Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение метанмонооксигеназной реакции в бесклеточных препаратах метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus штамм М

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пиляшенко-Новохатный, Андрей Игоревич

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. БИОХИМИЯ ОКИСЛЕНИЯ МЕТАНА.

1.1. Энергетический обмен метанокисляющих микроорганизмов

1.1.1. Окисление метана .II

1.1.2. Окисление метанола

1.1.3. Окисление формальдегида

1.1.4. Окисление формиата

1.2. Электронног-транспортные системы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОЛУ.

2.1. Объект исследования

2.2. Получение бесклеточных препаратов

2.3. Электронная микроскопия.

2.4. Определение активности ММО.

2.5. Очистка цитохрома Cqq.

2.6. Аналитические методы.

2.7. Спектральные методы

2.8. Определение аминокислотного состава

3. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МЕТАШ0Н00КСИГЕНАЗЫ.

3.1. Введение.

3.2. Разработка методов определения активности метанмонооксигеназы по убыли субстрата с помощью газошэдкостной хроматографии

3.3. Радиоизотопный метод определения активности метанмонооксигеназы.

3.4. Краткое заключение

4. ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ МЕТАНГ/ЮН00КСИГЕНАЗЫ

В БЕСКЛЕТОЧНЫХ ПРЕПАРАТАХ.

4.1. Введение.

4.2. Внутриклеточная локализация.

4.3. Стабильность метанмонооксигеназы в бее клеточных препаратах и условия их хранения.

4.4. Условия, необходимые для протекания метанмонооксигеназной реакции

4.5. рН-зависшость метанмонооксигеназы

4.6. Влияние ингибиторов.

4.7. Субстратная специфичность метанмонооксигеназы

4.8. Краткое заключение

5. ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ ЦИТОХРОМА Ссо В МЕТАНМОНООКСИГЕНАЗНОЙ РЕАКЦИИ mc.capsu.atus ШТАММ М.

5.1. Введение.

5.2. Солюбилизация метанмонооксигеназы

5.3. Выделение и очистка цитохрома Cqq

5.4. Молекулярная характеристика цитохрома Cqq.

5.5. Спектральные характеристики цитохрома Cqq.

5.6. Аминокислотный состав цитохрома Cqq

5.7. Взаимодействие цитохрома Cqq с СО, СН^ и СН3С1.

5.8. Изучение роли цитохрома Cqq в метанмонооксигеназной реакции.

5.9. Краткое заключение.

6. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМ МЕТАНМОНООКСИГЕНАЗНОЙ

РЕАКЦИИ КИНЕТИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ.

6.1. Введение.

6.2. Дейтероизотопныи эффект метанмоно-оксигеназной реакции

6.3. Температурная зависимость метанмоно-оксигеназной реакции

6.4. Краткое заключение

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДА.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение метанмонооксигеназной реакции в бесклеточных препаратах метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus штамм М"

4.2. Внутриклеточная локализация 4 3 Стабильность меташлонооксигеназы в бее клеточных препаратах и условия их хранеюш меташтонооксигеназной реакции 4.5. рН-зависрмость меташлонооксигеназы 4.6. Влияние ингибиторов 4.7. Субстратная специфичность меташлонооксигеназы 4.8. Краткое заключение ИССЛЕДОВАШГЕ РОЛИ ЦИТОХРОгМ CQQ В МЕТАШЮНООКСИГЕНАЗНОЙ РЕАКЦИИ 57 58 61 63 65 67 69 75 4.4. Условия, необходирлые для протекания MC.CAPSILATUS ffiTAIf.I Ivl. 7 6 5 1 Введение

5.2. Солюбилизация метанмонооксигеназы 76 77 5.3. Выделение и очистка цитохрома CQQ 78 5.4. Молекулярная характеристика цитохрома CQQ. 81 5.5. Спектральные характерноТРШИ цитохрома CQQ. 81 5.6. Аглинокислотный состав цитохрома CQQ 83 5.7. Взаимодействие цитохрома CQQ С СО, СН и CHgCI 89 5 8 Изучение роли цитохрома CQQ В меташлонооксигеназной реакции 5.9. Краткое заключение ИССЛЕДОВАНИЕ ШИШШЗШ РЕАКЩРШ КИРШТИЧЕСКЖШ МЕТАНУЮНООКСИГЕНАЗНОЙ МЕТ0ДА1У1И 93 96 99 Стр. 6 1 Введение 99 6.2. Дейтероизотопныи эффект меташлонооксигеназной реакщи 6 3 Теьшературная зависшлость меташлонооксигеназной реакции 6.4. Краткое заключение 0БСУ}КдаШ1Е РЕЗУЛЬТАТОВ 99 104 108 114 вывода ЛИТЕРАТУРА 121 123 ВВЕДЕНИЕ Микроорганизмы, окисляющие Cj-соединения (метан, метанол, формальдегид, формиат, окись углерода, амины и т д обладают уникальной способностью строить все компоненты клеток из Cj-единиц, получая необходимую для биосинтеза энергию за счет их окисления. Они широко распространены в природе. Особое место в этой группе микроорганизмов занимают микроорганизмы, способные окислять метан (45, 46). Перспективность метана, как сырья для промышленного микробиологического синтеза и возможность использования метанокисляющих микроорганизмов в качестве кормового белка и источника биологически актшных соединений, для снижения метаноносности угольных пластов способствует превращению этой группы микроорганизмов из объекта теоретических исследований в объек практического применения. Метанокислящие микроорганизмы проводят последовательное окисление метана до метанола, формальдегида и формиата. Аналогичных каталитических систем, катализирущих мягкое последовательное включение кислорода в молекулу метана, в современной химии нет. Поэтому ферментная система метанокислящих бактерий представляет значительный интерес с точки зрения ее моделирования и создания эффективных катализаторов для промышленного получения продуктов окисления метана. Для успешного решения перечисленных практических задач необходимо знание механизма окисления метана и, в частности, механизма первой стадии этой реакции окисления метана до метанола, Эта стадия наименее изучена и наиболее важна для метанокйсляющих бактерий, поскольку фермент, ответственный за окисление метана до метанола является ключевым для всей дальнейшей цепи окисления метана (46). Изучение метанокисляющих микроорганизмов проводится весьма интенсивно по широкому кругу вопросов. Однако работы по изучению механизма реакции окисления метана до метанола пока занимают весьма скромное место. Молекулярный механизм окисления метана практически не изучен. Сделаны лишь первые попытки разобраться в этом процессе. После работы Higgins and Quyie (66), установивших, что фермент, окисляющий метан представляет собой оксидазу со смешанной функцией, появились лишь сообщения о характере ингибирования реакции окисления метана (4, 6, 39, 40, 55, 57, 65, 68, 69, 91, 104, 106, 120). На основании этих исследований был сделан предварительный вывод о наличии иона метелла в активном центре метанокисляющего фермента. Заслуживает внимания попытка некоторых авторов установить лимитирующую стадию реакции окисления метана (2). Однако этим практически и исчерпываются данные по изучению механизма ферментативного окисления метана. Подобное положение может быть объяснено сложностями получения и хранения бесклеточных препаратов метанокисляющих бактерий. Это, в свою очередь, определяет сложности выделения и очистки метанокисляющей ферментной системы. Так, к настоящему времени лишь двум группам исследователей удалось получить частично очищенные препараты метанмонооксигеназной системы (18, 39, 40, 42, 65, 120, 121, 122). Обе эти системы различаются как по клеточной локализации, так и по субстратной специфичности. Все это свидетельствует о необходимости проведения исследования метанмонооксигеназной ферментной системы и изучения молекулярного механизма окисления метана. Целью настоящей работы являлось изучение молекулярного механизма ферментативного окисления метана до метанола бесклеточными препаратами метанокисляющих бактерий Methylосо ecus capsu- latus штшлм М И выяснению роли в этом процессе цитохрома с, связывающего СО. В связи с этжл в настоящей работе были поставлены следующие задачи: 1. Разработка методов определения активности метанмонооксигеназы (MvIO), ПОЗВОЛЯЮЩХФС определить ее кинетршеские параметры; 2. Получение и частичная очистка коьшонентов метанмонооксигеназной системы; 3. Разработка методов длительного хранения активных бесклеточных препаратов метанокислящих бактерий; 4. Изучение физико-химргческих свойств бесклеточных препаратов; 5. Исследование структуры активного центра ШЮ метолщш стаУ ционарной кинет1жи. При выделении и характеристрше юерлента использовали ряд биохигшческих подходов и электронную микроскопию. Для изучения активного центра применяли различные подходы стационарной кинетики и ряд физико-химических методов, включающих электронную спектроскопию, спектрофлуориглетрию, ядерный магнитный резонанс и так далее. Совокупность результатов, полученных в ходе вьшолнения настоящей работы, ддет возможность более целенаправленно проводить исследования по ош-ютке метанглонооксигеназы. Данные кинетического анализа позволили предложить модель строения активного центра, которая может служить -рабочеж гипотезой для дальнейшего исследования ферлента. Ниже сфорлулированы новые данные, которые ползгчены в настоящей работе и вынесены на защиту: I Разработаны метод! выделения и длительного хранения субклеточных: мембранных структур Mc.capsuLatus, штаглгл М, окисляющих метан с высокими скоростями; 2. Установлено, что метанмонооксигеназа м.capsulatus, штамма М, входит в состав мембранных структур везикулярного типа и являются ферментом широкого спектра действия и рН оптимумом 6,5-7,0; 3. Установлено, что цитохром CQQ не принимает участия в метанмонооксигеназной реакции у м.capsulatus штамм М; 4. Установлено, что лимитирующей стадией ферментативного окисления метана является стадия разрыва С-Н-связи; 5.Исследование зависимости К для метана от температуры, конкуренция процесса окисления окиси углерода с процессом окисления метана, а также ингибирующего влияния хелатирующих агентов на актртвность метанмонооксигеназы, позволили предположить, что субстраты связываются с участием иона металла субстрат-связывающего центра фермента; 6. Проведенные исследования позволили сформулировать представления о механизме ферментативного окисления метана, которые сводятся к следующему: молекулярный кислород и метан активируются в координационной сфере иона металла, после чего активная форма кислорода внедряется по активированной С-Н-связи.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Пиляшенко-Новохатный, Андрей Игоревич

ВЫВОДЫ

1. Разработаны два метода определения активности ММО. Один из них основан на газохроматографическом определении скорости окисления метана в реакционном объеме, не содержащем газовой фазы, а второй - на радиоизотопном измерении кошчества

ТА^тт продуктов реакции окисления СН^.

2. Разработаны методы выделения и длительного хранения субклеточных мембранных структур метанокисляющих бактерий Methyio-coccus capsuLatus, штамм М, которые с высокими скоростями окисляют метан.

3. Установлено, что ММО Мс.capsulatus штамм М входит в состав субклеточных мембранных структур везикулярного типа, окисляет метан и его гомологи, газообразные углеводороды, содержащие двойную связь и СО.

4. Установлено, что цитохром Cqq не принимает участия в метанмонооксигеназной реакции у Мс.capsuLatusiiiTaMM М.

5. Оценена энергия активации процесса окисления СН^ ММО

75 кДж'МОЛь-1 для температуры выше 293°К и 96 хЩж'Моль-1 для температуры ниже 293^). Наличие перегиба на кривой Аррениуса позволяет предположить, что в ферментативном окислении СН4 важную роль играют липиды.

6. На основании кинетических исследований окисления СН^ и СД^, CgHg и Cgflg МО установлено, что лимитирующей стадией ферментативного окисления метана является стадия разрыва С-Н связи.

7. Исследование зависимости Км для метана от температуры и конкуренция процесса окисления с процессом окисления метана, а также изучение ингибирующего влияния хелатирующих агэнтов на активность ММО, позволили предположить, что субстрата МО связываются с ионом металла активного центра фермента, 8. Проведенные исследования позволили сформулировать прэдстав-ления о механизме ферментативного окисления метана, которые сводятся к следующему: молекулярный кислород и метан активируются в координационной сфере иона металла, после чего активная форма кислорода внедряется по активированной С-Н связи с образованием метанола.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пиляшенко-Новохатный, Андрей Игоревич, Киев

1. Арчаков А.И. Микросомальное окисление. М.: "Наука", 1975, 327с.

2. Белова B.C., Гвоздев Р.И., Малашенко Ю.Р., Садков А.П., Юрченко В.А. Изотопный эффект в ферментном окислении метана. Биохимия, 1976, т. 41, с. 1903-1905.

3. Блкменфельд Л.А. Проблемы биологической физики. ГЛ.: "Наука", 1974, 268 с.

4. Гальченко В.Ф., Шишкина В.Н., Тюрин B.C., Троценко Ю.А. Выделение чистых культур метанотрофов и их свойства. -Микробиология, 1975, т. 44, с. 844-850.

5. Дэвенки Т., Грей Я. Аминокислоты, пептиды, б ежи. М.: "Мир", 1976, с. 69-71.

6. Квасников Е.И., Малашенко Ю.Р., Романовская В.А. Методы выделения и некоторые особенности биологии микроорганизмов, окисляющих газообразные углеводороды. Микробиология, 1969, т. 38, с. 968-974.

7. Лихтенштейн Г.И. Многоядерные металлоферменты. М.: "Наука", 1979, 323 с.

8. Малашенко Ю.Р., Романовская В.А., Богаченко В.И., Хотян Л.В., Волошин Н.В. Особенности углеродного питания микроорганизмов, растущих на природном газе. Микробиология, 1973, т. 42, с. 403-408.

9. Малашенко Ю.Р., Романовская В.А., Квасников Е.И. О систематическом положении бактерий, использующих газообразные углеводороды. Микробиология, 1972, т. 41, if 5,с. 871-879.

10. Малашенко Ю.Р., Романовская В.А., Соколов И.Г. Некоторые физиолого-биохимические свойства новых форм обли-гатных метилотрофов. Успехи микробиологии, 1978,т. 13, М.: "Наука".

11. Малаш енко Ю.Р., Романовская В. А., Троценко 10. А. Метан-окисляющие мжр о организмы. М.: "Наука", 1978.

12. Моносов Э.З. Мембраногенез у облигатных метанокиолявдих бактерий. В кн.: Рост микроорганизмов на Отсоединениях. Тезисы докладов сим позиума. Пущино, 1977,с. 25-28.

13. Моносов Э.З. Приспособления, облегчающие подготовку биологических образцов для электронной микроскопии. -Микробиология, 1978. т. 48, № 2, с. 362-366.

14. Моносов Э.З., Нетрусов А.И. Локализация энергогенераторов у метанокисляющих бактерий. Микробиология, 1976, т. 45, №4, с. 598-601.

15. Нетрусов А.И. Энергетический обмен метилотрофных микроорганизмов. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. М., МГУ, 1976.

16. Ракитин В.Ф., Моносов Э.З., Прокофьева Н.В., Григорян А.И. Метод скоростной декомпрессии для дезинтеграции рлеточных оболочек микроорганизмов. Приклад, микробиол. Г' биохимия, 1976, т. 12, JS 2, с. 278-282.

17. Уильяме В., У иле он К. Метода практической биохимии. М.: "Мир", 1977.

18. Хиггинс И.Дж., Тонге Г.М., Хаммонд Р.К. Метанмонсоксиге-наза и дыхание у Methylosinus trichosporium. Вкн.; Рост микроорганизмов на Cj-соединениях. Тезисы докладов симпозиума. Пущино, 1977, с. 66-68.

19. Четина Е.Б., Сузина Н.Е., Фихте Б.А., Троценко Ю.А. Влияние условий культивирования на организацию мембранного аппарата Methyl оmonas methanica. Микробиология, 1982, т. 51, № 2, с. 247-254.

20. Эммануэль Н.М., Кнорре Д.Г. Курс химической кинетики. М.: "Высшая школа", 1974, 287 с.

21. Aleem M.J. Generation of reducing power in chemosynthesis* II. Energy linked reduction of piridins nucleotides in the chemoautotroph Nitrosomonas europeae. Biochem. Biophys. Acta, 1969, v. 113, p. 216-224.

22. Anthony C. The biochemistry of methyl о trophic microorganisms. Sci. Progr., 1975, v. 62, p. 167-20 6.25» Anthony G. The microbiol metabolism of Сj-compour.ds. The cytochromes of Pseudomonas A MI. Biochem. J., 1975, v. 146, n. I, p. 289-298.

23. Anthony C., ZatmanL.J. The microbiol oxidation cf methanol. The alcohol dehydrogenase of Pseudomonas sp. И 27» -Bdochem. J., 1965, v. 96, n. 3, p. 808-812.

24. Anthony C., ZatmanL.J. The micro"biol oxidation of methanol. The purification and properties of the alcohol dehydrogenase of Pseudomonas sp. M 27. Biochem. J., 1967 a, v. 104, p. 953-959.

25. Anthony C., ZatmanL.J. The microbiol oxidation of methanol. The prostetic group of the alcohol dehydrogenase of Pseudomonas sp. M 27- Biochem. J., 1967 b, v. 104,p. 960-969.

26. Beardmore-Gray M., O'Keeffe D. T., Anthony G. The autoredu-cible cytochromes of the methylotrophs MethylophHus methylotrohus and Pseudomonas AM I. Biochem. J., 1982, v. 207, n. I, p. I6I-I65.

27. Beardmore-Gray M., O'Keeffe D. T., Anthony C. The methanol: cytochrome с oxidoreductase activity of methylotrophs. -J. Gen. Microbiol., 1983, v. 129, n. 4, p. 923-933.

28. Brown L.R., Strawinski R. J., McCLeskey C. S. The isolation and characterization of Methanomonas methanooxidans Brown and Strawinski. J. Gen. Microbiol., 1964, v. 10, p. 791-799.

29. Cardini G., Jurtshuk P. Cytochrome P-450 involvement in the oxidation of n-octane by cell-free extracts of Cory-nebacterium sp. strain ZEIG. J. Biol. Chem., 1969, v. 243, p. 6070-6072.

30. Cohen-Bozine G., Sistrom У/.R. The procariotic photosin-thetic apparats. In: Chlorophill s. Eds.: Vernon L.P., Lecley G.R., New-York-London, Acad. Press, 1966, p. 313-341*

31. Colby J., Dal ton H. Some properties of soluble methane monooxygenase from Methylococcus capsuLatus strain Bath. -Biochem. J., 1976, v. 157, n. 2, p. 495-497.

32. Colby J., Dal ton H. Resolution of the methane monDoxyge-nase of Methylococcus capsulatus (Bath) into three components. Purification and properties of component C, a fla-voprotein. Biochem. J., 1978, v. 171, n. 2, p. 461-477.

33. Colby J., Dal ton H., If/hi tt enbury R. An improved assay for bacterial methane monooxygenase: some propertie of the enzyme from Methylomonas methanica. Biochem. J., 1975, v. I5i, n. 2, p. 459-462.

34. Dawson M. J., Jones C.W. Energy conservation in the termal region of the respiratory chain of methyl оtrophyс bacterium Methylophylus methyl о trophus. Eur. J. Biochom., 1981, v. 118, n. I, p. II3-II8.

35. Duine J.A., Prank J. Jr., Westerling J. Purification and properties of methanol dehydrogenase from Hypomiorobium. -Biochem. Biophys. Acta., 1978, v. 524, p. 277-28r\

36. Perenci T. Oxygen methaholism inPPseudomonas methanica. -Arch. Microbiol., 1976, v. 108, p. 217-219.57» Perenci Т., Strom Т., Quayle J.R. Oxidation of carbon mo-nooxide and methane by Pseudomonas methanica. J,. Gen. Microbiol., 1975, v. 91, p. 79-91.

37. Poster J. V/.» Davis R.H. A methan dependent coccus, with notes on classification and nomenclature of obligate metha-neutHising bacteria. J. Bacterid., 1966, v. 91, p.1924--I93I.

38. Ghosh R., Quayle J.R. Purification and properties of the methanol dehydrogenase from Methylophilus methyl о trophus. -Biochem. J., 1981, v. 199, n. I, p. 2 4 5 250.

39. Gun sal us Т.О., Pederson Т.О., SLigar S.G. Oxygen-oatal yzed biological hydroxylations. Ann. Rev. Biochem., 1975,v. 44, p. 377-407.

40. Harrison D. E. P. Studies on the affinty of methanol and methaneut31 izing bacteria for their carbon substrates. ~ J. Appl. Bacterid• , 1973, v. 36, p. 301-308.

41. Heptinstall J., Quayle J.R. A mutant of Pseudomonas AM I wich lacks methanol dehydrogenase activity. J. Gen. Microbiol., 1969, v. 55, n. 3, p. 16-17.

42. Higgins I.G., Quayle J.R. Oxygenation of methan ty metha-negrown Pseudomonas methanica and Methylomonas methanooxi-dans. Biochem. J., 1970, v. 118, p. 201-208.

43. Нбрпег Т., Trautwein A Some properties of formate dehydrogenase. Z.Naturforsch., 1972, v. 27, p. Ю75-Ю76.

44. Hubley J.H., Mitton A. W. , Wilkinson J.P. The oxidation of carbon monooxides by methane oxidizing bacteria. Arch. Microbiol., 1974, v. 96, p. 365-З68.

45. Hubley J.H., Thomson A.W., Wilkinson J.P. Specific inhibitors of methane oxidation in Methylosinus trichosporium. -Arch. Microbiol., 1975, v. 10 2, n. 3, p. 139-20 2.

46. Hutchinson D.W., Whittenbury R., Dal ton H. A possible role of free radicals in the oxidation of methane by Methy-lococcus capsulatus. J. Theor. Biol., 1976, v. 58,p. 325-335.

47. Johnson P.A., Quayle J.R. Microbiol growth on Cj-compounds. Oxidation of methanol, formaldehyde and formate of methano 1 growth Pseudomonas AM I. Biochem. J. , 1964, v. 93» p. 281-290.

48. Johnson P.A., Quayle J.P. Microbiol growth on Cj-oompo-unds. Synthesis of cell constituens by methane and metha-nolgrown Pseudomonas methanica. Biochem. J., 19 55,v. 95, p. 859-867.

49. Leadbetter E.R., Foster J. V/. Studies on some me thane-utilizing bacteria. Aech. Microbiol., 1958, v. 30, p. 91-118.

50. Leadbetter E.R., Foster J. VI. Bacterial oxidation of gaseous alkanes. Arch. Microbiol., I960, v. 35, p. 92-104.

51. Linton J.D., Vakes J. Growth of the methane utilizing bacterium Methylococcus NCIB IIO83 in mineral salts medium with methanol as the sole sourse of carbon. -FEBS Lett., 1978, v. 4, n. 3, p. 125-130.

52. Lowry O.H., Rosebrough N. J. , Farr A.L. , Randall R.J. Protein measurement with the Fol in phenol reagent. J. Biol. Chem., 1951» v. 193, p. 265-275.

53. Malashenko Ju.R. Isolation and characterisation of new species ( thermophilic and thermotolerant ones ) of metha-neuti!izars. In: Microbiol production and utilizationof gases. Eds. Schlegel G,H. et al., GSttingen, 1976, p. 293-300.

54. Mai к in R., Malmstrom B.G. The state and function of copper in biological systens. Adv. Enzimol., 1970, v. 33> p. 177-244.

55. Mandori В., Rotilio G., Finazzi A. A. , Vallogini M.P., Malmstr6'm B.G., Antonini E. Copper reduction by substrate in diamine oxidase. FEBS Lett., 1969, v. 2., p. 182-184.

56. Mehta R.J. Studies on methanol- oxidizing bacteria. II. Purification and properties of methanol dehydrogenase from Pseudomonas R.J.I. Antonie van Leeuvenhoek,, 1973» v. 39, p. 303-312.

57. Meyers A.J. Jr. Obligate methyl о trophy: evaluation of dimethyl ether as a Cj-compound. J. Bacteriol., 1982,v. 150, n. 2, p. 966-968.

58. Murrell C.J., Dal ton H., Ammonia assimilation in Methylococcus capsuLatus ( Bath ) and other obligate methylоtrophs. J. Gen. Microbiol., 1983, v. 129, n. 4, p. II97-I206.

59. I-Jetrusov A. I. , Rodionov J. V., Ко drat leva ЕЛТ. ATP-genera-tion couple with Cj-compounds oxidation by methyl о trophic bacterium Pseudomonas sp. 2. FEBS Lett., 1977, v. 76, n. I, p. 56- 58.

60. ITemaz S. S. , HershL.B. Reduced nicotinamide adenine di-nucl eotideeactivated phospho enol pyruvate carboxylase in Pseudomonas MA.: potential regulation between carbon assimilation and energy production. J. Bacteriol., 1975, v. 124, p. 825-833.

61. Patel R.IT. , Hoare D. S. Physiological studies of methane and methanol-oxidizing bacteria. Oxidation of C.j-~com-pounds by Methylococcus capsulatus. J. Bacteriol., 1971, v. 107, p. 187-192.

62. Patel R.IT., Hou С. T., Felix A. Inhibition of dimethyl ether and methane oxidation in Methylococcus capsuLatus and Methylococcus tricho sporium. J. Bacteriol. 1976, v. 126, n. 2, p. 1017-1019.

63. Patel R.IT., Hou С. T., Felix A. Microbiol oxidation of methane and methanol. Iolation of methane-utilizing bacteria and characterization of a fecuLtative methan-uti-lizing isolate. J. Bacteriol., 1978, v. 136, n. I,p. 352 -364.

64. Patel R.IT., Hou С. T., Felix A. Purification and properties of the cytochrome с from Methyl о monas methanica. -J. Gen. Appl. Microbiol., 1979, v. 25, n. I, p. 819842.

65. Patel R.IT., Hou С. T., Iaskin A.I., Felix A Epoxi-dation of alkenes and hydroxylation of alcanes by soluble methane monooxygenase: regeneration of Cofactor 1TADH0. J.t

66. Appl. Biochem., 1982, v. 4, n. 2, p. 175-184.

67. Patel R.H., Felix A. Microbiol oxidation of metliane and methanol: crystallization and properties of methanol dehydrogenase from Methyl о sinus sporium. J. Bacteriol., 1976, v. 128, n. I, p. 413-424.

68. Pfenning N. Photo synthetic bacteria. An. Rev. Microbiol., 1967, v. 21, p. 285-342.

69. Proctor H.M. , Norris J.R., Ribbons D. W. Pine structur of methane-oxidizing bacteria. J. Appl. Bacterid., 1969, v. 32, n. I, p. II8-I2I.

70. Ribbons D. W. Some chemical and biochemical aspects of biomass. London, Inst. Petrol. Microbiol., 1963, p.47--61.

71. Scott D., Brannan J., Higgins I.J. The effect of growth conditions on intracytoplasmic membranes and methane mo-nooxygenase activies in Methyl о sinus tricho sporium ОВЗ'Ь. J. Gen. Microbiol., 1981, v. 125, n. I, p. 63~72.

72. Smith U., Ribbons D. V/. Pine structure of Methanomonas methanooxidans. Arch. Microbiol., 1970, v. 72v n. 2, p. II6-I22.

73. Sonngen N.L. Uber Bacterien, welche me than als ICohlen-stoffnahruhg und Energiequell e gebrauchen. Zbl . Bac-teriol., Parasitenk., Infektionskrankh. und Hyg., 190 6, Abt. v. 2, n. 15, p. 513-517.

74. I. Sperl G. T., Forrest H.S., Gibson D. T. Substrate specificity of the purified primary alcohol dehydrogenase from methanol oxidizing bacteria. J. Bacterid., 1974» v. 118, p. 541-550.

75. Stieglits В., Mateles R.I. Methanol metabolism in Psen-do пюпав. J. Bacterid., 1973, v. 114, p. 390-398.

76. Strom Т., Perenci Т., Quayle J.R. The carbon assimilation pathways of Methylococcus capsuLatus, Pseudomonas methanica and Methyl о sinus tricho sporium (ОВЗЪ) durring growth on methane. Biochem. J., 1974, v. 144, P* 465" -476.

77. Taylor I. J., Anthony C. A biochemical basis for obligate methylotrophy: propertie of a mutant of Pseudomonas AM I lacking 2-oxoglutarate dehydrogenase. J. Gen. Microbiol., 1976, v. 93, p. 259-265.

78. Tonge G.M., Drozd J. W., HiggiJis I.J. Energy couplingin Methyl 0 sinus tricho sporium. J. Gen. Microbiol., 1977,v. 99, n. I, p. 229-232.

79. Tonge G.M., Harrison D. E. F., Higgins I.J. Purification and properties of the me than mono-oxigenase enzyir.e sistem from Methylosinus trichosporium 0B3b. Biochem. J., 1977, v. 161, p. 333-344.

80. Tonge G.M., Harrison D. E. P., Knowles C.J., Higgins I.J. Properties and pertial purification of the methare-oxi-dazing enzyme from Methylosinus trichosporium. EEBS Lett., 1975, v. 58, p. 293-299.

81. Tonge G.M., Knowles C. J., Harrison D. E. F., Higgins I.J. Methabolism of one-carbon compounds: cytochromes of methane- and methanol-util izing bacteria. FEBS Lett., 1974, v. 44, p. I0 6-II0.

82. Urushibura Т., Forrest H.S., Hoare D. S. , Patel E.H. Pteridines produced by Methylococcus capsuLatus. Isolation and identification of neoprotein 2' +3' phosphate. Biochem. J., 1971, v. 125, п. I, p. I4I-I46.

83. Wadzinaki A.M., Ribbons D. W., Oxidation of Cj-compounds by partifiuLate fraction from Methylococcus capsuLatus:-properties of methanol oxidase and methanol dehydrogenase. J. Bacterid. , 1975 a, v. 122, p. 1364-1374.

84. Wadzinski A.M., Ribbons D. V/., Utilization of acetate by Methanomonas methanooxidans. J. Bacterid., 1975 b, v. 133, p. 380-381.

85. Weaver T.L ., Dugan P.R., HI trastructure of Methylosinus trichosporium as revealed by freeze etching. J. Bacterid., 1975 a, v. 121, n. 2, p. 704-710.

86. Wearer T.L., Dugan P.R. Methylotrophic enzyme distribution in Methyl о sinus tricho sporium. J. Bacteriol., 1975 b, v. 122, n. 2, p. 433-436.

87. Weston J.A., KnowLes C.J. The resperatory system of the marine Benecia natriagens. I. Cytochrome composition. Biochem. Biophys. Acta, 1974, v. 333»p. 228-236.

88. Whittenbury R., Phyllips К. C., Wilkinson J.P. Enrichment isolation and some properties of methane utilizing bacteria. J. Gen. Microbiol., 1970,v. 61, p. 20 5-218,

89. Wilkinson J. P. Hydrocarbons as source of single-cell protein. In: Microbes and biological productivity. 21 st Symp. Soc. Gen. Microbiol., Eds. Hughes D.E. , Rose A. H., London, Cambrige Univ. Press, 197--» p. 15"-46.

90. Wilkinson J. P. Physiological studies of bacteria grown on methane. Proc. Int. Symp. Mic robiol Growth Cj-compounds. Tokyo, Soc. Ferment., Technol., 1975» P* 45-47.