Экологические предпосылки гетерогенности популяций хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита в Западной Сибири

Якименко, Валерий Викторович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экологические предпосылки гетерогенности популяций хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита в Западной Сибири
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Экологические предпосылки гетерогенности популяций хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита в Западной Сибири"

На правах рукописи

ЯКИМЕНКО Валерий Викторович

Экологические предпосылки гетерогенности популяций хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита в Западной Сибири

03.00.06 - вирусология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва - 2004

Диссертация выполнена в ГУ Омский научно-исследовательский Институт природноочаговых инфекций МЗ РФ

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор.

Бутенко Александр Михайлович

Доктор биологических наук, профессор.

Коренберг Эдуард Исаевич

Доктор медицинских наук

Тимофеев Андрей Викторович

Ведушая организация:

ГУ Институт вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН

Защита состоится уТ» 2004 г. в_часов на заседании дис-

сертационного совета Д.001.026.01 в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН по адресу: 142782, Московская обл., Ленинский район, п/о Институт полиомиелита

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН

Автореферат разослан <0 »

2004 г.

Ученый секрет арь диссертационного совета

О.А.Медведкина

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Серьезной проблемой контроля эпидемической активности природных очагов вирусных инфекций является чередование периодов относительного эпидемического благополучия с труднопредсказуемыми периодами роста заболеваемости. Так, в последние два десятилетия в России не только отмечались периодические существенные подъемы и спады заболеваемости населения такими традиционными формами, как клещевой энцефалит (КЭ) и геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС), но и активизировались после длительного периода покоя природные очаги лихорадки Западного Нила (ЛЗН), Крымской-Конго (КГЛ) и омской (ОГЛ) геморрагических лихорадок.

В Российской Федерации ГЛПС по показателям заболеваемости лидирует среди зоонозных вирусных инфекций, и занимает одно из первых мест среди всех природноочаговых болезней человека (Tkachenko et al., 1998). При этом абсолютное число случаев заболевания — 97% — приходится на Европейскую часть России, 3% - на Азиатскую часть, главным образом, на Дальний Восток (Ткаченко и др.% 2000). Распространение очагов хантавирусов в Сибири длительное время определялось представлениями о дизъюнкции ареала (Лебедев, 1964). В настоящее время установлено, что из 30 серологически и/или генетически различающихся хантави-русов (Schmaljohn et al., 1983; Plusnin et al., 1994; Plusnin, et al., 1999; Avsic-Zupanc et al., 1995; Schmaljohn, Hjelle, 1997; и др.), только для 4 генотипов показана роль возбудителей ГЛПС - Хантаан, Сеул, Добрава и Пуумала (Schmaljohn, Hjelle, 1997). Сочетание новых представлений о популяционной гетерогенности состава хантавирусов, с полученными в 60х-80х годах 20го века данными о находках ханта-вирусного антигена у грызунов в лесной и тундровой ландшафтных зонах Западной Сибири (Апекина и др., 1990; Мясников и др., 1984; Мясников и др., 1991), определяли целесообразность проведения исследований по проблеме ГЛПС в регионе.

нородности состава популяций вируса ВКЭ в Западной Сибири к настоящему времени определяются представлениями о распространении генетически различающихся субтипов в пределах административных территорий субъектов Федерации. Целесообразным является изучение распространения генетических вариантов ВКЭ в условиях различных ландшафтов региона, в том числе - в зоне перекрытия но-зоареалов клещевого энцефалита и омской геморрагической лихорадки. Природные очаги последней вновь активизировались в последнее десятилетие 20 го века после 30™ -летнего периода эпидемического и эпизоотического благополучия. До настоящего времени отсутствуют достоверные данные о путях резервации вируса ОГЛ. Интенсивное развитие исследований ОГЛ было прервано в начале 70* годов в связи с полным прекращением эпидемической и эпизоотической активности природных очагов данного возбудителя в пределах всего нозоареала. Активизация природных очагов ОГЛ дала возможность продолжить исследования с учетом современных возможностей молекулярной биологии.

Исследование проблемы гетерогенности популяций хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита на молекулярно-генетическом уровне будет способствовать решению как практических задач эпидемиологии, так и проблем общебиологического плана, связанных с таксономией и эволюцией вирусов.

Цель и задачи исследования

Целью работы являлось изучение феномена гетерогенности состава популяций хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита в Западной Сибири.

В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи:

1. Оценить видовой состав и характер распределения в различных ландшафтных зонах Западной Сибири хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита.

2. Оценить феномен штаммовой гетерогенности хантавирусов (в т.ч. возбудителей ГЛПС) и вирусов комплекса клещевого энцефалита внутри различных ландшафтных зон Западной Сибири.

3. Оценить степень участия пространственно-географического аспекта изоляции хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита в формировании и поддержании феномена популяционной гетерогенности.

4. Оценить степень участия экологического аспекта изоляции хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита (на примере host-эффекта) в формировании и поддержании феномена популяционной гетерогенности.

Научная новизна работы.

В Западной Сибири впервые была установлена гетерогенность состава ханта-вирусов, оценен характер ландшафтного и биотопического распространения их природных очагов, описан (единовременно и независимо от финских исследователей) новый генотип хантавирусов, ассоциированный с популяциями леммингов на Таймыре (получивший название Топографов по представлению финских коллег). Показано значение реассортации малого и среднего сегментами и рекомбинантных событий в малом сегменте генома в формообразовании западносибирских ханта-вирусов Пуумала и Тула.

Впервые на юге Западной Сибири оценены особенности ландшафтного и биотопического распространения различных субтипов и геновариантов ВКЭ. Полученные результаты указывают на общность происхождения природных очагов КЭ юга Западной Сибири и европейских территорий.

Впервые по результатам секвенса двух генов вирусов ОГЛ показана высокая пространственная и временная консервативность штаммов ОГЛ, предполагающая отсутствие существенного генетического дрейфа. Показано, что вирусы ОГЛ образуют компактную группу изолятов в пределах вирусов комплекса КЭ, филогенетически наиболее близкую западному субтипу ВКЭ.

Практическая ценность работы

Впервые определены и депонированы в Международный компьютерный банк данных GenBank нуклеотидные последовательности М (А1.367061; АЖ442615; №442616; АВ442617) и S-сегментов (А¥367064; А^367065, АВ367066; А¥367067; АЖ367069; АВ367070; А!?367071) геномов западносибирских изолятов хантавиру-сов генотипа Пуумала; нуклеотидные последовательности структурной части Б-сегмента западносибирских изолятов хантавирусов генотипа Тула (А1?442618; А1?442619; А1?442620; АВ442621). Показана эпидемическая значимость на территории Западной Сибири хантавирусов генотипов Пуумала и Добрава\Белград.

В ГКВ и-та вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН депонированы штаммы вируса ОГЛ «Ондатра- М1 - Курган-1992» (ГКВ № 958); «Ондатра-19М-НС0-1989» (ГКВ № 962); «Ондатра-15П-НСО-1989» (ГКВ № 961); «Ондатра-31П-НСО-1989» (ГКВ № 960); «Ондатра-31М-НСО-1989» (ГКВ № 940); и штаммы вируса КЭ «41-А.йауе8сеш-НСО(КарасуК) - 1989» (ГКВ № 943); «№П»па-Омск (Тюкалинск)-1986» (ГКВ № 942) и «^Пепя-Омск (Черлак)-1986» (ГКВ № 959). Впервые определены нуклеотидные последовательности фрагментов генов Е (длиной 545 и 597 н.к.) у 20, и N85 (длиной 596 н.к.) -у 16 штаммов вируса омской геморрагической

лихорадки, в том числе у 17 штаммов, изолированных в современный период активности очагов с трех административных территорий региона (Курганская, Омская и Новосибирская обл.).

На защиту выносятся следующие положения:

• Хантавирусы на территории Западной Сибири представлены 4 генотипами. - Топографов, Пуумала, Добрава\Белград и Тула, распространение природных очагов которых в регионе имеет выраженную ландшафтно-биотопическую приуроченность. Спорадическая заболеваемость населения ГЛПС, регистрируемая на юге Западной Сибири, вызывается хантавирусами генотипов Пуумала и Добра-ва\Белград.

• В пределах северной и средней тайги Западной Сибири имеет место разрыв ареала хантавирусов.

• Происхождение западносибирских хантавирусов генотипов Пуумала и Тула связано с геновариантами северной и (или) центральной Европы. Формообразование западносибирских геновариантов хантавирусов связано с механизмами рекомбинации и (или) реассортации (малый и средний сегменты генома).

• Штаммовое разнообразие вирусов клещевого энцефалита на юге Западной Сибири (Омская и лесостепные территории запада Новосибирской обл.) представлено восточным, западным и урало-сибирским субтипами, распределение которых по территории имеет выраженные ландшафтные особенности. Полный комплекс геновариантов и субтипов регистрируется только в лесостепном ландшафте. Доминирование урало-сибирского субтипа при значительном участии западного, определяет близость западносибирских очагов ВКЭ восточно-европейским.

• Эпизоотическая активизация природных очагов омской геморрагической лихорадки (ОГЛ) в современный период происходит в рамках известных эндемичных территорий.

• Штаммы вируса ОГЛ образуют компактную группу (независимо от времени, места и источника изоляции) в пределах комплекса КЭ, наиболее близкую западному субтипу ВКЭ.

Апробация работы и публикации

Материалы диссертации были представлены на Всероссийском симпозиуме «Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита», Иркутск, 1990; Международной научной конференции «Вирусные, риккетсиозные и бактериальные инфекции, переносимые клещами», Листвянка, Иркутск, 1996; Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 75-

летию ОНИИПИ, Омск, 1996; Всероссийской научно-практической конференции «Природноочаговые инфекции в России: современная эпидемиология, диагностика, тактика защиты населения», Омск, 1998; Научной конференции; посвященной 90-летию со дня рождения М.П.Чумакова, Москва, 1999; Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ОНИИПИ, Омск, 2001; Пятой Международной конференции «HFRS, HPS and hantaviruses», Франция, 2001; Второй научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера», Новосибирск, 2002; 8 Всероссийском съезде эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, 2002; Российско-американском семинаре "Экология инфекционных заболеваний". Новосибирск, ГНЦ ВБ "Вектор", 2002; Межгосударственном семинаре «Современные технологии в диагностике особо опасных инфекционных болезней», Саратов, 2003; 4th International Conferences on Emerging Zoonoses. Ames, USA, September Л 8-21, 2003; International Conference on Emerging Infectious Diseases. Atlanta, February 29 - March 3,2004.

По материалам диссертации имеется 30 публикаций.

Объем и структура диссертации

Предлагаемая диссертационная работа состоит из введения, 2 глав обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы (218 отечественных и зарубежных источников) и 9 приложений. Объем работы составляет 282 стр. машинописного текста, в том числе 38 таблиц и 48 рисунков.

Автор выражает глубокую благодарность за помощь в выполнении отдельных разделов работы сотрудникам: ИПВЭ РАМН им. акад. М.П.Чумакова, канд. мед наук А.Е.Деконенко, канд. мед. наук Т.К.Дзагуровой, канд. мед. наук А.И. Иванову, докт. мед. наук, проф. Е.А.Ткаченко, канд. мед. наук Г.Г.Каргановой, канд. мед наук Т.И.Дживанян; Центрального НИИ эпидемиологии МЗ РФ, канд. мед. наук Л.С.Карань (лаборатория арбовирусных инфекций, рук. докт. мед. наук А.Е.Платонов); ИСИЭЖ СО РАН, канд. биолог, наук А.К.Добротворскому; Карагандинской медакадемии (Казахстан), канд. мед. наук М.А.Танкибаеву; Магаданского филиала института биологических проблем Севера РАН, докт. биолог, наук П. В. Тузовскому; ЦГСЭН по Новосибирской области, А.П.Федянину и Е.В.Федорову; Главному санитарному врачу ГУ ЦГСЭН по ЯНАО, докт. мед. наук Б.М.Раенгулову; ГУ ЦГСЭН по Омской области, А.В.Вахрушеву и Н.Г.Корсакову; сотруднику кафедры физики ОмГМА Ж.С.Тюлько, а также администрации и со-

грудникам ГУ Омский НИИ природноочаговых инфекций МЗ РФ, принимавших непосредственное участие в осуществлении данных исследований.

II. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

2.1. Обзор данных литературы. В двух главах раздела на основании анализа содержания 218 отечественных и зарубежных публикаций освещается состояние изученности поставленных в работе вопросов.

2.2. Методы и материалы., В работе использованы зоолого-паразитологические, вирусологические, серологические, молекулярно-биологические методы и методы филогенетического анализа. -

Зоолого-паразитологические методы. В работе использовали стандартные методики количественного учета мелких млекопитающих (Кучерук, 1952). Пора-женность млекопитающих эктопаразитами оценивали методом индексов (Песенко, 1982). Сбор, хранение и обработку гнезд птиц и млекопитающих для паразитоло-гических и вирусологических исследований членистоногих убежищного комплекса проводили по стандартной методике (Тагильцев и др., 1990). Учеты и сбор имаго пастбищных иксодовых клещей проводили на линейных транссектах на стандартную волокушу и (или) флаг, или на площадь. Определение систематической принадлежности членистоногих убежищного комплекса и кровососущих двукрылых проводилось докт. биолог, наук, проф. ОмГПУ И.И.Богдановым и сотрудником ГУ ОНИИПИ МЗ РФ канд. биолог, наук, доц. М.Г.Мальковой. Определение систематической принадлежности Hydrachnidae проводилось докт. биолог, наук. П.В.Тузовским (Магаданский филиал института биологических проблем Севера).

Вирусологические методы. Индикацию антигенов возбудителей в образцах осуществляли в иммунно-ферментном анализе (ИФА) с использованием: для хан-тавирусов - тест-системы «Хантагност» (производства НПО ИПВЭ РАМН (г.Москва); вирусов комплекса КЭ — тест-систем производства ПО «Вирион» (г. Томск) или НПО «Вектор» (г. Новосибирск). Индикацию инфекционного вируса в членистоногих (в клещах различных систематических групп и кровососущих двукрылых) осуществляли в ИФА и с использовнием явлений ЦПД и бляшкообразо-вание под твердым покрытием в культурах клеток (СПЭВ и (или) Vero E6) в микроварианте (Выявление циркуляции ..., 1991; Метод, рекомендации, 1986). Все исследуемые пробы сохраняли в условиях низких температур (в жидком азоте в герметичной упаковке, или в низкотемпературном холодильнике при температуре

не выше -72°С). Изоляцию арбовирусов проводили на 2-3-суточных новорожденных беспородных белых мышах по общепринятым методам.

В реакция биологической нейтрализации применяли ИАЖ к вирусам комплекса КЭ и исследуемым штаммам, приготовленные по стандартной методике (Clarke, Casals, 1958) с использованием саркомы мышей 180/TG сотрудником ГУ ОНИИПИ канд. мед. наук О.Б.Калминым. Реакция ставилась, на беспородных белых мышах и на культурах клеток в микроварианте, с применением цветной пробы (Выявление циркуляции ..., 1991), в двух модификациях. Расчет титров вируса и среднего эффекта в РБН проводили методами Кербера или Рида-Менча (цит. по Хэммон, Сатер, 1974).

При проведении вирусологических экспериментов на моделях иксодовых и гамазовых клещей использовали технологию культивирования и исследования, разработанную в ГУ ОНИИПИ (Тагильцев и др., 1990). В экспериментах по оценке влияния организма иксодовых клещей на характеристики штаммов ВКЭ, клещей заражали интрацелломально.

Серологические методы.

Реакции связывания комплемента (РСК) и торможения гемагглютинации (РТГА) проводили по стандартной методике (Хэммон, Сатер, 1974). Использованы антигены боратно-солевые; приготовленные методом сахарозо-ацетоновой экстракции (Clarke, Casals, 1958), и, на их основе - растворимые антигены.

Исследование сывороток крови больных с подозрением на ГЛПС с территории Омской и Тюменской областей осуществляли с использованиемлгест-системы МФА (производства ИПВЭ РАМН) и последующим подтверждением результата в РБН (метод редукции бляшек) на культуре клеток Vero-Еб в лаборатории геморрагических. лихорадок ИПВЭ РАМН (рук. докт. мед. наук, проф. Е.А.Ткаченко), канд. мед. наук Т.К.Дзагуровой.

Молекулярно-биологические методы.

Реакцию молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот (МГНК) проводили по общепринятым методикам (Маниатис и др., 1984; Шаманин и др., 1990) с использованием синтетических олигонуклеотидных зондов к штаммам ВКЭ «Со-фьин» и «Найдорф» (Шаманин и др., 1990; Дрокин, 1993, Дрокин и др., 1994), синтезированных в НПО «Вектор» и НИИБХ СО РАН (г. Новосибирск). Олигонукле-отиды метили по 5 -концу изотопом фосфор (Р32) с помощью Т4-ПНК производства НИИБХ СО РАН с последующим применением радиоавтографии. Часть работ по изучению штаммов ВКЭ в МГНК выполнены сотрудником ГУ ОНИИПИ МЗ

РФ, канд. биолог, наук Д.А.Дрокиным на базе ИПВЭ РАМН (лаборатория молекулярной биологии вирусов, рук. докт. мед. наук, акад. В.А.Лашкевич). Принадлежность штамма тому или иному субтипу ВКЭ оценивали по схеме, предложенной иркутскими коллегами (Злобин, Горин, 1996). При оценке генотипической принадлежности ВКЭ по результатам аминокислотного секвенса ориентировались на характер аминокислотных замен в позиции 206 белка Е (Беликов, 2000).

ОТ ПЦР проводили: для арбовирусов — с набором группо — и видоспецифиче-ских праймеров (Flavi, ОГЛ, ВКЭ, в том числе - двух диагностических к ВКЭ и ОГЛ, и двух - к ОГЛ - авторских, подобранных Л.С.Карань), комплементарных гену Е, кодирующего поверхностный гликопротеин, и гену NS5, кодирующего вирусную полимеразу; для хантавирусов - в стандартных условиях с применением родоспецифических праймеров, комплементарных различным участкам малого (S) и среднего (М) сегментов генома.

ОТ ПЦР и секвенс нуклеотидных последовательностей РНК-изолятов ханта-вирусов осуществлен сотрудником лаборатории геморрагических лихорадок ИПВЭ РАМН, канд. мед. наук А.Е.Деконенко.

ОТ ПЦР и секвенс нуклеотидных последовательностей штаммов вируса омской геморрагической лихорадки осуществлен сотрудником лаборатории арбови-русных инфекций ГУ ЦНИИЭ МЗ РФ, канд. мед. наук Л.С.Карань.

Методы филогенетического анализа.

Степень сходства нуклеотидных и аминокислотных последовательностей сравниваемых изолятов проводили с помощью методов наибольшего правдоподобия (ML) с использованием ППП PUZZLE, версия 2.5.1, алгоритм Tamura-Nei (K.Strimmer A. von Haeseler, 1996, Университет Мюнхена, Германия), ПП PHYLIP (программа DNAML) и ПП BIOEDIT 5.0.9; ближайшего соседа (NJ) - ППП CLUSTAL 1.81, максимальной экономии (МР), ПП PAUP 2.4.1; вычисления уровня взаимной информации (Кульбак, 1962). Интерфейс программы вычисления взаимной информации (MJ) разработан сотрудником кафедры физики ОмГМА Ж.С.Тюлько. Метод построения филогенетических деревьев основан на использовании максимальных значений взаимной информации, подсчитанные для пар сравниваемых последовательностей (Чалей, 1993).

Визуализацию дендрограмм (ML, NJ) осуществляли с помощью программы Tree View 1.6.6 (Page, 1996), и в Microsoft Exel 2000 (MJ).

Материалы от млекопитающих для исследования на инфицированность хан-тавирусами с территории Новосибирской обл. получены от канд. биолог, наук

А.К.Добротворского (ИСИЭЖ СО РАН) и Е.В.Федорова (ГУ ЦГСЭН по Новосибирской обл.). Ондатры для исследования на инфицированность вирусом омской геморрагической лихорадки с территории Новосибирской обл. доставлялись региональными подразделениями ветеринарной службы и ЦГСЭН; с территории Омской области - сотрудниками ГУ ЦГСЭН по Омской области Н.Г.Корсаковым и А.В.Вахрушевым. Иксодовые клещи из природных очагов КЭ в Центральном Казахстане получены от сотрудника Карагандинской медакадемии, канд. мед. наук МА.Танкибаева.

Сбор материалов для исследования на арбо- и хантавирусы с территории Западной Сибири и Алтая проводился автором самостоятельно или совместно с коллегами из ГУ ОНИИПИ МЗ РФ (лабораторий арбовирусных инфекций, зоонозных инфекций и по изучению бешенства). Последующие исследования материалов, изоляция штаммов и изучение полученных изолятов проводились автором совместно с коллегами из лаборатории арбовирусных инфекций ГУ ОНИИПИ МЗ РФ/

Результаты исследований базируются на следующих материалах:

1. При исследовании распространения хантавирусов в Западной Сибири исследовано 2967 экз. млекопитающих (отр. Грызуны, Насекомоядные и Хищные) с территорий Омской и Новосибирской областей, Ямало-Ненецкого автономного округа и Красноярского края (юго-западный Таймыр). В результате секвенирова-ны нуклеотидные последовательности 15 РНК-изолятов, отнесенные к 3 генотипам (в т.ч. два - к новому генотипу Топографов).

2. На инфицированность вирусами комплекса клещевого энцефалита исследовано 2204 пробы (2920 особей) млекопитающих и птиц, 1563 пробы (106490 особей) убежищных членистоногих, 724 пробы (77980 особей) кровососущих двукрылых, более 6000 особей иксодовых клещей. В результате изолировано 146 штаммов вирусов комплекса клещевого энцефалита. В молекулярно-биологических исследованиях использовано 92 штамма вируса клещевого энцефалита и 21 штамм омской геморрагической лихорадки. Секвенированы нуклеотид-ные последовательности двух генов у 20 штаммов ОГЛ, в том числе у 17, полученных в современный (1989-2001 гг.) период активизации природных очагов данной инфекции.

23. Хантавирусы. В результате проведенных исследований на территории Западной Сибири установлено (рис. 1) существование 4 генотипов хантавирусов (Тула, Пуумала, Добрава\Белград и Топографов), два из которых (Добрава\Белград и Пуумала) являются классическими возбудителями ГЛПС. Имеют место

Рис. 1. Распространение хантавирусов в Западной Сибири.

^ - места сбора материала ' находки антигена

ТУЛА

- установлена принадлежность генотипу

ландшафтные особенности распространения хантавирусов в регионе: генотип Топографов обнаружен в зонах переходных и северных субарктических и арктических тундр Таймыра, Пуумала - в подзоне мелколиственных лесов (подтайге) в Ишим-Иртышском междуречье, Тула- в степной зоне Приртышья. Циркуляция хантавируса Добрава\Белград установлена по случаям заболевания людей (ИФА, МФА, РБН) в подзоне мелколиственных лесов (подтайге) Западной Сибири в Ишим-Иртышском междуречье, локализация и структура природных очагов, не выяснены. Эпизодические находки хантавирусов в таежной зоне региона по-видимому связаны с возможностью формирования псевдоочагов хантавирусной инфекции в результате выноса с эндемичных территорий по поймам рек из более южных широт. Во всех случаях распространение хантавирусов в регионе характеризуется стенотопностью. В северной и средней тайги Западной Сибири, в междуречье Оби и Енисея в пределах данных подзон имеет место дизъюнкция ареала хантавирусов. Лесостепные.территории Ишим-Иртышского (Омская.обл.) и Иртыш-Обского (Новосибирская обл., 4 центральных и 2 Присалаирских р-на) междуречий свободны от хантавирусов До настоящего времени не обнаружены ханта-вирусы восточнее р. Иртыш и в пределах лесной зоны.

Топографов\Таймыр. В результате исследований популяций тундровых видов грызунов, проведенных в 1994 г. в ходе Шведско-Российской экспедиции в 17 точках вдоль северного побережья Евразии (Р1уштп е! а1., 1996; Уара1аШ е! а1., 1999; Ргеёга е!.а1., 1999), и наших - на юго-западном Таймыре, хантавирусный агент обнаружен в популяциях сибирского лемминга на 2 территориях северного Таймыра и в нижнем течении р. Муксуниха (юго-западный Таймыр, правый приток р.Енисей). Во всех случаях возбудитель выявлялся в местообитаниях, расположенных или в поймах тундровых рек, или в непосредственной близости к поймам. Уровень инфицированности сибирского лемминга (юго-западный Таймыр) по результатам иммуноферментного анализа (ИФА) составил 41,2 ± 11,9 % (или 11,1 ± 3,7% от всех исследованных животных). Кроме грызунов, хантавирусный антиген был выявлен в одной из проб гамазовых клещей Наешс^аша8ш атЪи1аш из выводкового гнезда сибирского лемминга в припойменных местообитаниях. Анализ результатов секвенса Ь, М и Б-сегментов генома изолятов с северного (Уа-ра1аШ е! а1., 1999,' изолят «Топографов») и М-сегмента двух изолятов с юго-западного Таймыра (наши данные, «Таймыр», рис. 2) показали принадлежность новому хантавирусному типу, получившему название «Топографов». При исследовании в 2000 и 2003 гг. популяций МюготаттаЦа в тундрах южного Ямала и

Рис. 2. Филогенетические отношения изолята Таймыр (LS-I), полученные на основании анализа секвенса участка С2-кодирующей области М-сегмента длиной 200 н.к. (метод максимальных парсимоний, ПП PAUP 2.4.1, цит. по Dekonenk;o et al., 1996).

центральных и северных территорий Полярного Урала в условиях низкой численности грызунов, хантавирусный антиген был обнаружен у одной особи узкочерепной полевки из предгорий Полярного Урала (бассейн реки Щучья). Ранее (Апеки-на и др., 1990; Мясников и др., 1991) хантавирусный антиген выявляли в легких леммингов (сибирского и копытного) со Среднего Ямала. Последующее сравнение нуклеотидных последовательностей гомологичных фрагментов М - сегмента генома хантавируса «Топографов» и хантавируса»Таймыр» показывает их 88% гомологию, что дает основание для отнесения их к единому хантавирусному типу (Топографов). Оба изолята имеют сходный уровень нуклеотидной гомологии с другими группами хантавирусов (Хабаровск, Пуумала, Тула и др.).

Пуумала. Эпизоотически активные очаги ГЛПС, ассоциированные с ханта-вирусами генотипа Пуумала, локализованы в болотистой местности подзоны мелколиственных лесов (подтайги) междуречья рек Ишим и Иртыш, преимущественно в липовых и в заболоченных березовых лесах. Возбудитель циркулирует в популяциях рыжей и красно-серой полевок. В течение двух сезонов (1996 и 1997 гг.) на фоне депрессии численности грызунов хантавирусный антиген выявляли у полевых мышей на юге подзоны мелколиственных лесов. На севере подзоны (1999— 2001 гг.) хантавирусный антиген выявлен только у рыжих и красно-серых полевок. Инфицированность грызунов составляла по результатам ИФА 7,1 ± 3,9 % в пойменных, 6,7 ± 3,7% на внепойменных биоценозах, достигая максимума в липняках:. 17,1 ± 4,5% (22,2 ± 6,9% рыжая и 14,8 ± 7,0% красно-серая полевки). В местообитаниях иного типа этот показатель был для рыжей полевки в 2,5—4 раза ниже, а инфицированность красно-серой отмечена в единичных случаях.

Результаты анализа секвенсов 8 и М-сегментов геномов западносибирских изолятов хантавирусов, полученных от рыжих и красно-серых полевок, с помощью метода максимального правдоподобия (рис. ЗА, Б), показывают их принадлежность хантавирусам Пуумала. Величины бутстрепа точек кластеризации данных изолятов с другими представителями хантавирусов Пуумала достоверны, и соответствуют величинам точек кластеризации различных генотипов относительно друг друга. К этой же группе хантавирусов отнесен и нетипичный для группы изолят от полевой мыши (Л137\Ош8к-1997). Уровень гомологии изолятов от рыжих и красно-серых полевок, рассчитанный по результатам полноразмерного сек-венса 8-сегмента, составляет около 99% нуклеотидной (н.к.) и аминокислотной (а.к.) гомологии. Обращает на себя внимание наличие в структурной части 8-сегмента консервативных участков с более достоверным уровнем сходства

Рис. ЗА. Филогения вирусов типа Пуумала и некоторых неклассифицированных вирусов (по наиболее длинному общему фрагменту 8- сегмента с координатами в клоне 423 - 611 н.к.). Дерево построено с использованием метода максимального правдоподобия, в узлах указаны величины бутстрэпа (в % для 1000 бутстрэп-выборок).

Рис. ЗБ. Филогения вирусов Пуумала, построенная по участку М-сегмента с координатами 40 - 3495 н.к. Дерево построено с использованием метода максимального правдоподобия, в узлах указаны величины бутстрэпа (в % для 1000 бутстрэп-выборок).

со скандинавскими изолятами (рис. 4), чем с изолятами из Поволжья и др., в структурной части М-сегмента - с башкирскими (южная территория Приуралья) и центрально-европейскими. Характер и уровень значимости кластеризации сибирских, скандинавских и башкирских изолятов на участках М-сегмента с координатами 2500-2850 и 3000-3350 н.к. предполагает более близкие филогенетические отношения сибирских и башкирских изолятов, нежели с изолятами иного происхождения (в т.ч. и из Поволжья). Значимый уровень кластеризации анализируемых изолятов (сибирских, скандинавских и др.) приходится на участок сегмента, комплементарный О2-гликопротеину, тогда как участок генома,. комплементарный белку G1 отличается значительной- вариабельностью. Сайт нарезки белка-предшественника приходится на консервативный участок с координатами 19002350 н.к.. Наличие на этом участке резкого подъема значения величины взаимной информации у сибирского изолята и изолятов из Башкирии (GG17\Bashkiria) и Германии (Cg-Erft), группирующихся в дистанцированные друг от друга кластеры, предполагает наличие в этой позиции участка рекомбинации. Эти данные соответствуют результатам сравнительного анализа нуклеотидного (кодирующая часть М-сегмента) и аминокислотного секвенса (гликопротеин G2) сибирских изолятов с изолятами из Скандинавии, центральной Европы и поволжских территорий России. Различия уровня нуклеотидной гомологии сибирских и башкирских изолятов составлял 7,4-7,7%, со скандинавскими (Финляндия, Швеция, Норвегия) - 7,89,3%, с французскими и немецкими - 9,3-9,8%, с японскими — 22,7%. Различия уровня аминокислотной гомологии составлял с башкирскими и немецкими - 5,15,5%, скандинавскими - 8,9-14,5%, с японскими - 8;5%. Более высокий уровень гомологии, чем ожидалось, обнаружили с сибирскими изоляты Kazan (Татария) и Udm\894cg\91 (Удмуртия) - 6,8% н.к. и 4,2% а.к. различий. Результаты сравнительного нуклеотидного анализа гомологичных фрагментов кодирующей части S-сегмента сибирских изолятов с изолятами различного происхождения показывают более высокий уровень подобия сибирских с хантавирусами из Финляндии и Карелии (1,8-2,8% различий н.к.), чем с иными скандинавскими (5,5-6,4% н.к.), поволжскими (4,1-4,6% н.к.), центрально-европейскими (6,0% н.к.) и японскими (7,1% н.к.). Уровень значимости данных нуклеотидной дивергенции различен, что отражается в результатах аминокислотного секвенса (нуклеокапсидный белок) -уровень сходства со скандинавскими изолятами очень высок (2,8-1,8% а.к. различий с карело-финскими; 2,3-3,9% а.к. с шведскими и норвежскими). Такой же уровень сходства с японскими и датскими (3,9% а.к.), из Удмуртии и Татарии

Рис. 4. Изменение величины взаимной информации J западносибирских изолятов: A) CG215/Omsk - вдоль последовательности М - сегмента - относительно финского (Sotkamo), поволжского (Kazan), башкирского (CG17\Bashkiria) и немецкого (CG-Erf) изолятов; Б) CRF161\Omsk - вдоль последовательности S-сегмента - относительно карельского (Kolodozero), финского (Sotkamo), и поволжского (Kazan) изолятов.

(3,7% а.к.). Максимальный уровень различий - с башкирскими и центрально-европейскими (4,2-5,0% а.к.). Из приведенного выше следует, что значимость нуклеотидных замен существенно различается у разных изолятов.

Происхождение сибирских очагов ГЛПС, ассоциированных с генотипом Пуумала определенно связано с европейскими очагами. Особенности нуклеотид-ной и аминокислотной структуры S и М-сегментов их генома предполагают формирование существующей у сибирских изолятов структуры генома в результате реассортации фрагментов и возможных рекомбинантных событий при совместной циркуляции генетически различных вариантов. Однородность штаммового состава. западносибирских очагов хантавирусов Пуумала исключает возможность гетерогенной рекомбинации в современный период.

Тула. Эпизоотически активные природные очаги, ассоциированные с ханта-вирусами генотипа Тула, локализованы в приозерных котловинах степных озер и пойменных лугах р.Иртыш в пределах степной зоны юга Западной Сибири. Вирус циркулировал в популяциях узкочерепных полевок (среднемноголетняя инфици-рованность 5,1 ± 2,0% весной, 7,4 ± 3,6% осенью) и степных пеструшек (средне-многолетняя инфицированность 12,1 ± 5,7%). Инфицированность степной пеструшки выше, чем узкочерепной полевки. Осенью 1999 г. отмечен трехкратный рост инфицированности узкочерепной полевки (17,6 ± 9,5%). Изоляты, полученные от разных видов, формируют (по результатам нуклеотидного секвенса структурной части S-сегмента), независимо от места и времени изоляции, два кластера (рис. 5). Уровень данной «внутривидовой» нуклеотидной дивергенции хантавирусов укладывается в известные (до 8% н.к. различий) рамки вариабельности группы российских изолятов, однако «межвидовые» различия (15,8%-18,7%) соответствуют уровням различий между группами - от 18,1% до 19,6% (по ^гену - 14,6%-15,7%) для изолятов из Восточной Словакии с Западной Словакией и Чехией, от 17% до 18,8% (по ^гену - 15,5%-16,5%) - для изолятов из Восточной Словакии и России ^ЬэЫ et а1., 1999).

Анализ результатов нуклеотидного секвенса, проведенный с использованием методов максимального правдоподобия и вычисления величины взаимной информации позволяет говорить о неоднородности нуклеотидного состава S-сегмента. Наличие консервативных участков с координатами 810-910 н.к. у западносибирских и российских изолятов, и с координатами 1100-1200 н.к. у западносибирских (от полевок) и чешских, дают основание предполагать наличие в позиции 1200 н.к. рекомбинантного фрагмента, сходного с фрагментами изолятов чешско-словацкой

Рис. 5. Филогения вирусов Тула. Дерево построено с использованием метода максимального правдоподобия по участку последовательности S-сегмента с координатами в сегменте 445 - 902 н.к., у ветвей указаны величины бутстрэпа (в % для 1000 бутстрэп-выборок), справа от скобок -уровень гомологии.

группы, возможность чего подтверждается - у природных изолятов хантавируса Тула из восточной Словакии показано наличие рекомбинантных участков (81ЪоМ Ы а1., 1999). Как и в случае хантавируса Пуумала, происхождение западносибирских природных очагов хантавируса Тула следует связывать с европейскими очагами. Особенности структуры 8-сегмента генома, изложенные выше, позволяют предполагать формирование по крайней мере данного сегмента генома западносибирских хантавирусов Тула в результате неких рекомбинантных событий при экспансии вируса на восток из центральной Европы, что подтверждается наличие в геноме гетерогенных участков, обнаруживающих более выраженное сходство с российскими или некоторыми центрально-европейскими изолятами. Наличие «межвидовых» различий у западносибирских изолятов вероятнее всего определяется циркуляцией двух геновариантов Тула в пределах однотипных биотопов, что основывается на выявлении отличий, имеющих не характер локальных или точечных изменений, а затрагивающих протяженные участки геномов. Возможность сосуществования двух геновариантов определяется особенностями пространственно-временной структуры популяций хозяев.

23. Штаммовое разнообразие ВКЭ в различных ландшафтах Западной Сибири и Алтая • Штаммовое разнообразие вируса клещевого энцефалита в подзоне южной тайги. Особенности пространственно-биотопического распределения иксодид обеспечивает возможность широкого обмена ВКЭ между прокормителями (грызунами и насекомоядными). Из пяти видов иксодид, встречающихся в биоценозах южной тайги, единственным переносчиком, имеющим существенное эпидемическое значения, является 1х.регеи1еа1ш. Важное эпизоотическое значение имеют 1х.регеи1еа1ш и ¡хЛпащиЦеерв. Распределение таежного клеща в ландшафтах южной тайги и уровень инфицированности, определяемый по результатам ИФА и бляшкообразования (БОЕ) на культуре клеток СПЭВ, имеет выраженную пространственную неоднородность. Наиболее стабильны показатели численности в зональных типах местообитаний - осиново-березовых и хвойных лесах, где они не превышали трехкратных колебаний. В мозаичных местообитаниях (поймы рек и др.) показатели численности достигали 10-кратных колебаний при высоком (в три - 15 раз выше зональных местообитаний) уровне дисперсии. Средневзвешенный по территории исследования показатель численности таежного клеща за пятилетний период наблюдений достигал 2-5-кратных колебаний. Уровень инфицирован-

ности клещей также укладывается в этот размах многолетних колебаний. Связи численности клещей с уровнем их инфицированности не прослеживается. Регистрируемая заболеваемость населения клещевым энцефалитом в четырех таежных районах Омской области носит индивидуальный характер и только в редких случаях может быть объяснена состоянием популяции Ix.peгsulcatus (численностью и уровнем инфицированности). Так подъем заболеваемости 1995 г. по-видимому был связан с общим подъемом численности Ix.peгsulcatus (11,7-27,3 экзЛкм) при среднем (2,7-5,9%) уровне вирусофорности во всех типах местообитаний южной тайги.

