetens L., Houben E., Rutgeerts P., Verbeke K. Effect of dietary intervention with different pre-and probiotics on intestinalbacterial enzyme activities I I Eur. J. Clin. Nutr. 2008. - Vol. 62 (2). - P. 225231.

87. De Vrese M., Schrezenmeir J. Probiotics, prebiotics, and symbiotics // Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. 2008. - № 111.-P. 1-66.

88. De Vrese M., Stegelmann A., Richter B. et al. Probiotics compensation for lactase insufficiency // Am. J. Clin. Nutr. - 2001. - Vol. 73 (Suppl. 2). - P. 421S-429S.

89. Dewan S., Tamang J.P. Dominant lactic acid bacteria and their technological properties isolated from the Himalayan ethnic fermented milk products // Antonie Van Leeuwenhoek. 2007. - Vol. 92 (3). - P. 343-352.

90. Diplock A.T., Aggett P. J., Ashwell M. et al. Scientific concepts of functional foods in Europe: consensus document // Br. J. Nutr. 1999. - Vol. 81 (Suppl. 1).-P. Sl-27.

91. Donkor O.N., Shah N.P. Production of (3-glucosidase and hydrolysis of isoflavone phytoestrogens by Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium lactis and Lactobacillus casei in soymilk // J. Food Sci. 2008. - Vol. 73 (1). - P. M15-20.

92. Douglas L.G., Sanders M.E. Probiotics and prebiotics in dietetics plactice // J. Am. Diet. Assoc. 2008. - Vol. 108 (3). - P. 510-521.

93. Ewaschuk J.B., Dieleman L.A. Probiotics and prebiotics in chronic inflammatory bowel diseases // World J. Gastroenterol. 2006. - Vol. 12 (37). -P. 5941-5950.

94. Fabian E., Elmadfa I. The effect of daily consumption of probiotic and conventional yoghurt on oxidant and anti-oxidant parameters in plasma of young healthy women // Int. J. Vitam. Nutr. Res. 2007. - Vol. 77 (2). - P. 7988.

95. Fahey R.C., Brown W.C., Adams W.B., Worsham M.B. Occurrence of glutathione in bacteria // J. Bacteriol. 1978. - Vol. 133 (3). - P. 1126-1129.

96. Finegold S.P. Normal human intestinal flora // Ann. 1st. Super Sanita. -1986. Vol. 22 (3). - P. 731-737.

97. Flohe L., Gunzler W.A. Assays of glutathione peroxidase // Methods enzymol.- 1984. -Vol. 105,-P. 114-119.

98. Fotiadis C. I., Stoidis C. N., Spyropoulos B.G., Zografos E.D. Role of probiotics, prebiotics and synbiotics in chemopreventon for colorectal cancer // World J. Gastroenterol. 2008. - Vol. 14 (42). - P. 6453-6457.

99. Freeman H.J. Effects of differing purified cellulose, pectin and hemicellulose fiber diets on fecal enzymes in 1,2-dimethylhydrazine-induced rat colon carcinogenesis // Cancer Research. 1986. - Vol. 46 (11). - P. 55295532.

100. Fuller R. Probiotics in man and animals // J. Appl. Bacteriol. 1989. - Vol. 66 (5).-P. 365-378.

101. Ganzle M.G. From gene to function: metabolic traits of starter cultures for improved quality of cereal foods // Int. J. Food Microbiol. 2009. - Vol. 134 (1-2).-P. 29-36.

102. Gao Z., Xu H., Chen X., Chen H. Antioxidant status and mineral contents in tissues of rutin and baicalin fed rats // Life Sci. 2003. - Vol. 73 (12). - P. 1599-1607.

103. Gatti M., Fornasari M.E., Lazzi C. et al. Peptidase activity in various species of dairy thermophilic lactobacilli // J. Appl. Microbiol. 2004. - Vol. 96 (2). -P. 223-229.

104. Gill H.S., Guarner F. Probiotics and human health: a clinical perspective // Postgrad. Med. J. 2004. - Vol. 80 - P. 516 - 526.

105. Goldin B.R., Gorbach S.L. The effect of milk and lactobacillus feeding on human intestinal bacterial enzyme activity // Am. J. Clin. Nutr. 1984. - Vol. 39 (5).-P. 756-761.

106. Goldin B.R., Gorbach S.L. Clinical indications for probiotics: an overview // Clin. Infect. Dis. -2008. Vol. 46 (Suppl. 2). - P. S96-S100.

107. Goldin B.R., Gorbach S.L., Saxelin M. et al. Survival of Lactobacillus species (strain GG) in human gastrointestinal tract. // Dig. Dis. Sci. 1992. -Vol. 37(1).-P. 121-128.

108. Goldin B.R., Swenson L., Dwyer J. et al. Effect of diet and Lactobacillus acidophilus supplements on human fecal bacterial enzymes // J. Natl. Cancer Inst. 1980. - Vol. 64 (2). - P. 255-261.

109. Gopal P.K., Sullivan P.A., Smart J.B. Utilisation of galacto-oligosaccharides as substrates for growth by lactic acid bacteria including Bifidobacterium lactis DR10 and Lactobacillus rhamnosus DR20 II Int. Dairy J. 2001. - Vol. 11 (1-2).-P. 19-25.

110. Gorbach S.L., Goldin B.R. The intestinal microflora and colon cancer connection // Rev. Infect. Dis. 1990. - Vol. 12 (Suppl.2). - P. S252-261.

111. Graefe E.U., Wittig J., Mueller S. at al. Pharmacokinetics and bioavailability of quercetin glycosides in humans // J. Clin. Pharmacol. 2001. - Vol. 41 (5). -P. 492-499.

112. Grimaldi A., Bartowsky E., Jiranek V. Screening of Lactobacillus spp. and Pediococcus spp. for glycosidase activities that are important in oenology // J. Appl. Microbiol. 2005. - Vol. 99 (5). - P. 1061-1069.

113. Guchte van de M., Penaud S., Grimaldi C. at al. The complete genome sequence of Lactobacillus bulgaricus reveals extensive and ongoing reductive evolution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2006. - Vol. 103 (24). - P. 92749279.

114. Guerin-Danan C., Chabanet C., Pedone C. et al. Milk fermented with yogurt cultures and Lactobacillus casei compared with yogurt and gelled milk: influence on intestinal microflora in healthy infacts // Am. J. Clin. Nutr. 1998. -Vol. 67(1).-P. 111-117.

115. Guetmonde M., Nieves C., Vinderola G. et al. Evolution of carbohydrate fraction in carbonated fermented milks as affected by beta-galactosidase activity of starter strains // J. Dairy Res. -2002. Vol. 69 (1). - P. 125-37.

116. Guven A., Guven A., Gulmez M. The effect of kefir on the activities of GSH-Px, GST, CAT, GSH and LPO levels in carbon tetrachloride-induced mice tissues // J. Vet. Med. B Infect. Dis. Vet. Public Health 2003. - Vol. 50 (8).-P. 412-416.

117. Habig W.H., Pabst M.J., Jakoby W.B. Glutathione S-transferases. The first enzymatic step in mercapturic acid formation // J. Biol. Chem. 1974. - Vol. 249 (22).-P. 7130-7139.

118. Hacini-Rachinel F., Nancey S., Boschetti G. et al. CD4+ T cells and Lactobacillus casei control relapsing colitis mediated by CD8+ T cells // J. Immunol. 2009. - Vol. 183 (9). - P. 5477-5486.

119. Hacksworth G., Drasar B.S., Hill M J. Intestinal bacteria and the hydrolysis of glycosidic bonds //J. Med. Microbiol. 1971. - Vol. 4 (4). - P. 451-459.

120. Halliwell B. Albumin an important extracellular antioxidant // Biochem. Pharmacol. - 1988. - Vol. 37 (4). - P. 569-571.

121. Han W., Mercenier A., Ait-Belgnaoui A. at al. Improvement of an experimental colitis in rats by lactic acid bacteria producing superoxide dismutase // Inflamm. Bowel Dis. 2006. - Vol. 12 (11). - P. 1044-1052.

122. Hanske L., Loh G., Sczesny S. et al. The bioavailability of apigenin-7-glucoside is influenced by human intestinal microbiota in rats // J. Nutr. 2009. -Vol. 139 (6).-P. 1095-1102.

123. Harmsen H.J.M., Raangs G.C., He T. et al. Extensive set of 16S rRNA-based probes for detection of bacteria in human feces. // Appl. Environ. Microbiol. 2002. - Vol. 68 (6). - P. 2982-2990.

124. Hart A.L., Stagg A.J., Frame M. et al. The role of the gut flora in health and disease, and its modification as therapy // Aliment Pharmacol Ther. — 2002. -Vol. 16 (8).-P. 1383-1393.

125. Hashimoto T., Ueda Y., Oi N. et al. Effects of combined administration of quercetin, rutin and extract of white radish sprout rich in kaempferol glycosides on the metabolism in rats // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2006. - Vol. 70 (1). -P. 279-281.

126. He T., Priebe M.G., Zhong Y. et al. Effects of yogurt and bifidobacteria supplementation on the colonic microbiota in lactose-intolerant subjects // J. Appl. Microbiol.-2008.-Vol. 104 (2).-P. 595-604.

127. Hickson M., D'Souza A.L., Muthu N. et al. Use of probiotic Lactobacillus preparation to prevent diarrhoea associated with antibiotics: randomised double blind placebo controlled trial // BMJ. 2007. - Vol. 335 (7610):80.

128. Hidalgo-Morales M., Robles-Olvera V., Garcia H.S. Lactobacillus reuteri beta-galactosidase activity and low milk acidification ability // Can. J. Microbiol. 2005. - Vol. 51 (3). - P. 261-267.

129. Hollman P.C., Bijsman M.N., van Gameren Y. et al. The sugar moiety is a major determinant of the absorption of dietary flanovoid glycosides in man // Free Radic. Res. 1999. - Vol. 31 (6). - P. 569-573.

130. Holzapfel W.H., Haberer P., Geisen R. et al. Taxonomy and important features of probiotic microorganisms in food and nutrition // Am. J. Clin. Nutr. 2001. - Vol. 73 (Suppl. 2). - P. 365S-373S.

131. Holzapfel W.H., Haberer P., Snel J. et al. Overview of gut flora and probiotics // Int. J. Food Microbiol. 1998. - Vol. 41 (2). - P. 85 - 101.

132. Honda H., Ktatoka F., Nagaoka S. et al. f3-Galactosidase, p- P-galactosidase and p- P-glucosidase activities in lactobacilli strains isolated from human faeces // Lett. Appl. Microbiol. 2007. - Vol. 45 (5). - P. 461-466.

133. Hooper LV, Midtvedt T, Gordon JI. How host-microbial interactions shape the nutrient environment of the mammalian intestine // Annu. Rev. Nutr. -2002. -Vol. 22.-P. 283-307.

134. Humble M.W., King A., Phillips I. API ZYM: a simple rapid system for the detection of bacterial enzymes // J. Clin. Path. 1977. - Vol. 30 (3). - P. 275277.

135. Hylemon P.B., Harder J. Biotransformation of monoterpenes, bile acids, and other isoprenoids in anaerobic ecosystems // FEMS Microbiol. Rev. 1998. -Vol.22 (5).-P. 475-488.

136. Ioku K., Pongpiriyadacha Y., Konishi Y. et al. p-Glucosidase activity in the rat small intestine toward quercetin monoglucosides // Biosci. Biotechnol. Biochem.- 1998.-Vol. 62 (7).-P. 1428-1431.

137. Iqbal M.F., Zhu W.Y. Bioactivation of flavonoid diglycosides by chicken cecal bacteria//FEMS Microbiol. Lett. 2009. - Vol. 295 (l).-P. 30-41.

138. Isolauri E., Sutas Y., Kankaanpaa P. et al. Probiotics: effects on immunity // Am. J. Clin. Nutr. -2001. Vol. 73 (Suppl. 2). - P. 444S-450S.

139. Jaganath I.B., Mullen W., Lean M.E. et al. In vitro catabolism of rutin by human fecal bacteria and the antioxidant capacity of its catabolites // Free Radic Biol. Med. 2009. - Vol. 47 (8). - P. 1180-1189.

140. Janbaz K.H., Saeed S.A., Gilani A.H. Protective effect of rutin on paracetamol- and CCU-induced hepatotoxicity in rodents // Fitoterapia. 2002. -Vol. 73 (7-8).-P. 557-563.

141. Jiang T., Mustapha A., Savaiano D.A. Improvement of lactose digestion in humans by ingestion of unfermented milk containing Bifidobacterium longum // J. Dairy Sci. 1996. - Vol. 79 (5). - P. 750-757.

142. Kaizu H., Sasaki M., Nakajima H. et al. Effect of antioxidative lactic acid bacteria on rats fed a diet deficient in vitamin E // J. Dairy Sci. 1993. - Vol. 76 (9).-P. 2493-2499.

143. Kapila S., Sinha P.R. Antioxidative and hypocholesterolemic effect of Lactobacillus casei ssp casei (biodefensive properties of lactobacilli) // Indian J. Med. Sci.-2006.-Vol. 60 (9).-P. 361-370.

144. Karthik kumar V., Vennila S., Nalini S. Modifying effects of morin on the development of aberrant crypt foci and bacterial enzymes in experimental colon cancer // Food Chem. Toxicol. 2009. - Vol. 47 (2). - P. 319-315.

145. Kidd P. Glutathione: systemic protectant against oxidative and free radical damage // Alter. Med. Rev. 1997. - Vol. 2 (3). - P. 155-182.

146. Kim K.Y., Nam K.A., Kurihara H. et al. Potent a-glucosidase inhibitors purified from the red alga Grateloupia elliptica // Phytochemistry. 2008. -Vol. 69 (16).-P. 2820-2825.

147. Kim G.N., Jang H.D. Protective mechanism of quercetin and rutin using glutathione metabolism on H202-induced oxidative stress in HepG2 cells // Ann. N Y Acad. Sci. 2009. - Vol. 1171 (1). - P. 530-537.

148. Kim E.-Y., Kim Y.-H., Rhee M.-H. et al. Selection of Lactobacills sp. PSC101 that produces active dietary enzymes such as amylase, lipase, phytase and protease in pigs // J. Gen. App. Microbiol. 2007. - Vol. 53 (2). - P. 111117.

149. Kim J.H., Park J.-Y., Jeong S.-J. et al. Characterization of the a-galactosidase gene from Leuconostoc mesenteriodes SY1 II J. Microbiol. Biotechnol. 2005. - Vol. 15 (4). - P. 800-808.

150. Kitada M., Igarashi K., Hirose S. et al. Inhibition by polyamines of lipid peroxide formation in rat liver microsomes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1979. - Vol. 87 (2). - P. 388-394.

151. Knassmuller S., Steinkellner H., Hirschl A.M. et al. Impact of bacteria in dairy products and of the intestinal microflora on the genotoxic and carcinogenis effects of heterocyclic aromatic amines // Mutat. Res. 2001. -Vol. 480-481.-P. 129-138.

152. Koller V.J., Marian B., Stidl R. et al. Impact of lactic acid bacteria on oxidative DNA damage in human derived colon cells // Food Chem. Toxicol. -2008. Vol. 46 (4). - P. 1221-1229.

153. Kullisaar T., Songisep E., Mikelsaar M. et al. Antioxidative probiotic fermented goats' milk decreases oxidative stress-mediated atherogenicity in human subjects // Br. J. Nutr. 2003. - Vol. 90 (2). - P. 449-456.

154. Kullisaar T., Zilmer M., Mikelsaar M. et al. Two antioxidative lactobacilli strains as promising probiotics // Int. J. Food Microbiol. 2002. - Vol. 72 (3). -P. 215-224.

155. La Casa C., Villegas I., Alarcon de la Lastra C. et al. Evidence for protective and antioxidant properties of rutin, a natural flavone, against ethanol induced gastric lesions // J. Ethnoparmacol. 2000. - Vol. 71 (1-2). - P. 45-53.

156. Lai J.-T., Fang H.-L., Hsieh W.-T. et al. Protective effect of a fermented substance from Saccharomyces cerevisiae on liver injury in mice caused by acetaminophen // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2008. - Vol. 72 (10). - P. 2514-2520.

157. Laqueur G.L., Michelson O., Whiting M.G. et al. Carcinogenic properties of nuts from Cycas circinalis L. indigenous to Guam // J. Natl. Cancer Inst. -1963.-Vol. 31.-P. 919-951.

158. LeBlanc J.G., Garro M.S., Savoy de Giori G. Effect of pH on Lactobacillus fermentum growth, raffmose removal, a-galactosidase activity and fermentation products // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2004. - Vol. 65 (1). - P. 119-123.

159. LeBlanc J.G., Piard J.C., Sesma F. et al. Lactobacillus fermentum CRL 722 is able to deliver active a-galactosidase activity in the small intestine of rats // FEMS Microbiol. Lett. 2005. - Vol. 248 (2). - P. 177-82.

160. Lee J., Hwang K.T., Heo M.S. et al. Resistance of Lactobacillus plantarum KCTC 3099 from Kimchi to oxidative stress // J. Med. Food. 2005. - Vol. 8 (3).-P. 299-304.

161. Lee H.S., Jung K.H., Hong S.W. et al. Morin protects acute liver damage by carbon tetrachloride (CC14) in rat // Arch. Pharm. Res. 2008. - Vol. 31 (9). -P. 1160-1165.

162. Ley R.E., Backhed F., Turnbaugh P. et al. Obesity alters gut microbial ecology // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2005. - Vol. 102 (31). - P. 1107011075.

163. Ley R.E., Turnbaugh P.J., Klein S. et al. Microbial ecology: human gut microbes associated with obesity // Nature. 2006. - Vol. 444 (7122). - P. 1022-1023.

164. Lilly D.M., Stilwell R.H. Probiotics: growth promoting factors produced by microorganisms // Science. 1965. - Vol. 147. - P. 747-748.

165. Lin M.Y., Chang F.J. Antioxidative effect of intestinal bacteria Bifidobacterium longum ATCC 15708 and Lactobacillus acidophilus ATCC 4356II Dig. Dis. Sci.-2000.-Vol. 45 (8).-P. 1617-1622.

166. Lin W.T., Yang S.C., Chen K.T. et al. Protective effects of L-arginine on pulmonary oxidative stress and antioxidant defenses during exhaustive exercise in rats // Acta Pharmacol. Sin. 2005. - Vol. 26. - P. 992-999.

167. Lin M.Y., Yen C.L. Reactive oxygen species and lipid peroxidation product-scavenging ability of yogurt organisms // J. Dairy Sci. 1999. - Vol. 82. - P. 1629-1634.

168. Lin M.Y., Yen C.L. Antioxidative ability of lactic acid bacteria // J. Agric. Food Chem. 1999. - Vol. 47 (4). - P. 1460-1466.

169. Lin M.Y., Yen C.L. Inhibition of lipid peroxidation by Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium longum // J. Agric. Food Chem. 1999. - Vol. 47 (9).-P. 3661-3664.

170. Ling W.H., Korpela R., Mykkanen H. et al. Lactobacillus strain GG supplementation decreases colonic hydrolitic and reductive enzyme activities in healthy female adults // J. Nutr. 1994. - Vol. 124 (1). - P. 18-23.

171. Liu J.R., Chen M.J., Lin C.W. Antimutagenic and antioxidant properties of milk-kefir and soymilk-kefir // J. Agric. Food Chem. 2005. - Vol. 53 (7). - P. 2467-74.

172. Llopis M., Antolin M., Carol M. et al. Lactobacillus casei downregulates commensals' inflammatory signals in Crohn's disease mucosa // Inflamm. Bowel Dis. 2009. - Vol. 15 (2). - P. 275-283.

173. Llopis M., Antolin M., Guarner F. et al. Mucosal colonization with Lactobacillus casei mitigates barrier injury induced by exposure to trinitronbenzene sulphonic acid // Gut. 2005. - Vol. 54 (7). - P. 955-959.

174. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L. et al. Protein measurement with Folin phenol reagent // Journal of biological chemistry. 1951. - Vol. 193 (1). -P. 265-275.

175. Mallett A.K., Bearne C.A., Lake B.G. et al. Modified mutagen activation in hepatic fractions from rats fed dietary rutin interation between gut flora and host metabolism // Food Chem Toxicol. - 1989. - Vol. 27 (9). - P. 607-11.

176. Manach C., Morand C., Demigne C. et al. Bioavailability of rutin and quercetin in rats // FEBS Lett. 1997. - Vol. 409 (1). - P. 12-16.

177. Manach C., Morand C., Texier O. et al. Quercetin metabilites in plasma of rats fed diets containing rutin or quercetin // J. Nutr. 1995. - Vol. 125 (7). - P. 1911-1922.

178. Manach C., Williamson G., Morand C. et al. Bioavailability and bioefficacy of polyphenols in humans. I. Review of 97 bioavailability studies // Am. J. Clin. Nutr.-2005.-Vol. 81 (Suppl. 1).-P. 230S-42S.

179. Manibusan M.K., Odin M., Eastmond D.A. Postulated carbon tetrachloride mode of action: a review // J. Environ. Sci. Health C Environ. Carcinog. Ecotoxicol. Rev. 2007. - Vol. 25 (3). - P. 185-209.

180. Marco M.L., Pavan S., Kleerebezem M. Towards understanding molecular modes of probiotic action // Curr. Opinion Biotech. 2006. - Vol. 17 (2). - P. 204-210.

181. Marcos A. Warnberg J., Nova E. et al. The effect of milk fermented by yogurt cultures plus Lactobacillus casei DN-114001 on the immune response of subjects under academic examination stress // Eur. J. Nutr. 2004. - Vol. 43 (6).-P. 381-389.

182. Markiewicz L., Garey J., Adlercreutz H. et al. In-vitro bioassays of nonsteroidal phytoestrogens // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1993. - Vol. 45 (5). -P. 399-405.

183. Marklund S. Extracellular superoxide dismutase in human tissues and human cell lines // Clin. Invest. 1984. - Vol. 74 (4). - P. 1398-1403.

184. Marteau P., Flourie B., Pochart P. et al. Effect of the microbial lactase (EC 3.2.1.23) activity in yoghurt on the intestinal absorption of lactose: an in vivo study on lactase-deficient humans // Br. J. Nutr. 1990. - Vol. 64 (1). - P. 7179.

185. Martini M.C., Lerebours E.C., Lin W.-J. et al. Strains and species of lactic acid bacteria in fermented milks (yogurts): effect on in vivo lactose digestion // Am. J. Clin. Nutr. 1991. - Vol. 54 (6). - P. 1041-1046.

186. Matthews A., Grimaldi A., Walker M. et al. Lactic acid bacteria as a potential source of enzymes for use in vinification // Appl. Environm. Microbiol. 2004. - Vol. 70 (10).-P. 5715-5731.

187. Mayo B. The proteolytic system of lactic acid bacteria // Microbiologia. -1993.-Vol. 9 (2).-P. 90-106.

188. McDonald I.A., Mader J.A., Busard R.G. The role of rutin and quercitrin in stimulating flavonol glycosidase activity by cultured cell-free microbial preparations of hyman feces and saliva // Mutat. Res. 1983. - Vol. 122 (2). -P. 95-102.

189. Mehta A., Singh S., Dhawan V. et al. Intestinal mucosal lipid peroxidation and absorptive friction in Salmonella Typhimurium mediated intestinal infection // Mol. Cell Biochem. 1998. - Vol. 178 (1-2). - P. 345-352.

190. Mercenier A., Pavan S., Pot B. Probiotics as biotherapeutic agent: present knowledge and future prospects // Curr. Pharm. Des. 2003. - Vol. 9 (2). — P. 175-191.

191. Metges C.C. Contribution of microbial amino acids to amino acid homeostasis of the host // J. Nutr. 2000. - Vol. 130 (7). - P.1857S-1864S.

192. Meyer A.L., Micksche M., Herbacek I. et al. Daily intake of probiotic as well as conventional yogurt has a stimulating effect on cellular immunity in young healthy women // Ann. Nutr. Metab. 2006. - Vol. 50 (3). - P. 282-289.

193. Miettinen M., Vuopio-Varkila J., Varkila K. Production of human tumor necrosis factor alpha, interleukin-6 and interleukin-10 is induced by lactic acid bacteria // Infect. Immun. 1996. - Vol. 64 (12). - P. 5403-5405.

194. Mikelsaar M., Zilmer M. Lactobacillus fermentum ME-3 an antimicrobial and antioxidative probiotic // Microb. Ecol. Health Dis. - 2009. - Vol. 21 (1) -P. 1-27.

195. Montgomery R.K., Buller H.A., Rings E.H.H.M. et al. Lactose intolerance and the genetic regulation of intestinal lactase-phlorizin hydrolase. // FASEB J. 1991.-Vol. 5 (13).-P. 2824-2832.

196. Montrose D.C., Floch M.H. Probiotics used in human studies // J. Clin. Gastroenterol. 2005. - Vol. 39 (6). - P. 469-484.

197. Morand C., Crespy V., Manach C. et al. Plasma metabolites of quercetin and their antioxidant properties // Am. J. Physiol. 1998. - Vol. 275. - P. R212-R219.

198. Nakamura J., Kubota Y., Miyaoka M. et al. Comparison of four microbial enzymes in Clostridia and Bacteroides isolated from human feces // Microbiol. Immunol. 2002. - Vol. 46 (7). - P. 487-490.

199. Nemeth K., Plumb G.W., Berrin J.G. et al. Deglycosylation by small intestinal epithelial cell ß-glucosidases is a critical step in the absorption and metabolism of dietary flavonoid glycosides in humans // Eur. J. Nutr. 2003. -Vol. 42(1).-P. 29-42.

200. Newton G.L., Arnold K., Price M.S. et al. Distribution of thiols in microorganisms: mycothiol is a major thiol in most actinomycetes // J. Bacteriol. 1996. - Vol. 178 (7). - P. 1990-1995.

201. Nishikimi M., Appaji N., Yagi K. The occurence of superoxide anion in the reaction of reduced phenazine methosulfate and molecular oxygen // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. - Vol. 46 (2). - P. 849-854.

202. Noh D.O., Gilliland S.E. Influence of bile on cellular integrity and galactosidase activity of Lactobacillus acidophilus II J. Dairy Sci. 1993. — Vol. 76 (5).-P. 1253-1259.

203. Noverr M.C., Huffnagle G.B. Does the microbiota regulate immune responses outside the gut? // Trends Microbiol. 2004. - Vol. 12 (12). - P.562-568.

204. Oelschlaeger T. Mechanisms of probiotic action — a review // Int. J. Med. Microbiol. 2009. - doi: 10.1016/j.ijmm.2009.08.005.

205. O'Hara A.M., Shanahan F. The gut flora as forgotten organ. // EMBO reports. 2006. - Vol. 7 (7). - P. 688-693.

206. Oozeer R., Leplingard A., Mater D.D.G. et al. Survival of Lactobacillus casei in the human digestive tract after consumption of fermented milk // Appl. Environ. Microbiol. 2006. - Vol. 72 (8). - P. 5615-5617.

207. Osborne D.L., Siedel E.R. Microflora-derived polyamines modulate obstruction-induced colonic mucosal hypertrophy // Am. J. Physiol. (Gastrointest. Liver Physiol.) 1989. - Vol. 256 (6). - P. G1049-G1058.

208. Osman N., Adawi D., Ahrne D. et al. Endotoxin- and D-galactosamine-induced liver injury improved by the administration of Lactobacillus, Bifidobacterium and blueberry // Dig. Liver Dis. 2007. - Vol. 39 (9). - P. 849-856.

209. Otieno D.O., Shah N.P. Endogenous 3-glucosidase and (3-galactosidase activities from selected probiotic microorganisms and their role in isoflavone biotransformation in soymilk // J. App. Microbiol. 2007. - Vol. 103 (4). - P. 910-917.

210. Pahwa A., Mathur B.N. Assessment of a bifidus containing infant formula. Part II. Implantation of Bifidobacterium. Bifidum II Indian J. Dairy Sci. 1987. -Vol. 40 (3).-P. 364-367.

211. Paik H.-D., Park J.-S., Park E. Effects of Bacillus polyfermenticus SCD on lipid and antioxidant metabolisms in rats fed a high-fat and high-cholesterol diet // Biol. Pharm. Bull. 2005. - Vol. 28 (7). - P. 1270-1274.

212. Panigrahi P., Parida S., Pradhan L. et al. Long-term colonization of a Lactobacillus plantarum symbiotic preparation in the neonatal gut // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2008. - Vol. 47 (1). - P. 45-53.

213. Parassol N.s Freitas M., Thoreux K. et al. Lactobacillus casei DN-114001 inhibits the increase in paracellular permeability of enteropathogenic Escherichia coli-infected T84 cells // Res. Microbiol. 2005. - Vol.156 (2). -P. 256-262.

214. Park S.-Y., Bok S.-H., Jeon S.-M. et al. Effect of rutin and tannic acid supplements on cholesterol metabolism in rats // Nutrition Research. 2002. -Vol. 22 (3).-P. 283-295.

215. Park E., Thomas J. The mechanisms of reduction of protein mixed disulfides (dethiolation) in cardiac tissue // Arch. Biochem. Biophys. 1989. - Vol. 274 (l).-P. 47-54.

216. Parra M.D., Martinez de Morentin B.E., Cobo J.M. et al. Daily ingestion of fermented milk containing Lactobacillus casei DN 114001 improves innate-defense capacity in healthy middle-aged people // J. Physiol. Biochem. 2004. -Vol. 60 (2).-P. 85-91.

217. Parvez S., Malik K.A., Ah Kang S. et al. Probiotics and their fermented food products are beneficial for health // J. Appl. Microbiol. 2006. - Vol. 100 (6). -P. 1171-1185.

218. Pavanato A., Tunon M.J., Sanchez-Campos et al. Effect of quercetin on liver damage in rats with carbon tetrachloride-induced cirrhosis // Dig. Dis. Sci. -2003. Vol. 48 (4). - P. 824-829.

219. Pawlowska J., Klewicka E., Czubkowski P. et al. Effect of Lactobacillus casei DN-114001 application on the activity of fecal enzymes in children after liver transplantation // Transplant. Proc. 2007. - Vol. 39 (10). - P. 3219-3221.

220. Pedone C.A., Arnaud C.C., Postaire E.R. et al. Multicentric study of the effect of milk fermented by Lactobacillus casei on the incidence of diarrhea // Int. J. Clin. Pract. 2000. - Vol. 54 (9). - P. 568-571.

221. Peran L., Camuesco D., Comalada M. et al. Lactobacillus fermentum, a probiotic capable to release glutathione, prevents colonic inflammation in the TNBS model of rat colitis // Int. J. Colorectal Dis. 2006. - Vol. 21 (8). -P.737-746.

222. Pereira D.I., Gibson G.R. Effects of consumption of probiotics and prebiotics on serum lipid levels in humans // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. -2002. Vol. 37 (4). - P. 259-81.

223. Pernoud S., Schneid-Citrain N., Agnetti V. et al. Use of lactic bacteria in fresh dairy products and probiotic effects. Paris: Lavoisier. - 2005. - 106 p.

224. Pham T.T., Shah N.P. Performance of starter in yogurt supplemented with soy protein isolate and biotransformation of isoflavones during storage period // J. Food Sei. 2009. - Vol. 74 (4). - P. M190-195.

225. Pool-Zobel B.L., Neudecker C., Domizlaff I. et al. Lactobacillus- and Bifidobacterium-mediated antigenotoxicity in the colon of rats. // Nutr. Cancer 1996. - Vol.26 (3). - P. 365-380.

226. Pujol P., Huguet J., Drobnic F. et al. The effect of fermented milk containing Lactobacillus casei on the immune response to exercise // Sports Med. Training and Rehab. 2000. - Vol. 9 (3). - P. 209-223.

227. Quan J., Piao L., Xu H. et al. Protective effect of iridoid glucosides from Boschniakia rossica on acute liver injury induced by carbon tetrachloride in rats // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2009. - Vol. 73 (4). - P. 849-854.

228. Rändle L.E., Goldring C.E.P., Benson C.A. et al. Investigation of the effect of a panel of model hepatotoxins on the Nrf2-Keap 1 defence response pathway in CD-I mice // Toxicology. 2008. - Vol. 243 (3). - P. 249-260.

229. Recknagel R.O. Carbon tetrachloride hepatotoxicity // Pharmacol. Rev. -1967.-Vol. 19 (2).-P. 145-208.

230. Reddy B.S. Prevention of colon cancer by pre- and probiotics: evidence from laboratory studies // Br. J. Nutr. 1998. - Vol. 80 (4). - P. S219-S223.

231. Reid G. Regulatory and clinical aspects of dairy probiotics. FAO/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and nutritional properties of powder milk with live lactic acid bacterial. Cordoba. Argentina, 2001.

232. Renugadevi J., Milton Prabu S. Quercetin protects against oxidative stress-related renal dysfunction by cadmium in rats // Exp. Toxicol. Pathol. 2009. -doi: 10.1016/j.etp.2009.06.006.

233. Reynolds R.D. Bioavailability of vitamin B-6 from plant foods // Am. J. Clin. Nutr. 1988. - Vol. 48 (4). - P. 863-867.

234. Rice-Evans C.A. Measurement of total antioxidant activity as a marker of antioxidant status in vivo: procedures and limitations. // Free Rad. Res. 2000. - Vol. 33 (Suppl.). - P.S59-S66.

235. Rice-Evans C.A., Miller N.J., Bolwell P.G. et al. The relative antioxidant activities of plant-derived polyphenolic flavonoids // Free Radic. Res. 1995. -Vol. 22 (4).-P. 375-83.

236. Rice-Evans C.A., Miller N.J., Paganga G. Structure-antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids // Free Radic. Biol. Med. 1996. -Vol. 20 (7).-P. 933-956.

237. Ridlon J.M., Kang D.J., Hylemon P.B. Bile salt biotransformations by human intestinal bacteria // J. Lipid Res. 2006. - Vol. 47 (2). - P. 241-259.

238. Rivera-Expinoza Y., Gallardo-Navarro Y. Non-dairy probiotic products // Food Microbiol. 2010. - Vol. 27 (1). - P. 1-11.

239. Rochat T., Bermudez-Humaran L., Cratadoux JJ. et al. Anti-inflammatory effects on Lactobacillus casei BL23 producing or not a manganese-dependent catalase on DSS-induced colitis in mice // Microb. Cell Fact. 2007. - Vol. 6. -P. 22-31.

240. Rochet V., Rigottier-Gois L., Sutren M. et al. Effects of orally administered Lactobacillus casei DN-114001 on the composition or activities of the dominant faecal microbiota in healthy humans // Br. J. Nutr. 2006. - Vol. 95 (2).-P. 421-429.

241. Rodriguez H., Curiel J.A., Landete J.M. et al. Food phenolics and lactic acid bacteria // Int. J. Food Microbiology. 2009. - Vol. 132 (2-3). - P. 79-90.

242. Ross D., Siegel D. NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1 (NQO 1, DT-diaphorase), functions and pharmacogenetics // Methods Enzym. 2004. - Vol. 382.-P. 115-144.

243. Rowland I.R., Rumney C.J., Coutts J.T., Lievense L.C. Effect of Bifidobacterium longum and inulin on gut bacterial metabolism and carcinogen-induced aberrant crypt foci in rats // Carcinogenesis. 1998. - Vol. 19 (2). - P. 281-285.

244. Saide J.A.O., Gilliland S.E. Antioxidative activity of Lactobacilli measured by oxygen radical absorbance capacity // J. Dairy Sei. 2005. - Vol. 88 (4). -P. 1352-1357.

245. Saito Y., Takano T., Rowland I.R. Effect of soybean oligosaccharides on the human gut microflora in in vitro culture // Microb. Ecol. Health Dis. 1992. -Vol. 5 (2).-P. 105-110.

246. Salminen S., Bouley C., Boutron-Ruault M.-C. et al. Functional food science and gastrointestinal physiology and function // Br. J. Nutr. 1998. - Vol. 80 (Suppl. 1).-P. S147-S171.

247. Scalabrini PI, Rossi M., Spettoli P. et al. Characterization of Bifidobacterium strains for use in soymilk fermentation // Int. J. Food Microbiol. 1998. - Vol. 39 (3).-P. 213-219.

248. Scalbert A., Morand C., Manach C. et al. Absorption and metabolism of polyphenols in the gut and impact on health // Biomed. Pharmacother. 2002. -Vol. 56 (6).-P. 276-282.

249. Scalbert A., Williamson G. Dietary intake and bioavailability of polyphenols // J. Nutr. 2000. - Vol. 130 (Suppl. 8). - P. 2073S-2085S.

250. Sedlak J., Lindsay R.H. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent. // Anal. Biochem. 1968. -Vol. 25 (1). -P.192-205.

251. Setchell K.D.R., Brown N.M., Lydeking-Olsen E. The clinical importance of the metabolite equol a clue to the effectiveness of soy and its isoflavones // Amer. Soc. Nutr. Sci. - 2002. - Vol. 132(12). - P. 3577-3584.

252. Shanahan F. The host-microbe interface within the gut // Best Pract. Res. Clin. Gastroenterol. 2002. - Vol. 16 (6). - P. 915-931.

253. Shanely R.A., Knab A.M., Nieman D.C. et al. Quercetin supplementation does not alter antioxidant status in humans // Free Radic. Res. 2010. - Vol. 44 (2).-P. 224-231.

254. Sies H. Oxidative stress from basic research to clinical application // Am. J. Med. - 1991.-Vol. 91 (3C).-P. S31-38.

255. Sohal R.S. Oxidative stress hypothesis of aging // Free radic.biol.med. -2002. Vol. 33 (5). - P. 573-574.

256. Songisepp E., Kals J., Kullisaar T. et al. Evaluation of the functional efficacy of an antioxidative probiotic in healthy volunteers // Nutrition J. 2005. -doi: 10.1186/1475-2891 -4-22.

257. Spanhaak S., Havenaar R., Schaafsma G. The effect of consumption of milk fermented by Lactobacillus casei strain Shirota on the intestinal microflora and immune parameters in humans // Eur. J. Clin. Nutr. 1998. - Vol. 52 (12). — P. 899-907.

258. Stecchini M.L., Del Torre M., Munari M. Determination of peroxy radical -scavenging of lactic acid bacteria // Int. J. Food Microbiol. 2001. - Vol. 64 (1-2).-P. 183-188.

259. Stein J., Schroder O., Bonk M. et al. Induction of glutathione-S-transferase-pi by short chain fatty acids in the intestinal cell line caco-2 // Eur. J. Clin. Invest. 1996. - Vol. 26 (1). - P. 84-87.

260. Tephly T.R., Burchell B. UDP-glucuronosultransferases: a family of detoxifying enzymes // Trends Pharmacol. Sci. 1990. - Vol. 11 (7). - P.276-279.

261. Terahara M., Kurama S., Takemoto N. Prevention by lactic acid bacteria of the oxidation of human LDL // Biosci. Biotehnol. Biochem. 2001. - Vol. 65 (8).-P. 1864-1868.

262. Thoreux K., Balas D., Bouley C. et al. Diet supplemented with yoghurt or milk fermented by Lactobacillus casei DN-114001 stimulates growth and brush-border enzyme activities in mouse small intestine // Digestion. 1998. -Vol. 59 (4).-P. 349-359.

263. Tien M.T., Girardin S.E., Regnault B. et al. Anti-inflammatory effect of Lactobacillus casei on Shigella-infected human intestinal epithelial cells. // J. Immunol. 2006. - Vol. 176 (2). - P. 1228-1237.

264. Trumbeckaite S., Bernatoniene J., Majiene D. et al. The effect of flavonoids on rat heart mitochondrial function // Biomed. Pharmacother. 2006. - Vol. 60 (5).-P. 245-248.

265. Tzortzis G., Goulas A.K., Baillon M.-L.A. et al. In vitro evaluation of the fermentation properties of galactooligosaccharides synthesized by a-galactosidase from Lactobacillus reuteri II Appl. Microbiol. Biotechnol. -2004.-Vol. 64.-P. 106-111.

266. Uchiyama M., Michara M. Determination of malonaldehyde precursor in tissues by thiobarbituric acid test // Biochemistry. 1978. - Vol. 86 (1). - P. 271-278

267. Valeur N., Engel P., Garbajal N. et al. Colonization and immunomodulation by Lactobacillus reuteri ATCC 55730 in the human gastrointestinal tract // Appl. Environm. Microbiol. 2004. - Vol. 70 (2). - P. 1176-1181.

268. Viana P.A., de Rezende S.T., Falkoski D.L. et al. Hydrolysis of oligosaccharides in soybean products by Debaryomyces hansenii UFV-1 a-galactosidase // Food Chem. 2007. - Vol. 103 (2). - P. 331-337.

269. Virtanen T., Pichlanto A., Akkanen S. et al. Development of antioxidant activity in milk whey during fermentation with lactic acid bacteria // J. Appl. Microbiol. 2007. - Vol. 102(1).-P. 106-115.

270. Wang Y.C., Yu R.C., Chou C.C. Antioxidant activities of soymilk fermented with lactic acid bacteria and bifidobacteria // Food Microbiol. 2006. - Vol. 23 (23).-P. 128-135.

271. Weber L.W., Boll M., Stampfl A. Hepatotoxicity and mechanism of action of haloalkanes: carbon tetrachloride as a toxicological model. // Crit. Rev. Toxicol.-2003.-Vol. 33 (2).-P. 105-136.

272. Weinstein P.D., Cebra J.J. The preference for switching to IgA expression by Peyer's patch germinal center B cells is likely due to the intrinsic influence oftheirmicroenvironment//J. Immunol. 1991.-Vol. 147 ().-P. 4126-4135.

273. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen. Enzymes-tools and targets. Basel: Karger. - 1988. - P. 161-167.

274. Wollowski I., Rechkemmer G., Pool-Zobel B.L. Protective role of probiotics and probiotics in colon cancer // Am. J. Clin. Nutr. 2001. - Vol. 73 (Suppl. 2). -P. S451-455.

275. Xu J., Gordon J.I. Inaugural Article: Honor thy symbionts // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.-2003.-Vol. 100 (18).-P. 10452-10459.

276. Yang Y.-S., Ahn T.-H., Lee J.C. et al. Protective effects of Pycnogenol on carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in Sprague-Dawley rats // Food Chem. Toxicol. 2008. - Vol. 46 (1). - P. 380-387.

277. Yokoyama A., Sakakibara H., Crozier A. et al. Quercetin metabolites and protection against peroxynitrite-induced oxidative hepatic injury in rats // Free Radie. Res. 2009. - Vol. 43 (10). - P. 913-921.

278. Yoon M. Y., Hwang H.-J. Reduction of soybean oligosaccharides and properties of a-D-galactosidase from Lactobacillus curvatus R08 and Leuconostoc mesenteriodes JK55 II Food Microbiology. 2008. - Vol. 25 (6). -P. 815-823.

279. Zanoni S., Pompei A., Cordisco L. et al. Growth kinetics on oligo- and polysaccharides and promising features of three antioxidative potential probiotic strains. // J. Appl. Microbiol. 2008. - Vol. 105 (5). - P. 1266-1276.

280. Ziaee A., Zamansoltani F., Nassiri-Asl M. et al. Effects of rutin on lipid profile in hypercholesterolaemic rats // Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 2009. -Vol. 104 (3).-P. 253-258.1. БЛАГОДАРНОСТИ

Информация о работе

Ускова, Мария Александровна
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.01.04

Диссертация

Изучение свойств пробиотических молочнокислых бактерий как биологически активных компонентов пищи - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы