Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Гепатопротекторные и антиоксидантные эффекты экстрактов лотоса орехоносного

ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Гепатопротекторные и антиоксидантные эффекты экстрактов лотоса орехоносного"

На правах рукописи

Хассан Мустафа Салахелдин Абделхамид

ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ И АНТИОКСИДАНТНЫЕ ЭФФЕКТЫ ЭКСТРАКТОВ ЛОТОСА ОРЕХОНОСНОГО

03.03.01 - физиология, 03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005563630

21 ОКТ 2015

Астрахань — 2015

005563630

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханский государственный университет»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор

Кондратенко Елена Игоревна

Официальные оппоненты:

Котельннков Андрей Вячеславович, доктор биологических наук, доцент, ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный технический университет», кафедра гидробиологии и общей экологии, профессор

Никулина Дина Максимовна, доктор медицинских наук, профессор,

ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет», кафедра

биологической химии, заведующая кафедрой

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Ульяновский государственный педагогический университет имени И. Н. Ульянова»

Защита диссертации состоится 24 октября 2015 года в 10:00 часов на заседании объединенного диссертационного совета ДМ 212.009.01 при ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет» по адресу: 414000, г.Астрахань, пл. Шаумяна, 1, ауд. 101

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет» по адресу: 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20а, и на сайте: http://www.asu.edu.ru

Автореферат разослан « » сентября 2015 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета

Курьянова Евгения Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Печень играет ключевую роль в обмене веществ и часто упоминается как «великий химический завод» тела, физиологическая эффективность которого зависит от синтетической активности печени, ее способности к выведению токсинов. Риск интоксикации печени в последнее время значительно возрос за счет воздействия экологических факторов, пестицидов и химиотерапевтических средств (S.H. Garba et al.,2009). Гепатотоксины при воздействии на печень повреждают ее паренхиму и нарушают обменные и ферментативные процессы, вызывая разнообразные патологические состояния - от жировой и белковой дистрофии до токсического гепатита, цирроза и карциномы (G. Chander et al., 2002; Абдуллаев, 2007; Ч.С. Павлов, В.Т. Ивашкин, 2007; Н.В. Багинская с соавт., 2007; И.В. Козлова, М.В. Сафонова, 2008; Е.В. Вайс с соавт., 2012; В.М. Махов, 2012; Е.В. Лузина с соавт.,2013).

В настоящее время разнообразные побочные эффекты, сопровождающие физиологическую активность синтетических соединений, сместили направление научных исследований в область изучения биологических эффектов растительного сырья, являющегося богатым источником биологически активных веществ (D. S. Fabricant and N.R. Farnsworth, 2001). Препараты растительного происхождения - наиболее востребованная группа гепатопротекторов, поэтому поиск перспективных методов коррекции токсических поражений печени включает в себя изучение гепатопротекторных свойств лекарственных растений. Одним из ключевых элементов защиты клеток печени от токсического повреждения является воздействие на свободно-радикальный статус организма. В этой связи целесообразно рассмотреть проявление гепатопротекторного эффекта в сочетании с антиоксидантным действием экстрагированных компонентов растительного сырья.

Кроме того, направление проведенного исследования в значительной мере было обусловлено существующими в литературе сведениями о высокой биологической активности и лечебной эффективности экстрактов различных частей лотоса орехоносного (ЛО) (D.B. Lee et al., 2015; Н.А. Ломтева с соавт., 2014 ; N.R. Mehta et al., 2013; A.R. Im et al., 2013; S. Liu et al., 2013; В. Huang et al., 2013; R. Subashini et al., 2012; Е.И. Кондратенко с соавт., 2012; H.H. Но et al., 2010; В. Huang et al., 2010).

Цель исследования: изучить в сравнительном аспекте гепатопротекторную и антиоксидантную активности экстрактов лотоса орехоносного, полученных из листьев, плодов-коробочек и семян у самок крыс с ССЦ-индуцированным повреждением печени. Задачи исследования

D Изучить химический состав экстрактов ЛО с помощью газовой хроматографии и масс-спектрометрии. l^D Оценить влияние экстрактов, полученных из листьев, плодов-коробочек и семян ЛО на биохимические маркеры функционального состояния печени при ее токсическом поражении четырёххлористым углеродом. ИяЭО Рассмотреть влияние экстрактов ЛО на морфофункциональное состояние печени крыс с CCLi-ицдуцированным повреждением, выявить экстракты, которые наиболее эффективно поддерживают дезиноксикационную функцию печени. §J<âD Сравнить гепатопротекторный эффект экстрактов различных частей ЛО с эффектами силимарина на фоне токсического поражения печени четырёххлористым углеродом, оценить интенсивность действия в дозозависимом аспекте.

@<áD Оценить в сравнительном аспекте антиоксидантные эффекты экстрактов семян, плодов-коробочек и листьев ЛО в ткани печени крыс при ее токсическом поражении, оценить интенсивность действия в дозозависимом аспекте.

Научная новизна работы. В представленном исследовании впервые в сравнительном аспекте изучено гепатопротекторное и антиоксидантное действие экстрактов, полученных из листьев, плодов-коробочек и семян лотоса орехоносного на фоне токсического поражения печени тетрахлорметаном (ССЦ) и установлена зависимость «доза - эффект». Впервые проведено углубленное комплексное изучение химического состава различных морфологических частей растения ЛО. Методом хромато-масс-спекгрометрии определены биологически активные вещества, входящие в состав исследуемых экстрактов. Впервые в сравнительном аспекте изучено влияние экстрактов ЛО на гистоструктурные и морфометрические показатели печени при моделировании СС14-индуцированного гепатоза.

Теоретическая и практическая значимость работы. Получены экспериментальные обоснования для расширения спектра практического применения экстрактов лотоса орехоносного в медицине и фармации. Гепатопротекторная активность экстрактов лотоса орехоносного в условиях токсического повреждения печени указывает на возможность использования этих экстрактов при лечении заболеваний печени. Химический анализ исследуемых экстрактов дополняет аналитическую базу биологически активных веществ растительного происхождения, влияющих на функциональные системы организма. Результаты работы могут быть использованы в учебном процессе в рамках дисциплин «Физиология», «Биологически активные вещества растительного происхождения» и «Биохимия».

Материалы и методы исследования

Получение экстрактов лотоса орехоносного. Семена, плоды-коробочки и листья ЛО отдельно измельчали до порошкообразного состояния. 20 г каждого порошка помещали в 500 мл 60%-ного этанола на 3 часа при 60°С в термостате. Спиртовые экстракты фильтровали, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе при 60°С. Растворы экстрактов вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в дозах 50 и 100 мг/кг массы тела.

Хромато-масс-спектрометрическое изучение химического состава спиртовых экстрактов лотоса орехоносного. Хромато-масс-спекгрометрический анализ проводили на системе GC Clarus 500 Perkin Elmer, включающей AOC-20Í автосамплер и газовый хроматограф, сопряженный с масс-спектрометром (GC-MS). Для хроматографического разделения пробы использовали капиллярную колонку из плавленого кварца длиной 30 м и внутренним диаметром 0,25 мм. Неподвижная фаза 5% фенил метил полисилоксановой жидкости с толщиной слоя 0,2 мкм, ионизация электронами 70 эВ; гелий (99,999%) использовали в качестве газа-носителя при постоянном потоке 1 мл / мин, объем инъекции -1 мкл (сплит-отношение 10:1). Температура инжектора и интерфейса - 200 °С; температура ионно-источника - 200 °С. Хроматографирование проводили в режиме программирования температуры от 110 до 280 °С со скоростью 10 град./мин до 200 °С, а затем 5 град. / мин до 280 °С, заканчивая 9 мин изотермой при 280 ° С. Масс-спектры проводили при 70 эВ; интервал сканирования 0,5 с, фрагменты - от 40 до 650 да. МС температура линии передачи 280 °С. Обработку данных проводили с помощью штатных программ прибора. Вещества в хроматографических пиках идентифицировали с помощью библиотечных программ с базой данных масс-спектров Wiley9 и NIST (К.Р. Praveen et al., 2010).

Схема эксперимента

В первой серии эксперимента на 63 самках беспородных крыс (средняя масса - 240 г, возраст - 12-13 мес.) определяли гепатопротекгорное и антиоксидантное действие исследуемых экстрактов в условиях токсического повреждения тетрахлорметаном.

Во второй серии экспериментов на 36 самках белых беспородных крыс того же возраста и массы изучали влияние введения экстрактов ЛО на морфофункциональное состояние печени на фоне ССЦ-индуцированного гепатоза. Самки крыс были разделены на 9 групп. Все препараты и экстракты вводились согласно схеме (табл. 1), животные содержались в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. Экстракты и силимарин вводили в дозе 50 мг/кг массы тела через 5 ч после введения ССЦ, чтобы избежать нарушения абсорбции каждого вещества.

На 50-й день крыс декапитировали после кратковременной наркотизации диэтиловым эфиром. Кровь забирали в сухие стерильные пробирки. Материал центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут. Сыворотку хранили при температуре - 20 °С для дальнейшего биохимического анализа Образцы печени и почек фиксировали для дальнейших гистологических исследований.

Таблица 1.

Группы животных

Нормальный контроль

ССЦ контроль

Общая схема эксперимента

Введенный раствор

Физиологический раствор, 0.9% ИаС!

Положительный контроль

Экстракт семян

лотоса орехоносного

Экстракт плодов лотоса орехоносного

1% ССЦ в оливковом масле (об/об)

1% ССЦ в оливковом масле (об/об)

Силимарин

1% ССЦ в оливковом масле (об/об)

Экстракт семян

1% СС1) в оливковом масле (об/об)

Экстракт

1% ССЦ в оливковом масле (об/об)

Экстракт

1% ССЦ в оливковом масле (об/об)

Количество дней введения

Ежедневно в течение _7 недель

1 раз в день, в течение 4 дней, в течение 7 недель

Дозы при внутрижелудочном _введении

1 мл / кг массы тела

2 мл / кг массы тела

1 раз в день, в течение 4 дней, в течение 7 недель

Ежедневно в течение 7 недель

1 раз в день, в течение 4 дней, в течение 7 недель

Ежедневно в течение 7 недель

1 раз в день, в течение 4 дней, в течение 7 недель

Ежедневно в течение 7 недель

1 раз в день, в течение 4 дней, в течение 7 недель

Ежедневно в течение 7 недель_

1 раз в день, в течение 4 дней, в течение 7 недель

2 мл / кг массы тела

50 мг / кг массы тела

2 мл / кг массы тела

50 мг / кг массы тела

2 мл / кг массы тела

100 мг / кг массы тела

2 мл / кг массы тела

50 мг / кг массы тела

2 мл / кг массы тела

Экстракт Ежедневно в течение 7 недель 100 мг / кг массы тела

8 9 Экстракт листьев лотоса орехоносного 1% ССЦ в оливковом масле (об/об) 1 раз в день, в течение 4 дней, в течение 7 недель 2 мл / кг массы тела

Экстракт Ежедневно в течение 7 недель 50 мг / кг массы тела

1% СО4 в оливковом масле (об/об) 1 раз в день, в течение 4 дней, в течение 7 недель 2 мл / кг массы тела

Экстракт Ежедневно в течение 7 недель 100 мг/кгмассы тела

Оценка биохимических показателей. Для оценки гепатопротекторной и почечной протекторной активности экстрактов ЛО в сыворотке крови определяли активность АЛТ и ACT, щелочной фосфатазы (ЩФ), уровни общего холестерина, общего билирубина и альбумина, используя наборы биохимических реактивов «Ольвекс диагностикум» (г. Санкт-Петербург). Содержание общего белка в сыворотке крови определяли биуретовым методом (набор Агат-Мед, г. Москва), концентрацию мочевины (ммоль/л) -диацетилмонооксимовым методом с помощью наборов реактивов «Vital diagnostics» (г. Санкт-Петербург), активность ЩФ - унифицированным методом по конечной точке (O.A. Bessey et al., 1946), активности АЛТ и ACT - унифицированным методом Райтмана-Френкеля (S. Reitman and S. Frankel., 1957), концентрации альбумина - унифицированным колориметрическим методом (В. Т. Doumas et al.,1971), концентрации общего билирубина - методом Йендрашека-Грофа (L. Jendrassik and P. Grof, 1938), концентрации общего холестерина - энзиматическим колориметрическим методом (P. Trinder, 1969).

Оценка антиоксидантной активности экстрактов ЛО. Лнтиоксидантные свойства экстрактов ЛО оценивали по методу, основанному на взаимодействии продуктов перекисного окисления липидов с тиобарбитуровой кислотой с образованием окрашенного комплекса (максимум поглощения - 540 нм) (И.Д. Стальная и Т. Т. Гаришвили, 1977) и снижению катал азной активности в печени и почках (М.А. Королюк с со авт., 1988).

Гистологическое исследование печеночной ткани позволило верифицировать ее изменения в условиях моделирования токсического поражения тетрахлорметаном. Кусочки ткани фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина на 0,1 М фосфатном буфере при pH 7,2- 7,4, обезвоживали проводкой через ряд растворов этанола восходящей концентрации с последующей заливкой в парафин. Из полученных блоков готовили срезы толщиной 3 мкм и окрашивали их гематоксилином и эозином (Д.Э. Коржевский, A.B. Гиляров, 2005). Морфологическое исследование гистологических препаратов проводили при помощи светооптического микроскопа Leica DM LS (Германия) в пяти полях зрения при увеличении 400 и цифровой фотокамеры Leica DC320 (Германия). Степень влияния различных экстрактов лотоса орехоносного и силимарина на дезинтоксикационную функцию печени и морфофункциональное состояние органа оценивали по общей гистологической картине паренхимы, а также по комплексу морфометрических показателей: диаметру клеток и их ядер, числу безъядерных клеток, клеток с крупным светлым ядром и гигантских клеток с двойным ядром на 100 клеток паренхимы печени.

Статистическая обработка полученных результатов. Выборка для каждой группы животных составила не менее 7 крыс. Полученные данные были представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. Результаты обрабатывали статистически с

использованием t-критерия Стьюдента с применением стандартного набора программ SPSS, версия 16.0. Отличия считали статистически значимыми при р <0,05.

Основные положения, выпосимые на защиту

1. Наибольшим гепатопротекторным действием в условиях ССЦ-индуцированного повреждения печени обладают экстракты, полученные из семян и плодов-коробочек лотоса орехоносного. В меньшей степени этот эффект проявляется у экстракта листьев ЛО.

2. Изученные экстракты лотоса орехоносного обладают антиоксидантным действием в тканях печени и почек в условиях токсического повреждения. При этом, наиболее выраженный антиоксидантный эффект отмечен у экстракта плодов-коробочек ЛО. Выявлена не значительная специфичность влияния экспериментальных доз на биохимические и морфологические показатели.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на следующих конференциях: VII Международной научно-практической конференции для молодых ученых «Фундаментальные и прикладные проблемы получения новых материалов: исследования, инновации и технологии» - Астрахань, Россия, (23-25 апреля 2013 г.); Ш Международной научной конференции «Новые Направления в Химии Гетероциклических Соединений» - Пятигорск, Россия (17-21 сентября 2013 г.); Ш Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Фундаментальная и прикладная исследование в биологии (Биотехнология)» - Донецк, Украина (24-27 февраля 2014г.); VIII Международной научно-практической конференции для молодых ученых «Фундаментальные и прикладные проблемы получения новых материалов: исследования, инновации и технологии» — Астрахань, Россия (28-30 апреля 2014 г.); II Международной научно-практической конференции «Современная биология: актуальные вопросы» -Санкт-Петербург, Россия, (17-18 октября 2014г.); ХП Международной конференции «Химия и ее роль в развитии» - Эль-Мансура и Шарм-Эль-Шейх, Египет, (16-20 марта 2015г.); V Юбилейной Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» - Санкт-Петербург, Россия, (20-21 апреля 2015 г.) ; VI Российско-Корейской конференции «Современные достижения химии биологически активных веществ и биотехнологию) -Новосибирск, Россия, (5-10 июля 2015 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, из них 1 статья в зарубежном издании, включенном в базу систем цитирования Scopus, 4 статьи в российских изданиях, включенных в список Высшей аттестационной комиссии.

Структура н объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 134 страницах машинописного текста, иллюстрирована 7 таблицами и 15 рисунками. Диссертация состоит из введения, четырех глав и выводов, а также списка литературы, состоящего из 125 отечественных и 186 зарубежных источников.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Результаты химического анализа экстрактов ЛО. Хромато-масс-спектрометрическое исследование показало, что спиртовые экстракты семян, плодов-коробочек и листьев ЛО содержат биологически активные вещества и фенольные соединения.

ГХ-МС хроматограмма спиртового экстракта семян ЛО показала 38 пиков. Доминирующими компонентами масс-спектра являются лупеол (22,95%), 9,12,15-октадекатриеновая кислота, 2-[(триметилсилил) окси]-1-[[(триметилсилил)окси]метил] этиловый эфир, 2,3-дигидроксипропил цис-13-докозеноат (5,35%), олеаноловая кислота

(5,19%), трис-триметилсилил эфирное производное 1,25-дигидроксивитамина И2 (3,36%), 1 триметилсилил производное 2-моноолеина (3,26%), бетулин (1,61%).

ГХ-МС хроматограмма спиртового экстракта плодов ЛО включала 37 пиков с ! преобладанием в структуре спектра 9-октадеценовой кислоты (г), метилового эфира | (12,46%), 8,11-октадекадиеновой кислоты метилового эфира (11,71%), 13-докозеновой кислоты метилового эфира (10,47%), пентадекановой кислоты 14-метил, метилового эфира (8,08%), флавон-4'-ОН,5-ОН, 7-диглюкозид (4,53%), гептадекановой кислоты 15-метил, ) метилового эфира (2,44%), кантаксантина (1,77%) и фитофлуена (1,37%).

ГХ-МС хроматограмма спиртового экстракта листьев ЛО показала 40 пиков. Основными фитохимическими компонентами масс-спектра являются 1-гексадеканол \ (10,47%), 13-докозеновой кислоты метиловый эфир, (7,88%), 2-нафтол-1-(р-хлорфенилазо) (5,38%), кверцетин-7,3',4'-триметокси (4,61%), докозан (4,43%), анодендрозид-А (4,31%), ; колхифолеин (3,73%), 6-октадеценовая кислота, метиловый эфир (3,39%), флавон-4'-ОН,5-ОН, 7-ди-О-глюкозид (2,50%) и каротин, 1,1',2,2'-тетрагидро -1,1'-диметокси (2,22%).

Влияние исследуемых экстрактов ЛО на биохимические параметры печени и почек в сыворотке крыс.

Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию общего белка. В сравнении СС14 контроля с интактным контролем (физ. р-р), концентрация общего белка в сыворотке животных, которые получали только СС14 на 28% (р<0,05) ниже (рис. 1). I Введение силимарина на фоне СС14 значительно увеличивает концентрацию общего белка, по сравнению с СС14 - контролем (р<0,05). Введения экстракта семян ЛО на фоне СС14, ! достоверно повышало концентрацию общего белка почти в 1,2 раза (р <0,05), плодов-коробочек в 1,4 раза (р<0,01). Аналогичную динамику показал экстракт листьев ЛО. , Достоверных различий между группами в зависимости от дозы экстракта ЛО не обнаружено. В сравнении эффективности экстрактов ЛО с действием силимарина I концентрация общего белка в сыворотке крови животных отличалась не значительно. 1

Ш ФИЗ. Р-Р

SCCL4 Контроль S СС1.4+Силимарин (50 МГ/КГ М.Т.) В СС1.4+Экстракт (50МГ/КГ М.Т.) И «Х4+Экстракт (100МГ/КГ М.Т.)

Рис. 1 Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию общего белка (г/л)

- достоверность различий между гоуппами животных физ. р-р. (гр. 1) и группами животных CCL, £гр. 2) (по Стьюденту): " - р<0,05 ; - р<0,01; т - р<0,001. ;

- достоверность различий между группами^ животных ССЦ (гр. 2) и остальными группами | животных (гр. 3-9) (по Стьюденту); * - р<0,05 ; " - р<0,01; "" - р<0,001.

• - достоверность различий между группами животных силимарин (гр. 3) и экстракт лотоса (гр 4- ' 9) (по Стьюденту): • - р<0,05 ; •• - р<0,01; ••• - р<0,001.

Общий Белок

Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию альбумина В сравнении СС14-контроля с интактным контролем (физ. р-р), концентрация альбумина в сыворотке животных, которые получали только ССЦ (группа 2) на 26% ниже (р<0,05) (рис. 2).

Экстракты ЛО достоверно повышают содержание альбумина в 1,3 раза (р<0,05) по сравнению с контролем (СС14). Наблюдаемые эффекты аналогичны действию гепатопротектора - силимарина.

Альбумин

ШФИЗ. Р-Р ШСС14 Контроль

ЫССХ4+Силигларин (50 МГ/КГ М.Т.)

НСа4+Экстракт(50МГ/КГМ.Т.)

ШСа4+Экстракт(100МГ/КГМ.Т.)

Рис. 2 Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию альбумина (г/л)

# - достоверность различий между группами животных физ. р-р. (гр. 1) и группами животных СС14 (гр. 2) (по Стьюденту): * - р<0,05 ; ** - р<0,01; ш - р<0,001.

- достоверность различий между группами животных ССЦ (гр. 2) и остальными группами животных (гр. 3-9) (по Стьюденту); * - р<0,05 ; ** - р<0,01; "* - р<0,001.

• - достоверность различий между группами животных силимарин (гр. 3) и экстракт лотоса (гр. 49) (по Стьюденту): • - р<0,05 ; •• - р<0,01; ••• - р<0,001.

Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию аланинаминотрансферазы (АЛТ)

В сравнении с интактным контролем (физ. р-р), активность фермента АЛТ достоверно повышалась практически в 2 раза у животных с СС14-индуцированным гепатозом (рис. 3). Экстракты ЛО уменьшают активность аланинаминотрансферазы на 3847% (р<0,01) в сравнении с контролем (ССЦ), что соответствует действию препарата-контроля.

Аланинаминотрансфераза

ШФИЗ.Р-Р й CCL4 Контроль

S СС1.4+Силимарин (50 МГ/КГ М.Т.) В СС[_4+Экстракт (50МГ/КГ М.Т.) ЁЗСС1.4+Экстракт (100МГ/КГ М.Т.)

О

Рис. 3 Влияние экстрактов лотоса орехоиосного на концентрацию AJIT (ммоль/(ч-л))

* - достоверность различий между группами животных физ. р-р. (гр. 1) и группами животных CCI4 (гр. 2) (по Стьюденту): " - р<0,05 ; - р<0,01; ш - р<0,001.

- достоверность различий между группами животных CCI4 (гр. 2) и остальными группами животных (гр. 3-9) (по Стьюденту); * - р<0,05 ; " - р<0,01; *** - р<0,001.

• - достоверность различий между группами животных силимарин (гр. 3) и экстракт лотоса (гр. 49) (по Стьюденту): • - р<0,05 ; • • - р<0,01; • • • - р<0,001.

Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию аспартатаминотрансферазы Активность ACT у особей с моделируемым токсическим поражением печени в сравнении с интактным контролем достоверно повышалась практически в 1,8 раза (рис. 4). В группе силимарин-контроля, активность ACT на 40% (р<0,05) ниже, чем у животных, которые получали только СС14. в то время, как экстракты семян и плодов-коробочек уменьшали активность ACT на 31-38% (р<0,05). Достоверных различий между группами, получавшими разные дозы экстракта, не выявлено. Экстракт листьев JIO не вызвал изменений активности ACT в сравнении с СС14 — контролем.

Аспартатаминотрансфераза

ШФИЗ. Р-Р BCCL4 Контроль

S СС1-4+Силимарин (50 МГ/КГ М.Т.) В СС14+Экстракт (50МГ/КГ М.Т.) В СС1_4+Экстракт (100МГ/КГ М.Т.)

Рис. 4 Влинние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию (ACT) (ммоль/(ч-л))

- достоверность различий между группами животных физ. р-р. (гр. 1) и группами животных CCI4 ^гр. 2) (по Стьюденту): " - р<0,05 ; р<0,01; т - р<0,001.

- достоверность различий между группами животных CCI4 (гр. 2) и остальными группами животных (гр. 3-9) (по Стьюденту); * - р<0,05 ; ** - р<0,01; *** - р<0,001.

• - достоверность различий между группами животных силимарин (гр. 3) и экстракт лотоса (гр. 49) (по Стьюденту): р<0,05 ;••-р<0,01; •••-р<0,001.

Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию щелочной фосфатазы

(ЩФ)

Активность ЩФ достоверно повышалась в 2,9 раза (р<0,01) в сыворотке крови животных, получавших ССЦ по сравнению с интактным контролем (физ. р-р), сочетание ССЦ + силимарин снижало значение этого показателя на 61% (р<0,01) по сравнению с группой, получавшей только СС14 (рис. 5). Из трех исследуемых экстрактов, только экстракт семян ЛО привел к достоверному снижению активности ЩФ на 48% (р<0,01) по сравнению с ССЦ- контролем, вне зависимости от дозы экстракта.

В сравнении эффективности экстрактов ЛО с действием препарата контроля -силимарином, активность ЩФ в сыворотке крови животных, получавших 50 и 100 мг/кг м. т. экстракт семян ЛО после введения ССЦ, не значительно отличались, в то время, как у животных, получавших экстракты плодов-коробочек и листьев в экспериментальных дозах этот показатель значительно отличался. Наиболее действенной оказалась доза 100 мг/кг м. т.

ш

■ 2000

Ф и

$ > 1500

£ к с;

о °

£ 5 1000

¿Г

Щелочная Фосфатаза

ШФИЗ.Р-Р БСС1.4 Контроль

Н СС|.4+Силимарин (50МГ/КГ М.Т.) Н СС1.4+Экстракт (50МГ/КГ М.Т.) ® СС1.4+Экстракт (ЮОМГ/КГ М.Т.)

Рис. 5 Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию ЩФ (нмоль/(с-л))

* - достоверность различий между группами животных физ. р-р. (гр. 1) и группами животных ССЦ (гр. 2) (по Стьюденту); * - р<0,05 ; ** - р<0,01; т - р<0,001.

- достоверность различий между группами животных ССЦ (гр. 2) и остальными группами животных (гр. 3-9) (по Стьюденту); * - р<0,05 ; " - р<0,01; "' - р<0,001.

• - достоверность различий между группами животных силимарин (гр. 3) и экстракт лотоса (гр. 49) (по Стьюденту): • - р<0,05 ; •• - р<0,01; ••• - р<0,001.

Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию общего билирубина

Тетрахлорметан достоверно повышал концентрацию общего билирубина практически в 7,7 раза (р<0,001) по сравнению с интактным контролем (рис.6). Силимарин, напротив, уменьшал значение этого показателя на 86% (р<0,001) по сравнению с ССЦ- контролем. Введение экстракта семян ЛО на фоне тетрахлорметана снижало величину этого показателя на 83% (р<0,01), плодов-коробочек - на 55%, (р<0,001), листьев - на 70% (р<0,001). Зависимости снижения от дозы экстракта не выявлено.

Общий Билирубин

шфиз. р-р

@СС14 Контроль

Н С0.4+Силимарин (50 МГ/КГ М.Т.) 0 СС1.4+Экстракт (50МГ/КГ М.Т.) ® СС14+Экстракт (ЮОМГ/КГ М.Т.)

Л4

С®

Рис. 6 Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию общего билирубина (мкмоль/л)

- достоверность различий между группами животных физ. р-р. (гр. 1) и группами животных ССЦ £гр. 2) (по Стьгоденту): * - р<0,05 ; #Г- р<0,01; ш - р<0,001.

- достоверность различий между группами животных ССЦ (гр. 2) и остальными группами животных (гр. 3-9) (по Стьюденту); * - р<0,05 ; ** - р<0,01; "* - р<0,001.

• - достоверность различий между группами животных силимарин (гр. 3) и экстракт лотоса (гр. 49) (по Стьюденту): • - р<0,05 ; •• - р<0,01; ••• - р<0,001.

Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию мочевины

Концентрация мочевины достоверно повышалась в 1.7 раза (р<0,01) под действием СС14 по сравнению с интактным контролем (рис. 7). Силимарин снижал этот показатель на 36% (р<0,01), экстракт семян ЛО - на 31% (р<0,01), плодов-коробочек - на 39% (р<0,01), листьев - на 34% (р<0,01) по сравнению с СС14-контролем. При сравнении с действием силимарина наиболее значительным оказалось изменение концентрации мочевины при дозе экстракта 100 мг / кг м. т.

Мочевина

ШФИЗ. Р-Р

I СС1.4 Контроль

ГО

Н СС1.4+Сили™арин (50 МГ/КГ М.Т.)

ЕЭСС1.4+Экстрзкт(50МГ/КГМ.Т.)

3 СС1.4+Экстракт (ЮОМГ/КГ М.Т.)

Рис. 7 Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию мочевины (ммоль/л)

* - достоверность различий между группами животных физ. р-р. (гр. 1) и группами животных СС14 £гр. 2) (по Стьюденту): " - р<0,05 ; *Г- р<0,01;ш - р<0,001.

- достоверность различий между группами животных ССЦ (гр. 2) и остальными группами животных (гр. 3-9) (по Стьюденту); * - р<0,05 ; " - р<0,01; "" - р<0,001.

• - достоверность различий между группами животных силимарин (гр. 3) и экстракт лотоса (гр. 49) (по Стьюденту): • - р<0,05 ; •• - р<0,01; ••• - р<0,001.

Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию общего холестерина

Концентрация общего холестерина достоверно повышалась в 3.7 раза (р<0,001) после введения ССЦ по сравнению с интакгным контролем (физ. р- р) (рис.8).

У животных, получавших ССЦ + силимарин, концентрация общего холестерина на 57% (р<0,001) ниже, чем у группы ССЦ- контроля. Экстракт семян ЛО уменьшал показатель до 45%, плодов-коробочек - до 26% (р<0,05). Экстракт листьев привел к достоверному снижению показателя на 27% (р<0,05) только в дозе 100 мг/кг.

Общий Холестерин

ШФИЗ. Р-Р ЭСС1.4 Контроль

НСС|.4+Силимарин (БОМГ/КГ М.Т.) 0 СС1.4+Экстракт (50МГ/КГ М.Т.) Ш СС1_4+Экстракт (ЮОМГ/КГ М.Т.)

Рис. 8 Влияние экстрактов лотоса орехоносного на концентрацию общего холестерина

(миоль/л)

* - достоверность различий между группами животных физ. р-р. (гр. 1) и группами животных ССЦ (гр. 2) (по Стьюденту): * - р<0,05 ; *" - р<0,01;т - р<0,001.

- достоверность различий между группами животных ССЦ (гр. 2) и остальными группами животных (гр. 3-9) (по Стьюденту); * - р<0,05 ; " - р<0,01; "' - р<0,001.

• - достоверность различий между группами животных силимарин (гр. 3) и экстракт лотоса (гр. 49) (по Стьюденту): • - р<0,05 ; •• - р<0,01; ••• - р<0,001.

Результаты исследования антиоксидантной активности экстрактов лотоса орехоносного в тканях печени и почек крыс

Выявлено, что экстракты лотоса орехоносного в обеих экспериментальных дозах способствуют уменьшению уровней ТБК-активньтх продуктов в тканях печени и почек и повышают активность каталазы по сравнению с группой, получавшей ССЦ. Однако большая степень снижения уровня МДА в печени характерна для дозы 100 мг/кг (р<0,001) (табл. 2).

Таблица 2.

Влияние экстрактов ЛО на концентрацию МДА и активность каталазы в печени и почках

Цокачатели Группы Печень Почки

ТБК-активные продукты, нмоль/мг ткани Катал азная активность, мкат/л ТБК-активные продукты, нмоль/мг ткани Каталазная активность, мкат/л

Физ. р-р 0,18±0,08 23,33±0,28 0,15±0,04 23,55±0,69

ССЦ 1,06±0,20ш 19,23±1,72ш 0,71±0,06#* 20,54±2,66s

CCI4+ Силимарин (50 мг/кг массы тела) 0,25±0,08*" 21,80±0,75" 0,28±0,06*" 23,50±0,33*

CCLt + Экстракт семян ЛО (50 мг/кг массы тела) 0,52±0,22*"w 21,19±0,87* 0,51±0,13**w 23,42±0,59*

CCI4 + Экстракт семян ЛО (100 мг/кг массы тела) 0,28±0,11*"<D) 21,71±0,93** 0,42±0,12*" 23,38±0,62*

ССЦ + Экстракт плодов ЛО (50 мг/кг массы тела) 0,67±0,24**н 21,55±0,62" 0,52±0,14"м 23,44±0,47*

ССЦ + Экстракт плодов ЛО (100 мг/кг массы тела) 0,54±0,27**н 22,28±0,49" 0,51±0,10"н 23,88±0,51*

ССЦ + Экстракт листьевЛО (50 мг/кг массы тела) 0,71±0,16"М 21,48±0,82" 0,49±0,09"м 24,10±0,28"

ССЦ + Экстракт листьев ЛО (100 мг/кг массы тела) 0,27±0,13"*(оа) 21,91±0,65" 0,47±0,15**w 24,14±0,22"

£

- достоверность различий между группами животных физ. р-р. (гр. I) и группами животных ССЦ (гр. П) (по Стьюденту): * - р<0,05;## - р<0,01; т - р<0,001.

* - достоверность различий между группами животных ССЦ (гр. П) и остальными группами животных (гр. III - IX) (по Стьюденту); * - р <0,05; " - р <0,01; *** - р <0,001.

• - достоверность различий между группами животных силимарин (гр. III) и экстракт лотоса (гр. 1У-1Х) (по Стьюденту): р <0,05; ••-р <0,01; р <0,001.

° - достоверность различий между группами животных 50 мг/кг массы тела экстракт лотоса и группами животных 100 мг/кг массы тела экстракт лотоса (по Стьюденту): ° - р <0,05; ап- р <0,01; ппа-р <0,001.

Результаты анализа влияния экстрактов семян, плодов-коробочек и листьев лотоса орехоносного на морфофункциональные параметры дезинтоксикационной

функции ткани печени

Действие тетрахлорметан на морфологическую картину печени

Выявлено, что под действием ССЦ нарушается балочная структура печени. Следует отметить значительные нарушения микроциркуляции: неравномерно расширенные капилляры, в которых заметен стаз клеток крови (в основном эритроцитов), множество мелких кровоизлияний (геморрагии) вдоль стенок сосудов (рис. 9). В цитоплазме

гепатоцитов обнаружены многочисленные жировые пустоты, что указывает на жировую дистрофию печени: гибель клеток печени сопровождается слиянием жировых капель. Характерно, что пустоты по объему превышали диаметр печеночных клеток. Внутриклеточные пустоты также были довольно значительными, что указывает на крупноклеточный характер ожирения гепатоцитов. Жировая инфильтрация охватывала всю паренхиму печени: наблюдалось ее диффузное ожирение. В паренхиме обнаружено большое количество некрозов (1/3 органа), захватывавших 2-4 гепатоцита. По наличию и состоянию ядер клетки делились на 3 типа: безъядерные, клетки с темноокрашенным плотным ядром, клетки со светлым крупным ядром. Кроме того, появились клетки с гигантскими ядрами. Оболочки клеток четко не различались из-за массивного отека ткани. Отек затронул и эндотелий сосудистых стенок. В условиях ССЬ4-индуцированного повреждения печени более чем на 70% увеличивается диаметр гепатоцитов. Диаметр ядер гепатоцитов увеличивается на 50%.

Таким образом, отмечена следующая патология печеночной паренхимы: нарушение микроциркуляции; отек паренхимы органа, жировой гепатоз, некроз, полиморфизм клеток и ядер гепатоцитов. Жировой гепатоз находился во второй - третьей степени развития. Это : ожирение ткани органа в сочетании с некробиозом гепатоцитов и с начинающимся

Рис. 9 Препарат печени крыс. Тетрахлорметан. Окраска гематоксилин-эозином, 0к10х0б40

1 - некроз нескольких клеток печени: 2 - жировая дистрофия цитоплазмы клетки печени; 3 - отек паренхимы органа, отсутствие границ между клетками; 4 - гигантское ядро клетки печени; 5 -амитоз клеток печени; 6 - некроз ядра гепатоцита; 7 - спазм капилляров.

Влияние экстракта семян лотоса орехоносного на морфологическую картину печени на фоне воздействия тетрахлорметана

Гистологическое исследование показало, что балочная структура по-прежнему нарушена из-за отека паренхимы печени, сохраняется небольшой отек сосудов. Капилляры I остаются несколько расширенными и заполнеными цепочкой из эритроцитов (рис. 10). ! Наблюдаются мелкие кровоизлияния. Выявлен полиморфизм ядер: большинство ядер | крупные, светлые, даже гигантские. Имеются и мелкие, плотные, интенсивно окрашенные.

Отмечены незначительные участки некроза, признаков жировой дистрофии не | обнаружено, что говорит о достаточно высокой степени деинтоксикационного воздействия I экстракта семян лотоса орехоносного в дозе 100 мг/кг м. т. Имеющиеся небольшие

изменением дольчатой структуры печени.

изменения гепатоцитов почти полностью соответствуют изменениям клеток печени контрольной группы.

■»5 V** * '' # > •

V -^ ** « ' ' • » •

'» ' |» .-V ' 1 * • 1 ^ % '» _ ф '¿1 _:_ * % > * <9 / : т*\ Щ *'- ■ * Е&1Э1& * л 1 У||* й- »

а» в ч т * * Г , 1

в * £ • * .с • ® * .... • V» " 6 •'/* ; * -Ф ш " 1Ш ' ... < 2' * о * " ¿ « 9 » О ' * ^ ^ ; . ЯВв? & ' ® о

Рис. 10 Препарат печени крыс. Тетрахлорметан + экстракт семян лотоса орехоносного

(100 мг/кг массы тела животного). Окраска гематоксилин-эозином. 0к10х0б40

1 - гигантское ядро гепатоцита; 2 - расширенный участок капилляра; 3 - мелкий участок некроза.

Анализ морфометрических показателей паренхимы печени под действием силимарина и экстрактов различных частей лотоса орехоносного в условиях ССЬ4 -

индуцированного гепатоза

Силимарин, вводимый на фоне ССХ^-индуцированного повреждения печени, в большей степени нивелировал гистоструктурные и морфометрические проявления интоксикации: уменьшалась степень микруциркуляторного расстройства и отек паренхимы, существенно снижалось количество некрозов. Диаметр ядер не отличался от контроля, число всех типов клеток также было в пределах нормы.

Различные экстракты лотоса орехоносного оказали в разной степени выраженный гепатопротекторный эффект. Наиболее эффективным оказался экстракт семян ЛО. Диаметр гепатоцитов и их ядер даже на фоне введения тетрахлорметана не отличались от соответствующих значений в контроле, что свидетельствует о высокой, сравнимой с эталонным гепатопротектором силимарином защитной активностью экстракта семян лотоса орехоносного в отношении гепатотоксического агента. Гепатопротекторная активность экстрактов плодов-коробочек, вводимых крысам в двух концентрациях, оказалась достаточно высокой, однако степень повреждения паренхимы печени по сравнению с действием экстракта семян и силимарина была выше. Экстракт листьев ЛО в двух исследованных экспериментальных дозах не оказал протекторного воздействия на модели тетрахлорметан-индуцированной гепатотоксичности, морфометрические показатели не отличались от соответствующих показателей в группе, получавшей только тетрахлорметан.

Обсуждение результатов

Развивающаяся при отравлении тетрахлорметаном печеночная недостаточность связана с интенсификацией процессов перекисного окисления, продукцией и накоплением высокотоксичных метаболитов, что приводит к некрозу гепатоцитов и фиброзу печени (Л.В. Кравченко, 2009). Среди известных механизмов повреждения гепатоцитов авторы выделяют механизм индукции перекисного окисления липидов тетрахлорметаном в

отдельный тип, в котором цитохром Р-450 является основным субстратом (Recknagel, 1983). Ключевым ферментом, обеспечивающими очистку от Н202, образующегося во время неполного окисления, является каталаза. Она играет важную роль в механизме защиты организма от вредного воздействия активных форм кислорода и свободных радикалов в биологических системах (Halliwell and Gutteridge, 1989).

Согласно полученным результатам, угнетение естественных ферментативных механизмов защиты организма под действием ССЦ обусловлено также снижением каталазной активности в тканях печени и почек, сопровождающимся повышением уровня ТБК-активных продуктов в 5,9 и 4,7 раза (р<0,001) по сравнению с интактным контролем.

Исследование гепатопротекторного действия экстрактов JIO при экспериментальном повреждении печени показало, что введение всех трех экстрактов способствует коррекции гепатоза. При этом существует некоторая специфичность воздействия: нормализации уровня общего белка, AJIT и АСТ в большей степени способствует экстракт плодов-коробочек лотоса орехоносного, в то время как максимальное снижение ЩФ, общего билирубина и мочевины наблюдалось после введения экстрактов семян и плодов-коробочек. Это указывает на то, что морфологически различные части растения оказывают селективное воздействие на звенья гепато-билиарной системы. Метаболическую функцию печени в условиях экспериментального токсического воздействия, в большей степени, нормализует экстракт семян ЛО.

Уровень ТБК-активных продуктов как в печени, так и в почках максимально приблизился к нормальному значению под воздействием препарата сравнения -силимарина. Однако экстракты ЛО также проявили свои антиоксидантные свойства, что привело к снижению количества ТБК-активных продуктов. То есть, интенсивность процессов свободно-радикального окисления достоврено уменьшилась, что сопровождалось интенсификацией очищения тканей от Н202. Полученные результаты согласуются с данными о значительном росте уровня супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы и снижении ТБК-активных продуктов после введения водно-спиртового экстракта семян в течение 4 дней до применения четыреххлористого углерода (Rai et al., 2006). Об интенсификации процесса очищения тканей от метаболитов тетрахлорметана свидетельствует увеличение каталазной активности в печени и почках. Все это в совокупности подтверждает наличие у экстрактов лотоса орехоносного гепатопротекторных и антиоксидантных свойств в отношении СС14-индуцированного повреждения.

Известно, что терапевтическое и профилактическое действие препаратов на растительном сырье обусловлено особенностями химического состава экстрагированных из них смесей. Согласно литературным данным, экстракты ЛО содержат алкалоиды, сапонины, фенольные соединения и углеводы. Спектрометрический анализ экстракта семян подтвердил насыщенность их биологически-активными веществами терпеновой природы, эфирами высших жирных кислот, производными стеролов. Представители этого химического ряда обладают антирадикальной и антиоксидантной активностью (Tripathi et al., 1996). Лупеол, содержащийся в экстракте семян ЛО, обладает фармакологической активностью против различных заболеваний, таких как артрит, диабет, сердечнососудистые заболевания, поражения почек, печени, микробные инфекции и рак (Chaturvedi et al.,2008; Saleem, 2008), играет очень важную роль в нормализации липидного профиля (Sudhahar et al.,2007), ранозаживлении (Harish et al.,2008), имеет защитный эффект при гиперхолестеринемии, связанной с повреждением почек (Sudhahar et al.,2008) и подавлением иммунных факторов (Bani et al.,2006; Vasconcelos et al., 2008).

Основными фотохимическими компонентами спиртового экстракта плодов-коробочек ЛО являются органические кислоты, их эфиры, а также флавоны,

17

характеризующиеся противоопухолевой и антиоксидантной активностью (Yeong et al., 1989; Govindappa et al., 2014; Veitch and Grayer, 2008). Обнаружено, что процианидины плодов и коробочек ЛО обладают многими биологическими эффектами, включающими антирадикальное действие, в частности, освобождение организма от перекисных радикалов гидроксила, водорода, гидро-пероксильного и супероксид-анион-радикалов.

Учитывая известные данные о механизме токсического поражения печении под действием тетрахлорметана, можно предположить, что ингибирование ПОЛ экстрактами лотоса орехоносного обусловлено стабилизацией цитохрома Р-450 фенольными соединениями, входящими в состав экстрактов. Включаясь в обменные процессы в тканях, фснольныс соединения экранируют реакционный субстрат в цепи перекисного окисления. Возможно, некоторые представители этого класса химических соединений стабилизируют цитохром Р-450 в самом начале действия СС14, в то время, как другие реагируют с уже образовавшимися перекиси ыми радикалами, защищая структурные белки и липиды на финальном этапе реакции окисления. В частности, широко представленные в растительных экстрактах дубильные вещества, относящиеся к группе полифенолов, обладают способностью к закреплению белковых молекул в клеточных структурах.

Таким образом, можно сказать, что исследованные экстракты обладают выраженными гепатопротекторными и антиоксидантными свойствами, обусловленными содержанием в них представителей важнейших классов органических соединений, активных в отношении свободных радикалов. Достоверное изменение основных биохимических показателей при введении экстрактов свидетельствует о значительном ингибировании перекисного окисления липидов и выведении уже образовавшихся продуктов окисления. Специфичность влияния экстрактов, выделенных из разных частей растения также обусловлена их качественным составом. Так, экстракты семян и плодов-коробочек лотоса орехоносного содержат больше высших жирных кислот, их эфиров, терпенов и стеролов, чем экстракт листьев, который насыщен флавонолами, такими как кверцетин.

Сопоставление результатов биохимического и гистологического анализа подтвердило высокую степень протективного действия экстрактов, выражающегося в нормализации основных морфометрических характеристик печеночной ткани, аналогичной действию силимарина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенного исследования выявили гепатопротекторное и антиоксидантпое действие экстрактов семян, плодов-коробочек и листьев лотоса орехоносного у самок крыс с ССЦ-индуцированным повреждением печени. Нами было показано, что экстракты ЛО способствуют ингибированию гепатотоксического действия тетрахлорметана через активацию фермента каталазы и утилизацию свободных радикалов, образующихся при метаболизме тетрахлорметана, предотвращая тем самым перекисное окисление липидов в тканях печени и почек.

Гепатопротекторное действие исследуемых экстрактов ЛО проявляется через восстановление основных биохимических показателей и улучшение морфофункциональных характеристик паренхимы печени. Эффективность исследуемых экстрактов семян и плодов-коробочек лотоса орехоносного сопоставима с известным гепатопротекторным препаратом - силимарином.

ВЫВОДЫ:

1. В составе экстрактов лотоса орехоносного преобладают биологически активные вещества, относящиеся к классу фенольных и флавоноидных соединений. Установлено, что исследуемые части JIO содержат фенольные соединения, которые обусловливают антиоксидантную активность экстрактов. Основными фитохимическими компонентами спиртового экстракта семян ЛО является лупеол (22,95%); плодов - 9-октадеценовой кислоты метиловый эфир (12,46%), 8,11-окгадекадиеновой кислоты метиловый эфир (11,71%), 13-докозеновой кислоты метиловый эфир (10,47%); листьев - 1-гексадеканол (10,47%) и 13-докозеновой кислоты метиловый эфир (7,88%).

2. Экстракты лотоса орехоносного достоверно изменяют значение биохимических маркеров печени при ССЦ-индуцированном гепатозе за счет подавления перекисного окисления липидов и повышения активности катал азы. Наибольшим протективным потенциалом обладают экстракты семян и плодов-коробочек ЛО, снижающие активность ферментов АЛТ и ACT на 38-47% и 31-38% соответственно. Наибольшее уменьшение концентрации щелочной фосфатазы (на 48%) и общего билирубина (на 83%) в сыворотке крови вызвал экстракт семян ЛО.

3. Максимальной коррекции гистологической структуры паренхимы печени на фоне токсического повреждения тетрахлорметаном способствует экстракт семян ЛО, устраняющий признаки жировой дистрофии и способствующий сохранению архитектоники органа. Величина клеток н их ядер не отличима от значений в контроле.

4. В сравнении с действием силимарина все экстракты проявляют высокую гепатопротекторную активность, основные биохимические показатели изменяются в динамике, аналогичной силимарину. Наименьший эффект экстрактов наблюдался в отношении щелочной фосфатазы и общего билирубина. Закономерной специфики влияния экспериментальных доз экстракта семян и плодов-коробочек не выявлено. Экстракт листьев вызывает достоверное снижение концентрации щелочной фосфатазы и холестерина в дозе 100 мг/кг.

5. Антиоксидантная активность экстрактов ЛО аналогична силимарину. Наибольшее снижение концентрации ТБК-активных продуктов, в частности МДА, наблюдается в печеночной ткани после введения 100 мг/кг экстракта семян (0,28±0,11). Увеличение каталазной активности независимо от дозы введения экстрактов аналогично силимарину и находится в пределах от 21,19±0,87 до 21,91±0,65.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи, опубликованные в ведущих рецензируемых научных журналах и ичдяниат,

определенных ВАК:

1. Абделхамид М.С. Фармакогностическая оценка и фармакологические свойства экстракта семян лотоса орехоносного / М.С. Абделхамид, Е.И. Кондратенко, MB. Мажитова, Н.А. Ломтева, Н. В. Нетипанова, М.В. Губанова, А.А. Бонн // Естественные науки (Биотехнология). - 2013. - Т.43.-№ 2. - С. 112-119. (Список ВАК, РИНЦ-0,116).

2. Abdelhamid M.S. The antitumor and anti-inflammatory activities of Nelumbo nucífera (Sacred lotus) / M.S. Abdelhamid, E.I. Kondratenko // Естественные науки (Экспериментальная Физиология, Морфология и Медицина). -2014 -Т46 -№ 1 -С 47-53. (Список ВАК, РИНЦ-0,116).

3. Абделхамид М.С. Изучение протекторных и антиоксидантных свойств экстракта плодов-коробочки лотоса орехоносного (Nelumbo nucífera) у самок крыс с индуцированным СС14-повреждением печени и почек / М.С. Абделхамид, Е.И. Кондратенко, Н.А. Ломтева // Технология и товароведение инновационных пищевых продуктов. - 2014. — Т.29. - № 6. - С. 21-27. (Список ВАК, РИНЦ - 0,293).

4. Абделхамид М.С. Гепатопротекгорные и антиоксидантные свойства экстракта листьев лотоса орехоносного {Nelumbo nucífera) у самок крыс с индуцированным ССЦ повреждением печени / М.С. Абделхамид, Е.И. Кондратенко, К.Н. Кондратенко // Естественные науки (Экспериментальная Физиология, Морфология и Медицина) -2015. - Т50. - № 1. - С. 56-62. (Список ВАК, РИНЦ-0,116).

5. Abdelhamid MS. GC-MS analysis of phytocomponents in the ethanolic extract of Nelumbo nucífera seeds from Russia / E.I. Kondratenko, N.A. Lomteva // Journal of Applied Pharmaceutical Science. - 2015. - V.5. - № 4. - P. 115-118. (Scopus, SJR-0.258).

Тезисы докладов региональных и международных конференций:

1. Абделхамид М.С. Hepatoprotective activity of sacred lotus {Nelumbo nucífera Gaertn): A review / M.C. Абделхамид // Сборник трудов VII международной научно-практической конференции для молодых ученых «Фундаментальные и прикладные проблемы получения новых материалов: исследования, инновации и технологию) Астраханский государственный университет, Астрахань, Россия, 23-25 апреля, 2013. - С. 47-50.

2. Абделхамид М.С. Biological activities of heterocyclic compounds from Nelumbo nucífera: A review / M.C. Абделхамид // Сборник трудов in Международная научная конференция «Новые Направления в Химии Гетероциклических Соединений» Пятигорск, Россия, 17-21 сентября, 2013. - С.127.

3. Абделхамид М.С. The medicinal and therapeutic aspects of Nelumbo nucífera / M.C. Абделхамид // Сборник трудов Ш фундаментальная и прикладная исследование в биологии (Биотехнология) «Международная конференция студентов, аспирантов и молодых учёных», Донецк, Украина, 24-27 февраля 2014. - С.266.

4. Абделхамид М.С. Comparison of the antioxidant activity of different parts of Nelumbo nucífera / M. С. Абделхамид // Сборник трудов VIII международная научно-практическая конференция «Фундаментальные и прикладные проблемы получения новых материалов: исследование, инновации и технологии», Астраханский государственный университет, Астрахань, Россия, 28-30 апреля, 2014. - С. 37-38.

5. Абделхамид М.С. Изучение протекторных и антиоксидантных свойств экстракта семян Лотоса Орехоносного {Nelumbo nucífera) у самок крыс с индуцированным СС14

20

повреждением печени и почек / М.С. Абделхамид, Е. И. Кондратенко, Н.А. Ломтева // Сборник трудов П международная научно-практическая конференция «Современная биология: актуальные вопросы», Санкт-Петербург, Россия, 17-18 октября 2014. - С. 1722.

6. Abdelhamid M.S. Evaluation of the Protective Activity of the Extract of Nelumbo nucifera Seedpod Against ССЦ-mduced Hepatic-Renal Toxicity in Rats / M.S. Abdelhamid, E.I. Kondratenko, N.A. Lomteva // Book of abstracts of the 12th International Conference on Chemistry and its Role in Development (ICCRD'12), Mansoura & Sharm El-Sheikh, Egypt, 16-20 March 2015. - P. 425.

7. Абделхамид M.C. Гепатопротекторные и антиоксидантные свойства экстракта листьев лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) у самок крыс с индуцированным СС14 повреждением печени / М.С. Абделхамид, К.Н. Кондратенко // 53-ей Международной научной студенческой конференции «МНСК 2015», Новосибирск, Россия, 11-17 апреля 2015.-С. 134.

8. Абделхамид М.С. Хромато-масс-спектрометрическое изучение химического состава спиртового экстракта листьев лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) / М.С. Абделхамид, К.Н. Кондратенко // Сборник трудов V юбилейной Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация- потенциал будущего», Санкт-Петербург, Россия, 20-21 апреля 2015. - С. 463-465.

9. Abdelhamid M.S. Phytochemical analysis, Hepatoprotective and Antioxidant Activities of Russian Nelumbo nucifera Leaves Against ССЦ-Induced Hepatic Damage in Rats / M.S. Abdelhamid, E.I. Kondratenko, N.A. Lomteva // Book of abstracts of the 6th Russian-Korean Conference "Current Issues of Biologically Active Compounds Chemistry and Biotechnology", Novosibirsk, Russia, 5-10 July 2015. - P.131.

Список сокращений:

ЛО - лотос орехоносный

БАВ - биологически активные вещества

CCL, — четыреххлористый углерод или тетрахлорметан

КАТ - катал аза

ТБК - тиобарбитуровая кислота МДА — малоновый диальдегид АсАТ — аспартатаминотрансфераза АлАТ - аланинаминотрансфераза ЩФ - щелочная фосфатаза ЛП - лекарственные препараты ПОЛ - перекисное окисление липидов АФК - активные формы кислорода ГЦК - гепатоцеллюлярная карцинома

Подписано в печать 01.09.2015 г. Уч.-изд. л. 1,4. Усл. печ. л. 1,3. Заказ № 3226. Тираж 100 экз.

Оттиражировано в Издательском доме «Астраханский университет» 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20а Тел. (8512) 48-53-47 (отдел маркетинга), 48-53^5, тел. 48-53-44, тел./факс (8512) 48-53-46 E-mail: asupress@yandex.ru