Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение механизма комплементации системного распространения вируса крапчатости красного клевера вирусом табачной мозаики

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Изучение механизма комплементации системного распространения вируса крапчатости красного клевера вирусом табачной мозаики"

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В.ЛОМОНОСОВА БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

о~

I—

НАЗАРОВА ДЖЕННЕТ НУРНАЗАРОВНА

ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМА КОМПЛЕМЕНТАЦИИ

СИСТЕМНОГО РАСПРОСТРАНЕНИЯ ВИРУСА КРАПЧАТОСТИ КРАСНОГО КЛЕВЕРА ВИРУСОМ ТАБАЧНОЙ МОЗАИКИ

03.00.06 - Вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва ■ 1995

сп

На правах рукописи УДК 578.3

Работа выполнена на кафедре вирусологии Биологического факультета Московского Государственного Университета имени М.В.Ломоносова.

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Защита состоится "/¿Г" 1995 г. в -/Г час.

• • лг; •

на заседании Специализированного совета Д.053.05.70 при Московском Государственном Университете им. М.Е.Ломоносова по адресу: 119899, Москва, Воробьевы Горы, МГУ, Биологический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова.

Автореферат разослан "УЗ " С^Ч0-^^1995 года*

академик РАН, профессор И.Г.Атабеков,

каццвдат биологических наук С.И.Малышенко

доктор биологических наук С.К.Завриев,

кандидат биологических наук В.Г.Джавахия

Институт, вирусологии РАМН

Ученый секретарь Специализированно: совета, кандидат химических наук . . / : В .Н.Каграманоа

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Исследование ме~ энизма распространения вирусной инфекции в растениях представля-т собой одну из основных задач современной вирусологии. Транс-орт вирусов растений является активным процессом, в котором при-имаит участие вирусспецифические транспортные белки СТБ) С Hull, 989 ). К настоящему времени показано, что ТВ имеются у различных итовирусов независимо от принадлежности к той или иной таксоно-ическо\1 группе с fltabekov and Taliansky, 1390 ). Изучение меха-измов действия ТБ вирусов растений, их участия в распространении нфекции является важной проблемой, одним из эффективных методов сследовация которой стал комнлементационный анализ.

Данный метод был применен в настоящей работе для изучения истемного распространения вируса крапчатости красного клевера БНКК ) в растениях табака, осуществляемого с помощью вируса та-ачной мозаики (. ВТМ ). Под системным распространением вируса десь понимается полное инфицирование растения, включающее в себя ;ак процесс ближнего транспорта ( транспорт от клетки к клетке в феделах инокулированного листа ), так и процесс дальнего транс-юрта ( транспорт по проводящей системе с последуищим заражением тинокулированных листьев ).

Системное распространение вируса осуществляется в тех расте-шях, в которых он способен полностью выполнить свою транспортную )ункцию (ТФ). Если ТФ данного вируса не моает быть реализована-в гом или ином растении, нередко барьер для транспорта преодолевается при совместном заражении с другим вирусом. В этом случае ви-jyc - помощник комплементирует зависимый вирус по функции транс-юрта. Такая комплементация возможна как между родственными зирусами, так и между вирусами из разных таксономических групп

( Atabekov and Taliansky, 19SO ).

В данной работе исследовалась комплементация ТФ БНКК ( комо вирус ) с помощью ВТК ( тобамовирус ). Механизмы транспорта эти вирусов, относящихся к разным таксономическим группам, являйте наиболее изученными к настоящему времени. - В распространении ВКК и ВТМ в растениях активно участвуют вирусспецифические ТБ ( 30 ТБ - у ВТМ; 48К / 58 К ТБ - у ВККК ). Но если транспорт ВТМ про исходит с образованием комплексов " РНК - ТБ " и осуществляется через модифицированные плазмодесмы, то комовирус транспортируете в форме вирусных частиц по специфическим тубулярным структурам .индуцируемым ТБ С Citovsky and Zambrysky, 1991 : Wellink and va: Каштеп, 1989 ; van Lent et al, 1990 ).

Таким образом, эти механизмы принципиально отличаются дру] от друга. Поэтому изучение комплементации по ТФ мезду вирусами и: этих групп представляет особый интерес для понимания процессо! осуществления транспорта и Функциональной роли ТБ , в системно! распространении фитовирусов.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было изучение механизма, посредством которого тобамовирус t ВТМ ) помогает комовирусу ( ВККК ) распространяться I растениях Nicociana tabacun. ■

В ходе работы решались следующие задачи :

1) выяснение принципиальной возможности инфицирования H.tabacui комовирусом ( интактннх растений и протопластов ) ;

2) изучение возможности комплементации функции транспорта ВККК £ растениях табака с помощью тобамовируса ( ВТМ ) ;

3) получение трансгенных растений M.tabacum, продуцирующих 30 !• ТБ ВТМ ;

4) исследование функциональной роли ТВ ВТМ, продуцируемого трансгенными растениями табака, в осуществлении комплементации транс-

юртной функции для Ьг 1 ( мутанта ВТМ, температурочувствителъно-■о по транспорту ) и для ВККК.

Научная новизна и практическая 1 е н н о с т,ь работы, В настоящей работе впервые показа-¡а возможность комплементации ТФ комовируса С ВККК ) с помощью гобамовируса С ВТМ ) в растениях НЛаЬасит, которые в норме не ¡аражакпся ВККК. Благодаря использованию трансгенных растений та-)ака, продуцирующих 30 К ТБ ВТМ, исследованы условия системного, >аспространения ВККК в НЛаЬасип. Установлено, что наличие функ-шонально активного ТБ ВТМ при отсутствии других факторов являет-:я необходимым, но недостаточным условием для распространения (ККК в растениях табака. Кроме ТБВТМ для осуществления ТФ комо-¡ируса требуется также наличие других ВТМ - специфических факто-юв ( или фактора ), что подтверждено результатами смешанного инфицирования ( ВККК + Ьб 1 ) трансгенных растений табака.

Ввиду того, что работа посвящена изучении механизма ¡омплементации распространения комовируса в растениях табака, ее )езультаты представляют интерес и с практической стороны. Иссле-ювание распространения вирусной инфекции в растениях имеет не-юсредственное отношение к проблеме вирусоустойчивости растений и :озданию эффективных способов защиты растений от вирусов.

Апробация работы. Результаты работы были доло-шны на заседании кафедры вирусологии Биологического факультета 1ГУ.

Структура работы. Диссертация состоит из следу-)щих разделов : введение, обзор литературы, материалы и методы ¡сследования, обсуждение результатов, список литературы. Общий

)бъем диссертации составляет . .0^?,, , в том числе 3........

жсунков. Список цитируемой литературы содержит публи-

;аций.

>

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Для нашей экспериментальной системы большое значение имел выбор растений. В работе мы использовали растения НЛаЬасив, которые явились удобный объектом по следукщим причинам:

1) ВККК не способен самостоятельно осуществлять системное инфицирование табачных растений, в то время, как для БТМ НЛаЬасит является растением - хозяином ;

2) растения табака хорошо изучены и широко используются • в фитовирусологических экспериментах.

1. Инфицирование интактных растений и протопластов табаке ВККК.

Растения НЛаЬасит сорта Самсун инокулировали ВККК в концентрации 100 мкг/мл. С помощью иммуноферментного анализа ( ИФА ) было показано, что ВККК не способен системно распространяться в растениях ИЛаЬасив ( Табл.1. ). Для того» чтобы определить, проявляется ли устойчивость к ВККК на клеточном уровне, из растений НЛаЬасит были выделены протопласты. Изолированные из мезофилла листа протопласты инокулировали ВККК ( 5 мкг/мл ). Спустя различные интервалы времени определяли содеряание ВККК в протопластах методом ИФА. Результаты ИФЙ показали: ВККК накапливается в протопластах табака ( Рис.1. ), что свидетельствует о возможности эффективной репродукции вируса в изолированных клетках. Зти данные дали основание предполовить, что устойчивость растений табака бала обусловлена невозможностью выравения ТФ ВККК.

Таблица 1. Накопление ВККК в растениях табака, смеиан-

х

но - инфицированных ВТМ и ВККК.

Вирус-помощник Зависимый вирус Накопление ВККК ( нг/г листовой ткани )

I II III

ВТМ ВККК 820 2440 1600

- ВККК 10 ^ 10 410

Эксперименты проводили при 24 С. Листья инокулировали вирусом - помощником в концентрации 50 мкг/мл, через 2-4 дня зараяали зависимым вирусом ( 100 мкг/мл ). "Определяли методом ИФА через 4~1 дней после заражения ВККК. Для какдого опыта приведены средние значения, полученные при анализе 3 или 4 растений.

§ зооо-

г С 2000-

Т 24

-1— 32

в 16 24 32 40

Время (часы) после инокуляции

Рис.). Накопление ВККК в протопластах табака, инфицированных вирусом.

2. Комплементация транспорта ВККК с помощью ВТМ в смешанно - инфицированных растениях табака.

Для преодоления блокады транспорта ВККК б растениях табака нами был использован ВТМ в качестве вируса - помощника.

Растения НДаЬасии сорта Самсун инокулировали ВТМ (50мкг/мл). Через 2-4 дня растения заражали ВККК в концентрации 100 мкг/мл. Б присутствии ВТИ-помощника ВККК накапливался в НДаЬасип (Табл.1).

Для доказательства комплементации ВККК именно по транспорту при смешанном инфицировании с ВТМ нами был использован следующий экспериментальной подход. Обычно при механической инокуляции растений вирусом происходит инфицирование лишь незначительного числа клеток эпидермиса. Поэтому обнаружение вируса в других тканях указывает на то. что произошел транспорт вирусной инфекции.

Исходя из этого, мы выделили протопласты из листьев растений, смешанно-инфицированных ВТМ и ВККК, и исследовали их на наличие ВККК. Результаты ЙФА показали, что протопласты содержали и накапливали ВККК I Табл,2.

В то же время протопласты,выделенные из контрольных растений, заращенных только ВККК, практически не содержали комовирус (Табл.2). Следовательно, роль вируса - помощника ( ВТМ ) в развитии инфекции ВККК состояла не в усилении репродукции комовируса, а в обеспечении транспорта ВККК из клетки в клетку. Если бы ВТМ лишь усиливал репликацию ВККК, это выражалось бы б увеличении содержания ВККК в первично - инфицированных эпидермальных клетках. Но обнаружение ВККК в протопластах, изолированных ив мезофилла, явилось свидетельством того, что ВККК преодолел с помощью ВТМ барь-

Таблица 2. Содержание ВККК в протопластах.выделенных из смешанно-инфицированных ВТК и ВККК растений табака?

Вирус -помощник Зависимый вирус Содержание ВККК 6 ** ( нг/5х10 протопластов )

1 1Г II!

ВТМ ВККК 1800 3240 2500

- ВККК ч< 20 ч< 20 ч< 20

Растения инокулировали вирусом - помощником в концентрации 50 мкг/мл,через 2-4 дня заракали зависимым вирусом (100 мкг/мл).

'"Протопласты выделяли через 4-7 дней после заражения ЗЬ'КК, инкубировали 24 часа для накопления вируса, тестировали методом йФй,

зр для транспорта из первично - заракенных клеток эпидермиса в :аренхимные клетки мезофилла ( Рейвне и др.. 1930: Atabekov and Га I i anskv, 1 930 ).

Полученные данные позволили предположить, что необходимой 1редписылкой для комплементации по ТФ меаду ВККК и ВТМ является наличие Функционально активного ТБ, кодируемого тобаиовирусоы -)онопнико*. Это предпилояение было подтверядено в экспериментах с ^пользованием Ls 1, мутантного штамма ВТМ, дефектного по ТФ.

3. Заранение растений табака ВККК совместно с Ls 1.

Мутация в геноме Ls 1 приводит к замене пролина на серии в 153 полокении 30 К ТБ вируса, что проявляется в температурочдвс-твитеяъном поведении мутанта ( Leonard and Zaitlin, 1982; Meshi et al., 198?.). При пермиссивной температуре ( 24°С ) Ls 1 ведет себя подобно ВТМ, в частности, системно инфицируя растения N.tabacum. При 33° С ТБ Ls 1 нефункционален,поэтому Ls 1 не способен распространяться в растениях в условиях непермиссивнай температуры С Sishiguchi et al., 1980. ).

Ls 1 использовали в качестве вируса - помощника ( в концентрации 50 мкг/мл ), заражая растения N.tabacum сорта Самсун. Через 2-4 дня растения заражали ВККК ( 100 мкг/мл ). Содержание вирусов определяли методом ИФЙ через 4-7 дней после заранени« ВККК. Данные, приведенные в табл.3, показывают, что Ls 1 был не способен комплементировать ТФ ВККК в N.tabacua при непермиссивно£ для Ls 1 температуре ( 33°С ). При 24° С Ls 1 комплементирова; распространение ВККК с эффективностью, сравнимой с эффективность! комплементации между ВТМ и комовирусом ( Табл.3; Табл.1 ).

Таким образом, этот эксперимент наглядно npojeMOHCTpHpoBSJ необходимость наличия функционального 30 К ТБ тобамовируса дл! осуществления комплементации ТФ ВККК в N.tabacum. Можно предположить, что способность ВТМ комплементировать ТФ ВККК основана н< свойствах ТВ ВТМ. Известно, что ТБ ВТМ кооперативно связывает молекулы нуклеиновой кислоты по всей длине ( СItovsky аш Zambrysky, 1991 ). Этим, возмоано, объясняется отсутствие выраженной специфичности ТБ к определенным нуклеотидным последовательностям при образовании транспортабельных комплексов

*

Таблица 3, Заражение растений табака ВККК совместно с Ls 1.

Вирус - ПОМОЩНИК Зависимый вирус t°c Накопление вируса ( нг/г листовой ткани )

Ls 1 ВККК

I II I II

Ls 1 ВККК 33° v< 20 í 20 20 20

Ls 1 - 33- ¿ 20 •í 20 - -

- ВККК 33е - - ч< 20 ч< 20

Is 1 ВККК 24° 18200 16000 3600 1800

* Растения заракали вирусом - помощником в концентрации 50 мкг/мл. через 2-4 дня инокулировали зависимым вирусом ( 100 мкг/мл ). Определяли методом ИФА через 4-7 дней после заражения ВККК.

(Citovskü and Zaubrysky, 1991 ). В свою очередь, неспецифичное связывание Т5 ВТК с РНК ВККК монет каким-то образом привести к комплементации ТФ ВККК в растениях табака.

При этом, в процессе связывания с ТЕ, конкуренции мекду вирусными РНК и хозяйскими кРНК не происходит, вероятно, потому, что in vivo хозяйские мРНК существуют в виде рибонуклеопротекдных комплексов, не доступных для связывания с ТБ ( Maule. 1991

4. Получение трансгенных растений табака, продуцируют 30 К белок ВТМ.

4.t.- Клонирование кДНК гена 30 К ТБ ВТК,

На матрице РНК, выделенной из очищенного препарата штамма U 1 ВТМ. синтезировали первую цепь кДНК с использованием обрати транскриптазы. При син!езе в качестве праймера использовали си тетический олигонуклеотид, комплементарный участку от 5745 нукл отида до 5766 нуклеотида РНК ВТК и содераащий сайт рестрикции д Eco R I . Затем на матрице первой цепи кДНК синтезировали втор цепь. Полученная двуцепочечная кДНК содерЕала два сайта рестри ции для Eco RI: собственный - в геномной РНК ВТМ ( в районе 42 нуклеотида ) и индуцированный при помощи синтетического олигону леотида ( в районе 5766 нуклеотида ), ДНК разрезали Eco R I, п лученный фрагмент ( 4255 - 5?66 нуклеотиды ) клонировали в Eco R I сайте плазмиды pUC 19 ( Yaenisch - Perron et al, 1985 ). И лучили плазмиду pUC 30 К. Затем из полученной плазмиды была вир зана последовательность ВТМ с помощью Eco 31.1 ( сайт рестрикц этого фермента - в районе 4745 нуклеотида РНК ВТК ) и Eco R Этот фрагмент, включающий ген 30 К ТБ ВТМ, был лигирован в вект pRT 104 С Topfler et al., 1987 ); в Xho I и Eco R I сайты пол линкерной области, расположенной мекду 35 S промотором вируса м заики цветной капусты и сигналом полиаденилирования гена нопали синтазн. В результате была получена плазмида pRT 30. содержа® химерный ген 30 К ТБ ВТМ. Hind III фрагмент ДНИ этой плазмиды С введен в Hind III сайт бинарного вектора pBIN 19 ( ßevan, 1984 Сконструированная плазмида -pBIK 30 К содержала ген неомицинфо фотрансферазы II . который обеспечивал устойчивость к ангибиоти канамицину, и ген. кодирующий 30 К белок U 1 ВТМ ( Рис. 2 ).

Hind Ш

Eco 31.1-PoI I Hind III EcoRI №

Hind III

Hind III Xho I/Eco 31.1

4 Hind III

Hind III (частичный гидролиз) Xho I/Eco 31.1 Hind III Eco RI

Hind III

Hind III

зцзшм

3'nos

Лигирование этого блока в полилинкер Ti-плазмиды Bin 19

Рис.2 Схема получения конструкции pBIN 30 К 11

4.2. Получение трансгенных растений табака,экспресси-рующих ген 30 К ТБ ВТК,

Плазмида р BIN 30 К была конъюгирована в flgrobacteriuB tumefaciens LA 4404. Полученная агробактерия была использована для трансформации листовых дисков табака ( N.tabacua сорт Petit Habana $R 1 h Было получено несколько трансформированных линий N.tabacua. Первоначальную селекцию растений проводили с помощью теста на устойчивость к канамицину; содеркание канамицина в среде составляло 50 мкг/мл. Затем'укореняли растения линий, устойчивых •» канамицину.

.Для того, чтобы проверить Функциональность 30 К ТБ ВТК, синтезируемого в различных линиях N.tabacua, листья укорененных растений инокулировали Ls Д С 70 мкг/мл ) при 33° С. Через 5 дней определяли содерхание вируса в инокулированных листьях. Было показано, что из 5 полученных линий трансгенных растений наиболее эффективно комплементировала Ls 1 линия То-4 (2100 нг/г Ls 1 в ткани зараиенных листьев, ^ 20 нг/г -в контроле ). Из этого заключили, что данная линия продуцировала функционально активный 30 К ТБ ВТ«.

Для идентификации 30 К ТБ ВТК в растениях линии То-4 N.tabacuB был использован метод Вестерн - блоттинга ( Рис.3 ). Результаты анализа подтвердили наличие ТБ ВТМ в растениях этой линии.

Именно поэтому ti», выбрали линию То-4 как наиболее подходящую для дальнейших чкслег'инен-тов по комплементации транспорта ВККК.

i 2

Рис.3. Иммуноблот-анализ (Вестерн-блоттинг) трансгенных растений .экспрессирующих ген 30 К белка ВТНЛ-контрольное растение H.tabarar. г-продцкт трансляции in vitro мРНК 30 К белка ВТМ.З-растение линии То-4.

5. Комплементация транспорта БККК в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген 30 К белка ВТК.

В следующей серии экспериментов листья трансгенных растений То-4 инокулировали ВККК в концентрации 500 мкг/мл или ВККК в смеси с Ls I (ВККК - 500 мкг/мл: Ls 1 - 70 мкг/мл ). Все эксперименты проводили при 33°С.

Результаты опытов ( данные получены совместно с О.й.Кондаковой ) показали, что в контрольных растениях Tk-i, не продуцирующих 30 К белок, мутант Ls i не кокплементировал ТФ ВККК при нелермиссивной температуре ( Табл.4 ). что согласуется с рас-

смотренной и подтвержденной (Табл.3) идеей о необходимое, функционального 30 К белка 8ТМ для комплементации ТФ комовируса.

Таблица 4. Накопление ВККК в листьях трансгенных растений табака, содержащих .ген 30 К .белка ВТМ, в присутствии или отсутствии Ьг-

Линия растений. Продукция 30 К белка ВТК Вирус -помощник Зависимый вирус ' .4 Содержание ВККК ( нг/г листовой ткани *» )

инокулированные листья неинокулированные листья

I II III II ' III

То - 4 1 ВККК 180 1080 1800 800 60

нет ВККК <; 20 20 « 20 « 20 ч< 20

Тк - 1 13' 1 ВККК $ 20 20 « 20 ч< 20 4 20

нет ВККК ч< 20 ч< 20 « 20 ч< 20 ч< 20

* Эксперименты проводили при ЗЗсС ( непермиссивная температура для транспорта Ьб 1 из клетки в клетку ). Концентрация для заражения: ВККК - 500 мкг/мл, 1,5 ! - 70 мкг/мл.

"Тестировали методом ИФй: инокулированные листья - через 7 дней после инокуляции, неинокулированные - через 25 дней после инокуляции нияних листьев. Для каждого опыта приведены средние значения, полученные при анализе. 3 или 4 растений.

Однако, ВККК был неспособен к осуществлении ТФ и в трансгенных растениях То - 4, которые продуцировали температуроустойчивый Функциональный 30 К белок ВТМ. Но при заражении растений линии То-4 ВККК совместно с Ls 1 наблюдали накопление и транспорт ВККК ( 'Габл.4 ). При этом ВККК можно было обнаружить не только в инокулированных, но и в неинокулированных листьях ( Табл.4 ), что явилось убедительным доказательством комплементации именно функции транспорта. Обнарунение ВККК в неинокулированных листьях свидетельствовало об осуществлении вирусом дальнего транспорта, который невозможен без транспорта из клетки в клетку в инокулированных листьях.

Таким образом,, системное распространение ВККК обеспечивалось Is 1 в трансгенных растениях табака, продуцирующих 30 К ТБ ВТМ.

Результаты настоящей работы показали, что наличие функционально активного ТБ ВТМ при отсутствии других вирусспецифических факторов является необходимым, но недостаточным условием для распространения ВККК в N.tabacum. Можно предположить, что кроме модификации плазмодесм, осуществляемой 30 К ТБ ВТМ, для транспорта ВККК требуется некая дополнительная ЙТМ - специфическая Функция или функции.

Экспериментальные данные, полученные в последние годы, показывают, что существенную роль в распространении вирусов растений могут играть белок оболочки ( Б0. ) и РНК - репликаза.

Необходимость ВО для дальнего транспорта была установлена ранее при исследовании ряда вирусов: тобамовирусов, тобравирусов, фуровирусов, бромовирусов, диантовирусов, однокомпонентных геми-нивирусов и кукумовирусов,

В частности, для ВТМ было показано участие Б0 в процессе дальнего транспорта ( Hilf and Dauson, 1993 ). Во-и-гнь' , Б0 тоба-

мовирусов специфически взаимодействует с какими-то клеточными факторами, что и обеспечивает системное распространение вируса.

Для комовирусов и кукумовирусов рядом исследователей было показано участие БО в бликнем транспорте.

9 штамма "type вируса штриховатой мозаики ячменя с ВШ ) была отмечена бифункциональность РНК - репликазы, связанная с ее участием в процессе дальнего транспорта ( Petty et al., 1990 ).

Из этого mosho заключить, что наряду с ТБ распространение вирусов в растениях могут контролировать и другие вирусспецифи-ческие факторы. Этот вывод был подтвержден результатами эксперимента по совместному зарааению ( ВККК + Ls 1 ) трансгенных растений табака, продуцирующих 30 К ТБ ВТМ ( т.е. в условиях экспрессии генома полноценного ВТМ ). В этих условиях комовирус системно распространялся B.N.tabacum ( Табл-.4 ),

Возможно, 30 К ТБ ВТМ не способен полностью осуществить вирусный транспорт, а обеспечивает лишь первичную модификацию плазмодесм ; на более поздних стадиях вирусного транспорта могут функционировать другие вирусспецифические продукты.

Выводы

1. Показано, что ВККК С комовирус ) реплицируется в протопластах табака, но не инфицирует интактные растения. Таким образом, в растениях табака ВККК дефектен по функции транспорта, а не по репликации.

2. Функция транспорта ВККК монет быть комплементирована ВТМ с-тобамовирус ) в растениях табака, в норме устойчивых к зараке-нию ВККК.

3. Получены трансгенные растения табака, продуцирующие 30 К ТБ ВТМ.

4, Показано, что транигеннме растения таГмка, зкшрег.г.ирую-щие ген 30 К ТЬ ВТМ, комплемвнтирувт ТФ l.s 1 iемператцрпчувг, твительного мутанта ВТК но транспорту; но не кокнлемечтирут транспорт ВККК, Таким образом, наличие Функционально активного ТБ В'ГМ при отсутствии других факторов является недосшочини условием для распространении ВККК в растениях табака.

fi. Заражение грансгенных ¡мочений габако, продуцирующих .50 К ТБ ВТМ, ВККК спвмесыо с I.s I приводт к комплементации ТФ ВККК,

Список опдоликованных работ

1. Taliansky, М.Е., Malyshenko, S.I., Kumiakova, О.й., Nazarova, Уа.U., Kaplan, I.K,, Nazarova, J.N, ami fttabekov, l.ü, " Induction of Antiviral re^istan^ in plants by transformation with viral Kovenent. protein gene sequences, " Proceedings of IOth ftnniversary Synpusium of th* flttu Harburg Centei foe fieri cultural Biotechnology, 1994, p,3l.

2, Назарова Д.И,, Кондакова O.ft,, Малыиенко С.И., Камни И.В., Назарова В.В., Тальянекий М.З. ' Изучение механизма комплементации системного распространения вируса крапчатости красного клевера вирусом табачной мозаики." Доклады РАСХН, 1995, N