Устойчивость природного очага в значительной степени обеспечивается его структурными особенностями, обеспечивающими устойчивое существование, возбудителя, независимо от возможных неблагоприятных изменений среды. Наиболее контролируемыми компонентами очага являются популяции переносчиков, прежде всего — иксодид. Из трех видов иксодид, составляющих основу фауны иксодид южной тайги (Ix.peгsulcatus, Ix.tгianguliceps,. Ix.apгonophoгus), наибольшая эври-топность и наиболее. стабильные показатели численности характерны для Ix.tгianguliceps, имеющего, кроме того, протяженный период активности - не менее 8 месяцев в году. Уровень вирусофорности имаго Ix.tгianguliceps, по результатам ИФА с последующим подтверждением в биопробе на НБМ (от 21,6 ± 9,3% до 60,7 ± 6,2%) подтверждает значимую роль этого вида (наряду с Ix.peгsulcatus) в поддержании устойчивости очагов КЭ в первичных ландшафтах южной тайги. Вирус КЭ здесь представлен изолятами западного и (или) урало-сибирского субтипов. Источник изоляции не предопределяет принадлежность тому или иному субтипу, несмотря на выраженные различия в характере гибридизации изолятов от теплокровных и иксодид.

Штаммовое разнообразие вируса КЭ в северной лесостепи. Особенностью данной территории юга Западной Сибири является эндемичность в отношении двух нозоформ, вызываемых близкородственными вирусами - клещевого энцефалита и омской геморрагической лихорадки. Эпидемическая активность очагов КЭ и ОГЛ в пределах лесостепи определяется состоянием популяций пастбищных иксодид - D.гeticulatus и Ix.peгsulcatus. Наступление в конце 60х - начале 70х гг. периода эпидемического благополучия по ОГЛ связывали (Бусыгин и др., 1975; Лебедев, 1982) с изменением популяционной структуры иксодовых клещей, выражавшейся в снижении численности и уровня инфицированности D.гeticulatus и появлении и росте численности Ix.peгsulcatus. Исследования, проводимые в северной

лесостепи (1984-1994 гг.) продемонстрировали, что верхний и нижний пределы численности D.reticulatus в указанный период времени не имеют существенных различий с периодом 1959-1980 гг. (max. 6,3 и 7 экз. на 1 км маршрута в 1991 и 1992 гг. соответственно); уровень численности Ix.persulcatus в указанный период времени в среднем выше, чем в предшествующем, но верхний регистрируемый предел лишь вдвое выше D.reticulatus. Отмечены существенные различия в уровне и динамике численности обоих видов клещей в местообитаниях различного типа-синхронные изменения численности D.reticulatus и Ix.persulcatus регистрировались только на лугах по окраинам лесостепных болот , тогда как в лесных местообитаниях изменения шли практически в противофазе (что отражается и в самостоятельном характере линий тренда, построенных методом скользящей средней). Кривая изменения уровня инфицированности клещей вирусом КЭ у обоих видов однотипна, имеет периодичность 3-4 года. Рост численности сопровождался снижением уровня инфицированности в отдельные сезоны. В отличии от динамики, численности, кривая изменения уровня вирусофорности обоих видов может иметь синхронный характер. Сопоставление уровня заболеваемости КЭ на территории Тюкалинского и Крутинского р-нов Омской области, где нами проводились многолетние наблюдения за переносчиками, с кривыми численности и вирусофорно-сти иксодовых клещей, показывает, что рост заболеваемости может совпадать, как со снижением численности переносчика на фоне роста его вирусофорности, так и наоборот, с ростом численности на фоне снижения вирусофорности. В очагах КЭ лесостепной зоны существенное эпидемическое значение имеет D.reticulatus, на что указывает, например, рост заболеваемости 1990 г., происходящий на фоне высокой численности Ix.persulcatus (15,7 ± 6,0 осЛкм) при его низкой вирусофорно-сти (2,1 ± 1,2%), и умеренной (4,0 ± 0,2 осЛкм) численности и высокой вирусофор-ности D.reticulatus (более 17,2 ± 4,2%). Перечень указанных особенностей динамики численности клещей и уровня их инфицированности позволяют предполагать наличие неоднородности состава инфицирующих агентов, имеющих свои особенности циркуляции, что и обеспечивает столь разнообразную картину динамики инфицированности. По результатам МГНК, в данном регионе отмечена циркуляция трех субтипов вируса клещевого энцефалита (западного, восточного и урало-сибирского), представленных шестью геновариантами вируса. Западный и урало-сибирский субтипы в популяционной структуре ВКЭ регистрировался чаще, чем восточный, что вероятно отражает близость по крайней мере юго-западных областей Западной Сибири европейским территориям. Следует отметить, что набор

штаммов, принадлежащих трем субтипам, не регистрировали ни в один сезон, однако сочетания пар вариантов отмечалось регулярно. Принадлежность источника изоляции штаммов вируса КЭ тому или иному виду клещей (иксодовых или гама-зовых), или изъятие источника изоляции из того или иного типа местообитаний не предопределяли принадлежность изолята определенному субтипу вируса КЭ. По-видимому имеет место замещение (частичное или полное) на локальных территориях (в биотопах) одного субтипа другим с восстановлением первого в последующие сезоны. В северной лесостепи Новосибирской области при исследовании природных очагов ОГЛ от мышевидных млекопитающих, кровососущих двукрылых, гамазовых и водяных клещей изолированы ряд штаммов вируса КЭ, отнесенные к урало-сибирскому и западному субтипам.

Штаммовое разнообразие вируса КЭ в степной зоне Западной Сибири. Потенциальная эпидемическая активность очагов КЭ в степной зоне Казахстана и юга Западной Сибири определяется наличием двух видов пастбищных иксодид -Б.ша^таШв и Б.геИсиМш. В степной зоне Омской обл. в современный период распределение переносчиков из числа иксодид крайне неравномерно, наибольшая встречаемость отмечается только в районе населенных пунктов и местах выпаса скота. В настоящее время на степных участках, не используемых в хозяйственной деятельности человека, иксодиды регистрируются эпизодически, при этом уровень инфицированности вирусом КЭ составлял до 2%. Налтерритории Центрального Казахстана (Карагандинская обл.) природные очаги КЭ были установлены в 1960— 1963 гг. в зоне сухих степей (Дмитриенко, Приходько, 1967), существование их было подтверждено в ходе дальнейших исследований (Танкибаев, 1996). Уровень инфицированности абсолютно доминирующего в фауне иксодид клеща Б.ша^таШв за весь предшествующий период исследований колебался от 1,4% до 3,7%. По результатам наших исследований 1999-2001 гг. уровень численности Б.ша^таШв и Б.геИеиМш и регистрируемая вирусофорность по той же территории - в тех же пределах (1,7%—2,2%), что и 10-40 лет назад, однако на локальных участках и в разные сезоны данный показатель может существенно варьировать, что косвенно отражает особенности очагов ВКЭ в аридной зоне. Изоляты ВКЭ западного субтипа были получены от грызунов водно-болотного комплекса (полевок-экономок), урало-сибирского субтипа - от убежищных членистоногих из гнезд птиц. Принадлежность изолятов от иксодид вирусу КЭ подтверждена в ОТ ПЦР, однако генотипическая принадлежность штаммов не определена.

Штаммовое разнообразие вируса КЭ в альпийской и субальпийской зонах Алтая. Особенностями очаговой территории данного типа (расположенной выше 2200 м н.у.м.) является высокая мозаичность местообитаний в пределах локальных участков (что типично для горных территорий), и полное отсутствие ге-матофагов из числа пастбищных клещей и кровососущих двукрылых. Исследования показывают, что изоляты ВКЭ в безиксодовой зоне юго-восточного Алтая представлены двумя субтипами вируса - урало-сибирским и западным, существование которых в условиях высокогорий обеспечивается членистоногими из числа гамазовых клещей, и теплокровными позвоночными (грызунами и птицами). Условия существования популяций различных видов позвоночных и их членистоногих паразитов и нидиколов в местообитаниях высокогорий характеризуются выраженной мозаичностью, что потенциально может обеспечить циркуляцию в природных очагах КЭ различных геновариантов. Вирус КЭ представлен теми же субтипами, что циркулируют и в очагах КЭ в межгорных котловинах и речных долинах. Не отмечено связи субтипа вируса с источником изоляции.

2.4. Вирус ОГЛ — распространение и штаммовая неоднородность

Современное состояние природных очагов ОГЛ. В последнее десятилетие 20го в. произошла эпизоотическая активизация природных очагов ОГЛ в пределах эндемичных территорий северной лесостепи Западной Сибири, сопровождающаяся эпидемическими проявлениями в Омской и Новосибирской областях (рис. 6). Как и в предшествующий период активности (завершившийся в начале 70х гг. 20го в.), основное число случаев заражения людей связано с контактами с ондатрой или её местообитаниями (регистрируется водный путь заражения), нежели с передачей через присасывание иксодовых клещей.

Штаммовое разнообразие изолятов вируса ОГЛ. Результаты нуклеотидно-го анализа фрагментов генов Е (протяженностью 590 н.к.) и N85 (протяженностью 588 н.к.) у изолятов вируса ОГЛ (рис. 7А, Б), показывает значительный пространственный и временной консерватизм исследуемых штаммов вируса ОГЛ на данных двух участках генома, с уровнем гомологии выше 96,5%. Исключение составляет штамм из Курганской области (М-1-Курган-1992-О2), изолированный из мозга трупа ондатры в период эпизоотии 1992 г. - уровень его гомологии с 16 анализируемыми штаммами ОГЛ варьирует от 87,5 до 88,3% на участке, кодирующем белок Е, и от 88,6 до 89,8 % на участке неструктурной части генома (N85). Несмотря на «компактность» группы изолятов ОГЛ, обращает на себя внимание

Рис. 7А. Результат сравнения последовательностей по наиболее длинному общему фрагменту гена Е длиной 538 н.к. с координатами 1704-2242 (732-1270 от начала клона). Дерево постоено по методу ближайшего соседа Цифрами показаны величины бутстрепа в узлах ветвления (в % к 1000 эвристических повторов).

Рис. 7Б. Результат сравнения последовательностей по наиболее длинному общему фрагменту гена №5 с координатами 9254-9850 (координаты выбранного участка сравнения по клону Vasilchenko(af069066). Дерово построено по методу ближайшего соседа. Цифрами показаны величины бутст-репа в узлах ветвления (в % к 1000 евристических повторов)

образование единых кластеров штаммами, полученными от эпидемического источника (клеща или ондатры) и от больных. Результаты ОТ ПЦР и последующего секвенса полученных последовательностей показывают наличие микст-изолятов вирусов ОГЛ и КЭ.

Филогенетические отношения вируса ОГЛ с вирусами комплекса КЭ.

Наибольшая гетерогенность структуры гена Е ВКЭ отмечена для вирусов урало-сибирского субтипа, что выражается в наличии высокогомологичных участков в разных частях гена с восточным и западным субтипами. Вся группа вирусов ОГЛ по результатам сравнения общего фрагмента гена Е, обнаруживает наличие гомологичных фрагментов (с уровнем значимости J= 130-140 и несколько выше) в гене Е с вирусом КЭ западного субтипа. Представители комплекса КЭ (Лангат, Повас-сан, КЛБ, Алькурма, Deet Tick) достоверно дистанцированы на участке гена Е от вирусов ОГЛ и КЭ всех трех субтипов и вируса Louping III, ген Е которого обнаруживает выраженное сходство с западным субтипом вируса КЭ.

Наибольшая регистрируемая неоднородность нуклеотидного состава гена NS5 отмечена для ВКЭ урало-сибирского субтипа, обнаруживающего большее сходство с восточным субтипом, чем с западным. Из всего комплекса вирусов КЭ, штаммы вируса ОГЛ обнаруживают значимое (по уровню взаимной информации) сходство с западным субтипом вируса КЭ на двух участках гена NS5.Bnpyc Louping 111, в отличии от иных представителей комплекса КЭ, дистанцированных от вируса КЭ, на участке генома, соответствующего гену NS5, обнаруживает высокий уровень сходства с западным субтипов, их кривые изменения величины взаимной информации J в целом идентичны.

Ниже приводятся предельные значения величин нуклеотидной дивергенции, полученные на основании расчета матрицы сходства. Величина нуклеотидной дивергенции гена Е между субтипами вируса КЭ (крайние значения - 13,7-16,5%) как минимум вдвое превышает дивергенцию внутри субтипов (максимум варьирования - у восточного субтипа - 0,3-6,8%). Размах дивергенции между субтипами перекрывает показатели дивергенции вирусов КЭ западного субтипа и ОГЛ (16— 17,8%). При выраженной однородности изолятов ОГЛ (0-3,2%), наличие дистанцированного изолята из Курганской обл. увеличивает размах дивергенции до 12,3%, что близко минимальным различиям западного и восточного субтипов вируса КЭ (13,7%). Обращает на себя внимание, что уровень нуклеотидной дивергенции гена Е изолятов вирусов ОГЛ и Кьяссанурской лесной болезни (КЛБ) -возбудителей заболеваний людей, сходных по клиническим проявлениям - близок

таковому у вирусов КЭ и КЛБ (24,8-27,7%), и соответствует наблюдаемому уровню дивергенции между вирусами комплекса КЭ. В целом сходная картина нуклео-тидной дивергенции наблюдается и на участке гена N85 - предельные значения уровня дивергенции между тремя субтипами вируса КЭ (12,5-15,9%) близки уровню различий вирусов КЭ западного субтипа и ОГЛ (16,1-16,8%) и наблюдаемому предельному уровню дивергенции среди изолятов ОГЛ (11,4%).

2.4. Влияния эффекта хозяина на штаммовые характеристики ВКЭ и ОГЛ

Полученные в ходе полевых исследований результаты, свидетельствующие о возможности существования в пределах локальных территорий разных субтипов и (или) геновариантов вируса КЭ, делают необходимым изучение уровня вариабельности различных штаммовых признаков (биологических, генетических) в организме различных видов хозяев из числа позвоночных и членистоногих, а также уровня селективного воздействия на штаммовые характеристики при изоляции штаммов на лабораторных животных (Ис^-эффект). На наличие этого феномена. обращали внимание достаточно давно (Дживанян и др., 1974, 1988; Цилинский, 1988; Чунихин и др., 1979, 1982; ^агазЫ, 1984). У всех использованных в работе штаммов отмечено изменение характера гибридизации в реакции молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот (МГНК) с олигозондами к наиболее вариабельным участкам структурной (рге-М, М) и неструктурной (N8-1, №-2Ь) частях генома в процессе длительного последовательного пассирования на НБМ при сохранении исходного фенотипа в стандартных условиях культивирования клеток (+37°С) и изменении фенотипа и снижение титра на 3-5 Lg при температуре выше +40°С.

Изменение характера реакции в МГНК набором синтетических олигонуклео-тидных зондов при пассировании штаммов через организм иксодовых клещей путем интрацелломального заражения, могут происходить на первом пассаже, с изменением исходного фенотипа (средне- или крупнобляшечного) на мелкобляшеч-ный. Наибольшие частоты изменений характера гибридизации привязаны к участкам генома, кодирующим белки пре-М - М, С и N81. Последующие пассажи не приводили к изменению характера гибридизации, однако отмечена тенденция к восстановлению исходного фенотипа. Отмечается медленное накопление в организме искусственно инфицированных голодных иксодовых клещей вирусной РНК до концентраций, пригодных к использованию в МГНК. Величина инфекционного

титра вируса в интрацелломально инфицированных клещах, независимо от величины дозы заражения, выравнивается по истечении 10-14 суток от момента заражения." Это в сочетании с результатами гибридизации позволяет предполагать наличие инфицирования иксодид по принципу низкой множественности заражения.

В ходе проведения экспериментов на модели гамазовых клещей при лабораторном заражении клещей вирусами комплекса КЭ, регистрировались изменения. характера вирулентности для НБМ; в варианте экспериментов со спонтанно инфицированными клещами отмечены изменения вирулентности для НБМ и бляшкооб-разования на культуре клеток. Обращает на себя внимание, что как в случае искусственного инфицирования, так и в случае спонтанной инфицированности А.саваЦв, происходит элиминация вируса КЭ в течение двух месяцев с начала наблюдений (или заражения). Длительность сохранения в организме этого вида клещей вируса ОГЛ достаточна для переживания вирусом зимнего периода в условиях.Западной Сибири.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Хантавирусы. В продолжение работ предшествующего периода (Мясников и др., 1984, 1991, 1992), поставивших под сомнение.наличие дизъюнкции ареала ГЛПС на территории Сибири, проведена оценка распространения хантавирусов (в том числе - возбудителей ГЛПС), их генотипического состава, путей вероятного происхождения,-эпизоотической и эпидемической активности природных очагов хантавирусных инфекций в различных ландшафтных зонах Западной Сибири, от переходных тундр до степей.

Результаты исследований показывают, что на территории Западной Сибири циркулируют хантавирусы 4 генотипов — ТопографовУГаймыр, Пуумала, Добра-ва\Белград и Тула, в том числе 2 (Пуумала и Добрава) являются возбудителями ГЛПС. Распространение хантавирусов неравномерно и связано с определенными ландшафтами. Так, генотип Топографов в условиях Западной Сибири распространен в зонах переходных и северных субарктических тундр; Пуумала и Добрава - в подзонах мелколиственных лесов; Тула - в степях. В Обь-Енисейском (северная тайга) и Обь-Иртышском (средняя тайга) междуречьях по-видимому действительно существует разрыв ареала хантавирусов, также как отсутствуют постоянные, эпизоотически активные очаги хантавирусов в подзоне южной тайги и зоне лесостепи к востоку от р.Ишим (Омская и Новосибирская обл.).

Генотип ТопографовУГаймыр обнаружен в популяции сибирского лемминга в припойменных тундрах рек северного (Уара1аМ1 Ы а1., 1999) и юго-западного (наши данные) Таймыра. Изоляты, полученные с северных и южных территорий Таймыра характеризуются высоким уровнем нуклеотидной гомологии, что позволило их отнести к единому генотипу (Топографов).

Эпизоотически активные очаги геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), ассоциированные с хантавирусами генотипа Пуумала, на территории Западной Сибири локализованы в подзоне мелколиственных лесов (подтаи-ге) к западу от долины р.Иртыш. Основными хозяевами данного генотипа в сибирских очагах являются рыжая и красно-серая полевки. В таежную зону возбудитель проникает, по-видимому, по долинам рек, где может формировать псевдоочаги, существующие на протяжении длительности жизни инфицированных животных. Результаты секвенса 8 и М-сегментов геномов полученных изолятов показывают высокий уровень гомологии западносибирских изолятов, независимо от вида - источника (рыжая или красно-серая полевки), места и времени изоляции. Результаты секвенса 8 и М-сегментов геномов сибирских изолятов позволяют говорить о происхождении данных вариантов в результате реассортации 8 и М-сегментов гено-вариантов, идентичных карело-финским и центрально-европейским в местах совместной циркуляции при экспансии Пуумала-подобных вирусов в Восточную Европу. Конечный (сибирский) вариант по-видимому сформировался в результате контактов геновариантов Пуумала, циркулирующих в южном и северном Приура-лье. Есть основания предполагать, что на территории среднего Зауралья возможны находки всех трех геновариантов Пуумала. Эпидемические проявления природных очагов Пуумала в западной Сибири носят эпизодический локальный характер. Это же относится и к генотипу Добрава\Белград, существование которого обнаружили по наличию заболевания у людей. Природных очагов данного генотипа к настоящему времени выявить не удалось.

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ» 35 БИБЛИОТЕКА |

ОЭ *» «*Т |

лок, западносибирских изолятов с центрально-европейскими, чем с российскими (Тульская обл.). Наличие в геноме западносибирских изолятов участков возможной рекомбинации, позволяет предполагать происхождение данных вариантов в процессе экспансии разных геновариантов данного генотипа из Центральной в Восточную Европу, подобно хантавирусам генотипа Пуумала.

Вирусы клещевого энцефалита и омской геморрагической лихорадки

ВКЭ. В продолжение ранее проведенных исследований (Злобин, Горин, 1996; Леонова, 1997; Беликов, 2000; и др.), доказавших циркуляцию на территориях отдельных крупных регионов полного или почти полного набора субтипов и генова-риантов ВКЭ, в данной работе показана популяционная гетерогенность вируса КЭ в различных ландшафтных зонах регионов Западной Сибири (Омская и западные части Новосибирской обл.) и горного Алтая. Независимо от ландшафтной принадлежности, на указанных территориях Западной Сибири в природных очагах ВКЭ абсолютно доминируют два субтипа - западный и урало-сибирский (с преобладанием второго). Этим определяется сходство восточно-европейских и западноси- -бирских очаговых территорий. Принципиальным является то, что в зональных ландшафтах, каковыми являются тайга и степь, регистрируется только два субтипа ВКЭ - западный и урало-сибирский. Интразональный ландшафт, каковым является лесостепь, характеризуется наличием очагов КЭ с полным представительством геновариантов и субтипов. Здесь, как и в других ландшафтах, доминируют западный и урало-сибирский субтипы, однако в отдельные сезоны выявляется присутствие в очагах и восточного субтипа. Обращает на себя внимание, что за период исследований ни разу не регистрировали единовременного присутствия на территории исследования всех трех субтипов, однако присутствие двух субтипов является по-видимому нормой. Состав фауны иксодид, их пространственное распределение и особенности динамики численности оказывают влияние на устойчивость и пространственную структуру очага, уровень его эпидемической активности, но, по-видимому, не предопределяют уровень активности разных субтипов в очаге. В природных очагах ВКЭ высокогорий Алтая (безиксодовая зона) отмечен высокий уровень эпизоотической активности вирусов западного и урало-сибирского субтипов, которые отмечены и в межгорных котловинах и долинах рек, в популяции ик-содовых клещей. Нигде (в рамках использованных критериев результатов МГНК) не отмечали связи источника изоляции штаммов с видовой (или групповой) принадлежностью источника изоляции.

Экспериментальные исследования, направленные на оценку изменений штаммовых характеристик, вероятно происходящих в организмах хозяев - позвоночных и членистоногих, продемонстрировали следующее. Накопление изменений в геноме ВКЭ при пассажах на теплокровных (белые мыши) происходит постепенно. При пассажах вируса через организм иксодовых клещей изменения происходят уже на первом пассаже, вероятно — по типу низкой множественности заражения. Характер регистрируемых изменений (как в организме белых мышей, так и иксодовых клещей), тем не менее, не приводит к изменению принадлежности штамма исходному субтипу (при используемых критериях результатов МГНК), что может служить признаком уровня значимости регистрируемых изменений в геноме.

Результаты анализа нуклеотидных последовательностей на участках генов Е, №1 и NS5 штаммов ВКЭ, относящихся к разным субтипам, демонстрируют выраженную неоднородность нуклеотидного состава на отдельных участках генов' трех субтипов. Восточный субтип наиболее дистанцирован от западного и урало-сибирского, последний занимает некое промежуточное положение между ними. Все три субтипа ВКЭ дистанцированы от представителей комплекса ВКЭ, кроме, соответственно, вирусов ОГЛ и Ьсщ^ 111. Последний на участках анализируемых генов практически идентичен западному, субтипу ВКЭ. По-видимому формирование урало-сибирского субтипа (исходя из наличия в их генах пространственно разделенных протяженных участков с высоким уровнем сходства нуклеотидных последовательностей с западным и восточным субтипами) можно рассматривать как результат неких рекомбинантных событий при микст-инфицировании обоими субтипами.

Оценка изменений некоторых фенотипических характеристик штаммов в экспериментах показывает отсутствие изменений (по критерию бляшечного фенотипа) при серийных пассажах на мышах, и появление изменений фенотипа на мел-кобляшечный при пассаже на иксодовых клещах. Однако при последующих пассажах на клещах по-видимому происходит восстановление исходного фенотипа.

Тем не менее, отмечается наличие критериев, связанных с источником изоляции штамма, имеющих существенное эпизоотическое (вероятно - и эпидемическое) значение. Отмечается крайне низкая периферическая активность штаммов (ВКЭ и ОГЛ), изолированных от Hydroacarmae и кровососущих комаров; высокая периферическая активность — штаммов от убежищных членистоногих.

Омская геморрагическая лихорадка. Наблюдения за развитием эпизоотии ОГЛ в популяциях ондатры на эндемичных территориях Западной Сибири показывает, что активизация очагов ОГЛ современного периода происходит в границах прежних очагов Курганской, Омской, Новосибирской и, вероятно, Тюменской обл.

По-прежнему остаются невыясненными пути резервации вируса ОГЛ. При развитии эпизоотии ОГЛ в популяции ондатры, штаммы вируса ОГЛ удается изолировать от достаточно широкого круга позвоночных и членистоногих. Значение кровососущих двукрылых и водяных клещей, вследствие низкой периферической активности изолируемых от них штаммов, в поддержании эпизоотической и эпидемической активности очагов неясно.

Молекулярно-генетические исследования полученных изолятов показывают, что по результатам секвенса фрагментов двух генов — структурного гена Е (кодирующего поверхностный гликопротеин) и неструктурного гена N85 (кодирующего вирусную полимеразу) — штаммы вируса ОГЛ (независимо от времени, источника и места изоляции) образуют компактную группу в составе вирусов комплекса КЭ. На достаточно протяженных участках данных генов все изоляты ОГЛ обнаруживают выраженное сходство с западным субтипом вируса КЭ. Несколько дистанцированным в группе штаммов ОГЛ оказывается изолят из Курганской области (Ог-М1-Курган-1992).

Результаты исследования изолятов с территории очагов ОГЛ с использованием ОТ ПЦР демонстрируют присутствие ампликонов двух типов - полученных с использованием специфических праймеров к ОГЛ и к ВКЭ соответственно. Последующий секвенс подтверждает присутствие обоих вирусов. Наличие подобных естественных микстов не обязательно связано с работой с объединенными пробами исследуемых организмов (как это имеет место при работе с членистоногими убежищного комплекса), что показывает возможность сосуществования в организме одной особи хозяина (по крайней мере на протяжении ограниченного числа пассажей) вирусов ОГЛ и КЭ. Эксперименты на убежищных членистоногих продемонстрировали элиминацию ВКЭ при длительном (более 2 месяцев) существовании в условиях микст-инфекции.

Филогенетический анализ изолятов ОГЛ с представителями комплекса ВКЭ показывает достоверную дистанцированность данного вируса от всех известных представителей комплекса, включая вирус Кьяссанурской лесной болезни. С другой стороны, штамм вируса комплекса КЭ Алькурма, изолированный в Саудовской Аравии, практически идентичен (на участках генов Е, N81 и N85) вирусу

КЛБ. Как известно, клинические проявления вируса ОГЛ и КЛБ имеют сходные черты, вирус Алькурма также вызывает лихорадку с выраженной геморрагией. Эти обстоятельства позволяют ставить под сомнение целесообразность применения клинических критериев в систематике по крайней мере вирусов комплекса клещевого энцефалита

ВЫВОДЫ

1. Хантавирусы на территории Западной Сибири представлены 4 генотипами (Пуумала, Добрава, Тула и Топографов), распространение которых в регионе характеризуется ландшафтно-биотопическими особенностями. Возникновение западносибирских очагов Пуумала и Тула связано с европейскими очагами хантави-русов данных генотипов, их эпизоотическая активность снижается с продвижением на восток от Урала. Природные очаги хантавирусов Пуумала и Добрава на юго-западе Западной Сибири эпизодически проявляют эпидемическую активность.

2. Происхождение западносибирского геноварианта хантавируса Пуумала следует связывать с результатами реассортации малого и среднего сегментов генома, и возможными рекомбинантными событиями в малом сегменте генома при совместной циркуляции центрально- и североевропейских геновариантов данного генотипа на восточно-европейских территориях. Западносибирские геноварианты хантавируса Тула являются результатом возможных рекомбинантных событий в малом сегменте генома при совместной циркуляции западноевропейских генова-риантов данного генотипа. Хантавирус Таймыр (территория юго-западного Таймыра) идентичен вирусу Топографов (генотип Топографов).

3. Вирус клещевого энцефалита на юге Западной Сибири (Омская и прилегающие территории Новосибирской обл.) представлен тремя генотипами (субтипами) - западным, урало-сибирским и восточным - и шестью известными на сегодня геновариантами. Наибольшее разнообразие геновариантов характерно для природных очагов КЭ в лесостепном ландшафте. Зональные ландшафты характеризуются относительной однородностью генотипического состава очагов. Специфической связи генотипа или геноварианта с видом переносчика (хозяина) не зарегистрировано.

4. Членистоногие убежищного комплекса могут обеспечивать существование эпизоотически активных очагов КЭ независимо от наличия в составе циклов циркуляции ВКЭ эпидемически значимых переносчиков или уровня их численности.

5. При наличии выраженного селективного воздействия организма хозяев из числа членистоногих в условиях лабораторного эксперимента на некоторые штаммовые характеристики ВКЭ, уровень выявленного воздействия не обнаруживает изменений систематического положения исследуемых штаммов внутри группы ВКЭ.

6. Регистрируемая эпидемическая и эпизоотическая активизация природных очагов омской геморрагической лихорадки на юге Западной Сибири территориально перекрывает известные эндемичные территории (период 40х-70х гг. 20 века).

7. Изоляты вируса ОГЛ характеризуются высоким уровнем консерватизма на участках гена Е и N85. Выраженной географической (кроме изолята из Курганской обл.) и временной вариабельности изолятов не выявлено. На участках данных генов вирус ОГЛ наиболее близок западному субтипу ВКЭ в связи с наличием выраженной нуклеотидной гомологии на отдельных фрагментах. Размах нуклеотид-ной и аминокислотной дивергенции вируса ОГЛ перекрывается с таковым у западного субтипа ВКЭ.

8. Членистоногие убежищного комплекса и гидробионты из числа Б1р1ега и НуёгасИтёае в периоды эпизоотической активности очагов ОГЛ включаются в циркуляцию возбудителя. Членистоногие убежищного комплекса из числа доминирующих в сообществе видов мезостигматных клещей, адаптированных к обитанию в гнездах или убежищах позвоночных-хозяев, способны резервировать вирусы ОГЛ и КЭ и обеспечивать переживание неблагоприятного периода существования очагов.

Список основных публикаций по теме диссертации

1. Тагильцев А.А., Тарасевич Л.Н., Якименко В.В. Материалы сравнительного изучения экологии вируса КЭ в эксперименте // Природноочаговые инфекции и инвазии. -Омск, 1984 - С. 84-90.

2. Россолов М.А., Якименко В.В. Роль гамазовых клещей в сочетанном очаге ар-бовирусов в северной лесостепи Омской области // Природноочаговые болезни человека -Омск, 1985 - С. 80-86.

3. Тагильцев А.А., Тарасевич Л.Н., Богданов И.И., Якименко В.В. Изучение членистоногих убежищного комплекса в природных очагах трансмиссивных вирусных инфекций. - Томск: Изд-во ТГУ, 1990 - 106 с.

4. Якименко В.В., Богданов И.И., Дрокин Д.А., Калмин О.Б., Тагильцев А.А. Особенности связей членистоногих убежищного комплекса с возбудителями

трансмиссивных вирусных инфекций в колониальных поселениях птиц // Паразитология.-1991.- Т.25, Вып.2 - С. 156-162.

5. Калмин О.Б., Якименко В.В., Дрокин Д.А., Богданов И.И., Бусыгин Ф.Ф. Изоляция вирусов комплекса клещевого энцефалита из кровососущих комаров на юге Западной Сибири // Природноочаговые болезни человека. - Омск, 1991 -С. 91-95.

6. Дрокин Д.А., Злобин В.И., Карганова Г.Г., Вихорева Т.В., Якименко В.В., Дживанян Т. И., Лашкевич В.А. Изменение геномов штаммов вируса клещевого энцефалита в результате пассажей на мышах // Вопросы вирусологии - М.: Медицина, 19 94-№4-С. 160-162.

7. Деконенко А.Е., Ткаченко Е.А., Липская Г.Ю., Дзагурова Т.К., Иванов А.П., Иванов Л.И., Слонова Р.А., Маркешин С.А., Иванидзе Э.А., Шуткова Т.М., Якименко В.В., Чижиков В. Генетическая дифференциация хантавирусов с помощью полимеразной цепной реакции и секвенирования // Вопросы вирусологии - М.: Медицина, 1996 - Т.41, №1 - С. 24-27.

8. Якименко В.В., Дрокин Д.А., Калмин О.Б., Богданов И.И., Иванов Д.И. К вопросу о влиянии host-эффекта на штаммовую изменчивость вируса клещевого энцефалита // Вопросы вирусологии - М.: Медицина, 1996 — Т.41, №3 - С. 112117.

9. Бусыгин Ф.Ф., Якименко В.В., Богданов И.И., Матущенко А.А. Итоги разработки проблемы арбовирусов в Западной Сибири // Природноочаговые болезни человека: Респ. сборник научных трудов. — Омск, 1996 - С. 18-29.

10. Богданов И.И., Якименко В.В., Иванов Д.И., Калмин О.Б., Вахрушев А.В. Вирусы комплекса клещевого энцефалита в безиксодовой зоне. Сообщение 1. Сообщества мелких млекопитающих и их паразитов и нидиколов в высокогорных ландшафтах Алтая // Природноочаговые болезни человека: Респ. сборник научных трудов. - Омск, 1996 - С. 102-110.

11. Якименко В.В., Богданов И.И., Иванов Д.И., Калмин О.Б., Вахрушев А.В. Вирусы комплекса клещевого энцефалита в безиксодовой зоне. Сообщение 2. Циркуляция вируса клещевого энцефалита в высокогорьях Алтая // Природноочаговые болезни человека: Респ. сборник научных трудов. - Омск, 1996 - С. 110-114.

12. Якименко В.В. Результаты изучения взаимоотношений вирусов комплекса клещевого энцефалита и гамазовых клещей Androlaelaps casalis в эксперименте

// Природноочаговые болезни человека: Респ. сборник научных трудов. -Омск, 1996-С 115-122.

13. Калмин О.Б., Бусыгин Ф.Ф.; Якименко В.В., Богданов И.И. Кровососущие комары как переносчики вируса омской геморрагической лихорадки // Природноочаговые болезни человека: Респ. сборник научных трудов. - Омск, 1996 — С. 123-127.

14. Якименко В.В., Тузовский П.В., Калмин О.Б., Богданов И.И., Дрокин Д.А., Та-гильцев А.А. Водяные клещи Ну&асЬш(1ае юга Западной Сибири в связи с их участием в циркуляции арбовирусов //Паразитология. - 1997. - Т. 31, №5. - С. 414-Л26.

15. Якименко В.В., Деконенко А.Е., Малькова М.Г., Танцев А.К., Кузьмин И.В., Ткаченко ЕА. К проблеме распространения хантавирусов в западной Сибири // Актуальные вопросы инфекционной патологии: Мат-лы конф. - Барнаул, 1999. -С. 217-220.

16. Бусыгин Ф.Ф., Якименко В.В., Калмин О.Б., Богданов И.И. Современное состояние изучения арбовирусов в Западной Сибири // Актуальные проблемы медицинской вирусологии: Мат-лы конф. - М., 1999. - Т. 2. - С. 15.

17. Дзагурова Т.К., Ткаченко ЕА, Чу Е.К., Ли Х.В., Лесников И.Р., Пащенко Э.А., Скорнякова И.Н., Лопаткина Т.К., Овечкина Т.И., Якименко В.В., Горбачкова . Е.А., Костырко В.И. Об этиологической роли хантавирусного серотипа Добра-ва\Белград в структуре заболеваемости ГЛПС в России // Актуальные проблемы медицинской вирусологии: Мат-лы конф. - М., 1999. - Т. 2. - С. 60.

18. Деконенко А.Е., Ткаченко Е.А.б Иванов А.П., Дзагурова Т.К., Якименко В.В., Никоноров Ю.М.б Никитин П.Н., Шервали В.И., Барановский П.М., Смолджон К. Новые хантавирусные генотипы в европейской части России и Западной Сибири // Актуальные проблемы медицинской вирусологии: Мат-лы конф. -М., 1999.-Т. 2. - С. 61.

19. Якименко В.В., Деконенко А.Е., Малькова М.Г., Кузьмин И.В., Дзагурова Т.К., Ткаченко А.Е. Распространение хантавирусов в Западной Сибири // Актуальные проблемы медицинской вирусологии: Мат-лы конф. - М.1,1999. - Т. 2. - С. 92.

20. Якименко В.В., Деконенко А.Е., Малькова М.Г., Кузьмин И.В., Танцев А.К., Дзагурова Т.К., Ткаченко А.Е. О распространении хантавирусов в западной Сибири // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. - 2000. - №3. - С. 21-28.

21. Ткаченко Е.А., Слонова Р.А., Иванов Л.И., Морозов В.Г., Якименко В.В., Юничева Ю.В., Дзагурова Т.К., Нургалеева Р.Г., Иванов Л.П., Ямпольский А.Ф., Деконенко Л.Е., Здановская Н.И., Астахова Т.И., Василенко Л.Е., Дроздов С.Г., Минин Г.Д., Матущенко А.А., Брудный Р.А., Федоров Ю.М. Современное состояние проблемы ГЛПС // Природноочаговые болезни человека: Респ. сб. научных работ. - Омск, 2001. - С. 22-32.

22. Якименко В.В., Деконенко А.Е., Малькова М.Г., Дзагурова Т.К., Кузьмин И.В., Пальчех Н.А., Танцев А.К., Колесникова Е.М., Ткаченко А.Е., Раенгулов Б.М., Матущенко А.Е. Хантавирусы в Западной Сибири // Природноочаговые болезни человека: Респ. сб. научных работ.- Омск, 2001. - С. 32-39.

23. Малькова М.Г., Пальчех Н.А., Кузьмин И.В., Якименко В.В. Пространственная структура популяций грызунов в степной зоне Омской области // Природно-очаговые болезни человека: Респ. сб. научных работ- Омск, 2001. - С. 39-43.

24. Тюлько Ж.С., Якименко В.В., Деконенко А.Е. О существовании рекомбинаций у хантавирусов \\ Актуальные аспекты природноочаговых болезней: мат. конф. -Омск,2001.-С. 85-86.

25. Якименко В.В., Танкибаев М.А. О роли иксодовых клещей БегшасеПог ша^ь паШв в экологии вируса Тягиня // Актуальные аспекты природноочаговых болезней: Мат-лы конф. - Омск, 2001. - С. 69-70.

26. Кузьмин И.В., Якименко В.В., Малькова М.Г., Пальчех Н.А. Сочетанная экспериментальная инфекция узкочерепных полевок (Мюге^ш gгega1is) вирусами клещевого энцефалита и бешенства с возможным проявлением интерференции. // Вопр. вирусол. - 2002 - Т. 47, №1. - С. 26-30.

27. Якименко В.В., Тюлько Ж.С., Деконенко А.Е. Филогенетические отношения западносибирских хантавирусов генотипов Тула и Пуумала // Хантавирусы и хантавирусные инфекции / Под ред. Р.А.Слоновой, В.А.Иванис. - Владивосток, 2003. - С. 161-172.

28. Тюлько Ж.С, Якименко В.В. Изучение филогенетических отношений хантави-русов с применением метода вычисления взаимной информации (на примере Хантаан-подобных вирусов) // Хантавирусы и хантавирусные инфекции / Под ред. Р.А.Слоновой, В.А.Иванис. - Владивосток, 2003. - С. 173-181.

29. Карань Л.С., Якименко В.В., Матущенко А.А., Шипулин Г.А., Платонов А.Е. Кто есть кто среди вирусов комплекса клещевого энцефалита: генетическое расследование // Современные технологии в диагностике особо опасных ин-

фекционных болезней / Под ред. В.В.Кутырева - Саратов, РосНИПЧИ «Микроб», 2003. - С. 89-92.

30. Dekonenko A., Yakimenko V., Ivanov A., Morozov V., Nikitin P., Khasanova S., Dzagurova Т., Tkachenko E., Schmalijohn C. Genetic similarity of Puumala viruses found in Finland and western Siberia and of the mitochondrial DNA of their rodeht hosts suggests a common evolutionary oridin // Infection, Genetics and Evolution. — Elsevier, 2003. - № 3. - P. 245-257.

0 0 0 «Издатель-Полиграфист» Объем 2 печ. л. Бумага офсетная

Формат А5 Тираж 100 экз.

Лицензия ПЛД №58-53 от 24.07.97 г. №2155

SS-7439

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Якименко, Валерий Викторович

Общая характеристика работы.

Глава 1. Современное состояние проблемы хантавирусов (обзор данных литературы).

1.1. Характеристика групп.

1.2. Хантавирусы Старого Света.

1.3. Хантавирусы Нового Света.

1.4. Вопросы изменчивости и филогении хантавирусов.

Глава 2. Современное состояние изученности вирусов комплекса клещевого энцефалита в Западной Сибири (обзор данных литературы).

2.1. Вирус клещевого энцефалита (ВКЭ) - распространение и штаммовая неоднородность в Западной Сибири.

2.2. Вирус омской геморрагической лихорадки - распространение и штаммовая неоднородность в Западной Сибири.

Собственные исследования.

Глава 3. Материалы и методы.

3.1. Методы.

3.1.1. Зоопаразитологические методы.

3.1.2. Методы вирусологических исследований.

3.1.3. Методы филогенетического анализа.

3.1.4. Экспериментальные исследования.

3.2. Материалы.

3.2.1. Вирусы комплекса клещевого энцефалита.

3.2.2. Хантавирусы.

Глава 4. Распространения и филогенетические отношения хантавирусов в Западной Сибири.

4.1. Распространение в регионе.

4.1.1. Хантавирусы генотипа Топографов.

4.1.2. Хантавирусы генотипа Пуумала.

4.1.3. Эпидемиологические проявления природных очагов хантавирусов генотипа Пуумала в Западной Сибири.

4.1.4. Хантавирусы генотипа Добрава\Белград.

4.1.5. Хантавирусы генотипа Тула.

Глава 5. Гетерогенность вируса клещевого энцефалита в различных ландшафтах Западной Сибири и Алтая.

5.1. Гетерогенность вируса клещевого энцефалита в подзоне южной тайги.

5.2. Ландшафтно-биотопические особенности распространения вируса клещевого энцефалита в южной тайге.

5.3. Гетерогенность вируса клещевого энцефалита в северной лесостепи.

5.4. Ландшафтно-биотопические особенности распространения вируса клещевого энцефалита в северной лесостепи.

5.5. Гетерогенность вируса клещевого энцефалита в степной зоне Западной Сибири.

5.6. Ландшафтно-биотопические особенности распространения вируса клещевого энцефалита в степи (Западная Сибирь и Центр. Казахстан).

5.7. Гетерогенность вируса клещевого энцефалита в альпийской и субальпийской зонах Алтая.

5.8. Ландшафтно-биотопические особенности распространения вируса клещевого энцефалита в в альпийской и субальпийской зонах Алтая.

Глава 6. Вирус омской геморрагической лихорадки - распространение и гетерогенность.

6.1. Современные данные по распросранению природных очагов омской геморрагической лихорадки.

6.2. Оценка уровня однородности нуклеотидного состава геномов вирусов комплекса клещевого энцефалита с помощью вычисления величины взаимной информации.

6.3. Оценка уровня гомологии нуклеотидного состава генов Е и

NS5 вирусов комплекса клещевого энцефалита.

Глава 7. Экспериментальное изучение влияния эффекта хозяина на штаммовые характеристики вирусов комплекса клещевого энцефалита.

7.1. Результаты селективного воздействия на возбудитель организма лабораторных животных (белых мышей).

7.2. Результаты селективного воздействия на возбудитель организма иксодовых клещей.

7.3. Результаты селективного воздействия на возбудитель организма гамазовых клещей.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экологические предпосылки гетерогенности популяций хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита в Западной Сибири"

Актуальность темы

Серьезной проблемой контроля эпидемической активности природных очагов вирусных инфекций является чередование периодов относительного эпидемического благополучия с труднопредсказуемыми периодами эпидемической активности. Так, в последние два десятилетия в России не только отмечались периодические существенные подъемы и спады заболеваемости населения такими традиционными формами, как клещевой энцефалит (КЭ) и геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС), но и активизировались после длительного периода покоя природные очаги лихорадки Западного Нила (ЛЗН), Крымской-Конго (КГЛ) и омской (ОГЛ) геморрагических лихорадок.

В Российской Федерации ГЛПС по показателям заболеваемости лидирует среди зоонозных вирусных инфекций, и занимает одно из первых мест среди всех природно-очаговых болезней человека (ТкасЬепко е1 а1., 1998), при этом абсолютное число случаев заболевания - 97% - приходится на Европейскую часть России, 3% - на Азиатскую часть, главным образом, на Дальний Восток (Ткаченко, 2000). Распространение очагов хантавирусов в Сибири длительное время определялось представлениями о дизъюнкции ареала хантавирусов (Лебедев, 1964). В настоящее время установлено, что из 30 серологически и/или генетически различающихся хантавирусов (8сЬшаЦо1т е1 а1., 1983; Р1шпт е1 а1., 1994; Р1и8пт, е1 а1., 1999; Аузк-гирапс е1 а1., 1995; ЗсктаЦоИп, КУе11е, 1997; и др.), только для 4 генотипов показана роль возбудителей ГЛПС - Хантаан, Сеул, Пуумала и Добрава (8с1ш1аЦо1т, Н]е11е, 1997). Сочетание новых представлений о популяционной гетерогенности состава хантавирусов, с полученными в 60х - 80х годах 20го века данными о находках хантавирусного антигена у грызунов в лесной и тундровой ландшафтных зонах Западной Сибири (Апекина и др., 1990; Мясников и др., 1984; Мясников и др., 1991), определяли целесообразность проведения исследований по проблеме ГЛПС в регионе.

Клещевой энцефалит (КЭ) продолжает занимать второе место в России (после ГЛПС) по уровню заболеваемости населения зоонозными инфекциями вирусной природы. К настоящему времени является доказанным положение о популяционной гетерогенности вируса клещевого энцефалита фактически на любой территории в пределах его нозоареала (Злобин, Горин, 1996; Леонова, 1997), в связи с чем предпринимаются попытки сопоставить регистрируемую гетерогенность с особенностями клинического течения КЭ у людей (Леонова, 1997). Сведения о неоднородности состава популяций вируса ВКЭ в Западной Сибири к настоящему времени определяются представлениями о распространении генетически различающихся субтипов в пределах административных территорий субъектов Федерации. Целесообразным является изучение распространения генетических вариантов ВКЭ в условиях различных ландшафтов региона, в том числе - в зоне перекрытия нозоареалов клещевого энцефалита и омской геморрагической лихорадки. Природные очаги последней вновь активизировались в последнее десятилетие 20го века после 30™ -летнего периода эпидемического и эпизоотического благополучия. До настоящего времени отсутствуют достоверные данные о путях резервации вируса ОГЛ. Интенсивное развитие исследований ОГЛ было прервано в начале 70х годов в связи с полным прекращением эпидемической и эпизоотической активности природных очагов ОГЛ в пределах всего нозоареала. Активизация природных очагов ОГЛ дала возможность продолжить исследования с учетом современных возможностей молекулярной биологии.

Цель и задачи исследования

В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи:

4. Оценить степень участия экологического аспекта изоляции хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита (на примере ЬозЬ эффекта) в формировании и поддержании феномена популяционной гетерогенности.

Научная новизна работы

В Западной Сибири впервые была установлена гетерогенность состава хантавирусов, оценен характер ландшафтного и биотопического распространения их природных очагов, описан (единовременно и независимо от финских исследователей) новый генотип хантавирусов, ассоциированный с популяциями леммингов на Таймыре (получивший название Топографов по представлению финских коллег). Показано значение реассортации и рекомбинантных событий в формообразовании западносибирских хантавирусов Пуумала и Тула.

Практическая ценность работы

Впервые определены и депонированы в Международный компьютерный банк данных ОепВапк нуклеотидные последовательности М {АР367061; АЕ442615; АР442616; А¥442617) и 8-сегментов (АР367064; АГ367065, АР367066; АР367067; АР367069; АГ367070; АР367071) геномов западносибирских изолятов хантавирусов генотипа Пуумала; нуклеотидные последовательности структурной части Б-сегмента западносибирских изолятов хантавирусов генотипа Тула (АР442618; АР442619; АР442620; АЕ442621). Показана эпидемическая значимость на территории Западной Сибири хантавирусов генотипов Пуумала и Добрава\Белград.

В ГКВ и-та вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН депонированы штаммы вируса ОГЛ "Ондатра-М1-Курган-1992" (ГКВ № 958); "Ондатра-19М-НСО-1989" (ГКВ № 962); "Ондатра-15П-НСО-1989" (ГКВ № 961); "Ондатра-31П-НСО-1989" (ГКВ № 960); "Ондатра-31М-НСО-1989" (ГКВ № 940); и штаммы вируса КЭ 'ЧЬА.Аауезсет- НСО(Карасук)- 1989" (ГКВ № 943); "ЫеШепа-Омск (Тюкалинск)-1986" (ГКВ № 942) и "ИеШепа-Омск (Черлак)-1986" (ГКВ № 959). Впервые определены нуклеотидные последовательности фрагментов генов Е (длиной 545 и 597 н.к.) у 20 штаммов, и N85 (длиной 596 н.к.) - у 16 штаммов вируса омской геморрагической лихорадки, в том числе у

17 штаммов, изолированных в современный период активности очагов с трех административных территорий региона (Курганская, Омская и Новосибирская обл.).

На защиту выносятся следующие положения:

• Хантавирусы на территории Западной Сибири представлены 4 генотипами - Топографов, Пуумала, Добрава\Белград и Тула, распространение природных очагов которых в регионе имеет выраженную ландшафтно-биотопическую приуроченность.

Спорадическая заболеваемость населения ГЛПС, регистрируемая на юге Западной Сибири, вызывается хантавирусами генотипов Пуумала и Добрава\Белград.

• В пределах северной и средней тайги Западной Сибири имеет место разрыв ареала хантавирусов.

Апробация работы и публикации

Материалы диссертации были представлены на Всероссийском симпозиуме "Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита", Иркутск, 1990; Международной научной конференции "Вирусные, риккетсиозные и бактериальные инфекции, переносимые клещами", Листвянка, Иркутск, 1996; Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 75-летию ОНИИПИ, Омск, 1996; Всероссийской научно-практической конференции "Природноочаговые инфекции в России: современная эпидемиология, диагностика, тактика защиты населения", Омск, 1998; Научной конференции, посвященной 90-летию со дня рождения М.П.Чумакова, Москва, 1999; Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ОНИИПИ, Омск, 2001; Пятой Международной конференции "HFRS, HPS and hantaviruses", Франция, 2001; Второй научной конференции с международным участием "Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера", Новосибирск, 2002; 8 Всероссийском съезде эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, 2002; Российско-американском семинаре "Экология инфекционных заболеваний". Новосибирск, ГНЦ ВБ "Вектор", 2002; Межгосударственном семинаре "Современные технологии в диагностике особо опасных инфекционных болезней", Саратов, 2003; 4th International Conferences on Emerging Zoonoses. Ames, USA, September 18-21,

2003; International Conference on Emerging Infectious Diseases. Atlanta, February 29 - March 3, 2004.

По материалам диссертации имеется 30 публикаций.

Объем и структура диссертации

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Якименко, Валерий Викторович

ВЫВОДЫ

1. Хантавирусы на территории Западной Сибири представлены 4 генотипами (Пуумала, Добрава, Тула и Топографов), распространение которых в регионе характеризуется ландшафтно-биотопическими особенностями. Возникновение западносибирских очагов Пуумала и Тула связано с европейскими очагами хантавирусов данных генотипов, их эпизоотическая активность снижается с продвижением на восток от Урала. Природные очаги хантавирусов Пуумала и Добрава на юго-западе Западной Сибири эпизодически проявляют эпидемическую активность.

2. Происхождение западносибирского геноварианта хантавируса Пуумала следует связывать с результатами реассортации малого и среднего сегментов генома, и возможными рекомбинантными событиями в малом сегменте генома при совместной циркуляции центрально- и североевропейских геновариантов данного генотипа на восточно-европейских территориях. Западносибирские геноварианты хантавируса Тула являются результатом возможных рекомбинантных событий в малом сегменте генома при совместной циркуляции западноевропейских геновариантов данного генотипа. Хантавирус Таймыр (территория юго-западного Таймыра) идентичен вирусу Топографов (генотип Топографов).

7. Изоляты вируса ОГЛ характеризуются высоким уровнем консерватизма на участках гена Е и N85. Выраженной географической (кроме изолята из Курганской обл.) и временной вариабельности изолятов не выявлено. На участках данных генов вирус ОГЛ наиболее близок западному субтипу ВКЭ в связи с наличием выраженной нуклеотидной гомологии на отдельных фрагментах. Размах нуклеотидной и аминокислотной дивергенции вируса ОГЛ перекрывается с таковым у западного субтипа ВКЭ.

8. Членистоногие убежищного комплекса и гидробионты из числа Э1р1ега и Нус1гас11шс1ае в периоды эпизоотической активности очагов ОГЛ включаются в циркуляцию возбудителя. Членистоногие убежищного комплекса из числа доминирующих в сообществе видов мезостигматных клещей, адаптированных к обитанию в гнездах или убежищах позвоночных-хозяев, способны резервировать вирусы ОГЛ и КЭ и обеспечивать переживание неблагоприятного периода существования очагов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ Хантавирусы

В продолжение работ предшествующего периода (Мясников и др., 1984, 1991, 1992), поставивших под сомнение наличие дизъюнкции ареала ГЛПС на территории Сибири, проведена оценка распространения хантавирусов (в том числе - возбудителей ГЛПС), их генотипического состава, путей вероятного происхождения, эпизоотической и эпидемической активности в различных ландшафтных зонах Западной Сибири, от переходных тундр до степей.

Результаты исследований показывают, что на территории Западной Сибири циркулируют хантавирусы 4 генотипов - Топографов\Таймыр, Пуумала, Добрава\Белград и Тула, в том числе 2 (Пуумала и Добрава) являются возбудителями ГЛПС. Распространение хантавирусов неравномерно и связано с определенными ландшафтами. Так, генотип Топографов в условиях Западной Сибири распространен в зонах переходных и северных субарктических тундр; Пуумала и Добрава - в подзонах мелколиственных лесов; Тула - в степях. В Обь-Енисейском (северная тайга) и Обь-Иртышском (средняя тайга) междуречьях по-видимому действительно существует разрыв ареала хантавирусов, также как отсутствуют постоянные, эпизоотически активные очаги хантавирусов в подзоне южной тайги и зоне лесостепи к востоку от р.Ишим (Омская и Новосибирская обл.).

Генотип Топографов\Таймыр обнаружен в популяции сибирского лемминга в припойменных тундрах рек северного (Уара1аЬН & а1., 1999) и юго-западного (наши данные) Таймыра. Изоляты, полученные с северных и южных территорий Таймыра характеризуются высоким уровнем нуклеотидной гомологии, что позволило их отнести к единому генотипу (Топографов). Выраженная стенотопность распространения данного вируса позволяет говорить о его происхождении от южных форм хантавирусов в процессе формирования арктических и субарктических ландшафтов.

Эпизоотически активные очаги генотипа Пуумала на территории Западной Сибири локализованы в подзоне мелколиственных лесов (подтайге) к западу от долины р.Иртыш, биоценотически приурочены к реликтовым липовым и заболоченным осиново-березовым лесам в Ишим-Иртышском междуречье. Основными хозяевами данного генотипа в сибирских очагах являются рыжая и красно-серая полевки. В таежную зону возбудитель проникает, по-видимому, по долинам рек, где может формировать псевдоочаги, существующие на протяжении длительности жизни инфицированных животных. Результаты секвенса Б и М-сегментов геномов полученных изолятов показывают высокий уровень гомологии (вплоть до идентичности отдельных изолятов) западносибирских изолятов, независимо от вида источника изоляции (рыжая или красно-серая полевки), места и времени изоляции. Результаты секвенса 8 и М-сегментов геномов сибирских изолятов позволяют говорить о происхождении данных вариантов в результате реассортации 8 и М-сегментов вариантов, идентичных карело-финским и центрально-европейским в местах совместной циркуляции при экспансии Пуумала-подобных вирусов в Восточную Европу. Конечный (сибирский) вариант по-видимому сформировался в результате контактов геновариантов Пуумала, циркулирующих в южном и северном Приуралье. Есть основания предполагать, что на территории среднего Зауралья возможны находки всех трех геновариантов Пуумала. Эпидемические проявления природных очагов Пуумала в западной Сибири носят эпизодический локальный характер. Это же относится и к генотипу Добрава\Белград, существование которого обнаружили по наличию заболевания у людей. Природных очагов данного генотипа к настоящему времени выявить не удалось.

Эпизоотически активные природные очаги генотипа Тула локализованы в зоне степи, с возможностью выноса в лесостепную зону по долинам рек. Циркуляция хантавируса осуществляется в популяциях узкочерепной полевки и степной пеструшки. Результаты секвенса 8-сегмента полученных изолятов показывают наличие в уровне гомологии внутри группы, связанной с видом источника изоляции, что может быть объяснено особенностями пространственной структуры этих видов грызунов. Филогенетический анализ показывает наличие более высокого уровня гомологии в структурной части гена, кодирующего нуклеокапсидный белок, западносибирских изолятов с центрально-европейскими, чем с российскими (Тульская обл.). Наличие в геноме западносибирских изолятов участков возможной рекомбинации, позволяют предполагать происхождение данных вариантов в процессе экспансии разных геновариантов данного генотипа из Центральной в Восточную Европу, подобно хантавирусам генотипа Пуумала.

Вирусы клещевого энцефалита и омской геморрагической лихорадки

ВКЭ. В продолжение ранее проведенных исследований (Злобин, Горин, 1996; Леонова, 1997; Беликов, 2000; и др.), показавших циркуляцию на территориях отдельных крупных регионов полного или почти полного набора субтипов и геновариантов ВКЭ, в данной работе показана неоднородность штаммового состава ВКЭ в различных ландшафтных зонах регионов Западной Сибири (Омская и западные части Новосибирской обл.) и горного Алтая. Независимо от ландшафтной принадлежности, на указанных территориях Западной Сибири в природных очагах ВКЭ абсолютно доминируют два субтипа - западный и урало-сибирский (с преобладанием второго), что является критерием, сближающим восточно-европейские и западносибирские территории. Принципиальным является то, что в зональных ландшафтах, каковыми являются тайга и степь, регистрируются только два субтипа ВКЭ -западный и урало-сибирский. Интразональный ландшафт, каковым является лесостепь, характеризуется наличием очагов ВКЭ с полным представительством геновариантов и субтипов. Здесь, как и в других ландшафтах, доминируют западный и урало-сибирский субтипы, однако в отдельные сезоны выявляется присутствие в очагах и восточного субтипа. Обращает на себя внимание, что за период исследований ни разу не регистрировали единовременного присутствия на территории исследования всех трех субтипов, однако присутствие двух субтипов является по-видимому нормой. Состав фауны иксодид, их пространственное распределение и

• особенности динамики численности оказывают влияние на устойчивость и пространственную структуру очага, уровень его эпидемической активности, но, по-видимому, не влияют на уровень активности разных субтипов в очаге. В природных очагах КЭ высокогорий Алтая (безиксодовая зона) циркуляция вируса осуществляется в сообществах теплокровных позвоночных и членистоногих убежищного комплекса из числа доминирующих в сообществе видов гамазоидных клещей. Здесь отмечен высокий уровень эпизоотической активности вирусов западного и урало-сибирского субтипов, которые отмечены и в межгорных котловинах и долинах рек, в популяции иксодовых клещей. Нигде (в рамках использованных критериев результатов МГНК) не отмечали связи источника изоляции штаммов с принадлежностью вируса тому или иному субтипу.

Экспериментальные исследования, направленные на оценку изменений штаммовых характеристик, вероятно происходящих в организмах хозяев -позвоночных и членистоногих, продемонстрировали следующее. Накопление изменений в геноме ВКЭ при пассажах на теплокровных (белые мыши) происходит постепенно. При пассажах вируса через организм иксодовых клещей изменения происходят уже на первом пассаже, вероятно - по типу низкой множественности заражения. Характер регистрируемых изменений (как в организме белых мышей, так и иксодовых клещей), тем не менее, не приводит к изменению принадлежности штамма исходному субтипу (при используемых критериях результатов МГНК), что может служить признаком уровня значимости регистрируемых изменений в геноме. Подтвердить или опровергнуть данное предположение можно только путем секвенирования изучаемых фрагментов генома с последующим анализом наличия аминокислотных замен.

Результаты анализа нуклеотидных последовательностей на участках генов Е, NS1 и NS5 штаммов ВКЭ, относящихся к разным субтипам, демонстрируют выраженную неоднородность нуклеотидного состава на отдельных участках генов трех субтипов. Восточный субтип наиболее дистанцирован от западного и урало-сибирского, последний занимает некое промежуточное положение между ними. Все три субтипа ВКЭ дистанцированы от представителей комплекса ВКЭ, кроме, соответственно, вируса ОГЛ и Louping 111. Последний на участках анализируемых генов практически идентичен западному субтипу ВКЭ. По-видимому формирование урало-сибирского субтипа (исходя из наличия в их генах пространственно разделенных протяженных участков с высоким уровнем сходства нуклеотидных последовательностей с западным и восточным субтипами) можно рассматривать как результат неких рекомбинантных событий при микст-инфицировании обоими субтипами.

Оценка изменений некоторых фенотипических характеристик штаммов в экспериментах показывает отсутствие изменений (по критерию бляшечного фенотипа) при серийных пассажах на мышах, и появление изменений фенотипа на мелкобляшечный при пассаже на иксодовых клещах. Однако при последующих пассажах на клещах по-видимому происходит восстановление исходного фенотипа.

Тем не менее, отмечается наличие критериев, связанных с источником изоляции штамма, имеющих существенное эпизоотическое (вероятно - и эпидемическое) значение. Отмечается уровень крайне низкой периферической активности штаммов (ВКЭ и ОГЛ), изолированных от Hydracarinae и кровососущих комаров; уровень высокой периферической активности - от убежищных членистоногих.

ОГЛ. По-прежнему остаются невыясненными пути резервации вируса ОГЛ. Наблюдения за развитием эпизоотий ОГЛ в популяциях ондатры на эндемичных территориях Западной Сибири показывает, что активизация очагов ОГЛ современного периода происходит в границах прежних очагов Курганской, Омской, Новосибирской и, вероятно, Тюменской обл.

При развитии эпизоотии в циркуляцию вируса включается достаточно широкий круг позвоночных и членистоногих, включая мышевидных млекопитающих, членистоногих убежищного комплекса, кровососущих

• двукрылых и водяных клещей. Значение последних двух групп, вследствие низкой периферической активности изолируемых от них штаммов, в циркуляции возбудителя неясно.

Молекулярно-генетические исследования полученных изолятов показывают, что по результатам секвенса фрагментов двух генов -структурного гена Е (кодирующего поверхностный гликопротеин) и неструктурного гена N85 (кодирующего вирусную полимеразу) - штаммы вируса ОГЛ (независимо от времени, источника и места изоляции) образуют компактную группу в составе вирусов комплекса КЭ. На достаточно протяженных участках данных генов все изоляты ОГЛ обнаруживают выраженное сходство с западным субтипов ВКЭ. Несколько дистанцированным в группе штаммов ОГЛ оказывается изолят из Курганской области (Ог-М1-Курган-1992).

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Якименко, Валерий Викторович, Омск

1. Тагильцев A.A., Тарасевич JI.H., Якименко В.В. Материалы сравнительного изучения экологии вируса КЭ в эксперименте // Природноочаговые инфекции и инвазии.- Омск, 1984 С. 84 - 90.

2. Россолов М.А., Якименко В.В. Роль гамазовых клещей в сочетанном очаге арбовирусов в северной лесостепи Омской области // Природноочаговые болезни человека Омск, 1985 - С. 80-86.

3. Тагильцев A.A., Тарасевич JI.H., Богданов И.И., Якименко В.В. Изучение членистоногих убежищного комплекса в природных очагах трансмиссивных вирусных инфекций. Томск: Изд-во ТГУ, 1990 - 106 с.

4. Якименко В.В., Богданов И.И., Дрокин Д.А., Калмин О.Б., Тагильцев

5. A.A. Особенности связей членистоногих убежищного комплекса с возбудителями трансмиссивных вирусных инфекций в колониальных поселениях птиц // Паразитология. 1991. - Т.25, Вып.2 - С. 156-162.

6. Калмин О.Б., Якименко В.В., Дрокин Д.А., Богданов И.И., Бусыгин Ф.Ф. Изоляция вирусов комплекса клещевого энцефалита из кровососущих комаров на юге Западной Сибири // Природноочаговые болезни человека. -Омск, 1991 С. 91-95.

7. Дрокин Д.А., Злобин В.И., Карганова Г.Г., Вихорева Т.В., Якименко

8. B.В., Дживанян Т.И., Лашкевич В.А. Изменение геномов штаммов вируса клещевого энцефалита в результате пассажей на мышах // Вопросы вирусологии М.: Медицина, 1994 - №4 - С. 160-162.

9. Якименко В.В., Дрокин Д.А., Калмин О.Б., Богданов И.И., Иванов Д.И. К вопросу о влиянии host-эффекта на штаммовую изменчивость вирусаf клещевого энцефалита // Вопросы вирусологии М.: Медицина, 1996 - Т.41,3.С. 112-117.

10. Бусыгин Ф.Ф., Якименко В.В., Богданов И.И., Матущенко A.A. Итоги разработки проблемы арбовирусов в Западной Сибири // Природноочаговые болезни человека: Респ. сборник научных трудов.- Омск, 1996 С. 18-29.

11. Якименко В.В. Результаты изучения взаимоотношений вирусов комплекса клещевого энцефалита и гамазовых клещей Androlaelaps casalis в эксперименте // Природноочаговые болезни человека: Респ. сборник научных трудов.- Омск, 1996-С. 115-122.

12. Калмин О.Б., Бусыгин Ф.Ф., Якименко В.В., Богданов И.И. Кровососущие комары как переносчики вируса омской геморрагической лихорадки // Природноочаговые болезни человека: Респ. сборник научных трудов.- Омск, 1996 С. 123-127.

13. Якименко В.В., Тузовский П.В., Калмин О.Б., Богданов ИИ, Дрокин Д.А., Тагильцев A.A. Водяные клещи Hydrachnidae юга Западной Сибири в связи с их участием в циркуляции арбовирусов //Паразитология. 1997. - Т. 31, №5.-С. 414-426.

14. Якименко В.В., Деконенко А.Е., Малькова М.Г., Танцев А.К., Кузьмин И.В., Ткаченко Е.А. К проблеме распространения хантавирусов в западной

15. Сибири // Актуальные вопросы инфекционной патологии: Мат-лы конф.

16. Барнаул, 1999. С. 217 - 220.

17. Бусыгин Ф.Ф., Якименко В.В., Калмин О.Б., Богданов И.И. Современное состояние изучения арбовирусов в Западной Сибири // Актуальные проблемы медицинской вирусологии: Мат-лы конф. М., 1999. - Т. 2. - С. 15.

18. Якименко В.В., Деконенко А.Е., Малькова М.Г., Кузьмин И.В., Дзагурова Т.К., Ткаченко А.Е. Распространение хантавирусов в Западной Сибири // Актуальные проблемы медицинской вирусологии: Мат-лы конф. -М., 1999. Т. 2.-С. 92.

19. Якименко В.В., Деконенко А.Е., Малькова М.Г., Кузьмин И.В., Танцев

20. A.К., Дзагурова Т.К., Ткаченко А.Е. О распространении хантавирусов в западной Сибири // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 2000. - №3. - С. 21 -28.

21. Ткаченко Е.А., Слонова P.A., Иванов Л.И., Морозов В.Г., Якименко

22. B.В., Юничева Ю.В., Дзагурова Т.К., Нургалеева Р.Г., Иванов А.П., Ямпольский А.Ф., Деконенко А.Е., Здановская Н.И., Астахова Т.И., Василенко Л.Е., Дроздов С.Г., Минин Г.Д., Матущенко A.A., Брудный P.A., Федоров Ю.М.

23. Современное состояние проблемы ГЛПС // Природноочаговые болезничеловека: Респ. сб. научных работ. Омск, 2001. - С. 22 - 32.

24. Малькова М.Г., Пальчех H.A., Кузьмин И.В., Якименко В.В. Пространственная структура популяций грызунов в степной зоне Омской области // Природноочаговые болезни человека: Респ. сб. научных работ-Омск, 2001.-С. 39-43.

25. Тюлько Ж.С., Якименко В.В., Деконенко А.Е. О существовании рекомбинаций у хантавирусов \\ Актуальные аспекты природноочаговых болезней: мат. конф. Омск, 2001. - С. 85 - 86.

26. Якименко В.В., Танкибаев М.А. О роли иксодовых клещей Dermacentor marginatus в экологии вируса Тягиня // Актуальные аспекты природноочаговых болезней: Мат-лы конф. Омск, 2001. - С. 69 - 70.

28. Якименко B.B. , Тарасевич JI.H., Тагильцев А.А. Водяные клещи и арбовирусы: Тез. докл. Пятой Всесоюз. акаролог. совещ. Фрунзе: Илим, 1985 -С. 289.

29. Богданов И.И., Якименко В.В., Малькова М.Г., Мансуров П.Г. К роли Ixodes trianguliceps в циркуляции ВКЭ: Тез. докл. международной конф.: вирусные, риккетсиозные и бактериальные инфекции, переносимые клещами. -Иркутск, 1996-С. 23-24.

30. Якименко В.В. Экологическая изоляция как фактор формообразования в группе арбовирусов: Тез. докл. конфю: Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера. Новосибирск, 1998 - С. 14-15

31. Tankibaev М.А., Rudacov N.V., Samoilenko I.E., Reshetnikova T.A., Yakimenko V.V., Chpinov S.N., Walker D.H. New data in the study of spotted fever group ricketsiae and arboviruses in Central Kazachstan // 15th Meeting of ASR. -2000.-P. 36.

32. Dekonenko A., Yakimenko V., Ivanov A., Dzagurova Т., Tkachenko E., Schmaljohn C. // Molecular epidemiology of hantaviruses in Russia // Fifth International conference on HFRS, HPS and hantaviruses. 2001. - P. 63.

33. Yakimenko V.V., Dekonenko A.E., Malkova M.G., Kuzmin I.V., Tantsev A.K., Dzagurova Т.К., Tkachenko E. A. Natural foci of hantaviruses in West Siberia // Fifth International conference on HFRS, HPS and hantaviruses. 2001. - P. 164 -165.

34. Якименко В.В., Бусыгин Ф.Ф., Калмин О.Б., Вахрушев А.В., Корсаков Н.Г. Омская геморрагическая лихорадка (ОГЛ) в Западной Сибири: Тез. докл. 8 Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. -М.:РОСИНЭКС, 2002. Т. 1. - 425 - 426.

35. Karan L.S., Yakimenko V.V., Platonov А.Е., Matushenko А.А., Shipulin G.A. Phylogeny of Omsk hemorrhagic fever virus // Abstracts of 4th International Conferences on Emerging Zoonoses. Ames, USA, 2003. - P. 94.

36. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

37. Агаджанян А.К. Эволюционная история полевок, Microtinae: Тез докл. 6 Съезд Териологического общества. М., 1999. - С. 7.

38. Баркова Э.А., Мелентьева Л.А. Материалы вирусологического изучения эпизоотии среди ондатр в Крутинском районе Омской области // Труды Омского НИИЭМГ Омск, 1959. №6. - С.23-27.

39. Бахмутов В.А., Сосин В.Ф., Штро В.И. Распределение и численность некоторых наземных позвоночных в северной тундре Ямала в летний период // Распространение и численность наземных позвоночных полуострова Ямал. -Свердловск, 1985. С. 39 - 66.

40. Беликов С.И. Молекулярно-генетические подходы к изучению РНК-содержащих вирусов на моделях морбилливируса байкальской нерпы и вирусаклещевого энцефалита: Автореф. дис. докт. биолог, наук. Иркутск, 2000. 38 с.

41. Борсук Э.А. Опыт изучения биологических и антигенных свойств штаммов арбовирусов, выделенных из природных очагов инфекции (на примере ОГЛ) // Вопросы инфекционной патологии. Омск, 1975. - С. 108 — 120.

42. Бусыгин Ф.Ф. Распространение и эпидемиологическое значениеарбовирусов в Западной Сибири: Автореф дисс.докт. мед. наук. М., 1975. 47 с.

43. П.Василенко В.А., Гавриловксая И.Н., Апекина Н.С., Резапкин Г.В., Ткаченко Е.А. Обнаружение очагов ГЛПС в Эстонской ССР // Вопр. вирусологии. 1987. - Т. 32(4). - С. 464 - 467.

44. Васюта Ю.С. Обзор заболеваемости геморрагическими лихорадками в РСФСР // Клещевой энцефалит и вирусные геморрагические лихорадки. -Омск, 1963.-С. 355 -358.

45. Вейр Б. Анализ генетических данных. М.: Мир, 1995. - 120 с.

46. Верхозина М.М. Молекулярно-эпидемиологическая и генетическая характеристика региональной популяции вируса клещевого энцефалита Восточной Сибири: Автореф. дис. канд. биолог, наук. Иркутск, 2000. 21 с.

47. Волынец Л.В. Вирусологическая характеристика вирусов, изолированных от комаров в лесостепных очагах омской геморрагической лихорадки в Западной Сибири // Вопросы инфекционной патологии Омск, 1970.- С. 225 -226.

48. Волынец JI.B., Богданов И.И. Изучение восприимчивости комаров Manzonia richardii к вирусу омской геморрагической лихорадки // Вопросы инфекционной патологии. Омск, 1971. - С. 82 - 84.

49. Волынец Л.В., Богданов И.И., Федорова Т.Н., Нецкий Г.И. Повторное выделение вирусов группы клещевого энцефалита от кровососущих комаров в лесостепных очагах омской геморрагической лихорадки Западной Сибири // Арбовирусы. М., 1964. - Вып.2. - С. 184.

50. Воробьева H.H., Хаджиева Т.М. Мутагенное действие некоторых химических факторов на вирус омской геморрагической лихорадки (ОГЛ): М-ты проблемной комиссии РАМН СССР "Полиомиелит и вирусные энцефалиты". Арбовирусы М., 1967. Вып. 2 - С. 172 -174.

51. Воробьева H.H., Кухарчук Л.П., Стрижак В.М. Выделение вируса омской геморрагической лихорадки из комаров Aedes в Барабинской низменности // Природно-очаговые инфекции Дальнего Востока. Хабаровск, 1973. -Вып. 2.-С. 70-72.

52. Выявление циркуляции арбовирусов и методы вирусологических и серологических исследований.(лабораторные исследования) //В кн.: Итоги науки и техники (сер. Вирусология). М., 1991 - Т. 25. - С. 21 - 77.

53. Гагарина A.B. Вирусологическая характеристика заболеваний, сходных с клещевым энцефалитом и омской геморрагической лихорадкой, встепном районе Омской области // Труды ОГНИИЭМГ. Омское книжное издательство, 1955- № 3. - С. 7 -16.

54. Гагарина A.B. Спонтанное носительство вируса омской геморрагической лихорадки клещом Dermacentor marginatus Sulz. // Труды Омского НИИЭМГ Омск, 1957 - № 4. - С. 15 - 27.

55. Гагарина A.B. Спонтанное носительство вируса омской геморрагической лихорадки клещом Dermacentor marginatus // Труды Томского НИИВС Томск, 1956. - Т. 7. - С. 289 - 294.

56. Гагарина A.B. Клещевая передача ОГЛ // Труды ИПВЭ. Эндемичные вирусные инфекции. 1965. - Т.7. - С. 422 - 429.

57. Гагарина A.B., Зимина В.Е., Равдоникас О.В. О естественной зараженности ондатр вирусом омской геморрагической лихорадки // Труды Омского НИИЭМГ Омск, 1958 - № 5. - С. 31 - 36.

58. Гофман М. Распространение ондатры в северной Америке и за пределами ее естественного арела // Ондатра (Морфология, систематика, экология) Наука, М., 1993. - С. 26 - 38.

59. Гурбо Г.Д., Дубов A.B., Катин A.A., Галимов В.Р. Случай выявления больных омской геморрагической лихорадкой в зимний период на юге Тюменской области: М-лы научн.-практ. конф.: Вопросы краевой инфекционной патологии Тюмень, 1967. - С. 11.

60. Гурбо Г.Д., Дубов A.B., Галимова Э.З. и др. О длительности эпизоотий омской геморрагической лихорадки среди ондатр // Условия существования очагов клещевого энцефалита в Западной Сибири.- Л., 1974. -С. 92 94.

61. Деконенко А.Е. Генетическая дифференциация хантавирусов: Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1996. 20 с.

62. Дживанян Т.И., Королев М.Б., Карганова Г.Г. // Вопр. вирусологии. -1988.-№5.- С. 589-595.

63. Дживанян Т.И., Карганова Г.Г., Кондратьев Я.Ю., Лашкевич В.А. Изменение антигенной специфичности вируса клещевого энцефалита при смене хозяев: М-лы конф.: Актуальные проблемы медицинской вирусологии. М., 1999.-Т. 2.-С. 23.

64. Дзагурова Т.К., Ткаченко Е.А., Чу Ё.К. и др. Об этиологической роли хантавирусов серотипа Добрава (Белград) в структуре заболеваемости ГЛПС в России: М-лы конф.: Актуальные проблемы медицинской вирусологии: м-лы конф. М., 1999. - Т. 2. - С. 60.

65. Дмитриенко Н.К. // Вопр. вирусол., 1962. № 6. - С. 742.

66. Дмитриенко Н.К., Приходько Е.Т. Очаги клещевого энцефалита зоны сухих степей (полупустыни) // Мед. паразитология и паразитарные болезни. -1967. №3. С. 276-279.

67. Дрокин Д.А. Индикация и идентификация флавивирусов методоммолекулярной гибридизации нуклеиновых кислот: Автореф. дисс. канд.биолог, наук. Томск, 1993. 19 с.

68. Дунаев Н.Б. Экспериментальное изучение восприимчивости водяных крыс к вирусу омской геморрагической лихорадки // Вопросы инфекционной патологии Омск, 1973. - С. 137 - 141.

69. Дунаев Н.Б., Федорова Т.Н., Маренко В.Ф. Омская геморрагическая лихорадка у ондатр (экспериментальные данные) // Вопросы инфекционной патологии. Омск, 1975. - С. 67 - 70.

70. Ефимов В.М., Галактионов Ю.К., Шушпанова Н.Ф. Анализ и прогноз временных рядов методом главных компонент. Новосибирск: Наука, 1988. -69 с.

71. Злобин В.И., Горин 0.3. Клещевой энцефалит (Этиология, эпидемиология и профилактика в Сибири). Новосибирск: Наука, 1996. - 177 с.

72. Иванидзе Е.А., Сакварелидзе Л.А., Ткаченко Е.А., Резапкин Г.В., Дзагурова Т.К. Обнаружение природных очагов ГЛПС в Грузинской ССР // Вопр. вирусологии. 1987. № 5. - С. 607 - 610.

73. Иванов Л.И., Здановская Н.И., Ткаченко Е.А., Резапкин Г.В., Рыльцева Е.В., Гапонова Л.К., Воробьева Р.Н., Волков В.И. Ареал распространения и природные резервуары вируса ГЛПС на Дальнем Востоке СССР. Вопр.вирусол. 1989. №1. - С. 595-598

74. Карганова Г.Г., Дживанян Т.И., Гмыль Л.В., Кондратьева Я.Ю., Бахмутов Д.В., Гмыль Л.В., Лашкевич В.А. Микроэволюция вируса клещевого энцефалита, связанная со сменой: М-лы конф. Актуальные проблемы медицинской вирусологии М., 1999. - Т. 2. - С. 30.

75. Ким Р., Ру Ч., Ким Г.М. с соавт. Специфическая профилактика ГЛПС в КНДР: Тез. докл. Международный симпозиум по ГЛПС. Ленинград, 1991. -С. 16-17

76. Компаниец Г.Г. Распространение вируса Сеул на юге Дальнего Востока России и его роль в инфекционной патологии: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Владивосток, 2002. 24 с.

77. Корнилова Э.А., Гагарина A.B. Сравнительная характеристикахбиологических свойств штаммов омской геморрагической лихорадки // Вирусные геморрагические лихорадки. М., 1971. - С. 464 - 468.

78. Корнилова Э.А., Гагарина A.B., Чумаков М.П. Изучение антигенных взаимосвязей штаммов вируса омской геморрагической лихорадки, выделенных из различных источников природного очага // Вирусные геморрагические лихорадки. М., 1971. - С. 469 - 474.

79. Корш П.В. К вопросу эпизоотологической характеристики природных очагов омской геморрагической лихорадки на юге Западной Сибири // Вопросы инфекционной патологии. Зап.-Сиб. Изд-во, Омск, 1971. - С.70-75.

80. Корш П.В. Эпизоотологическое состояние популяции ондатры в Омской области за последние 22 года // Вопросы инфекционной патологии -Омск, 1970. С.79-81.

81. Кульбак С. Теория информации и статистика. М.: Наука, 1967. - 152с.

82. Кучерук В.В. Количественный учет важнейших видов вредных грызунов и землероек // Методы учета численности и географического распределения наземных позвоночных. М., 1952. - С. 9 - 46.

83. Кучерук В.В. Степной фаунистический комплекс млекопитающих и его место в фауне Палеарктики // География населения животных и методы его изучения. М., 1959. - С. 45 - 87.

84. Кушнарева Т.В. Гемагглютинирующие свойства хантавирусов и получение специфического диагностикума: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Владивосток, 2002. 26 с.

85. Лавров Н.П. История акклиматизации ондатры и ее современный ареал // Ондатра (Морфология, систематика, экология) Наука, М., 1993. - С. 39 - 46.

86. Лебедев А.Д. Географическое распространение геморрагического нефрозо-нефрита // Мед. география. М., 1964 - Вып. 66. - С. 69 - 111.

87. Лебедев Е.П. Характеристика очага омской геморрагической лихорадки в межэпидемический период // Природноочаговые антропонозы. -Омск, 1976.-С. 125- 126.

88. Лебедев Е.П. Характеристика современного состояния очагов омской геморрагической лихорадки: Автореф. дисс.канд. мед. наук. М., 1982.- 18 с.

89. Леонова Г.Н. Клещевой энцефалит в Приморском крае. -Владивосток: Дальнаука, 1997. 187 с.

90. Максимов A.A. Природные циклы. Причины повторяемости экологических процессов. Ленинград: Наука, 1989. - 234 с.

91. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Методы генетической инженерии // Гл. 7. Молекулярное клонирование, (ред. Бабаев A.A., Скрябин К.Г.). М.: Мир, 1984. - С. 205-240.

92. Матюхина Л.В. Роль кровососущих комаров в очагах омской геморрагической лихорадки // Природноочаговые антропонозы. Омск, 1976. -С. 127- 128.

93. Методические рекомендации. Вирусологические исследования отдельных экземпляров иксодовых клещей с использованием методов микроанализа. -М., 1986. 15 с.

94. Морозова О.В. Свойства некоторых белков вируса клещевого энцефалита: Автореф. дисс.докт. биолог, наук. Кольцово, 2001. 40 с.

95. Мясников Ю.А., Ткаченко Е.А., Иванов А.П. и др. Природные очаги геморрагической лихорадки с почечным синдромом на территории Омской области // Природно-очаговые инфекции и инвазии. Омск, 1984. - С. 134 - 140.

96. Мясников Ю.А., Апекина Н.С., Зуевский А.П. и др. Размещение природных очагов геморрагической лихорадки с почечным синдромом в различных ландшафтных зонах Тюменской области // Вопр. вирусологии. -1992.-№3.-С. 161 165.

97. Наумов Р.Л., Чунихин С.П., Гутова В.П. Экспериментальное изучение взаимоотношений позвоночных с вирусом клещевого энцефалита. 2. Мелкие млекопитающие // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1984. - №2. -С. 83-86.

98. Песенко Ю.П. Принципы и методы количественного анализа в фаунистических исследованиях. М.:Наука, 1982. - 287 с.

99. Пчелкина A.A., Никитина H.A., Кулик И.Л. Изучение виремии у рыжих, красных и узкочерепных полевок при экспериментальном заражении вирусом клещевого энцефалита // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. -1969-№4.-С. 431 -435.

100. Равдоникас О.В., Чумаков М.П., Соловей Э.А. и др. Значение болотного норового клеща Ixodes apronophorus в циркуляции вируса омской геморрагической лихорадки в природном очаге // Вирусные геморрагические лихорадки. -М., 1971.-С. 485-491.

101. Россолов М.А. Роль озерных чаек в поддержании циркуляции вируса клещевого энцефалита в природе: Тез. докл. XI Всесоюз. конф. по природной очагововсти болезней. М., 1984. - С. 136-137.

102. Рубин С.Г., Чумаков М.П., Семашко И.В. Антигенные типы: Тез. докл. территориальной конференции: Вирусы и вирусные инфекции человека. -М., 1981.-С. 63 -64.

103. Стеблов Е.М. // В кн.: Нейроинфекции в Казахстане. Алма-Ата, 1946.-Вып. 1.-С. 54.

104. Танкибаев М.А. Характеристика природных очагов арбовирусныхинфекций Казахского мелкосопочника: Автореф. дисс. канд. мед. наук.1. Алматы, 1996. 19 с.

105. Тарасевич JI.H., Тагильцев A.A. Материалы экспериментального изучения взаимоотношений гамазоидных клещей из группы неисключительных гематофагов с вирусом омской геморрагической лихорадки // Вопросы инфекционной патологии. Омск, 1975. - С. 89 - 95.

106. Тарганская В.А. Клиническое течение острого нефрита: М-лы Дальневосточного мед. института. Хабаровск, 1935. - Т. 2.- С. 156 - 161.

107. Терских В.И. Дмитров лептоспироз: Автореф. дисс.канд. мед наук. М., 1936.-20 с.

108. Ткаченко Е.А., Слонова P.A., Иванов Л.И., Морозов В.Г., Якименко

109. B.В.,Юничева Ю.В., Дзагурова Т.К., Нургалеева Р.Г., Иванов А.П., Ямпольский А.Ф., Деконенко А.Е., Здановская Н.И., Астахова Т.И., Василенко Л.Е., Дроздов

110. C.Г.,Минин Г.Д., Матущенко A.A., Брудный P.A., Фёдоров Ю.М. Современное состояние проблемы ГЛПС // Природноочаговые болезни человека. Омск, 2001. - С. 22-32.

111. Федорова Т.Н. Результаты вирусологических исследований в очаге омской геморрагической лихорадки в Новосибирской области // Клещевой энцефалит и вирусные геморрагические лихорадки. Омск, 1963. - С. 377 - 378.

112. Федорова Т.Н. Роль ондатры в экологии вируса омской геморрагической лихорадки // Вопросы инфекционной патологии. Омск, 1975.-С. 14-23.

113. Федорова Т.Н., Дунаев Н.Б. Пути инфицирования ондатр вирусом омской геморрагической лихорадки (экспериментальные данные) // Вопросы инфекционной патологии. Омск, 1973. - С. 131 - 132.

114. Фолитарек С.С. Эффект столкновения незнакомцев Alienconflictus в эпизоотологии ондатры Западной Сибири // Перелетные птицы и их роль в распространении арбовирусов. Новосибирск, 1969. - С. 128 - 130.

115. Харитонова H.H. Результаты серологических исследований крови диких и домашних животных в очаге омской геморрагической лихорадки Северной Кулунды // Перелетные птицы и их роль в распространении арбовирусов. Новосибирск, 1969. - С. 317 - 321.

116. Харитонова H.H., Леонов Ю.А. Омская геморрагическая лихорадка. -Новосибирск: Наука, 1978. 220 с.

117. Харитонова H.H., Леонов Ю.А. Попытка моделирования нетрансмиссивных путей инфицирования диких животных вирусом омской геморрагической лихорадки: Тез. докл. территориальной конференции: Вирусы и вирусные инфекции человека. М., 1981. - С. 244.

118. Харитонова H.H., Леонов Ю.А. Медицинское (эпидемиологическое) значение водяной полевки. 20.3. Омская геморрагическая лихорадка // В кн.: Водяная полевка. М.:Наука, 2001. - С. 466 - 468.

119. Хэммон В., Сатер Г. Арбовирусы // В кн.: Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний / Ред. Леннет Э., Шмидт Н. М.: Медицина, 1974. - С. 185 - 227.

120. Цилинский Я.Я. Популяционная структура и эволюция вирусов. -М.: Медицина, 1988. 240 с.

121. Чалей М.Б., Коротков E.B. Информационный подход к выявлению сходства генов тРНК и их глобальная классификация. // Изв. АН СССР. Сер. биол. 1990.- №6. -С. 915.

122. Чунихин С.П., Дживанян Т.И. Экологические маркеры арбовирусов: ДС-маркер вируса клещевого энцефалита // Вестн. АМН СССР. -1977.-№5.-С. 17-21.

123. Чунихин С.П., Куренков В.Б., Решетников И.А., Хозинская Г.А., Коротков Ю.С.б Окулова Н.М., Хозинский В.В. Экспериментальная характеристика роли грызунов в популяционной селекции вируса клещевого энцефалита// Экология вирусов.- 1982. С.11-15.

124. Чунихин С.П., Леонова Г.Н. Экология и географическое распространение арбовирусов. -М.: Медицина, 1985. 125 с.

125. Antoniadis A., Pyrpasopulos M., Sion M., Daniel S., Peters C. Two cases of HFRS in nothern Greece // J. Infect. Dis. 1984. - Vol. 149. - P. 1011 -1013.

126. Antoniadis A., Stylianakis A., Papa A., Alexiou-Daniel S., Lampropoulos A., Nichol S. Direct genetic detection of Dobrava virus in Greek and Albanian patients with hemorrhagic fever with renal syndrome // J. Infect. Dis. -1996.-Vol. 174.- P. 407-410.

127. Avsic-Zupanc T. HFRS in the Balkans // Mannual of HFRS and HPS / In: Edd. Lee H.W., Calisher C.H., Schmaljohn C.S. Seoul., 1998. - P. 60-62.

128. Avsic-Zupanc T., Cizman B., Glidic A., Hoofd G., Van der Groen G. Evidence for hantavirus disease in Slovenia, Yugoslavia // Acta Virologica. 1989. -Vol. 33.-P. 327-337.

129. Avsic-Zupanc T., Toney A., Anderson K., Chu Y.K., Schmaljohn C. Genetic and antigenic properties of Dobrava virus: a unique member of the hantavirus genus, Family Bunyaviridae // J. Gen. Virol. 1995. - Vol. 68. - P. 2801 -2808.

130. Baek L.J., Lee H.W. Seroepidemiologic study of hantavirus infection of wild birds and bats in Korea // In: 2th International conference on HFRS (abstr.). -China, 1992.-P. 69.

131. Bakhvalova V.N., Rar V.A., Tkachev S.E., Matveev V.A., Matveev L.E., Karaganov A.S., Dobrotvorsky A.K., Morozova O.V. Tick-borne encephalitis virus strains of West Siberia // Virus Research 2000. - Vol. 70. - P. 1-12.

132. Bowen M.D., Gelbmann W., Ksizek T.G., Nichol S.T. Puumala virus and two genetic variants of Tula virus are present in Austrian rodents // J. Med. Virology.- 1997.-Vol. 53.-P. 174-181.

133. Calisher C.H., Schmaljohn C.S. Classification of Hantaviruses // Mannual of HFRS and HPS / In: Edd. Lee H.W., Calisher C.H., Schmaljohn C.S. -Seoul, 1998.- P. 13-16.

134. Chen H.X., Qiu F.X. Epidemiologic surveillance on the hemorrhagic fever with renal syndrome in China // Chin. Med. J. 1993. - Vol. 106 (11). - P. 857-863.

135. Chua P. K., Song J.-W., Masuzawa T., Kadosaka T., Takada N., Morita C., Yanagihara R. Epizootology of hantavirus infection in Japan // 5 International Conference on HFRS and hantaviruses. France, 2001. - P. 158.

136. Chumakov M., Shindarov L., Gavrilovskaya I., Vasilenko SVol., Gorbachkova E., Katzarov G. Seroepidemiology of hemorrhagic fever with renal syndrome in Bolgaria // Acta Virol. 1998. - Vol. 32 (3). - P. 261 - 266.

137. Clarke D., Casalse J. Techniques for hemagglutination and hemagglutination-inhibition with arthropod-borne viruses // Amer. J. Tro P. Med. Hyg. 1958-№7.-P. 561-573.

138. Clement J., Heyman P., McKenna P., Colson P., Avsic-Zupanc T. The hantaviruses in Europe: from the bedside to the bench // Emerg. Infect. Disease. -1997.-Vol.3. P. 205 -211

139. Elliott R.M. Molecular biology of the Bimyaviridae // J. Gen. Virol.1990.- Vol. 71.-P. 501 -522.

140. Elliott R.M., Schmaljohn C.S., Collett M.S. Bimyaviridae genome stracture and gene expression // Current Topics in Microbiology and Immunology.1991.-Vol. 169.- P. 91-141.

141. Eltari E., Nuti M., Hasko I., Gina A. HFRS in a case in northern Albania //Lancet. 1987.- P. 1211.

142. Enria D., Padula P., Segura E. et al. Hantavirus pulmonary syndrome in Argentina: possibility of person-to-person transmission // Medicina (Buenos Aires). -1996.-Vol. 56.- P. 709.

143. Felsenstein J. PHYLIP (Phylogeny Interference Package). Version 3.5.c.

144. Fredra K., Fedorov VOL., Jarreli G., Jonsson L. Genetic diversity in arctic lemmings // Ambio. 1999. - Vol. 28(3). - P. 261 - 269.

145. Gonzalez J. P., Yoksan S., Hebreteau V., Nitatpattna N., Chuavancy G., Supputthamongkol Y. Natural history and first evadence of human pathogenic hantavirus in Thailand // 5 International Conference on HFRS and hantaviruses (Abastr.). 2001.-P. 71.

146. Gould E.A., De Lamballerie X., De Zanotto A., Holmes E.C. Flavivirus evolution // Proceedings of the 3th International conference "Ticks and tick-borne Pathogens: into the 21st century", Bratislava. 2000. - P. 1-9.

147. Gresikova M., Kozuch O., Sekeyova M., Tkachenko E.A., Rezapkin G.V., Lysy J. Detection of the antigen and antibodies to the eastern subtype of HFRS virus in small rodents in Slovakia // Acta Virol. 1988. - Vol. 32(2). - P. 164 - 167.

148. Gresikova M., Tkachenko E.A., Sekeyova M. Detektion of antibodies to the westwrn and the eastern type of HFRS in patient's sera from Slovakia // Acta Virol. 1990. - Vol. 34 (4). - P. 372 - 375.

149. Gritsun T.S., Lashkevich V.A., Gould.E.A. Nucleotide and deduced amino acid sequence of the envelope glycoprotein of Omsk haemorrhagoc fevervirus; comparison with other flavivirus // J. Gen. Virol. 1993. - Vol. 74. - P. 287291.

150. Haemorrhagic fever with renal sindrom // Bull. WHO. 1983. - Vol. 61.- P. 269-275.

151. Heiske A., Anheier B., Pilaski J., Volchkov V.E., Feldmann H. A new Clethrionomys-derived hantavirus from Germany: evidence for distinct genetic sublineages of Puumala viruses in Western Europe // Virus Research. 1999. - Vol. 61.- P. 101-112.

152. Henderson W.W., Monroe M.C., Jeor C.St., Thayers W. P., Rowe J.E., Peters C.J., Nichol S.T. Naturally occurring Sin Nobre virus genetic reassortants // Virology. 1995.-Vol. 214.- P. -602-610.

153. Hjelle B. Hantaviruses and hantavirus cardiopulmonary syndrome in the Americas. // Emergence and Control of Rodent-borne Viral Diseases. Elsevier, 1999. - P. 55-62.

154. Horling,J., Lundkvist A., Jaarola M., Plusnin A., Tegelstrom H., Persson K., Lehvaslaiho H., Hornfeldt B., Vaheri A., Niklasson B. Distribution and geneticheterogeneity of Puumala virus in Sweden // J. Gen. Virol. 1996. - Vol. 77. - P. 2555-2562.

155. Igarashi Akira // Hatau araky, Tro P. Med. 1984.- Vol. 26. - P. 173179.

156. Johnson A., Bowen M., Ksiazek T. et al. Laguna Negra virus associated with HPS in western Paraguay and Bolivia // Virology. 1997. - Vol. 238. - P. 115127.

157. Kamrud K.I., Schmaljohn C.S. Expression strategy of the M genom segment of Hantaan virus // Virus Res. 1994. - Vol. 31. - P. 109 - 121.

158. Kawamata J., Yamanouchi T., Dohmae K., Miyamoto H., Takahaski M., Yamanishi K., Kurata T., Lee H.W. Control of laboratory acquired hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) in Japan // Lab. Anim. Sci. 1987. - Vol. 37(4). - P. 431-436.

159. Kim G.R., Lee Y.T., Park C.H. A new natural reservoir of hantavirus: isolation of hantaviruses from lung tissues of bats // Acta.Virol. 1994. - Vol. 36 -P. 493.

160. Knutrud O. Nephropathia epidemica 11 T. Nor. Laegeforen. 1949. - P. 69-259.

161. Kukkonen S.K.J., Vaheri A., Plusnin A. Completion of the Tula hantavirus genome sequence: properties of the L segment and heterogeneity found in 3' termini of S and L genome RNAs // J. Gen.Virology. 1998. - Vol. 79. - P. 2615 - 2622.

162. Kuno G., Chang K., Gwong-Jen J., Tsuchiya R., Karabatsos N., Cropp C.B. Phylogeny of the genus Flavivirus // J.Virology. 1998. - Vol. 72. - P. 73 -83.

163. Kuo M.-D., Lin H.-T, Kan S.-H, Yao C.-W. The complete sequrnce of hantaviruses isolated from Rattus norvegicus captured at Tiachung Harbor in Taiwan // 5 International Conference on HFRS and hantaviruses (Abastr.). 2001. - P. 148.

164. Lee H. W. Epidemiology and epizootology // Mannual of HFRS and HPS /In: Edd. Lee H.W., Calisher C.H., Schmaljohn C.S. Seoul, 1998. - P. 40 - 48.

165. Lee H.W. Epidemiology and pathogenesis of hemorrhagic fever with renal syndrome // The Bunyaviridae. Plenum Press. / In: Elliott R.M. (Edd.). New York, 1996.- P. 253-267.

166. Lee H.W., Lee P. W., Baek L.J., Chu Y.K. Geographical distribution of hemorrhagic fever with renal syndrom and hantaviruses // Arch. Virol. 1990. -Vol. 1. - P. 5-18.

167. Lee H.W., Lee P. W., Johnson K.M. Isolation of the Hantaan virus, etiological agent of Korean hemorrhagic fever // J. Infect. Dis. 1978. - Vol. 137. -P. 298-308.

168. LeGuenno B. L es nou veaux virus // Pourl. Science. 1995. - Vol. 212.- P. 36-44.

169. Lopez N., Padula P., Rossi C. et al. Genetic characterization and phylogeny of Andes virus and variants from Argentina and Chile // Virus Res. -1997.-Vol. 50.- P. 77-84.

170. Lulac VOL., Dokic M., Rakovic-Savcic L., Diglisic G., Glicic A., Drndarevic D., Obradovic M. Epidemiologic characteristics of hemorrhagic fever with renal syndrom in military population // Vojnosanit. Pregl. (Engl.). 1992. - Vol. 49(3).- P. 201 -205.

171. Lundkvist A., Apekina N., Myasnokov Y., Vapalahti O., Vaheri A., Plusnin A. Dobrava virus outbreak in Russia // Lancet. 1997.- Vol. 13.- P. 781 — 782.

172. Lundkvist A., Niklasson B. Bank vole monoclonal antibodies against Puumala virus envelope glycoproteins: identification of epitopes involved in neutralization // Arch. Virol. 1992. - Vol. 126. - P. 93- 105.

173. Lundkvist A., Vasilenko V., Golovljova I., Plusnin A., Vaheri A. Human Dobrava infections in Estonia // Lancet. 1998. - Vol. 352. - P. 369.

174. Morzunov S. P., Rowe J.E., Ksiazek T.G., Peters C.J., Jeor S.C.St., Nichol S. Genetic analysis of diversity and origin of hantaviruses in Permyscus leucopus mice in North America // J. Virol. 1998. - Vol. 72 (1). - P. 57 - 64.

175. Nichol S.T Genetic analisis of hantaviruses and their host relationships // In.: Emerg. And Control of rodent-borne viral diseases /ed. Saluzzo J-F., Dodet B., Elsevier SAS. 1999.- P. 99-109.

176. Niklasson B., Lundkvist A. HFRS in Europe // Mannual of HFRS and HPS / Edd. Lee H.W., Calisher C.H., Schmaljohn C.S. Seoul, 1998. - P. 58 - 59.

177. Nowotny N. The domestic cat: a possible transmisser of virus from rodents to man // Lancet. 1994. - Vol. 343. - P. 921.

178. Nowotny N., Weissenboeck H., Aberie S., Hinterdorfer F. Hantavirus infection in the domestic cat // J. Amer. Med. Assoc. 1994. - Vol. 272. - P. 1100 -1101.

179. Padula P., Edelstein A., Miguel S., Lopez N., Rossi C., Rabinovich R. Hantavirus pulmonary syndrome outbreak in Argentina: molecular evidence for person-to-person transmission of Andes virus // Virology. 1998. - Vol. 241. - P. 323-330

180. Page R.D.M.Tree View: an application to display phylogenetic trees on personal computers // Com P. Appl. Biosci. 1996. - Vol. 12. - P. 357 - 358.

181. Papa A., Johnson A.M., Stockton P. C., Bowen M.D., Spiropoulou C.F., Alexiou-Daniel S. Et al. Retrospective serologic and genetic study of the distribution of hantaviruses in Greece // J. Med. Virol. 1998. - Vol. 55. - P. 321 - 327.

182. Papa A., Mills J., Kouidous Ma.B., Papadimitrou E., Anthoniadis A. Preliminary characterization and natural history of hantaviruses in rodents in Nothern Greece // Emerg. Infect. Disease. 2000. Vol. 6. - P. 654 - 655.

183. Peters C.J., Simpson G.L., Levy H. Spectrum of hantavirus infection hemorrhagic fever with renal syndrom and hantavirus pulmonary syndrom // Annual Re Vol. Med. 1999. - Vol. 50. - P. 531 - 545.

184. Plyusnin A, Vapalahti O, Lundkvist A, Henttonen H, Vaheri A. Newly recognised hantavirus in Siberian lemmings // The Lancet. 1996. - Vol. 347. - P. 1835- 1836.

185. Plyusnin A., Kukkonen S.K.J. Plyusnina A., Vapalahti O., Vaheri A. Transfection-mediated generation of functionally complement Tula hantavirus with recombinanr S RNA segment // EMBO J. 2002. - Vol. 21 (6). - P. 1497 - 1503.

186. Plyusnin A., Vapalahti O., Lundkvist A., Henttonen H., Vaheri A. Hantaviruses in Europe: an overview: Emergence and Control of Rodent-borne Viral Diseases. // Elsevier. 1999. - P. 85-91

187. Rodriguez L.L., Owens J.H., Peters C.J., Nichol S.T. Genetic reassortment among viruses causing hantavirus pulmonary síndrome // Virology -1998.-Vol. 242.- P. 99- 106.

188. Sauvage F., Penalba C., Vuillaume P., Boue F., Coudrier D., Pontier D., Artois M. Puumala hantavirus infectionin humans and in the resrrvoir nost, Ardenes region, France // Emerg. Infect. Disease. 2002. - Vol. 8(12). - P. 1509 - 1511.

189. Schmaljohn C.S., Dalrymple J.M. Analysis of Hantaan varus RNA: evadence for a new genus of Bunyaviridae // Virology. 1983. - Vol. 131. - P. 482 -491.

190. Schmaljohn C.S., Hasty E.S., Dalrymple J.M., LeDuc J.W. Antigenic and genetic properties in viruses linked to hemorrhagic fever with renal sindrom // Science. 1985. - Vol. 227 - P. 1041 - 1044.

191. Schmaljohn C.S., Hjelle B. Hantaviruses: a global disease problem. // Emerg. Infect. Dis. 1997. - Vol. 3(2). - P. 95 - 104.

192. Schmaljohn C.S., Jenninga G.B., Hay J., Dalrymple J.M. Coding strategy of the S genom segment of Hantaan virus // Virology. 1986. - Vol. 155. -P. 633-643.

193. Schmaljohn C.S., Schmaljohn A.L., Dalrymple J.M. Hantaan Virus M RNA: coding strategy, nucleotide sequence, and gene order // Virology. 1987. -Vol. 157 .- P. 31-39.

194. Sheshberadaran H., Niklasson B., Tkachenko E.A. Antigenic relationships between hantaviruses analyzed by immunoprecipitation // J. Gen. Virol.- 1988.-Vol.69. P. 2645-2651.

195. Sibold C., Meisel, Kruger D.H., Labuda M., Lysy J., Kozuch O., Pejcoch M., Vaheri A., Plusnin A. Recombination in Tula hantavirus evolution: analysis of genetic lyneages from Slovakia // J. Virol. 1999. - Vol. 73. - P. 667 -675.

196. Sibold C., Sparr S., Schulz A., Labuda M., Kozuch O., Lysy J., Kruger D.H., Meisel H. Genetic charactirization of a new hantavirus detected in Microtus arvalis from Slovakia//Virus genes. 1995.- Vol.10 - P. 277-281.

197. Slonova R., Tkachenko E., Kushnarev E., Dzagurova T., Astakova T. Hantavirus isolation from birds // Acta. Virol. 1992. - Vol. 36 - P. 493.

198. Stohwasser R., Raab K., Darai G., Bautz E.K.F. Primary structure of the large (L) RNA segment of nephropathia epidemica virus strain Hallnas B1 coding for the viral RNA polymerase // Virology. -1991. Vol.174 - P. 386 - 391.

199. Tang Y.W., Zu X., Zu Z., Tsai T.F. Isolation of hemorrhagic fever with renal syndrome virus from Suncus murinus, an Insectivore // Lancet. 1985. - Vol. I.- P. 513.

200. Tegelstorm H. Transfer of mitihondrial DNA from Nothern red-backed vole (Clethrionomys rutilus) to the bank vole (C. glareolus) // J. Mol. Evol. 1987. -Vol.24. - P. 218-227.

201. Tkachenko E.A., Ivanidze E.A., Zagidullin I., Dekonenko A.E. HFRS in Eurasia: Russia and Republics of the fomer USSR // In: Edd. Lee H.W., Calisher C.H., Schmaljohn C.S. Mannual of HFRS and HPS, Seoul. 1998. - P. 49 - 57.

202. Toro J., Vega J.D., Khan A.S., Mills J.N., Padula P., Terry W., Yadyn Z., Valderrama R. et all. An outbreak of Hantaviruss Pulmonar Syndrom, Chile, 1997 // Emerg. Infecr. Disease. 1998. - Vol. 4(4).

203. Virus detection and identification with serological tests: Manual of hemorrhagic fever with renal syndrome and hantavirus pulmonary syndrome. Seol, 1998.-P. 80-141.

204. Wu G. et al. Studies on gamasid mites as transmitting vector of epidemic haemorrhagic fever // In: 2th International conference on HFRS (abstr.), Beijing, China.- 1992.-P. 84.

205. Wu G., Jiang K. Et al. Experimental studies on natural infection and transmission of EHFV in Leptotrombidium scutellare // In: 2th International conference on HFRS (abstr.), Beijing, China. 1992. - P. 86.

206. Wu G., Zhang Y., Guo H., Jiang K., Zhang J., Gan Y. The role of the Leptotrombidium scutellare in the transmission of human diseases // Chin. Med. J. (Engl.). 1996.-Vol. 109(9).- P. 670-673.

207. Yashina L., Slonova R., Mishin VOL., Patrishev N., Schmaljohn C., Ivanov L. A newly discovered pathogenic Amur virus from Far Eastern Russia // 5 International Conference on HFRS and hantaviruses (Abastr.), France. 2001. - P. 23.

208. Zhang B. et al. The role of mites in the transmission of HFRS virus // In: 2th International conference on HFRS (abstr.), Beijing, China. 1992. - P. 87.

209. Zhang Y.„ Zhao X.Z., Zhang B.G., Do R., Zhu X.L., Wu G.H. Hantavirus isolation from pig's lung // Chin. J. Public. Health. 1988. - Vol. 7. - P. 18-20.

210. Zhang Y., Shen J.Z., Zhang B.G., Deng X.Z., Zhao X.Z., Wu G.H. Isolation of a virus of epidemic hemorrhagic fever from lung tissue of dog // Virol. Sin. 1989. - Vol. 4. - P. 76 - 79.

211. Объемы вирусологических исследований птиц и млекопитающих на арбовирусы

212. Группа или вид животных Область, край К-во районов Ландшафтная зона Дата изъятия Исследовано1. Особей Проб5 10.1985-01.1986 61 496 10.1986-01.1987 104 1045 10.1987-01.1988 59 59

213. Новосибирская 3 Лесостепь 11.1089 01-1490 42 846 11.1990- 01.1991 237 2371. Ондатра 2 12.1998 48 481. ИТОГО 551 5813 11.1949 02.2000 170 58

214. Омская 2 Лесостепь (северная подзона) 11.2000-02.2001 68 683 11.2001 -02.2002 152 1521. ИТОГО 390 2781. ИТОГО 941 859

215. Алтайский, респ. Алтай 1 08-09.1990 101 98

216. Альпийская и субальпийская 06-07.1991 94 63итого 195 161

217. Новосибирская 2 Лесостепь (северная подзона) 05-06.1991 83 493 05-06.1997 105 992 Степь 05.1998 19 19

218. Мышевидные млекопитающие 3 05-06.1999 30 302 08.1986 85 851 05.1988 30 301. Омская 1 05.1989 97 48

219. Лесостепь (северная подзона) 05.1990 24 241 05.1991 26 161 12.1991 26 151 05-06.1993 34 34

220. Группа или вид животных Область, край, округ К-во районов Ландшафтная зона Дата изъятия Исследовано1. Особей Проб1 05.1994 30 301 05-06.1995 77 77

221. Лесостепь (северная подзона) 06.1998 33 332 06.2001 81 811. ИТОГО 697 6211 05-06.1996 41 411 06.1997 32 32

222. Подтаежная (подтайга) 06.1999 30 301. Омская 1 08.2001 160 1601. ИТОГО 263 2631 08-09.1989 72 72

223. Мышевидные 1 Южная тайга (подзона хвойных лесов) 07-08.1990 49 49млекопитающие 1 06.1992 13 131 09-10.1993 152 1521. ИТОГО 286 286

224. Южная тайга (подзона смешанных лесов) 07-08.1996 41 411 08.1998 72 721. ИТОГО 113 113

225. Ямало-Ненецкий А.О. 2 Северная тайга 07-09.1997 176 176

226. Южные тундры 08 09.2000 210 2101. ИТОГО 386 386

227. Красноярский, п-во Таймыр 1 Переходные тундры 07-08.1994 93 931. ИТОГО 2116 2831

228. Группа или вид животных Область, край, округ К-во районов Ландшафтная зона Дата изъятия Исследовано

229. Красноярский, п-ов Таймыр 1 Переходные тундры 07-08.1994 14 14

230. Алтайский, респ. Алтай 1 Альпийская и субальпийская 08-09.1990; 06-07.1991 14 14

231. Птицы Ямало-Ненецкий А.О. 2 Северная тайга 07-09.1997 13 13

232. Южная тайга (подзона хвойных лесов) 08-09.1989; 09-10.1993 16 16

233. Омская 1 Лесостепь (северная подзона) 08.1986 22 221 05.1989, 05.1990 41 412 Степь 05.1998 10 101. ИТОГО 89 89

Информация о работе

Якименко, Валерий Викторович
доктора биологических наук
Омск, 2004
ВАК 03.00.06

Диссертация

Экологические предпосылки гетерогенности популяций хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита в Западной Сибири - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Экологические предпосылки гетерогенности популяций хантавирусов и вирусов комплекса клещевого энцефалита в Западной Сибири - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы