Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Физико-химические характеристики лимфоидных клеток при пролиферативных процессах

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зорин, Владимир Петрович

ОСНОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕШЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЖТЕРАТУРШХ ДАННЫХ

1.1. Строение клеточных мембран.

1.2. Роль структурного состояния липидного компонента в определении функциональных свойств клеточных мембран.

1.3. Биофизические и биохимические показатели опухолевых клеток в процессе развития опухолей.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ К МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Получение суспензий клеток.

2.2. Флуоресцентные зонды.

2.3. Измерение внутриклеточного рН с помощью флуоресцеин-диацетата.

2.4. Методика определения спектрально-флуоресцентных параметров клеточных суспензий.

2.5. Квалификация использованных реактивов.

2.6. Препараты для модельных исследований.

2.7. Определение содержания продуктов ПОЛ в клетках

2.8. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. ФИЗШСО-ХЖМЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ КЛЕТОК

ЛИМФШДНОЙ ТКАНИ

3.1. Спектрально-люминесцентные свойства клеток и клеточных мембран в ультрафиолетовой и видимой областях спектра.

3.2. Использование флуоресцентных зондов для исследования структурно-функциональных превращений мембран лимфоидных клеток.

3.3. Биохимические показатели процессов перекисного окисления липидов в клетках лимфоидной ткани и их связь с физико-химическшли характеристиками клеток.

3.4. Изучение факторов, определяющих величину внутриклеточного рН в клетках лимфоидной ткани.

3.5. Температурноиндуцированные изменения текучести клеточных мембран и рН £ в нормальных и опухолевых клетках.

ГЛАВА 4. СТРЛ(ТУРН0-ФУ11К1 ЩОНАJJbblblE ИЗМЕНЕНИЯ КЛЕТОК ЖМфШДНОЙ ТКАНИ,СВЯЗАННЫЕ С ИЗМЕНЕНИЕМ СКОРОСТИ ПРОЛИФЕ-РАЩ'М

4.1. Физико-химические характеристики клеток селезенки мыши при лейкозе <£а

4.2. Сравнительная характеристика физико-химических свойств лимфоцитов периферической крови человека в норме, при лейкозе и при действии фитогемагглютенина.

4.3. Структурно-функциональные изменения клеточных мембран в процессе роста асцитной гепатомы мыши.

4.4. Структурно-функциональные изменения мембран клеток лимфомы Беркитта в процессе'культивирования.

4.5. Сравнительная характеристика процессов в клетках трансформированной ткани и в развивающихся клеточных популяциях.

ЗАШИЕШЕ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Физико-химические характеристики лимфоидных клеток при пролиферативных процессах"

Клеточные системы с изменяющейся скоростью пролиферации представляют собой широкий класс экспериментальных моделей. Деление клеток и его регуляция на молекулярном уровне - проблемы, решение которых актуально для многих областей медицинских и биологических наук. При непосредственном участии про-лиферативных процессов в организме протекают такие явления, как регенерация тканей, заживление ран, развитие иммунного ответа. Изменение скорости клеточной пролиферации сопровождает развитие многих паталогических процессов. Так, в последние годы сформировалось представление о том, что опухолевый рост является результатом нарушения нормальной пролиферации и диффе-ренцировки клеток / 7, 214 /. Стимуляция клеточной пролиферации рассматривается и как важный способ модификации лучевого и других видов поражения клеток / 75 /.

К настоящему времени, в основном, охарактеризованы биохимические изменения в клетках, сопровождающие индукцию и торможение пролиферации в различных клеточных системах. Показано, что особая роль в регуляции активности пролиферативных процессов принадлежит клеточным мембранам. Состав, структура и функции клеточных мембран претерпевают изменения как при ускорении, так и при торможении пролиферативных процессов. Изменение состава и структуры клеточных мембран сильно влияет на чувствительность клеток к действию пролиферогенных факторов. Как пролифе-ративнозависимые изменения могут рассматриваться некоторые изменения в количественных соотношениях клеточных компонентов и нарушения пропорциональности между различными функциональными цроцессаш при опухолевой трансформации клеток.

Пролиферативнозависимые изменения клеточных характеристик представляют значительный интерес с точки зрения сравнения нормальных и опухолевых клеток и тканей, а также для установления критериев различий злокачественного и доброкачественного роста новообразований в организме.

Несмотря на большое число экспериментальных работ, выполненных при исследовании клеточных популяций с меняющейся скоростью пролиферации, молекулярные механизмы, определяющие скорость клеточного роста, все еще далеки от полного понимания. В значительной степени это положение связано с тем, что пролиферация клеток зависит от множества самых разнообразных факторов как специфической, так и неспецифической природы. Однако ряд клеточных характеристик изменяется в клетках сходным образом независимо от црироды того или иного фактора, влияющего на скорость пролиферации. Очевидно, что подобные клеточные характеристики, которые определяются изменяющимся при пролиферации состоянием клеток, а также проблемы регуляции пролиферации могут быть изучены лишь при исследовании реакций клеток на различные пролиферогенные воздействия.

В связи с изложенным целью нашей работы явилось выявление структурных и функциональных особенностей мембран как нормальных, так и опухолетрансформированных клеток, находящихся в состояниях с различной активностью пролиферативных процессов.

Объектом исследований служили, в основном, клетки лимфоид-ной ткани. Выбор в качестве объекта исследований лимфоидной ткани обусловлен важностью пролиферативных процессов для выполнения ею иммунологической функции, способностью этой ткани к физиологической и выраженной репаративной регенерации, высокой частотой злокачественной трансформации. Кроме того, изменение пролиферативной активности лимфоидных клеток легко моделируется в эксперименте.

Для регистрации реакции: лимфоидных клеток на изменение активности пролиферативных процессов применены методы собственной флуоресценции клеток ( в диапазоне спектра длин волн 300-500 нм ), абсорбционного анализа и флуоресцентных зондов. В качестве основных клеточных характеристик в работе исследовали микровязкость и параметр липидного порядка клеточных мембран, измеряемые с помощью липидраетворимого зонда ДИТ, величину степени поляризации флуоресценции различающихся по локализации в клетке флуоресцентных зондов, амплитуду изменений степени поляризации флуоресценции зонда ШС по спектру его флуоресценции, содержание в клетках МДА-подобных и флуоресцирующих продуктов процессов ПОЛ, величину активности ионов водорода в клетках и ее изменчивость при варьировании рН среды в диапазоне 6,5-8,0,

Исследуя различные характеристики лимфоидных клеток, мы исходили из того, что между ними существуют определенные взаимосвязи. Поэтов для определения возможных причинно-еледствен-ных отношений в вариациях различных мембранных характеристик лимфоидных клеток при изменении активности пролиферативных цро-цессов нами било исследовано влияние накопления продуктов процессов ПОЛ на структурные характеристики клеточных мембран и Чувствительность рй^ к изменению рН среды, а также взаимосвязь между термоиндуцированными изменениями параметра липидного порядка и активности ионов Н+ в клетках.

В результате проведенного исследования определены ( для ряда характеристик впервые ) различия между лимфоцитами, выделенными из лимфоидных тканей в норме и цри опухолевой трансформации. Установлены закономерности ряда изменений исследованных клеточных характеристик в динамике развития клеточных популяций ( опухоль АГ-22а, культура клеток лимфомы Беркитта, культура лимфоцитов периферической крови человека при действии ФГА ), Модельные исследования взаимосвязи изменений биохимических и структурно -функциональных характеристик мембран различных клеток позволили предположить наличие между ними вполне определенных отношений подчиненности.

На основании полученных данных, а также данных литературы в работе развивается положение о зависимости между пролифера-тивной активностью лимфоидных клеток и рядом структурно-функциональных характеристик клеточных мембран. Заключено, что вследствие зависимости структурно-функциональных состояний клеток от скорости роста популяций в клетках будут осуществляться такие физико-химические механизмы регуляции состояний, которые могут усиливать действие пролиферогенных факторов, а также обеспечивать взаимосвязь между пролиферативными процессами и действием факторов, изменяющих активность обменных и синтетических процессов в клетке.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Зорин, Владимир Петрович

ВЫВОДЫ

1. Для лимфоидных клеток исследована зависимость рН( от pH среды. Для всех исследованных типов клеток (клетки тимуса, селезенки, лимфоузлов, периферической крови человека, опухоли АГ-22а, культуры лимфомы Беркитта) установлено, что линейный характер зависимости рН^ от pH среды сохраняется в широком диапазоне pH независимо от ионного состава среды, что позволило ввести для характеристики чувствительности рН^к изменениям pH среды коэффициент А. Коэффициент А зависит от мор-фофункционального состояния лимфоидных клеток и его изменение определяется изменением биохимических и структурных характеристик клеточных мембран. Величина коэффициента А зависит от характеристик среды, в которой находятся клетки: буферной емкости, ионного состава и температуры.

2. Показано, что при увеличении температуры среды от 0 до 45 °С в клетках изменяется величина внутриклеточного pH. Для клеток АГ~22а в интервале 18-19 °С и для клеток селезенки мыши при 8-12 °С установлено скачкообразное изменение величины pHL.

3. Показано, что лейкозноизмененные лимфоидные клетки (лейкоз и хронический лимфолейкоз) в сравнении с нормальными характеризуются меньшим содержанием продуктов ПОЛ, меньшей величиной параметра липидного порядка и меньшей величиной коэффициента А. Установлено, что подвижность молекулярных зондов выше в составе лейкозных клеток.

4. Лимфоциты периферической крови человека, стимулированные к пролиферации действием митогена ФГА, характеризуются в сравнении с лимфоцитами, находящимися в покое, изменениями исследованных клеточных характеристик той же направленности, что и при опухолевой трансформации клеток.

5. Результаты анализа изменений клеточных характеристик в динамике роста клеточных популяций (опухоль АГ-22а и культура клеток лимфомы Беркитта) показали, что при уменьшении скорости пролиферации в клетках увеличивается содержание продуктов ПОЛ, уменьшается текучесть клеточных мембран, увеличивается чувствительность величины рН[ к изменениям рН среды.

6. Увеличение содержания продуктов ПОЛ в лимфоидных клетках сопровождается уменьшением текучести клеточных мембран, регистрируемым по изменению Рдфрр» и уменьшением подвижности мембранных структур на поверхности клеток, регистрируемым по изменению Рдас и р^щ. Накопление продуктов ПОЛ ведет также к увеличению гетерогенности мест связывания на поверхности клеток для АИС. Интенсификация процессов ПОЛ в клетках сопровождается увеличением коэффициента А и уменьшением величины трансмембранного градиента рН. Выравнивание концентраций продуктов ПОЛ в клеточных суспензиях (клетки селезенки в норме и при лейкозе £а. , АГ-22а на различных стадиях развития опухоли) ведет к уменьшению различий в структурных и функциональных характеристиках клеточных мембран.

7. Полученные данные, описывающие взаимосвязь клеточных характеристик при различных активностях процессов ПОЛ позволяют рассматривать последовательность процессов: изменение содержания продуктов ПОЛ - структурная модификация липидного бислоя мембраны - изменение величины внутриклеточного рН и ее чувствительности к вариациям рН среды, как один из участков цепи регуляторных процессов, ведущих к приобретению или потере клетками компетентности к пролиферации.

Автор считает своим долгом выразить искреннюю признательность своим научным руководителям: доктору физ.-мат.наук Ко-мяку Анатолию Ивановичу и кандидату физ.-мат.наук Черенкевичу Сергею Николаевичу за предоставленную возможность работать по данной теме, за поддержку и помощь при руководстве работой.

Автор также благодарен доктору мед.наук Свирновскоцу А.И., кандидату мед.наук Сыколо А.И., Меркуловой И.П., кандидату биол.наук Лабзо С.С. за помощь при получении материалов для исследования и при обсуждении результатов.

159 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Среди различных функциональных превращений клеток важное место занимают пролиферативные клеточные изменения. Например, с помощью различных биохимических методов в литературе показано, что многие количественные отличия опухолевых клеток от нормальных не являются строго специфичными в отношении опухолевой трансформации клеток. Более того показано, что в определенные периоды развития нормальные клетки по ряду характеристик претерпевают те же количественные изменения, которые наблюдаются при опухолевой трансформации клеток.

Отличия, установленные для опухолевых клеток, касаются изменений в интенсивности синтетических и обменных процессов и проявляются в виде увеличения активности различных метаболических цроцессов, процессов синтеза различных клеточных компонентов. В то же время показано, что в основе приобретения клеткой компетентности как к усиленной функциональной деятельности, так и к усиленной пролиферации - одному из отличительных свойств опухолевых клеток, лежат единые механизмы, относящиеся к общи неспецифическим реакциям клеток. Свидетельством в пользу существования сопряжения цролиферативных и функциональных процессов в клетках могут служить данные об изменении активности клеточных ферментов в популяциях клеток с изменяющейся скоростью роста.

Одной из решающих особенностей опухолевых клеток является потеря ими чувствительности к регулирующим воздействиям со стороны систем, участвующих в поддержании ионного гомеостаза. В то же время показано, что максимальная пролиферативная активность клеток достигается в узком диапазоне концентраций ионов и рН и обеспечивается соответствующим структурным состоянием клеточных мембран. В этом плане установленные для опухолевых клеток отличия в структурных и функциональных характеристиках можно рассматривать и с точки зрения изменений пролиферативной активности клеток и связанных с ними пролиферогенных изменений структурного и функционального состояния клеточных мембран.

Различия в пролиферации и связанных с ними клеточных характеристик нормальных и опухолевых клеток наиболее четко проявляются при изменениях скорости роста клеточных популяций, например, в случае торможения роста при увеличении клеточной плотности или при ускорении под действием различных митогенов. Поэтому в качестве моделей, позволяющих выделить эти различия и особенности, нами были выбраны популяции клеток как нормальных, так и опухолеизмененных, изменяющие скорость роста в условиях Ln vitro и in vitzo , В качестве модели оцухолевых клеток в работе проанализированы клетки селезенки мышей при лейкозе £а. и лимфоциты периферической крови больных хроническим лимфолейкозом. В качестве контрольных клеток изучались клетки интактных мышей и здоровых доноров. Для анализа зависимости структурно-функциональных характеристик клеток и клеточных мембран от активности пролиферативных процессов были рассмотрены клетки АГ-22а в динамике развития опухоли и клетки лимфо-мы Беркитта в процессе культивирования, а также лимфоциты периферической крови человека, стимулированные ФГА.

Установлено, что изменение структурного состояния клеточных мембран и ряд биохимических характеристик клеток можно успешно изучать с помощью флуоресцентных методов исследования.Сравнение характеристик клеток с различной пролиферативной активностью осуществлялось с помощью параметров собственной флуоресценции клеток в ультрафиолетовой и видимой областях спектра, параметров флуоресценции оптических зондов с различной локализацией в мембране и клетке. Кроме того, изучалось относительное содержание продуктов ПОЛ в клетках.

С целью выяснения сопряженности изменений отдельных структурных и биохимических показателей мембран при нарушении функционального состояния клеток эти показатели сравнивали с вариациями клеточных характеристик при экзогенном изменении одного из клеточных параметров.

Полученные нами результаты показывают, что суспензии опухолевых клеток отличаются от суспензий нормальных лимфоцитов по величине интенсивности собственной флуоресценции в ультрафиолетовой и видимой областях спектра, а также по относительному содержанию ЬЩА. Кроме того установлено, что степень поляризации флуоресценции зондов АНС, ®А, ДФГТ и ковалентных меток ФМА и ШТЦ меньше в суспензии опухолевых клеток по сравнению с нормальными.

Следует отметить, что установленные нами различия между отдельными типами клеток в величинах степени поляризации флуоресценции зондов не связано с различиями в количестве связанных клетками молекул красителя. Установлено, что при всех исследованных функциональных превращениях клеток заметных изменений в поверхностной плотности мест связывания АНС не происходит, что позволяет исключить из рассмотрения эффекты, связанные с концентрационной деполяризацией флуоресценции зонда. Исследование зависимости степени поляризации по спектру флуоресценции АНС в клеточных суспензиях показало, что изменения величины степени поляризации флуоресценции красителя обусловлены гетерогенностью мест связывания молекул зонда на поверхности клеток.

Исследование флуоресцентным способом с использованием ФДА активности ионов Н+ в клетках при варьировании рН среды в диапазоне 6,0-8,0 показало, что как опухолевые, так и нормальные лимфоидные клетки характеризуются линейной зависимостью рН£ от рН среды. Введенный нами параметр А, характеризующий зависимость рН{, от рН среды для данного типа клеток, позволяет описать зависимость гомеостатирующего потенциала клеточных мембран от ряда физико-химических факторов среды» Нами установлено, что изменение структурного состояния липидного компонента клеточных мембран вследствие варьирования содержания продуктов перекисного окисления липидов в клетке может лежать в основе гомеостатирующей функции клеточных мембран»

Нами установлено, что нормальные клетки с более интенсивными пролиферативными процессами - лимфоциты периферической гфови человека, стимулированные ФГА, характеризуются такими же изменениями исследованных структурных и биохимических характеристик клеток и клеточных мембран по сравнению с нести-мулированными клетками, что и опухолетрасформированные в сравнении с нормальными.

При исследованиии клеток, выделенных из опухоли АГ-22а и культуры клеток лимфомы Беркитта на различных стадиях развития, нами зарегистрированы значительные изменения в содержании ТБК-активных и флуоресцирующих продуктов процессов ПОЛ, в структуре липидного компонента клеточных мембран, величины степени поляризации флуоресценции АНС. Клетки, полученные из популяций, находящихся на терминальной стадии роста, характеризуются сниженным гомеостатирующим потенциалом в сравнении с аналогичными клетками, выделенными на стадии экспоненциального роста клеточных популяций* Аналогичные результаты получены нами при исследовании клеток лимфомы Беркитта в процессе долговременного культивирования.

Несмотря на количественные различия структурных и биохимических параметров лимфоидных клеток и их мебран в зависимости от морфо-функционального состояния, направленность изменений регистрируемых характеристик совпадает в случае сходства изменений пролиферативной активности. Таким образом, полученные нами результаты позволяют утверждать, что установленные различия в величинах степени поляризации флуоресценции зондов, рН£, а также в содержании продуктов процессов ПОЛ не являются строго специфическими для лейкозных клеток и в значительной степени отражают увеличенную скорость пролиферации опухолевых кле- , ток в организме опухоленосителя.

Исследование изменений клеточных характеристик при экзогенном стимулировании процессов ПОЛ в клетках позволило нам предположить, что вариации в содержании продуктов эндогенных процессов ПОЛ в клетках, претерпевающих морфо-функциональные превращения, могут служить причиной нарушения с труктурно-фун-кционального состояния клеточных мембран. На основании полученных экспериментальных результатов нами предложена схема, включающая последовательность изменений исследованных характеристик клеток: изменение содержания продуктов ПОЛ в клетках -структурная модификация липидного бислоя мембран - изменение внутриклеточной концентрации ионов и метаболитов. Полученные результаты не позволяют однозначно решить вопрос о взаимоподчиненности наблюдаемых изменений биофизических и биохимических характеристик клеток, с одной стороны, и изменений пролиферативной активности, с другой. Однако, анализ опубликованных в литературе и собственных данных позволяет считать, что нарушение структурно-функционального состояния клеточных мембран может выступать как один из факторов регуляции пролиферативной активности клеток, йроме того, в случае изменения скоростей обменных процессов вследствие снижения или увеличения скорости роста клеточной популяции изменение структурно-функционального состояния клеточных мембран по обсуждаемому механизму может обеспечивать усиление пролиферативного ответа клеток.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зорин, Владимир Петрович, Минск

1. Александров В.Я. Клетки, макромолекулы и температура.-М., Наука, 1971, 246 с.

2. Александров H.H., Фрадкин С.З. Пути повышения Фезопас-с§сти применения метода управляемой гипергликемии перекисле-ния в комплексном лечении злокачественных опухолей. - В кн.: Актуальные проблемы онкологии, радиологии. т.З. Минск, 1973, 245 с.

3. Александров H.H., Савченко Н.Е», Фрадкин С.З., Жаврид Э«А. Применение гипертермии и гипергликемии при лечении злокачественных опухолей,- М., Медицина, 1980, 256 с.

4. Алесенко A.B., Бурлакова Е.Б. Связь изменений антиокислительной активности липидов с синтезом ДНК в регенерирующей ткани.- Докл.АН СССР, 1972, т.207, с.1471-1474,

5. Антонов В.Ф,, Владимиров Ю,А., Россельс А.Н,, Коркина Л,Г. Влияние продуктов перекисного окисления ненасыщенных жирных кислот на транспорт ионов через бимолекулярные фосфолипид-ные мембраны.- Биофизика, 1973, т,18, №4, с.666-673.

6. Антонов В.Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран«-М,, Наука, 1982, 151 с.

7. Бейтс 0. Определение pH. Теория и практика,- Л,, Химия, 1972, 398 с.

8. Богданов Г.Н., Шмонина В,М, Обмен нуклеиновых кислотв нормальной, регенерирующей и неопластических тканях печени.-Вопр. онкологии, 1975, т,21, № 4, с.28-32,

9. Бурлакова Е.Б,, Аристархова С.А,, Архипова Г,В., Гва-хария В.О., Глущенко H.H., Храпова Н.Г. Регуляторная роль взаимосвязи изменений концентрации антиоксидантов и состава липидов клеточных мембран,- Докл. АН СССР, 1976, т.228, № I, с.215-218,

10. Эдаакова Е.Б., Дкалябова М.И., Гвахария В.О., Глушенко Н.Н,, Молочкина Е.М,, Шполько В.Н. Влияние липидов мембран на активность ферментов,- В кн.: Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и паталогии, М,, Наука, 1982, с.113-140,

11. Е|урлакова Е.Б, Связь изменений структуры и функции мембран с окислительными реакциями в липидах,- В кн.: Симпоз. докл. на 3 Всесоюзн, биохимическом съезде,, Рига, Знание, 1974, с,184.

12. Бурлакова Е.Б, Роль антиокислителей в физико-химических процессах регулировки размножения клеток.- В кн.: Физико-химические основы авторегуляции в клетках,, М,, Наука, 1968, с.15-25.

13. Бурлакова Е.Б«, Алесенко A.B., Молочкина Е.М,, Пальми-на H.H., Храпова Н,Г, Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте.- М., Наука, 1975, 214 с.

14. Бурштейн Э.А. Собственная люминесценция белка.- В кн.: Итоги науки и техники. Биофизика., М., ВИНИТИ, 1977, т.7, с.5-39,

15. Бурштейн Э,А. Люминесценция белковых хромофоров (модельные исследования),- В кн.: Итоги науки и техники. Биофизика,, М., ВИНИТИ, 1976, т.6, 246 с.

16. Варрен Л,, Бук С,А. Химические изменения в мембранах опухолевых клеток,- В кн.: Мембраны и болезнь,, М., Медицина, 1980, с.183-194.

17. Васильев Ю.М., Гельфанд И.М. Взаимодействие нормальных и неопластических клеток со средой,- М., Наука, 1981, 220 с.

18. Волков Е.И., Чернавский Д.С. Биологические следствия физической организации плазматических мембран нормальных и опухолевых: клеток.- Известия Ш СССР сер. биол., 1981, № I, 29-42.

19. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е, Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран,- М., Наука, 1980, 320 с,

20. Владимиров Ю.А,, Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах,- М., Наука, 1972, 186 с.

21. Владимиров Ю.А., Поглазов А.Ф. Структурная организация мембран.- В кн.: Биологические мембраны,, М,, Медицина, 1973, 7-42.

22. Голощапов А.Н,, Бурлакова Е,Б, Исследование микровязкости и структурных переходов в липидах и белках клеточных мембран методом спиновых зондов.- Биофизика, 1975, т.20, № 5с.816-820.

23. Горьков В.А,, Островская Л.А. Связь времени жизни жи-вотных-опухоленосителей с кинетикой развития злокачественногопроцесса при перевитом лейкозе у мышей*- Изв. Ш СССР. Сер. биол., 1977, № 3, с.451-455.

24. Давыдова С.Я. Плазматические мембраны.- В кн.: Биологические мембраны., М., Медицина, 1973, с.189-205,

25. Добрецов Г.Е», Косников В.В., Шанин С.С., Коган Э.М., Владимиров Ю.А, Различия между лимфоцитами, выявляемые мембранными флуоресцентными зондами.- Цитология, 1980, т.22, № 3, 320325.

26. Дозморов И.М., Руднева Т.Б. Методы разделения Т- и В-лимфоцитов,- В кн.: Итоги науки и техники. Общие вопросы пата-логии., М., ВИНИТИ, 1977, т.5, с.101-132.

27. Зорина Т.Е., Храповицкий В.П., Черенкевич С.Н. Действие озона на липосомы из фосфолипидов растительного происхождения.- Весци АН БССР. Сер. биол., 1981, № 5, с.38-41.

28. Каган В.Е., Архипенко Ю.В., Козлов Ю.П., Галущенко И.В. Модификация ферментной системы траспорта Са2+ в саркоплазмати-ческом ретикулуме при перекисном окислении липидов.- Биохимия, 1983, т.48, № I, с.158-166.

29. Конев В.В., Попов Г.А. Действие УШ-света на образование продуктов перекисного окисления липидов.- Биофизика, 1978, т.23, № 3, с.474-478.

30. Конев В.В., Попов Г,А., Сейланов А.С., Тарусова Е.И., Гончаров П.И. Образование малонового диальдегида при взаимодействии липосом с клетками.- Биофизика, 1983, т.28, № 4,с.703-704.

31. Конев C.B. Электронно-возбужденные состояния биополимеров.- Минск, Наука и техника, 1965, 186 с.

32. Конев C.B., Мажуль В.М. Межклеточные контакты.- Минск, Наука и техника, 1977, 312 с.

33. Ланкин В.З. Изменение содержания высших жирных кислот в клетках растущей асцитной карциномы Эрлиха.- Изв. АН СССР. Сер. биол., 1971, №3, с.457-460.

34. Ланкин В.З. Высшие жирные кислоты и энергитеческий обмен опухоли.- В кн.: Актуальные вопросы современной онкологии, М.,Медицина, 1971, №3, с.112-120.

35. Левин C.B. Структурные изменения клеточных мембран,-Л., Наука, 1976, 224 с.

36. Маленков А.Г. Ионный гомеостаз и автономное поведение опухоли.- М., Наука, 1976, 171 с.

37. Маркович Д.С., Умрихина Н.В., Волькенштейн М.В. Исследование специфического связывания репортеров (ртутных производных флуоресцеина) лактатдегидрогиназой.- Молекуляр. биология, 1971, т.5, № I с. 51-58.

38. Матус В.К., Воробей А.В., Черницкий Е.А. Влияние хлор-промазина и температуры на транспорт глюкозы в тенях эритроцитов,- Биофизика, 1977, т.22, № 4, с.861-865.

39. Медведб И.Н. Спектрально-флуоресцентные исследования реакций нормальных и лейкозных лимфоидных клеток на изменение ионной силы и рН среды.: Автореф. дис. . канд. биол. наук., Минск, 1981, 23 с,

40. Орлов С.Н., Данилов B.C., Малков Ю.А., Ребров В.Г. Свободнорадикальное окисление липидов биологических мембран.

41. Флуоресценция жирных кислот и фосфолипидов.- Биофизика, 1975, т.20, № 2, с.228-232.

42. Островский Д.Н. Молекулярная организация биологических мембран.- В кн.: Биомембраны. Структура, функции, методы исследования., Рига, Зинатне, 1977, с.7-27.

43. Пальмина Н.П., Бурлакова Е.Б. Антиокислительная активность липидов как тест для химиотерапии опухолей. В кн.: Актуальные вопросы современной онкологии, М., МГУ, 1973, т.З, с.86-91.

44. Пальмина Н.П., Бурлакова Е.Б. Изменение активности липидов при развитии перевиваемых опухолей.- В кн.: Физико-химические механизмы злокачественного роста, М., Наука, 1970, с.86-91.

45. Перцев А.Н., Писаревский А.Н., Резников Н.В., Сошин Л.Д., Шушкевич С.С,, Черенкевич С.Н. Эффективный метод регистрации слабых спектров люминесценции.- Курн. прикл. спектроскопии, 1964, т.1, № 4, с.303-309.

46. Петров Р.В., Хаитов P.M. Иммунологические механизмы клеточного гомеостаза.- В кн.: Гомеостаз, М., Медицина, 1974, с.190-250.

47. Поглазов А«Ф., Шубин М.В., Скоцеляс Ю.Г., Алимов В.А.,р.

48. Владимиров Ю.А. Флуорометрическое изучение выхода Са из ли-посом, индуцированное воздействием фосфолипазы А.- Биофизика,1975, т.20, № I, с.69-72.

49. Поликар А. Элементы физиологии клетки.- Л., Наука,1976, 390с.

50. Порошенко Г.Г., Миненкова Е.А., Фомина М.М., Евсеенко Л.С. 0 цитологических подходах к анализу кинетических характеристик роста перевиваемых штаммов опухолей мышей.- Изв. АН СССР. Сер. биол., 1977, № 2, с.273-280.

51. Потапенко А.Я., Путвинский А.В., Рогцупкин Д.И., Владимиров Ю.А. Изменение проводимости биологических мембран под действием УФ-излучения.- В кн.: Биологическое действие УФ-об-лучения, М.,Наука, 1975, с.69-75.

52. Райхлин Н.Т. Ультраструктура и гистохимия опухолевых клеток.- В кн.: Итоги науки и техники. Цитология., М., ВИНИТИ,1976, т.З, с.53-66.

53. Свирновский А.И. О взаимоотношениях между регенерацией и канцерогенезом.- Успехи соврем, биологии, 1974, т.77,с.133-152.

54. Свирновский А.И., Шуманская Т.У., Левин В.Й., Медведь И.Н., Черенкевич С.Н. Сравнительное исследование свойств лей-козноизмененной и стимулированной к пролиферации ткани нормальной селезенки.- Весци АН БССР, Сер. Биол., 1981, № 5,с67-71.

55. Ситковский М.В. Молекулярные механизмы активации лимфоцитов.- В кн.: Итоги науки и техники. Биологическая химия., М., ВИНИТИ, 1979, т.13, с.6-136.

56. Сорокина 3»А, Зависимость между внутри- и внеклеточным рН, потенциалом покоя и концентрацией ионов К4" в поперечнополосатом мышечном волокне лднушки.- Цитология, 1961, т.З, № I, с,48-59.

57. Сорокина З.А. Измерение активности ионов водорода вне и внутри нервных клеток ганглиев моллюсков.- Журн. эволюционной биохимии и физиологии, 1965, т.1, № 4, с,343-360.

58. Тагеева C.B. Определение концентрации водородных ионов в некоторых биологических объектах с помощью флуоресцентных индикаторов.- Цитология, 1971, т.13, № I, с.122-126.

59. Туманова С.Ю. Роль гликопротеинов и гликолипидов в межклеточных взаимодействиях.- Биохимия, 1978, т.43, № 3, с,387-398.

60. Фракфурт О.С. Клеточный цикл в опухолях.- М., Медицина, 1975, 172 с.

61. Хмельницкий А.И., Луневич А.Я., Черенкевич С.Н., Комяк А.И., Минько А.А, Спектрально-флюоресцентное исследование хромофоров, образующихся при перекисном окислении липидов,- Биофизика, 1983, т.28, № 2, с.238-241.

62. Ходас М.Я., Тверской А.Л., Леонова С.Ф., Левин А.Л., Юшкин A.B. О значении измерения pH эритроцитов.- Анестезиология и реаниматология, 1979, № 6, с.31-36.

63. Ходосова И.А., Захарова Н.В. Ферменты, связанные с пролиферацией клеток и опухолевый рост.- Экспериментальная онкология, 1981, т.З, № I, с.10-19.

64. Холодова Ю.Д. Структурно-функциональные особенности мембран с различным содержанием холестерина.- Уьф. биохим. журн., 1981, т.53, № 5, с.114-130.

65. Черницкий Е.А. Люминесценция и структурная лабильность белков в растворе и клетке.- Минск, Наука и техника, 1972, 278с.

66. Черницкий Е.А., Воробей A.B., Конев C.B. Термические переходы в эритроцитарных мембранах» выявляемые по проницаемости их к АНС.- Биофизика, 1978, т.23, № I, е.80-84.

67. Черногрядская H.A., Розанов Ю.М., Богданова М.С., Боровков Ю.С. Ультрафиолетовая флуоресценция клеток.- Л. Наука, 1978, 215 с.

68. Шапот B.C. Биохимические аспекты опухолевого роста.-М., Медицина, 1975 , 304 с.

69. Шапот B.C., Давыдова С.Я., Стрелкова Л.Б. О липорибо-нуклеиновых комплексах как интегральной части структуры плазматических мембран.- В кн.: Структура и функции биологических мембран», М., Наука, I97X, 219 с.

70. Шубин М.В., Поглазов А.Ф., Скоцеляс Ю.Г., Владимиров Ю.А. Изучение влияния перекисного окисления липидов на црони-цаемость мембран липосом для ионов Са^+.- Биофизика, 1975,т.20, № I, с.161-163.

71. Эмануэль Н.М., Коновалова Н.П., Дронова Л.М. Кинетическая характеристика противоопухолевой активности химическихсоединений различных классов.- Докл. АН СССР, I960, т.143, с.737-740.

72. Эмануэль Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов,- М., Наука, 1977, 419 с,

73. Яковлев А.Ю, Исследование закономерностей кинетики индуцированной пролиферации клеток.: Автореф. дис. . физ.-мат, наук,- М,, 1980, 48с,

74. Averdunk R., bauf P»K. Effect of mitogens on sodium-potassium transport, %-oubain binding and ATP-activity in lymphocytes.- Exptl. Cell Res., 1975, v.93, P*331-342.

75. Bleau G., Roberts K.D. Red cell surface structure: stabilisation by cholesterol sulfate as evidenced by scanning electron microscopy.- Biochem. Biophys. Acta, 1975, v.375,1. W 2, p.220-223.

76. Blitterswijk van W.J., Emmelot P., Hilkmann H.A.M.

77. Bruce W., Cecil P. Alternation of human lymplloblastoid cell line HEH6 during subsequent cultivation.- Proc. 3 Gen. Meet. Sur. Soc. Anim. Cell Technol., Oxford, Basel e.a., 1979» p.101-105.

78. Bullough YiUS. Mitotik control in adult mammalian tissues.- Biol. Rev.f v.50, p.99-107«

79. Burton G.W., Cheeseman K.H., Ingold K.U., Slater I.P. lipid antioxidant and products of lipid peroxidation as potential tumour protective agents.- Biochem. Soc. Trans., 1983» ▼•11» m 3, p.261-268.

80. Burlacova E.B., Arkhipova G.V., Shishkina Ii.N., Golo-shchapov A.Ii., Zaslavsky Yu.A. Influence of ionizing radiation of regulatory function of biomembranes.- Stud. Biophys., 1975» v,53# » 1, p.67-71»

81. Burton R.P. The role of buffers in body fluids. Mathe-matic analysis.- Respir. Physiol., 1973» v.18, №1, p.34-42.

82. Cercek L., Cercek B. Application of the phenomenon of the structuredness of cytoplasmic matrix in diagnosis of malignant disorders: a review.- fiur.J. Cancer, 1977» v.13, P.903-910.

83. Collard J.G., De Widt A. Lokalisation of the lipid probe 1,6-diphenil-1,3,5-hexatriene (DPH) in intact cells by fluorescense microscopy.- Exptl. cell Res., 1978, v.116, №2, p.443-450.

84. Collard J.G., De Widt A., Oomen-Meulemans E.P.M.,

85. Deutsch C., Price M., Johansson C. A sodium requirement for mitogen-induced proliferation in human peripheral blood lymphocytes.- Exptl. Cell Res., 1981, v.136, p.359-369.

86. Dobretsov G.E., Dmitriyev V.M., Pirogova L.B., Petrov V.A., Vladimirov Yu.A. 4-dimethylaminochalcone and 3-methoxy-bensantrone as fluorescent probes to study biomembranes.-Stud. Biophys., 1978, V.B71, p.189-196.

87. Prelin L.S. Mitotic cycle of cell at terminal stage of culture.- Biochimie, 1978, v.60, №3, p.627-638.137, Pridovich J. Superoxid dismutase.- Ann. Rev. Biochem. 1975, v. 44, m9 p.147-159.

88. Inbar M., Shinitsky M. Increase of cholesterol level in the surface membrane of lymphoma cells and its inhibitory effect on ascites tumor development.- Proc. nat. Acad. Sci. USA, 1974, v.71, p.2128-2130.

89. Jain S.K., Hochstein P. Polymerization of membrane components in aging red blood cells.- Biochem. Biophys. Res. Comm., 1980, v,92, m, p.247-250.

90. Jahning P. Structural order of lipids and proteinsin membranes: Evaluation of fluorescence anisotropy data.-Proc.Hat.Acad.Sci.USA, 1979, v.76, № 12, p.6361-6365*

91. Kiefer H., Blume A.J*, Kaback H*R* Membrane potentialchanges during mitogenius stimulation of mouse spleen lymphocytes.- Proc. Hat. Acad. Sci. USA, Biol. Sci., 1980, v.77» № 4, p.2200-2204«

92. Kroll R.G., Booth I.R. The role of potassium transport in the generation of a pH gradient in E.coli. Biochem. J. 1981, v.198, P3, p.691-698.

93. Kunimato M., inoue K., Uojima S. Effects of ferrous ion and ascorbate-induced lipid peroxidation on liposomal membranes.- Biochim. Biophys. Acta, 1981, v.646, №1, p.169-178.

94. Lee A.G. Models for chain motion in lipid bilay.-Progr. Biophys. Mol. Biol., 1975, v.25, p.5-26.177* Letellier L,, koudden H. Lipid and proteins segregation in E# coli membrane.- Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1977» v.74, Ю2, p.452-456.

95. Levine J.K., Partington P., Roberts G.C., Birdsall U., Lee A,G# A nuclear magnetic relaxation times and models for chain motion in lecithin vesicles.- FEBS Lett., 1972, v.23 Ш2, p.203-207.

96. Libenson L#, Jena M. Extracellular pH and neoplastic transformations.- Cancer Res.- 1974» v.34, p.953-957.

97. Ladoulis C.T., Gill I.J., Shi-Hua C.t Mirsa D.K.

98. The structure and metabolism of human lymphocytese membranes.-Progr. Allergy, 1975» v.18, №2, p.205-288.

99. Мак W. Vu-Н.» Wong Y. I.-F. Relationship between membrane fluidity and capping of receptors for concanavalin A.-Can. J. Biochem., 1980, v.58, №4, p.1421-1429.

100. Mantulin W.Vv., Pownall H.J. Fluorescence probes of membrane structure and dynamics.- Photochem. and Photobiol», 1977» v.26, m9 p.69-73»

101. Mitchell H., Y/ood P., Pentycross C.R., Abel P., Bayshawe K.D. The SOM test for cancer. An evoluation in terms of lymp« hocytes from healthy donors and cancer patients.- Brit. J. Cancer, 1980, v.41, p.772-781.

102. Negendank W., Shaller C. A critical temperature of

103. Polliak A., Lampen U., Glarkson B.D., Harven E., Ben-twich Z., Siégal P.P., Kunkel H.G. Identification of human Band T-lymphocytes by scanning electron microscopy.- J. Exper. Med., 1973, v.138, p.607-624.

104. Rindler M.J., Saier M.H. Evidence for Ia+/H+ antiport in cultured dog kidney cells (MX5K)«- J. Biol. Chem,, 1981, v.256, «221, p. 10820-10825»

105. Rink T.J,, Tsien R,Y., Pozzan I, Cytoplasmic pH and free Mg2+ in lymphocytes.- J. Cell. Biol,, 1982, v.95, №1, p.189-196.

106. Shinitzky M., Barenholz 1» Fluidity parameters of lipid regions determined by fluorescence polarisation.- Biochim. Biophys. Acta, 1978, v.515, i«2, p.367-394.

107. Shukla S.D., Hanhan D.J. Membrane alterations in cellular susceptibility of phospholipids in density ( age )-separated human erythrocytes to phospholipase A2*- Arch. Biochem. Biophys., 1982, v.214, №1, p.335-341.

108. Singer S.J. Molecular biology of cellular membranes ■with application to immunology.- Adv. in Immunol., 1974» v.19, p.1-66.

109. Singer S.J. Ihe fluid mosaic model of the structure of the cell membranes.- Science, 1972, v.175, p.720-731.

110. Skulachev V.P. Transmembrane electrochemical H+ potential as a convertible energy source for the living cell.

111. FEBS Letters, 1977, v.74, №1, p.1-8.

112. Smets L.A. Cell transformation as a model for tumor induction and neoplastic growth.- Biochim. Biophys. Acta, 1980, v.605, №1, p.93-111.

113. Stier A., Sackmann E. Spin labels as enzyme substrates heterogeneous lipid distribution in liver microsomal membranes.- 1973, Biochim. Biophys. Acta, 1973, v.311, ^3, p.400-408.

114. Sy/eet P., Lee M.D. Ozone selectively inhibits growthof human cancer cells.- Science, 1980, v.209, "4459, p.931-933.

115. Takeuchi S., Maeda A. Use of fluorescein mercuric acetate as a probe in studies of thiol-containing proteins.*-J. Biochem., 1977, v.81, n24, p.971-976.

116. Tappel A.L., Bidlack W.R. Fluorescent products of phospholipids during lipid peroxidation.- Lipids, 1973, v.8, №2, p.203- 208.

117. Thomas R.C. Ion-sensitive intracellular microelect-rode.- London, Academic Press, 1978, 212p.

118. Tsai C.M., Chen K., Canellakis H. Isolation and characterization of the plasma membrane of L-1210 cells.- Biochim. Biophys. Acta, 1975, v.401, p.196-199.

119. Visser J.M, Intracellular pH-determination by fluorescence measurements.- J. Histochem, and Cytochem.- 1979, v.27,1, p.32-35.

120. Waddell W.J., Bates R.G. Intracellular pH.- Physiol. Rev., 1969, v.49, ¿82, p.285-329.

121. Wheeler K.P. Activation of membrane adenosine triphosphatase by chelating reagents and phospholipids.- Biochem. J. 1971, v. 125, ^3, p.71-78.

122. Winzler R.J., Carbohydrates in cell surface.- Intern. Rev. Cytol., 1970, v.29, p.77-125.

123. Witting L.A*, Sackman O.R. J. Amer. Oil Chem. Soc., 1965, v.42, p.908-1007.

124. Woo K.B., Funkhouser W.K., Sullivan C., Alnbaster 0. Analysis of the proliferation kinetics of Burkitts lymphoma cells.- Cell and Tissue Kinet., 1980, v.13, №6, p.591-604.