Вирусные болезни растений Дальнего Востока (диагностика, идентификация, особенности биологии патогенов)

Крылов, Александр Васильевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Вирусные болезни растений Дальнего Востока (диагностика, идентификация, особенности биологии патогенов)
ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Вирусные болезни растений Дальнего Востока (диагностика, идентификация, особенности биологии патогенов)"

Российская Академия сельскохозяйственных наук

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений

На правах рукописи

КРЫЛОВ

Александр Васильевич

ВИРУСНЫЕ БОЛЕЗНИ РАСТЕНИЙ ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА

(диагностика, идентификация, особенности биологии патогенов)

06. 01.11 — Защита растений от вредителей и болезней

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург Пушкин

1994

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕйЬСКОХОЬЯЙЗТБККШХ НАУК

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧКО-ИССЛЕдОВАТЗЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ

На иравах рукописи

кшов

Александр Васильевич

ШЕУСНЫЕ ВОЯЕШИ РАСТЕНИЙ ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА

(диагностика, идентификация, особенности биологии патогенов)

06.01.II - ¡защита растений от вредителей и болезней АШШЙЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени, доктора биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ ПУШКИН

1994

• Работа выполнена в Амурском комплексном каучно-исследова -тельском и Вхолого-почьенном институтах в 1970-1930 гг. Часть экспериментов по молекулярной биологии вирусов выполнена на кафедре вирусологии ЬПУ им. Ы.В.Ломоносова.

■ Официальные оппоненты: доктор биологических наук, провес -сор Ю.Т.Дьяков, доктор биологических наук, профессор Ю.И.Вда-сов, доктор сельскохозяйственных наук, профессор Г.В.Еадина.

Ведущее учреждение: Всероссийский институт растениеводства 'им. Н.К.Вавилова.

на заседании Сппциал _

Всесоюзном научно-исследовательском институте защиты растений по адресу: 189620, г. Петербург-Душкин, 6, шоссе Подбельского, З', ШЗР.

и диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всесоюзного ордена Трудового Красного Замени научно-исследовательского института защиты растений.

Защита состоится

Учёный секретарь Специализированного Совета БКЗР

Г.А,Наседкина

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБИЛИ

К началу наших исследований, совпавши: с организацией Дальне-осточного научного центра Ali СССР, сведения о вирусах ДБ были решентарны и недостаточны, что вызвало необходимость проваде -ля работ по инвентаризации фитопаточенных вирусов.

Актуальность их изучения ещё более возросла с развитием и ин-эяск^икацией сельского хозяйства Дальнего Востока, расширением ■ ветоводства, обнаружением резорваторов среди кустарниковых и генах древесных культур. Отсутствие и недостаточность сведений

составе и распространении вирусов сделали задачей дня изучение той группы возбудителей. Исследование видового состава помогает рогвозироЕать районирование новых сортов, устойчивых к данноцу атогену. Знание сеойств шрусов позволяет разрабатывать и при -энять высокочувствительные методы диагностики, что необходимо яя предупреждения вирусных заболеваний.

По экономическому ущербу для Дальнего Востока первое место анимают вирусные болезни сои, в том числе из-за больших площа -эй, занятых культурой. Осношое значение имеет вирус мозаики ои, что характерно и для условий Китая (Ford et ai., 1901). аияение урожая при поражении ВМС - до 30-78$ (Рейран, Полива -ова, 1969), а по данным М.Ф.Муравьевой - 50-79$ (1967), 22-94 1971), что определяется передачей труса через семена (5 %) с оследунцим распространением тлями. К концу вегетации заражен -ость нередко достигает 100$. Ситуация осложняется отсутствием ортов, устойчивых.к ВМС." .

Велик ущерб от вирусных болезней у вегетативно размножаемых-ультур, в первую очередь, картофеля. НИИКХ оценивает потери от ярусных заболеваний в 30$ в среднем по стране, по другим дан -им от 25 до 50$ (Бобкова, Тальянский, Атабеков, 1986). С.И.Фро-ов (1983) считает, что в Хабаровском крее из-за поражения ви -усами теряется 10-15$ и более урожая, в Амурской области наи -эньшие потери 17,6$ (Мотылева, 1973), на Сахалина в среднем 3$. (Кояухова, 1984), Камчатке - 5-10 (Кваша, 1980). Заражен -ость на юге ДВ 22-23$. Большая вредоносность определяется редце всего распространением вируса скручивания листьев и У-ируса картофеля.

Детальное изучение состава, распространения, жизненного вдк-а вирусов и механизмов их взаимодействия с растениями - един -

стванная надёжная основа для борьбы и .профилактики вирусных заболеваний, снижения их вредоносности.

■ Цель и задачи исследований. Основная цель работы состояла в идентификации, изучении свойств и особенностей биологии вирусов растений Дальнего Востока, преимущественно сельскохозяйственных, всзгошо более полной характеристике их для уточнения общей картины пораяёиноста растений и значения вирусных заболеваний в ней. Эти данные в коночном счёте необходимы для выработка стратегии и тактики защиты растений от вирусных заболеваний в конкретных условиях Дальневосточного региона.

Были доставлены задачи:

1) идентифицировать обнаруженные вирусы;

2) возможно более полно охарактеризовать обнаруженные вирусы растений, в первую очередь сельскохозяйственных, и изучить их свойства п особенности: а) биологические, б) физико-химические,

в) иывднологичесние•

3) изучить распространение, пути передачи инфекции с целью использования полученных данных в борьбе против вирусных забо -лева лий;

4) на основе изучения свойств вирусов разработать высокочувствительные методы диагностики и провести их сравнительную оценку;

5) исслодовать возможные связи и взаимоотношения мезду от -дельными вирусами, их таксономический статус;

6) классифицировать изученные вирусы и дать предложения по совершенствованию их номенклатуры.

Научная новизна исследований. Впервые приводится общая картина распространения вирусов на Дальнем Востока. Еыявлено 42 вируса. Вопреки ранео распространённому представлению, что мозаика злаков на гого ДВ, вызывается вирусом завукливания злаков, доказано, что возбудителем является новый рабдошрус - мозаики злаков. Показано иммунологическое родство вирусов мозаики, за -кукливания и северной мозаики злаков.

Впервые в СССР обнаружены вирусы полосчатости гороха, коль -цовой пятнистости томатов, мозаика кошелины и редиса, доказана принадлежность последнего к японо-американскому серотипу. Най -дели,и изучены новые изоляты и штаммы вирусов в картофеля,табачной .мозаики - 9, кёлтой мозаики фасоли - 4, мозаики сои.- 3 гцуппы. Для многих показаны новые хозяева и регерЕаторы.

Изучены взаимоотношения потексвярусов: X картофеля, мозаики белого кивера, аукуба мозаика картофеля, кольцевой пятнистости гортензии. Обосновывается целесообразность перевода вируса аукуба мозаика (р) картофеля из вероятных в истинные представители потексЕирусов.

Практическая ценность исследований. Моицшм резервом увеличения производства продукции растениеводства, а для ДВ сна должна возрасти'в 2 раза, является снимание потерь урояая от вредите -лей и болезней, в частности вирусных. Разработка элективных г. экономичных приемов и мер борьба с вирусная» заболеваниями но -возможна без глубокого изучения и познания биологии шрусов растений. Изучение вирусов р/ отений Дальнего Востока и их свойств - основа мероприятий по защите растений. Система мероприятий как часть интегрированной защиты растеши! додана включать приемы изоляции (вирусы мозаики злаков, аспермиа томатов), предотвращения или снижения передачи семенами (вирусы табачной мозаики.,, мозаики сои), культуры верхушечной меристемы (вирусы картофеля), защиты от заноса из природных очагов (вирус огуречной мозаики), предотвращения или ограничения распространения в культуре.

• Изучите свойств вирусов растений и разработка методов Евде-яония их позволили получить диагностические сызоротки к.изгзто-вить диагностику™ (Гнутова, 1985), некоторые из них орипшаль---ды или получены ышрша в страна.

Полученные, результаты используются при чтении курса лекций ю фатовирусологии в Дальневосточном государственном ушверси -

гото;

Апробация робота. Матэриали исследований представлялись и цокладывалиоь на семинарах отдала физиологии и вирусологии, заседаниях Учёного соеотп а научных конференциях Еиолого-почвен-юго института ДВО ЛИ СССР; У1, УП, Щ Всесоюзных совещаниях по [Ярусным болозням растений (Киев, 1971; Ленинград, 1978; Виль -цос, 1934); Всесоюзном симпозиуме по экологии Енрусов (-Впади -зосток, 1973); Всесоюзном семинаре - совещании по вирусным боте зням овощных культур (Ереван, 1974); ХП, 'ЗОН Международных ботанических конгрессах (Ленинград, 1975; Сидней, 1981); УШ и IX сон$еренцпях чехословацких Еярусологов (Братислава, 1976; Брно, 1981); Всесоюзном семинаре-совещании по/применению серологичес-сой диагностики шрусов л микоплазм (и'оква, 1577); Ш Мевдуна -родном конгрессе до фитопатологии (¡.¡кнхен, 1978); XI Всесоюзной

конференции по электронной микроскопии (Таллин, 197Э); Х1У Тихоокеанском научном конгрессе (Хабаровск, 1979); УП Европей -ском конгресса пи электронной микроскопии (Гаага, 1980); кон -ференции по электронной микроскопии (Лейпциг, 1980); П Всесоюзном совещании по штаммам вирусов растений (Елгава, 1982); Вз-бгдем совещании руководителей служб защиты растений региональных ботаничесхсих садов СССР (Ташкент, 1983); У Всесоюзном со вещании по ультраструктуре растений (Кишинев, 1983); УШ съезде ШО (Алма-Ата, 1985); Международном симпозиума "Современные достижения в фитовирусологии" (Еайнхардсбрунн, 1КР, 1986);

Всесоюзной конференций "Вирусы микроорганизмов и растений" (Ташкент, 1986); У Европейской конференции по вирусам злаков (Будапешт, 1988).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 53 работы в отечественных и зарубежных изданиях.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 286 страницах машинописного текста, состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, иллюстрирована 33 таблицами и 52 рисунками. Список цитированной литературы включает 313 наименований советских и зарубежных авторов.

Глава I. ИЗУЧЕНИЕ ШЕГСОВ РАСТЕНИЙ НА ДШНЕМ ВОСТОКЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ (краткий очерк)

Первым сообщением об обнаружении вирусных заболеваний.на Дальнем Востоке была работа Д.Л.Проничевой (1929) о каршко -вости овса (позднее считавшимся закукяиванием злаков) в Амурской области.

, Дальнейшее пополнение знаний о вирусных заболеваниях рас -тений Дальнего Востока обязано работам И.Н.Абрамова (1931, 1939, 1953), В.А.Золотницкого (1962), М.Ф.Муравьевой (1967, 1968, 1971). С.Б.Герасимов (1966) обнаружил в семенах, поду ченных от Владивостокского сортоучастка, вирус штрховатой мозаики ячменя.

С 1958 г. сотрудниками отдела вирусологии Еиолого-почвен -ного института ДВНЦ АН СССР изучаются распространение, ведо -носвость и возбудители вирусных болезней растений на Дальнем Востоке. Установлено, что все возделываемые сорта картофеля,и сои поражаются заболеваниями, которые обусловливают снижение

урожайности и ухудшение качества продукции. Бали идентифицирована вирусы: на картофеле - X, У, А, М, -з, Ь! па сое -мозаики сои, задержки роста сои, жйлтой мозаики фасоли, кольцевой пятнистости табака; на помидорах - вирус табачной мозаики (Рейфдая и др., 1973).

Задачей дальнейших исследований стало так изучение вновь обнаруженных фитопатогонных вирусов, так и изучение свойств и особенностей возбудителей, обнаруженных ранее. Одновременно с идентификацией и изучением особенностей вирусов растений Дальнего Востока встал вопрос о классификация их.

Глава П. МАТЕН1АЛ И МЕТОДЫ I. Отбор исходного материала и идентификация вирусов

Для отбора исходного материала и идентификации вирусов проводились маршрутные обследования, анализ и зараконие растений на стациона -рах под капроновыми я тщвшж изоляторами, в вегетационных плёночных и стационарных домиках, в теплицах с нерегулируемым решмом. Учёт проводили по методико Власова, Лантас (1962). Крут растений-хозяев определяли заражением видов разных семейств механически или призикама.

Механическую передачу производили по Шоймсши (Карай и др., 1974). В ряде случаев растения предварительно, затеняли. При заражении нередко использовались буферы, чаще всего фосфатный, и антиокислители (восстановители).

Вирус не менее трёх раз пассировали чорез некроз или при отсутствии хозяев с некротической реакцией через зону хлоро -•тачного пятна. Заражалось от 5 до 15, а для трусов злаков более 25 растений в стадии семядолей или 4-5 листьев. Инокулюм готовили из листьев,, этиолированных листьев, почек, лепестков соцветий больных растений.

Для дальнейшей работы с каядым вирусом,, поддержания его в культуре и размножения подбирались растения для накопления. В редких случаях использовались исходные растения, из которых выделан вирус.

Физические свойства вир и оно в: точку тершшеской инактивации (ТШ), предельное,разведение (ДР), время сохранения инфекционности (ВСИ) ^ соке или при других условиях - изучали по стандартным методикам (Шоймоши, 1974;

Гпббс, лзррисон, 1978).

Выполнялось с А.л.Чуян, Т.А.Полиеэновой, О.Г.Гордейчук, В.£.Толкач, Е.2.Бородиной, П.Ю.Мамаевш, Л.Б.Калининой, В.М. Малевич, И. В. ПагТрановской.

Передача насекомыми. Сведения о тлях -г •зреносчкках вирусов растений приводятся в основном по результатам исследований К.П.Дьяконова и Е.П.Голакда. Прово- ' даишсь многолетние сборы тлей отловом в ловушки Мёрике, с, листьев растений, отряхиванием на ватный планшет с отловом в ловушки Ыёрике, кошелем сачком, преимущественно на злаковых культурах (Лебедева, Дьяконов, Немилостива, 1982).

Определение видового состава проведено К.П.ДьяконоЕЫМ.Изу-ченке виро£орности тлей осуществлялось по общепринятой.методике.'Колонии стерильных тлей кормились после лредваритель -цого голодания иа испытуемых растениях и пересаживались на здороЕие и. индикаторные растения. Все эксперименты проводи -лксь в условиях изоляции (Лебедева,Дыщоное, Немилостива, 1982).

Взаимоотношения вируса мозаики злаков с тёмной цикадкой 1аойе1р'ьах зггЗ.агеНив гаи. изучал П.Ю.Маыаев, который детально описал методику работы (Мамаев, 1989).

Вирусные включения, изучались в световом 4-2Е, люминесцентном Ш-2а и электронном ЭШ 100 Л микроскопах. Для определения природы включений проводились цитохиш-ческие реакции на белок и, ШК (Гольдин, 1963"): трипановым синим по Гимза, матиловым-зелёным-хшрошшом по Унна. Белок, окрашивался лмголем и пикриновой кислотой, включения - трипановым синим после предварительной фиксации Ь% трихлоруксусной кислотой, нуклеиновая кислота - по Еальду. - При люмякесцентно-шкроскопическом анализа препарата эпи-дермальных тканей, содержащих включения, фиксировали 5$ тра-хлоруксусной кислотой в течение двух минут, отшвали водой, окрашивали 0,1$ акридинорашсем - 3 минуты.

Включения В® изучали в световом микроскопе (Крылов и др., 1981). Свеяие эгщдермалыше срезы фиксировали в смеси формалин-уксусная кислота-спирт и окрашивали прочным зелёным. Нефиксированный материал окрашивали раствором лвголя, 1$-ным водным раствором |локсина..

Для обнаружения .включений ШЪ снятый с шшшй стороны лис-

та эпидермис помещали в каплю води и просматривали в ceqt°bom микроскопе ivIHi 6 (Бородина, Крылов, Рублёве, 1981). Выполнялось с Н.В.Крыловой, К.В.Рублёвой, В.Ф.Толкач.

Дяя изучения морфологии возбудителей и контроля за чистотой препаратов в процессе выделения вируса применялась электронная микроскопия: метод разбав -ленных суспензий (Проценко, Легункова, I960), модификации метода негативного контрастирования (Развязкппэ, Полякова, Штейн-Марголина, 1968; Степаненко, 1969), иммунная электронная микроскопия методом Деррика (?ублёва, Тнуюаэ, 1985), методы исследования ультратонких срезов. Срезы получали на ультрамикротоме ькв, контрастировали уранилацзтатом и цитратом свинца по общепринятой методике. Препараты исследовали в электронных микроскопах УШВ-ЮОБ, GMB-I00I, ЗШЗ-I00AK, Phillips - 400, Jen -7а, Jem -IOOC.

Исследования выполнялись совместно с В.А.Штейн-Марголиной (Институт биохимии АН СССР), В.Л.Федотиной (Институт микро -биологии АН СССР), В.II.Степаненко, Н.В.Рублёвой, Л.А.Минской. Е.В.Артюковой.

П. Получение препаратов вирусов

Все операции выполнялись на холоду при 4°.

Потексшрусы. X вирус картофеля выделяли из замороженных листьев (вогекз, 1970).

Вирус кольцевой пятнистости гор-то н з и и получали по методу, описанному Хшшш и др. (Hill et al., -1977).

F вирус картофеля выделяли по Мики и Осима (Miki, Oshina, "197?) С некоторыми модификациями (Artyukova, Krylov, 1983).

Вирус мозаика белого клевера выделяли по несколько модифицированному методу Микя и Найта (Miki, Kniglit, 19b7).

Препаративное выделение ВТМ проводили но общепринятому для этой группы методу Стира (steere, 1959).

BOM ЕЫДеЛЯЛСЯ НО методам ТоМЛИНСОНа (Toalinson, ¡iheperd, ttalxer, 1 ,>39) и Лото (Lot et al. , 1972), ПОПОШруСЫ ПО Xopjacoiiy (.llarrison, Nixon, 1900.).

Лучшие результаты iipii выделении eki зз некроза табака по-

лучены по прописи И.И.СибиряковоЙ (Сибирякова и др., 1987).

Для выделения вируса мозаики редиса использовали метод Кассаниса (Kassaais et aL., 1973), модифицированный М.В. Сапоцким (Крылов и др., 1981). Доя получения препарата ни -руса мозаики сои предложен метод выделения (Пинькевич, Крылов, 1977), представляющий собой комбинацию из ранее использованных методов. Для выделения вирусов мозаики коммелины (Артюкова и др., 1988) и жёлтой карликовости лука (Артюкова, Пус,Крылов, 1990) использованы две методики. Первая представляет модификацию метода В.К.Новикова и соавторов (1984). Вторая методика -Модификация метода ДогерТИ и Хиберта (Dougherty, Hiebert, 1980).

Для получения высокоочищенных препаратов вируса мозаики злаков была разработана методика выделения с использованием отдельных приёмов процедур выделения, успешно применявшихся для получения препаратов вирусов мозаики кукурузы (Lastra, Acosta, 1979), мозаики озимой пшеницы (Федотина и др.,19В1), курчавой карликовости картофеля (Козар и др., 1980) и неко -торых других с учётом физико-химических особенностей НИЗ.

Езстворшый антиген - низкомолекулярный белок включений ШЗ - выделялся методом изоалектрической преципитации с последующим низко- и высокоскоростным центрифугированием по Поповой и Атабекову (1966).

йшолнялось с Е.В.Артюковой, Л.Л.Минской, М.В.Сапоцшш, И.И.СибиряковоЙ, О.Г.Гсрцейчук, Т.И.Плешаковой, Л.И.Мойсоен-ко, З.Н.Козловской, С.Г.Пус.

Ш. Иммунолошчес1ше и ишунохимические методы

Широко использовался один из старейших методов капельной агглютинации на предметных стёклах (Дунин, Попова, 1937). С целью соединить простоту метода Ду-шша-Поповой со значительно более высокой чувствительностью использованы латекс-тест, реакции бентонитной агглютинации и впробактериальной агглютинации. Из нескольких варщнтов ла -текс-теста ш выбрали метод Р.Берсса (Bercks, 1%7). Большим преимуществом метода является возможность длительного хранения в холодильнике (4°) полученных диагностикумов (Гну-това, Криов, IS73), /

Еще более доступным инертным носителем антител является бентонит, порядок постановки реакции б е н т о н и т н о й 1 г г л ют я и а ц и и описан ранее (Гнутова,Крылов,1973).

Метод виробактериальной агглютинации - АБВ ~ тест (Чирков и др., 1981} иопольэо -зался для изучения антигенных взаимоотношений между потекс-знрусами. При изучении антигенных взаимоотношений лотексви-зусов, как и других вопросов, применяли также методы двойной даффузии в агаре (Ouchteriony, 1962), ракетного иммуноэлек— :рофореза (Laureil, 1966), радиальной шдадунодиффузии (Mandai et al., 1965), "сэндвич" и конкурентные варианты имму-юферментного анализа (СиСирякова и др., 1907).

Идя трёх первых методов вирусные частицы фрагментировали •льтразвуком в течение 10-15 мин при 15-20 кгц, 1% Твин - 20 ли додецилсульфатом натрия (ДСП) в концентрации 0,05-0,1$.

Реакцию двойной диффузии в агаре OucMeriony, 1962) использовали в микромодификации.

Постановка реакции радиальной и мму н о, и.ф ф у з и и - ШД (Maacini et al., 1965) описана Р.В. йутовой (1985).

Ракетный иммуноэлек т'рофорез -ИЗЗ? проводили по Лорзллу (Laureii, 1966) в обычной аппара-уре, применяемой для электрофоратичэского разделения белков.

Ддя количественной оценки антигенного сходства вирусов астений, в первую очередь потековирусов, И.И.Сибиряковой 1987) модифицирован и применён конкурентны й а р и а н т ИФА (Яегталп, 1982), основанный на конкурен-:ш между сорбированными и конкурентными (родственными) анти-энами за центры связывания антител, гомологичных сорбировап-эму антигену.

Иммунологические и иммунохпмичоские исследования проведены иммунологической группой лзбораторш - Р.В.Гнутова, О.Г. зрцейчук, И.И.Сибирякова, Н.Н.Какарека, В.Г.Корж, З.Н.Коз -эвокая. Часть экспериментов выполнена с лабораторией хтилии зиифекционного иммунитета ТИБ0Х (А.В.Курика) и отдела биохи-ш вирусов растений МГУ (Т.Н.Конарова).

1У. Изучение физико-химических свойств вирионов и их компонентов

Свойства вирионов

Гомогенность полученных препаратов вирусов подтверждали электронномикроскопдчески, спектрофоретически, электрофорети-чески, в иммунодиффузионных тестах, центрифугированием в градиенте плотности. Препараты ¿ж, ВМС, ВЫ,ВТ,Ком центрифугировали в градиенте плотности хлористого цезия. Вирыоны HJC, вш. в соответ -отвутацих буферах (оптическая плотность при 260 им - I o.e.) подвергали с е д и м е н т а ц и о н и о м у анализу при 17 ООО об/мин в аналитической ультрацентрифуге Spinco к с применением абсорбционной оптики.

Процентное содержание НПС рассчитывались по фосфору. Фос -фор в вирусных препаратах определяли, как описано Васьковским С сотр. (Vasicovsky, Kostetsicy, Vasendin, 1975).

Характеристика структурных белков некоторых вирусов растений

Получение и аминокислотный а н а -. лиз кале ид и ого белка. Белок гвь получали по методу Дамирдаха и Шефедаа (iiamirdach, Shepherd, 1970) путём деградации вирионов 5,3 М раствором гуанидин гидрохлорида в присутствии 2 М хлористого лития. Недеградированный ни -рус и HUÍ удаляли высокоскоростным центрифугированием (80000 . 90 мин), раствор белка диализовали против дистиллированной воды и лиофилыю высушивали.

Белок BTIwl выделяли разрушением вируса уксусной кислотой по Fra^nkei-Coarat (1957). Белки других вирусов (ВЖ, НЛР,ШЗ, потексвирусов) освобовдали нагреванием препаратов вирусов на кипящей водяной бане в 0,01 М фосфатном буфере (pH 7,1), со -дерхацем Ifj додецилсульфата натрия (ДСП) и I% 2-меркаптоэта -нола (1,!Э) в течение 2 мин при 100° (иногда 5-7 мин при 70° для нотексЕирусов). М - концевые аминокислоты капсидного бол-

Ka '¿BS. ОПрОДвЛЯЛИ ДаНСИЛХЛОрЩНЫМ МеТОДОМ (Greay, xíartley, 1963).

Аминокислотный анализ структурных белков м, полученного с помощью голь-хроматографии на сефадексе G-75 и EEJ проводили методом ионообменной хроматографии не аминокислот -

НОМ анализаторе Liquisat III (Labotron, itPD. СодерЕЗНИе триптофана, (который полностью разругается 20 время кислот -ного гидролиза) определяла спектрофотоу.етрпчесхси в 6 'А гуа -НВДИН гидрохлорзде (Breddernan, 1974).

Электрофорез белков в п- о л ц а к р ил а м и дном геле. Молекулярную .массу структурных белков определяли методом электрофореза в иолаакрияамадном геле в денатурирующей системе (дДС-ПАГ) по методу Ьебора и Осборн (Weber, Osborn, 1969). В качества белков-маркеров использовали белок БЕЛ, бычий сывороточный альбумин,химотрипси-ноген, миоглобии,-лизоцкм, ка£боксипептидазу, цптохром С. Электрофорез вели npi сшг тока 20 г/Л в течение 4 ч.

Молекулярные массы белков определяли общепринятым методом (Weber, Osborn, 1969) из графика зависимости относительной подишюсти от логарифма молекулярной массы. При сравнении электрофорэтической подвижности белков при разных концентрациях полиакраламидного геля молекулярную массу рассчитывали из графика, предложенного Хвдрпкогл и Смитом для определения массы белков, являющихся зарвдошми изомерами (Hedrick, Smith, 1968).

Для определзшт молекулярной массы натйвкых структурных болков потексвирусов и ВМЗ прэпараты для электрофора за в ДЦС--ПАГ готовили таюзэ по Паулю (Paul, 197'0-

Гидролиз структурных болков и сравнительное пептидное картирование к апсидних белков потокевп-р у о о в. Гидролиз Е'Ю трипсином проводили при 37°. I мг/мл вируса в 0,02 М боратном буфере (jll 3,0) инкубировали с трш-сином в соотношениях вирус¡фермент 3:1 и 500:1.

Ограниченный протаолиз капсидкых болков потэксшрусов проводили как описано Кпеволандом с соавторами (Cleveland ot ai., 1977). Пативные структурные балки сравнивала таш» ма -тодом пептидного картирования посла исчерпывающего гидролиза трипсином. Сравнительный анализ трпптических гидролизатов методом пептидного картирования осуществляли по методике Фрича И др. ("ritsch, fcayo, Hirth, 1977).

Характеристика геномных RiK некоторых вир^усов растений

Выделение впруспих 11!Х. При получении вираошшх Kili F3K,

ШЕК, БКПГ, ВТМ использовали метод фенольной дэпротеинизации в присутствии ДСП при рН 9,0 с последующим осавдонием ШК 22,5 объёмами этилового спирта, содержащего 0,03 М ацетатного буфера, pll 5,0.

НШ MP наделяли по методу Дауберта с соавторами (Daubert г' ai., 1978). Дополнительно Hffi очищали осаздением её 2 М хлорюткм литием. Hffi ВИЛ выделяли и с использованием перхлората натрия.

Фракционирование НК в градиента концентрации сахарозы. НШ жк фракционировали в линейно-логарифмическом градиенте концентрации сахарозы (5-20$) в 0,01 М ацетатном буфере (jH 6,0). Градиенты раскапывали на фракции с помощью системы Densi-fiov/ ПС (Зи-chLer Instruments) И коллектора фракций Microcol IDC (Gil-sot. ). Наличие ШК во фракциях регистрировали по поглощению при 260 нм, используя Abserbance conitor UA-5 (1800). Hffi из фракций осаждали двумя объёмами этанола, содержащего 0,03М ацетат натрш (рН 5,0).

Шрионную Hffi также фракциотровали в градиенте концентрации сахарозы без предварительной дедротеинизации фенолом, как описано Хиллом с соавторами (Hill, Benner, Zeyen, 1977).

Фракционирование ШК методом электрофореза в полиакриламидном геле. ШК потексвирусов анализировали'электрофорезом в 3?°~ ном полиакриламидном геле, содержащем 7 М мочевину, 0,05. М трис-боратный буфер и 0,008 М ЭДТА (jH 8,3), при постоянном напряжении 200 В в течение 2 ч.

При определении молекулярной массы в качестве маркеров использовали вириошше НШ вирусов табачной мозаики ( 2,Ох х106 Д) и мозаики костра ( 1,09х106 Д, 0,99хЮ6 Д, 0,7х хЮ® Д и 0-,28x10® Д). Молекулярную массу определяли из графика зависимости корня квадратного рз молекулярной массы от логарифма подвижности относительно третьего компонента ШК ви -руса мозаики костра (Hffi).

HilC BMP подвергали электрофорезу также в 2% агарозэ с 7 М мочевиной в Цитратном буфере. Зоны Hffi Е.1Р идентифицировали под УФ-светом после окрашивания.бромистым эгидием или радио -автох^рафией.

Опроделоние нуклеозидного.сос-

тава вирусных ШК. Нуклеозидный состав ШК потек-свирусов и ВТМ определяли хроматографическим методом на ясид -костном хроматографе высокого давления Varian -8500 после исчерпывающего ферментативного гидролиза. Гидролизат анализировали на колонке (25x16 см) со смолой Амшекс А-7 (Biorad, США), используя в качестве внутреннего стандарта гидролизат ГНК обычного штамма вируса табачной мозаики.

Хроматография ШК потексвирусов и 'ШР на олиго(дТ)цоллгаа-зе. Аффинную хроматографию НШ вирусов на олиго(дТ)целлшазе (Sigma, США) на колонке объёмом I мл проводили, как описано Аграновским с соавторами (Agranovsky et al., 1981)- Дяя контроля проводили аффинную -роматографию полиадениловой кисло -ты, а также ШК ВТГЛ» в составе которой полиадениловые блоки отсутствуют (Goelet et ai., 1982).

Олигонуклеотидное картирование ШК fbk, ХШ и ЩЕК проводили по методу Педерсена и Хазелти-на (Pederson, Haseitin, 1980).

У. Трансляция вирусных НШ в ретикулоцитах кролика

Трансляцию ШК проводили в бесклеточной белок-синтезирую -щей системе из лизатов ретикулоцитов кролика по методу Пелха-ма и Джексона (Pelham, Jackson, 1976). Лизат ретикулоцитов кролика, -обработанный микрококковой пукяоазой, был получен от О.Н.Денисенко (Институт белка, Пущино-на-Оке). Бесклеточную белок-синтезиругацую систему оптимизировали доя трансляции НЖ fbl и ашк.

Для идентификации белка оболочки продуктов трансляции ШК £ЕК проводили иммунопреципитацию по методике Робинсона с соавторами (Rotinson et al., 1983).

Сравнительный анализ полипептида с массой 26 кД, синтези -рованного npsi трансляции НЖ РЖ in vitro, с белком капсиды вируса проводили с помощью пептидного картирования после ис -черпыващего гидролиза трипсином.

Полипептид р сравнивали также с другими продуктами трансляции и калсидным белком 1'Ж с помощью ограниченного протео-лиза химотрипсином.

Эксперименты проводились с Е.В.Артюковой, Л.А.Минской,М.В.

Сапоцким, Л.И.Моисеенко, Т.И.Плешаковой, С.Г.Пус, Н.П.Родио -

новой"(¡'¡ГУ), В.Г.ГорбулеБЫМ (Институт молекулярной биологии All СССР).

Глаза Li. KiF/CL! РАСТЕНИЙ ДАлНШГО ВОСТОКА -ИДЕИТИйПСАДИЯ И ШИКТЕРлСТЕКЛ

Состав фулопатогенных вирусов Дальнего Востока наиболее изучен в Приморье л. прилзжацпх к Амуру районах Амурской области и Хабаровского края, которые являются и основными се -л^снохозяйственными. Список (табл. I) включает более 40 фи -топатогенгшх вирусов (Крылов, 1987), что немного более четверти вирусов растений, обнаруженных в делом в республиках бывшего СССР.

РАДДОБИТУСЫ. Вирус мозакки злаков.

При изучении распространённого на Дальнем Востоке заболе -вания, считавшегося закукливанием злаков, с признаками, идентичный! закукливанию, было установлено, что оно вызывается таюкэ рабдоЕирусом, но больших размеров (Крылов и др. ,1981; Бородина и др., 1982). Сравнительное изучение нового вируса, названного наш - вирусом мозаики злаков (ВМЗ), и вируса за -кукливания злаков (ВЗЗ), подтвердили данные о их самостояте -льности при сходстве некоторых свойств (Минская и др. ,1987).

При изучении круга растешй, поражаемых ВМЗ в эксперимен -тальных условиях (табл. 2) испытаны в первую очередь райони -рованние и перспективные на Дальнем Востоке сорта пшеницы,ячменя, овса, ржи, риса, проса, кукурузы. Цикадки актишо питались и были жизнеспособны в течение 4-13,дней. Наиболее долго насекомые выживали на овсе, пшенице, ячмине, рисе; менее благоприятными хозяевами оказались кукуруза и просо.

При заражении вирофорными имаго тёмной цикадки Laodeiphax striateiius Pali, в экспериментальных условиях период от посадки насекомых до появления симптомов-длился от 5 до 9-10 дней (у проса сорта Уссурийское - 19 дней). Затем через 2-4 дня на растениях развивалась системная мозаика. Мозаика сос -тояла из характерных светло-зелёных, жёлто-зелёных, иногда белых широшх штршэв. Часто штрихи сливались в полосы. Штрихи и полосы располагались по всей поверхности листа, захватывая нередко стебель растения.

Восприимчивы к инфекций в экспершенталышх условиях овёс, пиеница, ячмень, рожь, просо.

Овёс восприимчивее других культур. Среди районированных

j'tob иммунных и устойчивых но обнаружено. Сорго оказалось

Таблица I

Вирусы растений, обнаруженные на территории Дальнего Востока

Ж ГШ Группа К-во 'Вирус Аббревиатура Первое сообщение об сбнару -жении па ДВ

I 2 3 4 5 6

Рабдовирусы I

Лютеошрусы I

Группа вируса

некроза табака -I

Каряавирусы 4

Потивирусы 10

Мозаики злаков ВМЗ

Скручивания листьев ВСЛК картофеля?5 - •

Некроз табака ВЕЕТ

Еессиштошости лилий ВЕН

Полосчатости гороха ШГ

М картофеля МЕХ

¡3 картофеля sbk 7 картофеля • УЖ

Обыкновенной мозаики фасоли ' ВОШ

Жёлтой мозаики фасоли : ВЕШ

Мозаики гиплеаструма BIT

Мозаики коммелины ЕМКом

Зёлтой карликовости ВЕКИ лука

А - картофеля АЕК

Мозаики сои ВЮ

Бородина.Федотина,Крылов, 1982 Абрамов, 1953; Костин, 1966

Сибирякова, Гнутова, Толкач, Рублева, Чуян, Крылов, 1987

Проценко, Шатрова, 1969

Поливанова, Крылов, 1985

Рейфман, Крылов, Киселев, 1969

Рейфман, Крылов, Костин, 1964

Абрамов, 1953; Рейфман, Крилов, Степаненко, Костин 1971

Поливанова, Крылов, 1985 Муравьёва, 1967 Толкач, 1990

Артшога, Моисеенко, Толкач, Крылов, 1988

Рейфман, Крылов, Степаненко, Костин, Iwl

Абрамов, 1931; Рейфман, Поли -ванова, 1966

6. ПотексЕпрусы

7. Тобамошрусы

8. Неповирусы

1ргапа вируса дефоршшвдей мо зашей гороха

Пестролепестности тшьпана Мозаики турнепса

5 X картофеля

Кольцевой пятнистости гортензии

Мозаики белого клевера

у - Бирускартофеля

Мозаики подорожника азиатского«

2 Табачной мозаики

Зелёной крапчатой мозаики ■ огурцов

4 Кольцевой'пятнистости табака

Мозаики резухи

Кольцевой пятнистости томатов

Кольцевой пятнистости малины

I Деформирующей мозаики гороха

Продолжение табл. I

5_6

HIT Крылов, 1985

ВМТ Крылов, Малевич, Сапоцкяй, Гнутова, 1Ублева, IS8I

ХБК Абрамов, 1953; Рейфман, Крылов, Степаненко, Костин, I97X

ВКПГ Чуян, Крылов, Степаненко, 1975

ЕДЖ Поливанова, Слепухина, Степа -ненко, 1977

.fbk Крылов, Гнутова, Чиркова, Ки -селев, 1974

ВША Костин, 1976; Костин, Волков. 1976

ВГМ Рейфиан, Поливанова, Крылов, Костин, Степаненко, 1973

ВЗКМО Рей$ман, Поливанова, Крылов, Костин, Степаненко, 1973

ЕКГСГ Поливанова, 1971

БГЛРез Gordejchuk, Krylov, Krylova, Samonina, 1977

БКПТом Gordejchuk, Krylov, Krylova, Samonina, 1977

ВКПМ Gordejchuk, Krylov, Krylova, Samonina, 1977

ВВДГ Поливанова, Крылов, 1985

Окончание табл. I

I 2 3 4 5 6

10. Комовирусы 2 Мозаики редиса BIP Крылов, Малевич, Сапоцкий,

Крапчатости красного клевера ЕККК Гнутова, Рублева, 1981 Поливанова, Крылов, 1985

II. Тобравирусы I Погремковости табака ШГаб Взйфман, Руцкова, 1978

12. Кукумовирусы \ 2 Оцурачной мозаика Вирус аспермии томатов ВОМ ВАТ Поливанова, 1971 Чуян, Крылов, 1979

13. Бромовирусы 2 Иозаткп костра безостого Мозаики вики однопарной5® вмк ВЫЕО Соколова,Ларана, Степаненко, Крылов, 1977 Костин,Волков,Волкова, 1979

14. Группа вируса I Мозаики люцерны вш Поливанова, Слепухина, Степаненко , 1977

мозаики дщерац

15. Гордейвирусы I ШтриховзтоЯ мозаики ячменя шш Герасимов, 1966

16/ Неклассифици- 4 Штриховатости риса ВНР РеЩман, Пинскер, 1973

рованные вирусы Крапчатости гвоздики - Линейных узоров винограда ; Крапчатости pica вкг ВДУВ ШР Крылов, 1985 Saiaonina, Uilkus, ïrylova, Krylov, 1973 Немилостива, Рейфман, I98G

*DCjTK относила к лютеовирусам в качестве вероятного члена группы (fenaer, 1976). Позднее он был исключен из числа классифицированных (aatthews, 1979). Ряд исследований (Mehrad, La-pisrre, Got, 1979; Kowiiani, Stace-Smith, 1979), выполненных для уточнения характеристик* ШК ВСЛК и его систематического полоавния, подтвердил первую точку зрения. Как и следошло osa -дать, вирус скручивания листьев картофеля восстановлен как люгеовирус (Matthews, 1932).

^е яаяяется признаннш Международным Таксономическим Комитетом.

Отнесён по совокупности свойств.

Таблица 2

Изучение крута растений-хозяев найденных вирусов растений

ВИРУС. ( ств видов ^соот. зарекалось тьхахчиь л Мл л- лч> с источник

. заики злаков I 62 18 Минская и др., 1987

Некроза табака II 37 26 Сибкрякова и др.,1987

з - картофеля 5 27 3 Крылов, 1971

М - картофеля 5 28 4 Крылов, 1971

У - картофеля 5 36 II Крылов, 1971

А - картофеля 5 7 4 Крылов, 1971

Еёлтой мозаики фасоли. из гладиолуса 7 35 24

из клевера 5 25 17 Поливанова,Слепухина,

из гороха (ВОМГ) 5 25 15 Степаненко, 1980

Жёлтой карликов.лука 8 29 8

Мозаика коммелины 5 31 3

Мозаики турнепса 15 67 23

Мозаики пшпеастЕума 5 10 4

Мозаика сои 5 72 18 Поливанова, 1977 (отчёт)

Табачной мозаики 5 15 15 Крылов и др., 1980

из ириса 8 39 29 Толкач и др., 1988

Аспермии томатов 9 33 28 Чуян,Крылов, 1979.

Огуречной мозаики 7 27 27 Гордейчук и др., 1977

9 43 41 Поливанова и др,,1981

8 17 17 Чуян и др., 1977

8 26 26 отчёт

Мозаики резухи 4 II II Гордейчук и др.,1977

Кольцевой пятнистости малины 5 16 16 Горцейчук и др., 1977

Кольцевой пятнистости томата 3 9 9 Гордейчук и др.,1977

Мозаики редиса 5 21 18 Крылов и др., 1981

II 48 14

Мозаики костра бозостого 18 71 62 Соколова и др., 1977

Мозаики люцерны 10 64 64 Поливанова.СлепухинаI С теианенко,1980;Поли-

Ытриховатой мозаики ячменя

2й

ванова, Крылов, 1985 Соколова, 1976

Окончание табл. 2

т А 2 3 4 5

X - картофеля 5 42 35 Крылов, 1971

из хризантемы 7 17 17 Чуян, Крылов, 1975

из белены 3 9 S

из петунии 3 9 9

р (аукуба мозаики) 5 24 6 Крылов, 1971

Вирус мозаики белого клевера 10 73 50 Поливанова и др. ,1977, 1980

Кольцевой пятнистости гортензии 4 12 3 Чуян, Крылов, Степа-ненко, 1975

наиболее устойчивым к ВМЗ. Получены отрщательные результаты в опытах по передаче ШЗ на рис - Oryza sativa L. и кукурузу -

- Zea mays L.

Кроме зерновых культур заражение зарегистрцювано у 13-ти ВИДОВ злаков, главным образом из родов Avena И Broams.

Мозаика злаков обнаружена во всех сельскохозяйственных зонах Амурской области. Кристаллические включения, характерные для вируса, найдены у больных растений овса в посевах Надеж -динского и Партизанского районов Придорского края. В 1987' году в Приморье в растениях с признаками заболевания обнаружен рабдошрус (Мамаев, Костин, Волков, 1989).

В естественных и экспершентальных условиях единственным путём распространения ВМЗ является перенос - цикадкой тёмной.

ВМЗ приобретают имаго, так как достаточно питания

на больном растении в течение 15 минут (Мамаев, 1985). Инфекция передаётся и распространяется только личинками (1У-У) и взрослыми цикадками. Инкубационный период в переносчике 10-16 дней. Вирофорность весенней генерации после перезимовки около А%. В разные годы шрифорность летних генераций- тёмной цикад-ки Амурской популяции значительно колеблется: 1979 - 25.6, 1980 - 13.7, 1982 - 6Л% (Бородина, мамаев, 1985),

В обычные годы в Амурской области тёмная цикадка имеет две генерации: середина июня - середина сентября и в конце июля -

- окриление в мае следующего года. В 1980 году, когда температура воздуха превышала средние многолетние и достигала в ав -густе 24-23° и в сентябре 14-18°, развились три генерации тёмной цикадка: первая - июль-август, »торая - третья декада июля-сентября, третья - август-июнь следующего года (Бородп-

на-, Мама о в, 1985). ,

Численность идшго I генерации достигает максимума в сора -•дине июля (в среднем 300-400 цякадок на 100 взмахов сачка,. : иногда до 5SO) и постепенно снижается до сентября.

Вирус сохраняется в зиадунцих под сухими остатками стеблей и "кстьзв нимфах, И-1У Бозрастов II генерации, инфицированных , осенью. С коша апреля ншдфн заселяет всходы яровых зераоЕах ' рашшх и сверхранних сроков сева, где весенняя генерация заканчивает развитие и окрыляется в с о родине иай. • Йкаго. ваоеляэт ^ ' посек; яровых зерновых культур массовых к поздних сроков сова,' популяция корлзнтрируотся на последних', где растения молоке и ' сочное. Наибольшему поражению подвергаются всхода (в меньшой степени взрослые растения) в нарюд кассового лата иь;аго (конец мая - первая декада июня). Цккадки заселяют пшеницу'и овёс ц мепшс ячмень. Царкулящуг и какошгаюш труса ..в природе тас-яейаим образом связаны с культурой овса, а в первый период т-гот^цка и с овсигом обакновашам, у которого отмечено поравд-шгз ВМЗ в полевых и экспериментальных условиях. Когда площади'-кормовых растений в конце яшя - начала августа после уборе ироадх культур сокращаются, хдакадка расселяется на ззеходах йа-даличк, посевах оЕса на зелёный корм, поздяес одаолеиш: зла -котже сорняках (щетинник, куриюо просо). На этих корлолах растениях в зависимости от погодах условий П-ая генерация. может закончить paaisiua и в Еозраота уйти-

на зимовку. - - . ,

В опытах Е.Е.Еород^лой (1982) у естественно зароЕЗнних растений овса (сродное по 50-ти экземплярам) на 25$ сшшзна кус -тистсать, на 58,2$ - дадаа creösöii и иа 41,7$ - длина метелка, уменьшены количество ссияа в штелко Ha'S3,9¡2, шсса sepia с сдиой каталка - на 9G,8;¿. У большее растений на' 38,9 по срав-ношш со адоровцш моньша масса 1000 зЭрзя. В 1973-1977 гг. npi обследовании зареванна овоа (22 сорта), колобалось от еди -Ш1ЧШХ ОКЗеГДЯЛЯрОВ. ДО 12$.

В клетках поражённых растений баля обнарузаны характерше паракрастадлйческае ншечешш (Бородина и др., I98Í), прод - , ставяяювде собой белок (растворЕШй антиген), как-показано Г.А.Поповой и И.Г.Атабоковым (1966) дая вируса мозаики озимой пшеница. ¡: '■ '•-.-/' '.'.--,-'■ ..

При , электронной шсроскошш-удьтратонкщс-срезоН,листьев мо-,'

заичхшх растений овса и проса выявлено большое количество имеющих наружную мембрану бацилловпдных вираоков. Эти вираоны обильно заполняли цатоплазад- клеток эпидермы, мезофилла, флоэма; включая зролые ситовидные трубка. Изрэдка они обнаруви -вались в сооудах ксилемы. Скопления вирионов в клетках растений, хак прашло, были окрукены цитодлазштичеошзш мембрана-, .¿и* Нередко в канальцах эндоплазматичоской ооти образовива -лиоь расширения, заполнению варюкош. В ядрах, хлороплаотах, шгохондриях варонов не было, -

Длина бацилловидных шрионов - 420+50 пм, ширина - 67+8 хал,. В центре вираонов располагается злехстронпопрозрачная зона -капал диаметром до 10 км, чалее к периферии следует электрон-ноплотная зона с внеинш диаметром 34¿6 нм, представляющая собой, вероятно, рхбонуклоопротеяд - Hffl (нуклеокапсвд). За этим алактронношготшм слоем олэдуот олэктроннопрозрачная зона,ширина которой варьирует, задало, в зависимости от стада созревания бацплдоЕЭДшх вирионов, Окружает-лаотацу наружный элок-трониошютный слой шириной около 9 пм, являющийся мембраной (pao. I).

■ Пошло бацаллоЕидних шраонов во всех наследованных образцах мозаичных рартавий присутствовали п&ясчхсоадныо частица пираной 34+6 шл, кототае, по-видимому, представляют стадию фондирования вараоноа - так иазихаешо "наврзлно" шрусхша частицы.' .

Препараты шдзлшш из растений овса, собранных на опытных долях Всероссийского научно-нссдедоватольокого института сои в A'.typcitoí? области.

Зяоктрохшомикроскопическао исследования препаратов ВТ,13 показали содержание в них бацмлоЕЯДних вираонов с примесью округлых форл и деградированных вирусных частиц. В препаратах шруеннх частиц ШЗ выявлено 5 структурных белх&в. Молекулярная масса ;белков соответствовала: 36.0; 45.0; 55.0; 58.0; 70.0 кД; В• качества исследуемых образцов при. электрофорезе в полиакриламадномгелв по Лэммйй использовались препараты вирусных частиц,.обработанные ДСН и 2-моркаптоэтанолом по Ве -беру й Осборн (1969, 1972),.также экстракты больных а здоровых, растений," обработанных.по Паулю (1974) мочевшой, ДСН и 2-г.юртштоэкшолс.ч.

"К.препаратам вируса подучены диагностические сыворотки.

Установлено частичное иммунологическое родстео БМЗ с шрусом ьакукливания злаков.

Обнаружение иммунологического родства мезду ЬМЗ и ВЗЬ вызвало естественный интерес к взаимоотношениям их с вирусами северной мозаики злаков (ВСМЗ) в Японии и розеточной карли - .

4 ковости пшеницы (ВШ1) в Китае. В своё время японскими исследователями было высказано предположение о том, что закукли -вание и северная мозаика злаков, возможно, вызываются одним шрусом (Ито, Фукуши, 1Э44). Это предположение - не было подтверждено. Вирусы закукливзндя- и северной мозаики злаков значительно отличаются по морфологии. Есть отличия и по кругу раотений-хозяев: ВЗЗ пора' igt кукурузу и, возможно, как считал К.С.Сухов, ряс, которые не заражаются ВСМЗ. ШЗ и ВСМЗ заражают.рожь, которая не поражается ВЗЗ.

Открытие вируса мозаики злаков на Дальнем Востоке иодни -мает вопрос о его взаимоотношениях с ВСЫЗ и ВШ1. Вирусы относительно сходны по морфологии: БМЗ -..420J50 х 67^8 им, ВСМЗ - 350 х 60-58, ВНЕС - 320-400 х 50-54 нм. ВМЗ, как и вирус северной ьюзашш, не зараюет рас и кукурузу в эксперименте н заракает роаь, ,

Пэреносчакои вируса северной мозаики'злаков является тёмная цокадка так го, гак а вируса розеточной карликовости пшеницы, который является штаммом вируса северной мозаики зла -КОВ (Luadsgaard, Tien, Toriyama, 1984-).

Методами пмцунодвдйузии и ракетного иммуноэлектрофоре за показано наличие иммунологического родства мезду вирусами мозаики и северной мозаики злаков.

ПОШШРУСЦ - самая большая и экономически ваяная группа трусов растений широко представлена на Дальнем Востоке.

Вирус желтой мозаики фасоли обнаружен впервые на сое (Поливанова, 1968). Физические свойства изолятов существенно различаются. Широко'распространен, не поредавался семенами сои, кормовых бобов (изоляты из сои, гладиолуса). Перено -сится персиковой тлёй и Aphis glycines Mats. Вредоносен. Может поражать до 47$ растений (Поливанова, 1968) и снижать урожай до 39/5 (Поливанова, 1980). ВШ£ Еыделен на посевах сои, клеверов, гороха, из гладиолусов. Представлен несколькими штаммами. Самым распространённым оказался штамм BS№, , поражающий сою, фасоль, горох. Установлено, что резерватора-

ми этого вируса служат посевы клеверов, а также дикорастущие виды донника, вики» чипы. "Типичный" для аёлтой мозаики шта^ вызывает симптомы в виде жёлтых пятен на сортах фасоли, сои, поражает душистый горошек, бобы, горохи (вызывая слабые мо -заичные симптомы)» гладиолусы.

Вирус, вызывающий мозаику гороха (ВОМГ), выделенный наш из многолетних посевов клевера и гороха, также является штаммом БЕ.Нг. В отличие от типичного штамма ВШ&, штамм мозаики гороха вызывает яркие симптомы мозаики на бобах, горохе. К этому штамму устойчиш соя, гладиолусы и сорта гороха Wisconsin Perfection, Horai, ?oii. He поражает он и большинство сортов фасоли. В наших экспериментах чувствительными из них были: Kentucky Wonder, Scotia, Wisconsin. Refugee. Оба Штамма могут присутствовать на одном растении, дифференцируются на горохе и фасоли.

Третий штамм Ш«й выделен из больных растений красного клевера. Характеризуется тем, что на инокулированкых листьях фасоли появляются некрозы, а системная реакция проявляется в вида светлой точечной крапчатости. Этот изолят ЕШ& вызывает системную мозаику на Vicia faba L., Lupinus anguatifolius Ь., Petunia hybrida Vilm. MeliXotus indicus (L.) Ail., Pisua sa -tivum h-

Местные жёлтые пятна отмечены на Chenopodiua quinoa Willd;.,, Ch... amaranticolor Coste et JKeyn. • He поражает СОЮ, copra- гороха Soli,, Wisconsin Perfection. . ■

Виргусныо частицы 750-850 x 15 нм. В эпидермисе заражённых листьев бобов, люпина, клевера обнаружены Х-тела, в ядрах клеток - кристаллические включения. Аналогичные Х-тела найдены В.Ф.Толкач в сое и гладиолусах.

Шпус мозаики коммелины обнаружен в растениях традесканции белоцветковой Tradescantia albiflora Kunth. С симптомами ХЛ0-ротичной мозаики на листьях в теплицах совхозов' "Декоративные культуры" гг. Владивостока и Хабаровска.

Вирус имеет узкий круг растений-хозяев, ограниченный видами сом. коммелиноЕые; у 3 из 12 видов растений наблюдались симптомы поражения.

Вирус характеризовался невысокой устойчивостью в соке за - ■ ражённых растений тинантим, утрачивал инфекционные свойства при прогревании до, 50° и хранении его в комнатных условиях

от I до 3 суток, шрус передавался персиковой тлёй с больных растений традесканции белоцветковой на растения традесканции белоцветковой а тинантии недолговечной. Первичные признаки заражения появлялись на II день, причём тинантия оказалась более чувствительной к инфекции. Частицы нитевидные 750-780 нм. В эпидерлальннх клетках листьев пораженных растений традесканции и тинантии наблюдали Х-тела. Выход вируса состав -ляет 120-150 мг на кг листьев. Плавучая плотность вирионов в растворе хлористого цезия колебалась от 1,316 до 1,34 г/см3 в зависимости от способа получения и времени хранения очи -щенных препаратов. Выявлена гетерогенность капсидного белка вириоиоз .изучаемого изолята. Молекулярная масса наганного белка 34 кД, продуктов его деградации 31,9 кД и 29,4 кД.

Вицуи жёлтой карликовости лука на Дальнем Востоке впервые обнаружен на,индивидуальном участке. В дальнейшем вирус изучался в материале из Западной Сибири.

Использовались пораженные рартения лука-шалота и чеснока, собранные на опытных полях НИИ раотениеводства и селекции СО ВАСЖШ.

Показана передача вируса на 8 видов и сортов сем. АШа -сеае и СЬепоросИасеае, а также персиковой тлёй. Темпера -тура инактивации вируса в соке - 65°, а длительность выстаивания - 2-е суток.

Выход вируса 180-200 мг/кг и 130-150 мг/кг в зависимости от метода выделения. Препараты характеризовались типичным для нуклеопротеидов спектром, отношение Е20о к ®280 ~ При центрифугировании в градиенте концентрации сахарозы ВЫСЛ седиыентировал в раде одной зоны медленнее В'ГМ. Молекулярная масса белка 36108^2556, продуктов его деградации 31697+480, 30204^-517 , 28068+2216 (Артюкова, Пус, Крылов, 1990).

По данным В.Ф.Толкач, Н.В.Рублёвой при электронно-микро -скопичаском анализе ткани поражённых растений чеснока и лука и препаратов вирусных частиц обнаружены вирионы свыше 700 нм длиной. В эпидермалышх клетках больных растений найцены включения в виде, гранулярных Х-тел.

йпдгс мозамси сои. В 1930 году в Уссурийске в образцах сои, полученных из Северо-Восточного Китая, И.Н.Абрамов впервые отмечает мозаичные,'растения. Цо-Еидпмому, мозаика сои в материале, полученном из Китая, была зафиксирована

И.Н.Абрамовым раньше, чем в самом Китае.

BviG представляет собою частицу размером 750x15 нм. В соке вирус сохраняется в течение 3-4 дней при комнатной темпера -туре и сохраняет инфекционноеть при разведении I0"4. Распространён на посевах сои повсеместно. Wß краЕно вредонооен: снижается высота растений, уменьшается количество ветвей,зерен в бобах и может вызывать потери уролшя зерна в 30-70 % (Поливанова, 1У71).

ВМС в природе не имеет других растений-хозяев, кроме сои. Источник его в начале вегетационного периода - больные про -ростки, выросшие из заражённых семян (5-25$). Вирус аффективно переносится тлями Aulacorthum eólaxii Kalt.Aphis glyci -nes Mata., M. persicae. Может передаваться И Aphis goseypii Giov. но она составляет всего 4$ крылатых тлей ореди 4 видов, заселяющих сою в Приморье (Дьяконов, 1982).

Замечено, что заболевание мозаикой сои сильно распространено в Восточной Азии (СССР, Япония, Китай) в значительно меньше в Северной Америке (США, Канада). Вш> естественным предположить, что различия в распространении шруса мозаики сои в Восточной Азии и Северной Амеракэ ыо!ут определяться особенностями биологии и экологии вируса и его переносчиков в первую очередь, так как, например, для Приморья Т.А.Поли -вановой (1968) показана прямая корреляция медду зарахшннос -тью растений и количеством тлей на сое. Коэффициент корреляции близок к I.'

Для анализа видового состава54 был взят наиболее полный список переносчиков из 18 видов, приводимый Шмидтом (Schmidt, 1977)- Различия в видовом составе тлей - переносчиков вируса мозаики сои в Северной Америке (США) и Босточ -ной Азии. (СССР, Китай, Япония) кажутся не слишком большими. Однако, если попытаться оценить роль видов в переносе и распространении вируса мозаики сои, картина выглядит по-другому.

Но данным К.П.Дьяконова и Е.П.Голавда (1971) на долю А. glycines и Au.soiani приходится 97-99% от всех отлавливаемых на сое тлей. До двухлетним данным 51% составляют особи картофельной тли, однако при жаркой и сухой погоде числен -ность соевой тли возрастает до 58$. В.С.Арефин и Л.А.Ивлиев

^Анализ проведен по материалам картотеки к.б.и. И.О.lia -щенко и при её консультации.

(1984) подтверждают данные о массовом заселении растений сои тлями видов Au.soiani и ¿.glycines. Причём в 1982 году с жарким и засушливым летним периодом отмечено высокое размножение лишь A.glycines. В 1987 году в условиях аналогичного лета также отмечено массовое размножение ¿.glycines (Арефин, неопубликованные данные).

Таким образом, можно считать, что основными переносчиками . вируса мозаики сои являются массовые на культуре виды тлей Aulacorthum solani - космополит И Aphis glycines, специфичный для Восточной Азии. В годы с жарким, засушливым для Приморья летом (1982, 1987) отмечено массовое: размножение лишь A.glycines и особи этого вида доминировали на сое. логично предположить, что существенные различия в заражённости сои вирусом мозаики сои в Северной Америке (СЫЛ) и Восточной Азии (СССР, Китай, Япония) наряду с другими причинами опре -деляются наличием или отсутствием массового эффективного переносчика Aphis glycines.

ВМС выделялся из растений, заражённых средним штаммом,соответствующим штамму В в Японии. Общее количество вирусного препарата составило 4-14 мг на кг листьев больных растений. Препарат имел типичный для нуклеопротеидов максимум поглощения npi 260 нм и минимум при245-247 нм; отношение было равно 0,8-0,83, что соответствовало содержанию примерно 6-6 ,Ъ% ШК.

Коэффициенты седиментации ШС составили 141 и 147 S соответственно в 0,1 и 0,05 М боратшх буферных растворах piL8,0.

При определении молекулярного веса структурного белка ВМС обнаружены два белхошх компонента: 1-е молекулярным весом 28110+258 и II - с молекулярным весом 32640+225. В зависимости от времени хранения вирусного препарата наблюдались спонтанный переход компонента II в белок I и появление нового дополнительного быстро движущегося белка с молекулярным несом 25570+226.

Одной из вероятных причин такого спонтанного изменения структуршго белка LiviC мог быть гидролиз его протеззами. Результаты изучения кинетики ферментативного гидролиза при соотношении виру с трипсин 500:1 показали, что полный переход электрофоротически медленного белка в более подвижный компо-

нент происходит в течение 5-чаоовой инкубации реакционной ' смеси njM температуре 37°. , .

riOTEKCBlP/CLl. Витзуо аукуба мозаики (или Е ) картофеля относится к возможным потексвирусам до последнего времени сравнительно мало изученным. Это объяоняетоя прежде воего тем, что существует мнение о |«юлой распространённости этого вируса. Экспериментальные дайные последних лет а результаты наших исследований в Приморском крае позволяют замшить,что вирус поражает картофель значительно чаще, чём принято счи -тать.

В период с 1966 по 1972 гг. в коллекционных посевах ДВ Bip Е.П.Киселёвым и А.Л.Чирковой проанализирована на заражение : вирусом 102 образца диких и культурных видов, 66 межвидовых гибрщов и 325 сортов картофеля иностранной селекции. Всего обследовано 4960 растений. .

Наличие вируса установлено в растениях видов картофеля: Solanum ЪиГЬо cas tnnum Dua., 8. tri il duo Corr., S.etoloniferun Schlechtd. et Bouche. , Б. rdeaiesum Lindl., В. îalerodontum JBltt. 4 S. 1сб1Ъх'в2шбэ?£. Juîs* et Buk,, S.microdoatum Juz.et Buk.

Зараженность видов.составила 24,5$ от всех изученных.Положительную реакцию дали от 10 до 40$ 'проаналиаированшхраате-ний. Из 66 межвидовых гибридов вирус г обнаружен у 49, что соотавляет 74,3$. Максимальное порашше некоторых образцов достигло 70$. , . ; '

Зараженность вирусом 3? сортов картофеля колебалась от 10 до 80$, а коллекции в целом достигла 40,8$ от всех выращиваемых. Сорта не менее ,5 лет, находящиеся в условиях. Приморского края, были поражены вирусом в большей отепени, чем сорта,поступившие из коллекций Пушкинских лабораторий ШБэ.'В первом случае из 169 сортов вирус имели IQI сорт (63,4$), ео-ето-ром из 156 сортов зараженными оказались только 26 (16,7$). Свшие 51$ растений заражени у Ю сортов. Пораженность вирусом от 31 до 50$ отмечалась у 24 оортов (Крылов и др., 1974).

Выход РЖ до 70 мг/кг. Вирус имел типичный нуклеопрбтезд- . ный спектр с ^лкскдаом при 260-265 нм, минимумом при 245-247 нм. Соотношение поглощения при 260 .нм "и 280 нм "в спектре, скорректированном по сЕеторассеивакиа.било равно 1,24-1,3, а соотношение ^¿.Д^. - 1,18.

Плавучая плотность - 1,315-1,3X6 г/см .

; Анализ Eapyciauc препаратов показал содержание фосфора

0.461+ 0,008%, что соответствовало содержанию ЕКК в вирусе i картофеля 5,058^0,1$. Препараты содержали только один белковый компонент с молекулярным весом 27480^319 (Artyикс -va. Sryiov, 1983). ■ - „

lOBAJfiOBlpycii представлена на Дальнем Востоке влрусаш табачной мозошга и зелёной крапчатой мозаики огурцов.

/ ВТМ впервые на ДВ идэн-гкфзщарован нами,на томатах гак в " ' открытом (Дальневосточная опытная станция ВИР), ток я в зап-jhtom грунте (Архёмовский тепличный совхоз Приморского края, теилачпыо хозяйства г. Магадана, Камчатской и Сахалинской областей) (Рейган и др., 1973).

В Приморье ВТМ бнл изолирован из 4 видов растений, пора -жвапих сшсьй вирусов: петунии гибридной p.bybrida (I), белена ЧЗрЯОЙ H.aiger, табака ДУ1ШСТ0Г0 Hicotiaaa affiris Moore, зорью! (лихниса халкедонского) Lychain chalccdoiiica

1. (Крылов и др., IS80); петунии (П) (Чуян, Крылов, Крылова, 1974), ирисов (и) я 2 штампа из нарциссов (Чуян, Стрекозова,' Крылов, 1983) 216 и 412.

■ При псслодог-оппи физических свойств описываемых штаммов устансвлэны .различая квзду ними. Всо атакш' сохраняла инфек -цаошюсть пря хранении в неочищенном сско зарадённого та бага в комнатных условиях в течение 60 дней и при разведении Ю-7. Для каздого из штаидов ВТМ характеркн специфические формы вирусных ветачэнпЗ.Пхц заражения всеми полевыми изсыштама образовались шшчошя в ездо типичных кристаллов ВТМ в тканях пораявтшх томатов и Табаков. Вез изучавшиеся итамяготносятся к группа томатных вируса табачной мозашей (точнее, к вирусу мозаика томатов) кроме BIM 216 а ВТМ-И.

' nd реакции основных раотений-йндикаторов B1M-4I2 мояно отнести к тештншд -штаммам, во im у одного растопил из 6 использованных сортов (Коралл,-Новато, Хабаровские 308, Сибирские, Рвввщуп, Аяпатьева) то:;лтов он на вызывал заболевания и не определялся прз обратной передаче.

Таким образом, на томатах в Приморском крае, как а на декоративных растениях, превалирующее распространение имеют штаммы HTM, относящиеся к группп томатных, среди них отмечено распространение нового для этой зоны штамма пестростебель-носта томатов. ' '

НЕПОШЕУСЫ. Вирус кольцевой пятнистости томатов. ВКПТ идентифицирован на растениях малины, смородины Приморский Чемпион И Kibe8 dicuaoha И ii. procunbens (Uordejchuk et al., -1977).

Среди растений-индикаторов характерно реагировали табак, петуния, томаты, фасоль Гшнто. Отчётливые кольца с бурым, реже чёрным ободком на петунии образовались весной и осенью. В летний период чаще проявлялся некроз центральной жилки о засыханием всего листа. .Характерным признаком для всех рас -тений было иочезновение симптомов по мере развития растений (в среднем через 4-6 недель после заражения). Симптомы вообще довольно слабы и усиливаются после двукратного пассажа через махорку, заражающуюся ВЮ1Том системно.

Частично очшцоиным соком заражали сеянцы н. occidentalis б фазе 3-5 листьев. Позже заражение не удавалось. На иноку -лированных сеянцах спустя 3-4 недели развивалась мозаика в виде светлых жёлтых пятен. После периода покоя на растениях появляются симптомы идентичные симптомам на исходных расте -ниях.

Сок терял инфекционность при нагревании до 57-58°; через 35-48 часов выстаивания при комнатной температуре. Цредель -¡юс разведение - Ю-2 (в осеннее время заражение иногда удавалось при разведении Ю-^).

В заражённых растениях табака и-петунии показали наличие вирусных включений. При микроокопировании зпидермальннх тканей листа, стебля растений в клетках обнаруживаются мелкие, многоугольной формы пластинки, 'размером 3-10 ммк. Включения формируются к моменту появления симптомов на поверхности листа (жёлтые пятна и кольца) и исчезают по мере ослабления симптомов болезни и старения растений..

Серологически вирус идентифицирован сывороткой к виц/су кольцевой пятнистости томатов, полученной от д-ра Стейс-Оми-та,во Есех индикаторных растениях, а также в частично осветлённом соке kubus occidentalis И Kites procumbens (Gordej -Chuk et al., 1977).

KOUQBllF/CU. Витас мозамш редиса. Обнаружен в 1975 г. на юге Приморского края но лобе-китэйской редьке (Kaphanus sa-tivus subsp. sinensis (Juiil.) aazon convar.ioba dazon). позже заболевание было найдено на редисе.

Точка термической инактиЕации находилась е пределах 7580°, предельное разведение составляло выстаивание больше 16 суток.

Б препаратах из сока больных хастаний были обнаружены как отдельные сферические частицы, так и небольшие эгрета тп ва -риоиов ШР, иногда окруженные мембраной. ла ультротонккх срезах они видны как электронноллсткые сферические частицы диаметром 22,-26 нм. Ь клетках паренхимы корнеплодов лсбы вирус накапливался, в незначительном количестве: лишь в 1-2 клетках из 40-50 исследованных были найдены цепочки Бирюков в трубчатых структурах. IIpi электронной микроскопия препаратов вируса выявлены сферические варусныо частада диаметром около 28 нм.

Выход вируса при выделении в зимний период составил 50-60 мг на I кг листьев редьки или лобы. Спектр поглощения имеет минимум при длине волны 240 нм, максимум при 260 нм. Соотношение ®26с/^280 =

lipa электрофорезе вирусного белка выявлены 3 зоны, соот -ветствувдие 3 полипептидным цепям с молекулярным весом 19833 ¿139, 26290+125 и 39950+280. Бее эти зоны присутствуют как в верхнем, так и в нижнем компонентах вируса мозаики редиса. В суммарном препарате зона с молекулярным весом 399U0 наиболее интенсивна, а с молекулярным весом 26290 наименее интенсивна.

При иммунодиффузии реакция идентичности установлена с ан -тисывороткой к выделенному нами вирусу и антисывороткой к вирусу мозаики редиса, полученной от доктора Кэшбвлла.

На Дальнем Востоке вирус мозаики редиса встречается шесте с вирусом мозаики турнепса, вызывая заболевание, известное в Японии под названием задержки роста редиса. Точихара (1968) допускал, что заболевание является смешанной инфекцией Eipy -сами мозаики редиса и мрзашш турнепса. Присутствие в расто -ниях в naie Еируса мозаики турнепса подтверждено нами элвкт -ронно-микроскоиически и реакцией кольцепреципитации со специфической антисыЕороткой, полученной из Японии от профессора Вакимото.

КУКУМОШЕ/Ш. Вирус огуречной мозаики впервые шделен на сое в 1967 году под названием вирус задеркки роста сои (Поливанова, 1971). Позже обнаружен на ягодниках (Гордейчук и.др., 1977), декоративных (Чуян и др.," 1978), овощных (Теплоухова и

др., 1987) и кормовых бобах (Поливанова и др., 1981). Изучали изоляты БОМ, выделенные из.лилии тигровой (Lilium tigri -mm L,), эхинации пурпурной (Echinacea purpurea fcoech.), TO-ката (Lycopersicon esouleatum kin. ) 'Ревермун; бальзамина (Impatiens balsaaina L.), канны индийской (Canna indica L.), ТКЛЬПана (Tulipa hybride Hort.), нарцисса (narcissus hybri-dus Hort.J, примулы обрэтноконической (Primula oboonica Ha-nce), гладиолуса гибридного (Gladiolus hybridus Hort.), банана японского (iíusa basjoo Sieb, et £ucc.).

Физико-химические свойства изолятов существенно отличаются. Вирус изометрической формы диаметром 29 нм.

Для идентификации дальневосточных изолятов и определения степени их антигенного родства, использовали антисыворотки, полученные от докторов Каневского (ПНР), Рихтера (ГДР),Стейс--Смита (Канада).

Антисыворотками, полученными от Стейс-Смита и нашими, по -казана идентичность изолятов ВОМ из декоративных растений с БОИ из примулы, смородины, огурца.

Особой вредоносностью отличается при эпифитотийных вспыи -ках в смешанных инфекциях, чаще всего с ВТМ. В 1979 году та -кая вспышка отмечалась в хозяйствах Хабаровского, Приморского краев на томатах.

На посевах сои вирус поражает единичные растения, на которых бобы обычно не образуются. Зёрна не вазрегают, так как из-за сильной задержки развития растения погибают от заморозков.

Вирус асдермии томатов впервые на Дальнем Востоке описан на хризантемах (Чуян, Крылов, 1979).

Вирус утрачивал инфекционность при температуре от 66 до 67^ хранении в комнатных условиях от 7 до 9 суток и разведении от 10"3 до Ю-4. Наш изолят реагировал положительно с цельной сывороткой и в разведении 1:2 к вирусу аспермии томатов, из -готовленной в Проблемной лаборатории по изучению шрусов растений и насекомых Латвийской сельскохозяйственной академии.

В Приморском крае вирус аспермии на помидорах пока не об -наружен, скорее всего, потоцу, что посадки томатов удалены от плантаций хризантемы.

Глава 1У. ИЬУЧЕШОСТВ БИЕГСОВ РАСТЕНИЙ ДАЛЬНЕГО

востока России в срашении с дениш регионами

Количество зарегистрированных вирусных заболеваний растений до известной степени является показателем выявленности этих заболеваний, хотя, как справедливо писал В.Л.Рыжков (1945), "... от выявления вирусного заболевания до строгого доказательства его вирусной природа и подробного его изуче г ния - ещё больной путь". В ряде обзоров, сводок и монографий опубликованы данные о численности и составе вирусов растений, в том числе и на прилегающих к ДВ России территориях (табл.3).

■ , Таблица 3 йитонатогеннне вирусы Дальнего Востока России и сравниваемых территорий

Страна, регион

КОЛ-ЕО вирусов

Классифицировано

Источник

Япония КНР

Бывший СССР Украина ДВ России Австралия

Новая Зеландия Польша -

214 - 161 Крылов, 198?

56 -39 - Крылов, 1987

148 93 Крылов, 1987

30 не сообщается Краев, 1980

42 38 Крылов, 1987

58 не сообщается Мс Leaa, Price,

193468 не сообщается Матьюз, 1973

34 не сообщается Truszkowska, 1984-

Приведённые данные позволяют, во-первых, сравнить изученность вирусов растений на соседних терратораях, во-вторых, прогнозировать обнаружение некоторых вирусов. Учитывая географическое положение ДВ России, продолжающиеся работы по инвентаризации фитопатогенных вирусов состояние изученности следует признать естественным, в том числе и наибольшее внимание к Приморью и прилежащим к Амуру районам Амурской об -ласти и Хабаровского края, которые являются и основными сельскохозяйственными.

глава у. 0 классификации фитопатогеншх вирусов

Одновременно с идентификацией и изучением особенностей биологии вирусов растений Дальнего Востока встал вопрос о

классификации их в соответствии с требованиями Международного Комитета таксономии шрусов. Рассмотрены история и пред -локения по таксономии фитопатогениых вирусов.

Б настоящее время применяется система классификации вирусов, одобренная Международными Конгрессами и дополненная решениями Комитета таксономии вирусов (Fenner, -I976i Matthews, 1979, 1982). .

На основании изученных свойств фитопатогенные вирусы Дальнего Востока России распределены по группам и семействам вирусов растений принятой ныне Международной классификации. .'

Глава У1. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПОТЕКСШРУСОВ ДВ

Вирус г картофеля относится Международным комитетом по таксономии вирусов к возможным членам потексвирусов. В отличие от истинных представителей группы он передаётся тлями при совместном заражении с У-вирусом картофеля и не обнаруживает антигенного родства с другими потексвирусами в иммуно -химических реакциях (Koejaig,Leseiuann,1973i Matthews, 1982).

Наш было показано, что но ряду химических и физических овойств в вирус картофеля (fbsc) моает быть отнесён к группе потексшрусов (Artyukova, Krylov, 1933). Ш сравнивали некоторые., свойства типичного (ХЕК), двух признанных (БМЕК и БКПГ) и одного возможного (fbk) представителей гргушш по -тексвирусов.

Сравнительное изучение физико-химических свойств потексшрусов

Общим признаком всех изучавшихся потексшрусов является высокое содержание аденина, причём дая большинства оно сос тавляет около 32-33$. Такое высокое содержание аденина поз -воляет предположить наличие полиалениловых блоков в их структуре. В составе ШК гвк и БКПГ, как и ШК ХЕК, были выявлоны поли (А) последовательности. Поли (А) блок длиной до 210 нук-леотндов был локализован на 3"-конце Hffi fbk. Ранее поли. (А) последовательность подобной длины была обнаружена на 3'-конце ХВК,(Морозов и др., 1981). &ия изучения гомологии структур калсидных белков методом ограниченного протеолиза папаином и химотрипсином использовали электродоретически очищенные белки. Били обнаружены, как общие для всех четырёх белков непти-. да, так и одинаковые только для трех шш двух белков. Гвдро-

лизат каждого белка содержал индивидуальные, присущие" только еглу пептиды.

Сравнение числа общих и индивидуальных пептидов в изучаемых белках позволило еыяеить степень их структурной гомологии. Сходство изучаемых белков лучше выявилось при анализе лродук-тов протеолиза их химотрапсином. Белок ШЖ наиболее сходен с белком ХБК и в меньшей степени с белком в то время как

белок БКиГ ближе белку Ш, чем белкам ХБК яла Более'

детальное сравнение исследуемых вирусных белков было выполнено методом пептидного картирования их после полного гидролиза трипсином. Как известно, белок ХБК содержит 10 лазиковкх и 9 арГИВИКОБЫХ остатков (Koenig et al., 1973). белок ¿'Ж - 13 лизияовых и 12 аргининовых (Artyukova, Krylov, 1983), а бе -лок BlffiU - 12 лизинобых а 3 аргининовых аминокислотных остатков (Hammond, Kuli, 1981). После исчерпывающего трипсинолаза тадролизаты белков ХБК, гж и H.iEK содержали 19, 26 и 17 пептидов соответственно (рис. 2). При анализе полученных пептидных карт было обнаружено, что в составе__белка XLK присутствовало 9 индивидуальных пептидов, в болко ¿ж число их было только 7. Соположение остальных пептидов на пептидных картах этих трёх белков полностью или частично совпадало, что свидетельствует о значительном структурном подобии исследуемых каасидных белков потвксвирусов.

Таким образом, наличие большого .числа общих пептидов при гидролизе- исследуемых .вирусных белков папаином, химотрипсином и трипсином убедительно свидетельствует о значительном сходстве некоторых их структурных элементов между собой и подтверждает обоснованность отнесения этих вирусов в одну таксоном -ческую группу.

Сравнительное изучение иммунологических свойств потвксвирусов

Наличие общих пептидов, сходство структурных элементов позволяет предполагать как индивидуальные, так и общие идентич -ныв детерминанты у изучаемых вирусов, что показано методом двойной диффузии в агаре и подтверждено методами ракетного иммуноэлектрофореза и реакции виро-бэктериальной агглютинации [Gnutova et al. , 1986). •

Сравнительная характеристика дана в гомо- и гетеросистемах.

Для изучения антигенных взаимоотношений потвксвирусов при-

-»•О

й1с. 2. Схема траптических пептидных карт белков потекс-вирусов + точка нанесения гидролизата; Е - над т равление электрофореза; С - направление хрома -тографш

пептиды белка уёк пептиды белка ХБК пептида белка 1ШК

за

менекы конкурентный и "сэндвич" - методы иммуноферментного анализа (Сибирякова и др., 1987). Наиболее близкородственными являются ХЕК и БЛЕЙ, несколько удалён БАМК, а ЬКИГ обладает самой слабой степенью родстш по отношению к другим изучаемым потексвирусам. Для количественной оценки антигенного родства потексвирусов применили конкурентный вариант (Негтапа, 19В2), Наиболее близкими являлись ХЬК и ВМШ (более 90$ родства), менее Ш1Г (до 40$ родства) и БАМК за-' нимает промежуточное положение (до 60$ родства) (Сибирякова и др., 1987) (рис. 3).

Иммунная электронная микроскопия наглядно продемонстрировала сорбцию специфических антител не только на гомологичных, но и на гетерологичных вирусных частицах. Принимая интенсивность покрытия антителами вируса в гомологичной системе за 100$, можно судить об антигенных взаимоотношениях медлу ви -русами изучаемой группы.

Таким образом, данные полученные нами с помощью РДЦ.ШКЕ», АЕВ-теста, двух вариантов ИФА и ИЗЭД позволяют считать как и ХЕК, ШЕК и Ш1Г, истинным представителем потексвирусов.

БМБК

ВКИГ

Рис. 3. Антигенные взаимоотношения изучавшихся потексвирусов Дальнего Востока по результатам конкурентного варианта имцуноферментативного анализа

Обоснование мероприятий по ограничению вирусных болезней растений Дальнего Востока

Борьба с вирусными болезнями растений - это, за немногим исключением, непрекращающаяся борьба. Общепризнано, что бороться с вирусами трудно, а полностью избавиться от них, в отлитие от многих других патогенов, практически невозможно, до настоящего времени в отношении вирусных болезней расте -нкй отсутствуют прямые методы защиты. В сеязи с этим резко возрастает значение знания особенностей биологии вирусов, взаимоотношений их с переносчиками и растениями. Основные мероприятия,' которые могут принести пользу, носят профилактический характер. Они направлены на сокращение источников инфекции внутри и вне насаждений'и посевов, предотвращение или ограничение распространения вирусов переносчиками и уменьшение воздействия патогенов на растение. Поэтому определение и изучение шрусов растений дальнего Востока России и вызываемых ими заболеваний - необходимый этап, имеющий первостепенное значение для введения противовирусных меро -приятий в систему интегрированной защиты.

Скрининг фитопатогенных шрусов региона показал, что в настоящее вре;ля вирусные заболевания вызываются более чем 40 видами вирусов, обнаруженных и в разной степени изученных на дальнем Востоке. Можно ожидать, что список этих патогенов будет пополнен как за счёт вирусов растений, известных в КНР и Японии, так и обнаружения на культурах, где они не изучались или изучались слабо (земляника, плодовые). Однако фундамент эффективности проводимых мер борьбы - правильная идентификация вирусов, поражающих основные культурные растения региона - заложен,.

Обстановка на Дальнем Востоке благоприятна для распрост -ранения вирусных болезней и даже периодических эпифитотий. Во-первых, этому способствует, с одной стороны, монокультура среди палевых 2сультур (картофель, соя), с другой стороны, юг Дальнего Востока характеризуется богатством растительности,в том числе и культурной. Монокультура ведёт, к накоплению ин -фекции. Ситуацию усугубляет наличие природных резерваторов. Поэтому при Еыращивании картофеля вряд ли можно обойтись без оздоровления исходного материала для семеноводства методами

верхушечной меристемы с последующим ускоренным размножением в теплицах и вегетационных дошках и выращиванием в изолированных условиях. Во-вторых; для ротона характерна многочисленность фитопатогенних вирусов, штаммов, изолятов, как по -казано и в нашей работе. Обычно наибольший ущерб культурным растениям наносится при распространении новых видов и их лтаммов. На дальнем Востоке России, в Японии и Китае на-сое вирус огуречной мозаики вызывает заболевание задержки роста* (ранее считался вирусом задержки роста сои). Больные расте -пил, как правило, гибнут при первых заморозках, не успевая дать полноценных сэмян. Таким образом, культура сои представляет собой тупик для вируса огуречной мозаики. Вирус, однако, юстоянно отмечается на сое. Это становится возможным только Злагода^ распространению большого количества изолятов ВОМ и иличию естественных рвзервагоров. Вирус огуречной мозаики ia дальнем Востоке обнаружен на Ib Еидах культурных растений: :оа, кормовых бобах, смородинемалине, жимолости, огурцах, томатах, лилии тигровой, эхинации пурпурной, бальзамине,канна нщийской, нарциссе, примуле обратноконической, гладиолусе "ибрвдном и банане японском. Среди резерваторов как обычные растения - частые носители ВОМ - гладиолус, так и довольно жзотические - банан японский. Вирус постоянно переносится с юсадок овощных и декоративных культур, ягодных растений, а, ¡озможно, и природных кустарников. В-третьих, мощным факто -хзм, способствующим распространению вирусных заболеваний,яв-[яется Еидовое разнообразие и высокая численность насекомых ■ переносчиков вирусов. Численность тлей на сое может быть включительно высокой. Необходимость обработки инсектицидами, ю крайней мере семенных полей, вряд ли нуждается в донолни-'вльном обосновании.

La юге дальнего Востока, в Японии я Китае одним из основ-ых переносчиков вируса мозаики сои яыяется олигофаг Aphis cin.es - вид, специфичный для Восточной Азии а не Естре -ающайся в других регионах. В ззсуштвые годи, отмочающиеся ля Приморья один раз в пять лет, особи соевой тли доминиру-т среди переносчиков вирусов сои. В Амурской области, где ЗучаЛЗСЬ бИОЛОГИЯ ТёМНОЙ ЦИКЭДКИ Laodelphax s tria'teilua -ереносчика вируса моьаики злаков, развивается 2 поколения, в отдельные благоприятные годи и 3, то есть подтверждается

общая тенденция роста числа поколений о севера на юг ареала. Б то же время, по данным К.П.Дьяконова, на Дальнем Востоке есть зоны с обеднённой афидофауной и низкой численностью переносчиков. Такими являются зона семеноводства картофеля и северные районы. Например, на Камчатке обеднен еидовой состав тлей и большая часть лета является неблагоприятной для их лёта, сйание биологии и экологии вирусов и их пере -носчиков определяет успехи в борьбе с-вирусными заболеваниями растений. Ценность экологического подхода б организации ин -тегрированной защиты культур определяется сложностью цепи событий, вытекающих из взаимодействия вирусов с постоянно . менявшейся окружающей средой. Составление прогнозов возникновения вспышек - основная для практики конечная цель исс- -ледований по экологии фитопатогенных вирусов. .

Для защиты томатов, цитрусовых, какао успешно применяется вакцинация растений. На Дальнем Востоке проходит испытание вакцинация картофеля ослабленным штаммом X вируса картофеля. Применение этого приёма в районах ограниченного распростра- ' нения У вируса картофеля не вызывает больших возражений. В то же время на юге Дальнего Востока приём вызывает- серьёз -ные сомнения, в первую очередь из-за широкого распространения УВК (7-ВДЙ), вызывающего в комплексе с ХВК эффект синергизма. Двойные вирусные инфекции, как известно, относятся к наиболее вредоносным. Следовательно, применению рекомендации должно предшествовать тщательное изучение возможности нару -тения слолшшегося равновесия и экспериментальная проверка опасности двойных инфекций вакцинированного картофеля в ус -ловиях юга Дальнего Востока'.

■Часто решающий успех достигается обнаружением в цепи развития вирусного заболевания слабого звена, которое мояшо использовать в интересах человека. В Приморье на хризантемах обнаружен вирус асперши томатов. В этом случае удаётся предотвратить распространение вируса на томатах путём раз -дельного выращивания томатов в овощных теплицах, а хризан -тем - в цветочных теплицах.

Таким образом, оценивая применяющиеся е борьбе с вирус -ными болезнями растений приёмы, в условиях Дальнего Востока, надо подчеркнуть следующее. Среди осноеных профилактических

мероприятий особое значение приобретают пространственная изоляция, в первую очередь для зерновых, сои и в защите томатов от аспершш, получение и использование здорового се -менкого и посадочного материала в картофелеводстве и особенно (возможно, решающее) на сое. Большое значение имеет защита растений от насекомых-переносчиков, в условиях Дальнего Востока организованная явно недостаточно. Очень желательна организация работы по прогнозированию численности и лёта переносчиков вирусов и вирусных шшфитотий. Достижением картофелеводов и вирусологов региона является внедрение во всех краях и областях Дальнего Востока закрытых зон семеноводства картофеля с оздоровлением исходного материала через культуру апикальных меристем.

В И В О Д Ы

1. В результате проведённых исследований (1970-1991 гг.) выявлен состав вирусов растений Дальнего Востока - 42 вида. На основании проведённых исследований и литературных данных сделаны выводы о вредоносности вирусных^ заболеваний в регионе. Это позволяет, учитывая видовой состав, биологические особенности вирусов и переносчиков, внедрять комплекс противовирусных мероприятий в систему интегрированной защиты растений региона. Вирус мозаики злаков ранее был неизвестен. Вирусы кольцевой пятнистости томатов, мозаики коммелины и редиса обнаружены впервые в России.

2. Изучены биологические, физико-химические и иммунологические свойства вирусов, штаммов, изолятов. Получены преиа -раты большинства вирусов. Разработаны и применены высокочувствительные диагностикуш к большинству изучавшихся вирусов, для чего подобраны изоляты и штаммы. Частично охарактеризо -ваны свойства вирионов и их компонентов.

3. Идентифицированы отраяанцие природную изменчивость вирусов штаммы шруса табачной мозаики - 9, з - вируса картофеля, жёлтой мозаики фасоли - 4, мозаики сои - 3 группы,изоляты вирусов мозаики костра - 24 и огуречной мозаики - 15, в том числе изолят ранее известный под названием вируса задержки роста сои.

4. Вирус табачной мозаики впервые в стране найден на ирисах и нарциссах. Вирус моззшш костра впервые обнаружен на

ВЭЙНИКе КОРОТКОЕОЛОСИСТОМ Calamagrostis brachytricha Seud., петушьем просе Echinochioa crus-gaili (L.) ноет, серобород-Ш1К6 сибирском Spodiopogon sibiricus Trin.

5. Изучены взаимоотношения потексЕирусов: Х-картофеля,мозаика белого клевера,.кольцевой пятнистости гортензии, ауку-ба мозаики картофеля. Обосновывается целесообразность пере -вода вируса аукуба мозаики картофеля в истинные представители группы, что однозначно подтвервдается локализацией поли (А) блока на 3' конце Н£К, наличием, по крайней мере, одного общего пептида при ограниченном протеолизе и общих детерыи -нантных груш у Есех изучаемых вирусов, а также сорбцией антител как на гомологичных, так и гетерологичных вирусных частицах и близостью антигенных сеойств по результатам иммунной электронной микроскопии и иммуноферментного анализа.

6. Вопреки ранее распространённому мнению, что мозаика злаков на Дальнем Востоке вызывается вирусом закукливания, доказано, что возбудителем является новый рабдовирус - мозаики злаков 420+50 х б7±8. Показано его иммунологическое родство с трусами закукливания и северной мозаики злаков.

7. ПроЕедённый анализ состава переносчиков вируса мозаики сои на Дальнем Востоке объясняет большую заражённость сои в Восточной Азии в сравнении с другими регионами. Наличие доминирующего, особенно в засушливые годы, переносчика-соевой тли Aphis glycines Mats. - олигофага, жестко ставит вопросы защиты сои от вирусных болезней.

8. 11а основании полученных экспериментальных данных о биологических особенностях и экологии патогенов дано обосно -вание мероприятий по ограничению вирусных болезней растений Дальнего Востока.

ПРАКТИЧЕСКИЕ И МЕТОДОЛОШЧЕСКШ 1Ж0Ж!ДЛЩИ

I. В борьбе с 'вирусными заболеваниями злаков сохраняет актуальность система мероприятий, рекомендованная В.К. Зажурило и Г.М.Ситниковой, дополненная более поздними рекомендациями о пространственной изоляции посевов. Последний upiou особенно эффективен в условиях дальнего лостокэ из-за малых площадей озимых культур и в'борьбе с основным заболеванием мозаикой злаков.

2. Проведённый анализ эпкфитотийноЁ ситуации вируса мозаика сои позволяет прогнозировать больаук заражённость лосе -вов на дальнем Востоке в сравнении с другими регионами, например, в Северной Америке. Поэтому в системе получения оздоровлённого материала сои наряду с борьбой с переносчиками вирусов решающее значение приобретает отбор здоровых семян как по пигментации, так и особенно по люминесценции.

3. Многолетние исследования отдела вирусологии позволили выделить районы наиболее благоприятные для семеноводства картофеля: Елизовсяий на Камчатке, Тымоеский на.Сахалине, ОльсКйй в Магаданской области, Зейский и Белогорский в Амурской области, Чугуевский в Приморском крае, соехоз Аданап для зоны БАМ.

4. Значительно большего внимания заслуживают имеющиеся на Пальнем Востоке возможности выращивания сельскохозяйственных растений в изолированных условиях, провде есого семенных участков, особенно для ограничения вредоносности вируса мо -заики сои и предохранения томатов от заражения вирусом ас -аермии.

5. Выделенный из нарциссов ВТ1Л-412 не заражал испытанные зорта томатов а не вызывал симптомов на других культурах при системном поражении. Целесообразно широко испытать BTM-4I2 в шчестве вакцинного штамма. ■

6. Следует шире использовать для диагностики патогенов в юмплексе методов как ладо используемый, ко простой, и часто эффективный метод включений, например, при работе с потиш-зусаии, так и современный иммуноферкентшй анализ в семено-зодстве с учётом его окупаемости (экономической эффективности).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Крылов A.B.- Растения-индикаторы для вир/сов картофеля Ч Труды ШИ, 1971, Ге 4 "Вирусные болезни сельскохозяйственна растений" вып. 3. С. 54-128.

2. Рейфман В.Г., Крылов A.B., Степакенко В.И., Костин В.д. зозбудители вирусных болезней картофеля на Дальнем Востоке, 'ам кв.

3. Гордейчук А.И., Костин Ъ.Д., Крылов A.b. Практические :етоды диагностики мозаичных вирусов картофеля // Труды

ДИШСХ, 1973. Т. 13, ч. 2. С. 276-278.

4. Рейфман В.Г., Поливанова Т.А., Крылов A.B., Костин В.Д. Степаненко В.И. Вирусные болезни растений на Дальнем Востоке // Сельскохозяйственная.биология. 1973. Т. 8, № 4. С.560-563.

5. Крылов A.B., Гнутова Р.В. Диагностика Ь' - вируса картофеля // Труды ПШ, новая серия. 1973. Т. 15(118), "Выращивание семенного картофеля на безвирусной основе". С. 77-79,

6.. Крылов A.B., Гнутова Р.В., Чиркова Д.А., Киселев Е.П. F - вирус в коллекционных и семеноводческих посевах карто -феля в Приморском крее // Доклада МШИЛ. 1974. №1. С.20-21

7. Чуян А.Х., Крылова П.В., Крылов A.B. О некоторых изоля-тах вируса табачной мозаики на Дальнем Востоке // Тезисы докладов к Всесоюзно^ семинару-совещанию по вирусным болезням . овощных культур. М., 1974. С. 30-31.

8. Чуян А.Х., Степаненко В.И., Крылов A.B. Вирус кольце -ВОЙ ПЯТНИСТОСТИ гортензии Hydrangea macrophylla (Thunb.) DC. в Приморском крае // Труды ЕЛИ, новая серия. 1975. Т. 31(134) "Вирусные болезни растений Дальнего Востока". С. 118-120.-*

Э, Gnutova ß.V~, Krylov А.V.potato A Virus Diagnosis by Serological Methods // Phytopathologische Zeitschrift. 1975-Bd. 83, H S. 311-31910. Чуян А.Х., Крылов A.B. Х-вируо картофеля на хризантеме // Бюллетень Главного Ботанического Сада. 1975. Ьып. 96. С. 64-67.

11. Пинысевич Б.В., Крылов A.B. Выделение и некоторые физико-химические свойства вируса мозаики сои // Виол.науки. 1977. ib II. С. 26-31.

12. Gordejchuk O.G., Jlrylova U.V., Sanonina I.П., Krylov A.V. Virus disease of berry crops in the Soviet Far East 1. Identification of some mechanically transmitted viruses, detected in Primorye territory // Zbl. Bakt., II Abt. 1977. Bd. 132, К 8. S. 686-70713. Соколова E.E., Ларина Э.И., Степаненко В.И., Крылов

A.B. Üipyc мозаики костра на Дальнем Востоке // Труди ЕЛИ, новая серия. 1977.. Т. 48(151) "Вирусные болезни растений Дальнего Востока" вып. 8. С. 53-6С. ' .

14. Чуян А.Х., Мащинка К., Муха В., Крылов A.B. Возбудитель мозаичного заболевания пршулы (Primula obconica liance) в Приморье // Там ке. С. 84-9U. :

15. Гнутова Р.В., Чуян А.Х., Крылова К.В., Рублёва К.Ь., Крылов А.В. Характеристика некоторых штаммов вируса табач -ной мозаики // Вирусные болезни сельскохозяйственных растений и мары борьбы с ними. (Тезисы докладов Всесоюзного со -вещания) Ереван. 1978. С. 28-30.

16. Чуян А.Х., Малевич Б.М., Стрекозова В.Ф., Крылов А.В. Еирус огуречной мозаики в Приморском крае // вирусные болезни сельскохозяйственных растений и меры борьбы с ниш. (Те -зисы докладов Всесоюзного совещания) м. 1978. G. 147-148.

17. Крылов А.В. Вирусы растений Дальнего Востока. Там же. С. 243-244. i

18.- Чуян А.Х., Крылов А.В. Вирус аспермии томатов из хризантемы в Приморском крае и его свойства // Бюллетень Глав -ного Ботанического сада. 1979. Ш 114. С. 84-92.

19. Крадов А.В. Вирусы растений Дальнего Востока СССР // ПУ Тйхоокеанский научный конгресс. Комитет Н. Ботаника. Тезисы докл. 1979. С. 32-33. .

20. Гнутова Р.В., Чуян А.Х., Крылова„Н.В., Рублева Н.Ь., Крылов А.В. Характеристика некоторых дальневосточных штамм -аов вируса табачной мозаики // Шол. наука. 1980. й I. C.3I-37.

21. Крылов А.В., Соколова Е.Е., Немилостива Н.И. Возбудители вирусных болезней злаков // Возбудители болезней саль -¡»«хозяйственных растений Дальнего Востока. Ы., Наука. 1980. 3. 225-245. .

. 22. Крылов А.В., Чуян'А.X., Бутова Р.В., Крылова Н.В., Зтепаненко В.И. Штаммы вируса табачной мозаики на Дальнем Зостоке //Plant Virology, 1976, Bratislava.1980. P.175-- 185.

'23. Крылов А.В., Малевич В.М., Садоцкай М.В., ГнутоЕа ?.В.; Рублева Н.В. laipyc мозаики редиса - новый для СССР сомовирус // Еиол. науки. 1981. № 3. С. 24-30.

24. Крылов А.В. шрусы растений СССР (сш5сок) // Сельско-:озяйственная биология. 1981. Т. 16, & 3. С, 432-434.

: 25. Крылов А.В., Бородина Е.Е., Федотина Ъ.Л., Минская [.А. Еабдовирус, поражащий злаки на Дальнем Востоке СССР '/Proceedings of the 9th Conference of the Czechoslovak Plant Virologists, Plant Virology! Brno Czechoslovakia (31/8-4/9 1981). P. 85-89.

26. Крылов А.Ii. ¿ирусы растений Дальнего Востока. I.Iö&o-, бромо-, к комовирусы // Вирусные болезни растений. IS8I.

О. 62-67.

27. Бородина З.Е., Рублева Н.Б., Крылов A.B. Закукливание злаков е курской области и Приморском крае // Там же. С. 68-75. . ' / -

28. Бородина Е.Е,, Федотина Б.Л., Крылов A.B. Круг растений-хозяев и морфология вируса мозаики злаков.// Виол.науки. 1982. » 2. С. 22-29.

29. Artyukova E.V., Krylov A.V. Physical and Chemical Properties of Potato АисиЪа Jiosaic Virus and its Coat Protein // Phytopathologische Zeitschrift. П983« Bd. 107, Н 3. S. 265-275.

30. Чуян A.I., Стрекозова В.Ф., Крылов A.B. Обнаружение и сравнительное изучение двух штаммов вируса' табачной мозаика, изолированных из нарциссов // Тезисы докладов 8 рабочего совещания руководителей служб защита растений региональных ботанических садов СССР (2I-24/9-.82). 1983. С. 48-49.

31. Крылов A.JB. Вирусы растений Дальнего Востока. П,Куку-мовирусы // Влияние вирусов на обмен растений. 1983. С.46-48.

32. Крылов A.B., Костин Б.Д. Вирусы растений Дальнего Востока. Ш.йотеовирусы // Там же. С. '49-60.

33. Крылов A.B. . Ларина Э.И. 'Терминологический указатель вирусов, поражающих сельскохозяйственные- культуры в СССР (методические указания). Л. ШЗР. 1983. 17 с.

34. Штейн-Марголина В.А., Сапоцкяй М.Б., Крылов A.B. Электронная микроскопия листьев растений, заражённых вирусом мозаики редиса // Ультраструктурная организация растений. У Всесоюзный симпозиум по ульграструктуре растений. (Тезисы докладов). Кишинев. 1983. С. 173.

35. Чуян А.Х., Стрекозова В.Ф., Крылов A.B. Особенности шруса жолтой мозаики фасоли, изолированного из гладиолуса в Приморье // Теория и практика использования иммунитета сельскохозяйственных культур к вирусным болезням. УШ Всесоюзное . совещание (Тезиса докладов). Вильнюс. 1984. С. I6&-I68. '

36. Чуян А.Х., Стрекозова В.Ф., Крылов A.b. Воспрвшчи -' еость растений к штамму ВИЛ-412 - с нарциссов'// 'Там же.' С. 168-170. •' ' . : ' '•/' - "у"'-- '' "У

37. АртакоЕЭ £.В., Горбулев В.Г., Родионова H.H..Крылов ,

Li., Атабеков K.J.". Сравнительное изучение структурных осо -Ценностей и трансляции ШК потексвирусов // ¡молекулярная 5иолог;;'л. 1985. Т. 19, вып. 4. С. I02I-I028.

38. Крылов А.Б., Артюкова Е.В.., Гнутова ?.Ь., Ыоисеенко I.II,, СибирчкоЕа И.И., Чуян А.Х. Сравнительное изучение по -гексвирусов Советского Дальнего Востока // Тезисы УШ съезда т. Алма-Ата. 1985. Т. 5. С. 19.

39. Минская Л.А., Калашникова Л.В., Алексеева Т.К., Крылов L.3. К вопросу об идентификации растворимых антигенов Еируоов ¡озаики и закукливания злаков // Взаимоотношения вирусов с ¡летками растения-хозяина. Владивосток. IS85. С. 40-49.

•40.. Поливанова Т.А., Крылов A.B. Вирусы, вдантафицирован-[ые на зернобобовых культурах в Приморье // Там же. С.87-93.

41, Крылов A.B. Вирусы растений Дальнего, Востока СССР и .рилегающах территорий // Проблемы защиты растений в тропиках . субтропиках. Ы.: Уди. 1985. С. 87-95.

42.Krylov А.V., Artyukova E.V. Comparative studies on the tructural components of soce potexyirus confira the validity С their belonging to the group // Recent results in plant ¡.rology. Gotha (GDB). 1936. P. 52-5343. Сибирякова И.И., Kypuca A.B., Гнутова P.B., Павленко

,.Ф., Оводов iO.C., Крылов A.B. Исследование ишуноферментны-и методами антигенного родства вирусов кольцевой пятнистое-а гортензии, мозаики белого клевера, Х-вируса картофеля и укуба мозаики картофеля // Шол. науки. 1987. № 2. С.20-26.

44. Артюкова Е.Ъ., Родионова ПЛ., Крылов A.B., Атабеков .Г. Особенности трансляции ШК вируса аукуба мозаики карто-еля //Молекулярная биология. 1987. Т. 21, й 2. С. 448-455.

45. Сибирякова И.И., Гнутова Р.В., Толкач Б.Ф., 1^блава .В.,- Чуян А.Х., Крылов A.b. Биологические свойства местного золята вируса некроза табака и получение специфических сы -ороток // Сельскохозяйственная биология. 1987. Jê 5.С. 55-60.

46. Теплоухова Т.Н., Ыалевнч В.1Л., ^ублегз Н.В., Степанен-о В.К., Гнутова Р.Б., Крылов A.B. ¡ярусные.болезни овощных ультур в Приморском крае // Пути повышения продуктивности зстениеводства, кормопроизводства и садоводства на Дальнем зстоке. Владивосток: ДВО АН СССР. 1987. С. 182-187.

47. Шнская Л.А., Федотйна Б. Д., Бородина Е.Щ.,Крылов A.B. збдовирусы злаков СССР. М., Паука. 1987. 128 с.

48. Крылов A.B., Ларина Э.И., Артшова Е.Б. Кадастр вирусов растений СССР. Препринт. Владивосток. 1987. 51 с.

49. Крылов A.B. Барусы растений КНР и Японии. Деп.04.08.87 И 553У-В. Ьладивосток. 1987. 35 с.

50. Егейн-Марголина В.А., Сапоцкий М.В., Крылов A.B. ¡алек-тронкомикроскоаическоо исследование растений, заражённых вирусом мозаики редиса // лав. АН СССР. Сер. биол. 1988. & I. С. 13-21.

51. Артшова Е.В., Моисеенко Л .К., Толкач З.Ф., Крылов A.B. Выделение и некоторые свойства нотивируса,- изолированного из традесканции белоцвзтковой // Виол, науки. 1938.

8. С. 30-34.

52. Артхшова Е.В., Крылов A.B. Вирусы группы Potexvirus // Фнтовирусологические исследования на Дальнем Востоке.Владивосток: ДВО АК СССР. 1989. С. 30-53.

53. Артшова Е.В., Пус С.Г., Крылов A.B. Некоторые физико-химические свойства вируса жёлтой карликовости лука // Виол, науки. 1990. й 7. С. 27-39.

Информация о работе

Крылов, Александр Васильевич
доктора биологических наук
Санкт-Петербург-Пушкин, 1994
ВАК 06.01.11

Автореферат

Похожие работы