Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11

Фадеев, Федор Алексеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11"

На правах рукописи

ФАДЕЕВ Федор Алексеевич

ИЗМЕНЧИВОСТЬ РЕЦЕПТОРНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ ВИРУСА ECHO 11

03.00.06 - вирусология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 6 ОНТ 2008

Москва-2008

003448940

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Уральская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель

доктор медицинских наук, профессор Сергеев Александр Григорьевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Забережный Алексей Дмитриевич

кандидат биологических наук Еремеева Татьяна Петровна

Ведущее учреждение

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Омская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «27» октября 2008 г. в 12.00 часов на заседании диссертационного совета Д.001.020.01 при Государственном учреждении «Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского» РАМН по адресу: 123098, Москва, ул. Гамалеи, д. 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного учреждения «Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И Ивановского» РАМН по адресу: 123098, Москва, ул. Гамалеи, д. 16.

Автореферат разослан «24» сентября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Исследование особенностей взаимодействия энтеровирусов с клеточными рецепторами имеет фундаментальное значение для понимания молекулярных основ тропизма этих вирусов к определённым видам клеток, а также для объяснения особенностей патогенеза и клинического течения энтеровирусных инфекций.

Многие представители рода Enterovirus (большинство вирусов ECHO и некоторые вирусы Коксаки А) в качестве основного клеточного рецептора используют белок DAF (CD55) [Newcombe N.G. et al., 2004, Powell R.M. et al., 1998, 1999]. Взаимодействие энтеровирусов с эритроцитарным рецептором DAF in vitro вызывает феномен гемагглютинации. В то же время, известно, что некоторые штаммы этих вирусов могут использовать независимый от DAF путь проникновения в клетки с помощью альтернативных рецепторов. [Goodfellow I. et al., 2000; Johnson K.M. et al., 1962; Pasch A. et al., 1999; Seiinka H.-C. et al, 2002; Stuart A.D. et al., 2002].

Ранее было установлено, что в популяциях гемагглютинирующих клонов вируса ECHO 11 (признак daf +), полученных на культуре ФЭЧ, обнаруживаются негемагглютинирующие мутанты, утратившие сродство к рецептору DAF (признак daf"). Средняя частота daf мутантов в составе daf + клона (3x10~5) соответствовала вероятности возникновения нуклеотидной замены в определенной позиции у РНК-геномных вирусов (Ю-4 - 10"5), что позволяло высказать предположение о точковом характере мутации, приводящей к изменению рецепторной специфичности вируса ECHOl 1 [Sergeev A.G. et al., 1994]. Было показано, что на перевиваемой клеточной культуре JI-41 наблюдалось резкое ограничение инфекционной активности daf + клонов вируса ЕСНОП, полученных на культуре ФЭЧ. В пассажах на клетках JI-41 происходило постепенное снижение ГА активности вируса, сопровождавшееся выравниванием его инфекционной активности на обеих клеточных культурах (ФЭЧ и JI-41) [Новоселов A.B., 1994]. В то же время, оставались неизвестными локализация мутации, обусловливающей изменение рецепторной специфичности вирусов ECHO, а также причины утраты вирусом ГА активности при адаптации к клеткам JI-41

Цель исследования

На модели вируса ЕСНОП выяснить механизм селекции энтеровирусов по признаку рецепторной специфичности при

репродукции в' клеточных культурах и установить молекулярно-генетические основы феномена изменчивости данного признака.

Задачи работы:

1. Картировать мутации, обусловливающие утрату вирусом ECHOl 1 аффинности к рецептору DAF.

2. Оценить характер изменения рецепторной специфичности вируса ECHO 11 при адаптации с перевиваемой культуры RD к культурам JI-41 и НЕр-2.

3. Выяснить механизм селекции мутантов с измененной рецепторной специфичностью при репродукции вируса ЕСН011 на клеточных культурах J3-41 и НЕр-2.

4. Сравнить репродуктивную активность daf+ вариантов и daf мутантов в бластных клетках, выделенных из крови больного OMJI.

5. Изучить особенности репродукции вируса ECHO 11 на перевиваемой культуре клеток почки африканской зеленой мартышки BGM.

Научная новизна работы

Обнаружены ранее не описанные мутации, приводящие к утрате аффинности вируса ECHOl 1к рецептору DAF.

Впервые установлено, что позитивная селекция daf~ мутантов при адаптации daf* клонов вируса ECHOl 1 к клеточным культурам J1-41 и НЕр-2 обусловлена низкой скоростью интернализации частиц с daf + фенотипом.

Показано, что рестрикция репродуктивной активности daf + варианта вируса ECHO 11 на клетках обезьяны BGM не связана с этапом адсорбции.

Впервые описаны селективные свойства бластных клеток, выделенных из крови больного ОМЛ, в отношении daf + и daf вариантов вируса ECHOl 1.

Теоретическая и практическая значимость работы

Результаты исследования дополняют современные представления об изменчивости рецепторной специфичности энтеровирусов как адаптационном механизме, расширяющем диапазон чувствительных клеток, а также о возможной роли этого феномена в патогенезе энтеровирусных инфекций Данные о чувствительности клеточных культур к вирусу ECHO 11 могут быть использованы для оптимизации методики выделения аффинных к DAF энтеровирусов из клинического материала

Положения, выносимые на защиту:

1) Рецепторная специфичность вируса ECHO 11 является вариабельным признаком: существуют мутантные неаффинные к DAF

варианты данного вируса, использующие для адсорбции на клеточной мембране альтернативные рецепторы.

2) Утрата вирусом ECHO 11 сродства к рецептору DAF обусловлена единичными аминокислотными заменами в участке белка VP2, образующем антирецептор.

3) Адаптация вируса ECHOl 1 к клеточным культурам JI-41 и НЕр-2 сопровождается селекцией по признаку реценторной специфичности и накоплением в популяции мутантов, не имеющих сродства к DAF.

4) Селекция daf~ мутантов на клетках JI-41 и IIEp-2 обусловлена меньшей продолжительностью периода их интернализации по сравнению с исходным daf4 вирусом.

Внедрение результатов исследования и апробация работы

Материалы исследований внедрены в учебный процесс кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» Росздрава.

Основные результаты работы представлены и обсуждены на I конференции иммунологов Урала (г. Екатеринбург, 2001); 57-й, 58-й, 59-й, 60-й, 61-й, 62-й и 63-й межвузовских научно-практических конференциях молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» (г. Екатеринбург, 2002, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007, 2008 гг.); IV межрегиональной научно-практической конференции с международным участием ОГМА (г. Омск, 2003 г.); Межрегиональной научной конференции (г. Томск, 2003 г.); конференции УрО РАН «Вирусы и иммунитет» (г. Екатеринбург, 2003 г.); III конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (г. Москва, 2004 г.), региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы вирусных инфекций в современный период» (г. Екатеринбург, 2007 г.).

По теме исследования опубликованы 18 научных работ, из них 3 в рецензируемых журналах.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, главы литературного обзора, 3 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 13 отечественных и 154 зарубежных источника, и приложений. Диссертация имеет объем 132 страницы, иллюстрирована 17 таблицами и 14 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы

Вирусы. Вирусные клоны были выделены ранее из исходных штаммов методом бляшек под агаровым покрытием. Гемагглютинирующие (daf*) клоны G3123 (штамм Gregory) и 5.9.11.5 (штамм 7611) получены на первичной клеточной культуре ФЭЧ, daf+ клон 111 (штамм 7611) - на перевиваемой культуре клеток рабдомиосаркомы человека RD. Негемагглютинирующие (daf) клоны выделены на культуре ФЭЧ: G28 и G70 - из G3123; 101 и 103 - из 5.9.11.5 [Новоселов A.B., 1994; SergeevA.G. etal., 1994].

Клеточные культуры. Первичную культуру ФЭЧ получали из абортного материала методом холодной трипсшшзации [Карышева А.Ф., Сюрин В.Н., 1980]. Перевиваемые клеточные культуры RD, JI-41, НЕр-2 и BGM получены из вирусологической лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Свердловской области».

Вирусологические методы исследования. Адаптацию вирусных клонов к новой клеточной культуре осуществляли методом неразведенных пассажей.

Для изучения особенностей репродукции вируса ECHO 11 в бластных клетках, выделенных из крови больного OMJI без созревания (Ml), лейкоконцентрат очищали от примеси эритроцитов, после чего клетки ресуспендировали в смеси сред Игла и RPMI-1640 с добавлением 10% коровьей сыворотки, доводя до концентрации 150 тыс. клеток/мл среды, и заражали полученную взвесь вирусом.

Для проведения реакции бляшкообразования клеточный монослой в культуральном флаконе (Coming-Costar) заражали соответствующим разведением вируссодержащей жидкости в объеме 200 мкл, после чего наносили питательное агаровое покрытие [Dulbecco R., Vogt М., 1954]. После застывания агара культуральные флаконы переворачивали вверх монослоем и инкубировали в темноте при 37°С. Учет сформировавшихся бляшек проводили через 72 часа.

Инфекционную активность вируса оценивали методом конечных разведений, определяя величину ТЦД^/мл по методу Рида-Менча, а также в РБО (в этом случае титр вируса выражали в количестве БОЕ/мл) При подсчете ТЦД50 каждым разведением вируса заражали не менее четырех культуральных флаконов. Для вычисления инфекционной активности вируса РБО проводили минимум в четырех флаконах с клеточным монослоем, при этом общее число подсчитанных бляшек составляло не менее 80.

Гемагглютинирующую активность вируса определяли микрометодом по общепринятой методике.

Скорость интернализации вируса оценивали в модифицированном варианте РБО с использованием фотосенсибилизированного вируса, для получения которого в среду поддержания перед заражением клеток добавляли 0,001% нейтрального красного (ICN Pharmaceuticals, Inc.). Культуральные флаконы с адсорбированным на клеточном монослое ФСВ инкубировали при 37°С в течение различных интервалов времени, после чего засвечивали лампой накаливания и покрывали клетки питательным агаром. Вирусные частицы, не завершившие интернализацию за время инкубации при 37°С, инактивировались светом и в дальнейшем бляшки не образовывали. Флаконы переносили в термостат и выдерживали в течение 72 часов, после чего учитывали результат РБО. Скорость интернализации вируса определяли путем сравнения количества бляшек, образовавшихся на «засвеченном» монослое, с контрольным, не подвергшимся воздействию света.

Для оценки доли вирусных частиц, которые не вступали в стадию депротеинизащш после взаимодействия с клеточным рецептором, флаконы с адсорбировавшимся на клеточном монослое вирусом инкубировали при 37°С в течение 60 мин. (контрольные флаконы оставляли при 20°С), после чего элюировали вирус с клеток 0,025% раствором дезоксихолата натрия в среде Игла. Сравнение инфекционной активности элюата в контроле (20°С) и после инкубации при 37°С позволяло определить долю вирусных частиц, не вступающих в стадию интернализации после адсорбции на мембране клеток.

Молекулярно-генетический анализ. Выделение вирусной РНК для секвенирования осуществляли методом сорбции на силикагеле с помощью комплекта реагентов "РИБО-сорб" (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва). Для проведения обратной транскрипции использовали набор "PEBEPTA-L-100" того же производителя. Структурную часть генома (около 3 тыс. оснований, кодирующих белки вирусного капсида VP1 -VP4) амплифицировали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в виде шести перекрывающихся сегментов с использованием праймеров, представленных в таблице 1.

Анализ продуктов амплификации осуществляли методом электрофореза в 2% агарозном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием (0,5 мг/мл) и детекцией в ультрафиолетовом трансиллюминаторе. Секвенирование ДНК проводили на автоматическом генетическом анализаторе ABI Prism 310 (Applied Biosystems, США) с использованием реакционной смеси ABI Prism BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit v.3.0 (Applied Biosystems,

США) по прямой (праймеры 1S, 2S, 3S, 4S, 5S, 6S) и обратной (праймеры 1А, 2А, ЗА, 4А, 5А, 6А) последовательностям. Для сопоставления сегментов, выравнивания и сравнения последовательностей нуклеотидов и аминокислот использовали компьютерную программу MEGA, версия 3.1.

Таблица 1

Праймеры для амплификации структурной части генома вируса

ECHO 11

Пары Область

прайме- Название Последовательность амплифи-

ров кации *

1 пара 1S AGCTATTGGATTGGCCATCC 603-

1А GCATCAGGAAATTTCCACCA 1185

2 пара 2S AAAGACTCTCCGGGTTGGTG 1148-

2А GCCATTGTACTCTGCACACA 1693

3 пара 3S CGTCACGGTCGCGCCAATGT 1657-

ЗА GACTGCAGACCCACGTCCCA 2202

4 пара 4S GGTACGCATGTCGTATGGGA 2168-

4А GGACTCTGACCTCGAGTGGT 2617

5 пара 5S GGACAATTAACGCAAGACGTATGGT 2582-

5А GGGTTGGTTGATGTTTGCCAT 3166

6 пара 6S AGCACAGTGAGAGTGTACTT 3131 —

6А CCCTGTTATAATCTTCCCACA 3422

* - область амплификации указана по позициям нуклеотидов в геноме вируса ЕСН011 (№AY167103 в GenBank)

Статистическая обработка результатов исследования. Для

обработки результатов РБО, применяли стандартные методы математической статистики [Ашмарин И.П., Воробьев А.А, 1962]. Достоверность различий устанавливали по F-критерию. Для сравнения показателей гемагглютинирующей активности использовали непараметрический критерий Манна-Уитни [Гланц С.А, 1999]. Различия считали достоверными при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Картирование мутаций, приводящих к изменению рецепторной специфичности вируса ЕСНОИ

Для картирования мутации, приводящей к утрате вирусом сродства к DAF, было проведено секвенирование daf + вирусных клонов G3123 (штамм Gregory), 5.9.11.5 и 111 (штамм 7611), а также

мутантных с1а/~ клонов 028, С70 (выделены из клона 03123), 101 и 103 (выделены клона 5.9.11.5).

В структурной части генома с!а/~ клона 028 была выявлена одна транзиция (С—>Т в 750 позиции), которая привела к замене треонина (Т) на метионин (М) в белке УР2 (165 аминокислотный остаток). Единственная значимая точковая мутация в 663 позиции),

обнаруженная у ¿а/~ клона 070, обусловила замену 135 аминокислоты (серина) белка УР2 на глицин (табл. 2).

Таблица 2

Аминокислотные замены в структурных белках, обнаруженные у

вирусных клонов, полученных из прототипного штамма Gregory

Белок /номер аминокислоты в белке Наименование клона*

G3123 в28 G70

УР2 /135 S (age) Б (аёс) G(ggc)

УР2/165 Т(aeg) М(а1ё) T(acg)

* - в скобках указан нуклеотидный триплет, кодирующий соответствующую аминокислоту

В структурной части генома с1а/~ клона 101 была обнаружена единственная транзиция й —► А в позиции 695, которая привела к замене серина (Б) на аспарагин (И) в 145 аминокислотном остатке белка УР2. В структурной части генома с1с$ ~ клона 103 также была обнаружена одна точковая мутация в —»• А в позиции 746, обусловившая замену глицина (в) на глутаминовую кислоту (Е) в 162 аминокислотном остатке белка УР2 (табл. 3).

Таблица 3

Аминокислотные замены в структурных белках, обнаруженные у

вирусных клонов, полученных из штамма 7611

Белок / номер аминокислоты в белке Наименование клона*

5.9.11.5 111 101 103

УР2/145 S (agt) S (agt) N (aat) s (agt)

УР2/162 G (gga) G (gga) G (gga) E (gaa)

УРЗ / 23 S (tea) T (аса) S (tea) S (tea)

УРЗ/86 Q (cag) R (egg) Q(cag) Q (cag)

* - в скобках указан нуклеотидный триплет, кодирующий соответствующую аминокислоту

Таким образом, у каждого из четырех исследованных с1а/ ~ клонов в структурной части генома было обнаружено по одной значимой точковой мутации (транзиции), обусловливающей замену

аминокислоты. Расположение выявленных у клонов 101 и 103 аминокислотных замен на поверхности капсида представлено на рис. 1.

По данным рентгеноструктурного анализа и трёхмерной реконструкции изображений, полученных методом криоэлектронной микроскопии, вирус ECHO 11 образует комплекс с DAF в результате взаимодействия доменов SCR3 и SCR4 рецептора с поверхностью вириона вблизи осей симметрии 2-го порядка [Bhella D., 2004]. Вирусный антирецептор находится ниже южного края каньона, расположенного вокруг осей симметрии 5-го порядка, и представлен аминокислотными остатками капсидного белка VP2 (с 142 по 164), которые взаимодействуют преимущественно с доменом SCR3 [Pettigrew D.M. et al., 2006].

Аминокислотные замены, выявленные у daf~ клонов G28, 101 и 103, находились в пределах фрагмента белка VP2, образующего антирецептор, и пространственно располагались вблизи высококонсервативной аминокислоты VP2 N161, которая имеет критическое значение для связывания с DAF [Bhella D., 2004]. Мутация, обнаруженная у клона G70 (VP2 S135—>G), затрагивала аминокислотный остаток за пределами фрагмента VP2, входящего в состав антирецептора, однако пространственно расположенный в непосредственной близости от аминокислоты VP2 N161. Связь выявленных мутаций с утратой вирусом сродства к DAF подтверждается тем, что у каждого исследованного клона аминокислотная замена в структурных белках была единственной. Сравнение аминокислотной последовательности участка белка VP2, образующего антирецептор для DAF, у исследованных daf клонов и 16 представленных в GenBank штаммов и клонов вируса ECHO 11 показало, что выявленные аминокислотные замены не были описаны ранее.

Результаты проведённого секвенирования позволяют сделать вывод о том, что утрата вирусом ECHOl 1 сродства к DAF обусловлена единственной точковой мутацией по ограниченному числу её потенциальных сайтов, влияющей на структуру контактирующего с DAF вирусного антирецептора. В работе Powell R.M. et al. (1998) было показано, что блокирование антирецептора растворимым DAF подавляло репродукцию гемагглютинирующих вирусов ECHO в клетках RD. Следовательно, сохранение вирусом способности к инфицированию ФЭЧ после утраты аффинности к рецептору DAF предполагает взаимодействие daf ' мутантов с альтернативным клеточным рецептором.

в г

Рис. 1. Локализация аминокислотных замен у daf клонов 101 и 103 (штамм 7611) вируса ECHOl 1. Для создания рисунка использована программа NCBI Cn3D v.4.1 3D-structure viewer и кристаллографические координаты моделей PDB, код 1UPN, и PDB, код 1Н8Т.А. Расположение протомера на схеме строения вириона. Оси симметрии 2-го 3-го (J^) и 5-го fф) порядков. Проекция

протомера выделена жирными линиями. Б. Проекция SCR3 и SCR4 доменов DAF на поверхности вириона. Символы мишени соответствуют локализации аминокислотных замен у мутантных клонов. Штриховой линией обозначена область каньона. В. Область антирецептора к DAF. Белым цветом обозначены аминокислоты, контактирующие с DAF: 1 - аминокислотная замена S145—в белке VP2 клона 101; 2 - аминокислотная замена G162—>Е в белке VP2 клона 103. Г. Расположение аминокислотных замен на сагиттальном разрезе, проходящем через ребро икосаэдра.

При сравнении аминокислотной последовательности структурных белков daf* клонов 5.9.11.5 (выделен на культуре ФЭЧ) и 111 (выделен на клетках RD) были обнаружены различия в позициях VP3 23 и VP3 86 (табл. 3). Соответствующие аминокислотные остатки расположены во внутренней части капсида на значительном удалении как от антирецептора для DAF, так и от каньона, что позволяет предполагать случайный характер этих различий.

Изменение рецепторной специфичности вируса ЕСНОИ при репродукции в культуре клеток JI-41

Для изучения механизма селекции вируса ECHO 11 по признаку рецепторной специфичности был использован daf + клон 111, выделенный на культуре RD. В предварительном эксперименте было выявлено ограничение инфекционной активности клона в клетках JI-41, однако его адаптация к данной культуре приводила к селекции daf~ мутантов с высокой инфекционной активностью как на клетках RD, так и на JI-41, то есть, обладавших, в отличие от исходного вируса, признаком расширенного диапазона клеток-хозяев (hr +).

Исходный клон 111 образовывал на клетках RD только крупные бляшки, в то время как на культуре Л-41 формировались бляшки двух типов: мелкие (диаметром около 0,5 мм) и крайне малочисленные крупные (3,5-6,5 мм). Адаптация клона 111 к клеткам Л-41 сопровождалась увеличением доли вирусных частиц, образующих крупные бляшки на данной культуре (S + фенотип); к 12-му пассажу мелкобляшечные варианты (S ~ фенотип) в вирусной популяции не обнаруживались.

Для выяснения рецепторной специфичности S + и S " вариантов вируса ECHO 11 была проведена РБО с клоном 111 после удаления из него аффинных к DAF частиц путем двукратной обработки эритроцитами человека. Оставшиеся в надосадочной жидкости вирусные частицы с daf" фенотипом образовывали на данной культуре преимущественно крупные бляшки (около 80%) и лишь незначительное количество мелких. Доля daf S + вариантов в исходной вирусной популяции составила (1,1 ±0,2) 10°. Выделенные из крупных бляшек изоляты на первом пассаже в культуре клеток Л-41 и RD дали daf" потомство. Таким образом, мелкие бляшки являлись производными daf * вариантов, имевшихся в составе исходного клона 111, тогда как крупные бляшки были образованы потомством вирусов, содержавшихся в пуле мутантов с daf" фенотипом.

Анализ механизма селекции daf'hr + мутантов на клетках Л-41

Размер бляшек, образуемых адаптированными к клеткам Л-41 daf ~ hr Y мутантами, свидетельствовал об их более высокой репродуктивной активности на данной культуре по сравнению с daf^ вариантами, что могло быть связано с теми этапами цикла репродукции вируса, в которых непосредственно участвует рецептор, то есть, с адсорбцией и интернализацией. Экспериментально было показано, что уровень адсорбции ГА клона 111 на клетках Л-41 выше, чем на RD. Таким образом, ограничение репродуктивной активности daf 4 варианта на культуре Л-41 не было связано с отсутствием на поверхности клеток соответствующих рецепторов.

Для сравнения скорости интернализации daf+ вируса и daf~ hr + мутанта были использованы фотосенсибилизированные пулы исходного клона 111 и адаптированного к клеткам Л-41 субварианта 111Л41. Для daf hr + мутанта промежуток времени, необходимый для интернализации 50% адсорбированных на клетках Л-41 вирионов, составил менее 20 мин., через 45 мин. проникновение в клетки завершили почти все вирусные частицы. В аналогичном эксперименте с клоном 111 на клетках Л-41 через 20 мин. доля проникших в клетки вирионов составила 3%, через 90 мин. этот показатель достиг 44% (рис. 2)

Таким образом, селекция daf hr ' мутантов на клетках Л-41 была обусловлена меньшей продолжительностью периода интернализации на данной культуре по сравнению с исходным daf т вирусом.

В отдельном эксперименте была определена скорость интернализации вирусных частиц, присутствовавших в составе исходного ГА клона 111, которые образовывали крупные бляшки на Л-41. Поскольку эти частицы имели daf ~ фенотип, было высказано предположение о том, что они являются daf hr 4 мутантами, которые накапливаются в вирусной популяции при адаптации к культуре Л-41. Однако данная гипотеза не получила экспериментального подтверждения: вирусные частицы с daf " S + фенотипом имели такую же скорость интернализации на клетках Л-41, как исходный daf + вариант и, следовательно, они не обладали признаком расширенного диапазона клеток-хозяев.

О мин. 20 мин. 45 мин. 60 мин. 90 мин. время инкубации при 37 С до "засветки"

Ш субвариант 111Л41 23 клен 111

Рис. 2. Динамика интернализации daf' клона 111 и его daf hr + субварианта 111JI41 вируса ECHOl 1 на клетках JI-41.

Результаты описанных в данном разделе экспериментов свидетельствовали о том, что daf мутанты с расширенным диапазоном клеток-хозяев являются производными частиц с daf ~ фенотипом в составе клона 111, и одновременно доказывали, что утрата вирусом сродства к DAF не приводит к расширению диапазона его клеток-хозяев. Полученный результат позволил предположить, что трансформация исходной daf т частицы в daf ~ hr + вариант обеспечивается двумя мутациями:

исходный daf+ вирус

J, мутация daf4 —> daf daf мутант

J, мутация hr~ —> hr 1 daf hr + мутант

Первая мутация (daf * —» daf ") приводит к утрате вирусом способности взаимодействовать с рецептором DAF, однако не влияет на признак диапазона клеток-хозяев. Трансформация неаффинного к DAF мутанта в daf hr + вариант с высокой репродуктивной активностью на клетках JI-41 обусловлена дополнительной мутацией hr~—+hr +, повышающей скорость интернализации вируса на данной культуре, что обеспечивает более эффективный механизм проникновения вируса в клетки Л-41.

Репродукция вируса ECHOll в бластных клетках, выделенных от больного ОМЛ

Принимая во внимание, что культура JI-41 является производной от клеток моноцитарного ростка, представляло интерес оценить чувствительность к вирусу ECHOl 1 бластных клеток, выделенных из крови больного OMJ1. Инкубация клона 111 с бластными клетками сопровождалось статистически достоверным уменьшением его титра, что свидетельствовало о высоком уровне адсорбции daf + вируса и, соответственно, подтверждало экспрессию этими клетками рецептора DAF.

Для определения репродуктивной активности вируса ECHOll суспензию бластных клеток заражали фотосенсибилизированными клоном 111 и адаптированным к перевиваемой культуре JI-4I субвариантом 111JI41 (множественность заражения около 100 БОЕ/клетку). После инкубации при 37°С в течение 120 часов (времени, в течение которого клетки сохраняли жизнеспособность) клеточную суспензию подвергали воздействию света для инактивации ФСБ из исходного инокулята. Инфекционную активность вирусного урожая, оценивали на клетках RD (клон 111) и на JI-41 (субвариант 111Л41).

Титр вируса, полученного после заражения бластных клеток клоном 111, составил (1,8±0,2)-107 БОЕ/мл. Было показано, что подавляющее большинство вирусных частиц в потомстве клона 111 имели daf + фенотип. Таким образом, бластные клетки поддерживают репродукцию daf + варианта ECHOll, не имея выраженной способности к селекции неаффинного к DAF вируса.

В аналогичном эксперименте с субвариантом 111JI41 титр вирусного урожая составил менее 102 БОЕ/мл, следовательно, daf hr + мутант не проявил репродуктивную активность в бластных клетках.

Сравнение особенностей репродукции вируса ECHOll в клетках Л-41 и НЕр-2

Для оценки диапазона изменчивости рецепторной специфичности вируса ECHOll была изучена возможность его адаптации к культуре опухолевых эпителиальных клеток НЕр-2. В доступной литературе отсутствовали сведения о чувствительности этих клеток к вирусу ECHOll, однако было известно, что они экспрессируют рецептор DAF [Shafren et al.,1997].

Адаптация клона 111 к клеткам НЕр-2 сопровождалась накоплением в вирусной популяции неаффинных к DAF мутантов. Характер изменения ГА активности клона в пассажах свидетельствовал о том, что данная культура, в отличие от Л-41, практически не поддерживает репродукцию daf + варианта ECHOll, несмотря на

высокий уровень адсорбции вируса. Экспериментально было показано, что около 80% вирусных частиц, адсорбированных на мембране клеток RD, после инкубации при 37°С в течение 60 мин. утрачивали инфекционность, тогда как для клеток НЕр-2 аналогичный показатель составил лишь около 30%. Таким образом, низкая репродуктивная активность daf ' вируса на клетках карциномы была обусловлена рестрикцией на этапе интернализации.

Адаптированный после 12 последовательных пассажей к культуре НЕр-2 субвариант клона 111 (lllHEp) проявил наиболее высокий уровень инфекционной активности на клетках RD (как и субвариант 111JI41). В то же время, вирус lllHEp имел такой же уровень рестрикции инфекционной активности на клетках JI-41, как исходный клон 111. Титр lllHEp на клетках карциномы был невысоким, однако субвариант 111Л41 вообще не проявил репродуктивную активность на клетках НЕр-2. Титр субварианта 111Л41 после адаптации к НЕр-2 (субвариант 111Л41-НЕр) на всех трех клеточных культурах стал приблизительно таким же, как и у субварианта 111НЕр (рис. 3).

11 х ! s 0 i

1HI

у, <«,>•♦* 111

!Т:1

***

111П41 111 НЕр 111Л41-НЕр

Я RD в Л-41 □ НЕр-2

Рис. 3. Инфекционная активность клона 111 и его субвариантов 111Л41, ШНЕр и 111Л41 -НЕр на клеточных культурах RD, Л-41 и НЕр-2.

Выявленные различия инфекционной активности обоих ¿а[ субвариантов клона 111 могли быть обусловлены их неодинаковой рецепторной специфичностью. Для проверки данного предположения было проведено сравнение уровня адсорбции субвариантов 111Л41 и

111НЕр путем их инкубации с взвесью клеток ГШ, Л-41 и НЕр-2. Корректность подобного сравнения обеспечивалась равенством исходной инфекционной активности обоих вирусных субвариантов (определенной на культуре 1Ш), концентрации клеток во взвеси, а также одинаковой продолжительностью инкубации. Обнаружены достоверные различия в уровне адсорбции 111Л41 и 111НЕр, которые свидетельствовали в пользу гипотезы о том, что для адсорбции на клеточной мембране эти субварианты используют разные клеточные рецепторы (рис. 4).

aS ЮО ■

Рис. 4. Доля вирусных частиц, оставшихся в надосадочной жидкости после инкубации субвариантов 111Л41 и lllHEp с клетками RD, Л-41 и НЕр-2

Особенности селекции вируса ЕСНОИ на клетках BGM

Известно, что человек является единственным видом, обладающим высокой чувствительностью к инфицированию вирусами ECHO. Для выяснения роли рецепторной специфичности как фактора, ограничивающего видовой диапазон возможных хозяев, были изучены особенности репродукции этих вирусов в клетках почки африканской зеленой мартышки BGM.

Инкубация клона 111 с клетками BGM сопровождалась уменьшением ГА активности вируса, что позволяет предполагать экспрессию ими рецептора-аналога человеческого DAF. При первом заражении этих клеток клоном 111 наблюдалась рестрикция его инфекционной активности, однако после адаптации

(10 последовательных пассажей) титр вируса на культуре RD остался по-прежнему высоким, тогда как на BGM этот показатель увеличился на 4 порядка Полученный субвариант 111BGM сохранил способность агглютинировать эритроциты человека и адсорбироваться на клетках RD и НЕр-2, экспрессирующих DAF. Сравнение уровня адсорбции клона 111 и субварианта 111BGM на культурах RD, НЕр-2 и BGM, показало, что после адаптации к клеткам обезьяны аффинность вируса к человеческому рецептору DAF не изменилась. Это позволяет высказать предположение, что ограничение репродукции клона 111 в первых пассажах на клетках BGM не было связано с этапом специфического связывания вируса с клеточным рецептором DAF. Принимая во внимание, что культура BGM является производной от клеток мартышки, можно предположить, что рестрикция репродуктивной активности вируса на данной культуре связана с различиями в строении корецепторов на клетках человека и обезьяны.

ВЫВОДЫ

1) Рецепторная специфичность вируса ЕСН011 является вариабельным признаком: помимо основного рецептора DAF для адсорбции на клеточной мембране вирус может использовать альтернативные рецепторы. Утрата вирусом ECHO 11 сродства к DAF обусловлена точковой мутацией по ограниченному числу сайтов в участке белка VP2, образующем антирецептор.

2) Адаптация daf вируса ECHOl 1, выделенного на клетках RD, к культурам J1-41 и НЕр-2 сопровождается изменением рецепторной специфичности вирусной популяции. Происходит позитивная селекция daf мутантов с расширенным диапазоном клеток-хозяев.

3) Ограничение репродуктивной активности исходного daf + вируса по сравнению с daf hr + мутантами на клетках Л-41 и НЕр-2 не связано с уровнем его адсорбции на клеточной мембране, а обусловлено большей продолжительностью периода интернализации на этих культурах.

4) Рестрикция инфекционной активности daf4 варианта вируса ЕСН011, наблюдаемая на клеточной культуре BGM, не связана с этапом адсорбции. Адаптированный к клеткам BGM вирус сохраняет аффинность к человеческому рецептору DAF.

5) Властные клетки, выделенные из крови больного ОМЛ, поддерживают репродукцию daf+ варианта вируса ECHOl 1, в то времр как daf ~ hr + мутант не проявляет репродуктивную активность на данной культуре.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1) Новоселов А.В Мутантный вирус ECHO 11 не использует клеточный рецептор DAF / A.B. Новоселов, А.Г. Сергеев, Ф.А. Фадеев // Мат. 1-й конференции иммунологов Урала,- Екатеринбург, 2001 -С. 12-13.

2) Фадеев Ф.А. Внутрипопуляционная изменчивость гемагглютинирующих вариантов вируса ЕСН011 на культурах клеток RD и Л-41 / Ф.А. Фадеев, A.B. Виноградов // Сб. 57 научно-практической конференции молодых ученых и студентов УГМА-Екатеринбург, 2002 - С. 112-114.

3) Сергеев А.Г. Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHOl 1 / А.Г. Сергеев, A.B. Новоселов, Ф.А Фадеев // Мат. IV конференции ОГМА «Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемического благополучия населения»,- Омск, 2003.- Т. 1.- С. 229232.

4) Фадеев Ф.А. Селекция вариантов вируса ЕСН011 по признаку рецепторной специфичности / Ф.А. Фадеев, A.M. Попов // Материалы IV конференции молодых ученых «Санкт-Петербургский научный форум - 2004»,- СПб., 2004. - С.66.

5) Фадеев Ф.А. Изменение рецепторной специфичности вируса ECHO 11 при адаптации к клеточной культуре BGM / Ф.А. Фадеев, A.M. Попов // Сб. 59 научно-практической конференции молодых ученых и студентов УГМА,- Екатеринбург, 2004 - С 166-168.

6) Фадеев Ф.А. Селекция вируса ЕСН011, обладающего признаком расширенного диапазона клеток-хозяев / Ф.А. Фадеев, A.B. Резайкин, A.M. Попов // Мат. 60 научно-практической конференции молодых ученых и студентов УГМА - Екатеринбург, 2005 - С. 202204.

7) Фадеев Ф.А. Селекция вируса ЕСН011 по признаку рецепторной специфичности при адаптации к новому типу клеток / Ф.А. Фадеев, A.B. Новоселов // Тезисы докладов научной конференции «Демидовские чтения на Урале»,- Екатеринбург, 2006 - С.291-292.

8) Фадеев Ф.А. Роль рецептора DAF в репродукции энтеровирусов / Ф.А. Фадеев, А.Г. Сергеев, A.B. Новоселов // Уральский медицинский журнал.- 2006,- Спец. вып. №2 - С.26-28.

9) Фадеев Ф.А. Селекция вируса ECHO 11 по признаку рецепторной специфичности в трансформированных моноцитах человека / Ф.А. Фадеев, А.Г. Сергеев, A.B. Устюжанин // Там же — С.33-35

10) Резайкин A.B. Изменение рецепторной специфичности вируса ECHO 11 определяет аминокислотная замена в белке VP2 / A.B.

Резайкин, А.Г. Сергеев, Ф А. Фадеев, A.B. Новоселов, С В. Лебедев // Там же.- С.23-25.

11) Фадеев Ф.А. Разная рецепторная специфичность вируса ЕСНОП, адаптированного к клеткам Л-41 и НЕр-2 / Ф.А. Фадеев, A.B. Устюжанин // Мат. 61 межвузовской научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием - Екатеринбург, 2006 - С. 146-148.

12) Резайкин A.B. Молекулярно-генетический анализ энтеровирусов, выделенных от больных серозным менингитом / A.B. Резайкин, А Т. Подколзин, НЛО. Абрамычева, Т.Э. Снитковская, A.B. Устюжанин, Ф.А. Фадеев // Там же,- С. 143-144.

13) Фадеев Ф.А. Влияние скорости интернализации вируса на его репродуктивную активность / Ф.А. Фадеев, A.B. Резайкин // Мат. 62 научно-практической конференции молодых ученых и студентов УГМА- Екатеринбург, 2007,- С. 109-110.

14) Резайкин A.B. Картирование мутации, определяющей рецепторную специфичность вируса ЕСНОП / A.B. Резайкин, Ф.А. Фадеев, A.B. Устюжанин // Там же - С. 107-109.

15) Фадеев Ф.А. Диапазон изменчивости рецепторяой специфичности вируса ЕСН011 / Ф.А. Фадеев, А.Г. Сергеев, A.B. Новоселов // Уральский медицинский журнал,- 2007,- №11.— С. 65-68.

16) Фадеев Ф.А. Утрата вирусом ECHOl 1 аффинности к рецептору DAF обусловлена аминокислотной заменой в области антирецептора / Ф.А Фадеев, A.B. Резайкин, A.B. Устюжанин П Мат. 62 научно-практической конференции молодых ученых и студентов УГМА,- Екатеринбург, 2007,- С. 109-110.

17) Фадеев Ф.А. Рецепторная специфичность энтеровирусов человека / Ф.А. Фадеев, А.Г. Сергеев, A.B. Новоселов // Вопросы Вирусологии,- 2008.- №1- С. 4-9.

18) Новоселов A.B. Изменение рецепторной специфичности вируса ЕСНОП при адаптации к культуре клеток BGM не связано с межвидовыми различиями рецептора DAF у человека и африканской зеленой мартышки / A.B. Новоселов, A.B. Резайкин, Ф.А. Фадеев, А.Г. Сергеев // Уральский медицинский журнал - 2008 - №8. - С. 168-172.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БОЕ - бляшкообразующая единица ГА активность - гемагглютинирующая активность ГАЕ - гемагглютинирующая единица ГА клон - гемагглютинирующий клон

Л-41 - перевиваемая культура клеток крови больного острым

моноцитарным лейкозом

ОМЛ - острый миелоидный лейкоз

РБО - реакция бляшкообразования

РНК - рибонуклеиновая кислота

ТЦД50 - 50% тканевая цитопатогенная доза

ФЭЧ - первичная культура фибробластов эмбриона человека

ФСБ - фотосенсибилизированный вирус

1ЮМ - перевиваемая культура клеток ночки африканской зеленой мартышки

БАР (С055) - клеточный рецептор

НЕр-2 - перевиваемая культура клеток карциномы гортани человека Ш) - перевиваемая культура клеток рабдомиосаркомы человека

Автореферат напечатан по решению профильной комиссии ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН от 11.09 2008 г.

Подписано в печать 11 09.2008 г. Формат 60x84 1/16 Усл. печ л. 1,6. Тираж 100 экз. Заказ № 145. Отпечатано в типографии ГОУ ВПО УГМА Росздрава, г. Екатеринбург, ул Репина, д 3.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Фадеев, Федор Алексеевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Клеточные'рецепторы энтеровирусов человека.

1.1.1. Рецепторная специфичность полиовирусов.

1.1.2. Рецепторная специфичность вирусов Коксаки А.

1.1.3. Рецепторная специфичность вирусов Коксаки В.

1.1.4. Рецепторная специфичность вирусов ECHO.

1.1.5. Рецепторная специфичность энтеровируса 70.

1.2. Роль клеточных рецепторов в проникновении энтеровирусов в клетку.

1.2.1. Механизм интернетизации энтеровирусов.

1.2.2. Особенности прохоэ/сдения стадии интернетизации аффинными к DAF энтер о вирусами.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11"

Актуальность проблемы. Энтеровирусы являются возбудителями широкого спектра инфекционных заболеваний от ОРЗ до полиомиелита и энцефалита [1, 3]. Одним из ключевых параметров, ограничивающих круг хозяев вируса и определяющих его тканевой и органный тропизм, является рецепторная специфичность [19, 63, 96, 127]. Исследование особенностей взаимодействия с клеточными рецепторами имеет фундаментальное значение для понимания молекулярных основ тропизма этих вирусов к определённым видам клеток, а также для объяснения особенностей патогенеза и клинического течения энтеровирусных инфекций.

Консерватизм структуры клеточных рецепторов, выполняющих определенные физиологические функции, обусловливает стабильность формы вирусного антирецептора, поэтому этап специфической адсорбции энтеровирусов может рассматриваться как одна из наиболее эффективных точек приложения для разработки противовирусных препаратов. Блокирование репродукции энтеровирусов до проникновения в клетку позволило бы получить менее токсичные противовирусные препараты по сравнению с препаратами, действующими внутриклеточно [78, 79, 131]. Кроме того, формирование лекарственной устойчивости вирусов к таким препаратам должно быть затруднено по причине нежизнеспособности мутантов. Таким образом, проблема специфичности рецепторного взаимодействия энтеровирусов может быть рассмотрена в двух аспектах: в аспекте разнообразия используемых энтеровирусами клеточных рецепторов и в аспекте внутритиповой изменчивости энтеровирусов, позволяющей им использовать альтернативные клеточные рецепторы.

Многие представители рода Enterovirus (большинство вирусов ECHO и некоторые вирусы Коксаки А) в качестве основного клеточного рецептора используют белок DAF (фактор ускорения диссоциации, CD55), присутствующий на мембране ядросодержащих клеток, а также на эритроцитах и тромбоцитах. Взаимодействие энтеровирусов с эритроцитарным рецептором DAF in vitro вызывает феномен гемагглютинации [29, 71, 102, 112]. В то же время, известно, что некоторые штаммы этих вирусов могут использовать независимый от DAF путь проникновения в клетки с помощью альтернативных рецепторов [36, 37, 49, 58, 92].

Ранее было установлено, что в популяциях гемагглютинирующих (ГА) клонов вируса ECHO 11 (признак daf +) обнаруживаются негемагглютинирующие мутанты, утратившие сродство к рецептору DAF (признак daf~). Доля daf мутантов в вирусной популяции имела близкие величины в двух последовательных пассажах daf + клонов, что свидетельствовало о равновесной структуре популяции в отношении данного признака. На культуре фибробластов эмбриона человека (ФЭЧ) была экспериментально доказана нейтральность мутации, приводящей к утрате сродства к DAF. Средняя частота daf~ мутантов в составе daf+ клона (3-10-5) соответствовала вероятности возникновения нуклеотидной замены в определенной позиции у РНК-геномных вирусов (10"4 - 10"5), что позволяло высказать предположение о точковом характере мутации, приводящей к изменению рецепторной специфичности вируса ECHO 11 [70]. Было показано, что на перевиваемой культуре клеток JI-41 наблюдалось резкое ограничение инфекционной активности daf + клонов вируса ЕСН011, полученных на культуре ФЭЧ. В пассажах на клетках JI-41 было выявлено постепенное снижение ГА активности вируса, сопровождавшееся выравниванием его инфекционной активности на обеих клеточных культурах (ФЭЧ и JI-41) [12]. В то же время, оставались неизвестными локализация мутации, обусловливающей изменение рецепторной специфичности вирусов ECHO, а также причины утраты вирусом ГА активности при адаптации к клеткам JI-41.

Цель исследования. На модели вируса ECHO 11 выяснить механизм селекции энтеровирусов по признаку рецепторной специфичности при репродукции в клеточных культурах и установить молекулярно-генетические основы феномена изменчивости данного признака.

Задачи работы:

1. Картировать мутации, обусловливающие утрату вирусом ECHO 11 аффинности к рецептору DAF.

2. Оценить характер изменения рецепторной специфичности вируса ECHO 11 при адаптации с перевиваемой культуры RD (клетки рабдомиосаркомы человека) к культурам JT-41 (клетки крови больного острым моноцитарным лейкозом) и НЕр-2 (клетки карциномы гортани человека).

3. Выяснить механизм селекции мутантов с измененной рецепторной специфичностью при репродукции вируса ECHO 11 на клеточных культурах JI-41 и НЕр-2.

4. Сравнить репродуктивную активность daf+ вариантов и daf~ мутантов в бластных клетках, выделенных из крови больного острым миелоидным лейкозом (OMJI).

Положения, выносимые на защиту:

1) Рецепторная специфичность вируса ECHOl 1 является вариабельным признаком: существуют мутантные неаффинные к DAF формы данного вируса, использующие для адсорбции на клеточной мембране альтернативные рецепторы.

3) Адаптация вируса ECHO 11 к клеточным культурам JI-41 и НЕр-2 сопровождается селекцией по признаку рецепторной специфичности и накоплением в популяции мутантов, не имеющих сродства к DAF.

4) Селекция daf ~ мутантов на клетках JI-41 и НЕр-2 обусловлена меньшей продолжительностью периода их интернализации по сравнению с исходным daf+ вирусом.

Научная новизна работы. Обнаружены ранее не описанные мутации, приводящие к утрате вирусом ECHO 11 способности связываться с рецептором DAF.

Впервые установлено, что позитивная селекция daf ' мутантов при адаптации daf+ клонов вируса ECHOl 1 к клеточным культурам J1-41 и НЕр-2 обусловлена низкой скоростью интернализации частиц с daf+ фенотипом.

Показано, что рестрикция репродуктивной активности daf + варианта вируса ECHOl 1 на клетках обезьяны BGM не связана с этапом адсорбции.

Впервые описаны селективные свойства бластных клеток, выделенных из крови больного OMJI, в отношении daf + и daf ~ вариантов вируса ЕСНОП.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследования дополняют современные представления об изменчивости рецепторной специфичности энтеровирусов как об адаптационном механизме, расширяющем диапазон чувствительных клеток, а также о роли данного феномена в патогенезе энтеровирусных инфекций. Результаты оценки чувствительности клеточных культур к вариантам вируса ЕСНОП могут быть использованы для оптимизации методики выделения аффинных к DAF энтеровирусов из клинического материала.

Внедрение результатов исследования и апробация работы. Материалы исследований внедрены в учебный процесс кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» Росздрава.

Основные результаты работы представлены и обсуждены на I конференции иммунологов Урала (г. Екатеринбург, 2001); 57-й, 58-й, 59, 60-й, 61-й, 62-й и 63-й межвузовских научно-практических конференциях молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» (г. Екатеринбург, 2002, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007, 2008 гг.); IV межрегиональной научно-практической конференции с международным участием ОГМА (г. Омск, 2003 г.); Межрегиональной научной конференции (г. Томск, 2003 г.); конференции УрО РАН «Вирусы и иммунитет» (г. Екатеринбург, 2003 г.); III конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (г. Москва, 2004 г.), региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы вирусных инфекций в современный период» (г. Екатеринбург, 2007 г.).

По теме исследования опубликованы 18 научные работы, из них 3 в рецензируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, главы литературного обзора, 3 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 13 отечественных и 154 зарубежных источника, и приложений. Диссертация имеет объем 132 страницы, иллюстрирована 17 таблицами и 14 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Фадеев, Федор Алексеевич

ВЫВОДЫ

1) Рецепторная специфичность вируса ECHOl 1 является вариабельным признаком: помимо основного рецептора DAF для адсорбции на клеточной мембране вирус может использовать альтернативные рецепторы. Утрата вирусом ECHO 11 сродства к DAF обусловлена точковой мутацией по ограниченному числу сайтов в участке белка VP2, образующем антирецептор.

2) Адаптация daf + вируса ECHOll, выделенного на клетках RD, к культурам JI-41 и НЕр-2 сопровождается изменением рецепторной специфичности вирусной популяции. Происходит позитивная селекция daf~ мутантов с расширенным диапазоном клеток-хозяев.

3) Ограничение репродуктивной активности исходного daf+ вируса по сравнению с daf ~ hr + мутантами на клетках JI-41 и НЕр-2 не связано с уровнем его адсорбции на клеточной мембране, а обусловлено большей продолжительностью периода интернализации на этих культурах.

4) Рестрикция инфекционной активности daf + варианта вируса ECHOll, наблюдаемая на клеточной культуре BGM, не связана с этапом адсорбции. Адаптированный к клеткам BGM вирус сохраняет аффинность к человеческому рецептору DAF.

5) Властные клетки, выделенные из крови больного OMJI, поддерживают репродукцию daf+ варианта вируса ECHOll, в то время как daf hr + мутант не проявляет репродуктивную активность на данной культуре.

1.3. Заключение

На основании проведенного обзора литературы можно сделать следующее заключение:

1) В настоящее время известно более 10-ти клеточных рецепторов, используемых различными энтеровирусами. Показано, что в некоторых случаях для инфицирования клетки, необходимо взаимодействие вириона одновременно с двумя (или более) мембранными молекулами разных типов. При этом один из рецепторов фиксирует вирион на поверхности клетки, а другой участвует в запуске процесса интернализации комплекса вируса с рецептором. Однако современные сведения о рецепторной специфичности энтеровирусов недостаточно полно отражают спектр используемых ими клеточных рецепторов.

2) Основным клеточным рецептором для многих энтеровирусов (в том числе ECHOll) является белок DAF (CD55). Способность некоторых представителей рода к агглютинации эритроцитов обусловлена их сродством к этому рецептору. Наличие DAF на мембране клетки является необходимым, но недостаточным условием для ее инфицирования daf + вирусом. Проникновение вируса в цитозоль возможно только при взаимодействии с корецепторами (CD59; р2-микроглобулин и, вероятно, другими).

3) После связывания с рецептором на клеточной мембране вирион превращается в А-частицу, образующую трансмембранную пору, через которую вирусная РНК проникает в цитозоль (пустой капсид остается снаружи). Индуктором процесса трансформации вируса в А-частицу является взаимодействие рецептора с поверхностью каньона, окружающего вершину каждого пентамера капсида. Рецептор DAF связывается с капсидом южнее каньона, в то время как функцию взаимодействия с каньоном берет на себя корецептор. Аффинные и неаффинные к DAF энтеровирусы используют принципиально разные механизмы проникновения в клетку: необходимым условием для запуска интернализации daf + вируса является эндоцитоз комплекса вирус-рецептор в «липидных плотах» или кавеолах, тогда как daf вирусы используют альтернативный путь интернализации без участия кавеолина.

4) Существование феномена изменчивости рецепторной специфичности энтеровирусов можно считать доказанным. Многие вирусы Коксаки, ECHO и EV70 для инфицирования клетки могут использовать более одного клеточного рецептора. Разнообразие рецепторной специфичности для одного и того же серотипа обеспечивается за счет спонтанных мутаций в структурной части генома. Таким образом, популяции как природных, так и лабораторных штаммов указанных вирусов являются гетерогенными по признаку рецепторной специфичности. В то же время, молекулярно-генетические основы феномена изменчивости рецепторной специфичности, а также причины и механизм селекции вируса по данному признаку остаются неизученными.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Вирусы

Прототипный штамм Gregory вируса ECHO 11 получен из Института полиомиелита и вирусных энцефалитов (г. Москва). Штамм 7611 вируса ECHOl 1 является клиническим изолятом от больного серозным менингитом.

Вирусные клоны ранее были выделены из исходных штаммов методом бляшек под агаровым покрытием (3-4-х кратное клонирование «из бляшки-в бляшку»). Гемагглютинирующие (daf ) клоны 5.9.11.5 (штамм 7611) и G3123 (штамм Gregory) получены на первичной клеточной культуре ФЭЧ, daf " клон 111 (штамм 7611) - на перевиваемой культуре клеток рабдомиосаркомы человека RD. Негемагглготинирующие {daf "") клоны выделены на культуре ФЭЧ по схеме, представленной на рисунке 2: из клона 5.9.11.5 - 101 и 103, из клона G3123 - G28 и G70 [70]. Полученные вирусные клоны размножали в тех же культурах клеток, в которых они были выделены.

5.9.11.5 Л

7611

ФЭЧ)

ФЭЧ) (ФЭЧ) (ФЭЧ) (ФЭЧ)

101

ФЭЧ) 103

ФЭЧ)

KD)

RD)

111

ДОУ)

Gregory

ФЭЧ)

ФЭЧ) (ФЭЧ)

G3123

ФЭЧ)

0G28 s (ФЭЧ)

G70

ФЭЧ)

Рисунок 2. Схема получения daf" и daf клонов из штаммов Gregory и 7611 вируса ECHOl 1. В скобках указана клеточная культура, на которой был получен штамм/клон.

2.2. Первичная культура фибробластов эмбриона человека

Первичную культуру фибробластов эмбриона человека получали модифицированным методом холодной трипсинизации. Эмбрионы, извлеченные в результате искусственных абортов в сроке беременности 8-12 недель, помещали в раствор Хенкса с антибиотиками: пенициллином (500 ЕД/мл), гентамицином (100 мкг/мл) и нистатином (400 ЕД/мл). Кожно-мышечные ткани отмывали от сгустков крови и помещали на 30 мин. в чашку Петри с раствором Хенкса, содержащим антибиотики в высокой концентрации: пенициллин - 5000 ЕД/мл, гентамицин - 500 мкг/мл, нистатин - 2000 ЕД/мл. Отпрепарированный материал измельчали ножницами до получения гомогенной массы, заливали 0,25% раствором трипсина в соотношении объемов материала и раствора 1:5 и оставляли на 18 часов при 4°С. После окончания инкубации материал отмывали раствором Хенкса и суспендировали его энергичным встряхиванием в среде Игла. Полученную клеточную суспензию центрифугировали в течение 30-40 сек. при 3000 об./мин. для осаждения слизи (при этом клетки оставались во взвеси), после чего разводили ее средой Игла до концентрации 300-400 тыс. клеток/мл и добавляли сыворотку крупного рогатого скота (10% от объема среды), а также антибиотики: пенициллин - 100 ЕД/мл, гентамицин - 20 мкг/мл и нистатин — 40 ЕД/мл.

Фибробласты выращивали в монослое в культуральных флаконах.

2.3. Перевиваемые клеточные культуры

Перевиваемые клеточные культуры RD (клетки рабдомиосаркомы человека), JI-41 КД/84 (дериват линии J-96, полученной из клеток крови больного острым моноцитарным лейкозом), НЕр-2 (клетки карциномы гортани человека) и BGM (клетки почки африканской зеленой мартышки) получены из вирусологической лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Свердловской области».

Клетки выращивали в монослое в пластиковых культуральных флаконах (Corning-Costar) при 37°С. Для культивирования клеток RD использовали смесь питательных сред Игла (MEM с двойным набором аминокислот и витаминов) и RPMI-1640 с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки (производство HyClone) или 10% коровьей сыворотки. Клеточный монослой снимали с пластика раствором Версена.

Клетки Л-41 и НЕр-2 выращивали на смеси сред Игла (MEM) и 199 с добавлением 5% эмбриональной телячьей или 10% коровьей сыворотки; клетки BGM - на модифицированной по Дульбекко минимальной среде Игла (DMEM), содержащей 10% сыворотки теленка. Клетки Л-41, НЕр-2 и BGM снимали с пластика смесью растворов Версена и трипсина в соотношении 1:1.

В среды роста для перевиваемых клеточных культур добавляли антибиотики в той же концентрации, что и для первичной культуры ФЭЧ.

При пересевах суспензию клеток разводили питательной средой в 3-4 раза (культура RD) или в 5-6 раз (остальные клеточные культуры) по сравнению с исходным объемом среды.

В качестве среды поддержания во всех случаях использовали основную среду Игла с антибиотиками, но без добавления сыворотки.

2.4. Адаптация вируса к новой клеточной культуре методом неразведенных пассажей

Клеточный монослой в культуральном флаконе заражали 200 мкл вируссодержащей жидкости и инкубировали его при 37°С до полной дегенерации клеток. Последующие пассажи проводили по той же схеме инокуляцией материала предыдущего пассажа в новый флакон с клеточным монослоем. Изучение свойств адаптированного вируса осуществляли после 10-12 последовательных пассажей.

2.5. Культивирование вируса ECHOll в бластных клетках, выделенных из крови больного острым миелоидным лейкозом

Для культивирования вируса использовали бластные клетки, выделенные из крови больного OMJI без созревания (Ml) после лейкафереза. Примесь эритроцитов из лейкоконцентрата удаляли центрифугированием в растворе фиколл-урографина (р= 1,077 г/мл) при 1500 о б./мин. в течение 15 мин. (соотношение объемов раствора и клеток 4:1). Клетки, оставшиеся над слоем фиколл-урографина, собирали пипеткой, двукратно отмывали раствором Эрла и ресуспендировали в смеси сред Игла и RPMI-1640 с добавлением 10% коровьей сыворотки, доводя до концентрации 150 тыс. клеток/мл среды. Полученную клеточную суспензию разливали в культуральные флаконы по 4 мл и- инфицировали ее 100 мкл фотосенсибилизированного вируса (множественность заражения - около 100 БОЕ/клетку). Флаконы с клетками инкубировали при 37°С в течение 120 часов, после чего засвечивали их лампой накаливания в течение 20 мин. для инактивации остатков фотосенсибилизированного вируса. Инфекционную активность полученного вирусного урожая определяли на той же клеточной культуре, к которой был адаптирован использованный для заражения бластных клеток вирус.

Для контроля полноты фотоинактивации вируса 100 мкл исходного препарата, использованного для заражения клеток, разводили во флаконе с 4 мл среды Игла. Содержимое флакона подвергали воздействию света и определяли его остаточную инфекционную активность.

Выживаемость клеток в питательной среде оценивали с использованием трипанового синего, смешивая равные объемы клеточной суспензии и 0,1 % раствора красителя. После инкубации смеси при комнатной температуре в течение 10 мин. подсчитывали процент окрашенных клеток в камере Горяева. Непосредственно после очистки лейкоцитарной массы от эритроцитов доля погибших клеток составляла около 5%; при инкубации при

37°С в незараженном вирусом контроле выживаемость клеток через 72 часа составила 80%, а через 120 часов - 50%.

2.6. Постановка реакции бляшкообразования и клонирование вируса

Для постановки реакции бляшкообразования (РБО) использовали плотный клеточный монослой в пластиковом культуральном флаконе (площадь 25см ). После удаления среды роста клетки заражали соответствующим разведением вируссодержащей жидкости в объеме 200 мкл и инкубировали их при 20°С в течение 40мин. По завершении инкубации из флакона удаляли инокулят; клеточный монослой двукратно отмывали раствором Эрла и наносили на него питательное агаровое покрытие в объеме 10 мл.

Для приготовления питательного агарового покрытия использовали модифицированную пропись [54]. На 100 мл покрытия непосредственно перед использованием готовили два раствора следующего состава: Раствор А:

Бидистиллированная вода - 28,5 мл

10-кратный концентрат раствора Эрла без фенолового красного- 10 мл (использование смеси этого ингредиента с 10-кратным концентратом среды 199 в объемном соотношении 2:1 позволяло продлить время, в течение которого клетки сохраняли жизнеспособность под агаровым покрытием) Сыворотка эмбриональная телячья - 5 мл Раствор ЗМ хлорида магния - 1 мл Раствор 3% глутамина- 1 мл Раствор 0,1% нейтрального красного- 1,5 мл Раствор 7,5% гидрокарбоната натрия - 1,2 мл Раствор бензилпенициллина 100000 ЕД/мл - 100 мкл Раствор гентамицина сульфата 40 мг/мл - 50 мкл Спиртовый раствор нистатина 200000 ЕД/мл — 25 мкл

Раствор Б:

Бидистиллированная вода - 50 мл

Агар Difco - 0,9 г

Раствор Б нагревали до 100°С на водяной бане в течение часа и добавляли к нему 40 мг протамина сульфата, растворенного в небольшом объеме горячей воды. Охладив раствор Б до 42°С, его смешивали с раствором А, при температуре смеси 38°С ее наносили на клеточный монослой. После застывания агара культуральные флаконы переворачивали вверх монослоем и инкубировали в темноте при 37°С. Подсчет количества бляшек проводили через 72 часа.

Для выделения вирусных клонов использовали бляшки, отстоящие от соседних не менее чем на 20 мм. Небольшую пробу агара из центра бляшки отбирали пастеровской пипеткой с изогнутым концом, после чего взятый образец растворяли в 1 мл среды Игла.

2.7. Получение фотосенсибилизированного вируса

Репродукция вируса в среде поддержания с добавлением нейтрального красного сопровождается включением в капсид молекул красителя. Под воздействием видимой части спектра света в сенсибилизированных вирусных частицах происходит разрушение РНК, вследствие чего они утрачивают инфекционность. После проникновения нуклеиновой кислоты в цитозоль клетки происходит отделение от нее красителя, в результате чего вирус становится нечувствительным к свету. Таким образом, утрата фотосенсибилизированным вирусом (ФСВ) светочувствительности свидетельствует о том, что вирусная РНК находится внутри клетки и, соответственно, является сигналом окончания интернализации [76].

Для получения ФСВ клеточный монослой заражали исходным вирусным материалом в объеме 200 мкл (титр 105 БОЕ/мл). После 30-минутной адсорбции при 20°С клетки отмывали от несвязавшегося вируса, добавляли среду поддержания, содержащую 0,001% нейтрального красного

ICN Pharmaceuticals, Inc.), и инкубировали при 37°C в темноте до полной дегенерации монослоя. Для проведения экспериментов использовали вирус после двух пассажей на среде с нейтральным красным. Полученный ФСВ хранили во флаконе с непрозрачными стенками, все манипуляции с ним проводили при очень слабом освещении.

Светочувствительность ФСВ оценивали методом конечных разведений, используя его десятикратные разведения для заражения флаконов с клеточным монослоем. После инкубации при 20°С в течение 30 мин. монослой отмывали раствором Эрла от неадсорбировавшегося вируса; флаконы подвергали засветке (контрольные оставляли в темноте) и переносили их в термостат (37°С) на 72 часа. Для фотоинактивации вируса использовали лампу накаливания мощностью 100 Вт, время засветки составляло 20 мин., расстояние между лампой и флаконами - около 50 см. Светочувствительность вируса оценивали, сравнивая показатели его ТЦД5о в контрольных «незасвеченных» и подвергшихся воздействию света флаконах. Титр ФСВ после «засветки» уменьшался на 3 порядка. Приблизительно такого же уровня фотоинактивации (в 300-400 раз) удалось ранее добиться Huang et al. [76] в работе с использованием фотосенсибилизированного полиовируса. Таким образом, ФСВ, не инактивировавшийся светом, давал погрешность менее 1% и потому не оказывал заметного влияния на результаты описанных в диссертации экспериментов.

2.8. Оценка гемагглютинирующей активности вируса

Гемагглютинирующую активность вируса определяли микрометодом [7, 9, 13] с использованием последовательных двукратных разведений вируссодержащей жидкости в 50 мкл раствора Эрла, содержащего 0,05% человеческого сывороточного альбумина. К разведениям вируса добавляли по 50 мкл 1% взвеси эритроцитов человека. Планшеты инкубировали при 4°С в течение часа, после чего учитывали результат реакции. ГА активность вируса выражали в гемагглютинирующих единицах (ГАЕ).

2.9. Оценка инфекционной активности вируса

Инфекционную активность вируса оценивали методом конечных разведений, определяя величину 50% тканевой цитопатогенной дозы (ТЦД50) в 1 мл вируссодержащей жидкости, а также в РБО (в этом случае концентрацию вируса выражали в количестве бляшкообразующих единиц, содержащихся в 1мл вируссодержащей жидкости, БОЕ/мл).

Последовательные десятикратные разведения исследуемой вируссодержащей жидкости готовили в лунках пластмассового планшета, содержащих по 0,9 мл среды Игла. В первую лунку вносили 100 мкл титруемого материала и, сменив наконечник дозатора, тщательно перемешивали ее содержимое, после чего 100 мкл десятикратно разведенной вируссодержащей жидкости переносили в следующую лунку. Процедуру повторяли до получения необходимого разведения вируса.

При титровании методом конечных разведений в культуральные флаконы с клеточным монослоем вносили по 100 мкл предварительно приготовленных разведений вируса от 10"1 до 10"9 (не менее 4 флаконов для каждого разведения). Флаконы с инфицированными клетками помещали в термостат и инкубировали при 37°С. Результат реакции учитывали на 5 день по деструкции монослоя. ТЦД5о вируса в исходном препарате вычисляли по методу Рида-Менча [9].

Инфекционную активность в РБО определяли по формуле: 10г 1=Х

V ' где I - инфекционная активность вируса в исходном препарате (БОЕ/мл); X - среднее количество бляшек в флаконах; V — объем инокулята (мл), использованного для заражения клеток; i — показатель степени разведения исходного препарата.

Для вычисления инфекционной активности одного вирусного препарата РБО проводили минимум в четырех флаконах с клеточным монослоем, при этом общее число подсчитанных бляшек составляло не менее 80.

2.10. Оценка уровня адсорбции вируса ЕСНОП на клеточной мембране

Клеточный монослой снимали с пластика культурального флакона раствором Версена (без добавления трипсина). Клетки (около 8млн.) осаждали центрифугированием, однократно отмывали раствором Эрла и суспендировали в 0,5 мл исследуемой вируссодержащей жидкости. Полученную взвесь инкубировали при 4°С в течение часа, периодически ее встряхивая, затем клетки осаждали центрифугированием и определяли остаточную • инфекционную активность надосадочной жидкости. Сопоставление инфекционной активности вируса до и после инкубации с клетками позволяло оценить уровень его адсорбции на исследуемой клеточной культуре.

2.11. Оценка скорости интернализации вируса

Оценку скорости интернализации адсорбированного на поверхности клеток вируса осуществляли с использованием фотосенсибилизированных клонов в модифицированном варианте РБО. В культуральные флаконы с клеточным монослоем вносили ФСВ в соответствующем разведении и выдерживали их при 20°С в течение 40 мин. После отмывания клеток от несвязавшегося вируса раствором Эрла флаконы разделяли на партии (не менее трех флаконов в каждой) и помещали их в термостат (температура 37°С). Флаконы, используемые для оценки. полноты фотоинактивации вируса, оставляли при 20°С. Через определенные интервалы времени (20 мин., 45 мин., 60 мин. и 90 мин.) очередную партию флаконов извлекали из термостата и оставляли в темноте при 20°С. После извлечения из термостата последней партии все флаконы одновременно засвечивали лампой накаливания в течение 20 мин. Вирусные частицы, проникшие в клетку за время инкубации при 37°С, утрачивали светочувствительность вследствие отделения в цитозоле красителя от РНК, в то время как не завершившие интернализацию частицы инактивировались светом. После нанесения на клетки агарового покрытия флаконы вновь переносили в термостат и выдерживали в течение 72 часов до формирования бляшек. Контрольные флаконы, используемые для подсчета количества бляшек, формирующихся на незасвеченном монослое, не подвергали воздействию света. Сравнение количества бляшек, образовавшихся в «засвеченных» культуральных флаконах, и в контрольных, не подвергшихся воздействию света, позволяло оценить долю вирусных частиц, проникающих в клетку за время инкубации при 37°С до момента фотоинактивации вируса.

2.12. Определение доли вирусных частиц, утрачивающих инфекционность после адсорбции на клетках

В пластиковый культуральный флакон с клеточным монослоем (площадь монослоя 25 см", около 2,5 млн. клеток) вносили 1 мл вируссодержащей жидкости. Адсорбцию вируса на клетках проводили при 20°С в течение 40 мин., после чего клеточный монослой трехкратно отмывали раствором Эрла.

Флаконы с адсорбированным на клетках вирусом переносили в термостат и выдерживали при 37°С в течение 60 мин.; контрольные флаконы продолжали инкубировать при прежней температуре 20°С. После завершения инкубации клетки соскабливали с пластика и ресуспендировали в 0,9 мл среды Игла, для увеличения степени дисперсности клеточную взвесь многократно перемешивали, набирая ее в пипетку и выпуская обратно. К полученной суспензии добавляли 100 мкл 0,25% раствора дезоксихолата натрия и инкубировали ее при 20°С в течение 30 мин. при постоянном энергичном перемешивании для предотвращения образования клеточных конгломератов. По окончании инкубации клеточный детрит удаляли центрифугированием. Сравнение инфекционной активности элюата в контроле (20°С) и после инкубации при 37°С позволяло определить долю вирусных частиц, не подвергающихся интернализации после адсорбции на мембране клеток.

2.13. Секвенирование генома вируса ECHOll

Выделение вирусной РНК проводили методом сорбции на силикагеле с помощью комплекта реагентов "РИБО-сорб" (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва). Для проведения обратной транскрипции использовали набор "PEBEPTA-L-100" того же производителя.

Структурную часть генома (около 3 тыс. оснований, кодирующих белки вирусного капсида VP1 - VP4) амплифицировали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в виде шести перекрывающихся сегментов. Праймерные последовательности были подобраны с использованием полных нуклеотидных последовательностей генома вируса ECHOll из GenBank (AY167103, AY167104, AY167105, AY167106, AJ276224, AJ577589, AJ577590, AJ577594, Х80059, DQ092796) с учетом высококонсервативных участков (табл. 2).

Для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) готовили реакционную смесь, включающую следующие компоненты: 2 ед. ДНК-полимеразы ("ДиаТак", ЦНИИ эпидемиологии, Москва), 0,2 шМ смеси dNTP, по 15 рМ каждого из двух праймеров, реакционный буфер (67 шМ Трис-НС1, рН 8,3, 2,5 шМ MgCb). ПЦР проводили в следующем режиме: 1-й цикл -95°С - 3 минуты; 42 цикла - 95°С - 10 секунд, 48°С - 10 секунд, 72°С - 40 секунд; заключительный цикл - 72°С - 5 минут.

Секвенирование ДНК проводили на автоматическом генетическом анализаторе ABI Prism 310 (Applied Biosystems, США) с использованием реакционной смеси ABI Prism BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit v.3.0 (Applied Biosystems, США) по прямой (праймеры IS, 2S, 3S, 4S, 5S, 6S) и обратной (праймеры 1A, 2A, ЗА, 4A, 5A, 6A) последовательностям.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Фадеев, Федор Алексеевич, Москва

1. Архангельская, Э.И. Этиология серозного менингита (по материалам г. Омска) Текст. / Э.И. Архангельская, Т.Г. Змейкова, С.Ф. Скубенко // Вирусные инфекции: Респ. сб. научн. трудов — Свердловск: СНИИВИ, 1991- С.48-50.

2. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях Текст. / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев Л.: Медгиз, 1962.-180 с.

3. Ворошилова, М.К. Энтеровирусные инфекции человека Текст. / М.К. Ворошилова-М.: Медицина, 1979.-360 с.

4. Выгодский, М.Я. Справочник по элементарной математике Текст. / М.Я. Выгодский-М.: Наука, 1979.-335 с.

5. Гендон, Ю.З. Генетика вирусов человека и животных Текст. / Ю.З. Гендон.- М.: Наука, 1967,- 356 с.

6. Гланц С.А. Медико-биологическая статистика Текст. / С.А. Гланц, -М.: Практика, 1999. - 459 с.

7. Егоров, А.А. К методике выявления гемагглютинирующей активности энтеровирусов Текст. / А.А Егоров, Н.В. Амбарцумова // Микробиол. ж.- 1989.- Т.51, №4.- С. 95-97.

8. Злобин В.И. Изучение и оценка генетических признаков штаммов вируса полиомиелита, выделенных в период применения живой полиомиелитной вакцины Текст.: автореферат дисс. . канд. мед. наук.: 03.00.06 /В.И. Злобин Свердловск, 1976.-26 с.

9. Карышева, А.Ф. Руководство по практической вирусологии Текст. / А.Ф. Карышева, В.Н. Сюрин-Кишинев: Штиинца, 1980.-212 с.

10. Лакин, Г.Ф. Биометрия: учеб. пособие для биол. спец. вузов Текст. / Г.Ф. Лакин-М.: Высш. шк., 1990.-352 с.

11. Лашкевич, В.А. О статистической оценке результатов титрования инфекционности некоторых вирусов методом бляшек Текст. / В.А.

12. Лашкевич, Г.Х. Кодкинд, А.А. Мискин // Вопр. Виру со л,- 1980 №5 — С. 563-566.

13. Новоселов, А.В. Генетический анализ гемагглютинирующих свойств энтеровирусов (на модели вируса ECHO 11) Текст.: автореферат дисс. . канд. мед. наук: 03.00.06 / А.В. Новоселов-М., 1994.-23 с.

14. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования Текст. / под ред. М.О. Биргера М.: Медицина, 1982.— 464 с.

15. A monoclonal antibody specific for the cellular receptor for the group В coxsackieviruses Text. / K.H. Hsu, K. Lonberg-Holm, B. Alstein, R.L. Crowell //J. Virol.- 1988.-Vol.62 (5).-P. 1647-1652.

16. A novel cell entry pathway for DAF-using human enterovirus is dependent on lipid rafts Text. / A.D. Stuart, H.E. Eustace, T.A. McKee, T.D.K. Brown //J. Virol.- 2002.-Vol. 76 (18).-P. 9307-9332.

17. Alexander, D.A. Sialic acid functions in enterovirus 70 binding and infection Text. / D.A. Alexander, K. Dimock .// J. Virol.- 2002.- Vol.76 (22).-P.l 1265-11272.

18. Baranowski, E. Evolution of cell recognition by viruses Text. / E. Baranowski, C.M. Ruiz-Jarabo, E. Domingo // Science 2001 - Vol.292.-P. 1102-1105.

19. Binding to decay-accelerating factor is not required for infection of human leukocyte cell lines by enterovirus 70 Text. / A. Haddad, M.R. Nokhbeh, D.A. Alexander, S J. Dawe, C. Grise, N. Gulzar, K. Dimock // J. Virol -2004.-Vol.78 (6).-P.2674-2681.

20. Bubeck, D. Cryo-electron microscopy reconstruction of a poliovirus-receptor-membrane complex Text. / D. Bubeck, D.J. Filman, J.M. Hogle // Nat. Struct. Mol. Biol.- 2005.- Vol.12 (7).-P.615-618.

21. Canyon rim residues, including antigenic determinants, modulate serotype-specific binding of polioviruses to mutants of the poliovirus receptor Text. / J. Harber, G. Bernhardt, H.H. Lu, J.Y. Sqro, E. Wimmer. // Virology.-1995.- Vol.214 (2).-P.559-570.

22. Cardiovirulent coxsackieviruses and the decay-accelerating factor (CD55) receptor Text. / T.A. Martino, M. Petric, M. Brown, K. Aitken, C. Gauntt, C.D. Richardson, L.H. Chow, P.P. Liu // Virology.- 1998.- Vol.244.- P. 302-314.

23. Carson, S.D. Coxsackievirus and adenovirus receptor (CAR) binds immunoglobulins Text. / S.D. Carson, N.M. Chapman // Biochemistry — 2001.-Vol.40.-P. 14324-14329.

24. Cell recognition and entry by rhino- and enteroviruses Text. / M.G. Rossmann, J. Bella, P.R. Kolatkar, Y. He, E. Wimmer, R.J. Kuhn, T.S. Baker // Virology.- 2000.- Vol.269.- P. 239-247.

25. Characterization of a 100-kilodalton binding protein for the six serotypes of coxsackie В viruses Text. / U.R. de Verdugo, H.-S. Selinka, M. Huber, B. Kramer, J. Kellermann, P.H. Hofshneider, R. Kandolf// J. Virol.- 1995 -Vol. 69 (11).-P. 6751-6757.

26. Characterization of the echovirus 7 receptor: domains of CD55 critical for virus binding Text. / N.A. Clarkson, R. Kaufman, D.M. Lublin, T. Ward, P.A. Pipkin, P.D. Minor, D.J. Evans, J.W. Almond // J. Virol.- 1995,- Vol. 69 (9).-P. 5497-5501.

27. Chothia, C. The molecular structure of cell adhesion molecules Text. / C. Chothia, E.Y. Jones // Annu. Rev. Biochem.- Vol.66.- P. 823-862.

28. Cohen, C.J. The coxsackievirus and adenovirus receptor is a transmembrane component of the tight junction Text. / C.J. Cohen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2001.-Vol.98.-P. 15191-15196.

29. Colston, E.M. Poliovirus variants selected on mutant receptor-expressing cells identify capsid residues that expand receptor recognition Text. / E.M. Colston, V.R. Racaniello // J. Virol.- 1995.- Vol.69 (8).- P.4823-4829.

30. Colston, E.M. Soluble receptor-resistant poliovirus mutants identify surface and internal capsid residues that control interaction with the cell receptor Text. / E. Colston, V.R. Racaniello // EMBO J.- 1994.- Vol.13.- P. 58555862.

31. Comparative analysis of virus-host interactions of hemagglutinating and non-hemagglutinating strains of Coxsackievirus B3 Text. / A. Pasch, J.-H.Kiipper, A. Wolde, R. Kandolf, H.-C. Selinka // J.Gen.Virol.- 1999.-Vol.80 P.3153-3158.

32. Complexes of poliovirus serotypes with their common cellular receptor, CD 155 Text. / Y. He, S. Mueller, P.R. Chipman, C.M. Bator, X. Peng, V.D. Bowman, S. Mukhopadhyay, E. Wimmer // J. Virol.- 2003.- Vol.77 (8).- P. 4827-4835.

33. Coxsackie В viruses that use human DAF as a receptor infect pig cells via pig CAR and do not use pig DAF Text. / O.B. Spiller, I.G. Goodfellow, D.J. Evans, SJ. Hinchliffe, B.P. Morgan // J. Gen. Virol.- 2002.- Vol.83.-P. 45-52.

34. Coxsackievirus A21 binds to decay-accelerating factor but requires intercellular adhesion molecule 1 for cell entry Text. / D.R. Shafren, D.J. Dorahy, R.A. Ingham, G.F. Burns, R.D. Barry // J. Virol.- 1997.- Vol.71 (6).-P.473 6-4743.

35. Coxsackievirus B3 adapted to growth in RD cells binds to decay-accelerating factor (CD55) Text. / J.M. Bergelson, J.G. Mohanty, R.L. Crowell, N.F. St. John, D.M. Lublin, R.W. Finberg // J. Virol. 1995.-Vol.69 (3).-P. 1903-1906.

36. Coxsackieviruses Bl, B3 and B5 use decay-accelerating factor as a receptor for cell attachment Text. / D.R. Shafren, R.C. Bates, M.V. Agrez, R.L. Herd, G.F. Burns, R.D. Barry // J. Virol.- 1995.- Vol. 69 (6).- P. 38733877.

37. Crowell, R.L. Specific alterations of coxsackievirus B3 eluted from HeLa cells Text. / R.L. Crowell, L. Philipson // J. Virol.- 1971.- Vol.8.- P. 509515.

38. Curry, S. The poliovirus 135S particle is infectious Text. / S. Curry, M. Chow, J.M. Hogle //J. Virol.- 1996.-Vol.70 (10).-P. 7125-7131.

39. Decay-accelerating factor CD55 is identified as the receptor for echovirus 7 using CELICS, a rapid immuno-focal cloning method Text. / T. Ward, P.A. Pipkin, N.A. Clarkson, D.M. Stone, P.D. Minor, J.W. Almond // EMBO J.-1994.-Vol.13.-P. 5070-5074.

40. Distinct cellular receptor interactions in poliovirus and rhinoviruses Text. / L. Xing, K. Tjarnlund, B. Lindqvist, G.G. Kaplan, D. Feigelstock, R.H. Cheng, J.M. Casanovas // EMBOJ.- 2000.-Vol.19 (6).-P. 1207-1216.

41. Domingo, E. Quasispecies and the implications for virus persistence and escape Text. / E. Domingo // Clin. Diagn. Virol.- 1998.- Vol.10.- P. 97101.

42. Domingo, E. RNA virus mutations and fitness for survival Text. / E. Domingo, J.J. Holland // Annu. Rev. Microbiol.- 1997,- Vol.51.- P. 151178.

43. Dove, A.W. Cold-adapted poliovirus mutants bypass a postentry replication block Text. / A.W. Dove, V.R. Racaniello // J. Virol.- 1997.- Vol.71 (6).-P. 4728-4735.

44. Dulbecco R. Plaque formation and isolation of pure lines with poliomyelitis viruses Text. / R. Dulbecco, M. Vogt // J. Exp. Med.- 1954.- V.99.- P. 167182.

45. Dulbecco R. A study of the basic aspects of neutralization of two animal viruses, Western equine encephalitis virus and poliomyelitis virus Text. / R. Dulbecco, M. Vogt, A.G.R. Strickland // Virology.- 1956.- V.2.- P. 162205.

46. Echovirus 1 interaction with the human very late antigen-2 (integrin a2Pi) I domain Text. / S.L. King, T. Kamata, J.A. Cunningham, J. Emsley, R.C. Liddington, Y. Takada, J.M. Bergelson // J. Biol. Chem.- 1997.- Vol.272 (45).- P.28518-28522.

47. Echovirus infection of rhabdomyosarcoma cells is inhibited by antiserum to the complement control protein CD59 Text. / I.G. Goodfellow, R.M. Powell, T. Ward, O.B. Spiller, J.W. Almond, D.J. Evans // J. Gen.Virol.-2000.- Vol.81.- P.1393-1401.

48. Echoviruses bind heparan sulfate at the cell surface Text. / I.G. Goodfellow, A.B. Sioofy, R.M. Powell, D.J. Evans // J. Virol.- 2001.-Vol.75(10).-P.4918-4921.

49. Enhanced cellular receptor usage by a bioselected variant of coxsackievirus A21 Text. / E.S. Johansson, L. Xing, R.H. Cheng, D.R. Shafren // J. Virol.-2004.- Vol.78 (22).-P. 12603-12612.

50. Enterovirus receptor and virus replication in human leukocytes Text. / T. Vuorinen, R. Vainionpaa, J. Heino, T. Hyypia // J. Gen. Virol 1999 - Vol. 80.-P. 921-927.

51. Entry of poliovirus type 1 and mouse Elberfeld (ME) virus into HEp-2 cells: receptor-mediated endocytosis and endosomal or lysosomal uncoating Text. / H. Zeinhhardt, K. Wetz, P. Willingmann, K.O. Habermehl // J. Gen. Virol.-Vol.66.-P. 483-492.

52. Evans, D.J. Cell receptors for picornaviruses as determinants of cell tropism and pathogenesis Text. / D.J. Evans, J.W. Almond // Trends in microbiology.- 1998.-Vol.6 (5).-P. 198-202.

53. Evolution of fitness in experimental populations of vesicular stomatitis virus Text. / S.F. Elena, F. Gonzalez-Candelas, I.S. Novella, E.A. Duarte, D.K. Clarke, E. Domingo, J.J. Holland, A. Moya // Genetics 1996.- Vol.142 (3).-P. 673-679.

54. Fatty acid-depleted albumin induces the formation of echovirus A particles Text. / T. Ward, R.M. Powell, Y. Chaudhry, J. Meredith, J.W. Almond, W. Kraus, B. Nelsen-Salz, H.J. Eggers, D.J. Evans // J. Virol 2000.- Vol.74 (7).-P. 3410-3412.

55. Freistadt, M.S. Mutational analysis of the cellular receptor for poliovirus Text. / M.S. Freistadt, V.R. Racaniello // J. Virol.- 1991.- V.65 (7). P. 3873-3876.

56. Fricks, C.E. Cell-induced conformational change in poliovirus: externalization of the amino terminus of VP1 is responsible for liposome binding Text. / C.E. Fricks, J.M. Hogle // J. Virol.- 1990.- Vol. 64 (5).- P. 1934-1945.

57. Frisk, G. Persistence of coxsackievirus B4 infection in rhabdomyosarcoma cells for 30 months Text. / G. Frisk, M.A. Lindberg, H. Oiderholm // Arch. Virol.- 1999.-Vol. 144.-P. 2239-2245.

58. Genetic analysis of echovirus 11 variability in adsorption to human erythrocytes Text. / A.G. Sergeev, Novoselov A.V., Bubenschikov A.V., Kondrashova Z.N. //Arch. Virol.- 1994.- Vol.134 (2).-P.129-139.

59. Goldfield, M. Hemagglutinins associated with certain human enteric viruses Text. / M. Goldfield, S. Srihongse, J.P. Fox // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.-1957.- Vol.96.- P. 788-791.

60. Heparan sulfate and coxsackievirus-adenovirus receptor: each one mediates coxsackievirus B3 PD infection Text. / A.E. Zautner, U. Korner, A. Henke, C. Badorff, M. Schmidtke // J. Virol.- 2003.-Vol.77 (18).-P. 10071-10077.

61. Hogle, J.M. Poliovirus cell entry: common structural themes in viral cell entry pathways Text. / J.M. Hogle // Annu. Rev. Microbiol- 2002-Vol.56 P.677-702.

62. Hogle, J.M. Three-dimensional structure of poliovirus at 2.9 A resolution Text. / J.M. Hogle, M. Chow, D.J. Filman // Science.- 1985.- Vol.229.- P. 1358-1365.

63. Huang, Y. Is the 135S poliovirus particle an intermediate during cell entry? Text. / Y. Huang, J.M. Hogle, M. Chow // J. Virol.- 2000.- Vol. 74 (18).-P. 8757-8761.

64. Identification of the integrin VLA-2 as a receptor for echovirus 1 Text. / J.M. Bergelson, M.P. Shepley, M.C. Chan, M.E. Hemler, R.W. Finberg // Science.- 1992.-Vol.275.-P. 1718-1720.

65. In vitro activity of pirodavir (R 77975), a substituted phenoxy-pyridazinamine with broad-spectrum antipicornaviral activity Text. / K.

66. Andries, В. Dewindt, J. Snoeks, R. Willebrords, K.V. Eemeren, R. Stokbroekx, P.A.J. Janssen // Antimicrobial agents and chemotherapy — 1992.-Vol.36 (1).-P. 100-107.

67. In vitro and in vivo activities of WIN 54954, a new broad-spectrum antipicornavirus drug Text. / M.G. Woods, G.D. Diana, M.C. Rogge, M.J. Otto, F.J. Dutko, M.A. McKinlay // Antimicrobial agents and chemotherapy.- 1989.-Vol.33 (12).-P.2069-2074.

68. Inhibition of coxsackie В infection by soluble forms of its receptors: binding affinities, altered particle formation, and competition with cellular receptors Text. / I.G. Goodfellow, D.J. Evans, A.M. Blom, D. Kerrigan, J.S. Miners,

69. B.P. Morgan, O.B. Spiller // J. Virol.-2005.-Vol.79 (18).-P.12016-12024.

70. Integrin avp6 is an RGD-dependent receptor for coxsackievirus A9 Text. /

71. C.H. Williams, T. Kajander, T. Hyypia, T. Jackson, D. Sheppard, G. Stanway // J. Virol.- 2004.- Vol.78 (13).- P.6967-6973.

72. Interaction of coxsackievirus A21 with its cellular receptor, ICAM-1 Text. / C. Xiao, C.M. Bator, V.D. Bowman, E. Rieder, Y. He, B. Hebert, J. Bella, T.S. Baker, E. Wimmer, R.J. Kuhn, M.G. Rossman // J. Virol 2001 -Vol.75 (5).-P. 2444-2451.

73. Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformation alteration in the virion Text. / M. Arita, S. Koike, J. Aoki, H. Horie, A. Nomoto // J. Virol.- 1998.- Vol.72 (5).- P. 3578-3586.

74. Interaction of the poliovirus receptor with poliovirus Text. / Y. He, V.D. Bowman, St. Mueller, C.M. Bator, J. Bella, X. Peng, T.S. Baker, E. Wimmer, RJ. Kuhn, M.G. Rossmann // Proc. Natl. Acad. Sci. USA-2000.-Vol.97 (l).-P. 79-84.

75. Involvement of p2-microglobulin and integrin avp3 molecules in the coxsackievirus A9 infectious cycle Text. / M. Triantafilou, K. Triantafilou, K.M. Wilson, Y. Takada, N. Fernandez, G. Stanway // J. Gen. Virol.-1999.- Vol.80.- P.2591-2600.

76. Isolation and molecular characterization of a poliovirus type 1 mutant that replicates in the spinal cord of mice Text. / Q. Jia, S. Ohka, K. Iwasaki, K. Tohyama, A. Nomoto // J. Virol.- 1999.- Vol.73 (7).- P.6041-6047.

77. Johnson, K.M. Separation of hemagglutinating and non-hemagglutinating variants of coxsackie A-21 virus Text. / K.M. Johnson, D.J. Lang // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1962.-Vol.110.-P.653-657.

78. Kinetic analysis of the effect of poliovirus receptor on viral uncoating: the receptor as a catalyst Text. / S.K. Tsang, B.M. McDermott, V.R. Racaniello, J.M. Hogle // J. Virol.-2001.-Vol.75 (11).-P. 4984-4989.

79. Kumar, S. MEGA3: Integrated software for molecular evolutionary genetics analysis and sequence alignment Text. / S. Kumar, К Tamura, M. Nei // Briefings in Bioinformatics. 2004. - Vol. 79. - P. 1707-1713.

80. La Monica, N. Mapping of sequences required for mouse neurovirulence of poliovirus type 2 Lansing Text. / N. la Monica, C. Meriam, V.R. Racaniello //J. Virol.- 1986.-Vol.57 (2).- P.515-525.

81. Lentz, T.L. Viral tropism and target cell receptors Text. / T.L. Lentz // Molecular mimicry in health and disease: Proc. 2nd Nord Insulin Symposium.-Amsterdam, 1988-P. 185-195.

82. Liao, S. Allele-specific adaptation of poliovirus VP1 B-C loop variants to mutant cell receptors Text. / S. Liao, V.R. Racaniello // J. Virol 1997-Vol.71.- P. 9770-9777.

83. Lonberg-Holm, K. Physical and metabolic requirements for early interaction of poliovirus and human rhinovirus with HeLa cells Text. / K. Lonberg-Holm, N.M. Whiteley // J. Virol.- 1976.- Vol.19 (3).- P. 857-870.

84. Lublin, D.M. Decay-accelerating factor biochemistry, molecular biology, and function Text. / D.M. Lublin, J.P. Atkinson // Annu. Rev. Immunol.-1989.-Vol.7.-P. 35-58.

85. Mapping CD55 function. The structure of two pathogen-binding domains at 1.7 A Text. / P. Williams, Y. Chaudhry, I.G. Goodfellow, J. Billington, R. Powell, O.B. Spiller, D.J. Evans, S. Lea // J. Biol. Chem.- 2003.- Vol.278-P. 10691-10696.

86. Mapping of the RD phenotype of the Nancy strain of coxsackievirus B3 Text. / A.M. Lindberg, R.L. Crowell, R. Zell, R. Kandolf, U. Pettersson // Virus Res.- 1992.- V.24.-P. 187-196.

87. Molecular evolution of the human enteroviruses: correlation of serotype with VP1 sequence and application to picornavirus classification Text. / M.S. Oberste, K. Maher, D.L. Kilpatrick, M.A. Pallansch // J. Virol.- 1999-Vol.73 (3).-P.1941-1948.

88. Molecular tectonic model of vims structural transitions: the putative cell entry states of poliovirus Text. / D.M. Belnap, D.J. Filman, B.L. Trus, N. Cheng, F.P. Booy, J.F. Conway, St. Curry, C.N. Hiremath // J. Virol-2000.- Vol.74 (3).-P.1342-1354.

89. Molecular typing of enteroviruses: current status and future requirements Text. / P. Muir, U. Kammerer, K.Korn, M.N. Mulders, Т. Poyry, B. Weissbrich, R. Kandolf, G.M. Cleator, A.M. van Loon // Clin. Microbiol. Rev.- 1998.-Vol.11 (l).-P. 202-227.

90. Mouse adaptation determinants of poliovirus type 1 enhance viral uncoating Text. / T. Couderc, F. Delpeyroux, H. le Blay, F. Horaud, B. Blondel // J. Virol.- 1996.- Vol.70 (1).-P.305-312.

91. Mouse cells expressing human intercellular adhesion molecule-1 are susceptible to infection by coxsackievirus A21 Text. / D.R. Shafren, D.J. Dorahy, S.J. Greive, G.F. Burns, R.D. Barry // J. Virol.- 1997.- Vol.71 (1).-P.785-789.

92. Nelsen-Salz, B. Integrin ауРз (vitronectin receptor) is a candidate receptor for the virulent echovirus 9 strain Barty Text. / B. Nelsen-Salz, H.J. Eggers, H. Zimmermann//J. Gen. Virol.- 1999.- Vol.80.-P.2311-2313.

93. Newcombe, N.G. Cellular receptor interactions of C-cluster human group A coxsackieviruses Text. / N.G. Newcombe, P. Andersson, E.S Johansson // J. Gen. Virol.- 2003.- Vol.84.- P.3041-3050.

94. Newcombe, N.G. Enterovirus capsid interactions with decay-accelerating factor mediate lytic infection Text. / N.G. Newcombe, E.S. Johansson, G. Au//J. Virol.- 2004.- Vol.78 (3).-P. 1431-1439.

95. Nichols, B.J. Endocytosis without clathrin coats Text. / B.J. Nichols, J. Lippincott-Schwartz // Trends in Cell Biol.- 2001.- Vol.11.- P. 406-412.

96. Nicholson-Weller, A. Structure and function of decay-accelerating factor CD55 Text. / A. Nicholson-Weller, C.E. Wang // J. Lab. Clin. Med.-1994.-Vol. 123.-P. 485-491.

97. Pathogenesis of coxsackievirus A9 in mice: role of the viral arginine-glycine-aspartic acid motif Text. / H. Harvala, H. Kalimo, G. Stanway, T. Hyypia // J. Gen. Virol.- 2003.- Vol.84.- P.2375-2379.

98. Perez, L. Entry of poliovirus into cells does not require a low-pH step Text. / L. Perez, L. Carrsaco // J. Virol.- 1993.- Vol. 67 (8).- P. 4543-4548.

99. Pulli, T. Cell-surface interactions of echovirus 22 Text. / T. Pulli, E. Koivunen, T. Hyypia // J. Biol. Chem.- 1997.- Vol.272 (34).- P.21176-21180.

100. Racaniello, V.R. Early events in poliovirus infection: virus-receptor interactions Text. / V.R. Racaniello //Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996-Vol.93.-P. 11378-11381.

101. Razani, B. Caveolins and caveolae: molecular and functional relationships Text. / B. Razani, M.P. Lisanti // Experimental Cell Research.- 2001 -Vol.271.-P. 36-44.

102. Reagan, K.J. Altered receptor specifity of Coxsackievirus B3 after growth in rhabdomyosarcoma cells Text. / K.J. Reagan, B. Goldberg, R.L. Crowell // J. Virol.- 1984.- V.49 (3).-P.635-640.

103. Ren, R. Human poliovirus gene expression and poliovirus tissue tropism in transgenic mice Text. / R. Ren, V.R. Racaniello // J. Virol 1992-Vol.66 (l).-P. 296-304.

104. Role for ^-microglobulin in echovirus infection of rhabdomyosarcoma cells Text. / T. Ward, R.M. Powell, P.A. Pipkin, D.J. Evans. P.D. Minor, J.W. Almond // J. Virol.- 1998.- Vol.72 (7).- P.5360-5365.

105. Rossmann, M.G. Conservation of the putative receptor attachment site in' picornaviruses Text. / M.G. Rossmann, A.C. Palmenberg // Virology — 1988.-Vol.164.-P. 373-382.

106. Rossmann, M.G. Picornavirus-receptor interactions Text. / M.G. Rossmann, Y. He, R.J. Kuhn // Trends in Microbiol.- 2002.- Vol.10 (7).- P. 324-331.

107. Rossmann, M.G. The canyon hypothesis Text. / M.G. Rossmann // J. Biol. Chem.- 1989.-Vol.264 (25).-P. 14587-14590.

108. Rossmann, M.G. Viral cell recognition and entry Text. / M.G. Rossmann // Protein Sci.- 1994.-Vol.3 .-P. 1712-1725.

109. Sabin A.B. Present position of immunization against poliomyelitis with live virus vaccines Text. / A.B. Sabin // British Med. J.- 1959.- V. 5123.- P. 663-680.

110. Schneider, W.L. Genetic diversity in RNA virus quasispecies is controlled by host-virus interactions Text. / W.L. Schneider, M.J. Roossinck // J. Virol.-2001.-Vol. 75 (14).-P. 6566-6571.

111. Schneider-Schaulies J. Cellular receptors for viruses: links to tropism and pathogenesis Text. / J. Schneider-Schaulies // J. Gen. Virol- 2000.-Vol.81- P.1413-1429.

112. Secrotory pathway function, but not cytoskeletal integrity, is required in poliovirus infection Text. / J. Doedens, L.A. Maynell, M.W. Klymlowsky, K. Kirkegaard//Arch. Virol. Suppl.- 1994.-Vol.9.-P. 159-172.

113. Serum albumin inhibits echovirus uncoating Text. / T. Ward, R.M. Powell, D.J. Evans, J.W. Almond // J. Gen Virol.- 1999.- Vol. 80.- P. 283-290.

114. Shafren, D.R. Viral cell entry induced by cross-linked decay-accelerating factor Text. / D.R. Shafren // J. Virol.- 1998.- Vol.72 (11).- P.9407-9412.

115. Shin, J.-S. Caveolae as portals of entry for microbes Text. / J.-S. Shin, S.N. Abraham // Microbes and infection.- 2001.- Vol.3.- P. 755-761.

116. Short consensus repeat domain 1 of decay-accelerating factor is required for enterovirus 70 binding Text. / T.M. Karnauchow, S. Dawe, D.M. Lublin, K. Dimock//J. Virol.- 1998.-Vol.72 (11).-P.9380-9383.

117. Sialidase-sensitive erythrocyte receptor for enterovirus type 70 Text. / E.T. Utagava, K. Miyamura, A. Mukoyama, R. Kono // J. Gen. Virol 1982-Vol.63.-P. 141-148.

118. Steinhauer, D.A. Rapid evolution of RNA viruses Text. / D.A. Steinhauer, J.J. Holland // Annu. Rev. Microbiol.- 1987.- Vol. 41.- P. 409-433.

119. Structural and functional insights into the interaction of echo viruses and decay-accelerating factor Text. / D.M. Pettigrew, D.T. Williams, D. Kerrigan, D.J. Evans, S.M. Lea, D. Bhella // J. Biol. Chem. 2006. -Vol.281 (8).-P. 5169-5177.

120. Structural studies of two rhinovirus serotypes complexed with fragments of their cellular receptor Text. / P.R. Kolatkar, J. Bella, N.H. Olson, C.M. Bator, T.S. Baker,. M.G. Rossmann // EMBO J.- 1999.- Vol.18.- P. 62496259.

121. Susceptibility of human bone marrow cells and hematopoietic cell lines to coxsackievirus B3 infection Text. / T. Vuorinen, R. Vainionpaa, F. Vanharanta, T. Hyypia// J. Virol.- 1996.- Vol.70 (12).-P. 9018-9023.

122. The coxsackievirus A9 RGD motif is not essential for virus viability Text. / P.J. Hughes, C. Horsnell, T. Hyypia, G. Stanway // J. Virol.- 1995.- Vol.69 (12).-P. 8035-8040.

123. The evolution of RNA viruses: a population genetics view Text. / A. Moya, S.F. Elena, A. Bracho, R. Miralles, E. Barrio // Proc. Natl. Acad. Sci. USA -2000.-Vol. 97 (13).- P.6967-6973.

124. The HeLa cell receptor for enterovirus 70 is decay-accelerating factor (CD55) Text. / T.M. Karnauchow, D.L. Tolson, B.A. Harrison, E. Altman, D.M. Lublin, K. Dimock // J. Virol.- 1996.- Vol.70 (8).- P.5143-5152.

125. The human poliovirus receptor related 2 protein is a new hematopoietic/endothelial homophilic adhesion molecule Text. / M. Lopez, M. Aoubala, F. Jordier, D. Isnardon, S. Gomez, P. Dubreuil // Blood-1998.-Vol.92 (12).- P.4602-4611.

126. The murine CAR homolog is a receptor for coxsackie В viruses and adenoviruses Text. / J.M. Bergelson, A. Krithivas, L. Celi, G. Droguett, M.S. Horwitz, T. Wickham, R.L. Crowell, R.W. Finberg // 1998.- J. Virol.-Vol.72(l).-P. 415-419.

127. The poliovirus receptor CD155 mediates cell-to-matrix contacts by specifically binding to vitronectin Text. / R. Lange, X. Peng, E. Wimmer, M. Lipp, G. Bernhardt//Virology.- 2001.-Vol. 218.-P. 218-227.

128. Tomko, R.P. HCAR and mCAR: the human and mouse cellular receptors for subgroup С adenoviruses and group В coxsackieviruses Text. / R.P. Tomko, R. Xu, L. Philipson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1997.- Vol.94.-P.3352-3356.

129. Tosteson, M.T. Characterization of the ion channels formed by poliovirus in planar lipid membranes Text. / M.T. Tosteson, M. Chow // J. Virol— 1997.-Vol.71 (l).-P. 507-511.

130. Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells Text. / C. Mendelsohn, B. Johnson, K.A. Lionetti, P. Nobis, E. Wimmer, V.R. Racaniello //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1986.-Vol.83.-P.7845-7849.

131. Transgenic mice carrying the human poliovirus receptor: new animal model for study of poliovirus neurovirulence Text. / H. Horie, S. Koike, T. Kurata, Y. Sato-Yoshida, I. Ise, Y. Ota, S. Abe, K. Hioki // J. Virol.- 1994.- V.68 (2).-P. 681-688.

132. Uptake of poliovirus into the endosomal system of HeLa cells Text. / P. Kronenberger, D. Schober, E. Prchla, O. Ofori-Anyinam, R. Vrijsen, B. Rombaut, D. Blaas, R. Fuchs, A. Boeye // Arch. Virol 1998.-Vol. 143-P. 1417-1424.

133. Van der Goot, F.G. Raft membrane domains: from a liquid-ordered membrane phase to a site of pathogen attack Text. / F.G. Van der Goot, T. Harder // Seminars in immunology-2001 Vol.13 - P. 89-97.

134. Wang, X. Coxsackievirus and adenovirus receptor cytoplasmatic and transmembrane domains are not essential for coxsackievirus and adenovirus infection Text. / X. Wang, J.M. Bergelson // J. Virol.- 1999.- Vol.73 (3).-P.2559-2562.

135. Xing, L. Structural analysis of human rhino virus complexed with ICAM-1 reveals the dynamics of receptor-mediated virus uncoating Text. / L. Xing, J.M. Casasnovas, R.H. Cheng // J. Virol.- 2003.- Vol.77 (11).- P. 61016107.

136. Yoshii, T. Replication of enterovirus 70 in non-primate cell cultures Text. / T. Yoshii, K. Natori, R. Kono // J. Gen. Virol.- 1977.- Vol.36 (3).- P.377-384.

137. Zhang, S. Persistent echovirus infection of mouse cells expressing the viral receptor VLA-2 Text. / S. Zhang, V.R.Racaniello // Virology.- 1997.-Vol.235.-P. 293-301.штамм Gregory)

138. Белок Последовательность нуклеотидов

139. VP4 ATGGGAGCGC AAGTATCAAC ACAAAAGACC GGTGCGCATG AAACCGGCTT GAACGCCAGT GGTAGTTCTA ТААТССАСТА САССААСАТА AACTACTATA AAGATGCAGC ATCCAACTCG GCAAATAGGC AAGAATTTTC ACAAGACCCT GGTAAGTTCA CCGAACCAGT GAAGGATATC ATGGTGAAGT CACTACCTGC1. АСТТААС

140. GTTTGAGGCT СТСААССТСА TTGCAA

141. CTCACTATAG GTTGGTGCAG CAGGACGAGT ACACAAGCGC

142. TGGCAATGTC ACATGCTGGT ATCAGACTGG AATAGTCGTC

143. CCGGCGGGCA CTCCGACATC GTGCTCCATC ATGTGTTTTG

144. TATCGGCATG CAATGATTTC TCTGTGAGAT TACTAAAGGA

145. CACGCCATTT ATAGAACAAA CTGCAATACT GCAA

146. VP1 GGTGATGTGG TAGAAGCTGT AGAGAACGCC GTTGCACGTG

147. TGGCAGATAC AATTGGTAGT GGGCCGTCAA ATTCGCAAGC

148. AGTGCCTGCT TTAACAGCAG TTGAGACAGG GCACACATCT

149. CAGGTGACAC CCAGTGATAC CATGCAAACC AGGCATGTCA

150. AGAACTACCA TTCCAGATCT GAGTCCAGCA TTGAAAACTT

151. CCTCAGCAGA TCTGCCTGCG TTTATATGGG AGGATACTGC

152. АСААССААСА CTGACCAGAC ААААТТАТТТ GCCTCATGGA

153. CTATTAGTGC ACGACGCATG GTTCAAATGA GACGCAAGCT

154. AGAGATCTTC ACTTACGTCC GTTTTGATGT GGAGGTGACT

155. TTTGTGATTA CCAGCAAGCA GGACCAGGGC AACCGATTGG

156. GCCAAGACAT GCCACCCCTG ACTCACCAGA TCATGTATAT

157. CCCACCAGGG GGGCCCATTC CAAAGTCTGT CACTGACTAT

158. GCATGGCAAA ССТССАССАА CCCCAGCATT TTCTGGACTG

159. AGGGGAACGC GCCACCCAGA ATGTCTATCC CATTCATTAG

160. CATTGGTAAC GCCTACAGTA ATTTTTACGA CGGGTGGTCT

161. CACTTCTCGC AAAACGGGGT GTATGGCTAC ААСАСАСТСА

162. ACCACATGGG ТСАААТТТАТ GTTAGACACG TGAATGGATC

163. АТСАССАСТС CCTATGACTA GCACTGTTAG AATGTACCTC

164. AAGCCGAAGC ATGTTAAAGC ATGGGTCCCG CGGCCTCCTA

165. GGCTATGCCA ATACGAAAAT GCATCCACGG TGAACTTTAC

166. АСССАСАААС GTCACCGACA AGCGAACCAG САТСААСТАС

167. ATTCCTGAGA CGGTCAAACC AGACCTATCA ААСТАС

168. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU443626.

169. Аминокислотная последовательность структурных белков клона G3123штамм Gregory)1. Белок

170. Аминокислотная последовательность1. VP4 MGAQVSTQKT ANRQEFSQDP1. GAHETGLNAS GKFTEPVKDI1. GSSIIHYTNI MVKSLPALN1. NYYKDAASNS

171. VP2 SPSAEECGYS YLKDNEATAE KFPDALKDMG CLLVVCVPEA NGTNTVQTIV VMPYINNVPM ITVTVAPMCA

172. DRVRSITLGN DQPTHPDVAT LFGQNMYYHY EMGCSQVDGT TNAGMGVGVG DNMFRHHNFT EYNGLRLSTS

173. STITTQESAN CRFYTLESVT LGRAGYTLHV VNEHGLSEGE NLTIYPHQWI LMIIPFVPLD LQ

174. VVVGYGRWPE WERDSPGWWW QCNASKFHQG TAKKFSSTST NLRTNNCATI YSSDSSTYVP

175. VP3 GLPVMNTPGS QNLMEIAEVD QVFGFQVQPG CGSAMATGKF QSSCVLCVPW PAGTPTSCSI

176. NQFLTSDDFQ SVVPVNNVEG LDSVFKHTLL LLAYAPPGAN ISQTHYRLVQ MCFVSACNDF

177. SPSAMPQFDV KLDTMEVYRI GEILNYYAHW APKNRKDAML QDEYTSAGNV SVRLLKDTPF

178. TPELNIPGEV PVQSGNHQSD SGSIKLTFVF GTHIIWDVGL TCWYQTGIVV IEQTAILQ

179. УР1 GDVVEAVENA QVTPSDTMQT TTNTDQTKLF FVITSKQDQG AWQTSTNPSI HFSQNGVYGY KPKHVKAWVP IPETVKPDLS

180. VARVADTIGS RHVKNYHSRS ASWTISARRM NRLGQDMPPL FWTEGNAPPR NTLNHMGQIY RPPRLCQYEN NY

181. GPSNSQAVPA ESSIENFLSR VQMRRKLEIF THQIMYIPPG MSIPFISIGN VRHVNGSSPL ASTVNFTPTN

182. AVETGHTS SACVYMGGYC TYVRFDVEVT GPIPKSVTDY AYSNFYDGWS PMTSTVRMYL VTDKRTSINYштамм Gregory)

183. Белок Последовательность нуклеотидов

184. VP4 ATGGGAGCGC AAGTATCAAC ACAAAAGAC С GGTGCGCATG

185. AAACCGGCTT GAACGCCAGT GGTAGTTCTA TAATCCACTA

186. САССААСАТА ААСТАСТАТА AAGATGCAGC ATCCAACTCG

187. GCAAATAGGC AAGAATTTTC ACAAGACCCT GGTAAGTTCA

188. CCGAACCAGT GAAGGATATC ATGGTGAAGT CACTACCTGC1. АСТТААС

189. VP2 TCGCCGTCTG CTGAAGAGTG TGGGTACAGT GACAGAGTGC

190. GATCCATAAC ACTAGGTAAC TCTACCATCA CAACACAAGA

191. AAGTGCAAAT GTAGTAGTGG GGTATGGTCG ATGGCCTGAG

192. TACCTGAAAG ACAATGAGGC CACTGCTGAA GATCAACCAA

193. CCCACCCTGA TGTAGCAACA TGTAGGTTTT ACACCCTGGA

194. ATCGGTCACG TGGGAAAGAG ATTCACCCGG GTGGTGGTGG

195. AAATTCCCGG ACGCCCTAAA AGATATGGGG CTCTTCGGCC

196. AAAACATGTA СТАССACTAT CTAGGAAGAG CCGGTTACAC

197. ATTGCATGTA CAATGTAATG CATCTAAATT CCATCAGGGA

198. TGCTTGCTAG TGGTCTGTGT ACCGGAAGCA GAGATGGGAT

199. GCAGCCAAGT GGATGGTACT GTAAATGAGC ATGGATTGAG

200. TGAGGGGGAG ACCGCTAAGA AATTCTCTTC TACCAGCACA

201. AATGGGACCA ACATGGTACA GACGATTGTG ACAAATGCCG

202. GTATGGGAGT GGGAGTGGGC AATCTCACTA TATACCCACA

203. TCAGTGGATA AATTTGCGCA CCAATAACTG CGCCACCATC

204. GTCATGCCAT ACATAAACAA CGTACCGATG GACAACATGT

205. TCAGACACCA CAATTTCACA CTAATGATTA TTCCCTTTGT

206. ACCATTAGAC TATTCTTCAG ATTCATCCAC GTACGTGCCC

207. ATAACAGTGA CAGTCGCTCC AATGTGTGCT GAGTATAATG

208. GTTTGAGGCT CTCAACCTCA TTGCAA

209. VP3 GGATTACCTG TCATGAATAC ACCGGGTAGC AACCAGTTTC

210. TGACATCGGA CGACTTCCAG TCACCATCTG CCATGCCACA

211. ATTTGATGTC ACCCCAGAGT TAAATATACC AGGGGAGGTA

212. СААААССТСА TGGAAATTGC TGAAGTCGAC TCGGTGGTGC

213. CAGTCAACAA CGTGGAAGGG AAACTCGACA CAATGGAGGT

214. CTACCGGATT CCAGTGCAGA GTGGTAATCA CCAAAGTGAC

215. CAAGTCTTCG GTTTTCAAGT GCAACCTGGG CTAGATAGCG

216. ТТТТСАААСА CACGCTACTG GGGGAGATTT TGAACTACTA

217. TGCACACTGG TCTGGTAGTA TAAAACTAAC ATTTGTTTTC

218. TGTGGTTCCG CTATGGCTAC GGGTAAATTC CTACTAGCCT

219. ACGCCCCGCC CGGAGCGAAC GCTCCTAAGA ATAGGAAAGA

220. TGCAATGCTG GGCACACACA TTATCTGGGA TGTTGGACTG

221. CAGTCATCGT GTGTCTTATG TGTGCCTTGG ATTAGTCAAA

222. CTCACTATAG GTTGGTGCAG CAGGACGAGT ACACAAGCGC

223. TGGCAATGTC ACATGCTGGT ATCAGACTGG AATAGTCGTC

224. CCGGCGGGCA CTCCGACATC GTGCTCCATC ATGTGTTTTG

225. TATCGGCATG CAATGATTTC TCTGTGAGAT TACTAAAGGA

226. CACGCCATTT ATAGAACAAA CTGCAATACT GCAA

227. VP1 GGTGATGTGG TAGAAGCTGT AGAGAACGCC GTTGCACGTG

228. TGGCAGATAC AATTGGTAGT GGGCCGTCAA ATTCGCAAGC

229. AGTGCCTGCT TTAACAGCAG TTGAGACAGG GCACACATCT

230. CAGGTGACAC CCAGTGATAC CATGCAAACC AGGCATGTCA

231. AGAACTACCA TTCCAGATCT GAGTCCAGCA TTGAAAACTT

232. CCTCAGCAGA TCTGCCTGCG TTTATATGGG AGGATACTGC

233. АСААССААСА CTGACCAGAC ААААТТАТТТ GCCTCATGGA

234. CTATTAGTGC ACGACGCATG GTTCAAATGA GACGCAAGCT

235. AGAGATCTTC ACTTACGTCC GTTTTGATGT GGAGGTGACT

236. TTTGTGATTA CCAGCAAGCA GGACCAGGGC AACCGATTGG

237. GCCAAGACAT GCCACCCCTG ACTCACCAGA TCATGTATAT

238. CCCACCAGGG GGGCCCATTC CAAAGTCTGT CACTGACTAT

239. GCATGGCAAA ССТССАССАА CCCCAGCATT TTCTGGACTG

240. AGGGGAACGC GCCACCCAGA ATGTCTATCC CATTCATTAG

241. CATTGGTAAC GCCTACAGTA ATTTTTACGA CGGGTGGTCT

242. CACTTCTCGC AAAACGGGGT GTATGGCTAC ААСАСАСТСА

243. ACCACATGGG ТСАААТТТАТ GTTAGACACG TGAATGGATC

244. АТСАССАСТС CCTATGACTA GCACTGTTAG AATGTACCTC

245. AAGCCGAAGC ATGTTAAAGC ATGGGTCCCG CGGCCTCCTA

246. GGCTATGCCA ATACGAAAAT GCATCCACGG TGAACTTTAC

247. АСССАСАААС GTCACCGACA AGCGAACCAG САТСААСТАС

248. ATTCCTGAGA CGGTCAAACC AGACCTATCA ААСТАС

249. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU443625.

250. Аминокислотная последовательность структурных белков клона G28 (штамм1. Gregory)

251. Белок Аминокислотная последовательность

252. VP4 MGAQVSTQKT GAHETGLNAS GSSIIHYTNI NYYKDAASNS

253. ANRQEFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN

254. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVGYGRWPE

255. YLKDNEATAE DQPTHPDVAT CRFYTLESVT WERDSPGWWW

256. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTLHV QCNASKFHQG

257. CLLVVCVPEA EMGCSQVDGT VNEHGLSEGE TAKKFSSTST

258. NGTNMVQTIV TNAGMGVGVG NLTIYPHQWI NLRTNNCATI

259. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1.VTVAPMCA EYNGLRLSTS LQ

260. VP3 GLPVMNTPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV

261. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMEVYRI PVQSGNHQSD

262. QVFGFQVQPG LDSVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF

263. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKNRKDAML GTHIIWDVGL

264. QSSCVLCVPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV

265. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTAILQ

266. VP1 GDVVEAVENA VARVADTIGS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS

267. QVTPSDTMQT RHVKNYHSRS ESSIENFLSR SACVYMGGYC

268. TTNTDQTKLF ASWTISARRM VQMRRKLEIF TYVRFDVEVT

269. FVITSKQDQG NRLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY

270. AWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS

271. HFSQNGVYGY NTLNHMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYL

272. KPKHVKAWVP RPPRLCQYEN ASTVNFTPTN VTDKRTSINY1.ETVKPDLS NY штамм Gregory)

273. Белок Последовательность нуклеотидов

274. VP 4 ATGGGAGCGC AAGTATCAAC ACAAAAGACC GGTGCGCATG

275. AAACCGGCTT GAACGCCAGT GGTAGTTCTA ТААТССАСТА

276. САССААСАТА AACTACTATA AAGATGCAGC ATCCAACTCG

277. GCAAATAGGC AAGAATTTTC ACAAGACCCT GGTAAGTTCA

278. CCGAACCAGT GAAGGATATC ATGGTGAAGT CACTACCTGC1. АСТТААС

279. VP2 TCGCCGTCTG CTGAAGAGTG TGGGTACAGT GACAGAGTGC

280. GATCCATAAC ACTAGGTAAC ТСТАССАТСА CAACACAAGA

281. AAGTGCAAAT GTAGTAGTGG GGTATGGTCG ATGGCCTGAG

282. TACCTGAAAG ACAATGAGGC CACTGCTGAA GATCAACCAA

283. CCCACCCTGA TGTAGCAACA TGTAGGTTTT ACACCCTGGA

284. ATCGGTCACG TGGGAAAGAG ATTCACCCGG GTGGTGGTGG

285. AAATTCCCGG ACGCCCTAAA AGATATGGGG CTCTTCGGCC

286. AAAACATGTA СТАССАСТАТ CTAGGAAGAG CCGGTTACAC

287. ATTGCATGTA CAATGTAATG САТСТАААТТ CCATCAGGGA

288. TGCTTGCTAG TGGTCTGTGT ACCGGAAGCA GAGATGGGAT

289. GCGGCCAAGT GGATGGTACT GTAAATGAGC ATGGATTGAG

290. TGAGGGGGAG ACCGCTAAGA ААТТСТСТТС TACCAGCACA

291. AATGGGACCA ACACGGTACA GACGATTGTG ACAAATGCCG

292. GTATGGGAGT GGGAGTGGGC ААТСТСАСТА ТАТАСССАСА

293. TCAGTGGATA AATTTGCGCA CCAATAACTG CGCCACCATC

294. GTCATGCCAT АСАТАААСАА CGTACCGATG GACAACATGT

295. ТСAGАСАССА СААТТТСАСА CTAATGATTA TTCCCTTTGT

296. ACCATTAGAC TATTCTTCAG ATТCATССАС GTACGTGCCC

297. ATAACAGTGA CAGTCGCTCC AATGTGTGCT GAGTATAATG

298. GTTTGAGGCT СТСААССТСА TTGCAA

299. VP3 GGATTACCTG TCATGAATAC ACCGGGTAGC AACCAGTTTC

300. TGACATCGGA CGACTTCCAG TCACCATCTG CCATGCCACA

301. ATTTGATGTC ACCCCAGAGT ТАААТАТАСС AGGGGAGGTA

302. СААААССТСА TGGAAATTGC TGAAGTCGAC TCGGTGGTGC

303. CAGTCAACAA CGTGGAAGGG AAACTCGACA CAATGGAGGT

304. CTACCGGATT CCAGTGCAGA GTGGTAATCA CCAAAGTGAC

305. CAAGTCTTCG GTTTTCAAGT GCAACCTGGG CTAGATAGCG

306. ТТТТСАААСА CACGCTACTG GGGGAGATTT TGAACTACTA

307. TGCACACTGG TCTGGTAGTA ТААААСТААС ATTTGTTTTC

308. TGTGGTTCCG CTATGGCTAC GGGTAAATTC CTACTAGCCT

309. ACGCCCCGCC CGGAGCGAAC GCTCCTAAGA ATAGGAAAGA

310. TGCAATGCTG GGCACACACA TTATCTGGGA TGTTGGACTG

311. CAGTCATCGT GTGTCTTATG TGTGCCTTGG ATTAGTCAAA

312. CTCACTATAG GTTGGTGCAG CAGGACGAGT ACACAAGCGC

313. TGGCAATGTC ACATGCTGGT ATCAGACTGG AATAGTCGTC

314. CCGGCGGGCA CTCCGACATC GTGCTCCATC ATGTGTTTTG

315. TATCGGCATG CAATGATTTC TCTGTGAGAT TACTAAAGGA

316. CACGCCATTT ATAGAACAAA CTGCAATACT GCAA

317. VP1 GGTGATGTGG TAGAAGCTGT AGAGAACGCC GTTGCACGTG

318. TGGCAGATAC AATTGGTAGT GGGCCGTCAA ATTCGCAAGC

319. AGTGCCTGCT TTAACAGCAG TTGAGACAGG GCACACATCT

320. CAGGTGACAC CCAGTGATAC CATGCAAACC AGGCATGTCA

321. AGAACTACCA TTCCAGATCT GAGTCCAGCA TTGAAAACTT

322. CCTCAGCAGA TCTGCCTGCG TTTATATGGG AGGATACTGC

323. АСААССААСА CTGACCAGAC ААААТТАТТТ GCCTCATGGA

324. CTATTAGTGC ACGACGCATG GTTCAAATGA GACGCAAGCT

325. AGAGATCTTC ACTTACGTCC GTTTTGATGT GGAGGTGACT

326. TTTGTGATTA CCAGCAAGCA GGACCAGGGC AACCGATTGG

327. GCCAAGACAT GCCACCCCTG ACTCACCAGA TCATGTATAT

328. CCCACCAGGG GGGCCCATTC CAAAGTCTGT CACTGACTAT

329. GCATGGCAAA ССТССАССАА CCCCAGCATT TTCTGGACTG

330. AGGGGAACGC GCCACCCAGA ATGTCTATCC CATТCATTAG

331. CATTGGTAAC GCCTACAGTA ATTTTTACGA CGGGTGGTCT

332. CACTTCTCGC AAAACGGGGT GTATGGCTAC ААСАСАС ТСA

333. ACCACATGGG ТСАААТТТАТ GTTAGACACG TGAATGGATC

334. АТСАССАСТС CCTATGACTA GCACTGTTAG AATGTACCTC

335. AAGCCGAAGC ATGTTAAAGC ATGGGTCCCG CGGCCTCCTA

336. GGCTATGCCA ATACGAAAAT GCATCCACGG TGAACTTTAC

337. АС С САСАААС GTCACCGACA AGCGAACCAG CATCAACTAC

338. ATTCCTGAGA CGGTCAAACC AGACCTATCA AACTAC

339. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU443623.

340. Аминокислотная последовательность структурных белков клона G3123штамм Gregory)

341. Белок Аминокислотная последовательность

342. VP4 MGAQVSTQKT GAHETGLNAS GSSIIHYTNI NYYKDAASNS

343. ANRQEFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN

344. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVGYGRWPE

345. YLKDNEATAE DQPTHPDVAT CRFYTLESVT WERDSPGWWW

346. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTLHV QCNASKFHQG

347. CLLVVCVPEA EMGCGQVDGT VNEHGLSEGE TAKKFSSTST

348. NGTNTVQTIV TNAGMGVGVG NLTIYPHQWI NLRTNNCATI

349. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1.VTVAPMCA EYNGLRLSTS LQ

350. VP3 GLPVMNTPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV

351. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMEVYRI PVQSGNHQSD

352. QVFGFQVQPG LDSVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF

353. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKNRKDAML GTHIIWDVGL

354. QSSCVLCVPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV

355. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTAILQ

356. VP1 GDVVEAVENA VARVADTIGS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS

357. QVTPSDTMQT RHVKNYHSRS ESSIENFLSR SACVYMGGYC

358. TTNTDQTKLF ASWTISARRM VQMRRKLEIF TYVRFDVEVT

359. FVITSKQDQG NRLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY

360. AWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS

361. HFSQNGVYGY NTLNHMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYL

362. KPKHVKAWVP RPPRLCQYEN ASTVNFTPTN VTDKRTSINY1.ETVKPDLS NY штамм 7611)

363. Белок Последовательность нуклеотидов

364. VP4 ATGGGAGCTC AAGTGTCGAC ACAAAAGACT GGAGCGCATG AGACCGGTTT GAGTGCCAGC GGGAACTCAA ТТАТАСАТТА САССААСАТС AACTACTATA AGGATGCCGC GTCAAACTCA GCAAACAGGC AAGACTTCTC CCAAGATCCC GGGAAGTTCA CAGAACCGGT GAAAGATATA ATGGTGAAAT CACTACCTGC1. ТСТАААС

365. GCTTGAGATT GGCGACTTCG TTGCAA

366. CGCACTATAG AGGAAATGTC CCAGCAGGCA TTTCAGCATG TACACCATTT

367. ACTAGTGCAA ACTTGTTGGT CTCCAACATC CAATGACTTC ATAGAGCAAA

368. CAAGATGAGT ATCAGACAGG GTGCTCCATC TCGGTGCGCT CTGCCCTCCT

369. ACACCAGTGC GATTGTGGTT ATGTGTTTTG TGCTAAAAGA GCAA

370. VP1 GGTGATGTGG TGGCAGACAC TGTGCCTGCT CAAGTAACCC ACAACTACCA TCTTTGTAGG ACAACCAATA CCATCAACGC CGAGATGTTC TTTGTGATTA GCCAAGATAT ACCACCAGGG ACGTGGCAAA AGGGAAATGC TATTGGCAAT CATTTCTCTC ATCGTATGGG CTCACCACTA AAGCCAAAGC GGTTGTGCCA ACCCACCAAC ATACCAGAGA

371. TGGAGGCAGT CATTAGCAGT CTGACCGCTG CCAGTGACAT CTCTAGATCA TCGGCATGCG CCGATGCCTC ACGGCGTATG ACGTACGTTA CCAGTAAACA GCCACCACTG GGCCCTATAC CATCCACCAA ACCACCCAGG GCCTACAGTA AAAATGGTGT CCAAATTTAC CCTATGACAA ACGTGAAAGT GTACGTGAAT ATCACTGAGA CAGTCAAACC

372. CGAAAATGCC GGGCCATCAA TGGAGACGGG СATACAGACС GAATCCAGTA TCTACATGGG CAAGTTGTTT GTACAAATGA GGTTTGACGT AGATCAAGGG ACACACCAAA CGAAGTCAGT CCCGAGTATC ATGTCCATCC ATTTCTATGA GTACGGTTAC GTCAGGCACG GCACAGTTAG GTGGGTCCCA GCATCAACTG AGAGAACAAG TGATGTTTCA

373. GTTGCACGCG ATTCACAAGC ACACACGTCT AGGCACGTGC TTGAGAACTT AGAATACCAC GCGTCATGGA GGCGCAAACT GGAAGTGACA ACCAAACTGG TTATGTATAT AACGGACTAC TTTTGGACTG CTTTCATTAG CGGCTGGTCA AATACGCTCA TGAACGGATC GATGTACTTC CGCCCGCCTA TCAACTTCAA CATTAACTAC AC AT AC

374. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU167520.

375. Аминокислотная последовательность структурных белков клона 5.9.11.5штамм 7611)

376. Белок Аминокислотная последовательность

377. VP 4 MGAQVSTQKT GAHETGLSAS GNSIIHYTNI NYYKDAASNS

378. ANRQDFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN

379. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVAYGRWPE

380. YLKDDEATAE DQPTQPDVAT CRFYTLESVT WEKDSPGWWW

381. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTIHV QCNASKFHQG

382. CLMVVCVPEA EMGCSQIDGT VNEHSLSEGE TAKKFAATST

383. NGTNTVQSIV TNAGMGVGVG NLTIFPHQWI NLRTNNCATI

384. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1. VTVTVAPMCA EYNGLRLATS LQ

385. VP3 GLPVMITPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV

386. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMDIYRI PVQSGNHQST

387. QVFGFQVQPG LDNVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF

388. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKSRKDAML GTHIIWDVGL

389. QSSCVLCIPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV

390. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTALLQ

391. VP1 GDVVEAVENA VARVADTISS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS

392. QVTPSDIIQT RHVHNYHSRS ESSIENFLCR SACVYMGEYH

393. TTNTDASKLF ASWTINARRM VQMRRKLEMF TYVRFDVEVT

394. FVITSKQDQG TKLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY

395. TWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS

396. HFSQNGVYGY NTLNRMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYF

397. KPKHVKVWVP RPPRLCQYVN ASTVNFKPTN ITEKRTSINY1.ETVKPDVS TY штамм 7611)

398. Белок Последовательность нуклеотидов

399. VP 4 ATGGGAGCTC AAGTGTCGAC ACAAAAGACT GGAGCGCATG

400. AGACCGGTTT GAGTGCCAGC GGGAACTCAA TTATACATTA

401. САССААСАТС ААСТАСТАТА AGGATGCCGC GTCAAACTCA

402. GCAAACAGGC AAGACTTCTC CCAAGATCCC GGGAAGTTCA

403. CAGAACCGGT GAAAGATATA ATGGTGAAAT CACTACCTGC1. ТСТАААС

404. VP2 TCACCATCTG CCGAGGAGTG CGGTTATAGC GACAGAGTGC

405. GTTCCATCAC ACTTGGTAAT ТССАССАТАА CAACCCAGGA

406. GAGCGCCAAC GTGGTGGTGG CATATGGCAG ATGGCCCGAG

407. TACTTGAAGG ACGATGAGGC CACCGCCGAG GACCAACCAA

408. CCCAGCCGGA TGTAGCTACA TGTAGGTTCT ACACATTGGA

409. GTCAGTCACA TGGGAGAAAG ACTCACCAGG ATGGTGGTGG

410. AAGTTTCCAG ACGCTCTGAA GGACATGGGC TTATTTGGGC

411. AGAATATGTA СТАТСАСТАС CTAGGTAGGG CTGGATACAC

412. TATACACGTG CAGTGCAACG CCTCCAAATT CCACCAGGGC

413. TGCCTGATGG TTGTCTGCGT GCCAGAGGCG GAAATGGGCT

414. GTAGTCAGAT TGATGGTACA GTAAATGAGC ACAATCTGAG

415. TGAAGGAGAG ACTGCTAAGA AATTTGCAGC CACTTCCACT

416. AACGGAACAA ATACAGTCCA ATCAATCGTG ACGAATGCAG

417. GCATGGGAGT GGGTGTGGGC AACTTAACCA TTTTCCCACA

418. TCAATGGATT AACTTGCGAA CAAACAATTG TGCCACTATA

419. GTGATGCCAT АСАТСААСАА TGTGCCTATG GACAACATGT

420. ТTAGАСАССА СААТТТТАСА CTGATGATCA TACCCTTTGT

421. GCCATTGGAT TACTCGTCAG ATTCATCTAC ATATGTACCA

422. GTTACAGTCA CGGTGGCCCC GATGTGCGCA GAATACAATG

423. GCTTGAGATT GGCGACTTCG TTGCAA

424. УРЗ GGTTTGCCTG TAATGATCAC CCCAGGAAGT AACCAGTTCT

425. TGACCTCAGA CGATTTTCAA TCACCATCAG CCATGCCACA

426. GTTTGATGTA АСАССAGAGТ TGAACATACC TGGTGAAGTG

427. CAGAACCTCA TGGAGATTGC AGAGGTCGAC TCCGTGGTTC

428. CAGTAAACAA TGTGGAAGGG AAGCTGGACA CGATGGATAT

429. CTATCGAATT CCTGTACAGA GTGGCAACCA CCAGAGTACA

430. CAAGTGTTTG GCTTCCAGGT GCAGCCAGGG TTGGACAATG

431. TGTTCAAGCA CACATTATTG GGGGAAATAC TGAACTACTA

432. TGCACACTGG TCAGGGAGCA TCAAACTCAC GTTCGTCTTC

433. TGCGGTTCAG CCATGGCCAC CGGGAAGTTC CTACTTGCGT

434. ATGCACCACC AGGGGCGAAT GCCCCGAAGA GCAGGAAGGA

435. TGCAATGCTG GGCACGCACA TCATCTGGGA TGTGGGGTTG

436. CAGTCATCAT GCGTCTTGTG TATACCTTGG ATTAGTCAGA

437. CGCACTATAG ACTAGTGCAA CAAGATGAGT ACACCAGTGC

438. AGGAAATGTC ACTTGTTGGT ATCAGACAGG GATTGTGGTT

439. CCAGCAGGCA СТССААСАТС GTGCTCCATC ATGTGTTTTG

440. TTTCAGCATG CAATGACTTC TCGGTGCGCT TGCTAAAAGA

441. ТАСАССАТТТ ATAGAGCAAA CTGCCCTCCT GCAA

442. VP1 GGTGATGTGG TGGAGGCAGT CGAAAATGCC GTTGCACGCG

443. TGGCAGACAC CATTAGCAGT GGGCCATCAA ATTCACAAGC

444. TGTGCCTGCT CTGACCGCTG TGGAGACGGG ACACACGTCT

445. CAAGTAACCC CCAGTGACAT CATACAGACC AGGCACGTGC

446. АСААСТАССА CTCTAGATCA GAATCCAGTA TTGAGAACTT

447. TCTTTGTAGG TCGGCATGCG TCTACATGGG AGAATACCAC

448. АСААССААТА CCGATGCCTC CAAGTTGTTT GCGTCATGGA

449. CCATCAACGC ACGGCGTATG GTACAAATGA GGCGCAAACT

450. CGAGATGTTC ACGTACGTTA GGTTTGACGT GGAAGTGACA

451. TTTGTGATTA CCAGTAAACA AGATCAAGGG ACCAAACTGG

452. GCCAAGATAT GCCACCACTG ACACACCAAA TTATGTATAT

453. ACCACCAGGG GGCCCTATAC CGAAGTCAGT AACGGACTAC

454. ACGTGGCAAA САТССАССАА CCCGAGTATC TTTTGGACTG

455. AGGGAAATGC ACCACCCAGG ATGTCCATCC CTTTCATTAG

456. TATTGGCAAT GCCTACAGTA ATTTCTATGA CGGCTGGTCA

457. САТТТСТСТС AAAATGGTGT GTACGGTTAC AATACGCTCA

458. ATCGTATGGG ССАААТТТАС GTCAGGCACG TGAACGGATC

459. СТСАССАСТА CCTATGACAA GCACAGTTAG GATGTACTTC

460. AAGCCAAAGC ACGTGAAAGT GTGGGTCCCA CGCCCGCCTA

461. GGTTGTGCCA GTACGTGAAT GCATCAACTG TCAACTTCAA

462. АСССАССААС ATCACTGAGA AGAGAACAAG CATTAACTAC

463. ATACCAGAGA CAGTCAAACC TGATGTTTCA ACATAC

464. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU167521.

465. Аминокислотная последовательность структурных белков клона 101 (штамм7611)

466. Белок Аминокислотная последовательность

467. VP4 MGAQVSTQKT GAHETGLSAS GNSIIHYTNI NYYKDAASNS

468. ANRQDFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN

469. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVAYGRWPE

470. YLKDDEATAE DQPTQPDVAT CRFYTLESVT WEKDSPGWWW

471. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTIHV QCNASKFHQG

472. CLMVVCVPEA EMGCSQIDGT VNEHNLSEGE TAKKFAATST

473. NGTNTVQSIV TNAGMGVGVG NLTIFPHQWI NLRTNNCATI

474. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1. VTVTVAPMCA EYNGLRLATS LQ

475. VP3 GLPVMITPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV

476. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMDIYRI PVQSGNHQST

477. QVFGFQVQPG LDNVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF

478. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKSRKDAML GTHIIWDVGL

479. QSSCVLCIPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV

480. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTALLQ

481. VP1 GDVVEAVENA VARVADTISS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS

482. QVTPSDIIQT RHVHNYHSRS ESSIENFLCR SACVYMGEYH

483. TTNTDASKLF ASWTINARRM VQMRRKLEMF TYVRFDVEVT '

484. FVITSKQDQG TKLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY

485. TWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS

486. HFSQNGVYGY NTLNRMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYF

487. KPKHVKVWVP RPPRLCQYVN ASTVNFKPTN ITEKRTSINY1.ETVKPDVS TY штамм 7611)

488. Белок Последовательность нуклеотидов

489. VP4 ATGGGAGCTC AAGTGTCGAC ACAAAAGACT GGAGCGCATG

490. AGACCGGTTT GAGTGCCAGC GGGAACTCAA TTATACATTA

491. САССААСAT С AACTACTATA AGGATGCCGC GTCAAACTCA

492. GCAAACAGGC AAGACTTCTC CCAAGATCCC GGGAAGTTCA

493. CAGAACCGGT GAAAGATATA ATGGTGAAAT CACTACCTGC1. ТСТАААС

494. VP2 TCACCATCTG CCGAGGAGTG CGGTTATAGC GACAGAGTGC

495. GTTCCATCAC ACTTGGTAAT ТССАССАТАА CAACCCAGGA

496. GAGCGCCAAC GTGGTGGTGG CATATGGCAG ATGGCCCGAG

497. TACTTGAAGG ACGATGAGGC CACCGCCGAG GACCAACCAA

498. CCCAGCCGGA TGTAGCTACA TGTAGGTTCT ACACATTGGA

499. GTCAGTCACA TGGGAGAAAG ACTCACCAGG ATGGTGGTGG

500. AAGTTTCCAG ACGCTCTGAA GGACATGGGC TTATTTGGGC

501. AGAATATGTA СТАТСАСТАС CTAGGTAGGG CTGGATACAC

502. TATACACGTG CAGTGCAACG ССТССАААТТ CCACCAGGGC

503. TGCCTGATGG TTGTCTGCGT -GCCAGAGGCG GAAATGGGCT

504. GTAGTCAGAT TGATGGTACA GTAAATGAGC ACAGTCTGAG

505. TGAAGGAGAG ACTGCTAAGA AATTTGCAGC CACTTCCACT

506. AACGAAACAA ATACAGTCCA ATCAATCGTG ACGAATGCAG

507. GCATGGGAGT GGGTGTGGGC AACTTAACCA TTTTCCCACA

508. TCAATGGATT AACTTGCGAA CAAACAATTG TGCCACTATA

509. GTGATGCCAT АСАТСААСАА TGTGCCTATG GACAACATGT

510. TTAGACACCA СААТТТТАСА СTGATGATСA TACCCTTTGT

511. GCCATTGGAT TACTCGTCAG ATTCATCTAC ATATGTACCA

512. GTTACAGTCA CGGTGGCCCC GATGTGCGCA GAATACAATG

513. GCTTGAGATT GGCGACTTCG TTGCAA ■

514. VP3 GGTTTGCCTG TAATGATCAC CCCAGGAAGT AACCAGTTCT

515. TGACCTCAGA CGATTTTCAA TCACCATCAG CCATGCCACA

516. GTTTGATGTA ACACCAGAGT TGAACATACC TGGTGAAGTG

517. CAGAACCTCA TGGAGATTGC AGAGGTCGAC TCCGTGGTTC

518. CAGTAAACAA TGTGGAAGGG AAGCTGGACA CGATGGATAT

519. CTATCGAATT CCTGTACAGA GTGGCAACCA CCAGAGTACA

520. CAAGTGTTTG GCTTCCAGGT GCAGCCAGGG TTGGACAATG

521. TGTTCAAGCA CACATTATTG GGGGAAATAC TGAACTACTA

522. TGCACACTGG TCAGGGAGCA TCAAACTCAC GTTCGTCTTC

523. TGCGGTTCAG CCATGGCCAC CGGGAAGTTC CTACTTGCGT

524. ATGCACCACC AGGGGCGAAT GCCCCGAAGA GCAGGAAGGA

525. TGCAATGCTG GGCACGCACA TCATCTGGGA TGTGGGGTTG

526. CAGTCATCAT GCGTCTTGTG TATACCTTGG ATTAGTCAGA

527. CGCACTATAG ACTAGTGCAA CAAGATGAGT ACACCAGTGC

528. AGGAAATGTC ACTTGTTGGT ATCAGACAGG GATTGTGGTT

529. CCAGCAGGCA СТССААСАТС GTGCTCCATC ATGTGTTTTG

530. TTTCAGCATG CAATGACTTC TCGGTGCGCT TGCTAAAAGA

531. ТАСАССАТТТ ATAGAGCAAA CTGCCCTCCT GCAA

532. VP1 GGTGATGTGG TGGAGGCAGT CGAAAATGCC GTTGCACGCG

533. TGGCAGACAC CATTAGCAGT GGGCCATCAA ATTCACAAGC

534. TGTGCCTGCT CTGACCGCTG TGGAGACGGG ACACACGTCT

535. CAAGTAACCC CCAGTGACAT CATACAGACC AGGCACGTGC

536. АСААСТАССА CTCTAGATCA GAATCCAGTA TTGAGAACTT

537. TCTTTGTAGG TCGGCATGCG TCTACATGGG AGAATACCAC

538. АСААССААТА CCGATGCCTC CAAGTTGTTT GCGTCATGGA

539. CCATCAACGC ACGGCGTATG GTACAAATGA GGCGCAAACT

540. CGAGATGTTC ACGTACGTTA GGTTTGACGT GGAAGTGACA ■

541. TTTGTGATTA CCAGTAAACA AGATCAAGGG ACCAAACTGG

542. GCCAAGATAT GCCACCACTG АС АС АС С AAA TTATGTATAT

543. ACCACCAGGG GGCCCTATAC CGAAGTCAGT AACGGACTAC

544. ACGTGGCAAA САТССАССАА CCCGAGTATC TTTTGGACTG

545. AGGGAAATGC ACCACCCAGG ATGTCCATCC CTTTCATTAG

546. TATTGGCAAT GCCTACAGTA ATTTCTATGA CGGCTGGTCA

547. САТТТСТСТС AAAATGGTGT GTACGGTTAC AATACGCTCA

548. ATCGTATGGG ССАААТТТАС GTCAGGCACG TGAACGGATC

549. СТСАССАСТА ССТАТGACAA GCACAGTTAG GATGTACTTC

550. AAGCCAAAGC ACGTGAAAGT GTGGGTCCCA CGCCCGCCTA

551. GGTTGTGCCA GTACGTGAAT GCATCAACTG ТСААСТТСАА

552. АСССАССААС ATCACTGAGA AGAGAACAAG САТТААСТАС

553. ATACCAGAGA CAGTCAAACC TGATGTTTCG АСАТАС

554. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU167522.7611)

555. Белок Аминокислотная последовательность

556. VP4 MGAQVSTQKT GAHETGLSAS GNSIIHYTNI NYYKDAASNS

557. ANRQDFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN

558. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVAYGRWPE

559. YLKDDEATAE DQPTQPDVAT CRFYTLESVT WEKDSPGWWW

560. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTIHV QCNASKFHQG

561. CLMVVCVPEA EMGCSQIDGT VNEHSLSEGE TAKKFAATST

562. NETNTVQSIV TNAGMGVGVG NLTIFPHQWI NLRTNNCATI

563. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1. VTVTVAPMCA EYNGLRLATS LQ

564. УРЗ GLPVMITPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV

565. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMDIYRI PVQSGNHQST

566. QVFGFQVQPG LDNVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF

567. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKSRKDAML GTHIIWDVGL

568. QSSCVLCIPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV

569. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTALLQ

570. VP1 GDVVEAVENA VARVADTISS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS

571. QVTPSDIIQT RHVHNYHSRS ESSIENFLCR SACVYMGEYH

572. TTNTDASKLF ASWTINARRM VQMRRKLEMF TYVRFDVEVT

573. FVITSKQDQG TKLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY

574. TWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS

575. HFSQNGVYGY NTLNRMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYF

576. KPKHVKVWVP RPPRLCQYVN ASTVNFKPTN ITEKRTSINY1.ETVKPDVS TY

Информация о работе

Фадеев, Федор Алексеевич
кандидата биологических наук
Москва, 2008
ВАК 03.00.06

Диссертация

Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11 - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11 ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Фадеев, Федор Алексеевич

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11"

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Фадеев, Федор Алексеевич

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Фадеев, Федор Алексеевич, Москва

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология