Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение очагов клещевого энцефалита, геморрагической лихорадки с почечным синдромом и крымской-Конго геморрагической лихорадки в Крыму

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Изучение очагов клещевого энцефалита, геморрагической лихорадки с почечным синдромом и крымской-Конго геморрагической лихорадки в Крыму"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МВДНЦИ15СКИ>: НАУК ИНСТИТУТ ПОЛИОМИЕЛИТА И ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ

РГВ од

3

На права;! рукописи УДК 616. 98. 578.833. 26-07

МАРКЕШН СЕРГЕЙ ЯКОВЛЕВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ ОЧАГОВ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА, ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ • ~ ПОЧЕЧНЫМ СИЛДГОМОМИ И КРЫМСКОЙ-КОНГО ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ

В КРЫНУ

03.00.06 - Вирусология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Иоскыа,1994 р ^

С/ "

Работа выполнена в Институте полиомиелита и вирусных энце фалитов Российской Академии Медицинских Наук и в Крымской проти ьючумной станции Министерства Здравоохранения Украины.

Научные рукс>водитоли:

доктор медицинских наук, профессор, Е.А.Ткачеико кандидат медицинских наук Д.С.Караванов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, Я). А. Мясников доктор медицинских наук, профессор, И.С.Воробьева

Ведущая организация: Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов тага-.ни Л.Л.Тарасузича ИЗ РФ

За*«ита состоится " (0 " ХАМЩлИ- __193Чг. и № иа

«оседания.Шециатяйзигге-ашюго-"Уч;лзлго Сс&хеа Д. 001.7.7.01 . —¿н Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов Российской АНН (142782»Московская область^ Ленинский район, п/о Институт полно -миелита)-

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института полиомиелита и вирусных энцефалитом АМН России.

Автореферат разослан •Л.У" 1Л/У1 ЛМЫЛ 189 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета,

каадщат биологических нале О. А. Медзедкииа

ОЕЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Значительный прогресс в разработке и усовершенствовании современных высокоэффективных диагностических методов, а также их использование для обследования различных по своей природе материалов позволили провести широкие исследования по выявлению и изучению природных очагов различных вирусных инфекций. К таким наиболее распространенным природао-очаговым инфекциям следует отнести геморрагическую лихорадку с почечным синдромом < ГЛПС) и клещевой энцефалит С КЭ). Ежегодно регистрируемая заболеваемость ГЛПС и КЭ на территории стран бывшего СССР намного превосходит показатели заболеваемости людей другими при-родно-очаговыми инфекциями вместе взятыми. Обнаружение циркуляции хантавирусов среди мелких млекопитающих во многих регионах мира указывает на убиквиггарное их распространение. Периодически возникающая активизация природных очагов несегг серьезную угрозу заражения людей ГЛПС. Результаты исследований разных авторов за последние голы позволили значительно расширить представление о нозоареале ГЛПС и определить наличие вируса на территориях, где ранее случаи заболевания этой инфекцией не регистрировались. При этом, выявлен довольно высокий процент случаев заболевания с атипичным течением болезни, с симптомами для него нехарактерными. Наглядным подтверждением этого факта явились впервые зарегистрированные в США в конце 1992 г. и первой половине 1993 г. случаи заболевания лвдей с ярковыраженной симптоматикой, характерной для респираторных инфекций. В результате лабораторного обследования материалов от больных Шла установлена этиологическая роль хантавируеа в этих заболеваниях. Несмотря на отсутствие у больных геморрагического и почечного синдромов, заболевания протекали очень тяжело и в 60 % закончились летальными исходами.

Возрастание эпидемиологической значимости клещевого энцефа лита за последние года, повсеместный рост заболеваемости объясняется повышением активности природных очагов этой инфекции, ухудшением экологической обстановки и снижением иммунореактивно-сти населения.

Вероятно, в ближайшее время следует ожидать активизации природных очагов и крымской-Конго геморрагической лихорадки, о чем свидетельствуют зарегистрированные летом 1993 г. в Ростовской на Дону области (после более, чем 20 летнего перерыва) 5 случаев заболевания этой инфекции, 2 из которых закончились, летальным исходом.

Целесообразность проведения исследований по выявлению и изучению природных очагов вышеперечисленных инфекций на территории Республики Крым обусловлена особенностями этого региона (географическое расположение, климатические условия, растительность и животный мир), благоприятствующими циркуляции и сохранению вирусов-возбудителей этих инфекций в природе.. Кроме того, регулярно поступающие из медицинских учреждений сведения о случаях заболеваний неясного происхождения, сопровождакхцихся лихорадочными проявлениями, вызывали необходимость их этиологической расшифровки и установления возможной принадлежности этих заболеваний к природно-очаговым вирусным инфекциям.

Цель исследования. в связи с вышеизложенным, нами были проведены широкие исследования по выявлению и изучению природнш очагов вирусов-возбудителей КЗ, ГЛПС и ККГЛ в Крыму, выяснении особенностей их циркуляции и эпидемиологической значимости I краевой патологии человека.

Задачи исследования :

1. Определить территориальную приуроченность природных очагов КЭ, ГЛПС и ККГЛ и очагов с сочетанной циркуляцией возбудителей указанных инфекций.

2. Определить струхтурнные особенности природных очагов КЭ, ГЛПС и ККГЛ в различных ландшафтных зонах полуострова Крым.

3. Установить характер эпизоотического процесса при ГЛПС в различных зонах полуострова.

4. Выделить на территории Крыма штаммы вирусов КЭ, ККГЛ, а также хантавирусов и изучить их антигенные взаимоотношения со штаммами, изолированными ранее в других регионах.

5. Определить степень потенциальной эпидемической опасности очагов вирусов КЭ, ГЛПС и ККГЛ в Крыму.

8. Изучить клинико-эпидемиологические особенности КЭ в Крыму.

Научная новизна. В результате проведенных исследований получены новые данные, имеющие приоритетное значение в изучении КЭ и вирусных геморрагических лихорадок: впервые установлена циркуляция хантавирусов в Крыму, а также существование на его территории природных очагов с сочетанной циркуляцией хантавирусов, вирусов КЭ и ККГЛ; уточнены границы очаговых территорий циркуляции этих вирусов, видовой состав млекопитающих-носителей хантавирусов, видовой состав клещей-носителей вирусов КЭ, ККГЛ в природе; впервые в Крыму выделены штаммы хантавируса, вирусов КЭ и Баткен, которые были подвергнуты антигенному идентифицированию с целью выяснения их принадлежности к отдельным серотипам этих вирусов; определена степень напряженности естественного иммунитета населения Крыма по отношению к хантавирусам, вирусам КЭ и ККГЛ; определены клинико-эпидемиологические особенности КЭ.

-В-

Практическая значимость

Уточнение ареала и выяснение особенностей циркуляции ханта-' вирусов и вирусов КЭ и ККГЛ на территории республики Крым открывают перспективу для оценки степени активности пригодных очагов инфекций, вызываемых этими вирусами, и своевременного проведения соответствующих противоэпидемических мероприятий. Научно обоснована и внедрена в практику здравоохранения Крыма система лабораторной диагностики КЭ, ГЛПС и ККГЛ, а также система рациональной профилактики КЭ, что нашло отражение в подготовленных совместно с органами здравоохранения Крыма методических документах.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. На территории Крымского полуострова выявлены ранее неизвестные природные очаги вируса КЭ и хантавирусов.

2. Установлено, что природные очага КЭ в Крыму являются ри~ цинусными очагами "европейского" типа.

3. Уточнены границы очаговых территорий циркуляции хантавирусов и вирусов КЭ и ККГЛ, определен видовой состав млекопитающих-носителей хантавирусов, а также видовой состав клещей-носителей вирусов КЭ, ККГЛ в природе.

4. Определен уровень напряженности естественного иммунитета к хантавирусам и вирусам КЭ и ККГЛ у населения Крыма.

5. Выделены штаммы хантавируса и вирусов КЭ и Баткен, изучены их антигенные характеристики.

6. В результате анализа клинико-серологических данных установлено преобладание лихорадочных и стертых форм клиническогс течения КЭ в Крымских очагах этой инфекции.

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации были доложены на Республиканской научно-практической конференций (Ижевск, 1990), на Всесоюзном симпозиуме "Современные проблем!

эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита" (Иркутск, 1990), на Всесоюзном симпозиуме "Арбовирусы и арбови-русные инфекции" (Москва, 1991), на Международном симпозиуме по ГЛПС (Ленинград, 1991), на конференции Украинского научного общества паразитологов (Киев,1993),на расширенном заседании научно- практического совета Крымской противочумной станции МЗ Украины (27декабря 1993 г.). Апробация материалов диссертации состоялась на заседании межлабораторного Ученого совета Института полиомиелита и вирусных энцефалитов Российской АМН 29 апреля 1994г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 научных работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 160 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований (3 главы), заключения, выводов и списка 'литературы (179 источников, из них: 115 отечественных и В4 зарубежных авторов). Иллюстрирована В4 рисунками и 32 таблицами.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ В соответствии с целью и основными задачами диссертации обзор литературы содержит информацию об этиологии, эпидемиологии и о географическом распространении клещевого энцефалита, хантави-русных инфекций и Крымской-Конго геморрагической лихорадки.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Исследования проводили на территории Крымского полуострова, включая практически все ландшафтно-географические зоны республики. За период с 1985 по 1990 гг. было собрано и обследовано вирусологическими и серологическими методами 19644 мелких млекопитающих 21 вида, 35170 клещей 9 видов, а также 10742 сывороток

здорового населения республики, 477 - от больных, людей и 1268 -от сельскохозяйственных животных. Для выявления специфических антигенов вирусов КЭ, ККГЛ и хантавирусов в материалах, собранных от мелких млекопитающих и клещей использовали иммуносорбент-ные методы иммуноферментного (ИФМ) и •радиоиммунологического (РИА) анализа, а также реакцию непрямой гемагтлютинации (РИГА). Для обнаружения антител к вышеуказанным вирусам в сыворотках крови людей и животных, а также для идентификации вновь выделенных штаммов применяли прямой и непрямой методы иммунофлюоресцен-ции (МФА) и реакцию связывания комплемента (РСК). В процессе работы использовали штаммы хантавирусных серотипов Хантаан, Пуума-ла, Сеул, Проспект Хилл и вируса КЭ (штамм "Софьин"). Для выделения штаммов вирусов КЭ использовали перевиваемую культуру клеток СПЭВ, а для выделения вирусов ККГЛ и хантавирусов - клетки Yero Е8. Изучение антигенной структуры штаммов вируса КЭ, выделенных на территории Крыма, проводили с помощью моноклональвых атител к гликопротеину Е вируса КЭ, полученных сотрудниками Новосибирского НИИБХ СО РА и Института полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН России (панель из 12 моноклонов, идентифицирующих отдельные эпитопы в трех доменах - А,В,С).

С целью классификации выделенных в Крыму хантавирусных лгга-ммов провели их исследование с моноклональными антителами, приготовленными к представителям 3 хантавирусных серотипов: Хантаан, Сеул, и Пуумала, а также использовали Хантаан-типоспецифи-ческий моноклон "А" и Сеул-типоспецифический моноклон "R".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Изучение региональных особенностей очагов клетевого энцефалита в Крыму О циркуляции вируса клещевого энцефалита (КЭ) на территории

северо-западного Причерноморья стало известно в 70-е толп. Изоляция вируса КЭ из клещей, грызунов и птиц, собранных и отловленных в Крыму, обнаружение специфических антител к вирусу в сыворотках птиц и людей, а также выявление серологически подтвержденных случаев КЭ дали основание предполагать существование на Крымском полуострове природных очагов этой инфекции. Дальнейшее изучение показало, что эти очаги являются типичными очагами КЭ "европейского" типа с основным видом переносчика европейским лесным клещом - X.ricinus. Ареал последнего совпадает с распространением лесных массивов в горной, предгорной и южнобережной зонах. Распределение клещей по территории в пределах ареала носит ярко выраженный локальный характер. Такой особенностью распространения клещей обусловлено и наличие на территории горнолесной зоны Крымского полуострова локальных, изолированных природных очагов КЭ. По результатам вирусологических исследований, проведенных в 1986-1990 гг., были уточнены границы 4 ключевых участков очагов КЭ. По природпо-климатическим условиям и составу ака-рофауны они подразделены на очаги Северного (Тополевский, Бала-новский и Краснолесненский) и Южного (Гурзуфский) макросклонов Крымских гор. Анализ степени зараженности клещей вирусом КЭ показал, что для Крымских очагов КЭ характерен низкий уровень ви~ русофорностИ клещей (0.52Х). Активность эпизоотического процесса в очагах меняется с изменением мезоклимата каждого очага. Выявлены различия в активности очагов северного и южного макросклонов. Для первых характерны сезонные изменения активности с весенним и осенним пиком вирусофорности клещей, очаги КЭ южного макросклона характеризуются менее выраженной сезонной активностью.

В результате вирусологического обследования полевых матери-

алов, собранных на територии Крыма, алло выделено 63 штамма вируса КЭ из клещей I.ricinus и 2 штамма из крсши больных КЭ с подтвержденным лабораторными исследованиями диагнозам. С помощью моноклональных антител (МКА) к гликопротеину Е вируса КЭ проведены исследования по изучению антигенной структуры 13 штаммов, изолированных от клещей, собранных на территории различных очагов КЭ. Было обнаружено, что пять штаммов, выделенные из клещей I. ricinus, собранных на территории Крымских очагов, имели антигенные отличия от эталонного штамма "Софьин" по одному из 3 доменов гликопротеина Е. Два штамма (Крым 12 и Крым 14), наделенные на территориии Краснолесвенского очага имели отличия по МКА . Последний по топологической структуре связан с зоной перекрытия поддоменов 1 и 11 в домене А белка Е. Степень гомологичной связи этого мовоклона с штаммами Крым 12 и 14, по сравнению с эталонным штаммом "Софьин", не превышала 0,052. Титр МКА со штаммами Крым 12 и Крым 14 был меньше 1:1000 в то время) как с эталонным штаммом "Софьин" титр моноклова составил 1:256 000 -1:512 000. По этому эпитопу крымские штаммы резко отличались от вируса, выделенного на Дальнем Востоке. Штамм Крым 132, изолированный из клещей I. ricinus, собранных на территории Большой Ялты (Гурзуф), практически не вступал в специфическое взаимодействие с МКА ЗВ^, (домен А). Степень гомологической связи с эталонным штаммом не превышала 0,32, что также свидетельствовало об антигенных отличиях этого штамма. Штаммы Крым 667 и 668, выделенные из клещей,собранных на территории Балавовского очага (предгорная зона), отличались от эталонного штамма "Софьин" по МКА 5В5 (домен А). Степень родства по отношению к штамму "Софьин" не превышала 1,22. Остальные 8 штаммов не дифференцировались ни одним из 12 МКА.

Такимобразом на территории Крыма циркулируют как штаммы идентичные дальневосточному штамму "Софьия", так и отличающиеся особенностями антигенной структуры. Все отличия в антигенной структуре выделенных штаммов топологически связаны с изменениями в эпигонах домена А, что представляет большой интерес и является, возможно, отличительной чертой циркулирующих в природных очагах Крыма штаммов КЭ.

Прямым доказательством эпидемиологической значимости циркуляции вируса КЭ на территории Крыма является изоляция из крови 2 больных КЭ штаммов вируса, идентичных по своей антигенной характеристике клещевым иэолятам вируса КЭ из Крымских очагов.

Изучение иммунного статуса населения Крыма в отношении вируса КЭ, выявившее значительный процент иммунных (13,91*) среди жителей горнолесаой зовы полуострова, также свидетельствует о потенциальной эпидемичесхой опасности КЭ на этой территории Крыма. Равный по величине показатель иммунной прослойки к вирусу КЭ, почти всех районов горнолесной зоны (12-18Х) указывает на значительное количество локальных природных очагов КЭ на этой территории.

Анализ иммуноструктуры профессиональных и возрастных групп населения позволил выделить группы риска и условия, способствующие заражению людей вирусом КЭ (Рис. 1). Коитингентами наибольшего риска заражения КЭ являются студенческая молодежь и лица, профессионально связанные с лесом, а основными факторами, способствующими заражению, - профессиональная, хозяйственно-бытовая деятельность и отдых людей в лесу. Эти данные подтвердились при анализе факторов, способствующих возникновению заболевания. Было установлено, что 84,9% заболевших КЭ заразились во время отдыха в лесу и парках, при сборе грибов и ягод, а у 11,9% - эаболева-

РИС. 1

ИММУНОСТРУКТУРА НАСЕЛЕНИЯ КРЫМА К ВИРУСУ КЛЕЩЕВОГО

ЭНЦЕФАЛИТА

СОЦИАЛЬНО-ПРОФЕССИОНАЛЬНЫЕ ГРУППЫ:

9 - ПРОЧИЕ

1 - ДОШКОЛЬНИКИ

2 - ШКОЛЬНИКИ

3 - СТУДЕНТЫ

4 - РАБОЧИЕ

5 - СЛУЖАЩИЕ

6 - РАБОТНИКИ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА ? - ДОМОХОЗЯЙКИ И ПЕНСИОНЕРЫ

8 - ЛИЦА, ПРОФЕССИОНАЛЬНО СВЯЗАННЫЕ С ЛЕСОМ

N

(

ние связано с профессиональной деятельностью в лесу.

Всего за период 1985-1990 гг. в Крыму официально зарегистрировано 109 случаев КЭ: 98 у жителей Крыма и 11 у приезжих.

Показатель заболеваемости КЭ по республике в целом составляет 3,08 на 100 тыс. населения. Зоной наибольшего риска заражения КЭ является горный Крым, для населения которого характерны наиболее высокие показатели иммунной прослойки (14%) и заболеваемости КЭ (7,6? на 100 тыс. населения).

Эпидемиологическое обследование официально зарегистрированных случаев КЭ показало, что почти все заболевшие (98Х), включая и жителей степных районов, за последние 10-20 дней до начала заболевания посещали лес. 782 больных отмечали присасывание клещей. В 4 случаях источником заражения КЭ было молоко.

Заболевания КЭ в Крыму регистрируются, в основном, в весен-не-летне-осенний период. Первые случаи появляются в конце апреля- начале мая (0,18 на 82-100 тыс. населения), пик заболеваемости - в июне-начале июля (1,4 па 100 тыс.), последние случаи КЭ регистрируются в октябре, иногда в ноябре.

По статистическим данным областного отдела здравоохранения за период 1985-1990 гг. в лечебных учреждениях Крыма лечилось и обследовалось в связи с подозрением на КЭ более 470 человек. На основании клинико-зпидемиологических и серологических данных диагноз КЭ был установлен у 109 больных. Согласно принятой классификации все случаи заболевания КЭ в республике были распределены в 4 группы в соответствии с формой клинического проявления инфекции (Табл, 1).

В 1991 г. было проведено ретроспективное исследование случаев заболевания, сходных по клиническим проявлениям и эпидемиологическим данным с КЭ, наблюдавшихся в 1987-1990гг. в Белогорс-

ком, Алуштинском, Симферопольском районах и Большой Ялте. В 27 случаях из 72 в крови обследованных были обнаружены антитела к вирусу КЭ с титром не ниже 1:1280.

Таблица 1 .'Клинические проявления КЭ в Крыму за период 1985-1990 гг.

Клинические формы Распределение заболеваемости КЭ по клиническим формам

по /111/ 1985г. 1986г. 1887г. 1988г. 1989г.| 1990г. Всего

Обследовано больных 98 52 92 116 47 72 477

Диагноз 26/26,51 установлен 6/13,1 36/39, 1 25/28,4 2/^,25 14/19,4 109/22,9

из них: Лихора- 12/50 дочная 4/66,7 21/58, 3 20/80,0 2/100 7/50,0 66/61,5

Менин- 9/34,6 геальная - 9/25, 0 2/8,0 - 2/14,3 22/20,2

Очаго- 1/3,8 вая - 2/5,6 - - 2/14,3 5/4,58

Стертая 4/15,4 2/33,3 4/11, 1 3/12,0' - 3/21,4 16/14,6

абсолютное число заболевших / X от числа заболевших КЭ в даном году.

Таким образом, можно с большой долей вероятности предполагать, что истинное количество случаев КЭ в Крыму превышает число официально зарегистрированных. Очевидно, большинство случаев КЭ может протекать под другим диагнозом вследствие легкого течения этого заболевания в регионе.

Изучение иммунного статуса населения Крыма к вирусу КЭ и

»

клинико - эпидемиологическое обследование случаев заболевания КЭ позволило выделить горнолесную зону полуострова, как наиболее эпидемически опасную по КЭ территорию, определить способствующие заражению людей вирусом факторы, которыми в крымских очагах кв-

пяются профессиональная, хозяйственно-бытовая деятельность и отдых людей в лесу. Основной источник инфицирования вирусом ХЭ в Крыму - клещ I. ricinus, осуществляющий передачу вируса трансмиссивным путем. Особенностью клинического проявления КЭ в Крыму является преобладание лихорадочных и стертых форм инфекции, при которых эффективность выявления больных КЭ в значительной степени обусловлена своевременной постановкой лабораторного диагноза КЭ.

Распространение и особенности циркуляции хантавирусов в Крыму

Для изучения ^ареала хантавирусов и особенностей их циркуляции на территории Крыма нами обследовано 19 644 зверьков 21 вида, относящихся к 4 отрядам, 8 семействам и 15 родам млекопитающих.

Хавтавирусные антиген и антитела выявлены у 12 видов мелких млекопитающих, относящихся к 5 семействам. В степной зоне антиген обнаружен в легких 5 видов животных, на Керченском полуострове - у 7, в предгорной - у 9, в Горной - у 6 видов.

По результатам ежегодного обследования зверьков определены границы ареала хантавирусов на территории республики Крым. В соответствии с показателями частоты выявления инфицированных хан-тавирусами животных, территорию Крыма следует отнести к природ-во-очаговым территориям с низкой степенью активности хантавирусов (показатель частоты зараженности зверьков в среднем по Крыму составляет 2.03Х). При этом в районах степного Крыма эти показатели составляют 1,22, на Керченском полуострове - 1,3%, в очагах предгорья - 3.13Z, в горах - 4,03%.

Результаты пятилетнего наблюдения за очагами позволили выделить на территории полуострова 2 типа природных очагов циркуляции хантавирусов, различающихся по своей биоценотической и

простраяствеыной структуре: степные, циркуляцию »«руса в которкс обеспечивают, в основном, доминирующие здесь домовая и лecнaJ мыши; очаги горно-лесного типа с основными носителями хантавиру-сов - обыкновенной полевкой и лесной и желтогорлой мышами. Наблюдения за характером эпизоотического процесса в популяциях основных носителей позволили сделать заключение о том, что на фон< персистенции вируса в организме животного имеют место период) активной ©го репродукции. Отмечаются различия цикличности эпизоотического процесса ко длительности в очагах степного и горнолесного типа, не совпадают также годовые и сезонные пики эпизоотической активности. В связи с этим прогнозирование эпизооти* хантавирусов в Крыму возможно только для каждого типа природам; очагов в отдельности.

Для выделения хантавирусов были использованы материалы 01 мелких млекопитающих, отловленных в 1989 г. в 2-х районах горно4 зоны Крыма: в центральном районе Главной горной гряды <с.Краснолесье) и в восточном районе гряда (урочище Кок-Асан). В результате вирусологического обследования легочных суспензий от 31 животного, включая 28 обыкновенных полевок, 2 желтогорлых мышей I 1 малой белозубки, было выделено 7 хантавирусных штаммов. Все штаммы были выделены от обыкновенных полевок, отловленных в урочище Кок-Асан.

Серологическая идентификация, проведенная с помощью дифференцирующих поликлональных сывороток реконвалесцентов после ГЛПС, а также с использованием моноклональаых антител, приготовленных к штаммам 3-х хантавирусных серотипов: Хантаан, Пуумапа > Сеул, (Табл.2)свидетельствует о том, что выделенные нами от обыкновенных полевок (Н. агуаНз) штаммы являются близкородственными (но неидентичными) хантавирусвому ссротипу Проспект Хилл.

Таблица 2. Антигенная дифференциация хантавирусных штаммов, выделенных в Крыму

Моноклоналъные антитела

Штаммы НАНТААЯ 76- -118 БЙ- 11

03-4 04 -3 С8-11 В1-4 А7 -4 09- -5

-6 -5 8 -4 -4 -4 -8

Напгаап 76-118 + 4- + 4- - - 4- +

Зеои1 80-39 + + - + 4- 4- 4- -

ВоЪкапо 4- - - - - + 4- -

Р.НИ1-1 + - - + - + 4- -

На11паг 83-223 + - - - - + 4- -

СБ-1820/Уфа-83 + - - - - 4- 4- -

СС-343/Саратов-86 + - - - - + 4- -

МР-43/Ха6аровск-89 + - - + - + 4- -

ИР-113/Ха6аровск-90 + - - 4- - 4- 4- -

. МА-34/Крым-92 + - - 4- - + 4- -

.НА-35/Крым-92 + - - + - 4- 4- -

.МА-Зв/Крым-92 + - - + - 4- 4-

.ИА-40/Крым-92 + - - 4- - 4- 4- -

Штаммы Монсклональные антитела к: вирусу НаИпаэ 83-2

5А2 4С2 5В7 1С12 ЗЕ11 ЗН9 5К1 Зв5 5АЗ

Нап1аап 76-118 - - - 4- 4- - - - 4-

Зеоч1 80-39 - - 4- +. - - - 4-

БоЪкаво + + 4- 4- 4- + 4- 4- 4-

Р.Н111-1 - - - + 4- - - 4- -

НаИпаэ 83-223 + 4- + + 4- 4- 4- 4- +

С&-1820/Уфа-83 + + 4- - - 4- 4- 4- -

Сй-343/Саратов-88 + + 4- + 4- 4- + 4-

МК-4 3/Хабаровск-89 - - ( + > + 4- 4- + - 4-

МР-113/Ха6аровск-90 - - - + 1- 4- 4- - 4-

.МА-24/Крым-92 - - - + + 4- - + 4-

,НА-35/Крым-92 - - - + 4- 4- - 4- 4-

.МА-Зб/Крым-92 - - - + 4- 4- - + 4-

.НА-43/Крым-92 - - - + + + - 4- 4-

Возможно, что серотип Проспект Хилп обладает высокой антигенной вариабильность», что обусловливает существование в составе этого серотипа отдельных подтипов. Не исключено, что штаммы выделенные в Крыму относятся к одному из таких подтипов.

Рядом авторов ранее были высказаны предположения о том, что хантавирусные штаммы, относящиеся к серотипу Проспект Хилл и циркулирующие среди"полевок рода Н1сго1иу не имеют этиологической значимости в структуре заболеваемости ГЛПС. Возможно и крымские штаммы являются непатогенными для человека, либо вызывают атипичные клинические формы заболевания. Для окончательного выяснения этого вопроса потребуется проведение широких комплексных клинико-серологических исследований, обеспеченных высокочувствительными диагностическими методами.

В 1985-1990 гг. с целью выявления возможных случаев заболевания ГЛПС было Проведено серологическое обследование 317 больных из различных районов Крыма с заболеваниями, в клиническом течении которых имелись сходные с ГЛПС симптомы.При исследовании парных сывороток крови этих больных в МФА с поливалентным ханта-вирусным антигеном выявить специфические антитела к хантавирусам не удалось ни в одном случае.

За период 1987-1989 гг. нами обследовано на присутствие антител к хантавирусам 6901 сывороток крови, собранных от здорового населенияболывинства административных районов Крыма. Частота выявления серопозитивных лиц к хантавирусам в целом по Крыму составила 0,62.

Оценка состояния природных очагов крымской-Ком'о геморрагической лихорадки (ККГЛ) в Крыму Изучение спонтанной инфицированности вирусом ККГЛ иксодовых клещей проводили на материалах, собранных на территории 18 райо-

вов Крыма. Всего исследовано 8842 экземпляра (в 722 пробах) 9 видов иксодовых клещей. Из 480 проб клещевых суспензий, которыми заражали новорожденных белых мышей, выделить штаммы вирусов ККГЛ не удалось. С помощью метода иммуноферментного анализа била определена инфицированность вирусом ККГЛ клещей Н.marginatum ваг-ginatun, Н.punctata, D.marginatus, I.ricinus. Инфицированные особи H.narginatun narginatun обнаружены практически во всех зонах: в степной - Красногвардейский и Симферопольские районы, в предгорной - окрестности г.Севастополя и южная часть Симферопольского района (с.Мраморное), в горной - Бахчисарайский район. Инфицированные особи Н.punctata, D.narginatus и I.ricinus обнаружены, в основном, на территории горнолесных массивов Симферопольского (с. Краснолесье), Белогорского (окрестности с.Балано-во) и Алуштинского районов.

Таким образом, подтверждены данные о возможности спонтанного инфицирования вирусом ККГЛ в Крыму 4 виде® иксодовых клещей, в том числе, впервые для данного региона установлено участие в этом процессе клещей D.narginatus. Клещи Н.narginatun narginatun сохраняют способность трансовариальной передачи вируса ККГЛ потомству.

Для изучения степени участия животных в циркуляции вируса ККГЛ в 1986-1990 гг. обследовано 3297 мелких млекопитающих 9 видов, из которых 970 исследованы в ИФА на наличие антигена ККГЛ в ,' печени и селезенке и 2847 в РСК и МФА на присутстие в сыворотках антител к этому вирусу. Получены данные, которые свидетельствуют о том, что в разных ландшафтных зонах Крыма в поддержании циркуляции вируса ККГЛ могут принимать участие отдельные виды диких животных-прокормителей преимагинальных форм иксодовых клещей, такие как заяц-русак, обыкновенная полевка, малая белозубка.

лесная и домовая мыши.

По результатам ваших исследований из 10742 проб сывороток людей, собранных на территории 18 районов Крыма, только в 51 сы~ вороткебыли выявлены антитела к вирусу ККГЛ, т.е. иммунная прослойка к этому вирусу, в среднем по республике Крым, составила 0,52. Анализ иммунной структуры показал, что 95% серопозитивных лиц составили жители сельской местности, занятые в сельскохозяйственном производстве, при этом животноводы составили 30,8Х.

Проведено исследование 2300 сывороток КРС из 5 районов Крыма. Животных обследовали в хозяйствах, где выявили серопозитивных к вирусу ККГЛ людей. В 3 из 5 обследованных хозяйствах в сыворотках крови животных нами обнаружены вирусспецифические к вирусу ККГЛ антитела. Необходимо отметить, что скот в хозяйствах Крыма находится на стойловом содержании, что ограничивает контакт его с клещами - переносчиками вируса. Очевидно, это является одним из факторов, обусловливающих низкий процент (0,5-0,8%) обнаружения у животных антител к вирусу ККГЛ.

Все указанные факторы обеспечивают длительное существование очагов ККГЛ в Крыму. По сравнению с природными очагами этой инфекции в Астраханской области, где ежегодно регистрируются случаи заболевания лвддей и выделяются штаммы вируса ККГЛ из клещей, состояние Крымского очага можно характеризовать, как незначительной степени напряженности. Обнаружение антител к вирусу ККГЛ у людей указывает на возможность инфицирования человека во всех ландшафтных зонах Крыма. Низкая активность Крымского очага ККГЛ может быть результатом интенсивного землепользования, повсеместного в республике перевода скота на стойловое содержание,, а также резкого сокращения численности зайцев на территории охотничьих хозяйств.

-21-вывода

1. В результате проведенных исследований впервые получены данные о циркуляции хаптавирусов и существовании ранее неизвестных природных очагов КЭ на территории республики Крым.

2. Показано широкое распространение хантавирусов, вирусов КЭ и ККГЛ, а также существование сочетавших природных очагов циркуляции этих вирусов на территории Крыма.

3. Определен видовой состав клещей - носителей вирусов КЭ и ККГЛ. Установлено, что основным переносчиком вируса КЭ в Крыму является клещ I.ricinus. Подтверждены ранее полученные авторами данные о возможности спонтанного инфицирования вирусом ККГЛ 4 видов иксодовых клещей. Впервые нами установлено, что в Крыму участвуют также в поддержании вируса ККГЛ в природе клещи вида Dernacentor narginatus.

4. Определен видовой состав мелких млекопитающих - носителей хантавирусов в различных ландшафтно - географических зонах Крыма. Хантавирусный антиген обнаружен у 12 видов животных, относящихся к 5 семействам млекопитающих.

5. Анализ результатов изучения естественного иммунитета у населения Крыма к хантавирусам и вирусам КЭ и ККГЛ свидетельствует о высоком числе иммунных лиц к вирусу КЭ среди жителей горнолеспой зоны (14-20Х) и о низкой частоте выявления серопози-тиввых лиц к вирусу ККГЛ (0,5%) и к хантавирусам (0,6%), практически на всей территории республики Крым.

6. Определен контингент населения, наиболее подверженного риску заражения КЭ, установлены основные факторы, способствующие инфицированию вирусом КЭ. Полученные данные служат основой для подготовки и проведения профилактических мероприятий против КЭ.

7. В результате клипико-серологического обследования боль-

ных выявлено 109 случаев заболевания КЗ. Заболеваемость КЭ в Крыму характеризуется относительно невысокими показателями и преобладанием легких клинических форм течения болезни. Вместе с тем встречаются также и очаговые формы, доля которых по данным 1985 - 1990гг. составляла не более 3-52 от числа заболевших лиц. Острых случаев заболевания ККГЛ и ГЛПС установить не удалось.

8. Выделено 63 штамма вируса КЭ из клещей I.ricinus и 2 штамма из крови больных КЭ. С помощью метода иммуноферментного анализа с использованием мовоклональных антител к эпигонам доменов А, В и С гликопротеида Е удалось определить среда изолятов вируса КЭ из клещей наличие штаммов как идентичных дальневосточному штамму "Софьин", так и резко отличающихся от него по отдельным (одному из трех) эпигонов домена А.

9. Впервые на территории Крыма были выделены хантавирусыые штаммы, при этом, все 7 штаммов изолированы от обыкновенных полевок Hierotus arvalis. Анализ результатов антигенной дифференциации вновь выделенных хантавирусных штаммов с поликлональными и моноклональными антителами показал их близкое антигенов родство, но не идентичность с представителями хантавирусного сероти-па Проспект Хилл.

Список научных работ опубликованных по теме диссертации 1. Мицевич Г.Ф., Захарова Т.Ф., Маркешин С.Я., Бандура С.А., Пашков А.Я., Ткаченко Е.А. Выявление природных очагов геморрагической лихорадки с почечным синдромом на территориии Крымской и Черниговской областей //Вопросы вирусологии.- 1987.-Ы6.-С.733-735.

2. Маркешин С.Я., Алексеев А.Ф., Ткаченко Е.А., Чирний В.И., Захарова Т.Ф., РыльцеваЕ.В. Особенности природной очаговости геморрагической лихорадки с почечным синдромом в различных ландшафтах Крыма //Вопросы вирусологии,- 1989,- Н4.- С. 485-487.

3. Борисова М.А., Маркешин С.Я., Рязанова Н.Я., Дегтярева

А.А. Захарова Т.О., Бычкова М.В. Особенности клинических прояв леяий клещевого энцефалита в Крыму //Журнал Клиническая медицина.- 1963.- Н12.-С.80-83 .

4. Смирнова С.Е., Маркезин С.Я., Евстафьев И.Л., Захарова Т.Ф. Новые данные об очагах крымской-Конго геморрагической лихорадки в Крымской области //В кн. Сборник тезисов докладов Всесоюзной конференции по нркродаой. очаговости болезней.-М.,1989. -С. 143-144.

5. Марксами С. Я. Караванов A.C. Бычкова М.В. и др. Очаги клещевого энцефалита в Крыму // Там же,- С.100.

6. Арутюнян Л.С., Дулицкий Д.И., Маркешин С.Я., Чнрний В.И. О природной очаговости геморрагической лихорадки стачечным синдромом (ГЛПС) в юго-западном Крыму //Там же.- С.13.

7. Маркешин С.Я., Захарова Т.Караванов A.C., Марцовенко Л.А. и др. Некоторые эпидемиологические особенности клещевого энцефалита в Крыму //В ich. Актуальные вопросы изучения клещевого энцефалита и геморрагической лихорадеки в их природных очагах. Тсзксы докладов Республ. научно-прахтич.конференции.- Идевск., ! !)30. - С. 26.

а. Коамв. В. В., Нар.Чй!Г-Я1 С. Я-, 'Лсачепко S.A. и .ар. Ковыэ O'v.-.г-д гст-орглыл'чес.'сой л*/ггог>пдкн с лечзчщм синдроме»« на террито-гни леЕ»;б?р>еч!:Ю"1 У«стк»«!Ч //Там re.- С. 150.

.0. ".-pft'-b'i В.И., ът С.Л., Хсзиа П.В. и да. Аятроиууги-

чеекие очаги геморрагической лихорадки с почечным синдромом в Крыму //Там же.- С.154.

10. Маркешин С.Я., Караванов A.C., Ковин В. В. .Захарова Т.Ф., ЕвстратовЮ.В., Бычкова М.В., Евстафьев И.Л. Иммунный статус населения Крыма к вирусу клещевого энцефалита /'/Журнал мик-робиол.- 1991.- N 10. - С.28-31.

11. Маркешин С.Я., Смирнова С.К., Евстафьев И.Л.Оценка состояния природных очагов Крымской-Конго геморрагической лихорадки в Крыму //Журнал микробиол.- 1931.- Н9.~ С.47-50.

12. Чирний В.И., Алексеев А.Ф. , Маркешин С.Я., Ковин В. В. Сезонная динамика эпизоотии геморрагической лихорадки с почечным синдромом в разных типах природных очагов Крымского полуострова //Материалы всесоюзного симпозиума "Арбсвирусы и вирусные инфэк-ции".~ Сбора. Итоги науки и техники. - М.,1831.- Т.24.- С.128-127.

13. Чирнжт В.И., V'eKceeB А.О.. Маркешин С.Я., Копив В.В.

Природиыа очаги геморрагической лихорадки с почечным сиядромом ни. Крымском полуострове //Материалы всесоюзного симпозиума "Лр-бовирусы и вирусные инфекции" . - Сборы. Итоги науки итехники. -М. ,1031-- Т. 24.- С.125-120.

14. Еостратов Я). В., Маркеахиы С. Я- Изучение природам очагов вирусных инфекций в раде районов Украины //Там де.- С.29.

15. Маркениш С.Я. , Чирпий В.И., Евстратов й.В. йзучашю природных очагов хаытавирусов на территории яевобереашой Украины и Крымского полуострова //В кн. :Международный симпозиум по ГЛПС. Ленинград, СССР. 1991 - Тезисы докладов.- С. 7-8.