Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение содержания фосфоинозитидов в крови и ткани печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изменение содержания фосфоинозитидов в крови и ткани печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом"

На правах рукописи

Турыгина Светлан» Анатольевна

ИЗМЕНЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ФОСФОИНОЗИТИДОВ В КГОВИ И ТКАНИ ПЕЧЕНИ ПРИ ОСТРОМ ОТРАВЛЕНИИ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ

(03.00.04.- биохимия) АВТОРЕФЕРАТ

диссертации па соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тверь-2004 г.

Работа выполнена на кафедрах клинической биохимии и клинической лабораторной диагностики и гистологии, цитологии и эмбриологии Тверской государственной медицинской академии

Научный руководитель- доктор медицински* наук, профессор Слюсарь Николаи Николаевич

Официальные оппонента* доктор биологических наук, профессор Каргалоло» Александр Васильевич

Ведущая организация Самарский государственный университет

Защита диссертации состоится «7» декабря 20041. в 14.00. часов на заседании диссертационном счы.и К 212.263.01 Тверского государственного универстета (170002, г Тверь, пр Чайковского, 70э кори \ аудитория 318)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Тверского государственного университета (г Тверь, ул. Володарского, 44а)

кандидат биологических наук, доцент Карцева Софья Владимировна

Автореферат разослан «3» ноября 2004г.

ГОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ

библиотека

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор биологически* наук, доиеит

А И. Панкрушина.

ОБЩАЯ ХАРАШ ерисгика РАБОТЫ

Актуальность темы. Широкое использование химических пешееiо сгонит перса исс гедоватслями задачи выяснения их действия на организм В это« плане заслуживает внимания довольно больчгая группа хлорированных у|левозородов которые наряду с четъгреххлорнстым углеродом могут поражав паренхиматозные органы и, главным образом печень Результата исследовании показали, то мплм чувствительными к повреждающему действию четырсххлористого углерода явтяются ферментные кошпексм мембран эдоилазмагичесйого ретикулума, микросочальн^е ферменты (Арчакок Л И Панчпжо Л Ф ,1473 , Войковская Ю А ,1969, Губекий Ю И.,1972)

Сущег твенную роль в г**патг гокгччнпс" и uei,>'flfivvrtf,piie',0'г у',"еродр о'^о;!0*' ч^регисго'.'} окислению ненасыщенных жирных кислот в мембранных структурах гепатоцитов (Bu'lcr 1С19Ы) и изменениям фосфозипидов структурных компонентов линидного бислоя, что приводит к деформации клеточных мембран, повышению их проницаемости и, следовательно, к утечке внутриктеточных ферментов В результате нарушается внутриклеточный метаболизм, что усугубляет паюлошческий процесс Вместе с тем изучение патогенеза поражений печени под действием четыреххлористог с углерода требует широкого исследования, в том числе и различного рода морфо-биохимических пока йпслей, позволяющих коррелировать развитие нарушений на разных стадиях патологического процесса Недостаточно изучены соотношения динамики повреждения различных клеточных структур организма и биохимическими изменениями состояния гепатоцитов Выяснить чти взаимоотношения при остром отравлении четыреххлорисым у|леродом сложно, так как нет исследований содержания фосфоинознтндов их фосфорилированных форм, которые, как известно обеспечивают внутрикоммугикатнвные связи в системе кровь-ткань и выполняют функцию вторичных посредников в передаче сигналов и соответственно, регуляции функций клеток (Berndge М. 1., Irvine R F.,1989, Carter A N., Huanq R , Sonsky A ,¡994., Carter A N.. Dowries C. P.,1992).

Существенная роль фосфоинозитидов в регуляции клеточных процессов связана с участием зтнх фосфолипидов в транспортной, энергетической, пластической, регуляторной функциях биологических мембран (Швец В И, Степанов А В , Крылова В Н , Гулак П.В ,1987) и имеют четкую функциональную и структурную связь с рецепторами, что позволяет рассматривать их одними из основных структурных составляющих в трансмембранной передаче сигналов (Scoll G К , Dodson J М Monlgomuy Р.А .19911 Однако отсутствуют сведения о содержании фосфоинозитидов в основных биологических объектах (клетках крови, печени) при ос гром отравлении четыреххлористым углеродом Укачанные недостаточно изученные вопросы определили цель и задачи данного исследования

Целью исследовании явилось изучение содержания фосфоинотитидов в клеточных элементах кропи, ткани печени при остром отравлении четь.реххлористыч углеродом и при введении «эсссиииопе-фортеь.

В соответствии с цепью были поставлены следующие задачи: ' 1 Исследовать изменения фосфоинози гидов в клетках крови, цельной крови и печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом - '2. Выявить взаимосвязь количества фосфоинотитидов и изменения морфологических параметров печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом

3. Исхждовэть влияние «эссенциальныхл фосфолипидов на характер и диичмику изменений ^юсфоинозитидов печени и клеток крови н морфологические параметру печени при очром отравлении четыреххлористым углеродом Научная новизна. В результате проведенных исследований выявлены изменения содержания фосфатидилиночитов и их фосфорилированных форм в клетках крови и печени при остром огрявленни четыреххлористым углеродом Показана корреляция биохимических и морфологических изменений неченч в различные сроки острого о-.равления организма животных Установлено что острое отравление четыреххлористым углеродом сопровождается однонаправленным характером изменения 410.11,я содержания фосфоикозигидов в крови и клетках крови, которые связаны с изменением количества фо<форилнаованных форм ф'уфатидилинозитлр р чуяни речени й ргзупллте ин.» кюшш «эссенциальных» фосфолипидов на (свезли крови и ткань печени при остром отравченим четыреххлорнешм углеродом установлены изменения фосфоииозитидов в различные временные интервалы Практическая значимость. Результаты исследования представляют интерес для биологии и медицины, т. к они дополняют знания по биохимии мембранного строения клеток печени к крови в условиях нормы, острой интоксикации, а также расширяют представления о протекторном возлеЫ тени препарата «эссенциале-фортев, механизмах внутриклеточных взаимодействий на клетки печени и крови

Особенности морфо-биохимических характеристик исследуемого органа могло бы служить одним и< способов лечения цирроза печени применительно для чеювеческоги организма, а уровень сопояннх фосфоинозитидного состава являтся бы показателем здоровой либо патологически измененной пани печени.

Положения, выносимые на защиту:

\ Острое отравление четыреххлористым углеродом изменяет содержание (Ьосфоинознпглов н клеггнх крови, ткани печени, которое коррелирует с характером морфологических изменений

2. Введение «эссенциальиых» фосфолипидов при остром отравлении четыреххлористым углеродом не способствует полному восстановлению количества фосфатидилинозитов и их фосфорняиров^ннмх форм в клетках крови и ткани печени

3.Ежедневное введение гепатопротектора- «эссенциале фор1е-Н» уменьшает долю нскротнчсски и дистрофически пораженных гегаторитов. стимулирует нормальное митотическое деление печеночных клеток, угнетая развитие междольковой соединительной ткани

Апробация рабогы. Основные положения работы и результаты исследования доложены на конференции молодых ученых «Аспирантские чтения-2004» г Самара, 2004г, на II Всероссийской научно-практичсскоч конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы фундаментальные, эколеч ячееше и клинические аспекты», г Новосибирск, 2004г.; на V Общероссийском съезде анатомов, гистллогоь и эмбриологов», г.Казань, 2004г; на научно-практической конференции ТГМА и ГУЗ ОКЬ «Итоги и перспективы лечебно профилактической, научно-исследовательской и педагогической деятельности», межкафедральном заседании сотрудников ТГМА, 2004г

Внедрение. Результаты рабогы и основные ее положения используются на кафедрах клинической биохимии и клинической лабораторной диагностики, гистологии Тверской государственном медицинском академии, при чтении лекций и проведении практических занятий Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 науных работ

Структур» и объем диссертации. Диссертация изложена на 121 страницах машинописною текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных

исследований, их обсуждения, заключения, выводов и списка лн'ергилр;.!, который гжлючап 50 отечественных и 64 зарубежных источников Работа иллюстрирована таблицами (?}, ри;\икамм(^О) гисгофаммачи (2)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены на 99 крысах обоего гола массой 190-200г Животные были раздечены на три фумпы* первую составнти 45 крыс которым однократно внугримышечно вводили че гыреххлорип мй углерод (CCL,) по 0,3 мл на 100 i веса, вторую- 45 животных, которым »осле введения ОС! j ежедневно парентерально вводили раствор «эссенциале-Н» из расчета 0 ! мл на 100 i веса, третью труппу составили 9 ичгактних животных Крыс 1 и !! гоупп выводили из эксперимента на ! ! 7,10, и 14 сутки Забор магернапп-печень и кров*- проводили под эфирным наркозом Из крови выделязи тромбоиигы (Ясгрсбш- I Я , 1985), эритроциты и лимфоциты (Нагеиг Дж Б И соавт , 1980) Из отмыгых клеточных суспензий, цельной кровн, ткани печени экстрагировали липиды и выделение фосфоинозитидов осуществлялось с помощью метода проточной горизонтальной хроматографии (Каргвполов А В, Слюсарь НН 1991-1995) Рсзутьтаты выражали в имолях фосфора соответствующего фосфоинозитида на 1 mi белка Концентрацию белка определяли биуретовым методом (Колб В.Г и соавт. 1982)

Морфологические методы исследования Для микроскопического исследования материю фиксировала в 12% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа (спирт- 60 мл, хлороформ 30 мл, ледяная уксусная кислот 10мл) с последующим изготовлением гистопрепаратов по классической схеме Срезы толшиной 7-10 мкм окрашивали гематоксилин- эозином но способу Всйгерта, 1ликоген выявляли по методике Шабадаша (Меркулов Г.А ,1969)

