Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Терапевтическое действие ларивитола при токсическом поражении печени лабораторных животных и гепатозах цыплят-бройлеров

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Терапевтическое действие ларивитола при токсическом поражении печени лабораторных животных и гепатозах цыплят-бройлеров"

На правах рукописи

Ерёменко Сергей Васильевич

ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ЛАРИВИТОЛА ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ И ГЕПАТОЗАХ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 о ш

Белгород - 2012

005017590

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени

В.Я.Горина»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Резниченко Людмила Васильевна

Официальные оппоненты: Никулин Иван Алексеевич доктор вете-

ринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. императора Петра 1», кафедра терапии и фармакологии, профессор.

Сноз Григорий Васильевич доктор ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицина и биотехнологии им. К.И. Скрябина, кафедра клинической диагностики и радиобиологии, профессор.

Ведущая организация - ФГБОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится 15 мая 2012 года в « Ю » часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.02 при ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я. Горина» по адресу: 308503, Белгородская область, Белгородский район, пос. Майский, ул. Вавилова, д. 1. Тел/факс 8(4722)-39-22-62

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В .Я. Горина», а с авторефератом в сети интернет на официальном сайте Министерства образования и науки РФ vak.ed.gov.ru и на сайте академии www.bsaa.edu.ru

Автореферат разослан « » (Щ'ф&лЗ 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Резниченко Людмила Васильевна

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Поражения печени различной этиологии занимают значительное место в общей структуре заболеваний и являются достаточно широко распространенной патологией (Подымова С.Д., 1998; Дынжи-нова Е. А, 2007; Привалов И. М., 2009).

При патологии печени, независимо от этиологии, ведущим патоморфо-логическим синдромом является цитолиз, обусловленный повышением проницаемости и (или) разрушением мембран гепатоцитов и их органелл с развитием гиперферментемии митохондриального фермента АсАТ и цитоплаз-матического фермента АлАТ (Подымова С.Д., 1998; Шерлок Ш. с соавт., 1999).

Для коррекции цитолитического синдрома в настоящее время целесообразно включение в современную фармакотерапию хронических поражений печени препаратов, обладающих гепатопротекторным и мембраностабилизи-рующим действием и тем самым активитующих антиоксидантную защиту организма (Катикова О.Ю., 2002; Доркииа Е.Г, 2004). К препаратам, обладающим гепатопротектрными свойствами, относят каротин, жирорастворимые витамины, биофлавоноиды и др.

Гепатопротекторный эффект могут оказывать фармакологические средства, улучшающие метаболические процессы в организме, средства, ин-гибирующие перекисное окисление липидов и обладающие антнгипоксиче-ской активностью (Силуянова Н. с соавт.,2002). Для лечения и профилактики токсических гепатитов можно применять препараты, содержащие в своём составе витамины, биофлавоноиды и другие биологически активные вещества (Скакун Н.П. с соавт., 1987 ; Тихазе А.К. с соавт., 1999; Абидуева Е.Л., 2005; Ильченко, Л.Ю. с соавт., 2007).

Исходя из этого, нами, совместно с учёными-химиками ЗАО «Петро-хим>> ( г.Белгород) был разработан новый комплексный препарат, в состав которого вошли биофлавоноидный комплекс лиственницы, а также витамины А, Дз и Е, который получил название ларивитол. При разработке лариви-

тола, было учтено его антиоксидантное действие, которое является ключевым звеном в профилактике заболеваний животных.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы было изучение ге-патотропных свойств ларивитола на модели острого токсического гепатита на белых крысах и подтверждение его фармакологического действия при ге-патозах цыплят-бройлеров.

Для достижения цели на разрешение были поставлены следующие задачи:

» определить безвредность ларивитола на лабораторных животных;

• вызвать токсический гепатит у белых крыс путём применения четырёх-хлористого углерода;

• на модели острого токсического гепатита установить гепатотропный эффект ларивитола и сравнить его эффективность с аминовиталом;

• сравнить эффективность действия ларивитола и аминовитала при гепато-зах цыплят-бройлеров;

• определить химический состав и биологическую ценность мяса птицы, получавшей ларивитол;

• экономически обосновать использование ларивитола в птицеводстве.

Научная новизна работы. На модели острого токсического гепатита впервые изучены гепатотропные свойства ларивитола. Действие препарата проявлялось уменьшением нарушений функционального состояния печени, вызванного четырёххлористым углеродом, и сопровождалось снижением до физиологической нормы активности ферментов переаминирования, щелочной фосфатазы и содержания билирубина в сыворотке крови, восстановлением гистоструктуры печени.

На цыплятах-бройлерах подтверждены выявленные на лабораторных животных гепатотропные свойства ларивитола. Дано обоснование возможности его использования в качестве лечебно-профилактического средства при гепатозах цыплят-бройлеров.

Практическая значимость работы. Предложен новый препарат для лечения гепатозов цыплят-бройлеров и дано экономическое обоснование использования его в птицеводстве.

Ларивитол выпускает ЗАО «Петрохим» (г. Белгород). Разработано и утверждено временное наставление по его применению.

Апробация результатов исследования. Результаты исследования были представлены на международных научно-практических конференциях: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (Белгород, 2010, 2011), «Современные подходы к развитию АПК» (Казань, 20011), и расширенном заседании кафедры инфекционной и инвазионной патологии Белгородской государственной сельскохозяйственной академии (2012).

Публикация результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ в сборниках международных конференций, центральных журналах и отдельных изданиях (из них две - в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ). Основные положения, выносимые на защиту:

• результаты токсикологических свойств ларивитола;

• доказательства гепатотропного действия препарата на модели острого токсического гепатита на белых крысах;

» доказательства терапевтического действия ларивитола при гепатозах цыплят-бройлеров;

• оценка товарного вида и биологической ценности птицеводческой продукции после применения ларивитола;

• практические предложения по применению ларивитола;

Объем н структура диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений. Библиогра-

фический список включает 166 источника, в том числе - 65 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 21 таблицей и 6 рисунками.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнялась в 2009-2012 гг. на базе Белгородской государственной сельскохозяйственной академии и Белгородской межобластной ветеринарной лаборатории. Производственные опыты проводились в условиях ЗАО «Приосколье» Новооскольского района Белгородской области.

Объектом исследования служил препарат ларивитол, который представляет собой сыпучую порошкообразную массу кремового цвета и содержит в своём составе биофлавоноидный комплекс лиственницы - 0,02 мг/г; витамин А - 500 МЕ/г; витамин Дз - 250 МЕ/г; витамин Е - 0,2 мг/г.

В экспериментальной части работы было использовано 88 белых крыс, 12 кроликов, 18 морских свинок, 120 цыплят-бройлеров; в клинических и научно-производственных испытаниях - 46000 цыплят.

Токсический гепатит вызывали внутрибрюшинным введением крысам четырёххлористого углерода в форме 50% эмульсии на вазелиновом масле из расчёта 4,0 мл на 1 кг массы тела в течение 3-х суток (Венгеровский А.И. с соавт., 1999).

В конце периода наблюдения из каждой группы умерщвляли по 6 животных для патоморфологических исследований. Методом оценки эффективности действия препаратов был клинический осмотр животных, измерение массы тела и контроль некоторых биохимических показателей сыворотки крови (AST и ALT, креатинин, общий билирубин, щелочная фосфатаза, общий белок и т.д.).

Комплексные исследования клинического состояния птицы проводили с учетом условий их кормления и содержания. При диагностике гепатозов учитывали активность печёночных ферментов (аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы) и щелочной фосфатазы, содержание билирубина в сыворотке крови, результаты патологоанатомического вскрытия.

Принималось во внимание степень поражаемое™ поголовья и падёж.

При формировании групп учитывали породность, возраст, живую массу и общее состояние животных.

Схема опытов представлена в табл.1.

Табл. 1 - Схема опытов

Группы Количество животных Применяемы препараты Дозы препаратов

Первый опыт

Определение токсикологических свойств ларивитола

Второй опыт

Изучение гепатотропных свойств ларивитола на модели экспериментального острого токсического гепатита белых крыс

1-контрольная 18 Интактные животные -

2-опытная 18 ССЬ, (4,0 мл/кг массы тела) -

3-опытная 18 ССЇ4 + ларивитол 2,0 г/кг массы тела

4-опытная 18 ССЦ +аминовитал 0,2 мл/л воды

Третий опыт Оценка клинического состояния и биохимических показателей крови цыплят- бройлеров

Четвёртый опыт Лечебное действие ларивитола при гепатозах

цыплят-оройлеров

1-контрольная 120 Основной рацион (ОР) -

2-опытная 120 ОР+аминовитал ОД мл/л воды

3-опытная 120 ОР+ларивитол 1,0 г/кг массы тела

4-опытная 120 ОР+ларивитол 2,0 г/кг мзссы тела

5-опьггная 120 ОР+ ларивитол 3,0 г/кг массы тела

Производственная проверка

1-контрольная 16210 Основной рацион (ОР) -

2-опытная 16563 ОР+ ларивитол 1,0 г/кг массы тела

3-опытная 17104 ОР+ ларивитол 2,0 г/кг массы тела

4-опытная 16507 ОР+ ларивитол 3,0 г/кг массы тела

Гематологические показатели (число эритроцитов, лейкоцитов, лейко-грамму) определяли общепринятыми методами (Симонян Г. А. с соавт. , 1995), биохимические показатели крови - при помощи гематологического анализатора «Хитачи», активность лизоцима в сыворотке крови - нефело-метрическим методом (Дорофейчук В. Г., 1968), бактерицидную активность

сыворотки - по И. М. Карпуть (1993), фагоцитарную активность - по количеству фагоцитирующих псевдоэозинофилов из 100 учтенных клеток.

При ветеринарно-санитарной оценке мяса пользовались правилами ве-теринарно-санитарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мясных продуктов (М., 2001).

На основании результатов, полученных в производственных условиях, проводили расчёт экономической эффективности применения ларивитола (Никитин И.Н., 1982). Полученный в опытах цифровой материал был подвергнут статистической обработке на персональном компьютере по методам вариационной статистики с вычислением аргумента Стьюдента Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при р<0,05 (Лакин Г.Ф., 1973).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Определение безвредности ларивитола

Для изучения острой токсичности ларивитола было сформировано 4 группы белых крыс (одна контрольная и три опытные) обоего пола массой 180-220 г, по 10 гол в каждой. Животным опытных групп препарат применяли перорально из расчёта 11,0; 16,5 и 25,0 г/кг массы тела. Наблюдение проводили в течение 14 суток.

При этом не удалось установить конкретной величины ЛД50, ввиду того, что рассчитанные по верхней границе дозы оказались больше максимального объёма препарата, допустимого для введения в желудок крысы. Введение максимального объёма препарата не вызывало каких-либо отклонений в поведении животных и естественных отправлении (дефекации, диуреза). Ни в одной из опытных групп от изучаемых доз препарата не зарегистрировано гибели животных. Таким образом, по параметрам острой токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 ларивитол можно отнести к веществам 4 класса -малоопасным.

Длительное (в течение 3 мес.) ежедневное применение ларивитола в дозах 2,0; 10,0 и 20,0 г/кг массы тела (десятикратная доза от расчетной) так-

же не вызывало изменений в общем состоянии животных, их условно-рефлекторной деятельности, морфологическом и биохимическом составе крови. Установлено, что ларивитол не обладает также местнораздражающим и аллергизирующим действием и без каких-либо специальных режимов может назначаться перорально в рекомендуемых дозах.

3.2. Изучение гепатотропных свойств ларивитола на модели острого токсического гепатита

Острый токсический гепатит у белых крыс вызывали четырёххлори-стым углеродом на вазелиновом масле из расчёта 4,0 мл/кг массы тела в течение 3-х суток однократно.

Для проведения опыта было отобрано 4 группы белых беспородных крыс по 18 голов в каждой.

Первой группе никаких препаратов не применяли (интактные животные). Крысам второй, третьей и четвёртой опытных групп внутрибрюшинно

1 раз в сутки вводили 50%-ную эмульсию четырёххлористого углерода на вазелиновом масле в дозе 4 мл/кг массы тела в течение трёх суток подряд. Третьей опытной группе сразу после окончания инъекций четыреххлористо-го углерода в течение 14 суток в корм добавляли ларивитол из расчёта

2 г/кг массы тела, четвёртой опытной группе в течение такого же периода времени выпаивали аминовитал из расчёта 0,2 мл/л воды. Изменения биохимического состава крови животных представлены в табл. 2.

Как видно из таблицы, интоксикация СС14 характеризовалось повышенным образованием билирубина и ингибированием экскреции внутрипе-ченочного звена данного пигмента. Во второй опытной группе отмечалось повышение уровня билирубина в сыворотке крови на 71,9 % по сравнению с интактной группой животных, при р<0,001.

Введение крысам четырёххлористого углерода привело к нарушению цитоплазматических мембран гепатоцитов, что проявилось увеличением в сыворотке крови ферментов переаминирования: во второй группе активность AST и ALT возросли на 71,9 и 99,6% соответственно по сравнению с ин-

такгными животными (р<0,001). Наблюдалось также повышение активности щелочной фосфатазы (на 34,7%).

Таблица 2. - Биохимические показатели крови крыс

Показатели Контрольная группа Опытные группы

1 2 3 4

интактные животные ССІ4 ларивитол +ССЦ аминови-тал+ССІ4

AST ед/л 187,9±8,47 323,0+7,41*** 188,6+6,85 291,5+9,57***

±к контролю, % - +71,9 + 0,4 +55,1

ALT ед/л 119,8±5,66 239,0+6,31*** 121,5+5,33 198,2+4,31**

±к коніролю, % - +99,6 +1,4 +65,4

Альбумины г/л 32,0+1,85 34,2±1,71 33,1+0,82 33,8+1,77

±к контролю, % - +6,8 +3,4 +5,6

Общий белок г/л 67,8±1,23 63,0+1,18* 68,7+1,34 69,2+0,99

±к контролю, % - -7,1 +1,3 +2,1

Мочевина ммоль/л 6,72±0,67 8,25±0,63 6,82+0,55 7,91+0,52

±к контролю, % - +22,8 +1,5 +17,7

Креатинин мг/дл 0,42±0,30 0,49+0,34 0,43+0,31 0,47+0,35

±к контролю, % - +16,6 +2,4 +11,9

Билирубин мг/дл 0,52±0,09 0,87+0,07* 0,54+0,12 0,59+0,14

±к контролю, % - +67,3 +1,9 +11,8

Холестерин ммоль/л 1,18±0,19 1,72+0,18* 1,23+0,22 1,49+0,21

±к контролю, % - +50,0 +17,8 +28,6

Глюкоза ммоль/л 9,22±1,16 4,81+1,11* 8,66+1,13 7,14+1,22

±к контролю, % - -47,8 -6,1 -22,5

Щелочная фосфатаза ед/л 349,1+8,80 470,2+9,87* 350,3+7,12 386,1+6,18*

+к контролю, % - +34,7 +0,4 +10,5

Примечание: ***- р<0,001; **- р<0,01; *- р<0,05

Введение ларивитола крысам третьей опытной группы сопровождалось уменьшением синдрома цитолиза, что проявилось нормализацией в сыворотке крови активности ферментов переаминнрования. Активность щелочной фосфатазы, как показателя фосфорно-кальциевого обмена и синдрома холестаза, также была в пределах физиологической нормы.

Действие аминовитала (4-я опытная группа) было менее выраженным, что подтверждается меньшим снижением активности AST и ALT, чем в группах с применением ларивитола.

Введение крысам четырёххлористого углерода (вторая группа) вызывало резкое снижение глюкозы в сыворотке крови (на 47,8%) по сравнению с интактными животными. Как известно, гипогликемия связана с ингибирова-нием четырёххлористым углеродом гликонеогенеза и усиления гликогено-лиза (Бахадыров Ф.Н., с соавт., 1998). При этом нарушался синтез печенью инсулиназ, гидролизируюших инсулин.

После применения ларивитола в третьей опытной группе уровень глюкозы снизился незначительно (на 6,1%). После выпаивания аминовитала уровень глюкозы также снизился в сыворотке крови животных четвёртой опытной группы (на 22,5%), однако эти изменения не подтверждались статистически в сравнении с интактными животными.

Следовательно, ларивитол более эффективно препятствует развитию гипогликемии.

Гепатозащитное действие ларивитола может быть обусловлено наличием в его составе биофлавоноидного комплекса и витаминов А и Е, которые, как известно, являясь антиоксидантами, обладают гепатотропным действием.

Что касается аминовитала, то его действие было менее эффективным на протяжении всего периода проведения эксперимента.

При сравнении гистоструктуры печени контрольных и интакгных животных установлены значительные различия. После применения четырёххлористого углерода отмечалось нарушение строения печени. Гепатоциты с явлениями зернистости, гидропической, жировой дистрофии (рис.1)

Рис. 1 Гистоструктура печени животных после применения четырёх-хлористого углерода

После применения ларивитола (рис.2) отмечено полное восстановление печени.

Рис. 2. Гистоструктура печени контрольных животных и гистоструктура печень крыс после применения ларивитола

Из рисунка видно, что гистросотруктура органа после лечения лариви-толом мало отличается от печени контрольных крыс. Признаков жировой дистрофии практически не обнаружено. Поражённые клетки с очагами некроза практически отсутствуют. Наблюдаются регенераторные процессы за счет клеток печени и соединительной ткани.

Применив крысам аминовитала на фоне четырёххлористого углерода вызвало незначительный терапевтический эффект рис. (3).

Рис. 3. Гистоструктура печени животных после применения аминовитала

Таким образом, применение ларивитола практически полностью останавливает развитие токсического гепатита, в то время как аминовитал лишь частично снижает токсическое действие четыреххлористого углерода и слабо способствует регенерации гепатоцитов.

На основании проведённых исследований можно ожидать, что лариви-тол окажет такое же действие при гепатозах птицы. Чтобы проверить это, нами проведены исследования на цыплятах-бройлерах, которые в условиях крупных птицеводческих хозяйств наиболее часто подвержены различным поражениям печени.

3.3. Терапевтический эффект ларивитола при гепатозах цыплят-бройлеров При оценке клинического состояния и биохимических показателей крови цыплят-бройлеров установлено поражение их печени в 10- и 25-суточном возрасте. Это подтверждалось значительным повышением в сыворотке крови активности ферментов переаминирования и щелочной фосфата-зы, снижением общего белка, повышением билирубина и глюкозы.

Изучение гепатотропных свойств ларивитола на цыплятах бройлерах начали с определения оптимальных доз препарата. Изучались три дозы - 1,0;

2,0 и 3,0 г/кг массы тела. Параллельно проводилось сравнение эффективности действия ларивитола с аминовиталом.

После скармливания ларивитола в дозах 2,0 и 3,0 г/кг отмечалось увеличение среднесуточных приростов птицы (на 11,9 и 12,4% выше контрольных показателей).

Ларивитол не вызвал каких-либо существенных изменений в популяциях лейкоцитов крови. Незначительные сдвиги в лейкограмме были статистически недостоверными и характеризовались лишь тенденцией к увеличению в ней доли псевдоэозинофилов.

Однако по биохимическому составу крови были отмечены существенные изменения (табл. 3).

Таблица 3 - Биохимические показатели крови цыплят-бройлеров

Показатели Группы

1- контрольная 2-опытная 3-опытная 4-опытная 5-опытная

аминовитал ларивитол 1,0 г/кг ларивитол 2,0 г/кг ларивитол 3,0 г/кг

Исходные данные

Гемоглобин, г/л 95,2±4,33 94,8+4,56 9б,0±3,37 95,8±3,48 94,6±4,44

Общий белок, г/л 27,8±2,33 28,1±1,58 27,7±1,68 26,5±1,32 25,9±3,21

Глюкоза, млюль/л 12,26±0,42 12,54±0,33 11,56±ОД1 11,4б±0,30 12,54±0,47

Кальций, ммоль/л 3,53±0,35 3,46±0,51 3,98±0,36 3,87±0,51 3,42±0,23

Фосфор, ммоль/л 4,92±0,56 5,11±0,31 5,27±0,41 5,13±0,49 4,87±0,33

Холесте-рол. ммоль/л 1,35±ОД1 1,33±0,43 1,38±0,23 1,46±0,21 1,32±0,22

Билирубин, мг/дл 2,4б±0,25 2,33±0,29 2,44±0,17 2,56±0,18 2,01 ±0,27

Щелочная фосфатаза ед/л 647,6±б,21 654,8±7,13 648,1±б,26 689,1±8,32 621,5±7,44

AST. ед/л 233,1±6,11 254,2± 5,22 241,1±3,75 212,1 ±6,20 244,1 ±5,35

ALT. ед/л 52,1±2,56 50,4±3,02 57,4±3,12 56,3 ±2,26 54,0± 3,22

В конце экспериментального периода

Гемоглобин, г/л 97,3±3,12 98,1±3,14 96,5±2,84 95,1±3,12 97,0±2,19

Общий белок, г/л 28,2±2,57 28,3±2,64 27,9±2,33 28,1±2,67 28,6±2,45

Глюкоза, ммоль/л 12,21±0,85 11,54±0,56 10,23±0,62 8,71±0,91* 9,11±0,7б*

Кальций, лшоль/л 3,75±0,61 3,94±0,67 4,56±0,52 4,97±0,68 4,82±0,57

Фосфор, ммоль/л 4,55±0,39 4,92±0,31 4,15±0,47 3,65±0,38 3,77±0,31

Холестерол лаюль/л 1,56±0,39 1,61 ±0,22 1,33±0,54 1,34±0,46 1,30±0,15

Билирубин, мг/дл 2,24±0,33 2,12±0,43 1,47±0,52 1,24±0,40 1,32±0,39

Щелочная фосфатаза ед/л 638,2±12,84 623,1 ±10,28 576,8±13,8 * 522,7± 12,21 ** 531,8±13,10 **

AST, ед/л 247,7±7,89 233,2±8,21 228,б±8,12 * 177,3±7,71 ** 181,2±8,92 **

ALT, ед/л 57,3±3,89 56,1±2,33 54,7±3,88 42,3±3,78* 43,1±3,81*

Примечание: * - р<0,05; **- р<0,01

У подопытных цыплят, получавших ларивитол, заметно снижалась активность AST и ALT, играющих важную роль в процессах переаминирова-ния, деградации аминокислот и биосинтезе белка (Мецлер Д., 1980; Кольман Я., Рём К., 2000).

Следует отметить достоверное снижение активности аспартатами-нотрансферазы от всех изучаемых доз ларивитола: на 7,7% - от минимальной дозы препарата и на 28,4 и 26,8% соответственно - от доз 2,0 и 3,0 г/кг массы тела. Снижение аланинаминотрансферазы отмечалось только после применения максимальных доз препарата (на 26,1% от дозы 2,0 г/кг и на 24,8% от дозы 3,0 г/кг массы тела).

После применения ларивитола произошло снижение глюкозы в сыворотке крови, причём достоверно от доз 2,0 и 3,0 г/кг массы тела (на 28,7 и 25,4% соответственно по сравнению с контролем при р<0,05).

Активность щелочной фосфатазы также снизилась до физиологических значений после скармливания ларивитола: от дозы 1,0 г/кг - на 9,6%, от доз 2,0 и 3,0 г/кг - на 18,1 и 16,7% соответственно по сравнению с контролем (во всех случаях р<0,05-0,01).

Таким образом, проведённые исследования на цыплятах показали, что ларивитол оказывает гепатотропное действие, которое проявлялось снижением до физиологической нормы активности ферментов переаминирования, щелочной фосфатазы и содержания глюкозы в сыворотке крови. Действие аминовитала было менее эффективным. Активность ферментов переаминирования и щелочной фосфатазы в сыворотке крови несколько снижалась, но не достигала уровня, наблюдаемого после применения ларивитола.

Высокая гепатотропная эффективность ларивитола обусловлена наличием в нём анитиоксидантов - биофлавоноидов и витамина Е.

В своих последующих исследованиях мы изучали влияние ларивитола на общую резистентность организма цыплят (табл.4).

Таблица 4 — Показатели естественной резистентности цыплят-бройлеров

Группы

Показатели 1-контроль 2-опытная 3-опытная 4-опытная 5-опьгтная

аминовитал ларивитол 1,0 г/кг ларивитол 2,0 г/кг ларивитол 3,0 г/кг

Исходные данные

Бактерицидная активность, % 44,29±1,54 46,23±1,62 43,57±1,39 45,77±1,54 46,21±1,53

Фагоцитарная активность, % 42,35±1,64 43,51±1,52 44,21 ±1,66 42,79±1,85 41,94±1,32

Лизоцимная активность, % 11,54±0,82 12,21±0,63 11,77±0,53 12,24±0,36 11,88±0,75 1 1

Иммуноглобулины, ед 3,21±0,32 3,51 ±0,27 3,36±0,29 3,24±0,27 3,12±0,52

В конце экспериментального периода

Бактерицидная активность, % 45,70±1,56 46,82±1,38 45,83±1,29 47,12±1,38 48,21 ±1,46

Фагоцитгрная актігоноспь, % 43,12±1,62 44,21±1,63 46,87±1,87 49,21±1,59* 48,75±1,59*

Лизоцимная активность, % 12,22±0,74 12,64±0,97 11,79±0,84 11,85±0,79 12,36±0,82

Иммуноглобулины, ед 3,5б±0,32 3,21 ±0,44 3,71±0,46 3,52±0,77 3,78±0,66

Примечание: * - р<0,05;

В конце экспериментального периода было установлено, что применение различных доз ларивитола вызывало повышение фагоцитарной активности псевдоэозинофилов, причём достоверное только от максимальных доз (на 14Д и 12,8% соответственно при р<0,05).

3.4. Качество и биологическая ценность мяса птицы Качество мяса цыплят-бройлеров после применения ларивитола несколько отличалось от показателей контрольной группы. БПК мышечной ткани оказался достоверно выше, чем у цыплят, не получавших препарат, но только после применения максимальных доз (на 20-25,6%); в мышцах увеличивалось содержание протеина, (статистически достоверно от доз 2,0 и 3,0 г/кг массы тела - на 13,6 и 14,1% соответственно).

При определении аминокислотного состава мяса было установлено увеличение общего количества заменимых и незаменимых аминокислот после применения и ларивитола и аминовитала, но в большей степени от ларивитола по незаменимым аминокислотам.

выводы

1. Разработан гепатотропный препарат ларивитол, содержащий в своём составе биофлавоноидный комплекс лиственницы и витамины А, Дз, Е.

2. Ларивитол является малотоксичным препаратом. Он по ГОСТ 12.1.007-76 относится к веществам 4 класса, не обладает хронической токсичностью, местнораздражающим и аллергенным действием;

3. Острый токсический гепатит на белых крысах, вызываемый четы-рёххлористым углеродом, проявляется повышением в сыворотке крови активности аспартатаминотрансферазы (на 71,9%) и аланинами-нотрансферазы (на 99,6%), содержания билирубина (на 71,9 %), снижением общего белка (на 7,1%) и развитием жировой дистрофии печени.

4. Ларивитол, применяемый белым крысам на фоне токсического гепатита, вызванного четырёххлористым углеродом, обладает гепатотроп-ным действием, которое проявляется восстановлением функции гепа-тоцитов, существенным снижением в сыворотке крови активности ферментов переаминирования и щелочной фосфатазы, содержания билирубина, повышением уровня общего белка.

5. Аминовитал, применяемый белым крысам на том же фоне, что и ларивитол, оказывает слабое гепатотропное действие, не препятствует развитию жировой дистрофии печени; в сыворотке крови активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы на фоне токсического гепатита снижается лишь на 55,1 и 64,5% соответственно.

6. Гепатотропное действие ларивитола было подтверждено на цыплятах-бройлерах. Оптимальной дозой препарата при лечении гепатозов является 2,0 г/кг массы тела.

7. Применение при гепатозе цыплятам-бройлерам ларивитола в дозе 2,0 г/кг массы тела способствует снижению в сыворотке крови содержания глюкозы (на 28,7%), активности щелочной фосфатазы (на 18,1%), аспартатаминотрансферазы (на 28,4%), аланинаминотрансферазы (на 26,1%), повышению фагоцитарной активности псевдоэози-нофилов (на 14,1%).

8. В мышечной ткани цыплят, получавших ларивитол, содержится больше белка (на 13,6 %), повышается БПК (на 20,0%) по сравнению с контрольными показателями.

9. Экономическая эффективность применения цыплятам-бройлерам ларивитола в дозе 1,0 г/кг массы тела составляет 1,7 руб. на 1 руб. затрат, в дозе 2,0 г/кг - 4,3 руб. и в дозе 3,0 г/кг- 2,8 руб. на 1 руб. затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Ларивнтол рекомендуется использовать для лечения цыплят-бройлеров при гепатозах, повышения естественной резистентности организма и продуктивности. Препарат рекомендуется применять с кормом из расчёта 2,0 г/кг массы тела в течение 20-25 сут.

На производство и применение ларивитола разработана нормативная документация (технические условия, инструкция по применению).

Результаты исследований могут быть использованы при создании новых средств, нормализующих функцию печени и повышающих неспецифическую резистентность организма; составлении научной и информационной литературы, а также в учебном процессе при подготовке ветеринарных врачей и зооинженеров.

Публикации в ведущих рецензируемых изданиях, рекомендованных действующим перечнем ВАК

1. Ерёменко C.B. Новые препараты при токсических гепатитах сельскохозяйственных животных/ C.B. Ерёменко //Уч. записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана.-Т. 207. - Казань, 2011. - С. 242-247.

2. Харченко Ю.А., Ерёменко C.B., Авдонина О.О. Гепатопротекторные свойства новых препаратов // Современные проблемы науки и образования. - 2012. - № 1; URL: http://www.science-education.ru/101-5552 (дата обращения: 21.02.2012).

Прочие публикации, содержащие основные научные результаты диссертации

3. Резниченко Л. В. Гепатопротекторные свойства каротинсодержащих комплексов / Л. В. Резниченко, С.Б. Носков, C.B. Ерёменко // Бюллетень научных работ. /Белгородская ГСХА.- Вып. 21- Белгород, 2010. -С. 50-52.

4. Носков С.Б. Изучение гепатопротекторных свойств витаминсодержащих препаратов на модели острого токсического гепатита / С.Б. Носков, Л. В. Резниченко, C.B. Ерёменко // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения: Мат-лы 14-й между народ. науч.-произв. конф. - Белгород, 2010. - С. 86.

5. Ерёменко C.B. Гепатопротекторное действие каротинсодержащих препаратов // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения: Мат-лы XV международ, науч.-произв. конф. -Белгород,2011.-С. 72.

Выпущено в авторской редакции Подписано в печать 11.04.12. Печ.л. 1,0 Тираж 100 экз. Заказ №38 308503, п.Майский Белгородской области Типография БелГСХА им. В.Я.Горина

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Ерёменко, Сергей Васильевич, Белгород

61 12-16/124

ФГБОУ ВПО «БЕЛГОРОДСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ им. В.Я. Горина»

На правах рукописи

Ерёменко Сергей Васильевич

ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ЛАРИВИТОЛА ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ И ГЕПАТОЗАХ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и

морфология животных

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Л. В. Резниченко

Белгород - 2012

СОДЕРЖАНИЕ

Стр

Ведение................................................................................3

1. Обзор литературы................................................................7

1.1. Механизм токсического поражения печени четыреххлористым углеродом...............................................................................7

1.2. Клинико-морфологические виды повреждений печени и их коррек-рек-

ция....................................................................................

1.3. Антиоксиданты и их роль в восстановлении функции печени.. ..18

2. Материал и методы исследования.........................................31

3. Собственные исследования................................................38

3.1 .Определение токсикологических свойств ларивитола................38

3.2. Лечебное действие ларивитола на функциональное состояние печени крыс при поражении четырёххлористым углеродом...............46

3.2.1. Физиологическое состояние и масса тела.............................46

3.2.2. Биохимический показатели крови....................................48

3.2.3. Гистологические изменения печени...................................53

3.3. Оценка клинического состояния и биохимических показателей крови сельскохозяйственной птицы............................................60

3.4. Терапевтический эффект ларивитола при гепатозах цыплят-бройлеров ..........................................................................63

3.4.1. Интенсивность роста и сохранность...................................63

3.4.2.Морфологические и биохимические показатели крови.......... 65

3.4.3. Показатели естественной резистентности.............................70

3.4.4. Ветеринарно-санитарная оценка и физико-химические показатели мяса...................................................................................71

3.5. Производственные испытания.............................................78

4.0бсуждение результатов исследования..................................80

ВЫВОДЫ..........................................................................93

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.....................................95

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ......................96

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Поражения печени различной этиологии занимают значительное место в общей структуре заболеваний и являются достаточно широко распространенной патологией (Подымова С.Д., 1998; Дынжи-нова Е. А, 2007; Привалов И. М., 2009).

В патогенезе поражений печени большое значение отводится окислительному стрессу (Коновалова, Г .Г, 2000; Владимиров Ю.А., 2000; Буеверов А.О., 2002; Оковитый C.B., 2002; Скворцов В.В., 2003; Свиридов М.М., 2006), при котором наблюдается сдвиг про-антиоксидантного равновесия в сторону усиления прооксидантной составляющей, снижения резервов мобилизации антиоксидантной защиты, что сопряжено с нарушением энергообеспечения клетки, детоксикационных механизмов, активацией апоптоза, про-воспалительных цитокинов и др. (Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г., 1985; Сара-тиков A.C. с соавт, 2003; Мойбенко, A.A. с соавт, 2005; Emery M.G.,et. al., 2003).

Окислительный стресс инициирует нарушения, связанные с кровоснабжением печени (повреждение эндотелия сосудов и синусоидов печени с изменением выработки оксида азота, ухудшение свойств крови, состояния микроциркуляторного русла и пр.), что усу1убляет течение патологического процесса (Макаров В. Г., Макарова M. Н., 2004; Saini R., et al, 2010; Aher

V.D., et al., 2010).

При патологии печени, независимо от этиологии, ведущим патоморфо-логическим синдромом является цитолиз, обусловленный повышением проницаемости и (или) разрушением мембран гепатоцитов и их органелл с развитием гиперферментемии митохондриального фермента АсАТ и цитоплаз-матического фермента АлАТ (Подымова Д., 1998, Шерлок Ш., Дули Дж., 1999).

Для коррекции цитолитического синдрома в настоящее время целесообразно включение в современную фармакотерапию хронических поражений

печени препаратов, обладающих гепатопротекторным и мембраностабилизи-рующим действием, что может быть достигнуто активацией антиоксидант-ных систем, в частности при использовании антиоксидантов (Катикова О.Ю., 2002, Доркина Е.Г, 2004), к которым относятся каротин, жирорастворимые витамины, биофлавоноиды и др.

Поэтому проблема изыскания новых эффективных препаратов, сочетающих иммуностимулирующие, антиоксидантные и противовоспалительные свойства остаётся весьма актуальной, несмотря на то, что предлагается достаточно много препаратов для устранения данной патологии. Каждый из этих препаратов, обладая определённым положительным воздействием, базирующимся на механизмах различного типа, проявляет серьёзные побочные эффекты. К тому же большинство применяемых в ветеринарной медицине препаратов дорогостоящие, что побуждает химиков, фармакологов и ветеринарных врачей к поиску высокоактивных отечественных гепатопротекторов.

Исходя из этого, нами, совместно с учёными-химиками ЗАО «Петро-хим» (Белгород), был разработан новый комплексный препарат, в состав которого вошли биофлавоноидный комплекс лиственницы, витамины А, Дз и Е и сорбент аэросил, который получил название ларивитол.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы было изучение ге-патотропных свойств ларивитола на модели острого токсического гепатита на белых крысах и подтверждение его фармакологического действия при ге-патозах цыплят-бройлеров.

Для достижения цели на разрешение были поставлены следующие задачи:

• определить безвредность ларивитола на лабораторных животных;

• вызвать токсический гепатит у белых крыс путём применения четырёх-хлористого углерода;

• на модели острого токсического гепатита установить гепатотропный эффект ларивитола и сравнить его эффективность с аминовиталом;

• сравнить эффективность действия ларивитола и аминовитала при гепато-зах цыплят-бройлеров;

• определить химический состав и биологическую ценность мяса птицы, получавшей ларивитол;

• экономически обосновать использование ларивитола в птицеводстве.

Научная новизна работы. На модели острого токсического гепатита впервые изучены гепатотропные свойства ларивитола. Действие препарата проявлялось уменьшением нарушений функционального состояния печени, вызванного четырёххлористым углеродом, и сопровождалось снижением до физиологической нормы активности ферментов переаминирования, щелочной фосфатазы и содержания билирубина в сыворотке крови, восстановлением гистоструктуры печени.

На цыплятах-бройлерах подтверждены выявленные на лабораторных животных гепатотропные свойства ларивитола. Дано обоснование возможности его использования в качестве лечебно-профилактического средства при гепато-зах цыплят-бройлеров.

Практическая значимость работы. Предложен новый препарат для лечения гепатозов цыплят-бройлеров и дано экономическое обоснование использования его в птицеводстве.

Ларивитол выпускает ЗАО «Петрохим» (г. Белгород). Разработано и утверждено временное наставление по его применению.

Апробация результатов исследования. Результаты исследования были представлены на международных научно-практических конференциях: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (Белгород, 2010, 2011), «Современные подходы к развитию АПК» (Казань, 20011), и расширенном заседании кафедры инфекционной и инвазионной патологии Белгородской государственной сельскохозяйственной академии (2012).

Публикация результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ в сборниках международных конференций,

центральных журналах и отдельных изданиях (из них две - в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ). Основные положения, выносимые на защиту:

• результаты токсикологических свойств ларивитола;

• доказательства гепатотропного действия препарата на модели острого токсического гепатита на белых крысах;

• доказательства терапевтического действия ларивитола при гепатозах цыплят-бройлеров;

• оценка товарного вида и биологической ценности птицеводческой продукции после применения ларивитола;

• практические предложения по применению ларивитола;

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений. Библиографический список включает 166 источника, в том числе - 65 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 21 таблицей и 6 рисунками.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Механизм токсического поражения печени четыреххлористым углеродом

Особое значение в химической патологии в последнее время придаётся роли перекисного окисления липидов. К числу ядов, вызывающих повышенное образование липоперекисей и снижение антиокислительной активности в печени, относят в первую очередь гепатотропные яды (этанол, аллиловый спирт, четырёххлористый углерод). Усиление перекисного окисления липидов является универсальным фактором повышения проницаемости мембран, т.е. может быть непосредственным механизмом цитолиза.

Экспериментальное развитие патологии печени наиболее просто получить введением гепатотропных ядов, таких как четыреххлористый углерод (СС14) или этанол, с развитием гепатита и цирроза печени. Д.С.Саркисов (1981) использовал этот яд для выявления динамики репаративных процессов. При этом было показано, что на каждое очередное введение яда организм отвечает вполне стереотипной реакцией, выражающейся в резком подъёме синтетической активности печёночных клеток. Согласно данным автора, увеличение синтеза ДНК происходит в сохранившихся печёночных клетках и представляет собой их компенсаторную реакцию в ответ на дистрофические и некротические изменения печёночной ткани, возникающие под влиянием четырёххлористого углерода. Описанная динамика синтеза ДНК и РНК в печёночной ткани после одной инъекции четырёххлористого углерода представляет собой то элементарное звено, из чередования которых складывается сложная цепь последовательно возникающих подъёмов синтетической активности гепатоцитов при любых вариантах многократного действия патогенного фактора. В данном случае мы имеем дело с типичным компенсаторным процессом, так как увеличение скорости синтеза РНК является результатом не форсированной работы тех же самых генов, которые транскрибирова-

лись до стимулирующего воздействия, а вовлечения в транскрипцию новых генов.

Другим примером, также связанным с поражением печени, могут служить исследования молекулярных механизмов токсической гибели гепатоци-тов при воздействии самых различных химических веществ. При этом гибель клетки наступает вследствие нарушений кальциевого гомеостаза. На примере интоксикаций четырёххлористым углеродом показано, что повреждение проницаемости клеточных оболочек сопровождается усиленным проникновением кальция в гепетоциты. Ионы кальция биологически очень активны, способны вызывать глубокие изменения внуриклеточного метаболизма и приводить, в конечном итоге, к появлению некротических очагов и гибели клетки (Farber J.,1990).

Данные о нарушениях внутриклеточного кальциевого гомеостаза были получены при интоксикациях четырёххлористым углеродом и бромтрихлор-метаном. Нарушения проницаемости внутриклеточных мембран при этих видах интоксикации приводят к резкому перераспределению кальция в гепато-цитах (Lee, S.E. al., 2002). Эти данные позволили авторам сформулировать концепцию общего конечного пути гибели клеток. Предполагается, что нарушение целостности клеточных мембран может иметь различную природу. В одних случаях - это усиление перекисного окисления липидов, входящих в состав клеточной оболочки, в других - блокада сульфгидрильных групп белковых молекул, составляющих основу биомембран (Антоненков В.Д., с соавт., 1990; Зиямутдинова З.К., с соавт., 1993). Следствием же, приводящим к гибели клетки, является нарушение кальциевого гомеостаза -проникновение в гепатоциты Са2+ через повреждённую мембрану по электрохимическому градиенту (Чеснокова Н.П. с соавт., 2006; Gu YH al., 2006).

Четыреххлористый углерод (СС14) широко используется в экспериментальной токсикологии для изучения таких проявлений гепатотоксичности, как жировая дегенерация, фиброз, апоптоз, канцерогенез. Хроническая интоксикация тетрахлорметаном (CCI 4) широко используется для эксперимен-

тального моделирования хронического гепатита и цирроза печени. Изучение патогенеза интоксикации СС14 в клинике, в опытах на животных и в модельных экспериментах с изолированными клеточными структурами позволило выделить два этапа при действии СС14 на клетки печени.

Первый этап: специфическое действие СС14, который при метаболизме в монооксигеназной системе гладкого эндоплазматического ретикулума преобразуется в свободные радикалы и электрофильные интермедиаты, кова-лентно связывающие биомакромолекулы центролобулярных гепатоцитов. СС14 ЯтвнрсмЕИЗО

Кроме того, свободные радикалы, взаимодействуя с липидами мембран, инициируют перекисное окисление липидов.

Второй этап: неспецифическая реакция клетки, сопровождающаяся нарушением барьерных свойств мембран, ионного баланса, биоэнергетических процессов и как следствие изменением клеточных функций.

У белых беспородных крыс самцов (250-300 г) развитие острого токсического гепатита вызывают однократным введением четырёххлористого углерода на 50% растворе оливкового масла. Ниже представлены возможные пути введения и дозы:

Через 1-3 дня в печени животных обнаруживается центральный лобу-лярный некроз. Исследуемые вещества вводятся внутрижелудочно, ежедневно, по профилактической или лечебной схеме. Животные подвергаются эвтаназии спустя 2 недели после отравления СС14, отбор крови осуществляют из сердца. При некропсии забирают на исследование печень.

Токсическое повреждение печени, вызванное введением СС14, является адекватной моделью цирротического поражения печени у человека (Карта-

Путь введения

¡Внутрижелудочно Внутрибрюшинно

Доза

4-5 мл/кг

2,0-4,0 мл/кг

шова О Я., 1982). Механизм повреждающего действия СС14 реализуется через активацию процессов свободнорадикального окисления (Galisteo М. et al., 2000). Образование свободных радикалов и реактивных метаболитов кислорода является важным механизмом повреждения клеток печени. В частности, чрезмерная продукция активных форм кислорода (АФК), инициирует лавинообразное разветвление процессов свободнорадикального окисления (Зимин Ю.В. с соавт., 2001).

Имеющиеся к настоящему времени данные позволяют считать, что, как в реакциях окислительного стресса, так и в механизмах антиоксидантной защиты принимает участие оксид азота, образование которого доказано для ге-патоцитов, клеток Купфера и эндотелиальных клеток печени.

Введенный в организм СС14 растворяется во всех мембранных элементах печёночной клетки. Наибольшее количество его сосредоточивается в микросомальной фракции. А.И. Арчаков (1975) приводит подробный разбор механизма действия СС14. Решающее значение отводится связыванию тет-рахлорметана с цитохромом Р-450. Быстро протекающая реакция восстановления приводит к образованию радикала СС13, что и является пусковым звеном в механизме повреждающего действия яда. Образовавшиеся радикалы четырёххлористого углерода, с одной стороны, взаимодействуя с липидами, резко стимулируют развитие перекисного окисления и вызывают повреждение биологических мембран. С другой стороны, они оказывают непосредственное действие на цитохром Р-450, вызывая его деструкцию (Gumicio J.J., 1989; Gumerova A. A., et al., 2007). Свободнорадикальные продукты метаболизма четырёххлористого углерода стимулируют перекисное окисление липидов и в первую очередь повреждают мембраны эндоплазматической сети. Возможно, что страдают мембраны и других внутриклеточных структур. В частности, это доказано для лизосом. Следствием стимуляции перекисного окисления липидов является нарушение функционирования важнейших ферментных систем, что и приводит к гибели клетки. В мембранах эндоплазматической сети нарушаются процессы синтеза белка и липопротеидов, инак-

тивируется глюкозо-6-фосфатаза. Решающую роль играет «мембранный эффект», развивающийся вследствие действия свободнорадикальных продуктов превращения четырёххлористого углерода и стимулированного ими пере-кисного окисления липидов (Арчаков А.И., 1975). Взаимодействие образующихся радикалов СС14 с ПНЖК фосфолипидов мембран инициируют пере-кисное окисление липидов (ПОЛ) с последующим развитием цепной реакции свободнорадикального окисления, что приводит к глубоким нарушениям ф