Исследование взаимосвязи липидного состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток

Бедулева, Любовь Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование взаимосвязи липидного состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Исследование взаимосвязи липидного состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток"

На правах рукописи

ББДУЛЕВА Любовь Викторовна

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ЛИПИДНОГО СОСТАВА И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК

Специальность: 03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань-2004

Работа выполнена на кафедре биохимии и биотехнологии Тверского государственного университета, на кафедре иммунологии Удмуртского государственного университета.

Научный руководитель -

доктор биологических наук, профессор Грибанов Геннадий Александрович Официальные оппоненты -

доктор биологических наук, профессор Ишмухаметова Диляра Галимовна доктор медицинских наук, профессор Бутолин Евгений Германович

Ведущая организация - ГНЦ РФ - Институт иммунологии Минздрава России

Защита состоится 21 октября 2004 г.

в 14:30 на заседании диссертационного совета Д 212.081.08 в Казанском государственном университете по адресу: 420008, г. Казань, ул. Кремлевская,18.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского государственного университета по адресу: 420008, г. Казань, ул. Кремлевская,18.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук,

доцент

Аскарова А.Н.

8£>

2005-4 12439

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Ключевое положение в иерархии систем управления иммунокомпетентных клеток (ИКК) занимают мембраны, на которых сосредоточены многие функциональные системы клеток Определяющая роль в молекулярной организации и функционировании биологических мембран принадлежит липидам. Липидный состав детерминирует физико-химическое состояние мембран- их эластические и реологические свойства, проницаемость, стабильность, заряд (С.В Конев, 1987; Р. Геннис, 1997). Современные исследования показывают, что липидные домены мембран создают функциональные «платформы» для множества сигнальных и транспортных путей клеток (М Marmor, 2001; F.Van Laethem, 2002; L Bini, 2003) Некоторые липиды и продукты их метаболизма несут информационную нагрузку, действуя как вторичные посредники в клетках при передаче сигнала (Р. Геннис, 1997; D.R Jones, 1999), включаясь в межклеточные (P. Grandmaison, 2004) и межсистемные взаимодействия (Е Прахин, 2000; Р.Н Степаненко, 2001) Известно, что регуляция клеточных функций биологически-активными соединениями, в частности, гормонами, простагландинами опосредована изменениями в липидном составе мембран клеток-мишеней (С.В Конев, 1987; П В Сергеев, 1998; Э.А Доценко2001, F. Van Laethem, 2003). Вследствие кооперативной организации липидного компонента даже незначительные сдвиги в содержании отдельных липидов способны реализоваться в крупномасштабной глобальной перестройке мембран с гигантским коэффициентом усиления (С В Конев, 1987) Все это свидетельствует о том, что липиды занимают важное место среди факторов регуляции мембранных процессов клеток

Специализированные клетки организма, к которым относят и ИКК, имеют ряд особенностей липидного состава Как дифференцировка клеток, так и потеря клетками специфических функций сопровождается изменениями в организации и составе липидов мембран (Л Д Бергельсон, 1984, M Ricardo, 1986, M Chabot, 1990, S Malapati, 2001) Это позволяет полагать, что липидный состав

может быть ответственен за проявление специфиче« свойств клеток Гетерогенность популяций клеток иммун

бокая морфо-функциональная специализация предполагают наличие особенностей в их липидном составе Поэтому интерес представляет сравнительный анализ липидного состава популяций ИКК в связи с и их функциональными свойствами

Функциональная активность (ФА) ИКК также находится под контролем их липидного состава Цитотоксическая активность киллеров (В А Извекова, 1991), хемотаксис нейтрофилов (В Wolach, 1992), реакция бласгтрансформации лимфоцитов на митогены (I Seres, 1996) существенно зависят от липидного состава этих клеток При этом исследователи отмечают ведущую роль холестерина (Р Kabouridis, 2000, Э. Доценко, 2001) и жирных кислот (T. Stulnig, 2001, S Kew, 2003; P. Yaqoob, 2003) в регуляции функциональной активности ИКК в связи с их существенным влиянием на физико-химическое состояние мембран, а также ФТИ, с которым ассоциированы многие рецепторы ИКК (В А Извекова, 1991) На клиническом материале показано, что нарушения функциональной активности ИКК сопровождаются изменениями в их липидном составе Обнаружены изменения в липидном составе ИКК при состояниях гиперчувствительности, иммунодефицитах (И.А Горошинская, 1999, Е Прахин, 2000, V. Pratt, 2002) Однако эти немногочисленные данные лишь открывают перспективу подобных исследований Структурно-функциональная связь липидного состава с активностью ИКК остается не раскрытой и требует дальнейших исследований

Для изучения взаимосвязи между липидным составом и функциональной активностью ИКК наряду с физиологическими используют различные экспериментальные модели, предполагающие модификацию липидного состава клеток Липотропные и антиоксидантные свойства а-токоферола (X Wang, 2000) позволяют рассматривать его как фактор модификации липидного состава ИКК Кроме того, витамин Е действует на функциональную активность ИКК (M De la Fuente, 2000) Поэтому влияние а-токоферола на липидный состав ИКК может быть удобной моделью в рамках исследований взаимосвязи между изменениями липидного КОМРРНеша и функциональной активности ИКК

««1ТПЯМИ-* !

• «««M***!* » *í

1 .»* 0»

Цель работы - исследовать взаимосвязь между липидным составом и функциональной активностью полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ), моно-нуклеаров периферической крови человека и перитонеальных лейкоцитов крыс Задачи:

• изучить липидный состав мононуклеаров и ПМЯЛ периферической крови здоровых людей методом микротонкослойной хроматографии Провести сравнительный анализ липидного состава мононуклеаров и ПМЯЛ в связи с их функциональными свойствами;

• исследовать зависимость между липидным составом ПМЯЛ периферической крови человека и их функциональной активностью в тестах на адгезию, фагоцитоз, бактерицидность и взаимосвязь между липидным составом мононуклеаров и их пролиферативной активностью в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ),

• проанализировать липидный состав перитонеальных лейкоцитов крыс и его связь с фагоцитарной, бактерицидной активностью, адгезией этих клеток;

• определить липидный состав мононуклеаров и ПМЯЛ и их функциональную активность у здоровых людей при приеме а-токоферола

Научная новизна исследования. В работе впервые изучены особенности липидного состава ПМЯЛ и мононуклеаров периферической крови человека и дан их сравнительный анализ

Выявлены новые факты взаимосвязи между липидным составом ИКК и их функциональной активностью Обнаружена зависимость между содержанием лизофосфолипидов в ПМЯЛ крови людей и пороговым характером изменения фагоцитарной активности этих клеток Показано, что уровень холестерина в ПМЯЛ крови человека является важным фактором, контролирующим проявление их бактерицидной активности, а от соотношения Хс/ФЛ зависит адгезия ПМЯЛ Выявлено, что адгезия перитонеальных лейкоцитов крыс к пластику связана с уровнем фракции фосфатидилинозитолов и фосфатидилсеринов

Выявлены специфические изменения в липидном составе ПМЯЛ и мононуклеаров периферической крови человека под влиянием а-токоферола Обна-

ружен феномен оптимизации функциональной активности лимфоцитов крови человека витамином Е

Практическая значимость исследования. Обнаруженная взаимосвязь между содержанием липидов и функциональной активностью ИКК указывает на то, что изменения в липидном составе могут быть важным патогенетическим звеном в нарушении функциональной активности ИКК В связи с этим липид-ный состав ИКК можно рассматривать как мишень при выборе стратегии имму-нокоррекции Терапия, направленная на модификацию липидного состава может способствовать уменьшению повреждающих эффектов при патологии С другой стороны, изменения в липидном спектре могут быть следствием нарушений функциональной активности ИКК Поэтому показатели липидного состава могут иметь важное клинико-диагностическое значение В экспериментальной иммунологии модификация липидного состава может использоваться как подход для моделирования функциональных состояний ИКК Положения, выносимые на защиту.

1 Липидный состав ПМЯЛ и мононуклеаров периферической крови человека различен В пуле холестерина мононуклеаров преобладает свободный холестерин, в ПМЯЛ - эфирносвязанный, что соответственно определяет различие индексов этерификации и Хс/ФЛ между этими клетками Выявленные особенности в липидном составе могут быть ответственны за проявление специфических функциональных свойств клеток

2 Лизофосфолипиды являются фактором пороговой регуляция фагоцитарной активности ПМЯЛ крови человека

3 Полиморфноядерные лейкоциты крови человека при относительно низком уровне свободного холестерина в клетках могут находиться как в состоянии спонтанной бактерицидности, так и в активном состоянии В то же время при относительно высокой концентрации холестерина обнаруживаются состояния клеток, отвечающие только низкому уровню их активности

4 Витамин Е снижает уровень свободного холестерина и увеличивает долю его эфиров в мононуклеарах крови человека и модулирует стимулированную ФГА пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови человека

Апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на: 6-ой Российской университетско-академической научно-практической конференции (Ижевск, 2003); 5-ой Тихоокеанской международной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2004); 69-ой межвузовской конференции молодых ученых (Курск, 2004); 2-ой международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования», (Тамбов, 2004); 8-ой Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века», (Пущино, 2004), 59-ой межвузовской научно-практической конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения», (Екатеринбург, 2004); III съезде иммунологов России, (Екатеринбург, 2004).

По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ.

Структура диссертационной работы. Работа изложена на 130 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов Список литературы включает 188 источников, среди которых 59 отечественных и 129 иностранных. Работа иллюстрирована 22 таблицами, 25 рисунками. Приложение содержит 4 таблицы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

Объектом исследования явились иммунокомпетентные клетки: мононук-леары и полиморфноядерные лейкоциты периферической крови здоровых людей, а также перитонеальные лейкоциты крыс. В эксперименте использовали кровь доноров в возрасте от 20 до 30 лет (48 образцов). Кровь забирали в утренние часы. Для получения перитонеальных лейкоцитов крыс использовали белых беспородных крыс-самцов (9 животных) массой 200-250 г, содержавшихся на стандартном рационе.

Мононуклеары и ПМЯЛ получали из периферической крови человека, фракционированием в градиенте фиколл-верографина. При этом мононуклеары

на 80 % были представлены лимфоцитами и на 20 % моноцитами (Д.К Новиков, 1996). Фракция ПМЯЛ содержала 98% нейтрофилов (Д.К. Новиков, 1996).

Экстракцию липидов проводили по методу Фолча. Липидный экстракт отмывали 0,73 % раствором NaCI (М.И. Прохорова, 1982). Фракционный состав общих липидов и фосфолипидов определяли методами микротонкослойной хроматографии (мТСХ) на силикагеле с последующим количественным анализом фракций. Общие липиды разделяли в системе гексан - диэтиловый эфир -метанол - ледяная уксусная кислота в соотношении 9:2:0,2:0,3 (Г.А Грибанов, 1980). Количественное определение фракций проводили разложением с концентрированной серной кислотой. Фосфолипиды разделяли в системе хлороформ -метанол - ледяная уксусная кислота - вода в соотношении 5:3:0,80,4 (Г.А.Грибанов, 1980). Количество фосфолипидов определяли по неорганическому фосфору. Для этого липиды сжигали с хлорной кислотой, и образующийся неорганический фосфат определяли в цветной реакции с малахитовым зеленым (Г.А.Грибанов, 1980).

О функциональной активности ПМЯЛ и перитонеальных лейкоцитов крыс судили по фагоцитарной активности, бактерицидное™ в НСТ-тесте (Д К. Новиков, 1996), адгезии к пластику (P.M. Хаитов, 1995). Функциональную активность лимфоцитов определяли в РБТЛ. Клетки культивировали в среде RPMI-1640 с ФГА, 48 часов при 37°С. В качестве показателей пролиферативной активности лимфоцитов использовали спонтанную пролиферативную активность и пролиферативный ответ лимфоцитов на стимуляцию митогеном ФГА. Спонтанную пролиферативную активность определяли по потреблению глюкозы клетками в культуральной среде за время культивирования в лунках, не содержащих ФГА. Пролиферативную активность, стимулированную ФГА, определяли по индексу стимуляции (ИСФГл), который вычисляли как разницу между потреблением глюкозы с ФГА и спонтанным потреблением глюкозы за время культи вирован ия.

При исследовании влияния а-токоферола на липидный состав и ФА моно-нуклеаров и ПМЯЛ периферической крови человека, добровольцы (11 человек)

принимали витамин Е в виде желатиновых капсул, содержащих 300 мг а-токоферола, один раз в день, в течение 10 дней. Все испытуемые были проин-* формированы о целях, методах, побочных эффектах, возможном риске, продол-

жительности и ожидаемых результатах исследования и дали письменное согла-

к сие на участие в исследовании. Были проанализированы липидный состав моно-

нуклеаров и ПМЯЛ, а так же пролиферативная активность лимфоцитов в РБТЛ и функциональная активность ПМЯЛ в фагоцитарном тесте, НСТ-тесте, адгезии к пластику до приема витамина Ё и на следующий день после последнего приема.

Сравнительный анализ липидного состава ПМЯЛ и мононуклеаров был проведен с помощью t-теста для независимых переменных. В эксперименте с витамином Е для определения значимости различий в липидном составе и ФА ИКК до и после приема витамина Е был использован t-тест для зависимых переменных. Для определения взаимосвязи между липидным составом и функциональной активностью использовали регрессионный анализ и корреляционный анализ по Пирсону (Г.Ф. Лакин, 1973). Результаты были обработаны с помощью программы Statistica 4.5 для Windows.

Результаты исследований и их обсуждение 1. Особенности липидного состава и функциональные свойства мононуклеаров и полиморфноядерных лейкоцитов крови людей. Результаты исследований показали, что основные различия в липидном составе ПМЯЛ и мононуклеаров связаны с пулом холестерина (табл. 1).

Таблица 1

Содержание общих лнпидов (в мкг на 106 клеток) и фракционный состав

общих липидов ИКК (в % от суммы фракций), (М±т)

ОЛ Фракции липидов

ФЛ ДГ Хс СЖК ТГ ЭХ ОХ

Мононуклеары, п= 15 68 ±8 26,6 ±2,6 15,1 ±3,0 21,0 ±2,0 13,7 ±1,6 10,2 ±1,2 13,4 ±2,0 34,4 ±2,5

ПМЯЛ, 115 25,8 12,1 9,3 12,4 11,3 29,1 38,4

п= 16 ±38 ±2,9 ±1,8 ±1,3 ±1,6 ±1,6 ±3,8 ±3,4

Р <0,001 <0,001

В мононуклеарах преобладает свободный холестерин, в ГТМЯЛ - эфирнос-вязанный, что соответственно определяет различие индексов этерификации и Хс/ФЛ между мононуклеарами и ПМЯЛ (табл 2) Индекс этерификации в ПМЯЛ примерно в 2 раза выше, чем в мононуклеарах Так же ПМЯЛ за счет меньшего содержания свободного холестерина имеют более низкое молярное отношение Хс/ФЛ, чем мононуклеары

Таблица 2

Индексные показатели липидного состава ИКК (М ± т)

Хс/ФЛ ЭХ/ЭХ+Хс

Мононуклеары, п= 15 0,92+0,14 0,37±0,05

ПМЯЛ, п=16 0,43±0,07 0,73±0,04

Р <0,01 <0,001

Обращает на себя внимание близкое к 1,0 значение индекса Хс/ФЛ в мононуклеарах, тогда как для большинства плазматических мембран оно варьирует от 0,5 до 0,8 Близкий к 1,0 индекс Хс/ФЛ соответствует высокой вязкости и низкой проницаемости мембраны (В Н. Титов, 2000) Известно, что циркулирующие лимфоциты, выделенные из периферической крови, имеют более высокую вязкость мембран (W.J. Van Blitterswijk, 1984) и высокий индекс Хс/ФЛ (С А Голованов, 1976) по сравнению с лимфоцитами, полученными из лимфоузлов Учитывая, что лимфоциты периферической крови являются низкоактивными клетками, в отличие от лимфоцитов, полученных из лимфоидных органов, где находятся центры активации и пролиферации лимфоцитов, можно предположить, что обнаруженный высокий индекс Хс/ФЛ в мононуклеарах отвечает неактивному состоянию циркулирующих лимфоцитов, которые составляют основную долю среди периферических мононуклеаров В свою очередь обнаруженный в ПМЯЛ низкий индекс Хс/ФЛ, определяющий высокую текучесть мембран, может быть ответственен за такие функциональные свойства ПМЯЛ, как высокая подвижность в тканях и фагоцитоз

Мембраны ПМЯЛ в очаге воспаления подвержены модифицирующему воздействию свободнорадикальных процессов. В связи с возможностью повреж-1 дения мембран и гибели клеток необходимы механизмы стабилизации мембран.

Свободный холестерин способен ограничивать свободнорадикальные процессы I в мембранах (А.М Батиш, 2000). В лимфоцитах и макрофагах при состояниях, сопровождающихся накоплением лизофосфолипидов, продуктов перекисного окисления липидов увеличивается содержание холестерина (Л.С Бикбулатова, 1990; Е.И Прахин., 2000). В нашем исследовании обнаружена отрицательная корреляционная зависимость между продукцией супероксид-аниона в НСТ-тесте и содержанием холестерина в ПМЯЛ (рис. 2). Указанные феномены и отмеченные выше свойства холестерина позволяют рассматривать его как фактор стабилизации мембран при повышении функциональной активности клеток, связанной с активацией свободнорадикального окисления. Эфиры холестерина в результате гидролиза холестеролэстеразой или других метаболических перестроек способны быстро превращаться в свободный холестерин Поэтому высокий уровень эфиров холестерина в ПМЯЛ может являться источником свободного холестерина, принимающего участие в механизмах регуляции свободнорадикальных процессов в мембранах ПМЯЛ.

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить ряд особенностей в липидном составе ПМЯЛ и мононуклеаров, которые, по-видимому, отражают различия в функциональных свойствах исследованных популяций ИКК.

2. Взаимосвязь липидного состава и функциональной активности им-мунокомпетентных клеток.

2.1. Липидный состав и функциональная активность полиморфноя-дерных лейкоцитов периферической крови человека.

Исследование липидного состава и фагоцитарной активности ПМЯЛ крови людей обнаружило, что показатели фагоцитарной активности - фагоцитарный индекс (ФИ) и фагоцитарное число (ФЧ) положительно коррелируют с уровнем лизофосфолипидов ( г = 0, 64 ЛФЛ с ФИ и г = 0,67 ЛФЛ с ФЧ, р < 0,05, рис 1а) и отрицательно коррелируют с уровнем фосфатидилхолинов (ФХ) в

клетках (г = - 0,63 ФХ с ФИ и г = - 0,62 ФХ с ФЧ, р < 0,05) При этом выявлена обратная зависимость между содержанием ЛФЛ и ФХ (г= - 0,57, р < 0,05), указывающая на то, что активация фагоцитоза ПМЯЛ сопровождается накоплением ЛФЛ, основным источником образования которых являются ФХ

ЛФЛ+ГЛФ, в % от Число Индивидуальных суммы фракций ФЛ значений в данном интервале ФЧ

а б

Рис 1 а - зависимость ФЧ от уровня фракции ЛФЛ+ГЛФ в ПМЯЛ Рамкой обозначена область перехода ПМЯЛ из состояния низкой в состояние высокой фагоцитарной активности

-Линия регрессии. .....Границы доверительного интервала

б - гистограмма распределения ФЧ.

Кривая нормального распределения для данной выборки

При анализе характера варьирования функциональных показателей ПМЯЛ было обнаружено, что распределение показателей фагоцитарной активности ПМЯЛ обследованных доноров отличается от нормального, имеет двухвершинный характер (рис 1 б), тогда как распределение показателей бактерицидной активности в той же выборке соответствует нормальному Сравнение эмпирических частот интервалов ФЧ и теоретически вычисленных показало, что они плохо согласуются между собой, что служит основанием считать распределение ФЧ не соответствующим нормальному закону

Исходя из этого, можно выделить две группы значений фагоцитарной активности ПМЯЛ' группу с высоким уровнем фагоцитарной активности (ФИ =

88,3±5,5, ФЧ = 7,5±0,3) и группу с низким уровнем фагоцитарной активности (ФИ = 27+6,4, ФЧ = 3,1 ±0,3) Данный факт может указывать на существование двух возможных дискретных состояний, отвечающих двум разным уровням фагоцитарной активности клеток «активное» и «неактивное»

На рис. 1а показано, что изменение фагоцитарной активности от низкого уровня до высокого наблюдается в узком интервале концентраций ЛФЛ и имеет пороговый характер, что отвечает критериям кооперативных структурных перестроек мембран (С.В Конев, 1987) Известно, что кооперативные перестройки выражены наиболее ярко при фазовых переходах липидов, когда скачком меняется ряд важнейших физико-химических свойств липидов - микровязкость, сжимаемость, механическая прочность, проницаемость, способность растворять различные вещества (С В Конев, 1987) В связи с этим ЛФЛ можно рассматривать как фактор пороговой регуляции фагоцитарной активности и предположить механизм переключения уровня фагоцитарной активности с участием лизофос-фолипидов. ЛФЛ по своим свойствам являются поверхностно-активными хао-тропными агентами, и могут участвовать в реорганизации липидной структуры бислоя (ГА Грибанов, 1991), определяя тем самым существование различных фазовых состояний мембран, влияющих на их свойства Исследования на модельных мембранах показали, что к изменениям относительной доли некоторых липидов, чувствительна доменная организация липидов мембран (А Н Гольцов, 1995, Т.М БЫшд, 2001, М Теуйа, 2002) При этом возможны пространственные перегруппировки пула липидов, которые являются механизмом регуляции локальной вязкости мембран, подвижности интегральных белков, их активности, а так же функциональной активности клеток в целом. Возможно, что ЛФЛ в определенном интервале значений - зоне перехода (рис 1а), вызывают реаранжи-ровку в композиции липидов мембран ПМЯЛ, которая может происходить с участием сложных метаболических перестроек При этом разным композициям липидов мембран будут отвечать разные состояния фагоцитарной активности клеток, либо с высоким, либо низким уровнем

Исследование липидного состава ГТМЯЛ и интенсивности кислородзави-симых механизмов бактерицидности в НСТ-тесте выявило взаимосвязь между показателями НСТ-теста и содержанием свободного холестерина в этих клетках (рис 2)

Рис 2 Зависимость количества НСТ-положительных клеток от уровня холестерина в ПМЯЛ - Линия регрессии ------Границы доверительного интервала

Из представленных на рис 2 данных видно, что при низком, относительно среднего, уровне свободного холестерина ПМЯЛ могут находиться как в состоянии спонтанной бактерицидности, так и в состоянии «кислородного взрыва». В то же время, при высокой, относительно средней, концентрации холестерина в клетках, обнаруживаются состояния ПМЯЛ, отвечающие только низкому уровню их активности. Обнаруженный факт указывает на то, что высокие концентрации свободного холестерина могут быть фактором, препятствующим переходу ПМЯЛ в состояние с высоким уровнем бактерицидности

Таким образом, свободный холестерин в мембранах ПМЯЛ может являться важным фактором, определяющим проявление бактерицидной активности клеток

Исследование взаимосвязи липидного состава ПМЯЛ человека и их адгезии к пластику показало, что уровень адгезии ПМЯЛ положительно коррелирует с индексом Хс/ФЛ в них (г = 0,66, р<0,05, рис 3)

Учитывая, что тесному контакту мембран, их слипанию способствует дегидратация полярных групп липидных молекул (Р Б Геннис, 1997), можно предположить, что выявленное увеличение адгезии ПМЯЛ при росте индекса

Хс/ФЛ, связано со способностью холестерина снижать гидратацию мембран (АМ Батит, 2000)

0,26 I-■-;-

Рис 3 Зависимость уровня адгезии ПМЯЛ к пластику от индекса Х/ФЛ

--Линия регрессии. ------Границы доверительного интервала

В связи с этим увеличение соотношения Хс/ФЛ в мембранах ПМЯЛ можно рассматривать как один из механизмов усиления адгезии ПМЯЛ

2.2. Липидный состав и функциональная активность перитонеальных

При исследовании взаимосвязи липидного состава и функциональной активности перитонеальных лейкоцитов крыс была обнаружена положительная корреляционная зависимость между адгезией клеток к пластику и уровнем фракции ФТИ и ФС (г=0,79, р<0,05, рис 4).

0,06

0,02

Хс/ФЛ

0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6

лейкоцитов крыс.

0,105

•? 0,075

О °.°95

0,055

0,065

0,045

_^_ ФТИ+ФС, в % от

2 6 10 14 18 22 26 30 суммы фракций ФЛ

Рис 4 Зависимость адгезии перитонеальных лейкоцитов

крыс к пластику от уровня фракции ФТИ+ФС -Линия регрессии ......Границы доверительного интервала

Согласно современным представлениям многие, рецепторы ИКК ассоциированы с ФТИ (В А Извекова, 1991), для которых известно участие в постре-цепторной передаче сигнала в клетку Показано, что фактор, активирующий прилипание лейкоцитов, так же действует на ПМЯЛ через рецепторы, ассоциированные с ФТИ Из этого следует, что содержание ФТИ может определять «отзывчивость» перитонеальных лейкоцитов крыс к фактору активации адгезии

2.3. Липидный состав и функциональная активность мононуклеаров

периферической крови человека. Результаты исследования липидного состава мононуклеаров, которые были представлены в основном лимфоцитами, и их функциональной активности в РБТЛ позволили обнаружить отрицательную корреляцию между содержанием свободного холестерина и индексом стимуляции лимфоцитов ФГА в РБТЛ (г = -0,81, р<0,05, рис. 5).

Хс, в % от суммы фракций ОЛ

4 8 12 16 20 24 28 32 36

Рис. 5. Зависимость индекса стимуляции лимфоцитов ФГА

в РБТЛ от уровня холестерина -Линия регрессии ----Границы доверительного интервала.

Феномен сочетания изменений содержания холестерина в лимфоцитах и уровня их пролиферативной активности показан в ряде исследований Так у пациентов с гиперлипидемией наблюдается высокий уровень холестерина в лимфоцитах При этом базальный уровень включения тимидина у таких пациентов повышен, но ответ на митоген конканавалин А снижен (I Seres, 1996) За возрастное снижение «отзывчивости» лимфоцитов на ФГА также ответственны изменения в липидном составе клеток увеличение уровня холестерина, соотношения Хс/ФЛ, ФЭА/ФХ (L A Huber, 1991) Известно, что индексы Хс/ФЛ, ФЭА/ФХ

и содержание свободного холестерина являются критериями вязкости, проницаемости мембран (L A Huber, 1991, Ю С Бутов, 2001) Изменение этих показателей модифицирует работу некоторых рецепторных и транспортных систем клеток, в том числе систем, участвующих в регуляции пролиферативной активности лимфоцитов, а также изменяет метаболическую активность клеток в целом Так установлено, что уровень холестерина в лимфоцитах тесно связан с содержанием свободного кальция в них (I Seres, 1996), который в свою очередь необходим для реализации активности протеинкиназы С и других ферментов, участвующих в процессах пролиферации лимфоцитов

Таким образом, высокий уровень холестерина в лимфоцитах периферической крови человека подавляет их пролиферативную активность, стимулированную ФГА.

3. Влияние а-токоферола на липидный состав и функциональную активность мононуклеаров и полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови человека.

В ходе исследований влияния приема витамина Е в дозе 300 мг/день в течение 10 дней на липидный состав и ФА мононуклеаров и ПМЯЛ крови здоровых людей взаимосвязи между количественными перестройками липидного компонента ПМЯЛ и мононуклеаров, вызванными витамином Е, и изменением функциональной активности клеток не обнаружено Тем не менее, результаты влияния витамина Е на липидный состав и функциональную активность ИКК заслуживают внимания

Выявлено, что прием 300 мг а-токоферола в течение 10 дней вызвал с>ще-ственные количественные изменения в фосфолипидном составе ПМЯЛ, связанные с увеличением уровня ФС (с 13,5±2,6 % до 22,1±3,3 %, р<0,05) и СМ (с 8,9±0,6 % до 15,7±1,8 % р<0,01) На модельных мембранах было показано, что витамин Е в отношении фосфолипидов проявляет избирательную антиоксидант-ную активность, защищая от свободно-радикального окисления только ФС (А Terrasa, 2000) В связи с этим можно предположить, что, обнаруженные в данном исследовании, изменения в составе фосфолипидов ПМЯЛ являются следст-

вием селективного влияния приема витамина Е на интенсивность перекисного окисления отдельных липидных фракций

Исследование липидного состава мононуклеаров до и после приема 300 мг витамина Е показало, что под влиянием витамина Е изменился количественный состав общих липидов мононуклеаров за счет снижения содержания Хс (с 26,2+2,4 % до 15,2 ±2,3 %, р<0,05), увеличения содержание ЭХ (с 14,0+2,0 % до 31,7±4,5%, р<0,01) При этом изменения относительного количества общего холестерина в мононуклеарах не происходило Данный факт, а также наличие отрицательной корреляция (г = - 0,65, р<0,05) между содержанием свободного холестерина и эфирносвязанного в мононуклеарах после приема витамина Е, свидетельствуют об усиление этерификации свободного холестерина в этих клетках в условиях приема витамина Е Можно полагать, что изменения в липидном составе функционально различных ИКК под влиянием витамина Е носят достаточно специфический характер.

Результаты исследований функциональной активности ПМЯЛ до и после приема витамина Е показали, что изменений фагоцитарной, бактерицидной активности, адгезии в условиях проведенного эксперимента не обнаружено Отсутствие изменений функциональной активности ПМЯЛ на фоне модификации их фосфолипидного спектра может указывать на независимость исследованных функциональных свойств ПМЯЛ от количества СМ и ФС в этих клетках

При изучении влияния приема витамина Е на пролиферативную активность лимфоцитов, стимулированную ФГА, выявлено, что характер ответа лимфоцитов на прием витамина Е определяется исходным уровнем их пролифера-тивной активности. Витамин Е увеличивал активность клеток с исходно низким уровнем пролиферативной активности в ответ на ФГА с 1,8±0,18 ммоль/л до 4,34±0,69 ммоль/л и снижал активность лимфоцитов, имеющих изначально высокий уровень, с 3,03±0,23 ммоль/л до 1,9+0,61 ммоль/л Данный феномен был обнаружен ранее французским исследователем De la Fuente, (2000)

Таким образом, выявленный факт позволяет предполагать модулирующий характер воздействия витамина Е на пролиферативную активность лимфоцитов

ВЫВОДЫ

1. Сравнительный анализ липидного состава мононуклеаров и полиморфноя-дерных лейкоцитов периферической крови здоровых людей выявил, что в пуле холестерина мононуклеаров преобладает свободный холестерин, тогда как в полиморфноядерных лейкоцитах - эфирносвязанный За счет меньшего содержания свободного холестерина полиморфноядерные лейкоциты имеют более низкое молярное отношение Хс/ФЛ, чем мононукпеары Особенности липидного состава полиморфноядерных лейкоцитов и мононуклеаров могут отражать различия в их функциональных свойствах

2 Распределение показателей фагоцитарной активности в исследуемой выборке имеет двухвершинный характер, что указывает на существование двух дискретных функциональных состояний, отвечающих двум разным уровням фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов людей Обнаруженная взаимосвязь между уровнем лизофосфолипидов и фагоцитарной активностью полиморфноядерных лейкоцитов позволяет рассматривать лизофосфоли-пиды как фактор пороговой регуляции фагоцитарной активности клеток

3 Полиморфноядерные лейкоциты периферической крови человека при относительно низком уровне свободного холестерина в клетках могут находиться как в состоянии спонтанной бактерицидности, так и в активном состоянии В то же время при относительно высокой концентрации холестерина в полиморфноядерных лейкоцитах обнаруживаются состояния клеток, отвечающие только низкому уровню их активности

4 Увеличение соотношения Хс/ФЛ в мембранах полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови можно рассматривать как один из механизмов усиления их адгезии Адгезия перитонеальных лейкоцитов крыс к пластику положительно коррелирует с уровнем фосфатидилинозитолов и фосфатидилсери-нов

5 При относительно высоком уровне свободного холестерина в лимфоцитах периферической крови человека снижается их пролиферативная активность в реакции бласттрансформации, стимулированной фитогемагглютинином

6 а-токоферол при приеме в дозе 300 мг/день в течение 10 дней вызвал увеличение уровней фосфатидилсеринов и сфингомиелинов в полиморфноядерных лейкоцитах периферической крови человека, что может быть следствием избирательной антиоксидантной активности витамина Е Изменений функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов в тестах фагоцитарной, бактерицидной активности и адгезии не обнаружено

7. В мононуклеарах периферической крови человека отмечено снижение уровня свободного холестерина и увеличение его эфиров при приеме а-токоферола в дозе 300 мг/день в течение 10 дней Выявлен модулирующий эффект а-токоферола на пролиферативную активность лимфоцитов в реакции бласт-трансформации, вызванной фитогемагглютинином

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1 Грибанов Г.А, Бедулева Л В , Меньшиков И В , Ребров Л Б , Мальцева В Н Об особенностях липидного состава некоторых иммунокомпетентных клеток кровичеловека//Биомедицинскиетехнологии - 2002 -С 81-85 2. Грибанов Г.А., Бедулева Л В , Меньшиков И В , Ребров Л Б, Мальцева В Н Исследование взаимосвязи липидного состава полиморфноядерных лейкоцитов и их функциональной активности//Биомедицинские технологии - 2003 - Вып 20. - С.131-141

3 Бедулева Л В Исследование взаимосвязи липидного состава и функциональной активности мононуклеаров периферической крови человека//6-ая Рос уни-верситетско-академическая конференция Матер докл - Ижевск, 2003 - С 342

4 Бедулева Л В , Грибанов Г А Исследование липидного состава и адгезии полиморфноядерных лейкоцитов крови человека и перитонеальных лейкоцитов крыс//8-ая Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых "Биология - наука XXI века"- Пущино, 2004 - С 46

5. Бедулева Л В , Булатова Н И Влияние приема витамина Е на липидный состав и функциональную активность мононуклеаров периферической крови челове-ка//Матер. 69-й межвуз конф молодых ученых - Курск, 2004 - Ч I - С 29-30 6 Грибанов Г А , Меньшиков И В , Бедулева Л В Изменение функциональной активности и липидного состава перитонеальных лейкоцитов крыс при одно-

кратном введении гидрокорТизона//Матерналы 2-ой международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования» - Тамбов, 2004 -41 - С 34-36

7 Бедулева Л В , Попович К А Влияние приема витамина Е на липидный состав полиморфноядерных лейкоцитов и мононуклеаров периферической крови чело-века//Акт воп совр мед науки и здравоохранения Матер 59-ой межвуз конф молодых ученых с междунар участием - Екатеринбург, 2004 -С 163

8 Меньшиков И В , Бедулева Л В , Грибанов Г А Влияние глюкокортикоидов на липидный состав и функциональную активность перитонеальных лейкоцитов Kpbic//Russian J of Immunology Тез. докл -2004.-Vol 9 - С 286

9 Грибанов Г А , Меньшиков И В , Бедулева Л В Липидный состав и функциональная активность полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови че-ловека//Иммунология -2004 - №5-С 268-271

Список сокращений, используемых в работе

ГЛФ - глицерофосфаты ДГ - диглицериды ИКК - иммунокомпетентные клетки ИС - индекс стимуляции ЛФЛ - лизофосфолипиды НСТ - нитросиний тетразолий ОЛ - общие липиды ОГТ - оптическая плотность ОХ -общий холестерин ПМЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты РБТЛ - реакция бласттрансформации лимфоцитов

СЖК - свободные жирные кислоты

СМ - сфингомиелины ТГ - триглицериды ФА - функциональная активность ФГА - фитогемагглютинин ФИ - фагоцитарный индекс ФЛ - фосфолипиды ФС - фосфатидилсерины ФТИ - фосфатидилинозитолы ФХ - фосфатпдилхолины ФЧ - фагоцитарное число Хс - свободный холестерин ЭХ - эфиры холестерина п - количество исследований

Отпечатано с оригинал-макета заказчика

Подписано в печать 13.09.2004. Формат 60x84/16. Тираж 100 экз. Заказ N° 1442.

Типография Удмуртского государственного университета 426034, Ижевск, ул. Университетская, 1, корп. 4.

(

i m

(

»18755

РНБ Русский фонд

2005^4 12439

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бедулева, Любовь Викторовна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Липидный состав и функциональные свойства клеток.

1.1.1 Состав, свойства липидов и их организация в клеточных мембранах.

1.1.2. Липидный состав иммунокомпетентных клеток.

1.2. Роль лшшдного состава иммунокомпетентных клеток в регуляции их функциональной активности.

1.3. Возможные механизмы взаимосвязи липидного состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток.

1.4. Изменения липидного состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток в экспериментальных условиях.

1.4.1. Экспериментальные модели для изучения взаимосвязи липидного состава и функциональной активности клеток.

1.4.2. Влияние а-токоферола на липидный компонент и функциональную активность иммунокомпетентных клеток.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Материалы исследования.

2.2. Методы исследования.

2.3. Статистическая обработка результатов исследования.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

3.1. Липидный состав мононуклеаров и полиморфноядерных лейкоч цитов периферической крови человека.

3.2. Исследование зависимости между липидным составом и функциональной активностью иммунокомпетентных клеток.

3.2.1. Изучение взаимосвязи между липидным составом и адгезией, фагоцитарной, бактерицидной активностью полиморфноя-дерных лейкоцитов периферической крови человека.

3.2.2. Липидный состав и адгезия перигонеальных лейкоцитов крыс.

3.2.3. Определение связи между липидным составом и пролифера-тивной активностью лимфоцитов периферической крови человека.

3.3. Изменения липидного состава и функциональной активности мононуклеаров и полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови человека при приеме а-токоферола.

Глава 4. Обсуждение результатов.

4.1. Особенности липидного состава и функциональные свойства мононуклеаров и полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови человека.

4.2. Липидный состав и функциональная активность полиморфноядерных лейкоцитов, мононуклеаров периферической крови человека, перитонеальных лейкоцитов крыс.

4.3. Влияние а-токоферола на липидный состав и функциональную активность мононуклеаров и полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови человека.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование взаимосвязи липидного состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток"

Актуальность исследования.

Ключевое положение в иерархии систем управления клеток занимают мембраны, на которых сосредоточены многие функциональные системы клеток. Определяющая роль в молекулярной организации и функционировании биологических мембран принадлежит липидам. Липидный состав детерминирует физико-химическое состояние мембран: их эластические и реологические свойства [14, 15, 36, 51], проницаемость [7, 18, 36], стабильность [18, 142], заряд [28, 36]. Современные исследования показывают, что липидные домены мембран создают функциональные «платформы» для множества сигнальных и транспортных путей клетки [66, 112, 144, 173]. Липидный состав влияет на экспонирование рецепторов на плазматической мембране ИКК [28, 118, 139], что может являться основной механизмов регуляции «отзывчивости» клеток на внешние сигналы. Некоторые липиды и продукты их метаболизма несут информационную нагрузку, действуя как вторичные посредники в клетке при передаче сигнала [12, 110, 141], включаясь в межклеточные [98] и межсистемные взаимодействия [45, 48]. Известно, что регуляция клеточных функций биологически-активными соединениями, в частности, гормонами, простагландинами опосредована изменениями в липидном составе мембран клеток-мишеней [23, 36, 47, 177]. Вследствие кооперативной организации липидного компонента даже незначительные сдвиги в содержании отдельных липидов способны реализоваться в крупномасштабной глобальной перестройке мембран с гигантским коэффициентом усиления [36]. Все это свидетельствует о том, что липиды занимают важное место среди факторов регуляции мембранных процессов клеток.

Специализированные клетки, к которым относят и ИКК, имеют ряд особенностей липидного состава. Как дифференцировка клеток, так и потеря клетками специфических функций сопровождается изменениями в организации и составе липидов мембран [5, 71, 125, 151]. Это позволяет полагать, что липид-ный состав может быть ответственен за проявление специфических функциональных свойств клеток. Гетерогенность популяций клеток иммунной системы и их глубокая морфо-функциональная специализация предполагают наличие особенностей в их липидном составе. Поэтому интерес представляет сравнительный анализ липидного состава популяций ИКК в связи с и их функциональными свойствами.

Функциональная активность ИКК также находится под контролем их липидного состава. Цитотоксическая активность киллеров [28], хемотаксис ней-трофилов [181], реакция бласттрансформации лимфоцитов на митогены [160, 165] существенно зависят от липидного состава этих клеток. При этом исследователи отмечают ведущую роль холестерина [23, 28, 112, 139] и жирных кислот [80, 113, 164, 184] в регуляции функциональной активности ИКК в связи с их существенным влиянием на физико-химическое состояние мембран, а также ФТИ, с которым ассоциированы многие рецепторы ИКК [28]. На клиническом материале показано, что нарушения функциональной активности ИКК сопровождаются изменениями в их липидном составе. Обнаружены изменения в липидном составе ИКК при состояниях гиперчувствительности, иммунодефици-тах [15, 45, 148]. Однако эти немногочисленные данные лишь открывают перспективу подобных исследований. Структурно-функциональная связь липидного состава с активностью ИКК остается не раскрытой и требует дальнейших исследований.

Для изучения взаимосвязи между лшшдным составом и функциональной активностью ИКК наряду с физиологическими используют различные экспериментальные модели, предполагающие модификацию липидного состава клеток. Липотропные и антиоксидантные свойства а-токоферола [180] позволяют рассматривать его как фактор модификации липидного состава ИКК. Кроме того, витамин Е действует на функциональную активность ИКК [78, 79]. Поэтому влияние а-токоферола на липидный состав ИКК может быть удобной моделью в рамках исследований взаимосвязи между изменениями липидного компонента и функциональной активности ИКК.

В связи с этим целью работы явилось исследование взаимосвязи между липидным составом и функциональной активностью полиморфноядерных лейкоцитов, мононуклеаров периферической крови человека и перигонеальных лейкоцитов крыс.

В задачи исследования входило:

• изучить липидный состав мононуклеаров и ПМЯЛ периферической крови здоровых людей методом микротонкослойной хроматографии. Провести сравнительный анализ липидного состава мононуклеаров и ПМЯЛ в связи с их функциональными свойствами;

• исследовать зависимость между липидным составом ПМЯЛ и их функциональной активностью в тестах на адгезию, фагоцитоз, бактерицидность и взаимосвязь между липидным составом мононуклеаров и их пролиферативной активностью в РБТЛ;

• определить липидный состав мононуклеаров и ПМЯЛ и их функциональную активность у здоровых людей при приеме а-токоферола.

Объектом исследования являлись иммунокомпетентные клетки: периферические мононуклеары и полиморфноядерные лейкоциты крови здоровых людей, перитонеальные лейкоциты крыс.

Предмет исследования - взаимосвязь липидного состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток. Научная новизна исследования.

В работе впервые изучены особенности липидного состава ПМЯЛ и мононуклеаров периферической крови человека и дан их сравнительный анализ.

Выявлены новые факты взаимосвязи между липидным составом ИКК и их функциональной активностью. Обнаружена зависимость между содержанием лизофосфолипидов в ПМЯЛ крови людей и пороговым характером изменения фагоцитарной активности этих клеток.

Показано, что уровень холестерина в ПМЯЛ крови человека является важным фактором, контролирующим проявление их бактерицидной активности, а от соотношения Хс/ФЛ зависит адгезия ПМЯЛ.

Выявлено, что адгезия перитонеальных лейкоцитов крыс к пластику связана с уровнем фракции фосфатидилинозитолов и фосфатидилсеринов.

Выявлены специфические изменения в липидном составе ПМЯЛ и мононуклеаров периферической крови человека под влиянием а-токоферола. Обнаружен феномен оптимизации функциональной активности лимфоцитов крови человека витамином Е.

Практическая значимость исследования.

Обнаруженная взаимосвязь между содержанием липидов и функциональной активностью ИКК указывает на то, что изменения в липидном составе могут быть важным патогенетическим звеном в нарушении функциональной активности ИКК. В связи с этим липидный состав ИКК можно рассматривать как мишень при выборе стратегии иммунокоррекции. Терапия, направленная на модификацию липидного состава может способствовать уменьшению повреждающих эффектов при патологии. С другой стороны, изменения в липидном спектре могут быть следствием нарушений функциональной активности ИКК. Поэтому показатели липидного состава могут иметь важное клинико-диагностическое значение. В экспериментальной иммунологии модификация липидного состава может использоваться как подход для моделирования функциональных состояний ИКК.

Положения, выносимые на защиту. 1. Липидный состав ПМЯЛ и мононуклеаров периферической крови человека различен. В пуле холестерина мононуклеаров преобладает свободный холестерин, в ПМЯЛ - эфирносвязанный, что соответственно определяет различие индексов этерификации и Хс/ФЛ между этими клетками. Выявленные особенности в липидном составе могут быть ответственны за проявление специфических функциональных свойств клеток.

2. Лизофосфолипиды являются фактором пороговой регуляция фагоцитарной активности ПМЯЛ крови человека.

3. Полиморфноядерные лейкоциты крови человека при относительно низком уровне свободного холестерина в клетках могут находиться как в состоянии спонтанной бактерицидности, так и в активном состоянии. В то же время при относительно высокой концентрации холестерина обнаруживаются состояния клеток, отвечающие только низкому уровню их активности.

4. Витамин Е снижает уровень свободного холестерина и увеличивает долю его эфиров в мононуклеарах крови человека и модулирует стимулированную ФГА пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови человека.

Апробация результатов исследований.

Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на: 6-ой Российской университетско-академической научно-практической конференции (Ижевск, 2003); 5-ой Тихоокеанской международной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2004); 69-ой межвузовской конференции молодых ученых (Курск, 2004); 2 международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования», (Тамбов, 2004); 8-ой Международной Путинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века», (Пущино, 2004), 59-ой межвузовской научно-практической конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения», (Екатеринбург, 2004); III съезде иммунологов России, (Екатеринбург, 2004).

По теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 3 в центральной печати.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Бедулева, Любовь Викторовна

105 Выводы

1. Сравнительный анализ липидного состава мононуклеаров и полиморф-ноядерных лейкоцитов периферической крови здоровых людей выявил, что в пуле холестерина мононуклеаров преобладает свободный холестерин, тогда как в полиморфноядерных лейкоцитах - эфирносвязанный. За счет меньшего содержания свободного холестерина полиморфноядерные лейкоциты имеют более низкое молярное отношение Хс/ФЛ, чем мононуклеары. Особенности липидного состава полиморфноядерных лейкоцитов и мононуклеаров могут отражать различия в их функциональных свойствах.

2. Распределение показателей фагоцитарной активности в исследуемой выборке имеет двухвершинный характер, что указывает на существование двух дискретных функциональных состояний, отвечающих двум разным уровням фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов людей. Обнаруженная взаимосвязь между уровнем лизофосфолипидов и фагоцитарной активностью полиморфноядерных лейкоцитов позволяет рассматривать лизофосфо-липиды как фактор пороговой регуляции фагоцитарной активности клеток.

3. Полиморфноядерные лейкоциты периферической крови человека при относительно низком уровне свободного холестерина в клетках могут находиться как в состоянии спонтанной бактерицидности, так и в активном состоянии. В то же время при относительно высокой концентрации холестерина в полиморфноядерных лейкоцитах обнаруживаются состояния клеток, отвечающие только низкому уровню их активности.

4. Увеличение соотношения Хс/ФЛ в мембранах полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови человека можно рассматривать как один из механизмов усиления их адгезии. Адгезия перитонеальных лейкоцитов крыс к пластику положительно коррелирует с уровнем фосфатидилинозитолов и фос-фатидилсеринов.

5. При относительно высоком уровне свободного холестерина в лимфоцитах периферической крови человека снижается их пролиферативная активность в реакции бласттрансформации, стимулированной фитогемагглютинином.

6. а-токоферол при приеме в дозе 300 мг/день в течение 10 дней вызвал увеличение уровней фосфатидилсеринов и сфингомиелинов в полиморфноядерных лейкоцитах периферической крови человека, что может быть следствием избирательной антиоксидантной активности витамина Е. Изменений функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов в тестах фагоцитарной, бактерицидной активности и адгезии не обнаружено.

7. В мононуклеарах периферической крови человека отмечено снижение уровня свободного холестерина и увеличение его эфиров при приеме а-токоферола в дозе 300 мг/день в течение 10 дней. Выявлен модулирующий эффект а-токоферола на пролиферативную активность лимфоцитов в реакции бласттрансформации, вызванной фитогемагглютинином.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бедулева, Любовь Викторовна, Казань

1. Авакян А.Р. Иммуномодулирующее действие активаторов обмена углеводов и липидов при остром холодовом стрессе/ А.Р: Авакян, А.И. Лазарев, Л.Г. Прокопенко, Б.С. Утешев //Экспериментальная и клиническая фармакология. -2002. -№3.-С.50-53.

2. Базанов Г.А. Влияние оксипина на тяжесть анафилактического шока и соотношение липидных фракций в лимфоцитах аллергизированных кроликов/ Г.А. Базанов, Л.Д. Смирнов//Бюлл. экспер. биол. и мед. 1995. -№ 4. - С.384-386.

3. Бергельсон Л.Д. Исследование липидов и их молекулярной организации в искусственных и биологических мембранах/ Л.Д. Бергельсон//Биологические мембраны. 1984. - № 8. - С.794-812.

4. Бикбулатова Л.С. Влияние выработки условного рефлекса двустороннего избегания на липидную компоненту мозга крыс/ Л.С. Бикбулатова, А.Б. Оби-дин, Н.В. Гуляева, М.Г. Айрапетянц, Р.И. Кругликов//Бюлл. экспер. биол. и мед. 1990. -№ 4. - С.315-316.

5. Биохимия мембран. Кн. 9. Клеточные мембраны и иммунитет: Учебное пособие/ Р.В. Петров, Р.И. Атауллаханов/Под ред. Болдырева А.А. М.: В.Ш., 1991.-144 с.

6. Богданова Н.Г. Действие сверхмалых доз тиролиберина на микровязкость липидной компоненты биологических мембран/ Н.Г. Богданова, Т.В. Лемекова, Н.П. Пальмина//Бюлл. экспер. биол. и мед. 2000. - № 1. - С.38-40.

7. Волхова JI.А. Уровень холестерина в лимфоцитах периферической крови: взаимосвязь с ишемической болезнью сердца у пациентов с различными типами гиперлипидемии/ Л.А. Волхова, Е.Ю. Соловьева//Бюлл. экспер. биол. и мед.- 1993. -№ 11. С.476-478.

8. Бутов Ю.С. Клинические и биохимические параллели у больных псориазом в процессе комплексной терапии/ Ю.С. Бутов, Е.А. Хрусталева, Е.Г. Федорова, Л. Марченко, Т.И. Туркина//Медицинский научный и учебно-методический журнал. 2001. - № .3. - С.76-79.

9. Введение в биомембранологию: Учебное пособие/Под ред. А.А. Болдырева- М.: МОГУ, 1990.-206с.

10. Геннис Р.Б. Биомембраны: Молекулярная структура и функции/ Р.Б. Теннис. М.: Мир, 1997. - 622с.

11. Голованов С.А. К механизму действия гидрокортизона на липиды лимфо-идных клеток/ С.А. Голованов//Проблемы эндокринологии. 1976. - Т. 12, №. 4.- С.79-81.

12. Гольцов А.Н. Исследование влияния липидного состава клеточных мембран на доменную структуру бислоя и латеральный транспорт/А.Н. Гольцов, В.Н. Каданцев//Физиология человека. 1995. - Т.21, № 6. - С.113-126.

13. Горошинская И.А. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови у онкологических больных/ И.А. Горошинская, Л.Ю. Голотина, Е.И. Горло, Т.А. Ровда, Ю.Н. Бордюшков//Вопросы мед. химии. 1999. -№ 1. -С.53-57.

14. Грибанов Г.А. О метаболических взаимоотношениях липидов/ Г.А. Грибанов/Лепехи современной биологии. 1979. - Т.87. - Вып 1. - С.16-33.

15. Грибанов Г.А. Методы анализа липидов. Лабораторный практикум для студентов химико-биологического факультета/ Г.А. Грибанов. Калининский госуниверситет, 1980. - 51с.

16. Грибанов Г.А. Особенности структуры и биологическая роль лизофосфоли-пидов/ Г.А. Грибанов//Вопросы мед. химии. 1991. - Т.37, № 4. С.2-10.

17. Грибанов Г.А. Об особенностях липидного состава некоторых иммуноком-петентных клеток крови человека/ JI.B. Бедулева, И.В. Меньшиков, JI.E. Ребров, В.Н. Мальцева//Биомедицинские технологии. 2002. - С.81- 85.

18. Грибанов Г.А. Липидные показатели кожи, мозжечка и продолговатого мозга при водно-иммерсионном стрессе у крыс/ Г.А. Грибанов, Н.В. Костюк, Ю.В. Абрамов, В.А. Быков, Л.Б. Ребров, Т.В. Володина, С.С. Перцов//Вопр. мед. химии. 1999. - № 2. - С.131-135.

19. Дорошенко Е.О. Применение Т-активина при сахарном диабете у детей/ Е.О. Дорошенко, Е.И. Мартынова, В.Я. Арион, В.В. Смирнов//Медицинский научный и учебно-методический журнал. 2001. - № 3. - С.98-120.

20. Доценко Э.А. Холестерин и липопротеины низкой плотности как эндогенные иммуномодуляторы/ Э.А. Доценко, Г.И. Юпатов, А.А. Чир-кин//Иммунопатология, аллергология, инфектология. -2001.-№3.-С.6-15.

21. Душкин М.И. Влияние 25-гидроксихолестерина и прогестерона на эстери-фикацию холестерина, вязкость и белково-липидные взаимодействия мембран в макрофагах/ М.И. Душкин, Н.Г. Колосова, А.Ф. Сафина//Бюлл. экспер. биол. и мед. 2000. - № 2. - С. 145-148.

22. Зайцева Л.Г. Роль эйкозаноидов в регуляции фагоцитарной функции макрофагов фактором адгезии тромбоцитов при эндотоксическом шоке/ Л.Г. Зайцева, М.Ю. Вайсбурд, Г.М. Шапошникова, Е.Б. Мысякин//Бюлл. экспер. биол. и мед. 2000. - № 9. - С.309-312.

23. Извекова В.А Роль эндогенных и экзогенных простагландннов в регуляции экспрессии Fc-рецепторов лимфоцитов и значение липидного состава мембран: Автореф. дис. канд. мед. наук/В.А.Извекова. М., 1987. 22 с.

24. Извекова В.А. Липиды мембран и функции иммунокомпетентных клеток в норме и патологии/ В.А. Извекова//Успехи современной биологии. 1991. -Вып. 4. -Т.111. -С.577-588.

25. КагаваЯ. Биомембраны/ Я. Кагава. М.: В.Ш., 1985. - 302 с.

26. Капралов А А. Продукция супероксида нейтрофилами крови человека при действии токоферола/ А.А. Капралов, А.Г. Федорчук, А.И. Масюк, Г.В. Дон-ченко, Г.Д. Петров//Иммунология. 1997. -№ 6. - С. 15-16.

27. Киселева Е.П. Влияние гиперлипидемии на чувствительность тимоцитов к апоптозу у мышей линии СВА и С57В1/6/ Е.П. Киселева, В.П. Пузырева, Р.П. Огурцов, И.Г. Ковалева// Бюлл. экспер. биол. и мед. 2000. - № 8. - С.200-202.

28. Колосова М.В. Состав липидов мембран эритроцитов и их биофизические характеристики у детей с инсулинзависимым сахарным диабетом в процессетерапии/ M.B. Колосова, В.В. Новицкий, Е.А. Степовая, Е.Б.//Клин. лаб. диагностика. 2001. -№1. - С. 10-12.

29. Конев С.В. Структурная лабильность биологических мембран и регулятор-ные процессы/ С.В. Конев. Минск: «Наука и техника», 1987. - 238 с.

30. Лакин Г.Ф. Биометрия/ Г.Ф. Лакин. М: В. Ш., 1973. - 342 с.

31. Меньшиков И.В. Витамин Е и аэробная работоспособность спортсменов в условиях нормо- и гипертермии/ И.В. Меньшиков, Л.А. Иоффе, В.Е. Сусеков//Физиология человека. 1994. - Т. 20, № 4. - С. 110-115.

32. Меньшиков И.В. Основы иммунологии. Лабораторный практикум: Учебное пособие/И.В. Меньшиков, Л.В. Бедулева. -Ижевск: УдГУ, 2001. 133 с.

33. Методы биохимических исследований/Под ред. Прохоровой М.И. Л., 1982.-С.56.

34. Насонов Е.Л. Биохимия фосфолипидов/Материалы сайта http://cir.msk.ru.

35. Новиков Д.К. Оценка иммунного статуса/ Д.К. Новиков, В.И. Новикова. -Витебск, 1996,- 281с.

36. Прахин Е.И. Липиды плазматических мембран и липидные медиаторы воспаления у детей с атопическими заболеваниям/ Е.И. Прахин, С.Ю. Терещен-ко//Педиатрия. 2000. - №2. - С.82-88.

37. Рыжова Л.М. Липиды плазматичеких мембран лимфоцитов у больных атеросклерозом и их детей/ Л. М. Рыжова, Г.А. Суханова, И.А. Ковалев, Г.П. Фил-липов// Клин.лаб.диаг. 2001. -№3. - С.10-12.

38. Сергеев П.В. Стероидные гормоны модуляторы липидного спектр лизосо-мальных мембран фибробластов кожи/ П.В. Сергеев, Т.В. Ухина, А.В. Семей-кин, Ю.С. Акулов//Бюлл. экспер. биол. и мед. - 1998. - Т. 125, № 2. - С. 165-167.

39. Степаненко Р.Н. Влияние ганглиозидов на пролиферацию и синтез антител лимфоцитами периферической крови больных аутоиммунными заболеваниями/ Р.Н. Степаненко, С.В. Скопцова, М.М. Кондрашева//Иммунология. 2001. - № 1. - С.26-30.

40. Сухова Т.А. Влияние гидрокортизона на метаболизм липидов в плазматических мембранах гепатоцитов/ Т.А. Сухова, Т.В. Ухина//Бюлл. экспер. биол. и мед. 1986. - Т.102, № ю. - С.436-437.

41. Тадевосян Ю.В. Роль фосфолипидов в изменении стабильности лизосо-мальных мембран в условиях хронической алкогольной интоксикации/ Ю.В. Тадевосян, К.Г. Карагезян, Г.А. Геворкян, Т.Б. Батикян//Бюлл. экспер. биол. и мед. 1985. - № 11. - С. 553-554.

42. Титов В.Н. Функциональная роль холестерина, различие пулов холестерина в клетке и отдельных классах липопротеинов крови/ В.Н. Титов//Клин. лаб. ди-аг. 2000. - № 3. - С.3-10.

43. Титов В.Н. Атеросклероз патология полиеновых жирных кислот/ В.Н. Ти-тов//Клин. лаб. диаг. - 2001. - № 1. - С.3-9.

44. Туркина Т.Н. Сравнительные аспекты изменения показателей метаболизма липидов в мембранах лимфоцитов и эритроцитов у детей, больных сахарным диабетом/ Т.Н. Туркина, В. А. Извекова, Л.Ф. Марченко, Л.В. Сапелки-на//Педиатрия. 1991. - № 2. - С.30-33.

45. Хаитов P.M. Экологическая иммунология/ P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, Х.И. Истамов. М: ВНИРО, 1995. - С.147-148.

46. Хышиктуев Б.С. Фосфолипидный состав разных участков пораженного органа при раке легкого/ Б.С. Хышиктуев, Ю.Р. Агапова, И.В. Жилин, В.Н. Ива-нов//Вопр. мед. химии. 1999. -№ 4. - С.350-354.

47. Черепнев Г. В. Ксимедон снижает мембранную экспрессию фосфатидилсе-рина, вызванную проапоптогенным дефицитом сывороточных факторов роста в

48. Т-клетках Jurkat/ Г.В. Черепнев, Ф. Керн, Р.С. ГараевЮкспериментальная и клиническая фармакология. 2002. - № 3. - С.40-43.

49. Чертков В.М. Изменения показателей липидного обмена в семенниках крыс при воздействии жира печени минтая/ В.М. Чертков, Т.А. Ботвич, М.А. Хасина, О.А. Артюкова//Бюлл. экспер. биол. и мед. -2001. № 2. - С. 144-147.

50. Шехтман М.М. Липидная структура и функциональное состояние иммунокомпетентных клеток у беременных с гипертонической болезнью, ассоциированной с ожирением/ М.М. Шехтман, Ю.Г. Расуль-заде, В.И. Иванов, В.Т. Бор-ников//Иммунология. 1998. - № 5. - С.55-59.

51. Ярилин А.А. Основы иммунологии/ А.А. Ярилин. М.: Медицина, 1999. -606 с.

52. Adolfsson О. Vitamin E-enhanced IL-2 production in old mice: naive but not memory T cells show increased cell division cycling and IL-2-producing capacity/ O. Adolfsson, B.T. Huber, S.N. Meydani//J. Immunol. 2001. - Vol. 167. - P.3809-3817.

53. Alvarez E. Age-dependent modification of lipid composition and lipid structural order parameter of rat peritoneal macrophage membranes/ E. Alvarez, V, Ruiz-Gutierrez, C. Santa Maria, A. Machado//Mech. Ageing Dev. 1993. - Vol. 71. -P.1-12.

54. Anderson H.A. Concentration of MHC class II molecules in lipid rafts facilitates antigen presentation/ H.A. Anderson, E.M. Hiltbold, P.A. Roche//Nat. Immunol. -2001.-Vol. 2.-P. 3.

55. Balamuth F. Distinct patterns of membrane microdomain partitioning in Thl and th2 cells/ F. Balamuth, D. Leitenberg, J. Unternaehrer, I. Mellman, K. Bottomly //Immunity. 2001. - Vol. 15. -P.729-738.

56. Beisel W.R. Impact of infectious disease upon fat metabolism and immune functions/ W.R. Beisel//Cancer Res. 1981. - Vol 41. - P.3797-3798.

57. Bini L. Extensive temporally regulated reorganization of lipid raft proteome following T-cell antigen receptor triggering/ L. Bini, S. Pacini, S. Liberatori, S. Valen-sin, M. Pelligini, R. Raggiaschi//Biochem. J. 2003. - Vol. 369. - P.301-309.

58. Blatt D.H. Vitamin E kinetics and function of tocopherol regulatory proteins/ D.H. Blatt, S.W. Leonard, M.G. Traber//Nutrition. 2001. - Vol. 17. - P.799-805.

59. Bonini I.C. Sphingomyelin composition and physical asymmetries in native acetylcholine receptor rich membranes/ I.C. Bonini, S.S. Antollini, C. Gutierrez-Merino// Eur. Biophys J. 2002. - Vol. 31. - P. 417-427.

60. Brigelius-Flohe R. Vitamin E: function and metabolism/ R. Brigelius-Flohe, M.G. Traber//FASEB Journal. 1999. - Vol. 13.-P.l 145-1155.

61. Brown D. Structure and function of membrane rafts/ D. Brown //J. Med. Microbiol. 2002. - Vol. 291. - P.433-437.

62. Brunet S. Modulation of endoplasmic reticulum-bound cholesterol regulatory enzymes by iron/ascorbate-mediated lipid peroxidation/ S. Brunet, L. Thibault, G. Lepage, E.G. Seidman, N. Dube, E. Levy//Free Radic. Biol. 2000. - Vol. 28. - P. 46-54.

63. Calder P.C. Effects of feeding lipids of different fatty acid compositions upon rat lymphocyte proliferation/ P.C. Calder, L.F. Costa-Rosa, R. Curi//Life Sci. 1995. -Vol. 56. -P.455-463.

64. Chabot M.C. Ether-linked phosphoglyceride content of human leukemia cells/ M.C. Chabot, D.G. Greene, J.K. Brockschmidt, R.L. Capizzi, R.L. Wykle//Cancer Res. 1990. - Vol. 50. -P.7174-7178.

65. Chekhun V.F. Phospholipid and cholesterol levels in the tumor cell plasma membranes with different sensitivity to doxorubicin/ V.F. Chekhun, V.P. Tryndiak, I.M. Todor, V.M. Mykhailenko//Ukr. Biochim. Zh. 2003. - Vol. 75. - P. 120-125.

66. Christie W.W. The lipid composition of the spleen and intestinal and popliteal lymph nodes in the sheep/ W.W. Christie, R.C. NobMLipids. 1985. - Vol. 20. -P.389-392.

67. Curi R. The effect of propionate on lipid synthesis in rat lymphocytes/ R. Curi, L.F. Rosa, M. Yano, J.A. Bond, E.A. Newsholme//Gen. Pharmacol. 1994. - Vol. 25.-P. 1411-1416.

68. Damen J. Effect of dietary lipids on plasma lipoproteins and fluidity of lymphoid cell membranes in normal and leukemic mice/ J. Damen, J. Widt, H. Hilkmann, W.J. Van Blitterswijk//Biochim. Biophys. Acta. 1988. -Vol. 943. -P.l66-174.

69. De la Fuente M. Changes in macrophage and lymphocyte functions in guinea-pigs after different amounts of vitamin E ingestion/M. De la Fuente, M. Carazo, R.Correa, M. Del Rio//Br. J. Nutr. 2000. - Vol. 84. - P.25-29.

70. De la Fuente M. Antioxidants as modulators of immune function/ M. De la Fuente, V. Victor//Immunol. Cell Biol. 2000. - Vol. 78. - P.49-54.

71. Del Buono B.J. Plasma membrane lipid organization and the adherence of differentiating lymphocytes to macrophages/ B.J. Del Buono, S.M. White, P.L. Williamson, R.A. Schlegel/Л. Cell Physiol. 1989. - Vol. 138. - P.61-69.

72. Del Buono B.J. Alterations in plasma membrane lipid organization during lymphocyte differentiation/ B.J. Del Buono, P.L. Williamson, R.A. Schlegel //J. Cell Physiol. 1986. - Vol. 126. -P.379-388.

73. Diplock A.T .The modulating influence of vitamin E in biological membrane unsaturated phospholipid metabolism/ A.T. Diplock//Acta Vitaminol. Enzymol. 1982. -Vol. 4.-P. 303-309.

74. Draber P. Lipid rafts in mast cell signaling/ P. Draber, L. Draberova//Mol. Immunol. 2002. - Vol. 38. - P. 1247.

75. Drobnik W. Apo AI/ABCA1-dependent and HDL3-mediated lipid efflux from compositionally distinct cholesterol-based microdomains/ W. Drobnik, H. Bor-sukova, A. Pfeiffer, G. Liebisch, H. Schindler, G. Schmitz//Traffic. 2002. - Vol. 3. -P. 268-278.

76. Edidin M. Membrane cholesterol, protein phosphorylation and lipid rafts/ M. Edidin//Sci. STKE 2001. №. 67. - PE1.

77. Fan Y.Y. Dietary (n- 3) polyunsaturated fatty acids remodel mouse T-cell lipid rafts/ Y.Y. Fan, D.N. McMuiray, L.H. Ly, R.S. Chapkin //J.Nutr. 2003. - Vol.133. -P. 1913-1920.

78. Fernandes G. Dietary lipids and risk of autoimmune disease/G. Fernandes //Clin. Immunol. Immunopathol. 1994. - Vol. 72. - P.193-197.

79. Garnacho Montero J. Lipids and immune function/ J. Garnacho Montero, J. Shou, C. OrtizLeyba//Nutr. Hosp. 1996. - Vol. 11. -P.230-237.

80. Gillett M.P. Lecithin: cholesterol acyltransfer, dyslipoproteinaemia and membrane lipids in uraemia/ M.P. Gillett, E.N. Obineche, M.S. Lakhani, A. Abdulle, M. Sulaiman//J. Nephrol. 2001. - Vol. 14. -P.472-480.

81. Goebel J. Differential localization of IL-2- and -15 receptor chains in membrane rafts of human T cells/ J. Goebel, K. Forrest, L. Morford, T.L. Roszman//J. Leukoc. Biol. 2002. - Vol. 72. - P.199-206.

82. Goppelt M. Lipid composition of functional domains of the lymphocyte plasma membrane/ M. Goppelt, R. Eichhorn, G. Krebs, K. Resch/ZBiochim. Biophys. Acta. -1986. Vol. 854. -P.184-190.

83. Gousset K. Evidence for a physiological role for membrane rafts in human platelets/ K. Gousset, W.F. Wolkers, N.M. Tsvetkova, A.E. Oliver, C.L. Field, N.J. Walker, J.H. Crowe, F. Tablin//J. Cell Physiol. 2002. - Vol. 190. - P. 117-128.

84. Grandmaison P.A. Externalization of phosphatidylserine during apoptosis does not specifically require either isoform of phosphatidylserine synthase/ P.A. Grandmaison, T.S. Nanowsky, J.E. Vance//BBA 2004. -Vol. 1636. - P. 1-11.

85. Grimble R.F. Modulation of pro-inflammatory cytokine biology by unsaturated fatty acids/ R.F. Grimble, P.S. Tappia//Z Ernahrungswiss. 1998. - Vol. 37. - P.57-65.

86. Grosman N. Similar effect of ether phospholipids, PAF and lyso-PAF on the Ca(2+)-ATPase activity of rat brain synaptosomes and leucocyte membranes/ N. Grosman//Int. Immunopharmacol. -2001. Vol 1. - P. 1321-1329.

87. Harbige L.S. Dietary n-6 and n-3 fatty acids in immunity and autoimmune disease/ L.S. Harbige//Proc. Nutr. Soc. 1998. - Vol. 57. - P.555-562.

88. Healy D.A. Effect of low-to-moderate amounts of dietary fish oil on neutrophil lipid composition and function / D.A. Healy, F.A. Wallas, E.A. Miles, P.C. Calder, P. Newsholm// Lipids. 2000. - Vol. 35. - P.763-768.

89. Herrera E. Vitamin E: action, metabolism and perspectives/ E. Herrera, C. Bar-das//J. Physiol. Biochem. 2001. - Vol. 57. - P.43-56.

90. Jindrichova S. Corticosteroid effect on Caco-2 cell lipids depends on cell differentiation/ S. Jindrichova, O. Novakova, J. Bryndova, E. Tvrzicka, V. Lisa, F. Novak, J. Pacha//J. Steroid Biochem Mol. Biol.-2003. Vol. 87.-P. 157-165.

91. Kabarowski J.H. Lysophosphatidylcholine as a ligand for the immunoregulatory receptor G2A/ J.H. Kabarowski, K. Zhu, L.Q. Le, O.N. Witte, Y. Xu//Science. 2001. - Vol. 293. - P.702-705.

92. Kabouridis P.S. Cholesterol depletion disrapts lipid rafts and modulates the activity signaling pathways in T lymphocytes/ P.S. Kabouridis, J. Janzen, A. Magee //Eur. J. Immunol. 2000. - Vol. 30. - P. 954-963.

93. Komatsua H. Glycerylphosphorylcholine inhibits the transfer function of phos-phatidylinositol transfer protein/ H. Komatsua, J. Westermanb, G. Snoekb, T. Ta-raschia, N. Janesa//Bochim. Biophys. Acta. 2003. - Vol. 1632. - P.72-79.

94. Kusner D.J. Protease priming of neutrophil superoxide production. Effects on membrane lipid order and lateral mobility/ D.J. Kusner, J.N. Aucott, D. Franceschi, M.M. Sarasua, P. J. Spagnuolo, C.H. King//J. Biol. Chem. 1991. - Vol. 266. -P.16465-16471.

95. Laganiere S. Study on the lipid composition of aging Fischer-344 rst lymphoid cells: effect of long-term calorie restriction/ S. Laganiere, G. Fernandes//Lipids-1991.-Vol. 26.-P. 472-478.

96. Lee C.Y. Vitamin E supplementation improves cell-mediated immunity and oxidative stress of Asian men and women/ C.Y. Lee, Man-Fan Wan J.//J. Nutr. -2000. Vol. 130. - P. 2932-2937.

97. Lehto M.T. Pi-specific phospholipase С cleavage of a reconstituted GPI-anchored protein: modulation by the lipid bilayer/ M.T. Lehto, F. J. Sha-rom//Biochemistry. -2002. -Vol. 41. -P.1398-1408.

98. Leitinger B. The involvement of lipid rafts in the regulation of integrin function/ B. Leitinger, N. Hogg//J. Cell Sci. 2002. - Vol. 115. - P. 963-972.

99. Lin B.F. Dietary fat influences la antigen expression, cytokines and prostaglandin E2 production of immune cells in autoimmune-prone NZB x NZW F1 mice/ B.F.1.n, C.H. Huang, B.L. Chiang, S.J. Jeng //Br. J. Nutr. 1996. - Vol. 75. - P. 711722.

100. Madara J.L. Structural features of and cholesterol distribution in M-cell membranes in guinea pig, rat, and mouse Peyers patches/ J.L. Madara, W.A Bye, J.S. Trier//Gastroenterology. 1984. - Vol. 87. - P.1091-1103.

101. Malapati S. The influence of CD40 on the association of the В cell antigen receptor with lipid rafts in mature and immature cells/ S. Malapati, S.K. Pierce//Eur. J. Immunol. 2001. - Vol. 31. - P.3789-3797.

102. Marmor M.D. Role for lipid rafts in regulating interleukin-2 receptor signaling/ M.D. Marmor, M. Julius//Blood. 2001. - Vol. 98. -P.1489-1497.

103. Martelli A.M. Diacylglycerol kinases in nuclear lipid-dependent signal transduction pathways/ A.M. Martelli, R. Bortul, G. Tabellini, R. Bareggi, L. Manzoli, P. Narducci, L. Cocco//Cell Mol. Life. Sci. 2002. - Vol. 59. -P.l 129-1137.

104. Massey J.B. Interfacial properties of phosphatidylcholine bilayers containing vitamin E derivates/ J.B. Massey //Chem. Phys. Lipids. 2001. - Vol. 109. - P.157-174.

105. Masuda M. Decreased fluidity of polymorphonuclear luekocyte membrane in streptozocin-induced diabetic rats/ M. Masuda, T. Murakami, H. Egawa, K. Mu-rata//Diabetes. 1990. - Vol. 39. - P.466-470.

106. Milhiet P.E. Cholesterol is not crucial for the existence of microdomains in kidney brush-border membrane models/ P.E. Milhiet, M.C. Giocondi, C. Le Grimel-lec//J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277. -P. 857-858.

107. Millan J. Lipid rafts mediate biosynthetic transport to the T lymphocyte uropod subdomain and are necessary for uropod integrity and function/ J. Millan, M.C. Montoya, D. Sancho, F. Sanchez-Madrid, M.A. Alonso//Blood. 2002. - Vol. 99. -P.978-984.

108. Mitchell J.S. Lipid microdomain clustering induces a redistribution of antigen recognition and adhesion molecules on human T lymphocytes/ J.S. Mitchell, O. Kanca, B.W. Mclntyre//J. Immunol. 2002. - Vol. 168. - P.2737-2744.

109. Miura S. Modulation of intectinal immune system by dietary fat intake: relevance to Crohn's disease/ S. Miura, Y. Tsuzuki//J. Gastroenterol. Hepatol. 1998. -Vol.13.-P. 1183-1190.

110. Moriguchi S. The role of vitamin E in T-cell differentiation and the decrease of cellular immunity with aging/ S. Moriguchi, M. Hamada, K. Yamauchi, K. Sakai, S. Yamamoto//J. Med. Invest. 1998. - Vol. 45. - P. 1-8.

111. Morrow W.J. Dietary fat and immune function. Antibody responses, lymphocyte and accessory cell function in (NZB x NZW) F1 mice/ W.J. Morrow, Y. Ohashi, J. Hall, J. Pribnov, S. Hirose, T. Shirai, J.A. Levy//J. Immunol. 1985. - Vol. 135. -P.3857-3863.

112. Moussa M. In vivo effects of oil-based lipid emulsion on limphocyte activation in rats/ M. Moussa, J.Le Boucher, J. Garcia, J. Tkaczuk //Clinical Nutrition. 2000. -Vol. 19.-P.49-54.

113. Moussa M. Relationship between the fatty acid composition of rat lymphocytes and immune functions/ M. Moussa, J. Tkaczuk, J. Ragab, J. Garcia, M. Abbal, E. Ohayon, J. Ghisolfi, J. P. Thouvenot //Br. J. Nutr. 2000. - Vol. 83. - P.327-333.

114. Murawski U. Age-related changes of lipid fractions and total fatty acids in the serum of female and male rats aged from 37 to 1200 days/ U. Murawski, K. Kri-esten, H. Egge// Сотр. Biochem. Physiol. 1989. - Vol. 94. - P.525-536.

115. Neufeld N.D. Effects of caloric restriction and exercise on insulin receptors in obesity: association with changes in membrane lipids/ N.D. Neufeld, C. Ezrin, L. Corbo, D. Long, M.A. Bush //Metabolism. 1986. - Vol. 35. - P.580-587.

116. Nguyen D.H. CXCR4 function requires membrane cholesterol/ D.H. Nguyen, D. Taub//J. Immunol. 2002. - Vol. 168. - P.4121-4126.

117. Ohanian J. Sphingolipids in mammalian cell signaling/ J. Ohanian, V. Oha-nian//Cell Moll. Life Sci. 2001. - Vol. 58. - P. 2053-2068.

118. Petrequin P.R. Differential responses to adjuvants of macrophages from young virgin, aging virgin and aging breeder mice/ P.R. Petrequin, A.G. JohnsonvVInt. J. of Immunopharmacology. 1986. - Vol. 8. - P.261-268.

119. Pierce S.K. Lipid rafts and B-cell activation/ S.K. Pierce //Nat. Rev. Immunol. -2002.-Vol. 2. P.96-105.

120. Pike M.C. Lipid requirements for leukocyte chemotaxis and phagocytosis: effects of inhibitors of phospholipid and cholesterol synthesis/ M.C. Pike, R. Snyder-man//J. Immunol. 1980. - Vol. 124. -P.1963-1969.

121. Pilot J.D. Effects of phospholipid headgroup and phase on the activity of diacyl-glycerol kinase of Escherichia coli/ J.D. Pilot, J.M. East, A.G. Lee//Biochemistry. -2001.-Vol. 40.-P. 14891-14897.

122. Pozzi D. Role of Alcata cell membrane fluidity in susceptibility to Epstein-Barr virus infection/ D. Pozzi, A. Lisi, S. Grimaldi//Res. Virol. 1995. -Vol. 146. -P.301-305.

123. Pratt V.C. Alteration in lymphocyte function and relation to phospholipid composition after burn injury in humans/ V.C. Pratt, E.E. Tredget, M.T. Clandinin, C.J. Field//Crit Care Med. 2002. - Vol. 30. -P.1753-1761.

124. Radu C.G. T cell chemotaxis to lysophosphatidylcholine through the G2A receptor/ C.G. Radu, L.V. Yang, M. Riedinger, M. Au, O.N. Witte//Proc. Natl. Acad Sci USA. 2004. - Vol. 101. -P.245-250.

125. Ricardo M.J. Lipid composition of alveolar macrophage plasma membrane during postnatal development/ M.J. Ricardo, G.W. Small, Q. N. Myrvik, L.S. Kucera//J. Immunol. 1986. - Vol. 136. -P.1054-1056.

126. Salgado J. Alpha-tocopherol interacts with natural micelle-forming single-chain phospholipids stabilizing the bilayer phase/ J. Salgado, J. Villalain, J.C. Gomez-Fernandez//Arch. Biochem. Biophys. 1993. - Vol. 306. -P.368-376.

127. Samuni A.M. Damage to liposomal lipids: protection by antioxidants and cholesterol-mediated dehydration/ A.M. Samuni, A. Lipman, Y. Barenholz//Chem. Phys. Lipids. -2000. Vol. 105. - P. 121-134.

128. Sanchez-Migallon M.P. Interaction between alpha-tocopherol and heteroacid phosphatidylcholines with different amounts of unsaturation/ M.P. Sanchez-Migallon, F.G. Aranda, J.C. Gomez-Fernandes//Bochim. Biophys. Acta. 1996. -Vol. 1279. -P.251-258.

129. Sanderson P. Effects of dietary lipid manipulation upon graft vs host and host vs graft responses in the rat/ P. Sanderson, P. Yaqoob, P. Calder//Cellular Immunology. 1995. - Vol. 164. - P.240-247.

130. Schade A.E. Lipid raft heterogeneity in human peripheral blood T lymphoblasts: a mechanism for regulating the initiation of TCR signal transduction/A.E. Schade, A.D. Levine//J. Immunol. 2002. - Vol.168. - P.2233-2239.

131. Sedwick C.E. Ordered just so: lipid rafts and lymphocyte function\ C.E. Sed-wick, A. Altman//Sci. STKE. 2002. № 122 - PE 2.

132. Serafini M. Dietary vitamin E and T cell-mediated function in the elderly: effectiveness and mechanism of action/ M. Serafini//Int. J. Dev. Neurosci. 2000. -Vol. 18. -P.401-410.

133. Seres I. Alteration of lymphocyte membrane phospholipids and intracellular free calcium concentrations in hyperlipidemic subjects/ I. Seres, M. Freyss-Beguin, A.

134. Mohacsi, В. Kozlovsky, J. Simon, M. Devynck, T. Fulop// J. Atherosclerosis. 1996. -Vol. 121. - P.175-183.

135. Shiratsuchi A. Phosphatidylserine-mediated phagocytosis of influenza A virus-infected cells by mouse peritoneal macrophages/ A. Shiratsuchi, M. Kaido, T. Taki-zawa, Y. Nakanishi//J. Virol. 2000. - Vol. 74. - P.9240-9244.

136. Simons M. Assembly of myelin by association of proteolipid protein with cholesterol- and galactosylceramide-rich membrane domains/ M. Simons, E. Kramer, C. Thiele, W. Stoffel, J. Trotter//J. Cell. Biol. 2000. - Vol. 151. - P.143-153.

137. Smith D.M. Plasma membrane lipid packing and leukocyte function-associated antigen-1-dependent aggregation of lymphocytes/ D.M. Smith, P.L. Williamson, R.A. Schlegel//J. Cell Physiol. 1993. - Vol. 156. - P.182-188.

138. Stulnig T.M. Immunomodulation by polyunsaturated fatty acids: mechanisms and effects/ T.M. Stulnig//Int. Arch. Allergy Immunol. 2003. - Vol. 132. - P.310-321

139. Stulnig T.M. Altered switch in lipid composition during T-cell blast transformation in the healthy elderly/ T.M. Stulnig, E. Buhler, G. Bock, C. Kirchebner, D. Schonitzer, G. Wick//J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 1995. - Vol. 50. - P.383-390.

140. Stulnig T.M. Polyunsaturated eicosapentaenoic acid displaces proteins from membrane rafts by altering raft lipid composition/ T.M. Stulnig, J. Huber, N. Leit-inger, E. Imre, P. Angelisova//J. Biol Chem. 2001. - Vol. 276. - P.37335-37340.

141. Szewczenlco-Pawlikowski M. Accumulation of unsaturated lipids in monocytes during early phase pyrogen tolerance/ M. Szewczenko-Pawlikowski, W. Kozalc //Biochim. Biophys. Acta. 2000. - Vol. 1484. - P. 183-194.

142. Terrasa A. Selective inhibition of the non-enzymatic lipid peroxidation of phos-phatidylserine in rod outer segments by alpha-tocopherol/ A. Terrasa, M. Guajardo, A. Catala//Mol. Cell Biochem. 2000. - Vol. 211. -P.39-45.

143. Thewke D. Transcriptional homeostatic control of membrane lipid composition/ D. Thewke, M. Kramer, M. Sinensky//Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. -Vol. 273.-P. 1-4.

144. Traill K.N. Lymphocyte membrane lipid composition and mitogen responsiveness in chickens: role of membrane fluidity/ K.N. Traill, K. Ratheiser, R. Pfeil-schifter//Eur. J. Immunol. 1986. - Vol. 16. - P.75-82.

145. Tsubata Т. В cell signaling/ T. Tsubata, J. Wienands//Int. Rev. Immunol. -2001.-Vol.20.-P.675-678.

146. Tuosto L. Organization of plasma membrane functional rafts upon T cell activation/ L. Tuosto, I. Parolini, S. Schroder, M. Sargiacomo, A. Lanzavecchia, A. Vi-ola//Eur. J. Immunol. 2001. - Vol.31. - P.345-349.

147. Uchida T. Inhibition of cell growth by macrophage membrane lipid molecule/ T. Uchida, S. Naito, J. Mizuguchi//Int. Arch. Allergy Immunol. 1995. - Vol.106. -P.107-112.

148. Van Laethem F. Membrane lipid rafts: new targets for immunoregulation/ F. Van Laethem, O. Leo//Curr. Mol. Med. 2002. - Vol. 2. - P.557-570.

149. Van Laethem F. Glucocorticoids alter the lipid and protein composition of membrane rafts of a murine T cell hybridoma/ F. Van Laethem, X. Liang, F. Andris, J. Urbain, M. Vandenbranden, Т. M. Stulnig, O. Leo//J. Immunol. 2003. - Vol. 170. -P.2932-2939.

150. Wallace F.A. Dietary fats affect macrophage-mediated cytotoxicity towards tumour cells/ F.A. Wallace, S.J. Neely, E.A. Miles, P.C. Calder//Immunol. Cell Biol. -2000.-Vol. 78.-P. 40-48.

151. Wang X. The location and function of vitamin E in membranes/ X. Wang, P.J. Quinn//Mol. Membr. Biol. 2000. - Vol. 17. - P.143-156.

152. Wolach B. Improved chemotactic ability of neonatal polymorphonuclear cells induced by mild membrane rigidification/ B. Wolach, M. Ben Dor, O. Chomsky, R. Gavrieli, M. Shinitzky//J. Leukoc. Biol. 1992. - Vol.51. - P. 324-328.

153. Yaqoob P. Lipids and the immune response/ P. Yaqoob//Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic Care. 1998. № 1. - P. 153-161.

154. Yaqoob P. Fatty acids as gatekeepers of immune cell regulation/ P. Yaqoob //Trends Immunol. 2003. - Vol. 24. - P.639-645.

155. Yaqoob P. Effect of dietary lipid manipulation upon inflammatory mediator production by murine macrophages/ P. Yaqoob, P. Calder//Cell. Immunol. 1995. -Vol. 163.-P. 120-128.

156. Yaqoob P. The effect of dietary lipid manipulation on rat lymphocyte subsets and proliferation/ P. Yaqoob, E.A. Newsholme, P. Calder//Immunology. 1994. -Vol. 82. - P.603-610.

157. Yaqoob P. Influence of cell culture conditions on diet-induced changes in lymphocyte fatty acid composition/ P. Yaqoob, E.A. Newsholme, P. Calder//Biochim. Biophys. Acta. 1995. - Vol. 1255. - P. 333-340.

158. Zeyda M. LAT displacement from lipid rafts as a molecular mechanism for the inhibition of T cell signaling by polyunsaturated fatty acids/ M. Zeyda, G. Staffler, V. Horejsi, W. Waldhausl, T.M. Stulnig//J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277. -P.28418-28423.

Информация о работе

Бедулева, Любовь Викторовна
кандидата биологических наук
Казань, 2004
ВАК 03.00.04

Диссертация

Исследование взаимосвязи липидного состава и функциональной активности иммунокомпетентных клеток - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы