Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение жирнокислотного состава липидов в соматических нервах при возбуждении

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Изменение жирнокислотного состава липидов в соматических нервах при возбуждении"

ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ИЗМЕНЕНИЕ ЖИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ЛИПИДОВ В СОМАТИЧЕСКИХ НЕРВАХ ПРИ ВОЗБУЖДЕНИИ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

На правах рукописи

НИКОЛАЕВ ВЛАДИМИР ТРОФИМОВЕ

03.00.02 — Биофизика

ВОРОНЕЖ — 1995

Робота выполнена о межфакультетской лаборатории биофизики Мордовского ордена Дружбы народов государственного университета имени II. П. Огарева

Научные руководители: доктор биологических наук.

профессор Колье О. Р. доктор биологических наук, профессор Реви и В. В.

Официальные оппоненты: доктор физико-математических

наук, профессор Аксенов С. И. кандидат биологических наук, доцент Клокова В. М.

Ведущая организация — Московский научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии РАМН

на заседании диссертационного Совета К 063.48.14 при Воронежском государственном университете по адресу: 394693, г. Воронеж, Университетская площадь, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в зональной научной библиотеке Воронежского госунивсрситета.

Аитореферат разослан ¿4 января 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат биологических паук.

доцент овалева Т. А.

Защита диссертации состоится 2? ЛФ 1996 года в 13

час

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ-Актуальность темы- S последние голы появилось большое число работ, указывающих на активную роль липидов в распространении ритмического возбуждения в нервной ткани-

Еажнеяш'.ки компонентами.определяющими физико-химическое состояние мембран являются жирные кислоты сХКЭ, которые входят в состав •липидоз или находятся в свободном состоянии- Хирнкм кислотам фосфо-липидов свойственны структурные переходы <вг<?г.г,ег, 1эа^>, достаточно высокая скорость обновления как внутри одного, класса, так и между

классами ЛИПИДОВ <Rot>inson et al, 1992; Leger, 1Э93) , ЧТО МОЕеТ ИКеТЬ

важное значение для функционирования возбудимых образования- Разнообразные тарные кислоты, участвуя в формировании гидрофобной зоны мембраны,в значительной степени определяют eî метаболическую активность и фазовое состояние и,следовательно.многие функциональные характеристики ион-транспортных систс:: < Антонов и др-,1992; Lin et ai, 1эаа>.

Особо высокой метаболической активностью в функционирующих нервных проводниках характеризуются фосфоинозитиды, причем большая скорость обновления свойственна не только полярным группировкам, но и жирным кислотам, входящим е их состав <suri,i9B2>. Усиление метаболизма фосооиноэитидоз мохет быть связано с повышением обмена жирных кислот,находящихся в их составе (Четвериков,1976>.через пул свободных ЗЗфНКХ КИСЛОТ (Yoshida et а1,13Э&).В ОСНОВНОМ, ЭТИ ДаННЫЭ ПОЛучены на изолированных тканях мозга и, миокарда и практически отсутствуют данные об интенсивности обмена хирнокислотноя части çocçohho-зитидоз в соматических нервах в условиях функциональной активности нереа.

В ходе метаболизма фосфоинозитидов образуются физиологически активные продукты, в частности, свободные жирные кислоты и 1,2-диа-цилглицерин-

Свободные жирные кислоты являются полисунациональными соединениями в клетке-Они служат метаболическим резервом обмена жирными кислотами между различными Еидами липидов. Свободные жирные кислоты могут являться мощными модификаторами проницаемости биомембран.Изменение проницаемости мохет быть обусловлено как модификацией жирными кислотами липидных областей мембраны за счет конофорных свой-

ств, детергентных способностей и возникновения дефектов (Болдырев,

1935;ЗГ1а'а<Ч а1, 19В1 ; 1_ее, 1937!Сох а1,1Э92>, Так И СПеЦИфИЧеС-

кнк взаимодействием жирных кислот с мембранными белками - АТФззами, фОСфОЛИПЗЗаМИ И КаНЭЛОфОрНераНИ (ТоаЫо а1, 1992; Уог^йа ег

а1, 1992).

Исследование состава свободных жирных кислот в нервных проводниках различной степени миелинизации в состоянии покоя и в состоянии активного функционирования, а также, их влияния на транспорт кальция в. нерве помогло бы глубже понять роль свободных хирных кислот в процессе проведения возбуждения по нервному проводнику.

Другин полифункциональнын агентон является 1,2-диацилглицерин, который играет важную роль в регуляции активности фосфолипазы А2, протеинйлназы С И транспорта кальция (Така! еЬ а1., 19795 ¿хйоуеЪгкх а1,1ээг5 МеШгика, 1995). Степень метаболической активности диа-цилглицерина в значительной степени определяется наборов жирных кислот , входящих В их состав (Брусованик,1986;Н15Ьхгика, 1Э84).

Установление степени идентичности изменения в жмрнокислотноя части компонентов фосфоинозитидного цикла и 1,2-диацилглицерина в нервных проводниках позволило бы более полно оценить их участие в процессе проведения возбуждения.

Известно,что нарушения обмена липидов определяют в значительной степени ход патологических процессов в поврежденных, тканях (Бурла-кова, 1985)-Усиление фосфолипазной активности,процессов перекисного окисления липидов и нарушение фосфоинозитидного обмена приводит к деструкции мембраны и нарушению транспорта ионов к, следовательно, нереального метаболизма клетки. Выяснение качественного и количественного состава жирных кислот компонентов фосфоинозитидного цикла, 1-,2-диацилглицерина и фракции свободных жирных кислот при повреждении нерва позволило бы выяснить роль гидрофобной части молекулы ли-пида в механизмах нарушений процесса проведения возбуждения при повреждении нерва.

Цель и задачи исследования- Целью нашей работы стало установление взаимосвязи между изменением жирноккслотного состава наиболее лабильных компонентов липидной фазы «фосфоинозитидов, 1,2-диацилгли-иерина и свободных жирных кислот) и функционированием нервных проводников.

Б соответствии с этим были поставлены задачи: изучить состав свободных жирных кислот в нервных проводниках в покое и при проведении возбухдения;выделить_фосфолипидные компоненты фосфоинозитид-ного цикла и 1,2-диацилглицерин из нервов и изучить их жирнокислот-ныя состав в покое и при проведении возбуждения¡выяснить возможную связь между составов тарных кислот компонентов фосфоинозитидного цикла,1,2-диацилглицеринз и фракции свободных жирных кислот и уровнем кальция в соматических нервах; исследовать влияние экзогенных свободных жирных кислот и 1,2-диацилглицерина на транспорт кальция в керне;изучить состав свободных жирных кислот,жирнскислотноя части 1,2-диацилглицерина и компонентов фосфоинозитидного цикла при развит;'.!'. патологических процессов в нервных проводниках.

Научная новизна работы-Впервые показана важная роль индивидуальных компонентов гидрофобной фазы биокембрэн в процессе проведения ритмического возбуждения и регуляции проницаемости плазматической мембраны для исков кальция в нервном проводнике. В функционирующем нерве происходит изменение состава свободных жирных кислот,уменьшение их уровня в нерве кролика и накопление- в нервах калькара.краба и лягуахи. Описана корреляция кежду количественным содержанием отдельных свободных ЖЗфНЫХ КИСЛОТ И ЖИрКЫМИ КИСЛОТаМИ фОСфОИНОЗИТИДСВ

и 1.2-днацилглицерина.Интенсификация метаболизма фосфсинозитидов в мпе.-'.'.низнровзннах нервах сопровождается уменьшением фонда свободных жирных кислот и увеличением уровня 1,2-диацилглицерина.Показано,что •з деген&рируксек нерве кролика накапливаются Есе типы фссфсинозити-дов, увеличивается содержанке свободных жирных кислот и уменьшается -1,З-диацилглилерина-В этих же условиях происходит нарушение поступления кальция в нервны?, проводник.

Нау'-'но-практкческая значимость работы- Проведенные исследования по-'зволяйт расширить представления об участии гидрофобной части фосфо-инознтидоз и 1,2-диацилглицерина в процессе проведения возбуждения' по соматическим нервам,а также,использовать полученные результаты в клинической медицине для расшифровки молекулярных механизмов развития патологии нервного проводника при его повреждении. Апробация работы. Основные результаты диссертации докладывались на заседаниях секции биофизики Московского общества испытателей природы <Москва,1939-1991>, на Огаревских чтениях в Мордовском госуни-

с

верситете ин. Н-П-Огарева (Саранск,1990-1995),на v Всероссийсксз конференции по патологии клетки «Москва,1993). на vi Симпозиуме пс биохинии липидов «Санкт-Петербург,1994).

Публикация результатов работы- По теме диссертации опубликовано s печатных работ.

Структура и объем работы- Диссертация объемон /Ы страницы машинописного текста состоит из введения,трех глав,заключения, выводов и списка цитируемой литературы,включавшего 88 отечественных и 224 зарубежных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ. Объект и методы исследования. Объектом исследования служили немие-линизированные нервные стволы Тихоокеанского кальмара <ommantost-r-ephus sioanei pacificus), слабомкелинизированные нервы конечностей травяного краба <carcer«us iwenas) .киелинязированные седалищные нервы травяной лягушки «Rana temporaria) И КррЛИКЭ ПОрОДЫ ШИНШИЛЛа «□ryctoiagus cunicuius в.),а также липиды.выделенные из нервов. Изолированные нервные стволы выдерживали в соответствующих растворах Рингера.а нервные стволы калькара-в морской воде.Результаты,полученные на нервных проводниках, не подвергшихся ни стимуляции, ни воздействию каких-либо агентов,служили контролем.Раздражение проводили во влажной камере прямоугольными электрическими импульсами¡для аксона кальмара амплитудой 750 мВ и длительностью инпульса 0,3 не; для нерва краба амплитудой 1,5 В и длительностью импульса 1 мс; для нерва лягушки анплитудой 450 мВ и длительностью инпульса 0,3 мс? для нерва кролика анплитудой 1,5 мВ и длительностью 0,3 мс.При раздражении нервов использовали частоты в диапазоне от 10 до 200 импл: Продолжительность стимуляции в разных опытах была 1,5 и 5 мин Для нервов кальмара,краба и лягушки температура в камере равнялась 20-22°С.Нервы кролика выдерживали в среде, обогащенной кислородон и стимулировали при температуре 37°С-Потенциалы действия отводили вне клеточно и наблюдали на экране осциллографа С1-68. Для создания модели патологического процесса ны осуществляли перерезку нерва кролика в месте его выхода из позвоночного столба-По истечении 24 час нерв извлекали и помещали в раствор Рингера-

Липиды из нервных волокон выделяли по иетодан Блайя-Даиера (Biigh.Dayer, 1Э59) и Зубера В. <ЗуберД982> • Для качественного и ко-

личественного анализа смеси лкпидов применяли метод препаративной хроматографии. используя в качестве адсорбента силикагель КСК с добавление!! 4-6* нагния углекислого основного, импрегнируя пластинки 1* оксалатом калия в случае разделения фсс?оинозитидов,а также,используя пластинки фирмы Merck (США>. Разделение фосфолипидов проводили в системах растворителей Роузера (Rouser et ai,i967>. Для разделения фосфоинозитидов использовали систему Фолча < Foich «t ai, 1Эбв>. Диглицериды выделяли по нетоду Мангольда (Mangold, 1эбэ> - На. хрокатогранмах пятна фссфслипидоз, диглицеркдоз и свободных жирных кислот идентифицировали, используя специфические окрашивавшие реагенты «Синютина,1978! Кирхнер, 19S1; flnker.Sonanini, 1963sShaw, 1368;

Vaskovsky et al, 1975) И СТЭНДарТЫ С"СВИДеТеЛИ"Э-

Метилирование ЗК проводили по нетоду Мсррисона и Смита (Morrison, Smith,1964),с помощь» раствора фтористого брома в метаноле-Анализ метиловых зфиров 2К проводили нетодом газожидкостной хроматографии на газовом хроматографе Хром-5 (ЧСФР> с нелинейным программированием температур. В качестве твердого носителя использовали хрокосорб В/ДИ GMDS (Perkin Elmer, АНГЛИЯ) С Зернением 0,16"0,2 НК, а в качестве неподвижной жидкой фазы - 1,d-бутандиолсукцинат (3%>.В некоторых случаях твердым носителем служил хрокосорб w/hp (serva, США) с зернением 0,125-0,15 мм с нанесенной на него неподвижной жидкой фазой Силзр-1СС (10%) (Serva,США). Количественный анализ полученных хронатограмм проводили в соответствии с описанными в литературе методами (Литвинов.Руденко,1971;Коган,1975; Вигдергау3,1977s Пецев,Коцез.1987).Кроне того, использовали комплекс "Хромпроцессор, v. 2.00" системы связи газового хроматографа с ПК ibm рс, с помощью которого.осуществлялся прием хроматографического сигнала, обработка и хранение результатов хроматографического анализа.Для измерения поглокения кальция нервные стволы кальмара предварительно выдерживали в корскоя воде, а седалищные нервы кролика - в физиологическом растворе,содержащих изотоп 4SCa с удельной радиоактивностью 5 мкКю-ри/мл-Наличие радиоактивных изотопов в нервных проводниках регистрировали методом жидкостной сцинтилляции на установке ASAC-40-iK (Intertechniqie,ФраНЦИЯ).

Результаты экспериментов обрабатывали статистически с использованием t-критерия Стьюдента <Лакин,1980>.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Состав свободных жирных кислот нервных проводников лягушки.кальмара,краба и кролика при возбуждении.

Распространение нервного импульса по соматическим нервам тесно связано с изменением состава и структурными перестройками липид-нсго бислоя сРевин и дрД984;Кольс,МаксимовД937Э. Центральным звеном в метаболизме ллпкдов яеляются свободные жирные кислоты ССЖКЭ. Представляло интерес изучить состав СЖК нервных проводников разной степени миелинизацик при разных^ режимах функционирования.

Ка первом этапе была исследована зависимость состава СЖК от частоты и длительности ритмического возбуждения. В качестве объекта исследования использовали изолированные седалищные нервы лягушки травяной.

Таблица 1

Состав свободных жирных кислот седалищного нерва лягушки при 1,5 мин стимуляции разными частотами ев у. от суммы ХКЭ.

Состояние Кислота Покой 30 инп-с Стимуляция _ 80 икп/с 100 имп/с

Лзуриновая 7 0+0,4 4,0+0,2 2 0+0 2 5 2±0 4

Мкристиновая 14 2+0,9 5,7+0,3 . 11 0+0 7 23 3±1 В

Пентадекановая - - - 4 0+0 3

Пальмитинрвая 40 8+3,1 65,8±3,8 64 0+5 1 44 1±2 7

Пальмитоолеиновая 2' 8±0,2 _ _ 3 0±0 1

Стеариновая 10 6+0,6 И,6+0,7 8 5±0 6 12 1+0 7

Олеиновая 13 8+1,2 - - 1 8±0 о

Арахидоновая 10 8+0,5 12,9+0,9 14 5±1 1 6 5+0 3

Коэффициент

насыщенности 2,65 6,8 5,9 7,8

Содержание, 6,3 5,0 9,1

мкг,^мг лкпидов 7,6

Анализ полученных данных показывает,что состав СЖК покоящегося и стинулируекого седалищного нерва определяется набором из 8-11

кислот сТабл. 1 и 25.Более 90* ог суммы всех ЖК приходится на нирис-тикевую,пальмитиновую,стеариновую.олеиновую и арахидоновую кислоты. Характерной особенностью является высокое содержание пальмитиновой кислоты. При стимулировании нерва с частотой 30 имп.-с происходит уменьшение доли короткоцепочечных ЖК, а с увеличением частоты раздражения их содержание возрастает. Содержание длинноцепочечных ЖК е тех же условиях сначала повышается, а затем понижается. Коэффициент

насыщенности,расчитываемый как отношение содержания насыщенных ЖК к содержания ненасыщенных и отражавший состояние, дипидов,возрастает с увеличением частоты стимуляции и снижается при длительном возбуждении нерва.Общее содержание СЖ е седалищном нерве возрастает с увеличение;! частоты и длительности стимуляции.

Наибольшие качественные и количественные изменения в составе СЖК происходят при стимуляции нервов лягушки с частотой 100 ияп/С в течение 5 мин.

Таблица 2

Состав свободных жирных кислот седалищного нерва лягушки при 5 мин стимуляции разными частотами се к от суммы КО.

Состояние Кислота Покой 30 икп/с Стимуляция 80 имо'с 100 ккпл:

Лауриновая 7,0+0,1 3 .7*0,2 2,0*0,1 9,2*0,4

Миристиковая 14.2*0,9 5 7*0,3 10,4*0,7 29,3*1,8

Пентадекановая - - - 3,2±0,1

Пальмитиновая 10,8*3,1 17 5±3,8 60,4±1,4 34,6*1,7

Пальмитоолеиновая 2,8*0,2 - 1.9+0,1 2,4+0.1

Стеариновая 10,6*0,6. 12 8±0,7 3,3*0,5 9,9*0,7

Олеиновая 13.8;1.2 — - 2,8±0.2

Линолевая - - 2,3±0,1 -

Эякозодиеновая - 4 3*0,3 - -

Арахидоновая 10,8±0,5 11 0±0,3 13.7*0,9 8,6*0,5

Зякозопентаеновая - 14 7*2,1 -

Коэффициент

насыщенности 2,65 2,33 1.6 6,2

Содержание, 6,3 1Р.8 11,0

мкг-'мг липидов 5,0

Т.о..проведение ритмического возбуждения сопровождается значительная изменением состава СК,степени их насыщенности. Направленность и глубина изменений изучаемых нами параметров определяется частотой следования импульсов и продолжительностью стимуляции.

Приведенные данные были получены на миелинизированном нерве лягушки, состоящем из тысяч волокон. Поэтому можно говорить лишь об интегральном характере изменения состава СЖ. Представляло интерес выявить изменения фракции СXX на одиночных возбудимых образованиях,а именно,в гигантском аксоне кальмара.

Проведенные исследования на гигантских аксонах показали,что при переходе нерва из состояния покоя в состояние функциональной активности происходят глубокие изменения в фракционном составе свободных

жирных кислотах сТабл.Зэ.

Далее был исследован состав СЖК в слабониелинкзкрованном нерве ходильной ноги черноморского краба и сильномиелинизированном седалищной нерЕе теплокровного животного - кролика сТабл.Зэ.

Было показано,что и для слабониелинизированного нерва краба,и для ниелинизированкого нерва кролика характерна высокая степень изменения состава свободных жирных кислот при возбуждении.

Сравнительный анализ показал,что между содержанием СЖК в нервах кальмара, краба, лягушки и кролика имеется как сходство, так и различие.Сходство состоит в том,что набор СЖК определяется,в основ-ном,одними и теми же кислотами:лауриновоа.ниристиновоя, пальмитиновой, стеариновой .олеиновой и зрахидоновоя,ка долю которых приходится 70-95* от суммы всех ЖК.Отличия же состоят в том, что качественный состав СЕК представлен разным числом кислот и долевое содержание каждой кислоты в их обшей сумме существенно варьирует.Сильнее Есего отличия наблюдаются при сравнении состава СЖК кемиелинизированных и ниелинизированных нервных проводников. Миелинизацкя нервных проводников сопровождается уменьшением содержания полиеновых Ж и увеличением содержания короткоцепочечных и моноеновых кислот.Так,в аксоне кальмара и нерве краба значительна доля длинноцепочечных полиеновых кислот-эякозотриеновой.арахидоновой и докозодиенозой.а в нервах лягушки-и кролика - короткоцепочечных жирных кислот.

Обнаруженная нами большая ненасыщенность фракции СЖК в аксоне кальмара и нерве краба может быть обусловлена и обитанием этих животных в водах с низкой температурой,т.к. известно,что среда обитания сказывается и на степени насыщенности,и на характере полиеновых кислот с Помазанская,Красильниковаа,1978;Парнова,19S3D.

Стимуляция нервных проводников вызывает разнообразные изменения состава СЖК. Но ножно выделить ряд общих закономерностей. Число индивидуальных ЖК при переходе нервов кальмара, лягушки и кролика в состояние активного функционирования увеличивается. Коэффициент насыщенности при стимуляции уменьшается у кальмара,почти не изменяется у краба и возрастает у лягушки и кролика. Доля короткоцепочечных ЖК уменьшается в немиелинизированных и возрастает в ниелинизированных нервах. Одновременно,' содержание длинноцепочечных ЖК меняется в обратном порядке. Немиелинизированные аксон кальмара и нерв краба

Таблица 3.

Состав свободных жирных кислот нервных проводников в покое и при возбуждении (в X от суммы всех ЖК)

1 1 1 Кальмар .... Краб Кролик ... ,

I Состояние Покой Стимуляция Покой Стимуляция Покой Стимуляция,200 имп/с 1

I Кислота 1 30 имп/с,5 мин 10 имп/е,1,5 мин 1,5 мин | 5 мин |

1 |Лауриновая 1,0+0, 1 0,45 ± 0,2 1,4+0,2 1,3 + 0,1 7,9 ±0,2 0,78 + 0,35 I 5,55 ± 0,44|

¡Миркетиковая• 6,Б±0, 5 3,45 ± 0,8 5,5+0,3 3,8 + 0,4 4,0 +0,38 6,78 + 0,4 • 120,0 ± 0,2 |

|Пентадекаковая 3,0+0,2 1,25 + 0,3 2,5±0,1 2,5 ± 0,1 1,16+0,08 3,68 ± 0,21 1 4,5 ± 0,7 |

¡Пальмитиновая 33,5±3, 0 23а95 + 5,0 29,1+1,8 28,1 ± 1,0 19,13±1,5 33,98 ± 1,35 123,9 ± 0,21|

|Пальмитоолеиновая 0,3+0 7 3,15 ± 0,4 5,0+0,3 4,3 ± 0,3 3,89±0,1 4,88 + 1,17 111,8 ± 0,6 |

|Стеариновая 12,5+0 6 10,35 + 1,35 18,6+1,2 17,2 + 1,1 8,16+0,36 16,46 + 0,5 1 8,6 ± 0,7 |

|Олеиновая 12,3+1 1 12,8 + 1,9 13,9+1,1 11,6 ± 1,0 9,06±0,6 8,78 + 0,4 1 9,8 ± 0,6 |

¡Линолевая - - 2,6+0,1 1,6 ± 0,1 - 2,73 + 1,77 I 1,85 + 1,0 |

|Линолекозая - - 3,8±0,2 3,7 ± 0,2 - - 4 |

|АралИКОЕЗЛ - 6,6 + 1,1 - - - - 1 - \

|Эйкогеновая - 2,5 ± 0,5 - - - 1 - |

|Зйкозотриеновая 16,4+1 6 10,0 ± 2,5 5,9+0,4 8,7 ± 0,6 - - 1 - !

1Арахидоновая 8,0±2 5 12,4 ± 0)9 5,1+0,4 6,7 ± 0,4 46,7 +1,2 2,85 ± 0,9 |14,0 ± 1,54|

¡Бегеновая - - 6,6+0,5 11,5 + 0,8 - - 1 - !

|Докозодиеновая 8,1 ± 2,0 - - - - 1 - |

|Докозопентаеновая ' - - - - 10,67 ± 0,8 1 - !

|Докозогексаеновая - - - - - 8,43 ± 1,4 ¡ - ¡

¡Коэффициент

\насыщенности 1,3 1,04 1,75 1,8 0,68 1,61 1 1,67 1

(Количество,

¡мкг/мг липидов I 14,1 1 27,2 • 12,7 | 18,5 1 3,0 1 2,1 I 1 1,7 |

характеризуются более высокий содержание« СЖК,которое при стимуляции еие более возрастает.Также,при стимуляции возрастает к содержание СЖК в нерве лягущки.а в нерве кролика-падает.Нужно отметить.чтс степень отклонения состава СЖК. от уровня покоя зависит от частоты следования импульсов к продолжительности стимуляции.Для жкестных. находящихся на более низкой эволюционной ступени,изменения состава СЖК наблюдаются при более низких частотах и калом времени раздражения.

Таким образом,при проведении ритмического возбуждения во всех типах исследованных соматических нерЕоз происходят значительные изменения в составе СЖК, что говорит об их участии в функционировании соматического нерва.Об этом же свидетельствуют и данные литературы, показывающие, что СЖК индуцируют катионную проводимость с Антонов, 19923.оказывают хаотропное действие на липидныа бкслой CMarsh, seldom, 1эвгэ, влияя на структурные и функциональные свойства белковых компонентов биомембраны.

Один из источников образования свободных жирных кислот может быть связан с активацией фосфоинозитидного цикла s функционирующем нерве СЧеТВерИКОВ,1976;Yoshida,1986;Ikeda et al,19883. Мы попытэлксь установить эту сеязь в следующей серии экспериментов, где проводили параллельные исследования жирнокислотного состава всех компенентов ФИ-цикла и фракции СЖК.

Жирнокислотныя состав компонентов фосфоинозитидного цикла.диацкл-глицерина и свободных жирных кислот в седалищном нерве кролика при возбуждении

Поскольку эксперименты проводились в разные периоды времени,то в каждой серии опытов ставился свой контроль.Это связано с тем, что состав жирных кислот как свободных, так и связанных, сильно зависит от состава пиши CHoiman, 1986} Boui-re, 19935 .температуры CKpenc,19Sl; Гурин,19393.возраста CRodrigues de Turco,Bazan,19833 и функцнонэль-ного состояния животного CSkler.ovsky, 198S3. Также,показано, что уровень полифосфоинозитидов в нервной ткани носит сезонный характер С Кондратьев,1969;Чирковская,Смирнов,19723.

В покое фракции фосфоинозитидов представлены,в основном,одними и теми же кислотами. Это <16:0> пальмитиновая, <1S:о> стеариновая и

<20: 4> арахидоновая кислоты. Фракция ДФИ представлена дополнительно <14:0) миристиновоя.а фракция ТОЙ- <12:0) лауриновоя и миристиновоя кислотами, на каждую из которых приходится не более 3,2х от общего содержания жирных кислот (Табл.4). Во всех фракциях ФИ наибольший

Таблица 4.

Жирнокислотныа состав компонентов ФИ-цикла, диацилглицерина и свободных жирных кислот в седалищном нерЕе кролика при возбуждении <в х от суммы ЖС>.

12:0 14:0 15:0 16:0 18:0 ¡20: 1 20:2 20:4

Пок МФИ Возб 2,7± 0,4 'з,з± 0,3 - 70, 7± 0,2 24, 7± 1,0 9,1 + 0,4 5,3+ п, о - - 20,2± 0,2 64,0+ 2,'

Пок ДФИ Возб 2,2+ 0.1 2,й± 0,3 3 2+ 0^2" - 4?, 4+' 4.1 34,3+ згз" 17,У + 1,1 17,2+ 1.0 - - '32,1 + 2,1 43,1± 3,9

Пок ТФИ Возб 1, У + 0,1 2,3 + 0,05 2,6± 0,1 2,6+ 0,2 - 1,0 11,2± 1,0 18,1 + 0,05 26,4 + 1,2 - - 59,7 + 0,6 57,5+ 1,2

Пок ФК Возб 2,3 + 0,1 4,0+ 0.2 3,0± 0,1 5,0± 0,4 11,2+ 1,2 40,0 + 3.7 65,6± 5,9 39,4± 3,7 3.0± 0,1 6,2+ 0,4 15,3+ 1.1 5,0 + 0,4

Пок ДАГ Возб 3,4 + •0,2 2,1 + 0,2 1,9+ 0.2 2 49+ о.'г ~ 2,3 ± 0,2 14,97±-1.3 11,2 + 1,0 39,28+ 2,1 6,Б + 0,7 - - 74,7 + 5.1 41,16+ 4.2

Пок . СХК Возб 0,73 + 0,1 5,68± 0.4 6,15+ 0,3 5,23 + 0.72 1,04 + 0,1 59,4 + 6,0 64,3± 5,2 9,9± 1,1 24,24± 2,5 - - 22,72+ 2,5

вклад вносит пальмитиновая кислота <от 70,7* а МФИ до 17,Ту. в ТФИ>. Ненасыщенные Ж представлены арахидоновой кислотой,содержание которой изменяется от 20,2* в МФИ до 59,7у. в ТФИ.

При переходе нерва в состояние функциональной активности наибольшие изменения Ж состава происходят во фракции МФИ: появляются лауриновая и миристиасвая кислоты,суммарное содержание которых составляет 6% от общего содержания 1К. Во фракции ДОИ появляется в малом количестве лауриновая кислота, а во фракции ТФИ качественного изменения ЖК состава не происходит. Во всех фракциях ФИ происходит уменьшение содержания пальмитиновой кислоты,причем наиболее сильное

уменьшение происходит во фракции МФИ.Содержание хе арахидоновоя кислоты увеличивается so фракциях МФИ и ДОИ,а во фракции ТФИ остается, без изменения. Основной вклад в общее содержание ЕК вносят те же кислоты,что и в состоянии покоя.Во всех фракциях ФИ происходит уменьшение абсолютного количества ¡EX.В то же время, коэффициент насыщенности уменьшается для фракция Ml И и ДФИ, и остается примерно на нок уровне для фракции ТФй.

В покое во фракции ®К обнаружено 5 ЖК:С12:0Э лауриновая,С14:0з ниркстинсвая,с16-.03 пальмитиновая,CIS-.Оз стеариновая и C2Q-.43 арахидоновая. Наибольшее содержание приходится на пальмитиновую и стеариновую кислоты. При переходе нерва в состояние активного функционк-нирования происходят значительные изменения.Появляются новые кислоты: <15:0) пентадекановая,(20:1) эккозеновая и (20:2) эякозодиеновая (Табл.4).Коэффициент насыщенности Еырос до 6,0, а общее содержание ЖК превысило уровень покоя почти в 13 раз.

Т.о..при переходе нерва из состояния покоя в состояние активного функционирования в ХК составе всех компонентов ©И-цикла происходят качественные и количественные изменения,что свидетельствует об активных процессах обновления ЖК части компонентов ФИ-цикла в возбужденном нерве.

В одном из основных продуктов распада фосфоинозитидов- диацил-глицерине,в покое обнаружено 6 кислот:С12:0з лауриновая, eld:05 ни-ристиновая,с15:03 пентадекановая,С16:05 пальмитиновзя,с18: Оэ стеариновая и C2Q: 43 арахидоновая, причем вклад арахидоновоя кислоты очень существенен (Табл.4).При переходе нерва в состояние активного Функционирования происходит количественное перераспределение этих кислот.Общее содержание Ж увеличилось в 6 раз,а коэффициент насыщенности возрос в 4 раза.

Во фракции СЖК е покое были обнаружены те же кислоты, что и в в составе ДАГа.но с иным долевым содержанием.В состоянии активного Функционирования е нерве исчезли пентадекановая и арахидоновая кислоты. Значительно возросло содержание лауриновой и стеариновой кислот Чабл.4).Общее содержанке XX уменьшилось в 6 раз.

Таким образом,выявлен сходный ЖК набор компонентов ФК-цикла и Фракции СЖК в седалищном нерве кролика.Это лауриновая,ниристиновая, пальмитиновая, стеариновая и арахидоновая кислоты, на долю которых

IS

приходится свыше 90* от общего содержания ЖК. Во всех фракциях наибольший вклад вносят пальмитиновая и арахидоновая кислоты. При переходе нерва в состояние функциональной активности в ЖК составе компонентов ФИ-цикла происходит количественное и качественное перераспределение,но основной вклад в общее содержание ЖК вносят те же кислоты,что и в состоянии покоя.Содержание арахидоновой кислоты з ФИ возрастает,а в продуктах их метаболизма и во фракции СЖК - уменьшается.

Выявленная динаяякз изменений в ЖК составе компонентов ФИ-цикла позволяет заключить, что у ФИ метаболически активной является и гидрофобная часть молекулы,что,по-видимому,связано с регуляцией фазового состояния мембран нервного волокна,что в свою очередь влияет на активность нембраносвязанных ион-транспортирующих систем.

Сходный набор кислот во фракции СЖК,компонентов СИ-цикла и продуктов их метаболизма, а также характер их перераспределения свидетельствует о том,что значительная часть СЖК может образовываться из ФИ. Имеющиеся отличия в составе ЖК во фракциях ФИ и СЖК указывают на их образование как за счет биосинтеза,так и гидролиза сложных липи-дов.Значительные изменения как в абсолютном содержании СЖК, так и в количественной перераспределении индивидуальных кислот при возбуждении говорит об их участии в функционировании нерва, которое может осуществляться как путем изменений в гидрофобной области липидного бислся,так и непосредственным влиянием продуктов его нетаболизма на активность ион-транспортирувших систен нерва. /

Поглощение кальция нервными проводниками в покое и при возбуждении.

В последние годы показано,что изменения в транспорте и внутриклеточной концентрации ионов кальция играют ключевую роль в распространении нервного импульса,сопровождающегося активацией метаболизма ФИ сКостюк,1992; Крутецкая,Лебедев,19925.Было предположено наличие взаимосвязи между этими процессами.Показано, что продукты обмена ФИ вызывают увеличение внутриклеточной концентрации кальция вследствие мобилизации кальция из внутриклеточного депо и входа кальция по градиенту концентрации из наружной среды.

Поэтому мы серией экспериментов попытались связать поглощение

кальция нервными проводниками при ритмическоя стимуляции с обнаруженными изменениями в содержании ДАГа и СЖК.Для этого изучалось поглощение 45Са нениелкнизировакными и миелинизироЕанными нервные?, проводниками е разных условиях функционирования.

В состоянии покоя поглощение кальция аксоном кальмара равнялось 23 пМ/мг сухого веса нервов.При стимуляции аксонов СЗО икп/с,5 ми:о поглощение кальция возрастает и становится равным 37 пМ/кг с рис. 15.

■Поглощение кальция аксоном ка.йьмзра и нервом кролика

пЯ^мг сух веса лип идо в ЮС 75 ■ 50 -25-

а

I-1 Покоя

"-"-и Возбуждение

кальмар

кролик

Рис.1.

Поглощения кальция нервом кролика в покое равнялось 55 пМ-'МГ сухого Ееса„а при стимуляции С200 имп/с,5 мин5 поглощение кальция возрастает до 75 пМ'мг Срис.15,т.е. его уровень стал превышать уровень покоя на 33*.

Т.о. стимуляция не- и яиелинизированных нервов сопровождается не только активацией СИ-цикла.но и усилением поглощения кальция.

Влияние экзогенных свободных жирных кислот и дкацилглицеринз на поглощение кальция.

Учитывая наши результаты по изменению содержаний СЖК и ДЛГ при возбуждении нервов,мы предположили, что усиление поглощения кальция при возбуждении связано с образованием одного из продуктов распада ФИ -ДАГа и изменением содержания СЖК, поскольку известно, что ДАГ и СЖК влияют на транспорт кальция через плазматическую мембрану сни-

аг.д еЪ а1.,19Э2Э.

В связи с этим мы поставили эксперименты по изучению влияния экзогенных СЖК и ДАГа на поглощение кальция в нервах разных типов.

В течение 30 нин аксоны кальмара инкубировались в морской ведена нервы кролика в растворе Рингера,содержащих жирную кислоту и:а ДАГ.

Влияние свободных жирных кислот и 1,2-диацилглицерина на поглощение кальция в аксоне кальнара св пМ^яг сухого веса нервов}.

пМ/яг сухого Беса нервов

100 -7550 25 -

Стеариновая кислота

Арахидоновая кислота

Диацилглицерин

контроль

Пю-5 М

ш

10"4 М 10"А м ВВю-3 м Рис. 2.

Инкубация аксонов кальнара со стеариновой и арахидоновой кислотой в концентрациях 10"5 М не вызывает достоверного увеличения поглощения кальция аксонон кальмара. С повышением концентрации возрастает и поглощение кальция срис.2Э,но повышение поглощения кальция стеариновой кислотой было меньше.

В ниелинизированнон нерве кролика арахидоновая кислота в концентрации Ю-5 М усиливала поглощение кальция на 47-/- по сравнению с контролен. Повышение концентрации до 10~4 М не вызывало дальнейшего повышения поглощения кальция,а 10~3 М концентрация арахидоновой кислоты наоборот, снижала поглощение кальция относительно уровня контроля.

В то же время повышение концентрации стеариновой кислоты вызывало повышение поглощения кальция концентрационнозависимын образом.

Проведенные опыты показали, что как ненасыщенные,так и насыщенные ЖК усиливают в исследованных нами концентрациях поглощение кальция в обоих типах исследованных нервов. Подавление поступления кальция в нерв при высоких концентрациях арахидоновой кислоты, воз- ■ ножно,связано с ее накоплением в липиднон бислое ненбраны и инакти-

IB

вациея кальцийсвязанных систем.

Влияние свободных хирных кислот и 1,2-диацилглицерина на поглощение кальция в нерве кролика св пМ/нг сухого веса нервов?.

nM.nr сухого веса

контроль

Рис. 3.

Действие низкой концентрации ДАГа СЮ" № не вызывает изнене-ниа в поглощении кальция аксоном кальнара.Концентрации ДАГа 10"4 М и 5 10~А И • вызывают одинаковое 30* увеличение поглощение кальция срис.25.

Инкубация нервов кролика в растворе ДАГа концентрацией 10"5 М приводит к увеличению поглощения кальция относительно уровня контроля на 52". Повышение концентрации ДАГа вызывает ene большее увеличение поглощения кальция срис.Зз.

Такин образом,ДАГ усиливает поглощение кальция как в ниелини-зированных.так и в нениелинизированных нервах, причен более значительно в нерве кролика.

Учитывая данные литературы, ножно предположить, что СЖК и ДАГ ногут реализовать свое действие через протеинкиназу С CLinden et

al.,19S7;Nishizuka,19953 ИЛИЗасЧеТ изменения СВОЙСТВ ЛИПИДНОГО бислоя С De Boeek, Zidovetzki, 1992;Strennmel et al., 19923.

Влияние дегенерации нерва кролика на жирнокислотныя состав фосфо-инозитидов.диацилглииерина и фракции свободных тарных кислот.

Учитывая высокую лабильность липидноя фазы, а также способность ряда продуктов липидного обнена вызывать деструктивные изменения в мембране, иохно предположить, что липиды определяют в значительной мере ход патологических процессов СПрилипко,Лиденан,1982;Бурлакова, Пальмина,19825.Как известно,нарушение ФИ обнена cs«kar, Hokin,tsee; Nahoi-ski et ai, 1ЭЭ15 и интенсивности протекания процессов ПОЛ СГуб-ския и др.19875 приводят к нарушению транспорта кальция и,соответственно, нормального метаболизна клетки.Это проявляется прежде всего в накоплении СЖК с Dor-man, 19825. Поэтону исследование связи между интенсивностью обнена К части ФИ,составоп СЖК и поглощением кальция при повреждении нервного ствола позволит получить дополнительные сведения об участии липидов в нарушении функционирования нерва.

Анализ результатов экспериментов,приведенных в табл.5 и 6,показывает, что все исследованные фракции ФИ в покое представлены следующими ЖК:С14:05 ииристиновоя, С16.05 пальмитиновой,С18:05 стеарино-воя и C20:d5 арахидоновоя. Во фракции МФИ наряду с вышеперечисленны-

Табл.5

Жирнокислотныя состав компонентов ФИ-цикла и продуктов их нетаболизма в седалищном нерве кролика в покое и при

перерезке св х от сунны ЖК5.

Кислота Фракция 14 :0 16 -0 18 =0 20 -.4 Кислота*

МФИ Пок 1.7+0,15 43,0±3,1 23.6+4,3 26,4+1,5 5.3+0,15*

ПР 1,3±0,35 61,8±1.65 14,5±2,4 20,4+1,35 2,0+0,15*

ДФИ Пок 3.0+0.45 17,4±0,75 9,3+1.0 70.3+1,1 -

ПР 2,6 19,6 22,8 53,4 1,6 s

ТФИ Пок 1,7 5,6 8.1 84,6 -

ПР 1,7+0,05 13,8+0,95 22.8+1,15 19,7

19,6+0,5® 17,7+1,4

ФК Пок 0.9 2,1 - 97,0 -

ПР 9,7+2,4 2,8+0,9 3.2±0,15 82,0±2,0 2,3+0,7®

ЛАГ Пок 4,9±0,6 36,2+0.5 42.0+1.9 - 16,9+1,8

ПР 3.9 38.4 51.0 - 6.7 *

СЖК Пок 5,3±0,05 27,1+0,8 - 67,6±0,8 -

ПР 3,0+0,2 45,3±1,85 7,8±1,9 28.5+1.0 12,0±1,2* 3,4 2

* В графе «Кислота» под соответствующими номерами указаны следующие ЖК =1-12 :0; 2- 10 :0; 3- 15 :0; 4- 18 :1; 5- 18 :3; 6- 20 :1.

ми кислот г мн обнаружена и <12:03 лауриновая кислота. Полифосфоиноз;;-тиды СполиФИз характеризуются высоким содержанием арахидоновой кислоты ссвыше 70«,а фракция МОИ - высоким'содержанием пальмитиновой кислоты С43.0*3.

При перерезке нерва наиболее сильные изменения происходят во Фракции ТОЙ: появляются три новые кислоты - С15:03 пентадеканоЕая. CIS:33 линоленовая и С20:1з зякозеновая.В ДОИ появилась пентадекг-нсвая кислота,а во фракции МФИ число ХК не изменилось.При перерезке во всех формах ФИ происходит уменьшение количества арахидоновой кислоты, причем наиболее значительное-во фракции ТФИ.Одновременно происходит увеличение количества пальмитиновой кислоты, содержание м;:-ристиновоя кислоты остается примерно на одной уровне, а количество стеариновой кислоты уменьшается только во фракции МОИ.При перерезке происходит накопление общего количества ХК фосфоинозитидов, причем характер накопления свидетельствует о возрастании общего содержания ФИ.Крене того,ФИ становятся более насыщенными.

В покое жирнокислотныя состав ФК и СХК качественно одинаков, причем эти фракции характеризуются высоким содержанием арахидоновой кислоты,особенно ©К. При перерезке наиболее сильные изменения происходят в составе СХК:появляются с10:03 каг.риловая, с 12:Оз лауриноЕая и CIS:Оз стеариновая кислоты. Уменьшается ара-хидоновая кислота,а уровень паль митиновоя кислоты сильно возрастает. В составе ФК появляются новые кислоты: С15: 03 пентадекановая и CIS:Оз стеаринозая и значительно возрастает уровень миристиново кислоты. В ЛАГе арахидоновая кислота отсутствует и основной вклад вносят пальмитиновая и стеариновая кислоты. Общее содержание ХК уменьшается при перерезке во фракциях ФК к ДАГа и увеличивается во Фракции СХК. Степень насыщенности «следуемых фракция повышается.

Табл 6

Общее содержание ХК и коэфициент насыщенности компонентов ФИ-цик-ла и продуктов их метаболизма в седалищном нерве кролика в покое сПокз и при перерезке СПРЗ.

Фракция мкг нг~липид К нас

МФИ Пок 1,42+0,2 2,8

ПР 2 25+0 06 3,9

ДФИ Пок ПР 0,47+0,02 1 Л 0,4 0,87

ТФИ Пок 0,32 0,18

ПР 0,52+0,01 0,75

ФК Пок 6,13 0,03

ПР 2.0+0,04 0,22

ДАГ Пок ПР 10,4+0,3 8,0 4 92 13,9

СХК Пок 8,8+0.12 0,47

Г.Р 14.0+1,15 2,5

Поглощение кальция при перерезке возрастает на 75*.Если в контроле поглощение кальция составило 47 пМл1г сухого веса нерва, то в перерезанной нерве поглощение кальция составило 82 пМ/ нг сухого веса.Увеличение поглощения кальция при перерезке ножно объяснить интенсификацией ПОЛ сРевин, 1990Э.На усиление процессов ПОЛ указывают и наши данные по снижению доли ненасыщенных ЖК сен табл 6э".

Кроне того, в перерезанной нерве происходит накопление всех фора ФИ.По-видиному.при перерезке нерва происходит инактивация мен-браносвязанных ферментов св частности фосфолипазы Сэ, ответственных за гидролиз ФИ за счет накопления продуктов ПОЛ СМагМп, Е1пеап, 1377}, в результате чего и возрастает количество ФИ сен табл 5Э. Дополнительным потверждениен этому предположению являются наши данные по уменьшению содержания предшественников синтеза ФИ -ФК и ДАГ при перерезке нерва.

Еще однин механизмом,лежашин в основе патологических изменений, происходящих в нерве,является активация поступающим кальцием каль-циизависимых фосфолипаз А1 и А2.0б активации кальциязависиных фос-фолипаз А1я А2 свидетельствуют наши данные по накоплению СЖК в перерезанном волокне.

Перечисленные изменения,возможно,лежат в основе патологических нарушений при повреждении нервного волокна.

Такин образон,исходя из собственных результатов исследований и данных литературы,можно считать,что липиды принимают активное участие в функционировании нервного проводника.которое схематически мо- . жно представить следующим образон. В функционирующем нервном проводнике происходит усиление обмена ФИ,что приводит к появлению метаболически активных ©К,ДАГа и СЖК,которые регулируют транспорт кальция. Об усилении поглощения кальция нервными проводниками,вызываемое СЖК и ДАГон,свидетельствуют наши эксперименты. СЖК и ДАГ реализуют свое действие через протеинкиназу С сшвИАзика, 19353.

ВЫВОДЫ.

1.Состав свободных жирных кислот нениелинизированных и ниелинизиро-ванных нервных проводников кальмара,краба,лягушки и кролика представлен в основной миристиновоя,пальмитиновой,стеариновой,олеиновой м арахидоновой кислотами.Вклад индивидуальных кислот отражает видовые особенности исследованных животных. С повышением степени

миелинизации нервов количество свободных жирных кислот уменьшается

2. При возбуждении изменяется качественный и количественны?, состав свободных жирных кислот во всех типах изученных нервов.Содержание длинноцепочечных жирных кислот повышается в нениелинизированных Еолокнах и уменьшается в ииелинизированных.В обратной порядке изненяется содержание короткоцепочечных жирных кислот. Количество свободных жирных кислот в нерве при стимуляции увеличивается у холоднокровных и уненьшается у теплокровных животных.

3.Изменения,происходящие одновременно в жирнокислотной части фосфо-инозитидов и во фракции свободных жирных кислот, а также сходны?, их качественный состав свидетельствуют о том, что фосфоинозитиды могут служить источником свободных жирных кислот. Имеющиеся отличия в жирнокислотном составе фосфоинозитидов и составе свободных жирных кислот,указывают на участие последних и в обшен липиднск обменэ.

Л.При дегенерации нерва,вызванной перерезкой,наблюдается накопление свободных жирных кислот, увеличение степени насыщенности фракция фосфоинозитидов и свободных жирных кислот и усиление поглощения кальция.Обнаруженные изменения,по-видимому, отражают компенсаторные явления, происходящие в гидрофобной' области биомембран в поврежденном нервз.

5.Свободные жирные кислоты влияют на поглощение кальция соматическими нервами.Насыщенная стеариновая кислота вызывает усиление поглощения кальция во всех типах исследованных нервов, а ненасыщенная арахидоновая кислота повышает поглощение кальция только в не- ■ миелинизированном волокне кальмара.

6.Продукт гидролиза фосфоинозитидов - 1,2-диацилглицерин усиливает поглощение кальция как в нениелинизированных.так и в миелинизиро-ванных нервных проводниках.

7.На основании собственных результатов исследования и данных литературы можно утверждать, что проведение возбуждения по соматическим нервам вызывает глубокие изменения не только структуры,но и состава липидного компонента возбудимых менбран.И одним из важных звеньев в этой цепи липидного обмена являются свободные жирные кислоты и 1,2-диацилглицерин,регулирующие поглощение кальция нервными волокнами.

список

ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Николаев В.Т., Сосунов А. А., Ревин В.В., Киселева Р.Е., Соловьева Т.В. Изменение состава свободных жирных кислот в нервной волокне кролика при возбуждении // Использование различных нетодсв э изучении биологических систен.-М. : Наука, 19SS.-С.25-27.

2.Николаев В.Т. .Ревин В.В.,Колье O.P. .Киселева Р.Е. Состав свободных жирных кислот в гигантском аксоне кальнара при возбуждении /V Использование различных нетодов в изучении биологических систем. -M. : Наука.1988.-С.40-43.

3.Ревин В.В..Николаев В.Т. .Колье O.P. Содержание свободных жирных кислот и поглощение Са в гигантской аксоне кальнара в покое и при возбуждении^Биофизика.-1989. -T.34.N 3.-С. 504-507.

4.Николаев В.Т..Ревин В.В. .Грунюшкин И.П..Колье O.P. Изучение жир-нокислотного состава компонентов фосфоинозитидного цикла в седалищном нерве кролика при перерезке^ Некоторые биофизические аспекты исследования хивьи систен.-М. ,1992.-С.78-83.

5.Николаев В.Т. „Резин Б.3.,Колье O.P. Изненение состава жирных кислот компонентов ФИ-цикла и интенсивности перекисеобразования при перерезке седалищного нерва кролика^Тез. докл-V Всерос. конф. по патологии клетки.Москва,29- 30 ноября 1993,- М.,1993.-С.22-23

6.Николаев В.Т.,Ревин В.В..Колье О.Р.Состав жирных кислот фосфоино-зитидов.перекисное окисление и поглощение Са при дегенерации ние-линового нерва^/Докл.МОИП. Общая биология 1991-1992/Моск. об-во ис-пыт. природы. МГУ.-М. 1994.-С.36-39.-ДЕП. в ВИНИТИ 10.01.94,N38-B94.

7.Николаев В. Т.Влияние электрической стимуляции на состав свободных жирных кислот в седалищнон нерве лягушки/^xxiv Огаревские чтения: Тез.докл.науч.кон®.:В 3 ч.-Саранск.1995.-Ч.2.-С.29.

8.Николаев В.Т.,Ревин В.В. Изменение жирнокислотного состава компонентов ФИ-цикла и продуктов его нетаболизна при возбуждении нерва кролика: Тез. докл. vi Симпозиума по биохинии липидов.Санкт-Петер-бург,3-6 ОКТ. .1994. -М.. 1995. -С. 71-72.

Подписано в почать 15.01.96. Объпм 1,0 п.л. Тираж 100 экэ. Заказ )?3G.

Типография Издательства Мордовского университета.

430000, Саранск, ул. Советская, 24.