Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение химического состава и особенностей накопления биологически активных соединений в плодовых телах Laetiporus sulphureus (Bull.: fr.) murr. в условиях Прибайкалья

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации по теме "Изучение химического состава и особенностей накопления биологически активных соединений в плодовых телах Laetiporus sulphureus (Bull.: fr.) murr. в условиях Прибайкалья"

АГАФОНОВА Софья Васильевна

ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА И ОСОБЕННОСТЕЙ НАКОПЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В ПЛОДОВЫХ ТЕЛАХ Laetiporus sulphureus (BULL.: FR.) MURR. В УСЛОВИЯХ ПРИБАЙКАЛЬЯ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

03 00 12 - физиология и биохимия растений 03 00 16 - экология

003ieiat>»

003161959

АГАФОНОВА Софья Васильевна

ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА И ОСОБЕННОСТЕЙ НАКОПЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В ПЛОДОВЫХ ТЕЛАХ Laetiporus sulphureus (BULL.: FR.) MURR. В УСЛОВИЯХ ПРИБАЙКАЛЬЯ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

03 00 12 - физиология и биохимия растений 03.00 16 - экология

Работа выполнена в Сибирском институте физиологии и биохимии растений СО РАН

Научные руководители доктор биологических наук

Боровский Геннадий Борисович

кандидат биологических наук Пензина Татьяна Александровна

Официальные оппоненты доктор биологических наук

Озолина Наталья Владимировна

кандидат биологических наук Морозова Татьяна Иннокентьевна

Ведущая организация

ГОУ ВПО Иркутский Государственный Университет

Защита состоится "12 ноября" 2007 г. в 13°° час на заседании диссертационного совета Д 003 047 01 при Сибирском институте физиологии и биохимии растений СО РАН по адресу 664033, ул. Лермонтова, 132, а/я 317.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Сибирского института физиологии и биохимии растений СО РАН

Автореферат разослан "_" 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Д003 047.01

кандидат биологических наук

ГП Акимова

ОБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние десятилетия возрос интерес к источникам биологически активных соединений грибного происхождения, обладающих протеолитической,

иммуномодулирующей, антиоксидантной, антибиотической и другими видами активностей [Белова, 1991, Mizuno et al., 1992; Wasser, 2002, Koh et al, 2003; Новикова, 2004]. В связи с этим актуальными являются исследования направленной регуляции биохимической активности высших грибов

Химический состав тканей и органов высших растений напрямую зависит от условий обитания растительного организма [Boweler, 1992, Salin, 1987, Wellekens, 1994]. Существует мнение [Гамерман, 1976], что содержание биологически активных веществ у высших растений закономерно падает с возрастанием географической широты места произрастания Относительно высших грибов, вопрос о накоплении в них биологически активных веществ в зависимости от условий произрастания остается мало исследованным.

Возможность использования трутовых грибов как наиболее доступных объектов в биоконверсии органических отходов, в пищевой индустрии и медицине предопределяет необходимость более глубокого исследования их химического состава, а так же определения условий, влияющих на накопление биологически активных соединений

Объектом исследования является ксилотрофный базидиомицет Laetiporus sulphureus (Bull.. Fr) Murr - семейство Polyporales, относящийся к грибам бурой гнили Основной ареал L sulphureus расположен в зоне широколиственных лесов По экологическим характеристикам гриб относится к термофилам [Мухин, 1993], в Прибайкалье его плодоношение приходится на термический максимум региона Гриб легко культивируется как в лабораторных, так и в природных условиях, в короткий срок образует плодовые тела большой биомассы Обладает выраженной антимикробной, протеолитической и антиоксидантной активностью [Turkoglu, 2007]

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является определение влияния климатических факторов среды на химический состав и особенности накопления биологически активных соединений в плодовых телах Laetiporus sulphureus (Bull Fr ) Murr в условиях Прибайкалья

Для достижения этой цели были поставлены следующие

задачи:

1. Изучить химический состав плодовых тел прибайкальского штамма L sulphureus

2 Изучить динамику накопления биологически активных соединений в процессе развития плодовых тел L sulphureus

3 Определить влияние климатического фактора на характер накопления углеводов, липидов, органических кислот, аминокислот, минерального состава плодовых тел двух прибайкальских штаммов L sulphureus в разных ландшафтах Прибайкалья

4. Показать роль климатических факторов среды на проявление антиоксидантной активности плодовых тел L sulphureus в экспериментах т vivo и in vitro Положения, выносимые на защиту.

1) Химический состав и содержание биологически активных соединений в плодовых телах L sulphureus обусловлены климатическими факторами среды

2) Наибольшее содержание биологически активных соединений в плодовых телах L sulphureus наблюдается в условиях среднетаежного ландшафта

Научная новизна работы. Впервые исследован химический состав плодовых тел прибайкальских штаммов Laetiporus sulphureus Обнаружено присутствие алкалоидов и фенолов, ранее не идентифицированных в химическом составе данного гриба Впервые из плодовых тел L sulphureus выделены и охарактеризованы два новых полисахарида, латипоран А (разветвленный Р-(1—>3)-галактоманноглюкан) и латиглюкан I (линейный |3-(1—>3)-гомоглюкан). Установлено, что содержание органических кислот, углеводов, жирных кислот, фенолов, алкалоидов и аминокислот в значительной степени определяется климатическими условиями места произрастания гриба - наибольшее содержание биологически активных соединений в плодовых телах отмечено в среднетаежном ландшафте. Установлено, что доминирующую роль в проявлении антиоксидантного эффекта экстрактов из плодовых тел L sulphureus играют фенольные соединения, водорастворимые полисахариды и каротиноиды. Показано, что наибольшее содержание биологически активных соединений и наиболее выраженный антиоксидантный эффект приходятся на фазу зрелого плодового тела

Теоретическая и практическая значимость работы. Изучение химического состава плодовых тел прибайкальских

штаммов L sulphureus вносит вклад в область изучения грибных метаболитов Полученные данные позволяют оценить влияние климатических факторов среды на процессы, связанные с синтезом и накоплением метаболитов в плодовых телах базидиомицетов. Экспериментальный материал позволяет рассматривать L sulphureus в качестве объекта для дальнейших исследований биологически активных соединений с целью расширения спектра лекарственных препаратов грибного происхождения. Выявление высокой степени антиоксидантной активности экстрактов плодовых тел L sulphureus позволяет рассматривать данный гриб в качестве сырья для разработки биологически активных добавок.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на Втором конгрессе медицинской микологии (Москва, 2004), Третьем конгрессе медицинской микологии (Москва, 2005), Пятом конгрессе медицинской микологии (Москва, 2007), 6-й Международной конференции «Проблемы лесной фитопатологии и микологии» (Москва-Петрозаводск, 2005)

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 150 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, методической и экспериментальной частей, выводов и списка цитируемой литературы Работа включает 25 рисунков, 37 таблиц и 3 схемы. Список литературы состоит из 250 источников, в том числе 200 иностранных авторов

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В эксперименте одновременно было задействовано два прибайкальских штамма №1 и №2, что дало представление о роли штаммовой вариабельности В эксперименте, в качестве субстрата для получения плодовых тел L sulphureus использовалась единая древесина Larix sibirica Ledb Данный прием позволил нивелировать влияние субстрата на показатели биохимической характеристики

плодовых тел L sulphureus. Для работы готовились спилы высотой 1-15 см и диаметром 15 см Инокулировали субстрат десятисуточным мицелием L sulphureus Инкубация проходила при температуре 23 °С до полного обрастания субстрата в течении 24 дней Иммитированные пеньки в количестве 15 штук каждого штамма переносили по разработанной ранее методике на экспериментальные плантации (ЭП) в естественные ландшафты [Войников и др, 2005] Полевые эксперименты проводили в природных ландшафтах, значительно различающихся параметрами

трех наиболее важных для грибов факторов: освещенности, температуры, влажности воздуха. Измерения проводились метеометром на уровне почвы и травостоя - основных ярусов обитания дереворазрушающих грибов Параметры фиксировались в июле, месяце, на который приходится термический максимум региона исследования. Формирование плодовых тел L sulphureus на площадках происходило в период термического максимума региона - с июля по август. Образцы плодовых тел получали в течение двух лет-2005 и 2006 гг.

Плодовые тела L sulphureus в лабораторных условиях получали в ростовых камерах, при температуре 21°С Формирование зачатков плодовых тел происходило на 14 сутки после полного обрастания субстрата при регулярном воздушно-капельном увлажнении

Качественный анализ извлечений на наличие основных групп органических соединений проводили с использованием характерных реакций Для исследования индивидуальных соединений использовали методы гель-фильтрации на колонках с Сефадексом G-100, 200 (полисахариды), препаративной хроматографии на бумаге FN-16 (органические кислоты), FN-12 (углеводы, фенолокислоты), FN-2 (фенолокислоты) Высокоэффективную тонкослойную хроматографию проводили при анализе углеводов на ВЭТСХ пластинах Армсорб (Реахром). ВЭТСХ - денситометрию проводили с применением планшетного сканера Mustek 2000 и пакета программ для сканирующей денситометрии TLC-Manager 3 1 (@PinSoft 2005) Анализ аминокислотного состава проводили на автоматическом аминокислотном анализаторе ААА-339

Газо-хроматоспектрометрический анализ проводили на приборе Agilent с масс-селективным детектором. Исследование состава органических кислот проводили на катионообменной смоле КУ-2-8 в Н+-форме Ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе проводили при очистке водорастворимых полисахаридов Температуру плавления исследуемых соединений определяли в запаянных капиллярах на приборе IA-9100. Оптическое вращение (а™) определяли на поляриметре - Coers, 1 = 10 см при 20°С. Спектральные исследования проводили на спектрофотометрах СФ-26, СВ-4, Cecil 2011, в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см ИК-спектры регистрировали на ИК-Фурье спектрометре Perkin-Elmer на стекле КРС-5 в интервале длин волн 450-4000 см"1. Спектры 13С-ЯМР регистрировали на ЯМР-спектрометре VARIAN-VXR 500S. Спектры сняты для 1% растворов

веществ в de-ДМСО и NaOD. Эмиссионно-спектральный анализ проводили на спектрографе ДФС-8

Антирадикальную активность гексановой, этилацетатной и ацетоновой фракций из плодовых тел L sulphureus определяли т vitro ДФПГ-методом [Lee et al, 1956] Антиоксидантная активность гексановой, этилацетатной и ацетоновой фракциий плодовых тел L sulphureus исследовалась с применением кинетической модели окисления p-каротина пероксидом водорода в присутствии ДМСО Антиоксидантную активность in vivo водных отваров плодовых тел проверяли на модели токсического поражения печени крыс ССЦ. О степени защиты судили по концентрации малонового диальдегида и диеновых конъюгатов в гомогенате печени животных.

При обработке результатов количественных анализов использовали методы математической статистики [Гавриков, 2002]. Регрессионный анализ выполняли с применением пакета программ Advanced Grapher ver 2 07 (Alentum Software Inc ).

КЛИМАТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Полевые исследования проводились в районах Прибайкалья, различающихся показателями эколого-климатического фактора (табл 1)

Таблица 1

Эколого-климатические характеристики экспериментальных

плантаций*

ЭП £ среднесуточной температуры воздуха выше 10°С°, °с Интенсивность солнечного излучения, мДж/м2 Количество осадков за год, мм Индекс сухости

«Быстрая» 1100 4000-4200 500 <0 45

«Усть-Кут» 1495 3400 - 3600 350 0 45-1 00

«Большое Голустное» 1000 4400 300 100

*[Атлас Иркутской области, 2003 ]

Согласно поставленным задачам, для получения плодовых тел Ь зЫрЬтеия в лесостепном, среднетаежном и горно-таёжном ландшафтах были заложены экспериментальные природные плантации. Названия экспериментальным плантациям (ЭП) даны по административным пунктам, вблизи которых они изучались. «Быстрая»— с Быстрое, Слюдянский район, «Усть-Кут»- г. Усть-Кут; «Б. Голоустное» - с. Большое Голоустное, Иркутский район В

период плодоношения Ь йЫрЪигет на экспериментальных плантациях проводили исследования микроклиматических параметров наиболее важных для дереворазрушающих грибов факторов - свет, температура, влажность (табл.2).

Таблица 2

Микроклиматические условия экспериментальных плантаций

Год Температура,°С Освещенность, 104люкс Влажность,%

h=20 см h=50см h=20см h=50см h=20 см h=50 см

«Быстрая»

2005 18±0 1 21±0 4 5 5±2 3 7 8±2 9 58 6±1 7 57 6±1 1

2006 17 5±0 5 20 8±1 2 5 9±1 2 8 5±2 5 58 2±1 5 57±1 9

«Усть-Кут»

2005 25±4 1 25 6±5 4 8 9±1 2 12 2±0 1 58 6±0 7 50 6±1 0

2006 23±3 3 24 6±6 8 9 3±1 5 14 2±0 8 56 2±0 3 54 0±1 0

«Б.Голоустное»

2005 24 3±0 1 17 9±0 6 19 0±1 2 30 2±0 1 40 6±0 7 43 6±1 0

2006 24 6±0 1 17 5±0 2 19 5±1 8 314±0 5 38 6±0 2 40±0 1

Примечание h- высота основных горизонтов обитания дереворазрушающих грибов

ИССЛЕДОВАНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТВА ПЛОДОВЫХ ТЕЛ Laetiporus sulphureus (Bull.:Fr.) Murr.

В результате проведенного качественного анализа, установлено присутствие в плодовых телах L sulphureus следующих групп соединений каротиноидов, алкалоидов, тритерпеновых и фенольных соединений, аминокислот, углеводов, белков и полисахаридов Присутствие производных антрацена, флавоноидов и кумаринов не отмечено ни в одной из исследованных фракций Полученные результаты подтвердили уже известные факты обнаружения в плодовых телах L sulphureus полисахаридов [Alquini et al., 2004], белков [Valandon, Mummery, 1969], и каротиноидов [Weber, 2004]. Впервые обнаружено присутствие алкалоидов и фенольных соединений Поскольку сведения о систематическом исследовании химического состава данного объекта отсутствуют, нами проведено детальное изучение органических кислот, углеводов, аминокислот, жирных кислот и элементного состава

Органические кислоты. В результате хроматографического анализа водного извлечения в плодовых телах L sulphureus обнаружены вещества, дающие положительную реакцию с бромкрезоловым зеленым. С применением препаративной

хроматографии на бумаге выделено пять соединений, которые идентифицировали по данным температуры плавления исходных соединений и их анилидов, а также проб смешения, характерных качественных реакций, молекулярной массе, величины оптического вращения, хроматографической подвижности, ИК- и 13С-ЯМР-спектроскопии с винной, лимонной, яблочной, малоновой и янтарной кислотами.

Результаты исследования выявили, что общее содержание органических кислот в плодовых телах Ь згйрЬигет варьирует от 2 27 до 7.99%, эти данные свидетельствуют о значительном влиянии климатических факторов на характер накопления данного класса соединений. Максимальное содержание органических кислот приходится на образцы плодовых тел, полученных на ЭП «Усть-Кут» - 3 53 - 7 99% Содержание органических кислот на плантациях «Быстрое» и «Б Голоустное» незначительно отличаются -233.07% и 2.35 - 3 65% соответственно Представленные данные позволяют предположить, что характер накопления органических кислот в плодовых телах Ь ягЛркигеиь определяется температурными условиями в период вегетации. Вероятно, высокая теплообеспеченность и контрастность среднесуточных температур, характерные для ЭП «Усть-Кут», обеспечиваются накоплению данного класса соединений в плодовых телах гриба ЭП «Быстрая» и «Б Голоустное» в период вегетации находятся под охлаждающим действием оз. Байкал, и поэтому температурный режим этих площадок обладает пониженной теплообеспеченностью, но не отличается резкими температурными перепадами. Данный факт объясняет незначительную разницу, которая варьируется в пределах 3% процентов

Углеводный комплекс. Фракционирование углеводного комплекса проводили с использованием метода Бэйли, в результате чего выделены фракции свободных углеводов (Ьвв), водо- (Ь8\¥) и щелочерастворимых полисахаридов (ЬБА) При исследовании фракции ЬББ в плодовых телах Ь ви1р1шгеш установлено присутствие трех соединений, маннита (ЫМ), арабита (ЬР-2) и трегалозы (ЬБ-З). Доминирующим компонентом комплекса свободных углеводов является маннит, для детальной идентификации которого проведено его выделение.

Т пл 165°С (Н20), депрессии с достоверным образцом маннита не дает, ас20 +28° (с 0.5, 1% Ыа2В407). ИК-спектр (утах, пленка, см"1). 476, 495, 519, 630, 654, 720, 876, 927, 953, 1019, 1089, 1195,1261,1320,1351,1373,1432,1458,2917, 2939, 2954,2972.

Водорастворимые полисахариды (ВРПС). Общее содержание ВРПС (LSW) в плодовых телах Ь Би1р1гигеш составляет 3.67% Они представляют собой слабо окрашенные компоненты, растворы которых не дают реакции Сакса с раствором йода Для дальнейшей очистки полисахаридного комплекса использовано фракционирование с применением спиртового градиента, в ходе которого получено 5 фракций (табл 3).

Таблица 3

Фракция Содержание в LSW', % Моносаха ридный состав, %

А га Рис Gal Glc Man Rha Xyi

LSW'-l 8 12 04 60 19 4 515 17 3 4 1 12

LSW-2 12 77 - 1 8 13 2 59 4 24 7 03 05

LSW'-З 8 46 - 12 52 1 84 37 8 0 1 03

LSW-4 6 39 - 88 57 3 - 33 4 0 1 03

LSW-5 2 15 - 42 59 2 - 35 9 02 04

Количественный анализ гидролизатов показал, что все выделенные фракции гетерогенны по составу Гель-хроматографирование фракций LSW' показало, что суммарный комплекс гетерогенен и состоит из шести полисахаридов, названных нами латипоранами, которые отличаются величинами молекулярного веса: А - 5 6 104 Да, В - 3 9 104 Да, С - 2 7 104 Да, D -2 5 1 04 Да, Е - 1 9104 Да, F - 1 5 104 Да Доминирующим компонентом ВРПС является латипоран А, содержание которого составляет более 30% от массы LSW' (0 28% от массы абс -сух. сырья) Анализируя данные периодатного, хромового окисления, helix coil-теета, деградации по Смиту, результатов ИК, 13С-ЯМР-спектроскопии (рис 1) и метилирования, установлено, что латипоран А представляет собой |3-(1—>3)-связанный гетероглюкан, содержащий в боковых цепях галактозу, маннозу и следы фукозы, рамнозы и ксилозы, предварительная структура которого приведена ниже'

м м

I I

P"GIcp-(l[—>3)-p-GIcp(l—>3)-p-Glcp(l—>3)-p-Glcp(l—>3)-p-Glcp(l—►3)-P-GlCp(l]36.37^3)-p-GlCp

Щелочерастворимые полисахариды (ЩРПС) отличаются значительно большим содержанием в сравнении с водорастворимыми полисахаридами и составляют до 55 12% от массы плодового тела L sulphureus

и

Рис 1 13С-ЯМР-спектры нашивного и деградированного по Смиту латипорана А.

А - латипоран А, Б - участок 13С-ЯМР-спектра латипорана А в диапазоне 10-20 м д, В - 13С-ЯМР-спектр деградированного по Смиту латипорана А Указаны порядковые номера углеродных остатков пираноз Ба - галактоза, - глюкоза, Бс - фукоза, Мп - манноза

Из комплекса ЩРПС выделены фракции Ь8А-1 и Ь8А-2, отличающиеся по ряду физико-химических свойств (табл. 4)

Таблица 4

_Физико-химические показатели фракций ЩРПС

Содержание, % Содержание, % <

углеводов фенолов золы азота

Ь8А-1 4146* 80 07±6 61 < 0 5% 0 98±0 04 5 51±0 28 -16

Ц5А-2 1 24* 72 24±5 29 0 74±0 01 4 42±0 16 -5

Ь8А-1а 38 72** 97 12±4 85 - < 1 0% - -17

Ь8А-1Ь 601** 95 47±4 12 -15

* - содержание в плодовых телах, ** - содержание в Ь8А-1

С применением фракционного осаждения этанолом фракцию ЬвА-! разделили на два компонента - Ь8А-1а и ЬБА-ГЬ, выходы

которых составили 38.72 и 6 01% от массы LSA-1. Оба компонента отличаются высоким содержанием углеводов, содержание минеральной примеси не превышает 1%, азот и фенолы не обнаружены (табл.4) LSA-la по результатам гель-хроматографии на Сефадексе G-200 гомогенен и выходит единственным пиком, соответствующий молекулярной массе 1.8 105 Да. В составе LSA-lb обнаружено два вещества с молекулярными массами 1.8-105и 1.5 105 Да.

По данным БХ и ВЭТСХ после полного гидролиза LSA-la обнаружена только глюкоза Характеристическое поглощение при

892 см"1 свидетельствует о присутствии Р-связи между остатками

„20

глюкозы, о чем свидетельствует отрицательная величина D . После периодатного окисления и деградации по Смиту, а также окисления хромовым ангидридом и метилирования установлено наличие линейной, структуры, содержащей остатки Р-(1—>3)-глюкозы В 13С-ЯМР спектре LSA-la (рис 2) наблюдается шесть сигналов- 102.1 (СО, 85 1 (С3), 74 2 (С5), 71.6 (С2), 69 8 (С4) и 612 мд (Сб), характерные для спектров других линейных р-(1—>3)-глюканов (курдлан Alcaligenes faecalis, глюканы Termitomyces eurhizms и Omphalia lapidescens), что свидетельствует о близости их структур

Максимум спектра поглощения конго красного претерпевает батохромный сдвиг в присутствии LSA-la (helix coil-теет, рис 3), что характерно для "скрученных" (helical) структур, каковыми являются Р-(1 —»3)-глюканы

Таким образом, доминирующий компонент комплекса щелочерастворимых полисахаридов плодовых тел L sulphureus, названный нами латиглюканом I, является линейным |3-(1—>3)-гомоглюканом со следующей структурой:

P-Glcp-(1[—3)-p-Glcp(l],,->3)-p-Glcp , где п = 1098-1099

Результаты химических исследований свидетельствуют о том, что ЩРПС плодовых тел L sulphureus являются Р-(1—>3)-связанными гомоглюканами, содержащими остатки глюкозы в боковых цепях, присоединенных к Сб-атому глюкозы основной цепи.

При исследовании группового состава углеводного комплекса плодовых тел L sulphureus из разных мест произрастания установлено, что на долю свободных углеводов приходится 1.172 66%; до 80% компонентов этой фракции приходится на маннит (0 87-2 02%).

Рис 2 13С-ЯМР-спектр LSA-la Рис 3. Helix coil-mecm

Общее содержание комплекса ВРПС составляет 0.57-2.56% ЩРПС представляют собой доминирующую группу полисахаридов плодовых тел L sulphureus, их содержание может составлять 24.3862 93%

Установлено, что климатические факторы среды оказывают влияние на характер накопления углеводных компонентов в плодовых телах L sulphureus ЭП «Усть-Кут» отличается повышенным содержанием свободных углеводов и водорастворимых полисахаридов Данный факт объясняется следующим: поскольку L sulphureus, является термофилом [Бондарцев, 1953], ночные температуры экспериментальной плантации «Усть-Кут» (7 - 10°С) [Справочник по климату СССР, 1966], для грибов данной экологической группы являются лимитирующими В этом случае происходит инициация процессов депонирования питательных веществ и соединений, являющихся криопротекторами, которые входят в состав комплекса свободных углеводов (СУ), а также ВРПС

Для плодовых тел, полученных на экспериментальной плантации (ЭП) «Б.Голоустное», характерно повышенное содержание ЩРПС («Быстрое» -36.18-51 60%,«Усть-Кут» - 24.38 -49.08%; «Б Голоустное» 36.18 - 62.93%). Территория данной ЭП относится к зоне «дождевой тени» и характеризуется малым количеством выпавших осадков (300 мм) Высокая степень инсоляции (4400 мДж/м2) и недостаточное увлажнение (индекс

сухости 1 00) характерные для ЭП «Б Голоустное» [Справочник по климату СССР, 1966], способствуют накоплению ЩРПС в плодовых телах трутовика серно-желтого Данный факт свидетельствует о влиянии увлажнения и инсоляции на накопление ЩРПС, что может быть непосредственно связано с развитием защитных скелетных структур - клеточных стенок, основным компонентом которых у базидиомицетов являются глюканы, доминирующие в комплексе ЩРПС.

Аминокислоты. При исследовании состава свободных аминокислот установлено, что для плодовых тел L sulphureus характерно присутствие 24 веществ, общее содержание которых может составлять 1.00-6.59%. Обнаружено присутствие представителей 4 групп аминокислот моноаминомонокарбоновые (аланин, цистеиновая кислота, глицин, изолейцин, лейцин, метионин, серин, треонин, тирозин, валин, а- и у-аминомасляные кислоты), моноаминодикарбоновые (аспарагин, глутамин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты), диаминомонокарбоновые (аргинин, орнитин, цитруллин, лизин) и гетероциклические (пролин, оксипролин, гистидин) Из 8 незаменимых найдено 6 аминокислот изолейцин, лейцин, лизина, метионин, треонин и валин. Общий спектр аминокислот для каждого плодового тела различен как по качественному, так и по количественному составу

Установлено, что в число десяти наиболее часто встречающихся аминокислот с наибольшим содержанием для всех изученных образцов плодовых тел входят глутамин (1.69), глутаминовая кислота (1.81), лейцин (1.96), аргинин (2.72), тирозин (3.16), аланин (3.41), серин (3.44), оксипролин (3.53), у-аминомасляная кислота (3 71) и глицин (3.80)

При сравнении спектров индексов накопления для экспериментальных плантаций (ЭП) следует отметить, что они отличаются по характеру накопления отдельных компонентов

Для плантации «Б. Голоустное» и «Усть-Кут» характерно высокое содержание глутамина и глутаминовой кислоты (Rc = 0 63, 0.63 и 0.85, 0.68, соответственно), в отличие от площадки «Быстрое», доминирующими соединениями которой являются гидроксипролин и лейцин (Rc = 0 7, 131, соответственно). Пролин, цитруллин и а-аминомасляная кислота обнаружены только в образцах ЭП «Усть-Кут», валин - только в образцах ЭП «Б Голоустное» Метионин не обнаружен в плодовых телах «Быстрое», равно как и глутамин в образцах из той же площадки штамма LS-Br-0804 Это может быть обусловлено стресс-факторами (низкие, относительно дневных,

ночные температуры, недостаток влаги, угнетающий уровень инсоляции) и, как следствие, адаптацией грибов к экстремальным условиям произрастания для ЭП «Усть-Кут» и ЭП «Б.Голоустное»

При исследовании особенностей изменения группового состава аминокислот, а также их суммарного содержания, следует отметить больший биосинтетический потенциал плодовых тел, полученных с ЭП «Усть-Кут» Междуштаммовых отличий при исследовании данного класса соединений обнаружено не было

Содержание белка в плодовых телах L sulphureus составляет 12 8-45 1%, что вполне характерно для базидиомицетов

Жирные кислоты. Общее содержание нейтральных липидов в плодовых телах L sulphureus составляет 0.60-1 03%. Для компонентного состава липидов характерен диапазон жирных кислот с длиной цепи С12-С25; доминирующими являются кислоты С^-С^-ряда. Насыщенные жирные кислоты составляют 27.7942 39% от суммарного содержания нейтральных липидов и представлены 11 веществами лауриновая (12-0), миристиновая (14-0), пентадекановая (15-0), пальмитиновая (16 0), маргариновая (17.0), стеариновая (18 0), арахиновая (20-0), бегеновая (22:0), трикозановая (23.0), лигноцериновая (24:0) и пентакозановая (25'0) Основные составляющие этой фракции - пальмитиновая и стеариновая кислоты, на долю которых приходится 16.93-21.65 и 3.74-7 49%, соответственно Содержание минорных компонентов -12-0, 20-0-25-0 - составляет не более 5%.

На долю ненасыщенных кислот приходится около 70% липидного комплекса, который состоит из 4 представителей ряда моно- и диеновых кислот, пальмитолеиновая (16:1п-7), цис-вакценовая (18-1п-7), олеиновая (18.1п-9) и линолевая (18:2п-6) Содержание олеиновой и линолевой кислот наибольшее - 10.1519.95% и 31.68-49 17%, соответственно, причем последняя является доминирующим соединением всего комплекса нейтральных липидов

Междуштаммовые отличия наблюдаются при исследовании качественной картины состава жирных кислот для некоторых мест произрастания. Количественный состав жирных кислот для обоих штаммов также подвергается изменениям для штамма №1 обычно характерно большее, чем у штамма №2, содержание таких ненасыщенных кислот, как олеиновая и линолевая, насыщенных -пальмитиновой и маргариновой Общее содержание ненасыщенных кислот у штамма №1, всегда выше в сравнении со штаммом №2 на 2-18%.

При проведении сравнительного анализа накопления классов нейтральных липидов в плодовых телах Ь sv.lphv.reus в зависимости от климатических условий, можно выявить некоторые особенности. «Быстрое» насыщенные жирные кислоты (ЖК) - 28.86-36.16%, ненасыщенные ЖК - 43.77-62 45% «Усть-Кут» насыщенные ЖК -29.84-42 39%, ненасыщенные ЖК - 54.77-69 94% ;«Б.Голоустное» насыщенные ЖК - 27.79-39 99%, ненасыщенные ЖК - 57.63-58 72% Пониженный ход ночных температур, характерный для ЭП «Усть-Кут» обуславливает высокое содержание накопление ненасыщенных кислот, олеиновой и линолевой кислот, а также суммарное содержание этой группы липидов.

Показатели атмосферного увлажнения влияют на накопление насыщенных кислот, чем ниже уровень влажности, тем выше содержание пальмитиновой кислоты и родственных соединений.

Наибольшее содержание липидов характерно для ландшафта с резкими перепадами температур в период развития плодовых тел.

Элементный состав. Для всех образцов плодовых тел Ь яи1рЬигеш был определен элементный состав - 23 элемента Установлено, что эколого-климатические параметры не влияют на характер накопления элементов в исследованных объектах Поскольку содержание элементов в плодовых телах зависит от элементного состава субстрата, то данный факт подтверждает частичное нивелирование субстратного фактора в данном эксперименте Это особенно заметно при сравнении концентрации макроэлементов, величины Яс которых различаются не более чем на 8-10%

Другие классы соединений. При проверке ряда фракций плодовых тел Ь $и1рЬигеиз с применением ТСХ на наличие соединений тритерпеновых и стериновых соединений установлено присутствие не менее 9 веществ. В спиртовой и гексановой фракциях, а также неомыляемом остатке гексановой фракции хроматографически обнаружены (3-ситостерин и холестерин. Общее содержание тритерпеновых соединений (галохромная реакция концентрированной серной кислоты с тритерпеновым скелетом), составляет 0 54% (плодовые тела), 0 94% (спиртовая фракция), 3 17% (гексановая фракция)

Качественный анализ извлечений плодовых тел Ь 5и1рЫгеж на наличие алкалоидов показал, что Ь яи1рЬигеш отличается наличием соединений этого класса. Алкалоиды обнаружены во всех образцах сырья Наиболее выражена реакция для образцов плодовых тел полученных на ЭП «Усть-Кут», а также «Б. Голоустное», что

подтверждает факт наличия стресс-факторов в течение вегетационного периода гриба Известно, что алкалоиды являются в большинстве случаев продуктами экстремального метаболизма, повышение концентрации которых в растительных и грибных объектах свидетельствует о наличии процессов депонирования азота, либо продукции веществ, защищающих организм от влияния внешних раздражителей Общее содержание алкалоидов в плодовых телах £ йифкигеш составляет 0.32-0.40%

Фенольные компоненты плодовых тел Ь яЫрЪигеш являются до сих пор неизученным классом соединений. При предварительном хроматографическом изучении выявлены следующие особенности поведения фенольных компонентов, отсутствие пятен в зоне гликозидов полифенолов и агликонов. Вещества концентрируются в области бензойный и оксикоричных кислот Хроматографирование (ТСХ) со стандартными образцами фенольных кислот показало присутствие 4 веществ1 сиреневой, ванилиновой, 2,5-диоксибензойной и п-кумаровой кислот Общее содержание фенольных соединений, определенное по методу Фолина-Чокальте, составляет 0.69-2 85%. Наибольшее содержание фенолов характерно для образцов плодовых тел, собранных на ЭП «Б. Голоустное» и «Усть-Кут».

Динамика накопления основных групп химических соединений в пуоиессе развития плодового тела. Динамика накопления основных групп БАВ в процессе развития плодового тела Ь вхйркигеш исследовалась на образцах плодовых тел, полученных в ростовых камерах при температуре 21°С в фазах: зачатков (I), зрелых плодовых тел (II), стареющих плодовых тел (III) Результаты приведены в таблицах 5-7.

Таблица 5

Содержание органических кислот плодовых тел Ь. яи1ркигеияв

Фаза Кислоты

свободные связавные сумма

I 121 2 06 3 27

II 144 167 3 11

III 125 3 80 5 05

Таблица 6

Состав углеводного комплекса плодовых тел Ь. вШркигею

Фаза Свободные углеводы, % ВРПС, % ЩРПС, % Хитин, %

сумма манвит

I 13 91 9 00 1 21 20 26 2 30

II 15 87 14 94 143 19 81 2 00

III 27 18 25 21 1 00 2128 4 90

Таблица 7

Химический состав плодовых тел L. sulphureus_

Фаза Аминокислоты, % Белки, % Фенолы, % Липиды, % Каротиноиды, мг%

I 1 69 0 046 3 86 0 83 4 37

II 1 92 0 034 195 1 24 5 10

III 1 81 0 019 1 58 0 75 4 73

Установлено, что наибольшее содержание органических кислот и их связанных форм наблюдается в фазе стареющего плодового тела (III), свободные кислоты доминируют в фазе зрелого плодового тела (II) Для свободных углеводов, в том числе маннита, щелочерастворимых полисахаридов и хитина, характерно накопление в конце периода роста Максимальные концентрации аминокислот, липидов и каротиноидов отмечены в плодовых телах фазы зрелости.

Для белков и фенольных соединений наивысший уровень характерен для плодовых тел начала вегетации.

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ЭКСТРАКТОВ ИЗ ПЛОДОВЫХ ТЕЛ Laetiporus sulphureus (BulI.:Fr.) Murr

Для определения антирадикальной активности использовался наиболее широко применяемый ДФПГ-метод. Установлено, что наиболее активной является этилацетатная фракция (1С50 0.58 мг/мл); активность ацетоновой и гексановой фракций ниже в 2 и 7 раз, соответственно Доминирующими соединениями фракции, экстрагируемой этилацетатом, являются фенолы- их содержание составляет до 58%, поэтому именно они отвечают за наличие данного эффекта у фракции. Общее содержание фенолов, в ацетоновом извлечении ниже - до 24%, поэтому и выраженность эффекта ниже.

При проверке наличия антирадикальной активности спиртовых извлечений, полученных при экстракции плодовых тел 95% этанолом (1 г/100 мл), установлено, что эффект составляет 25 93-89 95% по отношению к контролю (0.002% раствор аскорбиновой кислоты)

Наиболее активными оказались извлечения, полученные из плодовых тел ЭП «Усть-Кут» - 67.20-89 95% Данный факт объясняется большим содержанием экстрактивных веществ в плодовых телах, полученных на этой площадке. При сравнении химического состава плодовых тел L sulphureus с величиной антирадикальной активности и последующим корреляционным

анализом результатов установлено, что наиболее удовлетворительные результаты в паре "состав-свойство" наблюдается для фенольных соединений (г2 = 0 7074), каротиноидов (г2 = 0 5774) и водорастворимых полисахаридов (г2 = 0 7042). Уровни коэффициентов корреляции превышают допустимый порог в 0 5 единиц, поэтому можно с уверенностью говорить о доминирующем вкладе именно этих трех групп соединений в антирадикальный эффект экстрактов из плодовых тел L sulphureus

При исследовании изменения антирадикальной активности у спиртовых и водных извлечений плодовых тел L sulphureus, полученных последовательной экстракцией в разные периоды развития установлено, что максимум приходится на фазу зрелого плодового тела, что объясняется наибольшим накоплением активных веществ

В экспериментах по определению антиоксидантной активности (АОА) извлечений плодовых тел L sulphureus установлено, что наиболее активным протектором ß-каротина является этилацетатная фракция, которая в концентрации 0 3 мг/мл по окончании второго часа эксперимента позволяет сохранить более 60% пигмента. АОА ацетонового извлечения несколько ниже - на 38% Гексановая фракция в исследуемых дозах показывает обратный эффект Во все интервалы времени наблюдался процесс активации окисления, причем отмечен дозозависимый характер данного явления — чем выше концентрация извлечения в субстрате, тем большее окисление он вызывает

На модели токсического поражения печени крыс СС14 установлено, что водные отвары плодовых тел L sulphureus (1 г/180 мл Н20) из всех мест сбора оказывают выраженное антиоксидантное действие, препятствуя токсическому поражению печени (рис 4) Уровень МДА у животных, получавших отвары (2 мл/100 г живого веса животного), составляет 7 25-9% по отношению к группе СС14-поражения (интактная группа 1.67%); концентрация диеновых конъюгатов находится в пределах 6.18-13 72% по отношению к ССЦ-группе (интактная группа 2.19%).

При проведении корреляционного анализа в ряду концентрация БАВ - концентрация МДА (КД) выявлено прямое влияние концентрации углеводов и экстрактивных веществ в отваре на уровень МДА - величины коэффициентов корреляции г2 = 0.9734 и 0 9274, соответственно Для концентрации диеновых конъюгатов эта зависимость менее выражена - г2 = 0 5672 и 0 1635, соответственно, для углеводов и экстрактивных веществ.

1

,1

р ta

1 1 S г»

б бг ук им са4

Рис. 4. Уровни накопления малонового днальдегида (МДА) и диеновых конъюгатов (КД) в гомогенате печени крыс

Экспериментальные группы: В - СС14 + отвар («Быстрая»), БГ - СС1„ + отвар («Б. Голоустное»), УК - СС14 + отвар («Усть-Кут»), Ин - вода (интактная группа), СС14 - ССЦ + вода. По оси абсцисс - группа животных; по оси ординат - % накопления по отношению к группе СС14.

Таким образом, при проверке наличия биологической активности извлечений из плодовых тел L. sulphureus. установлено, что они обладают выраженным антиоксидантным действием, что было подтверждено в экспериментах in vitro и in vivo. Наибольшей биологической активностью обладают извлечения из плодовых тел, полученных на ЭГТ «Усть-Кут» - среднетаёжный ландшафт. Перепад ночных и дневных температур в период развития плодового тела, вероятно, способствует накоплению соединений, отвечающих за проявление антиоксидантной активности, что подтверждают данные исследования химического состава. Разная степень АОА в зависимости от места произрастания гриба позволяет говорить о значимом влиянии термического фактора на характер проявления данного вида активности.

Выводы

1. Изучен химический состав плодовых тел L. sulphureus, установлено присутствие в плодовых телах L. sulphureus следующих групп соединений: алкалоидов до 0.4%; тритерпеновых соединений до 0.5%; фенольных соединений 0.7-4%; аминокислот 1-6.5%; углеводов: маннига 0,5-2%, водорастворимых полисахаридов 0.52.5%, щелочерастворимых полисахаридов 24-62%, хитина 2-5%;

белков 12.8-45 1%; липидов 0.6-1%, органических кислот 2-8%, макро- и микроэлементов 3.5-9%

2 Впервые из плодовых тел L sulphureus выделены и охарактеризованы два новых полисахарида, латипоран А (разветвленный Р-(1—»3)-галактоманноглюкан) и латиглюкан I (линейный Р"(1—>3)-гомоглюкан)

3 Установлено, что содержание углеводов, липидов, органических кислот, аминокислот, других групп соединений в плодовых телах L sulphureus зависит от климатических факторов. Выявлено, что разные группы биологически активных соединений в плодовых телах L sulphureus накапливаются в разной зависимости, что обуславливается экологическими потребностями гриба в конкретных условия произрастания.

4. Установлено, что элементный состав плодовых тел L sulphureus не зависит от климатических условий района произрастаний и, вероятно, зависит от эдафического фактора.

3. Изучена динамика накопления биологически активных соединений в процессе формирования плодовых тел Выявлено, что наибольшим биосинтетическим потенциалом обладают плодовые тела в фазе зрелости

4 В результате экспериментов in vitro и in vivo, выявлен антиоксидантный эффект извлечений из плодовых тел L sulphureus Установлено значимое влияние климатического фактора на проявление антиоксидантной активности экстрактов из плодовых тел L sulphureus

По теме диссертации опубликованы следующие работы

1. Новикова (Агафонова) C.B., Боровский Г.Б., Пензина Т.А. Использование факторов природной среды в регуляции БАВ базидиомицетов // Второй конгресс медицинской микологии -Москва -2004 - с 312

2. Агафонова С В, Боровский Г Б , Пензина Т А Исследование АОА экстрактов из плодовых тел Laetiporus sulphureus II Биологически активные добавки и перспективы их применения в здравоохранении-Мат-лы науч -практ конф.- Улан-Удэ, 2005 - С 62-63

3 Агафонова С В , Боровский Г Б , Пензина Т.А. Влияние факторов среды на лекарственную активность высших грибов // Проблемы лесной фитопатологии и микологии. Материалы 6-й Международной конференции. Москва-Петрозаводск, 2005. С. 203209.

4. Агафонова С В., Боровский Г Б, Пензина Т А Влияние экстрактов трутовика серно-желтого на уровень МДА в печени крыс // Грибы в природных и антропогенных системах Труды международной конференции посвященной 100-летию начала работы проф А С Бондарцева в Ботаническом институте им B.JI Комарова РАН (С.-Петербург, 24-28 апреля). Т. 1 СПб, 2005 С 210215.

5 Агафонова С В , Боровский Г Б , Пензина Т А , Лепихова С А Влияние климатических условий среды на антиоксидантный эффект экстрактов из плодовых тел Laetiporus sulphureus II Третий конгресс медицинской микологии. - Москва. - 2005.- с. 325.

6 Агафонова С В , Боровский Г Б , Пензина Т А , Олейников Д Н Влияние условий произрастания на содержание полисахаридов полисахаридов в плодовых телах Latieporus sulphureusII Пятый конгресс медицинской микологии - Москва - 2007 -с 405

7 Войников В К , Пензина Т А , Яковлев А Ю , Боровский Г Б , Новикова С В , Александрова Г П , Медведева С А, Волчатова Е А , Хамидулина Е А, Белых Л И, Пензина Э Э , Рябчикова И А Контроль стрессовой нагрузки в лесных экосистемах Прибайкалья при воздействии аэропромвыбросов алюминиевых // Сибирский экологический журнал - 2005 - №4 - с. 693 -700.

8 Олейников Д Н , Агафонова С.В, Боровский Г Б , Пензина Т А , Рохин AB. Водорастворимые эндополисахариды плодовых тел Laetiporus sulphureus (Bull Fr) Murr II Прикладная биохимия и микробиология (в печати)

Подписано в печать 05.10.2007. 1 усл. печ. л , Заказ №668. Тираж 100 экз Формат 60x84 1/16 Отпечатано на множительном участке ВСЖД-филиала ОАО «РЖД» г Иркутск

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Агафонова, Софья Васильевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Факторы среды, регулирующие процессы жизнедеятельности грибов.

1.1.1. Температура.

1.1.2. Влажность.

1.1.3 Освещенность.

1.2 Направления в изучении вторичных метаболитов высших грибов.

1.2.1 Изучение антибактериальной и противогрибковой активности метаболитов высших грибов.

1.2.2 Изучение противовирусной активности метаболитов высших грибов

1.2.3 Изучение иммуномодулирующей активности высших грибов.

1.2.4 Изучение ферментной активности высших грибов.

1.3 Химический состав плодовых тел Laetiporus sulphureus.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Методы полевых работ.

2.1.1.Исследование микроклиматических параметров экспериментальных плантаций (ЭП).

2.1.2. Получение плодовых тел L. sulphureus на экспериментальных плантациях (ЭП).

2.2. Культивирование прибайкальских штаммов L. sulphureus в лабораторных условиях.

2.3. Методы исследования химического состава плодовых тел L. sulphureus

2.3.1. Экстракция и фракционирование.

2.3.2 Аналитические методы разделения.

2.3.3 Препаративные методы разделения.

2.3.4 Физико-химические методы.

2.3.5. Химические методы.

2.3.6. Химические реакции.

2.4.1. Антирадикальная активность (DPPH-метод).

2.4.2. Антиоксидантная активность (каротин-Н202-модель).

2.4.3. Определение малонового диальдегида в печени крысы.

2.4.4. Определение диеновой конъюгации (КД) ненасыщенных высших жирных кислот в печени крысы.

2.4.5. Моделирование острого токсического повреждения печени крыс линии Wistar.

2.5. Гистохимические методы (ШИК-реакция).

ГЛАВА 3. КЛИМАТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНА ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Факторы, определяющие дифференциацию природных условий района исследования.

3.2. Эколого-климатические условия экспериментальных плантаций.

3.2.1 Климатические условия экспериментальной плантации «Быстрая»

3.2.2 Климатические условия экспериментальной плантации «Усть-Кут»

3.2.3.Климатические условия экспериментальной плантации «Б. Голоустное».

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Химическое исследование плодовых тел Laetiporus sulphureus (Bull.rFr.) Murr.

4.1.1 Органические кислоты.

4.1.2 Углеводы.

4.1.3 Аминокислоты. Характеристика аминокислотного состава плодовых тел L. sulphureus.

4.1.4. Жирные кислоты. Характеристика состава жирных кислот плодовых тел L. sulphureus.

4.1.5. Элементный состав. Характеристика элементного состава плодовых тел L. sulphureus.

4.1.6. Другие классы соединений.

4.1.7. Динамика накопления основных групп химических. соединений в процессе развития плодового тела L. sulphureus.

4.2. Исследование биологической активности извлечений из плодовых тел Laetiporus sulphureus (Bull.rFr.) Murr.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение химического состава и особенностей накопления биологически активных соединений в плодовых телах Laetiporus sulphureus (Bull.: fr.) murr. в условиях Прибайкалья"

Актуальность работы. В последние десятилетия возрос интерес к источникам биологически активных соединений грибного происхождения, обладающих протеолитической, иммуномодулирующей, антиоксидантной, антибиотической и другими видами активностей [15, 131, 175,190]. В связи с этим актуальными являются исследования направленной регуляции биохимической активности высших грибов.

Химический состав тканей и органов высших растений напрямую зависит от условий обитания растительного организма. Существует мнение [105], что содержание биологически активных веществ у высших растений закономерно падает с возрастанием географической широты места произрастания. Относительно высших грибов, вопрос о накоплении в них биологически активных веществ в зависимости от условий произрастания остается мало исследованным.

Возможность использования трутовых грибов как наиболее доступных объектов в биоконверсии органических отходов, в пищевой индустрии и медицине предопределяет необходимость более глубокого исследования их химического состава, а так же определения условий, влияющих на накопление биологически активных соединений.

Объектом исследования является ксилотрофный базидиомицет Laetiporus sulphureus (Bull.: Fr.) Murr. (рис. 1.) - семейство Polyporales, относящийся к грибам бурой гнили [76]. Основной ареал L. sulphureus расположен в зоне широколиственных лесов. По экологическим характеристикам гриб относится к термофилам, в Прибайкалье его плодоношение приходится на термический максимум региона. Гриб легко культивируется как в лабораторных, так и в природных условиях, в короткий срок образует плодовые тела большой биомассы. Обладает выраженной антимикробной, протеолитической и антиоксидантной активностью [170].

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является определение влияния климатических факторов среды на химический состав и особенности накопления биологически активных соединений в плодовых телах Laetiporus sulphureus (Bull.:Fr.) Murr. в условиях Прибайкалья.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить химический состав плодовых тел прибайкальского штамма L. sulphureus.

2. Изучить динамику накопления биологически активных соединений в процессе развития плодовых тел L. sulphureus.

3. Определить влияние климатического фактора на характер накопления углеводов, липидов, органических кислот, аминокислот, минерального состава плодовых тел двух прибайкальских штаммов L. sulphureus в разных ландшафтах Прибайкалья.

4. Показать роль климатических факторов среды на проявление антиоксидантной активности плодовых тел L. sulphureus в экспериментах in vivo и in vitro.

Положения, выносимые на защиту.

1) Химический состав и содержание биологически активных соединений в плодовых телах L. sulphureus обусловлены климатическими факторами среды.

2) Наибольшее содержание биологически активных соединений в плодовых телах L. sulphureus наблюдается в условиях среднетаежного ландшафта.

Научная новизна работы. Впервые исследован химический состав плодовых тел прибайкальских штаммов Laetiporus sulphureus. Обнаружено присутствие алкалоидов и фенолов, ранее не идентифицированных в химическом составе данного гриба. Впервые из плодовых тел L. sulphureus выделены и охарактеризованы два новых полисахарида: латипоран А (разветвленный (3-( 1 —>3)-галактоманноглюкан) и латиглюкан I (линейный (1—>3)-гомоглюкан). Установлено, что содержание органических кислот, углеводов, жирных кислот, фенолов, алкалоидов и аминокислот в значительной степени определяется климатическими условиями места произрастания гриба - наибольшее содержание биологически активных соединений в плодовых телах отмечено в среднетаежном ландшафте. Установлено, что доминирующую роль в проявлении антиоксидантного эффекта экстрактов из плодовых тел L. sulphureus играют фенольные соединения, водорастворимые полисахариды и каротиноиды. Показано, что наибольшее содержание биологически активных соединений и наиболее выраженный антиоксидантный эффект приходятся на фазу зрелого плодового тела.

Теоретическая и практическая значимость работы. Изучение химического состава плодовых тел прибайкальских штаммов L. sulphureus вносит вклад в область изучения грибных метаболитов. Полученные данные позволяют оценить влияние климатических факторов среды на процессы, связанные с синтезом и накоплением метаболитов в плодовых телах базидиомицетов. Экспериментальный материал позволяет рассматривать L. sulphureus в качестве объекта для дальнейших исследований биологически активных соединений с целью расширения спектра лекарственных препаратов грибного происхождения. Выявление высокой степени антиоксидантной активности экстрактов плодовых тел L. sulphureus позволяет рассматривать данный гриб в качестве сырья для разработки биологически активных добавок.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на Втором конгрессе медицинской микологии (Москва, 2004), Третьем конгрессе медицинской микологии (Москва, 2005), Пятом конгрессе медицинской микологии (Москва, 2007), 6-й Международной конференции «Проблемы лесной фитопатологии и микологии» (Москва-Петрозаводск, 2005).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 148 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, методической и экспериментальной частей, выводов и списка

Заключение Диссертация по теме "Физиология и биохимия растений", Агафонова, Софья Васильевна

125 ВЫВОДЫ

1. Изучен химический состав плодовых тел L. sulphureus, установлено присутствие в плодовых телах L. sulphureus следующих групп соединений: алкалоидов до 0.4%; тритерпеновых соединений до 0.5%; фенольных соединений 0.7-4%; аминокислот 1-6.5%; углеводов: маннита 0.5-2%, водорастворимых полисахаридов 0.5-2.5%, щелочерастворимых полисахаридов 24-62%, хитина 2-5%; белков 12.8-45.1%; липидов 0.6-1%, органических кислот 2-8%, макро- и микроэлементов 3.5-9%.

2. Впервые из плодовых тел L. sulphureus выделены и охарактеризованы два новых полисахарида: латипоран А (разветвленный Р-(1—>3)-галактоманноглюкан) и латиглюкан I (линейный (3-(1 —>3)-гомоглюкан).

3. Установлено, что содержание углеводов, липидов, органических кислот, аминокислот, других групп соединений в плодовых телах L. sulphureus зависит от климатических факторов. Выявлено, что разные группы биологически активных соединений в плодовых телах L. sulphureus накапливаются в разной зависимости, что обуславливается экологическими потребностями гриба в конкретных условия произрастания.

4. Установлено, что элементный состав плодовых тел L. sulphureus не зависит от климатических условий района произрастаний и, вероятно, зависит от эдафического фактора.

5. Изучена динамика накопления биологически активных соединений в процессе формирования плодовых тел. Выявлено, что наибольшим биосинтетическим потенциалом обладают плодовые тела в фазе зрелости.

6. В результате экспериментов in vitro и in vivo, выявлен антиоксидантный эффект извлечений из плодовых тел L. sulphureus. Установлено значимое влияние климатического фактора на проявление антиоксидантной активности экстрактов из плодовых тел L. sulphureus.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние десятилетия возрос интерес к изучению биологически активных метаболитов высших базидиальных грибов с целью дальнейшего практического применения. Около 75% видов от общего числа ксилотрофных базидиомицетов способны синтезировать вещества, обладающие лекарственной способностью. В связи с высоким потенциалом ксилотрофных базидиомицетов в области медицины, пищевой промышленности и биоконверсии становятся актуальными исследования регуляции метаболизма и выявление факторов, способствующих максимальному содержанию биологически активных соединений в грибах. Прибайкалье является регионом, на территории которого находятся природные ландшафты с высокой степенью дифференциации экологических факторов. Уникальные условия Прибайкалья позволили на относительно небольшом географическом пространстве исследовать влияние климатических условий различных природных ландшафтов на процессы метаболизма базидиальных ксилотрофов.

В результате работы были проведены исследования химического состава и особенностей накопления биологически активных соединений в плодовых телах гриба группы бурой гнили L. sulphureus. L. sulphureus в условиях Западной и Восточной Сибири является реликтовым грибом, т.е остатком древней флоры. Его ареал в Прибайкалье характеризуется локальными местами произрастания, и фаза плодоношения приходится на период максимальных температур и атмосферного увлажнения, данный факт позволяет охарактеризовать этот гриб как термофил. Лабораторные исследования также выявили, что температурным оптимумом для роста мицелия и плодоношения L. sulphureus являются достаточно высокие для грибов температуры - 23-25°С.

Было проведено исследование химического состава плодовых тел природных штаммов L. sulphureus, взятых из контрастных ландшафтов

Прибайкалья. Исследования выявили наличие широкого спектра соединений -полисахаридов, белков, тритерпеновых соединений, каротиноидов и других классов соединений, обнаружение которых явилось причиной для их более подробного изучения.

Впервые был подробно изучен углеводный комплекс прибайкальского штамма L. sulphureus. При исследовании комплекса водорастворимых эндополисахаридов было выявлено, что доминирующим компонентом комплекса, является латипоран А - полисахарид, содержание которого составляет более 0.28% от массы сухого сырья. Латипоран А является галактоманноглюканом; подобной структурой обладают полисахариды с выраженной иммуномодулирующей и антимикробной и противовирусной активностями. Исследование комплекса щелочерастворимых полисахаридов показало наличие линейного Р-(1—»3)-гомоглюкана, названого нами -латиглюкан I. Известно, что грибные полисахариды подобного строения обладают высокой иммуномодулирующей и, как следствие, противораковой и противоопухолевой активностями. Такие препараты как линтинан, крестин, шизофлан уже применяются при лечении различных стадий раковых заболевании. Результаты наших исследований позволят расширить спектр грибных полисахаридов, способных проявлять данные виды активности.

Изучение динамики развития плодового тела L. sulphureus показало, что содержание химических соединений в фазы развития зачатков, зрелости и старения плодового тела разнородно и зависит от особенностей протекания метаболических процессов, характерных для определенной фазы развития грибного организма. Наибольшее содержание метаболитов было обнаружено в фазу зрелого плодового тела, что говорит о высоком синтетической активности данной стадии развития плодовых тел L. sulphureus. Полученные сведения могут иметь большую практическую значимость в области разработки лекарственных препаратов из данного гриба.

Для решения основной задачи исследования, используя метод природных плантаций, были проведены исследования по изучению влияния климатических условий ландшафта на химический состав и особенности накопления биологически активных метаболитов в плодовых телах L. sulphureus. Поскольку грибы являются сапротрофами, влияние субстратного фактора на метаболические процессы данных организмов очевидно. Для адекватной оценки роли абиотических факторов в работе впервые был использован метод нивелирующий участие субстрата.

Установлено, что элементный состав плодовых тел L. sulphureus не зависит от климатических условий района произрастаний. Этот факт подтверждается сравнением концентрации макроэлементов, величины индекса, накопления которых различаются не более чем на 8-10%. Содержание таких элементов как алюминий максимально для плантации горно-таёжного ландшафта, КБН которого может достигать величин 125-127.7. Можно предположит, что высокое содержание этого элемента в почвах данного ландшафта может быть следствием высоких концентраций данных элементов в воздухе, что можно связать с особенностями состава горных почв, то есть с эдафическим фактором.

Исследование характера накопления биологически активных соединений в плодовых телах выявило прямую зависимость данного явления от климатических условий ландшафта. Результаты показали, что изменение параметров климатических факторов неодинаково влияет на накопление разных классов соединений. Так высокое содержание щелочерастворимых полисахаридов наблюдается в плодовых телах, полученных в лесостепном ландшафте, находящегося под воздействием водной массы оз. Байкал, а содержание водорастворимых полисахаридов наибольшее - в среднетаёжном ландшафте с максимальной степенью теплообеспеченнностью в дневное время суток и пониженным ходом ночных температур. Высокое содержание биологически активных соединений было выявлено в плодовых тела L. sulphureus, полученных в среднетаёжном ландшафте. Данный факт позволяет говорить о том, что определяющим фактором в характере накопления метаболитов, вероятно, играет температурный фактор. Благодаря высокой теплообеспеченности в дневное время, на данном ландшафте образуется температурный оптимум для развития и плодоношения L. sulphureus, низкие ночные температуры, обусловленные уменьшением притока солнечной радиации, что является стресс-условиями для гриба термофила, в результате чего происходит депонирование соединений, обладающих защитной и питательной функцией.

Исследование биологической активности экстрактов плодовых тел L. sulphureus в экспериментах in vivo и in vitro выявило выраженную АОА водных отваров. Установлено, что доминирующую роль в проявлении антиоксидантного эффекта экстрактов из плодовых тел L. sulphureus играют фенольные соединения, водорастворимые полисахариды и каротиноиды. Показано, что наибольшее содержание биологически активных соединений и наиболее выраженный антиоксидантный эффект приходятся на фазу зрелого плодового тела.

При изучении антирадикальной и антиоксидантной активностей спиртовых извлечений из плодовых тел L. sulphureus из разных экспериментальных плантаций, было выявлено, что они отличаются по характеру проявления. Экстракты из плодовых тел из среднетаежного ландшафта, проявление антирадикальной и антиоксидантной активности наиболее выражено, по сравнению с лесостепным и горно-таежным ландшафтами, что связано с высоким содержанием биологически активных метаболитов в плодовых телах из данного ландшафта.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Агафонова, Софья Васильевна, Иркутск

1. Агафонова С.В. Влияние экстрактов трутовика серно-желтого на уровень

2. Агафонова С.В. Влияние климатических условий среды на антиоксидантныйэффект экстрактов из плодовых тел Laetiporus sulphureus / С.В.Агафонова, Г.Б.Боровский, Т.А. Пензина и др. // Третий конгресс медицинской микологии, Москва, 2005. М., - 2005.- с. 325.

3. Агафонова С.В. Влияние условий произрастания на содержаниеполисахаридов полисахаридов в плодовых телах Latieporus sulphureus / С.В.Агафонова, Г.Б.Боровский, Т.А. Пензина и др. // Пятый конгресс медицинской микологии, Москва, 2007. М., 2007.-е 405.

4. Агроклиматический справочник по Иркутской области- Л.: Гидрометеоиздат, 1959. 215 с.

5. Адо Ю.В. Влияние внешних условий на рост мицелия грибов разрушителейдревесины / Ю.В. Адо // Тр. Архангел. Лесотехн. Ин-та. Архангельск, 1955.-С. 45-65.

6. Александрова Т.К. Суточная амплитуда температуры воздуха на территории

7. Предбайкалья / Т.К. Александрова. Иркутск, 1971.- 315с.

8. Алисов Б.П. Климат СССР / Б.П. Алисов. Изд. МГУ, 1956.- 425с.

9. Атлас. Байкал. М.: Федеральная служба геодезии и картографии России.1993.- 160с.

10. Атлас Иркутской области. М.; Иркутск: Гл. упр. Геодезии и картографии

11. М-ва геологии и охраны недр СССР, 1962. 179 с.

12. Бабицкая. В.Г. Физиологически активные соединения и биологическоедействие глубинного мицелия базидиомицета Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) P. Karst / В.Г. Бабицкая, C.B. Хлюстов, Л.В. Пленина и др. // Биотехнология. 2003. - № 4. - С. 35-44.

13. Бадалян С.М. Исследование антиоксидантной активности некоторыхбазидиальных макромицетов / С.М. Бадалян, А.В. Гаспарян // Микология и фитопатология. 2003. - Т. 37. - Вып. 5. - С. 63-68.

14. Беккер З.Э. Физиология и биохимия грибов / З.Э. Беккер. М.: Изд-во Моск.1. Ун-та, 1988.-230с.

15. Белова Н.В. Базидиомицеты источники биологически активных веществ /

16. Н.В. Белова // Растительные ресурсыю Т.27. - Вып.2. - С.8-17.

17. Буфал В.В. Климат озера Байкал и Прибайкалья / В.В Буфал. М.; Наука,1966.-С. 34-70

18. Бондарцев А. С. Трутовые грибы европейской части СССР и Кавказа

19. А. С. Бондарцев М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1953. - 1106 с.

20. Бондарцева М.А.Факторы влияющие на распространение аффилофоровыхгрибов по типам леса // Проблемы изучения грибов и лишайников.Тарту, 1965.-С. 23 -28.

21. Бондарцева М.А. Жизненные формы базидиальных макромицетов / Новостисистематики низших растений / М.А. Бондарцева. Д., 1974. - Т. 11. - С. 29 -40

22. Бояркин В.М. География Иркутской области. Физико-географическое районирование Иркутской области / В.М. Бояркин. Иркутск, 1973. -Вып. 3.-328 с.

23. Бурлакова Е. Б. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественномросте / Бурлакова Е. Б., Алесенко А. В., Молочкина Е. М., и др. М.: Наука, 1975.-214 с.

24. Бухало А.С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре / А.С.

25. Бухало. Киев: Наукова думка, 1988. - 125 с.

26. Войников В.К. Контроль стрессовой нагрузки в лесных экосистемах

27. Прибайкалья при воздействии аэропромвыбросов алюминиевых / В.К. Войников, Т.А. Пензина, А.Ю. Яковлев, Г.Б. Боровский, С.В Новикова (Агафонова) и др. // Сибирский экологический журнал. 2005. - №4. - с. 693-700.

28. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах /

29. Ю.А.Владимиров, О.А. Азизова, А.И. Леев и др. М.: ВИНИТИ, 1991. -С. 18-21

30. Гавриков Д.Е. Введение в биологическую статистику: учебно-метадическоепособие / Д.Е. Гавриков. Иркутск: Изд-во Иркутск. Гос.пед. ун-та, 2002.74 с.

31. Григорьев А.А. Классификация климатов СССР / А.А. Григорьев, М.И.

32. Будыко // Изв. АН СССР. Сер. Геогр. I960.- №3. -С.3-19.

33. Дудка И.А. Методы экспериментальной микологии. / И.А. Дудка, С.П.

34. Вассер, И.А. Элланская и др. Киев: Наукова Думка, 1982.-418 с.

35. Терешина В.М. Стимулирующий эффект зеленого света на образование (3каротина Blakeslea trispora / В.М. Терешина, А.И. Киселева, Е.П. Феофилова, Е.В. Кашпорова // Микробиология. 1993. - Т.62. - Вып.1. С. 56-61.

36. Тюлина JI.H. Важный прибайкальский тип поясности растительности. / JI.H.

37. Тюлина. Новосибирск: Наука, 19766. - 318 с.

38. Казицина Я.А. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии в органическойхимии. / JI.A. Казицина, Н.Б. Куплетская. М.: Высшая школа, 1971. - С. 35-42.

39. Касьянова JI.H. Экология растений Прибайкалья (водный обмен) / JI.H.

40. Касьянова. М.: Наука, 2004. - 288 с.

41. Климатические особенности зоны БАМ. /Отв. редактор Н.П. Ладейшиков1. Н.: Наука, 1979. 143 с.

42. Капич А.Н. Содержание в грибах продуктов перикисного окислениялипидов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой / А.Н. Капич, Т.С. Гвоздикова // Микология и фитопатология. Т.32. - Вып. 4. - С. 30-36.

43. Копылова Т. Н. Процессы перикисного окисления липидов и антиокислительная система печени крыс при остром и хроническом отравлении четыреххлористым углеродом / Т. Н. Копылова // Сельскохозяйственная биология. 2004. - Т.5. - № 8. -С. 74-77.

44. Капич А.Н. О составе липидов мицелия Flammulina velutipes (Curt.: Fr.) Sing.

45. А.Н. Капич, E.C. Романовец, С.П. Войт // Прикладная биохимия и микробиология . -1989. Т.25. -Вып. 3. - С. 68-73.

46. Капич А.Н. Содержанеи липидов в мицелии дереворазрушающихбазидиомицетов и их жиронокислотный состав / А.Н. Капич, Е.С.

47. Романовец, С.П. Войт // Микология и фитопатология. 1990. - Вып. 1. -С.51-56.

48. Капич А.Н. Антиоксидантное свойства дереворазрушающихбазидиомицетов / А.Н. Капич, JI.H. Шишкина // Микология и фитопатология. 1992. - Т. 26. -Вып. 6. - С. 486-492.

49. Мюллер Э. Микология / Э. Мюллер, В. Леффлер. М.:Мир, 1995. - 343с.

50. Надежин Б.В. Лено-Ангарская лесостепь (почвенно-географический очерк) /

51. Б.В. Надежин. М.: Изд-во АН СССР, 1961.-318 с.

52. Низковская О.П. Противоопухолевые свойства высших базидиомицетов /

53. О.П. Низковская // Микология и фитопатология. 1983. - Т.17. - №3. - С. 243-247.

54. Наканиси К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений. /

55. Оводов Ю.С. Полисахариды грибов, мхов и лишайников, структура ифизиологическая активность/ Ю.С. Оводов // Проблемы химии древесины и лесохимии: Сб. трудов Коми научного центра УрО Российской АН. -Сыктывкар, 1997.-№156.-С. 100-111.

56. Одум Ю. Экология. / Ю. Одум. Москва: Мир, 1986.- Т.2. -376 с.

57. Олейников Д.Н. Водорастворимые эндополисахариды плодовых тел1.etiporus sulphureus (Bull.:Fr.) Murr./ Д.Н. Олейников, С.В. Агафонова, Г. Б.Боровский, Пензина Т.А., Рохин А.В. // Прикладная биохимия и микробиология (в печати).

58. Пармасто Э. О. распространении некоторых редких трутовых грибов /

59. Пармасто Э. О // Изв. АН СССР Сер. Биол. 1959а. - Т.8. - №4. - С.266-277.

60. Рипачек В. Биология дереворазрушающих грибов / В. Рипачек. Пер.чешского издания.- М.: «Лесная промышленность», 1967. 276 с.

61. Коржуев С.С. Равнины и горы Сибири / С.С. Коржуев, В.Н. Олюнин, Г.И.

62. Лазуков и др. М.: Наука, 1975.-352 с.

63. Фалина Н.Н. Препарат фибринолитического действия из зимнего опенка

64. Flammulina velutipes / Н.Н. Фалина, Э.Н. Морозова, Н.П. Денисова и др. // Прикл. биохимия и микробиология. 1978. - Т. 14. - №5. - С. 699-701.

65. Феофилова Е.П. Прогресс в области экспериментальной микологии какоснова для создания современных биотехнологий / Е.П. Феофилова // Микробиология. 1997. -Т.66. - №3. - С. 302-310.

66. Феофилова Е.П. Царство грибов: гетерогенность физиолого -биохимическихсвойств и близость к растениям, животным и прокариотам / Е.П. Феофилова // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. - Т.37. -№2.-С. 288-299.

67. Феофилова Е.П. Действие видимого света на цитодифференцировку, рост иметаболизм мицелиальных грибов / Е.П. Феофилова // Итоги науки и техники ВИНИТИ. Микробиология. 1991. - Т. 24. - С. 71-115.

68. Феофилова Е.П. Действие света на спорообразование и активностьлитических экзоферментов ферментов грибов рода Aspergillius / Е.П.Феофилова, М.В.Волхова, Б.А.Величко, A.M. Карпов,

69. М.В.Полотебнова, Г.В. Черкасова, Г.Ф. Шлыкова // Биотехнология. -1988. Т.4. - №6. - с. 719-722.

70. Феофилова Е.П. Изменения в липидном составе клеток грибов в процессеонтогенеза и использование этих данных в хемотаксономии / Е.П. Феофилова, М.В. Михайлова, Г.Г. Шумская и др. // Микология и фитопатология. 1991а. - Т.25. - №4. - С. 348-359

71. Феофилова Е.П. Трегалоза, стресс и анабиоз / Е.П. Феофилова //

72. Микробиология. 1992. - Т.61. - №5. - С. 741-755.

73. Феофилова Е.П. Изменения в углеводном составе клеток грибов в связи садаптацией к температурному стрессу / Е.П.Феофилова, В.М.Терешина, И.Б. Горнова // Микробиология. 1994. - Т. 63. - №5. - С. 792-798.

74. Хайс И. М. Хроматография на бумаге / И. М.Хайс, К. Мацек. М.: Изд-воиностранной литературы, 1962.- 851 с.

75. Шиврина А.Н. Биологически активные вещества высших грибов / А.Н.

76. Шиврина. М.-Л.: Наука, 1965.- 194 с.

77. Шелухина Н.П. Галактуроновая кислота, методы ее получения иопределения / Н.П. Шелухина, И.И. Турдакова, Г.Б. Аймухамедова. -Фрунзе: Илим, 1972. С. 40-41.

78. Abdel-Akher, М. A new procedure for the determination of the structure ofpolysaccharides / M. Abdel-Akher, K., Hamilton, R. Montgomery, F. Smith // J. Am. Chem. Soc. -1952. V.74. - P. 4970-4971.

79. Alquini G. Polysaccharides from fruit bodies of the basidiomycetes Laetiporussulphureus (Bull.: Fr.) Murr / G. Alquini, E.R. Carbonero, F.R. Rosado, C.

80. Cosentino у, M. Iacomini // FEMS Microbiology Letters. 2004. - V.230.- P. 47-52.

81. Anwer, U., Dunnschicht chromatographische Pilzdiagnostik. 1980, TUMunchen.

82. Williams, D.H. and I. Fleming, Spektroskopische Methoden zur Strukturaufklarung, Stuttgart: Thieme.

83. Barbisan L. Agaricus (Himematsutak) does not alters the development of ratdiethylnitrosamine iniated hepatic preneoplastic foci / L.F. Barbisan, A.L.Tozzi Spinardi-Barbisan, E.L.T. Moreria, D.M.F. Mareira, // Cancer Sci. 2003. Vol. 2. -P.188 -192.

84. Bhavanandan, V.P. Polysaccharides from Polyporus giganteus / V.P.

85. Bhavanandan, H.O. Bouveng, and B. Lindberg // Acta Chem. Scand. 2005. -P.518-512.

86. Brugnerotto J. An infrared investigation in relation with chitin and chitosancharacterization / J. Brugnerotto, J. Lizardi, F.M.Goyoolea, W.Aruelles-Monal, J. Desrieres // Polymer. 2001. - V. 42. - P.3569-3580.

87. Begue, W.J. The use of tetrazolium salts in bioautographi Procedures/ W.J Begueand R.M. Kline //Journal of chromatography. 1972. - V.64. - P. 182-184.

88. Bailey R.W. Carbohydrate composition of particulate preparations from mungbean (.Phaseolus aureus) shoots / R.W.Bailey, S.Haq, W.Z.Hassid // Phytochemistry. 1967. - V.6. - P.293-301.

89. Carbonero, E.R. Comparative studies of the polysaccharides isolated fromlichenized fungi of the genus Cladonia as chemotypes / E.R., Carbonero, G.L., Sassaki, P., Stuelp // FEMS Microbiol. Lett. 2001. -V. 194. - P.65-69.

90. Ciucanu, I. Simple and rapid method for the permethylation of carbohydrates /1.

91. Ciucanu and F. Kerek // Carbohydr Res. 1984. - V. 131. - P.209-217.

92. Cho, S.M. A mannofucogalactan, fomitellan A, with mutagenic effect from fruitbodies of Fomitella fraxinea (Imaz.) / S.M., Cho, H.,Koshino, S.H., Yu and I.D., Yoo // Carbohydr. Polym. 1998. - V.37. - P. 13-18.

93. Ciucanu I. A simple and rapid method for the permethylation of carbohydrates /1.

94. Ciucanu, F. A. Kerek // Carbohydrate Research. 1984. - V.131. - P.209-217.

95. Chakraborty I. A water-soluble (1—>3)-f3-glucan from the alkaline extract of anedible mushroom Termitomyces eurhizus /1. Chakraborty, M. Mondal, D. Rout, S.S. Islam // Carbohydrate Research.- 2006.- V.341.- P.2990-2993.

96. Carbonero E.R. Iacomini M. A p^glucan from the fruit body of edible mushrooms

97. Pleurotus eryngii and Pleurotus ostreatoroseus / E.R. Carbonero, A.H.P. Gracher, F.R. Smiderle, F.R. Rosado, G.L. Sassaki, AJ. Gorin, M. Iacomini // Carbohydrate Polymers.- 2006.- V.66.- P.252-257.

98. Chihara, G. Inhibition of mouse Sacroma 180 by polysaccharides from Lentinusedodes (Berk.) Sing Chihara / G., Maeda, Y., Hamuro, J., Sasaki et al. // Nature. 1969. - V. 222. - P. 687-688.

99. Chauveau C. A water-soluble 0-D-glucan from Boletus erythropus / C. Chauveau,

100. P. Talaga, J-M. Wieruzeski et al. // Phytochemistry. 1996. - V. 6. - №3. -P.413-415.

101. Dubois, M. Colorimetric method for determination of sugars and related substances / M., Dubois, K., Gilles, J., Hamilton, P., Rebers, & F., Smith // Analytical Chemistry. 1956. - V.28 (3). - P.350-356.

102. Davoli P. Laetiporic acid, a family of non caratenoid polyen pigments from frutbodies and liquid cultures of Laetiporus sulphureus (Polyporales, Fungi) / P. Davoli, A. Mucci, L. Schenetti, W.S. R. Weber // Photochemistry. 2005. -V.66.-P. 817-823.

103. Donelly, D.M.X. Dihydrobenzofurans from Heterobasidion annosum / D.M.X.

104. Donelly // Phytochemistry 1988.- V.27(8). - P. 2709-2713.

105. Donelly, D.M.X. Fomajorin S and D from Fomes annosus / D.M.X. Donelly //

106. Tetrahedron Letters. 1982. - V.23 (51). - P. 5451-5452.

107. Donelly, D.M.X. and D,J. Coveney, Antibacterial sesquiterpene aryl esters from

108. P.J. Lea, Editors. Clarendon Press, Oxford. 1987. P. 19-32.

109. Gorin, P. Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectroscopy of polysaccharides

110. P. Gorin // Advance in carbohydrate chemistry and biochemistry, New York: Academic Press. In R. Tipson, & D. Horton (Eds.), 1981. -V. 38. P. 13-104.

111. Gorin, P. Assignment of carbon-13 signals in nuclear magnetic resonance spectraof D-galactopyrano-a-D-manno-pyranans from yeasts / P., Gorin & M. Mazurek // Carbohydrate Research. 1982. -V.l05(2). - P. 283-287.

112. Gutierrez A, Prieto A, Martinez AT. Structural characterization of extracellularpolysaccharides produced by fungi from the genus Pleurotus / A., Gutierrez, A., Prieto, А,Т., Martinez //Carbohydr Res. 1996.- V 281. - P. 145-148.

113. Hamuro, J. Carboxymethylpachymaran, a new water-soluble polysaccharide withmarked antitumor activity / J., Hamuro, Y., Yamashita, Y., Ohsaka, Y., Maeda //Nature. 1971. -V. 233. -P.486-487.

114. Harwood J. Strategies for coping with low environmental temperatures / J.

115. Harwood//TIBS.-1991.-V. 16.-P. 126-127.

116. Hay, G.W. Periodate oxidation of polysaccharides: general procedures. / G.W.,

117. Hay, В.A., Lewis and F. Smith // Methods Carbohydr. Chem. 1965. - V.5.-P.357-360.

118. Hamburger, M. Bioactivity in plants: the link between phytochemistry andmedicine / M. Hamburger, and K. Hostettmann // Phytochemistry. 1991. V. 30. - P. 3864-3874.

119. Homans, A.L. Direct bioautography on thin-layer chromatograms as amethod for detecting fungitoxic substances / A.L. Homans and A. Fuchs // Journal of chromatography. 1970. -V.51. - P. 327-329.

120. Hwang, B.Y. Antioxidant Benzoylated Flavan-3-ol Glycosides from Celastrus Orbculatus / B.Y. Hwang // Journal of natural products. 2001. - V.64. - P. 8284.

121. Fraser, R.N. Polysaccharides elaborated by Polyporus pinicola (Fr) /R.N., Fraser,

122. S., Karacsonyi and В., Lindberg // Acta Chem. Scand. 1967. - V.21. - P. 17831789.

123. Fang, Q. H. Submerged fermentation of higher fungus Ganoderma lucidum forproduction of valuable bioactive metabolites-ganoderic acid and polysaccharide / Q. H., Fang, J. J., Zhong // Biochemical Engineering Journal. 2002. - V.10. -P.61-65.

124. Jelsma J. Observation on the cell-wall composition of the bracket fungi1.etiporus sulphureus and Piptoporus betulinus / J., Jelsma, D.R., Kreger // Archives of Microbiology.- 1978.- V. 119.- P.249-253.

125. Ishurd O. The anti-cancer activity of polysaccharide prepared from Lybian dates

126. Ikekawa Т. Antitumor polysaccharides of Flammulina velutipes 2 / Т., Ikekawa,

127. Y., Ikeda, Y., Yshioka, K., Nakanishi, E., Ykoyoma, E., Ymazaki // Koreyan J. Mycol.- 1999.-V. 27. -P.143-154.

128. Elson, E.L. Fluorescence Correlation Spectroscopy I, Conceptual Basis and theory

129. E.L., Elson, and D., Magde // Biopolymers. 1974. - V. 13. - P. 1-27.

130. Krietsch, T. Fluoreszenz-Korrelations-Spektroskopie (FCS): Ein neues analytisches Verfahren zur Charakterisierung molekularer Wechselwirkungen /Krietsch, Т., S. Sterrer, and T. Schonknecht I I DGZ-Mitteilungen. 1996. -V.l. - P. 21-24.

131. Kline, R.M. A simple technique in developing thin-layer bioautographs / R.M.,

132. Kline, and Т., Golab // Journal of chromatography. 1965. - V.l8. - P. 409 -411.

133. Karaman, Y. Antimicrobial activity of aqueous and methanol extracts of Juniperus oxycedrus L. / Y., Karaman, M., Sengu. & A. Adiguzel // Journal of Ethnopharmacology. 2004. - V.85. - P.213-235.

134. Keller A.C. Antimutagenic affect of the mushroom Agaricus blazei Murrill extracts on V79 cell / A.C. Keller, M.P. Maillard, L.R. Ribeiro, G. Speit, Q.Jordao // Mutal. Res. 2001. - V.496. - P.5-13.

135. Kim, S. Antibacterial effect of water-soluble arrow root (Pueraria eradix) teaextracts on food borne pathogens in ground beef and mushroom soup Kim, S. & Fung, D. Y. С J S.Kim // Journal of Food Protection. 2004. - V. 67(9). -P.1953 -1956.

136. Kulicke, W. Correlation between immunological activity, molar mass, and molecular structure of different (l-3)-L-D-glucans. / W., Kulicke, A.I. Lettau,

137. Т., Heiko // Carbohydr. Res. 1997. -V. 297. - P. 135-143.

138. Kirakosyan A. Applied enviroment stress to enhance the levels of polyphenolicsin leaves hawthorn plant / A.Kirakosyan, P. Kaufman, S.Warber, S. Zick, K. Aaronson, S. Boiling, S. C. Chang // Physiologia Plantarum. 2004.- V. 121.-P. 182- 186.

139. Kobayashi H. Characterization of Aspartic Proteinase from Basidiomycete,1.etiporus sulphureus / Kobayashi H., Kim H. // Food Sci. Technol. Res. -2003. -V.9.(l).- P. 30-34.

140. Koh J. H. Antifatigue and antistress effect of the hot-water fraction from myceliaof Cordyceps snensis / J.H., Koh, J.M., Kyung, J.C., Song // Biol. Pharm.Bull. -2003.-V 26.-P 691-694.

141. Hunnius, Pharmazeutisches Worterbuch., Berlin, New York: Walter de Gruyter.1. Vol. 7.-1993.-456 p.

142. Jordan K. Zjawiony Biologically acrive compounds from Aphylloporales (Polypore) Fungi / K. Zjawiony Jordan // J. Nat. Prod. 2004. -V.67. - P. 300310.

143. Jong, S.C. Medicinal and therapeutic value of the Shiitake Mushroom. Adv. /

144. S.C., Jong and J.M., Birmingham // Appl. Microbiol. 1993. -V.39. - P. 153183.

145. Jones, J.K.N. Fractionation using copper complexes / J.K.N. Jones and R.J.

146. Stoodley// Methods Carbohydr. Chem. 1965. - V.5. - P.36-38.

147. Jakovljevic, D. On the mannogalactan from the fruit bodies of Pleurotus ostreatus (Fr.) Quel. / D., Jakovljevic, J., Miljkovic-Stojanovic, M., Radulovic and M.H., Vljevic-Jakovljevic // J. Serb. Chem. Soc. 1998. - V.63. -P. 137142.

148. Lee, Т. M. Screening for N-methylatedtyramines in some higher fungi / T. Lee,,

149. G., West, J. L., Mclaughlin, L. R., Brady, J. L., Lowe & A. H. Smith //1.oydia. -1975. -V.38. P.450 - 452.

150. Lee, S. J. Isolation and sequence analysis of new peptaibol, boletusin, from Boletus spp / S.J., Lee, H., Yeo, B. S., Yun & I.D. Yoo //Journal of Peptide Science. 1999. - V.5 (8). - P.374 -378.

151. Lee, H. Antrodia camphorata polysaccharides exhibit anti-hepatitis В virus effects / H., Lee, R., Huang, C., Chen, H., Chen, W. Hsu and M. Lu //FEMS Microbiol. Lett. 2002. - V. 209. - P. 63-67.

152. List, P.H. Basische Pilzin halts stoffe / P.H. List // Planta Medica. 1958. - V.6.1. P.424.

153. Lin C.N. A lanostaanoid of Formosan Ganoderma lucidum / C.N., Lin, W.P. Tone, S.J. Won // Phytochemistry. V.29. - P.673-675.

154. Longvah, T. Compositional and nutritional studies on edible wild mushroomfrom north east India / Т., Longvah, & Y. G., Deosthale // Food Chemistry. -1998.-V.63.-P.331-334.

155. Leon F. Lanostanoid triterpenes from Laetiporus sulphureus and apoptosis induction on HL-60 human myeloid leukemia cells / F., Leon, J., Quintana, A., Rivera, F., Estevez, J., Bermejo. // Journal of Natural Products. 2004. - V. 67. -P. 2008-2011.

156. Mancheno J.M. Structual Analysis of the Laetiporus sulphureus Hemolytic

157. Pore-forming Lectin in Complex-with sugars ancheno / J.M., Mancheno, H., Goldstain, I.J., Martinez-Ripoll, M., Hermoso // The J. Bio. Chem. 2005.-V. 280.-№7.-P. 17251-17259.

158. Mendoza, C.E. Thin-layer chromatography and enzyme inhibition techniques / C.E. Mendoza // Journal of chromatography. 1973. - V.78. - P. 29 - 40.

159. Mau, J-L. Hayng antioxidant properties of hot water extracts from Ganodermatsugae Murrill / J-L Mau, S-Y Tsai, Y-H Tseng //LWN. 2005. - V.38. - P. 589-597.

160. Mau, J-L. Antioxidant properties metanolic extracts from of several medicinalmushrooms / J-L., Mau, G-R., Chao, K-T., Wu // Journal of Agricultural and Food Chemistry. -2001. V.49. - P. 5461-5467.

161. Mau, J-L. Antioxidant properties of several specialiti mushroom / J-L., Mau, H

162. C, Lin, S-F., Song // Food Research International. 2002b. -V.35. -P.519-526.

163. Manzi, P. Nutrient sinedible mushroom: Aninter-species comparative study / P.,

164. Manzi, L., Gambelli, S., Marconi, V., Vivanti, & L. Pizzoferrato // Food Chemistry. 1999. - V.65. - P. 477-482.

165. Mau, J.-L. Antioxidant properties of several specialty mushrooms / J.-L., Mau,

166. H.-C., Lin, & S.-F. Song, // Food Research International. 2002. -V.35. -P.519-526.

167. Moller, J. K. S. (Origanum dictamnus)as a source of water-extractable antioxidants / J. K. S., Moller, H. L., Madsen, Т., Altonen, & L. H., Skibsted // Food Chemistry. 1999 - P.64. - P.215-219.

168. Mukumoto, T. The chemical structure of a mannofucogalactan from the fruitbodies of Flammulina velutipes (Fr.) Sing. /Mukumoto, T. and Yamaguchi, H. // Carbohydr. Res. 1977. - V.59. - P. 614-621.

169. Manzi, P. Beta-glucans in edible mushrooms / P. Manzi and L. Pizzoferrato //

170. Food Chem. 2000. - V.68. - P. 315-318.

171. Mizuno, T. Food function and medicinal effect of mushroom fungi / T. Mizuno //

172. Food Ingred. 1993. V. 158. P. 8-23.

173. Molitoris, H.P. Mushrooms in medicine / H.P. Molitoris // Folia Microbiol. Praha.- 1994. V.39. - P.91-98.

174. Mizuno, T. Antitumor active substances from mushroom / Т., Mizuno, H., Sation, Т., Nishitoba & H. Kawagishi // Food Review International. 1995. -V.ll (1).-P.23-61.

175. Mosmann, T. Rapid colorometric assay for celluler growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays / T. Mosmann // Journal of Immunological Methods. 1983. - V.63 (1). - P.55-63.

176. Nieto, S. Flavonoids as stabilizers of fisoil: an alternative to synthetic antioxidants / S., Nieto, A., Garrido, J., Sanhueza, L.A., Loyola, G., Morales, F., Leighton //J. Am. Oil Chem. Soc. 1993. - V.78 (8). - P.773-778.

177. Niki, E. Antioxidantism-free radical and biological defense. / Niki, E., H.,

178. Shimaski & Mino, M. -Tokyo. 1994: Gakkai Syuppan Center.

179. Nakajima Y. Antioxidant small phenolic ingredients in Inonotus obliqus (persoon) Pilat (Chaga) / Y.Nakajima, Y. Sato, T. Konishi // Chem. Pharm.Bull. 2007. - V.55 (8). - P. 1222-1226.

180. Ohno N. Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectral analysis of the fruit bodies of Grifola fronfosa / N., Ohno, K., lino, I., Suzuki, K., Sato, S.,Oikawa T. Yadomae // Chemical & Pharmaceutical Bulletin. 1985. - V.33. - P.1557-1562.

181. Park, Y. K. Comparison of thefl avonoid aglyconecontents of Apismelli ferapropolis from various regions of Brazil / Y.K., Park, M.H., Koo, M., Ikegaki & J.L., Contado // Arquivos de Biologiae Technologia. 1997. - V.40 (1). -P.97-106.

182. Perlin, A.S. Carbon-13 and proton magnetic resonance spectra of D-glucose-13C

183. A.S. Perlin and B. Casu // Tetrahedron Lett. 1969. - V.34. - P.2919-2924.

184. Pschyrembel, Klinisches Worterbuch. Vol. 257. 1994, Berlin, New York: Walterde Gruyter.

185. Rapior, S. Volatile composition of Laetiporus sulphureus / S., Rapior, G.,

186. Konska, J., Guillot, C., Andory, & J. -M., Bessiere, // Crytogamie,Mycology. -2000.-V.21 (1). -P.67-72.

187. Ruiz-Herrera, J. Biosynthesis of L-glucans in fungi / J. Ruiz-Herrera // Antonievan Leeuwenhoek. 1991. - V.60. -P. 73-81.

188. Roedig Penman, A. Antioxidant properties of myricetin and quercetin in oil andemulsions / A., Roedig Penman, & M. H., Gordon // Journal of the American Oil Chemists Society. 1998. - V.75 (2). - P. 169-180.

189. Rogers, S.O. Intraspecific comparisons of Laetiporus sulphureus isolates frombroadleaf and coniferous trees in Europe / S.O., Rogers, O. Holdenriederand T.N., Sieber//Mycol. Res. 1999. - V. 103. - P.1245-1251.

190. Rhee, K. Screening for acetylcholinesterase inhibitors from Amaryllidaceae using silica gel thin-layer chromatography in combination with bioactivity staining / K. Rhee // J. Chromatography A. 2001. -V. 915. - P. 217-223.

191. Sahu, S.C. Food antioxidants: their dual role in carcinogenesis. InS. Baskin & H.

192. Salem (Eds.). Washington: Taylor&Francis / S.C., Sahu, & S. Green, // Oxidants, antioxidants and free radicals. 1997. - V.2. - P. 329-330.

193. Sanchez-Moreno, C. Proceduretomeasure the antiradical efficiency of polyphenols / C.,Sanchez-Moreno, J.A.,Larrauri & F. A.Saura-Calixto // J. Sci. Food and Agriculture. 1998. - V.76. - P.270-276.

194. Sheena, N. Antibacterial activity of three Macro fungi Ganoderma lucidum, Navesporus floccose and Phellinu srimosus occurring South India / N., Sheena, A., Ajith, T.A., Mathew, & K.K. Janardhanan // Pharmaceutical Biology. -2003.-V.41.-P.564-567.

195. Simic, M.G. Mechanisms of inhibition of free radical processed in mutagenesisand carcinogenesis / M.G. Simic // Mutation Research. 1988. - V.202. -P.377-386.

196. Slinkard, K. Total phenol analyses: automation and comparison with manual methods / K. Slinkard // American Journal of Enology and Viticulture. 1977. -V. 28. - P.49-55.

197. Saito K. Further examination on the structure of an alkali-soluble glean isolatedfrom Ophelia lapidescens / K., Saito, M., Nishidjima, Т., Miyazaki // Chemical & Pharmaceutical Bulletin. 1990. - V.38. - P.1745-1747

198. Sakagami, H. Induction of immunopotentiation activity by a protein-bound polysaccharide, PSK (review) / Sakagami, H., Aoki, Т., Simpson, A., & Tanuma, S. //Anti-cancer Research. 1999- V.l 1. -P. 993-1000.

199. Stalpers, J.Ai, The Aphyllophoraceous Fungi III Key to the species of the Hericiales. / Butin, H., Krankheiten der Wald- und Parkbaume. 1965, Stuttgart: Georg Thieme. -115 p.

200. Saito H. 13C nuclear magnetic resonance study of a gel-forming branched (1—>3)

201. P-glucan, A3, from Pleurotus ostreatus (Fr.) Quel: determination of side-chains and conformation of the polymer-chain in relation to gel-structure / H., Saito, Т., Ohki, Y., Yoshioka, F. A., Fukuoka // FEBS Letters. 1976. - V.68. - P.15-18.

202. Shimizu A. Isolation of an inhibitor of platelet aggregation from a fungus, Ganoderma lucidum / A., Shimizu, Т., Yano, Y., Stio, Y., Inada, // Chem. Pharm. Bull. 1985. - V.33. - P. 3012-5.

203. Sonnenbichler, J. A cyclopentabenzopyranone produced by the fungus

204. Heterobasidion annosum in dual cultures / Sonnenbichler, J. // Phytochemistry. 1983. - V.22 (6). - P.1489-1491.

205. Sonnenbichler, J. Further Metabolites from Dual Cultures of the antagonistic Basidiomycetes Heterobasidion annosum and Gloeophyllum abietinum

206. J. Sonnenbichler // Biol. Chem. Hoppe-Seyler. 1993. - V.374. - P.467-473.

207. Sonnenbichler, J. Isolation of antibiotic compounds from cultures of

208. Heterobasidion annosum synthesized in the presence of antagonistic fungi or host plant cells / J. Sonnenbichler // Biol. Chem. Hoppe-Seyler. 1989. -V.370. - P.1295-1303.

209. Su, С. Y. Differential-effects of Ganoderma acids on the thromboxane A (2)signaling pathways in human platelets / C.Y., Su, M.S., Shiao, & C.T. Wang // Biochem. Pharm. 1999. - V.58 (4). - P. 587-595.

210. Sterrer, S. Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS) a highlysensitive method to analyze drug/target interactions. J. Receptor & Signal / S. Sterrer and K. Henco // Transduction Res. 1997. - V.l7. - P.511-520.

211. Takao, T. A simple Screening method for antioxidants and Isolation of several antioxidants produced by marine bacteria from fish and shellfish / T. Takao //Basic. Biotech. Biochem. 1994. - V.58 (10). - P.1780-1783.

212. Toth J.O. Ganoderic acid T and Z: cytotoxic triterpenes from Ganoderma lucidum (Polyporaceae) / J-O., Toth, В., Luu, G., Ourisson // Tetrahedron Lett. 1983.-V. 24.-P.1081-1086

213. Tanigami, Y. Partial degradation and biological activities of an antitumor polysaccharide from rice bran / Y., Tanigami, S., Kusumoto, S., Nagao & S. Kokeguchi // Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1991. -V.39 (7). - P. 1782-1787.

214. Turkoglu A. Antioxidant and antimicrobial activities of Laetiporus sulphureus

215. Bull.) Murrill / A., Turkoglu, E.M., Duru, N., Mercan, I., Kivrak, K., Gezer // Food Chemistry. 2007. - V. 101. - P. 267-273.

216. Tseng, Y.-H. Non-volatile flavor components of Ganoderma tsugae / Y.-H., Tseng, Y.-L., Lee, J-L. Mau // Food Chemistry. V. 38. - P. 589-597.

217. Teissedre, P.L. Wine phenolics: contribution to dietary in take and bioavailability / P.L., Teissedre, & N. Landrault, // Food Research International. -2000. V.33. -P.461-467.

218. Tepe, B. Antimicrobial and antioxidant activities of these sentialoil and variousextracts of Salvia tomentosa Miller (Lamiaceae) / В., Tepe, D., Daferera, A., Sokmen, M., Sokmen, & M. Polissiou // Food Chem. 2005. - V.90. - P.333-340.

219. Wasser, S.P. Medicinal properties of substances occurring in higher Basidiomycetes mushrooms: current perspective (review) / S.P., Wasser, & A.L. Weis International // J. Medicinal Mushrooms. 1999. -V.l. -P.31-62.

220. Weber, R.W.S. Laetiporic acid, an polyenepigment from the wood-rotting basidiomycete Laetiporus sulphureus (Polyporales,Fungi) / R.W.S., Weber, A., Mucci & P., Davoli // Tetrahedron Letters. 2004. - V. 45. - P. 1075-1078.

221. Williams, G.M. Anticarcinogenic effect so synthetic phenolic antioxidants / G.M., Williams & M.J., Iatropoulos // USA: Taylor & Francis. In Oxidants, antioxidants, and free radicals. 1997. - P.341-350

222. Wolfram, M.L. Reduction with sodium borohydride / M.L., Wolfrom and A.

223. Thompson //Methods Carbohydr. Chem. 1963. - V2.-P.65-67.

224. Weins, C. Toxicological evaluation of harmful substances by in situ enzymaticand biological detection in high-performance thin-layer chromatography / C., Weins and H. Jork // J. Chromatography. 1996. - V. 750. - P. 403-407.

225. Willment, J.A. Characterization of the Human L-glucan receptor and its alternatively spliced isoforms / J.A., Willment, S., Gordon and G.D., Brown, // J. Biol. Chem. 2001. - V.276. - P.43818-43 823.

226. Wang, G. Y. Antitumor active polysaccharides from the Chinese mushroom

227. Songshan Lingzhi, the fruiting body of Ganoderma tsugae / G. Y., Wang, J., Zhang, H., Li, C., Zhang et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1993. - V.57 (6). - P.894-900.

228. Wu, T. S. Cytotoxicity of Ganoderma lucidum triterpenes / T. S., Wu, L. S., Shi,

229. S. C., Kuo // J. Nat. Prod. 2001. - V. 64 (8). - P. 1121-1122.

230. Zhang, J. Antitumor active protein-containing glycans from the Chinese mushroom Songshan Lingzhi, Ganoderma tsugae mycelium / J., Zhang, G. Y., Wang, H., Li et al. // Bios. Biotech. Biochem. 1994. -V.58 -P.1202-1205.

231. Zhang, L. Studies on fractionation and molecular weights of Chinese lacquerpolysaccharide / L., Zhang, X., Qiu, J., Xu et al.// Carbohydrate Polymers. -1992.-V. 19.-P. 161-166.

232. Ziegenbein F.C. Secondary metabolites from Ganoderma lucidum and Songiporus leucomalleullus / F.C. Ziegenbein, H-P.Hanssen, W.A. Konig // Phytochemistry. 2006. - V.67. - P.202-211.

233. Velioglu, Y.S. Antioxidant activity and total phenolics in selected fruits, vegetables, and grain products / Y.S., Velioglu, G., Mazza, L., Gao & B.D. Oomah // J. Agric. Food Chem. 1998. - V.46. -P.4113-4117.

234. Yang, J.-H. Non-volatile taste components Of Several commercial mushrooms /

235. J.-H., Yang, H.-C., Lin, J.-L. Mau // Food Chem. 2000. - V.172. -P.465-471.

236. Yang, J.-H. Antioxidant properties of several commercial mushrooms / J.-H.,

237. Yang, H.-C., Lin, J.-L. Mau, // Food Chem. 2002. - V.77. - P.229-235.

238. Yoshikawa, К Five lanostsne triterpenoids and tree saponins from the fruit bodyof Laetiporus versisporus / K., Yoshikawa, K., Matsumoto, S., Chie Mine, Sh., Bando // Chem.Pharm. Bull. 1978. - V. 48. - №10. - P.1418-1421.

239. Yanga, J.-H. Antioxidant properties of several commercial mushrooms / J.-H.,

240. Yanga, H.-C., Linb, & J., Maub // Food Chem. 2002.- V. - 77. - P.229-235.

241. Ykohama A. Triterpenoids of lanostane group from fruit bodies of ninebasidiomycetes species / A. Ykohama, S. Natori // Chem. Pharm. Bull. 2007. - V.22.-P.883-887.

242. Yen, G.C. Relation ship between antioxidant activity and maturity of peanuthulls. / G.C., Yen, P.D., Duh, & C.L., Tsai, // J. Agric. Food Chem. -1993.-V.41.-P. 67-70.

243. Yoshikawa K. A benzophuran glycoside and an acetylenic acid from the fungus1.etiporus sulphureus var. miniatus / K., Yoshikawa, S., Bando, S., Arihara, E., Matsumura, S., Katayama // Chem. Pharm. Bull. 2001. - V. 49. - P.327-329.

244. Yoshikawa K. New lanostanoid Glycosides from the fruit body of Laetiporus versisporus / K. Yoshikawa, K. Matsumoto, S Arihara // J. Nat. Prod. 2005 -V.62.-№4.-P.543-545

245. Yang F-C. The influence of environmental conditions on the mycelial growth of Antrodia cinnamomea in submerged cultures / F-C. Yang, H-C Huang, M-J. Yang // Enzyme and Microbial Techn. 2003. - V.33. - P.395-402.

246. Yap Т.О. Animproved method for of Lentinan from the edable Medicinal Shitake mushroom, Lentinus edodes (Burk) Sing / Т.О. Yap, M.L.M. Ng // Int. J. Medicinal Mushroom. 2004. - V.3. - P.6-19.