Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Гепатопротекторные свойства и метаболические эффекты липофильных продуктов растительного происхождения в эксперименте
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия
Автореферат диссертации по теме "Гепатопротекторные свойства и метаболические эффекты липофильных продуктов растительного происхождения в эксперименте"
На правах рукописи
Есауленко Елена Евгеньевна
ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА И МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЛИПОФИЛЬНЫХ ПРОДУКТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
03.01.04 - биохимия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
1 Ь СЕИ 2014
Ростов-на-Дону 2014
005552635
005552635
Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (г. Краснодар)
Научный консультант: Быков Илья Михайлович,
доктор медицинских наук, профессор
Официальные оппоненты: Мазо Владимир Кимович,
доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории пищевых биотехнологий и специализированных продуктов ФГБУ «НИИ питания РАМН» (г. Москва)
Муронец Владимир Израилевич,
доктор биологических наук, профессор, зав. отделом биохимии животной клетки НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова (г. Москва)
Микашинович Зоя Ивановна,
доктор биологических наук, профессор, зав. кафедрой общей и клинической биохимии с курсом органической и неорганической химии № 1 ГБОУ ВПО «Ростовского государственного медицинского университета» Минздрава России (г. Ростов-на Дону)
Ведущая организация: Российский национальный исследовательский
медицинский университет им. Н.И. Пирогова (г. Москва).
Защита диссертации состоится « 22 » октября 2014 г. в « 11-00 » часов на заседании диссертационного совета Д 212.208.07 в ФГАОУ ВПО «Южный федеральный университет» (г. Ростов-на-Дону, пр. Стачки 194/1, акт. зал).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГАОУ ВПО «Южный федеральный университет» по адресу: г. Ростов-на-Дону, ул. Зорге, 21, ж.
Автореферат разослан « & » ¿^////7572014 г.
Ученый секретарь диссертационного совета У/
кандидат биологических наук, с.н.с. Я ^ А Е.В. Асланян
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Функционирование органов и тканей организма, состояние его здоровья, адаптация к условиям внешней среды и, в том числе, резерв возможностей нейтрализовать вредные ксенобиотики во многом определяется химическим составом потребляемых продуктов питания, в составе которых, наряду с белками, важнейшими питательными веществами являются жиры. Количеством и качеством липофильных продуктов животного и растительного происхождения, поступающих в организм, в большой мере определяется спектр важнейших метаболических процессов и, в том числе, включение тех или иных химических веществ в клеточные и субклеточные структуры. Количество и состав липидов крови, а также клеточных мембран зависят от жирно-кислотного состава жиров в употребляемых продуктах. Состав поступающего в организм жира во многом определяет фосфолипидный состав мембранных структур клеток, что существенным образом характеризует их функциональные свойства и способность поддерживать структурную целостность. В этой связи, поиск мембранопротекторов, а применительно к теме нашего исследования -гепатопротекторов, был предпринят среди продуктов растительного происхождения, содержащих оптимальное соотношение фосфолипидов и полиненасыщенных жирных кислот. Печень занимает центральное место в процессах углеводного, белкового, липидного, пигментного метаболизма, а также в процессах детоксикации многочисленных веществ, попадающих в организм [A.B. Калинин, H.A. Петрук, 2011; C.B. Оковитый и соавт., 2012; А.П. Власов и соавт., 2013]. Ксенобиотики в печени подвергаются биотрансформации с образованием менее токсичных метаболитов, которые в дальнейшем переносятся транспортными белками и элиминируются из организма [А.И. Арчаков и соавт., 2008; Ю.И. Бородин и соавт., 2008; А.О. Буеверов, 2009]. Таким образом, печень участвует в поддержании биохимического гомеокинеза организма, обеспечивая слаженную работу метаболического конвейера, эффективность которого зависит, прежде всего, от состояния печеночных энзимных систем. Изменение ак-
тивности печеночных ферментов ведет к снижению детоксикационной функции печени, а также участия в биосинтезе фосфолипидов клеточных мембран, что приводит к нарушению их функционального состояния. Таким образом, воздействие на организм чужеродных веществ, обладающих токсическими свойствами, может оказывать значительное влияние на печень, приводящее к формированию ее токсического поражения [A.M. Di Bisceglie et al., 2007; Н.И. Ka-летина, 2008; B.C. Камышников, 2009; A.H. Курзанов, 2012; E.B. Лузина и co-авт., 2013].
Разнообразные по механизмам развития и клиническим проявлениям патологические изменения печени вызывают промышленные токсиканты, природные токсины, лекарственные средства, алкоголь, гепатотропные вирусы и другие факторы [Д.Е. Семенов и соавт., 2012; Ю.О. Шульпекова, 2012; С.С. Попов и соавт., 2013]. Поиск перспективных методов коррекции токсических поражений печени включает изучение препаратов-гепатопротекторов на основе эссен-циальных фосфолипидов (ФЛ), защитное действие которых связано с их ролью в восстановлении клеточных мембран гепатоцитов. Несомненный интерес представляют гепатопротекторы, содержащие полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК), которые получают из растительного сырья и морских организмов. Особое внимание уделяется роли ПНЖК в метаболизме липидов, поддержании текучести клеточных мембран, богатых полиеновыми кислотами. ПНЖК являются незаменимыми факторами пищи. Обладая разнообразной биологической активностью, они участвуют в адаптации организма к окружающей среде [Е.С. Киселева, 2008; В.В. Чумакова и соавт., 2012; М.С. Гинс и соавт., 2013]. Действие ПНЖК семейства со-3 и со-6 на липидный обмен человека и животных состоит в торможении биосинтеза в печени триацилглицеринов (ТАГ), угнетении образования активных форм кислорода и свободных радикалов. Эффекты широко известных препаратов на основе ФЛ и ТАГ остаются предметом многочисленных исследований. В то же время активно ведется поиск новых веществ природного происхождения, содержащих ПНЖК и другие соединения,
восстанавливающих структуру мембран гепатоцитов и нормализующих метаболические процессы в печени [Ж.Б. Дашинамжилов и соавт., 2008; В.И. Смо-льякова и соавт., 2011; М.А. Джавахян, Ю.С. Канунникова, 2012]. Существующие сведения о метаболических и структурных нарушениях при токсическом поражении печени (ТПП) не дают полного представления о возникающих при этом изменениях процессов перекисного окисления липидов, а также системы ферментов антирадикальной защиты в совокупности с функциональным состоянием главных пищеварительных желёз. В этой связи исследование патобио-химических механизмов острого ТПП и поиск возможных путей их коррекции представляется актуальным, как с позиции углубления знаний о формировании токсической печеночной недостаточности, так и в прикладном аспекте, включающем поиск и изучение липофильных продуктов растительного происхождения с известными и предполагаемыми гепатопротективными гиполипидемиче-скими и антиоксидантными свойствами. Выявление таких ценных биологических свойств в исследуемых растительных маслах и обоснование целесообразности их использования для гепатопротекции, нормализации метаболизма и про/ антиоксидантного статуса организма существенно повысит эффективность решения актуальной социальной и медико-биологической проблемы - коррекции и профилактики разнообразных патологических изменений печени. Использование липофильных продуктов растительного происхождения в качестве алиментарных факторов специализированного оздоровительного назначения внесет существенный вклад в успешное решение основных задач государственной политики в области здорового питания (распоряжение Правительства РФ от 25.10.2010 г. № 1873-р).
Объектом настоящего исследования стали липофильные вещества растительного происхождения, а предметом - их гепатопротективные свойства и метаболические эффекты. Направление поиска в значительной мере было обусловлено существующими в литературе сведениями о высокой биологической активности и лечебной эффективности липофильных продуктов растительного
происхождения, получаемых из плодов черного (Juglans nigra) и грецкого (Ju-glans regia) орехов, а также из семян льна (Lineum usitatissimum). Очевиден дефицит препаратов на основе растительных масел с установленным гепатопро-текторным действием, хотя среди известных продуктов растительного происхождения имеются растительные масла, изучение свойств и механизмов действия которых представляется перспективным, поскольку они значительно отличаются друг от друга по содержанию жирных кислот, жирорастворимых витаминов, фосфолипидов и других компонентов, способных оказывать гепато-протекторное действие [Н.В. Печерская и соавт., 2006; Е.В. Вайс и соавт., 2012]. В этой связи поиск новых веществ, способных устранять или уменьшать негативное воздействие токсикантов на организм, представлялся актуальным.
Цель исследования. Экспериментально обосновать целесообразность использования липофильных продуктов растительного происхождения, обладающих наиболее выраженными гепатопротекторными, антиоксидантными, метаболическими эффектами в качестве специализированных алиментарных факторов для защиты организма от воздействия токсикантов.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
1) Изучить химический состав и физико-химические свойства ряда липофильных продуктов растительного происхождения с предполагаемыми гепато-протективными, антиоксидантными и гиполипидемическими свойствами.
2) Дать оценку метаболической доступности липидов, входящих в состав исследуемых продуктов, по интенсивности их гидролиза липолитическими ферментами поджелудочной железы и тонкой кишки.
3) Оценить антиоксидантные свойства исследуемых растительных масел и фармпрепаратов на основе эссенциальных фосфолипидов.
4) Охарактеризовать спектр и выраженность метаболических и морфо-функциональных нарушений у экспериментальных животных с моделированием токсического поражения печени.
5) Проанализировать изменение содержания биохимических маркеров функционального состояния гепатоцитов: аланинаминотрансферазы, щелочной
фосфатазы, аспартатаминотрансферазы, у-глутамилтранспептидазы, билирубина в сыворотке крови крыс, получавших исследуемые вещества на фоне острой интоксикации четыреххлористым углеродом.
6) Охарактеризовать влияние масел черного и грецкого орехов, льняного масла, а также препарата «Фосфоглив» на состояние метаболизма белков, ли-пидов, углеводов, функциональное состояние желудочных и поджелудочных желёз, морфофункциональный статус печени у крыс с печеночной недостаточностью, индуцированной тетрахлорметаном.
7) Изучить состояние антиоксидантной системы у крыс с моделированием печеночной недостаточности и влияние исследуемых растительных масел и препарата «Фосфоглив» на процессы перекисного окисления липидов.
8) На основе полученных данных обозначить перспективы и обосновать целесообразность проведения клинических исследований по использованию изученных продуктов растительного происхождения для коррекции метаболических, структурных и оксидативных нарушений, возникающих при токсической печеночной недостаточности.
Научная новизна. В представленном исследовании впервые получены данные, позволившие провести сравнительный анализ химических и физико-химических характеристик ряда липофильных продуктов растительного происхождения (льняное, кукурузное, оливковое, подсолнечное масла, а также масло черного и грецкого орехов) и часто используемых препаратов гепатопротекто-ров («Эссливер форте», «Фосфоглив», «Эссенциале форте»).
Впервые исследована атакуемость различных растительных масел и гепа-топротекторов липолитическими ферментами в экспериментах с использованием гидролизных ячеек, а также получены данные о характеристиках антиокси-дантных свойств исследуемых продуктов с использованием липосомальных тест-систем.
Впервые произведен комплексный анализ нарушений белкового, липидно-го и углеводного обменов веществ, активности основных ферментных систем
гепато-гастро-панкреатического органокомплекса, системы про- / антиоксидан-ты, морфологических изменений печени, возникающих у экспериментальных животных при моделировании токсического поражения печени.
На обширном многоплановом экспериментальном материале проведено сравнительное изучение гепатопротекторных свойств и гиполипидемических эффектов исследованных веществ в условиях моделирования токсического поражения печени.
Впервые проведено сопоставление эффектов исследованных масел на биохимические параметры функционального состояния организма у животных с токсическим поражением печени. Получены доказательства позитивного влияния масел льна, черного и грецкого орехов на морфофункциональный статус печени и состояние метаболических процессов у животных с токсической печеночной недостаточностью. Обоснована целесообразность использования этих природных продуктов в качестве алиментарных факторов профилактического и лечебного назначения для защиты от воздействия токсикантов, нормализации метаболизма и про-/антиоксидантного статуса.
Научно-практическая значимость работы. На экспериментальной модели патологии печени у подопытных животных получены данные о выраженных гепатопротекторных свойствах масел льна, черного и грецкого орехов, что позволяет рекомендовать проведение клинических исследований по их применению в профилактике и лечении печеночной недостаточности в качестве компонентов оздоровительного питания.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Комплексный анализ химического состава липофильных продуктов растительного происхождения, их метаболической доступности и антирадикальных свойств позволяет осуществлять целенаправленный поиск новых веществ с гепатопротекторными свойствами.
2. Моделирование токсического поражения печени у крыс введением тет-рахлорметана вызывает сочетанные нарушения, заключающиеся в повреждении
гепатоцитов, изменении активности основных печеночных, желудочных и панкреатических ферментов, нарушении метаболизма белков, липидов и углеводов, активации процессов липопероксидации, дисбаланса антиоксидантной системы организма.
3. Использование масел черного, грецкого орехов и льна, а также фармпрепарата «Фосфоглив» у крыс с токсическим поражением печени обеспечивает восстановление структуры ткани печени, нормализацию нарушенных процессов углеводного, белкового и липидного обменов веществ, энзимных систем печени, желудка и поджелудочной железы, снижение процессов липопероксидации, нивелирование нарушений системы антирадикальной защиты.
4. Мультипараметрическое исследование масел черного, грецкого орехов и масла льна позволяет рассматривать их в качестве потенциальных алиментарных гепатопротекторов и рекомендовать для клинических испытаний в профилактике и терапии токсических поражений печени, а также фармацевтических исследований на предмет разработки новых гепатотропных препаратов.
Апробация результатов исследования. Материалы исследований, полученные в ходе выполнения диссертации, были представлены и обсуждались на научно-практической конференции с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Волгоград-Москва, 2006); V Европейском Конгрессе по астме (Москва, 2007); IV Международной конференции «Физиология и патология иммунной системы» (Москва, 2008); конгрессе «Человек и лекарство» (Краснодар, 2008); VII съезде аллегологов и иммунологов СНГ (Санкт-Петербург, 2009); Международной научно-практической конференции «Функциональные продукты питания: ресурсосберегающие технологии переработки сельскохозяйственного сырья, гигиенические аспекты и безопасность» (Краснодар, 2009); XIV и XV Российских конференциях «Гепатология сегодня» (Москва, 2009, 2010); II и 1П съезде физиологов СНГ (Кишинев, 2008; Ял та, 2011); XVII Международном конгрессе «Гепатология сегодня» (Москва, 2012); XVIII Российской гастроэн-
терологической неделе (Москва, 2012); XIV и XVII Международном Конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2009; Нью-Йорк, 2012); XIX Всемирном Конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2013); Ш Международной научно-практической конференции «21 век: фундаментальная наука и технологии» (Москва, 2014).
Публикации. По теме диссертации опубликована 51 научная работа, в том числе 23 публикации в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, получен 1 патент. Общий объем публикаций составил -6,67 п. л., личный вклад - 85 %.
Структура и объем диссертации. Работа изложена на 277 страницах, содержит 3 схемы, 21 таблицу, проиллюстрирована 38 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, главы, в которой представлены материалы и методы исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка используемых сокращений, списка литературы, содержащего 465 отечественных и 137 зарубежных источников.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В экспериментах были использованы 300 белых беспородных крыс-самцов с массой тела 170-220 граммов. Животные содержались в стандартных условиях университетского вивария. Их использование в эксперименте производилось с соблюдением норм и требований, регламентированных законодательством Российской Федерации и международными рекомендациями Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов в научных или иных целях [1986].
На первом этапе исследования было проведено моделирование токсического поражения печени с использованием трех различных гепатотоксикантов. В I варианте животным вводили 50% масляный раствор тетрахлорметана (СС14) (0,5 мл/100 г массы тела один раз в сутки в течение трех суток). Во II варианте животным вводили 40% водный раствор этанола в дозе 10 мл/кг массы тела в течение 7 дней в два приема с интервалом в 12 часов. В III варианте моделиро-
вания ТПП: крысам вводили внутрижелудочно парацетамол 2 раза в сутки в дозе 5 мг/кг массы тела в виде 1% суспензии крахмальной слизи в течение 7 дней. Животным контрольной группы вводили аликвоту физиологического раствора по тем же схемам. Часть крыс контрольной группы и групп с моделированием ТПП выводилась из эксперимента на 7-е сутки, а остальные - на 30-е сутки. Все биохимические и морфологические исследования были выполнены в день забора биоматериалов (крови, печени, желудка, поджелудочной железы). Подопытные животные были разделены на группы: Первая группа (I) - контрольная (50 крыс). Вторая группа - животные с моделированием ТПП, выведенные из эксперимента на 7-е сутки (75 крыс). Данная группа включала три подгруппы: (П) - моделирование ТПП путем введения СС14 (п=25); (Пэт.) - ТПП введением этанола (п=25); (Пп>р.) - ТПП введением парацетамола (п=25). Третья группа -животные с моделированием ТПП, выведенные из эксперимента на 30 сутки (75 крыс). В составе группы также выделяли три подгруппы: (Ш)- моделирование ТПП введением СС14 (п=25); (Шэт.) - ТПП введением этанола (п=25); (П1„,Р.) - ТПП введением парацетамола (п=25). Четвертая группа (IV) - животные с моделированием ТПП, вызванного введением СС14, получавшие масло черного ореха (п=25). Пятая группа (V) - животные с моделированием ТПП, вызванного введением СС14, получавшие масло грецкого ореха (п=25). Шестая группа (VI) - животные с ТПП, вызванного введением СС14, получавшие препарат «Фосфоглив» (п=25). Седьмая группа (VII) - животные с моделированием ТПП, вызванного введением СС14, получавшие льняное масло (п=25).
Исследуемые растительные продукты вводили внутрижелудочно в количестве 0,2 мл/сут. в течение 27 дней. Лиофилизированный фармпрепарат «Фосфоглив» вводили с помощью зонда в утренние и вечерние часы до основного кормления животных по 10 мг/кг массы тела животного 2 раза в сутки.
Биохимические исследования включали оценку гепатотропных и метаболических эффектов исследуемых гепатотоксикантов и липофильных продуктов растительного происхождения с использованием сертифицированного обору-
дования: анализатора LIVIA CORMAY (Италия), спектрофотометра UNICO 2800 UV VIS (США), фотоэлектроколориметра концентрационного КФК-2МП (Россия), микроскопа NIKON ECLIPSE Е200 (Япония). Функциональное состояние печени характеризовали по показателям активности аспартатаминотранс-феразы (ACT) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) унифицированным методом Райтмана-Френкеля с использованием стандартных наборов реагентов фирмы «Vital Diagnostics SPb» (Россия); щелочной фосфатазы (ЩФ) - унифицированным методом; у-глутамилтранспептидазы (у-ГТП) - унифицированным колориметрическим методом; содержания общего и прямого билирубина в сыворотке крови - методом Ендрассика-Гроффа [B.C. Камышников, 2009]. Состояние метаболизма углеводов оценивали по концентрации в крови глюкозы энзима-тическим колориметрическим методом по реакции Триндера, лактата - энзима-тическим колориметрическим методом, а пировиноградной кислоты (ПВК) -модифицированным колориметрическим методом Умбайта [Медицинские лабораторные технологии, 2002]. Метаболизм белков оценивали по содержанию в сыворотке крови общего белка методом Брэдфорда [Р. Доссон и соавт., 1991], альбумина (с использованием набора реагентов фирмы «Vital Diagnostics SPb», Россия) и фракций глобулинов - турбидиметрическим методом Олла и Мак-корда в модификации С.А. Карпюка [Камышников, 2009]. Метаболизм липидов характеризовали путем определения содержания в сыворотке крови общего холестерина (ОХС), триацилглицеринов (ТАГ), эфиров холестерина (ЭХС), не-этерифицированного холестерина (НЭХС) - методом Златкиса-Зака [B.C. Камышников, 2009], холестерина липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), используя наборы реагентов фирмы «Vital Diagnostics SPb» (Россия); холестерин липопротеидов низкой (ЛПНП) и очень низкой плотности (ЛПОНП) рассчитывали с помощью формул W.T. Fridwald (1972), липиды эритроцитов (общие и ФЛ) определяли методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии [М. Кейтс, 1975]. Состояние системы про-/антиоксидантов оценивали по активности каталазы [М.А Королюк с соавт., 1988], супероксиддисмутазы (СОД)
эритроцитов [В.А. Костюк и соавт., 1990] и уровню продуктов липопероксида-ции, взаимодействующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-РП) в сыворотке крови, используя набор реагентов фирмы «Vital Diagnostics SPb» (Россия). В гомогенате слизистой оболочки желудка определяли активность пепсина экспресс-методом Н.П. Пятницкого (1955), а в гомогенате ткани поджелудочной железы - активность трипсина методом Эрлангера-Шатерникова [A.A. Покровский, 1969] и химотрипсина методом Н.П. Пятницкого и М.Т. Проскурякова [1969]. Гистологическое и цитологическое исследование ткани печени позволили верифицировать ее изменения в условиях моделирования токсического поражения тетрахлорметаном. Кусочки ткани печени фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина на 0,1 М фосфатном буфере при pH 7,2- 7,4, обезвоживали проводкой через ряд растворов изопропанола восходящей крепости с последующей заливкой в парафин. Из полученных блоков готовили срезы толщиной 3 мкм, которые для приготовления гистологических препаратов окрашивали гематоксилином и эозином [Д.Э. Коржевский, A.B. Гиляров, 2005].
Для изучения гепатотропных эффектов растительных продуктов в условиях экспериментального ТПП были отобраны липофильные вещества с потенциальными гепатопротективными свойствами: масло черного ореха, масло грецкого ореха, льняное масло, эффекты которых сопоставляли с гепатотропными эффектами фармпрепарата «Фосфоглив». Химический состав липидов растительных масел исследовали после их экстрагирования из плодов черного и грецкого орехов с последующим определением их жирно-кислотного состава методом газожидкостной хроматографии на хроматографе Хром 5, йодного числа и массовой доли неомыляемых веществ [Лабораторный практикум по химии жиров, 2004]. Антиоксидантную активность липофильных продуктов оценивали в экспериментах in vitro с использованием модельной биохимической системы [В.Г. Зайцев, 2001] - по содержанию ТБК-РП в суспензии липо-сом, содержащих исследуемое масло или фармпрепарат. Метаболическую доступность исследуемых веществ определяли в опытах in vitro по интенсивности
липолиза растительных масел или фосфолипидных концентратов в составе фармпрепаратов в динамике через различные интервалы времени под действием ферментного препарата «Панинтестин», содержащего весь комплекс энзимов подаселудочной железы и двенадцатиперстной кишки.
Статистическую обработку экспериментального материала проводили в соответствии с методами вариационной статистики [А.Н. Герасимов, 2007] с использованием пакетов статистических программ «Microsoft Excel 2010» и STATISTIKA 6.0 for Windows. За достоверные различия в сравнении средних величин сравниваемых показателей брали t-критерий Стьюдента при р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В сравнительном аспекте был изучен химический состав и свойства известных растительных масел: подсолнечного, кукурузного, оливкового, менее известного - льняного и почти не исследованных - грецкого и черного орехов. На первом этапе исследования проводилось определение одного из важнейших показателей - йодного числа, которое характеризует степень непредельности жирных кислот, входящих в состав жира. Йодное число масел черного и грецкого орехов ранее не исследовалось, и, по нашим данным, этот показатель у масла черного ореха составил 140 г 12/100г, а у масла грецкого ореха - 152 г 12/100г. Сопоставление результатов собственных исследований, касающихся масел черного и грецкого орехов, с данными литературы, включавшими информацию о кукурузном, оливковом, подсолнечном и льняном маслах дало основание для формирования сравнительного ряда упомянутых видов масел по показателю йодного числа: льняное масло > масло грецкого ореха > масло черного ореха > подсолнечное масло > кукурузное масло > оливковое масло.
На втором этапе был проведен анализ жирно-кислотного состава изучаемых масел (табл. 1), который показал, что масла подсолнечника и кукурузы содержат насыщенные пальмитиновую и стеариновую жирные кислоты и ненасыщенные — олеиновую и линолевую. Оливковое масло содержало до 83% олеиновой жирной кислоты. Масло льна содержало в большом количестве со-6 ли-
нолевую и (о-З линоленовую ненасыщенные жирные кислоты. Высокая степень ненасыщенности льняного масла определяется тем, что более 70% жирных кислот в его составе имеют от одной до трех двойных связей. Анализ жирно-кислотного состава практически не изученного ранее масла черного ореха показал, что в его составе содержится до 28% олеиновой кислоты, примерно 3,3% пальмитиновой и 2,15% стеариновой кислот. Особенностью жирно-кислотного состава масла черного ореха является высокое (до 62,3%) содержание линоле-вой кислоты, а также значительно большее количество линоленовой кислоты по сравнению с подсолнечным, кукурузным и оливковым маслами. Особенностью жирно-кислотного состава масла грецкого ореха является содержание в его составе почти 63% линолевой, 10,75% линоленовой и 16,8% олеиновой кислот. Масло грецкого ореха беднее масла черного ореха по содержанию олеиновой кислоты, но в 3 раза превосходило его по содержанию линоленовой кислоты.
Таблица 1
Содержание жирных кислот (в % к сумме кислот) и массовая доля
неомыляемых веществ в составе изучаемых масел
Виды растительных масел Условные обозначения жирных кислот Неомы-ляемые вещества (в %)
^18:2 С18:3 Си:1 Сил С20:1 Сы:0 С1«:0 С18:0
Черного ореха* 62,32 3,10 28,02 0,03 0,38 0,02 3,29 2,15 0,53*
Грецкого ореха* 62,95 10,75 16,81 0,19 0,14 0,02 6,49 2,33 0,20*
Льняное* 12-г 20,7 41+57,5 22+28,4 — — — 4,3+5,8 4,2+4,9 0,4+0,7*
Оливковое" 7+18,1 0,3+0,5 68,9+83 0,9+1,8 — — 6,0+11,3 1,2+4,0 2,8+7,3*
Подсолнечное* 50+75 — 14+35 Следы — Следы 3,0+10,0 1,0+10,0 0,5+0,9*
Кукурузное* 48+56 0,5+0,8 23+49 0,2+0,3 до 1,7 до 2,5 оо до 6,2 0,2+2,5*
Обозначения: С18:2 - линолевая; С|Х:з - линоленовая; С18:1 - олеиновая; С16:1 - пальмитолеино-вая; С2<>:1 - эйкозеновая; С^о - мнристиновая; С^ю - пальмитиновая; С^о - стеариновая; * -собственные данные; * - данные литературы [Лабораторный практикум по химии жиров,
Масла черного и грецкого орехов содержат значительно больше ПНЖК в сравнении с оливковым маслом, но уступают по содержанию мононенасыщенной олеиновой кислоты. В следовых количествах в маслах черного и грецкого орехов обнаружены лигноцериновая (С24:о), бегеновая (С22ю) И арахиновая (С2о:о) жирные кислоты. Анализ содержания неомыляемых веществ в исследуемых видах растительных масел показал, что по этому параметру масло черного ореха сопоставимо с подсолнечным, льняным и кукурузным маслами, но существенно уступает значению этого показателя в оливковом масле. Наименьшее содержание неомыляемых веществ зафиксировано в масле грецкого ореха.
Одним из факторов формирования патологических состояний является их усугубление за счет усиления процессов свободно-радикального окисления и нарушения баланса параметров про- / антиоксидантной системы. Это свидетельствует о целесообразности поиска путей фармакологической и диетологической коррекции такого дисбаланса, важным этапом которого является изучение эффектов химических соединений, позволяющее отобрать вещества с антиоксидантной активностью, что является одной из задач данной работы. Антиок-сидантные свойства исследуемых растительных масел сопоставляли по их эффектам с фармпрепаратами «Фосфоглив», «Эссенциале форте Н» и «Эссливер форте», основу которых составляют эссенциальные фосфолипиды (ЭФЛ), преимущественно фосфатидилхолин (ФХ) (табл. 2). Полученные в ходе исследования данные о влиянии растительных масел и фармпрепаратов на интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) свидетельствуют о наличии у них анти-оксидантных свойств разной степени выраженности. Изучаемые вещества достоверно снижали в эксперименте in vitro содержание ТБК-РП в липосомах в течение первых 12-ти часов. Полученные данные хорошо согласуются с существующими представлениями о механизмах антиоксидантного действия химических соединений, в состав которых входят ФЛ, ТАГ и другие вещества, содержащие ненасыщенные реакционноспособные двойные связи, способные гасить активность свободных радикалов, инициирующих ПОЛ, конкурируя за них с липидами и тем самым препятствуя их интенсивному окислению. Полу-
ченные результаты свидетельствуют об отсутствии у исследованных растительных масел и фармпрепаратов прооксидантных и наличие выраженных ан-тиоксидантных свойств. Это позволило сформировать сравнительный ряд изученных веществ по антиоксидантной активности: льняное масло>масло черного ореха> «Фосфоглив»>масло грецкого ореха>«Эссенциале форте»>«Эссливер форте»> подсолнечное масло > кукурузное масло > оливковое мас-ло>«Ретинола ацетат».
Таблица 2
Динамика содержания продуктов липопероксидации, взаимодействующих с ТБК в липосомах, содержащих исследуемые растительные масла или
Исследуемые масла и фарм препараты ТБК-РП, мкмоль/л (М ± ш)
Время окисления, час
3 6 9 12 24
Суспензия липо-сом (контроль) 15,41±0,06 20,76±0,17 25,60±0,19 28,99±0,27 29,68±0,16
Масло грецкого ореха 6,55±0,09* 8,40±0,12* 12,62±0,04* 19,46±0,09* 22,69±0,07*
Масло черного ореха 5,40±0,09* 6,52±0,08* 10,68±0,12* 17,71 ±0,05* 20,50±0,06*
Льняное масло 3,66±0,06* 5,63±0,05* 9,65±0,03* 16,80±0,02* 19,58±0,03*
Оливковое Масло 11,53±0,16* 14,37±0,15* 20,35±0,17* 25,64±0,23 29,40±0,20
Кукурузное масло 9,45±0,17* 12,33±0,17* 17,53±0,13* 23,70±0,15* 28,39±0,19
Подсолнечное масло 8,35±0,12* 11,96±0,16* 16,20±0,21* 22,43±0,16* 27,90±0,13
«Ретинола ацетат» 12,43±0,18* 16,62±0,35* 22,33±0,24 27,29±0,20* 32,12±0,30
«Фосфоглив» 6,09±0,01* 7,50±0,05* 11,75±0,07* 18,31±0,09* 21,65±0,05*
«Эссенциале форте» 7,09±0,11* 10,06±0,08* 14,08±0,05* 21,02±0,17* 24,25±0,19*
«Эссливер форте» 7,62±0,06* 10,65±0,07* 14,84±0,16* 21,23±0,19* 24,85±0,19*
Анализ полученных данных послужил основанием отбора для дальнейших исследований четырех наиболее перспективных продуктов растительного происхождения: масел льна, черного и грецкого орехов и препарата «Фосфоглив», обладающих наиболее выраженными антиоксидантными свойствами.
Природные вещества, поступающие в организм per os в составе пищи или лекарственных средств, характеризуются уровнем их биодоступности, зависящим от их способности трансформироваться до компонентов, которые могут быть усвоены и, следовательно, могут включиться в метаболические процессы. Такая трансформация определяется состоянием ферментативных систем желудочно-кишечного тракта, систем всасывания продуктов гидролиза и систем их ресинтеза с образованием компонентов, включающихся в обменные процессы организма. Применительно к объектам нашего исследования было необходимо оценить способность ТАГ и ФЛ растительных масел и препарата «Фосфоглив» гидролизоваться под действием липаз и фосфолипаз в тонкой кишке, поскольку это обстоятельство определяет эффективность включения компонентов ТАГ и ФЛ в обменные процессы организма и их последующие биологические эффекты. О метаболической доступности изучаемых веществ судили по интенсивности их липолиза in vitro под действием липаз в составе ферментного препарата «Панинтестин» (рис. 1).
—Масло черного ореха
н Масло грецкого ореха
Масло льняное
-Масло оливковое
-Масло подсолнечное
►-Масло кукурузное
-Эссенциале форте
нЭссливер форте
-й-Фосфотив
Рис. 1. Интенсивность липолиза исследуемых масел и фосфолипидных концентратов под действием ферментного препарата «Панинтестин».
Наболее интенсивно происходил липолиз льняного масла, ниже была скорость гидролиза масел черного и грецкого орехов, а липолиз кукурузного масла был наименее эффективным. Сравнительный ряд интенсивности липолитиче-
ского гидролиза исследуемых растительных масел выглядит следующим образом: льняное масло>масло грецкого ореха>масло черного ореха>подсолнечное масло>оливковое масло>кукурузное масло. Наибольшая интенсивность липо-лиза отмечена у препарата «Фосфоглив», несколько меньшая у «Эссенциале форте» и наименьшая у препарата «Эссливер форте».
На основе результатов изучения химического состава, интенсивности ли-политического гидролиза и антиоксидантных свойств растительных масел и ряда фармпрепаратов были отобраны наиболее перспективные продукты растительного происхождения с потенциальным гепатопротекторным действием (масла льна, черного и грецкого орехов), а также фармпрепарат «Фосфоглив» для изучения влияния исследуемых веществ на морфофункциональный статус печени и состояние метаболических процессов у крыс с моделированием ТПП.
Изучение биохимических показателей крови крыс позволило провести сравнительную оценку выраженности нарушений функционального состояния гепатоцитов при использовании трех различных моделей ТПП: при введении этанола, парацетамола и СС14 (табл. 3).
Таблица 3
Активность индикаторных и экскреторных ферментов сыворотки крови
крыс при моделировании ТПП, вызванного введением _ этанола, парацетамола, CCI,, (M±m)__
Исследуемые показатели Группы животных (п=25 в каждой группе) Сроки наблюдения
Контрольная (I) Введение этанола Введение парацетамола Введение СС14
ACT (U/л) 8,78±0,27 22,63±0,28* 22,35±0,31* 32,37±0,39* 7 суток
17,75±0,22* 17,94±0,34* 24,06±0,68* 30 суток
АЛТ (U/л) 8,62±0,25 24,69±0,50* 23,41±0,21* 53,62±0,50* 7 суток
18,38±0,28* 18,32±0,21* 41,19±0,44* 30 суток
Коэффициент де Ритиса АСТ/АЛТ 1,02±0,01 0,93±0,03* 0,96±0,02* 0,60±0,01* 7 суток
0,97±0,02* 0,98±0,02* 0,59±0,02* 30 суток
у-ГТП (U/л) 16,60±0,48 120,10±0,59* 121,45±0,71* 137,36±1,85* 7 суток
92,4±0,23* 95,4±0,86* 108,67±1,02* 30 суток
ЩФ (U/л) 87,51±0,49 93,96±0,42* 96,49±0,46* 102,22±0,72* 7 суток
88,51±0,48* 90,01±0,58* 91,21±0,46* 30 суток
Обозначения: * -р<0,05 по сравнению с контрольной группой.
Активность индикаторных (ACT и АЛТ) и экскреторных (у-ГТП и ЩФ) ферментов в сыворотке крови крыс существенно увеличилась при введении животным всех использованных гепатотоксикантов на 7-е сутки эксперимента. На 30-е сутки наблюдения активность этих ферментов достоверно уменьшилась по сравнению с показателями на 7-е сутки, оставаясь при этом существенно больше, чем у крыс контрольной группы. Зафиксированные изменения активности печеночных энзимов, а также повышение концентрации билирубина свидетельствуют о повреждающем действии на гепатоциты всех трех токсикантов. О преимущественном повреждении внешних мембран клеток печени свидетельствует значительное увеличение активности цитоплазматического фермента - АЛТ, по сравнению с изменением активности ACT, имеющего митохон-дрально-цитоплазматическую локализацию.
Исследование ключевого показателя пигментного обмена билирубина крови позволило зафиксировать достоверное увеличение его содержания в крови у крыс с ТПП, индуцированным введением СС14(рис. 2).
25
I группа II группа III группа
Рис. 2. Влияние острой интоксикации СС14 на содержание общего билирубина
и его фракций в сыворотке крови крыс. Обозначения: I группа - контрольная;
II группа - животные с ТПП ССЦ (7-е сутки эксперимента);
III группа - животные с ТПП ССЦ (30-е сутки эксперимента); *р < 0,05 по сравнению с контрольной группой.
На развитие транзиторного некроза части гепатоцитов указывает увеличение активности у-ГТП и ЩФ в крови крыс, а повышение концентрации билиру-
бина, преимущественно за счет его прямой фракции, позволяет заключить, что у подопытных животных имело место не только формирование синдрома цитолиза, но и развитие синдрома внутрипеченочного холестаза. Сравнительная оценка выраженности ТПП при использовании трех различных гепатотокси-кантов позволила сделать вывод о существенно более выраженном повреждении печени при введении крысам CCL, по сравнению с моделями, вызванными введением этанола или парацетамола. Все это предопределило выбор моделирования ТПП с использованием СС14 для проведения дальнейших экспериментальных исследований в рамках данной работы.
Наиболее вероятный механизм, объясняющий биохимические изменения в организме животных, подвергшихся воздействию ССЦ, состоит в развитии ок-сидативного стресса, модуляции апоптоза, повреждении мембран клеток, активации процессов перекисного окисления липидов свободными радикалами, образующимися при трансформации СС14 [Л.С. Козина и соавт., 2008]. Полученные нами данные во многом подтверждают эту точку зрения. У крыс II и III групп с интоксикацией СС14 выявлены достоверные признаки активации ПОЛ. Содержание ТБК-РП на 7-е сутки возросло на 74,8% (р<0,05), а на 30-е сутки эксперимента в 3,1 раза (р<0,05) превышало значение этого показателя ПОЛ в крови крыс контрольной группы.
Исследование антиоксидантной системы крови подопытных животных выявило существенный дисбаланс в работе ее ферментативного звена. Активность супероксиддисмутазы (СОД) в гемолизате эритроцитов крыс II группы составила 14,59±0,43 ед./г Hb, а в эритроцитах III группы животных -10,19±0,23 ед./г НЬ, что было меньше контрольных значений на 37,2% и 56,2% (р<0,05)
соответственно. Активность каталазы в гемолизате эритроцитов на 7-е сутки после введения крысам CCI, снизилась на 57,1% (р<0,05), а на 30-е сутки - на 60,2% (р<0,05) по сравнению с контролем. Причиной отмеченных изменений активности каталазы и СОД в эритроцитах крыс, вероятно, является избыточное количество активных форм кислорода и свободных радикалов, образующихся в условиях интоксикации ССЦ, вследствие чего происходит окисли-
тельная модификация функциональных групп энзимов, усиление процесссов их функциональной перестройки и деградации. Значение коэффициента катала-за/СОД на 30-е сутки эксперимента увеличилось на 36,1% (р<0,05) по сравнению с его величиной на 7-е сутки после затравки крыс СС14, что свидетельствует о тенденции к восстановлению сбалансированности ферментов первой и второй линий антирадикальной защиты организма подопытных животных.
Введение СС14 вызвало существенные нарушения метаболических процессов у подопытных животных (табл. 4). Изменения углеводного обмена проявились в снижении уровня глюкозы в крови крыс на 7-е сутки - на 27,8% (р<0,05), а на 30-е сутки - на 38,5% (р<0,05) по сравнению с контролем. Уменьшение содержания в сыворотке крови на 30-е сутки эксперимента ПВК на 23,3% (р<0,05), а лактата на 13,4% (р<0,05) отражало общую тенденцию развития гипогликемии, которая связана с нарушением процессов гликогенолиза и глюко-неогенеза в печени крыс с ТПП СС14.
Таблица 4
Влияние острой интоксикации ССЦ на концентрацию глюкозы,
лактата и пирувата в сыворотке крови животных, (М±ш)
Группы крыс (по п=25 в каждой) Глюкоза Лактат, ммоль/л Пировиноград-ная кислота, ммоль/л Соотношение лактат/ пируват
I (контрольная) 4,60±0,14 2,02±0,06 0,36±0,01 5,82±0,23
П (7 суток от начала эксперимента) 3,32±0,08* 1,90±0,02* 0,30±0,01* 6,49±0,14*
П1 (30 суток от начала эксперимента) 2,83±0,06*' 1,75±0,02*" 0,23±0,01** 7,75±0,24**
Обозначения: * - р<0,05 в сравнении с контролем; * - р<0,05 в сравнении со П группой.
Существенное возрастание интегрального коэффициента, отражающего соотношение концентрации лактата к ПВК, можно считать свидетельством преобладания в тканях анаэробного гликолиза над аэробным, что служит индикатором нарастания степени тканевой гипоксии.
Влияние тетрахлорметана на белковый обмен в организме подопытных крыс проявилось в возникновении выраженной гипопротеинемии (табл. 5).
Таблица 5
Изменение показателей белкового обмена у крыс контрольной (I) и опытных (II, III) групп при интоксикации животных тетрахлорметаном, (М±т)
Исследуемый показатель
Общий белок, г/л
Группы животных (п=25 в каждой группе)
I(контрольная)
74,09±0,97
II (7-е сутки)
58,58±0,64*
III (30-е сутки)
64,23±0,47*'
Альбумины, г/л
33,26±0,55
25,14±0,22*
29,01±0,23*"
Глобулины, г/л
41,53±1 13
33,44±0,66*
35,22±0,53*'
Соотношение альбуминов к глобулинам
0,82±0,05
0,76±0,02
0,83±0,02
Обозначения: * - р<0,05 в сравнении с контролем; * - р<0,05 в сравнении со II группой.
Достоверно уменьшилась концентрация общего белка, альбуминов, глобулинов. В наибольшей мере гипопротеинемия выявлялась на 7-е сутки эксперимента, а на 30-е сутки проявилась тенденция к увеличению содержания белка в крови по сравнению с 7-ми сутками наблюдения, что, по-видимому, можно рассматривать как проявление репаративных процессов в гепатоцитах.
Результаты исследования отдельных фракций глобулинов (рис. 3) сыворотки крови животных контрольной, II и III опытных групп свидетельствуют о снижении содержания а-глобулинов во II группе на 51,4% (р<0,05), у-глобулинов - на 32,7% (р<0,05) и увеличении содержания ß-глобулинов на 37,0% (р<0,05).
I группа И группа П1 группа
10%
' Альбумины ■ альфа-глобулины ■ бета-глобулины
• гамма-глооулины
Рис. 3. Распределение белковых фракций сыворотки крови крыс при моделировании острого токсического поражения печени в сравнении с данными контрольной группы животных в различные сроки эксперимента.
У крыс III группы содержание а-глобулинов в крови было на 72,2% (р<0,05) меньше их концентрации у контрольных животных, фракция ß-глобулинов увеличилась на 45,3% (р<0,05), что позволяет констатировать развитие у животных с интоксикацией СС14 диспротеинемии. Патобиохимиче-ские изменения белкового обмена у крыс с ТПП отражали нарушения белок-синтезирующей функции печени, формирования диспротеинемии и гипопроте-инемии, что, по-видимому, связано с нарушением морфофункционального статуса гепатоцитов вследствие их повреждения свободными радикалами, обуславливающими гепатотоксический эффект СС14.Верификация изменений ли-пидного обмена, возникающих при ТПП, в значительной мере базируется на данных исследования содержания в сыворотке крови ОХС и ТАГ [В.Н. Титов, Д.М. Лисицин, 2006]. Изменения липидного обмена у крыс с ТПП тетрахлорме-таном состояли, прежде всего, в выраженной гиперхолестеринемии, связанной как с увеличением содержания по сравнению с контролем ОХС на 30,0% (р<0,05), так и с увеличением его содержания в ЛПНП на 120% (р<0,05) при одновременном снижении холестерина (ХС) во фракции ЛПВП на 45,1% (р<0,05). По содержанию ХС в отдельных фракциях липопротеидов можно с высокой вероятностью судить о количестве самих липопротеидов в плазме крови [B.C. Камышников, 2009]. Это позволяет на основании полученных нами данных предполагать, что у подопытных животных имело место формирование вторичной дислипопротеидемии II а типа по D.S. Fridrickson (1967). У крыс с интоксикацией СС14 было выявлено угнетение процессов этерификации ХС. На 30-е сутки эксперимента содержание ЭХС в крови крыс уменьшилось на 31,1%, а концентрация НЭХС возрасла на 128,8% (р<0,05), что обусловило уменьшение значения коэффициента ЭХС/НЭХС в эти сроки наблюдения на 72,9% по сравнению с контролем. Угнетение процесса этерификации ХС связано с накоплением продуктов ПОЛ в липопротеидах и последующим нарушением распределения ОХС в липопротеидных частицах. Исследование содержания ТАГ показало, что у крыс II группы их концентрация в крови уменьшилась на
57,4% (р<0,05), а у животных III группы - на 66,7% (р<0,05) по сравнению с контрольной группой. Вероятно, наблюдаемое снижение концентрации ТАГ связано с блокированием синтеза эндогенных ТАГ в печени в следствии ее токсического поражения. Это подтверждается фактом снижения содержания ХС в ЛПОНП на 57,6% (р<0,05) у крыс II опытной группы и на 66,1% - у животных III группы по сравнению с контролем. Поскольку ЛПОНП синтезируются в печени и в их состав входят в значительном количестве ТАГ, то блокирование синтеза последних сопровождается уменьшением образования ЛПОНП.
Гепатотоксические эффекты СС14 опосредуются, прежде всего, его повреждающим действием на липидные компоненты мембран. Исследование ли-пидов мембран гепатоцитов очень сложно осуществить в условиях динамического наблюдения в проводимом нами эксперименте. В этой связи в качестве информационного эквивалента мы использовали мембраны эритроцитов, так как изменения их липидного спектра коррелируют с изменениями, происходящими в мембранах клеток паренхиматозных органов [B.C. Камышников, 2009]. В эритроцитах крыс с интоксикацией CCL, содержание ФЛ уменьшилось на 7-е сутки на 24,2% (р<0,05), а на 30-е сутки - на 46,3% (р<0,05) по сравнению с контролем. Количество НЭХС на 7-е сутки увеличилось на 19,3% (р<0,05), а на 30-е сутки - на 31,2% (р<0,05). НЭХС, являющийся компонентом клеточных мембран, влияет на диффузию белков и липидов, уменьшает подвижность жирно-кислотных остатков ФЛ. Соотношение НЭХС/ФЛ характеризует жесткость эритроцитарной мембраны [Л.Н. Лесникова, 2006]. На 7-е сутки эксперимента коэффициент НЭХС/ФЛ увеличился по сравнению с контролем на 56,3% (р<0,05), а на 30-е сутки - на 143,0% (р<0,05), что позволяет констатировать уменьшение проницаемости мембраны эритроцитов, повышение микровязкости, усиление ее жесткости.
Установлены выраженные изменения в содержании различных фракций ФЛ (рис. 4) наружного слоя мембраны эритроцитов у крыс с интоксикацией ССЦ, состоящие в замене фосфатидилхолина (ФХ) на сфингомиелин (СМ). Со-
держание ЛФХ внутри эритроцитарного мембранного бислоя превысило аналогичный показатель контрольной группы крыс на 26,1% (р<0,05). Перераспределение фракций ФЛ в мембране эритроцитов крыс, находящихся под воздействием тетрахлорметана, свидетельствует об активации фосфолипазы А2 в эритроцитах подопытных животных. Изменение концентрации ФЛ во внутреннем слое мембраны эритроцитов свидетельствует о развитии диспропорций в их соотношениях. Содержание ФЭА в эритроцитах 1П группы крыс уменьшилось на 34,2% (р<0,05), а количество ЛФЭА увеличилось на 123,1% (р<0,05). Содержание ФС у этой группы крыс превысило аналогичный показатель контроля в 2,5 раза. Коэффициент соотношения содержания в мембране эритроцитов ФЭА/ФС у крыс с интоксикацией СС14 был в 5,3 раза меньше, чем в контрольной группе животных. Изменение содержания ФЛ как во внутреннем, так и во внешнем слоях мембраны эритроцитов, вероятно, обусловлены не только активацией фосфолипаз, но и воздействием радикалов трихлорметина и хлорина, образующихся при метаболизме СС14.
I группа ШрушИ Ш группа
♦С:4.04_, ЛФХ; 1,16
Рис. 4. Распределение фракций фосфолипидов эритроцитов крыс с интоксикацией СС14 в сравнении с данными контрольной группы животных в %. Обозначения: ФИ - фосфатидилинозитол; ФС - фосфатидилсерин; СМ - сфингомиелин; ЛФЭА - лизофосфатидилэтаноламин; ФЭА - фосфатидилэтаноламин; ЛФХ - лизофосфатидилхолин; ФХ - фосфатидилхолин.
Полученные данные позволяют констатировать наличие у подопытных животных выраженных изменений фосфолипидного спектра мембран эритроцитов, дающих основание для заключения о возникновении в них глубоких структурно-функциональных нарушений под воздействием СС14.
Существующие представления о тесной функциональной взаимосвязи печени, желудка и поджелудочной железы, представляющих собой ведущий альянс секреторных структур пищеварительной системы, их тесной филогенетической общности, позволили предположить вероятность развития в условиях проводимого эксперимента токсического поражения не только печени, но и желудочных и поджелудочной желез. В этой связи нами был исследован ведущий показатель морфофункционального статуса желудочных и поджелудочной желез - синтез ими протеолитических ферментов. Под влиянием СС14 в тканях слизистой оболочки желудка крыс II группы достоверно (на 51,1%, р<0,05) снизилось содержание пепсина, а в ткани поджелудочной железы - трипсина (на 77,9%, р<0,05) и химотрипсина (на 69,9%, р<0,05) по сравнению с контрольной группой животных, что, с одной стороны, может быть следствием угнетения их секреции, а с другой - отражать изменения их каталитической активности. Оба эти процесса могут быть индуцированы свободно-радикальным повреждением белоксинтезирующих структур пищеварительных желез.
Результаты проведенных исследований позволили констатировать тот факт, что введение крысам СС14 вызвало существенные нарушения функционального состояния гепатоцитов, достоверные изменения метаболизма липи-дов, белков, углеводов, системы про-/антиоксидантов и, в первую очередь, ферментативного звена антирадикальной защиты организма, а также активности желудочных и панкреатических протеолитических энзимов.
В этой связи было проведено исследование морфологических характеристик ткани печени крыс с моделированием ТПП путем введения СС14. Морфологическая картина ткани печени крыс контрольной группы по данным гистологического исследования в целом соответствовала критериям нормы. Гистологическое исследование ткани печени крыс с интоксикацией СС14 показало существенные отличия в структуре органа экспериментальных животных этой группы по сравнению с контролем (рис. 5). Так, на 7-е сутки эксперимента на микропрепаратах были обнаружены множественные проявления нарушения структуры ткани печени: дискомплексация печеночных балок, очаговые некро-
зы, кариолизис (рис. 5, В) и кариопикноз гепатоцитов (рис. 5, А), жировая дистрофия клеток печени (рис. 5, Б).
*
¡¡Йу
щж
¡11
М- .V;» £5
А Б
Рис. 5. Микроскопическая картина печени крыс, подвергнутых интоксикации СС14 (7-е сутки эксперимента). Обозначения: окраска гематоксилином и эозином, хЗОО, иммерсия. Пояснения в тексте.
Наблюдалась картина микрососудистых изменений: микроциркуляторные стазы, отек стенок кровеносных сосудов, острая венозная гиперемия междолько-вых капилляров, эритродиапедез, периваскулярные инфильтраты из полиморфных лейкоцитов, набухание и десквамация эндотелия сосудов, местный гемо-сидероз.
На 30-е сутки эксперимента после введения крысам СС14 патоморфологи-ческие изменения микроструктуры печени оставались неоднородными и характеризовались преобладанием реактивных процессов, которые происходили в основном из интерстициальной соединительной ткани (рис.6).
-А
»
V
А Б В
Рис. 6. Микроскопическая картина ткани печени крыс с моделированием токсического поражения СС14 (30-е сутки эксперимента).
Обозначения: окраска гематоксилином и эозином, хЗОО, иммерсия. Пояснения в тексте.
Патоморфологическая картина ткани печени характеризовалась менее выраженными нарушениями гемодинамики, проявившимися в виде хронической венозной гиперемии по сравнению с 7-ми сутками. Нарушения структуры ткани печени проявлялись дезинтеграцией гепатоцитов в печеночных балках, преобладанием процессов хронического альтеративного воспаления, преимущественно в виде гидропической и жировой дистрофии и атрофии гепатоцитов
(рис. 6 А, В), а также бурой и цианотической индурации и цирроза ткани органа. В эти же сроки эксперимента в ткани печени животных с ТПП патоморфо-логические изменения характеризовались регенерационной гипертрофией гепа-тоцитов (рис. 6, Б), лимфоцитарной и гистиоцитарной инфильтрацией ткани органа, образованием вторичных (ложных) желчных протоков, пролиферацией грануляционной соединительной ткани.
Представленные патобиохимические и гистологические данные о нарушении морфофункционального статуса гепатоцитов убедительно свидетельствуют об эффективности проведенного моделирования ТПП.
При гистологическом исследовании ткани печени животных с интоксикацией СС14, получавших масла льна, черного или грецкого орехов (рис. 7), было выявлено следующее: структура долек в значительной мере восстановлена и хорошо выражена, печеночные балки имели характерное радиальное расположение, в отдельных участках сохранялась гиперемия междольковых капилляров, периваскулярные полиморфно-клеточные инфильтраты. Структура желчных протоков практически полностью восстановилась. В отдельных гепатоци-тах выявлялся лизис и пикноз ядер, зернистая дистрофия. Указка микроскопа установлена на восстановленные балочные структуры ткани органа.
А Б В Г
Рис. 7. Микроскопическая картина печени крыс с интоксикацией тетрахлорме-таном, получавших масло черного (А), грецкого (Б) орехов, льняное масло (В), препарат «Фосфоглив» (Г) (30-е сутки эксперимента).
Обозначения: окраска гематоксилином и эозином, х400, иммерсия.
Гистологическая картина ткани печени в группе крыс, получавших препарат «Фосфоглив» на фоне ТПП, на 30-е сутки наблюдения представляла собой хорошо выраженную структуру печеночных долек. Кровеносные сосуды, желчные протоки и подавляющая часть гепатоцитов патоморфологических из-
менений не имели. В немногих отдельных печеночных балках отмечали признаки жировой дистрофии и кариолизис гепатоцитов. Таким образом, введение в организм подопытных крыс исследуемых веществ способствовало восстановлению нормальной морфологической структуры печени, что свидетельствует о наличии у них гепатопротективных свойств. Однако на основании только лишь исследования морфологических перестроек ткани печени сложно оценить выраженность гепатопротективных свойств исследуемых веществ.
В этой связи были проведены углубленные биохимические исследования влияния растительных масел и препарата «Фосфоглив» на параметры маркеров функционального состояния печени у крыс с моделированием ТПП (табл. 6).
Таблица 6
Влияние исследуемых растительных масел или препарата «Фосфоглив»
на активность ферментов-маркеров морфофункционального состояния
гепатоцитов в сыворотке крови крыс с интоксикацией СС14 _ (30-е сутки эксперимента, М±т)_
Группы крыс (п = 25 в каждой группе) Исследуемый показатель
ACT, U/л АЛТ, U/л Коэффициент де Рн-тиса у-ГТП, U/л ЩФ, U/л
I(контрольная) 8,78±0,27 8,62±0,25 1,02±0,01 16,60±0,48 87,51±0,49
III (группа сравнения) 24,06±0,68* 41,19±0,44* 0,59±0,02* 108,67±1,02* 91,21±0,46*
IV (введение масла черного ореха) 16,35±0,52** 32,75±0,48*' 0,50±0,04*' 63,74±1,24** 89,63 ±0,52*'
V (введение масла грецкого ореха) 17,43±0,52** 35,55±0,48** 0,49±0,02** 65,44±1,26*" 91,67±0,51*'
У1(введение препарата «Фосфоглив») 12,87±0,61** 28,47±0,42** 0,45±0,02*" 54,85±1,11** 89,78±0,47*'
VII (введение льняного масла) 14,76±0,56*' 30,81±0,48*' 0,48±0,02*' 61,22±1,1*' 90,12±0,5*'
Обозначения: * - р<0,05 в сравнении с контролем; * - р<0,05 в сравнении с III группой
Введение в организм крыс с ТПП масла черного ореха сопровождалось снижением активности ACT на 32,0% (р<0,05), АЛТ - на 20,5% (р<0,05), у-ГТП - на 41,3% (р<0,05) по сравнению с величинами, наблюдаемыми у животных, не получавших исследуемые вещества. У крыс с интоксикацией СС14, получавших масло грецкого ореха, активность ACT уменьшилась на 27,6% (р<0,05), АЛТ - на 13,7% (р<0,05), у-ГТП - на 39,8% (р<0,05) по сравнению с аналогич-
ными показателями III группы крыс. Следует отметить, что значения активности ACT в эти сроки исследования превысили показатель контрольной группы крыс в 2 раза, а показатель AJIT - в 4,1 раза. В крови животных, получавших льняное масло либо препарат «Фосфоглив», также наблюдалось достоверное снижение активности ACT, AJIT и у-ГТП по сравнению с данными III группы крыс.Несмотря на достоверное уменьшение эффекта гиперферментемии, обнаруженного в группах животных, получавших масло черного и грецкого орехов, а также масло льна на 30-е сутки эксперимента, активность ACT, AJIT и у-ГТП не достигала их уровней, наблюдаемых в крови контрольной группы крыс.
У крыс всех групп, получавших исследуемые вещества, наблюдалось снижение содержания в крови общего билирубина преимущественно за счет его прямой фракции (рис. 8).
90 ■ общий белок ■ алъб\тлшы ■ глобулины
so
Группы I IX III IX" V VI VII
Рис. 8. Влияние исследуемых растительных масел или препарата «Фосфоглив» на содержание общего билирубина и его фракций в сыворотке крови крыс с моделированием острого токсического поражения печени. Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контролем, ** - р<0,05 по сравнению с III группой.
У животных, получавших масло черного ореха, содержание общего билирубина было ниже показателей III подопытной группы на 19,3% (р<0,05), а в сыворотке крови крыс, которым вводили масло грецкого ореха, - на 15,9% (р<0,05). При введении крысам льняного масла концентрация общего билирубина в сравнении с аналогичным показателем III группы животных оказалась
на 28,8% (р<0,05) ниже, а введение животным препарата «Фосфоглив» уменьшило его содержание при аналогичном сравнении на 36,2% (р<0,05).
Результаты исследования маркеров функционального состояния печени позволили сформировать сравнительный ряд изучаемых веществ по показателям выраженности гепатопротективных свойств в следующем порядке: «Фосфоглив» > льняное масло > масло черного ореха > масло грецкого ореха.
Таким образом, можно констатировать, что масла льна, черного и грецкого орехов, а также препарат «Фосфоглив» обладают существенными гепатопро-тективными свойствами, способствуя уменьшению проявлений токсических, цитолитических и холестатических эффектов СС14 у подопытных крыс.
Результаты влияния исследуемых веществ на углеводный обмен у животных с ТПП, вызванным тетрахлорметаном, свидетельствуют о тенденции к его нормализации и частичному восстановлению (табл. 7).
Таблица 7
Концентрация глюкозы, пирувата и л акта та в крови крыс с ТПП СС14 на фоне введения растительных масел или препарата «Фосфоглив», (М±т)
Группы крыс (п=25 в каждой группе) Глюкоза, ммоль/л Молочная кислота, ммоль/л Пировиноград-ная кислота, ммоль/л Соотпошепие-лактат/пируват
I(контрольная) 4,60±0,14 2,02±0,06 0,36±0,01 5,82±0,23
III (СС14, 30 суток от начала опыта) 2,83±0,06* 1,75±0,02 0,23±0,01* 7,75±0,24*
IV (введение масла черного ореха) 4,10±0,08*' 1,78±0,03 0,29±0,02*' 6,14±0,3**
V (введение масла грецкого ореха) 3,88±0,06** 1,77±0,4 0,2б±0,01** 6,81±0,30**
VI (введение препарата «Фосфоглив») 3,66±0,065** 1,73±0,02 0,27±0,01** 6,41±0,28**
VII (введение льняного масла) 4,20±0,06** 1,79±0,02 0,33±0,02* 5,42±0,30**
Обозначения: * - р<0,05 в сравнении с контролем; * - р<0,05 в сравнении с III группой.
Это выражалось в увеличении глюкозы в сыворотке крови, а также в изменении соотношения содержания лактата и пирувата за счет увеличения доли ПВК, что свидетельствует о преобладании аэробного пути окисления глюкозы над анаэробным. Наибольшее увеличение содержания глюкозы было в крови крыс, получавших масло льна, - на 48,4% (р<0,05), а наименьшее - получавших «Фосфо-
глив» - на 29,3% (р<0,05). Содержание ПВК в крови крыс с ТПП, получавших исследуемые вещества, существенно увеличилось по сравнению с показателями Ш группы. Наибольшим рост концентрации ПВК был у крыс, получавших льняное масло (на 43,5%), а наименьшим - у крыс, получавших масло грецкого ореха (на 13,0%). Полученные результаты позволяют констатировать, что при введении в организм подопытных крыс с моделированием ТПП масел льна, грецкого и черного орехов, а также лекарственного препарата «Фосфоглив» имело место частичное восстановление процессов метаболизма углеводов.
Под действием изучаемых растительных масел и «Фосфоглива» у крыс с экспериментальным ТПП произошли позитивные изменения параметров белкового обмена (рис. 9).
I группа
III группа
IV группа
группа
■ Альбумины ■ альфа-глобулины ■ бета-глобулины ■ гамма-глобулины
Рис. 9. Влияние исследуемых растительных масел или препарата «Фосфоглив» на белковый спектр сыворотки крови крыс с моделированием ТПП.
Концентрация общего белка в сыворотке крови животных увеличилась за
счет увеличения содержания фракции а-глобулинов и фракции альбуминов,
при этом уровень (3-глобулинов снизился.
Наиболее выраженные изменения белкового спектра сыворотки крови
зафиксированы у крыс, получавших льняное масло. Содержание а-глобулинов у них возросло на 100,6% по сравнению с III группой животных при одновременном снижении ß-глобулинов на 27,0% (р<0,05).
У крыс, получавших масло черного ореха, фракция а-глобулинов увеличилась на 54,8% (р< 0,05); у животных, которые получали «Фосфоглив», содержание а-глобулинов возросло на 69,5% (р<0,05), а в крови крыс, получавших масло грецкого ореха, - на 47,3%. Содержание у-глобулинов увеличилось у животных, получавших «Фосфоглив», на 10,6%, льняное масло — на 7,9%, масло черного ореха - на 7,3% (р<0,05). Содержание альбуминов увеличилось в крови крыс всех групп, получавших исследуемые масла и препарат «Фосфоглив».
Исследование содержания вторичных продуктов ПОЛ в сыворотке крови крыс с ТПП на фоне введения животным изучаемых веществ позволило выявить тенденцию к уменьшению их концентрации во всех группах животных по сравнению с аналогичным показателем III группы. У крыс, получавших масла льна, черного и грецкого орехов, уровень ТБК-РП снизился на 34,9%; 17,6% и 21,9% соответственно (р<0,05). Наименьшее понижение концентрации ТБК-РП зафиксировано у крыс, получавших «Фосфоглив», - на 11,1% (р<0,05).
Активность ферментов антирадикальной защиты в группах животных изменялась на данном этапе исследования однонаправленным образом (табл. 8). У крыс, получавших масло льна, активность каталазы превысила показатель группы сравнения на 89,4%, у животных, которым вводили «Фосфоглив», - на 33,0% (р<0,05), при этом активность СОД у них составила 125,5% по отношению к Ш группе животных. В эритроцитах крыс с ТПП, получавших масло черного ореха, активность каталазы превысила этот показатель у крыс III группы на 60,3%, а активность СОД - на 54,6% (р<0,05). У животных, получавших масло грецкого ореха, увеличение активности каталазы и СОД по отношению к группе сравнения составило 49,2% и 42,4% (р<0,05) соответственно. Приведенные результаты исследования позволяют констатировать, что снижение содержания ТБК-РП в плазме крови, а также тенденция к нормализации содержания энзимов антирадикальной защиты эритроцитов во всех группах животных, по-
лучавших исследуемые растительные масла или препарат «Фосфоглив», свидетельствуют об инактивации процессов ПОЛ, что было наиболее выражено в группе крыс, получавших льняное масло.
Таблица 8
Влияние исследуемых растительных масел или препарата «Фосфоглив» на
активность ферментов антирадикальной защиты эритроцитов крыс _с ТПП, (М±т)_
Группы подопытных животных (п = 25 в каждой группе) Исследуемый показатель
Каталаза, мкмоль/(мнн-г Hb) Супероксид-дисмутаза, ед./г Hb Соотношение каталаза/СОД
I (контрольная) 69,32±0,80 23,25±0,43 3,00±0,06
III (CCU, 30 суток от начала опыта) 27,62±0,43 10,19±0,23 2,75±0,08
IV (введение масла черного ореха) 44,28±0,44** 15,75±0,22** 2,81±0,08**
V (введение масла грецкого ореха) 41,22±0,42*' 14,51±0,23*' 2,84±0,06**
VI (введение препарата «Фосфоглив») 36,73±0,33** 12,79±0,20** 2,87±0,04**
VII (введение льняного масла) 52,31±0,42** 18,53±0,20** 2,82±0,06**
Обозначения: * - р<0,05 в сравнении с контролем; * - р<0,05 в сравнении с III группой.
Исследования влияния масел льна, черного, грецкого орехов и препарата «Фосфоглив» на активность протеолитнческих энзимов желудка и поджелудочной железы у крыс с острым ТПП показало, что активность пепсина у крыс, получавших масло льна, повысилась на 18,2% (р<0,05) по сравнению с животными III группы сравнения, активность трипсина увеличилась в 1,5 раза, а содержание химотрипсина - на 46,6% (табл. 9). У животных, получавших масло черного ореха, содержание пепсина увеличилось на 15,6% (р<0,05), трипсина в этой группе крыс возросло в 1,4 раза, а активность химотрипсина - на 44,3% по отношению к Ш группе. Употребление крысами масла грецкого ореха привело к повышению активности пепсина на 13,9%, трипсина - в 1,4 раза, химотрипсина - на 43,1% (р<0,05). Введение крысам препарата «Фосфоглив» инициировало повышение содержания пепсина в ткани желудка на 20,0% (р<0,05). Содержание трипсина при этом возросло в ткани поджелудочной железы на 159,8%, а химотрипсина - на 45,4% (р<0,05).
Таблица 9
Влияние исследуемых продуктов растительного происхождения или препарата «Фосфоглив» на активность протеолитическнх ферментов желудка _и поджелудочной железы у крыс с интоксикацией СС1), (М±т)_
Группы крыс п Пепсин, мг/г Трипсин, мг/г Химотрип-син, ед/г
I(контрольная) 25 1,45±0,06 22,68±0,22 1,36±0,04
III (ССЦ, 30 суток от начала опыта) 25 1,15±0,02 7,74±0,09 0,88±0,01
IV (введение масла черного ореха) 25 1,33±0,02** 18,67±0,13** 1,27±0,01*'
V (введение масла грецкого ореха) 25 1,31±0,02*' 18,95±0,21** 1,26±0,01*'
VI (введение препарата «Фосфоглив») 25 1,38±0,02** 20,11±0,17** 1,28±0,11**
VII (введение льняного масла) 25 1,36±0,01*' 19,47±0,17** 1,29±0,17**
Обозначения: * - р<0,05 в сравнении с контролем; * - р<0,05 в сравнении с III группой.
Содержание протеолитическнх ферментов в ткани поджелудочной железы и слизистой оболочки желудка в группах крыс с ТПП под влиянием исследованных растительных масел и препарата «Фосфоглив» на 30-е сутки эксперимента не отличалось от аналогичных показателей I группы крыс, что свидетельствует о восстановлении функционального состояния пищеварительных желез, которое было наиболее полноценным у животных, получавших льняное масло.
Полученные данные о состоянии липидного обмена у крыс с ТПП свидетельствуют, что при введении им масел черного и грецкого орехов, льняного масла или препарата «Фосфоглив» проявилась явная тенденция к уменьшению выраженности нарушений и нормализации метаболизма липидов в организме. Во всех подгруппах крыс содержание ОХС и НЭХС в сыворотке крови достоверно уменьшилось по сравнению с Ш группой сравнения. Наиболее значительное снижение концентрации ОХС (на 17,5%) и НЭХС (на 38,2%) наблюдалось у животных, получавших льняное масло.
Анализ распределения ХС показал, что его содержание во фракции ЛПНП у крыс, получавших исследуемые масла или «Фосфоглив», достоверно уменьшилось по сравнению с III группой крыс с ТПП. Наиболее выраженный эффект снижения ХС в ЛПНП наблюдался у крыс, получавших льняное масло (на 47,4%) или масло черного ореха (на 40,6%). В то же время содержание холестерина в ЛПВП значительно увеличилось. Максимальное увеличение ХС в ЛПВП
было у животных, получавших льняное масло (на 80,1%). Содержание ХС в ЛПВП у крыс, получавших масла черного и грецкого орехов, превысило этот показатель в III группе на 66,0% и 58,0% соответственно. Содержание ХС в ЛПОНП у крыс, получавших масла черного и грецкого орехов, было больше, чем у животных III группы в 1,9 и в 1,7 раза соответственно, а у крыс, получавших масло льна, - в 2 раза (р<0,05), что практически соответствовало значению этого показателя у крыс контрольной группы.
Содержание ТАГ в крови животных, получавших масла льна, черного или грецкого орехов, достоверно превысило этот показатель у крыс III группы на 202,0%, 195,1% и 178,3% соответственно. У крыс, получавших масло льна, черного или грецкого орехов, уровень ТАГ на 30-е сутки эксперимента статистически не отличался от их содержания в крови животных контрольной группы.
У животных с интоксикацией ССЦ, которым вводили изучаемые вещества, зафиксировано увеличение содержания ФЛ по сравнению с группой крыс с ТПП, не получавших исследуемые вещества (табл. 10).
Таблица 10
Содержание липндов в эритроцитах крыс с токсическим поражением печени ССЦ на фоне введения подопытным животным исследуемых _растительных масел или препарата «Фосфоглнв», (М±т)_
Группы крыс (п=25 в каждой группе) Лнпиды зрит роцитов, % Соотношение НЭХС/ФЛ
ФЛ НЭХС
I (контрольная) 40,11 ±0,62 59,89±0,62 1,51 ±0,04
III (сравнения) 21,52±0,30 78,57±0,81 3,67±0,06
IV (введение масла черного ореха) 28,73±0,27** 74,29±0,72** 2,59±0,06**
V (введение масла грецкого ореха) 27,22±0,30** 73,81±0,80** 2,71±0,06*'
VI (введение препарата «Фосфоглив») 25,42±0,25** 76,11 ±0,78*' 2,99±0,06*'
VII (введение льняного масла) 33,87±0,27** 65,73±0,72** 1,94±0,06**
Обозначения: * - р<0,05 в сравнении с контролем; * - р<0,05 в сравнении с III группой.
Наибольшее увеличение ФЛ в гемолизате эритроцитов выявлено у животных, получавших масло льна (на 57,4%, р<0,05). У всех подопытных крыс, которым вводили изучаемые масла или «Фосфоглив», в гемолизате эритроцитов снизилась концентрация НЭХС, что логично отразилось на снижении коэффициента НЭХС/ФЛ в сопоставлении с его величиной в группе сравнения.
Рис. 10. Содержание фракций ФЛ в эритроцитах крыс с ТПП на фоне введения животным исследуемых растительных масел или препарата «Фосфоглив».
Содержание СМ в эритроцитах этих животных наоборот заметно уменьшилось. Замещение СМ на ФХ свидетельствует об увеличении текучести мембраны эритроцитов, что отражает сходные процессы в мембранах других клеточных элементов, включая гепатоциты. Под влиянием исследуемых продуктов произошло снижение содержания в эритроцитах лизоформ ФЛ. У крыс, получавших масло льна, содержание ЛФХ снизилось на 17,2% (р<0,05), а ЛФЭА -на 43,7% (р<0,05). Отмечено увеличение доли ФЭА при одновременном снижении содержания ФС.
Коэффициент, отражающий соотношение содержания ФЭА/ФС в группе крыс, получавших масло черного ореха, на 103,3% (р<0,05) превысил его значение в III группе сравнения, а в группе животных, получавших масло грецкого ореха, - на 125,0% (р<0,05). Соотношение концентраций ФЭА/ФС в эритроци-
Под влиянием исследуемых веществ изменился спектр ФЛ. Содержание ФХ существенно повысилось у крыс с ТПП на фоне приема изучаемых растительных масел или препарата «Фосфоглив» (рис. 10).
П" группа
ЛФХ; 1.10
VII группа
III группа
ЛФХ: 1.16
ФИ; 3.48 VIгруп
Т
тах крыс, получавших препарат «Фосфоглив», превысило аналогичный показатель группы сравнения на 30-е сутки эксперимента на 26,7% (р<0,05), а в группе животных, которым вводили масло льна, - на 340,0% (р<0,05).
Полученные данные позволяют сделать вывод, что под действием изучаемых растительных масел и препарата «Фосфоглив» происходило насыщение эритроцитов животных фосфолипидами. При этом имело место замещение СМ на ФХ, а ФС на ФЭА. Одновременно происходило уменьшение доли ЛФХ и ЛФЭА. Вышеописанные изменения спектра ФЛ в эритроцитах крыс в условиях нашего эксперимента свидетельствуют о том, что исследуемые вещества в разной степени улучшают реологические свойства мембран, способствуют увеличению их текучести, нормализации проницаемости. Все указанные изменения были наиболее выражены в группе крыс, получавших льняное масло.
Результаты исследования влияния масел черного и грецкого орехов, льняного масла и фармпрепарата «Фосфоглив» на морфофункциональный статус печени и состояние метаболических процессов позволяют заключить, что введение изучаемых веществ подопытным крысам с экспериментальным ТПП способствовало частичному восстановлению структуры ткани печени, нормализации выработки протеолитических ферментов, коррекции нарушений обмена белков, углеводов и липидов в организме животных, а также улучшению состояния системы ферментов антирадикальной защиты и ингибированию процессов ПОЛ. Все это может послужить основанием для проведения клинических исследований влияния изученных растительных масел как потенциальных гепа-топротекторных продуктов природного происхождения.
ВЫВОДЫ
1. Анализ физико-химических свойств и химического состава исследованных липофильных продуктов растительного происхождения позволил установить наличие в их составе значительного количества жирных кислот, обладающих моно- и полиненасыщенными связями - олеиновой, линолевой, линоленовой.
Льняное масло содержит до 57,5% со-3 ненасыщенной линоленовой кислоты, а в маслах черного и грецкого орехов было обнаружено высокое содержание со-6 ненасыщенной линолевой кислоты — более 62%.
2. Среди исследованных растительных масел, наибольшей способностью гидролизоваться под действием липолитических ферментов пищеварительных желез и соответственно наибольшей биодоступностью для включения в метаболические процессы в организме обладают: льняное масло - в 5,7 раза больше, чем у кукурузного масла, а также масла черного и грецкого орехов.
3. Оценка влияния компонентов исследуемых растительных масел и фармпрепаратов на активность процессов свободно-радикального окисления в модельных экспериментах in vitro на липосомальных тест-системах позволила сформировать сравнительный ряд изученных веществ по показателю антиокси-дантной активности: масло льна > масло черного ореха > «Фосфоглив» > масло грецкого ореха > «Эссенциале форте» > «Эссливер форте» > подсолнечное масло > кукурузное масло > оливковое масло > «Ретинола ацетат».
4. У подопытных животных с моделированием острого токсического поражения печени, вызванного воздействием тетрахлорметана, данными морфологического исследования верифицировано формирование цитолитического синдрома, а также установлен очень широкий спектр выраженных патобиохимиче-ских изменений, включающий формирование гипопротеинемии (концентрация общего белка уменьшилась на 20,9%, глобулинов — на 19,5%, альбуминов — на 24,4%), диспротеинемии (содержание фракций а- и у-глобулинов снизилось на 51,4% и 32,7%, а содержание Р-глобулинов повысилось на 37,0%), гипогликемии (снижение уровня глюкозы на 7-е сутки эксперимента составило 27,8%), дислипидемии и дислипопротеидемии (содержание ОХС и ХС ЛПНП было выше на 30,0% и 120,0% соответственно, а ТАГ - ниже на 57,4% аналогичного показателя у контрольных животных). Угнетение синтеза протеолитических энзимов характеризовалось уменьшением содержания пепсина в слизистой обо-
лочке желудка на 51%, трипсина и химотрипсина в ткани поджелудочной железы на 77,9% и 69,9% соответственно.
5. Анализ изменений морфологической картины ткани печени, активности ферментов-маркеров функционального состояния гепатоцитов показал уменьшение активности: АЛТ - на 27,6% для крыс, получавших масло льна; у-ГТП -до 40% у животных, получавших все исследуемые масла; ACT - на 46,5% под действием «Фосфоглива». Это, а также уменьшение концентрации билирубина в сыворотке крови крыс, получавших исследуемые вещества на фоне острой интоксикации четыреххлористым углеродом, позволили констатировать наиболее выраженные гепатопротекторные свойства у льняного масла и препарата «Фосфоглив» и несколько меньшие - у масел грецкого и черного орехов.
6. Введение масел черного и грецкого орехов, а также масла льна крысам с печеночной недостаточностью, индуцированной тетрахлорметаном, способствовало частичному восстановлению структуры ткани печени, достоверному уменьшению нарушений липидного метаболизма (наблюдалось снижение содержания ОХС на 17,5% в группе животных, получавших льняное масло; ХС ЛПНП под действием масел грецкого и черного орехов на 36,7% и 40,6% соответственно). Восстановление показателей белкового обмена характеризовалось повышением содержания общего белка, альбуминов и глобулинов в сыворотке крови животных. Под влиянием масла черного ореха фракция а-глобулинов увеличилась на 54,8%, а под влиянием масла льна - на 100,6% в сопоставлении этих показателей с группой сравнения. Изменения углеводного метаболизма сопровождались повышением уровня глюкозы на 37,1% под действием масла грецкого ореха и более чем на 44% - под действием масел черного ореха и льна.
7. Применение исследуемых растительных масел с целью гепатопротекции у крыс на фоне острой интоксикации четыреххлористым углеродом сопровождалось уменьшением активности процессов свободно-радикального окисления. Наблюдалось снижение концентрация ТБК-РП на 34,9% для льняного масла, а
для масел черного и грецкого орехов - на 17,6% и 21,9%, соответственно. Тенденция к нормализации ферментативного звена антирадикальной защиты была более выражена при введении подопытным животным льняного масла. 8. Введение масел льна, черного и грецкого орехов оказывает выраженный позитивный эффект на морфофункциональный статус печени и состояние метаболических процессов у животных с экспериментальной печеночной недостаточностью, проявившийся в уменьшении зафиксированных патологических изменений, достоверной тенденции к нормализации исследованных параметров функционального состояния организма. Это может послужить основанием для проведения клинических исследований влияния изученных растительных масел в качестве перспективных гепатопротекторов природного происхождения с потенциальной возможностью их использования, как в качестве алиментарных факторов, так и действующих начал лекарственных средств, что позволит решить актуальную медико-социальную проблему защиты организма от воздействия токсикантов.
Список опубликованных научных работ по теме диссертации в изданиях,
рекомендованных ВАК
1. Есауленко, Е.Е. Сравнительная характеристика протеолитической способности гастроэнтерологических препаратов при ферментозаместительной терапии панкреатитов / П.Г. Сто-рожук, И.М. Быков, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, M.JI. Макаренко // Кубан. науч. мед. вести.-2001.-№1 (55).-С. 17-19.
2. Есауленко, Е.Е. Влияние различных растительных масел на показатели липидного обмена у крыс / И.М. Быков, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, О.В. Дьякова // Аллергология и иммунология- 2007. - Т. 8, № 1. - С. 14.
3. Есауленко, Е.Е. Изменения липидного спектра липопротеинов при атеросклерозе / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, A.A. Ладутько // Аллергология и иммунология. - 2007. - Т. 8, № 2. -С. 217-219.
4. Есауленко, Е.Е. Возможности использования растительных масел и маргаринов в антиа-терогенной диете / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, A.A. Ладутько // Аллергология и иммунология, 2007. - Т. 8, № 4. - С. 405-407.
5. Есауленко, Е.Е. Оценка степени выраженности метаболических нарушений в крови при экспериментальном токсическом гепатите и разработка путей их коррекции / И.М. Быков, A.A. Ладутько, Е.Е. Есауленко, М.И. Быков, С.С. Бачко, МА. Хильчук // Кубан. науч. мед. вести. -2009. -№3 (108). - С. 21-26.
6. Есауленко, Е.Е. Активность процессов перекисного окисления липидов и состояние ферментов антирадикальной защиты при экспериментальном токсическом гепатите / Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, С.С. Бачко, М.И. Быков, И.М. Быков // Аллергология и иммунология. -2009.-Т. 10, № 1.-С. 145-146.
7. Есауленко, Е.Е. Оценка антиоксидантных свойств масла ореха черного (Juglands nigra L.) с использованием модели токсического гепатита / A.A. Ладутько, Е.Е. Есауленко, С.С. Бачко, М.И. Быков, И.М. Быков // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10, № 1. - С. 154.
8. Есауленко, Е.Е. Оценка степени выраженности окислительного стресса при токсическом поражении печени и методы его коррекции / Е.Е. Есауленко, М.И. Быков, A.A. Ладутько, С.С. Бачко, М.А. Хильчук, И.М. Быков, Е.В. Щербакова // Вестн. новых мед. технологий. -2009. - Т. 16, № 1. - С. 261-262.
9. Есауленко, Е.Е. Динамика показателей липидного обмена у крыс с моделью токсического гепатита без лечения и на фоне приема масла ореха черного (Juglands nigra L.) / Е.Е. Есауленко, М.И. Быков, A.A. Ладутько, С.С. Бачко // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т.
10. №2.-С. 289.
10. Есауленко, Е.Е. Перспективы использования масла ореха черного (Juglands nigra L.) для коррекции окислительного стресса и патологии липидного обмена при токсическом гепатите / Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, И.М. Быков // Аллергология и иммунология. - 2010. - Т.
11,№ 3. - С. 260-262.
11. Есауленко, Е.Е. Сравнительная биохимическая характеристика липидного спектра мембран эритроцитов при различных видах токсического поражения печени / Е.Е. Есауленко, С.С. Бачко, A.A. Ладутько, И.М. Быков // Фундам. исслед. - 2011. -№ 7. - С. 54-56.
12. Есауленко, Е.Е. Экспериментальная модель токсического поражения печени и способы ее коррекции / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, И.М. Быков // Аллергология и иммунология.-2012.-Т. 13,№ 1.-С. 131.
13. Есауленко, Е.Е. Влияние некоторых растительных масел на интенсивность протекания процессов свободнорадикального окисления в крови при моделировании острого токсического поражения печени / И.М. Быков, М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, М.И. Быков // Аллергология и иммунология. - 2012. - Т. 13, № 1. - С. 132.
14. Есауленко, Е.Е. Модификация липидного спектра мембран эритроцитов при экспериментальном токсическом поражении печени и возможности его коррекции растительными маслами / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, И.М. Быков, Н.Р. Данилова // Ку-бан. науч. мед. вестн. - 2012.-№ 1.-С. 177-181.
15. Есауленко, Е.Е. Перспективы использования липосомальной модельной тест-системы для оценки выраженности антиоксидантных свойств у липофильных продуктов растительного происхождения / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, М.А. Хильчук, Р.И. Сепиашвили // Аллергология и иммунология. -2012. - Т. 13, № 4. - С. 310-313.
16. Есауленко, Е.Е. Состояние системы про-/антиоксиданты и активность пищеварительных протеиназ у крыс при острой интоксикации четыреххлористым углеродом до и после коррекции растительными маслами [Электронный ресурс] / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков // Современные проблемы науки и образования. - 2013. - № 1. - Режим доступа: http: // www.science-education. ru / 107-8175.
17. Есауленко, Е.Е. Изучение влияния масел черного (JUGLAS NIGRA) и грецкого (JU-GLAS REGIA) орехов на показатели углеводного обмена крыс с моделью токсического поражения печени / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков // Аллергология и иммунология. - 2013. - Т. 14, №3,-С. 193-194.
18. Есауленко, Е.Е. Влияние интоксикации четыреххлористым углеродом на активность пищеварительных протеиназ у крыс и коррекция обнаруженных нарушений с помощью растительных масел / Е.Е. Есауленко, М.А. Хильчук, И.М. Быков // Вопросы питания. — 2013. — Т. 82, №5.-С. 36-40.
19. Есауленко, Е.Е. Сравнительная оценка гепатопротекгорных свойств фармпрепарата «Фосфоглив», льняного масла и масел из плодов грецкого и черного орехов [Электронный ресурс] / Есауленко Е.Е. // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 2; URL: http: // www.science-education.ru / 116-12311.
20. Есауленко, Е.Е. Метаболические эффекты льняного масла у крыс с интоксикацией тет-рахлорметаном / Е.Е. Есауленко // Фундам. исслед. — 2014. — № 1. — С. 59-63.
21. Есауленко, Е.Е. Влияние масел льна, черного и грецкого орехов на основные параметры метаболизма углеводов и белков у крыс с острым и токсическим поражением печени / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, А.Н. Курганов // Аллергология и иммунология. - 2014. - Т. 15, № 1. -С. 58-59.
22. Esaulenko, Е.Е. Metabolie effects of plant origin products in rats with carbon tetrachloride intoxication / I.M. Bykov, E.E. Esaulenko, K.I. Melkonuan // Intern. J. on Immunorehabilitation. -2014.-Vol. 16, № l.-P. 50-51.
23. Есауленко, Е.Е. Сравнительная оценка метаболической доступности некоторых растительных масел / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, А.Н. Курзанов // Вопросы питания. - 2014. - Т. 83, №3,-С. 180-181.
Патенты
24. Пат. 2437103 Российская Федерация, МПК G01N 33/92. Способ определения нарушения обмена холестерина в организме / И.М. Быков, A.A. Ладутько, Е.Е. Есауленко; заявитель и патентобладатель И.М. Быков, A.A. Ладутько, Е.Е. Есауленко; заявл. 22.07.2009, опубл. 2011, Бюл. № 5,2011.
Список опубликованных научных работ по теме диссертации
25. Есауленко, Е.Е. Перспективы использования различных продуктов детского питания у больных с патологией липидного обмена / И.М. Быков, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, М.И. Быков // Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины: материалы науч.-практ. конф. с междунар. участием. - Астрахань; Волгоград; М., 2006. - С. 181-184.
26. Есауленко, Е.Е. Влияние детских питательных смесей на показатели белкового и липидного обменов у крыс / И.М. Быков, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько // Аллергология и иммунология. - 2006. - Т. 7, № 3. - С. 411.
27. Есауленко, Е.Е. Возможности коррекции патологии липидного обмена у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями в стоматологической практике / И.М. Быков, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, О.В. Дьякова, Н.И. Быкова // Новые технологии в стоматологии: сб. науч. тр. -М.; Краснодар, 2007. - С. 15-18.
28. Есауленко, Е.Е. Роль активации свободно-радикального окисления у больных ишемиче-ской болезнью сердца в стоматологической практике / И.М. Быков, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько // Актуальные вопросы стоматологии: сб. науч. тр. -М.; Краснодар; Майкоп, 2008. -С. 39-41.
29. Есауленко, Е.Е. Биохимическая оценка гепатопротективных свойств масла ореха черного (Juglands nigra L.) с использованием модели токсического гепатита / Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, И.М. Быков, Е.В. Щербакова // Рос. жури, гастроэнтерологии, гепатологии, коло-проктологии. - 2008. - Т. 18, № 5, прил. № 32. - С. 147.
30. Есауленко, Е.Е. Перспективы использования растительных масел в комплексном лечении патологических процессов, сопровождающихся повреждением клеточных мембран / A.A. Ладутько, И.М. Быков, Е.Е. Есауленко, О.В. Дьякова // Актуальные вопросы стоматологии: сб. науч. тр. - М. Краснодар; Майкоп, 2008. - С. 115-119.
31. Есауленко, Е.Е. Влияние интоксикации четыреххлористым углеродом на липидный
спектр сыворотки крови крыс / И.М. Быков, A.A. Ладутько, С.С. Бачко, Е.Е. Есауленко, Н.С. Маланьина // Науч. тр. 2 съезда физиологов СНГ. - Кишинёв, Молдова, 2008. - С. 250.
32. Есауленко, Е.Е. Возможности коррекции процессов перекисного окисления липидов у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями в стоматологической практике / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, A.A. Ладутько // Актуальные вопросы стоматологии: сб. науч. тр. - М.; Краснодар; Майкоп, 2008. - С. 80-83.
33. Есауленко, Е.Е. Роль нарушения этерификации холестерина в патогенезе экспериментального токсического гепатита / A.A. Ладутько, Е.Е. Есауленко, М.И. Быков, И.М. Быков // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2008. - Т. 18, № 5, прил. № 32.-С. 148.
34. Есауленко, Е.Е. Перспективы использования энтерального питания в стоматологической практике / Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, О.В. Дьякова, Н.И. Быкова // Актуальные вопросы стоматологии: сб. науч. тр. -М.; Краснодар, 2008-С. 51-53.
35. Есауленко, Е.Е. Влияние масла ореха черного (Juglands nigra L.) на анаболическую функцию печени в условиях экспериментального токсического гепатита / Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, И.М. Быков, С.С. Бачко, Н.С. Маланьина, Е.В. Щербакова // Конгр. «Человек и лекарство»: тез. докл. - Краснодар, 2008. - С. 33.
36. Есауленко, Е.Е. Влияние масла ореха черного (Juglands nigra L.) на процессы восстановления липидного спектра сыворотки крови крыс при токсическом поражении печени / И.М. Быков, A.A. Ладутько, Е.Е. Есауленко,С.С. Бачко // Вопросы организации и образования в стоматологии: юбил. сб. науч. тр. - Краснодар, 2009. - С. 85-88.
37. Есауленко, Е.Е. Морфофункциональная характеристика гепатоцитов при экспериментальном токсическом гепатите / Е.Е. Есауленко, М.И. Быков, A.A. Ладутько, С.С. Бачко, Н.К. Волкова, Т.В. Еремина // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. - Т. 19, № 1, прил. № 33. - С. 75.
38. Есауленко, Е.Е. Применение масла ореха черного (Juglands nigra L.) для коррекции нарушений липидного обмена при интоксикации четыреххлористым углеродом / Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, И.М. Быков, Е.В. Щербакова, З.И. Дробицкая // Функциональные продукты питания: ресурсосберегающие технологии переработки сельскохозяйственного сырья, гигиенические аспекты и безопасность: материалы междунар. науч.-практ. конф. — Краснодар. 2009. - С. 203-207.
39. Есауленко, Е.Е. Изучение эффективности масла ореха черного (Juglands nigra L.) в лечении экспериментального токсического гепатита / A.A. Ладутько, М.И. Быков, Е.Е. Есау-
ленко, С.С. Бачко, Н.К. Волкова, Т.В. Еремина, Е.В. Щербакова // Рос. жури, гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктолопш. - 2009. - Т. 19, № 1, прил. № 33. - С. 76.
40. Есауленко, Е.Е. Перспективы создания нового лекарственного средства с гепатопротек-тивными и антиоксидантными свойствами на основе масла ореха 4epHoro(Juglands nigra L.) / A.A. Ладутько, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, Е.В. Щербакова, З.И. Дробицкая // Функциональные продукты питания: ресурсосберегающие технологии переработки сельскохозяйственного сырья, гигиенические аспекты и безопасность: материалы междунар. науч.-практ. конф. - Краснодар, 2009. - С. 232-237.
41. Есауленко, Е.Е. Особенности изменения липопротеинового спектра эритроцитов при экспериментальном токсическом гепатите / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, A.A. Ладутько, М.И. Быков, М.А. Хильчук, О.В. Дьякова // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктолопш. - 2010. - Т. 20, № 1, прил. № 35. - С. 91.
42. Есауленко, Е.Е. Влияние масла ореха черного (Juglands nigra L.) на процессы восстановления липопротеинового спектра эритроцитов крыс при токсическом поражении печени / A.A. Ладутько, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, Е.В. Щербакова, Н.С. Маланьина, С.С. Бачко // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2010. - Т. 20, № 1, прил. № 35.-С. 95.
43. Есауленко, Е.Е. Особенности антиоксидантного действия масла черного ореха (Juglands nigra L.) в условиях токсического поражения печени / С.С. Бачко, Е.Е. Есауленко, М.А. Хильчук, М.И. Быков, A.A. Ладутько // Науч. тр.З съезда физиологов СНГ. - Ялта, Украина, 2011.-С. 175-176.
44. Есауленко, Е.Е. Изменение липидного спектра мембран эритроцитов при остром токсическом поражении печени, вызванном интоксикацией четыреххлористым углеродом / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, A.A. Ладутько // 17 Рос. конгр. «Гепатология сегодня». -М., 2012.-С. 31.
45. Есауленко, Е.Е. Влияние растительных масел на активность ряда ферментов пищеварительной системы крыс в условиях острой интоксикации четыреххлористым углеродом / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктолопш. -2012. -Т. 22, № 5, прил. № 40. -С. 135.
46. Есауленко, Е.Е. Влияние интоксикации четыреххлористым углеродом на показатели белкового обмена в эксперименте / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, A.A. Ладутько, И.М. Быков // 17 Рос. конгр. «Гепатология сегодня». -М., 2012. - С. 32.
47. Есауленко, Е. Изменение активности пищеварительных протеиназ в условиях острой интоксикации четыреххлористым углеродом / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков,
Н.Р. Данилова // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатолопш, колопроктологии. - 2012. - Т. 17, № 5, прил. № 40. - С. 135.
48. Есауленко, Е.Е. Жнрнокислотный состав черного (американского) ореха / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, А.Н. Курзанов, М.А. Хильчук, О.В. Швец // Липидология - наука XXI века: материалы I междунар. науч.-практ. интернет конф. - Казань. 2013. - С. 75-78.
49. Есауленко, Е.Е. Исследование потенциальных гепатопротективных и антиоксидантных свойств масел черного и грецкого орехов / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, А.Н. Курзанов, О.В. Швец, М.А. Хильчук // Липидология - наука XXI века: материалы I междунар. науч.-практ. интернет конф. - Казань. - 2013. - С. 79-85.
50. Есауленко, Е.Е. Влияние масла черного ореха (JUGLANDS NIGRA) на метаболизм ли-пидов у крыс с острым токсическим поражением печени тетрахлорметаном / Е.Е. Есауленко //21 век: фундаментальная наука и технологии: материалы III междунар. науч.-практ. конф. -Москва.-2014.-С. 16-21.
51. Есауленко, Е.Е. Оценка эффективности антиоксидантных свойств липофильных продуктов растительного происхождения in vitro липосомальной модельной тест-системы / И.М. Быков, Е.Е. Есауленко, Р.И. Сепиашвили, М.А. Хильчук // «Кзюлопчний журн. - 2014. - Т. 60, № 2. - С. 88-92.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИИ
CCL,
у-ГТП
АЛТ
ACT
ЛПВП
ЛПНП
лпонп
нэхс
охс пвк пнжк
ФС
- Четыреххлористый углерод, тетрахлорметан
- Гаммаглутамилтранспептидаза
- Аланинаминотрансфераза
- Аспартатаминотрансфераза
- Липопротеиды высокой плотности
- Липопротеиды низкой плотности
- Липопротеиды очень низкой плотности
- Неэтерифицированный холестерин
- Общий холестерин
-Пировиноградная кислота
- Полиненасыщенные жирные кислоты
- Фосфатидилсерин
ПОЛ — Перекисное окисление липидов
ЭФЛ - Эссенциальные фосфолипиды
ФЛ — Фосфолипиды
СОД — Супероксиддисмутаза
ТАГ - Триацилглицерины
ТБК - Тиобарбитуровая кислота ТБК-РП - ТБК-реактивные продукты
ТПП — Токсическое поражение печени
ФХ - Фосфатидилхолин
ФЭ - Фосфатидилэтаноламин
ХС - Холестерин
ЩФ - Щелочная фосфатаза
ЭХС — Эфиры холестерина
Есауленко Елена Евгеньевна АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
Подписано в печать 02.07.14. Печать трафаретная. Формат 60x84 '/i6. Усл. печ. л. 2,7. Тираж 100 экз. Заказ № 1168.
Отпечатано в ООО «Издательский Дом-ЮГ» 350072, г. Краснодар, ул. Московская 2, корп. «В», оф. В-120,
Тел. 8(918)-41-50-571 e-mail: olfomenko@yandex.ru Сайт: http://id-yug.com
-
Есауленко, Елена Евгеньевна
-
доктора биологических наук
-
Ростов-на-Дону, 2014
-
ВАК 03.01.04
- Гепатопротекторные и антиоксидантные эффекты экстрактов лотоса орехоносного
- Комплексное биохимическое исследование токсикологических и фармакологических свойств препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папортниколистного
- Биохимическое обоснование коррегирующих свойств экстрактов шалфеев при экспериментальной патологии
- Роль биологических ритмов в реализации токсических эффектов химических веществ у млекопитающих в эксперименте
- Биотехнологические исследования и разработка состава лечебно-профилактического средства на основе регуляторных белков гепатопротекторного действия
