Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Изучение сомаклональных линий сои органогенного происхождения, полученных методом культуры тканей

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Изучение сомаклональных линий сои органогенного происхождения, полученных методом культуры тканей"

|щ На пРавах рукописи

¿63483431

О-

Ефремова Ольга Сергеевна

ИЗУЧЕНИЕ СОМАКЛОНАЛЬНЫХ ЛИНИЙ СОИ ОРГАНОГЕННОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ПОЛУЧЕННЫХ МЕТОДОМ КУЛЬТУРЫ ТКАНЕЙ

06.01.05 - селекция и семеноводство

1 9 НОЯ 7359

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

п. Тимирязевский - 2009

Диссертационная работа выполнена в ГНУ Приморский научно- исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии

Научный руководитель - кандидат сельскохозяйственных наук,

старший научный сотрудник Фисенко Полина Петровна Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук,

Ведущая организация - ГНУ Всероссийский научно-исследовательский

институт сои Россельхозакадемии

Защита состоится 9 декабря 2009 года в 14.00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.074.01 при ГНУ Приморский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии по адресу: 692539, Приморский край, Уссурийский район, п. Тимирязевский, ул. Во-ложенина, 30; тел: (4234)392-719, факс: (4234)392-400.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГНУ Приморский НИИСХ Россельхозакадемии.

член-корреспондент Россельхозакадемии Анненков Борис Глебович; кандидат сельскохозяйственных наук Селихова Ольга Александровна

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат сельскохозяйственных наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В селекции сои применяются различные методы создания исходного материала, но основным из них является гибридизация. Новые возможности в селекции открылись с организацией биотехнологических методов исследований.

Многими исследователями доказано, что культивирование in vitro индуцирует генетическую изменчивость. Растения, регенерированные из тканевых культур, как правило, отличаются от исходных форм, т.е. несут сомаклональную изменчивость, накопленную в процессе культивирования in vitro по одному или нескольким хозяйственно - ценным признакам.

Сомаклональная изменчивость является разновидностью мутагенеза, причем эта разновидность имеет некоторые специфические и весьма ценные аспекты. Как и индуцированный мутагенез, она носит случайный, ненаправленный характер, т.е. реализуются как полезные, так и вредные мутации, однако in vitro выбраковка вредных и нежелательных форм происходит уже в процессе регенерации в пробирке и начального отбора среди регенерантов Ro в условиях культуральной комнаты. Поэтому испытываемая в поле популяция регенерантов (R,) более продвинута в селекционном плане, что значительно сокращает селекционный объем.

Установлено, что сомаклональные варианты сои отличаются от исходных форм по качественным и количественным признакам. Нередко они даже превосходят их по ряду хозяйственно-ценных признаков и могут быть родоначальниками нового сорта.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы является изучение сомаклональных линий сои, созданных in vitro методом культуры тканей для расширения генетического разнообразия. При этом были поставлены следующие задачи:

- изучить сомаклоны по признаку урожайность;

- оценить регенерантные линии по содержанию белка, масла и их качест-

венному составу в семенах;

- провести иммунологический анализ рекомбинантов к грибным патогенам;

- выявить признаки различия сомаклонов от исходных форм, определить величины коэффициента вариации и провести группировку по их величине показателя;

- выделить сомаклональные линии характеризующиеся комплексом хозяйственно-ценных признаков;

- провести селекционную оценку сомаклонов, полученных с использованием in vitro тканей мутантов;

- осуществить анализ регенерантных линий, созданных с использованием в качестве дополнительного мутагенного фактора в питательной среде ионов меди.

Научная новизна. Впервые нами проведена глубокая оценка сомакло-нальных линий сои органогенного происхождения. Доказана целесообразность использования данного метода в селекции сои.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Метод культуры тканей в сочетании с отбором позволяет создавать ценный селекционный материал с повышенной продуктивностью, улучшенным биохимическим составом и устойчивый к поражению грибными патогенами.

2. Признаки, характеризующие растения сои классифицированы на две группы: стабильные и варьирующие. Величина изменчивости признака зависит от генотипа исходных форм и характера признака.

3. Изучаемые сомаклоны, созданные с использованием метода культуры тканей превосходят исходные формы по ряду хозяйственно-ценных признаков.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. В

результате проведенных исследований были выделены регенератные линии сои, полученные методом культуры тканей путем органогенеза, которые досто-

верно превысили стандарты и исходные формы по ряду хозяйственно-ценных признаков. Целесообразным считаем их использование в программе скрещивания сои. Пять сомаклональных линий, выделившихся по комплексу хозяйственно-ценных признаков, переданы для дальнейшего изучения в конкурсное сортоиспытание.

Алробация работы. Материалы диссертации были представлены на конференциях молодых ученых Приморского НИИСХ (п. Тимирязевский, 20062009 гг.), на общеуниверситетской тематической научной конференции ДАЛЬ ГАУ (г. Благовещенск, 2006 г.), на П-й Международной научно - технической конференции молодых ученых в ТГЭУ (г. Владивосток, 2007 г.), на VIII-й Меж-вузовой научно-практической конференции в ПГСХА (г. Уссурийск, 2008 г.), на Межведомственной научно - практической конференции во ВНИИ сои (г. Благовещенск, 2009г.).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 6 научных статьях, в том числе 1 в рецеюируемом издании.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста, содержит 21 таблицу, 3 рисунка. Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследований, 5 плав с экспериментальными данными, выводов, рекомендаций для селекционной практики, списка литературы, приложения. Список использованной литературы включает 192 источника, в том числе 50 на иностранных языках.

УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальная работа выполнена в период с 2004 по 2008 годы в ГНУ Приморский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Рос-сельхозакадемии на участках селекционного севооборота.

В годы проведения исследований метеоусловия имели определенные отклонения от оптимальных, что способствовало более полной оценки изучаемого материала. Почвы участков лугово-бурые оподзоленные с содержанием гумуса 3,8-4,0%, общего азота - 031-0,35%, Р205 - 5,2-5,8 мг на ЮОг почвы, К20 -

5

10,4-12,3 мг на 100 г почвы, рН солевой вытяжки - 5,4-5,8.

Предметом, нашего изучения стали сомаклональные линии, полученные ранее путем органогенеза из ткани семядольного узла 4-х районированных в Приморье сортов сои: Приморская 529, Ходсон, Венера, Приморская 301.

В работе также представлены результаты изучения регенерантов, наработанных в результате регенерации ткани мутантов, созданных путем лазерного и гамма - облучения, а также группы сомаклонов, выращенных в процессе регенерации с включением в питательную среду ионов меди.

Выращивание сомаклональных линий в селекционных питомниках проводили по методике Государственного сортоиспытания и в соответствии с принятой для Приморского края агротехникой.

В период вегетации фенологические наблюдения, учеты и анализы проводились по методике государственного сортоиспытания сельскохозяйственных культур.

Оценку продуктивности и учеты по основным хозяйственно-ценным признакам вели согласно методическим указаниям ВИР. Урожайные данные и другие показатели обрабатывали по методике Б.А. Доспехова.

Степень поражения (%) грибными патогенами при искусственном заражении листовой поверхности на жестком инфекционном фоне проведена совместно с сотрудниками лаборатории селекции сои ПримНИИСХ по методике ВИР и согласно Международному классификатору.

Биохимический состав семян исходных форм и регенерантных линий проведен во ВНИИ сои на ИК-сканере №г-42 по следующим показателям: 15 аминокислот, 5 жирных кислот, минеральные элементы, белок, масло. Оценку сомаклонов по химическому составу осуществляли на основании классификатора.

На основе совместных исследований с Биолош-почвенным институтом ДВО РАН проведен генетический анализ некоторых сомаклональных линий сои. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта ДВО РАН №05-11-СХ-06-002С "Методы биотехнологии в селекции сои и риса".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение сомаклональных линий сои, созданных методом культуры тканей путем органогенеза

Создать сорт, характеризующийся одновременно и высоким урожаем, хорошими показателями качества семян, устойчивый к патогенам - задача достаточно сложная. Использование метода культуры ткани - регенерация растений путем органогенеза, где были взяты первичные экспланты районированных сортов, стало попыткой в решении этой задачи.

В экспериментах по изучению сомаклонов органогенного происхождения по урожайности во всех популяциях выделены регенерантные линии достоверно превышающие материнские формы (таблица 1).

Таблица 1 - Урожайность четырех популяций сомаклональных линий сои, полученных путем регенерации через органогенез (2004,2005 гг.), кг/м2

Исходная форма (и.ф.), популяция, выделившаяся линия X 1ш1 У,% НСР05

Ходсон (и.ф.) 0,160 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Ходсон) 0,117 0,081-0,184 4,0 0,041

Выделившаяся регенераятная линия Ям?-0,184 11249 - 0,183 - - -

Приморская 529 (и.ф.) 0,156 - 1,6 -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 529) 0,139 0,002-0,179 - 0,021

Выделившаяся регенератная линия 1^426 - 0,179 - - -

Венера (и.ф.) 0,115 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Венера) 0,134 0,110-0,160 1,8 0,012

Выделившаяся регенератная линия Яз5б-0,160 1*399 - 0,142 - - -

Приморская 301 (и.ф.) 0,151 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 301) 0,130 0,097-0,166 1,4 0,026

Выделившаяся регенератная линия Я362-0,166 - - -

На основе этого нами сделан вывод о положительном использовании ме-

тода культуры ткани с реальным получением сомаклонов, превосходящих исходную форму по урожайности. Отмечено и влияние генотипа на результат. Наиболее эффективными в этом плане оказались сорта Ходсон и Венера.

Важным показателем сорта является соевый белок, который вполне может восполнить потребность человека в белковых веществах. Сорта, используемые нами в опыте, по содержанию белка в семенах относятся к классу средних (таблица 2).

Таблица 2 - Содержание белка в семенах четырех популяций сомаклональных линий сои органогенного происхождения, % (2004,2005 гг.)

Исходная форма (и.ф.), популяция, выделившаяся линия X Нш У,% НСР05

Ходсои (и.ф.) 40,2 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Ходсон) 35,9 37,6-40,28 2,79 1,08

Выделившаяся регенератная линия - - - -

Приморская 529 (и.ф.) 39,8 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 529) 40,4 39,56-40,94 1,23 0,14

Выделившаяся регенератная линия 1*354-40,94 - - -

Вепера (и.ф.) 39,45 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Венера) 39,29 38,87-39,49 0,72 0,25

Выделившаяся регенератная линия - - - -

Приморская 301 (и.ф.) 39,99 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 301) 39,93 39,43-40,34 1,15 0,36

Выделившаяся регеперантная линия Язб2-40,34 - ■ -

В популяциях сомаклональных линий сортов Приморская 529 и Приморская 301, выделено по одной линии, достоверно превышающих исходную форму по содержанию белка, это Яз54 (и.ф. Приморская 529) и К362 (и.ф. Приморская 301). Сомаклонов, превосходящих материнский сорт в популяции и.ф. Ход-сон и и.ф. Венера по данному признаку не отмечено (см. табл. 2).

Ценность белка зависит от состава аминокислот, поэтому анализ наработанных сомаклонов проводили и по их наличию.

Содержание кислот в сомаклонах популяции соответствовало количеству их в исходной форме, отличия если и были, то на уровне недостоверных, исключение составляет гистидин. Наличие его в семенах исходных сортов практически равное (9,0-9,3% от общего содержания аминокислот в семенах) (таблица 3).

Таблица 3 - Характеристика популяций сомаклональных линий сои органогенного происхождения по содержанию гистидина, % от общего содержания аминокислот в семенах (2004,2005 гг.)

Исходная форма (и.ф.), популяция, выделившаяся регенератная линия X lim V,% НСР05

Ходсон (и.ф.) 9,0 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Ходсон) 8,3 5,5-9,9 15,6 1,32

Выделившаяся регенератная линия - - - -

Приморская 529 (и.ф.) 9,0 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 529) 8,52 7,6-10,4 10,54 1,12

Выделившаяся регенератная линия R349- Ю,4 - - -

Венера (и.ф.) 9,3 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Венера) 8,75 8,3-9,3 4,74 0,39

Выделившаяся регенератная линия - - - -

Приморская 301 (и.ф.) 9,3 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 301) 9,17 8,9-9,5 2,72 0,24

Выделившаяся регенератная линия - - - -

Во всех популяциях сомаклонов имеются формы, у которых средняя величина признака ниже, чем у исходного сорта. Однако в популяции сорта Приморская 529 выявлена линия, достоверно превышающая исходную форму по содержанию гистидина R349- 10,4% от общего содержания аминокислот (и.ф. Приморская 529 - 9,0%).

Мы пришли к заключению, что наиболее отзывчивым на условия культивирования in vitro в плане увеличения гистидина в семенах оказался генотип самого стародавнего сорта сои, районированного в Приморье Приморская 529.

Среди бобовых культур соя занимает первое место по содержанию в зерне масла.

В популяциях исходных форм сомаклональные линии преимущественно характеризуются на уровне исходной или ниже. Самым низким содержанием масла характеризовался сорт Приморская 529 — 18,9%, но именно в этой популяции выявлено две регенерантные линии достоверно превосходящие материнский сорт: R354 и R349 (таблица 4).

Таблица 4 - Содержание масла в семенах четырех популяций сомаклональных линий сои органогенного происхождения, % (2004,2005 гг.)

Исходная форма (и.ф.), популяция, выделившаяся лиши X 1Ш1 НСР05

Ходсон (и.ф.) 20,38 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Ходсон) 19,37 15,49-20,63 7,64 2,01

Выделившаяся регенератная линия - - - -

Приморская 529 (и.ф.) 18,9 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 529) 19,2 18,32-20,11 8,8 0,72

Выделившаяся регенератная линия Я354-20,11 Яз49- 19,8 - - -

Венера (и.ф.) 19,43 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Венера) 19,23 18,98-19,73 1,78 0,3

Выделившаяся регенератная линия - - - -

Приморская 301 (и.ф.) 20,15 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 301) 20,04 19,45-20,44 2,62 0,46

Выделившаяся регенератная линия - - - -

Отмечена некоторая закономерность, чем выше содержание масла в семенах исходной формы, тем меньше вероятность выделения в данной популяции линий, достоверно превосходящих исходный сорт.

В свою очередь качество масла в семенах определяется наличием в нем жирных ненасыщенных кислот: пальмитиновая, стеориновая, линолевая, лино-леновая и олеиновая. В нашем случае варьирование признака отмечалось лишь по трем кислотам, содержание которых мы в последствии и анализировали.

Сомаклональные линии, достоверно превышающие содержанием линоле-вой кислоты исходную форму, обнаружены в популяции сорта Приморская 529 -Язи и Язи- В нашем эксперименте 52,5% линолевой кислоты в семенах сои -это максимальная величина (таблица 5).

Линоленовая кислота отрицательно влияет на качество масла, поэтому исследователи заинтересованы в разработке методов снижающих ее содержание. Среди изученных популяций в плане снижения содержания линоленовой кислоты преимущество имеет сорт Приморская 529. Регенератные линии Я354 и К394 характеризуются достоверно более низкими величинами в сравнении с исходным сортом. По одной линии выявлено в популяциях сорта Венера - Я219 и

Приморской 301 - К362- В популяции Ходсона линий с более низким, чем исходная форма содержанием линоленовой кислоты не обнаружено.

Таблица 5 - Сомаклональные линии сои органогенного происхождения популяций, выделившиеся по содержанию жирных ненасыщенных кислот, % от общего содержания масла в семенах (2004,2005 гг.)

Исходная форма (и.ф.), популяция, выделившаяся регенератная линия Линолевая кислота Пинолсновая кислота Олеиновая кислота

X 1 о4 > О о, и к X | > £ о к 1 £ > о а, и К

Ходсон (и.ф.) 51,0 - - - 92 - - - 93 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Ходсон) 50,9 48,652,1 1,8 132 10,5 9,114,3 133 2,1 13,7 11Д-20,0 173 4,28

Выделившаяся регенератная линия о - ч-о « ч5 О! —1 1 1 1 и £ г - - -

Приморская 529 (и.ф.) 51,6 - - - 11,1 - - - 17,1 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 529) 51,8 51,152,5 0,73 0,48 11,5 9,612,7 8,41 1Л4 17,5 15,021,1 12,0 2,44

Выделившаяся регенератная линия (Л гп <-» 1 1 Я 2 (2 £ - - - ЧО 00 сл оГ 1 1 Я 5 <2 С? - - - 1*46121,1 - - -

Венера (и.ф.) 51,1 - - - 11,4 - - ■ 14,0 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Венера) 51,5 51,451,8 0,32 0,16 11,07 10311,5 3,7 0,48 15,8 15,016,7 4,7 0,65

Выделившаяся регенератная линия К219- 51,8 - - - йгм-10,3 - - - с-„ ч- 43 чб 7 7 « а с? (2 - - -

Приморская 301 (и.ф.) 51,6 - - - 11,1 - - - 13,6 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 301) 51,6 51,551,7 0,22 0,08 10,6 9,711,1 6Д 0,56 13,8 13,114,8 5,2 0,68

Выделившаяся регенератная линия - - - - Язб2-9,7 - - - Язб2-14,8 - - -

По содержанию олеиновой кислоты сомаклональные линии, достоверно превышающие исходные формы, выявлены во всех четырех популяциях, но более всего их в популяции сорта Ходсон: Кз52 , Язд?, Язо,- Регенератная линия

11

К-352 превышает исходную форму по данному признаку на 10,7%.

Линия с высоким содержанием олеиновой кислоты обнаружена и в популяции сорта Приморская 529, Яш, но она лишь на 4% превышает материнский сорт (см. таблица 5).

Оценка материала по биохимическим показателям позволила отобрать сомаклональные линии, имеющие достоверное преимущество над исходными формами.

Урожайность сои в значительной степени зависит от устойчивости сортов к болезням. В Приморском крае создаются наиболее благоприятные природно-климатические условия для возникновения эпифитотий, особенно вызываемых фитопатогенными грибами.

К числу наиболее распространенных и вредоносных листовых болезней в крае относится септориоз, церкоспороз и пероноспороз. Наиболее эффективным и экологически безопасным средством борьбы с этими заболеваниями является возделывание невосприимчивых сортов.

Степень поражения изучаемых исходных форм септориозом практически равная (70,8-77,4), однако в популяции Приморской 529 отобраны две линии 1^461, 1*451, которые поражаются септориозом меньше исходной от 27,5% до 30,6%. В других популяциях выявлены тоже линии, поражаемые септориозом, достоверно ниже, чем исходная форма, но они практически относятся к классу восприимчивых как и материнские формы. Исключение составила популяция Приморской 301, в которой выделена линия Н362 классифицированная как сред-неустойчивая (таблица 6).

Церкоспорозом исходные формы, используемые в эксперименте, также как и септориозом, поражаются в различной степени. В популяции сомаклонов и.ф.Ходсон определены две линии в метшей степени поражаемые патогеном. По одной менее поражаемой церкоспорозом линии отобрано в других популяциях: 1*351 (и.ф. Приморская 529), Я^о (и.ф. Венера), Я362 (и.ф. Приморская 301).

Таблица 6 - Регенерантные линии сои органогенного происхождения четырех популяций, выделившиеся по степени поражения патогенными грибами, % (2004, 2005 гг.)

Исходная форма (и.ф.), популяция, выделившаяся регенератная линия Септориоз Церкоспороз Пероноспороз

X а £ о а, О я X 1 о4 «Л £ ы X 1 о4 > I

Ходсон (и.ф.) 77,5 - - - 69,4 - - - 90,7 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Ходсон) 67,85 57,5783 10,4 8,4 52,4 38,465,7 15,7 12,4 823 66,292,7 83 6,4

Выделившаяся регенератная линия 10 чэ оч 1Л 1 1 Я « - - - оо оо го" -з-1 1 я & м л ей ей - - - <4 чо чо г-1 1 & Л Л О л « - - -

Приморская 529 (и.ф.) 74,4 - - - 64,4 - - - 94,2 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 529) 57,4 43,866,9 12,8 123 60,8 46378,8 14,2 13,0 66,6 45,187,8 23,4 19,7

ТЭттттлтттгг>ттт>а<т/-»«т пвгапа, раптная линия Оч СТ> -о" ^ 1 1 е? £ - - - 1*351 463 - - - 0\ СО чо чо 1 1 О» — Я й ей 04 - - -

Венера (и.ф.) 70,8 - - - 613 - - - 72,3 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Венера) 77,4 69,485,75 8,95 3,% 55,1 39,570,0 19,8 12,2 62,7 44,473,2 18,2 11,5

Выделившаяся регенератная линия - - - - 1*229 39,5 - - - 1*399 44,4 - - -

Приморская 301 (и.ф.) 71,9 - - - 61,1 - - - 83,8 - - -

Популяция сомаклонов (и.ф. Приморская 301) 58,98 50,063,75 10,72 8,7 543 41,961,9 16,4 8,0 56,9 42370,7 20,0 16,5

Выделившаяся регенератная линия Язб2 50,0 - - - К-362 41,9 - - - гч г-*" т* 1Л 1 1 8 3 гЗ «у 34 Р4 - - -

По степени поражения пероноспорозом исходные формы существенно

различались. Четыре сомаклональные линии популяции Приморская 529: И^ь Из«, К351, 11426 поражались меньше исходной в пределах на 33,4-49,1%. В популяции Приморской 301 Лгов поражается пероноспорозом меньше исходной на 41,3%, а в популяции сомахлонов сорта Венера лишь на 27,9% (линия Язз?).

Среди изучаемых нами сомаклоналышх линий органогенного происхождения четырех популяций исходных форм были выделены регенерантные ли-

13

нии, имеющие преимущество перед исходной формой по комплексу хозяйственно - ценных признаков.

В популяции сомаклонов исходной формы Ходсон выявлено четыре сома-клональные линии К347, К249, Яз5з» превышающие исходную по 2-4 признакам. Среди них наибольшим преимуществом отличается линия Кз47| которая кроме урожайности превосходит материнскую форму по содержанию олеиновой кислоты и степени поражения листовыми патогенами (таблица 7).

Таблица 7 - Характеристика сомаклональных линий сои органогенного происхождения, отобранных по комплексу признаков (2004,2005 гг).

Г) а в и Содержание кислоты, % от об- а « - м Э ез Степень поражения патогенами

Исходная форма (и.ф.), выделившая- й из в Е а> О чО о4 щего количества масла в семенах <и И Я ™ р Е * | листовой поверхности, %

ся сомаклональная линия (К.) 1 к о § 2 к * о. и 5 с и Ц 0 1 3 1 а о а И Й я 8 о " ё £ о Е и И 1 н а *ю г О, О Я м О к о. о о с о п о о ° 8 о &

о и а к ц е: и о О и 2? с и о и я о, Н и к в

Ходсон (и.ф.) 0,160 20,38 51,0 9,2 93 9,0 77,5 69,4 90,7

Ямт 0,184* 16,1* 43,8* 66,2*

1*249 .0,183* 59,6*

«352 20,0* 57,5* 46,5*

Я353 38,4* 76,7*

Приморская 529 (и.ф.) 0,156 18,9 51,6 11,1 17,1 39,8 9,0 74,4 64,4 94,2

1*426 0,179* 59,9* 60,8*

21,1* 43,8* 45,1*

1*349 19,8* 10,4* 46,9*

Яиз 52,3* 56,9*

Язя 463* 463*

1*354 20,11* 52,5* 9,6* 40,94*

Венера (и.ф.) 0,124 51,1 11,4 14,0 70,0 723

Яз99 0,142* 16,4* 44,4*

Приморская 301 (и.ф.) 0,152 11,1 13,6 39,66 71,9 61,1 73,9

1*362 0,166 9,7* 14,8* 40,34* 50,0* 41,9* 573*

Примечание: * - достоверно превосходит исходную форму па 5% уровне

В популяции сомаклональных линий сорта Приморская 529 выявлено шесть линий, достоверно превосходящих исходную форму. Одна из них (R^e) достоверно превышает по урожайности и в меньшей степени поражается сеп-ториозом и пероноспорозом.

В популяции сомаклонов сорта Венера лучшей определена регенерантная линия R399. Первая из них выделяется достоверно по урожайности, содержанию олеиновой кислоты и степени поражения пероноспорозом.

В популяции регенератных линий сорта Приморская 301 выделена одна сомаклональная линия R362 , достоверно превосходящая исходную по трем признакам, характеризующим качество семян и трем признакам степени поражения патогенными грибами, но по урожайности, находящаяся на уровне исходной формы.

По результатам генетического анализа в спектрах сомаклональных линий обнаружены амшшконы, отсутствующие у исходных форм. В группе Приморская 301-68 новых ампликонов, в группе Приморская 529 - 81 новый ампликон, в группе Венера - 55 ампликонов и в группе Ходсон - 67 ампликонов.

Появление новых ампликонов у сомаклонов является отражением происходящих генетических изменений и связано с тем, что в геноме есть специфические районы, предрасположенные к мутациям, которые возникают в ответ на условия культивирования и приводят к формированию различных клонов в культуре in vitro

По результатам исследований выделены пять сомаклональных линий органогенного происхождения: R426 (и.ф. Приморская 529), R356 (и.ф. Венера), R362 (и.ф. Приморская 301), R347 (и.ф. Ходсон), R422 (и.ф. Ree), которые были переданы в отдел селекции сои для изучения в конкурсном сортоиспытании, где подтвердила свое преимущество по урожайности над стандартом (Приморская 69) сомаклональная линия R^ (и.ф. Приморская 529). Выделившаяся по урожайности линия R426 превзошла стандарт как по сбору белка (на 141,3 кг/га) и масла (на 34,4 кг/га), так и в меньшей степени поразилась патогенными грибами (септориозом - на 11,7% и пероноспорозом - на 28,2 %) (таблица 8).

Таблица 8 - Результаты изучения сомаклональных линий в конкурсном сортоиспытании (2006-2008 гг.)

Сорт, форма Происхождение Урожайность, д/га Период вегетации Сбор, кг\га Степень поражения, %

белка масла септо-риоз цер-кос-пороз перо-нос-пороз

Ходсон стандарт 25,6 111 1029,1 519,7 66,1 67,3 73,9

Приморская 69 стандарт 22,9 119 916,0 480,9 50,8 54,8 66,1

Приморская 1354 R347 (и.ф. Ходсоп) 27,5 110 1056,0 475,8 51,7 45,2 60,7

Приморская 1355 R422 (и.ф. Ходсон) 25,2 106 1008,0 509,0 57,1 41,3 60,0

Приморская 1356 R426 (и.ф. Примор-ская529) 26,7 119 1057,3 515,3 39,1 52,3 37,9

Приморская 1357 Яз5б(и.ф. Венера) 23,9 111 929,7 456,5 52,5 44,7 59,8

Приморская 1358 R362 (и.ф. Примор-ская81) 25,1 120 1011,5 489,5 46,5 44,7 67,5

НСРоз 2,1

Полученные на питательных средах в условиях in vitro растения - регенераты сои могут являются исходным материалом для традиционной селекции данной культуры, поскольку они представляют собой сомаклональные варианты. В результате изучения признаки: содержание белка, масла, линолевой кислоты в семенах характеризуются незначительной изменчивостью. Другие -урожайность, содержание олеиновой кислоты, гистидина, степень поражения септориозом, пероноспорозом, церкоспорозом варьируют от средних значений до значительных в зависимости от генотипа (рис.1). Однако величины вариабельности признаков недостаточно высоки, поэтому с целью расширить генетическую изменчивость в последние годы нами начаты изучения сомаклонов, полученных в результате использования ткани мутантов, созданных путем лазерного и гамма - облучения, а также группы сомаклонов, выращенных в процессе регенерации с включением в питательную среду ионов меди. Уже получены первые результаты.

□ Ходсон ПЗ Приморская 529 В Венера В Приморская 301

1 - урожайность, 2 - содержание белка, 3 - содержание гистидина, 4 - содержание масла, 5 - содержание линолевой кислоты, 6 - содержание линоленовой кислоты, 7 - содержание олеиновой кислоты, 8 - степень поражения септориозом, 9 - степень поражения церкоспорозом, 10 - степень поражения пероноспорозом

Рисунок 1 - Изменчивость признаков (У,%) четырех популяций сои органогенного происхождения

Использование мутантов в качестве исходных форм для регенерации путем органогенеза дало возможность получить линии, превышающие исходные формы по ряду признаков (таблица 9).

Таблица 9 - Выделившиеся по некоторым признакам регенерантные линий сои органогенного происхождения, созданные с использованием в качестве исходных эксплантов тканей мутантов, 2008 г.

Исходная форма (и.ф.), выделившаяся сома-клональная линия (R) Продуктивность, г Содержание в семенах масла, % Содержание кислоты, % ох общего количества масла в семенах Содержание белка в семенах, % Содержание гисти-1 дина, % от общего количества аминокислот Степень поражения патогенами листовой поверхности, %

яиноле-вая линоле-новая олеино- I вая септори- 03 церкос-пороз пероноспо-роз

Ходсон - L (и.ф.) 7,5 21,2 51,9 4,8 4,5 37,4 10,7 50,0 57,5 70,0

R«i6 6,3 21,6 52,3 5,0 4,8 39,3* 11,9* 41,3 29,8* 56,3

R<23 6,1 20,0 52,4 4,4 8,6 39,2* 10,3 35,0* 24,8* 57,5

R«46 6,3 20,4 52,2 5,3 7,7* 38,4* 10,9 24,3* 26,8* 63,8

Ходсон - у (и.ф.) 7,7 20,5 52,2 5,5 9,0 37,7 10,3 41,3 52,5 58,8

R«15 6,6 20,0 52,7 3,4* 10,7* 38,1* 9,6 40,0 47,5 58,8

Примечание: * - достоверно превосходит исходную ( юрму на 5% уровне

Впервые в нашей практике с использованием в качестве первичных эксплантов тканей мутантов получены линии устойчивые к септориозу: R^e (и.ф. Ходсон - L) и церкоспорозу: R«3 (и.ф. Ходсон - L).

Обнаруженные в выделившихся сомаклональных линиях отличия от исходных форм подтверждены величинами генетических дистанций, полученных на основании метода межмикросателлитных последовательностей (таблица 10).

Использование ионов Си2+ как дополнительного мутагенного фактора in vitro способствовало расширению генетической изменчивости. Выделены как высокопродуктивные две регенератные линии (R986 и RiMi), вдвое превышающие исходную форму (таблица 11). Первая из них помимо продуктивности

достоверно превзошла стандарт по содержанию гистидина.

Таблица 10 - Значения генетических дистанций у сомаклонов 1*о и исходных форм

Сомаклоны Генетические дистанции (1)14)

Ходсон Ходсон-Ь Ходсон- у

1*0-2-617 (и.ф. Ходсон) 0.1993 0.5645 0.5904

1*0-2-616 (и.ф. Ходсон-Ь) 0.2643 0.5340 0.5596

1*0-2-623 (и.ф. Ходсон-Ь) 0.2249 0.5245 0.5571

1*0-2-615 (и.ф.Ходсон- у) 0.2566 0.5596 0.5646

Таблица 11- Характеристика высокопродуктивных сомаклональныж линии сои, полученных с использованием в питательной среде дополнительного мутагенного фактора (ионы Си2*), 2008 г.

Исходная форма (и.ф.), выделившаяся сомахло-нальная линия (И) Про-дуктив тив-ность, г Содержание в семенах масла, % Содержание кислоты, % от общего количества масла в семенах Содержание бежав семенах, % Содержание гистидина, % от общего количества аминокислот

линоле-вая линоле-новая олеиновая

Ходсон (и.ф.) 4,5 19,7 53,2 6,8 14,6 39,7 9,0

1*986 9,4* 20,3 52,8 6,4 9,8 39,1 10,3*

КЮ46 10,0* 19,2 52,5 9,3 15,1 40,2 8,4

Примечание: * - достоверно превосходит исходную форму на 5% уровне

выводы

1. Среди изучаемых сомаклонов, созданных с использованием тканей районированных в Приморье сортов, отобраны формы характеризующиеся в сравнение с исходными повышенной продуктивностью, улучшенным биохимическим составом, устойчивостью к патогенам.

2. В результате изучения признаки: содержание белка, масла, линолевой кислоты в семенах характеризуются незначительной изменчивостью. Другие -

урожайность, содержание олеиновой кислоты, гистидина, степень поражения септориозом, пероноспорозом, церкоспорозом варьируют от средних значений до значительных в зависимости от генотипа.

3. Жирнокислотный состав семян не зависит от их масличности, а содержание гистидина от белковости.

4. Чем выше показатель признака у исходной формы, тем меньше вероятность выделить в данной популяции линии достоверно превышающие ее.

5. Условия регенерации способствуют чаще всего улучшению признаков, характеризующих: содержание олеиновой кислоты, степень поражения септориозом, церкоспорозом, пероноспорозом.

6. В изучаемых популяциях выявлено пять сомаклональных линий органогенного происхождения (R426. R356. R347. R422, R362). превосходящих исходные формы по нескольким признакам. Для дальнейшего изучения они были переданы в конкурсном сортоиспытании, где сомаклон R426 (Приморская 1356) достоверно превысил стандартный сорт по урожайности, содержанию белка, масла, в меньшей степени поражался септориозом и пероноспорозом.

7. Среди сомаклональных линий , наработанных с использованием тканей мутантов в качестве исходных форм для регенерации путем органогенеза, выделены рекомбинанты, превышающие исходные формы: R$i6 (и.ф. Ходсон - L) по периоду вегетации, содержанию белка и гистидина; (и.ф. Ходсон - у) -содержанию белка, олеиновой и линоленовой кислот; R^3 (И-Ф- Ходсон - L)- содержанию белка и олеиновой кислоты.

8. Впервые в нашей практике выделены регенератные линии, полученные из тканей мутантов, устойчивые к септориозу - R^ (и.ф. Ходсон - L) и церкоспорозу - R$23 (и.ф. Ходсон - L).

9. В популяции сомаклонов, полученных с использованием ионов Си 2+ как дополнительного мутагенного фактора in vitro, выявлены две высокопродуктивные сомаклональные линии (R1(M6 и R986).

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ

1. Использовать метод культуры ткани как дополнительный в селекции сои с целью создания исходного материала.

2. Выделенные сомаклоны предлагается включить в программу скрещивания как источники хозяйственно - ценных признаков.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Ефремова, О.С. Методы культуры ткани в селекции сои / О.С. Ефремова, П.П. Фисенко // Молодые ученые - агропромышленному производству Дальнего Востока : сб. науч. тр. молодых ученых / Россельхозакадемия, ДВ НМЦ, Примор. НИИСХ. - Владивосток: Дальнаука, 2006. - С. 11-17.

2 Результаты изучения сомаклональных линий сои / П.П. Фисенко, Н.И. Хохлова, Л.А. Дега, О.С. Ефремова, ГЛ. Ефимова // Научные основы повышения эффективности сельскохозяйственного производства на Дальнем Востоке России : материалы IV Казьминских чтений, 29 ноября 2005 г. / Россельхозакадемия [и др.]. - Хабаровск, 2006. - С. 68-74.

3 Ефремова, О.С. Селекция сои на улучшение признаков качества зерна с использованием метода культуры ткани // Актуальные проблемы технологии живых систем : сб. материалов II Междунар. науч.-технич. конф. молодых ученых, 26-29 сент. 2007 г. / Мин-во образования и науки РФ [и др.]. - Владивосток : Изд-во ТГЭУ, 2007. - С. 32-33.

4 Сравнительная оценка вариабельности признаков сомаклональных линий сои, полученных двумя путями регенерации (эмбриогенез, органогенез) / П.П. Фисенко, Н.И. Хохлова, Л.А. Дега, О.С. Ефремова // Пути повышения ресурсного потенциала сельскохозяйственного производства Дальнего Востока : к 100-летию аграрной науки на Дальнем Востоке : сб. науч. тр. / РАСХН, ДВ НМЦ, Примор. НИИСХ. - Владивосток: Дальнаука, 2007. - С. 83-91.

21

5 Ефремова, О.С. Результаты изучения сомаклональных линий сои органогенного происхождения // Пути повышения ресурсного потенциала сельскохозяйственного производства Дальнего Востока : к 100-летию аграрной науки на Дальнем Востоке : сб. науч. тр. / РАСХН, ДВ НМЦ, Примор. НИИСХ. - Владивосток : Дальнаука, 2007. - С. 74-82.

6 Фисенко, П.П. Результаты и перспективы использования метода культуры ткани в селекции сои / П.П. Фисенко, Н.И. Хохлова, О.С. Ефремова \\ Масличные культуры : науч.- техн. бюл. ВНИИМК. - Краснодар, 2008. - Вып. 2 (139).-С. 43-45.

На правах рукописи

Ефремова Ольга Сергеевна

ИЗУЧЕНИЕ СОМАКЛОНАЛЬНЫХ ЛИНИЙ СОИ ОРГАНОГЕННОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ПОЛУЧЕННЫХ МЕТОДОМ КУЛЬТУРЫ ТКАНЕЙ

06.01.05 — селекция и семеноводство

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Лицензия № 020572 от 16.09.1997 г.

Подписано в печать 22.10.2009 г. Формат 60 х 84 1/16. Бумага офсетная. Печать ЩЗСЮЯАРН ТЯ 1510. Уч.- изд. л. 1,3. _Тираж 100 экз. Заказ

Отпечатано участком оперативной полиграфии ФГОУ ВПО ПГСХА 692508. г. Уссурийск, ул. Раздольная, 8*.

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Ефремова, Ольга Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Народнохозяйственное значение сои.

1.2 Методы селекции сои.

1.3 Метод культуры тканей.

1.4 Сомаклональная изменчивость и причины ее возникновения.

2. УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1 Агроклиматическая характеристика Приморского края.

2.2 Погодные условия в годы выполнения работы.

2.3 Материал и методика проведения исследований.

3. Изучение сомаклональных линий сои органогенного происхождения, созданных методом культуры тканей.

3.1 Характеристика сомаклонов сои по признаку урожайности.

3.2 Оценка регенератных линий по содержанию белка, масла и их качественному составу.

3.3 Иммунологический анализ рекомбинантов к грибным патогенам.

3.4 Сомаклональные линии характеризующиеся комплексом хозяйственно-ценных признаков.

4. Селекционная оценка сомаклонов, полученных с использованием in vitro тканей мутантов.

5. Анализ регенерантных линий, созданных с использованием в качестве дополнительного мутагенного фактора в питательной среде ионов меди.

ВЫВОДЫ.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Ефремова, Ольга Сергеевна

выводы

1 Среди изучаемых сомаклоиов, созданных с использованием тканей районированных в Приморье сортов, отобраны формы характеризующиеся в сравнение с исходными повышенной продуктивностью, улучшенным биохимическим составом, устойчивостью к патогенам.

2 В результате изучения установлено, что признаки: содержание белка, масла, линолевой кислоты в семенах характеризуются незначительной изменчивостью. Другие - урожайность, содержание олеиновой кислоты, гистидина, степень поражения септориозом, пероноспорозом, церкоспорозом варьируют от средних значений до значительных в зависимости от генотипа.

3 Жирнокислотный состав семян не зависит от их масличности, а содержание гистидина от белковости.

4 Чем выше показатель признака у исходной формы, тем меньше вероятность выделить в данной популяции линии достоверно превышающие ее.

5 Условия регенерации способствуют чаще всего улучшению признаков, характеризующих: содержание олеиновой кислоты, степень поражения септориозом, церкоспорозом, пероноспорозом.

6 В изучаемых популяциях выявлено пять сомаклональных линий органогенного происхождения (1*426, 1*356, 1*347, 1*362), превосходящих исходные формы по нескольким признакам. Для дальнейшего изучения они были переданы в конкурсном сортоиспытании, где сомаклон Б^б (Приморская 1356) достоверно превысил стандартный сорт по урожайности, содержанию белка, масла, в меньшей степени поражался септориозом и пероноспорозом.

7 Среди сомаклональных линий, наработанных с использованием тканей мутантов в качестве исходных форм для регенерации путем органогенеза, выделены рекомбинанты, превышающие исходные формы: И^б (и.ф. Ходсон - Ь) по периоду вегетации, содержанию белка и гистидина; (и.ф. Ходсон - у)-содержанию белка, олеиновой и линоленовой кислот; К6гз (и.ф. Ходсон - Ь)-содержанию белка и олеиновой кислоты.

8 Впервые в нашей практике выделены регенерантные линии, полученные из тканей мутантов, устойчивые к септориозу - R.646 (и.ф. Ходсон - L) и церкоспорозу - R623 (и.ф. Ходсон - L).

9 В популяции сомаклонов, полученных с использованием ионов Си2+ как дополнительного мутагенного фактора in vitro, выявлены две сомаклональ-ные линии (R1046 и R986) сочетающие в себе высокую продуктивность с улучшенными биохимическими показателями (белок, масло и составляющие их компоненты).

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ

1. Использовать метод культуры ткани как дополнительный в селекции сои с целью создания исходного материала,

2. Выделенные сомаклоны предлагается включить в программу скрещивания как источники хозяйственно - ценных признаков.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Ефремова, Ольга Сергеевна, п. Тимирязевский

1. Технические культуры / Я.В. Губанов, С.Ф. Тихвинский, Е.П. Горелов и др. ; под ред. Я.В. Губанова. М. : Агропромиздат, 1986. - 287с.

2. Новак, А.Г. Возделывание сои / А.Г. Новак. М. : Россельхозиздат, 1964. - 104с.

3. Создание сортов сои северного экотипа и интродукция ее в Нечерноземную зону России / Г.С. Посыпанов, Т.П. Кобозева, В.П. Мухин и др. // Известия ТСХА. 2007. - Вып. 1. - С. 73-78.

4. Рязанцева, Т.П. Сорта сои Дальнего Востока / Т.П. Рязанцева, JI.K. Малыш. Благовещенск : Хабаровское кн. изд-во, 1974. - 72с.

5. Decreased Serum total Cholesterol Concentration Js Associated with High Intake of Soy Products in Japanese men and Women / C. Nadata, N. Takatsuka, Y. Kunsu et al. // J. Nutr. 1998. - Vol. 128, № 3. - P. 209-213

6. Кудрявцева, M.A. Биохимия сои // Биохимия культурных растений / под ред. H.H. Иванова. М. ; Л. : Сельхозгиз, 1938. - Т. 2. - С. 51-116.

7. Биохимия масличных культур // Минкевич, И. А. Масличные культуры / И.А. Минкевич, В.Е. Борковский. М. : Сельхозгиз, 1949. - Гл. 5. - С. 144-162.

8. Соя / Г.Т. Лавриненко, A.A. Бабич, В.Ф. Кузин, П.Е. Губанов. -М.: Россельхозиздат, 1978. 189с.

9. Шарапов, Н.И. Закономерности химизма растений : (о качестве урожая) / Н.И. Шарапов. М. ; Л. : Изд-во АН СССР, 1962. - 131 с.

10. Кузин, В.Ф. Возделывание сои на Дальнем Востоке / В.Ф. Кузин ; ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние, ВНИИсои. Благовещенск : Хабаровск, кн. изд-во,1976.-246с.

11. Соя / под ред. Ю.П. Мякушко, В.Ф. Баранова. М. : Колос, 1984.332с.

12. Соя в восточных районах страны / В.П. Черноголовин, Г.Т. Казьмин, В.В. Бурлака и др. ; ДальНИИСХ. Благовещенск, 1971. - 125с.

13. Подобедов, A.B. Эффективность использования сои в хлебопекарной промышленности // Аграрная наука. 1998. - № 11/12. - С. 9-11.

14. Подобедов, A.B. Потребительские свойства соевого белка //Аграрная наука. 2000. - № 1. - С. 10-11.

15. Мальченко, В.В. Соя // Частная селекция полевых культур / под ред. Г.В. Гуляева. М.: Колос, 1975. - С. 259-276.

16. Бородин, Е.А. Пищевые продукты из сои. Новая роль / Е.А. Бородин, Т.В. Аксенова, Н.И. Анищенко // Вестник ДВО РАН. 2000. - № 5. - С. 7285.

17. Мосс, Дж. Запасные белки семян бобовых / Дж. Мосс, Дж. Пер-налле // Химия и биохимия бобовых / ред. М.Н. Запрометов. М. : Агропром-издат, 1986.-С. 111-192.

18. Adlerereutz, Н. Phytooestrogens and Western diseases / H. Adlerereutz, W. Mazu //Ann. Med. 1997. - Vol. 29, № 5. - P. 95-12.

19. Вавилов, П.ГТ. Бобовые культуры и проблема растительного белка / П.П. Вавилов, Г.С. Посыпанов. М. : Россельхозиздат, 1983. - 256с.

20. Сычева, Т.В. Соя на страже вашего здоровья / Т.В. Сычева. -Бердск, 1999,- 12с.

21. Kennedy, A.R. The Bowman-Birk inhibitor from soybeans as an anticar-cinogenic agent // Am. J. Clin. Nutr. 1998. - Vol. 68, № 6. Suppl. - P. 1406-1412.

22. Setehell, K.D. Phytoestrogens: the biochemistry, physiology, and implications for human health of soy isoflavones // Am. J. Clin. Nutr. 1998. - Vol. 68, № 6. Suppl.-P. 1333-1346.

23. Messina, M.L. The role of soy products in reducing risk of cancer / M.L. Messina, S. Barnes // J. Nat. Cancer Jnst. 1991. - Vol. 83, № 8. - P. 541-546.

24. Soy intake and risk of breast cancer in Asians and Asian Americans / A.H. Wu, R.G. Ziegler, A.M. Nomura et al. //Am. J. Clin. Nutr. 1998. - Vol. 68, №6, Suppl.-P. 1437-1443.

25. Давыденко, О.Г. Соя умеренного климата / О.Г. Давыденко, Д.В. Голоенко, В.Е. Розенцвейг. Минск : Тэхналопя, 2004. - 173с.

26. Боднар, Г.В. Зернобобовые культуры / Г.В. Боднар, Г.Т. Лавринен-ко. М.: Колос, 1977. - 255с.

27. Тильба, В.А. О взаимоотношении клубеньковых бактерий и азотобактера с растениями сои // Восьмая конференция молодых ученых Дальнего Востока (секция биол. наук) / АН СССР, Сиб. отд-ние, ДВ филиал, Биолого-почв. ин-т. Владивосток, 1965. - С. 79-80.

28. Соя (генетика, селекция, семеноводство) / А.К. Лещенко, В. И. Сичкарь, В. Г. Михайлов и др.. Киев : Наукова думка, 1987. - 256с.

29. Коробко, В.А. Селекция сои в Молдавии // Бюл. науч.-техн. ин-форм. по маслич. культурам / ВАСХНИЛ, ВНИИМК. Краснодар, 1976. - Вып. 2.-С. 20-21.

30. Бороевич, С. Принципы и методы селекции растений / С. Бороевич ; пер. с сербохорват. В,В. Иноземцева ; под ред. А.К. Федорова. М. : Колос, 1984. - 344с.

31. Гордиенко, В.А. Методы селекционной работы по сое и фасоли // Методы исследования с зернобобовыми культурами : материалы науч.-метод, совещ. / ВАСХНИЛ, ВНИИЗБК. Орел, 1971. - Т. 1. - С. 199-210.

32. Гордиенко, В.А. Усовершенствование методов селекции сои // Методы селекции сельскохозяйственных растений в Молдавии : сб. статей. / АН МССР, Отд. Генетики растений, Молд. о-во генетиков и селекционеров. Кишинев : Штиинца, 1972. - С. 61-70.

33. Вавилов, H.H. Основные задачи советской селекции растений и пути их осуществления // Избр. тр. : в 5-ти т. М. ; Л. : Наука, 1965. - Т. 5. - С. 305-324.

34. Красковская, H.A. Сравнительное изучение некоторых методов создания исходного материала для селекции сои в Приморском крае : дис. . канд. с.-х. наук /H.A. Красковская. Благовещенск, 2000. - 194с.

35. Малыш, К.К. Об итогах селекции зерновой сои на Амурской опытной станции / К.К. Малыш, Т.П. Рязанцева // Тр. Амурской с.-х. опыт. ст. Благовещенск : Хабаровское кн. изд-во, 1965. - Т. 1. - С. 27-34.

36. Джонсон, Г.В. Генетика и селекция сои / Г.В. Джонсон, Р.Л. Бернард // Соя / пер. с англ. K.M. Селивановой ; под ред. и с предисл. В.Б. Енкена. М. : Колос, 1970.-С. 11-98.

37. Гуляев, Г.В. О формообразовательном процессе в селекционных популяциях // Известия ТСХА. 1969. - Вып. 3. - С. 84-95.

38. Мичурин, И.В. О подборе комбинаций родительских пар растений //88

39. Соч. : в 4-х т. М. : Сельхозгиз, 1948. - Т. 1. - С. 630.

40. Фисенко, П.П. Изучение принципов подбора родительских форм для гибридизации при селекции сои в Приморском крае : автореф. дис. . канд. с.-х. наук / П.П. Фисенко. Л., 1982. - 24с.

41. Ала, А.Я. Соя: генетические методы селекции G. max (L.) Merr. х G. soja / А .Я. Ала, В.А. Тильба ; Россельхозакадемия, ВНИИ сои. Благовещенск, 2005. - 123с.

42. Золотницкий, В.А. Соя на Дальнем Востоке / В.А. Золотницкий. -Хабаровск, 1962.-248с.

43. Ала, А.Я. Изменчивость и отбор в популяциях F4 G.max X G. max X (G. max X G.ussuriensis). // Селекция и агротехника возделывания сои на Дальнем Востоке : Науч.-техн. бюл. / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1983.-Вып. 38.-С. 12-22.

44. Создание и использование генофонда дикой уссурийской сои в генетических исследованиях : метод, рекомендации / сост. А.Я. Ала. ; ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние, ВНИИ сои. Новосибирск, 1984. - 50с.

45. Ала, А.Я. Наследование длины стебля и числа узлов на главном стебле у сои в F2 G.max X G. soja / А.Я. Ала, А.А. Гамолин // Науч.-техн. бюл. / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1985. - Вып. 37. - С. 3-9.

46. Ала, А.Я. Использование отдаленной гибридизации в селекции сои // Селекция с.-х. культур на Дальнем Востоке / под. ред. Г.Т. Казьмина ; сост. Е.П. Киселев. Хабаровск : кн. изд-во, 1987. - С. 60-70.

47. Тихончук, П.В. Получение межвидовых гибридов сои и их характеристика по хозяйственно-ценным признакам : дис. . канд. с.-х. наук / П.В. Тихончук. Хабаровск, 1990. - 155с.

48. Evaluation of the USDA soybean germplasm collection: maturity groups 000 to IV (PI 490, 765 to PI 507.573) / C.J. Coble, G.L. Sprau, R.L. Nelson et al., -Washington, 1992. 6lp.

49. Гинзбург, Э.Х. Описание наследования количественных признаков / Э.Х. Гинзбург ; отв. ред. З.С. Никоро. Новосибирск : Наука. Сиб. отд-ние,891984.-249с.

50. Алгоритмы эколого-геиетической инвентаризации генофонда и методы конструирования сортов сельскохозяйственных растений по урожайности, устойчивости к качеству : метод, рекомендации (новые подходы) / сост. В.А. Драгавцев ; ВИР. СПб. : ВИР, 1993. - 69с.

51. Лещенко, А.К. Генетическая изменчивость содержания белка и масла в семенах гибридов сои / А.К. Лещенко, В.И. Сичкарь, В.А. Лысенко // Селекция и семеноводство. 1976. - № 5. - С. 26-29.

52. Шмальц, X. Селекция растений / X. Шмалъц ; пер. с нем. и предисл. Ю.Л. Гужова. М.: Колос, 1973. - 296с.

53. Мякушко, Ю.П. Селекция и семеноводство сои на Северном Кавказе : автореф. дис. . д-ра с.-х. наук / Ю.П. Мякушко. Л., 1975. - 41с.

54. Малыш, Л.К. Сравнение модифицированного метода педигри (ОСП) и массового отбора в селекции сои / Л.К. Малыш, Н.Д. Фоменко // Резервы повышения эффективности соеводства : сб. науч. тр. / ВНИИ сои. Новосибирск, 1988. - С . 12-18.

55. Сальникова, Т.В. Преимущество и особенности химического мутагенеза у культурных растений // V съезд Всесоюз. о-ва генетиков и селекционеров им. Н.И. Вавилова, Москва, 24-28 ноября 1987 г. : тез. докл. М., 1987. - Т. 6.-С. 105.

56. Шведов, Г.Г. Индуцированные мутанты озимого ячменя и их селекционное значение // Селекция и семеноводство : республ. межведомств, те-мат. науч. сб. / МСХ Укр. ССР. Киев : Урожай, 1981. - Вып. 48. - С. 34-37.

57. Делоне, Л.Н. Опыты по рентгенизации культурных растений. 1. Пшеница // Тр. науч. ин-та селекции. Киев, 1928. - С. 1.

58. Делоне, Л.Н. Рентгеномутации у пшеницы // Вестн. прикл. ботаники. Харьков, 1930. - № 516. - С. 5-14.

59. Лужков, А.Н. Об экспериментальном получении полиплоидных гамет под влиянием низкой температуры и хлороформа // Тр. по прикладной ботанике, генетике и селекции растений. Сер. 2. Л., 1937. - № 7. - С. 127-150.90

60. Санегин, A.A. Рентгеномутации мягкой пшеницы (Tr. Vulgare) // Природа. 1934. - № 9. - С. 28.

61. Лещенко, А.К. Селекция сои во Всесоюзном институте сои и клещевины // Вопросы селекции и агротехники сои : сб. науч.-исслед. работ / под ред. И.Н. Гальченко. -М. : Сельхозгиз, 1953. С. 16-27.

62. Енкен, В.Б. Использование экспериментального метагенеза в селекции бобовых и других культур /В.Б. Енкен. М. : Колос, 1967. - 80с.

63. Енкен, В.Б. Соя / В.Б. Енкен. М.; Л. : Сельхозгиз, 1959. - 593с.

64. Гриднев, А.К. Создание исходного селекционного материала сои методом индуцированного мутагенеза : автореф. дис. . канд. с.-х. наук / А.К. Гриднев. Харьков, 1983. - 18с.

65. Акилов, У.А. Применение индуцированного мутагенеза в селекции высокобелковых и урожайных форм сои // Бюл. науч.-техн. информ. ВНИИЗБК. Орел, 1974. - № 8. - С. 21-26.

66. Тедорадзе, С.Г. Создание новых форм и сортов сои при помощи ионизирующего излучения // Биология и возделывание сои / АН СССР, Дальне-вост. науч. центр, Биолого-почв. ин-т. Владивосток, 1971. - С. 158-160.

67. Беляева Г.Н. Влияние физического мутагенеза на амурские сорта сои // Биология, селекция и возделывание сои / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние, ВНИИ сои. Благовещенск : Хабаровское кн. изд-во, 1971. - С. 31-33.

68. Беляева Г.Н. Применение ионизирующих излучений в селекции сои в Приамурье / Г.Е. Беляева, Т.П. Рязанцева, П.К. Малыш // Приемы регулирования продуктивности сои : сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ, Си б. отд-ние. Новосибирск, 1987.-С. 71-78.

69. Ала, А.Я. Использование малых мутаций в селекции сои // Некоторые вопросы селекции и биологии сои / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние, ВНИИ сои.

70. Благовещенск : Хабаровск, кн. изд-во, 1975. С. 73-76.

71. Ващенко, А.П. Итоги работы по селекции сои на скороспелость / А.П. Ващенко, М.Э. Элентух // Сиб. вестн. с.-х. науки. 1973. - № 3. - С. 18-22.

72. Ващенко, А.П. Некоторые вопросы селекционной работы с соей в Приморском крае // Некоторые вопросы селекции и биологии сои / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние, ВНИИ сои. Благовещенск : Хабаровск, кн. изд-во, 1975. - С. 6668.

73. Fang, P.S. Poliploidy in soybean pea nheat and rice induced by colchicine tredolment / P.S. Fang, W.S. Zoo // Science. 1940. - Vol. 91, № 2397. - P. 22.

74. Porten. K.B. The effect of poliploidy on soybean. / K.B. Porten, M.Z. Wiese // Lour. amer. Soc. Agr. 1948. - Vol. 40, N 80. - P.710-724.

75. Maheswari, P. Control of fertilization / P. Maheswari, Kusan Kanta // Pollen physiology and fertilization. 1961. - P. 187-193.

76. Kanta, K. Test-tube fertilization in a flowering plant / K. Kanta, N.S. Rangaswamy, P. Maheswari // Nature. 1962. - Vol. 194, N 4835. - P. 1214-1217.

77. Zhang, Gulhe. Оплодотворение in vitro гибридов риса групп indica и japonica / Zhang Gulhe, Song Pellun // Sci. agr. sin. 1993. - Vol. 26, N 5. - P. 1924.

78. Терновский, М.Ф. Получение межвидовых гибридов табака путем опыления семяпочек in vitro / М.Ф. Терновский, И.К. Шинкарева, Н.И. Ларьки-на // Генетика. 1976. - Т. ХП, № 10. - С. 40-45.

79. Здруйковская-Рихтер, А.И. Опыление и оплодотворение семяпочек в культуре in vitro / А.И. Здруйковская-Рихтер, М.С. Бабасюк // Физиология растений. 1974. - Т. 218, № 6. - С. 1482-1484.

80. Reed, S.M. Interspecific hybrids in Nicotiana throught in vitro culture of fertilizereds ovules Ш / S.M. Reed, G.B. Collins // Hered. 1978. - Vol. 69. - P. 311-315.

81. Zenkteler, M. In vitro Pollination and Fertilization // Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants. 1984. - Vol. 1. - P. 269-275.

82. Moue, T. Interspecific hybridization between an A-genome species92chinsse Cabbage) and a C-genome species (cabbage) of Brassica Embryo and ovulo culture cabbage I I Plant Breed Abst. 1980. - Vol. 50. - P. 702.

83. Kranz. Micromanipulation and in vitro fertilization with single pollen grains of maize / Kranz, H. Lorz // Sexnal Plant Reproduction. 1990. - Vol. 3, N 3. -P. 160-169.

84. Уралец, Л.И. Получение гибридных семян томатов опылением пестиков in vitro // Физиология и биохимия культурных растений. 1981. - Т. 13. -С. 77-80.

85. Stewart, J. In vitro fertilization and embryo rescue // Env. And Exp. Botany. 1981. - Vol. 21, N 3/4. -P. 301-315.

86. Гирко, B.C. Преодоление постгамных барьеров несовместимости при отдаленной гибридизации злаков // Докл. РАСХН. 1996. - № 1. - С.4-7.

87. Сравнение двух методов получения отдаленных гибридов при скрещивании тритикале с рожью / П.Д. Майстров, В.П. Баннокова, В.Н. Чередниченко. и др4. // Цитология и генетика. 1993. - Т. 27, № 3. - С. 25-30.

88. Козловская, В.Ф. Использование эмбриокультуры при получении растений первого поколения первого беккроса межвидовых гибридов пшениц / В.Ф. Козловская, Г.М. Мусалитин // Вестн. РАСХН. 1993. - № 5. - С. 14-17.

89. Применение метода культуры изолированных зародышей в межвидовой гибридизации лука / И.В. Титова, Н.И. Тимин, Н.А. Юрьева, Н.Н. Дмитриева // Труды по селекции и семеноводству овощных культур / ВНИИССОК. -М., 1982. Вып. 15. - С. 57-65.

90. Курсаков, Г.А. Применение изолированной культуры зародышей и тканей при отдаленной гибридизации плодовых растений // Тканевые и клеточ--ные культуры в селекции растений,: науч. тр. / ВАСХНИЛ. М., 1979. - С. 7077.

91. Кравцов, П.В. Культура изолированных зародышей как метод преодоления стерильности отдаленных гибридов плодовых растений / П.В. Кравцов, В.Г. Касьянова // Физиология растений. 1968. - Т. 15, № 5. - С. 931-933.

92. Рожанская, O.A. Соя и нут в Сибири: культура тканей, сомаклоны, мутанты. Новосибирск : Юпитер, 2005. - 155с.

93. Варданян, И.В. С омаклональная изменчивость в селекции острого перца / И.В. Варданян, Г.Ж. Саркисян. URL: http://www.armagrar-uni .am/arkhive/journal/2006-2/agro.

94. Komatsuda, Т. Genotypes of high competens for somatic embrypgenesis and plant regenezation in soybean Glycine max. / T. Komatsuda, K. Ohyama // Theoretical and Applied Genetic. 1988. - Vol. 75, N 5. - P. 695-700.

95. Lazzeri, P.A. A procedure for regeneration from immature Cotyledon tissue of soybean / P.A. Lazzeri, D.F. Hildebrand, G.B. Collins // Plant Mol. Biol. Rep.94- 1985, N 3. P. 160-167.

96. Auxin orientation effects on somatic embryogenesis from immature soybean cotyledons / L.M. Hartweck, P.A. Lazzeri, D. Gui et. al. // In vitro Cell and Dev. Biol. - 1988. - Vol.24, N 8. - P. 821-828.

97. Optimization of somatic embryogenesis and embryo germination in soybean / W.A. Parrott, G. Dtyden, S. Vogt et al. // In vitro Cell and Dev. Biol. 1988. -Vol. 24, N8.-P. 817-820.

98. Myers, James R. Plant regeneration of wild Glycine species from suspension culture derived protoplasts / James R. Myers, Paul A. Lazzeri, G.B. Collins//Plant Cell Repts. - 1989. - Vol.8, N2. - P. 112-115.

99. Barwale, U.B. Plant regeneration from callus cultures of several soybean genotypes via embryogenesis and organogenesis / U.B. Barwale, H.R. Kerns, J.M. Widholm // Planta. 1986. -N 167. - P. 473-481.

100. Barwale, U.B. Somaclonal variation in plant regenerated from cultured of soybean / U.B. Barwale, J.M. Widholm // Plant Cell Rep. 1987. - Vol. 6, N 5. -P. 365-368.

101. Ranch, J.P. Plant regeneration from embryo-derived tissue cultures of soybeans / J.P. Ranch, L. Oglesby, A.C. Zielinski // In vitro Cell Dev. Biol. 1985. -N58.-P. 653-658.

102. Shao, Qiguan. Recipient system for genetic engineering of soybean / Sliao Qiguan, Yin Guangchu, Wang Lianzheng. Harbin, 1988. - P. 123.

103. Zhou, Sijun. Plant regeneration from immature of soybean via samatic embryogenesis / Zhou Sijum, Yin Guangchu, Lei Bojun, He Zhihong // Soybean sciense. 1989. - Vol. 8, N 1. - P. 39-45.

104. He Zhou- pei, Xu Shu- ping // IIlHJiHb lush y oo36ao = Acta Biol .Exp. Sin. 1991. - Vol. 24, N 1. - P. 67-70.95

105. Донцова, T.B. Каллусо- и побегообразование у сортов сои, районированных в Амурской области // Пути повышения устойчивости производства сои на Дальнем Востоке : сб. науч. тр / ВАСХНИЛ, Сиб.отд-ние, ВНИИ сои. -Новосибирск, 1989. С. 128-136.

106. Соловьёв, В.П. Морфогенез в культуре изолированных органов // Резервы повышения продуктивности сои : сб.науч.тр./ ВАСХНИЛ, Сиб.отд-ние, ВНИИ сои. Новосибирск, 1990. - С. 31-35.

107. Майсурян, А.Н. Отбор и характеристика клеточных линий сои, устойчивых к Ь-азетидин-2 карбоновой кислоте / А.Н. Майсурян, Н.В. Хадеева, И.И. Дридзе // Физиология растений. 1987. - Т. 34, вып. 5. - С. 900-906.

108. Гаджиева, И.Х. Морфологический анализ в регенерации у сортов сои / И.Х. Гаджиева, А.Ш. Гасанова, М.А. Магомедова // Процессы регенерации в онтогенезе растений : сб. науч. тр. / Дагестан, гос. ун-т. Махачкала, 1991. -С. 31-39.

109. Жарова, Г.В. Прямой соматический эмбриогенез из незрелых зиго-тических зародышей сои в культуре in vitro // Науч.-техн. бюл. / ВИР. Л., 1992. -Вып. 223.-С. 40-41.

110. Ващенко, А.П. Селекция высокопродуктивных сортов сои в Приморье / А.П. Ващенко, П.П. Фисенко // Вестн. Россельхозакадемии. 2001. - № 3. -С. 38-41.

111. Wright, M.S. Plant regeneration from Tissue Cultures of soybean by organogenesis / M.S. Wright, S.M. Kochler, M.A. Hinchee, M.G. Carnes 11 Plant Cell Reports. 1986. - N 5. - P. 150-154.

112. Daimon, Hiroyuki. Multiple shoot formation and plantiet regeneration from cotyledonary node in peanut (Arachis hupogacal) / Hiroyuki Daimon Masa-hiro Mii // Jap. J. Breed. 1991. - Vol. 41, № 3. - P. 461-468.

113. Griga, M. Klonovani soje Glicine max. L. Merr. vyuitim kulture vzrostnych vicholu a del oz nicli nodu / M. Griga, H. Hejtmankova // Postl. vyro-ba. 1990. - Vol. 36, N 3. - P. 287-294.

114. Wright, M.S. Plant regeneration from tissue cuitures of soybean by organogenesis /M.S. Wright, M.G. Games et al. // Cell. Cult. Som. Cell. Genenet. Plants. 1986. - Vol. 3. - P. 111-119.

115. Cheng, T.Y. Plant regeneration from soybean cotyle donary node segments in culture / T.Y. Cheng, H. Saka, Т.Н. Voqui-Dinh // Plant Sci. Lett. 1980. - N 19. - P. 91-99.

116. Graybosch, R.A. Somaclonal variation in soybean. Plants regenerated from the Cotyledonary node tissue culture system / R.A. Graybosch, M.E. Edge, X. Delannay // Crop Science. 1987. - Vol. 27, № 4. - P. 803-806.

117. Freytag, A.H. Somaclonal variation in soybean plants regenerated from culture / A.H. Freytag, A.P. Rao-Arelli, S.C. Anand et al. // Plant Cell. Rep. -1989. Vol. 8, N 4. - P. 199-202.

118. Kameya, T. Plant regeneration from hypocotyl sections of Glicine special / T. Kameya, J. Widholm // Plant Science Letters. 1981. - № 21. - P. 289294.

119. Гостимский, С.А. Использование молекулярных маркеров для анализа генома растений / С.А. Гостимский, З.Г. Кокаева, В:К.Боброва // Генетика. -1999.-Т. 35, №11.-С. 1538-1549.

120. RAPD- based detection of genomic instability in soybean plants derived from somatic embryogenesis / A.S. Gesteira, W.C. Otoni, E.G.Barros, M.A.Moreira // Plant Breeding. 2002. - Vol. 121, N 3. - P. 269-271.

121. Рожанская, O.A. Создание селекционного материала эспарцета и люцерны методами биотехнологии / O.A. Рожанская, В.Г. Дарханова; Н.С. Строева // Кормопроизводство. 2008.- № 5. - С. 29-32.

122. Артамонов, В.И. Биотехнология агропромышленному комплексу / В.И. Артамонов. М. : Наука, 1989. - 158с.

123. Родина, H.A. Достижения генетики, селекции и биотехнологии в растениеводстве // Материалы годич. общего собрания, посвящ. 20-летнему Юбилею со дня основания отд-ния по Нечерноземной зоне РФ Россельхозака-демии. СПб., 1995. - С. 119-130.

124. Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию: Сорта растений: официальное издание / МСХ РФ ФГУ «Государственная комиссия РФ по испытанию и охране селекционных достижений»,- М.,-2004,- 233с.

125. Damato,F. Chromosome number variation in cultured cell and regenerated plants // Frontiers of plants tissue culture / Ed. T.A. Thorpe. Calgary, 1978. -P. 287-295.

126. Кунах, В.А. Изменчивость числа хромосом в онтогенезе высших растений // Цитология и генетика. 1978. - Т. 12, № 2. - С. 160-173.

127. Кунах, В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений и факторы, регулирующие этот процесс // Цитология и генетика. 1980. - Т. 14, № 1.-С. 73-81.

128. Бутенко,Р.Г. Культура изолированых тканей и физиология морфогенеза растений / Р.Г. Бутенко.-М.: Наука, 1964.-272 с.

129. Атанасов, А. Биотехнология в растениеводстве / пер. с болг. Е.В. Дейнеко ; под ред. Л.Д. Колосовой, Е.В: Дейнеко. Новосибирск, 1993. - 24Гс.

130. Chromosomal variation and. frequency of spontaneous mutation associated with in vitro culture and plant regeneration in maize / S. Edallo, C. Zucchinali, M. Perenzin, F. Salamin // Maydica. 1981. - Vol. 26, N 1. - P. 39-56.

131. Сомаклональная изменчивость / 3. Витанова, M. Влахова, П. Денчев и др. // Физиология и биохимия культурных растений. 1990. - Т. 22, № 5. -С. 419-426.

132. Fukui, К. Sequential occurrence of mutations in a growing rice callus // Theor. and Appl. Genet. 1983. - Vol. 65, N 3. - P. 226-230.

133. Prat, D. Genetic variability induced in Nicotiana sylvestris by protoplast culture // Theoret. Appl. Genet. 1983. - Vol. 64, N 3. - P. 223-230.

134. Evans David, A. Single gene mutations in tomato plants re-generated from tissue culture / Evans David, A., Sharp William R. // Science. 1983. - Vol. 221, N 4614. -P. 949-951.

135. Биотехнология растений. Клеточная селекция / отв. ред. Ю.Ю. Глеба ; АН УССР, Отд-ние клеточной биол. и инжен. ин-та ботаники им. Н. Г. Холодного. Киев : Наукова думка, 1990. - 280с.

136. Gengenbach В. G., Green С. Е., Donovan С. М. Inheritance of selected pathotoxin resistance in maize plants regenerated from cell cultures //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1977. - Vol. 74, N 11. - P. 5113-5117.

137. Змеева, B.H. Тенденции изменчивости некоторых хозяйственно полезных признаков в популяциях сомаклонов и андрогенных дигаплоидов риса Oriza sativaL. : автореф. дис. . канд. с.-х. наук. Владивосток, 1995. -27с.

138. Россеев, В.М. Получение каллусной культуры ячменя с высокой ре-генерационной способностью и изучение растений-регенерантов // Между нар. конф. "Биология культивируемых клеток и биотехнология" : тез. докл. Новосибирск, 1988. - Ч. 2. - С. 264.

139. Кушнаренко, С.В. Морфогенез и регенерация растений в культуре соматических тканей пшеницы // Междунар. конф. "Биология культивируемых клеток и биотехнология" : тез. докл. Новосибирск, 1988. - Ч. 2. - С. 265.

140. Эльконин JI.A. Сомаклональная изменчивость в культуре гаплоидных тканей сорго / JI.A. Эльконин, B.C. Тырнов, А.Г. Ишин // Междунар. конф. "Биология культивируемых клеток и биотехнология" : тез. докл. Новосибирск, 1988.-Ч. 2.-С. 273.

141. Папазян Н.Д. Исследование изменчивости в потомстве регенеран-тов пшеницы и ячменя / Н.Д. Папазян, Г.И. Бичехвост // Междунар. конф. "Биология культивируемые клеток и биотехнология" : тез. докл. Новосибирск, 1988.-Ч. 2.-С. 266.

142. Гостимский С.А. Генетический анализ сомаклональных изменений у посевного гороха / С.А. Гостимский, Т.А. Ежова, A.M. Багрова // Междунар. конф. "Биология культивируемых клеток и биотехнология" : тез. докл. Новосибирск, 1988. - Ч. 2. - С. 271.

143. Evans, D.A. Somaclonal variation//Plaint Biology.-1987.-Vol.4.-P.59-69,

144. Evans, D.A. Somaclonal variation-genetic basis and breeding application// Trends in Genetics.-1989.-Vol.5, № 2. P. 46-50.

145. Система земледелия в Приморском крае : рекомендации / ВАСХ-НИЛ, СО, Примор. НИИСХ. Новосибирск : СО ВАСХНИЛ, 1990. - 302 с.

146. Щербаков, В.К. Генетические основы иммунитета растений // Биологические основы растениеводства. Генетика, селекция, интродукция и защита селескохозяйственных растений: сб. статей. / науч. ред. Л.Л. Балашев. М., 1970.-С. 9-77.

147. Чирков, Ю.И. Агрометеорология / Ю.И. Чирков. 2-е изд., перераб. и доп. - J1. : Гидрометеоиздат, 1986. - 296с.

148. Казьмин, Г.Т. Итоги и направления селекции сои в Приамурье и Приморье // Наука сельскому хозяйству : сб. с.-х. информ. науч. учреждений Дальнего Востока / Дальневост. НИИСХ. - Хабаровск, 1963. - С. 3-7.

149. Грицун, А.Т. Основы возделывания сои в Приморье / А.Т. Грицун,-Владивосток: Дальневост. кн. Изд.-во,1981 160 с.

150. Соя : методические указания по селекции и семеноводству / сост. Н.И. Корсаков, Ю.П. Мякушко. Л. : ВИР, 1975,- 159с.

151. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта (с основами статист, обработки результатов исследований) / Б.А. Доспехов. доп. и перераб. - М. : Агро-промиздат, 1985. - 351 с.

152. Методические указания по изучению устойчивости сои к грибным болезням / сост. Н.И. Корсаков, A.M. Овчинникова, В.И. Мизева. ; ВАСХНИЛ, ВИР.-Л.: ВИР, 1979.-46с.

153. Международный классификатор СЭВ рода Glycine Weld / сост. СССР Л.Щелко, Г.Седова. В.Корнейчук; ЧСФР - Л.Пастухова, Г.Синский, П.Гофирек и др.; ВАСХНИЛ, ВИР. - Л., 1990. - 46 с.

154. Пенчуков, В.М. Культура больших возможностей / В.М. Пенчуков, Н.В. Медянников, А.У. Каппушев. Ставрополь : кн. изд-во, 1984. -287с.

155. Lim, S.M. Brown spot severity and yield reduction in soybean // Phyto102patolhogy. 1980. - Vol. 70, № 10. - P. 974-977.

156. Al-Zahim M.A., Fotd-LIoyd B.V., Newbury H.J. // Plant Cell Reports. -1999. -V. 18. P. 473-477.

157. Bohanec В., Jakse M., Ihan A., Jovorik B. // Plant Sei. 1995. - V. 104. -P. 215-224.

158. Манзюк, В.Т. Получение устойчивых к болезням мутаций ярового ячменя / В.Т.Манзюк, М.Р.Козаченко //Применение физического и химического мутагенеза в сельском хозяйстве: тез. 1-го Всесоюз. совещ., 30.06-3.07.1987 г.Кишинёв, 1987.-С. 168.

159. Grain legume cultivars derived from induced mutations, and mutations affecting nodulation / Bhatia C.R., Maluszynski M., Nichterlein K., Van Zanten L. // Mutat. Breed. Rev. 2001. - № 13. - P. 1-44.

160. Ващенко,А.П. Создание исходного материала для селекции сои на основе использования различных методов / А.П.Ващенко, Н.А.Красковская // С.-х. биология. Сер. биология растений.-2004.-№ 1.-С.44-47.юз

161. Синельников, Э.П. Агрогенезис почв Приморья / Э.П. Синельников, Ю.И. Слабко. М. : ГНУ ВНИИА, 2005. - 280 с.

162. Цмокалюк, Н.М. Оценка влияния загрязнения почвы тяжелыми металлами на развитие и продуктивность сои в условиях Уссурийского района Приморского края : автореф. дис. . канд. биол. наук / Н.М. Цмокалюк. Владивосток, 2001. - 20с.

163. Способ определения мутагенного эффекта тяжелых металлов : Пат. 53375. Украина, МПК7 A01G71100/ Глухов О.З., Хижняк H.A., Сафонов А. № 2002053834 ; Заявл. 10.05.02. Опубл. 15.01.03. Бюл. № 1.