Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Изменения иммунобиологических параметров крови ягнят в послеотъемный период под воздействием разных форм соединений селена

ВАК РФ 06.02.05, Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации по теме "Изменения иммунобиологических параметров крови ягнят в послеотъемный период под воздействием разных форм соединений селена"

Невитов Михаил Николаевич

На правах рукописи

1Ьи

ргб^'М

7 " АВГ 2000.

Изменения иммунобиологических пара,метров крови ягнят в поелеотьемный период под воздействием разных форм соединений

селена

06.02.05 - физиология, биохимия и биотехнология сельскохозяйственных

животных.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Пенза- 2000

Работа выполнена па кафедре биологии животных Пензенской государственной сельскохозяйственной академии

Научные руководители:

доктор химических наук, профессор Блинохватов Александр Федорович, кандидат биологических наук, доцент Боряев Геннадий Иванович.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессо] ШОБИН Николай Александрович доктор биологических наук ВЕРХОВСКИЙ Олег Анатольевич

Ведущая организация

Самарская государственная сельскохозяйственная академия

Защита состоится « 2000 г в /С'

часов

на

заседании диссертационного совета К 120.82.02 при Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 432601 г Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1; тел 31-42-72

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии.

Автореферат разослан «» £/¿/¿£¿¿¿0- 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Пыхтина Лидия Андреевна

1.Общая характеристика работы

Актуальность темы. В практике животноводства наиболее полному использованию генетического потенциала животных препятствуют многочисленные стрессы, обусловленные нарушениями технологий кормления и содержания животных, а также и определенными ситуациями должного выполнения требований интенсивных технологий. Различные по своей природе стрессы одним из универсальных последствий имеют усиление процессов неферментативного свободнорадикального окисления, негативно влияющего на целостность клеточных мембран и, соответственно, на деятельность мем-браносвязанных ферментов. В частности, такая ситуация складывается при сильном стрессе, вызванном отъемом молодняка от матерей. В этом случае сила стресса и последующее усиление активности свободнорадикальных процессов часто ставят деятельность антирадикальной защитной системы организма на грань срыва. Следствием является повреждение ряда клеточных и внеклеточных структур, замедление скорости роста и возникновение и развитие иммунодефицитных состояний и, соответственно, общее снижение резистентности организма.

В связи с этим поиск путей и средств, способствующих поддержанию нормальной деятельности антиоксидантной защитной системы организма в стрессовых условиях и обеспечивающих тем самым нормальное развитие иммунных реакций, является актуальным.

Среди средств, способных регулировать свободнорадикальные процессы и влиять таким образом как на окислительный метаболизм, так и на иммунные реакции, следует отметить соединения селена - кофактора селен-зависимой глутатионпероксидазы, которая является основным звеном антирадикальной защиты. Единичные и бессистемные исследования в этой области основаны на использовании в качестве донора селена остротоксичного селенита натрия. Именно его высокая токсичность и ряд других отрицательных

свойств, например, нестабильность водных растворов, предопределили негативное, в большинстве случаев, отношение к этому препарату как к иммуностимулятору. В качестве его альтернативы нами испытано новое селеноорга-ническое соединение 9-фенил-симм-октагидроселеноксантен (селенопиран, СП-1), выгодно отличающееся низкой токсичностью, отсутствием любых проявлений генотоксичности и способностью проявлять антиоксидантные (антирадикальные) свойства в молекулярном виде. Мы предположили, что совокупность свойств этого соединения позволит снижать вызванную стрессом избыточную концентрацию свободных радикалов до физиологического оптимума и наряду с этим активизировать ферментативную детоксикацию токсических гидроперекисей липидов, влияя таким образом на развитие иммунных реакций организма молодняка сельскохозяйственных животных.

Целью работы является оценка изменений гуморального иммунитета и неспецифической резистентности организма ягнят в период послеотъемного стресса, возникающих под влиянием усиления процессов свободнорадикаль-ного окисления, и возможности коррекции состояния иммунной системы при помощи селеносодержащих препаратов.

Были поставлены следующие задачи:

- изучить влияние разных форм препаратов селена в условиях отъемного стресса на ферментативную антиоксидантную и иммунную системы ягнят;

- определить динамику изменения концентрации селена в крови ягнят в период отъемного стресса;

- изучить влияние препаратов селена на зоотехнические показатели ягнят и возможность их использования в качестве адаптогенов в стрессовых ситуациях.

Научная новизна работы.

Впервые определена динамика изменения активности основных ферментов системы антирадикалыюй защиты - супероксидцисмутазы и глутатион-

пероксидазы и концентрации селена в крови ягнят в условиях послеотьемно-го стресса.

Показано, что у животных в период послеотъемного стресса происходит снижение уровня иммуноглобулинов М- и А-классов в сыворотке крови, а также реакций неспецифической резистентности. Доказано, что введение нового селеноорганического соединения СП-1 нормализует концентрацию 1пА у животных в послеотъемный период с последующей стимуляцией его синтеза.

Выдвинута гипотеза механизма снижения уровня гемоглобина в крови под влиянием селеносодержащих препаратов.

Практическая значимость работы.

На основании полученных иммунологических и биохимических данных, характеризующих состояние организма молодняка сельскохозяйственных животных в условиях стресса, предложены способы повышения резистентности и продуктивности путем внутримышечного введения соединения селена СП-1 с целью оптимизации уровня свободных радикалов в крови и стимуляции иммунной системы.

Положения, выносимые на защиту.

Отъем для молодняка сельскохозяйственных животных является критическим периодом в их развитии и сопровождается образованием избыточного количества свободнорадикальных окислителей в организме.

Между концентрацией ультрамикроэлемента селена в крови, активностью ферментов антирадикальной защиты и иммунными реакциями в стрессовых ситуациях существуют причинно-следственные связи.

Введение соединений селена ягнятам при отъеме от матерей сохраняет концентрацию 1дА и 1§М в период послеотъемного стресса, а в дальнейшем стимулирует их выработку.

Селенопиран оказывает выраженное положительное влияние на показатели живой массы ягнят после отъема за счет антиоксидантных и адаптоген-ных свойств.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались на ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и молодых ученых ПГСХА в 1997 - 1999 годах, а также на 50 научной конференции студентов и аспирантов Мичуринской ГСХА (Мичуринск, 1998г).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация написана на 110 страницах, состоит из введения, обзора литературы, объектов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений, библиографического списка, состоящего из 150 наименований, в том числе на иностранных языках и приложений.

2. Объекты и методы исследований.

Исследования проводились в 1997 - 1999 гг на ягнятах пород Советский меринос и Романовская в послеотъемный период. Научные опыты на ягнятах породы Советский меринос были поставлены в условиях виварии ПГСХА, научно-производственный опыт на ягнятах Романовской породы - в АО "Пригородное" Кузнецкого района Пензенской области.

В научном опыте из ягнят породы Советский меринос трехмесячного возраста после отъема по методу пар-аналогов были сформированы 3 группы по 10 голов в каждой. Животным контрольной группы внутримышечно вводился стерильный физиологический раствор, животным первой опытной группы - органическое соединение селена селенопиран (9-фенил-симм,-октагидроселеноксантен, СП-1) в дозе 0,1 мг селена на 1 кг живой массы, ягнятам 2 опытной группы - водный раствор селенита натрия в такой же дозе. Инъекции производились в день отъема, на 30 и 60 день после отъема. Все 3

группы животных находились в одинаковых условиях содержания и на одинаковых сбалансированных рационах.

Схема опыта представлена на рисунке 1.

Рис 1. Общая схема исследований.

В ходе исследований определялись следующие показатели: Биохимические - содержание селена в плазме и сыворотке крови флюо-риметрическим методом в модификации H.A. Голубкиной, активность ферментов антирадикальной защиты - супероксиддисмутазы (СОД) методом

H.P. Misra и J. Fridovich в модификации О.С. Брусова и глутатионпероксида-зы (ГПО) методом В.М. Моина, содержание общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом;

Иммунологические - концентрация иммуноглобулинов G-, М- и А-классов в сыворотке крови методом простой радиальной иммунодиффузии с использованием моноспецифических антисывороток и моноклональных антител, процент фагоцитоза, фагоцитарный индекс нейтрофилов путем подсчета захваченных фагоцитами микроорганизмов (Е. Coli штамма К-12) в мазке, окрашенному по Романовскому-Гимзе, бактерицидная активность сыворотки крови по торможению развития кишечной палочки, внесенной в сыворотку;

Гематологические - количество лейкоцитов в 1 л крови путем подсчета в камере Горяева, содержание гемоглобина гемоглобин-цианидным методом, лейкограмма;

Зоотехнические - живая масса, абсолютный, относительный и среднесуточный приросты живой массы.

Материалом для исследований являлась кровь, взятая из яремной вены в день отъема и на 7, 18 и 28 сутки после каждой из трех инъекций.

В научно-хозяйственном опыте, проводившемся на племенной овцеферме АО "Пригородное" Кузнецкого района Пензенской области, объектом исследований были ягнята Романовской породы в период отъема и последующие 30 суток. Сразу после отъема по методу сбалансированных групп аналогов были сформированы 2 группы по 20 ягнят в каждой - опытная и контрольная. Животным опытной группы внутримышечно вводился масляный раствор селенопирана из расчета 0,1 мг селена на 1 кг живой массы, контрольным ягнятам - физиологический раствор. Кровь для исследование бралась 4 раза у 5 голов из каждой группы в день отъема, на 7, 18 и 28 сутки после отъема. Животные содержались в одинаковых условиях на рационах, принятых в хозяйстве.

Результаты исследований были статистически обработаны методом определения достоверной разности при малых выборках по H.A. Плохинскому, а также с использованием непараметрических критериев сравнения.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Изменение состояния иммунной системы ягнят в послеотьем-

нын период.

Отъем для ягнят является мощным стрессовым фактором и характеризуется повышенным образованием в организме свободнорадикалъных окислителей. Физиологические концентрации супероксидных и пероксидных радикалов поддерживаются, прежде всего, ферментами системы антирадикальной защиты - супероксиддисмутазой и селен-содержащей глутатионпе-роксидазой. Действуя последовательно, эти ферменты превращают супероксидный радикал в пероксид водорода, а затем последний - в воду. Наибольшая эффективность этой системы достигается при адекватном повышении активности глутатионпероксидазы вслед за активизацией супероксиддисму-тазы. В противном случае происходит излишнее накопление пероксида водорода - продукта нейтрализации супероксида, который обладает высокой способностью повреждать клеточные структуры. Недостаточная активность ГПО обычно наблюдается при дефиците в организме селена. Проведенные нами исследования показали, что у ягнят контрольной группы в послеотъем-ный период происходило резкое повышение активности фермента суперок-сиддисмутазы. На 18 сутки после отъема активность СОД увеличилась на 306,5 %, по сравнению с первоначальным уровнем .

Активность же ГПО возрастала лишь до 7 суток после отъема с дальнейшим неадекватным снижением, что может свидетельствовать об истоще-

нии данного фермента и неэффективности системы антирадикалъной защиты в условиях послеотъемного стресса (Рис 2).

1супш 7сутки 18сугки 28сутки 35сутки ■■■Активность ГПО,Е/гНЬ ■ ♦■ Активность СОД.Е'гНЬ

Рис 2. Активность СОД и ГПО крови ягнят контрольной группы.

Таким образом, динамика активности ферментов системы антирадикальной защиты организма ягнят в послеотъемный период свидетельствует об усилении процессов свободнорадикапьного окисления и выработки избыточных количеств продуктов окисления.

Избыток пероксида водорода оказал отрицательное влияние как на неспецифическую резистентность, так и на систему специфического иммунитета животных. Наиболее подверженными отрицательному воздействию стресса оказались иммуноглобулины и бактерицидная активность сыворотки крови.

На 7 сутки после отъема содержание ^М в сыворотке крови снизилось на 37,6 % (с 1,09±0,11до 0,68±0,14 мг/мл ), и только к 28 суткам достигло 2,14±0,27 мг/мл, превысив первоначальный уровень.

На 7 сутки наблюдалось существенное уменьшение содержания ^А. Снижение составило 43,2 % к первоначальному уровню (0,80^0,06 мг/мл против 1,41 ±0,21 мг/мл ), а на 18 сутки - 45,4 % (0,77±0,11 мг/мл ). Лишь к 35 суткам послеотъемного периода концентрация ^А в сыворотке крови приблизилась к дострессовому уровню (1,18±0,13 мг/мл ).

Послеотъемный стресс не оказал существенного влияния на содержание ^О в сыворотке крови ягнят.

Отъем молодняка от матерей повлиял на нёспецифическую систему защиты. У животных на 7 сутки после отъема бактерицидная активность сыворотки крови снизилась с 69 до 41 %, а к 28 суткам достигла прежнего уровня.

Значительные изменения были выявлены в показателях общего количества лейкоцитов, а также числа нейтрофилов, лимфоцитов, эозинофи-лов.

На 7 сутки после отъема общее количество лейкоцитов снизилось на 36,1 % (с 7,67±2,74 до 4,90±0,69»10% ), а к 18 суткам - на 51,6 по сравнению с первоначальным уровнем (до 3,71±0,30*10 9/л ). Значение показателя стабилизировалось к 35 суткам и оставалось без существенных изменений до 63 суток эксперимента (5,80 - 6,30* Ю9 /л ).

Количество сегментоядерных нейтрофилов с 1 до 18 суток уменьшилось на 49,4 % (с 3,48±0,54 до 1,76±0,28*109/л). До 63 суток эксперимента происходило постепенное повышение количества сегментоядерных нейтрофилов до 3,49±0,36* 109/л, то есть до первоначального уровня.

Послеотъемный стресс вызвал значительное снижение количества лимфоцитов с 1 до 18 суток эксперимента - с 3,58±1,45 до 1,52±0,19 *10%.

Снижение количества эозинофилов продолжалось с 1 до 28 суток эксперимента и составило 83,3 % (с 0,42±0,06 до 0,07±0,01 * 109/л).

Существенных изменений в лейкограмме (процентном соотношении разных форм лейкоцитов) на протяжении всего эксперимента не отмечалось.

Таким образом, изменения в системе ферментов антирадикальной защиты и иммунной системе ягнят в течение 28 суток после отъема от маток позволяют определить этот период как "критический" для организма животных, поэтому возникает вопрос о необходимости использования в "критические периоды" развития препаратов, регулирующих свободнорадикальные процессы как с целью предупреждения окислительных патологий, так и для стимуляции развития отдельных звеньев иммунной системы и повышения общей неспецифической резистентности

3.2 Влияние селеносодсржащих препаратов на иммунологические и гематологические показатели ягнят в послеогьемиый период.

Для коррекции свободнорадикальных процессов в "критические" периоды определенный интерес представляют соединения селена, обладающие антиоксидантными и иммуностимулирующими свойствами. При проведении эксперимента нами использовались такие селеносодержащие препараты, как селенит натрия и селенопиран (СП-1). Селей в составе селеноорганического соединения СП-1 находится в коваяентно-связанном состоянии и высвобождается из молекулы постепенно, в процессе метаболизма. Так как диапазон между минимально необходимой и летальной дозами селена крайне невелик, то опасность селенотоксикоза при применении селенопирана существенно снижается (ИЗ 50 селенопирана - 700-900 мг/кг живой массы, LD 50 селенита натрия - 20-50 мг/кг живой массы). Препараты селена вводились внутримышечно ягнятам в момент отъема и далее по описанной выше методике из расчета 0,1 мг селена на 1 кг живой массы.

Содержание селена в сыворотке крови ягнят контрольной группы к 7 суткам повысилось на 62,8 % (с 62,3 до 101,4 мкг/л), по сравнению с перво-

начальным уровнем, а к 35 суткам снизилось до 82,9 мкг/л. Такой уровень селена в сыворотке крови ягнят свидетельствует об отсутствии выраженного селенодефицита. Однако, его содер'жание недостаточно для оптимального функционирования системы ферментов антирадикальной защиты ГПО и СОД в условиях стресса. Повышение концентрации этого ультрамикроэлемента в сыворотке крови контрольных животных на 7 сутки после отъема, возможно, связано с его перераспределением в организме. Уровень селена в сыворотке крови животных, получавших СП-1, к 7 суткам после отъема повысился на 103,5 % (с 67,7 до 137,8 мкг/л) с последующим постепенным снижением к 35 суткам до 100,3 мкг/л и был выше на 35,9 %, чем у контрольных животных (Р<0,001) и на 16,8 %, чем у ягнят, получавших селенит натрия (Р<0,01).

Как селенопиран, так и селенит натрия оказали существенное влияние на функционирование ферментов антирадикальной защиты - глутатионпе-роксидазы и супероксиддисмутазы.'У животных, получавших инъекции СП-1, с 1 по 18 сутки эксперимента постепенно возрастала активность как СОД, так и ГПО, но в значительно меньшей степени, чем в контроле (Рис 3).

700 ------,-:-1- 7

I сутки 7сутки 18сутки 28сутки 35сутки

ИИИ Активность ГПО,Е/гНЬ —♦—Активность СОД, Е/гНЬ Рис 3. Активность СОД и ГПО ягнят 1 опытной группы (СП-1)

Активность СОД у животных, получавших инъекции селенита натрия, на 7 сутки эксперимента осталась без изменений, а на 18 сутки возросла на 47,3 %. Активность ГПО у животных этой группы увеличилась с 1 по 18 сутки на 132,4 %, по сравнению с начальным уровнем (Рис 4).

1сутки 7сугки 18сугки 28сугки 35сутки

ММ Активность ГПО, ЕЛНЬ ♦ Активность СОД, Е/гНЬ

Рис 4. Активность СОД и ГПО ягнят 2 опытной группы (Селенит натрия).

Таким образом, на 18 сутки активность СОД ягнят контрольной группы была выше на 97,6 %, чем у ягнят, получавших СП-1 (Р< 0,01) и на 64,3 %, чем у ягнят, получавших селенит натрия (Р< 0,01). Активность же ГПО у ягнят контрольной группы на 18 сутки была ниже, соответственно, на 24,7% и 47,6% (Р <0,05). Понижение активности ГПО на фоне повышения активности СОД может свидетельствовать о неэффективности нейтрализации пероксида водорода системой антирадикальной защиты, который генерируется при участии СОД.

Между активностью ГПО крови ягнят контрольной группы и получавших селенит натрия и содержанием селена в сыворотке крови наблюдалась высокая положительная корреляция (г = 0,89). Однако, при использовании

органической формы селена - СП-1 - корреляция была средней (г=0,49). Возможно, что селенопиран, обладая антиоксидантными свойствами, включается в цепь ферментативных реакций и частично выполняет функции глу-татионпероксидазы.

Введение ягнятам при отъеме препаратов селена отразилось на содержании иммуноглобулинов классов в, М и А в сыворотке крови.

30 25 20

г;

* 15 о

ея

ю

5 0

Контрольная группа -В- 1 опытая группа (СП-1)

-¡г- 2 опытая группа (Селенит натрия)

Рис 5. Содержание ^О в сыворотке крови ягнят.

Содержание ^О в сыворотке крови ягнят контрольной группы колебалось в пределах 17,0 - 20,4 мг/мл, в сыворотке крови ягнят, получавших селенит натрия - 17,1 - 21,7 мг/мл. У ягнят, получавших СП-1 содержание ^О в сыворотке крови было выше, по сравнению с контролем, на 28 сутки после инъекции - на 23,2 % (Р<0,05), на 35 сутки (7 сутки после второй инъекции) - на 19 % (Р<0,05), на 56 сутки (7 сутки после третьей инъекции СП-1) - на 25,7 % (Р<0,05). Такую динамику изменения концентрации в сыво-

1 1 1 !

-1 N р к.

>- 1

}

1

1 сутки 7сутки 18супси 28супси 35сутки 4бсупси 56сутки бЗсутки 74супси

ротке крови ягнят, получавших СП-1 можно охарактеризовать как неярко выраженный иммунный ответ на вводимое селеноорганическое соединение (Рис 5).

Выраженное стимулирующее действие на синтез 1§М в организме ягнят оказал селенит натрия.

Содержание 1§М в сыворотке крови животных контрольной группы к 7 суткам снизилось с 1,09 до 0,68 мг/мл (на 37,6%), к 28 суткам повысилось до 2,14 мг/мл. В дальнейшем значение показателя изменялось в пределах 1,42 -1,87 мг/мл.

У ягнят, получавших СП-1, концентрация ^М снижалась с 0 до 18 суток с 1,24 до 0,94 мг/мл (на 24,2%) и с 28 до 74 суток была в пределах 1,91 - 2,64 мг/мл. В целом концентрация ^М в сыворотке крови у животных этой группы была несколько выше, чем у контрольных ягнят, хотя статистически достоверное превышение значение показателя отмечено только на 35 сутки эксперимента (Р<0,05).

В сыворотке крови ягнят, получавших селенит натрия, отмечено нарастание концентрации ^М с 0 до 35 суток с 1,51 до 3,06 мг/мл (на 102,6%), что на 82 % выше показателя .животных контрольной группы (Р< 0,01). После некоторого снижения на 46 сутки к 56 суткам концентрация ^М увеличилась до 3,16 мг/мл, что на 122,5 % выше, чем у ягнят контрольной группы (Р<0,05).

Стимулирующее действие селенита натрия на синтез ^М согласуется с имеющимися литературными данными, хотя механизм такого эффекта не имеет четкого объяснения.

3,5

3

ч 2,5

?

и: г

£

1.5

м

1

0,5

0

— 1 I 1 1

1

1—

._Д

I | --

1сугки 7сутки 18сугки 28сутки 35сутки 4бсутки 56сутки бЗсугки 74с>тки

- Контрольная груша -И-1 опытная группа (СП-1)

-2 опытная группа (Селенит натрия)

Рис 6. Содержание 1цМ в сыворотке крови ягнят.

Введение селенопирана ягнятам в послеотъемный период положительно повлияло на содержание 1аА в сыворотке крови (Рис 7).

§ 2,5 "й

< 1 < ы 1,5

1 сутки 7сутки 18сутки 28сутки 35сутки 46сутки 5бсутки бЗсугки 74сутки

•Контрольная группа -«- 1 опытная группа (СП-1)

•2 опытная группа (Селенит натрия)

Рис 7. Содержание IgA в сыворотке крови ягнят.

Содержание ^А в сыворотке крови ягнят, получавших селенопиран, возросло с 0 до 56 суток эксперимента с 1,48 до 3,54 мг/мл (на 139,2%). Некоторое снижение ^А наблюдалось лишь на 18 сутки после отъема. На 7 сутки концентрация 1§А в сыворотке крови ягнят, получавших СП-1 была выше на 100 % по сравнению с животными контрольной группы (Р< 0,01), и на 61,6 %, по сравнению с ягнятами, получавшими селенит натрия (Р <0,01). В дальнейшем отмечена стимуляция синтеза 1§А.

Таким образом, наиболее благоприятное влияние на динамику 1£А в период послеотъемного стресса оказал селенопиран, хотя уровень ^А в целом был выше и в группе, получавшей селенит натрия.

Бактерицидная активность сыворотки крови ягнят, получавших препараты селена, за период послеотъемного стресса существенно не изменялась и оставалась на уровне 60 - 70%. На 7 сутки эксперимента бактерицидная активность была выше, по сравнению с контролем, у ягнят, получавших СП-1 -на 57,1 %,(Р<0,05), а у ягнят, получавших селенит натрия - на 45,4 % (Р<0,05).

Динамика изменения количества лейкоцитов у ягнят контрольной группы и у ягнят, получавших СП-1, существенно не отличалась, количественных достоверных различий показателя между этими группами также не отмечено. Количество лейкоцитов в обеих группах изменялось в течение эксперимента от 3,42 до 9,00* 109 /л, что соответствует физиологической норме.

Несколько отличались показатели количества лейкоцитов у ягнят, получавших селенит натрия. С 18 суток послеотъемного периода как общее число лейкоцитов, так и количество нейтрофилов, эозинофилов и лимфоцитов было на 25-40 % выше, по сравнению со значениями этих показателей у животных двух других групп.

Достоверных изменений в процентном соотношении разных форм лейкоцитов не наблюдалось, то есть изменение общего числа лейкоцитов сопровождалось, пропорциональным изменением всех форм клеток "белой"

крови во всех трех группах.

Препараты селена, введенные ягнятам в период лослеотьемного стресса, оказали определенное влияние на захватывающую способность нейтро-филов. Наиболее выраженный эффект наблюдался от применения селенита натрия. У животных этой группы наблюдалось повышение фагоцитарного индекса нейтрофилов на 7 сутки после каждой инъекции препарата, по сравнению с ягнятами контрольной группы и получавшими СП-1.

Как в научном, так и в научно-производственном опытах соединения селена оказали влияние на содержание гемоглобина в крови ягнят.

В научном эксперименте у животных контрольной группы уровень гемоглобина снизился на 7 сутки после отъема на 18,7%, к 18 суткам повысился до 112,83 г/л и оставался в пределах 98,8 - 108,0 г/л до 56 суток эксперимента. (Рис 8).

120 110

ц 100

"С

в 90

5

Ю

§ 80

1 70

<и

^ 60 50 40

-♦-Контрольная группа -*- 1 опытная группа (СП-1)

2 опытная группа (селенит натрия)

ч о

/ N /

ь, / \ V

1 г 1 1 --1---- 1

1

1 !

]сутки 7сугки !8сутки 28сугки 35сугки 46сутки 5бсутки бЗсугки 74сугки 84сутки

Рис 8. Содержание гемоглобина в крови ягнят.

Динамика изменения уровня'гемоглобина у ягнят, получавших препараты селена, была сходной до 35 суток эксперимента. Тенденция к снижению показателя у животных обеих опытных групп сохранялась до 35 суток эксперимента. На 18 сутки эксперимента содержание гемоглобина было ниже, по сравнению с животными контрольной группы, у ягнят, получавших СП-1 - на 18,2 % (Р<0,001), у ягнят, получавших селенит натрия - на 17,7 % (Р<0,05). На 28 сутки уровень гемоглобина у животных опытных групп был ниже, соответственно, на 15,2 % (Р<0,001) и 10,8 % (Р<0,05), на 35 сутки -на 18,9 % (Р<0,01) и 19,2 %. С 35 суток до конца эксперимента существенных различий в содержании гемоглобина между группами не наблюдалось.

В научно-производственном эксперименте, селенопиран также оказал значительное влияние на содержание гемоглобина в крови ягнят. ¿Таллина ^ У животных контрольной группы уровень гемоглобина постепенно снизился с 0 по 28 сутки послеотьемного периода на 7,1 % (со 123,0 до 114,2 г/л). У ягнят, получавших селенопиран, уровень гемоглобина снизился с 0 до 18 суток на 13,5 % (со 120,7 до 104,4 г/л) и был ниже, по сравнению с показателем контрольной группы, на 12,9% (Р<0,05). На 28 сутки эксперимента содержание гемоглобина в крови животных опытной группы было на 7,2 % ниже, по сравнению с контролем, хотя разница недостоверна.

Снижение уровня гемоглобина у ягнят, получавших СП-1, по-видимому, связано с усилением интенсивности распада эритроцитов в печени и селезенке в результате гемолиза, о чем может свидетельствовала более высокая концентрация всех фракций билирубина в сыворотке крови этих животных.

Таблица 1

Содержание гемоглобина и билирубина в крови ягнят.

Сутки Контрольная группа, п=20 | Опытная группа (СП-1), п=20

гемоглобин,г/л билирубин, мкмоль/л гемоглобин,г/л билирубин, мкмоль/л

общий непрямой прямой общий непрямой прямой

0 123,0± 7,2 4,9±0,3 3,0±0,3 1,9±0,4 120,7± 4,9 4,2±0,3 3,3±0,2 0,9±0,3

7 122,2± 1,5 6,3±0,3 2,5±0,5 3,8±0,5 119,3± 6,8 6,6±0,7 4,1±0,4 2,5±0,3

18 119,8± 4,0 4,0±0,4 2,7±0,3 1,4±0,2 104,4± 4,0* 5,7±0,6 * 3,7±0,6 2,0±0,2 *

28 114,2± 4,7 3,5±0,5 1,3±0,5 2,2±0,1 106,0± 2,7 4,4±0,2 3,1±0,3 ** 1,3±0,2 **

* - Разность достоверна (Р<0,05), **-разность достоверна (Р<0,01).

Содержание билирубина в сыворотке крови ягнят, получавших СП-1, на 1В сутки было выше, по сравнению с контролем; общего на 42,7 % (Р<0,05), непрямого - на 40,4 %, прямого - на 48,2 % (Р<0,05).

На 28 сутки эксперимента содержание билирубина в крови ягнят опытной группы было выше, по сравнению с контролем, общего - на 25 %, непрямого - на 138,6 % (Р < 0,01) и прямого - ниже на 43,2% (Р<0,01).

Следует отметить, что содержание как гемоглобина, так и билирубина находилось в пределах физиологической нормы. У животных, получавших СП-1 происходило пропорциональное повышение всех фракций билирубина, что может свидетельствовать об отсутствии патологических процессов.

Селеноорганическое соединений СП-1 оказало выраженное положительное влияние на продуктивность ягнят. В течение 62 суток эксперимента среднесуточный прирост живой массы ягнят, получавших СП-1, был на уровне 100 г, в то время как значение этого показателя у контрольных животных и получавших селенит натрия находилось в пределах 67 - 68 г.

3.3 Применение селенопирана при отъеме ягнят в условиях сельскохозяйственного производства

Производственная апробация селенопирана проводилась с целью изучения влияния этого селеноорганического соединения на продуктивность ягнят в условиях послеотъемного стресса. Для контроля состояния здоровья ягнят определялись гематологические показатели.

Как и в предыдущем эксперименте, селеносодержащий препарат оказал выраженное положительное влияние на энергию роста ягнят в первые 28 суток после отъема (Таблица 2).

Таблица 2

Динамика изменения живой массы ягнят романовской породы.

Сутки Контрольная группа п=20 Опытная группа (СП-1) п=20

живая масса, кг абсолютный прирост, кг среднесуточный прирост, г относительный прирост, % живая масса, кг абсолютный прирост, кг среднесуточный прирост, г относительный прирост, %

0 14,4±0,5 - - - 14,б±0,5 - - -

28 15,8±0,6 1,4 50,9 9,7 16,4±0,7 1,8 65,5 12,3

49 17,9±1,1 2,1 99,5 13,3 18,7±1,2 2,3 110,0 14,0

154 31,3±1,3 13,4 128,0 74,9 31,5±1,2 12,8 121,9 68,4

Абсолютный прирост живой массы в этот период у животных, получавших СП-1, был на 28,6 % выше, а среднесуточный прирост живой массы -на 28,7 % выше, по сравнению с животными контрольной группы. В дальнейшем существенных различий в показателях живой массы между опытными и контрольными животными не отмечалось.

Выводы.

1. Полученный экспериментальный материал позволяет оценить период до 28 суток после отъема ягнят от матерей как один из наиболее критических в раннем онтогенезе. Усиливаются свободнорадикальные процессы. Активность основных ферментов антирадикальной защиты - супероксидцисмутазы и глутатионпероксидазы - изменяется некомплементарно. Возникает выраженный иммунодефицит, характеризующийся снижением содержания ^М на 37 %, ^А на 43 %, бактерицидной активности сыворотки крови на 41 %, количества лейкоцитов на 36 %, по отношению к первоначальному уровню.

2. Установлена взаимосвязь между ферментативной антиоксидантной и иммунной системами в условиях послеотъемного стресса. Оценено воздействие на эти системы и продуктивность ягнят органической (9-фенил-симм-октагидроселеноксантен) и неорганической (селенит натрия) форм соединений селена. Наиболее эффективной является органическая форма соединения селена, оптимизирующая деятельность антирадикальной системы организма ягнят.

3. Установлен факт повышения содержания селена в сыворотке крови ягнят на 62,7 % в первые 7 суток после отъема с последующим снижением до исходного уровня к 28 суткам. Введение в этот период в организм ягнят се-ленопирана и селенита натрия в дозе 0,1 мг селена на 1 кг живой массы одинаково повышает содержание этого микроэлемента в сыворотке крови на 103% к 7 суткам послеотъемного периода и поддерживает его на протяжении 28 суток на стабильно высоком уровне.

4. Установлена высокая положительная корреляция (г = 0,89) между активностью глутатионпероксидазы и содержанием селена в сыворотке крови при введении селенита натрия, а также в контроле. В случае использования селеиопирана подобная корреляция отсутствует, что может быть связано со способностью этого соединения перехватывать свободные радикалы.

5. Введение в организм ягнят в период послеотъемного стресса соединений селена препятствует стресс-зависимому снижению концентрации ¡¿М, а в последующем стимулирует его синтез в случае селенита натрия - на 82 %, а в случае селенопирана - на 40 %. Отличительной особенностью органической формы соединения селена является выраженный протекторный и стимулирующий эффект в отношении ^А.

6. В противоречие со сложившимися представлениями о стимулирующем эффекте селена в отношении уровня гемоглобина, установлен факт его снижения в стрессовый период под воздействием органической и неорганической форм соединений селена.

7. Введение селеноорганического соединения в организм ягнят в условиях хозяйственного опыта снизило степень отрицательного воздействия отъемного стресса на прирост живой массы. У ягнят, получавших селенопи-ран, среднесуточный прирост живой массы был выше на 28,2 %, а абсолютный прирост живой массы - на 26,7 %, по сравнению с контрольными показателями.

Практические предложения.

Обнаруженная выраженная иммуностимулирующая и биостимулирую-щая активность 9-фенил-симм-октагидроселеноксантена предопределяет необходимость расширенных испытаний этого соединения в качестве нового отечественного адаптогенного препарата, позволяющего нивелировать негативные последствия послеотъемного стресса молодняка сельскохозяйственных животных.

Основные положения диссертации опубликованы в следующих работах.

1. Боряев Г.И., Блинохватов А.Ф., Невитов М.Н. Влияние различных соединений селена на иммунный статус ягнят в послеотъемный период//"Овцы, козы, шерстное дело". Научно-производственный журнал. - №2, 1998.- с 4346.

2. Боряев Г.И., Невитов М.Н. Влияние селеноорганического соединения СП-1 на гуморальную систему иммунитета ягнят в послеотъемный период// Тезисы докладов молодых ученых.- Пенза, 1998- с 77-78.

3. Невитов М.Н., Боряев Г.И. Влияние разных форм соединений селена на гематологические показатели ягнят// Тезисы докладов молодых ученых. -Пенза, 1998.-с 80-81.

4. Невитов М.Н. Влияние соединений селена на гематологические показатели ягнят в послеотъемный период// "Проблемы и перспективы развития АПК в условиях рыночных отношений". Тезисы докладов 50 научной конференции студентов и аспирантов 16 - 17 апреля 1998 г. - Мичуринск, 1998,- с 40-42.

5. Боряев Г.И., Блинохватов А.Ф., Невитов М.Н., Тюлюкина Г.Г. Иммунобиологические характеристики крови ягнят, получавших соединения селена// "Современные проблемы науки в АПК": Материалы научной конференции.-Пенза, 1999,-с 16-17.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Невитов, Михаил Николаевич

Общая характеристика работы

1. Обзор литературы

1.1 Ферментная антиоксидантная система организма

1.2 Роль селена в антиоксидантной системе

1.3 Биохимические функции селена

1.4 Селен и иммунная система жвачных

1.5 Использование селеносодержащих соединений для повышения продуктивных качеств животных

2. Объекты и методы исследований

3. Результаты исследований

3.1 Изменения состояния иммунной системы ягнят в послеотъемный период

3.2 Влияние селеносодержащих препаратов на иммунологические и гематологические показатели ягнят в послеотъемный период

3.3 Применение селенопирана при отъеме ягнят в условиях сельскохозяйственного производства

4. Обсуждение результатов

5. Выводы

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Изменения иммунобиологических параметров крови ягнят в послеотъемный период под воздействием разных форм соединений селена"

Актуальность темы. В практике животноводства наиболее полному использованию генетического потенциала животных препятствуют многочисленные стрессы, обусловленные многочисленными нарушениями технологий кормления и содержания животных, а также и определенными ситуациями должного выполнения требований интенсивных технологий. (М. Ко-вальчикова, 1978, Никитченко И.Н., 1988). Различные по своей природе стрессы одним из универсальных последствий имеют усиление процессов неферментативного свободнорадикального окисления, негативно влияющего на целостность клеточных мембран и, соответственно, на деятельность мем-браносвязанных ферментов (Журавлев А.И., 1989). В частности, такая ситуация складывается при сильном стрессе, вызванном отъемом молодняка от матерей. В этом случае сила стресса и последующее усиление активности свободнорадикальных процессов часто ставят деятельность антирадикальной системы организма на грань срыва. Следствием является повреждение ряда клеточных и внеклеточных структур, замедление скорости роста и возникновение и развитие иммунодефицитных состояний и, соответственно, общее снижение резистентности организма (Плященко С.И., Сидоров В.Т., 1987).

В связи с этим поиск путей и средств, способствующих поддержанию нормальной деятельности антиоксидантной защитной системы организма в стрессовых условиях и обеспечивающих тем самым нормальное развитие иммунных реакций, является актуальным.

Среди средств, способных регулировать свободнорадикальные процессы и влиять таким образом как на окислительный метаболизм, так и на иммунные реакции, следует отметить соединения селена - кофактора селен-зависимой глутатионпероксидазы, которая является основным звеном антирадикальной защиты. Единичные и бессистемные исследования в этой области основаны на использовании в качестве донора селена остротоксичного селенита натрия. Именно его высокая токсичность и ряд других отрицательных свойств, например, нестабильность водных растворов, предопределили нега4 тивное отношение к этому препарату как к иммуностимулятору. В качестве его альтернативы нами испытано новое селеноорганическое соединение 9-фенил-симм-октагидроселеноксантен (селенопиран, СП-1), выгодно отличающееся низкой токсичностью, отсутствием любых проявлений геноток-сичности и способностью проявлять антиоксидантные (антирадикальные) свойства. Мы предположили, что совокупность свойств этого соединения позволит снижать вызванную стрессом избыточную концентрацию свободных радикалов до физиологического оптимума и наряду с этим активизировать ферментативную детоксикацию токсических гидроперекисей липидов, влияя таким образом на развитие иммунных реакций организма молодняка сельскохозяйственных животных.

Целью работы является оценка изменений гуморального иммунитета и неспецифической резистентности организма ягнят в период послеотъемного стресса, возникающих под влиянием усиления процессов свободнорадикаль-ного окисления, и возможности коррекции состояния иммунной системы при помощи селеносодержащих препаратов.

Были поставлены следующие задачи: изучить влияние разных форм препаратов селена в условиях отъемного стресса на ферментативную антиоксидантную и иммунную системы ягнят; определить динамику изменения концентрации селена в крови ягнят в период отъемного стресса; изучить влияние препаратов селена на зоотехнические показатели ягнят и возможность их использования в качестве адаптогенов в стрессовых ситуациях.

Научная новизна работы.

Впервые определена динамика изменения активности основных ферментов системы антирадикальной защиты - супероксиддисмутазы и глутатион-пероксидазы и концентрации селена в крови ягнят в условиях послеотъемного стресса. 5

Показано, что у животных в период послеотъемного стресса происходит снижение уровня иммуноглобулинов М- и А-классов в сыворотке крови, а также реакций неспецифической резистентности. Доказано, что введение нового селеноорганического соединения СП-1 нормализует концентрацию ^А у животных в послеотъемный период с последующей стимуляцией его синтеза.

Выдвинута гипотеза механизма снижения уровня гемоглобина в крови под влиянием селеносодержащих препаратов.

Практическая значимость работы.

На основании полученных иммунологических и биохимических данных, характеризующих состояние организма молодняка сельскохозяйственных животных в условиях стресса, предложены способы повышения резистентности и продуктивности путем внутримышечного введения соединения селена СП-1 с целью оптимизации уровня свободных радикалов в крови и стимуляции иммунной системы.

Положения, выносимые на защиту.

Отъем для молодняка сельскохозяйственных животных является критическим периодом в их развитии и сопровождается образованием избыточного количества свободнорадикальных окислителей в организме.

Между концентрацией ультрамикроэлемента селена в крови, активностью ферментов антирадикальной защиты и иммунными реакциями в стрессовых ситуациях существуют причинно-следственные связи.

Введение соединений селена ягнятам при отъеме от матерей сохраняет концентрацию ^А и ^М в период послеотъемного стресса, а в дальнейшем стимулирует их выработку.

Селенопиран оказывает выраженное положительное влияние на показатели живой массы ягнят после отъема за счет антиоксидантных и адаптоген-ных свойств. 6

Заключение Диссертация по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Невитов, Михаил Николаевич

77 Выводы

1. Полученный экспериментальный материал позволяет оценить период до 28 суток после отъема ягнят от матерей как один из наиболее критических в раннем онтогенезе. Усиливаются свободнорадикальные процессы. Активность основных ферментов антирадикальной защиты - супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы - изменяется некомплементарно. Возникает выраженный иммунодефицит, характеризующийся снижением содержания 1§М на 37 %, ^А на 43 %, бактерицидной активности сыворотки крови на 41 %, количества лейкоцитов на 36 %, по отношению к первоначальному уровню.

2. Установлена взаимосвязь между ферментативной антиоксидантной и иммунной системами в условиях послеотъемного стресса. Оценено воздействие на эти системы и продуктивность ягнят органической (9-фенил-симм-октагидроселеноксантен) и неорганической (селенит натрия) форм соединений селена. Наиболее эффективной является органическая форма соединения селена, оптимизирующая деятельность антирадикальной системы организма ягнят.

3. Установлен факт повышения содержания селена в сыворотке крови ягнят на 62,7 % в первые 7 суток после отъема с последующим снижением до исходного уровня к 28 суткам. Введение в этот период в организм ягнят се-ленопирана и селенита натрия в дозе 0,1 мг селена на 1 кг живой массы одинаково повышает содержание этого микроэлемента в сыворотке крови на 103% к 7 суткам послеотъемного периода и поддерживает его на протяжении 28 суток на стабильно высоком уровне.

4. Установлена высокая положительная корреляция (г = 0,89) между активностью глутатионпероксидазы и содержанием селена в сыворотке крови при введении селенита натрия, а также в контроле. В случае использования селенопирана подобная корреляция отсутствует, что может быть связано со способностью этого соединения перехватывать свободные радикалы.

78

5. Введение в организм ягнят в период послеотъемного стресса соединений селена препятствует стресс-зависимому снижению концентрации ^М, а в последующем стимулирует его синтез в случае селенита натрия - на 82 %, а в случае селенопирана - на 40 %. Отличительной особенностью органической формы соединения селена является выраженный протекторный и стимулирующий эффект в отношении ^А.

6. В противоречие со сложившимися представлениями о стимулирующем эффекте селена в отношении уровня гемоглобина, установлен факт его снижения в стрессовый период под воздействием органической и неорганической форм соединений селена.

7. Введение селеноорганического соединения в организм ягнят в условиях хозяйственного опыта снизило степень отрицательного воздействия отъемного стресса на прирост живой массы. У ягнят, получавших селенопи-ран, среднесуточный прирост живой массы был выше на 28,2 %, а абсолютный прирост живой массы - на 26,7 %, по сравнению с контрольными показателями.

Практические предложения.

Обнаруженная выраженная иммуностимулирующая и биостимулирую-щая активность 9-фенил-симм-октагидроселеноксантена предопределяет необходимость расширенных испытаний этого соединения в качестве нового отечественного адаптогенного препарата, позволяющего нивелировать негативные последствия послеотъемного стресса молодняка сельскохозяйственных животных.

79

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Невитов, Михаил Николаевич, Пенза

1. Анакина Ю.Г. Селен в кормлении животных // Овцеводство. 1990. -№2. С. 44-45.2. . Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных: Справочное пособие./ Калашников А.П. и др М.: Агропромиздат, 1985. -325 с.

2. Агафонников В.Ф., Еранов A.M., Романовский М.Н. Применение автономных электростимуляторов желудочно-кишечеого тракта для нормализации обмена веществ у бычков на откорме // Сиб. вестн. с-х. науки. 1996.-№1-2.-С. 73-78.

3. Блинохватов А.Ф. Использование ультрамикроэлемента селена в рационах овец // Овцы, козы, шерстяное дело.-1997.-№5-6.-С. 11-14.

4. Брусов О.С., Герасимов A.M., Панченко Л.Ф. Влияние природных ингибиторов радикальных реакций на автоокисление адреналина// Бюлл. экспер. биол. и мед. 1976. - №1. - С. 33 - 35.

5. Викторов П.И., Менькин В.К. Методика и организация зоотехнических опытов. М.: Агропромиздат, 1991.- 112 с.

6. Дунин И.М., Лебенгарц ЯЗ. Использование селена в молочном скотоводстве // Аграр. наука.- 1997.-№6.- С. 20-21.

7. Ерохин A.C., Федорченко O.A., Кувшинова B.C. Профилактика нарушений воспроизводительной функции у коров // Ветеринария.-1998.-№3.-С. 37-38.

8. Ерохин A.C., Чернова И.Е. Эффективность подкормки коров селеном в пастбищный период //Зоотехния, 1999, №3. С.15-17.

9. Журавлев А.И. Развитие идей Тарусова Б.Н. О роли цепных процессов в биологии//Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: 1982. - С. 3 - 36.

10. Журавлев А.И., Мяльдзин А.Р., Баранов A.B. Методы регистрации свободнорадикального окисления липидов в сыворотке, плазме и мембранах клеток крови: Метод, указ. М.: МВА, 1989.- 12 с.

11. Иммунология: В 3-х Т.- Пер с англ. / Под ред. У. Пола. М.: Мир, 1987- 1989.- Т. 3.-235 с.

12. Н.Искандеров Б.Ф., Алиев A.A. Влияние жировых добавок и селена на азотный обмен у бычков и буйволят. // Бюллетень ВНИИФБ и П с.-х. животных." 1981.-№ 2.- С.21 23.

13. Касумов С.Н. Биологическое значение селена для жвачных животных,- М., 1979. 47 с.

14. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное изд./ Кондрахин И.П. и др. М.: Агропромиздат, 1985.- 287 с.

15. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям. М.: Наука, 1985.-213 с.

16. Ковальчикова М., Ковальчик К. Адаптация и стресс при содержании и разведении сельскохозяйственных животных / Под ред. и с предисл. E.H. Панова. Пер. со словац. М.: Колос, 1978.- 271 с.

17. М.Ф. Трифонова, П.М. Заика, А.П. Устюжанин М Основы научных исследований.-М.: Колос, 1993.- 239 с.

18. Марзанов Н.С. Иммунология и иммуногенетика овец и коз: Кишинев.-Штиница.-1991.-120 с.81

19. Машковцев Н.М. Влияние селена на продуктивность крупного рогатого скота // Лечение и профилактика незаразных болезней в промышленных животновоческих комплексах. Казань, 1984.- С. 11 - 14.

20. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. М., 1981. - 227 с.

21. Мецлер Д. Биохимия: В 3-х Т. Пер. с англ. М.: Мир, 1980.

22. Мишанин Ю.Ф. Биохимические и физиологические аспекты патогенеза селеновой недостаточности у крупного рогатого скота: Авто-реф.докт.дис.- Львов,1992.- 35 с.

23. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах// Лаб. дело. 1986. - №12. - С. 724 -727.

24. Никитченко И.Н. и др. Адаптация, стрессы и продуктивность сельскохозяйственных животных. Мн.: Ураджай, 1988.- 200 с.

25. Овсянников А.И. Основы опытного дела в животноводстве.- М., Колос, 1976.- 304 с.

26. Пахмутов А.И. Цитохимия лейкоцитов периферической крови сельскохозяйственных животных в норме и патологии. Казань, изд. Казанского ветеринарного института, 1988. - 250 с.

27. Плохинский H.A. Биометрия. 2-е изд. - М.: Изд-во Московского университета, 1970.- 368 с.

28. Плященко С.И., Сидоров В.Т. Стрессы у сельскохозяйственных животных. М.: Агропромиздат, 1987.- 192 с.

29. Прытков Ю.Н. Влияние селена на продуктивность молодняка крупного рогатого скота // 24 Огаревские чтения: Тезисы докладов научной конференции, Саранск, 4-9,декабря, 1995, Ч 2.- Саранск, 1995.- с 184 185.

30. Ройт А. Основы иммунологии. Пер. с англ. М.: Мир, 1991. - 328 с.

31. Салмане Р.Э. Влияние профилактических доз селенита натрия на продуктивность овец. В кн.: Минеральное питание сельскохозяйственных животных и птицы.- Фрунзе: Илим, 1968.- с 133-134.82

32. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М., 1960.-325 с.

33. Сергеев П.В. и др. Биохимическая фармакология: Учеб. Пособие для вузов. М.: Высшая школа, 1982. - 343 с.

34. Справочник биохимика / Досон Р. и др. М.: Мир, 1991.- 544 с.

35. Страйер JI. Биохимия: В 3-х Т. Пер с англ. М.: Мир, 1985.

36. Титов Г.Н., Лядюхин JI.H., Донин Г.И. Распределение, накопление и миграция радиоактивного селена в организме животных и птицы.- Улан-Уде: Бурят.кн. изд-во, 1968.- 51 с.

37. Тутельян В.А., Хотимченко С.А., Голубкина H.A. Определение селена в продуктах питания: Методические указания.- М.: Информационно-издательский центр Госкомсанэпиднадзора России, 1995.- 10 с.

38. Феденко П.Я. Эффективность использования селенита натрия для повышения продуктивности овец //Научно-практический бюлл.Укр НИИ животноводства степных районов.-1980.-вып 1 с 22-25.

39. Федоров Ю.Н. Характеристика иммуноглобулинов мелкого рогатого скота // Тр. ВИЭВ "Проблемы ветеринарной иммунологии". М.: 1983., Т 57.

40. Фролов Ю.Н. Мясная продуктивность овец при использовании селе-ноорганических препаратов//Овцы, козы, шерстяное дело.-1997.-№5-6.-с 1416.

41. Фурдуй Ф.И. Физиологические механизмы стресса и адаптации при остром действии стресс-факторов. Кишинев.: Штиница, 1986.- 240 с.

42. Arthur J.R. Selenium biochemistry and function. In Trace elements in man and animals 9. Proceedings of the Ninth International Symposium on trace elements in man and animals. Ottawa. Canada. 1997., pp 1-5.

43. Arthur J.R., Bermano G., Mitchell J.H., Hesketh J.E. Regulation of selenoprotein gene expression and thyroxine hormone metabolism. Bio-chem. Soc. Trans. 24. 1996. 384-388.

44. Aziz E.S. et al. Effects of selenium on polymorphonuclear leukocyte function in goats, Am. J. Vet. Res., 45, 1715, 1984.

45. Baker S.S., and Cohen H.J. Increased sensivity to H202 in glutathione peroxidase deficient rat granulocytes., J. Nutr., 114, 2003, 1984.

46. Becket G.J. et al. Inhibition of type 1 and type 2 iodothyronine deio-dinase activity in rat liver, kidney and brain produced by selenium deficiency. Biochem. J. 259, 1989, 887-892.

47. Behne, D. et al. Evidence of specific selenium target tissues and new biologically important selenoproteins. Biochim. Biophys. Acta. 966: 12-21. 1988.

48. Berenshstein T.F. Effect of selenium and vitamin E on antibody formation in rabbits, Zdra Wookhr. Boloruss, 18, 34, 1972.□

49. Boyne R. et al. An in vivo and in vitro study of selenium deficiency and infection in rats. Journal of Comparative Pathology, 1986, 96: 379-386.

50. Boyne R, and Arthtur J.R. Alterations of neutrophil function in selenium-deficient cattle, Journal of Comparative Pathology, 1979, 89, 151.

51. Buckman T.D, Sutphin M.S., Eskhert E.D. A comparison of the effects of dietary selenium on selenoprotein expression in rat brain and liver. Biochimica et Biophysica Acta. 1993, Vol 1163, Iss 2, pp 176-184.

52. Burck, R.F. & Hill, K.E. Regulation of selenoproteins. Annu. Rev. Nutr. 13: 65-81,1993.84

53. Burck, R.F. & Correia, M.A., Selenium and hepatic heme metabolism, in Selenium in Biology and Medicine, Spallholz, J.E., eds., Avi Pub. Co., Westport, Conn., 1981,86.

54. Burck, R.F. & Gregory, P.E., Some characteristics of 75Se-P, a selenoprotein found in rat liver and plasma, and comparison of it with seleno-glutathione peroxidase, Arch. Biochem. Biophys., 213, 73, 1982.

55. Burk R.F. Recent developments in trace element metabolism and function: Newer roles of selenium in nutrition. J. Nutr. 119: 1051-1054. 1989.

56. Burton R.M. et al. Reaction of selenium with immunoglobulin molecules., Biochim. Biophys. Acta, 493, 323, 1977.

57. Calvin M.I., Cooper G.W. A specific selenopolypeptide associated with the auter membrane of rat sperm mitochondria. The spermatozoan Fawatt. D.W. and Bedford J.M. eds., Urban and Schwazenberg, Baltimore 1979. 135.

58. Chanoine, J.P. et al. Effects of selenium deficiency on thyroid hormone economy in rats. Endocrinology 131: 1787-1792. 1992.

59. Chari S.N. et al. Glutathione and if s redox system in diabetic polymorphonuclear leukocytes., Am. J. Med. Sci., 287,14, 1984.

60. Chen, J.S. et al, Effects of dietary selenium and vitamin E on hepatic mixed-function oxidase activities and in vivo covalent binding of aflatoxin Bi in rats, J. Nutr., 112, 324, 1982.

61. Clausen, J. & Tranum J., Kinetics of selenite uptake by mononuclear cells from peripheral human blood, Biol Trace Elem. Res., 4, 245,1982.

62. Combs, G.F et al, Food-Based Approaches to Preventing Micronutrient Malnutrition: an International Research Agenda, ppl-68. Cornell. Internat. Inst. For Food, Agr., and Development, Cornell University, Ithaca, NY, 1996.

63. Combs G.F., Combs S.B. The role of selenium in nutrition. Acad. Press. Inc., 1986, 532 pp.85

64. Courday C. et al. Effect of selenium supplementation on biological constants and antioxidant status in rats. Journal of trace elements in medicine and biology. 1996, Vol 10, Iss 1, pp 12 19.

65. Dumont J.E. et al. The biochemistry of endemic cretinism Roles of iodine and selenium deficiency and goitrogens. Mol. Cell. Endoc. 100., 1994., 163-166.

66. Ellis T.M. et al. The effect of selenium supplementation on antibody response to bacterial antigens in Merino sheep with a low selenium status. Australian Veterinary Journal, 67: 226-228., 1990.

67. Epp O. et al., The refined structure of the selenoenzyme glutathione peroxidase at 0.2 nm resolution, Eur. J. Biochem., 133,51,1983.

68. Evenson, J.K. & Sunde, R.A. Selenium incorporation into selenoproteins in the Se-adequate and Se-deficient rat. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 187: 169-180, 1988.

69. Flohe L. et al. Glutathione peroxidase: a selenoenzyme// FEBS Letters. -1973. -32, №1. -p 132-134.

70. Florence T.M. The role of free radicals in disease. Australian and New Zealand Journal of Ophtalmology 1995, Vol 23, Iss 1, pp 3 -7.

71. Foote C., Photosensitised oxygenations and the role of singlet oxygen, Accounts Chem. Res., 1, 104, 1968.

72. Fung K.K., Zachariev Z., Georgiev B. Effects of selenium and vitamins A and E on reproductive function in cows maintained under commercial conditions. Zhivotnov dni Nauki. 1990, 27:3, 57-61; 15 ref.

73. Goyens, P. et al. Selenium deficiency as a possible factor in the pathogenesis of myxoedematous cretinism. Acta.Endoc. (Copenh). 114: 497-502. 1987.

74. Gyang E.O. et al. Effects of selenium-vitamin E injection on bovine poly-morphonucleated leukocytes phagocytosis and killing of Staphylococcus aureus, Am. J, Vet. Res., 45, 175, 1984.

75. Hartley W.J. Pros.- New-Zeal. Soc. Anim. Prod.-1963.-p 23.86

76. Hathaway R.L., Allison L.D., Oldfield I.E. Effects of oral selenium on performance of grazing heifers // Proc. Am. Soc. Anim. Sc. W.Sect. Ann, Meet. Ei. Centro. 1979. №30. P.268 270.

77. Hill K.E. et al, The DNA for rat selenoprotein-P contains 10 TGA codons in the open reading framé, J. Biochem., 1991, V. 266., Iss 16., pp 50-53.

78. Hoekstra, W.G. Biochemical function of selenium and its relation to vitamin E. Fed. Proc. 34: 2083-2089. 1975.

79. Iohnson Walter H., Norman Ben B., Duntar Iohn R. Effect of selenium and vitamin E on calf weight gains // Trace Elem. Metab. Man and anim. Proc. 41 nt. Sump. Perth, 11-15 May, 1981, Berlin e.a. 1982. P.203 -206.

80. Jeinek P.D. et al., The effect of selenium supplementation on immunity and establishment of an experimental Haemonchus contortus infection in weaner Merino sheep fed a low selenium diet. Australian Veterinary Journal, 65: 214217., 1988.

81. Kalcklosch, M. et al. A new selenoprotein found in the glandular epithelial cells of the rat prostate. Biochem. Biophys. Res. Commun. 217: 162-170. 1995.

82. Karle J.A. et al. Uptake of Selenium-75 by PHA-stimulated lymphocytes. Effect on glutathione-peroxidase. Biol. Trace Elem. Res., 5, 17, 1983.

83. Larsen H.J. et al. Influence of selenium on antibody production in sheep. Research in Veterinary Science 45 : 4-10, 1988.

84. Larsen H.J. et al. Influence of selenium on sheep lymphocyte responses to mitogens. Research in Veterinary Science 45 : 11-15, 1988.

85. Mahan D.C., Porrett N.A. Evaluating the efficacy of selenium-euriched yeast and sodium selenite on tissue selenium retention and serum glutathione peroxidase activity in crower and finisher swine. J. Animal Science, 1996, V 74 № 12, pp 2967-2974.87

86. Mancini G, Carbonara A.O, Heremans J.F. Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion, Immunochemistry, 2, 235-254 (1965).

87. Marsh J.A, Combs M.E, et al. Effect of selenium and vitamin E dietary deficiencies on chick lymphoid organ development. Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine 182 : 1986, 425-436.

88. McCay P.B. and King M.M, Vitamin E: its role as biologic free radicals scavenger and its relationship to the microsomal mixed-function oxidase system, in Vitamin E:A Comprehensive Treatise, Machlin L.J,ed, Marcel Dekker, New York, 1980, 289.

89. Michaelson M, Noslin B.,Sjolin S, Pediatrics 35, 925 (1965).

90. Mills G.C, Hemoglobin catabolism, I. Glutathione peroxidase, an erythrocyte enzyme which protects hemoglobin from oxidative breakdown, J. Biol. Chem.,229, 189, 1957.

91. Misra H.P.& Fridovich J. The role of superoxide anion in the autooxida-tion of epinephrine and simple assay for superoxide dismutase, J. Biochem,10, 247,3170-3175, 1972.

92. Nakamura W, Hosoda S, Hayashi K, Purification and properties of rat liver glutathione peroxidase, Biochim. Biophys. Acta, 358, 251, 1974.

93. Nicholson J.W.G, Bush R.S, Allen J.G. Antibody responses of growing beef cattle fed silage diets with and without selenium supplementation. Canadian Journal of Animal Science, 1993, 73:2, 355-365; 28 ref.

94. Nockels C.F. Antioxidants improve cattle immunity following stress. Animal feed science and technology 1996, Vol 62, Iss 1, pp 59 68.88

95. Ognjanovic B. et al. The effect of selenium on the antioxidant defense system in the liver of rats exposed to cadmium. Physiological Research. 1995., V 44., Iss 5, pp 293-300.

96. Palleni, V., & Bacci, E., Bull sperm selenium is bound to a structural protein of mitochondria, J. Submicr. Cytol., 11, 165, 1979.

97. Parnham M.J. et al. Macrophage, lymphocytes and chronic inflammatory responses in selenium-deficient rodents. Association with decreased glutathione peroxidase activity, Int. J. Immunopharmacol., 5, 455, 1983.

98. Pence, B.C. Dietary selenium and antioxidant status toxic effects of 1,2-dimethylhydrasine in rats, J. Nutr., 1991, Vol 121., Iss 1., pp 138-144.

99. Proctor, J.F. et al., Selenium, vitamin E and linseed oil meal as preventatives of muscular dystrophy in lambs, J. Anim. Sci., 17, 1183, 1958.

100. Reffett J.K. et al. Effect of dietary selenium and vitamin E on primary and secondary immune response on lambs challenged with parainfluenza virus. Journal of Animal Science, 66: 1520-1528., 1988.

101. Roe J.A., Butler A., Scholler D.M., Valentine J.S. Differential scanning calorimetry of Cu, Zn-SOD the apoprotein and it's zinc-substituted derivates. Biochem.- 1988.- 27, №3, pp 950-958.

102. Roos D. et al. Protection of human neutrophils by endogenous catalase., J. Clin. Invest., 65, 1515,1980.

103. Schwarz, K., et al, Some regularities in the structure function relationship of organoselenium compounds effective against liver necrosis., Ann NY Acad. Sci., 1972., 192:200-214.

104. Sies H. Ebselen, a selenoorganic compound as glutathione-peroxidase mimic. Free radical biolQgy and medicine 1993, Vol 14, Iss 3, pp 313 323.

105. Simensen E. et al. Effects of transportation a high lactose diet and ACTU injections on the white blood cells count, serum Cortisol and IgG in young calves. Acta Vet. Scand. 1980. - 21, № 2. - pp 278 - 290.89

106. Spallholz J.E. et al. Immunological responses of mice fed diets supplemented with sodium selenate, Proc. Soc. Exp. Biol. Med, 143, 685, 1973.

107. Sunde R.A et al, Phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase: full lenght pig blastocyst cDNA sequence and regulation by selenium status. Bio-chem. Biophys. Res. Commun. 193: 905-911, 1993.

108. Tappel A.L, Lipid peroxidation damage to cell components, Fed. Proc,32, 1870,1973.

109. Thy L.L, Candlish J.T. SOD and glutathione peroxidase activation in erythrocytes as indices of oxygen loading in disease: a survey of one hundred cases //Biochem. Med. and Metab. Biol.- 1987.- 38, №1.-74 80.

110. Turner R.J. & Finch J.M, Selenium and the immune response. Proceedings of the Nutrition Society, 50: 275-285, 1990.

111. Turner R. J, Wheatley L.E, Beck N.F.G, Stimulatory effects of selenium on mitogen responses in lambs. Vet. Immunol. Immunopathol, 8, 119-124, 1985.

112. Wang J.D, Hung J.P. Effect of intensive administration of Selenium on calves. Atti della Societa Italiana di Buiatria 1993, 25:591-595; 16 ref.

113. Wu Z. et al. Altered selenium-binding protein levels associated with selenium-resistance. Carcinogenesis. 16, 1995, 2819-2824.