Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение процесса соединения антигенов с антителами методом иммунотермографии

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кочеровская, Найла Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Биофизика системы антиген-антитело.

2. Общие сведения о природе химических связей в белковых молекулах.

3. Основные типы серологических реакций.

4. Калориметрия в исследовании биологических сред.

5. Использование микротерморезисторов для регистрации реакции комплексообразования.

6. Моделирование иммунных процессов.

7. Теоретическое обоснование метода иммунотермогра

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Выбор теплового режима работы микротерморезистора.

2. Конструкция термисторной установки.

3. Объекты исследования.

4. Математическая обработка результатов исследования.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКШЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА Ш. РАЗРАБОТКА МЕТОДА ИММУНОТЕРМОГРАФШ

1. Конструкция многоканального прибора.

2. Установление оптимальных параметров метода иммуно-термографии.

3. Методика экспериментов.

4. Количественная оценка результатов реакции агглютинации методом иммунотермографии.

ГЛАВА 1У. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДА ИММУНОТЕРМОГРАФИИ

ПРИ ПОСТАНОВКЕ НЕКОТОРЫХ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

1. Определение теплопроводности среды в процессе комплексообразования.

2. Применение метода иммунотермографии при постановке реакции Видаля.

3. Использование метода иммунотермографии душ выявления аутоантител.

4. Определение иммуноглобулинов методом иммунотермографии.

5. Применение нормального закона распределения к результатам исследований.

6. Алгоритм поиска адекватной математической модели иммунной реакции.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение процесса соединения антигенов с антителами методом иммунотермографии"

Развитие науки непрерывно связано с расширением и совершенствованием применяемых методов исследования. Это в полной мере относится и к биофизике, бурный прогресс развития которой в последние десятилетия превратил ее из узкой дисциплины в широкую общебиологическую науку. Основной задачей этой науки стали - исследование и расшифровка на молекулярном уровне механизмов биологических процессов с вовлечением биофизических, биохимических и математических методов.

Современные методы постановки серологических реакций - агглю тинации, гемагглютинации, преципитации, флокуляции, связывания комплемента позволяют учитывать только конечные результаты серо реакции при соединении антигенов с антителами по появлению хлоп ев из склеившихся бактерий или эритроцитов, образованию преципи тата, помутнению среды, лизису эритроцитов и т.д.

Динамика процесса соединения детерминантных групп антигенов с рецепторами антител не учитывается, так как для оценки серо-реакций важны только конечные результаты, определяемые как отрицательная или положительная реакция интенсивностью от одного до четырех плюсов, что устанавливается визуально с некоторой долей субъективности.

Разведения сыворотки или антигенов позволяют при этом определять титры серореакций и учитывать результаты в различные сроки, часто только на второй день.

Существенным отличием разработанной нами методики иммуно-термографии является регистрация в виде графических кривых течения всего процесса соединения детерминантных групп антигенов рецепторами антител.

Таким образом, метод иммунотермографии позволяет изучать не только конечные результаты серореакций, но и установить начало реакции, ее интенсивность, продолжительность, волнообразный характер течения и момент окончания процесса.

В основе иммунных реакций, как уже давно установлено, лежит электростатическое взаимодействие между рецепторами антител и детерминантными группами антигенов - ван-дер-ваальсовых взаимодействий, водородных и ионных связей. Энергия взаимодействия мала и составляет от 4 до 12 ккал/моль /152/. Однако, использование современных терморезисторов и усилителей позволяет выявить происходящие при этом процессы агрегации макромолекул и изменения теплопроводности среды и зарегистрировать их графически в виде имму-нотермограмм, отражающих динамику соединения антигенов с антителами.

Актуальность темы обуславливается тем обстоятельством, что в практике до сих пор отсутствует точный, объективный способ учета динамики иммунных реакций и оценка их производится только визуально по образованию осадка, просветлению среды и т.д., что носит часто субъективный характер. Метод иммунотермографии, в отличие от этого, фиксирует динамику процесса соединения антигенов: с антителами в виде графической кривой, что важно для изучения особенностей иммунного ответа при различных инфекциях и иммунопатологических состояниях и может быть использован в биологии и медицине. На основании полученных графиков, названных нами иммунограммами , дается объективная характеристика процесса соединения детерминантных групп антигенов с рецепторами антител. Метод иммунографии может найти применение в биологии и медицине в качестве экспресс-метода для объективной оценки и анализа происходящих в организме иммунологических сдвигов.

Цель диссрфт^прной работы заключается в разработке нового объективного экспресс-метода учета и регистрации термодинамики процесса соединения антигенов с антителами в виде графических кривых. Объективная графическая регистрация динамики процесса соединения детерминантных групп антигенов с рецепторами антител позволяет изучить кинетику образования комплексов антиген-антитело.

Основные задачи исследования:

- разработка метода иммунотермографии для регистрации динамики реакции соединения антиген-антитело;

- применение метода имцунотермографии для постановки серологических реакций и титрования антител в сыворотках крови больных людей и экспериментальных животных;

- конструирование многоканальной тершсторной установки и установление оптимальных параметров метода;

- разработка алгоритмов обработки результатов исследования, полученных методом зшу^шотермографии.

Научная новизна. Впервые зарегистрйрована последовательность этапов процесса соединения антигена с антителами в виде графических кривых - иммунотермограмм, позволяющих выявить волнообразное течение процесса, момент наступления реакции, ее интенсивность и длительность течения в виде отдельных затухающих этапов, а также момент окончания реакции.

Принципиальное отличие предлагаемого метода заключается в том, что ранее применявшиеся методы учета иммунологических реакций регистрировали не сам процесс, а лишь его конечные результаты по образованию флокулята, агглютината, преципитата и прочее.

Практическая ценность работы. Предлагавши метод иммуно-термографии позволяет в течение 15-20 минут зарегистрировать динамику реакций соединения антигена с антителами, благодаря чему его следует отнести к методам экспресс-диагностики. Метод отличается специфичностью и высокой чувствительностью при выявлении различных типов антител: агглютининов, преципитинов и других иммуноглобулинов в сыворотках крови больных людей и экспериментальных животных.

Метод прост в постановке. Термисторная установка может быть собрана из типовых элементов заводского производства, что делает ее доступной для широкой лабораторной практики. Полученные графические результаты исследований в виде иммунотермо-грамм позволяют производить их дальнейшую математическую обработку с применением ЭВМ.

Разработанный метод внедрен в практику работы и включен в учебную программу кафедры экспериментальной и теоретической физики 2-го Московского медицинского института игл. Н.И.Пирого-ва и кафедры биохимии Среднеазиатского медицинского педиатрического института.

На разработанный метод Госкомитетом по делам изобретений и открытий получено авторское свидетельство "Способ постановки реакции агглютинации" за № 730349 /61/. Термисторная установка как прибор для постановки реакции агглютинации экспонировалась на ВДНХ УзССР.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Кочеровская, Найла Юрьевна

Выводы

1. Разработан метод регистрации динамики процесса соединения антигенов с антителами в виде графических кривых - иммунограмм на основе изменения теплопроводности среды в процессе образования комплексов антиген-антитело.

2. Иммунограммы объективно отражают волнообразный характер динамики процесса соединения антигенов с антителами в виде затухающих волн, позволяют установить начало реакции, ее интенсивность, длительность и момент окончания.

3. Метод иммунотермографии успешно применен при постановке различных серологических реакций - реакции агглютинации, выявления аутоантител и иммуноглобулинов, что указывает на универсальность метода, а по быстроте получаемых результатов его можно использовать в качестве лабораторной экспресс-диагностики.

4. Разработана схема многоканального прибора для одновременной постановки ряда параллельных исследований, что значительно сокращает время проведения исследований и повышает достоверность получаемых результатов.

5. С помощью ЭВМ произведена математическая обработка экспериментальных данных и найдена адекватная модель динамики изменения теплопроводности в процессе иммунных реакций.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Основной задачей биофизики является исследование и расшифровка на молекулярном уровне механизмов биологических процессов с вовлечением разнообразных методов. Происходящие в живых существах биологические процессы подчиняются общим законам физики и химии. В настоящее время известно, что в основе всех иммунологических реакций лежат по сути дела одни и те же механизмы взаимодействия электростатических сил между детерминантными группами антигенов и соответствующими им специфическими рецепторами антител, энергия которых подчиняется общим законам термодинамики. Величина энергии взаимодействия этих сил мала, однако применение современных высокочувствительных датчиков позволяет выявить происходящие при этом процессы агрегации макромолекул и изменения теплопроводности среды.

Актуальность выбранной темы обуславливается тем, что в практике отсутствует точный, объективный способ регистрации иммунных реакций и оценка их часто носит субъективный характер.

Настоящая работа посвящена изучению кинетики теплопроводности процесса соединения антигенов с антителами с помощью терморезисторов и регистрации этого процесса графически в виде иммунограмм. На основе этого нами был разработан метод иммунотермографии, позволяющий регистрировать кинетику иммунной реакции.

Метод иммунотермографии успешно применен нами при постановке различных серологических реакций - реакции агглютинации, выявления аутоантител и иммуноглобулинов в сыворотках больных людей и экспериментальных животных. Сравнительное изучение титров ' сывороток от больных тифо-паратифами при общепринятой постанов

- из ке реакции Видаля и методом иммунотермографии показало, что последний является специфическим и более чувствительным.

Изучение иммунограмм, полученных со специфическим, групповым и гетерологическим антигенами, показало возможность четкой дифференциации их по характеру регистрируемых кривых. Кроме того, в результате метода иммунотермографии удалось вскрыть волнообразный характер реакции соединения антигена с антителом.

Метод иммунотермографии был успешно применен также для выявления аутоантител у больных сахарным диабетом и при экспериментальном гепатите у крыс наряду с реакцией пассивной гемагглю-тинации по Бойдену и осаждением комплексов антиген-антитело сернокислым аммонием по А.И.Николаеву, причем чувствительность данного метода в 2-4 раза превышала чувствительность других серологических методов. Кроме того, применение иммунотермографии позволило выявить более ранние случаи заболевания сахарным диабетом, протекающие с ишемической болезнью сердца, при котором поражение сердечно-сосудистой системы, очевидно, зависит от образования иммунных комплексов в сосудистой стенке.

Сопоставление данных определения уровня иммуноглобулинов от больных с иммунологической недостаточностью, полученных методом иммунотермографии и методом радиальной иммунодиффузии по Манчини показало, что результаты достоверно коррелируют /коэффициент корреляции равен 0,73/.

Экспериментально были определены оптимальные условия регистрации иммунных реакций - величина тока, мощность рассеивания терморезистора, объем исследуемой жидкости. Была разработана схема параллельных исследований, предложен стационарный режим работы и усовершенствованы контроли. Все это снизило себестоимость прибора, сократило время проведения исследований и повысило достоверность получаемых результатов.

Преимуществом метода иммунотермографии является также быстрота получаемых результатов, что позволяет его отнести к методам лабораторной экспресс-диагностики.

Полученные экспериментальные данные были обработаны на ЭВМ методами математической статистики и найдены адекватные математические модели, описывающие кинетику теплопроводности иммунных реакций, что позволяет прогнозировать титр антител в исследуемых сыворотках и хранить полученную информацию.

Таким образом, метод иммунотермографии по своей высокой специфичности, чувствительности и универсальности для реакций антиген-антитело является ценным методом экспресс-диагностики и может быть рекомендован для применения в различных областях биологии и медицины.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кочеровская, Найла Юрьевна, Ташкент

1. Антонов В.Ф. Термодинамика биологических систем. - В сб. .-Биофизика. М.,Высшая школа, 1968, с.13-47.

2. Андроникашвили Э.Л., Мгеладзе Г.Н., Монаселидзе Д.Р. Микрокалориметрическое исследование разбавленных и концентрированных растворов и пленок ДЩ. Сб.докл.У1 Всесоюз.конф.по калориметрии, Тбилиси,1973,с.496-500.

3. Альперин Л.Б., Исавина И.А., Лозовой В.П., Шергин С.М. Модель динамики иммунной реакции. В кн.: Материалы по математическому обеспечению и использованию ЭВМ в медико-биологических исследованиях. Обнинск,1976,с.126-127.

4. Бакрадзе Н.Г. Микрокалориметрические исследования растворов РНК. Сб. докл. У1 Всесоюз.конф. по калориметрии, Тбилиси, 1973, с.506-510.

5. Балаева Н.М. Люминесцентно-серологичеокий метод выявления глобулинов. В кн.: Актуальные вопросы иммунологии. М., 1964, с.336-340.

6. Баренбойм Г.М., Доманский А.Н., Тураверов К.К. Люминесценция биополимеров и клеток. М.-Л., Наука, Ленингр.отд-ние, 1966, 233 с.

7. Баймухамедова Х.К., Кочеровская Н.Ю. Сравнительная оценка определения антител к инсулину у больных сахарным диабетом с ИБС. В кн.: Актуальные вопросы кардиологии. Ташкент, 1978, с.12-14.

8. Бородин Ю.И., Каменская В.В. Трехканальный прибор для одновременной регистрации различных физиологических процессов. В сб.: Патология и хирургическая коррекция кровообращения и дыхания. Новосибирск, Зап.-Сиб. книж.изд-во, 1964,с.135-139.

9. Владимиров Ю.А. Фотохимия и люминесценция белков. М., Наука, 1965, с. 232.

10. Вентцель Е.С. Теория вероятности. Учебник для втузов, 4-е изд., . М.: Наука, 1969. 576 с.

11. Вершигора А.К. Основы иммунологии. 2-е изд. Киев, Вища школа, 1980. 492 с.

12. Вичутинский А.А., Андреев И.М., Беликов А.А., Голиков А.Г. Дифференциальный проточный микрокалориметр. -.Мат. У1 Всесоюз. . конф. по калориметрии. Тбилиси,1973,с.585-587.

13. Волькенштейн М.В. Общая биофизика. М., Наука,1978. 590 с.

14. Волошин И.Ф. Электрические цепи постоянного тока с термисто-рами. Минск, АН БССР, 1962, с.6-8; с. 59-70.

15. С7. Волошин И.Ф., Касперович А.С., Шашков А.Г. Полупроводниковые термосопротивления. Минск, АН БССР, 1959,0.292-297.

16. Воробьев А.А. Актуальные проблемы иммунологии в свете иммуно-. профилактики инфекционных болезней. МЭИ, 1975,с. 17-21.

17. Е9. Вязов О.Е., Ходжаев Ш.Х. Руководство по иммунологии. М., . Медицина, 1973. 328 с.

18. Гасан A.M., Малеев В.Я. Исследование термической устойчивости

19. ДНК в концентрированных растворах. Сб.докл. У1 Всесоюз. конф. по калориметрии. Тбилиси,1973, с.481-485.

20. Гальперин Л.Н., Колесов Ю.Р., Машкинов Л.Б., Гернер Ю.Э. Дифференциальный автоматический калориметр (ДАК) различного назначения. Сб.докл. У1 Всесоюз.конф. по калориметрии. Тбилиси, 1973, с. 539.

21. Гальперин Л.Н., Колесов Ю.Р., Либерман А.Е., Невольниченко Б.И., Рубцов Ю.И., Кирпичев Е.П. Комплекс автоматических приборов для прецизионной калориметрии. Сб.докл. У1 Всесоюз. конф. по калориметрии. Тбилиси,1973,с.544-548.

22. ГОСТ 8083-73 "ГСИ". Отраслевой стандарт "Проверка и градуировка первичных измерительных преобразователей температуры (ПШГГ) ОСТ 33-80, ММ и ВХ СССР, май, 1980.

23. Голдобин А.С. Малогабаритный полупроводниковый термостат для медико-биологических исследований. Материалы И совещания по применению радиоэлектроники в биологии и медицине. Ново. сибирок, 1968, с. I27-I3I.

24. Гурвич А.Е. Изучение сывороточных белков методом электрофореза на фильтровальной бумаге. Лабораторное дело, 1955,1. J& 3, с. 3-7.

25. Дибров Б.Ф., Лившиц М.А., Волькенштейн М.В. Математическая модель иммунной реакции. 2-е стохостические аспекты. М., Биофизика, т.ХХП, вып. 2, 1977, с. 313-317.

26. Дибров Б.Ф., Лившиц М.А., Волькенштейн М.В. Математическая модель иммунной реакции. 1У. Пороговый характер инфекционного процесса. М., Биофизика, 1978,т.ХЖ, вып. 3,с.495-500. .

27. Дифференциальный микрокалориметр 2107-010. Рекламный проспект фирмы ,L КБ (Швеция), Стокгольм, 1977,с. 80-88.

28. Дифференциальный программируемый микрокалориметр "Сетарам" Рекламный проспект фирмы " Komef " (Франция), Париж, 1978, 8 с.

29. Древаль В.И. Определение молекулярного веса белков электрофорезом в полиакриламидном геле. В кн.: Сравнительная биохимия обмена веществ у животных. М., 1977, Л I, с. 78-80.

30. Дульнев Г.Н. Приближенные методы решения задач теплопроводности и их применение в технике. Сб. тр. ЛИТМО, Л., 1972, с. I05-II5.

31. Дульнев Г.Н., Тарновский Н.Н. Тепловые режимы электронной аппаратуры. Л., Ленингр.отд-ние, Энергия, 1971, 248 с.

32. Дьяконова М.Е., Дракин С.И. Исследование влияния температуры и малых добавок воды на теплоты растворения электролитов в метаноле. Сб.докл. У Всесоюз.конф. по калориметрии, М., 1971, с. 185-189.

33. Заславский Б.Ю., Вичутинский А.А., Хорлин А.Я. Влияние рН и ионной силы на термодинамику фермент-ингибиторного взаимодействия. Сб.докл. У Всесоюз.конф.по калориметрии. М., 1971, с. I55-X57.

34. Здродовский П.Ф. Проблемы инфекции и иммунитета. М., Медгиз, 1961, 366 с.

35. Зенков И.Д., Лушников В.Н. Калориметрическая установка для определения истинных теплоемкостей и теплот фазовых переходов в интервале температур 2-300°К. Сб.докл. У1 Всесоюз.конф. по калориметрии. Тбилиси,1973,с.590-591.

36. Зшгьбер Л.А. Основы иммунологии. 3-е изд.М.,Медгиз, . 1968, 599 с.

37. Кабатов Ю.Ф., Славин М.Б. Вероятностно-статистические методы в медицинских исследованиях и надежность медицинскойаппаратуры. М., Медицина, 1971, 296 с.

38. Кадыров Х.К., Антоглонов Ю.Г. Синтез математических моделей биологических и медицинских систем. Киев, Наукова думка, 1974, 222 с.

39. Казначеев В.П., Каменская В.В. Термисторы прямого подогрева в биологии и медицине. В кн.: Полупроводниковые термочувствительные сопротивления в биологии и медицине. Новосибирск, 1966, с.7-11.

40. Каменская В.В. Применение полупроводниковых чувствительных сопротивлений в биологии и медицине. Автореф.дисс.канд. физ.-мат.наук, - Томск, 1964, 19 с.

41. Каменская В.В. Микротепловые методы исследования иммунологических реакций. Автореф.дисс.докт.биол.наук. -Новосибирск, 1975, 50 с.

42. Каменская В.В., Казначеев В.П. О принципиальной возможности контроля за свертывающей системой крови термисторами. -В кн.: Патология и хирургия, Новосибирск, Зап.-Сиб.книж. изд-во, 1965,112-118.

43. Каменская В.В., Казначеев В.П., Старикин Ю.А., Голдобин А.С.

44. A.С. $ 280917 (СССР). Способ исследования дисперсных систем фазово-контрастным микроскенированием. Опубл. в Б.И. 1970,28.

45. Каменская В.В., Казначеев В.П., Старикин Ю.А., Карманов

46. B.Г., Роньжина С.Д., Малюга Г.Д. А.С. № 376443. (СССР). Способ исследования агглютинации. Опубл. в Б.И. 1972,$ 16.

47. Каменская В.В., Голдобин А.С. Прибор для исследования и контроля теплофизических характеристик изоляционных материалов. В сб.: Материалы научно-технической конференциипо надежности. Новосибирск, 1969, с. 84-88.

48. Каменская В.В., Ильенко А.И., Столяров А.В. Метод определения теплопроводности жидкости микротерморезисторами. -Материалы У Всесоюз.конф. по применению физики, математики, электроники в биологии и медицине. Новосибирск,1973,с. 188-189.

49. Каминский Л.С. Статистическая обработка лабораторных и клинических данных. 2-е изд. Л., Медицина, Ленингр.отд-ние, 1964, 252 с.

50. Карманов В.Г. Измерение температуры листьев растений при физиологических исследованиях. Автореф.дисс.канд.техн. наук, Л., 1956, 21 с.

51. Карманов В.Г., Шпимович Б.Н. Микротермосопротивления. -В кн.: Передовой научно-технический и производственный опыт, Лм Сб. тр. Л ЭТИ, 1961, с. 58-62.

52. Кашафутдинова З.Н. Термометрический метод исследования иммунобиологических измерений. В кн.: Физические методы и вопросы метрологии биомедицинских измерений. Тезисы докладов IY Всесоюз.семинара-совещания 24-27 мая 1976, М., с. 255-257.

53. Ключарев JI.A., Воробьев А.А. Новые данные о механизмах синтеза антител на клеточном и молекулярном уровнях. ШШ,1974, № 8, с. 85-89.

54. Кондратьев Г.М. Регулярный тешювой режим. М., Гостехиздат, . 1954, 408 с.

55. Кондратьев Г.М. Тепловые измерения. М.-Л., Машгиз, Ленингр. отд-ние, 1957, 244 с.

56. Кочеровская Н.Ю. Иммунограммы как объективный метод изучения динамики соединения антигена с антителом. Медицинский журнал Узбекистана, № 5, 1977, с. 34-36.

57. Кочеровская Н.Ю., Тураханов I.B. Термисторный метод оценки иммунологических.реакций. Вопросы кибернетики, Ташкент,1975, вып. 83, с. I08-II0.

58. Кочеровская Н.Ю., Кадыров Х.К. Многоканальная установка для оценки иммунологических реакций. В кн.: Проблемы создания аппаратуры для медицинских лабораторных исследований. Тезисы докладов Всесоюз.конф. Л., 1979, с. II3-II4.

59. Кочеровская Н.Ю., Николаев А.И., Кадыров Х.К., Тураханов Х.В. А.С. № 730349 (СССР). Способ исследования реакции агглютинации. Опубл. в Б.И. 1980, Л 16.

60. Кравченко А.Т., Галанова Н.В. Третий фактор приобретенногоиммунитета. В кн. г Иммунология и аллергология клетки. М., Медицина, 1948, с. II8-I22.

61. Кришталь М.Ф., Каменская В.В. Прибор для исследования комплементарных процессов. В кн.: Полупроводниковые термочувствительные сопротивления в биологии и медицине. Новоси -бирск, Зап.-Сиб.книж.изд-во, 1966, с. 28-33.

62. Лавриненко В.Ю. Справочник по полупроводниковым приборам. -Киев, Наукова думка, 1966, с. 31-35.

63. Лебедев Д.П., Андреев Е.Ф., Геращенко О.А. Микробиокалори-метрия. Промышленная теплотехника,1981, № 6, с.74-93.

64. Левкоева Л.Г. Клиническое значение определения печеночных антител методом иммунотермистографии.при гепатитах и цирро- . зах печени. Автореф. дисс.канд.мед.наук. Рязань,1973, 18 с.

65. Лыков А.В., Михайлов Ю.А. Теория теплопроводности. М., Гостехиздат, 1963, 535 с.

66. Лавриненко В.Ю. Справочник по полупроводниковым приборам.-Киев, Наукова думка, 1966, 183 с.

67. Мацека Г.Х. Физико-химические методы и достижения молекулярной биологии. Исследов.физ. и хим.биологических процессов.1. Киев, 1978, с. 45-50.

68. Медуницын Н.В. Иммунофлуоресцентное исследование антитело-образования при повышенной чувствительности замедленного типа. Вестн. АМН СССР, 1964, № 10, с. 39-45.

69. Меликова Е.Н. Иммунология брюшного тифа. М., Медгиз, 1963, 227 е., с. 18-48.

70. Михайлов И.Ф. Изучение свойств комплекса антиген-антитело методом флуоресцирующих антител. ЖЭИД961, $ 3,с.28-32.

71. Михайлов И.Ф., Дьяков Р.И. Люминесцентная микроскопия. -М., Медгиз, 1961, с. 223.

72. Михайлов И.Ф. Изучение первой фазы серологических, ре акций методом флуоресцирующих антител. ВМЖД965, № 3,с. 14-18.

73. Михеев М.А. Основы теплопередачи. 2-е изд. М., Энергия, 1977, 343 с.

74. Ногаллер A.M., Левкоева Л.Г. Изучение аутоиммунных процессов с помощью метода иммунотермистографии при заболеваниях печени и сердца. Терапевт.арх.,1971, № 4, с. 70-73.

75. Ногаллер A.M., Левкоева А.Г. Сердечные антитела при инфаркте миокарда (иммунотермистографические исследования). -Терапевт.арх., 1974, № II,с.I08-II2.

76. Незлин Р.С. Биохимия антител. М., Наука,1966, 306 с.

77. Нечаев Г.К. Полупроводниковые термосопротивления в автоматике. Киев, Гостехиздат УССР, 1962, 254 с.

78. Николаев А.И., Платонова Л.Е. Методы определения аутоанти-тел и их сравнительная оценка. Ташкент, Медицина,1971, III с.

79. Никитин В.М. Справочник серологических реакций. Кишинев, Штиинца, 1977, 204 с.

80. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. Кишинев, Штиинца, 1982, 303 с.

81. Пантюхина Т.Н., Постников И.С. Качественное исследование простейших математических моделей иммунной реакции.

82. В кн.: Динамические биологические системы, Горький, йзд-во АН СССР, 1978, № 2, с.26-35.

83. Пархоменко И.М. Кинетика биологических реакций. В кн.: Биофизика, под ред. Тарусова Б.Н. и Колье О.Р. М., Высшая . школа, 1968, с. 48-85.

84. Петров Р.В. Иммунология. Учебник для мед.вузов. М., Медицина, 1982, 368 с.

85. Петров Р.В. Беседы о новой иммунологии. 2-е изд. М., Молодая гвардия, 1978, 222 с.

86. Пыркин В.И. Программное обеспечение вторичной обработки. -М., ВСЕГИНГЕО, 1977, 93 с.

87. Предводителев А.С. О молекулярном теплообмене в жидкостях.-Докл. АН СССР, 1950, № 72, с.623-634.

88. Привалов П.Л., Бунатян Р.А., Воробьев А.Ф. Герметический высокочувствительный калориметр с изотермической оболочкой для определения малых тепловых эффектов в растворах. Сб.докл. У Всесоюз.конф. по калориметрии. М., 1971, с.438-441.

89. Привалов П.Л., Хечинашнили Н.Н. Термодинамические.характеристики нативного состояния глобулярных белков. Сб.докл. У1

90. Всесоюз.конф. по калориметрии. Тбилиси,1973, с.524-528.

91. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология. Учебник дщя мед. . вузов. 4-е изд. М., Медицина, 1980,.511 с.

92. Резникова Л.С., Эпштейн-Литвак Р.В., Леви М.И. Серологические методы исследования при диагностике инфекционных болезней.

93. М., Госиздат.Медицинская литература, 1962, 365 с.

94. Розенфельд М.А., Хавкин Л.С., Пирузян Л.А. Микрокалориметрия как принципиально новый метод исследования состояния системы, свертывания крови в норме и при патологии. Мат. У1 Всесоюз. конф. по калориметрии. Тбилиси,1973, с.465-468.

95. Розенфельд М.А., Ерзинкяя K.I., Пирузян I.A. Исследование термодинамических параметров реакции комплексных молекул фибриногена и гепарина методом калориметрического титрования. -Мат. YI Всесоюз.конф. по калориметрии, Тбилиси,1973,с.469-471.

96. S. Сотсков B.C. Термисторы и их применение в схемах. M.-JE., Автоматика и телемеханика, 1948, 208 с.

97. Старикин 10.А. Возможность исследования интенсивности иммунологической реакции с помощью термисторов прямого подогрева. -В кн.: Вопросы биофизики. Новосибирск, Зап.-Сиб.книж.изд-во, 1967, с.55-60.

98. Старикин Ю.А. Молекулярно-кинетическая теория теплопроводности среды при иммунологической реакции. В кн.: Вопросы биофизики. Новосибирск, Зап.-Сиб.книж.изд-во, 1967, с.49-54.

99. Столяров А.В. Микрокалориметрические исследования биологических процессов. Автореф.дисс.канд.биол.наук. Новосибирск, 1974, 22 с.

100. Тананко Э.М. Применение метода термистографии в клинике туберкулеза. Автореф.дисс.канд.мед.наук, Новосибирск,1973,20 е.

101. Тимаков В.Д. Микробиология. Учебник для мед.вузов. М., Медицина, 1973, 430 с.

102. Тураханов Х.В., Кочеровская Н.Ю. Влияние величины тока на чувствительность термисторного метода при оценке иммунологических реакций. Вопросы кибернетики, вып. 84, Ташкент,1975, с. 56-58.

103. Удалов Н.П. Упрощенный метод расчета семейства вольтамперных характеристик полупроводникового термосопротивления. Известия ВТУЗов, раздел "Энергетика", 1958, $ 9.

104. Удалов Н.П. Полупроводниковые датчики. М.-Л., Энергия, 1965, 239 с.

105. Фальк П. Радиоиш!унологическш1 анализ. В кн.: Иммунологические методы. М.: Мир, с. 423-434.

106. Шашков А.Г. Терморезисторы и их применение. М., Энергия, 1967, 319 с.

107. Шашков А.Г. Методы определения теплопроводности и температуропроводности. М., Энергия, 1973, 336 с.

108. Шефтель И.Т. Терморезисторы (характеристики, конструкция и область применения). М.,Наука, 1973, 415 с.

109. Шляхов Э.Н. Иммунология, иммунодиагностика, иммунопрофилактика инфекционных болезней. Кишинев, Картя молдавеняскэ, 1977, 423 с.

110. Балш М.С. Введение в учение об инфекционных заболеваниях. -Бухарест, Меридиан, 1961, 665 с. (пер. с румын.).

111. Berggen W.L., Weller Т.Н. Immnnoelectrophoretic demonstration of specific circulating autigen in animals infected with schistosoma mansoni. Amer.J.trop.Med.Hyg.,1967,p.606-6l0.

112. Barisas B.G., Singer S.J., Sturtevant J.M. Thermodynamicsof the binding of 2,4-dinitrophenol and 2,4,6-trinitrophe-nol haptens to the homologous and heterologous rabbit antibodies. Biochemistry,1972,11,p.2741-2744.

113. Bolung E.A., Blanchard G.G., Russell W.J. Bacterial identification by microcalorimetry. Nature,1973,241,p.472-473.

114. Brown H.D. Calorimetry of enzyme-catalyzed reactions. Biochemical Microcalorimetry. N.Y.,Acad.Press,1969,p.149-165.

115. Brettel R., Gorti L., Lamprecht J., Schaarschmidt B. Combination of a continuous culture with a flow microcalorimeter. Studio Biophys., 1972, 34, p. 71-76.

116. Bloth В., Svehag S.E. Further studies on the ultra-structure of dimeric IgA of human origin. J.Exp.Med.,1971, 133, p. Ю35-Ю42.

117. Becken W. Single radial immunodiffusion. A method for determination of antiserum titres. Glin.Ghim.Acta,1969,23, p.509-510.

118. Бойд У. Основы иммунологии. Под ред. А.Е.Гурвича. М., Мир, 1969, 647 с. (пер. с англ.).

119. Braun P.G. , Hild К., Ziegler A. Resolution of immunoglobulin patterns by analytical Isoelectric focusing. In: Immunological Methods (I.Lefkovits, B.Pernis, eds.).- Academic, New York, 1979, p.107-121.

120. Бернет Ф. Клеточная иммунология. M., Мир, 1971, 542 с. (пер. с англ.).123» Coffino P., Laskov R., Scharff M.D. Immunoglobulin production: Method for quantitatively detecting variant myeloma cells. Science, 1970, 167, p. 186.

121. Grothers P.M., Methzeg H. The influence of polyvalency onthe binding properties of antibodies. Irnmunochemistry,1972, 9, p. 341-357.

122. Cliffe A.I., MacKinnon C.H., Berridge N.J. Microcalorimet-ric estimation of bacteria in milk. J.Soc.Dairy Technol.,1973, 26, p. 209-210.

123. Goons Л.Н., Creech H.J., Jones R. Demonstration of pneumococcal antigen in tissues by use fluorescent antibody. J.Immun., 1942, 45, p.159-170.

124. Eriksson R., Wadso J. Design and testing of a flow microca-lorimeter for studies of aerobic bacterial growth. Proc. First Europ.Biophys.Congr.,1971,4,p.319-327.

125. Eisen H.N., Karush P. The interaction of purified antibody with homologous hapten: Antibody valence and binding constant. J.Am.Chem.Soc.,1949,71, p.363-364.

126. Eisen H.N., Siskind G.W. Variations in affinities of antibodies during the immune response. Biochemistry,1964, 3, p. 996-1008.

127. Eisen H.N. Combining sites of anti-2,4-dinitrophenyl antibodies. In: Progress in Immunology. Academic Press, New York, 1971, p. 243-251.

128. Forrest W.W. Microcalorimetry. In: Methods in microbiology, v. 6B, London, Acad.Press, 1972, p.285-318.

129. Фробишер M. Основы микробиологии. M., Мир, 1965. 678 с. (пер. с англ.).

130. Грабар П. Иммуноэлектрофорез белков человеческой сыворотки. Биохимия,1957, № 22, с.49 (пер. с франц.).

131. Грабар П., Буртэн П. Иммуноэлектрофоретический анализ. -М., И.Л., 1963. 209 с. (пер. с франц.)

132. Gurevitch J., Ephrati E. The Production of Antibodies. Melbourne,1947,55, p.37.

133. Гауровитц Ф. Антитела и иммунитет. ГЛ., И.Л., 1970. 416 с. (пер. с англ.).

134. Holmes К.С., Blow D.M. The use of X-ray diffraction in the study of protein and nucleic acid structure. Methods Bio-chem.Anal., 1965,13,p.113-239.

135. Huber R., Deisenhofer J., Colman P.M., Matsushima M., Palm W. Crystallographic structure studies of an IgG molecule and an Fc fragment. Nature (London),1976,264,p.415-420.

136. Хорот А. Молекулярные основы патогенеза болезней. М., Медицина, 1982 (пер. с польск.).

137. Haselkorn P., Friedman S., Givol D., Pecht I. Kinetec mapping of the antibody combining site by chemical relaxation spectrometry. Biochemistry,1974,13,p.2210-2222.

138. Hornick C.L., Karush P. Antibody affinity. III. The role of multivalence. Immunochemistry,1972,9,p.325-340.

139. Huchet R., Peldmann M. Studies on antibody affinity in mice. Eur,J.Immunol.,1973,3,p.49-55.

140. Houpt T.R. Suction device for measurement of rumen exchange in vivo. Amer.J.Veterin.Res.,1968,29,p.201-204.

141. Hirst G.K. Blood immunity and Blood Relationship, 1941,94, p.22. Цит. по А.К.Шубладзе, С.Я.Гайдамович. Краткий курс практической вирусологии. М., Медгиз,1954, с.92-101.

142. Hussain Н.М. Onkologische Untersuchungen uber die Bedeu-tung thermophiler Mikroorganismen fur die Selbsterhitzung von Hen. Z.allg.Mikrobiol.,1973,13, S.323-324.

143. Jaworslci A., Sedlazek L., Czerniawski P., Zablocki B. Ther-mogenesis of the stable L-forms of Proteus mirabilis and their parent bacteria. Acta microbiol.,1968,17,p.219-230.

144. Jones М.Ж., Skinner H.A., Tipping E., Wilkinson A. The interaction between ribonuclease A and surfactants. J.Bio-chem.,1973,135,p.231-236.

145. Кебот E.A., Мейер M.M. Экспериментальная иммунохимия. М., И.Л. 1968, 512 с. (пер. с англ.).

146. Кальве Е., Пратт А. Микрокалориметрия. М., И.Л. 1963. 477 с. (пер. с франц.).

147. Karush P. Affinity and the immune response. Ann.H.Y.Acad. Sci., 1970,169, p.56-64.

148. Купер Э. Сравнительная иммунология. -M.,Мир,1980. 422 с.

149. Квапинский Е. Молекулярная организация и ассоциация. В кн: Молекулярная микробиология. М., Мир,1977.520 с.(пер.с англ.)

150. Kwapinski G., Kwapinski Е., Webb C.J. Studies on circulating gonococcal antibodies and antigens. Can.J.Microbiol., 1978.24, Л 2,p.109-111.

151. Кеянот Р.» Мак-Керн Г.Дж., Бехтол К.Б. Моноклональные антитела (гибридомы: новый уровень биологического анализа).

152. М., Медицина, 1983,с.387-406. 416 с.

153. Lamprecht I., Meggers С., Stein Y/. Mikrokalorimetrische Untersuchungen zum Stoffwechsel von Hepen. I.Wachstum in fliissigen Medien. Biophysik,1971,8, 42-52.

154. Lamprecht I., Lochmann E.R., Pietsch J., Uttech K. Microca-lorimetric experiments on a cellfree protein synthesizing system of Saccharomyces. Ins Proteides of the Biological Fluids, v.20,Oxford, Pergamon Press,1973,p.551-553.

155. Lamprecht I., Schaarschmidt В., Welge G. Microcalorimetric investigations of the metabolism of yeast. V. Influence of ploidy on growth and metabolism. Rad.Environm.Biophys., 1975, 12,p.177-180.

156. Landsteiner K. The Specificity of Serological Reactions, 2nd rev.ed., Harvard University Press, Cembridge,1945, p. 124.

157. Leskowitz S. Immunochemical study of antigenic specificity. J.exp.Med., 1963, 117, p. 909-915.

158. Levin K. Heat production by leucocytes and thrombocytes measured with a flow microcalorimeter in normal man and during thyroid disfunction. Clin.chim.Acta,1971,32, p. 87-94.

159. Levin К., Boyo A.E. Heat production from erythrocytes. Scand.J.Clin.Lab.Invest.,1971,27,p.118-125.

160. Литмен Г.В., 1Уд P.A. Иммуноглобулины. M., Мир., 1981. 495 с. (пер. с англ.).

161. Mamet-Bratley M.D. Evidence concerning homogeneity of the combining sites of purified antibody. Immunochemistry, 1966, 3, p.155-159.

162. Matthews B.W. X-ray crystallographic studies of proteins. Ann.Rev.Phys.Chem.,1976, 27, p.493.

163. Нейчев С. Клиническая микробиология. София. Медицин.физкультура, 1977, 316 с. (пер. с болт.). '3. Носсал Г.Ж. Антитела и иммунитет. М., Медицина, 1973. 116 с. (пер. с англ.).

164. Oudin J. Genetic regulation of immunoglobulin synthesis.

165. Canad.biol., 1953, 12,p.19-34. r8. Pauling L. Molecular Structure and Biological Specificity.

166. American Institute of Biological Science. Washington.D.S. 1957, p.23-51.

167. Poljak R.J., Amzel L.M., Chen B.L. Phizackerley R.P., Saul F. Structure and specificity of antibody molecules. Philos. Trans.R.Soc. London , 1975,272,p.43-51.

168. Porter R. Chemical structure of Ig-globulin antibodies. Brit.med.Bull.,1963, 19,p.197-199.

169. Porter R.R. The hydrolysis of rabbit Y-globulin and antibodies with crystalline papain. Biochem.J.,1959,73,p.119-127.

170. Pressman D. The chemical nature of the combining site of antibody molecules. In: Conceptual Advances in Immunology and Oncology. Academy Press,New York,1963, p.290.

171. Richards F.F., Konigsberg W.H., Rosensteih R.W., Varga J.M. On the specificity of antibodies. Science,1975,187,p.130-137.

172. Sage H.J., Deutsch H.F., Fasman G., Levine L. The serological specificity of the polyalanine immune system. Immuno-chemistry,1964,1,p.133-144.

173. Schwartz M., Hancet D., Mozes E., Sela M. Affinity and avidity of antibodies to the random polymer (T,G.)-A-b and relatedordered synthetic polypeptides. Immunochemistry, 1978, 15» p. 477-480.

174. Шпегель Г. Общая микробиология. М., Мир, 1972 . 475 с. с. 202-236 (пер. с нем.).