Биохимические и цитохимические критерии в оценке эффективности использования липосомальных лекарственных препаратов при острой экспериментальной печеночной недостаточности, вызванной воздействием четыреххлористого углерода

Романова, Людмила Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биохимические и цитохимические критерии в оценке эффективности использования липосомальных лекарственных препаратов при острой экспериментальной печеночной недостаточности, вызванной воздействием четыреххлористого углерода
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические и цитохимические критерии в оценке эффективности использования липосомальных лекарственных препаратов при острой экспериментальной печеночной недостаточности, вызванной воздействием четыреххлористого углерода"

На правах рукописи

РОМАНОВА Людмила Викторовна

Биохимические и цитохимические критерии в оценке эффективности использования липосомальных лекарственных препаратов при острой экспериментальной печеночной недостаточности, вызванной воздействием четыреххлористого углерода.

03.00.04- биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону 2009

003466189

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ставропольская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и в Ставропольском научно-исследовательском противочумном институте Роспотребнадзора

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ В.И. Ефременко

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Владимцева И.В.

доктор биологических наук, профессор Бондаренко Т.И.

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет Росздрава» (г.Краснодар)

Защита состоится «.//>> Я/ПрелЛ 2009 г. в/Зчас. на заседании диссертационного совета Д. 212.268.07. по биологическим наукам в Южном федеральном университете (344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Большая Садовая, 105, ауд. )

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Южного федерального университета (344006, г. Ростов - на - Дону, ул. Пушкинская, 148).

Автореферат разослан «,М>» м&рта 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук Улра- Т.С. Колмакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Нарушение обменных процессов в печени наблюдается при различных заболеваниях. Вследствие патологических процессов может развиваться острая печеночная недостаточность (ОПН) в результате массивного некроза печеночных клеток, вызванного различными причинами и проявляющаяся внезапным тяжелым нарушением функции печени. Одной из этих причин является отравление гепатотропными ядами, в частности четыреххлористым углеродом (СС14).

В связи с особенностями молекулярных механизмов действия СС14 на субклеточные мембраны гепатоцитов (микросомальная активация, перекисное окисление липидов как механизм нарушения каталитических свойств мембраносвязанных ферментов), изучение биологического действия гепатотропного яда представляет интерес как модель молекулярной патологии мембранных структур (Губский, 1989). Вследствие этого, детальное изучение молекулярных основ химического поражения гепатоцитов приобрело общебиологическое и медицинское значение. Для коррекции обменных процессов при этом используют различные лекарственные препараты, способствующие стабилизации клеточных мембран, снижению процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и нормализации всех видов обменных процессов. В ряде случаях эффективность использования данных лекарственных средств оказывается низкой из-за их неспособности эффективно преодолевать анатомические и клеточные барьеры организма, токсичности некоторых препаратов, кратковременного пребывания в организме вследствии быстрой утилизации и выведения.

В последнее время появляются сообщения о широком применении липосом в качестве транспортеров лекарственных препаратов (Оцгейга й а!., 1998; Севастьянов, 1999; Абрамов и др., 2001; Хворостов, 2001). Используя липосомальные формы лекарственных препаратов, иммобилизованные во внутренний объем или мембрану липидных везикул, удается преодолеть недостатки их интактных форм. Широкие возможности применения липосом в терапии различных заболеваний обусловлены совокупностью их биологических свойств: химической инертностью, биосовместимостью, биодеградируемостью, практически отсутствием токсических и антигенных свойств. Липосомы обладают возможностью направлять заключенные в них вещества в определенные органы и ткани организма, что позволяет заметно снижать дозу препарата, сохраняя эффективность биологического действия. Кроме этого, липидные везикулы способны предохранять заключенные в них вещества от действия ряда факторов, обеспечивая пролонгированный эффект фиксированных в них лекарственных препаратов.

Однако в литературе практически отсутствуют данные о влиянии липосомаль-ных лекарственных препаратов, введенных разными путями, на биохимические и цитоэнзимохимические процессы организма при ОПН. В связи с этим комплексное исследование биохимических показателей углеводного, белкового, липидного обменов и ПОЛ, а также ферментативной активности у экспериментальных животных (белых мышей) с ОПН, вызванной введением им СС14, является актуальным.

Цель работы:

Целью настоящей работы явилось конструирование липосомальных лекарственных препаратов и исследование их метаболических эффектов в регуляции го-

меостаза у животных при острой печеночной недостаточности, вызванной отравлением четыреххлористым углеродом.

Задачи исследования:

1. Сконструировать липосомальный лекарственный препарат, последовательно используя методы «обращения фаз» и «замораживания - оттаивания» с включением гидрофобных лекарственных средств в наружную мембрану липидных везикул, а гидрофильных - в их внутренний объем, и оценить его биологическую эффективность.

2. Изучить влияние интактных и липосомальных лекарственных средств на интенсивность перекисного окисления липидов по уровню малонового ди-альдегида, активность каталазы и суммарной пероксидазной активности в сыворотке крови белых мышей при интоксикации четыреххлористым углеродом.

3. Исследовать влияние интактных и липосомальных лекарственных средств на показатели углеводного обмена.

4. Изучить влияние интактных и липосомальных лекарственных средств на белковый обмен по содержанию общего белка, мочевины и уровню тимоловой пробы.

5. Определить состояние липидного и пигментного обменов после введения экспериментальным животным четыреххлористого углерода и лечения ин-тактными и липосомальными лекарственными препаратами по уровню общего холестерина, триацилглицеридов и общего билирубина.

6. Изучить функциональное состояние печени при лечении животных ин-тактными и липосомальными лекарственными средствами после введения четыреххлористого углерода по активности аланинаминотрансферазы, ас-партатаминотрансферазы, гаммаглутамилтрансферазы в сыворотке крови, миелопероксидазы и кислой фосфатазы в нейтрофилах крови.

7. Исследовать гистологические изменения в печени, почках и селезенке у животных после введения им четыреххлористого углерода и лечения этих животных.

8. Сравнить действие интактных и липосомальных лекарственных форм при разных способах их введения по эффективности коррекции биохимических, цитохимических показателей и гистологических изменениях в органах у животных с острой печеночной недостаточностью.

Научная новизна работы.

Впервые создана новая липосомальная форма лекарственного препарата с иммобилизацией водорастворимых лекарственных средств во внутренний объем липидных везикул (аскорбиновой кислоты, АТФ, селенита натрия, эссенциале), а жирорастворимых (а-токоферола) - в мембрану липосом.

Основываясь на анализе различных биохимических, цитохимических и морфологических показателей у экспериментальных животных с острой печеночной недостаточностью, доказаны преимущества использованных липосомальных форм лекарственных препаратов над их интактными формами.

Липосомальные лекарственные средства оказывали более выраженное влияние на восстановление свободнорадикальных процессов, белкового, липидного и пигментного обменов, функционального состояния печени. Эффективность тера-

пии этими препаратами подтверждается тенденцией к нормализации показателей активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы в нейтрофилах крови.

Установлено, что пероральное введение липосомальных лекарственных препаратов животным с экспериментальной острой печеночной недостаточностью обеспечивало у них более быструю коррекцию гомеостаза, по сравнению с их внутрибрюшинном введением.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Изготовленный стабильный, комплексный липосомальный лекарственный препарат, обладающий пролонгированным действием, является более высокоэффективным, по сравнению с интактными лекарственными средствами, при лечении острой печеночной недостаточности у экспериментальных животных, вызванной введением им четыреххлористого углерода.

2. При введении экспериментальным животным четыреххлористого углерода выявлены нарушения органоспецифических обменных процессов и баланса про- и антиоксидантных систем.

3. Липосомальные лекарственные препараты, вводимые экспериментальным животным с острой печеночной недостаточностью, более эффективно нормализуют биохимические и цитоэнзимохимические показатели, функциональную активность печени.

4. Лечение острой печеночной недостаточности у экспериментальных животных комплексным липосомальным лекарственным препаратом, вводимым перорально, более эффективно, по сравнению с липосомальным лекарственным препаратом, введенным внутрибрюшинно.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследования расширяют существующие представления об использовании липосомальных лекарственных препаратов при лечении экспериментальной острой печеночной недостаточности и подтверждают их более высокую эффективность перед интактными лекарственными формами. В работе представлены новые данные о получении липосомальных лекарственных препаратов и оценке их действия при различных путях введения при лечении острой печеночной недостаточности, вызванной введением экспериментальным животным четыреххлористого углерода. Критериями оценки эффективности действия липосомальных лекарственных препаратов служили многочисленные биохимические показатели крови экспериментальных животных, а также ряд цитохимических и морфологических показателей при лечении острой печеночной недостаточности, что открывает новые перспективы их практического применения в медицине.

Разработаны методические рекомендации: «Оценка эффективности лечебного действия липосомальных и интактных лекарственных препаратов у экспериментальных животных, подвергшихся воздействию токсинов различной природы», утвержденные ректором Ставропольской государственной медицинской академии на основании решения Ученого совета академии (протокол №3 от 30.03.2005).

Получен патент на изобретение: «Способ оценки эффективности дезинтокси-кационной терапии при воздействии токсинов различной природы» (№2334989 от 27.09.2008 г.).

Материалы работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий в Ставропольской государственной медицинской академии в курсе

биологической, общей и биоорганической химии, а также при чтении базовой дисциплины «Биологической и медицинской химии» на кафедре ГОУ ВПО Ставропольского государственного университета Федерального агентства по образованию, о чем свидетельствуют акты внедрения.

Апробация диссертационной работы.

Материалы диссертации докладывались на научно-практической конференции сотрудников Ставропольского научно-исследовательского противочумного института совместно с сотрудниками Ставропольской государственной медицинской академии (Ставрополь, 2007).

Основные положения диссертации были представлены на 11-й Итоговой научной конференции студентов и молодых ученых СГМА (2003), Научных конференциях Ставропольского научно-исследовательского противочумного института (Ставрополь, 2004), Научной конференции «Здоровье: социальные и медико-биологи-ческие аспекты исследования» (Ставрополь, 2005), 7-й Международной конференции «Циклы природы и общества» (Ставрополь, 2005), 15-й Итоговой научной конференции студентов и молодых ученых СГМА (2007).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 3 в центральной печати, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК РФ - 1 статья. Личный вклад 50%, 0,17 п. л.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа содержит 20 таблиц и иллюстрирована 13 рисунками. Список использованной литературы включает 150 отечественных и 60 зарубежных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперимент проводили в течение 30 суток на 500 белых беспородных мышах обоего пола массой 18-20 грамм с соблюдением правил, предусмотренных Европейской комиссией по надзору за проведением лабораторных и других опытов с участием экспериментальных животных разных видов. Мыши находились в стандартных условиях с естественной сменой освещения и соблюдением общевиварий-ного рациона. У всех животных был свободный доступ к пище и воде.

Экспериментальных животных поделили на следующие группы:

1 - контрольная (п= 20 мышей) - данной группе животных СС14 не вводили;

2 - группа животных (п= 120 мышей), у которых вызывали острую печеночную недостаточность путем однократного внутрибрюшинного введения 50% масляного раствора ССк (0,25 ЛД50);

3 - группа животных (п= 120 мышей), которым проводили коррекцию обменных процессов, нарушенных воздействием СС14, путем введения интактным препаратом (разовые дозы рассчитывали в соответствии с фармакопейными данными из

расчета на массу тела животного) - аскорбиновая кислота (2,0 мг), АТФ (1,0 мг), а-токоферол (0,5 мкг), селенит натрия (0,00017 мг), эссенциале (2,5 мг), которые инъецировали однократно внутрибрюшинно ежедневно в течение 6 дней, начиная через сутки после введения токсина;

4 - группа животных (п= 120 мышей), лечение которых проводили липосо-мальными лекарственными средствами, вводимыми внутрибрюшинно на 2, 5, 8,11, 14, 17 сутки в тех же дозах, что и интактные;

5 - группа животных (п= 120 мышей), лечение которых проводили липосо-мальными лекарственными средствами, вводимыми перорально на 2, 5, 8,11, 14, 17 сутки в тех же дозах, что и интактные.

Липосомы получали из фосфолипидов, выделенных из головного мозга свиньи методом «выпаривания и обращения фаз», при этом жирорастворимый а-токоферол включался в структуру мембран липосом, а иммобилизацию водорастворимых лекарственных препаратов проводили методом шестикратного «замораживания - оттаивания» липосом в жидком азоте с последующим оттаиванием в водяной бане при температуре 40°С. Количество иммобилизируемых во внутренний объем водорастворимых лекарственных средств оценивали косвенным методом по включению глюкозы. Процент включения составлял 72,2 ± 2,1%.

Животных декапитировали на 3, 10, 20, 30 сутки и в сыворотке крови определяли биохимические показатели углеводного, белкового, липидного обменов, уровня общего билирубина, активность некоторых ферментов, продукты перекис-ного окисления липидов, цитохимические показатели нейтрофилов крови. В указанные сроки для изучения морфологических изменений внутренних органов после декапитации животных у них извлекали печень, почки, селезенку.

Для решения планируемых задач исследования использованы следующие методы:

1. Определение продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и активности ферментов антиоксидантной защиты по:

- содержанию продуктов МДА в сыворотке крови по методу В. Б. Гаврилова, 1987;

- активности каталазы по методу С. И. Крайнева, О. Д. Кушманова и др., 1974;

- суммарной пероксидазной активности (СПА) в плазме крови по методу А. А. По-

кровского, 1977.

2. Оценка состояния белкового обмена:

- определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом с использова-

нием стандартного набора реагентов «Вектор-Бест» (г. Новосибирск);

- определение тимоловой пробы в сыворотке крови по методу Маклагана в моди-

фикации Хуэрго и Поппера (в описании В. С. Камышниковой, 2003) с использованием стандартного набора реагентов «Био-Лахема-Тест» (Чехословакия);

- определение мочевины в сыворотке крови фотоколориметрическим методом с

использованием стандартного набора реагентов «Диахим-Мочевина» (г. Санкт-Петербург).

3. Оценка состояния липидного обмена:

- определение общего холестерина (ХС) в сыворотке крови методом Илька (в опи-

сании В. Н. Ореховича, 1977) с использованием стандартного набора реагентов «Био-Лахема-Тест» (Чехословакия);

- определение триглицеридов (ТАГ) в сыворотке крови спектрофотометрическим

методом с использованием стандартного набора реагентов «Био-Лахема-Тест» (Чехословакия).

4. Оценка состояния пигментного обмена:

- определение общего билирубина в сыворотке крови методом Ендрассика-Клеггорна-Грофа (в описании В. С. Камышникова, 2003) с использованием стандартного набора реагентов «Диахем-Абрес» (г. Санкт-Петербург).

5. Оценка состояния углеводного обмена:

- определение глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом (в описа-

нии М. И. Прохоровой, 1982) с использованием стандартного набора реагентов «Глюкоза-ФДК» (г. Москва).

6. Определение функциональной активности печени:

- определение активности аспартатгрансаминазы (АсАТ); аланинтрансаминазы

(АлАТ); гаммаглутамилтрансаминазы (ГГТ) в сыворотке крови по методу Рай-тмана-Френкеля в модификации Г. К. Громовой (1983) с использованием стандартного набора реагентов «Вектор-Бест» (г. Новосибирск);

- щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови фотоэлектроколориметрическим

методом с использованием стандартного набора реагентов «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).

7. Определение активности ферментов в нейтрофилах крови:

- кислой фосфатазы (КФ) и миелопероксидазы (МПО) по методу L. S. Kaplow

(1955).

8. Обработка материала для гистологического исследования проводилось по общепринятой методике (в описании Г.А. Меркулова, 1961).

Статистическая обработка результатов исследования проводилась согласно общепринятым методам. Результаты исследования обрабатывались на персональном компьютере с применением компьютерной программы Microsoft Excel 97.

Достоверность различий между исследуемыми группами определяли с помощью t-критерия Стьюдента. Статистически достоверными считали отличия, соответствующие величине ошибки р<0,05.

В работе была использована следующая аппаратура и оборудование: спектрофотометр (БИАН-120), фотоэлектроколориметр (ФЭК-ЗМ), испаритель ротационный (ИР-1), ультразвуковой дезинтегратор (УЗДН-2Т), микроскоп биологический исследовательский (МБИ-3), электронный микроскоп (УЕМ-1-OOSX).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изменения биохимических и цитохимических показателей в сыворотке крови белых мышей при острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода

Проведенные исследования показали, что введение в организм экспериментальных животных CCI4 приводило к изменениям показателей перекисного окисления липидов, углеводного, белкового, липидного обменов, уровня общего билирубина, ферментативной активности, изменениям цитохимических показателей нейтрофилов крови и морфологическим изменениям органов и тканей (печени, почек, селезенки и др,).

В патогенезе ОПН наблюдается частичное хроническое голодание, которое сопровождается белково-энергетической недостаточностью, при которой отмечают-

ся изменения в углеводном, липидном, энергетическом обменах веществ и защитных функциях организма.

Введение в организм СС14 приводит к интенсификации процесса ПОЛ. Степень ПОЛ оценивали по содержанию МДА в сыворотке крови. У группы животных, которым вводили СС14, на 3 сутки наблюдалось достоверное повышение содержания МДА в 1,8 раза. На 10 и 20 сутки наблюдалось снижение содержания МДА по сравнению с началом эксперимента, но на 30 сутки этот показатель оставался выше нормы на 41,7%. В начале эксперимента отмечалось повышение активности СПА в сыворотке крови в 4,4 раза. На 10 и 20 сутки активность СПА увеличилась по сравнению с 3 сутками. На 30 сутки этот показатель достоверно снизился, но остался выше нормы в 8 раз. В начале опыта наблюдалось достоверное снижение активности каталазы в 2,7 раза. Активность каталазы на 10-30 сутки стала повышаться, однако, исследуемый показатель оставался ниже нормы на 47,5% (табл. 1).

Увеличение содержания МДА в сыворотке крови на наш взгляд может быть обусловлено тем, что в эритроцитах процессы протекают более специфично. Большинство ученых считают, что причиной интенсификации ПОЛ являются активированные фагоциты, продуцирующие активные формы кислорода (Маянский, 1993). У животных при ОПН наблюдалась низкая активность каталазы, так как она начинает активно разрушать возрастающие концентрации перекиси водорода на воду и молекулярный кислород при данной патологии. СПА включает в себя внеэритро-цитарный гемоглобин и МПО нейтрофилов, которые высвобождаются при повреждении мембран эритроцитов и нейтрофилов крови (Козинец, 2001).

Таким образом, проведенное исследование показало, что отравление экспериментальных животных СО, приводит к интенсификации ПОЛ и смещению антиок-сидантного - прооксидантного равновесия в сторону прооксидантной системы.

В ответ на введение СО4 у экспериментальных животных в начале эксперимента уровень общего белка снижался в 4,9 раза. На протяжении всего эксперимента наблюдалось восстановление этого показателя, однако, и на 30 сутки уровень общего белка оставался достоверно ниже нормы на 54,1%. В начале исследования уровень мочевины достоверно снижался в 7,7 раза. На протяжении всего эксперимента наблюдалось восстановление этого показателя по сравнению с 3 сутками. На 30 сутки уровень мочевины достоверно повышался, но оставался ниже нормы 58,1%. Показатель тимоловой пробы на 3 сутки был выше контроля в 5 раз. На протяжении всего эксперимента наблюдалось постепенное снижение этого показателя. Уровень тимоловой пробы снижался по сравнению с началом эксперимента, но достоверно остался выше нормы в 2,5 раза (табл. 1).

Таким образом, при ОПН происходит прогрессирующее снижение количества общего белка в сосудистом русле, очевидно связанным с изменением процессов ресинтеза протеинов. Наблюдаемое снижение уровня мочевины в крови при тяжелых поражениях печени и повышение показателей тимоловой пробы является подтверждением поражения печени СС14.

При исследовании биохимических показателей липидного обмена в начале эксперимента после введения СС14 снизилось содержание ХС в 2,7 раза. На 10-30 сутки наблюдалось повышение этого показателя по сравнению с 3 сутками. Уровень ХС к концу опыта остался ниже контрольных величин на 40,6%. В начале исследования отмечалось повышение содержание ТАГ в 2,75 раза. В ходе эксперимента наблюдалось достоверное снижение этого показателя, но уровень ТАГ ос-

тался выше нормы на 75%. У экспериментальных животных в ответ на введение ССЦ в начале эксперимента наблюдалось повышение уровня общего билирубина в 2 раза, а к концу эксперимента наблюдалось достоверное снижение, но показатель превышал норму на 51,2% (табл. 1).

Определяемое при ОПН, вызванной CCI4, уменьшение уровня ХС связано, видимо, с нарушением гидролитической, всасывательной и моторно-эвакуаторной функций кишечника. В тоже время, в этих же условиях увеличение уровня ТАГ можно объяснить тем, что при отравлении СС14 интенсивность анаэробного гликолиза, а следовательно, и содержание фосфодиоксиацетона - источника синтеза ТАГ в печени - повышено. Повышено и содержание в сыворотке крови количество общего билирубина, что очевидно связано с тем, что вследствие холестаза, нарушено поступление желчи в двенадцатиперстную кишку.

У группы животных после введения CCI4 в начале эксперимента наблюдалось снижение уровня глюкозы в 1,3 раза, к концу эксперимента он остался ниже нормы на 58,3% (табл. 1).

Таким образом, при ОПН отмечается гипогликемия вследствии нарушения баланса между процессами гликогенолиза и глюконеогенеза, то есть торможение образования глюкозы из гликогенных аминокислот.

У экспериментальных животных после введения CCI4 на 3 сутки в сыворотке крови наблюдалось достоверное увеличение активности всех исследуемых показателей ферментативных систем: АлАТ, АсАТ, ГТТ и ЩФ. На протяжении всего эксперимента шло достоверное снижение активности всех перечисленных ферментов. К концу эксперимента показатели ферментативных систем продолжали снижаться, но уровня нормы не достигли. Активность АлАТ, АсАТ, ГГТ, ЩФ превышала норму в 2,57 раза, в 2,8 раза, на 20,2%, на 10,7%, соответственно. На 3 сутки у группы животных, которым вводили ССЦ, активность КФ достоверно повысилась в 1,8 раза. На 10-30 сутки активность КФ понижалась и к концу эксперимента превышала норму на 56,4%. В начале исследования активность МПО достоверно снизилась в 5,4 раза. Активность этого показателя на 10-30 сутки стала повышаться, но к концу опыта стала ниже нормы на 18,4% (табл. 1).

В результате исследований была выявлена динамика метаболических изменений ферментов нейтрофилов периферической крови белых мышей, что позволяет решить задачу о возможности использования цитохимических показателей этих клеток как дополнительный тест для более объективной оценки состояния макроорганизма при развитии интоксикации. При ОПН у экспериментальных животных наблюдалось снижение активности МПО в нейтрофилах крови, вследствие нарушения бактерицидной системы организма. Это связано с тем, что этот фермент совместно с перекисью водорода образует мощную антибактериальную систему. Повышение активности КФ в нейтрофилах крови белых мышей после интоксикации СС14, связано с его стимулирующим влиянием на нейтрофильные гранулоциты.

В результате проведенного эксперимента было установлено, что однократное внутрибрюшинное введение CCI4 белым мышам в дозе 0,25 ЛД50 вызывает у них изменение гомеостаза вследствие нарушения паренхимы печени.

Таблица 1.

Воздействие четыреххлористого углерода на интенсивность свободноради-кальных процессов и некоторые стороны обмена белков, углеводов, липндов, пигментный обмен в сыворотке крови экспериментальных животных, характеризующих функциональную активность печени.

Исследуемый п затель Контрольное значение показателя Сроки наблюдения (сутки)

3 10 20 30

МДА, мкмоль/л 3,60 ±0,06 6,60 ± 0,43* 5,80 ±0,19* 5,30 ±0,20* 5,10 ±0,44*

Катал аза, ммоль/мл/мин 24,00 ±0,23 9,00 ±0,83* 9,80 ±0,92* 11,30 ± 2,81* 12,60 ±0,77*

СПА, ед.опт.пл от/мл 0,125 ±0,013 0,550 ± 0,040* 1,000 ±0,038* 1,375 ± 0,092* 1,000 ±0,082*

Общий белок, г/л 98,00 ±2,10 20,00 ±3,10* 19,00 ±3,40* 31,00 ±2,90* 45,00 ± 3,00*

Мочевина, ммоль/л 9,30 ± 0,30 1,20 ±0,27* 1,80 ±0,16* 2,70 ±0,19* 3,90 ±0,17*

Тимоловая проба,ед 2,00 ±0,15 10,00 ±0,74* 7,00 ± 0,67* 6,00 ±0,69* 5,00 ±0,41*

Глюкоза, ммоль/л 2,40 ±0,17 1,80 ±0,02* 2,50 ±0,18 2,10 ±0,16 1,00 ±0,07*

ХС, ммоль/л 3,20±0,21 1,20±0,19* 1,40±0,43* 1,60±0,41* 1,90±0,34*

ТАГ, г/л 1,20±0,11 3,30±0,31* 3,00±0,31* 2,60±0,22* 2,10±0,21*

Общий билирубин, мкмоль/л 10,85±1,10 22,20±1,50* 19,60±1,60* 17,80±0,90* 16,40±1,40*

АлАТ, ед/л 7,00±0,68 27,00±3,70* 25,00±5,20* 22,00±3,60* 18,00±2,70*

АсАТ, ед/л 6,00±0,61 29,00±3,70* 27,00±2,50* 24,00±2,80* 18,00±1,90*

ГГТ, ед/л 84,00±0,73 132,00±9,30* 126,00±7,30* 121,00±5,60* 101,00±7,80*

ЩФ, ед/л 84,00±0,50 95,00±4,90* 96,00±4,00* 98,00±6,20* 93,00±5,80

КФ,МЕ 1,01±0,06 1,87±0,03* 1,79±0,02* 1,63±0,07* 1,58±0,03*

МПО, МЕ 1,41 ±0,09 0,26±0,04* 0,38±0,03* 0,95±0,01* 1,15±0,07*

Примечание: * - р<0,05 изменения статистически достоверны по сравнению с контрольными значениями

Коррекция биохимических и цитохимических показателей сыворотки и клеток крови, нарушенных воздействием четыреххлористого углерода ин-тактными и липосомальными лекарственными препаратами, введенными внутрибрюшинно и перорально.

Для коррекции гомеостаза организма, нарушенного воздействием ССЦ, использовали интактные лекарственные препараты, которые вводили внутрибрюшинно на 2, 3, 4, 5, 6, 7 сутки, объемом 0,5 мл. В тексте представлены достоверные отличия (р<0,05), по сравнению с контролем.

У экспериментальной группы животных, инъецированных интактными лекарственными препаратами, на 3 сутки уровень МДА достоверно повышался в 1,7 раза. В последующие сроки исследования этот показатель снижался, но к концу эксперимента оставался выше нормы на 16,7%. В сравнении с группой животных, которым вводили СС14, уровень МДА понижался на 17,7%. В начале исследования активность СПА достоверно повышалась в 4,8 раза. На 10 сутки активность СПА не изменилась, на 20-30 сутки незначительно увеличивалась по сравнению с 10 сутками. К концу эксперимента этот показатель достоверно превышал контрольную величину в 8,4 раза. В сравнении с группой животных, которым вводили СС14, СПА была выше.В начале эксперимента активность каталазы достоверно понижалась в 2,9 раза. Активность каталазы на 10-20 сутки достоверно повысилась, на 30 сутки наблюдалось увеличение активности этого показателя, но он оставался ниже нормы на 29,6%. В сравнении с группой животных, которым вводили СС14, активность каталазы увеличилась на 25,%. Лечение интактными лекарственными средствами приводило к снижению данных показателей за исключением СПА, которая наиболее чувствительна к воздействию СС14.

В группе животных, которым вводили липосомальные лекарственные препараты внутрибрюшинно на 3 сутки уровень МДА повышался в 1,4 раза. На протяжении всего эксперимента наблюдалась тенденция к снижению этого показателя. К концу эксперимента уровень МДА достоверно снизился, но оставался выше нормы на 11,1%. В начале исследования отмечалось повышение активности СПА в 4 раза. На протяжении всего эксперимента наблюдалась тенденция к увеличению этого показателя. СПА на 30 сутки снизилась, но оставалась выше нормы в 5,4 раза. В начале опыта активность каталазы достоверно снизилась в 2,3 раза. На протяжении всего эксперимента наблюдалась тенденция к увеличению этого показателя. Активность каталазы к концу эксперимента достоверно повышалась, но все же оставалась ниже нормы на 16,3%. Липосомальные лекарственные препараты, введенные внутрибрюшинно более эффективно приводили к восстановлению показателей ПОЛ по сравнению с интактными средствами. Уровень МДА уменьшался, активность каталазы повышалась на 18,9%, а СПА уменьшалась на 55%.

При лечении белых мышей липосомальными лекарственными препаратами, вводимыми перорально, на 3 сутки отмечалось повышение уровня МДА в 1,4 раза. На 10-20 сутки наблюдалось снижение этого показателя. К концу эксперимента уровень МДА достиг нормы.

В начале эксперимента наблюдалось повышение активности СПА в 5 раз, на 10 сутки отмечалось незначительное снижение этого показателя, на 20 сутки шло его повышение по сравнению с 10 сутками в 2 раза. К 30 суткам СПА снижалась, но оставалась выше нормы в 4,4 раза.Активность каталазы на 3 сутки была ниже нормы в 2 раза, на 10-20 сутки наблюдалось ее увеличение. К концу эксперимента активность каталазы повышалась, по сравнению с 3 сутками, но оставалась ниже нормы на 7,1%. Липосомальные лекарственные препараты, введенные перорально, быстрее восстанавливали данные показатели, чем липосомальные лекарственные средства, введенные внутрибрюшинно. Уровень МДА понижался на 12,5%, активность каталазы увеличивалась на 9,8%, СПА не изменилась. По результатам наших исследований можно сделать вывод о том, что применение липосомальных лекарственных препаратов дает более быстрый корригирующий эффект, причем более эффективным оказалось в данном случае его пероральное введение (рис. 1).

Рис 1. Изменение интенсивности перекисного окисления липидов в сыворотке крови у экспериментальных животных при острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода (в % к контролю).

I - экспериментальная группа животных, которой вводили СС14;

II - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно ин-тактные лекарственные препараты;

III - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно липо-сомалькые лекарственные препараты;

IV - экспериментальная группа животных, которой вводили перорально липосо-мальные лекарственные препараты.

*- статистически достоверные отличия по сравнению с контрольными значениями

При лечении группы экспериментальных животных ингактными лекарственными препаратами на 3 сутки наблюдалось достоверное снижение содержания общего белка в 5 раз. К концу эксперимента отмечалось достоверное повышение этого показателя. Содержание общего белка оставалось ниже нормы на 40,8%, но выше после введения СС14 на 28,8%. В начале исследования отмечалось снижение содержания мочевины в 6,2 раза. На 10-30 сутки эксперимента отмечалась достоверное повышение этого показателя по сравнению с началом опыта. Содержание мочевины оставалось ниже нормы на 28%, но выше, чем после введения СС14 на 71,8%. В начале эксперимента уровень тимоловой пробы повысился в 4,5 раза. В последующие сроки наблюдения отмечалась тенденция к снижению этого показателя, но уровень тимоловой пробы к концу исследования превышал контрольный показатель на 100%, что на 20% ниже, чем у животных, которым вводили ССЦ.

В группе экспериментальных животных, которым проводили лечение липо-сомальными лекарственными средствами, введенными внутрибрюшинно, в начале эксперимента наблюдалось достоверное понижение содержания общего белка в 3 раза. На 30 сутки содержание общего белка достоверно оставалось ниже контрольных показателей на 22,4%, но выше, чем у белых мышей, которым проводили лечение интакгаыми лекарственными препаратами на 31%. На 3 сутки отмечалось достоверное снижение содержания мочевины в 4,4 раза, которое увеличивалось в ходе эксперимента. На 30 сутки содержание этого показателя оставалось ниже контрольных показателей на 18,3%, но выше, чем у белых мышей, которым проводили лечение интактными лекарственными препаратами на 13,4%. Увеличение уровня тимоловой пробы в 4 раза наблюдалось к 3 суткам. Затем в ходе иссле-

дования его уровень снижался, но к концу эксперимента оставался выше нормы на 34%, но ниже чем у группы животных, леченных интактными средствами, введенными внутрибрюшинно, на 25%.

При введении липосомальных лекарственных препаратов экспериментальным животным перорально в начале эксперимента содержание общего белка достоверно снижалось в 2,6 раза. В ходе всего эксперимента этот показатель постепенно приближались к контрольным величинам. На 30 сутки содержание общего белка повышалось, но оставалось ниже нормы на 12,2%. В начале исследования содержание мочевины достоверно снижалось в 3,2 раза. На 10-20 сутки этот показатель постепенно приближались к контрольным величинам. К концу эксперимента содержание мочевины в сыворотке крови белых мышей достигло нормы. Уровень тимоловой пробы на 3 сутки достоверно повысился в 3 раза. В ходе всего эксперимента этот показатель постепенно приближался к контрольным величинам. На 30 сутки уровень тимоловой пробы достиг нормы. Этот способ введения липосомальных лекарственных средств нормализовал быстрее содержание общего белка на 13%, мочевины на 19% и уровень тимоловой пробы на 33,4%, чем их внутри-брюшинное введение.

Сравнительный анализ результатов, полученных в ходе исследования, показал, что к более быстрому восстановлению показателей белкового обмена приводили липосомальные формы лекарственных средств, по сравнению с интактными формами, причем более быстрый терапевтический эффект вызвали липосомальные лекарственные препараты, вводимые перорально (рис. 2).

[Ь Общий бели МочевинсОТимолоэая проф

Рис 2. Изменение показателей белкового обмена сыворотки крови экспериментальных животных при острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода (в % к контролю).

I - экспериментальная группа животных, которой вводили ССЬь

II - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно ин-тактные лекарственные препараты;

III - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно липосомальные лекарственные препараты;

IV - экспериментальная группа животных, которой вводили перорально липосомальные лекарственные препараты.

*- статистически достоверные отличия по сравнению с контрольными значениями

В сыворотке крови у мышей, которым вводили интактные лекарственные препараты, на 3 сутки происходило достоверное снижение уровня ХС в 2,5 раза. В ходе эксперимента этот показатель достоверно повышался, и к концу исследования уровень ХС остался ниже контрольных величин на 34,4% и выше на 10,5% в сравнении с группой животных, не получавших лечения. В начале исследования наблюдалось повышение уровня ТАГ 1,5 раза. На 10-30 сутки этот показатель достоверно снижался и оказался ниже нормы на 16,7%, но в 2 раза быстрее восстанавливался после введения ССЦ.

У экспериментальных животных, которым вводили липосомальные лекарственные препараты внутрибрюшинно, в начале эксперимента уровень ХС достоверно снижался в 2 раза, в последующие сроки наблюдалась тенденция к его повышению. На 30 сутки уровень ХС достоверно повышался, но оставался ниже нормы на 18,8%. По сравнению с группой животных, которым проводили лечение интактными препаратами, уровень ХС восстановился на 19,3% быстрее. Уровень ТАГ на 3 сутки достоверно повысился в 2,3 раза, а затем стал постепенно снижаться. К концу эксперимента уровень ТАГ оставался незначительно ниже нормы. По сравнению с группой животных, которым проводили лечение интактными препаратами, содержание ТАГ не изменилось.

При лечении животных липосомальными лекарственными препаратами, введенными перорально, на 3 сутки уровень ХС достоверно снизился в 1,4 раза, в последующие сроки эксперимента повышался, но к концу эксперимента уровень ХС достиг нормы. Уровень ТАГ на 3 сутки увеличился в 2 раза, а затем в ходе исследования имел тенденцию к снижению и к концу эксперимента оставался ниже нормы на 25%.

В результате проведенного эксперимента изменялись показатели пигментного обмена. В частности были исследованы изменения общего билирубина.

У экспериментальных животных в ответ на введение СС14 в начале эксперимента наблюдалось повышение уровня общего билирубина в 2 раза, а к концу эксперимента наблюдалось достоверное его снижение, но показатель превышал норму на 51,2%. Следующим образом изменялся этот показатель у группы животных, которым вводили интактные лекарственные средства: на 3 сутки он достоверно повысился в 2 раза и постепенно стал снижаться. К концу эксперимента уровень общего билирубина оставался на 39,2 % выше нормы. Интактный лекарственный препарат на 8,6% эффективнее приводил к норме этот показатель, по сравнению с действием ССЦ.

У экспериментальных животных, которым вводили липосомальные лекарственные препараты внутрибрюшинно, на 3 сутки уровень общего билирубина достоверно повысился в 2 раза, но к концу эксперимента наблюдалась тенденция к снижению его уровня, не достигшего нормы на 17,1%.

При лечении группы животных липосомальными лекарственными препаратами, введенными перорально, в начале эксперимента уровень общего билирубина повысился в 1,5 раза, затем этот показатель снижался, и на 30 сутки практически достиг нормы.

На основании этих данных можно говорить о том, что введение липосомаль-ных лекарственных препаратов дает более быстрый корригирующий эффект на липидный обмен и билирубин и существенно не зависит от способа их введения (рис.3).

|а тла общий билируОйас]

Рис 3. Изменение показателей липидного обмена и уровня общего билирубина сыворотки крови экспериментальных животных при острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода (в % к контролю).

I - экспериментальная группа животных, которой вводили ССЦ;

II - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно ин-тактные лекарственные препараты;

III - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно липо-сомальные лекарственные препараты;

IV - экспериментальная группа животных, которой вводили перорально липосо-мальные лекарственные препараты.

*- статистически достоверные отличия по сравнению с контрольными значениями

При лечении группы животных интактными липосомальными препаратами в начале эксперимента уровень глюкозы практически не изменялся, затем наблюдалось его снижение. К концу эксперимента уровень глюкозы достоверно оставался ниже контрольных величин на 45,8%, но на 30% выше в сравнении с группой животных, которым вводили токсин.

При лечении животных липосомальными лекарственными препаратами, введенными внутрибрюшинно, в начале эксперимента уровень глюкозы повышался, затем наблюдалось его достоверное снижение на 41,7% по сравнению сконтролем. Восстановление этого показателя при лечении интактными и липосомальными лекарственными препаратами, введенными внутрибрюшинно, происходило одинаково. При пероральном введении липосомальных средств содержание глюкозы в начале эксперимента снижалось, а к 30 суткам наблюдалась тенденция к повышению, но её уровень оставался ниже нормы на 16,7%. Это повышение оказалось на 40% эффективнее, чем после введения интактных и на 42% - липосомальных лекарственных препаратов, введенных внутрибрюшинно.

Таким образом, сопоставление результатов показателей уровня глюкозы экспериментальных животных по сравнению с контрольной группой выявило следующее: к концу эксперимента этот показатель у всех групп животных не достиг нормы, но липосомальные лекарственные препараты быстрее корригировали уровень

глюкозы, по сравнению с интактными. Наиболее эффективными являлись липосо-мальные лекарственные препараты, введенные перорально (рис. 4).

* * *

Рис 4. Изменение показателей уровня глюкозы сыворотки крови у экспериментальных животных при острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода (в % к контролю).

I - экспериментальная группа животных, которой вводили CCU;

II - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно ин-тактные лекарственные препараты;

IV - экспериментальная группа животных, которой вводили перорально липосо-мальные лекарственные препараты.

*- статистически достоверные отличия по сравнению с контрольными значениями

При лечении экспериментальной группы животных интактными лекарственными препаратами в начале эксперимента наблюдалось достоверное повышение активности показателей некоторых ферментативных систем: АлАТ, АсАТ, ГГТ, ЩФ. На 10 и 20 сутки у данной группы животных происходило дальнейшее снижение этих величин. К концу опыта активность АлАТ, АсАТ, ГГТ осталась выше нормы в 21,8 раза, на 83,3%, на 14,3%, соответственно, а активность ЩФ стала ниже нормы. По сравнению с не леченными животными интактные лекарственные препараты, введенные животным С ОПН, вызывали понижение АлАТ на 17,6%, АсАТ на 63,6%, ГГТ на 5,2% и ЩФ на 14,8%.

При лечении экспериментальных животных липосомальными лекарственными препаратами, введенными внутрибрюшинно, на 3 сутки от начала эксперимента наблюдалась тенденция к достоверному повышению активности АлАТ, АсАТ, ГГТ и ЩФ. На 10-20 сутки активность этих ферментов продолжала снижаться. К концу опыта активность АлАТ осталась выше нормы на 57,1%, АсАТ на 50%, а активность ЩФ снизилась незначительно. Липосомальные лекарственные препараты, введенные внутрибрюшинно, наиболее эффективно восстанавливали активность ферментов: АлАТ уменьшалась на 39,0%, АсАТ на 22,2%, ЩФ - незначительно.

Пероральное введение липосомальных лекарственных препаратов экспериментальным животным привело к следующим изменениям показателей ферментативных систем: на 3 сутки наблюдалось достоверное увеличение активности

АлАТ, АсАТ, ГГТ, ЩФ. На 10-20 сутки активность этих показателей продолжала снижаться, и к концу эксперимента активность АлАТ стала выше контрольных величин на 14,3%, АсАТ на 16,7% (рис. 5,6). Пероральное введение липосомальных лекарственных средств обладало наибольшей способностью к нормализации ферментативной активности: АлАТ понижалась на 37,5%, АсАТ на 28,6%, ГГТ и ЩФ незначительно.

Учитывая все вышеизложенное можно сделать вывод, что при ОПН, вызванной введением СС14, наиболее быстрый терапевтический эффект дают липосо-мальные препараты, введенные перорально.

|0АЛАТДАСАТ|

Рис 5. Изменение активности АлАТ и АсАТ сыворотки крови экспериментальных животных при острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода (в % к контролю).

I - экспериментальная группа животных, которой вводили СС14;

II - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно ин-тактные лекарственные препараты;

IV - экспериментальная группа животных, которой вводили перорально липосо-мальные лекарственные препараты.

*- статистически достоверные отличия по сравнению с контрольными значениями

50 4030 -2010-о --10-20-

н in

Сутки

* * * П

1Я

и i w

Рис 6. Изменение активности ГГТ и ЩФ сыворотки крови экспериментальных животных при острой печеночной недостаточности, вызванной введением че-тыреххлористого углерода (в % к контролю).

I - экспериментальная группа животных, которой вводили ССЦ;

II - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно ин-тактные лекарственные препараты;

IV - экспериментальная группа животных, которой вводили перорально липосо-мальные лекарственные препараты.

*- статистически достоверные отличия по сравнению с контрольными значениями.

V экспериментальной группы животных, лечение которых проводили интакт-ными лекарственным препаратами, в нейтрофилах крови на 3 сутки активность КФ увеличилась в 1,7 раза, на 10-30 сутки происходило достоверное снижение активности, но к концу эксперимента активность КФ превышала норму на 35,6%. Активность МПО в нейтрофилах крови на 3 сутки снизилась в 1,8 раза. На 10-30 наблюдалось достоверное повышение активности этого показателя, но к концу эксперимента ее уровень оставался ниже нормы. Интактные лекарственные препараты приводили к понижению активности КФ на 15,3% и увеличению активности МПО на 13,6%, что ниже по сравнению с группой животных, которым вводили токсин.

При лечении опытных животных липосомальными лекарственными препаратами, вводимыми внутрибрюшинно, на 3 сутки активность КФ увеличилась в 1,5 раза. На 10-30 сутки наблюдалось достоверное снижение активности этого показателя по сравнению с контрольными величинами. К концу эксперимента активность КФ снизилась, но нормы не достигла и превысила ее на 26,7%. В начале исследования активность МПО уменьшилась в 1,7 раза. На 10-30 сутки отмечалось постепенное увеличение активности этого показателя. К концу эксперимента активность МПО достигла нормы. Животным, которым проводили лечение липосомальными лекарственными препаратами, введенными внутрибрюшинно, активность КФ уменьшалась, МПО увеличивалась незначительно, что указывает на более быстрый эффект, в сравнении с интакгными лекарственными средствами.

При лечении экспериментальных животных липосомальными лекарственными препаратами перорально на 3 сутки активность КФ, по сравнению с контролем,

увеличилась в 1,5 раза. На 10-20 сутки активность этого фермента достоверно снижалась. К концу эксперимента активность КФ превысила норму на 13%. В начале исследования активность МПО достоверно понизилась в 1,8 раза. На 10-20 сутки активность этого фермента повышалась. К концу эксперимента активность МПО достигла нормы (рис 7). Липосомальные лекарственные препараты, введенные перорально, быстрее восстанавливали активность КФ и МПО, в отличие от лечения липосомальными лекарственными средствами, введенными внутрибрю-шинно: активность КФ понижалась на 11,3%, а активность МПО нормализовалась.

во-4020-О -20-40-60

* * * *

иг

Сутки

Рис 7. Изменение активности МПО и КФ в нейтрофилах крови экспериментальных животных при острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода (в % к контролю).

I - экспериментальная группа животных, которой вводили СС14;

II - экспериментальная группа животных, которой вводили внутрибрюшинно ин-тактные лекарственные препараты;

IV - экспериментальная группа животных, которой вводили перорально липосомальные лекарственные препараты.

*- статистически достоверные отличия по сравнению с контрольными значениями

Таким образом, липосомальные лекарственные препараты приводили к более быстрой нормализации показателей активности нейтрофилов крови, причем наиболее эффективным являлся пероральный способ их введения.

Состояние интоксикации любой природы можно рассматривать как отражение расстройств внутриклеточных энзиматических процессов (Карлинский, 1984). Клетка макроорганизма подвергается нагрузке высокой интенсивности и вынуждена налаживать свои функциональные системы. Несомненно, каждая клетка принимает неодинаковое участие в энергетическом усилии, но очевидно, что каждая клетка не действует в отдельности. Следующим этапом нашим исследований было изучение в динамике лечения четыреххлористой интоксикации функциональные энзимотические изменения.

Учитывая, что СС14 относится к гепатотропным ядам, при его введении животным, в первую очередь поражалась структура гепатоцитов, а затем всего органа, что подтвердили наши исследования.У группы экспериментальных животных после введения ССЬ в ранние сроки изменения в печени были преимущественно в зо-

не расположения триад. Междольковые вены увеличивались в диаметре, в них наблюдался застой крови. В последующие сроки наблюдались кровоизлияния. Балочная структура печени нарушалась, гепатоциты были заполнены зернистыми включениями различной величины. Часто вокруг центральной вены всиречались лимфоидные скопления, часть гепатоцитов находилась в состоянии некроза.

Следует отметить, что использование липосомальных препаратов по результатам патоморфологического исследования, не приводило к полному выздоровлению, но замедляло токсическое действие ССЦ. И хотя в отдаленные сроки наблюдения (30 сутки) структура исследуемых органов не восстанавливалась, но прослеживалась тенденция восстановления микроциркуляции крови.

Значительные морфологические изменения в органах не выявлены. В почках определялось умеренное полнокровие венул и капилляров, вокруг сосудов наблюдалось скопление лимфоидных клеток, в проксимальном отделе небольшое поражение нефрона. В клетках печени наблюдались гепатоциты в состоянии карионек-роза. В селезенке отмечался венозный застой, диапедез эритроцитов, капсула и трабекулы были отечны, разволокнены.

Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что использование липосомальных лекарственных препаратов в примененной схеме лечения экспериментальных животных не приводило к полному их выздоровлению, но снижало токсическое действие СС14.

Приведенные данные убедительно демонстрируют перспективность использования липосомальных форм лекарственных средств. При этом надо отметить, что наиболее быстрый корригирующий эффект дают липосомальные лекарственные препараты, вводимые перорально. Это можно объяснить тем, что их всасывание происходит преимущественно путем простой диффузии в желудке и тонкой кишке. До поступления в общий кровоток липосомальные лекарственные средства проходят два активных в биохимическом отношении барьера - кишечник и печень, оказывая своё биологическое действие.

ВЫВОДЫ

1. Получение липосом методом «выпаривания и обращения фаз» с последующим включением при шестикратном «замораживании - оттаивании» жирорастворимого а-токоферола в структуру мембран липосом, а водорастворимых - аскорбиновой кислоты, аденозинтрифосфорной кислоты, эссенциале и селенита натрия во внутренний их объем, обеспечивает включение лекарственных препаратов в пределах 72,2 ±2,1%.

2. Формирование острой печеночной недостаточности, вызванной однократным внутрибрюшинным введением белым мышам сублетальной дозы (0,25 ЛД50) че-тыреххлористого углерода, сопровождается интенсификацией перекисного окисления липидов с выраженным изменением свободнорадикальных процессов в сторону прооксидантной системы, нарушением отдельных сторон белкового, липидного, углеводного обменов и функционального состояния печени, регистрируемого по биохимическим и цитохимическим показателям крови.

3. Интактные и липосомальные лекарственные средства в процессе лечения острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода, приводят к снижению интенсивности перекисного окисления липидов в среднем на 17% и 11%, повышению активности каталазы на 29% и 17%, но не нормилизуют суммарную пероксидазную активность.

4. Лечение липоеомальными лекарственными препаратами острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода, приводит к более раннему восстановлению показателей белкового (содержание общего белка, мочевины, тимоловой пробы) и липидного (уровень холестерина, триг-лицеридов) обменов в сыворотке крови экспериментальных животных, по сравнению с интакгными лекарственными формами.

5. Функциональное состояние печени нормализуется в более ранние сроки при лечении животных липоеомальными препаратами, по сравнению с их интакгными формами. Такая же тенденция наблюдается при исследовании активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы в нейтрофилах крови экспериментальных животных. Гистологические изменения в печени, почках и селезенке имеют менее выраженный характер у животных, которым вводили липосомальные лекарственные препараты, по сравнению с применением интактных форм.

6. Пероральное введение липосомальных лекарственных препаратов животным с экспериментальной острой печеночной недостаточностью, по сравнению с их инъецированием внутрибрюшинно, обеспечивает более быструю коррекцию гомеостаза.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации в изданиях, рекомендованных ВАК

1. Исмаилова Г. К., Романова Л. В., Жилченко Е. Б., Ефременко Д. В., Голов-ченко Т. В., Малецкая О. В., Одинец А. В., Кремнева Г. М. Эффективность применения липосомальных форм антибиотиков при лечении некоторых инфекционных заболеваний в эксперименте// Вестник Волгоградского государственного медицинского университета.- 2007.- № 1.- С. 64-67. - личный вклад 50%.

2. Логвиненко О.В., Ефременко В.И., Романова Л.В., Кремнева Г.М. Способ оценки эффективности дезинтоксикационной терапии при воздействии токсинов различной природы. Патент на изобретение №2334989 от 27.09.2008 г., личный вклад 25%.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Романова Л.В. Сравнительная характеристика лечебного действия липосомальных и интактных лекарственных препаратов на острую печеночную недостаточность, вызванную воздействием четыреххлористого углерода// Тез. докл. XI итоговой науч. конф. студентов и молодых ученых,- Ставрополь, 2003.- С. 568-569.-0,08 п.л.,-личный вклад 100%,

2. Кремнева Г.М., Романова Л.В., Рогова С.Ш., Чернявская Е.Г. Коррекция показателей обменных процессов печени у экспериментальных животных, подвергшихся воздействию четыреххлористого углерода и сальмонеллезно-го эндотоксина// Тез. докл. XI итоговая науч. конф. студентов и молодых ученых.-Ставрополь, 2003,- С.550-551. - 0,08 п.л., - личный вклад 50%.

3. Романова Л.В.Изменение показателей белкового обмена при острой печеночной недостаточности,вызванных введением четыреххлористого углерода //Актуальные проблемы медицины: сб. науч. работ,- Томск, 2004.- №2.-С.348. - 0,04 п.л., - личный вклад 100%.

4. Чернявская Е.Г., Логвиненко О.В., Романова Л.В. Некоторые цитоэнзимохими-ческие показатели крови при острой печеночной недостаточности, вызванной

воздействием четыреххлористого углерода// Актуальные проблемы медицины: сб. науч. работ,- Томск, 2004,- №1.- С. 95. - 0,04 п.л., - личный вклад 50%.

5. Романова Л.В. Изменение показателей углеводного обмена при острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода и их коррекция с помощью интактных и липосомальных препаратов в сравнении// Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ,- Томск, 2005.- №1,- С.22. -0,04 п.л., - личный вклад 100%.

6. Романова Л.В. Влияние четыреххлористого углерода на показатели липидного обмена, общего билирубина в эксперименте и сравнительная характеристика на эти показатели комплекса лекарственных препаратов в интактной и липосо-мальной формах// Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ,- Томск, 2005.-№1,- С. 22. - 0,04 п.л., - личный вклад 100%.

7. Романова Л.В., Ефременко В.И., Кремнева Г.М. и др. Оценка эффективности лечения интакгными и лилосомальными препаратами экспериментальных животных, подвергшихся воздействию четыреххлористого углерода.-М,-2005.-38 е.—1,68 пл.,- Деп. в ВИНИТИ 25.07.05, №27636.-личный вклад 50%.

8. Романова Л.В., Кремнева Г.М., Рогова С.Ш., Литвиненко И.Л., Гузеева Н.П., Марушевская Н.Я., Смирнова А.С. Динамика показателей перекисного окисления липидов у экспериментальных животных на фоне введения четыреххлористого углерода и их коррекция интактными и липосомальными лекарственными препаратами// Высшее сестринское образование в XXI веке. Проблемы и перспективы: сб. науч. работ,- Ставрополь, 2005,- С. 82-86. -0,08 п.л., - личный вклад 80%.

Список сокращений.

АлАТ - аланинаминотрансаминаза

АсАТ - аспартатаминотрансаминаза

ГТТ - гамма-глутамилтрансаминаза

КФ - кислая фосфатаза

МДА - малоновый диальдегид

МПО - миелопероксидаза

ОПН - острая печеночная недостаточность

ПОЛ - перекисное окисление липидов

С ПА - суммарная пероксидазная активность

ТАГ - триацилглицериды

ХС - холестерин

ЩФ - щелочная фосфатаза

СО4 - четыреххлористый углерод

Сдано в набор 13.03.09 г. Подписано в печать 13.01.09 г. Заказ № 65. Тираж 100 экз. Формат 60*84 1/ 16. Печ. лист. 1,0. Усл. печ. л. 1,0. Копировально-множительный отдел НИЧ Южного федерального университета 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Б. Садовая, 105, тел (863) 263-82-91.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Романова, Людмила Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика свойств четыреххлористого углерода, влияние на обменные процессы в организме. Биологические модели, используемые для изучения острой печеночной недостаточности.

1.2. Биохимические критерии и лабораторная диагностика функций печени при её патологии.

1.3. Лекарственная коррекция нарушенных функций печени.

1.4. Получение, характеристика и биологические свойства липосом, осуществляющих направленный транспорт лекарственных средств.

ГЛАВА 2. Постановка эксперимента и методы исследования.

2.1. Постановка эксперимента.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Биохимические методы исследования.

2.2.1.1. Определение продуктов перекисного окисления липидов.

2.2.1.2. Определение суммарной пероксидазной активности.

2.2.1.3. Определение активности каталазы.

2.2.1.4. Определение содержания глюкозы.

2.2.1.5. Определение содержания общего белка.

2.2.1.6. Определение содержания мочевины.

2.2.1.7. Определение тимоловой пробы.

2.2.1.8. Определение уровня общего холестерина.

2.2.1.9. Определение уровня триглицеридов.

2.2.1.10. Определение общего билирубина.

2.2.1.11. Определение активности аминотрансфераз.

2.2.1.12. Определение активности щелочной фосфатазы.

2.2.2. Цитоэнзимохимические методы исследования.

2.2.2.1. Определение активности миелопероксидазы.

2.2.2.2. Определение активности кислой фосфатазы.

2.2.3. Гистоморфологическое исследование.

2.2.4. Получение фосфолипидов из головного мозга.

2.2.5. Тонкослойная хроматография.

2.2.6. Получение липосом методом «выпаривания и обращения фаз» и включения в них лекарственных средств методом «замораживания-оттаивания"

2.2.7. Подготовка липосомальных препаратов для электронно-микроскопического исследования.

2.3. Статистическая обработка результатов исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Биохимические и цитохимические показатели сыворотки крови лабораторных животных при формировании острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода.

3.2. Фармакологическая коррекция острой печеночной недостаточности.

3.2.1. Биохимические критерии лабораторной диагностики в оценке эффективности использования интактных лекарственных препаратов.

3.2.2. Коррекция экспериментальной острой печеночной недостаточности с помощью липосомальных лекарственных препаратов.

3.3. Гистологические критерии в оценке степени тяжести экспериментальной острой печеночной недостаточности и эффективности её лечения.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические и цитохимические критерии в оценке эффективности использования липосомальных лекарственных препаратов при острой экспериментальной печеночной недостаточности, вызванной воздействием четыреххлористого углерода"

Нарушение обменных процессов в печени наблюдается при различных заболеваниях. Так, вследствие патологических процессов может развиваться острая печеночная недостаточность в результате массивного некроза печеночных клеток, вызванного различными причинами и проявляющаяся внезапным тяжелым нарушением функции печени. Одной из этих причин является отравление гепатотропными ядами, в частности ССЦ.

В связи с особенностями молекулярных механизмов действия CCI4 на субклеточные мембраны гепатоцитов (микросомальная активация, перекисное окисление липидов как механизм нарушения каталитических свойств мембра-носвязанных ферментов) изучение биологического действия гепатотропного яда представляет интерес как модель молекулярной патологии мембранных структур (Губский, 1989). Вследствие этого, детальное изучение молекулярных основ химического поражения гепатоцитов приобрело общебиологическое и медицинское значение.

Развитие симптомов острой печеночной недостаточности (ОПН)) обусловлено дистрофией и распространенным некрозом гепатоцитов, а также массивным развитием портокавальных анастомозов, через которые значительная часть крови из воротной вены поступает в полые вены и затем в артериальное русло, минуя печень, что ещё более снижает её участие в дезинтоксикации вредных веществ и нарушает участие в различных видах обмена — углеводном, белковом, липидном и других. При ОПН наблюдается так же недостаток антиокси-дантов, защищающих клетки от свободно-радикального окисления (Подымова, 1993).

Для коррекции обменных процессов при этом используют различные лекарственные препараты, способствующие стабилизации клеточных мембран, снижению процессов перекисного окисления липидов и нормализации всех видов обменных процессов.

В ряде случаях эффективность использования данных лекарственных средств оказывается низкой из-за их неспособности эффективно преодолевать анатомические и клеточные барьеры организма, токсичности некоторых препаратов, кратковременного пребывания в организме вследствии быстрой утилизации и выведения.

В настоящее время возрос интерес к разработке получения различных ли-посомальных форм препаратов, обусловленный значительным расширением использования липосом во многих областях медицинской науки и практики.

В последнее время появляются сообщения о широком применении липосом в качестве транспортеров лекарственных препаратов (Dijrstra et al., 1998; Севастьянов, 1999; Абрамов и др., 2001, Хворостов, 2001). Используя липосо-мальные формы лекарственных препаратов, иммобилизованных во внутренний объем или мембрану липидных везикул, удается преодолеть недостатки их ин-тактных форм. Широкие возможности применения липосом в терапии различных заболеваний обусловлено совокупностью их биологических свойств: химической инертностью, биосовместимостью, биодеградируемостью, практически отсутствием токсических и антигенных свойств. Липосомы обладают возможностью направлять заключенные в них вещества в определенные органы и ткани организма, что позволяет заметно снижать дозу препарата, сохраняя эффективность биологического действия. Кроме этого, липидные везикулы способны предохранять заключенные в них вещества от действия ряда факторов, обеспечивая пролонгированный эффект фиксированных в них лекарственных препаратов.

Однако в литературе практически отсутствуют данные об изучении влияния липосомальных лекарственных препаратов, введенных разными путями, на биохимические и цитоэнзимохимические процессы организма при ОПН. С этой целью предполагается комплексно исследовать биохимические показатели углеводного, белкового, липидного обменов, показателей перекисного окисления липидов, а также ферментативной активности в сыворотке крови экспериментальных животных (белых мышей) с ОПН, вызванной введением им четырех-хлористого углерода.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Целью настоящей работы явилось конструирование липосомальных лекарственных препаратов и исследование их метаболических эффектов в регуляции гомеостаза у животных при острой печеночной недостаточности, вызванной отравлением четыреххлористым углеродом.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. Изучить влияние интактных и липосомальных лекарственных средств на интенсивность перекисного окисления липидов по уровню малонового диальдегида, активность каталазы и суммарной пероксидазной активности в сыворотке крови белых мышей при интоксикации четыреххлористым углеродом.

3. Исследовать влияние интактных и липосомальных лекарственных средств на отдельные стороны углеводного обмена.

4. Изучить влияние интактных и липосомальных лекарственных средств на отдельные стороны белкового обмена по содержанию общего белка, мочевины и уровню тимоловой пробы.

5. Определить состояние липидного и пигментного обменов после введения экспериментальным животным четыреххлористого углерода и лечения интактными и липосомальными лекарственными препаратами по уровню общего холестерина, триацилглицеридов и общего билирубина.

6. Изучить функциональное состояние печени при лечении животных ин-тактными и липосомальными лекарственными средствами после введения четыреххлористого углерода по активности аланинаминотрансфера-зы, аспартатаминотрансферазы, гаммаглутамилтрансферазы в сыворотке крови, миелопероксидазы и кислой фосфатазы в нейтрофилах крови.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые создана новая липосомальная форма лекарственного препарата с иммобилизацией водорастворимых лекарственных средств во внутренний объем липидных везикул (аскорбиновой кислоты, АТФ, селенита натрия, эссен-циале), а жирорастворимых (а-токоферола) - в мембрану липосом.

Липосомальные лекарственные средства оказывают более выраженное восстановление свободнорадикальных процессов, белкового, липидного и пигментного обменов, функционального состояния печени. Эффективность терапии этими препаратами подтверждается тенденцией к нормализации показателей активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы в нейтрофилах крови.

Установлено, что пероральное введение липосомальных лекарственных препаратов животным с экспериментальной острой печеночной недостаточностью обеспечивает у них более быструю коррекцию гомеостаза.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Изготовленный стабильный, комплексный липосомальный лекарственный препарат, обладающий пролонгированным действием, является более высокоэффективным, по сравнению с интактными лекарственными средствами, при лечении острой печеночной недостаточности у экспериментальных животных, вызванной четыреххлористым углеродом.

2. При введении экспериментальным животным четыреххлористого углерода выявлены у них нарушения органоспецифических обменных процессов и баланса про- и антиоксидантных систем.

3. Интактные и в более выраженной степени липосомальные лекарственные препараты, вводимые экспериментальным животным с острой печеночной недостаточностью, нормализуют биохимические и цитоэнзимохими-ческие показатели, функциональную активность печени.

4. Лечение острой печеночной недостаточности у экспериментальных животных комплексным липосомальным лекарственным препаратом, введенным перорально, оказалось более эффективным, по сравнению с липосомальным лекарственным препаратом, введенным внутрибрюшинно.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Результаты исследования расширяют существующие представления об использовании липосомальных лекарственных препаратов при лечении экспериментальной острой печеночной недостаточности и подтверждают их более высокую эффективность перед интактными лекарственными формами. В данной работе представлены новые данные о получении, оценке действия липосомальных лекарственных препаратов при различных путях введения при лечении острой печеночной недостаточности, вызванной введением экспериментальным животным четыреххлористого углерода. Критериями оценки эффективности действия липосомальных лекарственных препаратов служили многочисленные биохимические показатели крови экспериментальных животных, а также ряд цитохимических и морфологических показателей при лечении острой печеночной недостаточности, что открывает новые перспективы их практического применения в медицине.

Разработана методическая рекомендация: «Оценка эффективности лечебного действия липосомальных и интактных лекарственных препаратов у экспериментальных животных, подвергшихся воздействию токсинов различной природы», утвержденная ректором Ставропольской Государственной Медицинской Академии на основании решения Ученого совета академии (протокол от 30.03.2005, №3).

Получен патент на изобретение: «Способ оценки эффективности дезинток-сикационной терапии при воздействии токсинов различной природы» (№2334989 от 27.09.2008 г.).

Материалы работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий в Ставропольской государственной медицинской академии в курсе биологической, общей и биоорганической химии, а также при чтении базовой дисциплины «Биологической и медицинской химии» на кафедре ГОУ ВПО Ставропольского государственного университета Федерального агентства по образованию, о чем свидетельствуют акты с внедрения полученных результатов исследования.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Романова, Людмила Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Получение липосом методом «выпаривания и обращения фаз» с последующим включением при шестикратном «замораживании — оттаивании» жирорастворимого а-токоферола в структуру мембран липосом, а водорастворимых - аскорбиновой кислоты, аденозинтрифосфорной кислоты, эссенциале и селенита натрия во внутренний их объем, обеспечивает включение лекарственных препаратов в пределах 72,2 ± 2,1%.

2. Формирование острой печеночной недостаточности, вызванной однократным внутрибрюшинным введением белым мышам сублетальной дозы (0,25 ЛД50) четыреххлористого углерода, сопровождается интенсификацией пере-кисного окисления липидов с выраженным изменением свободнорадикаль-ных процессов в сторону прооксидантной системы, нарушением отдельных сторон белкового, липидного, углеводного обменов и функционального состояния печени, регистрируемого по биохимическим и цитохимическим показателям крови.

4. Лечение липосомальными лекарственными препаратами острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода, приводит к более раннему восстановлению показателей белкового (содержание общего белка, мочевины, тимоловой пробы) и липидного (уровень холестерина, триглицеридов ) обменов в сыворотке крови экспериментальных животных, по сравнению с интактными лекарственными формами.

5. Функциональное состояние печени нормализовалось в более ранние сроки при лечении животных липосомальными препаратами по сравнению с их интактными формами. Такая же тенденция наблюдалась при исследовании активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы в нейтрофилах крови экспериментальных животных. Гистологические изменения в печени, почках и селезенке имели менее выраженный характер у животных, которым вводили липосомальные лекарственные препараты, по сравнению с применением интактных форм.

6. Пероральное введение липосомальных лекарственных препаратов животным с экспериментальной острой печеночной недостаточностью, по сравнению с их инъецированием внутрибрюшинно, обеспечивало более быструю коррекцию гомеостаза.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Романова, Людмила Викторовна, Ставрополь

1. Абрамов К.С., Скидан И.Н., Гуляев А.Е. с соавт. Некоторые аспекты направленного транспорта лекарств в организм с помощью полимерных наноча-стиц//Клинич. исслед. лекар. средств в России. 2001.-№ 2. - С. 18-21.

2. Адо А.Д., Маянский А.Н. Современное состояние учения о фагоцитозе// Иммунология.- 1983.- №1.- С. 20-25.

3. Айдарханов Б.Б., Локшина Э.А., Ленская Е.Г. Молекулярные аспекты механизма антиокислительной активности витамина Е: особенности действия а— и у- токоферолов. //Вопр. мед. химии.- 1989.- №3,- С.2-8.

4. Актуальные вопросы патологии печени //под ред. Х.Х. Мансурова. — Душанбе, 1972. С.10-21.

5. Алимова Е.К., Астрацатурьян А.Т., Жаров Л.В. О роли липидов и жирных кислот в патогенезе инфекционного процесса. Липиды в организме животного и человека.- М.: Наука, 1974.- 10с.

6. Алматов К.Т. Механизмы развития повреждений мембран митохондрий и роль липолитической системы. Автореферат. .д-ра биол. наук.- Ташкент.-1989.-38с.

7. Антонов В. Ф., Князев Ю. А., Мошковский Ю. Ш. Липосомы и их взаимодействие с клетками и тканями. М.: Наука, 1981.- С. 3-9.

8. Аристархова С.А., Бурлакова Е.Б., Храпова Н.С. Влияние введенного токоферола на его метаболизм в липидах и на уровень природных антиоксидан-тов. Липиды в организме животных и человека.- М.- 1974.- С. 20-23.

9. Арчаков А.И., Панченко Л.Ф., Карузина И.И., Александрова Т.А. Действие ССЦ на ферментативные системы эндоплазматического ретикулума печени. //Биохимия. 1969. Т. 34, №3. - С. 604-609.

10. Ю.Асадов Ч.Д., Нумерова Л.С., Мирзоева М.Э. Связь между фагоцитарной функцией и цитохимическими показателями нейтрофилов крови. //Лаб. дело. -1990.- №11. С. 19-21.

11. П.Банкова В.В. Роль малонового диальдегида в регуляции перекисного окисления липидов в норме и при патологии: Автореферат. .д-ра биол. наук.- М.-1990.- 42с.

12. Барсуков Л.И. Липосомы. Соровский образовательный журнал. — 1998. -№10.-С. 2-9.

13. Бахов Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н. с соавт. Нейтрофилы, их роль в регуляции метаболизма тканей.// Успехи современной биологии.- 1987.- Т. 104. Вып. 215.- С. 281-293.

14. М.Белокуров Ю.Н., Рыбачков В.В., Панков А.Г. Об эндогенной интоксикации при острой печеночной недостаточности и возможностях её устранения. //Вестн. хирургии им. Грекова, 1985. Т. 134, №1. - С. 60-64.

15. Бергельсон Л.Д. Мембраны, молекулы, клетки.- М.: Наука, 1982.-183с.

16. Березин В.Э., Зайдес В.И., Миллер Г.Г. с соавт. Использование нового неионного детергента МЭСК для выделения и реконструкции в липосомы гли-копротеидов вируса Сендай // Молекул, генет., микробиол и вирусол. М., 1984.-№2.-С. 36-41.

17. Березовская Л.Н., Грязнова Н.С., Баирамашвили Д.И. Проблемы создания липосомальных лекарственных форм антибиотиков // Антибиотики и химиотерапия. 1990.-Т.З 5, №10. С. 31-35.

18. Бирюзова В.И. с соавт. Электронномикроскопические методы исследования биологических объектов. АН СССР. - М., 1963. - С. 19-22.

19. Блюгер А.Ф. Структура и функция печени при эпидемическом гепатите. Рига: Изд-во А.Н. Латв ССР, 1964, 176с.

20. Болдырев А.А., Курилла Е.Г., Павлова Т.Н. Биологические мембраны, М., 1992.-С. 124.

21. Болтова М.А., Майоре А.Я. и др. Изменение структуры и функции лизосом при воздействии на печень крыс четыреххлористого углерода: В кн: Гастроэнтерология. Рига, 1972, С. 15-21.

22. Бондарь З.А. Клиническая гепатология. М.: Медицина. 1970, 407 с.

23. Бруслик В.Г., Малюгин Э.Ф. и др. Использование взвеси клеток аллогенной печени в лечении печеночной недостаточности. — В кн: Патогенез и методы лечения печеночной недостаточности. М., 1979, С. 32-37.

24. Будкер В.Г., Вахрушева Т.Е., Киселева Е.В., Христолюбова Н.Б. Получение липосом с лекарственными препаратами.//Хим. фарм. Журн. - 1987. - Т. 21, №3.-С. 347-352.

25. Бурлакова Е.Б., Хохлов А.П. Биологические мембраны.- 1985.- Т.2.- С.557-565.

26. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г., Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты.//Успехи химии,- 1985.- №9.- С. 1540-1558.

27. Бурлакова Е.Б., Губарева А.В., Архипова Г.В., Рогинский В.А. Модуляция перекисного окисления липидов биогенными аминами в модельных системах // Вопр. мед. химии. 1992. - Т. 38, №2. - С. 17-20.

28. Бурханов С.А., Саатов Т.С. Липосомы как эффективные иммуноадъюванты // I Всесоюз. иммунол. съезд (Сочи, 15-17 нояб.; 1989); Тез. секц. и стенд, сообщ. Т.1.-М., 1989.-С. 23.

29. Бурчинский Г.И., Грицюк А.И., Губергриц А .Я. и др. Клиническая гастроэнтерология. -Киев: Здоров я, 1978. 640 с.

30. Владимиров Ю.А. Роль нарушений, свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов // Патол. физиология и экспериментальная терапия. 1989. - №4 С. 7-9.

31. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: «Наука». — 1972. — С.252.

32. Владимирский М.А., Ладыгина Г.А., Тенцова А.И. с соавт. Получение липосомальных препаратов стрептомицина и дигидрострептомицина // Антибиотики. 1984. - №3. - С. 163-166.

33. Владимирский М.А., Ладыгина Г.А., Тенцова А.И. Эффективность стрептомицина, включенного в липосомы, при экспериментальном туберкулезе у мышей // Антибиотики. 1983. - №1. - С.23-26.

34. Власов B.C., Салов В.Ф., Торчилин В.П., Бердичевский В.Р. Липосомы и перспективы их использования в прикладной иммунологии // ЖМЭИ. — 1982.-№8.-С. 12-19.

35. Воробьев М.С., Гуринович Н.А., Кисилев П.А. с соавт. Способ встраивания инсулина в липосомы.: А.с. № 1345398, СССР, 1985.

36. Гальперин Э.И., Семендяева Е.Н., Неклюдова Е.А. Недостаточность печени. -М.: Медицина, 1978. 328с.

37. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов Л.А. Общие механизмы токсического действия. М.: Медицина, 1986 - 276с.

38. Голубчикова Н.А., Сидоров В.Н., Крейнес В.М. с соавт. Взаимодействие липосом различного состава с компонентами сыворотки крови // Вестн. акад. мед. наук СССР. 1990. - №6. - С.36-38.

39. Грегориадис Г. В кн.: Липосомы в биологических системах. М. 1983, С. 6.

40. Громова Г.К. О совершенствовании унифицированного метода определения активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови // Лаб. дело. 1983. -№10.-С. 28-50.

41. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени. Киев, 1989. С. 11-14.

42. Гуляев А.Е., Ермекбаева Б.А., Кивман Г.Я. с соавт. Наночастицы как вектор направленного транспорта антибиотиков (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. 1998. - №3. — С. 3-6.

43. Давиденкова Е.Ф., Розенберг О.А., Шварц Е.И. Латентная активность креа-тинфосфокиназы в липосомах // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1978. - №6. - С. 673-675.

44. Дикий И.Л., Стрельников Л.С., Чуешов В.И. с соавт. Эктерицид как дисперсионная среда для получения клинических перспективных липосомальных лекарственных форм // Вестн. акад.- мед. наук СССР. 1990. №6. - С. - 4144.

45. Дикий И.Л., Яковенко В.Д., Стрельников Л.С. с соавт. Дисперсионная среда для получения липосом: А.с. №1637085, СССР, 1988.

46. Дудниченко А.С., Краснопольский Ю.М., Швец В.И. Липосомальные лекарственные препараты в эксперименте и клиники. Харьков. Изд. группа «Ра-Каравелла».-2002. - С. 101-119.

47. Ефременко В.И. Липосомы (получение, свойства, аспекты применения в биологии и медицине). Ставрополь, 1999. - 263с.

48. Ефременко В.И. Липосомы (получение, свойства, аспекты применения в биологии и медицине). // Деп. в ВИНИТИ. 18.12.98., №3733 В98. - 263с.

49. Ефременко В.И., Кузякова Л.М., Таран Т.В. с соавт. Физико-химические и биологические свойства липосом. Ставрополь, 1999. - 39 с. - Рус. - Деп. в ВИНИТИ 5.02.99., №384-В99.

50. Ефременко В.И., Кузякова Л.М., Таран Т.В., Курилова А.А. Строение, функции, свойства биомолекул, способных формировать бислойную мембрану липосом. Ставрополь, 1999, - 25с. - Рус.- Деп. в ВИНИТИ 5.02.99., №383 -В99.

51. Ефременко В.И., Таран Т.В., Кузякова Л.М. с соавт. Иммобилизация в липосомы веществ различной химической природы. Стерилизация и стабилизация липосом. Ставрополь, 2000. - 46с.

52. Ефременко В.И., Таран Т.В., Кузякова JI.M. с соавт. Методы приготовления липосом. Иммобилизация в липосомы различных веществ, стерилизация и лиофилизация липосом // Деп. в ВИНИТИ. 11.12.98а, №3636-В98. 76с.

53. Иванов И.И., Коровкин Б.Ф., Маркелов И.М. Введение в клиническую энзи-мологию. "Медицина".- Ленинград.- 1974.- 277с.

54. Каган В.Е., Орлов О.Н., Примепко Л.Л. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. Биофизика (Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР).-М.- 1986.- 136с.

55. Каган В.И., Скрыпин В.И., Сербинова Е.А. и др. Локализация а- токоферола в гидрофобной зоне липидного бислоя. Докл. Академии наук СССР.- 1986.Т. 288.-№5.- С. 1242-1245.

56. Каледин В.И., Попова Н.А., Стеценко А.И. с соавт. Противоопухолевая эффективность свободного и заключенного в липосомы плаксанта у мышей линии А/Не с метастазами опухоли ГА-1 в печени // Эксперим. онкология. -1993.-Т. 15, №5.-С. 75-77.

57. Каледин В.И., Стеценко А.И., Цимбалист В.Г. с соавт. Распределение платина в липосомах в организме мышей линии A /HeJ и его общая токсичность / Эксперим. онкология. 1992. - Т. 14, №1. с. 69-72.

58. Калеткина Л.Г. В кн.: Экспериментальная патология печени. Душанбе, 1973.-С. 151-171.

59. Калимурзина Б.С. Состояние функции почек при экспериментальном остром отравлении четыреххлористым углеродом. Гигиена труда и профессиональные заболевания., 1972. - №8. - С. 50-52.

60. Калинин А.В. Достижения в лечении хронических болезней печени с применением эссенциальных фосфолипидов// Ж.гастроэнтерология, гепатологии, колопроктологии. 1998. - Т.8. №2. - С. 89-92.

61. Камышников B.C. Справочник по клинико- биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. Издательство "МЕД пресс-информ". Москва.-2003.- 920с.

62. Карлинский В.М. Диагностическое значение фосфатазы сыворотки крови при заболеваниях печени. Клиническая медицина. — 1984. №5. - С. 66-70.

63. Карменский В.М. Диагностическое значение фосфатазы сыворотки крови при заболеваниях печени. Клиническая медицина.- 1984.-№5.- С. 66-70.

64. Кикути Хироси, Иноуэ Кэйдзо. Липосомы: свойства и применение. Юкага-ку, 1985.- Т.34, №10.- С. 784-798.

65. Кобринский Г.Д. Липосомы — транспортеры лекарств // Изд-во «Знание». — М., 1989.-49 с.

66. Козинец Г.И., Высоцкий В.В., Погорелов В.М. с соавт. Кровь и инфекция. М.- 2001.- 456с.

67. Комаров Ф.А., Коровкин Б.Ф., Меньшиков В.В. Биохимические исследования в клинике. "Медицина".- Ленинград.- 1999.- 407с.

68. Копылова Т.Н. Процессы перекисного окисления липидов и антиокислительная система печени крыс при остром отравлении четыреххлористым углеродом. С.-х. биол. Сер. Биол. животных. 2000. - №4. С. 74-77.

69. Крейнес В.М., Мельникова В.М., Марголин Я.М. с соавт. Противовоспалительные эффекты липосом // Вестн. акад. мед. наук СССР. 1990. - №6. -С. 44-47.

70. Кузякова Л.М., Ефременко В.И. Медикаментозная преодоление анатомических и клеточных барьеров с помощью липосом. — Ставрополь, 2000. — 169с.

71. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. М.: Медицина. 1974. - С. 132-134.

72. Левчук Ю.Н., Воловик З.Н. Размеры лецитиновых липосом, образующихся при воздействии ультразвука // Биофизика. — 1983. — Т. 28. — В. 2. — С. 266269.

73. Лилли Р. Патологическая техника и практическая гистохимия. М., 1969. -645 с.

74. Лось Г.В., Стефанов А.В., Лишко В.К. Влияние компонентов крови на стабильность липосом // Укр. биохим. журн. 1985а. — Т.57, №4. - С.3-9.

75. Лось Г.В., Стефанов А.В., Лишко В.К. Устойчивость липосом с различными физико-химическими характеристиками к действию плазмы крови // Укр. биохим. журн. 19856. - Т.57, №4. - С.10-14.

76. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления. М.: Медицина. -2000.-434с.

77. Лужников Е.А., Шиманко И.И., Ишмухаметов А.И. Особенности лечения токсических поражений печени при острых экзогенных отравлениях // Сов. мед. 1980. - №3. - С. 20-26.

78. Любешкин А.В., Себякин Ю.Л., Евстигнеева Р.П. Изучение свойств модифицированных полимерных липосом, содержащих новый тип гликозилдиг-лицеридов // Биол. мембраны. 1993. - Т. 10, №4. С . 431-437.

79. Мазутов В.З., Зуев И.В. Влияние селенита натрия и витамина Е на некоторые показатели липидного обмена в эксперименте. // Мед. Журн. Узбекистан. 1979. - №4. - С. 59-62.

80. Мансуров Х.Х., Муратов Ф.К. Печеночная недостаточность. Здравоохранение Таджикистана, 1985. №1. С 12-22.

81. Марголис Л.Б. Механизмы взаимодействия липосом с клетками: перспективы и ограничения применения липосом в науке и практики. Биол. Мембраны. 1987. - №5. - С. 453-467.

82. Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д. Липосомы и их взаимодействие с клетками. М.: Наука, 1986. - 240с.

83. Маянский А. Н. Фагоцитоз: проблемы и перспективы. Вестн. Рос. АМН.-1993.-№4.- С.52-55.

84. Мелихов В. И. Влияние сальмонеллезного энтеротоксина на процессы ПОЛ и активность каталазы. Молекулярные механизмы развития инфекционного заболевания: Тез. Докл. всесоюзн. конф., 19-23 авг.- 1990.- Звенигород.-1990.- 65с.

85. Меркулов Г.А. Курс патологической техники. Изд. Мед.гиз. Ленинград. — 1961.-340с.

86. Методы биохимических исследований. Под ред. проф. Прохоровой М. И.Ленинград.- 1982.- 272с.

87. Мисетова Е.Н. Метаболические изменения в крови при различных способах введения липосом. Автореф. дис. . канд. мед наук ., 2002. - С. 160.

88. Морозкина Т.С., Сухомлинский В.Н., Стрельников А.В. Избирательное влияние комплекса витаминов Е, А, С на антиоксидантную защиту опухолевых и нормальных тканей // Вопр. мед. химии. 1991. - Т. 37, №6 С. 59-61.

89. Нагоев Б.С. Очерки о нейтрофильном гранулоците. Нальчик, 1986. -144 с.

90. Неговский В.А., Закс И.О., Коновалов Г.А. Коррекция острой печеночной недостаточности и нарушений дезинтоксикационных систем организмав критических состояниях. // Всесоюзный съезд анестезиологов и реаниматологов, 3-й. Рига. 1983. - С. 468-469.

91. Несытова Н.Ю., Палева Н.С., Ильина Е.В. и др. Тенденции в развитии исследований в области липосом (Обзор патентной литературы) // Вестн. акад. мед. наук СССР. 1990. - №6. - С.8-19.

92. Николаев А .Я. Биологическая химия. Высш. шк. 1989, С 232-260, 411-413,423-427.

93. Новиков Ю.В., Ноаров Ю.А. Гигиена и санитария. 1984. №4. - С.51-55.

94. Ойвин И.А. Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований // пат. физиология. 1960. - №4. - С. 76-85.

95. Остро М.Д. Липосомы // В мире науке. 1987. -№ 3. - С.71-79.

96. Подымова С. Д. Болезни печени. М.- 1993.- 544с.

97. Покровский А.А. (ред.) Биохимические методы исследования в клиники- М.: Медицина. 1977. - 168 с.

98. Покровский А.А., Крыстев Л.П. Печень, лизосомы, питание // София. -1977. С. 5-59.

99. Поляков В.С.Каротин липосомальный. Ж. «Медицинская картотека», 1998, №1.-С. 21.

100. Ремезов П.И. Воспроизведение болезней человека в эксперименте. М.: Медицина, 1960.

101. Рималис Б.Ц. Клиника, диагностика и интенсивная терапия гепаторе-нального синдрома при ингаляционных отравлениях ССЦ // Тер. арх. 1981.- №4. С. 93-98.

102. Ротов К.А. Включение антибиотиков и сульфаниламидных препаратов в липосомы // Тез. науч. докл. X обл. конф. молодых ученых медиков и врачей «Актуальные вопросы экспериментальной, клинической медицины». Волгоград, 1988.-С. 61.

103. Ротов К.А., Васильев В.П., Антонов Ю.В. Получение и характеристика липосом, содержащих антибиотики // Микробиол. журн. 1989. - Т. 51, №6. -С. 79-83.

104. Русаков В.И., Алимова Е.К., Локшин Л.С. и др. Экспериментальная хирургия и анестезиология. - 1974, №2. - С 41-44.

105. Сазыкин Ю.О., Навашин П.С. Липосомальные лекарственные формы антимикробных агентов // Тез. докл. II Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (10-15 апреля 1995). М., 1995. - С.183.

106. Саркисов Д.С., Ремезов П.И. Воспроизведение болезней человека в эксперименте — М. Медицина, 1960, 189с.

107. Севастьянов В.И. Биосовместимость. — М., 1999. — 368с.

108. Северин Е.С., Николаев А.Я. Биохимия // Москва. ГЭ отар-мед. — 2001. -С. 142-160, 181-220, 232-243,300-305.

109. Сергеев С.Г., Гилев А.Ф., Устьянцева И.М. с соавт. Влияние подкожного введения липосом на функциональное состояние органов и систем экспериментальных животных // Вест. Акад. мед. наук. СССР. 1990. - №6. - С. 32-36.

110. Смирнов А.А. Получение липосом методом обращения фаз и замораживанием оттаиванием // Бюлл. экспер. биол. и мед. — 1984. — Т. 97, №8. — С. 249-252.

111. Смирнов, М. И. Витамины.- М., 1974.- 495с.

112. Современные методы в биохимии. Под редакцией академика АМН СССР Ореховича В. Н.- М.: Медицина.- 1977.- 391с.

113. Соколов Ю.В., Лишко В.К. Влияние двухвалентных катионов и фузо-генных факторов на взаимодействие липосом с плоским фосфолипидным бислоем // Укр. биохим. Журн. 1980. - Т.52, №6. - С. 700-705.

114. Соринсон С. Н. Вирусные гепатиты. Издательство "Теза.- С.-Петербург, 1998. 262с.

115. Справочник Видаль (Vidal). Лекарственные препараты в России. Астра Фармсервис., 2006., 1632 с.

116. Стасенкова К.П., Бондарь Б.И., Анисова А.А. Изучение профилактического действия токоферола при интоксикации четыреххлористым углеродом на фоне различной обеспеченности водорастворимыми витаминами // Вопросы питания. 1981. - №2. - С. 35-40.

117. Стефанов А. В. Перспективы использования липосом в медицине. Биохимия животных и человека.- Киев.- 1983.- №7.- С. 33-36.

118. Стефанов А.В., Блюм Я.Б., Тютюнник В.Р. с соавт. Получение липосом, содержащих серотонин и их влияние на накопление с AMP в печени крыс // Укр. биохим. журн. 1986. - Т. 58, №3. - С. 47-53.

119. Сюч Н.И., Василенко И.А., Бабакова С.В. Оценка функциональной активности нейтрофилов крови человека // Тез. докл. 1 съезда иммунологов. -Новосибирск, 1992. 469 с.

120. Тефтюева Н.Б., Мещинин И.Ф. Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантных систем печени крыс при гепатите и действии настойки лапчатки прямостоячей. Мед. хим. — 2003 5, №4 С. 75-79.

121. Торчилин В.П., Бан-АноКо, Бердичевский В.Р. и др. Докл. АН СССР, 1979, Т.246, С. 746.

122. Торчилин В.П., Смирнов В.Н.Направленный транспорт лекарств с помощью липосом // Укр. биохим. журн. 1984. - Т. 56, №3. — С.339-345.

123. Тюрин-Кузьмин А.Ю. Метод приготовления липосом с большим внутренним объемом // Тез. докл II Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (10-15 апреля 1995). -М., 1995. С. 20-21.

124. Фабер Н.А., Кетиладзе Е.С., Губский Л.В. и др. Экспериментальная модель острой печеночной недостаточности. Успехи гепатологии: Риж. Мед. ин-т, 1982, вып. 10, С 87-98.

125. Хворостов И.Н. Экспериментальное фармакологическое и токсикологическое изучение липосомальных форм антибиотиков группы аминогликози-дов. Автореф. дис. . канд. мед. наук. - Волгоград, 2001. - 18с.

126. Холодова Е.А., Забаровская З.В., Данилова Л.И. Липосомы в диабетоло-гии // Пробл. эндокринологии. 1990. - Т. 36, №6. С. 80-83.

127. Чернявский В.А., Обухова Е.Л., Зеров Ю.П. Внедрение плазмидной де-зоксирибонуклеиновой кислоты в липосомы из тотального липида Е. coli и определение их стабильности // Биохимия. 1984. - В49, №1. — С.38-44.

128. Шалимов С.А., Кейсевич Л.В., Покрасен И.М., Теплый В.В. Моделирование острой печеночной недостаточности. Клинич. Хирургия. — 1984. №9. -С. 54-55.

129. Шаршунова М., Шварц В., Михалец Ч. Тонкослойная хроматография в формации и клиническая биохимия. М.: Мир, 1980. - 620с.

130. Швайкова М.Д. Токсикологическая химия М.: 1975, 78 с.

131. Швец В.И., Краснопольский Ю.М. Липиды в лекарственных препаратов // Вестн. Акад. мед. наук СССР. 1990. - №6. - С. 19-28.

132. Шевченко Е.В., Смирнова Е.Ю. с соавт. Фазовый переход липидов как способ регулирования проницаемости липосом //Фармация. 1993.- Т.42, №3. — С.7-13.

133. Шерлок Ш., Дж.Дули. Заболевания печени и желчных путей. М. ГЭО-Тар, Медицина. - 1999, С 19-21.

134. Шиманко И.И., Мусселиус С.Г. Острая печеночно-почечная недостаточность. Москва.: Медицина, 1993.

135. Шнейдер М. Способ получения липосом: Пат. №1158031, СССР, 1985.

136. Шубич М.Г., Нагоев Б.Ж. Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и патологии. М. 1980. - 274с.

137. Anner В.М., Marcus М.М., Moosmayer М. Reconstitution of Na, К AT-Pase //.Enzymes, Receptors and Carriers Bid. Membrans. Berlin, e.a., 1984. - P. 81-86.

138. Avgerinos A, Harry D, Bousboulas S et al. The effect of an eucaloric high carbohydrate diet on circulating levels of glucose, fructose and non-esterified fatty acids inpatiens with cirrhosis // S Hepatol. 1992; 14:78.

139. Bachhwat B.K. Liposome technology in medicinell Ann. Nat. Acad. Med. Sci. (India). -V. 22, № 2. P. 71-77.

140. Bangham A.D., Standish M.M., Watkins J.C. Diffusion of univalentions across the lamellae of swollen phospholipids // J. Md., Biol. 1965 - V. 13. - P. 238-252.

141. Barenholz Y., Amselem S., Lichtenberg D. A new meyhod for preparetion of phospholipid vesicles (liposomes) // FEBS Lett. 1979. - V. 99. - P. 210 - 214.

142. Beatty J.D., Beatty B.G., Paraskevas F. Liposome stimulation of anti BSA antibody production in micle // J. Surg. Res. - 1981. - V. 31, № 3. - P. 259 - 267.

143. Borges, Thone F., De Cree S., De Cock W. Alkaline phosphatase activiti in human polymorphononuclear leucocytes // Hystochem. 1978. - Vol. 10, Nol. -P. 31-43.

144. Breisblatt W., Ohki S/I/ Fusion in phospholipid spherical membrans. II. Effect of cholesterol, divalentions and pH // J. Membr. Biol/ 1976. - V. 29, № 2. -P. 127-146.

145. Brendzel A.M., Miller I.F. Effects of lipid-soluble substances on the thermo-tropic properties of liposome filtration // Biochim. et biophys. acta. 1980. - V. 601, №2.-P. 260-270.

146. Choquet C.G., Patel G.B., Beveridge T.J. Formation of unilammer liposomes from total polar lipid extracts of methanogens // Appl. and Environ. Microbiol. -1992. V. 58, № 9. P. 2894 - 2900.

147. Deamer D.W. Preparetion and properties of enter-injection liposomes // Ann. N.Y. Acad Sci. 1978. - V. 308. - P. 250 - 258.

148. Dijstra J., Ryan J.L., Szoka F.C. A Procedure for the effecient incorporation of wild-type lipopolysaccharide into liposomes for use in immunological studies // J. Immunol. Meth. 1988. - V. 114,№ 1-2.-P. 197-205.

149. Fevery J., Blanckaert N. What can we learn from analysis of the serum bil-erubin? // J. Hepatol. 1986; 2:113.

150. Finkelstein M.C., Weissman G. Variations in lipid composition determine liposomal integrity in biological fluids // Biochim. et biophys. acta. 1979. — V. 587.-P. 202-216.

151. Foliot A., Petite J.M., Husson J.M. et al. Biol, et gastroenterol // 1972, 5 № 3, p. 135- 143.

152. Gains N., Hauser H. Characterisation of small unilamellar vesicles prodused in unisonicated phosphatidic acid and phosphatidylcholine — phosphatidic acid dispertions by pH adjustment // Biochim. et biophys. acta. 1983. - V. 731. — P. 31-39.

153. Gerristen W.J., van Zoelen E.J., Verckley A.J. et al. Freeze-fraction appearance and disposition of band 3 protein from the human erithrocyte membrane in lipid vesicles // Europ. J. Biochim. 1978. - V. 85. - P. 255 - 261.

154. Goodwin G.C., Jones M.N. The incorporation of glycophorin into phospholipid liposomes effect of acyl-chain lenght on glycophorin-lipid interaction // Bio-chim. Soc. Trans. 1980. - V. 8, № 3 - P. 323 - 324.

155. Hamilton R.L., Goerke J., Guo L.S.S. et al. Unilamellar liposomes made with the french pressure cells: a simple preparative and semiquantitative technique // J.Lipid. Res. 1980. - V. 21 - P. 981 - 992.

156. Hauser H.O. The effect of ultrasonic irradiation on the chemical structure of egg lecithin // Biochim. and biophys. Res. Commun. 1971. - V. 45. - P. 1049 -1055.

157. Hauser H.O., Jrons L. The effect of ultrasonication on the chemical and physical properties of aqueous egg yolk lecithin dispertions // Hoppe Seyler's Ztshr physiol. Chem. - 1972. - V. 353. - P. 1579 - 1590.

158. Hernarder-Borrel I., Rons M., Inarer J.C. The action of Triton X-100 and sodium dodecylsulphate on lipid layers. Effect on monolayers and linosomes // J. Microencapsul. 1990. - V. 7, № 2. - P. 255 - 259.

159. Heuck C. Daerr W., Haberbosch W. et al. The surfance charge of-apolipopro-teins, phospholipid liposomes and human very low density lipoproteins // J. Biol. Chem. 1983. -V. 258, № 13. - P. 8317 - 8322.

160. Hub H.H., Zimmermann U, Ringstorf H. Preparetion of large unilamellar vesicles // FEBS Lett. 1982. - V. 140. - P. 254 - 256.

161. Ideo G., Del Ninno E., de Franchis R. Enzume. 1971, 12, p. 242 - 245.

162. Ishii M., Jkehara H. Tumor Res // 1973, № 8, p. 114 - 116.

163. Jizomoto H. Process for prepareting liposome compositions: Pat. № 4762720, USA, 1988.

164. Jizomoto H., Kanaoka E., Hirano K. Encapsulation of drugs by lyiphilized, empty dipalmitoylphosphatidylcholine liposomes // Chem. and Pharm. Bull. — 1989.-V. 37, №6. -P. 1895- 1898.

165. Johnston D.S., Sandhera S., Pons M., Chapman D. Phospholipid poly-merssynthesis and spectral characteritics // Acta biochem. et biophys. 1980. — V. 602.-P. 57-69.

166. Kanyor H.L., Prestegard J.H. Fusion of phosphatidylcholine bilayer vesicles. Role of free fatty acids // Biochemistry. 1978. - V. 17. - P. 3592 - 3597.

167. Kaplow L.S. A histochemical procedure for localizing and evaluating leukocyte alkaline phosphotase activity in smears of blood and marrowW Blood the j. of Hematolog. 1955. - NolO. - P. 1023-1029.

168. Kiwada H., Akimoto M. et al. Application of synthetic liposomes based on acylamino acids or acyl peptides as drug carriers. I. Their preparation and transport of glytathione into the liver // Chem. and Pharm. Bull. 1987. - V. 35, № 7. -P. 2935-2942.

169. Kremer J.M.H., Esker M.W.J., Pathamamanoharam C. Vesicles of variable diameter prepared by a modified injection method // Biochemestry. 1977. - V. 16.-P. 3933-3935.

170. Kimelberg H.K., Mayhew E., Papahadjopouls D. Distribution of liposome-entrappel cations in mice // Life Sci. 1975. - V. 17. - P. 715 — 723.

171. Lai J.Y., Chow D.D., Hwang К J. Effect of lipid composition on insulin-medisted fussion of small unilamella liposomes: a kinetic studi // J. Pharm. Sci. — 1988. V. 77, № 5. - P. 432 - 437.

172. Lasic D. Metode za karakterizacijo liposomov // Farm, vestn. 1980. - V. 31, №3.-P. 183- 186.

173. Lichtenberg D., Markello T. Structural characteristics of phospholipid multilamellar liposomes // J. Pharm. Sci. 1995. - V. 73, № 1. - P. 122 - 125.

174. Liposom Technology // Ed G. Gregoriadis, New York. 1986. - V. 1. - P. 268.

175. Love W.G., Amos N., Williams B.D. High perfomance liquid chromoto-graphic analysis of liposome stability // J. Microexapsul. — 1990. V.7, № 1. - P. 122-125.

176. Murphy TJ., Shamoo A.E. Reconstitution of Ca2 Mg2 - ATPase in giant vesicles // Biophys. J. - 1978. -V. 21. -P. 27.

177. Nordlung J.R., Schmidt C.F., Dicken S.N. Transbilayer distribution of phos-phatidylethanolamine in large and small unilamellar vesicles // Biochemestry. — 1981. V. 20. - P. 3237 - 3241.

178. Oku N., Nojima S., Inoue K. Selective release of nonelectrolytes from liposomes upon perturbation of bilayers by temperature change or polyene antibiotics // Biochim. et biophys. acta. 1980. - V. 595, № 2. - P. 277 - 290.

179. Olson F., Hunt C.A., Szoka F.C. et al. Preparation of liposomes of defined size distribution by extrusion through polycarbonate membranes // Biochim. et biophys. acta. 1979. - V. 557, № 1. - P. 9 - 23.

180. Pick U. Liposomes with a large trapping capability prepared by freezing // Arch. Biochem. et Biophys.- 1981.- V. 212. -P. 186-194.

181. Prescott L.F. Drug conjugation in clinicl toxicology // Biochem. Soc. Trans. -1984. Vol. 2, № 1. - P. 96 - 99.

182. Rosenthal P. The laboratory method as a variable in the diagnosis of hyperbi-linibinemia. Am Y. Dis Child 1987:141:1066.

183. Rosnowska M., Krawczynski J. Diag. Lab. // 1972, 8, № 4 p 353 359.

184. Ross D.J., Sharnick S.V., Oster K.A. Liposomes as a proposed of large unilamellar vesicles // FEBS Lett. 1982. - Biochim. et biophys. acta. 140. - P. 254-256.

185. Rudman D., Difuleo T.J., Galambos J.T. et al. Maximal rates of excretion and synthesis of urea in normal and cirrhotic subjects. // J. Clin. Invest. 1973; 52:2241.

186. Samuel D., Ratt R., Taylor A.G. Removal of liposomes with incompletely encapsulated enzume using a monoclonal anti-alkaline phosphatase immunosorbent // J. Immunol. Meth. 1990. - V. 131, № 1. - P. 153 - 154.

187. Schneeweiss В., Graninger W., Ferenei P. et al. Energy metabolism in patients with acute and chronic liver disease. Hepatology // 1990, 11:387.

188. Shimada M., Yanoga K., Makowka L., et al. Significance of leeithin: cholesterol acyltransferase activity as a prognostic indicator of early allograft function in clinicl liver transplantation // Transplantation 1989; 48:600.1. J40

189. Sunamoto J. Functionalized liposomes as biocompatible materials // Abstr. Pap: 194th ACSNat. Meet. (Amer. Chem. Soc.), New Orleans, La, Ayg. 30. Sept. 4, 1987. - Washington, D.C., 1987. - P. 301.

190. Ueno M., Kikuchi H., Katoh S. et al. Effect of coenzume Q10 and other additives on the stability and the size distribution of liposome obtained by ethanol injection method // Юкагаку. 1987. - V. 36, № 4. - P. 272 - 275.

191. Weiss U., Funes J., Karel M. Autooxidation of lecithin liposomes in the pre-sense of lysozyme // J. Agr. And Food. Chem. 1983. - V. 32, № 3. - P. 517 — 522.

192. Wu Tai Guang, Bellama J.M. Potentiometric enzyme amplified flow in-jenction analysis detection system: behavior of free and liposome - released peroxidase // Anal. Lett. - 1989. - V. 22, № 5. - P. 1107 - 1124.

193. Zaslavsky B.Y., Borovskaya A.A., Rogozhin S.W. Effect of lipid composition on hydrophyphobig properties of liposomes // Molec. cell. Biochem. 1984. -V. 60, № 2.-P. 131-136.

Информация о работе

Романова, Людмила Викторовна
кандидата биологических наук
Ставрополь, 2009
ВАК 03.00.04

Диссертация

Биохимические и цитохимические критерии в оценке эффективности использования липосомальных лекарственных препаратов при острой экспериментальной печеночной недостаточности, вызванной воздействием четыреххлористого углерода - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы