Физиологическое обоснование применения фитогепатопротектора "ВинСпир" в ветеринарии

Павлова, Ольга Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Физиологическое обоснование применения фитогепатопротектора "ВинСпир" в ветеринарии
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Физиологическое обоснование применения фитогепатопротектора "ВинСпир" в ветеринарии"

□034Э4

На правах рукописи

ПАВЛОВА ОЛЬГА НИКОЛАЕВНА

ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ФИТОГЕПАТОПРОТЕКТОРА «ВИНСПИР» В ВЕТЕРИНАРИИ

03.03.01 - Физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 5 МАР 2010

Казань-2010

003494107

Работа выполнена в Федеральном государственном общеобразовательном учреждении высшего профессионального образования «Ульяновский государственный университет»

Научный руководитель — доктор биологических наук, профессор

Гондарева Людмила Николаевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, доцент

Логинов Георгий Павлович

доктор биологических наук, профессор Зайцев Владимир Владимирович

Ведущая организация — ФГОУ ВПО «Ульяновская

государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится 23 апреля 2010 года в 13.00 ч. на заседании диссертационного совета Д 230.034.02 при ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» по адресу 420074, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35, КГАВМ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана».

Автореферат разослан/Ь марта 2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, доцент

Мухаметгалиев Н.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования.

Печень - жизненно важный непарный внутренний орган, выполняет большое количество различных физиологических функций.

В печени происходит один из этапов обезвреживания токсических веществ и подготовка к выводу их из организма. Скорость переработки токсических компонентов в печени ограничена и не может быть резко увеличена в соответствии с возрастающими потребностями организма и, как следствие, возникают нарушения нормального хода процессов метаболизма, иммунного ответа, детоксикации и антимикробной: защиты организма [Н.А'. Антипанова, Н.Н. Котляр, >2006; Ю.П. Гичев, 2002].

В патогенезе нарушений функций; Печени важную роль играет увеличение уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ),' приводящего к оксидативному стрессу, при котором нарушается проницаемость клеточных мембран и изменяются функции клеток. Огромную роль в этом процессе играют свободные радикалы [В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Глотан, 1992; Ю.А. Владимиров, 2000].

Свободнорадикальное окисление - это необходимое условие обновления цитоплазматических мембран и их нормального функционирования, но поддержание гомеостаза в организме невозможно без работы - антиоксидантных систем, нейтрализующих излишние свободные радикалы [Н.К. Зенков, 2001].

Антиоксиданты вырабатываются в различных тканевых структурах и клеточных компонентах, имеют различную субстратную специфичность, но все они обладают сродством к активным формам кислорода и обеспечивают комплексную защиту биополимеров.

Однако при окислительном стрессе механизмы ферментной защиты оказываются недостаточны и возникает необходимость дополнительного введения в организм низкомолекулярных антиоксидантов.

Проведенный нами анализ результатов исследований, приведенных в доступной литературе, показал, что биологически активные соединения (БАС) биомассы сине-зеленой микроводоросли спирулины платенсис (5'рггиНпа рЫетгз) и шрота семян винограда могут бьггь основой для изготовления высокоэффективных гепатопротекторов.

Уникальное сочетание БАС (белки, витамины группы В, С, Е, полиненасыщенные жирные кислоты, пигменты: каротиноиды, хлорофилл, фикоцианин) обуславливают позитивное влияние биомассы спирулины на организм человека и животных.

Виноградный шрот в свою очередь содержит биологически активные фенольные соединения и имеет богатый набор ценных минеральных компонентов. Суммарное сочетание этих растительных объектов взаимно обогащает и усиливает позитивное действие на организм.

В связи с этим, целью нашей работы явилось создание комплексного фитогепатопротектора - смеси «ВинСпир» и изучение ее влияния на морфологический состав крови и функцию печени.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие основные задачи:

1. разработать технологию получения и создать гепатопротектор на основе биомассы спирулины и шрота семян винограда; н „•::..

2. изучить морфологический состав крови крыс при нагрузке фитоантиоксидантами;

3. изучить влияние смеси «ВинСпир» и ее составяяющих,.на-,МРрфологический состав крови животных, находящихся в состоянии оксидативдог<ад?рерса;

4. изучить функцию системы ПОЛ-АО печени крыс на. нагрузку смесью «ВинСпир» и отдельными ее компонентами у интакных крыс и на модели оксидативного стресса в сравнительном аспекте с (5-каротином; а г

5. разработать регламент применения смеси «ВинСпир»:.

Научная новизна работы. Впервые создан комплексный фитогепатопрогектор на основе биомассы спирулины и шрота семян винограда в соотношении 1:1 - смесь

«ВинСпир». Разработана технология изготовления смеси и определена лекарственная форма.

Установлено, что компоненты «ВинСпир» обладают антиоксидантной активностью (экстракт биомассы спирулины иягибирует процесс аутоокисления адреналина на 76%, а экстракт шрота семян винограда - на 53%), имеют богатый микроэлементный состав и соответствуют параметрам микробиологической чистоты СанПин 2.3.2.1078-01.

Выявлено, что биомасса спирулины и шрот семян винограда позитивно влияют на состав периферической крови клинически здоровых животных и животных с гипофункцией печени, но более значимый положительный эффект наблюдается в случае их сочетанного применения в виде смеси «ВинСпир».

Выявлено, что на нагрузку композицией «ВинСпир» и ее компонентами организм клинически здоровых крыс отвечает смещением равновесия в системе ПОЛ-АО печени в сторону снижения выработки антиоксидантных ферментов.

Нагрузка фитоантиоксидантами организма крыс с гипофункцией печени восстанавливает нарушенное равновесие в системе ПОЛ-АО достоверным снижением активности аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы, а также увеличением активности каталазы, глутатионпероксидазы, супероксиддисмугазы и снижением концентрации малонового диальдегида в тканях органа.

Впервые выявлен гепатопротекторный эффект шрота семян винограда. Сочетанное применение биомассы спирулины и шрота семян винограда в виде смеси «ВинСпир» обогащает и усиливает их позитивное влияние на организм животных.

Доказано, что смесь «ВинСпир» по своему гепатопротекторному действию превосходит известный препарат р-каротин и может быть рекомендована как лечебное средство.

Полученные результаты являются новыми и дополняют научные знания о физиологии печени.

Практическая значимость. Шрот семян винограда является вторичным ресурсом и его использование создает безотходную технологию производства, что в настоящее время является актуальной задачей.

Биомасса спирулины и шрот семян винограда, необходимые для создания смеси «ВинСпир» доступны, экологически безопасны и экономически выгодны.

Смесь «ВинСпир» может бьггь использована при гипофункции печени, что позволяет расширить ассортимент существующих средств, обладающих выраженным антиоксидантным и гепатопротекторный действием.

Разработаны технические условия и технические инструкции для производства смеси «ВинСпир».

Результаты исследований внедрены в учебный процесс при подготовке и переподготовке специалистов в Поволжской государственной социально-гуманитарной академии в г. Самара и Ульяновском государственном университете в г. Ульяновск.

Имеется положительное решение № 2009136886/22(052141) о вьщаче патента на полезную модель «Устройство для смешения компонентов биологически активных добавок растительного происхождения» от 05.10.2009 г.

Технологические решения по производству смеси «ВинСпир» и методы контроля качественного и количественного состава внедрены на предприятиях ООО «Эмульсионные технологии» и ООО НПФ «ХимПром» г. Самара.

Апробация и публикация результатов исследования.

Всероссийской научно-технической конференции «Современные сервисные технологии» (Самара 2007); «IV Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы развития транспортного комплекса» (Самара, 2008); «III Всероссийской научно-практической конференций «Процессы, технологии, оборудование и опыт переработки отходов и вторичного сырья» (Самара 2008); «III конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2008).

По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, из которых 4 - в рекомендуемых ВАК изданиях.

Основные положения, выносимые на защиту:

• Биомасса спирулины и шрот семян винограда имеют богатый микроэлементный состав, обладают выраженной антиоксидантной активностью, экологически безопасны и соответствуют требованиям микробиологической чистоты СанПин 2.3.2.1078-01. На основе биомассы спирулины и шрота семян винограда в соотношении 1:1 разработан комплексный фитогепатопротектор - смесь «ВинСпир».

• Смесь «ВинСпир» и ее компоненты оказывают позитивное влияние на морфологический состав крови клинически здоровых животных и животных с гипофункцией печени.

• Биомасса спирулины, шрот семян винограда и смесь «ВинСпир» оказывают выраженный гепатопротекторный эффект при гипофункции печени, снижая активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы и концентрацию малонового диальдегида, а также увеличивая активность хаталаз ы, глутапгонлерохсвдазы, супероксиддасмутазы в тканях органа, тем самым уменьшая уровень ПОЛ.

• Гепатопротекторный эффект смеси «ВинСпир» значительно превосходит таковой отдельных ее компонентов и известный препарат ß-каротин в среднем на 17 %.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 157 страницах машинописного текста, содержит 47 таблиц, 31 рисунок, состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной объектам наблюдения и методам исследований, и пяти глав, содержащих результаты собственных исследований. Список литературы включает 188 источников, в том числе 44 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводились в опыте in vitro и in vivo на базе кафедры фармацевтической технологии, кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии, кафедры фармакологии Самарского государственного медицинского университета, а также на кафедрах органической, биоорганической и медицинской химии, общей химии и хроматографии и кафедре зоологии Самарского государственного университета.

В качестве объектов наблюдения служили 570 беспородных белых крыс - самцов массой 190-210 г. На 40 животных изучали морфологический состав периферической крови после нагрузки растительными гепатопротекторами.

На 50 животных были проведены исследования по изучению изменений морфологического состава крови крыс под влиянием растительных гепатопротекторов на фоне оксидативного стресса.

Изучение функции системы ПОЛ-АО печени крыс на нагрузку растительными антиоксидантами у интакных крыс и на модели оксидатавного стресса в сравнительном аспекте с ß-каротином осуществляли на 100 животных.

Все эксперименты были проведены в 3-х повторностях.

В качестве фитоантиоксидантов-гепатопротекторов использовали биомассу спирулины и шрот семян винограда, а также разработанную на их основе в соотношении 1:1 комплексную смесь «ВинСпир».

В экспериментах использовали биомассу микроводоросли Spirulina platensis, культивирование которой осуществляется на базе ООО «Неофит» (г. Самара) и шрот

семян винограда, который вырабатывают на базе ООО «Золотой Корень» г. Самара.

Для изучения биомассы спирулины, шрота семян винограда и разработки на их основе смеси «ВинСпир» нами были использованы физико-химические методы исследования (ТСХ, ВЭЖХ, рентгенфлоуресцентная спектрометрия); химические методы (исследование антиоксидантной активности); микробиологические методы (исследование микробиологической чистоты); биологические методы (исследование экологической безопасности по стандартной методике Н.С. Строганова), математические методы (статистическая обработка результатов исследований).

Также нами использовались общепринятые гематологические, физиологические и биохимические методы. исследования состояния животных (определение активности ферментов, определение гематологических показателей) с целью выявления влияния фигоантиоксидантов на состав крови и систему перекисного окисления липидов -антиоксидантов печени здоровых животных и животных, находящихся в состоянии оксидативного стресса.

Схема проведения экспериментов представлена на рисунке 1._

Физиологическое обоснование применения фитоантиоксидантов при гипофункции печени на фоне оксидативного стресса

Изучение состава крови крыс на фоне нагрузет внутрижелудочяо фитоантиокевдантами

Исследование прогтивотоксическнх свойств фитоантиоксидантов-гепатопротекторов

Определение микроэлемьетгного состава, антиоксидантной австошости, микробиологической чис экологической безопасности и разработка комплексного фитогепатопротектор^-смеси «ВинСпир»

Изучение системы ПОЛ-АО печени здоровых крыс после нагрузки внутрижелудочно фитоантиоксидантами

Смесь «ВинСпир»

. Исследование смеси «ВинСпир», определение экологической безопасности, качественного и количественного состава

Исследование реакции системы ПОЛ-

АО печени половозрелых крыс, в состоянии оксидатианого стресса на дополнительную нагрузку фитоантшжеидянталш в сравнительном аспекте ср-каротином.

Рисунок 1 - Схема проведения экспериментов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Исследование биомассы спирулины, шрота семян винограда и разработка комплексного гепатопротектора на их основе

Качественный и количественный безэталонный элементный анализ биомассы спирулины и шрота семян винограда производился методом рентгеноспектрального флоуресцентного анализа. Полученные результаты подтвердили, что оба объекта имеют богатый минеральный состав.

Изучение антиоксидантной активности 1 % экстрактов биомассы спирулины и шрота семян винограда щюводили методом аутоокисления низких концентраций адреналина в щелочной среде. Результаты показали, что водный экстракт биомассы спирулины ингибирует аутоокиеяение адреналина на 76%, экстракт шрота семян винограда - на 53%.

Исследование микробиологической чистоты растительных субстанций осуществляли по методике ГФ XI для выявления и подсчета бактерий, дрожжевых и плесневых грибов. Полученные результаты выявили, что шрот семян винограда, и биомасса спирулины платенсис отвечают требованиям микробиологической чистоты СанПин 2.3.2.1073-0). Содержание КМАФАнМ (количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов) в водных экстрактах биомассы спирулины и шрота семян винограда соответствует норме, БГКП (колиформы) и дрожжи не обнаружены, плесень, также обнаруживается в пределах нормы.

Изучение экологической безопасности растительных антиоксидантов-гепатопротекто^зов проводили по стандартной методике Строганова Н.С. на тест-объектах - дафниях. Длительность эксперимента составляла 21 сутки. Каждая серия была проведена в трех повторностях. В ходе эксперимента учитывали: количество погибших и оставшихся в живых рачков; время появления яиц в выводковых камерах; время выхода молоди из выводковых камер и ее количество. Достоверность различий оценивали по критерию Вилкоксона - Манна - Уятни.

Выявлено, что биомасса спирулины, шрот семян винограда и их композиция в соотношении 1:1экологически безопасны.

.Выявленные, характеристики биомассы спирулины и шрота семян винограда позволяют использовать их в композиции в виде комплексной фитосмеси «ВинСпир».

Смесь «ВинСпир» представляет собой композицию биомассы спирулины и шрота семян винограда в соотношении 1:1. Разработана технология получения смеси «ВинСпир» (рис. 2) и ее лекарственная форма.

ВР-1.1. Подготовка оборудования к работе

ВР-1.2. Подготовка твердых желатиновых капсул

ВР-1.3. Подготовка первичной упаковки

ВР-1.

Подготовительные операции

ТП-2. Подготовка массы для заполнения капсул

ТП-Э. Наполнение капсул, отбраковка незаполненных капсул.запайка капсул

УМ 0-4.

Стандартизация

капсул

УМО-5. Фасовка, упаковка, маркировка капсул

ТП-2.1. Подготовка биомассы спирулины

ТП-2Л. Подготовка шрота семян винограда

ТП-2 .3. Взвешивание биомассы спирулины

ТП-2.4. Взвешивание шрота семян винограда

ТП-2.5. Измельчение массы, просеивание, смешивание компонентов

Готовая продукция на склад

Рисунок 2 - Технологическая схема производства капсул «ВинСпир»

На ручных весах отвешивают равное количество биомассы спирулины и шрота семян винограда,. биомассу дополнительно измельчают в ступке, оба компонента тщательно

смешивают. Затем полученной смесью порошков наполняют твердые желатиновые капсулы и их закрывают. Для получения кишечнорастворимых капсул производят обработку оболочек готовых и заполненных капсул формальдегидом для придания ей большей твердости с целью продления времени распадаемости капсулы, чтобы до попадания в кишечник не происходило ее разрушение, а, следовательно, и разрушение биологически активных соединений компонентов. Капсулы «ВинСпир» цилиндрической формы с полусферическими концами весом 0,6 г, состоящие из двух частей, которые входят одна в другую, не образуя зазоров. Внутри мелкодисперсный сыпучий порошок серо-зеленого цвета, имеющий специфический запах.

«ВинСпир» необходимо дринимать по 1 капсуле 3 раза в день вместе с пищей тридцатидневным курсом с последующим повтором каждые полгода..

Для качественного анализа смеси «ВинСпир» нами выбран метод ТСХ, с помощью которого были идентифицированы (3-каротин и фикоцианин биомассы спирулины, галловая кислота и флавоноиды шрота семян винограда. С помощью количественных методов анализа смеси «ВинСпир» было установлено, что содержание р-каротина в ней составляет 0,15±0,01 мг %, фикоцианина - 80,25±0,65 мг % и галловой кислоты - 8,27± 0,61 мг%.

3.2. Исследование морфологического состава крови крыс на фоне нагрузки фитоантиоксидантами

Исследование влияния фитогепатопротекторов на состав крови изучали в течение 35 дней ва 40 белых беспородных крысах-самцах массой 190-210 г, разделенных на группы. Одна группа являлась контрольной и получала воду дистиллированную, животные опытных групп получали:

2 группа - суспензию биомассы спирулины;

3 группа - суспензию шрота семян винограда;

4 группа - суспензию «ВинСпир».

В соответствии с разделением на группы животным вводили воду и фитоаятиоксиданты в виде суспензий внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 10 мг/100 г веса тела, объемом 1 мл. Суспензии биомассы спирулины, шрота семян винограда и их композиции готовили на дистиллированной воде.

Взятие крови у крыс проводилось из хвостовых век по общепринятой методике. Состав крови определяли у крыс до начала исследований, а также на 1, 4, б, 8, 10, 12, 15, 18, 23, 28, 35 дни эксперимента. Оценивали следующие показатели: количество эритроцитов и лейкоцитов, лейкоформула, содержание гемоглобина и СОЭ.

Результаты исследований приведены в таблицах 1-4.

Динамика изменения, состава крови крыс представлена на рисунках и в таблицах.

Исследование влияния суспензии биомассы спирулины, шрота семян винограда и смеси «ВинСпир» показало, что содержание эритроцитов в крови животных достоверно увеличивается в зависимости от продолжительности поступления испытуемых веществ в организм (табл. 1).

Таблица 1 - Количества эритроцитов в крови крыс на фоне нагрузки _фитоантиоксидантами, (М-10'Ул)__

дни контроль суспензия шрота суспензия спирулины «ВинСпир»

0 2,80±0,18 2,84±0,17 2,90±0,17 2,82±0,15

35 3,15±0,27 5,35±0,14' 4,78±0,1б' 5,45±0,09'

Примечание. В этой таблице различия достоверны при Р<0,05: 1 - по сравнению с показателями животных контрольной группы.

Увеличение количества эритроцитов в 1 л крови животных на 35 день эксперимента, по сравнению с контрольной группой составило в 3 группе - 49,85 %, во 2 - 38,55 % и 4 группе-57,97%.

Концентрация гемоглобина в крови на момент окончания эксперимента по сравнению с контролем, в группе животных, получавших суспензию шрота виноградных семян, была

выше на 34,4 %, в группе животных, получавших суспензию биомассы спирулины - на 22,0 %, а в группе, получавшей «ВинСпир» - на 39,5 %.

В контрольной группе наблюдались незначительные колебания концентрации гемоглобина в крови на протяжении всего эксперимента (табл. 2).

Таблица 2 - Концентрации гемоглобина в крови крыс на фоне нагрузки внутрижелудочно фитоантиоксидантами, (г/л)_

ДНИ контроль суспензия шрота суспензия спирулины «ВинСпир»

0 74,5±3,5 77,2±2,4 75,4±2,6 77,1±2,3

35 87,0±4,Р 115,2±3,Г 106,1±3,4' 121,4±3,8'

Примечание. В этой таблице различия достоверны при Р<0,05: ' - по сравнению с показателями животных контрольной группы. Таблица 3 - Изменение содержания лейкоцитов в крови крыс на фоне нагрузки внутрижелудочно фитоантиоксидантами, (М-10%)

ДНИ контроль суспензия шрота суспензия спирулины «ВинСпир»

0 5,82±0,43 5,96±0,23 6,12±0,22 5,78±0,37

35 13,63±0,64 17,52±0,37' : 19,31±0,20' 20,41 ±0,3 5'

Примечание. В этой таблице различия достоверны при Р<0,05: ' - по сравнению с показателями животных котрольной группы.

Увеличение числа лейкоцитов в группе крыс, получавшей суспензию виноградного шрота, по сравнению с контролем составляет 28,54 %, получавшей суспензию спирулины

-41,67 %, а композицию-49,74 % (табл.3). .............

В контрольной группе также отмечается рост числа лейкоцитов, но, в целом, все эти'

колебания также находились в пределах физиологической нормы. ..... :

.В, лейкоцитарной формуле колебания эозинофилов и моноцитов! были в статистически

незначимых пределах, в отличие от сешентоадфных и палочкрядерных лейкоцитов (табл. 4).

Таблица 4 - Динамика содержания палочкоядерных лейкоцитов в крови на фоне ______нагрузки внутрижелудочно фитоантиоксидантами (%)_

ДИН контроль суспензия шрота суспензия спирулины «ВинСпир»

0 1,73±0,32 1,67±0,14 1,71±0,14 1,69±0,14

35 1,70±0,17 2,19±0,15' 2,12±0,37' 2,22±0,0Д8'

Примечание. В этой таблице различия достоверны при Р<0,05: ' - по сравнению с показателями животных контрольной группы.

Увеличение числа палочкоядерных лейкоцитов в группе крыс, получавшей суспензию виноградного шрота, по сравнению с контролем составляет 28,82 %, получавшей суспензию спирулины - 24,71 %, а композицию - 30,59 %.

Изменение сегментоядерных лейкоцитов было существенным, но статистически значимым только в группе животных, получавших суспензию «ВинСпир».

Отклонения в содержании лимфоцитов и СОЭ у подопытных животных происходили в минимальных и статистически незначимых пределах.

Таким образом, по результатам проведенных исследований можно сделать вывод, что биомасса спирулины и шрот семян винограда позитивно влияют на состав периферической крови крыс. Но более значимый положительный эффект наблюдается в случае применения их композиции - смеси «ВинСпир», сочетающей в себе биологически активные соединения двух ценных растительных субстанций.

3.3. Изучение защитного действия фитоантиоксидантов по морфологическому

составу крови

Исследования проводили на 50 беспородных белых крысах-самцах массой 190-210 г., разделенных на 5 равночисленных групп. Крысы первой группы служили как контроль и получали дистиллированную воду. Животным 3, 4 и 5 групп в течение 30 дней внутрижелудочно вводили в дозе 10 мг/100 г массы тела биомассу спирулины, шрот семян винограда и смесь «ВинСпир» соответственно группе.

Затем, в течение 6 дней крысам внутримышечно вводили 50 % раствор

тетрахлорметана на абрикосовом масле в дозе 2 г/кг массы тела животного параллельно с введением фитоантиоксидантов, а животным 2 группы - параллельно с введением дистиллированной воды.

На 37 день эксперимента у крыс брали кровь для исследования морфологического состава. Результаты исследования приведены в таблице 5.

Оценку изменения состава крови проводили по следующим показателям: количество эритроцитов, лейкоцитов,лейкоформула, концентрация гемоглобина, СОЭ.

Таблица 5 - Гематологические показатели крыс при приеме фитоантиоксидантов на фоне

оксидативного стресса

Показатель Группы животных

Контроль ' Контроль + СС1„ Спирулина + СС14 Шрот семян винограда+ СС14 Смесь «ВянСпир» + СС14

Эритроциты, М-10,2/л 4,98±0,19 3,15±0,14' 3,97±0,15' 4,13±0,12' 4,45*0,16'

Гемоглобин, г/л 115,2±2,9 79,6±1,9' 92,5±3,3' 98,7±2,9' 103,3±2,9'

Лейкоциты, М-Ю'/л 8,45±0,27 13,06±0,29' 11,93±0,31' И,б4±0,28' 10,45±0,33'

Палочкоядер ные лейкоциты, % 2,22±0,18 1,13±0,12' 1,67±0,131 1,60*0,14' 1,87±0,1б'

Сегментоядерны е лейкоциты, % 18,67±0,93 24,82±1,бЗ' 21,12±1,25 20,37±1,06' 19,69±1,03'

Эозинофилы, % 2,05±0,37 1,17±0,181 1,68±0,37 1,74±0,35 1,71±0,33

Моноциты, % 1,33±0,21 2Д4±0,38' 1,83±0,29 1,75±0,24 1,67±0,31

Лимфоциты, % 67,17±2,37 84,67±3,55' 72,31 ±3,32' 73,33±3,25' 71,52±2,52'

СОЭ 1,36±0,23 1,88±0,44 1,66±0,23 1,50±0,18 1,53±0,19

Примечание. В этой таблице различия достоверны при Р<0.05: 1 - по сравнению с показателями животных контрольной группы, получавших тетрахлорметан.

Установлено, что у интактных животных количество эритроцитов в крови составляло 4,98±0,19 М-1012/л. У крыс, получавших тетрахлорметан, количества эритроцитов в крови достоверно снизилось на 36,75 %, концентрации гемоглобина - на 30,90 %, а число лейкоцитов увеличилось на 60,95 %.

В лейкоформуле: палочкоядерных лейкоцитов меньше на 49,10 %, эозинофилов - на 42,93 %, сегментоядерных больше на 32,94 %, моноцитов - на 68,42 %, лимфоцитов - на 26,05 % относительно интактных животных.

У животных, получавших биомассу спирулины, достоверно увеличилось количество эритроцитов в крови на 26,03 % и концентрация гемоглобина на 16,21 % по сравнению с результатами, полученными от животных, находящихся в состоянии оксидативного стресса (табл. 5).

Биомасса спирулины способствовала достоверному снижению роста лейкоцитов на 8,65 % в крови на фоне введения тетрахлорметана; количество палочкоядерных лейкоцитов достоверно увеличилось на 47,78 %.

Отмечалась тенденция к снижению количества сегментоядерных лейкоцитов, увеличению эозинофилов и снижению моноцитов, но различия между контрольной группой животных и животными, получавшими биомассу спирулины, на фоне оксидативного стресса, оказались не достоверными.

В группе крыс, получавшей биомассу спирулины, также отмечалось достоверное снижение количества лимфоцитов на 14,59 %.

Выявлено, что шрот семян винограда достоверно увеличивает количество эритроцитов в крови на 31,11 % и концентрацию гемоглобина на 23,99 % на фоне оксидативного стресса.

В крови животйых, получавших шрот семян винограда, по сравнению с результатами,

полученными от животных, находящихся в состоянии оксидативного стресса, количество лейкоцитов меньше на 10,87 %, количество палочкоядерных лейкоцитов достоверно больше на 41,59 %, сегмеятоадерных,-меньше на 17,93 %.

Отмечалась тенденция к увеличению эозинофилов и снижению количества моноцитов, но различия между контрольной группой животных и группой, получавшей шрот семян винограда, на фоне введения тетрахлорметана, оказались не достоверными.

В группе крыс, употреблявшей шрот семян винограда, отмечалось достоверное снижение количества лимфоцитов на 13,39%. —

Выявлено, что у животных, получавших смесь «ВинСпир» достоверно увеличивается количество эри!роцитов в крови на 41,27 % и концентрация гемоглобина на 29,77 % на фоне оксидативного стресса.

В лейкоцитарное формуле происходили следующие изменения: смесь «ВинСпир» способствовала достоверному снижению роста лейкоцитов на 19,98 % в крови на фоне введения тетрахлорметана; количество палочкоядерных лейкоцитов достоверно увеличилось на 65,48 %, сегментоядерных - достоверно снизилось на 20,67 %. Отмечалась тенденция к увеличению эозинофилов и снижению количества моноцитов в крови, но различия между контрольной группой животных и группой, получавшей смесь «ВинСпир» на фоне введения тетрахлорметана оказались не достоверными. .,

В группе крыс, получавшей смесь «ВинСпир» на фоне оксидативного стресса, отмечалось достоверное снижение количества лимфоцитов на 15,53 %.

Скорость оседания эритроцитов у животных, получавших фитоантиоксвданты на фоне оксидативного стресса, изменялась незначительно.

Таким образом, по результатам экспериментов можно сделать вывод, что гепатопротекторы растительного происхождения оказывают позитивное влияние на состав крови на фоне оксидативного стресса, а смесь «ВинСпир», как комплексный гепатопротектор нормализует состав крови эффективнее своих компонентов, взятых по отдельности.

3.4. Исследование системы ПОЛ-АО печени здоровых половозрелых крыс при применении фитоантиоксидантов

Исследование влияния растительных гепатопротекторов на систему перекисного: окисления липидов-антиоксидантов в тканях печени здоровых половозрелых крыс осуществляли на 40 белых лабораторных крысах-самцах массой 190-210 г. В эксперименте участвовали половозрелые крысы одного месяца рождения. Крыс содержали в условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. Животные были разбиты на 4 группы, по 10 крыс в каждой (табл. б).

Таблица 6 - Группы экспериментальных животных

~~ объекты исследования--номера групп^ 1 2 3 4

Вода дистиллированная +

Суспензия биомассы спирулины +

Суспензия шрота винограда +

Суспензии смеси «ВинСпир» +

Фитоантиоксвданты вводили однократно в желудок с помощью зонда в виде суспензии, приготовленной на воде дистиллированной в дозе 10 мг/100 г массы животного, объемом 1 мл ежедневно в течение 36 дней. Затем крыс убивали в соответствии с этическими нормами и проводили извлечение печени. Гомогенат из печени готовился механическим измельчением ткани печени массой 1 г с 9 мл трис-буфера (рН 7,4), со скоростью 5000 об/мин в сосуде с двойными стенками, постоянно охлаждаемым проточной водой.

Оценку влияния фитоантиоксидантов на систему ПОЛ-АО печени крыс проводили по концентрации малонового диальдегида и активности ферментов: каталаза,

супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза, аланинаминотрансфераза и аспартатаминотрансфераза, а также массе печени.

В таблице 7 приведены результаты по изучению массы печени крыс получавших фитоантиоксиданты.

Таблица 7 - Масса печени крыс, получавших в течение 36 дней фитоантиоксиданты

Группа животных Масса печени, г

Контроль 7,98±0,30

Спирулина 8,18±0,27

Шрот семян винограда 8,31±0,38

Смесь «ВинСпир» 8,11±0,43

Установлено, что введение в организм животных биомассы спирулины, шрота семян винограда и смеси «ВийСпир» не отражается на массе печени.

По результатам эксперимента, представленным в таблице 8, видно, что введение биомассы спирулины, шрота семян винограда и смеси «ВинСпир» в организм здоровых животных не сказывается на активности аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы, а также концентрации малонового диальдегида, так как их уровни практически совпадают с показателями интактных крыс (различия не превышают 2%).

Таблица 8 - Состояние системы ПОЛ-АО крыс при 36 дневном применении фитоантиоксидантов_

№ п/п Показатель Группы животных

1-контроль 2-спирулина 3-шрот семян винограда 4-смесь «ВинСпир»

1 Активность АсАТ, мкмоль/с*л 0,285±0,012 0,291 ±0,011 0,301±0,013 0,295±0,011

2 Активность АлАТ, мкмоль/с*л 1,596±0,058 1,613±0,074 1,622±0,069 1,614±0,063

3 Активность каталазы, мкат/л 51,37±2,51 43,95±2,411 42,54±2,64' 41,19±2,99'

4 Активность СОД, АЕД/мг белка печени 1,308±0,057 1,215±0,053 1,159±0,038' 1,111*0,056'

5 Активность ГП, мкмоль/мин/м г белка печени 1,680±0,053 1,579±0,055 1,522±0,044' 1,505±0,048'

6 Концентрация МДА, мхмоль/л 3,95±0,15 4,02±0,17 4,16±0,19 4,11±0,18

Примечание. В этой таблице различи» достоверны при Р<0,05: - по сравнению с показателями контрольной группы (интактных) животных.

Установлено, что использованные нами фитосубстанции снижают активность антиоксидантных ферментов системы ПОЛ-АО и этот эффект находится в прямой зависимости от природы источника. Так, биомасса спирулины снижает активность каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы у животных, на 14,44 %, 7,11 %

и 6,01 % соответственно. , . ; , .

Дополнительное внутрижелудочное введение шрота • семян винограда также способствовало снижению активности каталазы на 17,19 %, супероксидди смут азы - на 11.39%иглутатионпероксидазы-на9,4 %. г : .

Под влиянием смеси «ВинСпир» активность каталазы снизилась на 19.81%, супероксиддисмутазы - на 15,06 %, а глутатионпероксидазы - на 10,41 % относительно интакгаых животных.

3.5. Сравнительное изучение системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс при

применении фитоантиоксидантов-гепатопротекторов и р-каротина Исследования проводили на 60 белых лабораторных крысах-самцах массой 190-210 г, разделенных на 6 групп, по 10 крыс в каждой (табл. 9).

Фитоантиоксиданты вводили однократно в желудок с. помощью зонда в виде суспензии, приготовленной на воде дистиллированной ((3-каротин использовали в виде масляного раствора) в дозе 10 мг/100 г массы животного, объемом 1 мл ежедневно в течение 30 дней до начала эксперимента и в течение 6 дней параллельно с введением тетрахлорметана. На седьмой день крыс убивали в соответствии с этическими нормами, затем проводили извлечение печени и оценивали те же параметры системы ПОЛ-АО печени, что и в предыдущем опыте.

Таблица 9 - Группы экспериментальных животных

объекты исслёДОвани*-- 1 2 3 4 5 6

Вода дистиллированная + +

СС14 + + + + +

Суспензия биомассы спирулины +

Суспензия шрота винограда +

Суспензии смеси «ВинСпир» +

Масляный раствор Р-каротина +

В табл. 10 приведены результаты изменение массы печени крыс, находящихся в состоянии оксидативного стресса, при дополнительной нагрузке внутрижелудочно фитоантиоксидантами.

Таблица 10 - Масса печени крыс т он использовании фитогепатопротекторов

Группа животных Масса печени, г. ......

Контроль 7,98x0,30

Контроль + ССЦ 12,86±0,29

Спирулина + ССЦ 9,95±0,37'

Шрот семян винограда + ССЦ 10,35±0,56'

Смесь «ВинСпир» + ССЦ 9,77±0,4б'

Р-каротин+ ССЦ 11,45±0,51и

Примечание. В этой таблице различия достоверны при Р<0,05: 1 -по сравнению с показателями животных контрольной группы, получавших тетрахлорметан.2 - по сравнению с показателями животных группы, получавших композицию «ВинСпир» на фоне введения тетрахлорметана.

По результатам эксперимента видно, что в контрольной группе крыс, которой вводили тетрахлорметан, произошло увеличение массы печени относительно контроля на 61,15 %. В группе крыс, получавших суспензию биомассы спчрулины на фоне оксидативного стресса, масса печени была ниже на 22,62 %, в группе, получавшей суспензию шрота семян винограда - на 19,52 %, суспензию «ВинСпир» - на 24,02 %, а (3-каротин - на 43,48 % относительно контрольной группы животных, которым вводили тетрахлорметан.

Таким образом, смесь «ВинСпир», представляющая собой комплекс природных антиоксидантов, способствует снижению роста массы печени, при негативном

воздействии тетрахлорметана эффективнее своих компонентов по отдельности и превосходит эффективность (З-каоотина на 21 ,05 %.

В табл. 11 приведены результаты изучения системы ПОЛ-АО в тканях опытных крыс на 7-й день после шестидневного внутримышечного введения тетрахлорметана на фоне приема фитоантиоксидантов.

По результатам эксперимента было выявлено, что активность аспартатаминотрансферазы в группе крыс, которым, вводили тетрахлорметан, возросла в « 7 раз по сравнению с показателями интактных животных. Такая же тенденция отмечалась и при изучении активности аланинаминотрансферазы, которая возросла на 43,11 % относительно интактных животных.

Активность каталазы, после введения тетрахлорметана снижается на 42,94% относительно контрольной группы, активность супероксиддисмутазы - на 46,02 %, а глугатионпероксидазы - на 38,33 %.

Паавют, Пзуппыживопшх

НКошроль 2-Котроль+ СО, ЗСщутМ-СО, 4-Шрог семян ВИН0фЕШ9+ СО. 50»ш. «ВинОмр)+ со, СО,

АиивнзаьАсАТ, мииопьСл 028ЗД012 МЗМрС1 1,71'И0|071' щад.озз1

АютвкхльАлАТ, ШМШьУл тушцпё ишо/хб' 2Л53ВО0®и

Аиизностыяшазы, мгаЙ1 2ЯЗШ.621 %15fcl.ro1 37,55Ы,55и

АкпвяопьСОД АВДЫхэтапиени !,30ВДй57 0$9Щ042' ошдшз1 птцт' 1,01(М),039и

АгоиваьГП, мкмотЛиЛв-бяна пеяеш 1£8ШШ КВбЮ-М!1 124510047' 1,17»40р51' изыда1

КаизпршияМДА, милмь/л 3£ЯД15 7/Ш&' бдадго' вдацп' 5,45±Д13'

Примечание. В этой таблице различия достоверны при Р<0,05; ' -по сравнению с показателями животных контрольной группы, получавшей тетрахлорметан, ! - по сравнению с показателями животных группы, получавшей композицию «ВинСпир» на фоне введения тетрахлорметана.

При оксидативном стрессе повышается содержание конечного продукта перекисного окисления липвдов - малонового диальдегида в тканях печени. По результатам эксперимента нами было выявлено, что концентрация МДА в тканях печени возросла на 88,35 % относительно интактных животных.

Что касается растительных антиоксидантов, то они нормализуют нарушенное равновесие в системе ПОЛ-АО.

По результатам эксперимента, представленным в табл. И, видно, что биомасса спирулины снижает активность аспартатаминотрансферазы на 27,65 % и аланинаминотрансферазы на 16,91 % в сыворотке крови на фоне введения тетрахлорметана.

Активность каталазы, супероксиддисмутазы и глугатионпероксидазы возрастала под влиянием биомассы спирулины на фоне введения тетрахлорметана, на 35,21 %, 41,22 % и 20,17 % соответственно, относительно контрольной группы животных, находящихся в состоянии оксидативного стресса.

В группе крыс, получавшей биомассу спирулины, на фоне введения тетрахлорметана, концентрация малонового диальдегида снизилась на 18,28 % относительно контрольной группы, подвергавшейся воздействию тетрахлорметана.

Шрот семян винограда также снижает активность аспартатаминотрансферазы на 13,68

% и аланинаминотрансферазы на 14,27 % в сыворотке крови на фоне тетрахлорметана.

Также следует отметить, что шрот семян, винрграда, как и биомасса спирулины, способствовал росту активности каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы в тканях печени, на фоне введения тетрахлорметана, в частности, активность каталазы возросла на 23,34 %, активность супероксиддисмутазы - на 26,91 %, а глутатионпероксидазы-на 13,71 %.

В группе крыс, получавшей суспензию шрота семян винограда, на фоне введения тетрахлорметана, концентрация малонового .¡шальдегида была снижена на 11,56 %.

Выявлено, что смесь «ВинСпир» снижает активность аспартатаминотрансферазы на 38,71 % и аланинаминотрансферазы на 21,23 % в сыворотке крови на фоне тетрахлорметана, что превышает эффективность отдельных ее компонентов.

Смесь «ВинСпир», как биомасса спирулины и шрот семян винограда, но с большим эффектом, способствовала росту активности каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы в тканях печени на фоне введения тетрахлорметана, в частности, активность каталазы возросла на 47,36 %, активность супероксиддисмутазы - на 61,89 %, а глутатионпероксидазы - на 28,47 %.

В группе крыс, получавшей суспензию «ВинСпир», на фоне введения тетрахлорметана, концентрация малонового диальдегида снизилая, на 26,75 %.

Таким образом, фитоанткоксиданты проявляют выраженный гепатопротекторный эффект. Причем, смесь «ВикСпир», как комплексная смесь нормализует активность и концентрацию ферментов в системе ПОЛ-АО эффективнее своих компонентов по отдельности. : , , ч

Так как смесь «ВинСпир» новый прпарат, было решено сравнить его эффективность с эталонным антиоксидантом-гепатопротекторсм р-каротином. ;:.

Результаты экспериментов, представленные в табл. 11 свидетельствуют о том,, что активность аспартатаминотрансферазы . в группе крыс, получавшей только тетрахлорметан, возросла в ~7 раз относительно интактных животных, суспензию смеси «ВинСпир» на фоне введения тетрахлорметана ~ в 4,3 раза, а (5-каротин - в ~ 6 раз. .

Следовательно, смесь «ВинСпир» способствует снижению ¡.'роста активности, аспартатаминотрансферазы в тканях печени при воздействии тетрахлорметана на порядок эффективнее р-каротина.

Активность аланинаминотрансферазы, в группе крыс, получавшей воду дистиллированную на фоне введения тетрахлорметана, возросла на 43,11 % относительно интактных животных, в группе, получавшей помимо тетрахлорметана, суспензию «ВинСпир» - на 12,72 %, а Р-каротац - 27,63 %.

Доказано, что смесь «ВинСггар». способствует снижению . роста активности аланинаминотрансферазы в плазме крови при воздействии тетрахлорметана эффективнее р-каротина на 14,91 %.

При исследовании активности каталазы бьшо выявлено, что в группе крыс, получавшей воду дистиллированную на фоне введения тетрахлорметана, наблюдалось снижение уровня активности каталазы на 42,94 % относительно контроля, в группе, получавшей, помимо тетрахлорметана, суспензию композиции «ВинСиир» - на 15,92 %, а р-каротин - на 26,90 %.

Таким образом, комплексная антиоксидантная смесь «ВинСпир» нормализует активность каталазы в тканях печени при воздействии тетрахлорметана, повышая ее уровень, эффективнее, чем Р-каротин «а 10,98 %.

Изучение уровня активности супероксиддисмутазы выявило, что в группе крыс, получавшей воду дистиллированную, на фоне введения тетрахлорметана, наблюдалось снижение уровня активности супероксиддисмутазы на 46,02 %, относительно интактных животных, в группе, получавшей, помимо тетрахлорметана, суспензию композиции - на 12,61 %, р-каротин - на 22,78 %.

Смесь «ВинСпир» нормализует активность супероксиддисмутазы в тканях печени при

воздействии тетрахлорметана, способствуя повышению ее уровня, эффективнее Р-каротина на 10,17 %.

По результатам изучения активности глутатионпероксидазы было выявлено, что в группе крыс, получавшей воду дистиллированную на фоне введения тетрахлорметана, наблюдалось снижение уровня активности глутатионпероксидазы на 38,33 % относительно интактных животных, в группе, получавшей, помимо тетрахлорметана, суспензию «ВинСпир» - на 20,77 %, а р-каротин - на 30,48 %.

Таким образом, смесь «ВинСпир» нормализует активность глутатионпероксидазы в тканях печени при воздействии тетрахлорметана, существенно повышая ее, эффективнее Р-каротина на 9,71%.

Изучая уровень концентрации малонового диальдегида в тканях печени было выявлено, что в группе крыс, получавшей воду дистиллированную, на фоне введения тетрахлорметана, концентрация малонового диальдегида возросла на 88,35 % относительно интактных животных, в группе, получавшей помимо тетрахлорметана, суспензию смеси «ВинСпир» - на 37,97 %, а р-каротин - на 72,65 %.

По результатам эксперимента видно, что смесь «ВинСпир» способствует снижению роста концентрации малонового диальдегида в тканях печени при воздействии тетрахлорметана эффективнее Р-каротина на 34,68 %.

Таким образом, экспериментально подтверждено, что смесь «ВинСпир» как комплексное средство на основе растительных объектов, проявляющих антиоксидантные свойства, является на « 17 % более сильным гепатопротектором по сравнению с Р-каротином.

ВЫВОДЫ

1. Научно обоснована технология и применение комплексного средства на основе биомассы спирулины и шрота семян винограда - смеси «ВинСпир», состоящей из равных частей компонентов. «ВинСпир» представляет собой порошок серо-зеленого цвета с характерным запахом водорослей, содержит 0,15±0,01 мг % р-каротина, 80,25±0,65 мг % фикоцианина и 8,27± 0,61 мг % галловой кислоты и другие биологически активные вещества, выпускается в кишечнорастворимых капсулах по 0,6 г.

. палочкоядерных - на 28,82 %, 24,71 % и 30,59 % соответственно группе. Количество эозинофилов, моноцитов и лимфоцитов, а также СОЭ в крови животных изменялось статистически не значимо и не выходило за пределы физиологической нормы.

3. Смесь «ВинСпир» и ее отдельные компоненты при внутрижелудочном введении клинически здоровым крысам не вызывают существенных изменений в системе ПОЛ-АО печени. Активность АсАТ, АлАТ и концентрация малонового диальдегида у интактных животных и животных, получавших растительные объекты практически не отличались (отклонения уровней были в пределах 2 %). Активность каталазы, СОД и ГП в группах крыс, получавших биомассу спирулины, шрот семян винограда и смесь «ВинСпир» были снижены в пределах физиологической нормы. Активность каталазы снизилась на 14,44 %, 17,19 % и 19,81 %, активность СОД - на 7,11 %, 11,39 % и 15,06 %, активность ГП - на6,01 %, 9,4 % и 10,41 % соответственно.

4. Оксидативный стресс сопровождается снижением количества эритроцитов на 36,75 %, концентрации гемоглобина на 30,90 % и увеличением числа лейкоцитов на 60,95 %. В лейкоформуле наблюдается увеличение сегментоядерных нейтрофилов на 32,94 %, моноцитов - на 68,42 %, увеличение лимфоцитов на 26,05 %, снижение палочкоядерных нейтрофилов - на 49,10 % и эозинофилов - 42,93 % соответственно по сравнению с показателями интактных животных.

5. Введение животным биомассы спирулины на фоне оксидативного стресса,

сопровождается увеличением количества эритроцитов и концентрации гемоглобина на 26,03 % и 16,21 % соответственно, снижением количества лейкоцитов на 8,65 %, в том числе, увеличением палочкоядерных нейтрофилов на 47,78 % и снижением лимфоцитов на 14,59 %. Шрот семян винограда способствует увеличению количества эритроцитов и концентрации гемоглобина на 31,11 % и 23,99 % соответственно, снижению количества лейкоцитов на ;10,87 %, в том числе, увеличению палочкоядерных нейтрофилов на 41,59%, снижению сегментоядерных нейтрофилов на 17,93 % и снижению лимфоцитов на 13,39 %. На фоне введения смеси «ВинСпир» у животных наблюдается увеличение количества эритроцитов и концентрации гемоглобина на 41,27 % и 29,77 % соответственно, снижение количества лейкоцитов на 19,98 %, в том числе, увеличение палочкоядерных нейтрофилов на 65,48 %, снижение сегментоядерных нейтрофилов на 20,67 %, снижение лимфоцитов на 15,53 %.

6. Введение в организм смеси «ВинСпир» или ее отдельных компонентов совместно с тетрахлорметапом способствует восстановлению нарушенного оксидативным стрессом равновесия в системе ПОЛ-АО печени. Биомасса спирулины достоверно снижает активность АсАТ на 27,65 %, АлАТ - 16,91 %, повышает активность каталазы на 35,21 %, СОД - 41,22 %, ГП - 20,17% и снижает концентрацию МДА на 18,28 %. Шрот семян винограда достоверно снижает активность АсАТ на 13,68 %, АлАТ - 14,27 %, повышает активность каталазы на 23,34 %, СОД - 26,91 %, ГП - 13,71 % и снижает концентрацию МДА на 11,56 %. Смесь «ВинСпир» достоверно снижает активность АсАТ на 38,71 %, АлАТ - 21,23 %, повышает активность каталазы на 47,36 %, СОД -61,89 %, ГП - 28,47 % и снижает концентрацию МДА на 26,75 % по сравнению с показателями животных, при нагрузке тетрахлорметаном. Гепатопротекгорный эффект смеси «ВинСпир» превосходит таковой у ее отдельных компонентов.

7. Смесь «ВинСпир» по сравнению с ^-каротином является сильным гепатопротектором. Она на порядок эффективнее р-каротина снижает активность АсАТ, на 14,91 % снижает активность АлАТ, на 10,98 % повышает активность каталазы, 10,17 %, СОД -на 9,71 %, ГП - 9,71 %, и на 34,68 % снижает концентрацию МДА у животных при нагрузке тетрахлорметаном.

Практические предложения .1

К Шрот семян винограда является ценной расхительнрй субстанцией, способной обеспечивать организм важными макро- и микроэлементами и биологически активными веществами, которые положительно влияют на морфологический состав крови и функции печени животных. Поэтому шрот семян винограда следует шире внедрять в схему кормления домашних животных (собак, кошек и других декоративных животных). ;

2. Смесь «ВинСпир» является эффективным . гепатрпротектором и ее следует применять как лечебное средство при гипофункции печени; ..:.■■ !

3. Более детальное изучение биологических и.лечебных свойств биомассы спирулины и шрота семян винограда позволит создать; конкурентоспрсобные гепатопротекторные лечебные средства. ¡:;.\'

4. Разработаны технические условия и технические инструкции для производства смеси «ВинСпир». и

5. Результаты исследований внедрены в учебный процесс при подготовке и переподготовке специалистов в Поволжской государственной социально-гуманитарной академии в г. Самара и Ульяновском государственном университете в г. Ульяновск.

6. Технологические решения по производству смеси «ВинСпир» и методы контроля качественного и количественного состава внедрены на предприятиях ООО «Эмульсионные технологии» и ООО НПФ «ХимПром» г. Самара.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Павлова, О.Н. Классификация биологически активных добавок к пище и их применение в медицине и лечебном питании // Дни студенческой науки: сб. материалов 34 научной конференции студентов и аспирантов. Самарская государственная академия путей сообщения. - Выпуск 8. - Самара, 2007. - С. 108.

2. Желонкин, H.H. Определение микробиологических параметров разработанной лекарственной формы спрея на основе биомассы Спирулины платенсис и настойки Чистотела большого / H.H. Желонкин, Т.Ю. Боронец, О.Н. Павлова // Аптека 2007. Труды медико-фармацевтического конгресса. Москва, 23-26 октября 2007 г. -Москва, 2007. - С. 131-133.

3. Пурыгин, П.П. Определение токсичности и антиоксидантной активности биомассы Спирулины платенсис и лекарственных форм на ее основе / П.П. Пурыпш, H.H. Желонкин, О.Н.Павлова, C.B. Первушкин, В Л. Куркин, Ю.Л.Герасимов, Т.Ю. Боронец II Вестник СамГУ, №6 (56). - Самара, 2007. - С. 393-400. -

4. Павлова, О.Н. Перспективы использования сине-зеленой водоросли стфулипа платенсис для производства биологически активных добавок к пище / Ö.H. Павлова, H.H.Желонкин, Т.Ю.Боронец, Т.И.Симонова И Современное состояние и перспективы развития пищевой промышленности и общественного питания. Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященный 10-тилетию кафедры «Технология и организация питания», Челябинск, 19 октября 2007 г. - Челябинск, 2007. - С. 92-96.

5. Павлова, О.Н. Роль биологически активных добавок к пище в питании работников железнодорожной отрасли / О.Н. Павлова, H.H. Желонкин, C.B. Первушкин, П.П. Пурыгин, Т.Ю. Боронец, В.Б. Кашавцева II Актуальные проблемы развития транспортного комплекса. Материалы 4 Международной научно-практической конференции. Самара, 4-5 марта 2008 г. - Самара, 2008. - С. 318-321.

6. Павлова, О.Н. Современные подходы к классификации биологически активных добавок к пище / О.Н. Павлова, Е.А. Грибанова, H.H. Желонкин, Т.Ю. Боронец, C.B. Первушкин, П.П. Пурыгин // Вестник СамГУ, № 9/1 (59). - Самара, 2007.- С. 256-269.

7. Павлова, О.Н. Исследование виноградного шрота для получения биологически активных добавок к пище / О.Н. Павлова, ЮЛ. Герасимов, П.П. Пурыгин // Процессы, технологии, оборудование и опыт переработки отходов и вторичного сырья. Материалы 3 Всероссийской научно-практической конференции, Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - Самара, 2008. - С. 152-156.'

8. Павлова, О.Н. Влияние биологически активной добавки «ВинСпир» на основные показатели крови / О.Н. Павлова, H.H. Желонкин, Е.А. Воишева, C.B. Первушкин, П.П. Пурыгин, М.О. Тархова // Известия Самарского научного центра Российской академии наук: 13 # конгресс «Экология и здоровье человека».- Т. 2. - Самара, 2008.- С. 249-252.*

9. Павлова, О.Н. Исследование гепатопротекторного действия биологически активной добавки «ВинСпир» / О.Н. Павлова, H.H. Желонкин, C.B. Первушкин, П.П. Пурыгин, М.О. Тархова // Известия Самарского научного центра Российской академии наук: 13 конгресс «Экология и здоровье человека».- Т. 2. -Самара, 2008.- С. 253-257.*

10. Павлова, О.Н. Разработка биологически активной добавки к пище на основе сине-зеленой михроводоросли Spirulina platensis и виноградного шрота / О.Н. Павлова И Аспирантские чтения - 2007. Труды межвузовской конференции молодых ученых. -Самара, 2007. - С. 242-249.

11. Павлова, О.Н. Преимущества сверхкритической экстракции как способа получения биологически активных добавок к пище / О.Н. Павлова, Е.А. Грибанова, П.П.

Пурыгин // Современные сервисные технологии. Научные исследования аспирантов и молодых ученых. Материалы Всероссийской научно-технической конференции (27-28 ноября 2007 г.). - Самара, 2007. - С. 256-260.

12. Пурыгин, П.П. Характеристика винограда как потенциального компонента биологически активных добавок к пшце / П.П. Пурыгин, О.Н. Павлова // Современные сервисные технологии. Научные исследования аспирантов и молодых ученых. Материалы Всероссийской научно-технической конференции (27-28 ноября 2007 г.). - Самара, 2007. - С. 265-270.

13. Положительное решение № 2009136886/22(052141) о выдаче патента на полезную модель «Устройство для смешения компонентов биологически активных добавок растительного происхождения» от 05.10.2009 г.

14. Павлова, О.Н. О размножении дафвяй в растворах экстракта биомассы спирулины и шрота косточек винограда в соотношении 1:1 и о решении интегро-дифференциального уравнения / О.Н. Павлова, В.Б. Дмитриев, ЮЛ. Герасимов, П.П. Пурыгин // Известия Самарского научного центра Российской академии наук: Т. 11. - № 1(2). - Самара, 2009.- С. 114-119.*

15. Павлова, О.Н. Производственные факторы, ведущие к возникновению оксидативного стресса у работников железнодорожной отрасли / О.Н. Павлова, Л.Н. Гондарева, П.П. Пурыгин // Вестник СамГУПС. - 2009. - №6(18). - ТЛ. - С. 134-137.

* • публикации в центральных изданиях согласно перечню ВАК России

Подписано к печати t2.03.Z0. Формат 60x84/16

Заказ 63 Тираж/ййкз. Усл.-печ. л. Y.0

Бумага офсетная Печать RISO

Центр информационных технологий КГАВМ 420074, Казань, Сибирский тратт, 35.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Павлова, Ольга Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Перекисное окисление липидов и система антиоксидантной

1.1. 13 защиты.

1.2. Роль фитоантиоксидантов в коррекции дисфункций печени.

Биологически активные вещества-антиоксид анты

1.3. 24 гепатопротекторы.

1.4. Фитогепатопротекторы.

1.4.1. Биомасса сине-зеленой микроводоросли Spirulinaplatensis.

1.4.2. Шрот семян винограда.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты наблюдения.

2.2. Материалы исследования.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Методы исследования фитоантиоксидантов.

Методы исследования состояния экспериментальных

2.3.2. 49 животных.

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ,

ШРОТА СЕМЯН ВИНОГРАДА И РАЗРАБОТКА

ГЕПАТОПРОТЕКТОРА НА ИХ ОСНОВЕ.

3.1. Изучение элементного состава фитоантиоксидантов.

Изучение антиоксидантной активности экстрактов

3.2. 60 фитоантиоксидантов.

Исследование микробиологической чистоты экстрактов фитоантиоксидантов.

3.4. Изучение экологической безопасности фитоантиоксидантов по стандартной методике Строганова Н.С. на тест-объектах.

Разработка комплексного фитогепатопротектора — смеси

3.5. 64 «ВинСпир».

Изучение экологической безопасности смеси «ВинСпир» по

3.6. 66 стандартной методике Строганова Н.С. на тест-объектах.

Определение биологически активных соединений смеси

3.7. 68 «ВинСпир».

3.7.1. Качественный анализ смеси «ВинСпир».

3.7.2. Количественный анализ смеси «ВинСпир».

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ МОРФОЛОГИЧЕСКОГО СОСТАВА КРОВИ КРЫС ИА ФОНЕ НАГРУЗКИ

ВНУТРИЖЕЛУДОЧНО ФИТОАНТИОКСИДАНТАМИ.

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОТИВОТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ФИТОГЕПАТОПРОТЕКТОРОВ.

5.1. Изучение морфологического состава крови крыс, находящихся в состоянии оксидативного стресса.

Влияние фитогепатопротекторов на морфологический состав

5.2. 90 крови крыс, находящихся в состоянии оксидативного стресса.

5.2.1. Влияние биомассы спирулины на состав морфологический ^ крови крыс, находящихся в состоянии оксидативного стресса. Влияние шрота семян винограда на морфологический состав

5.2.2. крови крыс, находящихся в состоянии оксидативного 91 стресса.

Влияние смеси «ВинСпир» на морфологический состав крови

5.2.3. 92 крыс, находящихся в состоянии оксидативного стресса.

Сравнение противотоксических свойств однокомпонентных и ^ комплексного фитогепатопротекторов.

ГЛАВА 6. ИССЛЕДОВАНИЕ СИСТЕМЫ ПОЛ-АО ПЕЧЕНИ

КРЫС.

Изучение системы ПОЛ-АО печени здоровых половозрелых

6.1. крыс после нагрузки внутрижелудочно 101 фитогепатопротекторами.

Изучение системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс после

6.2. 103 нагрузки тетрахлорметаном.

Исследование реакции системы ПОЛ-АО печени здоровых половозрелых крыс в состоянии оксидативного стресса на

6.3. 105 дополнительную нагрузку фитоантиоксидантамигепатопротекторами.

Влияние биомассы спирулины на систему ПОЛ-АО печени

6.3.1. половозрелых крыс, после нагрузки тетрахлорметаном.

Влияние шрота семян винограда на систему ПОЛ-АО печени

6.3.2. половозрелых крыс, после нагрузки тетрахлорметаном.

Влияние смеси «ВинСпир» на систему ПОЛ-АО печени

6.3.3. половозрелых крыс, после нагрузки 109 тетрахлорметаном.

Сравнение эффективности воздействия однокомпонентных и

6.4. 111 комплексного фитогепатопротекторов.

Сравнение гепатопротекторного эффекта смеси «ВинСпир» с

6.5. эффектом эталонного антиоксиданта-гепатопротектора 118 p-каротина.

ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Физиологическое обоснование применения фитогепатопротектора "ВинСпир" в ветеринарии"

В печени происходит один из этапов обезвреживания токсических веществ и подготовка к выводу их из организма. Скорость переработки токсических компонентов в печени ограничена и не может быть резко увеличена в соответствии с возрастающими потребностями организма и, как следствие, возникают нарушения нормального хода процессов метаболизма, иммунного ответа, детоксикации и антимикробной защиты организма [9,33,44,66,77,83,123].

В патогенезе нарушений функций печени важную роль играет увеличение уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ), приводящего к оксидативному стрессу, при котором нарушается проницаемость клеточных мембран и изменяются функции клеток. Огромную роль в этом процессе играют свободные радикалы [11,12,26,33,57].

Свободнорадикальное окисление - это необходимое условие обновления цитоплазматических мембран и их нормального функционирования, но поддержание гомеостаза в организме невозможно без работы антиоксидантных систем, нейтрализующих излишние свободные радикалы [11,65,69,70,77].

Антиоксиданты вырабатываются в различных тканевых структурах и клеточных компонентах, имеют различную субстратную специфичность, но при этом все они обладают сродством к активным формам кислорода и обеспечивают комплексную защиту биополимеров.

Вместе с тем возможности ферментной защиты оказываются недостаточными, что требует дополнительного введения в организм низкомолекулярных антиоксидантов.

Проведенный нами анализ результатов исследований, приведенных в доступной литературе, показал, что биологически активные соединения

БАС) биомассы сине-зеленой микроводоросли спирулины платенсис {Spirulina platensis) и шрота семян винограда могут быть основой для изготовления высокоэффективных гепатопротекторов.

Виноградный шрот в свою очередь содержит биологически активные фенольные соединения и имеет богатый набор ценных минеральных компонентов. Суммарное сочетание этих растительных объектов в соотношении 1:1 взаимно обогащает и усиливает позитивное действие на организм.

В связи с этим, целью нашей работы явилось создание комплексного фитогепатопротектора - смеси «ВинСпир» и изучение его влияния на морфологический состав крови и функцию печени.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие основные задачи:

1. разработать технологию получения и создать гепатопротектор на основе биомассы спирулины и шрота семян винограда;

2. изучить морфологический состав крови крыс при нагрузке фитоантиоксидантами;

3. изучить влияние смеси «ВинСпир» и ее составляющих на морфологический состав крови животных, находящихся в состоянии оксидативного стресса;

4. изучить функцию системы ПОЛ-АО печени крыс на нагрузку смесью «ВинСпир» и отдельными ее компонентами у интакных крыс и на модели оксидативного стресса в сравнительном аспекте с Р-каротином;

5. разработать регламент применения смеси «ВинСпир».

Научная новизна работы

Впервые создан комплексный фитогепатопротектор на основе биомассы спирулины и шрота семян винограда в соотношении 1:1 — смесь «ВинСпир». Разработана технология изготовления смеси и определена лекарственная форма.

Установлено, что компоненты «ВинСпир» обладают антиоксидантной активностью (экстракт биомассы спирулины ингибирует процесс аутоокисления адреналина на 76%, а экстракт шрота семян винограда - на 53%), имеют богатый микроэлементный состав и соответствуют параметрам микробиологической чистоты СанПин 2.3.2.1078-01.

Выявлено, что на нагрузку композицией «ВинСпир» и ее компонентами> организм клинически здоровых крыс отвечает смещением равновесия в системе ПОЛ-АО печени в сторону снижения выработки антиоксидантных ферментов.

Нагрузка фитоантиоксидантами организма крыс с гипофункцией печени восстанавливает нарушенное равновесие в системе ПОЛ-АО достоверным снижением активности аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы, а также увеличением активности каталазы, глутатионпероксидазы, супероксиддисмутазы и снижением концентрации малонового диальдегида в тканях органа.

Доказано, что смесь «ВинСпир» по своему гепатопротекторному действию превосходит известный препарат (З-каротин и может быть рекомендована как лечебное средство.

Полученные результаты являются новыми и дополняют научные знания о физиологии печени.

Практическая значимость

Шрот семян винограда является вторичным ресурсом и его использование создает безотходную технологию производства, что в настоящее время является актуальной задачей.

Смесь «ВинСпир» может быть использована при гипофункции печени, что позволяет расширить ассортимент существующих средств, обладающих выраженным антиоксидантным и гепатопротекторным действием.

Разработаны технические условия и технические инструкции для производства смеси «ВинСпир».

Имеется положительное решение № 2009136886/22(052141) о выдаче патента на полезную модель «Устройство для смешения компонентов биологически активных добавок растительного происхождения» от 05.10.2009 г.

Апробация и публикация результатов исследования

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XXXIV научной конференции студентов и аспирантов (Самара 2007); Медико-фармацевтическом конгрессе, 14-й Международной фармацевтической выставке «Аптека 2007» (Москва, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития пищевой промышленности и общественного питания» (Челябинск 2007); Всероссийской научно-технической конференции «Современные сервисные технологии» (Самара 2007); «IV Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы развития транспортного комплекса» (Самара, 2008); «III Всероссийской научно-практической конференций «Процессы, технологии, оборудование и опыт переработки отходов и вторичного сырья» (Самара 2008); «III конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2008).

По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, из которых 4 — в рекомендуемых ВАК изданиях.

Основные положения, выносимые на защиту:

• Биомасса спирулины, шрот семян винограда и смесь «ВинСпир» оказывают выраженный гепатопротекторный эффект при гипофункции печени, снижая активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы и концентрацию малонового диальдегида, а также увеличивая активность каталазы, глутатионпероксидазы, супероксиддисмутазы в тканях органа, тем самым уменьшая уровень ПОЛ.

• Гепатопротекторный эффект смеси «ВинСпир» значительно превосходит таковой отдельных ее компонентов и известный препарат (3-каротин в среднем на 17 %.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 157 страницах машинописного текста, содержит 47 таблиц, 31 рисунок, состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной объектам наблюдения и методам исследований, и пяти глав, содержащих результаты собственных исследований. Список литературы включает 188 источников, в том числе 44 иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Павлова, Ольга Николаевна

выводы

1. Научно обоснована технология и применение комплексного средства на основе биомассы спирулины и шрота семян винограда - смеси «ВинСпир», состоящей из равных частей компонентов. «ВинСпир» представляет собой порошок серо-зеленого цвета с характерным запахом водорослей, содержит 0,15±0,01 мг % (3-каротина, 80,25±0,65 мг % фикоцианина и 8,27± 0,61 мг % галловой кислоты и другие биологически активные вещества, выпускается в кишечнорастворимых капсулах по 0,6 г.

2. Введение в организм здоровых животных шрота семян винограда биомассы спирулины и смеси «ВинСпир» сопровождается увеличением количества эритроцитов на 49,85 %, 38,55 % и 57,97 %, увеличением концентрации гемоглобина на 34,4 %, 22,0 %, и 39,5 %, увеличением количества лейкоцитов на 28,54 %, 41,67 % и 49,74 %, в том числе палочкоядерных - на 28,82 %, 24,71 % и 30,59 % соответственно группе. Количество эозинофилов, моноцитов и лимфоцитов, а также СОЭ в крови животных изменялось статистически не значимо и не выходило за пределы физиологической нормы.

3. Смесь «ВинСпир» и ее отдельные компоненты при внутрижелудочном введении клинически здоровым крысам не вызывают существенных изменений в системе ПО Л-АО печени. Активность Ac AT, Ал AT и концентрация малонового диальдегида у интактных животных и животных, получавших растительные объекты практически не отличались (отклонения уровней были в пределах 2 %). Активность каталазы, СОД и ГП в группах крыс, получавших биомассу спирулины, шрот семян винограда и смесь «ВинСпир» были снижены в пределах физиологической нормы. Активность каталазы снизилась на 14,44 %, 17,19 % и 19,81 %, активность СОД - на 7,11 %, 11,39 % и 15,06 %, активность ГП - на 6,01 %, 9,4 % и 10,41 % соответственно.

5. Введение животным биомассы спирулины на фоне оксидативного стресса, сопровождается увеличением количества эритроцитов и концентрации гемоглобина на 26,03 % и 16,21 % соответственно, снижением количества лейкоцитов на 8,65 %, в том числе, увеличением палочкоядерных нейтрофилов на 47,78 % и снижением лимфоцитов на 14,59 %. Шрот семян винограда способствует увеличению количества эритроцитов и концентрации гемоглобина на 31,11 % и 23,99 % соответственно, снижению количества лейкоцитов на 10,87 %, в том числе, увеличению палочкоядерных нейтрофилов на 41,59%, снижению сегментоядерных нейтрофилов на 17,93 % и снижению лимфоцитов на 13,39 %. На фоне введения смеси «ВинСпир» у животных наблюдается увеличение количества эритроцитов и концентрации гемоглобина на 41,27 % и 29,77 % соответственно, снижение количества лейкоцитов на 19,98 %, в том числе, увеличение палочкоядерных нейтрофилов на 65,48 %, снижение сегментоядерных нейтрофилов на 20,67 %, снижение лимфоцитов на 15,53 %.

6. Введение в организм смеси «ВинСпир» или ее отдельных компонентов совместно с тетрахлорметаном способствует восстановлению нарушенного оксидативным стрессом равновесия в системе ПОЛ-АО печени. Биомасса спирулины достоверно снижает активность АсАТ на 27,65 %, АлАТ - 16,91 %, повышает активность каталазы на 35,21 %, СОД - 41,22 %, ГП - 20,17% и снижает концентрацию МДА на 18,28 %. Шрот семян винограда достоверно снижает активность АсАТ на 13,68 %, АлАТ - 14,27 %, повышает активность каталазы на 23,34 %, СОД -26,91 %, ГП - 13,71 % и снижает концентрацию МДА на 11,56 %. Смесь

ВинСпир» достоверно снижает активность АсАТ на 38,71 %, АлАТ -21,23 %, повышает активность каталазы на 47,36 %, СОД - 61,89 %, ГП — 28,47 % и снижает концентрацию МДА на 26,75 % по сравнению с показателями животных, при нагрузке тетрахлорметаном. Гепатопротекторный эффект смеси «ВинСпир» превосходит таковой у ее отдельных компонентов.

7. Смесь «ВинСпир» по сравнению с (3-каротином является сильным гепатопротектором. Она на порядок эффективнее Р-каротина снижает активность АсАТ, на 14,91 % снижает активность АлАТ, на 10,98 % повышает активность каталазы, 10,17 %, СОД - на 9,71 %, ГП - 9,71 %, и на 34,68 % снижает концентрацию МДА у животных при нагрузке тетрахлорметаном.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Шрот семян винограда является ценной растительной субстанцией, способной обеспечивать организм важными макро- и микроэлементами и биологически активными веществами, которые положительно влияют на морфологический состав крови и функции печени животных. Поэтому шрот семян винограда следует шире внедрять в схему кормления домашних животных (собак, кошек и других декоративных животных).

2. Смесь «ВинСпир» является эффективным гепатопротектором и ее следует применять как лечебное средство при гипофункции печени.

3. Более детальное изучение биологических и лечебных свойств биомассы спирулины и шрота семян винограда позволит создать конкурентоспособные гепатопротекторные лечебные средства.

4. Разработаны технические условия и технические инструкции для производства смеси «ВинСпир».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Павлова, Ольга Николаевна, Казань

1. Авдеева, Е.В. Гепатопротекторные свойства фенилпропаноидов и их производных / Е.В. Авдеева // Экология и здоровье человека: материалы X Всероссийского конгресса.- Самара, 2007.- С. 89-96.

2. Активность ферментов антиоксидантной защиты организма и изменения липидного состава микросом при действии витамина Е и его производных / Г.В. Донченко и др. // Биоантиоксидант: тезисы докл. VI конф.- М., 2002.- С. 167-169.

3. Антиокислительная активность флавоноидов в системе микросомального перекисного окисления / А.И. Потапович и др. // Сборник научн. трудов «Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине».- Рига.- 1998.- С. 187-190.

4. Антиокислительная эффективность экстрактов корней солодки голой / Г.Г. Гарифулина и др. // Биоантиоксидант: тезисы докл. VI конф.- М., 2002.- С. 100-101.

5. Антиоксидантные свойства дигидрокверцетина / Ю.О. Телескин и др. // Биофизика.- 1996.- Т. 41, №3.- С. 620-624.

6. Антиоксидантные свойства комплексного гепатопротекторного лекарственного препарата Силибохол / А.А. Лебедев и др. // Растительные ресурсы.- 2001.- Т. 37.- С. 69-74.

7. Антиоксидантный эффект аллантоина в различных тканях животных при окислительном стрессе / Е.П. Гуськов и др. // Биоантиоксидант: тезисы доке VI конф,- М., 2002.- С. 145-146.

8. Антиоксидантный эффект некоторых метаболитов организма / Е.В. Дятлова и др. // Биоантиоксидант: тезисы докл. VI конф.- М., 2002.-С. 178-179.

9. Антипанов, Н.А. Аспекты управления риском здоровью в системе городского социально-гигиенического мониторинга / Н.А. Антипанова, Н.Н. Котляр // Экология и здоровье человека: труды XI

10. Всероссийского конгресса на тему: «Проблемы выживания человека в техногенной среде современных городов».- Самара, 2006.- С. 332.

11. Барабой, В.А. Окислительно-антиоксидантный гомеостаз в норме и при патологии / В.А. Барабой, Д.А. Сутковый.- К.: Наукова думка, 1997.- 420 с.

12. Барабой, В.А. Перекисное окисление и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Глотин // Сибирская наука.- 1992.- С 148.

13. Биологически активные, соединения винограда: перспективы призводства и применения в медицине и питании / В.М. Монченко и др. // Мат. международной, научно-практической конференции.-Симерополь, 2001,- С. 7 -15.

14. Биофлавоноид содержащие растения как потенциальные антиоксиданты / М.А. Рыжикова и др. // Биоантиоксидант: тезисы докл. VI конф.- М., 2000.- С. 5001-503.

15. Блинкова, Л.П. Биологическая активность спирулины / Л.П. Блинкова, О.Б. Горобец, А.П. Батуро // Журн. микробиологии.- 2001.-№2.-С. 14-18.

16. Большакова, И.В. Антиоксидантные свойства ряда экстрактов лекарственных растений / И.В. Большакова, E.JI. Лозовская, И.И. Сапежинский // Биофизика.- 1997.- Т. 42.- Вып. 2.- С. 480-483.

17. Бондырев, А.А. Дискриминация между апоптозом и некрозом нейронов под влиянием окислительного стресса / А.А. Бондырев // Биохимия.- 2000.- Т. 65, № 7.- с. 981-990.

18. Боронец, Т.Ю. Выделение и очистка фикоцианина из биомассы спирулины / Т.Ю. Боронец // Аспирантский вестник Поволжья: тезисы межвузовской конференции молодых ученых. Приложение к межвузовскому журналу.- Самара, 2007.- С. 197-203.

19. Брейдо, В.В. Роль активации процессов перекисного окисления липидов в прогрессировании поражений печени при алкоголизме /

20. B.В. Брейдо // Вопросы клинической гепатологии,- Караганда, 1991.1. C. 20-23.

21. Бурлакова, Е.Б. Молекулярные механизмы действия антиоксидантов при лечении сердечно-сосудистых заболеваний / Е.Б. Бурлакова // Кардиология.- 1980.- № 8.- С. 48.

22. Вертанян, Л.С. Образование супероксидных радикалов в мембранах субклеточных органелл регенерирующей печени / Л.С. Вертанян // Биохимия.- 1992.- Т. 57, № 5.- С. 671-675.

23. Виноградова, Л.Ф. Стабилизация мембран гепатоцитов и кардиомиоцитов при токсическом и аллергическом поражении печени и миокарда соединениями селена / Л.Ф. Виноградова, Т.П. Белестова // Биоантиоксидант: тезисы докл. IV конф.- Москва, 1992.- С. 159-160.

24. Виноградова, Л.Ф. Теоретические и экспериментальные основы применения антиоксидантов при токсичесских и аллергических поражениях печени / Л.Ф. Виноградова // Человек и лекарство: тезисы докл. IV Рос. нац. конгресса.- М., 1997.- С. 200.

25. Владимиров, Ю.А. Биологические мембраны и ^запрограммированная смерть клетки / Ю.А. Владимиров // Соровский образовательный журнал.- 2000.- Т.6, № 9.- С. 2-9.

26. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах / Ю.А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал.- 2000.-Т.6, №12.- С.13-19.

27. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вестник РАМН.- 1998.- № 7.- С. 43-51.

28. Влияние антиоксидантов сыворотки крови на уровень процессов перекисного окисления липидов при вирусном гепатите В / Н.А. Бондырев и др. // Всесоюзная конференция «Молекулярные механизмы развития инфекционных заболеваний.- Звенигород, 1990. -С.15.

29. Влияние биофлавоноидов на микросомальное и митохондриальное окисление при ССЦ-гепатозе / Е.Г. Доркина и др. // Человек и лекарство: тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса.- Москва, 2006.-С.520.

30. Влияние гепатопротекторов, содержащих полифенолы, на течение экспериментального хронического гепатита / А.И. Венгеровский, и др. // Хим. фармац. журнал.- Москва, 1996.- Т.ЗО, №2.- С. 3-4.

31. Влияние масляного экстракта из корня лопуха на антиоксидантную систему животных с экспериментальным гепатитом / Ж.Ж. Нургалиева и др. // Человек и лекарство: тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса.- М., 2006.- С. 232.

32. Влияние окружающей среды на заболеваемость органов пищеварения / О.В. Сазонова и др. // Известия Самарского научного центра Российской академии наук, спец.выпуск «XIII конгресс «Экология и здоровье человека»».- 2008.- Том 2.-С. 151-154.

33. Влияние режимов механохимической активации на активность ферментативного комплекса виноградных семян / Н.Н. Корнен и др. // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология.-Краснодар, 2000.- №5-6.- С.42-43.

34. Воронин, А.В. Влияние различных источников углерода на рост культуры Spirulina platensis (Nords.) Geilt / А.В. Воронин, С.В. Первушкин, И.Ф. Шаталаев // Вестн. СамГУ.- 2006.- № 2 (42).- С. 161166.

35. Гамалеет, И.А. Перекись водорода как сигнальная молекула / И.А. Гамалеет, И.В. Клюбин // Цитология.- 1996.- Т. 38, № 12.- С. 12331247.

36. Гамалей, И.Г. О регуляторной роли активных форм кислорода в клетках / И.Г. Гамалей // Цитология,- 1999.- Т. 41, №9.- 767 с.

37. Гепатозащитное действие флавоноидов вики изменчивой и вики обрубленной / Э.Т. Оганесян и др. // Фармация.- 2004.- №4.- С. 41-42.

38. Гепатозащитное действие цветков бархатцев распростертых / Е.Г. Доркина и др. // Фармация.- 2004.- №2.- С. 33-35.

39. Гикавый, В.И. Цитопротекторное и антиоксидантное действие регесана / В.И. Гикавый, Л.А. Подгурский, Л.И. Павлов // Человек и лекарство: тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса.- М., 2006.- С. 510.

40. Гичев, Ю.П. Загрязнение окружающей среды и здоровье человека / Ю.П. Гичев.- Новосибирск: СО РАМН, 2002.- 203 с.

41. Гонский, Я.И. Коррекция ацетилцистеином нарушений окислительных процессов при токсическом поражении печени / Я.И. Гонский, И.Н. Клищ, М.М. Корда // Экспериментальная и клиническая фармакология.- М., 1996.- Т.58, № 6.- С. 64-66.

42. Горбунов, В.Н. Влияние структурной модификации мембранных белков на липид-белковое взаимодействие в мембранах эритроцитов человека / В.Н. Горбунов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1993.- № 11.- С. 488-491.

43. Гордиенко, А.Д. Влияние флавоноидов и ненасыщенных фосфолипидов на функциональную активность микросом печени крыс при СС14-гепатите / А.Д. Гордиенко, В.В. Левченко, О.В. Кудаковцева // Вестник фармации.- Киев.- 1995. № 12.- С. 105-107.

44. Горобец, О.Б. Стимулирующее и ингибирующее воздействие Spirulina platensis на микроорганизмы / О.Б. Горобец, Л.П. Блинкова, А.П. Батуро //Журн. микробиологии.- 2001.- № 6.- С. 20-25.

45. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР.- 11-е изд.- М.: Медицина, 1987.- 336 с.

46. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР.- 11-е изд.- М.: Медицина, 1989.- 400 с.

47. Грига, И.В. Влияние экстракта астрагала хлопунца на перекисное окисление липидов / И.В. Грига, В.М. Кочерган // Фармакология и токсикология: Респ. межвед. сб. МЗ УССР.- 1991.- № 26.- С. 115-117.

48. Грошовый, Т.А. Математическое планирование эксперимента в фармацевтической технологии / Т.А. Грошовый, Е.В Маркова, В.А. Головкин.- Киев: Вища школа, 1992.- 185 с.

49. Губский, Ю.И. Механизмы перекисного окисления липидов фракций хроматина печени / Ю.И. Губский, E.JI. Левицкий // Биополимеры и клетка.- 1993.- № 5.- С. 34-43.

50. Гусев, М.В. Микробиология / М.В.Гусев, Л.А. Минеева.- М.: МГУ, 1992.- 376 с.

51. Дашиманжилов, Ж.Б. Гепатопротекторное действие наркофита при алкогольном гепатите / Ж.Б. Дашиманжилов, А.А. Диль, С.М. Николаев // Фармация.- 2004.- № 6.- С. 34-37.

52. Денчикова, Л.А. Пигменты фотосинтетического аппарата Spirulina platensis (Nordst.) Geilt. / Л.А. Денчикова, Ю.В. Скутару, В.Ф. Рудик // Альгология.- 1998.- Т. 8, № 3.- С. 268-272.

53. Дубинина, Е.Е. Активные формы кислорода и их роль в развитии оксидативного стресса / Е.Е. Дубинина // Труды международной конференции «Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии».- С. Петербург: Изд-во СПбМЦ, 1998.- С. 386-395.

54. Дубинина, Е.Е. Антиоксидантные системы плазмы крови / Е.Е. Дубинина//Укр. биохим. журнал.- 1992.- Т.64, №2.- с.3-15.

55. Еремин, А.Н. Влияние полидисульфида галловой кислоты на активность и стабильность каталазы в разных средах // А.Н. Еремин, Ю.П. Лосев, Д.И. Метелица // Биохимия.- 2000.- Т. 65, №2,- С.298-308.

56. Ерёмина, А.В. Определение полифенольного состава сухого экстракта гребней винограда методом ВЭЖХ / А.В. Ерёмина, В.Ю. Решетняк, М.О. Везиришвили // Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова.- 2004.- 75 с.

57. Исследование химического состава виноградных семян с целью использования их в качестве кормовой добавки / А.Ю. Шаззо и др. // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология.-Краснодар, 2002.- №1.- С. 38-39.

58. Источники активных форм кислорода в тканях ротовой полости в норме и при патологии / О.А. Бабина и др. // Стоматология,- 1999.-№5.-С. 9-11.

59. К механизму обеспечения антиоксидантного гомеостаза / Н.М. Сторож и др. //Цитология.- 1999.-Т.41, №9.- С.828.

60. Климнюк, Е.В. Экспериментальная фармакотерапия растительными флавоноидами поражений печени, вызванных индометацином / Е.В. Климнюк // Фармакология и токсикология: Респ. Межвед. Сб. МЗ УССР.- 1991.- № 26.- С. 94-97.

61. Количественное определение фикоцианина в биомассе спирулины / С.В. Первушкин и др. // Фармация.- 2005.- № 5.- С. 16-17.

62. Кольтовер, В.К. Свободнорадикальная теория старения: исторический очерк / В.К. Кольтовер // Успехи геронтологии.- 2000.- Вып. 4.- С. 3340.

63. Кондрашова, М.Н. Отрицательные ионы и активные формы кислорода / М.Н. Кондрашова // Биохимия.- 1999.- Т. 64, № 3.- С. 430432.

64. Консистентные свойства шоколадных изделий с добавлением измельченных ядер виноградных семян / Н.А. Басий и др. // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология.- Краснодар, 2005.-№1.- С. 51-53.

65. Коробейникова, О.Н. Модификация определения продуктов перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой / О.Н. Коробейникова // Лаб. дело,- 1989.- № 7.- С. 8-10.

66. Королева, JI.P. Современные гепатопротекторы / JI.P. Королева // Клиническая фармакология и лекарственные средства.- 2005.- № 2,- С 35-37.

67. Королюк, М.А. Метод определения активности каталазы/ М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Т. Майорова // Лаб. дело.- 1988.- № 1.- С. 16-19.

68. Костюк, В.А. Роль ковалентного связывания и перекисного окисления липидов в повреждении печени четыреххлористым углеродом / В.А Костюк//Биохимия.- 1991.- Т. 565, №10.- С. 187-188.

69. Костюк, В.А. Состояние антиокислительной защитной системы печени крыс при воздействии четыреххлористого углерода / В.А. Костюк, А.И. Потапович, Г.Т. Маслова // Укр. биохим. журнал.- 1992.Т. 64, №3.- С. 111-115.

70. Ксейко, Д.А. Процессы перекисного окисления липидов в норме и патологии / Д.А. Ксейко; под. ред. д.б.н., проф. Т.П. Генинг // Система перекисного окисления липидов антиоксиданты в норме и патологии.- Ульяновск: Вектор-С, 2008.- С. 6-48.

71. Куркин, В.А. Перспективы использования лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды / В.А. Куркин // Современное состояние и перспективы научных исследований в области фармации: Тез. докл. научн.-практ. конф. СамГМУ.- Самара, 1996.- С. 134-135.

72. Куркин, В.А. Фенилпропаноиды перспективные природные биологически активные соединения / В.А. Куркин // Актуальные вопросы медицины.- Самара, 1996.- С. 37-40.

73. Кутина, С.Н. Резистентность печени к повреждению СС14 при стимуляции макрофагов препаратами разных классов / С.Н. Кутина, А.А. Зубахин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2000.- № 6.- С. 620-622.

74. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Монография / И.П. Западнюк и др..- Киев: Вишашкола», 1983.- 363 с.

75. Логинов, А.С. Свободные радикалы в хронической патологии печени / А.С. Логинов, В.Н. Матюшин // Арх. патологии.- 1991.- Т. 53, № 6. С. 75-79.

76. Лошаков, Л.А. Лекарственные растения основной источник эффективных природных антиоксидантов / Л.А. Лошаков, В.П. Пахомов // Человек и лекарство: тезисы докл. XIII Рос. Нац. конгресса.- М., 2006.- С. 25.

77. Лужников, Е.А. Клиническая токсикология / Е.А. Лужников.- М.: Медицина, 1982.- 368 с.

78. Макаров, В.Г. Антиоксиданты и реакционно-активные формы кислорода. Их роль и механизмы действия / В.Г. Макаров, М.Н. Макарова // VIII Международный съезд «Фитофарм -2004».- Миккели, 2004,- С. 121-132.

79. Матюшин, Б.Н. Активность глутатионзависимых ферментов в биоптате печени при хроническом поражении гепатоцитов / Б.Н. Матюшин, А.С. Логинов, В.Д. Ткачев // Клинич. и лаб. диагностика.-1998.-№4.-С. 16-18.

80. Матюшин, Б.Н. Определение супероксиддисмутазной активности в материале пункционной биопсии печени при ее хроническом поражении / Б.Н. Матюшин // Лаб. дело.- 1991.- №7.- С. 16-19.

81. Матюшин, Б.Н. Современные подходы к лабораторной диагностике свободнорадикальных процессов в печени при ее вирусном поражении / Б.Н. Матюшин, А.С. Логинов, В.Д. Ткачев // Клинич. и лаб. диагностика.- 1997.- №6.- С. 37-38.

82. Меньшикова, Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии.- 1993.- Т. 113, №4!- С.442-453.

83. Меньшикова, Е.Б. Биохимия окислительного стресса. Оксиданты и антиоксиданты / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, С.М. Шергин.-Новосибирск: СО РАМН, 1994,- 230 с.

84. Меньшикова, Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии.- 1997.- Т. 117, вып. 2.- С. 155-171.

85. Методическое пособие по изучению процессов перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты организма животных /B.C. Бузлама и др..- Воронеж, 1997.- 35 с.

86. Мироненко, Г.А. Математическая обработка результатов измерений и вычислений / Г.А. Мироненко // Фармация.- 1980.- № 5,- С. 69-74.

87. Овсянникова, Т.Н. Состав и антиоксидантная активность комплекса биополимеров из Spirulina platensis (Nordst.) Geilt. / Т.Н. Овсянникова, Н.Г. Миронова, А.Г. Губанова // Альгология.- 1998.- Т. 8, №1.- С. 7581.

88. Оценка показателей антиоксидантной активности препаратов на основе лекарственного растительного сырья / А.П. Арзамасцев и др. // Хим.- фармац. журн.- 1999.- Т. 33, №11.- С. 17-20.

89. Первушкин, С.В. Биомасса спирулины: исследования и перспективы использования: монография / С.В. Первушкин, А.В. Воронин, А.А. Сохина.- Самара: СамГМУ, 2004.- 100с.

90. Первушкин, С.В. Закрытый способ культивирования биомассы Spirulina platensis / С.В. Первушкин, М.О. Тархова, А.В. Воронин // Человек и лекарство: тез. докл. VII Рос. нац. конгр. 10-14 апр. 2000 г.-М., 2000.-С. 463.

91. Первушкин, С.В. Исследования по стандартизации биомассы Spirulina platensis / С.В. Первушкин, А.В. Воронин, А.А. Сохина // Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики: сб. материалов конф.- Курск, 2001.- С. 216-217.

92. Первушкин, С.В. Метод количественного анализа хлорофилла и каротиноидов микроводоросли Spirulina platensis / С.В. Первушкин, А.В. Воронин, И.Ф. Шаталаев // Человек и лекарство: тез. докл. VIII Рос. нац. конгр. 12-16 апр. 2001 г.- М., 2001.- С. 703.

93. Первушкин, С.В. Стандартизация биомассы спирулины / С.В. Первушкин, А.В. Воронин, А.А. Сохина // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: материалы науч.-практ. конф.- Пермь, 2001.- С. 132-133.

94. Перекисная модификация мембран и изоферментный состав цитохрома Р 450 микросом печени крыс в условиях антиоксидантнойнедостаточности / Ю.И. Губский и др. // Украинский биохимический журнал.- 1992.- Т. 64, № 4.- С. 98-105.

95. Перекисное окисление липидов и повреждение печени при острой алкогольной интоксикации / В.В. Брейдо и др. // Вопросы наркологии.- 1991.- № 2.- С. 2-4.

96. Платонов, А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, компьютерные методы / А.Е. Платонов.- М., 2000.- 52 с.

97. Посохова, Е.А. Предшественники синтеза окиси азота как гепатопротекторные средства / Е.А. Посохова, A.M. Олещук // Тезисы докладов Международной научно-практической конференции.-Москва, 1997.- С.66.

98. Пострецепторное образование активных форм кислорода в клетках, не являющихся профессиональными фагоцитами / И.А. Гамалей и др. //Цитология.- 1999.- Т. 41, № 5.- С. 394-399.

99. Природные антиоксиданты как гепатопротекторы / Н.Д. Бунятян и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология.- 1999.-Т.62, № 3.- С. 64-67.

100. Природные антиоксиданты (биотехнологические, биологические и медицинские аспекты). Монография / Л.В. Кричковская и др..-Харьков: ОАО «Модель Вселенной», 2001,- 367 с.

101. Прохорова, Л.В. Разработка методики количественного определения суммы каротиноидов в препарате «Биомасса Спирулины платенсис» /

102. JI.B. Прохорова, C.A. Кедик, B.B. Шелестова // Ведомости науч. центра экспертизы и гос. контроля лек. средств.- 2001.- № 4 (8).- С. 9799.

103. Пупыкина, К.А. Изучение сборов для лечения панкреатита и гепатита / К.А. Пупыкина, Т.И. Плеханова, Ч.А. Петрова // Фармация.-2005.-№3.- С. 25-27.

104. Роль антиокисдантной системы в патогенезе токсического гепатита / Я.И. Гонский и др. // Патол. физиология и эксперим. терапия.- 1996.-№2,- С. 43-45.

105. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. Р.У. Хабриева.- 2-изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 2005.- 832 с.

106. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ.- М.:Ремедиум, 2000.- 398 с.

107. СанПиН 2.3.2.1290-03. Гигиенические требования к организации производства и оборота биологически активных добавок к пище.- М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава Росси, 2003.- 416 с.

108. Сапрыкина, О.А. Химические и биохимические особенности экстрактов из твердых частей грозди винограда / О.А. Сапрыкина, С.Х. Абдуразакова // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология,- Краснодар, 2001.- №1.- С. 19-22.

109. Саратиков, А.С. Новые гепатопротекторы природного происхождения / А.С. Саратиков, А.И. Венгеровский // Эксперим. и клинич. терапия.- 1995.- Т. 58, №1.- С. 8-11.

110. Свиридкина, Л.П. Влияние антиоксидантов на скорость выведения продуктов перекисного окисления из околоклеточного окружения / Л.П. Свиридкина, С.А. Попова, С.Г. Топоров // Человек и лекарство: тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса.- М., 2006.- С. 278

111. Сергеев, В.Н. Биологически активное растительное сырье в пищевой промышленности / В.Н. Сергеев, Ю.И Конаев // Пищевая промышленность.- 2001.- № 6,- С. 28

112. Сирота, Т.В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы / Т.В. Сирота // Вопросы мед. химии.- 1999,- Т. 45, №3.-С. 263-272.

113. Скаку, Н.П. Сравнительная эффективность растительных флавоноидных препаратов при остром поражении печени / Н.П. Скаку, И.П. Мосейчук // Фармакол. и токсикология.- 1991.- № 26.- С. 120-123.

114. Состояние антиоксидантной защиты больных хроническим активным гепатитом В и С вирусной этиологии / Дроздов В.Н. и др. // Биоантиоксидант: тезисы докл. VI конф.- Москва, 2002.- С. 17-18.

115. Справочник по клиническим лабораторным методам исследованиям / под. ред. Е.А. Коста.- 2-е изд., испр. и доп. // М.: Медицина, 1975.384 с.

116. Сравнительная эффективность антиоксидантов при защите бактериальной плазматической мембраны от активных форм кислорода / А.Ю. Иванов и др. // Биофизика.- 2000.- Т. 45, № 4.- С. 660-665.

117. Сторож, Н.М. Ингибирующие эффекты смесей альфа-токоферола сбета-каротином или витамином А при окислении эфиров полиненасыщенных жирных кислот / Н.М. Сторож, И.В. Кутузова // Вопросы медицинской химии.- 1996.- Т. 46, № 1.- С. 16-22.

118. Строганов, Н.С. Ведение лабораторной культуры и определение плодовитости дафний в ряду поколений / Н.С. Строганов, JI.B. Колосова // Методики биологических исследований по водной токсикологии.- М.: Наука, 1971,- С. 210-216.

119. Строганов, Н.С. Методика определения токсичности водной среды / Н.С. Строганов // Методики биологических исследований по водной токсикологии.- М.: Наука, 1971.- С. 14-60.

120. Супероксиддисмутаза при ишемии печени / Л.Г. Наглер и др. // Биохимия.- 1991.- Т. 56, №4.- С. 674-680.

121. Технологические свойства, растительных Б АД, полученных из вторичных ресурсов / А.П. Прибытко и др. // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология,- Краснодар, 2007.- №2.-С.95- 96.

122. Характеристика антирадикальной активности и состава экстрактов растительного сырья / М.Н. Макарова и др. // VIII Международный съезд «Фитофарм 2004». - Миккели, 2004.- С. 121-123.

123. Чучалин, А.Г. Система оксиданты антиоксиданты и пути медикаментозной коррекции / А.Г. Чучалин // Пульманология.- М., 2004.- с. 40-47.

124. Шнюкова, Е.И. Продуктивность и биохимический состав микроводорослей рода Spirulina Tupr. (Cyanophyta) / Е.И. Шнюкова,

125. П.А. Мушак, Н.Д. Тупик // Альгология.- 1994.- Т. 4, № 4.- С. 17-24.

126. Шольц, Е.П. Технология переработки винограда / Е.П. Шольц, В.Ф. Пономарев.- М.: ВО Агропромиздат, 1990.- 446 с.

127. Эффективность гепатозащитных средств при экспериментальном хроническом гепатите / А.С. Саратиков и др. //Экспериментальная и клиническая фармакология.- 1996.- № 1.- С. 59-60.

128. Эффекты ионов кальция на вне и внутриклеточные процессы генерации активных форм кислорода в фагоцетирующих клетках крови / А.В. Бизюкин и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1998.- Т. 126, № 9.- С. 334-336.

129. An Extract from Spirulina platensis a Selective Inhibitor of Herpes Simplex Vims Type 1 Penetration into HeLa Cells / O. Hayashi at all. // Phytother. Res.- 1993.- Vol. 7.- P. 76-80.

130. Attenuation of disrupted hepatic active oxygen metabolism with the recovery of acute liver in jury in rats intoxicated with carbon tetrachloride / Y. Ohta at all. // Res. Commun. Mol. Pathol. Pharimacol.- 1997.- Vol. 95, №2.-P. 191-207.

131. Baer-Dobowska, W. Inhibition of murine hepatic cytochrome P-450 activities by natural and synthetic phenolic compounds / W. Baer

132. Dobowska, H. Sxaefer, V. Krajka -Kuxniak // Xenobiotica.- 1998.- Vol. 28, №8.- P. 725 -743.

133. Block, T. Hydrogen peroxide alters the physicals state and functi on of the plasma cell membrane of pulmonary artery endothelial cells / T. Block // Cell Physiol.- 1991.- Vol. 146, № 3.- P. 362-369.

134. Bombart, P. Spirulina cultures in temperate climates / P. Bombart, M. Brouers, E. Dujardin // Spirulina, algae of life / Ed. par Frangois Doumenge.-Monaco, 1993,-P. 97-102.

135. Brejc, K. Isolation, crystallization, crystal structure analysis and refinement of allophycocyanin from the cyanobacterium Spirulina platensis at 2,3 A resolution / K. Brejc, R. Ficner, R. Huber // J. Mol. Biol.- 1995.-Vol. 249, № 2.- P. 424-440.

136. Calcium Spirulan, an Inhibitor of Enveloped Vims Replication, from Blue-Green Alga Spirulina platensis / T. Hayashi at all. // J. Natur. Products (Am. Chemical Soc, Am. Soc. Farmacognosy).- 1996.- Vol. 59, № l.-P. 83-87.

137. Cell damage by oxygen free radicals / G. Belomo at all. // Cetotechnology.- 1991.- V.5, № 1.- P. 571-573.

138. Dubick, M. Evidence for grape, wine and tea polyphenols as modulators ofatherosclerosis and ischemic heart disease in humans / M. Dubick, S. Omaye // Journal of Nutraceuticals Functionaland Medical Foods.- 2001.-№3.- P. 67-93.

139. Eaton, J.W. Catalases and peroxidasis and glutathione and hydrogen peroxide: Mysteries of the Bestiary / J.W. Eaton // J. lab. and Clin, med.-1991.- Vol. 118.-P. 3-4.

140. Effect of inclusion of defatted grape seed meal in the diet on digestion and performance of growing rabbits. / J. Garcia at all. // J. Anim. Sci.-2002.-Vol. 80,- P. 162-170.

141. Fedkovic, У. Spiruline et cancer / Y.Fedkovic, C.Astre, F.Pinguet //

142. Spirulina, algae of life / Ed. par Frangois Doumenge.- Monaco, 1993.- P. 117-120.

143. Fridovich, I. Superoxide radical and superoxide dismutase / I. Fridovich // Anny. Rev. Biochem.- 1995.- V.64.- P. 97-112.

144. Furumo, Koji. Effect of cumene hydroperoxide on lipid peroxydation in cultural rat hepatocytes supple metod with eicosapen tachoue acid / Koji Furumo, Narumi Ssugihama // Biol, and Pharm. Bull.- 1994.- Vol. 17, №3.-P. 419-422.

145. Glutatione peroxidase, superoxide dismutase, and catalase inactivation by peroxides and oxygen derived free redicals / E. Pigeolet at all. // Mech. Age Dev.- 1990.- Vol. 51, № 3.- P. 283-297.

146. Gutteridge, J. M. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of tissue damage / John M.C. Gutteridge // Clin. Chem.- 1995.- T. 41, № 12b.-P. 1819-1828.

147. Haizhen, Wang The recombinant b subunit of C-phycocyanin inhibits cell proliferation and induces apoptosis / Wang Haizhen, Yongding Liu, Xueliang Gao // Department of Biology.- Atlanta, 2006.- P. 125-129.

148. Hayashi, K. Enchancement of antibody production in mice by dietary Spirulina platensis / K. Hayashi // J. of Nutr. Sciences and Vitaminology.-1994,- Vol. 40.- P. 431-441.

149. Hayashi, T. Antiviral polysaccharide / T. Hayashi, K. Hayashi, I. Kojima //Biochem. Pharmacol.- 1998.- Vol. 55, № 5.- P. 789-793.

150. Hepatoprotective mechanism of silimarin: no evidence for involvement of cytochrome P-450 / M. P. Miguez at all. // Chem. Biol. Interact.- 1994.-Vol. 91, №1.- P. 51-63.

151. Hohl, H. Generation of activated oxygen species as side products of cell respiration / H. Hohl // Free Radic Biol, and Med.- 1990.- Suppl. № 1.- P. 141.

152. Janbas, K.N. Protective effects of rutin on paracetamol and CCl4-inducedhepatotoxicity in rodents / K.N. Janbas, S.A. Saeed, A.H. Gilani I I Fitoterapia.- 2002.- DEC; 73(7-8).- P 557-563.

153. Kim, H.M. Inhibitory effect of mast cell-mediated immediate-type allergic reactions in rats by spirulina / H.M. Kim, E.H. Lee, H.H. Cho // Biochem. Pharmacol.- 1998.- Vol. 55, № 7.- P. 1071-1076.

154. Koju, Hase Protective effect of celosian induced liver injuries / Hase Koju, Kadota Shigetoshi // Biol, and Pharm. Bull.- 1996.- Vol.19, № 4.- P. 567-572.

155. Kurkin, V.A. Phenylpropanoids from Medicinal Plants: Distribution, Classification, Structural Analysis, and Biological Activity / V.A. Kurkin // Chemistry ofNatural Compounds.- 2003.- Vol. 39, № 2.- P. 123-153.

156. Lisheng, L. Inhibitive effect and mechanism of polysaccharide of Spirulina platensis on transplanted tumor cells in mice/ L. Lisheng // Marine Sciences, Qindao China.- 1991.- № 5.- P. 33-38.

157. Liver lihid peroxidation and glutationrelated defence enzyme systems in mice treated wich paracetamol / G. Ozdemizler at all. // J. Appl. Toxicol.-1994.- Vol. 14, №4.- P. 297-299.

158. Molev A.M. Antiperoxidante and free radical scavenging activities of flawonoids / A.M. Molev, P. Alov // Meth. and Find. Exp. and Clin. Pharmacol.- 1994.- Vol. 16, № 1.- P.140-141.

159. Pascaud, M. The Essential polyunsaturated fatty Acids of Spirulina and our Immune Response / M. Pascaud // Spirulina, algae of life. ed. par Frangois Doumenge.- Monaco, 1993.- P. 49-58.

160. Pinero, J.E. Antioxidant activity of different fractions of Spirulina platensis protean extract / J.E. Pinero, P. Bermejo Bescos, A.M. Villar del Fresno // Farmacol.- 2001.- Vol. 56, № 5.- P. 497-500.

161. Preventive effect of melatonin on the progression of carbon tetrachloride induced acute liver injury rats / Y. Ohta at all. // Adv. Exp, Med. Boil.-1991.- Vol. 467.-P. 327-332.

162. Protective activity of hamamelitanin on cell damaga induced by superoxide anion raducel in murine dermal fibroblasts / Masaki Hitoshi at all. // Biol, and Pharm. Bull.- 1995.- Vol.18, № 1,- P.59-63.

163. Qian, Kaixian Growth and Biochemical Charactheristic of a Spirulina platensis / Kaixian Qian, Shengying Hou // Haiyang yu huzhao.- 1996.-Vol. 27, №4.-P. 357-361.

164. Qiu, Li-chuan Analysis of some physiological characteristic Spirulina major Kuetz / Li-chuan Qiu, Yuan-jie Ling, Shu-lian Xie // Zhiwu yanjiu.-1998.- Vol. 18, № 3.- P. 356-360.

165. Qureshi, M.A. Phagocytic potential of feline macrophages after exposure to a water soluble extract of Spirulina in vivo / M.A. Qureshi // Immunopharmacology and Immunotoxicology.- 1996.- № 1.- P. 32-36.

166. Qureshi, M.A. Spirulina platensis extract enhances chicken macrophage functions after in vitro exposure / M.A. Qureshi, M.T. Kidd // J. of Nutritional Immunology.- 1995.- Vol. 3, № 4.- P. 35-45.

167. Robak, M. Scavenging of reactive oxygen species as the mechanism of drug action / M. Robak, E. Marcinkiewicz // Pol. J. Pharmacol.- 1995.- Vol. 47, № 2.- P. 89-98.

168. Romay, C. Further studies on anti-inflammatory activity of phycocyanin in some animal models of inflammation / C. Romay, N. Ledon, R. Gonzalez//Inflamm. Res.- 1998.-Vol. 47.- P. 334-338.

169. Shimoi, K. Masuda Snticlastogenic and antioxidative activities of plant flavonoids in mice / K. Shimoi // Mutal. Res. Euviron.- 1996.- Vol.359, № 3.- P.225.

170. Time course of changes in hepatic lipid peroxidotion and glutathione metabolism in rats with carbon tetrachloride - induced cirrhosis / M. Cabre at all. // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol.- 2000.- Vol. 27, № 9.- P. 694-699.

171. Wagner, H. Pharmazeutische Biologie. Drogen und ihre Inhaltsstoffi / H. Wagner. Stuttgart.- New York: Gustav Fischer Verlag, 1993.- 522 p.

172. Wang, X.Q. A novel monoclinic crystal form for phycobiliproteins in phycobilisomes / X.Q. Wang, L.N. Li, W.R. Chang // Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr.- 2001.-Vol. 57, № 6.- P. 784-792.

173. Yang, H.N. Spirulina platensis inhibits anaphylactic reaction / H.N. Yang, E.H. Lee, H.M. Kim // Life Sci.- 1997.- Vol. 61, № 13.- P. 12371244.

174. Yoshida, A. Enzyme immunoassay for phycocyanin as the main component of spirulina color in foods / A. Yoshida, Y. Takagaki, T. Nishimune // Biosc. Biotechnol. Biochem.- 1996.- Vol. 60, № 1.- P. 57-60.

Информация о работе

Павлова, Ольга Николаевна
кандидата биологических наук
Казань, 2010
ВАК 03.03.01

Диссертация

Физиологическое обоснование применения фитогепатопротектора "ВинСпир" в ветеринарии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы