Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ФОТОБИОХИМИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ ХЛОРОПЛАСТОВ

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ФОТОБИОХИМИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ ХЛОРОПЛАСТОВ"

АКАЛМИН НАУК СССР ОРДЕНА ЛШША ШСТИГУТ ЕИОХШШ илениА.Н.ЕАХА

' На цраэах рукописи

ЧАН ВАН НИ

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ФОТОЕИОХШИЧВСКИХ РЕАКЦИЙ ХЛОРОПЛАСТОВ -

03.00.04 - биологическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических ■ наук

Москва - 1979

. Работа выполнена в лаборатории фотобиохимии Ордена Ленина Института биохимии имени А.Н.Баха АН СССР.

Научный руководитель:

академик А.А.Краоновский

Официальные оппоненты: доктор биологичеоких каук Н.П.Воскресенская . доктор биологических наук П. А. Колесников

Ведущееіфвдщ)іитивгИнотвтут'фотойинтезаАНСССР,. . ■ г.Путино

* » '

Зашита диссертации состоится " ДД" 1979 г.

на заседании Специализированного совета (К 002.96.01) по присуждении ученой стелена кандидата над*' . в Институте биохимии ш. А.Н.Баха АН СССР (ІІ707І, Ыосква, В-7І, Ленинский проспект, 33, корв. 2).

С диссертацией «ожво: ознакомиться в библиотеке' бнологжческоЙ яитвратурьЕ АН СССР (Ленинский проспек-г,33, корп. I).

Автореферат разослан-тМ?. 1979 г.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат биологических ваух ■

М.И. МОЛЧАНОВ

СН^Я. ЇАРАКГЕРіЕТ1^; РАБОТ

Актуальность проблемы. Изучение первичных фотобиохкмичес-клх реакций является:однзй из вахкейикх задач, прл вняснекни механизма фотосинтеза.; Псследоваяпя этих реакшй .проводятся ка разных уровнях сргаккзадтш фотосинтетических систем: на целих организмах, цедшс и ^рагаентированных хлоропластахи изолированных фотосинтетических- питентах, Вшхеленные хлоропласти, в которых сосредоточен весь ¿отосЕитетичесзсйй аппарат высших растений, явлгоя ся наиболее распрострааеншй объектом исследованна.

3 настоящее время обцепринята концепция, согласно которой

перенос электронов. в фото снят ет ическоы. аппарате раст енкй от ис-і ■ ■ ■ • + ходного донора - молекулы воды до конечного акцептора - НАДф

осуществляется пря участии двух- вэедедоватахьво райоташшх фотосистем, а взаимодействие фотосистем - посредством промежуточных переао стасов электрона. Компоненты злектронтранспоргаой цепи определению« обраЭ 0Ь1 расйолохены в мембранах хлоропластов.

\ Для изучения работы отдельных фрагментов сепя переноса злестрона в хлоропластах сирово используют искусственнее доноры х акесгоры электронов в сочетания с ингибиторами. С пс«ащ£ю таких исследований бто показано, чтоЕонечньы этапом фотоскнтети-ческого переноса электронов в первой фотосистеме является образование соединений с високим восстановитеяьнкм потенциалом, которые учаотвухгг в образовании ЕА®*В» необходимого для фиксации СО2. фотовыдаленяи иодекулярно го водорода, фотопоглощении кислорода К Т.д. "

Для* исследования механизмов функционирования восстановительно! ветви злегтровтрансцортноа ценя, а такжеддя поншания природы СОСрЯХЄЇШЩ с ней биопмическвх процессов часто прииеия-

nr вместо физиологического переносчика электронов ферредокеина.. синтетическое соединение," производное t г' -дипяридила — метил- -виологен ^ обладаший: той же величиной окдслительно-воостанови— . тельного потенциала/что и ферредоксин. Однако/ несмотря на пн- L тенсивные исследования, многое в механизмах этих процессов до сих пор остается невыясвепнод.

Цель и задачи рсследованто!..Основной целью настоящей.работы было исследование связей меашу различными типами окислительно-восстановительных процессов в хлоропластах!: фотовосстановлением метилвиологена,. фотовыделением водорода н фотовосстановленнем кислорода.' ■ : . -

* Научная новизна. ; Выяснены условия эффективного фотовосста-ковлекия цетшзиологена и фотообразовакия водорода в хлоропласта* и роли в этих процессах прямых и обратных реакций переноса электрона' в первой фотосистеме. Выяснена природа активации и вагнбгроаания фотопоглощения кислорода хлоропластами под влиянием различных воздействий.

Практическая значимость. Представленная работа является часть» фундаментальных' исследований Института биохимик .'им. А.Н. Баха АН СССР по юучени» фотохимических процессов фотосинтеза. Экспериментальные дашше работа расякрялт и углубляют понимание ^нкцкошфовашя элекгронтргшспоргыой цепи фотосинтеза. Практическое значение работы определяется возможность» отгтиглизации использования фотосинтетического аппзрата в преобразовании и ис-пользованЕИ солнечной энергии.''

■ Апробадт-л работы. Цат ериалн диссертации докладывались на научной конференции Ifccrrayra биохимии им. А.Н. Баха .АЛ СССР, по-еввдашой СО^аетиэ Октября (IS77 г.) и конг«ренцип молодкх уче-

иых того же института, поевдаекной 60-летив комсомола (1978г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано четыре . работы. ■

Cot.ал работы. Диссертации изложена на 142 страницах и со-

■ держит IÓ таблиц и 34 рисунка. Список литературы включает 195 назвслиЗ.

. ' ЭШИРШЮТАДЬШШ ЧАСТЬ " * '

ОБЪЕКТЫ II МЕТОДЫ 1ССЛЕЯСМШЯ "

Объектом исследования били хлоропласти, выделенные из про:' ростков гороха сорта "Победитель". Растения выращивали методом волной культуры. Хлоропласти тиса С / Hall , 1972/ получали по методу Уолхера /faltar 1972/. Работу проводила как со свеже-вцделенкыии, ,так:к с консервированяши в жидком азоте хлоропластами /Бекина, Красновскиа, 1968/. Экстракт гидрогеназы получали ю водородных бактерий Cloatxldiua butlrici» /Ceet, Feck* 1956/;

' Методи усследоачнкя. Фотовосстановление иетютиодогена определяли со изменению поглощения при 605 ни на спекі'рофогомегре СФ-4А шш СФ-10 с дополнит елькш осветителем и модифищгрованньы кпветодерььтелш. Реакцию проводили в трубках Тунберга с. бокоош

■ отводом в анаэробных условиях. Фотоввдеяение водорода» фотоввде-

■ дение и фото поглощение кислорода определяли шперсметричесним методом ка полярографе LP—7 с использованием закрытого алектро-,да типа .Клгфіса, Еаіц>яаение на индикаторном электроде -»-0,63 (для

; водорода) я —0,63 (для кислорода) по отношешт к хяорсеребрянсму ' электроду. Полярографическую ячейку териостахировали с пошдав ультратермостата. Сотообразовацзе перекиси водорода определяли ' по хе&шпманесцевции лшшола в присутствии пероксщгазы /сохвіег.

Richard . , i960/. Послесвечение хлоропластов исследовали с;по-мощью фосфороскопа. Фототщуцированное изменение pH суспензии • хлоропластов определяли с помощью стеклянных электродов на рВ- ; метре ЛПУ-01; сигнал регистрировали самописцем ■ от поляротрафа ¡

Исследование фотовосстановления метилвислогена и фотоввде-ления водорода проводили в анаэробных условиях» Другие реакции, проводите для сравнения, с этими процессами, также определяли в • анаэробных условиях, - Ддя создания анаэробшк условий применяли ' следующие способа: I -."совместное продувание" - инертный газ проходил через реакционную среду, содержащую хлоропластараздельное продувание" - газ проходил.через реакционную среду, я' омывал хлоропласты; 3 - ^совместное откачивание* (на форвакуум-ном насосе РШ-20 до 10 uta рт. ст.) - во время.' откачивания хлоропласт находились в реакционной среде; 4 - "раздельное откачивание" - суспензия хлсрошюсгов,; содержащая 50JS глицерина, во вршя о^тчЕваниЯ'Находилась:вне:реа1щион11оа среды.. Наь£и было показано, что количественное.фотовосстановлёние метилвиологена uojoío наЗлюдать только;в томслучае, когда кислород!удаляли методой раздельного продувания или откачивания» так как хлоропласта киактивируигся при пробулькивашш инертного газа через суспензию хлоропластов или совместном вахуушфоэании. Однако в ря~. . де опытов необходимо (Зыло" применять метод совместного продува-■. ния или.откачивания.. '

I. 1ВУЧШШ ЦСТЦВДЮЛОГЕЖ-

:ХЛОГШЕМТАУИ

Эти исследования Оыди проведены с целью выяснения cnocod-кости фотосинтетЕческого аппарата pacremsä к образованию сильных восстановителей я осойенностей этого процесса.

,' ; ^следуемые нами препараты хлоропластов гороха при освеще-■ ;кии восстанавливали доОавлешшй к шы метилвкологен; В отличие' '

•; от1 данных других авторов / хок в* , Х965» В1аск, 1965/

, в шеях опытах ни система поглощения'кислорода (глюкоза + глю-г Г'.коэооксвдаза), ни система удхшшя перекиси-водорода1, (каталаза •

. с отанолад) .не активировали фиовосстановленке метилвиологеиа,

-•. если кислород из реакцяотаой срежы предварительно бил полностью

'■.V- Прв найдешиа надо оптимальных условиях опытов (рН 8,5; 5'ИГ6 эрг/са2.сек; 5*10*^ Ц ЦЭ) скорость фотозосстановлскЕя ме-тютиологена - достаточно, высока и сравнима со скоростью реакции ..- Хялла только в первый момент освещения» При дальнейшем освещении скорость восстановления метмлвиологека бистро падает, в то время как'скорость реавдии Хилда'_остается высокой.при длительно* осве-"■ иеиип» Для выяснешм причин низкой эффективности фотовосстановления ИВ ш). есследовали этот процесс под влиянием ряда воздеЗст— : виЙ в сравнении с хорошо изученной фотохимической реакцией хло-..,-, ропластов - реакцией Хллла? с -дшоюрфенолиндофенолом (ДХФШ) и . ферршишдг.оц калия как , акцепторами.-:

: .. IIВлияние "различных факторов ка- йотовосстановлент:е метдявиологена'хлоропластами

■; . * : В присутствии 10"^ диурока и после обработки хлоропластов '

... трис«^уоорст< (0,8 М; рН:'8} ;яивуЙацяй ТО мин) как и реакция Хил- -

' ла с ДШЭ;■ фотовосстаяовленяе. метилвиологена полностью ингиби-

' руется. Это.позволяет предположить,.что фотосистема II участву-

. "ет в фотовосстаяозлегапг кеталвиологена; '.

' ]й.тяяотге раэойдителей фотоДосборилдровант. Как и реакция

Хилла, фотовосстановление МВ активируется разобцнгелями фотофос-

' формирования. Метиламин {1,2*10'"® М) и хлористый аммоний

(5»10~® И) увеличивали. скорость; реакдии' в 2,5-3 раза. . -: V Однако у как мы увддш из дальпе2шего:, действие детергента,' . ' растворителей. н нагревание оказывали различное влияние; на фото-. восстановление метилвполЬгена и реаодию Хилла. . ;;у -•''.

' - Нлтоппте детергента. Фотовосствновлевие ■ метилвиологена на- ■ ■ ■ ■ чинает подавляться'; при концентрации тритона Х-100,.равной

0,004?, в то время' как реакция Хилла активируется максимально '...■;■; при 0,007? того »» тготрфгрита- Влияние пиэтклового эфира. В опытах по влиянию афяра на восстановление метилвиологена: иреак-;.-гущ Хилла, в отличие от других опытов, • кислород удаляли методом ; "соклестного'откачивания", а реакционная среда содержала.50!?.. • *'.. глицерина. При повышении концентрации эфира до,5? скорость, фото- '. - восстановления метилвиологена постепенно падает,' тогда как ско- :' рость реакции Хклла остается практически достоянной. - Предвари— .-.-: тельное нагревание осдоводяасто'в-до' 40-42°С сильно подавляет то во сстановление метвявиологека, Гно .активирует реакции; Хилла." ■ ■ ~ Полученные "данные указывает , на' существование :шоЙ причинн подав— ' - ленияфото^сстановлетЕЯ мёт^иодогеш^ П, -'.' .

■ которая наблюдалась' под влиянием дпурона или после обработки . хлорогшастов трис-буферсм.-' • ''> •'/•• .' г.;.--;-¿у'-'.'Л;.

'" Для "дальнейшего исследования ос^енвостейфотстосстановле-':'"; ; нил метилвиологена хлоропластами мы исследовали этот процесс с •'. участием только фотосистемы I под влиянием сходных воздействия.'

2. Сотовосстановленйе метклвкологенахлоропластами. . •

■ 'с окзогешаст донорами электронов' . ■■"■' . . ..-Д;

Ь!ы гепользовали дпуроя для шгайировшшя",фотосистема II, а / цистеиы и дктиотрстол (ДП) в качестве доноров электронов. .

■ Тритон Х-100 при лкбой концентрации подавляет фотовосстанов- .

ленив метилэнологена в втих условиях, как к в системе без доно-■ ров. '. Предварительное нагревание также, приводит к -ингибированию фотовосстановления НВ хлгсропластши в присутствии доноров. Удаление кислорода методом совместного гоодувангя газа или откачивания суспензиыхлоропластов^(сы. метода исследования) вызывает сллъноа ингпбировагще фотовосетанОвленля метшшиологена с ДГТ.■' ; Получешше данные позволяют предположить,-что наблвдашая' инактивация фотовосстановлешет нетилвиологена хлоропласта;™ в , отсутствие экзогенных доноров'электронов связана с изменением в тдееделах первой фотосистедо/и эта ивактивахда на связана с нарушением сопряжения двух фот э с ист ш. Изменение не связано с удалением переносчиков электронов 'в фотосистеме I, поскольку фото-" восстановление метилового фасного о ДЕТ как донором электрона, ' (врж которой участвуютте жа переносчики 8лектронов)/1гвЬв*, 1972/ не подвергается 'влиянию продувания. газа. Возможной причиной подавления.восстановления метилвиологена может быть: измене-'ние'состояния мембран, в которых расположена ЭГЦ." Для выяснения этой возможности ьш исследовала влияние некоторых эацитша реагентов на фотовосстановление ыетплвиологена хлоропластани,

3. Влкяте стаб1шгегоута1«'мембрану реагентов на ' . ■ • фотовосстановление метадвиологена хлоропласташт

...'.'■ Влияние глицерина."-Глидерды' значительно' повышает скорость я глубину Готово сстановленля метилвнодотеяа. Максимальный эффект наблсдаетсяпрп 50£ глкцерина.' Действие' глицерина не связано с его- влияниа* на транспорт алехтроиов/ поскольку добавление гди-церина посла совместного продувания суспензию хлоропдастбв аргоном не увеличивало скорость и глубину реакции.

^ Влияние бычьего сывороточного алъбттяша (ША). Подобно гли-

цервну, присутствие ЕСА в реакционной среде при совместно* про- , ; дувании повшает скорость и глубину фотовосстановленвя метм- U'r:'' ' виологена; причал БСА существенно не влляет на эту реагацго.в ■ случае "раздельного продувания"» •.. — '-'¿V--V-■■■Л''.-''•■

Защитный;эффект глицерина и БСА, вероятно, связан с юс . .

влиянием на состояние мембран хлоропластов. На это указывает обратимое действие глицерина'на некоторце фотореакцил хлороплао-. .-. тоо, такие как фотоиндуцированное изменение pH ( д pH); ыилли-секундное послесвечение■ хлоропластов и действие глицерина на : реакцию Халла о крештаЙмолиОдатом.'-кот орая, по. мы emm некот орых';.■■. . авторов /Гольдфельд а др., 1976/, чувствотельна к гаменению * конформациа мембран хлоропластов/ / /'л > V v '

Из полученных дашшх видно ¿ что реаюхия фотовосстояоэления, метшшиологена чувствительна к изменению состояния мембран тила-.~; ••/ кондов, В условиях нашос опытов, при низких концентрациях трпто-- : • на Х-100, эфира, нагревании, продувании.газа и.откачивании,' ве- ,':; .. • роятнее всего, происходит, некоторое разр!^ение_мембран хлоро- ;„';. • \ пластов. В результате этого noBiaiaerca доступность восстановлен" ного ыетклвиологена к переносчикам электронов на донорной части " ФС I, что. приводит к погашению'эффективности циклического транс- . ". порта электронов через метилвиологеп.'В результате этого набло-дается каа£ущееся подавление фотовосстановления метилвкологеиа С '.хлоропластами под влиянием исследуеша нами воздействий. -; : 1

Циклический транспорт электронов через метилвкологен, ВОЗ-мсадю, имеет место и у неповреаиёщшх хлоропластов, где он также '. ыояет быть причиной низкой эффективности фотовосстановления MB по сравнении с другими фотохвмичеекгаи реаедшши.

Наиболее убедительное доказательство того, что.циклический

транспорт электронов определяет эффективность фотовосстановле-нияметалвиологенаполучено в опщах с применением комбината; экзогенных доноров электрона (см. раздел II, 2).

Итак, результат сравнительного исследования фотовосстшюв— леная ЦВ и хорошо изученной' реакции хлоропластов - реакции Хкл-да согласухггся с представлениемо том, что при функционировании ЭТЦ происходит1 перенос электронов от воды через две фотосистемы до низкопотенцнального акцептора электронов.. Однако эффективность, образования восстановительной силы в форме восстановленного' иетилвиологена понижена из-за циклического транспорта электронов через ыетилвиологсн, замыкалцего перенос электронов в первой.фотосистеме. '

Сильный восстановителькьй агент, ооразувдпйся при функционировании ЭТЦ может быть' использован во многих сопряженных процессах. Для понимания механизма использования восстановительной силы хлоропластов и для выяснения природа процесса фотовнделе--ния водорода хнввди организмами мы исследовали фотовыделение водорода хлоропластами в присутствии бактериальной гвдрогеназы / Агава «1., 1961» Вавеяяпа вг. «1.» 1973 /«

■ XI. ФОТОВШШЛЕШЕ ВОДОРОДА. ХШРОШСШИ I. Фотовыделение родотюда Дез зузогенннх доноров - -- г. . . ■ электрона

Освещение хлоропластов гороха в присутствии экстракта гид— рогеназы из сХо«Ъг1А1ш ЪиЪ1г1сап ери создании анаэробных условий методам раздельного прсуогвания приводит к выделению водорода со скоростью до 15 шел / ыг*хл в чао. Добавление иетилвиологена'в эту систему значительно активирует реакции. Хлористый аммоний — разобщит ель фотофосфорилироваяпя активирует фото— выделение водорода хлоропласт амп. Подобно фоговосстаиовленив

-ю- ..■:

иетидаиологева, система глюкоза> глжозооксидаэа не активирует реаишз» если кислород из реакционной среда был предварительно._ удален. Как а восстановление метштиологена, фотовидедение.водорода в отсутствие экзогенных доноров полностью подавляется диуроном (Ю-5 й). Продувание аргона через суспензии хлороплас-тов и тритон X—100 в концентрации, активирующей реакцию Хилда (0,0075») подавляют реакцию. '"

Таким образ ш, в отсутствие экзогенных доноров электронов ; фотовыделение. водорода и фотовосстановление метилвводогена аналогичны во многих отношениях. Это указывает на общность этапов транспорта электронов в этих реакцияхвозможно, что циклический, транспорт, электронов такае определяет эффективность фотовыделе-/* : ния. водорода. .......

2. потовыделение водорода хлоропластами в при— 'сутсурди экздгеннше донот>ов электронов -.

В качестве доноров электронов'использовали дитиотритол '"■:■. СДГГ), цистеин, НШ*Н, аскорбот натрия. В присутствии этих соединений и диурона <1(Г®.М). фотовыделение водорода связано -только с функционированием 4С I. Мы исследовали влияние различ-нше факторов на этот процесс.. '.-'.'.'■' :

Влияние мотклвиологена... ЗСлоро пласты' способны, выявлять водород с экзогенными-донорами электронов в отсутствие метпдвиологе-на с низкой скоростью. Добавление метвлвиологена.повышает степень сопрягеиия гидрогенази-о хлоропластами и тем сагшд.активирует вциеление водореда. Максимальная. скорость реакции наблюла— ется при 5*10 . и МВ, а дальнейшее увеличение его концентрации приводит к подавлению реакции. На&вдасмое подавление реакции ■ ке связано с изменением скорости восстановления «лет или поло гена,

поскольку скорость последнего процесса остается постоянной.при ' этих концентрациях метклвиологека." При-использовании фрагментов хлоропластов,полученных по методу Шутило вой и др. /1975/, наблвда-ется высокая скорость фотоьыд еле игл водорода, добавление метил-виологена приводит только к подавлению реакции. * ;

Влияние интенсивности света. Реакция фотовыделения водорода с дитвотритолом и цистеиноы насыпается при интенсивности света,! составляющей пршерно 5С£ от интенсивности света, насц-щашей реакцию Дилла с феррицианидом калия, проводшой в таких se условиях.

Влияние рН среды. Скорость реакции фотовыделекия водорода, хлоропластаии с дитиотритолом максимальна при pli около 7. Фотовосстановление нетилвиологена с этш зсе донором максимально при -рН 8,5. По-вавдАоиу, низкая скорость фотоввдёления водорода в ' щелочной области рН связана о инактивацией гидрогеназы;

Блкякие разобщителей фотойосФорилгооваикя; ■ оотовыделекие ' водорода таете, как и фотовосстановление нетилвиологена с дитиотритолом и цистеинса, активируется. при добавлении НН^СЗ. или метиламина. Скорости обеих реакций в % от контрольного опыта , без разобщителей приведены низе.

РячпЛттр-та ' Выделение.!^ Восстановление ШЗ ; . дат юстеш ДСТ ' цпстеин (S'io-3 U) 262 353 - 350 309

Метиламин (1,2*10~%) 269 333 330 260

Влияние тгогоом доноров электронов, ¡¿ы сравнивали фотовыделение водорода в присутствии следутаих доноров электронов: дп-тиотритол (¿ИТ),' цастеин, НАД9*Ы я аскорбат натрия + (пли

- гетраметил-п^енвлендаамин (ЕЛ5Д)).

Длительное фотовыаеленве водорода ваьщдается с дитиотри-толом а цистеилом. С НАД£*Н реакция■длится только 3—4- шшуты,. что, по-вадишду, связано с íy ккционкрованаел р - хдородластах ферредоксш - НАД$-$>еяактазы, которая восстанавлквает образующийся на свету НАДФ+. ото предположение подтверждается ингибиро-ванисм выделения водорода и восстановления кетглакологена хлоро— пластами с ДГТ и цястеинсм при добавлении п№ы*. [¡игибирсвание реакции при добавлешса НАЛ£Т наблюдалось ранее в работе Pao и других /Rfi£>,RoBa,H*ll, 1976/. Сотообразование водорода наси^ает-ся при очень высоких концентрациях ¿CT и цзстелна (5*1С « и

а, соответственно). Различие иенду &тели донорами, по-ви-дклому, связано .с более низкой прокидаедогтью якстенна в хлоропласта но сравнении с ДГТ. Нихе представлены скорости выделения водорода, фотовосстановленвя метЕлвнологена в поглощения кислорода (подробнее ш. раздел III) в присутствии тех ге доноров электронов £ мкксимх/мг-хл.час).

1онопн Выделение Эосстанов- Поглощение

v водорода - лекие ЫЗ-- кислорода

ДЕТ (5-КГ2 И) ; . П,7 . 24. 168,

Цистеин (5-JO"1 U) . 8,2 17,5 112

Аскорбат натрия '

•ШФД (10-41) 2,6 0,2 92 Аскорбат натрия (КГ^)* .

ДШЮ (10-^1) 1,7 0,12 IIS

Ib данных видно, что скорость фотовыделения водорода хлоро-^ пластами с различными.донорами, электронов йлиэка к скорости <¿c-тоаосстановления метидвиодогена, во звачктелыю ниае скорости поглощения к::слорода. '

Зоз:.!;1пая причина этого явления эаг-лючается в циклическом

-v-' .-із - ■-.;;■■. ■ .

транспорте электрона» - замыкающем первую ^фотосистему (си* раэ-

дєл i). ■'■■■■ , ■/■'-'-."'-'у.' ' - ' ' ' . .

." С предложением о влиянии циклического транспорта электронов на выделение, водорода хлоропластами согласуется также подав-ленде фотовыделения водорода при продувании'инертного'газа через ^суспензию хлоропластов или при действии детергента тритона *J£—100-.факторов/.иэменяташх; состояние* мембр^ повытащит -доступность восстановленного ыетидвиологена к пере- . носчикам, функциошфуицим на докорной части фотосистемы І. Кроме того, при использовании обратимо окясляпщегося донора электро- . нов, такого как аскорбат натрия, во мнению некоторых, авторов /іЬ*ї1е7, Grant ., I9G1/, йбрагвая реамшя ыезду окисленнш до», 'вороа н восстановленным иетилвиологенои таю& uorer. быть причиной ' снижения эффективности его восстановления.'Эта обратная ре-' акция может 'приводить, к еккгекию скорости потовыделения водорода с аскорбатом натрия в напих опытах. . '

Дм дальнейшего выяснения особенностей реакции фотовыделе-нкя водорода хлоропластами мы исследовали этот процесс в присутствии комбинации доноров электронов. 1 • Влияние комбпнашти доноров алектронов. Мы наЛшдали, Что при сошестном.присутствии в реакционной среде - аскорбата натрия и ДО фотоввделенке водорода хлоропластами происходит со скоростью, на два. порядцеа іфевшахщей/сїю^ подученной . іфи'Еспользозании каадого донора электрона отдельно. Это явление нельзя объяснить только повышением активности гидрогеназы при добавлении дягиотригожа / Eoffman «І.-,- 1977/, поскольку фотовыделение ^ хлоропластами с аспользованием ДГТ в качестве донора также мало эффективно, хотя последний слулшт хороший донором

в восстановлении метилового красного. Кроме того, в присутствии аскорбата* натрия и ДГТ сильно. активируется и фотовосстановление -метилвиодогена хлорооластамп — реакция, при которой гкпрогеназа не используется;'. -'.■' .■'■* ■ ,ч -=..■■';'■■

Высокую скорость фотовыделенля водорода в восстановления • метилвгологена также нельзя объяснить повышением эффективности , -'донировавая алектронов в присутствия' комбинации доноров по сравнению с отдельный донором. Это доказывается тем, что фотовосстановление хлоропластами метилового фашого, который: в отличие ■ от метштиодогена- восстанавливается необратимо, идет с высокой скоростью и не зависят'от того, применялись; ли аскорбат натрия. L и ДГТ отдельно или в комбинации. Данные га фотовыделенип водо-\-рода, фотовосстановленио метилвиологена и фотовосстановлению '' метилового красного хлороцвастами (в мюноль/мгосл-час)-приведе-■ НН ятое* ■ '■■ ■ ' ■ '-.' ;у:. V- ■

Доноры " ■ '■.■:;.':' ; Выделение :■ . Восстанов- Восстанови (5*Ю~2 М) ' ■ »олорода лениеИВ ■ - . левие МК

^ДГТ . . 3,2 .. . . 9,2 . . 262 :г-;-.

. Аскорбат натрия 0,2 • '.,.'•" ..' or. • ".:.• , • • 268

' Аскорбат натрия + ДГТ 301 . . • . 84 ' •' ' ' 270

Использование комбинации доноров - аскорбат нахрия + НАИН и аскорбат ватрля + цистеив не. приводило к активации фотоввдеде-ШЯ водорода. .-.'. л-,-1;

Наиболее вероятно, что'при совместном присутствии ДГТи :"-: аскорбаха натрия происходит подавление циклического транспорта электронов, осуществляемого через MB < ал* эндогенный акцептор); Пб-видтог^у, это происходит благодаря тому,' что аскорбат натрия восстанавливает все переносчика вдеатрояоа,-'расипяпж'р^^

ОС I и ОС II, а'ДГГ необходим для поддержания аскорбага натрия в восстановленнои йостоянии. Сдай ДГГ я цдстеин не способны полностью подавить циклический транспорт электронов из-за плохой проницаемости, в мембрашхяоропластов. Цистеин в комбинации с : аскорбатсн натрияне заменяет ДЕТ,' по-видшацу, со той причине, что он не способен конкурировать с восстановленным иетшгвиологе-ном за восстановление аскорбага.

. . Таким образом, несмотря на необратимость процесса образования водорода из-за трудности в сопряжении гидрогеназы с Э1Ц цшшлеский транспсфт злектровов от ыедиаторов (ЫВ, ФД ж др.) на донорную часть Фотосистемы I всеже является причиной сннже~ ш эффективности-фотовыделения водорода хлороояастаыи.

V ш. оотоаогдашив кислорода хшгопмсгши ■ .

Как известно. кислород является ащеторш влектрснов от электронтранспортвоЯ цецн. Он может быть регулятором работы Саймой цепи 'нлл участвовать в снабженииввергией реакииифшссации С02, вклшаясь в процесс псеадгадаупгческого « /НвЪег , 1973/. Однако в процессе поглскцешщ ютшэрода многое остается невшк* ненкш. Так, например, о ыестах вкЯшенвя киолорода в ЭТЦсу-ществуют разные точки зрения.

С цель» дальнейшего вкясвения механизма рмияу«*' ■пог^ггуп^ттич кислорода мы: исследовали: этот процесоюод влиянии« различных воздействиЙ(нагревание,'деЙствиедетергевта,срганическах,

растворит елей в раэойаит елей ФФ). Под влиянием этих факторов можно ояицать иные особенности поглощения кислорода по сравнению с фотовосставовленлем метллвиологена я фотоввделениемводорода, поскольку кислород является.веобратшш акцептором электрона; Исследованные нами препараты жлсропластозв ^горса». на свету

поглощают кислород как в. отсутствие экзогенных доноров Сэадо-' генное поглощение 02), тек и в присутствии доноров (экзогенное поглощенно о2). \ -

I.' Влияние различных Факторов на эндогенное поглощение кислорода

. Азцд, нитрид — актквирует погдооеЕие 02, Это связано о ин-гибировашем каталаэы, прасутствушей в наших объектах, о чем свидетельствует подавление процесса разложения Н^02, исследованного дшжнесцентным методом.^ Одаако^щи ^щеяграцвях аэгоа' натрия вше 10 Ц скорость поглощения кислорода резко повышается. Это явдёНяе связано с. повышением скорости транспорта влек-"; • тропов по ЭТЦ, поскольку скорость реакции Хидла о феррицианидом', калия прн этих концентрациях азида'.также скгьно возрастает: .

■ . Завясююсть поглощения' от иытенсдвностя света.* Реакция насыщается при 5*10"^ арг/са^сек. Такой « порог пасадёнйя'на-(Зладается я лая реаетда1юо1а , о феррнциаяндом кадЕЯ. г 5тот фает '. приводит к мысли о тси(' что реакция Холла и фотопоглощение 02 хлоропдастами лшмитщЗуютсянекоторым обдам этапом.

Влияние предварительного нагревания. При повышении температуры нагревания хлоропластов сш>роеть,фетодагдоцения 02 повидается я достигает максимума около 40-42°С; Дальнейшее повышение температуры приводит я сильному подавление реакция. Дня реакции Г ЗСилла с• феррициэвадсм »пзгйя вайладается примерно такая,хе' дави-сшость скорости реакции от температуры нагревания. .

Влияние органических растворителей. Ыетнловыасшзртв количестве 10? (к о<5ьему суспензии хлоропластов) увеличивает ско-' рость эндогенного поглощения кислорода на 10-15^. При более высоких концентрациях ва&зддается подапленае реаншш. Дпмётилеуль-.

фохсид (ЛЛС) максимально активирует поглощение кислорода на 20-252 при концентрации 30-4Дальнейшее увеличение концентрации ДОС приводит к подавлению реамшя. Ддатиловый эфир в количестве 1-2$ активирует эндогенное поглоаенже 02 в 1.6 раза. Дальнейшее повшение концентрации эфира приводи^ я ингибирова-яию реакции. фотообраэование перекиси водорода - продукта процесса поглссенля кислорода также максимально активируется 1,5 раза при 23 эфира, а при более высокой его концентрации янги<3а— руется. Однако следует отметить, что как и для реакции Хилла /Ърш, Красновский, 1968/ фотопоглоаение 02, активированное или ингибированное эфиром, восстанавливается до контрольного уровня после удаления растворителя. Результата этих опытов приведены нихе (в икмолях 02 / мг-хл*час).

Вариант опытов Хлоропласта

4% эфира 23 эфира

Контроль 9,6 9,9

Введение эфира 4,1 15,3

После удаления эфира 9#2 9,3

11н тааеже- исследовали влияние органических растворителей: метилового спирта, ДІС, диэтплового эфира ьа фотовыделение кислорода при реакция їшіла с феррхциаяядсы калия я иабдщалн аналогичную зависимость скорости этой реакции от концентрации растворителей.

Влияние детергента. Тритон Х-ІОО при 0,0073 максимально повисает скорость поглощения кислорода, а при более высоких концентрациях реакция подавляется. Важно отметить, что фотовыделение при реакции Хилла имеет такую ле зависимость от концентрации тритона.. ,

Раэобшители Ф^ такие, как карбоксициатщ^-хлорфегоигидра-зои (КХФ) „ хлористый аммоний I метилашш сильно активирует. и ■' поглощение кислорода, и реакции Хвдла,

Ш подученных данных видно, что исследуеаше нами факторы * оказывают аналогичное действие на эндогенное поглощение кисло. рода и реакцию Холла. Сходное подавление поглощения кислорода ■ и выделения кислорода при реакция Хилла при высоких концентра-' циях детергента и растворителей и нагревание при температуре вше 42°С приводит к предположении, что СС II участвует в фотопоглощении кислорода. Аналогичная активация этих реакций при низких концентрациях детергента, растворителей и при низких ■ температурах нагревания указывает на существование общего лимитирующего этапа в поглощения 02 и реакции Хилла. "■ .

Все это подтверждает, что кислород действует как акцептор реакции Хилла ж, по-вщдаюцу» может восстанавливаться в "разных точках ЭТЦ.

Дня выяснения вопроса о месте вклгяеяия кислорода в ,ЭТЦ мы исследовали фотопоглсйение кислорода в присутствии ингибитора да IX - диурова а доноров электронов, то есть в условиях, когда реакция происходит/только при участии.ФС X (принимаем для этого название - "экзогенное поглощение кислорода").

2. Едияние различных Факторов на экзогенное поглощение кислорода хлородластаии

Экзогенное поглощение кислорода ваДлддалтт в присутствии добавленного донора электронов аскорбата натрия (ИГ3 М) + ДШЭ (Ю-5 М) и яиурона (10~® Ы).

Тритон Х-100 в количестве (6,(ХГ#) максимально активирует экзогенное поглощение, также как и эндогенное поглощение кисло-

рода. ' Однако при высоких концентрациях детергента-(до 0,15) скорость экзогенного поглощения 02 вс® в*5® превшает скорость этой реагащи у контрольных,, не обработанных детергентом, хлоро— пластов. ■■ _ "

■ Диэтиловый эфир (25Е) максимально активирует экзогенное поглощение кислорода (как и эндогенное поглощение кислорода). При высоких концентрациях эфира экзогенное поглощениекислорода также более стабильно по сравнению с эндогенным поглощением. Точное совпадение максимумов,активации эндогенного л экзогенного поглощения кислорода позволяет сделать заключение, что в эвдогеннсы поглощении кислородаучаствует в ФС I.: йшмв словами в отсутствие; экзогенных добавок поглощение О^ хлороштотами ■ происходит в результате передачизлектронов от восстановленных акцепторов ФС I на кислород. Высокая стабильность "экзогенного поглощения кислорода по сравнению о эндогенным, поглощением кислорода также свидетельствует об участии ИЗ IX в последнем про' цессе, ..как;указано выше. -':-

йгак, полученные результаты показывает, что восстановительная сила,, образованная Ьри функционировании всей ЭТЦ в отсутствие физиологических акцепторов (НАДф+) расходуется на во о становление кислорода, каки на обраэование водорода в анаэробных условиях (скаэано вше). Однако скорость поглощения киолорода *' гораздо выше , скорости ^ выделения .водорода, я эти процессы иодвер— -гаюгся различному влиянию прндействии детергента, растворителей, нагревания.. Следует выяснить этя оообенностнпоглощения С этой цельо мы исследовали природу активации реакции под влиянием различных воздействия.

3. Пригода активации поглощения кислорода; = ... хлоропластами ■■•

Существует мнение,: что' активация транспорта электронов при реакции Хядда после нахревания /Bmwt, Valkes , 1969/ и под:: влиянием тритона Х-Х00 /Jagendorf, Лтгоо ,1959/ обусловлена раз обцением ФФ, Найлвдайиу» нами' активацию поглощения кислорода мояно объяснять таким яе механизмом.

Дня выяснение: этой возможности мы: исследовала влияние тритона Х-100, диэтвлового эфира и нагревания на мздлисекундноо Г, свечение, которое, по мнению многих авторов /V«jne, 196?t Croft, 1971/ тесно связано о внергиэацией ыеыбрая тидакоидов; необходимое для фотофосфорилирования. Подученные данные показывают, что тритон Х-100, диотадовый эфир прж концентрациях, активирупцих поглощение 02, сильно подавляют послесвечение, действуя подобно разобщит елям /ы«ув» , 1967/. Кроме того, у разобщенных хлоро-пластов детергент и афир не активируют поглощение 02 как в отсутствие, тая и в присутствии доноров электронов. Все указанные факты позволяют дредфлояить, что детергент х растворители вару- ■ тато нормальное состояние мембран хлорошшстов и одним из следствий этого нарушения является разобщение ФФ, что приводит' к активации поглощения 02. Нарушение состояния мембран при низках концентрациях детергента,: растворителя приводит только к повышению срямого потока электронов ва кислород.

Пржвосстаяоэленинметнлвиодогена иди фотоввделении водорода под влиянием вышеуказанных факторов, по-виддааыу, такхе происходит разобщение Ф5. Однако активирущнЭ эффект ігри этой (в результате разобщения 04) перекрывается обратным ингибирутоим эффектом (в результате повышения циклического транспорта эдек-

Л. • • •. '* . /ЗАКГОШШЕ

;, ; На основании полученных1 нами данных по фотовоостановлению иетЕлвиологена, (фотовыделешш водорода и фотопоглощению кислорода хлоропластами можно; предположить ^ сл едутацую гипот етиче скую схему 1фотекашя этих реакций и их связи о функционирование« электронтралспортной цепи (см. схему на стр.26). , : : •. На участие фотосистемы И в исследованных реакциях укаэыва-ет их подавлекие под влиянием факторов, ингибирунщнх систему' окисления воды, (действие'диурона, обработка трио^буфером). На ■ участие фотосистемы.II 'в. фотопотл^ении: кислорода также указывает ^его1шгя01фЬв^е. под'вли^ детер-^гента'; растворителей и нагревания, которое соответствует ингиби-. рованию фотовнделения кислорода при реакции Хшша под влиянием • тех же воздействий. • ' • . '. . • / ..' ■

Однако ' при ингзбированш фотосистемы Ифотовосстановление метилвиоЛогена' и другие исследованные реакции можно наблюдать в присутствии соединений, донируедих электроны на фотоенотему I . (НАДО*Н, цистета, дитиотритол (ДГГ) и аскорбат- натрия*и др.) Участие фотосистемы I в исследуемых фотореакциях хлоропластов -доказывается также аналогичным действием многих факторов (растворителей и детергента) на эти реакции как в отсутствие, так и в црисутствии экзогенных доноров алектронов.

Восстановлешшй верт^ фо-

. тосистекы I - (X), по-видимоцу, непосредственно участвует в восстановлении метилвиологена, выделении водорода и поглощении кислорода. Кроме.первичного акцептора (х), восстановленные вторичные эндогенные окцеоторц (например» ферредокоин) в восстановительной ветви фотосистемы I могут принимать участие в реакциях

выделения водорода в поглощения кислорода.

В свою отереда»,восстановленные акцепторы (X, ФД, МВ) могут донировать электроны на переносчики {ИХ, цят. f , ЛЦ, В700), расположенные между фотосистемами, давая начало циклическому транспорту электрона, эачцкапдему первую фотосистему. При фото- • восстановлении метиявиологенациклический транспорт электронов , ■ определяет эффективность этой реакции. Предполагается, что'на-; рушение мембраны хлоропластов (при продувании газа,вакууниро— ватаги, действии детергента, растворителей) повышает доступность ' метидвиологена (илиэндогегошх акцепторов фотосистемы 1) к хиас-тохиаону, цзтохрану пластоциадину и П700 я тем самым новы--. ■ шает диклический транспорт электронов, что, в свою очерещь,при-, водит к дадьЕе^шу сЕш^ешш эффективвости фотовосстановдеыия . , метилвиологена. - 'Y'.-1-

Цря фотовыдвлениж водорода жз-ea необходпмоЬтн сопряжения электронтранспортвой цепи с бактериальной пздюгеказой (что вызывает дополнительныетрудности в: Переносе электрона от ЭТЦ) циклический. транспорт озлезстронов является причиной виз кой скорости реакции, кал и гра фотовосстановлении метидвиологена, так как акцептированные евдогешпаш соединениями иди метилвиологе— ; " дом злектронымогут бить вновь возврадены к донорной частя фотосистемы I. -у"i'.^v^-v' ^ Vv ■■■-В присутствии кшбинацил доноров (аскорбат. натрия + ДПГ)' ' циклический поток электронов оказывается псдавлапшас, и. это приводит к значительному увелшченшз выхода;фотовосстановления isc— тшшиологена и фотовыдедения водорода* ;

В отличие от этих реакций, циклический транспорт адектро— нов, по-видимому, не влияет на скорость ж эффективность реакции

"'•.'• '.• ./:'*.*'•* .• 23 - УУу'^УЛл- .- : - Г

: фотопоглощения кислорода,; так как последний сильно ахцагггирует . электроны от электронтранспортной цепи (от X, ОД и др.),образуя при этой необратимые продуеты восстановдешга кнслореда (Щ&2*

В закдючениеследует отметить, что многие особенности фото-, : ;химических' реакций, - наблюдаемых* нами у ядоропластов,могут иметь место и в ждаых организмах/Так, при недостатке фгоиологическо-

• го акцептора электронов — ©^восстановленные промежуточные пе— - реаосчики, образовавшиеся при функционировании электронтранс—

портной цепи; могут быть - окислены кислородом или быть использованы в циклическом транспорте электронов, замнкаддем фотосисте—, Учу І»По-^идимоцу,- из^а,слабого сопряжения электротранспорт- :

" кой цепи о гидрогеназой фотовцделенне водорода ваблхідается ' . только при"анаэробиозе, и даже в этих условиях реакция происхо- ■

• дит С нюкой скоростьв.' ■".-■■■V"; ;

'--V Таким образом, в нааеы ссоледовашш выяснены условия оптимального использования активтгх восстановлению: продуктов, об- * ; разуешх і результате работы .адектронтранспортной цепи хдоро- .

• У '^виводи; . • .

.1. Исследована вз аимосвяэ ь окислит ельно-воссталовителышх. процессов, идущих в хлоропластах под действием света, - фотовое-" ' становления метилвиологена,' фотообразования водорода (в присут— ; ствии бактериальной гидрогеназы)

и фотопоглощения кислорода под

влиянием различных факторов.

: , 2; Для фотовосстановления метилвиологена, потекцнал которого близок потенциалу водородного электрода (а также для фотовыделения водорода в фотопоглоцсния кислорода), необходим ^гнкцио-

нпрование двух фотосистем; В отлично от реакции Хилла о > необр&- ■ ; тшо воостанашшвапцимжся акцепторами, алектронафотовоссталЬвле—,4" нио метилвиологена стабилизируется в присутствии зоцидаших : структуру хлоропластов реагентов и: подавляется под действием на-рупашях структуру факторов. Предполагается, что. циклический - . транспорт электронов,, эамыкалцнх первую фотосиотат^ /определяет'' оффективностьфотовос становления метилвиологена. Нарушлане . : структуру мембран хлоропластов реагенты, повытаяциклический ■ транспорт, электронов, подавлявт реаиодию. : ' 0 ■ С-'-У-': л'-'"

3. Найдена комбинация доноров электрона (дитиотритол -I- ас«' корбат натрия) , пря использовании которой фотовосстановление ме-" твдвийдогена лроиохедшт с высокой скоростью, сравнимой со ско-

; ростьв реакции Хилла с необратимо вооот аяавллвадзимкся акцепт о-^ ' рами электрона. Подавление -' циклического транспорта:. электронов; в присутствии этой комбияацдидоноров электрона проводят- к увеличению еффектявностк фотовосстановленля метилвиологена.

4. В анаэробных условиях вдекгроетранспортвая цепь вступает в сопряжение с добавленной бактериальной гвдрогеназой посредством эвдогеннш: переносчике® электрона (ферредоксин и др.). Добавление метилвиологена кал медиатора переноса-электронов; приводит

к повышению эффективности фотовндёленля водорода. Реакция фото— . . выделения водорода подавляется под влиянием^ нарутапаих структуру хлоропластов факторов, но активируется вприсутствии. комбинация доноров электрона. Предполагается, что иэ-«а трудности в сопряжении электронтранспрртвой цеди с гикрогенаэой циклический/ У..; транспорт электронов лимитирует 'фотовыделение водорода.

5. В аэробных условиях кислород является конечным акцептором электронов от алектронтранспортной'цепн, что доказывается

аналогичным действием различных факторов (азида натрия, детергента, растворителей и нагревания) на фотопоглощение кислорода и выделение' кислорода при реакции Хвлла. Местом вклгненяя кислорода в цепь переноса электрона является восстановительная ветвь фотосистемы I, на что указывает аналогичное действие различных факторов на фотопоглощение кислорода как в отсутствие,, так и в присутствии доноров электрона для фотосистемы I;

6. В отличие от фотовосстановления метиявиологена и выделения водорода, фотопоглощение кислорода активируется при низких концентрациях, детергента и растворителей.. Миялисекундное послесвечение хлоропластов, тесно связшшое с: анергиэацией мембран,; подавляется под влиянием этих реагентов. У разобщенных хлоропластов детергент - я растворители существенно не влияют на фотопоглощение кислорода. Предполагается, что активация фотопоглощения кислорода обусловлена разобщавшим действием детергента и растворителей. ■" ; " ' , ■ ,

: 7. Различие в-эффективности обратимого 'фотовосстановления • метиявиологена и выделения водорода по сравнению с необратимым фотовосстановлением кислорода связано с осуществлением обратных реакций, эамыкашщх восстановительную ветвь цепи переноса элех-: трона. Исследование,взаимосвязи различных окислительно-восставо-вительных процессов; вдущих в хлоропластах под влиянием света, ■ позволяет наметить путь оптимизации этих процессов.

Гипотетическая схема транспорта-.влектронов при фэтовосстановлеяин метилвиа1огена, фотоадделении водорода и фотопоглощении кислорода .. ■ хлороплястами -'■ . .

0 ^Рг

внтгрснш* сгоина

(Ьгасок осубдикованннх работ на твду тюссуртащэд

1. Чан Ван Ни, В.В.НикащфОВ, Г.П.^рнн, А.А.Красновсккй. Взаимосвязь фотовнделения и фотопоглощения кислорода хлоро-

. пластами: активация и инактивация. Биохимия, т. 42, вып. 7, 1298-1Э06, 1977.

2. ЧалВанНя, В .В .Нлкаадров ,* А. А. Красновский. Миллисекундное послесвечение хлоропластов: активация и подавлеяие. Биофизика, т. 22, вып. 6, 1056-1062, 1977;

3.В.В.Никандров,ЧанВадНя,Г.П.^ш,А.А.1фасновскиЙ. Исследование условий фотовосстановления метштиологена хлоропласт ама. Молекулярная биология, т.12, вып.6, .1278-1286, 1978.

, 4. А.А.Красновский, Чая Ван Ни, В.В.Никаядров, Г.П.^ин. Иселе-дование условий эффективного фотовыделекка водорода хлоро-властами в присутствии бактериальнойглдрогеназы. Иолекуляр-кая биология, т. 23, вып. 12, 1979.

. ■ , Принятые совращения' БСА - бычий сывороточный альбумин; ГЛР — гидрогеназа; ДАО - ди-метвлсульфоксвд; ДГТ -^дитиотритол; ДХФ® - дкхлорфенолиндофенол; КХФ- карбоксицианид-ы-хлорфенилгидразон; ЫВ - метадзиологен ; 1Г700 - хлорофилл реакционного центра фотосистемы I; ПК - пласто-: хинон; ПЦ - пластоцианин; ФД - ферредоксин; СС I - фотосистема I; 4С II - фотосистема II; ФФ - фотофосфорилирование; X - неидеяти-фицированный первичный акцептор фотосистемы X; а- некдеотифи-цированный первичный акцептор фотосистемы XI.

за К. 12 87.Т № Л Od. Вії аіиикс.