Для электронной микроскопии использовали ткань печени Кусочки исследуемого материала размером I мм-Змм фиксировали в 2,5% растворе глутарового альдегида на 0,1 М фосфатном буфере (pll 7,2-7,4) в течение 2 часов После промывания фиксированных фрагментов проводили постфнксаиию 1% раствором тетраоксидосмия Материал фиксировали в течение 3 ч при минусовой температуре Дальнейшую лофиксацию осуществляли в спиртах возрастающей концентрации. Пропитку и заливку осуществляли в смеси эпоксидных смси: аралдит и эпон Полимеризацию проводили в желатиновых капсулах в течение 2 суток в термостате при Т-60 С6 Для прицельной ориентации делали потутонкие срезы которые окрашивали метиленовым синим или азуром II Ультратонкие срезы изготовляли на ультратоме УМ1П -й и наносили на медные сеточки. В качестве подложки использовали формваров^ю пленку. Контрастирование ультра гонких срезов проводили уранилацетатом на 70 спирте Срезы исследовали и фотографировали на электронном микроскопе УЭМВ-100К при ускоряющем напряжении 75 кв

Морфометрические методы При проведении морфометрических исследований использовали метод отбора случайно ьыбранных гепатоцитов, равномерно распределенных в печеночной дольке по всему срезу Получали и аиалюирооали значения размеров гелатонитов; диаметры ядер, капилляров; ядерно-цитонлазматические отношения и площадь пораженной ткани при помоши системы прикладных программ «Морфолот, взаимодействующей с видеокамерой, установленной на лабораторном микроскопе МНФ -11 (Автандичов Г Г, 1990) Статистическая обработка результатов экспериментов Количественные результаты экспериментов подвергались статистической обработке по общепринятой в математической статистике методике на персональной ЭВМ IBM «Pentium 4» с

применением пакета прикладных программ «Slalgraf» версия 2 0 Статистическая достоверность ратпм'щй средних величин определялась по критерию Стьюдента ГАвтандилов Г.Г..1990)

Все цифровые материалы оформлены в виде таблиц, рисунков и гистограмм с момощчо прикладного пакета «Mitrosofl Graf» в программном продукте «Microsoft Word W;ndovs>,

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Классическим методом получения экспериментальной модели гепатита и циррота печени мо морйолог ической картине и некоторым функциональным показателям блишим к ¡ьпологичи к им ' состояниям, наблюдаемых у человека, является затравка лабораторных животных четыреххлористым

углеродом ССЦ Í Choi J S.,2002, Arise Irr, ¡ К. Subbotm V M.. Ncmoto E. Gandhi С R ?(КГ1 "m мот- ч печеночной патологии широко используется для решения многочисленны', вопросов патогенеза табочевапия ' пенсии, определения эффективности лекарственных средств изыскания новых методов лечения (Coli M К .

Uasjupta S.,2002, Hemmings S.J, Pulga VB, Tran ST., Uwiera R R.,2002). Исследование iепатотропного действия CCI 4 представляет практический интерес для профессиональной патолотш в спя hi с возможностью острых и хронических отравлений зтим ядом в производственных и бытовых условиях (Лу:п1 M M.. El-Hefnawy G.В, ßahlo! G W ,2002, Adcmu\iwa О, Onililo O Dcisumu О, Avanmiga О, «abre А Akinlatun W , Ogunyemi К О.,20021 Известно, что наличие хлора в молекуле ) гленодорода усиливает еи> токсическое действие, преимущественно в поражении паренхиматозных органов, в особенности печени и почек Ьолылое количество исследованчй (Арчаков А И., Панчснко Л.Ф и др.,1973) касается главным образом характеристики изменений каталитической активности ферментных систем, нарушению образования липопротсиновых комплексов в силу изменения структуры белкой участвующих в гг\ образовании, изменениям характера действия различных гормонов Имеются также данные о свободиорадикальных процессах, как в пусковом механизме гепатотоксического действия CCI... так и в изменении активности процессов перскисного окисления липидов Однако существующие литературные данные относительно молекулярных механизмов действия ССЦ на мембраны «щоплазматичссхого ретикулума и митохондрий противоречивы Недостаточно изучены соотношения между динамикой повреждения различных клеточных ор~анелл, связь между биохимическими изменениями и состоянием ультраструктуры гепатоьитов Установил, данную связь при отравлении ССЦ достаточно сложно, так как пет исследований содержания фосфоинозитидов, основных компонентов клеточных мембран i выполняющих в организме функцию вторичных мессенджеров н играющих решающую роль в регуляции

основных функций клеток. Ьажиая роль фосфоинозитидов в жизнедеятельности клеток связана с их непосредственным участием в транспортной, пластической, энергетической, коммуникативной функциях , биологических мембран Значительное число работ, касающихся механизмов действия ССЦ, выполнено на

длительном, хроническом введении яда, когда в печени имеются уже цирротические изменения и трудно судить о первичных метаболических реакциях, возникающих при поступлении этого яда в организм В связи с изложенным, перспективным является исследования содержания фосфоинозитидов в крови, клетках крови, ткани печени в ранние сроки после острого отравления ССЦ, которые позволят установить некоторые стороны патогенеза заболевания.

Нами исследовано содержание фосфоинозитидов в эритроцитах, тромбоцитах, лимфоцитах цельной крови, ткани печени у крыс линии «Вистар» в 1-!4 сутки после затравки ССЦ, а также ггри остром отравлении ССЦ на фоне введения «эссенииальиых» фосфолипидов («эссенциале-Н») Как показывают исследования последних лет, липидсодержащие препараты способны влиять на обмен фосфоинозитидов

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что количество основною фосфоино^итида - ФИ в ттсани печечи в ! и 3 с\тки после затравки CCI „ в среднем ниже их уровня у здоровых животных (рис 1 )

Содержание фосфоинозишдон в ткани печени у здоровых крыс и после введения чстыреххлорнстого углерода (M ± ni)

--

rfl hv, Кт. ■-ГЦ. гГЪ rft

□ ФИ

■ ФИФ 1

□ ФИФ

□ ФИДФ

■ ФИДФ1

10 14

Рис.1

По оси абсцисс сроки введения CCL* (в сутках); по оси ординат - нмоль фосфора соотегствующею фосфоинозитиоа на I мг белка.

В более поздние сроки (7,10,14 сутки) количество ФИ было достоверно выше их значений в )и 3 сутки после введения CCI, Изменения содержания ФИ в ткани печени после введения ССЦ вызывало нарушения в соотношении фосфорилированных в П-3 и D-4 позициях форм ФИ Причем, если соотношение ФИФ' к ФИФ и ФИДФ к ФИДФ1 у здоровых животных составило, соответственно 2,1 3,0 и 5,2 4,2 , тогда как в 1 сутки после введения СС1.< - 4,2 1,5 и 2,7.1,3; в более поздние сроки (14 сутки) 2,7 2/ и 4,3 3.3 Столь значимые изменения содержания фосфорилированных форм ФИ свидетельствует о нарушении коммуникативных взаимоотношений на уровне вторичных мессенджеров а также возможной дезинтеграции процесса информации обеспечивающиеся цепочкой мембранных белков, характер действия которых зависит от уровня инозитолтрифосфагов и инозитолтетрафосфатов в клетках На это^кашваюз данные изменения фосфорилированных в 1>-3 позиции форм ФИ, где содержание ФИФ1 в 1кани печени в !и 3 сутки после затравки ССЬ4 в среднем выше их значений на 7-14 сутки после введения С С it и количество ФИДФ' в 1и 3 сутки в среднем ниже их уровня на 14 гутки. Анализ морфологических изменений тканей печени свидетельствует о преимущественном поражении гепатоцитов при остром отравлении C'Ci.j Через 1-3 суток определяются участки некроза печеночных клеток оасположеиных в центре дольки Зона некроза в этот период составляет 18-20 % площади дольки, увеличивается также зона дистрофически измененных гепатоцито». Пик этих изменений происходит на 3 сутки эксперимента Процессы регенерации печеночной паренхимы в первые Зсуток эксперимента выражены слабо, митозы гепатоцитов носят аттшическнй характер Нормальное те"ение митоза определяется на ¡0-14 сутки эксперимента Последствия острого отравления CCL« наблюдаются и на 7-10 сугки эксперимента Зона некроза в этом случае составляет 10-15'? плошади дольки Только через 14 суток она значительно уменьшается и составляет 5% площади печеночной дольки (гистограмма I ).

Соотношение в % зон некроза, дистрофии и неизмененной части паренхимы долек леченн крмг I группы в разные сроки эксперимента

л

4 ¡1 а Л г

□ Зона некроза

■ Зона дистрофии

□ Неизмен.клетки

7 10 14

Гистограмма I

По оси абсцисс - сроки введения ССЬ< (в сутках) в сравнении с контрольной группой животных, по оси ординат - %

В промежуточной области дольки в ходе эксперимента отмечаются явления дистрофии гепатоцигов

Здесь выявляются клетки в состоянии гидротической дисгрофии, в цитоплазме которых определяются

многочисленные мелкие вакуоли Максимальное увеличение доли дистрофически измененных клеток

приходится на 3 сутки эксперимента Затем происходит постепенное снижение площади, занимаемой

дистрофически измененными гепатоцитами и на 14 сутки она составляет 8% дольки При остром

отравлении ССХ< наблюдаются изменения со стороны сосудистой системы печени Отмечается гибель части

эндотелиальных клеток, нарушается проницаемость сосудов Междольковые и поддолькочые вены

полнокровны, внутридольковые хапилляры и центральные вены расширены Определяется замедление

кровотока, что приводит к стазу форменных элементов крови В меньшей степени ССЦ и его мстабочнты

оказывают влияние на состояние междольковой соединительной ткани при однократном введении В

единичных случаях происходит незначительное разрастание рыхлой соединительной ткани между труппами

гепатоцитов, что приводит к образованию микродолек При остром отравлении ССЦ нарушается

гликогенообрвзуюшая функция печени. На 3 сутки после отравления СОЦ гликоген выявляется только и

цитоплазме гепатоцитов периферической зоны дольки Восстановление содержания гликогена близкою к

контролю отмечается только на 14 сутан эксперимента Некроз н дистрофические изменения гепатоцитов

г

можно объяснить действием ССЦ, его метаболитов на мембранные структуры гепатоцитов Изменения касаются гранулярной эндоплазматичеекпй сети, митохондрий и лизосом, а также нарушения регионального кровотока.

При исследовании содержания фосфоинозитидов в клетках крови н цельной крови у крыс после введения ССЬ, были получены следующие результаты. В 1 сутки после затравки ССЦ количество ФИ в тромбоцитах, эритроцитах и цельной крови было в среднем выше их значений у здоровых животных Вместе с тем с 3 по 14 сутки после затравки содержание ФИ в исследуемых биологических объектах имело четкую тенденцию к снижению их показателей Несколько другая картина обнаружена при исследовании уровня ФИ в лимфоцитах, где их значения в 1и 3 сутки после введения ССи в среднем ниже их значения у здоровых животных, в более поздние сроки (7,10,14 сутки) после затравки СС1., количество ФИ было в среднем ниже их уровня на 1 сутки после затравки. Изменения количества ФИ способствовало нарушениям

фосфорилирования этого фосфоинозитида, что отражалось на соотношениях фосфорилированных в D-3 и D-4 позициях форм ФИ Причем, нарушения фосфориляции ФИ в исследуемых клетках крови имели разный характер их изменений Так, в эритроцитах количество ФИФ1 в I сутки после введения CCI 4 было в среднем ниже их значений у здоровых животных Вместе с тем, в эти же сроки содержание ФИФ1 в тромбоцитах и лимфоцитах было значительно выше их уровня у здоровых животных Обращает на себя внимание тот факт, что уровень содержания другой фосфорилированной формы ФИ ФИФ в эритроцитах в 1 сутки после введения CCL( было в среднем выше их количества у здоровых животных, в то время как в лимфоцитах и тромбоцитах наблюдался обратный эффект Аналогичные ФИДФ и ФИФ обнаружены и при исследовании других фосфорилированных форм ФИ-ФИДФ и ФИДФ1. В более поздние сроки rioc.ie затравки ССЦ содержание фосфорилированных форм ФИ в исследуемых клетках крови достоверно отличались от их значений в I сутки после затравки ССЦ. В качестве примера нами представлены изменения содержания фосфоинозитидов в лимфоцитах (рис 2)

Содержание фосфоинозитидов в лимфоцитах у здоровых крыс и после введения четмреххлористого углерода (M ± m)

. -

аФи

■ ФИФ1

□ ФИФ

□ ФИДФ

■ ФИДФ1

10 14

30 25 20 15 10 5 0

Рис.2

По оси абсцисс - сроки введения ССЦ (в сутках), по оси ординат - нмоль фосфора соответствующей! фосфоинозитида на I м г белка

Так содержание ФИФ1, ФИФ, ФИДФ в лимфоцитах на 7-14 сутки после введения ССЦ было в среднем в 1,3 раза ниже их уровня а I сугки после затравки В то время, как количество ФИДФ' в лимфоцитах на 10,14 сутки после введения СС14 в среднем выше их значений на 1и Зсутки

Таким образом, из полученных экспериментальных данных следует, что влияние ССЦ па организм животного проявляется в нарушении обмена фосфоинозитидов как в ткани печени, так и в клеточных )лементах крови, что вполне может отражаться на внутрикоммуникативных взаимоотношениях а системе кровь-ткань вследствие этого разбалаисировав ситиальиые механизмы регуляции клеточных процессов В этих условиях необходим поиск лекарственных препаратов, направленных на нормализацию обмена фосфоинозитидов в организме По нашему мнению таким препаратом мо1уг быть «ихенциальные» фосфолипиды, которые как показывают исследования последних лет, способствуют восстановлению нормальной структуры мембран, влияют на проницаемость клеточных мембран и могут изменять количество фосфоинозитидов в различных биологических объектах организма

Как показали наши исследования в 1 и 3 сутки после введения «эссенциальных» фосфолипилов («эссенциале-Н») содержание ФИ в эритроцитах, тромбоцитах, лимфоцитах лишь незначительно отличалось от их уровня в эти же сроки после введения ССЬ4 Вместе с тем на 7-14 сутки после введения «эссенциалс-Н» концентрация ФИ в исследуемых клетках крови была снижена по сравнению с их количеством в I и 3 сутки Кроме того, содержание фосфорилированных форм ФИ в клетках крови и цельной крови имело ге же )акономерности их изменений, что и при исследовании ФИ Полученные данные могут свидетельствовать о том, что «эссенциале-Н» в определенной степени способно влиять на содержание фосфоинозитидов в клетках крови, хотя эффект от воздействия незначительный В отличие от этого, содержание основного фосфоинозитида-ФИ в ткани печени в I и 3 сутки после введения «зссенциале-Н» было в среднем выше их значений до введения препарата (рис.3)

Содержание фосфоинозитидов в ткани печени у крыс после введения четыреххлористого углерода и «эссенциале-Н» в различные сроки эксперимента (М ± т)

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

НЪ Шц шц г11

□ ФИ

■ ФИФ 1

□ ФИФ

□ ФИДФ

■ ФИДФ1

1 3 7 10 14 к

Рис 3

По оси абсцисс - сроки введения С'СЦ + «эссенциале-Н» (в сутках); по оси ординат - нмоль фосфора соответствующего фосфоинозитида на I мг белка.

Однако на 7,10 сутки после введения «эссенциале-Н» количество ФИ в ткани печени не отличалось от их значений до введения препарата Обращает на себя внимание тот факт, что количество фосфорилированных форм фосфоинозитидов - ФИФ' и ФИДФ' в 1и 3 сутки отличалось от их значений до введения «эссенциале-Н». Однако количество других фосфорилированных форм - ФИФ и ФИДФ в >гн же сроки соответствовало их значениям до введения препарата Вместе с тем, несмотря на продолжение введения «эссенциале-Н» количество фосфорилированных в О-З и СМ позициях форм фосфоинозитидов н ткани печени изменялось незначительно Закономерности изменения тканевых структур печени при остром отравлении ССЦ с ежедневным введением в качестве гепатопротектора «эссенциале-Н» аналогичны таковым у животных первой группы Характер повреждения тканевых структур печени не меняется Отмечаются снижение интенсивности процессов некроза и дистрофии печеночных клеток, что подтверждается результатами морфометрического исследования. В первую очередь это касается площади зон некроза н дистрофии гепатоцитов В этой серии опытов они значительно снижены по сравнению с таковыми в первой группе животных и к 14 суткам приближаются к контрольным показателям {гистограмма 2).

Соотношение в % юн некроза, дистрофии и неизмененной части паренхимы долек печенн крыс 2 группы в разные сроки эксперимента

100-1 9080 7060 5040

□Зона некроза

■ Зона

дистрофии □ Зона неизмен, клеток

"VVl1"1! л

1 3 7 10 14

Гистограмма 2

По оси абсцисс - сроки введения ССЬ< + «эссенциале-Н» (в сутках) в сравнении с контрольной группой жнвоз ных, по оси ординат - %

Введение «эссенциале-Н» способствует нормализации митотическог о деления гепатоиитов В первые сутки еще встречаются атипические митозы, в дальнейшем наблюдается нормальное течение мигая Нормализация всех морфологических показателей происходит к 10-14 суткам эксперимента Возможно, введение «эссенциальных» лнпопротеидов ослабляет действие метаболитов ССЦ на мембранные структуры | сшпоцитов, что приводит к менее выраженной патологии печеночных клеток.

В результате проведенного исследования установлено, что через 1-3 суток после введения CCL4 ткань печени крыс первой группы претерпевает сложный комплекс некротических и дистрофических изменений Отмечается отек, некроз части клеток S центре дольки Здесь же выявляется кровоизлияния, лейкоцитарная инфильтрация вокруг центральных вен В переходной зоне и перилобулярной области гепатоциты находятся в состоянии вакуолярной дистрофии Поддольковые вены расширены, стаз форменных элементов крови наблюдается в центральных венах В цитоплазме центролобулярных гепатоиитов отсутствует глгокоген, в перилобулярных отмечается его содержание По истечении 7-10 суток после отравления в центре дольки часть гепатоиитов содержат ядра на различных этапах разрушения В цитоплазме выявляются крупные вакуоли В переходной зоне определяются признаки вакуолярной дистрофии В перилобулярной области отмечаются атипические митозы гепатоцитов Преобладают полые мстафазы, задержка митоза в метафазе Гликоген в центролобулярных гепатоцитах отсутствует, в цитоплазме клеток периферической зоны определяется умеренное содержание гликогена Отмечается нарушение регионального кровотока На 14 сутки после введения СП,« в центре дольки единичные гепатоциты содержат мелкие вакуоли Центральные вены расширены, полнокровны Стенка центральных вен утолщена, вокруг нее определяются участки молодой соединительной ткани. По периферии дольки и в переходной области гепатоциты не несут признаков патологии Прослойки соединительнои ткани между дольками выражены В отдельных случаях соединительная ткань отграничивает группы печеночных клеток Включения гликогена выявляются как в центральных, так и в перилобулярных гепатоцитах При введении гепатопротектора через 1-3 суток явление некроза печеночных клеток в центре дольки выражены в меньшей

Морфологии дольки печени экспериментальных групп животных.

степени Здесь в основном преобладают процессы вакуолярной дистрофии В ииготэзме перыюб\лирных гапа'онигов наблюдаются мелкие вакуоли Здесь же определяется мигозы "-епатоциток атипических митозов не выявпено Снижается содержание гликогена в цитоплазме центролобулярных гепатоцшов Но истечении 7-19 суток выявляются отдельные очаш клето! в состоянии зернистой дистрофии Ядра в некоторой части клеток отсутствуют цитоплазма содержит мелкие гранупы 'Зндотелиоцнты и тгпаюцитм. особенно в периферической зоне, находятся в процессе митотического деления В этой же зоне в час ж клеток наблюдается усиление базофилии ядер и цитоплазмы Через 14 суток после отравления (( I , и введения гепатопротекгора отмечаются мелкие вакуоли в цитоплазме цеитротобуиярных гепато'ш'о« Наблюдаются явления стаза крови в центральных венах, расшир( нне кровешчгных капилляров Включения гликогена выявляются п цитоплазме всех г-плГШ 1НТГ.Г- ПЩ1.П'

Таким образом, при остром отравлении СС1.4 наблюдаются изменении 1епатоцпов по типу искром и вакуолярной дистрофии с последующи« разрушением части печеночных клеток Эж процесс.' захватывают це!ггр дольки В переходной и нерилобулярной зонах явления дистрофии выражены о меньшей С1епенн Регенераторные процессы отмечаются на 7-10 день эксперимента Наблюдаемые митозы гепатоцитов носят в большинстве случаев атипический характер Введение гемагопротектора в течение всею времени наблюдения приводит к уменьшению активности некротических и дистрофических процессов Активно протекают процессы регенерации гепатоцитов и эндотелиоцитов отсутствуют атипические митозы клеток В меньшей степени снижается уровень гликогена в цитоплазме гепатоцитов Можно допустить, что входящие в состав «эссенциале форте-Н» фосфотипиды восполняют потерю эндогенных, что значительно ослабляет развитие патологических реакций

Реакция мембранных органоидов при отравлении ССЬ4 с последующим введением <осеенииале ~Н» На электроинограммах печени здоровых животных гегатоииты долек имеют разные ратмеры и содержат ядра шарообразной или округлой формы с четким контуром Хроматин внутри кариоплазмы располагается равномерно Гранулярная Э11Г представлена в виде узких трубочек «ача^ьцев а также цистерн и вакуолей, покрытых множеством округлых рибосом А гранулярная ЭПС представлена скоплением вакуолей и цистерн и находится вблизи плазмолечмы Митохондрии локализуются в цитоплазме в виде скоплений, имеют округлую и овальную форму с четко выраженными кристачи и двухслойной мембраной Лизосомы представляют собой округлые, электронно-плотные тельца е гомог енным содержимым

Электронно-микроскопическое исследование ткани печени при острой интоксикации четыреххлористым углеродом с последующим введением «эссенциале-Н» выявило следующее

На 1 сутки после отравления изменены канальцы эндоплазма т ическогс ретмк>.лума На электроинограммах видны расширенные канальцы и частичная дегрануляцня шероховатой эндоплазматической сети, небольшое количество мембран гладкого ЭП ретикул>ми, это связано г вакуолизацией и дегрануляцией эргастоплазмы В патологический процесс вовлечены и митохондрии Наблюдается их набухание, некоторые из них имеют просветвленный матрикс, кристы без значительных изменений, увеличено количество лизосом Перисинусоидалы'ое пространства расширено

На 3 сутки в цитоплазме преобладает содержание липилных капель Канальцы атранулярчой ЭС значительно расширены, увеличено число свободно лежащих рибосом и почисом, участки гранулярной ЭПС встречаются фрагментарно Расширение каналов достигает степени вакуолизации Встречается большое количество лизосом Набухание митохондрий выражено сильнее Часть из них имеет просветленный

матрице кристы дезорганизованы. Ядра гепатоцчтор «сморщены», наблюдается процесс капжыичноза и кариолизиса.

На 7 сузки эксперимента большая часть гепатоцитов изменена Перин)клеарнос пространство расширено Просвет канальцев ЭПС расширен Когсичествь рибосом уменьшается Деструктивные изменения наблюдаются в митохондриях разрыв крист и разрушение мембран, в результате чего их число уменьшается, они приобретают различные формы Цитоплазма гепатоцитов гетерогенна, р ней определяемся бояьшое количество вакуолей, пузырьков различной формы и размеров, заполненных веществом низкой электронной плотности

На 14 сутки эксперимента количество лизосом уменьшается, жировой инфильтрат постепенно исчезает Происходит гомогенизация цитоплазмы Оть яанаиьпев ЭПС попхпнит к ипрмн кп^нс-от. уменьшение просвета между мембранами ЭП ретикулума Кариолемма восстанавливается, ядра приобретают свои обычные размеры и формы

В ходе эксперимента введение «эссенциале-Н» способствует более выраженным процессам восстановления мембранных структур органоидов я частности ЭПС и митохондрий Изменения в гепатоцитах менее выражены на 1 и 3 сутки. На 14 сутки происходит восстановление гепатоцитов, соответствующих норме. Следовательно, изменение у м-тр а структуры гепатоцитов крыс в разные сроки эксперимента вариабельны, последовательность и динамика их развития свидетельствует о серьезных изменениях ткани печени наступающих в ответ на токсический агент ССЦ с последующим введением «эссенциале-Н»

Анализ морфометрических показателей тканей печени крыс контрольной и экспериментальной групп.

Динамика морфометрических показателей площади поражения печеночной долыси ври отравлении СП/.

Тетрахлорметан и его метаболиты при остром отравлении вызывают некроз и дистрофию гапатоцитов церез 1 сутки после введения ССЦ область некроза в дольках печени животных первой группы достигает 18% Аналогичные изменения в печени животных второй группы составляет 11% О этот срок доля дистрофически измененных клеток у животных первой группы составляет 34% , а во второй |руппе - 26 % Новых некрозов спустя 3 суток эксперимента не выявлено Однако, в первой группе площадь некротического поражения составляет 20%, что можно объяснить распадом части гепатоцитов. находящихся в условиях глубокой дистрофии В печени животных второй группы площадь поражения не увеличивалась на 3 сутки эксперимента У животных первой группы резко возрастает площадь, занимаемая дистрофически измененными гепатоцигами. Во второй группе нарастание доли дистрофически измененных клеток не существенно Спустя 7-10 суток отмечается постепенное снижение площади поражения печеночной паренхимы Этот процесс более интенсивно протекает во второй группе животных, где к 14 суткам 0^% паренхимы не несет признаков патологии и только 5% площади занимают гепатопиты с разной сгспенью дистрофии Напротив, у животных первой группы площадь постнеьротических изменений составляет 5% в центре дольки.

Таким образом, при остром отравлении ССЬД пик некротических и дистрофических изменении гепатоцитов у животных первой группы наблюдается через 3 суток опыта В это время только 24% гепатоцитов дольки не несут патологических изменений Во второй группе опыта в пезень преобладают дистрофические процессы, а некроз в центре дольки охватывает только 1площади

Динамика показателей диаметров ядер гепатоцитов дочыш печени в процессе экспернцента Изменение ииаыетров ядер наблюдается при патологических процессах (лихчез, хариорексиг 01 ек), или в условиях репаративной регенерации тканей В норме диаметр ядер гепаюцигов колеблется в пределах 5,10-7 30 мкм Центролобулярные гепатоциты содержат ядра диаметром 5,95:10,4. а перичобуляриые 5 46+0,14 «<км Через 1 сутки у животных первой группы размер ядер иентроло^улярных ктэгоииг™ не меняется В перилобулярных гепзтоцитах, где протекают в основном процессы регенерации, диаметр ячер гепатоцитов увеличен и составляет 7,25+0,1? мкм Аналогичная тенденция прослеживается на прп'яяышп всего срока наблюдения и только на 14 сутки диаметр ядер перилобу^яргых гепагоцигов приблиаи.епч к контролю и составляет 5 9й±0,14мкм Увеличение диаметра ядер ненгро.тобу.ирн> х ,е,ышшпов I кчч. наибольших игмеиений паренхимы наблюдается из протяжении всего опыта Учитывая хдракчр повреждения центра дольки при отравлении ССЦ, можно сделать вывело наличии огека яцср гепаюцигон в тгйзоне Прослеживается также тенденция увеличения диаметра ядер центроюб^гярпмх гепатоцитов у жнвотны« 2 группы Спустя 14 суток, диаметр ядер гепатоцитов этой зоны составляет 7,5^0,16 мкм Не приближаются к норме эти показатели и к концу наблюдения у перилобулярнт гепатоцитов Это объясняется выраженными репаративными процессами гепатоцитов этой тоны Диаметры центро-и перилобулярных гепатоцитов контрольной и экспериментальной групп животных У здоровых животных (контроль) диаметр центролобулярных гепатоцитов равняется 1з,84П12*! мкм. при размахе в пределах 11,0-17,6 мкм У животных 1 группы отмечается увеличение диаметра цечтролобудяриых гепатоцитов спустя 1-10 суток после отравления, что может быть слеитвнсм огека и интенсивной вакуолизации цитоплазмы. Увеличение диаметров гепатоцитов по периферии дольки, очевидно, связано с репаративными процессами клеток печени Такая же тенденция отмечается 5 животных второй группы Центролобулярные гепатоциты увеличиваются в размерах, что также объясняется дистрофическими процессами в этих клетках Диаметр перилобулярных гепатоцитов увеличивается умеренно, но отличается от контроля Это также является признаком текущих регенераторных процессов Ядерно- цитоплазматические отношения (ЯНО) гепатоцитов контрольной и экспериментальной групп животных У контрольных животных ядерио-цитоплазмеиные отгюшения составляют у г;еитролобучярны> гепатоцитов ~0,06±0.006, а перилобулярных - 0,05±0,03 Минимальное значение соответствует 0.02*, а максимальное - 0,173 Снижение этих показателей у животных первой группы спустя 1-4 суток связано с увеличением объема цитоплазмы за счет внутриклеточного отека. У животных второй группы а >тн сроки ядерно-цитоплазменньге отношения соответствуют контролю

Повышение показателя ядерно-цитошгазматических отношений у перилобулярных гепатоцитов в первой и во второй группах через 7-14 суток опыта свидетельствует о компенсаторно регенераторных процессах в клетках этой зоны

Морфомстрическич показатели состояния капиллярной сети печеночной дольки крыс в контроле и эксперименте У здоровых животных диаметр капилляров расположенных в центре дольки составляет 8,0+0.38 мкм. а по периферии - 7,17+0,31 мкм При ос гром отравлении ССЦ отмечается нарушение регионального кровотока в дольке печени Наблюдается расширение междольковых и поддолмсовых вен. замедление кровотока в капиллярах и центральных венах У животных 1-ой группы резко расширенные перилобулярные

капилпяры отмечаются на !-7 сутки эксперимента На 3-й сутки диаметр перилобуляртых капичляров составляет 18,9+0,57 мкм, а цснтролобулярных 9,8Т±0.с8 мкм На 14 сутки диаметр цснтролобулярных капипяров приближается к контрочю, а перипобулярьых отличается от контроля Под влиянием тснатопротектора у животных 2-ой группы также происхотит увеличение диаметра капилляров печеночной лольхи, но не до таких показателей как у животных !-ой группы Г1<> окончанию эксперимента на 14 сутки, пока¡ателп диаметра капилляров у животных 2 группы приближаются к контролю

Таким образом, при остром отравлении четырелхлпристым углеродом происходят количественные изменения фосфоинозитидов и их фосфори чгрованных форм коррелируют с мор<<к1"огическими тгзмененнямн в печенн >ги изменения выявляются во все сроки эксперимента Использование при отравлении четырсххлористым углеротом «эссенииане-Н» в ран"ме срокч с'.остбстзссалг, ¡,; ¡¡;лч;. изменением содержания фосфоинозитидов в печени и клетках крови, однако в поздние сроки п«ле введения лекарственного препапата количество фосфоимоштаяов соответствовало их уровню до введения препарата

ВЫВОДЫ.

] В патогенезе острого отрарления чстирегхлористым углеродом существенную роль играют фосфоииозигиды, а их содержание отражает уровень морфологических изменений в печени Установлен характер измечений содержания фосфоинозитидов в крови и ее компонентах у крыс при отравлении четырсххлористым углеродом, проявляющийся уменьшением количества ФИ, ФИФ, ФИФ' по сравнению с интаюними животными, при одновременном возрастании ФИДФ, ФИДФ'.

2 Содержание фосфорилированных форм ФИ в клетках крови в первые сутки отравления четырсххлористым углеродом в среднем выше их значений, чем на более поздних срокач эксперимента(7-14 сутки)

3 Содержание основного фосфатидилинозитн (ФИ) в ткани печени в 1 и 3 сутки после затравки ССЦ в среднем ниже их уровня у здоровых животных На 7,10,14 сутки количество ФИ было достоверно выше их значений на 1 и 3 сутки.

4 «Эссенцнальные» фосфолипиды («эссенциалс-Н>>) способны изменять содержание фосфоинотитадов в крови и ткани печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом, одним и> возможных механизмов их действия является способность встраиваться в мембранные структуры клеток и вследствие этого влиять на процессы фосфориляции ФИ

5. СС1* вызывает изменения ткани печени, наибольшей чувствительностью к повреждающему действию токсического агента обладают гепатоци^ы Некротические и лис трофические процессы в них наиболее выражены на 1-3 сутки эксперимента после отравнсиия, это отражается в изменении ультраструктуры и морфолопти клеток печени, в резком снижении содержания гликогена, увеличении синтеза нейтрального жира и развитии жировой инфильтрации.

6 Под влиянием ССЦ угнетается пролиферация гепатоиитов и последующая их цитодифференцировка, образуются многочисленные атипические митозы, замедляется формирование печеночных балок

7 Введение гепатопротектора - «эссенциале форте -Н» уменьшает долю некротически и дистрофически пораженных тспатоцитов, стимулируем нормальное митотическое детеьис печеночных клеток, угнетая развитие междольковой соединительной ткзни

СПИСОК РАБОТ, опубликованных но теме диссертации:

1 Турнгина С А , Слюсарь Н Н, Матяш Б Л Реакция тканей печени крыс при остром отравлении четыреххлористым углеродом с одновременным введением гепатопротектора в эксперименте / Сборник научных трудов - Красноярск - 2004, с 252-253

3 Турыгина С А , Слюсарь Н Н , Кочкуров О В Динамика изменений фосфоинозитилов клеток крови и ткани печени при отравлении четыреххлористым углеродом / Сборник научно-пракгическнх работ ТГМА и ГУЗ ОКБ «Итоги и перспективы лечебно-профилактической, научно-исследовательской и педагогической деятельности» - Тверь -2004,-с 71-73

4 Турыгина С А Изменение содержания фосфоинозитилов в т\а:;н печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом // Конференция молодых ученых «Аспирантские чтсния-2004» -Самара.-2004,-с 456-458

5 Турыгина С А, Слюсарь Н Н . Кочкуров О В Влияние СС'м на содержание фосфоинозитилов в крови и ткани печени у экспериментальных животных / Сборн научных трудов «Компенсаторно-приспособительные процессы, фундаментальные, экологические и клинические аспекты» -Новосибирск.- 2004,- с 78

6 Турыгина С А , Слюсарь И Н, Соловьев В А Динамика изменеиий тканей печени крыс три остром отравлении тетрахлоридуглеродом / V Общероссийский съезд анатомов, гистологов и эмбриологов Морфологические ведомости, №1-2,- Казань -2004,- с 106

7. Турыгина С А, Соловьев В А, Слюсарь Н Н, Матяш Р Л Изменение содержания фосфоинозитилов и морфологических параметров при остром отравлении четыреххчорисгым углеродом у экспериментальных животных // Верхневолжск мед журнал -Тверь - 7004,- №5-0, -с.44-47

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

НЖК- ненасыщенные жирные кислоты

ФИ- фосфатидилинозчты

ФИН- фосфоинозитиды

ФИДФ - фосфатилилинозит -4,5-дифосфат

ФИДФ1- фосфатидил и ноз ит-3,4-дифосфат

ФИТФ- фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфат

ФИФ- фосфатидилинозит-4-фосфат I

ФИФ1- фосфатидилинозит-З-фосфат

ШИК-реакци»- выявление гликогена в гепагоцигах

ЭПР- эидошшматический ретикулум

ЭПС- эндоплазматическая сеть

f

Ц221 с 5 9

РНБ Русский фонд

2005-4 20889

Отпечатана 3 11.2004г ЗАО "Центро»", г. Тверь, б-р Радищева, 44 Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Турыгина, Светлана Анатольевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Роль фосфоинозитидов в регуляции клеточных процессов

1.2. Современные представления о механизме действия четыреххлористого углерода -------------------------—

1.3. Гистологические изменения в клетках печени под действием четыреххлористого углерода

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Уход и содержание подопытных животных.—

2.2. Материалы исследования .-.-.

2.3. Определение фосфоинозитидов в цельной крови и ткани печени —

2.4. Выделение клеток крови--------------------------------. ft 2.5. Морфологические методы исследования

2.6. Морфометрические методы исследования.

2.7. Статистическая обработка результатов эксперимента

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Морфология дольки печени крыс в норме

3.2. Изменения ткани печени крыс при остром отравлении четыреххлористым углеродом

3.3.Морфологические особенности строения печени при остром отравлении CCL4 с введением «эссенциале форте-Н».

3.4. Изменения субмикроскопического строения мембранных органоидов при отравлении CCL4 с последующим введением «эссенциале-Н»

3.5.Анализ морфометрических показателей тканей печени крыс контрольной и экспериментальных групп.—

3.5.1.Динамика морфометрических показателей площади поражения печеночной дольки при отравлении CCL4

3.5.2.Изменение диаметров ядер гепатоцитов дольки печени в процессе эксперимента.-.

3.5.3.Изменение размеров центро-и перилобулярных гепатоцитов контрольной и экспериментальной групп животных.

3.5.4.Ядерно-цитоплазмотические отношения (ЯЦО) гепатоцитов контрольной и экспериментальной групп животных.

3.5.5.Морфологические показатели состояния капелярной сети печеночной дольки крыс в контроле и эксперименте

3.6. Содержание фосфоинозитидов в цельной крови, эритроцитах, тромбоцитах, лимфоцитах и ткани печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом.

3.6.1. Исследование содержания фосфоинозитидов в эритроцитах при остром отравлении четыреххлористым углеродом.

3.6.2. Исследование содержания фосфоинозитидов в тромбоцитах при остром отравлении четыреххлористым углеродом

3.6.3. Исследование содержания фосфоинозитидов в лимфоцитах при остром отравлении четыреххлористым углеродом

3.6.4. Исследование содержания фосфоинозитидов в цельной крови при остром отравлении четыреххлористым углеродом.

3.6.5. Исследование содержания фосфоинозитидов в ткани печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом

3.7. Исследование содержания фосфоинозитидов в крови и ее компонентах, в ткани печени крыс, подвергшихся воздействию четыреххлористого углерода и в различные сроки после введения «эссенциале-Н».—.

3.7.1. Исследование содержания фосфоинозитидов в эритроцитах при остром отравлении CCL4 с последующим введением «эссенциале-Н»

3.7.2. Исследование содержания фосфоинозитидов в тромбоцитах у крыс при остром отравлении CCL4 с последующим введением «эссенциале-Н»

3.7.3. Исследование содержания фосфоинозитидов в лимфоцитах, цельной крови и ткани печени у крыс при остром отравлении CCL4 с последующим введением «эссенциале-Н» —

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение содержания фосфоинозитидов в крови и ткани печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом"

Актуальность темы. Широкое использование химических веществ ставит перед исследователями задачи выяснения их действия на организм. В этом плане заслуживает внимания довольно большая группа хлорированных углеводородов, которые наряду с четыреххлористым углеродом могут поражать паренхиматозные органы и, главным образом печень. Результаты исследований показали, что весьма чувствительными к повреждающему действию четыреххлористого углерода являются ферментные комплексы мембран эдоплазматического ретикулума, микросомальные ферменты [2,3,9,17].

Существенную роль в гепатотоксичности четыреххлористого углерода отводят перекисному окислению ненасыщенных жирных кислот в мембранных структурах гепатоцитов [61] и изменениям фосфолипидов структурных компонентов липидного бислоя, что приводит к деформации клеточных мембран, повышению их проницаемости и, следовательно, к утечке внутриклеточных ферментов [7]. В результате нарушается внутриклеточный метаболизм, что усугубляет патологический процесс. Вместе с тем изучение патогенеза поражений печени под действием четыреххлористого углерода требует широкого исследования, в том числе и различного рода морфо-биохимических показателей, позволяющих коррелировать развитие нарушений на разных стадиях патологического процесса. Недостаточно изучены соотношения динамики повреждения различных клеточных структур организма и биохимическими изменениями состояния гепатоцитов. Выяснить эти взаимоотношения при остром отравлении четыреххлористым углеродом сложно, так как нет исследований содержания фосфоинозитидов их фосфорилированных форм, которые, как известно обеспечивают внутрикоммуникативные связи в системе кровь-ткань и выполняют функцию вторичных посредников в передаче сигналов и, соответственно, регуляции функций клеток [63,69,70].

Существенная роль фосфоинозитидов в регуляции клеточных процессов связана с участием этих фосфолипидов в транспортной, энергетической, пластической, регуляторной функциях биологических мембран [47]. Они имеют четкую функциональную и структурную связь с рецепторами, что позволяет рассматривать их одними из основных структурных составляющих в трансмембранной передаче сигналов [109]. Однако отсутствуют сведения о содержании фосфоинозитидов в основных биологических объектах (клетках крови, печени) при остром отравлении четыреххлористым углеродом. Указанные недостаточно изученные вопросы определили цель и задачи данного исследования.

Целью исследования явилось изучение содержания фосфоинозитидов в клеточных элементах крови, ткани печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом и при введении «эссенциале-форте».

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать изменения фосфоинозитидов в клетках крови, цельной крови и печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом.

2. Выявить взаимосвязь количества фосфоинозитидов и изменения морфологических параметров печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом.

3. Исследовать влияние «эссенциальных» фосфолипидов на характер и динамику изменений фосфоинозитидов печени и клеток крови и морфологические параметры печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом.

Научная новизна. В результате проведенных исследований выявлены изменения содержания фосфатидилинозитов и их фосфорилированных форм в клетках крови и печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом. Показана корреляция биохимических и морфологических изменений печени в различные сроки острого отравления организма животных. Установлено, что острое отравление четыреххлористым углеродом сопровождается однонаправленным характером изменения уровня содержания фосфоинозитидов в крови и клетках крови, которые связаны с изменением количества фосфорилированных форм фосфатид ил инозитов в ткани печени. В результате изучения влияния «эссенциальных» фосфолипидов на клетки крови и ткань печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом установлены колебания фосфоинозитидов в различные временные интервалы.

Научно- практическая значимость. Результаты исследования представляют интерес для биологии и медицины, т. к. они дополняют знания по биохимии мембранного строения клеток печени и крови в условиях нормы, острой интоксикации, а также расширяют представления о протекторном воздействии препарата «эссенциале-форте», механизмах внутриклеточных взаимодействий на клетки печени и крови.

Особенности морфобиохимических характеристик исследуемого органа могло бы служить одним из способов лечения цирроза печени применительно для человеческого организма, а уровень состояния фосфоинозитидного состава являлся бы показателем здоровой либо патологически измененной печени.

Положения, выносимые на защиту:

1. Острое отравление четыреххлористым углеродом изменяет содержание фосфоинозитидов в клетках крови, ткани печени, которое коррелирует с характером морфологических изменений.

2. Введение «эссенциальных» фосфолипидов при остром отравлении четыреххлористым углеродом не способствует полному восстановлению количества фосфатидилинозитов и их фосфорилированных форм в клетках крови и ткани печени

3. Ежедневное введение гепатопротектора - «эссенциале форте-Н» уменьшает долю некротически и дистрофически пораженных гепатоцитов, стимулирует нормальное митотическое деление печеночных клеток, угнетая развитие междольковой соединительной ткани.

Апробация работы. Основные положения работы и результаты исследования доложены на конференции молодых ученых «Аспирантские чтения-2004», г.Самара, 2004г.; на II Всероссийской научно-практической конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты», г.Новосибирск, 2004г.; на V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов», г.Казань, 2004г.; межкафедральном заседании сотрудников ТГМА, 2004г.

Внедрение. Результаты работы и основные ее положения используются на кафедрах клинической биохимии и клинической лабораторной диагностики, гистологии Тверской государственной медицинской академии, при чтении лекций и проведении практических занятий.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 121 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, который включает 50 отечественных и 64 зарубежных источников. Работа иллюстрирована таблицами (2), рисунками (50), гистограммами (2).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Турыгина, Светлана Анатольевна

выводы.

1. В патогенезе острого отравления четыреххлористым углеродом существенную роль играют фосфоинозитиды, а их содержание отражает уровень морфологических изменений в печени. Установлен характер изменений содержания фосфоинозитидов в крови и ее компонентах у крыс при отравлении четыреххлористым углеродом, проявляющийся уменьшением количества ФИ, ФИФ, ФИФ1 по сравнению с интактными животными, при одновременном возрастании ФИДФ, ФИДФ1.

2. Содержание фосфорилированных форм ФИ в клетках крови в первые сутки отравления четыреххлористым углеродом в среднем выше их значений чем на более поздних сроках эксперимента (7-14 сутки).

3. Содержание основного фосфатидилинозита (ФИ) в ткани печени в 1 и 3 сутки после затравки CCL4 в среднем ниже их уровня у здоровых животных. На 7,10,14 сутки количество ФИ было достоверно выше их значений на 1 и 3 сутки .

4. «Эссенциальные» фосфолипиды («эссенциале-Н») способны изменять содержание фосфоинозитидов в крови и ткани печени при остром отравлении четыреххлористым углеродом, одним из возможных механизмов их действия является способность встраиваться в мембранные структуры клеток и вследствие этого влиять на процессы фосфориляции ФИ.

5. CCL4 вызывает изменения ткани печени, наибольшей чувствительностью к повреждающему действию токсического агента обладают гепатоциты. Некротические и дистрофические процессы в них наиболее выражены на 1- 3 сутки эксперимента после отравления, это отражается в изменении ультраструктуры и морфологии клеток печени, в резком снижении содержания гликогена, увеличении синтеза нейтрального жира и развитии жировой инфильтрации.

Под влиянием CCL4 угнетается пролиферация гепатоцитов и последующая их цитодифференцировка, образуются многочисленные атипические митозы, замедляется формирование печеночных балок. Введение гепатопротектора — «эссенциале форте-Н» уменьшает долю некротически и дистрофически пораженных гепатоцитов, стимулирует нормальное митотическое деление печеночных клеток, угнетая развитие междольковой соединительной ткани.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Турыгина, Светлана Анатольевна, Тверь

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство.-М: Медицина, 1990.-383 с.

2. Арчаков А.И., Панченко Л.Ф. и др. Действие CCL4 на ферментные системы эндоплазматического ретикулума печени // Биохимия.- М.:1973.- Т.34- вып.З-с. 604-609.

3. Арчаков А.И. Молекулярные механизмы взаимодействия CCL4 с мембранами ЭПС печени // Успехи гепатологии.- Рига. вып.4- 1973.- с.39-58.

4. Ашрафова Р., Туляганов П.Д., НабиевА. и др.// Влияние тахиллина на экспериментальную дистрофию печени, вызванную CCL4 // Мед. журнал Узбекистана- 1983.- №8- с. 44-49.

5. Беляева Н.Н. и др. Полиплоидизация гепатоцитов при разных режимах воздействия CCL4 на печень крысы // Бюл. экспер. биологии и медицины. -1980.-Т.89-№1-с.322-325.

6. Бизин Ю.П. Сравнительное изучение влияния на организм животных непрерывного и прерывистого воздействия CCL4 / 1977.-№3- с.27-29.

7. Биологические мембраны. Методы / под. Ред. Дж. Б. Финдлея, У.Г. Эванза -М.: Мир,- 1990.- 424 с.

8. Бонашевская Т.И., Беляеева Н.Н., Булочникова Е.К. Влияние различных режимов прерывистого действия CCL4 на развитие гепатотоксического эффекта // Гигиена и санитария. — 1979.- №1 l-c.68-70.

9. Великовская Ю.А. О нарушении ферментного обмена в клетках печени и почек при острой интоксикации CCL4 // Институт гигиены труда.- М.- 1969.-с. 51-54.

10. Верин В.К. Гистогенез печени человека // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. -1967.- Т.53- вып. 8- с. 90-95.

11. Верин В.К. Изменения печени крыс и эмбрионов после введения CCL4 / В кн.: Гистогенез и регенерация тканей.- Калинин.- 1970.- с. 122-128 с иллюстр.

12. Верин В.К. Реактивные изменения тканей печени после отравления CCL4. Автореф. дис. .к.м.н., JI.- 1965.- 15с.

13. Воронова JI.A. Влияние CCL4 на обмен РНК в печени крыс // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1976.-Т.81- №5.-с.543-545.

14. Гохберг C.JI. Влияние некоторых экспериментальных воздействий на субмикроскопическую организацию печени крыс при отравлении CCL4 // Бюл. экспер. биолог, и мед. 1978.- Т. 86- № 10- с. 498-501.

15. Губекий Ю.И. Ферментные системы эндоплазматического ретикулума и митохондрий печени при остром отравлении CCL4. Автореф. дис. к.м.н -Киев.-1972.- 28с.

16. Гулак П.В. Физиологические аспекты метаболизма фосфоинозитидов // Успехи соврем, биологии. -1881. Т. 91- вып.2- с. 162-177.

17. Доманский В.Ю., Каргаполов А.В. , Слюсарь Н.Н. Содержание фосфатидилинозитидов в крови онкологических больных // Вопросы онкологии.-1990.-№7-с.838-841.

18. Добровольская С.Г., Цирельников Н.И., Якобсон Н.С. // Морфогистохимическая характеристика печени беременных крыс в условиях введения CCL4 // Бюл. Эксперим. биологии и медицины.- 1973.-Т.75- №2с. 114-117.

19. Долго-Сабуров В.Б. Метаболизм фосфоинозитидов и нейрогуморальная регуляция // Нейрохимия. — 1986.-Т.5-№3- с.306-314.

20. Калашникова М.М. и др. Электронно-микроскопическая характеристика гепатом, возникших при длительном введении CCL4 // Бюл. эксперим. биол. и медицины Т. 89- №6 - 1980 .

21. Каргаполов А.В. Анализ липидного состава митохондриальных и эндоплазматических мембран с помощью проточной горизонтальной хроматографии // Биохимия.-1981. -Т.46-вып.4-с.691-698.

22. Кашуба Э.А. Влияние гипербарической оксигенации на течение острого и подострого поражения печени CCL4 в эксперименте. Автореф. дис.к.м.н.-Воронеж- 1976.- 23с.

23. Киселев Г.В. Энергетический аспект метаболизма и свойства полифосфоинозитидов // Успехи соврем. биологии.-1987.-Т.103-№2-с.163-172.

24. Ковальская К.С. Особенности гемоциркуляции печени, оттока желчи и лимфы при остром отравлении CCL4 // Фармакология и токсикология.- 1976.-Т.39- №4 с.458-462.

25. Костюк В.А. Роль ковалентного связывания и перекисного окисления липидов в поврежденной печени CCL4 // Биохимия.- 1991. -Т.56- №10-с. 1878-1885.

26. Кучеренко Н.Е., Блюм Я.Б. Роль мембранных фосфоинозитидов в опосредовании гормональных эффектов // Укр. биохим. журнал.-1986.-58-№1-с.86-101.

27. Лимфоциты: выделение, фракционирование и характеристика / Под ред.Дж. Б. Натвига, П. Перлмана, X. Вигзелля.- М: Медицина.- 1980.-280 с.

28. Меркулов Г.А. Курс патологической техники/ Л.:- Медицина- 1969.- 423 с.

29. Метаболические реакции печени при интоксикации CCL4 и их коррекция антиоксидантами растительного происхождения // Гигиена и санитария. -№1-с.30-32.

30. Петрова М.Б. Физико-химические аспекты воздействия гелий-неонового лазера на биологические системы . Автореф. дис. .к.х.н. -Тверь-1993.

31. Рималис Б.Ц. Гепаторенальный синдром при острых отравлениях ССЬ4. Автореф. Московск. НИИ. к.м.н. —М: -1983.

32. Романчиков Ю.М. Факторы роста, вторичные мессенджеры и онкогены// Успехи современной биологии.- 1991.-Т.111 -вып. 1-е. 19-33.

33. Северин Е.С., Кочеткова М.Н. Роль фосфорилирования в регуляции клеточной активности / М.: Наука,- 1986.-255с.

34. Слюсарь Н.Н. Роль фосфоинозитидов и их метаболитов в онкогенезе (экспериментальные и клинические исследования). Автореф. дис.д.м.н. — С.-Петербург.- 1993.

35. Ткачук В.А. Фосфоинозитидный обмен и осцилляция ионов Са27/

36. Биохимия.- 1998.-Т.63 -вып. l-c.47-56.

37. Три случая тяжелого отравления CCL4 с благоприятным исходом // Журнал Здравоохранения Туркменистана. 1979. -№12- с.32-34.

38. Утешев Б.С. Инозитолфосфат и кальций как вторичные мессенджеры // Эксперимент, и клинич. фармакология. -1992.-Т.55-№4- с. 69-74.

39. Швец В.И., Степанов А.Е., Крылова В.Н., Гулак П.В. Мио-инозит и фосфоинозитиды -М.: Наука, 1987.- 248с.

40. Юдина Т.В., Новиков Ю.В. Влияние CCL4 на проницаемость гисто-гематических барьеров при хроническом энтеральном поступлении в организм животных// Вестник Акад. наук СССР.- 1973 .-№10-с.54-59.

41. Ястребов Г.Н. Метод выделения тромбоцитов для изучения их липидного состава // Лаб. дело.- 1985.- №2- с.93-95.

42. Якобсон Г.С. Сравнительное морфометрическое изучение ультраструктуры гепатоцитов мышей при остром отравлении CCL4 // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -1974.- Т.77- №3 -с. 114-118.

43. Abraham P., Wilfred G. A massive increase in serum beta-glucuronidase after a single dose of carbon tetrachloride to the rat // Clin. Chim. Acta.-2002.-V. 322 N.1-2.-P.183-184.

44. Ademuyiwa O., Onitilo O., Dosumu O., Ayannuga O., Bakare A., Akinlatun W., Ogunyemi E.O. Zinc in CC14 toxicity // Biomed Environ Sci.- 2002.-V.15-N.3-P.187-195.

45. Ajith T.A, Janardhanan K.K. Antioxidant and antihepatotoxic activities of Phellinus rimosus (Berk) Pilat // J. Ethnopharmacol.- 2002.-V.81-N.3-P.387-391.

46. Aniya Y., Miyagi C., Nakandakari A., Kamiya S., Imaizumi N., Ichiba T. Free radical scavenging action of the medicinal herb Limonium wrightii from the Okinawa islands // Phytomedicine. -2002.-V.9-N.3-P.239-244.

47. Anselmi K., Subbotin V.M., Nemoto E., Gandhi C.R: Accelerated reversal of carbon tetrachloride-induced cirrhosis in rats by the endothelin receptor antagonist TAK-044 //J. Gastroenterol Hepatol.-2002.-V.17-N.5-P.589-597.115

48. Аоуаша С., Ohtani A., Ishidate K. Expression and characterization of the active molecular forms of choline/ethanolamine kinase-alpha and -beta in mouse tissues, including carbon tetrachloride-induced liver // Biochem J. -2002.-V.363-Pt. 3-P.777-784.

49. Arachidonic acid metabolism and tumor promotion / Ed. Dy. Susan M. Fisher T. J.;- Boston :- 1985.- 213 p.

50. Armbrust T, Batusic D, Xia L, Ramadori G. Early gene expression of hepatocyte growth factor in mononuclear phagocytes of rat liver after administration of carbon tetrachloride // Liver. -2002. -V.22-N.6-P.486-494.

51. Auqer K. P., Serunian L. A., Soltoff S.P. et al. PDGF dependent tyrosine phosphorylation Stimulates production of novel polyphosphoinosetiodes in intact cells // Cell. - 1989/ - V. 57 - N. 1 - P. 167 - 175.

52. Ayad M.M., El-Hefnawy G.B., Bahlol G.W. Charge transfer complexes of methylnaphthalene derivatives with TCNE in CCI4 // Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc. -2002. -V.58-N.1-P.161-166.

53. Butler T.C.// J. Pharmacol. Exp. Therap.-1961.-V.134-N.3-P.311.

54. Berridge M. J . A novel cellular signaling system based on the integration of phospholipid and calcium metabolism / Calcium and cell function / Ed W.J. Cheunad. 1983.- N.3 - P.l- 35.

55. Berridge M. J., Irvine R. F. Inositol phosphates and cell signaling // Nature. -1989. V. 341- N.6239 - P. 197- 205

56. Berridge M. J. Intracellular signaling through inositol triphosphate and diacylglycerol // Biol. Chem. Hoppe Seybr. 1986.- V. 367 - N.6- P. 447-456.

57. Bhadauria M., Jadon A., Sharma A., Shukla S. Effect of propriety herbal formulation against chronic carbon tetrachloride induced hepatotoxicity // Indian J. Exp. Biol. -2002.-V.40-N.11-P. 1254-1259.

58. Bishayi В., Roychowdhury S., Ghosh S., Sengupta M. Hepatoprotective and immunomodulatory properties of Tinospora cordifolia in CCL4 intoxicated mature albino rats Hi. Toxicol Sci.- 2002. -V.27-N.3-P.139-146.

59. Boopathy R. Anaerobic biotransformation of carbon tetrachloride under various electron acceptor conditions // Bioresour Technol. -2002. -V.84-N.1-P.69-73.

60. Borges Sda S., Korn Ml, Lima J.L. Chromium (III) determination with 1,5-diphenylcarbazide based on the oxidative effect of chlorine radicals generated from CCL4 sonolysis in aqueous solution // Anal Sci.- 2002. -V.18-N.12-P.1361-1366.

61. Carter A.N., Huanq R., Sorisky A. et al. Phosphatidylinositol 3,4,5 -trisphosphate is formed frombin-stimulated platelets // Biochem J. -1994.-V.301 -Pt.2 - P. 415-420.

62. Carter A. N., Downes C. P. Phosphatidylinositol -3 kinase . Is Activated by erve Grouwth Factor and epidermal qrouth factor in PC 12 Cell // J. Biol.

63. Chem .- 1992. V. 267. - N. 21 - P. 14563 - 14567.

64. Cassiman D., Libbrecht L., Desmet V., Denef C., Roskams T. Hepatic stellate cell/my о fibroblast subpopulations in fibrotic human and rat livers // J. Hepatol.-2002. -V. 36-N.2-P.200-209.

65. Carvalho R.A., Jones J.G., McGuirk C., Sherry A.D., Malloy C.R. Hepatic gluconeogenesis and Krebs cycle fluxes in a CCI4 model of acute liver failure //

66. NMR Biomed. -2002. V.15-N.1-P.45-51.

67. Chakraborty Т., Verma A.L. Vibrational spectra of CC14: isotopic components and hot bands. Part I // Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc.-2002.-V. 58-N.5-P.1013-1023.

68. Chen Y., Li S., Zhang X., Zhang Z., Xie W. Amelioration of carbon tetrachloride-induced hepatic fibrosis in rats by treatment with salvia miltiorrhiza and taurine // Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 2002. -V.10-N.2-P.148-149.

69. Chen X., Jeyaseelan S., Graham N. Physical and chemical properties study of the activated carbon made from sewage sludge // Waste Manag. -2002.-V.22-N.7-P.755-760.t;

70. Chidambara Murthy K.N., Singh R.P., Jayaprakasha G.K. Antioxidant activities of grape (Vitis vinifera) pomace extracts // J. Agric Food Chem. -2002.--V.50-N.21-P.5909-5914.

71. Choi J.S. Pharmacokinetics of paclitaxel in rabbits with carbon tetrachloride-induced hepatic failure // Arch. Pharm. Res.- 2002. -V.25-N.6-P.973-977.

72. Cocco L., Martelli., Capitannis., Nuclear inositol lipid cucle and differentiation // Advan. Enryme Requl. 1995. - V. 35 - P.23 - 33.

73. Dey A., Parmar D., Dhawan A., Dash D., Seth P.K. Cytochrome P450 2E1 dependent catalytic activity and lipid peroxidation in rat blood lymphocytes // Life Sci.- 2002. -V.71-N.21-P.2509-2519.

74. Dubuisson L., Desmouliere A., Decourt В., Evade L., Bedin C., Boussarie L., Barrier L., Vidaud M., Rosenbaum J. Inhibition of rat liver fibrogenesis through noradrenergic antagonism // Hepatology.- 2002.-V.35-N.2-P.325-331.

75. Endoh D., Okui Т., Ozawa S., Yamato O., Kon Y., Arikawa J., Hayashi M. Protective effect of a lignan-containing flaxseed extract against СОЦ-induced hepatic injury // J Vet Med Sci. 2002. - V.64-N.9-P.761-765.

76. Fadhel Z.A., Amran S. Effects of black tea extract on carbon tetrachloride-induced lipid peroxidation in liver, kidneys, and testes of rats // Phytother Res. -2002. 16 Suppl.- N.l-P.28-32.

77. Fountoulakis M., de Vera M.C., Crameri F., Boess F., Gasser R., Albertini S., Suter L. Modulation of gene and protein expression by carbon tetrachloride in the rat liver // Toxicol Appl Pharmacol. 2002. - V.183-N.1-P.71-80.

78. Gagliano N., Arosio В., Grizzi F., Vergani C., Annoni G. Acute liver ССЦ intoxication causes low HSP70 gene expression and a delayed transition through the cell cycle in aged rats // Exp Gerontol.- 2002. -V.37-N.6-P.791-801.

79. Garcia L., Hernandez I., Sandoval A., Salazar A., Garcia J., Vera J., Grijalva G., Muriel P., Margolin S., Armendariz-Borunda J. Pirfenidone effectively reverses experimental liver fibrosis // J Hepatol. -2002.- V.37-N.6-P.797-805.

80. Glavas S., Moschonas N. First measurements of carbon tetrachloride and tetrachloroethene in the atmosphere of Athens, Greece // Sci Total Environ.-2002. V.290-N.1-3-P.231-237.

81. Gole M.K., Dasgupta S. Role of plant metabolites in toxic liver injury // Asia Рас J Clin. Nutr. -2002.- V.ll-N.l-P.48-50.

82. Greabu M., Olinescu R. The formation of oxidative stress condition in the experimental chemically induced hepatotoxicity // Rocz Akad Med Bialymst. -2002.-V.47- P.86-94.

83. Grizzi F., Franceschini В., Barbieri В., Gagliano N., Arosio В., Chiriva-Internati M., Annoni G., Dioguardi N. Mast cell density: a quantitative index of acute liver inflammation // Anal Quant Cytol Histol. -2002. -V.24-N.2-P.63-69.

84. Hemmings S.J., Pulga V.B., Tran S.T., Uwiera R.R. Differential inhibitory effects of carbon tetrachloride on the hepatic plasma membrane, mitochondrial andendoplasmic reticular calcium transport systems: implications to hepatotoxicity //

85. Cell Biochem Funct.- 2002.-V.20-N.1-P.47-59.

86. Holan R., Lapetina E .G . Thrombin stimulates the production on a novel polyphosphoinositide in human platelets // J. Biol .Chem .- 1990.- V .265 N.5 -P. 2441 -2445.

87. Hung D.Y., Chang P., Cheung K., Winterford C., Roberts M.S. Quantitative evaluation of altered hepatic spaces and membrane transport in fibrotic rat liver // Hepatology. -2002. -V.36-N.5-P. 1180-1189.

88. X< 98. Irvine R.F. Inositol phosphate in Siqnal transduction // Biol. Chem. Hoope

89. Seuler — 1986. V. 367 - N.ll - P. 1106 - 1116.

90. Janakat S., Al-Merie H. Evaluation of hepatoprotective effect of Pistacia lentiscus, Phillyrea latifolia and Nicotiana glauca // J Ethnopharmacol.- 2002. -V.83-N.1-2-P.135-138.

91. Janakat S., Al-Merie H. Optimization of the dose and route of injection, and к characterisation of the time course of carbon tetrachloride-induced hepatotoxicityin the rat // J. Pharmacol Toxicol Methods. 2002. - V.48-N.1-P.41-4.

92. Janbaz K.H., Saeed S.A., Gilani A.H. Protective effect of rutin on paracetamol- and CCLj-induced hepatotoxicity in rodents // Fitoterapia. — 2002. -V.73-N.7-8-P.557-563.

93. Jeong W.I., Lee C.S., Park S.J., Chung J.Y., Jeong K.S. Kinetics of ^ macrophages, myofibroblasts and mast cells in carbon tetrachloride-induced ratliver cirrhosis // Anticancer Res.- 2002. V.22-N.2A-P.869-877.

94. Kakegawa Т., Ise H., Sugihara N., Nikaido Т., Negishi N., Akaike Т., Tanaka E. Soluble asialoglycoprotein receptors reflect the apoptosis of hepatocytes // Cell Transplant.- 2002.- V.11-N.5-P.407-415.

95. Kanta J., Dooley S., Delvoux В., Breuer S., D'Amico Т., Gressner AM. Tropoelastin expression is up-regulated during activation of hepatic stellate cells and in the livers of CCL4-cirrhotic rats // Liver. -2002. V.22-N.3-P.220-227.

96. Kapeller R., Cantley L. Phosphatidylinositol -3 kinase // Bio Essays. -1994/ -V. 16 - N.8 - P. 565-576 .

97. Michell R.H. Inositol phospholipide and cell surface receptor function // Biochim. et biophys. Acta 1975. - V. 415 - N.l - P. 81 - 147.

98. New direction in cancer treatment / Ed J. Maqrath Shlinder Verlaq. N.Y.; 1989.-P. 631.

99. Qui R., Melmon K. L. , Khan M. M. Cyclic ampis not a direct regulator of calcium flux and hydrolysis of phosphoinositides in human lymphocytes // Immunopharmacology. 1993.- V. 25- N.l - P. 37-49.

100. Scott G. K. , Dodson J. M Montgomery P. A. et al P 185 HER 2 signal transduction in breast cancer cells // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266 - N.2 — P. 14300-14305.

101. Sinqh S. S., Chaunhan A. ,Brackerhoff M. et. al. Activation of proteen kinase с by phosphatidyl inositol - 3,4,5. - triphosphate // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1993. - V.95 - N.l - P.104 - 112.

102. Varticovski L., Druker В., Merrison D. et al. The colony stimulatinq facter -1- receptor associates with and activates phosphatidylinositol -3- Kinase // Nature. -1990.- V. 342 N.6250 - P. 699 - 702.

103. Whitman M., Downes C. P., Keeler M. et al Type I phosphatidylinositol kinase makes a novel inositol phospholipid , phosphatidylinositol 3 phosphate // Nature. - 1988.- V. 332 -V.6165 - P. 644-646.

104. Yamamoto K., Graziani A., Carpenter C. et al A novel patuay for the formation of phosphatidylinositol -3 4 bisphosphates // J. Biol. Chem. - 1990.-V. 265 - N.36- P. 22086- 22089.

105. Yao D., Li S., Kong X., Ye Т., Fan., Zhong L., Wang G., Tian L., Wu W., Li M. Dynamic expression of tenascin in rat liver during liver fibrogenesis induced by CCL4// Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 2002.- V.10-N.1-P.40-42.