Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов

Савостина, Ирина Евгеньевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов"

На правах рукописи

Савостина Ирина Евгеньевна

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ УФ-СВЕТА И ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ НА АНТИОКСИДАНТНЫЙ СТАТУС И СОСТОЯНИЕ МЕМБРАН

ЛЕЙКОЦИТОВ

Специальность 03.00.02 - Биофизика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Воронеж-2005

Работа выполнена в Воронежском государственном университете

Научный руководитель:

доктор биологических наук,

профессор, заслуженный деятель науки РФ

Артюхов Валерий Григорьевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Попова Татьяна Николаевна

кандидат биологических наук Дмитриев Евгений Владиславович

Ведущая организация:

Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии

Защита состоится 26 декабря 2005 г. в 15-00 часов на заседании диссертационного совета Д.212 038.03 при Воронежском государственном университете по адресу: 394006, г. Воронеж, Университетская пл., 1, ауд. 59

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Воронежем го государственного университета

Автореферат разослан ноября 2005 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Грабович М.Ю.

ш>&-г< ггтьг

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Высокая интенсивность свободнорадикальных окислительных процессов в клетке в случае недостаточной активности компенсирующих систем приводит в масштабах организма к окислительному стрессу и, вследствие этого, к многочисленным патологиям, в том числе к различным бронхо-легочным заболеваниям (Б.О. Уагша е! а!., 1995; в. Ыеэиу ег а!., 1995) Повреждение активными кислородными метаболитами (АКМ) и окисленными липидами белков и нуклеиновых кислот может привести к нарушению иммунных функций, инициированию воспалительных процессов, развитию онкологических и нейрологических заболеваний (М.Р. Нокарр1е ег а!., 1996).

Внутриклеточный процесс детоксикации реактивных кислородных метаболитов включает энзиматические системы супероксиддисмутазы (СОД), ката-лазы, глутатионтрансферазы и глутатионпероксидазы, а также молекулы-ловушки свободных радикалов - витамины С, Е, каротиноиды и др. (Н.К Зен-ков с соавт., 2001). К антиоксидантам первого уровня защиты клетки от токсического действия активных форм кислорода (АФК) относят СОД, дисмути-рующую супероксидные анион-радикалы до пероксида водорода и воды.

Кроме того, важную роль в регуляции окислительно-восстановительного гомеостаза крови играют полиморфноядерные лейкоциты (ПМЯЛ), способные в определенных условиях генерировать АФК. Так, при активации лимфоциты способны к развитию явления, похожего на дыхательный «взрыв» с генерацией АКМ (Н.К. Зенков с соавт., 2001). Активация иммуноцитов и интенсификация пероксидного окисления липидов (ПОЛ) - процессы взаимосвязанные: активация фагоцитоза, сопровождающаяся увеличением образования АФК, приводит к усилению ПОЛ, и, наоборот, продукты ПОЛ способны сенсибилизировать нейтрофилы (Г.И Клебанов с соавт., 1990). Активность ферментов антиокси-дантной системы (АОС) зависит как от уровня АФК, так и от содержания в крови продуктов ПОЛ (Н.Б. Поберезкина, Л.Ф. Осинская, 1989).

Помимо этого, АФК участвуют в пролиферации лимфоцитарных клеток. Так, увеличение уровня супероксидного анион-радикала стимулирует пролиферацию лимфоцитов, а накопление пероксида водорода, наоборот, является сигналом к ингибированию этого процесса. В то же время, данные клетки, будучи мигрирующими, отражают изменения, происходящие в организме (М.В. Робинсон с соавт., 1986). Следовательно, лимфоциты можно рассматривать как «ферментное зеркало» организма, отражение его метаболических процессов.

Одним из возможных регуляторов окислительно-восстановительного равновесия в клетках иммунной системы является УФ-свет. Рядом авторов показано, что клеточные и гуморальные компоненты крови, подвергнутые УФ-облучению в физиологических дозах, могут оказывать регулирующее действие на окислительный гомеостаз (Л.В. Шабуневич с соавт., 1986; В.Г. Артюхов с соавт., 2003) и иммунную систему организма в целом (Е.Б. Жибурт с соавт., 1995; КЛЭ. ОЬо1епвкауа е1 а1., 1991).

РОС. НАЦИОН АЛЬНАЯ . БИБЛИОТЕКА ] С Пепрв&г ¡л /А« •а

ное равновесие позволяют подвести научно-обоснованный теоретический фундамент практического использования УФ-света в медицине.

В настоящее время при лечении патологий, сопровождающихся значительной интоксикацией организма и иммунодефицитными состояниями, активно используется сочетанное воздействие УФ-облучения и фармакологических препаратов на иммунокомпетентные клетки (В.М. Земсков с соавт., 1993). В связи с вышесказанным представляется актуальным изучение возможности регулирования окислительно-восстановительного равновесия в клетках иммунной системы путем сочетанного воздействия на них модуляторов физической и химической природы (УФ-света, иммуностимуляторов - дибазола, циклоферона -и иммунодепрессанта дексаметазона). Изучение механизмов, лежащих в основе действия УФ-света и иммуномодуляторов на лейкоцитарные клетки, позволит в дальнейшем модифицировать их функциональные свойства для достижения прогнозируемых эффектов коррекции иммунных расстройств. Решение указанной проблемы является теоретической основой применения экстракорпоральной УФ- и фармакологической модификации лимфоцитов (УФМЛ) в терапии ряда заболеваний и, таким образом, имеет большое значение для медицины.

Цель и задачи диссертационной работы. Целью настоящей работы явилось изучение биофизических и биохимических механизмов действия УФ-света и иммуномодуляторов (дибазола, циклоферона, дексаметазона) на поддержание окислительно-восстановительного гомеостаза иммуноцитами (лимфоциты, ней-трофилы) в норме и при патологии. '

В связи с этим перед нами стояли следующие задачи:

1. Изучить влияние УФ-света (240-390 нм, 151 Дж/м2) и иммуностимулятора дибазола в терапевтической концентрации на состояние про- и антиокси-дантного статуса лимфоцитов доноров.

2. Оценить уровень ПОЛ и состояние АОС иммуноцитов доноров в условиях сочетанного воздействия УФ-света и иммуностимулятора циклоферона.

3. Изучить сочетанное действие УФ-света и иммунодепрессанта дексаметазона на структурно-функциональные свойства и окислительно-восстановительный гомеостаз иммуноцитов доноров.

4. Оценить вклад сочетанного применения УФ-излучения и иммуномодуляторов (дибазол, циклоферон, дексаметазон) в поддержание окислительно-восстановительного равновесия в лимфоцитах больных бронхиальной астмой и пациентов с гнойными патологиями.

Научная новизна. Работа является комплексным исследованием, посвященным изучению механизмов окислительно-восстановительного гомеостаза лимфоцитов и нейтрофилов крови в условиях УФ-облучения и в присутствии химических модификаторов (дибазол, циклоферон, дексаметазон).

Показано, что повышение СОД-активности лимфоцитов при их УФ-облучении в терапевтической дозе 151 Дж/м2 обусловлено синтезом этого фермента клетками de novo. Обнаружено увеличение функциональной активности нейтрофилов при их инкубации с фотомодифицированными лимфоцитами и установлено, что данный эффект обусловлен активацией синтеза интерлейки-нов 1(3 (ИЛ-1р) и ИЛ-2 УФ-облученными клетками. На основании полученных экспериментальных и литературных данных предложена схема действия УФ-

света на иммуноциты.

Выявлено, что при сочетанном действии УФ-света и иммуностимуляторов (дибазола, циклоферона) на лимфоциты крови доноров происходит увеличение СОД-активности, адекватное повышению интенсивности пероксидного фотоокисления липидов (ПФОЛ) в клетках.

Разработаны схемы событий молекулярного механизма совместного действия УФ-света и циклоферона, а также влияния дексаметазона на фотомоди-фицированные лейкоциты крови доноров.

Впервые изучено сочетанное действие УФ-излучения и иммуномодуля-торов в терапевтической дозе на показатели про- и антиоксидантного статуса иммуноцитов крови доноров и больных бронхиальной астмой и гнойными патологиями. При проведении УФМЛ с дибазолом (пациенты с гнойно-септической патологией), с циклофероном и дексаметазоном (больные бронхиальной астмой) отмечены изменения в состоянии окислительно-восстановительного равновесия в сторону нормализации.

Практическая значимость. Научные положения диссертационной работы расширяют и углубляют современные представления о молекулярно-клеточных механизмах регуляторного действия УФ-света и иммуномодулирующих веществ на отдельные звенья про- и антиоксидантной систем организма.

Фотоиндуцированные изменения в функциональном статусе нейтрофи-лов, уровне ПОЛ и активности СОД в лимфоцитах доноров и больных бронхиальной астмой и гнойными патологиями необходимо учитывать при обсуждении вопросов, касающихся выяснения механизмов действия УФ-света на моле-кулярно-клеточном уровне. Полученные экспериментальные данные позволяют выявить общие закономерности регуляторного действия УФ-света в поддержании окислительно-восстановительного равновесия в клетках организма.

Результаты экспериментов по сочетанному действию УФ-света и имму-номодуляторов на иммуноциты (нейтрофилы и лимфоциты) позволяют расширить и обосновать новые подходы к иммунокоррекции патологических состояний организма и определить возможности применения метода УФМЛ при различной тяжести воспалительного процесса с целью повышения эффективности его использования.

Предложенные схемы событий, возникающих как при воздействии УФ-света в отдельности, так и в сочетании его с иммуномодулирующими препаратами (циклоферон и дексаметазон), могут быть полезны для понимания молекулярно-клеточных аспектов терапевтического действия методов УФМЛ и А У ФОК.

III Съезде биофизиков России (Воронеж, 2004); XIX Съезде физиологов России (Екатеринбург, 2004); III Международной конференции «Электромагнитные излучения в биологии» (Калуга, 2005); IV съезде фотобиологов России (Саратов, 2005); Научной сессии сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж, 2003; 2005). По материалам диссертации получено 3 удостоверения на рационализаторское предложение.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 статьи и 11 тезисов Благодарности. Автор выражает глубокую признательность и благодарность заведующей центром «Гравитационной хирургии и сорбционной терапии» Воронежской городской больницы № 9 (скорой медицинской помощи), главному трансфузиологу г. Воронежа, доктору медицинских наук JI.C. Свекло и врачу-трансфузиологу этого центра H.A. Аксеновой за помощь при подготовке работы.

На защиту выносятся следующие положения;

1. УФ-облучение лимфоцитов доноров в терапевтической дозе (240-390 нм, 151 Дж/м2) стимулирует синтез некоторых белков, в частности, провоспали-тельных цитокинов - интерлейкина 1 ß и интерлейкина 2-й супероксиддисму-тазы.

2. Сочетанное действие УФ-света и иммуностимуляторов (дибазола и цик-лоферона) в терапевтических дозах на лимфоциты доноров направлено на поддержание окислительно-восстановительного равновесия в клетках крови.

3. УФ-облучение лимфоцитов (151 Дж/м2) индуцирует повышение чувствительности фотомодифицированных клеток к некоторым лекарственным препаратам (дибазол и дексаметазон) за счет усиления вклада в комплексирование иммуномодуляторов с облученной мембраной клетки гидрофобных связей.

4. Схемы процессов, протекающих при сочетанном действии УФ-света и дексаметазона на функциональное состояние нейтрофилов; а также механизмов совместного действия УФ-света и циклоферона на лейкоциты крови доноров.

Структура диссертации. Диссертационная работа включает 202 страницы машинописного текста, 4 таблицы, 48 рисунков. Состоит из «Введения», 6 глав, «Заключения» и «Выводов». Список литературы содержит 321 источник, из них 160 - отечественных и 161 - зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. Действие УФ-света на структуру и функции белков и липидов В главе представлен анализ литературных данных о структуре антиокси-дантной системы и особенностях функционирования отдельных ее компонентов при действии УФ-света в норме и при патологии. Освещены процессы пе-роксидного фотоокисления липидов и их роль в УФ-индуцированных изменениях липидов мембран.

ГЛАВА 2. Бронхиальная астма: механизмы формирования, пути

коррекции патологического состояния В главе изложены современные сведения о классификации, этиологии, патогенезе бронхиальной астмы и способах лечения этого заболевания. Рас-

смотрены механизмы действия глюкокортикостероидных (ГКС) гормонов на клетки иммунной системы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования

Объектами исследования явились лимфоциты и нейтрофилы крови доноров, больных бронхиальной астмой и пациентов с гнойными патологиями. Для получения лейкоцитарной массы цельную гепаринизированную кровь (20 Ед/мл) центрифугировали 10 мин при 1000 об/мин (А.И. Кудрявицкий, 1985). Выделение лимфоцитов из лейкоцитарной массы осуществляли путем центрифугирования на градиенте плотности фиколл-урографина (1,077 г/мл) по методу А. Воуит (А. Воут, 1974); нейтрофилы выделяли на двойном градиенте плотности фиколл-урографина (1,077 и 1,119 г/мл).

УФ-облучение клеток проводили в термостатируемой (20+1 °С) кювете при постоянном перемешивании через светофильтр УФС-1 с полосой пропускания в области 240-390 нм. Источник излучения - ртутно-кварцевая лампа ДРТ-400. В работе использовали дозу облучения 151 Дж/м2, что соответствует терапевтическому диапазону доз.

Экстракорпоральную УФ- и фармакомодификацию лимфоцитов (УФМЛ) проводили на базе Воронежской городской больницы № 9 (скорой медицинской помощи) (БСМП). В комплекс базисной терапии был включен курс лечебного дискретного плазмоцитафереза из 3-4 сеансов, проводимых через день. В основе этого метода лечения лежит ультрафиолетовое облучение лимфоцитов крови больного аппаратом «Надежда» с последующей инкубацией с иммуно-модулятором.

Об уровне процессов пероксидного окисления липидов на клеточных мембранах судили по интенсивности спонтанной (1сп) хемилюминесценции (ХЛ) иммуноцитов в присутствии люминола (Ю.А. Владимиров, А.Я Потапенко, 1989). Измерение ХЛ проводили на биохемилюминометре БХЛ-06 М. Функциональную активность нейтрофилов оценивали по интенсивности стимулированной (1сг) люминолзависимой ХЛ, используя в качестве стимулятора фагоцитоза латекс (Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев, 1989).

СОД-активность лимфоцитов исследовали по изменению интенсивности ХЛ, опосредованной супероксидными анион-радикалами при окислении люминола (Л.Т. Рязанцева и др., 2001).

Каталитическую активность миелопероксидазы (МПО) регистрировали спектрофотометрически на вертикальном фотометре АИФР-01 «Униплан» при длине волны 450 нм по реакции окисления 3,5,3',5'-тетраметилбензидина (ТМБ) в присутствии пероксида водорода (Р.О. ,1озер1^§ # а1., 1982).

Концентрацию ИЛ-1р и ИЛ-2 в лизатах лимфоцитов определяли методом иммуноферментного анализа с помощью коммерческих тест-систем на основе антител к исследуемым цитокинам (производство ООО «Протеиновый контур», СПб.).

Флуоресцентные свойства зонда 1-анилинонафталин-8-сульфоната (АНС) исследовали после его инкубации с суспензией лимфоцитов в течение 30 мин

при 37 °С.

Жизнеспособность лимфоцитов определяли по стандартной методике с использованием красителя трипанового голубого (Д. Клаус, 1990).

Статистическую обработку результатов исследований проводили с помощью пакета статистических программ «81а1^арЫсБ». Отличия в контрольных и опытных сериях экспериментов анализировали методом попарных сравнений, используя ^критерий Стьюдента при 5 % уровне значимости.

ГЛАВА 4. Исследование воздействия УФ-света и дибазола на лимфоцитарные клетки

Дибазол - иммуномодулятор и адаптоген, проявляющий свойства индуктора интерферона. При изучении влияния УФ-света (151 Дж/м2) и дибазола в терапевтической концентрации (0,02 мг/мл крови) на интенсивность ПОЛ и СОД-активность лимфоцитов показано, что УФ-облучение лимфоцитов ((2-4)-105 кл/мл) приводит к увеличению СОД-активности и интенсивности процессов ПОЛ непосредственно после облучения в 2,1 и 1,5 раза соответственно (рис. 1). Повышение СОД-активности может быть вызвано как фотоактивацией фермента, так и увеличением содержания в крови супероксвдного анион-радикала в результате облучения. Отмечаемая интенсификация ПОЛ обусловлена вкладом пероксидного фотоокисления липидов мембран лимфоцитов. При сочетанием применении УФ-облучения и дибазола отмечено максимальное повышение активности СОД (в 2,25 раза) при увеличении уровня ПОЛ на 12 % по сравнению с нативными клетками. Совместное влияние этих факторов на лимфоциты может иметь положительный клинический эффект при лечении заболеваний, сопровождающихся повышением СОД-активности клеток.

А, отн. ед. 1си, мВ

Рис. 1. Зависимость СОД-активности (А) и интенсивности спонтанной хемилюминесценции (1сп) лимфоцитов от УФ-облучения и присутствия дибазола

Обозначения: В. СОД-активность; ™ - интенсивность хемилюминесценции;

1 - нативньге лимфоциты;

2 - лимфоциты + дибазол;

3 - облученные лимфоциты (151 Дж/м2);

4 - облученные лимфоциты + дибазол:

* - отличия достоверны относительно исходного уровня при р<0,05.

В проанализированных литературных источниках мы не нашли сведений, касающихся взаимодействия дибазола с мембранами клеток. Универсальным мембранным зондом, который реагирует на самые разнообразные перестройки, происходящие в мембранах, служит АНС (Ю.А. Владимиров, Г.Е. Добрецов, 1980). В связи с этим нами были исследованы флуоресцентные свойства АНС в

комплексе с нативными и фотомодифицированными лимфоцитами в присутствии дибазола.

При взаимодействии флуоресцентного зонда с лимфоцитарными мембранами показано, что интенсивность флуоресценции данного комплекса возрастает в 2,6 раза без изменения положения максимума по сравнению с раствором красителя, что свидетельствует о значительном вкладе сил электростатической природы в образование комплекса (рис. 2). Инкубация АНС с клетками, обработанными дибазолом, приводит к снижению изучаемого показателя на 9 % относительно контроля (нативные лимфоциты + АНС). Это может быть следствием стерического экранирования мест связывания флуоресцентного зонда на мембране в результате взаимодействия дибазола с лимфоцитарными клетками. УФ-модификация лимфоцитов в дозе 151 Дж/м2 вызывает уменьшение интенсивности флуоресценции АНС на 14 % по сравнению с контролем и сдвиг максимума флуоресценции на 6 нм в коротковолновую область, что характерно для комплексов АНС с гидрофобными группами белков. Выявленный эффект, по-видимому, обусловлен фотоиндуцированными изменениями структуры мембраны: повышением микровязкости липидного бислоя мембраны и образованием поперечных межмолекулярных сшивок вследствие интенсификации процессов ПФОЛ. Снижение интенсивности флуоресценции может быть обусловлено ограничением подвижности отдельных групп зонда в результате повышения вязкости мембраны. Кроме того, вследствие разрушения гликокаликса становятся доступными более глубокие, гидрофобные слои мембраны. Это повышает вклад сил гидрофобной природы во взаимодействие АНС с лимфоцитами и приводит к наблюдаемому нами коротковолновому сдвигу максимума флуоресценции зонда.

I 5 мв Рис. 2. Спектр флуоресцен-

0,20

ции АНС в комплексе с УФ-модифицированными лимфоцитами и дибазолом

0,15

Обозначения:

1 - нативные лимфоциты + АНС

(контроль);

2 - буферный раствор АНС (рН

0,10

7,4);

4 Дж/м2) + АНС;

3 - облученные лимфоциты (151

0,05

4 - облученные лимфоциты (151

•2 Дж/м2) + дибазол + АНС;

455 465 475 485 495 505 515 нм

* - достоверные изменения относительно контроля при р<0,05.

При инкубации АНС с фотомодифицированными лимфоцитами, обработанными дибазолом, отмечено понижение интенсивности флуоресцентного зонда на 16 % относительно аналогичной системы без иммуномодулятора (и на

28 % по сравнению с контролем) и сдвиг максимума флуоресценции в коротковолновую область на 5 нм (рис. 2). Полученные результаты свидетельствуют об усилении связывания дибазола с УФ-модифицированными в терапевтической дозе лимфоцитарными клетками по сравнению с нативными иммучонитами По-видимому, именно этим объясняется более выраженное действие дибазола на СОД-активность и уровень ПОЛ в облученных клетках.

Бронхиальная астма характеризуется возникновением сопутствующего заболеванию иммунодефицита, который может являться следствием применения глюкокортикостероидных гормонов, показанных при бронхиальной астме. В связи с этим представляется актуальным поиск способов компенсации состояний иммунодефицита. С целью нормализации иммунного статуса больным бронхиальной астмой на базе БСМП было проведено 3 этапа УФМЛ с дибазолом.

При изучении интенсивности ХЛ и СОД-активности лимфоцитов здоровых доноров было установлено, что в норме максимальная интенсивность спонтанной ХЛ равна 0,41+0,06 мВ, а СОД-активность - 0,38+0,02 отн.ед.

У большинства обследованных больных (14 чел) исследуемые показатели были повышены - уровень СОД в среднем на 40 %, а интенсивность ПОЛ - в 1,4 - 3,1 раза. В ходе проведения 3 сеансов УФМЛ-терапии с дибазолом нами отмечено понижение интенсивности ПОЛ, что может быть следствием как эффекта УФ-облучения (активирующего компоненты АОС, в частности СОД), так и действия дибазола; причем данные, полученные in vitro, указывают на то, что противовоспалительное действие дибазола усиливается при его взаимодействии с фотомодифицированными лимфоцитами.

ГЛАВА 5. Сочетанное воздействие УФ-света и циклоферона на лейкоцитарные клетки

В главе 4 сообщалось о повышении СОД-активности лимфоцитарных клеток непосредственно после их УФ-облучения. Известно, что УФ-свет и лазерное облучение стимулируют синтез ряда белков (К. Schulze-Osthoff et al., 1995). Было показано, что после суточной инкубации облученных клеток СОД-активность в них возрастает на 48 %. Для адекватной оценки механизма действия УФ-света in vivo важно было выяснить, способно ли УФ-облучение лейкоцитарных клеток в дозе 151 Дж/м2 активировать синтез СОД в лимфоцитах. С этой целью была проведена серия экспериментов по изучению влияния ингибитора синтеза белка циклогексимида (10 мкмоль/л) на показатели СОД-активности лимфоцитов при УФ-облучении клеток в терапевтической дозе. В результате проведенного исследования нами показано, что инкубация циклогексимида (ЦГ) с нативными клетками не приводит к достоверным изменениям изучаемого показателя (рис. 3). При добавлении ЦГ к облученным клеткам наблюдается снижение СОД-активности на 16 % по сравнению с нативными лимфоцитами и на 33 % относительно активности фермента у облученных клеток, что указывает на блокирование синтеза фермента de novo. Снижение активности СОД в облученных клетках после инкубации с ЦГ относительно нативных лимфоцитов может быть обусловлено, во-первых, интенсификацией процессов ПФОЛ с последующим накоплением продуктов окисления липидов, в том числе гидропе-

роксидов ненасыщенных жирных кислот, которые являются ингибиторами СОД; во-вторых, ингибирующим действием пероксида водорода, концентрация которого может повышаться в результате снижения под действием УФ-света активности пероксидазы и каталазы; и, в-третьих, деструктируюшим действием на фермент АФК, образующихся в результате УФ-облучения.

На основании полученных результатов можно заключить, что повышение СОД-активности лимфоцитов при УФ-облучении обусловлено не только конфор-мационными перестройками молекулы фермента, но и синтезом СОД клетками de novo. Поскольку УФ-свет индуцирует образование АФК клетками, то мы предполагаем, что регуляция синтеза фермента осуществляется по свободнорадикальному механизму.

А, отн.ед.

Рис. 3. Влияние циклогексимида на СОД-активность (А) фотомодифицированных лимфоцитов доноров

Обозначения:

1 - нативные лимфоциты (контроль);

2 - нативные клетки, инкубированные с ЦГ;

3 - лимфоциты, облученные в дозе 151 Дж/м2;

4 - облученные клетки, инкубированные с

ЦГ;

* - достоверные изменения по отношению к контролю;

0 - достоверные изменения относительно предыдущего значения при р<0,05.

В следующей серии экспериментов нами было исследовано влияние лимфоцитов, модифицированных УФ-светом в терапевтической дозе, на функциональную активность нейтрофилов. Показано, что при инкубации в течение 24 часов фотомодифицированных лимфоцитов с нейтрофилами интенсивность спонтанной хемилюминесценции лейкоцитов возрастает по сравнению с необ-лученной суспензией клеток на 150 %; это указывает на повышение уровня ПОЛ в результате УФ-облучения. Выявлено повышение фагоцитарной активности нейтрофилов на 40 %. Эффект прайминга фагоцитов может реализоваться путем усиления синтеза лимфоцитами провоспалительных цитокинов в результате их УФ-облучения. Для подтверждения этого предположения нами проведено исследование влияния фотомодификации лимфоцитов крови доноров на содержание в них интерлейкина-1 (3 и интерлейкина-2 после суточной инкубации клеток. Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что в УФ-модифицированных лимфоцитах активируются процессы синтеза цитокинов - содержание ИЛ-ip возрастает почти в 2 раза, ИЛ-2 - на 10 %. При УФ-облучении усиливается образование АФК - на это указывает повышение уровня ПОЛ в облученных клетках. Известно, что АФК могут активировать опреде-

ленные факторы транскрипции (К. ЗсНи^-ОБ^ой1 й а1., 1995). Возможно, данный механизм лежит в основе увеличения продукции ИЛ-1 [} и ИЛ-2, и, вероятно, именно этим объясняется высокая степень прайминга нейтрофилов при длительной инкубации их с фотомодифицированными лимфоцитами.

Наше исследование было направлено на выявление механизмов терапевтического эффекта комплексного применения экстракорпорального УФ-облучения иммуноцитов и фармакотерапии циклофероном (Цф). Последний, как и дибазол, относится к низкомолекулярным индукторам интерферона.

При изучении влияния УФ-облучения и циклоферона на состояние мембраны нейтрофила и его функциональный потенциал показано, что инкубация нейтрофилов с циклофероном (0,02 мг/мл) в течение 1 часа приводит к повышению уровня ПОЛ в клетках на 17 % (рис. 4). При облучении фагоцитов наблюдается увеличение интенсивности ПОЛ на 25 % относительно необлучен-ных клеток. Добавление Цф к фотомодифицированным клеткам снижает интен-

Рис. 4. Влияние УФ-света и циклоферона на уровень ПОЛ (1сп) и функциональную активность (1ст) нейтрофилов (после 1 ч инкубации с рффзначения:

уровень ПОЛ; Щ- функциональная активность; Г^нативныенейтрофилы (контроль);

2 - нативные клетки + Цф;

3 - нейтрофилы, облученные в дозе 151 Дж/м ;

4 - облученные клетки + Цф; * - отличия достоверны по сравнению с контролем;

° - достоверные изменения относительно предыдущего значения при р<0,05.

сивность ПОЛ в них до уровня нативных нейтрофилов. Нами также выявлен праймирующий эффект циклоферона по отношению к УФ-облученньтм (но не нативным!) нейтрофилам. УФ-свет стимулирует повышение функциональной активности нейтрофилов, степень активации составляет 21 %. При добавлении Цф к лейкомассе непосредственно после облучения отмечается более высокий прайминг нейтрофилов - интенсивность стимулированной ХЛ повышается на 25 % по сравнению с облученными и на 57 % - с нативными клетками. Выявленное нами увеличение интенсивности стимулированной ХЛ характеризует возможность нейтрофилов к более высокой генерации АФК в присутствии Цф. Можно предположить, что это один из механизмов индукции циклофероном синтеза белков, влияющих на проявление функциональных свойств клетками иммунной системы.

В следующей серии экспериментов инкубацию нейтрофилов с Цф прово-

дили в течение 24 часов в питательной среде ЯРМ1. Выявлено, что сочетанное действие УФ-света и Цф приводит к максимальному повышению уровня ПОЛ (рис 5). Степень прайминга фотомодифицированных клеток через 24 часа после УФ-облучения составляет 50 %, что существенно выше, чем при часовой инкубации клеток (21 %); эти результаты указывают на то, что УФ-свет является индуктором различных биохимических процессов, запускающих прайминг клеток. Цф также является праймирующим агентом, что, возможно, обусловлено индукцией синтеза интерферона.

Рис. 5. Влияние УФ-света и циклоферона на уровень ПОЛ (1сп) и функциональную активность (1ст) нейтрофилов (после 24 ч инкубации с

Цф)

Обозначения: Ш- уровень ПОЛ; Щ- функциональная активность;

1 - нативные нейтрофилы (контроль);

2 - нативные клетки + Цф;

3 - нейтрофилы, облученные в дозе 151 Дж/м2;

4 — облученные клетки + Цф; * - отличия достоверны по сравнению с контролем;

° - достоверные изменения относительно предыдущего значения при р<0,05.

Увеличение интенсивности стимулированной ХЛ при сочетанном действии УФ-радиации и циклоферона на 74 % по сравнению с нативными нейтро-филами можно объяснить аддитивным эффектом, при котором оба воздейст-^ вующих на клетки фактора (УФ-свет и циклоферон) вызывают прайминг лей-

коцитарных клеток. Выявленный нами прайминг может быть обусловлен акти-1 вацией двух основных ферментных систем, продуцирующих АФК в нейтрофи-

• лах: миелопероксидазой и NADPH-oкcидaзoй.

С нечыо выяснения вклада миелопероксидазы в УФ- и циклоферон-индуцированный прайминг нейтрофилов нами было изучено влияние УФ-света и Цф на активность МПО нейтрофильных лейкоцитов. Выявлено, что УФ-облучение фагоцитов у всех обследованных доноров приводит к снижению активности МПО в среднем на 11 % (рис. 6). Инкубация с циклофероном в течение 24 часов нативных и фотомодифицированных клеток вызывает повышение активности МПО на 31 и 22 % соответственно. По-видимому, активацией МПО обусловлен более высокий прайминг нейтрофилов при их инкубации в присутствии циклоферона.

При лечении больных бронхиальной астмой в качестве иммуномодули-

рующего агента в БСМП применялся циклоферон - новый отечественный препарат, хорошо зарекомендовавший себя, в том числе, в коррекции иммунного статуса организма при иммунодефицитных состояниях различного происхождения. С целью нормализации иммунного статуса больным бронхиальной астмой было проведено 3 сеанса УФМЛ с циклофероном. Обследованная группа больных (16 человек) по показателям уровня ПОЛ и СОД-активности не отли-

А, ед/мг белка

Рис. 6. Влияние УФ-света и циклоферона на активность (А) мие-лопероксидазы нейтрофилов (после 24 ч инкубации)

Обозначения:

1 - нативные нейтрофилы (контроль);

2 - нативные клетки + циклоферон;

3 - нейтрофилы, облученные в дозе 151 Дж/м2;

4 - облученные клетки + циклоферон; * - отличия достоверны по сравнению с контролем;

0 - достоверные изменения относительно предыдущего значения при р<0,05.

чалась от обследованной ранее группы пациентов с диагнозом бронхиальная астма (см. главу 4). В результате проведенных исследований нами отмечена нормализация показателей СОД-активности у большинства пациентов (12 человек). Однако интенсивность процессов ПОЛ по окончании этой терапии остается повышенной. Полученные результаты свидетельствуют, возможно, о недостаточной продолжительности курса лечения, особенно у пациентов, которые характеризовались более тяжелым течением бронхиальной астмы (4 человека).

ГЛАВА 6. Исследование действия УФ-света и глюкокортикостероидных гормонов на лимфоцитарные клетки

Дексаметазон (Дм) - синтетический кортикостероид, обладающий высоким противовоспалительным действием. Главную роль в реализации действия глюкокортикостероидных гормонов играют геномные эффекты, опосредованные связыванием гормона с внутриклеточными рецепторами и последующим изменением транскрипции определенных генов. Противовоспалительное действие глюкокортикостероидов обусловлено подавлением транскрипции, супрессией синтеза ИЛ-1р (Г.Н. Дранник, 2003). Показано, что при суточной инкубации фотомодифицированных клеток с Дм уровень продукции цитокина составляет всего 11 % от исходного, характерного для облученных лимфоцитов, в то время как инкубация нативных лимфоцитов с Дм индуцирует снижение ими продукции ИЛ-1 только на 39 %. Выявленные эффекты имеют место и в отно-

шении ИЛ-2, хотя и в меньшей степени - при добавлении дексаметазона к фо-томодифицированным лимфоцитам содержание цитокина не изменяется, оставаясь на уровне интактных клеток (рис. 7).

Более эффективное противовоспалительное действие дексаметазона при его добавлении к облученным лимфоцитам может быть связано с изменением

_ __ пг/мл Рис. 7. Влияние УФ-облучения и

дексаметазона на содержание интерлей-кинов в лимфоцитах доноров

Обозначения: Щ-ИЛ-1Р

т- ил-2

1 - нативные лимфоциты (контроль);

2 - нативные лимфоциты, инкубированные с Дм;

3 - облученные лимфоциты (151 Дж/м2);

4 - облученные лимфоциты, инкубированные с Дм;

* - достоверные изменения по отношению к контролю;

° - достоверные изменения относительно предыдущего значения при р<0,05. топографии компонентов мембраны в результате УФ-облучения, вследствие чего улучшается связывание с мембраной и последующее проникновение ГКС в клетку. Это предположение было подтверждено нами в экспериментах по исследованию флуоресценции мембранного зонда АНС.

Взаимодействие АНС с мембранами нативных лимфоцитов приводило к повышению интенсивности флуоресценции зонда в 2,9 раза без изменения положения максимума (498 нм). При инкубации АНС с лимфоцитами, обработанными дексаметазоном, выявлено снижение интенсивности флуоресценции зонда на 15 % по сравнению с контролем (рис. 8). Подобный эффект был зарегистрирован Неар Я.В. с1 а]. (1970) при комплексировании АН С с мембранами гепа-тоцитов в присутствии ГКС; было обнаружено, что глюкокортикостероиды, в отличие от других стероидов, взаимодействуют с 8Н-группами белков на поверхности плазматической мембраны, это создает препятствия для связывания мембранного зонда.

В результате инкубирования зонда с фотомодифицированными лимфоцитами интенсивность флуоресценции снижалась на 42 %, одновременно отмечался сдвиг максимума флуоресценции в коротковолновую область (490 нм), что может быть следствием как уменьшения комплексообразования зонда с мембраной, так и повышения вязкости мембраны и усиления вклада гидрофобных групп в образование данного комплекса. Нами показано, что при добавлении дексаметазона к УФ-облученным клеткам интенсивность флуоресценции АНС снижается по сравнению с аналогичной системой без гормона на 28 % (и на 54 % - по отношению к контролю), спектр флуоресценции имеет максимум

при 498 нм. Возможно, что при УФ-облучении происходит экстернализация вероятных мест связывания для ГКС; результатом указанных процессов является стерическое экранирование мест локализации красителя на мембране и, как следствие, снижение интенсивности флуоресценции данного комплекса.

Повышение степени связывания дексаметазона в результате УФ- облуче-

0,30 0,25

0,20 0.15 0,10 0,05 0

1фл, мВ

"М

■( л

■С - *

' 6? ; %4 V/

3 4 5

Рис. 8. Максимальная интенсивность флуоресценции АНС в комплексе с натив-ными и УФ-модифицированными лимфоцитами и дексаметазоном

Обозначения:

1 - нативные лимфоциты + АНС (контроль);

2 - УФ-облученные лимфоциты + АНС;

3 - нативные лимфоциты + Дм + АНС;

4 - УФ-облученные лимфоциты + Дм АНС;

5 - АНС;

* - достоверные изменения относительно контроля при р<0,05.

ния, по-видимому, обусловлено увеличением концентрации на поверхности мембраны специфических систем, отвечающих за связывание и перенос гормона внутрь клетки, их аффинность при этом сохраняется.

На базе БСМП группе больных бронхиальной астмой (20 человек) был проведен курс УФМЛ с Дм. Нами исследованы показатели СОД-активности и интенсивности ПОЛ у этих пациентов в ходе проведения им 3 сеансов УФМЛ с дексаметазоном. Установлено, что для больных бронхиальной астмой в период обострения характерна повышенная интенсивность процессов ПОЛ в мембранах лимфоцитов. В результате проведения курса экстракорпоральной УФ- и фармакологической модификации лимфоцитов у больных бронхиальной астмой средней степени тяжести происходит нормализация исходно завышенных значений СОД-активности, интенсивность процессов ПОЛ при этом снижается, оставаясь, однако, все еще выше нормы. Показано, что экстракорпоральная фотомодификация лимфоцитов существенно расширяет спектр возможностей эфферентного воздействия на кровь при бронхиальной астме, эффективно дополняя его немедикаментозное действие за счет оптимизации способа гормонотерапии.

При проведении ЭФМЛ больным бронхиальной астмой была предпринята попытка сокращения дозы ГКС гормона. Так, на первом и втором этапах процедуры в лейковзвесь больного добавлялась полусуточная доза, а на третьем этапе - четверть суточной дозы ГКС препарата, получаемого пациентом. В данном случае существовала опасность проявления синдрома "отмены" ГКС. Однако применяемая схема лечения сопровождалась положительным клиниче-

ским эффектом и сделала осуществимым снижение дозы системных ГКС у больных бронхиальной астмой.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С помощью методов люминолзависимой хемилюминесценции, флуоресценции, иммуноферментного анализа, определения каталитической активности ряда ферментов изучено действие УФ-излучения (240-390 нм, 151 Дж/м2) и некоторых иммуномодулирующих препаратов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов крови доноров и больных бронхиальной астмой и гнойными патологиями. В качестве иммуномодуляторов в работе были использованы дибазол и циклоферон, обладающие стимулирующим действием на иммунную систему, а также иммуносупрессор - дексаметазон.

На основании собственных экспериментальных и литературных данных нами предложена схема действия УФ-света на иммуноциты (рис. 9). Выявлено, что пролонгированное повышение СОД-активности УФ-облученных лимфоцитов обусловлено синтезом фермента клетками de novo. Обнаружено повышение фагоцитарной активности нейтрофилов при их инкубации с фотомодифициро-ванными лимфоцитами. Установлено, что УФ-облучение лимфоцитов активирует процессы синтеза интерлейкинов ip и 2.

При изучении влияния УФ-света и дибазола в терапевтической дозе на лимфоцитарные клетки показано, что в результате сочетанного применения указанных факторов степень активации СОД максимальна. Совместное влияние УФ-излучения и дибазола на лимфоциты может иметь положительный клинический эффект при лечении заболеваний, сопровождающихся повышением уровня ПОЛ и нарушением регуляции системы ПОЛ-АОС.

Установлено, что при усилении интенсивности ПФОЛ после УФ-облучения лимфоцитов в присутствии циклоферона происходит адекватное повышение СОД-активности, как ответная реакция организма на накопление ин-термедиатов ПОЛ, в то время как добавление только циклоферона приводит к смещению равновесия в сторону окисленных продуктов.

При изучении влияния УФ-света и циклоферона на нейтрофилы крови доноров выявлен праймирующий эффект данных факторов на функциональную активность нейтрофилов. причем степень прайминга существенно выше при суточной, чем при часовой инкубации клеток. Предполагается, что УФ-свет является индуктором различных биохимических процессов, в том числе синтеза белков, запускающих прайминг клеток. Обнаружено повышение активности миелопе-роксидазы при суточной инкубации нейтрофилов с циклофероном, что также может быть обусловлено синтезом фермента de novo. Увеличение степени прайминга при сочетанном действии УФ-света и циклоферона можно объяснить аддитивным эффектом этих факторов.

Предложена схема событий молекулярного механизма совместного действия УФ-света и циклоферона на лейкоциты крови доноров (рис. 10).

Рис. 9. Схема процессов, протекающих при УФ-облучении лейкоцитов

крови

Обозначения:

А - время ответа - минуты; Б - время ответа - часы; I - усиление процесса; I - ослабление процесса.

зателей СОД-активности с тенденцией к уменьшению интенсивности процессов ПОЛ. Приближение изучаемых показателей к норме указывает на снижение интенсивности воспаления и, возможно, является следствием смещения цито-кинового профиля в сторону преобладания Txl-типа иммунного ответа. Помимо изучения некоторых аспектов действия иммуностимулирующих препаратов на иммуноциты, нами проведено исследование влияния УФ-света и глюкокортикостероидного гормона (дексаметазона), обладающего иммуносу-прессивным эффектом, на функциональные свойства лимфоцитов и нейтрофи-лов периферической крови доноров.

При добавлении дексаметазона к клеткам обнаружено подавление синтеза интерлейкинов 1р и 2, наиболее выраженное после инкубации кортикосте-роида с фотомодифицированными иммуноцитами.

На основании анализа флуоресцентных свойств АНС в комплексе с лимфоцитами высказано предположение, что УФ-облучение клеток способствует улучшению взаимодействия дексаметазона и дибазола с плазматической мембраной.

В результате проведения курса УФМЛ с дексаметазоном у больных бронхиальной астмой средней степени тяжести происходит нормализация исходно завышенных значений СОД-активности, интенсивность процессов ПОЛ при этом снижается, оставаясь, однако, все еще выше нормы. В то же время обнаружено, что эти больные до лечения имели повышенное содержание в лим-фоцитарных клетках провоспалительного цитокина - ИЛ-ip. Концентрация ИЛ-2 была несколько ниже нормы. К окончанию курса УФМЛ-терапии отмечалась нормализация содержания исследуемых цитокинов в иммуноцитах больных бронхиальной астмой. Отмечено, что экстракорпоральная фотомодификация лимфоцитов существенно расширяет спектр возможностей эфферентного воздействия на кровь при бронхиальной астме, эффективно дополняя его немедикаментозное действие за счет оптимизации способа гормонотерапии. В ходе лечения представляется необходимым разделение больных на группы в зависимости от степени тяжести заболевания.

Результаты наших исследований и данные литературы суммированы нами в виде схемы (рис. 11). Обнаруженные закономерности могут быть использованы для объяснения механизмов положительного клинического эффекта со-четанного применения АУФОК и ЭИФТ.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что УФ-облучение лимфоцитов и нейтрофилов доноров (240390 нм, 151 Дж/м2) индуцирует повышение интенсивности процессов ПОЛ в клетках и увеличение СОД-активности лимфоцитов.

2. Обнаружено, что в процесс повышения СОД-активности лимфоцитов при УФ-облучении основной вклад вносит синтез молекул фермента de novo.

3. Методом иммуноферментного анализа выявлено, что в УФ-модифицированных лимфоцитах активируются процессы синтеза цитокинов - ИЛ-1 р и ИЛ-2 в результате накопления АФК.

4. Выявлено, что в результате сочетанного применения УФ-облучения лимфо-

Рис. 10. Схема событий молекулярного механизма совместного действия УФ-света и циклоферона на лейкоциты крови доноров

Обозначение: Т - усиление процесса.

Рис. 11. Влияние УФ-облучения лимфоцитов и их инкубации с дексаметазоном на синтез ИЛ-1р, ИЛ-2 и функциональное состояние нейтрофилов Примечание: изменения показателей (%) указаны по отношению к соответствующему значению у интактных клеток { - усиление процесса, | - ослабление процесса.

цитов и их инкубации с дибазолом степень активации СОД максимальна.

5. Установлено, что при УФ-облучении лимфоцитов крови доноров и инкубации их с циклофероном происходит увеличение активности СОД, адекватное повышению интенсивности ПФОЛ, в то время как добавление только циклоферона приводит к смещению равновесия системы ПОЛ-АОС в сторону окисленных продуктов.

6. Методом хемилюминесценции показано, что УФ-свет и циклоферон при со-четанном воздействии на нейтрофилы вызывают прайминг, максимальная степень прайминга выявляется через сутки и сопровождается повышением активности миелопероксидазы лейкоцитарных клеток.

7. Обнаружено, что фотомодифицированные клетки более чувствительны к действию глюкокортикостероида, что выражается в более интенсивной продукции ими ИЛ-13 и ИЛ-2.

8. С помощью метода флуоресцентных зондов показано, что УФ-облучение лимфоцитов в терапевтической дозе улучшает их связывание с дибазолом и дексаметазоном за счет усиления вклада в комплексирование иммуномоду-ляторов с облученной мембраной клетки гидрофобных связей.

9. Показано, что больные бронхиальной астмой характеризуются высоким содержанием в лимфоцитах ИЛ-1(3, в то время как содержание ИЛ-2 - ниже нормы. В результате проведения курса УФМЛ с дексаметазоном у данных пациентов происходила нормализация содержания изучаемых цитокинов.

Ю.Показано, что больные бронхиальной астмой и с гнойно-септической патологией имеют высокую интенсивность процессов ПОЛ и, в зависимости от степени тяжести заболевания, повышенные (средняя степень) или пониженные (тяжелая степень) показатели СОД-активности в лимфоцитах

И.При проведении курсов УФМЛ с дибазолом (больные гнойно-септической патологией), с циклофероном и дексаметазоном (больные бронхиальной астмой) отмечены изменения показателей СОД-активности и интенсивности ПОЛ в сторону их нормализации.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Лялина (Савостина) И.Е. Влияние сочетанного действия УФ-света и дибазола на пероксидное окисление липидов и антиоксидантную систему лимфоцитов доноров / И.Е. Лялина (Савостина) // Биология - наука 21-го века: 7-ая Пущинская школа-конф. молодых ученых: тез. докл., Пущино, 14-18 апреля 2003 г. - Пущино, 2003. - С. 66.

2. Артюхов В.Г. Ультрафиолетовая и фармакологическая модификация лимфоцитов при лечении гнойно-септической патологии / В.Г. Артюхов, О.В. Башарина, И.Е. Лялина (Савостина) // Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине: тез. докл., Санкт-Петербург, 1-4 июля 2003 г. -СПб, 2003.-С. 127.

3. Артюхов В.Г. Экстракорпоральная ультрафиолетовая и фармакологическая модификация лимфоцитов при лечении больных гормонозависимой бронхиальной астмой / В.Г. Артюхов, И.Е. Лялина (Савостина), О.В Башарина // Вестник ВГУ. Серия Химия, Биология, Фармация. ~ 2003. - № 1. - С. 26-31.

4. Функциональные изменения биомембран в процессе фотомодификации фармаколимфоцитов / Л.С. Свекло, В.Г. Артюхов, О.В. Башарина, И.Е. Лялина (Савостина) и др. // Актуальные проблемы экстракорпорального очищения крови, нефрологии и гемафереза: I Объединенный конгресс: тез. докл., Москва, 29-31 мая 2002 г. - М., 2002. - С. 191-192.

5. Фармакологическая модификация лимфоцитов в терапии бронхиальной астмы / H.A. Аксенова, Г.И. Зимарин, Н.Е. Бахметьева, И.Е. Лялина (Савостина) и др. // Актуальные проблемы экстракорпорального очищения крови, нефрологии и гемафереза: I Объединенный конгресс: тез. докл., Москва, 29-31 мая 2002 г. - М., 2002. - С. 195-196.

6. Ультрафиолетовая модификация функционального состояния иммунокомпе-тентных клеток / В.Г. Артюхов, О.В. Башарина, И.Е. Лялина (Савостина), О.В. Маслов Ч III съезд биофизиков России: тез. докл., Воронеж, 24-29 июня 2004 г. - Воронеж, 2004. - С. 492-493.

7. Лялина (Савостина) И.Е. Влияние УФО и фармакологической модификации лимфоцитов на содержание интерлейкинов 1 ß и 2 у больных бронхиальной астмой / И.Е. Лялина (Савостина), H.A. Аксенова. Л.С. Свекло // III съезд биофизиков России: тез. докл., Воронеж, 24-29 июня 2004 г. - Воронеж,

2004.-С. 540-541.

8. Аксенова H.A. Корреляционная оценка антиоксидантной и гемостатической систем при экстракорпоральной фармакологической модификации лимфоцитов (ЭФМЛ) / H.A. Аксенова, И.Е. Лялина (Савостина), В.М. Провоторов // III съезд биофизиков России: тез. докл., Воронеж, 24-29 июня 2004 г. - Воронеж, 2004. - С. 487-488.

9. Влияние УФ-излучения и циклоферона на иммунные клетки / В.Г. Артюхов, О.В. Башарина, И.Е. Лялина (Савостина), О.В. Маслов // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. - 2004. - Т. 90, № 8 (Приложение). -С. 115.

10.Влияние УФ-излучения и дексаметазона на продукцию лимфоцитами некоторых цитокинов / И.Е. Лялина (Савостина), О.В. Башарина, О.В. Маслов, В.Г. Артюхов // Актуальные проблемы сохранения устойчивости живых систем: VIII Международная научно-экологическая конференция: тез. докл., Белгород, 27-29 сентября 2004. - Белгород, 2004. - С. 122-123

11. Влияние ультрафиолетового света и дексаметазона на функциональные свойства лимфоцитов и нейтрофилов / В.Г. Артюхов, О.В. Башарина, И.Е. Лялина (Савостина) // Радиационная биология. Радиоэкология. - 2005. - Т. 45, №2.-С. 196-200.

12.Лялина (Савостина) И.Е. Влияние УФ-облучения и циклоферона на функциональные свойства нейтрофилов донорской крови / И.Е. Лялина (Савостина), В.Г. Артюхов, О.В. Башарина // Электромагнитные излучения в биологии: труды 3 Международной конференции, Калуга, 5-7 октября 2005 г. -Калуга, 2005.-С. 197-201.

13.Влияние УФ-света на синтез некоторых белков лимфоцитами / В.Г. Артюхов, О.В. Башарина, И.Е. Лялина (Савостина), Т.А. Дымова // IV Съезд фотобиологов России: тез. докл., Саратов, 26-30 сентября 2005 г. - Саратов,

2005.-С. 9-11.

•25246

РНБ Русский фонд

2006^ 28185

Заказ № 863 от 23 11 05 г Тир 100 экз Лаборатория оперативной полиграфии ВГУ

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Савостина, Ирина Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Действие УФ-света на структуру и функции белков и липи

1.1. Механизмы пероксидного окисления липидов в биологических мембранах. Фотомодификации липидного компонента биомембран

1.2. Влияние УФ-излучения на белки антиоксидантной системы крови

ГЛАВА 2. Бронхиальная астма: механизмы формирования, пути коррекции патологического состояния

2.1. Формирование и развитие бронхиальной астмы

2.2. Механизм действия глюкокортикостероидных гормонов 42 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования

3.1. Объекты исследования

3.2. Методы исследования

3.2.1. Получение лейкоцитарной массы

3.2.2. Выделение лимфоцитов из крови человека

3.2.3. Получение нейтрофилов

3.2.4. Определение интенсивности люминолзависимой хемилюминес- 55 ценции иммуноцитов

3.2.5. Получение супернатанта лимфоцитов

3.2.6. Определение супероксиддисмутазной активности лимфоцитов 58 методом люминолзависимой хемилюминесценции

3.2.7. Определение активности миелопероксидазы нейтрофилов

3.2.8. Облучение клеток крови

3.2.9. Методика проведения АУФОК

3.2.10. Методика проведения экстракорпоральной ультрафиолетовой и фармакологической модификации лимфоцитов крови

3.2.11. Регистрация спектров флуоресценции зонда 1анилинонафталин-8-сульфоната (АНС)

3.2.12. Получение лимфоцитарных лизатов для определения концентрации цитокинов

3.2.13. Определение концентрации ИЛ-ip и ИЛ-2 в лизатах лимфоцитов методом иммуноферментного анализа

3.2.14. Исследование синтеза супероксиддисмутазы de novo в лимфоцитах крови человека

3.2.15. Определение жизнеспособности лимфоцитов с помощью трипанового голубого

3.2.16. Статистическая обработка результатов экспериментов 71 РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 4. Исследование воздействия УФ-света и дибазола на лимфо-цитарные клетки

4.1. Влияние УФ-света и дибазола на лимфоциты крови доноров

4.2.Исследование взаимодействия дибазола с лимфоцитами крови доноров методом флуоресцентных зондов

4.3. Динамика показателей СОД-активности и интенсивности процессов ПОЛ лимфоцитов больных с гнойными патологиями в ходе проведения УФМЛ с дибазолом

ГЛАВА 5. Сочетанное воздействие УФ-света и циклоферона на лейкоцитарные клетки

5.1. Влияние УФ-облучения и циклоферона на показатели СОД-активности и интенсивность ПОЛ лимфоцитов донорской крови

5.2. Исследование продукции интерлейкина ip и интерлейкина 2 фо-томодифицированными лимфоцитами

5.3. Действие УФ-света и циклоферона на нейтрофильные лейкоциты

5.4. Изучение опосредованного действия УФ-света и циютоферона на функциональную активность нейтрофилов крови доноров

5.5. Влияние УФМЛ с циклофероном на показатели СОД-активности и интенсивности ПОЛ лимфоцитов больных с гнойными патологиями и бронхиальной астмой

ГЛАВА 6. Исследование действия УФ-света и глюкокортикостероидных гормонов на лимфоцитарные клетки

6.1. Исследование взаимодействия дексаметазона с лимфоцитами крови доноров с помощью флуоресцентных зондов

6.2. Влияние фотомодифицированных и инкубированных с дексамета-зоном лимфоцитов на функциональную активность нейтрофилов доноров

6.3. Влияние УФ-облучения и дексаметазона на продукцию некоторых цитокинов лимфоцитами доноров

6.4. Динамика СОД-активности и интенсивности процессов ПОЛ лимфоцитов больных бронхиальной астмой в ходе проведения УФМЛ с глюкокортикостероидными гормонами

6.5. Продукция некоторых цитокинов лимфоцитами больных бронхиальной астмой на отдельных этапах проведения УФМЛ с глюкокортикостероидными гормонами 155 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 164 ВЫВОДЫ 170 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

1фл — интенсивность флюоресценции

1хл — интенсивность хемилюминесценции

АМК — активированные метаболиты кислорода

АОС — антиоксидантная система

АУФОК - аутотрансфузия УФ-облученной крови

АФК — активные формы кислорода

Б А - бронхиальная астма

ГКС — глюкокортикостероиды

ИЛ — интерлейкин

МПО — миелопероксидаза

ПМЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты

ПОЛ — пероксидное окисление липидов

ПФОЛ — пероксидное фотоокисление липидов

СОД — супероксиддисмутаза

СРО — свободнорадикальное окисление

Тх - Т клетки хелперы

УФМЛ — ультрафиолетовая фармакологическая модификация лимфоцитов

УФ-свет — ультрафиолетовый свет ХЛ - хемилюминесценция

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов"

Актуальность темы. Высокая интенсивность свободнорадикальных окислительных процессов в клетке в случае недостаточной активности компенсирующих систем приводит в масштабах организма к окислительному стрессу и, вследствие этого, к многочисленным патологиям, в том числе к различным бронхо-легочным заболеваниям (S.D. Varma et al., 1995; S. Llesuy et al., 1995). Повреждение активными кислородными метаболитами (АКМ) и окисленными липидами белков и нуклеиновых кислот может привести к нарушению иммунных функций, инициированию воспалительных процессов, развитию онкологических и нейрологических заболеваний (М.Р. Holsapple et al., 1996).

Внутриклеточный процесс детоксикации реактивных кислородных метаболитов включает энзиматические системы супероксиддисмутазы (СОД), каталазы, глутатионтрансферазы и глутатионпероксидазы, а также молекулы-ловушки свободных радикалов - витамины С, Е, каротиноиды и др. (Н.К. Зенков с соавт., 2001). К антиоксидантам первого уровня защиты клетки от токсического действия активных форм кислорода (АФК) относят СОД, дис-мутирующую супероксидные анион-радикалы до пероксида водорода и | молекулярного кислорода.

Кроме того, важную роль в регуляции окислительно-восстановительного гомеостаза крови играют полиморфноядерные лейкоциты (ПМЯЛ), способные в определенных условиях генерировать АФК. Так, при активации лимфоциты способны к развитию явления, похожего на дыхательный «взрыв» с генерацией АКМ (Н.К. Зенков с соавт., 2001). Активация иммуноцитов и интенсификация пероксидного окисления липидов (ПОЛ) — процессы взаимосвязанные: активация фагоцитоза, сопровождающаяся увеличением образования АФК, приводит к усилению ПОЛ, и, наоборот, продукты ПОЛ способны сенсибилизировать нейтрофилы (Г.И. Клебанов с соавт., 1990). Активность ферментов антиоксидантной системы (АОС) зависит как от уровня АФК, так и от содержания в крови продуктов ПОЛ (Н.Б. Поберезкина, Л.Ф. Осинская, 1989).

Одним из возможных регуляторов окислительно-восстановительного равновесия в клетках иммунной системы является УФ-свет. Рядом авторов показано, что клеточные и гуморальные компоненты крови, подвергнутые УФ-облучению в физиологических дозах, могут оказывать регулирующее действие на окислительный гомеостаз (Л.В. Шабуневич с соавт., 1986; В.Г. Артюхов с соавт., 2003) и иммунную систему организма в целом (Е.Б. Жи-бурт с соавт., 1995; К.Б. ОЬо1епзкауа е1 а1., 1991).

Несмотря на большое количество экспериментальных данных, молеку-лярно-клеточные механизмы регуляторного действия УФ-света на окислительно-восстановительный гомеостаз изучены недостаточно. Знания об общих закономерностях и механизмах действия УФ-излучения на про- и анти-оксидантное равновесие позволяют подвести научно-обоснованный теоретический фундамент практического использования УФ-света в медицине.

В настоящее время при лечении патологий, сопровождающихся значительной интоксикацией организма и иммунодефицитными состояниями, активно используется сочетанное воздействие УФ-облучения и фармакологических препаратов на иммунокомпетентные клетки (В.М. Земсков с соавт., 1993). В связи с вышесказанным представляется актуальным изучение возможности регулирования окислительно-восстановительного равновесия в клетках иммунной системы путем сочетанного воздействия на них модуляторов физической и химической природы (УФ-света, иммуностимуляторов — дибазола, циклоферона — и иммунодепрессанта дексаметазона). Изучение механизмов, лежащих в основе действия УФ-света и иммуномодуляторов на лейкоцитарные клетки, позволит в дальнейшем модифицировать их функциональные свойства для достижения прогнозируемых эффектов коррекции иммунных расстройств. Решение указанной проблемы является теоретической основой применения экстракорпоральной УФ- и фармакологической модификации лимфоцитов (УФМЛ) в терапии ряда заболеваний и, таким образом, имеет большое значение для медицины.

Цель и задачи диссертационной работы. Целью настоящей работы явилось изучение биофизических и биохимических механизмов действия УФ-света и иммуномодуляторов (дибазола, циклоферона, дексаметазона) на поддержание окислительно-восстановительного гомеостаза иммуноцитами (лимфоциты, нейтрофилы) в норме и при патологии.

В связи с этим перед нами стояли следующие задачи:

1. Изучить влияние УФ-света (240-390 нм, 151 Дж/м2) и иммуностимулятора дибазола в терапевтической концентрации на состояние про- и антиок-сидантного статуса лимфоцитов доноров.

Показано, что повышение СОД-активности лимфоцитов при их УФл облучении в терапевтической дозе 151 Дж/м обусловлено синтезом этого фермента клетками de novo. Обнаружено увеличение функциональной активности нейтрофилов при их инкубации с фотомодифицированными лимфоцитами и установлено, что данный эффект обусловлен активацией синтеза интерлейкинов 1 р (ИЛ-1Р) и ИЛ-2 УФ-облученными клетками. На основании полученных экспериментальных и литературных данных предложена схема действия УФ-света на иммуноциты.

Выявлено, что при сочетанном действии УФ-света и иммуностимуляторов (дибазола, циклоферона) на лимфоциты крови доноров происходит увеличение СОД-активности, адекватное повышению интенсивности перок-сидного фотоокисления липидов (ПФОЛ) в клетках.

Разработаны схемы событий молекулярного механизма совместного действия УФ-света и циклоферона, а также влияния дексаметазона на фото-модифицированные лейкоциты крови доноров.

Впервые изучено сочетанное действие УФ-излучения и иммуномоду-ляторов в терапевтической дозе на показатели про- и антиоксидантного статуса иммуноцитов крови доноров и больных бронхиальной астмой и гнойными патологиями. При проведении УФМЛ с дибазолом (пациенты с гнойно-септической патологией), с циклофероном и дексаметазоном (больные бронхиальной астмой) отмечены изменения в состоянии окислительно-восстановительного равновесия в сторону нормализации.

Практическая значимость. Научные положения диссертационной работы расширяют и углубляют современные представления о молекулярно-клеточных механизмах регуляторного действия УФ-света и иммуномодули-рующих веществ на отдельные звенья про- и антиоксидантной систем организма.

Фотоиндуцированные изменения в функциональном статусе нейтрофилов, уровне ПОЛ и активности СОД в лимфоцитах доноров и больных бронхиальной астмой и гнойными патологиями необходимо учитывать при обсуждении вопросов, касающихся выяснения механизмов действия УФ-света на молекулярно-клеточном уровне. Полученные экспериментальные данные позволяют выявить общие закономерности регуляторного действия УФ-света в поддержании окислительно-восстановительного равновесия в клетках организма.

Результаты экспериментов по сочетанному действию УФ-света и им-муномодуляторов на иммуноциты (нейтрофилы и лимфоциты) позволяют расширить и обосновать новые подходы к иммунокоррекции патологических состояний организма и определить возможности применения метода УФМЛ при различной тяжести воспалительного процесса с целью повышения эффективности его использования.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на III Съезде фотобиологов России (Воронеж, 2001); I Объединенном конгрессе «Актуальные проблемы экстракорпорального очищения крови, нефрологии и гемафереза» (Москва, 2002); VII Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология — наука XXI века» (Пущино, 2003); III Международном конгрессе «Сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине» (СПб., 2003); XIII Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (СПб., 2003); VIII Международной научно-экологической конференции «Актуальные проблемы сохранения устойчивости живых систем» (Белгород, 2004); III Съезде биофизиков России (Воронеж, 2004); XIX Съезде физиологов России (Екатеринбург, 2004); П1 Международной конференции «Электромагнитные излучения в биологии» (Калуга, 2005); IV съезде фотобиологов России (Саратов, 2005); Научной сессии сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж, 2003; 2005). По материалам диссертации получено 3 удостоверения на рационализаторское предложение.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 статьи и 11 тезисов.

На защиту выносятся следующие положения:

1. УФ-облучение лимфоцитов доноров в терапевтической дозе (240-390 нм, 151 Дж/м ) стимулирует синтез некоторых белков, в частности, провос-палительных цитокинов — интерлейкина 1(3 и интерлейкина 2-й суперок-сиддисмутазы.

2. Сочетанное действие УФ-света и иммуностимуляторов (дибазола и циклоферона) в терапевтических дозах на лимфоциты доноров направлено на поддержание окислительно-восстановительного равновесия в клетках крови. л

3. УФ-облучение лимфоцитов (151 Дж/м ) индуцирует повышение чувствительности фотомодифицированных клеток к некоторым лекарственным препаратам (дибазол и дексаметазон) за счет усиления вклада в комплекси-рование иммуномодуляторов с облученной мембраной клетки гидрофобных связей.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Савостина, Ирина Евгеньевна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что УФ-облученне лимфоцитов и нейтрофилов доноров (240-390 нм, 151 Дж/м2) индуцирует повышение интенсивности процессов ПОЛ в клетках и увеличение СОД-активности лимфоцитов.

3. Методом иммуноферментного анализа выявлено, что в УФ-модифицированных лимфоцитах активируются процессы синтеза цитоки-нов - ИЛ-1(3 и ИЛ-2 в результате накопления АФК.

4. Выявлено, что в результате сочетанного применения УФ-облучения лимфоцитов и их инкубации с дибазолом степень активации СОД максимальна.

5. Установлено, что при УФ-облучении лимфоцитов крови доноров и инкубации их с цикпофероном происходит увеличение активности СОД, адекватное повышению интенсивности ПФОЛ, в то время как добавление только циклоферона приводит к смещению равновесия системы ПОЛ-АОС в сторону окисленных продуктов.

6. Методом хемилюминесценции показано, что УФ-свет и циклоферон при сочетанном воздействии на нейтрофилы вызывают прайминг, максимальная степень прайминга выявляется через сутки и сопровождается повышением активности миелопероксидазы лейкоцитарных клеток.

7. Обнаружено, что фотомодифицированные клетки более чувствительны к действию глюкокортикостероида, что выражается в более интенсивной продукции ими ИЛ-ip и ИЛ-2.

8. С помощью метода флуоресцентных зондов показано, что УФ-облучение лимфоцитов в терапевтической дозе улучшает их связывание с дибазолом и дексаметазоном за счет усиления вклада в комплексирование иммуно-модуляторов с облученной мембраной клетки гидрофобных связей.

9. Показано, что больные бронхиальной астмой характеризуются высоким содержанием в лимфоцитах ИЛ-1(3, в то время как содержание ИЛ-2 — ниже нормы. В результате проведения курса УФМЛ с дексаметазоном у данных пациентов происходила нормализация содержания изучаемых ци-токинов.

11.При проведении курсов УФМЛ с дибазолом (больные гнойно-септической патологией), с циклофероном и дексаметазоном (больные бронхиальной астмой) отмечены изменения показателей СОД-активности и интенсивности ПОЛ в сторону их нормализации.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании собственных экспериментальных и литературных данных нами предложена схема действия УФ-света на иммуноциты (рис. 46). Выявлено, что пролонгированное повышение СОД-активности УФ-облученных лимфоцитов обусловлено синтезом фермента клетками de novo. Обнаружено повышение фагоцитарной активности нейтрофилов при их инкубации с фотомодифицированными лимфоцитами. Установлено, что УФ-облучение лимфоцитов активирует процессы синтеза интерлейкинов 1Р и 2.

Установлено, что при усилении интенсивности ПФОЛ после УФ-облучения лимфоцитов в присутствии циклоферона происходит адекватное повышение СОД-активности, как ответная реакция организма на накопление интермедиатов ПОЛ, в то время как добавление только циклоферона приводит к смещению равновесия в сторону окисленных продуктов. При изучении влияния УФ-света и циклоферона на нейтрофилы крови доноров выявлен праймирующий эффект данных факторов на функциональную

Рис. 46. Схема процессов, протекающих при УФ-облучении лейкоцитов крови

Обозначения:

А - время ответа — минуты; Б - время ответа - часы; ^ — усиление процесса; ^ - ослабление процесса. активность нейтрофилов, причем степень прайминга существенно выше при суточной, чем при часовой инкубации клеток. Предполагается, что УФ-свет является индуктором различных биохимических процессов, в том числе синтеза белков, запускающих прайминг клеток. Обнаружено повышение активности миелопероксидазы при суточной инкубации нейтрофилов с циклофе-роном, что также может быть обусловлено синтезом фермента de novo. Увеличение степени прайминга при сочетанном действии УФ-света и циклофе-рона можно объяснить аддитивным эффектом этих факторов.

Предложена схема событий молекулярного механизма совместного действия УФ-света и циклоферона на лейкоциты крови доноров (рис. 47).

При проведении курса УФМЛ с циклофероном больным бронхиальной астмой было установлено, что все пациенты имели исходно высокие значения интенсивности ПОЛ, у большинства из них показатели СОД-активности были выше нормы. По окончании данной терапии была отмечена нормализация показателей СОД-активности с тенденцией к уменьшению интенсивности процессов ПОЛ. Приближение изучаемых показателей к норме указывает на снижение интенсивности воспаления и, возможно, является следствием смещения цитокинового профиля в сторону преобладания Txl-типа иммунного ответа.

Помимо изучения некоторых аспектов действия иммуностимулирующих препаратов на иммуноциты, нами проведено исследование влияния УФ-света и глюкокортикостероидного гормона (дексаметазона), обладающего иммуносупрессивным эффектом, на функциональные свойства лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови доноров.

При добавлении дексаметазона к клеткам обнаружено подавление синтеза интерлейкинов 1(3 и 2, наиболее выраженное после инкубации кортикостероида с фотомодифицированными иммуноцитами.

Рис. 47. Схема событий молекулярного механизма совместного действия УФ-света и циклоферона на лейкоциты крови доноров

Обозначение: - усиление процесса. с кой мембраной.

В результате проведения курса УФМЛ с дексаметазоном у больных бронхиальной астмой средней степени тяжести происходит нормализация исходно завышенных значений СОД-активности, интенсивность процессов * ПОЛ при этом снижается, оставаясь, однако, все еще выше нормы. В то же время обнаружено, что эти больные до лечения имели повышенное содержание в лимфоцитарных клетках провоспалительного цитокина - ИЛ-1р. Концентрация ИЛ-2 была несколько ниже нормы. К окончанию курса УФМЛ-терапии отмечалась нормализация содержания исследуемых цитокинов в иммуноцитах больных бронхиальной астмой. Отмечено, что экстракорпоральная фотомодификация лимфоцитов существенно расширяет спектр возможностей эфферентного воздействия на кровь при бронхиальной астме, эф-I фективно дополняя его немедикаментозное действие за счет оптимизации способа гормонотерапии. В ходе лечения представляется необходимым разделение больных на группы в зависимости от степени тяжести заболевания.

Результаты наших исследований и данные литературы суммированы нами в виде схемы (рис. 48). Обнаруженные закономерности могут быть использованы для объяснения механизмов положительного клинического эффекта сочетанного применения АУФОК и ЭИФТ.

Рис. 48. Влияние УФ-облучения лимфоцитов и их инкубации с дексаметазоном на синтез ИЛ-1р, ИЛ-2 и функциональное состояние нейтрофилов Примечание: изменения показателей (%) указаны по отношению к соответствующему значению у интактных клеток ^ - усиление процесса, ^ — ослабление процесса.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Савостина, Ирина Евгеньевна, Воронеж

1. Абдусаламов А.Б. Эффективность медицинской реабилитации больных бронхиальной астмой с учетом показателей липопероксидации и иммунитета / А.Б. Абдусаламов, A.M. Шафер // Пульмонология. 1995. — № 3. -С. 54-57.

2. Абрамова Ж.И. Человек и противоокислительные вещества / Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер. Л. : Наука. Ленингр. отд-ние, 1985. - 230 с.

3. Адо А.Д. Клинико-физиологические основы классификации бронхиальной астмы / А.Д. Адо, П.К. Булатов // Материалы V межобластной научной конференции терапевтов «Этиология, патогенез, клиника и лечение заболеваний органов дыхания». — Л., 1969. — С. 258-265.

4. Активирующее действие длинноволнового УФ-излучения на ферментативное превращение 5-окситриптофана в серотонин / Г.Я. Фрайкин и др. // Биофизика. 1989. - Т. 34, вып. 6. - С. 933-937.

5. Алматуни В.Г. Роль перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антирадикальной защиты в патогенезе бронхиальной астмы / В.Г. Алматуни, К.В. Карагезян, М.Д. Сафарян // Терапев. архив. 1980. - № 3. - С. 96-100.

6. Анализ действия излучения He-Ne лазера на структурные свойства церу-лоплазмина человека / C.B. Рязанцев и др. // Вестн. Воронеж, гос. ун-та. Сер. Химия. Биология. Фармация. — 2003. — № 2. — С. 172-174.

7. Аносов А.К. Роль фотоокисления липидов плазмы в ослаблении агрегации тромбоцитов при УФ-облучении / А.К. Аносов, Д.И. Рощупкин // Доклады АН СССР. 1983. - Т. 272. - С. 493-495.

8. Артюхов В.Г. Активация молекул супероксиддисмутазы под влиянием ультрафиолетового облучения / В.Г. Артюхов, О.В. Башарина, Ф.А. Филиппов // Биофизика. 1992. — Т. 37, вып. 1. - С. 13-16.

9. Артюхов В.Г. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 2000. - 296 с.

10. Артюхов В.Г. Биофизика : учеб. пособие. / В.Г. Артюхов, Т.А. Ковалева,

11. В.П. Шмелев. Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 1994. — 336 с.

12. П.Артюхов В.Г. Гемопротеиды: закономерности фотохимических превращений в условиях различного микроокружения / В.Г. Артюхов. — Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 1995. 280 с.

13. Арцишевская P.A. Десорбция гликопротеинов с поверхности лимфоцитов периферической крови человека после облучения коротковолновыми УФ-лучами / P.A. Арцишевская, А.П. Миронова, К.А. Самойлова // Цитология. — 1984. — №2.-С.209-214.

14. М.Бакуев М.М. Особенности секреции миелопероксидазы и хемшпоминес-центного ответа нейтрофилов человека при контакте со стимуляторами различной природы / М.М. Бакуев, М.З. Саидов, A.A. Бутаков // Иммунология. 1991.-№ 1.-С. 15-17.

15. Барабой В.А. Перекисное окисление и радиация / В.А. Барабой, В.Э. Орел, И.М. Карнаух. Киев : Наук, думка, 1991. - 256 с.

16. Башарина О.В. Анализ фото- и термоиндуцированных структурно-функциональных изменений супероксиддисмутазы и каталазы : Дисс. . канд. биол. наук / О.В. Башарина. Воронеж, 1995. - 140 с.

17. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте / Е.Б. Бурлакова и др.. М. : Наука, 1975. — 214 с.

18. Биохимия человека : в 2-х томах. / Р. Марри и др.. М. : Мир, 1993. - Т. 1.-384 с.

19. Бойчук C.B. Механизмы дексаметазон-индуцированного апоптоза лимфоцитов при атопической бронхиальной астме / C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин, P.C. Фассахов // Пульмонология. 2003. - № 3. - С. 10-16.

20. Бондарев И.М. Интенсивность хемилюминесценции сыворотки крови крыс при туберкулезном и опухолевом поражении легких / И.М. Бондарев, А.И. Журавлев, A.M. Шполянская // Проблемы туберкулеза. — 1971. — №9.-С. 1-4.

21. Бронхиальная астма / под ред. А.Г. Чучалина : В 2 томах. Т. 1. — М. : Агар, 1997.-432 с.

22. Бронхиальная астма / под ред. А.Г. Чучалина : В 2 томах. Т. 2. — М. : Агар, 1997.-400 с.

23. Василенко А.М. Цитокины в сочетанной регуляции боли и иммунитета / A.M. Василенко, JI.A. Захарова // Успехи современной биологии. 2000. -Т. 120, №2.-С. 174-189.

24. Введение в биомембранологию / под ред. A.A. Болдырева. М. : Изд-во МГУ, 1990.-280 с.

25. Владимиров Ю.А. Биохемилюминесценция / Ю.А. Владимиров. — М. : Наука, 2000. С. 294-302.

26. Владимиров Ю.А. Действие УФ-излучения на мембранные структуры клеток / Ю.А. Владимиров, Д.И. Рощупкин // Биологическое действие ультрафиолетового излучения. — М. : Наука, 1975. С. 31-39.

27. Владимиров Ю.А. О механизме действия ультрафиолетовой радиации на белки / Ю.А. Владимиров, Д.И. Рощупкин, Е.Е. Фесенко // Биофизика. — 1970. Т. 15, вып. 2. - С. 254-264.

28. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. — М. : Наука, 1972. — 252 с.

29. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физическиесвойства липидного слоя биологических мембран / Ю.А. Владимиров // Биофизика. 1987. - Т. 32, вып. 5. - С. 830-844.

30. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в первичных фотобиологических процессах / Ю.А. Владимиров // Биологические мембраны. 1998. — Т. 15, №5.-С. 517-529.

31. Владимиров Ю.А. Физико-химические основы фотобиологических процессов / Ю.А. Владимиров, А.Я. Потапенко. — М. : Высш. шк., 1989. -199 с.

32. Владимиров Ю.А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран / Ю.А. Владимиров, Г.Е. Добрецов. — М.: Высшая школа, 1980. -320 с.

33. Владимиров Ю.А. Хемилюминесценция животных клеток / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев. М. : ВИНИТИ, 1989. - 176 с. - (Итоги науки и техники. Биофизика ; т. 24)

34. Влияние некоторых антиоксидантов сыворотки крови на люминол-зависимую хемилюминесценцию при реакции Фентона / A.B. Широколава и др. // Биофизика. 1994. - Т. 38, вып. 4. - С. 749-750.

35. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на продукцию оксида азота и цитокинов лейкоцитами / Г.И. Клебанов и др. // Биологические мембраны. 2002. - Т. 19, № 5. - С. 391-402.

36. Влияние ультрафиолетового облучения крови на продукты свободно-радикального окисления и систему антиоксидантов организма / К.С. Терновой и др. // Доклады АН УССР. 1985. - № 7. - С. 79-82.

37. Влияние УФ-облучения на уровень пероксидного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы крови доноров / В.Г. Артюхов и др. // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. — 2003. — Т. 2, №4.-С. 323-325.

38. Влияние УФ-облучения на функциональную активность нейтрофилов крови доноров / Артюхов В.Г. и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. — № 3. — С. 291-293.

39. Волотовский И.Д. Влияние состояния липидной фазы мембраны на эффективность фотохимической модификации эритроцитарной ацетилхоли-нэстеразы / И.Д. Волотовский, JI.M. Шейко, C.B. Конев // Молекулярная биология. 1978.-Т.12.-С. 533-538.

40. Галактионов В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. М. : Изд-во МГУ, 1998.-480 с.

41. Гогвадзе В.Г. Участие фосфолипазы А2 в индуцируемом продуктами пе-рекисного окисления липидов разобщении митохондрий печени крыс / В.Г. Гогвадзе, H.H. Брустовецкий, A.A. Жукова // Биохимия. — 1990. — Т. 55, № 12.-С. 2195-2199.

42. Горюнов A.B. Перекисное окисление липидов в тромбоцитах, индуцированное УФ-излучением / A.B. Горюнов, Д.И. Рощупкин // Биологические мембраны. 1989. - Т. 6, № 5. - С. 551-554.

43. Гудзь Т.И. Ингибирование активности супероксиддисмутазы гидроперекисью линоленовой кислоты / Т.И. Гудзь, Е.Г. Пешкова, E.H. Гончаренко // Радиобиология. 1982. - Т. 22, № 5. - С. 674-677.

44. Даниляк И.Г. Генерация активных форм кислорода лейкоцитами крови, перекисное окисление липидов и антиперекисная защита у больных бронхиальной астмой / И.Г. Даниляк, А.Х. Коган, С.Г. Болевич // Терапев. архив. 1992. - № 3. - С. 54-57.

45. Действие низкоинтенсивного лазерного (632,8 нм) и ультрафиолетового излучений на спектральные свойства и функциональную активность церу-лоплазмина человека / В.Г. Артюхов и др. // Радиационная биология. Радиоэкология. 2002. - Т. 42, № 2. - С. 173-180.

46. Денисов Ю.П. Характеристика систем связывания стероидных гормонов в плазматических мембранах гепатоцитов / Ю.П. Денисов, П.В. Сергеев, Н.П. Саксонов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1980.-Т. 2.-С. 172-174.

47. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов / Г.Е. Добрецов. — М. : Наука, 1989. — 277 с.

48. Дранник Г.Н. Иммунотропные препараты / Г.Н. Дранник, Ю.А. Гриневич, Г.М. Дизик. Киев : Здоровье, 1994. - 288 с.

49. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология / Г.Н. Дранник. -М.: ООО «МИА», 2003. 604 с.

50. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода как сигнальных молекул в метаболизме тканей при окислительном стрессе / Е.Е. Дубинина // Вопросы мед. химии. 2001. - Т. 47, № 6. - С. 561-581.

51. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии / Ф.И. Ершов. М.: Медицина, 1996. - 240 с.

52. Жданов Г.Г. Проблемы гипоксии у реанимационных больных в свете свободно-радикальной теории / Г.Г. Жданов, М.Л. Нодель // Вестн. интенсивной терапии. -1995.- №3. С. 7-11.

53. Журавлев А.И. Развитие идей Б.Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии / А.И. Журавлев // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. — М.: Наука, 1982. С. 3-37.

54. Изменение физического состояния мембран в процессе стимуляции полиморфноядерных лейкоцитов крови / Г.И. Клебанов и др. // Биологические мембраны. 1990. - Т. 7, № 3. - С. 281-287.

55. Изучение клинической эффективности внутривенного лазерного облучения крови, плазмафереза и их сочетания у больных бронхиальной астмой / Ишина Т.И. и др. // Терапев. архив. 2001. - Т. 73, № 3. - С. 15-19.

56. Илларионов В. Лазерная терапия / В. Илларионов // Врач. — 1993. — № 8. — С. 11-18.

57. Ильина Н.И. Эпидемия аллергии, астмы в чем причина? / Н.И. Ильина, P.M. Хаитов // Астма. - 2001. - Т.2, № 1. - С. 35-38.

58. Иммунологические методы / под ред. Г. Фримеля. М. : Медицина. -1987.-412 с.

59. Искусных А.Ю. Исследование механизмов окислительно-восстановительного гомеостаза на примере системы «активированные нейтрофилы пероксидное окисление липидов — антиоксиданты» : Авто-реф. дис. . канд. биол. наук/ А.Ю. Искусных. -2004. -23 с.

60. Исследование влияния фотосенсибилизаторов на Fe индуцированное окисление суспензии фосфолипидных липосом / Г.И. Клебанов и др. // Биол. мембраны. - 2002. - Т. 19, № 2. - С. 160-169.

61. К вопросу о существовании специфических рецепторов к глюкокортикоидам на плазматических мембранах печени крыс / С. Кислинг и др. // Биохимия. 1979. - Т. 44, вып. 11. - С. 2021-2025.

62. Каган В.Е. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов / В.Е. Каган, О.Н. Орлов, Л.Л. Прилипко. М. : ВИНИТИ, 1986. - С. 1-135. - (Итоги науки и техники. Биофизика; т. 18).

63. Карандашов В.И. Ультрафиолетовое облучение крови / В.И. Карандашов, Е.Б. Петухов. М.: Медицина, 1997. - 224 с.71 .Кетлинский С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский, A.C. Симбирцев, A.A. Воробьев. Спб.: Гиппократ, 1992. - 255 с.

64. Клебанов Г.И. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения красного диапазона на активность супероксиддисмутазы макрофагов/ Г.И. Клебанов, Е.А. Полтаков, Ю.А. Владимиров // Биофизика. 2003. - Т. 48, № 3. -С. 462-473.

65. Клебанов Г.И. Влияние низкоинтенсивного лазерного облучения на пе-роксидацию мембранных липидов в цитозоле фагоцитов / Г.И. Клебанов, Т.В. Чичук, Ю.А. Владимиров // Биол. мембраны. — 2001. Т. 18, № 1. - С. 42-50.

66. Коваленко A.JI. Акридонуксусная кислота: фармакологические свойства и результаты клинического применения / A.JI. Коваленко, М.Г. Романцов, Ф.И. Ершов // Журнал микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000. - № 5-С. 103-108.

67. Коваленко A.JI. Терапевтический эффект циклоферона / A.JI. Коваленко, JI.E Алексеева // Циклоферон от эксперимента в клинику. - СПб, 2002. -С. 17-19.

68. Конев C.B. Действие УФ-света на белки в растворе и в составе биологических мембран / C.B. Конев, И.Д. Волотовский // Фотобиология животной клетки. М. : Наука, 1979. - С. 5-16.

69. Конев C.B. Фотобиология / C.B. Конев, И.Д. Волотовский. Минск : Изд-во БГУ, 1974. - С. 223-245.

70. Корольков С.Н. Влияние ультрафиолетового света на №+,К+-АТФазу фоторецепторов in vitro / С.Н. Корольков, М.П. Рычкова, В.В. Фураев // Сенсор. системы. 1999. - Т. 13, № 1. - С. 53-55.

71. Коррекция циклофероном иммунодефицитного состояния / Н.А. Дидков-ский и др. // Циклоферон — от эксперимента в клинику. СПб, 2002. - С. 20-38.

72. Кудрявицкий А.И. Оценка киллерной бактерицидности нейтрофилов периферической крови здоровых доноров и больных в прямом визуальном методе / А.И. Кудрявицкий // Лабораторное дело. — 1985. — № 1. — С. 4547.

73. Кузин A.M. Структурно-метаболическая теория в радиобиологии / A.M. Кузин. М.: Наука, 1986. - 282 с.

74. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. — М.: Высшая школа, 1990. — 351 с.

75. Левицкий Д.О. Биохимия мембран. Кальций и биологические мембраны / Д.О. Левицкий. — М.: Высш. школа, 1990. — 115 с.

76. Лесков В.П. Экстракорпоральная иммунофармакотерапия / В.П. Лесков, И.С. Гущин // Пульмонология. 1993. - №3. - С. 10-15.

77. Лимфоциты: Методы / под ред. Дж. Клауса. М.: Мир, 1990. - 395 с.

78. Лусс Л.В. Новые индустриальные технологии и астма / Л.В. Лусс, A.B. Богова, Н.И. Ильина // Астма. 2001. - Т. 2, № 1. - С. 44-46.

79. Малашкин А.Б. Циклоферон — средство повышения неспецифической реактивности при респираторных заболеваниях у детей / А.Б. Малашкин, М.Г. Романцов, К.А. Малышкин // Лечащий врач. 2000. - № 9. - С. 4849.

80. Манько В.М. Иммуномодуляция: история, тенденции развития, современное состояние и перспективы / В.М. Манько, Р.В. Петров, P.M. Хаитов // Иммунология. 2002. - № 3. - С. 132-138.

81. Медуницин Н.В. Цитокины и аллергия / Н.В. Медуницин // Иммунология. -1999.-№5.-С. 5-9.

82. Методы спиновых меток и зондов: проблемы и перспективы / под ред. Н.М. Эмануэля, Р.И. Жданова. — М. : Наука, 1986. 272 с.

83. Механизм фотолиза SH-групп в клеточных мембранах при УФ-облучении / М.Ю. Писцов и др. // Фотобиология животной клетки. JI. : Наука, 1979.-С. 55-58.

84. Миронова Г.Д. Участие пероксидазы и опосредованного цитохромоксида-зой действия кислорода в процессах образования АТФ / Г.Д. Миронова, Г.В. Сирота // Биофизика сложных систем и радиационных нарушений. — М. : Наука, 1977. С. 228-236.

85. Мурина М.А. Ослабление агрегации эритроцитов и перекисное окисление их мембранных липидов при УФ-облучении / М.А. Мурина, Д.И. Рощуп-кин // Биофизика. 1983. - Т. 28, вып. 4. - С. 716-721.

86. Наградова Н.К. Взаимодействие «гидрофобной пробы» — 1-анилин-8-нафталинсульфоната с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой/ Н.К. На-градова, P.A. Асриянц // Доклады АН СССР. 1971. - Т. 199, №2. -С. 474-477.

87. Нежинская Г.И. Фармакологическая активность иммунокорректоров при адъювантном артрите / Г.И. Нежинская, Н.С. Сапронов // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 2001. — № 3. — С. 11-13.

88. Огурцов С.И. Роль мембранотропного этапа во взаимодействии корти-зола с гепатоцитами / С.И. Огурцов, A.C. Духанин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. - Т. 133, № 6. - С. 659-661.

89. Олигомерные белки: структурно-функциональные модификации и роль субъединичных контактов / В.Г. Артюхов и др.. Воронеж : Изд-во Воронеж. ун-та., 1997. - 264 с.

90. Пеленицын А.Б. О механизме фотогемолиза эритроцитов / А.Б. Пеленицын, Д.И. Рощупкин, Ю.А. Владимиров // Физико-химические основы функционирования надмолекулярных структур клеток / под ред. В.Е. Кагана. М.: Изд-во МГУ, 1974. - Ч. 2. - С. 59-61.

91. Поберезкина Н.Б. Биологическая роль супероксиддисмутазы / Н.Б. Поберезкина, Л.Ф. Осинская // Украинский биохимический журнал. — 1989.-Т. 61,№2.-С. 14-23.

92. Попов Ю.В. Аппаратура для УФ-облучения / Ю.В. Попов, Д.Н. Лазарев // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных : сб. науч. тр. / под ред. И.Е. Ганелиной, К.А. Самойловой. Л.: Наука, 1986. - С. 11-18.

93. Применение неионных поверхностно-активных веществ и полиэтиле-ноксида-400 в качестве растворителей синтомицина, дибазола и фураци-лина / Б.И. Дашевская и др. // Фармация. 1970. — Т. 19, № 6. — С. 26-28.

94. Применение тромбоцитафереза в лечении бронхиальной астмы / А.Р. Татарский и др. // Терапевтический архив. 1991. - № 3. - С. 90-93.

95. Проявление антиоксидантного эффекта гидрокортизона в головном мозге крыс / Н.Д. Ещенко и др. // 2 Съезд Биохим. о-ва РАН.: тез. докл., Москва, 19-23 мая 1997 г.-М., 1997.-С. 189-190.

96. Пыцкий В.И. Аллергические заболевания / В.И. Пыцкий, Н.В. Адриа-нова, A.B. Артомасова. — М.: Медицина, 1984. — 272 с.

97. Пыцкий В.И. Бронхиальная астма: определение, классификация, патогенез / В.И. Пыцкий // Российский медицинский журнал. — 2001. — № 1. -С. 34-41.

98. Робинсон М.В. Морфология и метаболизм лимфоцитов / М.В. Робинсон, Л.Б. Топоркова, В.А. Труфакин. — Новосибирск : Наука. Сибирское отделение, 1986. 125 с.

99. Розен В.Б. Рецепторы и стероидные гормоны / В.Б. Розен, А.Н. Смирнов. М.: Изд-во МГУ, 1981.-308 с.

100. Роит А. Иммунология /А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл ; перевод с англ. В.И. Кандрора, А.Н. Маца, Л.А. Певницкого, М.А. Серовой. М. : Мир, 2000.-581 с.

101. Роль структуры мембран в активации митохондриальных фосфолипаз. 1. Активация митохондриальных фосфолипаз продуктами перекисного окисления липидов / Ю.Т. Тимушева и др. // Биологические мембраны. — 1998.-Т. 15, № 1.-С. 36-42.

102. Рошупкин Д.И. Молекулярные механизмы фотоповреждения биологических мембран / Д.И. Рощупкин // Фотобиология животной клетки. — JI.: Наука, 1979.-С. 23-34.

103. Рощупкин Д.И. Основы фотобиофизики / Д.И. Рощупкин, В.Г. Артю-хов. Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 1997. - 116 с.

104. Рощупкин Д.И. Свободнорадикальное и циклооксигеназное окисление липидов в мембранах клеток крови при УФ-облучении / Д.И. Рощупкин, М.А. Мурина // Биологические мембраны. — 1998. Т. 15. - № 2. — С. 221226.

105. Рощупкин Д.И. Фотобиологические процессы в биомембранах при действии ультрафиолетового излучения на клетки, ткани и органы животных / Д.И. Рощупкин, М.А. Мурина // Биофизика. 1993. - Т.38., вып. 6. — С. 1053-1068.

106. Рубин А.Б. Первичные молекулярные механизмы фотобиологических процессов и деструктивное действие оптического излучения / А.Б. Рубин, ГЛ. Фрайкин // Успехи современной биологии. 1987. — Т. 103, вып. 3. — С. 323-339.

107. Руководство по иммунофармакологии / под ред. М.М. Дейла, Дж.К. Формена ; перевод с англ. О.Г. Яновского ; под ред. Б.С. Утешева. М. : Медицина, 1998.-332 с.

108. Рууге Э.К. Митохондрии и клетка: свободные радикалы и повреждение при гипоксии/реоксигенации, действие антиоксидантов / Э.К. Рууге // 2-й Съезд биофизиков России, Москва, 23-27 авг., 1999 г. М., 1999. — С. 712713.

109. Савенко И.В. Использование средств иммунокоррекции в комплексном лечении папилломатоза гортани у детей / И.В. Савенко, Э.А. Цветков // Вестник оториноларингологии. 1996. — № 4. — С. 12-14.

110. Сапежинский И.И. О фотоокислении белков / И.И. Сапежинский // Фотобиология животной клетки. — М.: Наука, 1979. — С. 17-23.

111. Сапежинский И.И. Сенсибилизированное фотоокисление белков и других веществ. Возможное значение этих процессов в фотобиологии / И.И. Сапежинский // Молекулярные механизмы биологического действия оптического излучения. М.: Наука, 1988. - С. 92-101.

112. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров и др.. — М. : ВИНИТИ, 1991. — С. 1-249. — (Итоги науки и техники. Биофизика ; т. 29).

113. Семесько С.Г. Суммарная антиокислительная активность слезной жидкости / С.Г. Семесько, P.P. Фархутдинов // Клиническая лабораторная диагностика. 2002. - № 5. - С. 24-34.

114. Сепиашвили Р.И. Эволюция терапии бронхиальной астмы / Р.И. Се-пиашвили, Д.Ш. Мачарадзе // Астма. 2001. - Т. 2, № 1. - С. 66-69.

115. Сергеев П.В Роль мембранотропных эффектов глюкокортикоидов в реализации их фармакологической активности / П.В. Сергеев, A.B. Духанин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2002. — Т. 134, №9.-С. 244-253.

116. Сергеев П.В. Плазматическая мембрана клетки-мишени и стероидные гормоны: начало спора или его завершение? / П.В. Сергеев, A.C. Духанин, H.JI. Шимановский // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1995. - Т. 10. - С. 342-345.

117. Сергеев П.В. Рецепторы физиологически активных веществ / П.В. Сергеев, Н.П. Шимановский. М. : Медицина, 1987. - С. 323-340.

118. Сергеев П.В. Роль мембранотропных эффектов глюкокортикоидов в реализации их фармакологической активности / П.В. Сергеев, A.C. Духанин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2002. — Т. 134, №9.-С. 244-253.

119. Сергеев П.В. Стероидные гормоны / П.В. Сергеев. М. : Наука, 1984. -240 с.

120. Современная медицинская энциклопедия / под ред. Г.Б. Федосеева. — СПб. : Норинт, 2003. 1236 с.

121. Соколова С.А. Некоторые стороны противовоспалительной активности дибазола / С.А. Соколова, Г.Л. Медник // Фармакология и токсикология. — 1973.-№4.-С. 467-470.

122. Способ лечения глюкокортикостероидзависимых атопических заболеваний : а. с. №1311738 СССР : А 61 К 45/05 / И.С. Гущин и др. (СССР). 1988.

123. Теория и практика иммуноферментного анализа / под ред. A.M. Егорова. М. : Высшая школа, 1991. - 288 с.

124. Тинтерис Л.В. Аллостерическая регуляция активности церулоплазми-на / Л.В. Тинтерис, А.М. Шапошников // Биохимия. 1978. - Т. 48, вып. 6. -С. 979-987.

125. Тотолян A.A. Клетки иммунной системы (I-II) / A.A. Тотолян, И.С. Фрейдлин. СПб. : Наука, 1999. - 231 с.

126. Турпаев К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов / К.Т. Турпаев // Биохимия. 2002. — Т. 67, вып. 3. - С. 339-352.

127. Тутельян A.B. Прайминг фагоцитов и его применение в системе оценки специфической активности иммунорегуляторных соединений / A.B. Тутельян, Г.И. Клебанов // Иммунология. — 2004. — № 1. — С. 14-16.

128. Ультрафиолетовая фотомодификация функционального состояния лейкоцитов / Е.Б. Жибурт и др. // Эфферентная терапия. — 1995. Т. 1, № 3. -С. 56-58.

129. Ультрафиолетовое облучение крови в хирургии / И.Н. Пиксин и др. // Хирургия.-1990.-№ 11.-С. 100-103.

130. Федосеев Г.Б. Бронхиальная астма / Г.Б. Федосеев, Г.П. Хлопотова. — JI.: Медицина, 1988. 272 с.

131. Фотопревращение мембраннных липидов и его роль в изменениии функций биомембран под действием УФ-излучения / Д.И. Рощупкин и др. // Молекулярные механизмы биологического действия оптического излучения. М.: Наука, 1988. - С. 79-92.

132. Функциональное состояние нейтрофилов в острой фазе тяжелой бронхиальной астмы / JI.B. Ковальчук и др. // Астма. 2001. - Т. 2, № 1. — С. 128.

133. Хаитов P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидоро-вич. М.: Медицина, 2000. - С. 339-346.

134. Холмогоров В.Е. Действие оптического излучения на кровь. Фотомодификации свойств крови / В.Е. Холмогоров // 2-й Съезд биофизиков России. Москва, 23-27 авг. 1999 г. - М., 1999. - С. 730.

135. Холмогоров В.Е. Первичные фотопроцессы в крови и ее компонентах при действии оптического излучения / В.Е. Холмогоров, В.А. Крыленков, М.А. Османов // Молекулярные механизмы биологического действия оптического излучения. М.: Наука, 1988. - С. 164-177.

136. Чучалин А.Г. Бронхиальная астма / А.Г. Чучалин. — М. : Медицина, 1985.-160 с.

137. Чучалин А.Г. Бронхиальная астма: глобальная стратегия / А.Г. Чучалин // Терапевтический архив. — 1994. — № 3. С. 3-8.

138. Шафран М.Т. Миелопероксидаза нейтрофильных лейкоцитов / М.Т. Шафран // Успехи современной биологии. 1981. - Т. 92, № 2. - С. 5-11.

139. Штонда М.В. Роль процессов перекисного окисления липидов в патогенезе хронической сердечной недостаточности / М.В. Штонда // Медицинские новости. 2001. - № 3. - С. 66-68.

140. Экстракорпоральная иммунофармакотерапия с преднизолоном и цианкобаламином атопической глюкокортикостероидозависимой бронхиальной астмы / О.М. Курбачева и др. // Пульмонология. — 1992. — № 2. С. 52-57.

141. Электронно-микроскопическая характеристика тромбоцитов крови больных бронхиальной астмой при тромбоцитаферезе / A.JI. Черняев и др. // Пульмонология. 1993. — № 3. — С. 38-47.

142. Эффективность экстракорпорального ультрафиолетового облучения аутокрови в лечении хронических неспецифических заболеваний легких / Палеев Н.Р. и др. // Вестник РАМН. 1993. - №. 3. - С. 3-6.

143. Юлдашева И.А. Изменение иммунного статуса и перекисного окисления липидов у больных бронхиальной астмой / И.А. Юлдашева // Иммунология. 2002. - № 2. - С. 107-109.

144. Ярилин А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. М. : Медицина, 1999.-608 с.

145. P-Carotene inhibits the oxidative modification of low-density lipoprotein /1. Jialal et al. // Biochim. et Biophys. Acta. 1991. - V. 1086, № 1. - P. 134138.

146. A new function for platelets: Ig E-dependent killing of schistosomes / M. Joseph et al. // Nature. 1983. - Vol. 303. - P. 810-812.

147. Abbinante-Nissen J.M. Corticosteroids increase secretory leukocyte protease inhibitor transcript lewels in airway epithelial cells / J.M. Abbinante-Nissen, L.G. Simpson, G.D. Leikauf// Am. J. Physiol. 1995. - Vol. 12. - P. 601-606.

148. Activated memory T helper cells in bronchoalveolar lavage fluid from patients with atopic asthma: relation to asthma symptoms, lung function, and bronchial responsiveness / D.S. Robinson et al. // Thorax. 1993. - Vol. 48, № i.-p. 28-32.

149. Acute and nongenomic effects of testosterone on isolated and perfused ratheart / G. Ceballos et al. // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1999. - Vol. 33, №5.-P. 691-697.

150. Adcock I.M. Glucocorticoid receptor mRNA localization and expression in human lung / I.M. Adcock, M. Bronnegard, P.J. Barnes // Am. Rev. Respir. Dis.- 1991.-Vol. 143.-P. 628.

151. Allergen-induced changes in bone marrow progenitors and airway responsiveness in dogs and the effect of inhaled budesonide on these parameters / M.J. Woolley et al. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1994. - Vol. 11, № 5. - P. 600-606.

152. Allergic inflammation and its pharmacological modulation in asthma / S.T. Holgate et al. // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1991. - Vol. 94, № 1-4.-P. 210-217.

153. Analysis of JNK, Mdm2 and pl4 (ARF) contribution to the regulation of mutant p53 stability / T. Buschmann et al. // J. Mol. Biol. 2000. - Vol. 295, №4.-P. 1009-1021.

154. Antonenkov V.D. Some basic properties of ascorbate-dependent antioxida-tive-defence factors from rat liver cytosol / V.D. Antonenkov, H. Sies // Chemico-Biological Interactions. 1995. - V. 94. - P. 169-181.

155. Arnoux B. Release of platelet-activating factor (PAR-acether) from alveolar macrophages by the calcium ionophore A23187 and phagocytosis / B. Arnoux, D. Duval, J. Benveniste // Eur. J. Clin. Invest. 1980. - Vol. 10, № 6. - P. 437441.

156. Arora A. Structure-activity relationships for antioxidant activities of a series of flavonoids in a liposomal system / A. Arora, M.G. Nair, G.M. Strasburg // Free Radic. Biol, and Med. 1998 - Vol. 24, № 9. - P. 1355-1363.

157. ATF3 and stress responses / T. Hai et al. // Gene Expr. 1999. - Vol. 7, №4-6.-P. 321-335.

158. Barnes P.J. Efficacy and safety of inhaled corticosteroids. New development / P.J. Barnes, S. Pedersen, W.W. Busse // Am. J. Respir. Crit. Care Med. -1998.-Vol. 157, №3.-P. 1-53.

159. Barnes P.J. New concepts in the pathogenesis of bronchial hyperresponsiveness and asthma / P.J. Barnes // J. Allergy. 1989. - Vol. 83, № 6. - P. 10131026.

160. Barnes P.J. Nitric oxide and asthmatic inflammation / P.J. Barnes, F.Y. Liew //Today. 1995.-Vol. 16.-P. 128-130.

161. Benveniste J. Leukocyte-dependent histamine release from rabbit platelets. The role of Ig E, basophils, and a platelet-activating factor / J. Benveniste, P.M. Henson, C.G. Cochrane // J. Exp. Med. 1972. - Vol. 136. - P. 1356-1377.

162. Blood antioxidant status and erythrocyte lipid peroxidation following distance running / G.G. Duthie et al. // Arch, of Biochem. and Biophys. 1990. -Vol. 282, № l.-P. 78-83.

163. Blood eosinophil numbers and activity during 24 hours effects of treatment with budesonide and bambuterol / J.B. Wempe et al. // J. Allergy. — 1992. — Vol. 90, №5.-P. 757-765.

164. Borson D.B. Glucocorticoids induce neutral endopeptidase in transformed human trachea epithelial cells / D.B. Borson, S. Jew, D.C. Gruenert // Am. J. Physiol. 1991.-Vol. 260.-P. 83-89.

165. Boym A. Separation of blood leukocytes, granulocytes and lymphocytes / A. Boym // Tissue antigens. 1974. - № 4. - P. 269-274.

166. Bryant R.W. Role of glutathione peroxidase and monophosphate shunt in the platelet lipoxygenase pathway / R.W. Bryant, T.C. Simon, J.M. Bailey // J. Biol. Chem. 1982. - Vol. 257. - P. 14937-14943.

167. C-fos proto-oncogene expression in bronchial biopsies of asthmatics / P. Demoly et al. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1992. - Vol. 7. - P. 128-133.

168. Chow C.K. Vitamin E and oxidative stress / C.K. Chow // Free Rad. Biol. Med.-1991.-V. 11.-P. 215-232.

169. Cloning and tissue expression of two putative steroid membrane receptors / D. Gerdes et al. // Biol. Chem. 1998. - Vol. 379, № 7. - P. 907-911.

170. Cockcroft D.W. Airway hyperresponsiveness: therapeutic implications / D.W. Cockcroft // Ann. Allergy. 1987. - Vol. 59. - P. 405-414.

171. Coenzyme Q-3 as an antioxidant. Its effect on the composition and structural properties of phospholipid vesicles. / L. Landi et al. // Cell Biophys. — 1990.1. V. 16, № 1-2.-P. 1-12.

172. Compton M.M. Identification of a glucocorticoid-induced nuclease in thymocytes. A potential «lisis gene» product / M.M. Compton, J.A. Cidlowski // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 282, № 17. - P. 8288-8292.

173. Conolly M.E. Cyclic nucleotides, beta-receptors, and bronchial asthma / M.E. Conolly // Adv. Cyclic. Nucleotide Res. 1980. - Vol. 12. - P. 151-159.

174. Constitutive activation of an epithelial signal transducer and activator of transcription (STAT) pathway in asthma / D. Sampath et al. // J. Clin. Invest.» 1999.-Vol. 103.-P. 1353-1361.

175. Corticosteroid (methylprednisolone) modulation of photoperoxidation by ultraviolet light in liposomes / M.L. Seligman et al. // Photochem. Photobiol. -1979.-V. 29.-P. 549-558.

176. Corticosteroid inhibition of the synthesis and release of ferret tracheal glu-coconjugates / P.W. Cheng et al. // Am. Rev. Respir. Dis. 1986. - Vol. 133. -P. 295.

177. Crystallographic analysis of the interaction of the glucocorticoid receptor with DNA / B.F. Luisi et al. // Nature. 1991. - Vol. 352. - P. 497-505.

178. Cuss F.M. Effects of inhaled platelet activating factor on pulmonary func-tionand bronchial responsiveness in man / F.M. Cuss, C.M. Dixon, P.J. Barnes // Lancet. 1986. - Vol. 2. - P. 189-192.

179. Cytokine- and forscolin-induced synthesis of group 2 phospholipase A2 and prostaglandin E2 in rat mesangial cells / C. Schalkwiik et al. // Biochem. Bio-phys. Res. Commun. 1991. - Vol. 108, № 1. - P. 46-52.

180. Decrease in beta-adrenergic receptors of lymphocytes in spontaneosly occurring acute asthma / I. Hataoka et al. // Chest. 1993. - Vol. 104, № 2. - P. 508-514.

181. Determinants of allergen-induced asthma: dose of allergen, circulating Ig E antibody concentration and bronchial responsiveness to inhaled histamine / D.W. Cockroft et al. // Am. Rev. Respir. Dis. 1979. - Vol. 120, № 5. -P. 1053-1058.

182. Dexamethasone alters rapidly actin polymerization dynamics in human endometrial cells: evidence for nongenomic actions involving cAMP turnover / S.B. Koukouritaki et al. // J. Cell. Biochem. 1996. - Vol. 62, № 2. - P. 251261.

183. Dexamethasone inhibition of interleukin 1 beta production by human monocytes: post-transcriptional mechanisms / J.A. Kern et al. // J. Clin. Invest. — 1988. Vol. 81, № l. - P. 237-244.

184. Direct evidence of caeruloplasmin antioxidant properties / R.L. Atanasiu et al. // Mol. cell Biochem. 1998. - Vol. 189. - P. 127-135.

185. Dose-response studies of the suppression of whole blood histamine and basophil counts by prednisone / A.M. Saavedra-Delgado et al. // J. Allergy. — 1980. Vol. 66, № 6. - P. 464-471.

186. Drazen J.M. Leukotrienes and airway responses / J.M. Drazen, K.F. Austen // Am. Rev. Respir. Dis. 1987. - Vol. 164, № 4. - P. 985-998.

187. Effect of elevated temperature and ultravuolet light on superoxide dismutase / H.J. Forman et al. // Biochem. 1973. - Vol. 12, № 12. - P. 823-827.

188. Effect of glucocorticoid treatment on beta-adrenoreceptor subtype function in adipocytes from patients with asthma / S. Reynisdottir et al. // Clin. Sei. Colch. 1993. - Vol. 85, № 2. - P. 237-244.

189. Effect of inhaled corticosteroids on peripheral blood eosiniphil counts and density profiles in asthma / P.M. Evans et al. // J. Allergy. 1993. - Vol. 91, №2.-P. 643-650.

190. Effect of vitamins A and E on ischemia-reperfiision damage in rabbit heart / S. Llesuy et al. // Mol. Cell Biochem. 1995. - Vol. 145. - P. 45-51.

191. Effects of corticosteroid therapy on human monocyte function / J.J. Rinhart et al. // N. Engl. J. Med. 1975. - Vol. 292, № 5. - P. 236-241.

192. Effects of UV-sensitization of hematoporphyrin on lipid hydroperoxides in erythrocytes and on their hemolysis / U. Tadashi et al. // Jap. J. Toxicol, and Environ. Health. 1997. - Vol. 43, № 2. - P. 101-107.

193. Elliott S.J. Effect of oxidant stress on calcium signaling in vascular endothelial cells / S.J. Elliott, J.G. Meszaros, W.P. Schilling // Free Radie. Biol. Med. -1992. Vol. 13, № 6. - P. 635-650.

194. Eosinophilic inflammation in asthma / J. Bousquet et al. // N. Engl. J. Med. -1990.-Vol. 323, № 15.-P. 1033-1039.

195. Expression of inducible nitric oxide synthase in human bronchial epithelial cells / R.A. Robbins et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. — Vol. 203.-P. 209-218.

196. Factors involved in the uptake of corticosterone by rat liver cells / M.L. Rao et al. // Biochim. et Biophys. Acta. 1977. - Vol. 500. - P. 322-332.

197. Forscolin inhibits the release of histamine from human basophils and mast cells / G. Marone et al. // Agents Actions. 1986. - Vol. 18, № 1-2. - P. 9699.

198. Fridovich I. The biology of oxygen radicals. The superoxide radical is an agent of oxygen toxicity; superoxide dismutase provide an importent defence / I. Fridovich // Science. 1978. - Vol. 201, № 9. - P. 875-880.

199. Fugita T. Formation and removal of reactive oxygen species, lipid peroxides and free radicals, and their biological effects / T. Fugita // Yakugaku Zasshi. -2002.-Vol. 122, №3.-P. 203-218.

200. Gin W. Airways reversibility after prednisolone therapy in chronic asthma is associated with alterations in leukocyte function / W. Gin, R.J. Shaw, A.B. Kay // Am. Rev. Respir. Dis. 1985. - Vol. 132, № 6. - P. 1199-1203.

201. Girotti A.W. Photosensitized oxidation of membrane lipids: reaction pathways, cytotoxic effects, and cytoprotective mechanisms / A.W. Girotti // J. Photochem. and Photobiol. 2001. - Vol. 63, № 1-3. - P. 103-113.

202. Glucocorticoid-induced low molecular mass anti-inflammatory factors which do not inhibit phospholipase A2 / M. Koltai et al. // Eur. J. Pharmacol. — 1987.-Vol. 134,№ l.-P. 109-112.

203. Glucocorticoid-mediated repression of intercellular adhesion molecule-1 expression in human monocytic and bronchial epithelial cell lines / A. Van-de-Stolpe et al. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1993. - Vol. 8, № 3. - P 340347.

204. Gorski P. Eosinophils in bronchial asthma / P. Gorski, C. Palczynski // Al-lergol. et Immunopathol. 1989. - Vol. 17, № 2. - P. 113-116.

205. Gronemeyer H. Control of transcription activation by steroid hormone receptors / H. Gronemeyer // FASEB J. 1992. - Vol. 6. - P. 2524-2529.

206. Hallivell B. The antioxidants of human extracellular fluids / B. Hallivell, J.M.C. Gutteridge // Arch. Biochem. Biophys. 1990. - V. 280, № 1. - P. 1-8.

207. Halonen M. Differential effects of platelet depletion on the physiologic alterations of Ig E anaphylaxis and acetyl glyceryl ether phosphorylcholine infusion in the rabbit / M. Halonen et al. // Am. Rev. Respir. Dis. 1981. - Vol. 124,№4.-P. 416-421.

208. Heap R.B. Steroids and their interaction with phospholipids: solubility, distribution coefficient and effect on potassium permeability of liposomes / R.B. Heap, A.M. Symons, J.C. Watkins // Biochim. et Biophys. Acta. 1970. -Vol. 218.-P. 326-335.

209. Heat shock protein 70 upregulation is related to HLA-DR expression in bronchial asthma. Effects of inhaled glucocorticoids / G. Bertorelli et al. // Clin. Exp. Allergy. 1998. - Vol. 28. - P. 551-560.

210. Herdegen T. Inducible and constitutive transcription factors in the mammalian nervous system: control of gene expression by Jun, Fos and Krox, and CREB/ATF proteins / T. Herdegen, J.D. Leah // Brain. Res. Rev. 1998. - Vol. 28, №3.-P. 370-490.

211. High-affinity Ig E receptor on eosinophils in involved in defense against parasites / A.S. Gounni et al. // Nature. 1994. - Vol. 367. - P. 183-186.

212. Hirata F. Phospholipid methylation and biological signal transmission / F. Hirata, J. Axelrod // Science. 1980. - Vol. 209. - P. 1082-1090.

213. Holgate S.T. The human lung mast cell: morphology, biochemistry and role in allergic asthma / S.T. Holgate // Adv. Med. 1983. - Vol. 19. - P. 287-306.

214. Holgate S.T. The role of the eosinophil in asthma / S.T. Holgate, W.R. Roche, M.K. Church // Am. Rev. Respir. Dis. 1991. - Vol. 143. - P. 66-70.

215. Homocysteine-responsive ATF3 gene expression in human vascular endothelial cells: activation of c-Jun NF^-terminal kinase and promoter response element / Y. Cai et al. // Blood. 2000. - Vol. 96, № 6. - P. 2140-2148.

216. Human fibroblasts release reactive oxygen species in response to inter-leukin-1 or tumor necrosis factor-alpha / B. Meier et al. // Biochemical J. -1989. Vol. 263. - P. 539-545.

217. Human neutrophil-derived platelet activating factor / G.Z. Lotner et al. // J. Immunol. 1980. - Vol. 124, № 2. - P. 676-684.

218. Identification of an inducible endothelial-leukocyte adhesion molecule / M.P. Bevilacqua et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1987. - Vol. 84, № 24. -P. 9238-9242.

219. Identification of the cytokine RANTES released from platelets as an eosinophil chemotaktic factor / Y. Kameyoshi et al. // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1994. - Vol. 104, № 1. - P. 49-51.

220. Immunohistochemical analysis of the activation of NF-kappa B and expression of associated cytokines and adhesion molecules in human models of allergic inflammation / S.J. Wilson et al. // J. Pathol. 1999. - Vol. 189. - P. 265272.

221. Increased biosynthesis of platelet-activating factor in activated human eosinophils / T. Lee et al. // J. Biol. Chem. 1984. - Vol. 259, № 9. - P. 55265530.

222. Induction by glucocorticoids of angiotensin converting enzyme production from bovine endothelial cells in culture and rat lung in vivo / F.A.O. Mendelsohn et al. // J. Clin. Invest. 1982. - Vol. 70, № 3. - P. 684-692.

223. Induction of cyclo-oxygenase-2 by cytokines in human pulmonary epithelial cells: regulation by dexamethasone / J.A. Mitchell et al. // Br. J. Pharmacol. — 1994.-Vol. 113, № 3. — P. 1008-1014.

224. Influence of two hydroxyalkenals on monocyte immune phagocytosis / D. Roccatello et al.//IRCS Med. Sci.- 1985.-Vol. 13.-P. 135-136.

225. Inhibition by reactive aldehydes of superoxide anion radical production in stimulated human neutrophils / G. Witz et al. // Chem. Biol. Int. 1985. -Vol. 53.-P. 13-23.

226. Inhibitory effect of a selective thromboxane synthetase inhibitor, OKY-046, on acetaldehyde-induced bronchoconstriction in asthmatic patients / S. Myou et al. //Chest.-1994.-Vol. 106, №5.-P. 1414-1418.

227. Interactions between granulocytes and platelets with the guinea-pig lung in passive anaphylactic shock. Correlations with PAF-acetherinduced lesion / A. Lellouch-Tubiana et al. // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1987. -Vol. 83,№2.-P. 198-205.

228. Intercellular adhesion molekule-1 (ICAM-1) in the pathogenesis of asthma / C.D. Wegner et al. // Science. 1990. - Vol. 247. - P. 456-459.

229. Ishizaka K. Mechanism of reaginic hypersensitivity and Ig E antibody response / K. Ishizaka, T. Ishizaka // Immunol. Rev. 1978. - Vol. 41. - P. 109148.

230. Josephygg P.D. The horseradish peroxidase-catalyzed oxidation of 3,5,3',5 tetramethylbenzidine / P.D. Josephygg, T. Elingg, R.P. Mason 1 // J. Biol. Chem. 1982. - Vol. 257, № 7. - P. 3669-3675.

231. Kasapoglu M. Alterations of antioxidant enzymes and oxidative stress markers in aging / M. Kasapoglu, T. Ozben // Exp. Gerontol. — 2001. Vol. 36, № 2. -P. 209-220.

232. Kitagawa S. A comparison of the superoxide-releasing response in human polymorphonuclear leukocytes and monocytes / S. Kitagawa, F. Takaku, S. Sakamoto // J. Immunol. 1980. - Vol. 125. - P. 359-364.

233. Laitinen A. Airway morphology: epithelium/basement membrane / A. Laiti-nen, L.A. Laitinen // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1994. - Vol. 150, № 5. -P. 14-17.

234. Late and prolonged induction of eosinophil apoptosis in sensitized mouse lung after ovalbumin challenge / T. Kodama et al. // Clin. Exp. Allergy.1998.-Vol. 28.-P. 1435-1443.

235. Lewis G.D. Inhibition of prostaglandin synthesis by glucocorticoids in human endothelial cells / G.D. Lewis, W.B. Campbell, A.R. Johnson // Endocrinology-1986.-Vol. 119, № l.-P. 62-69.

236. Lipid hydroperoxides induce apoptosis in T cells displaying a HIV-associated glutathione peroxidase deficiency / P.A. Sandstrom et al. // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269. - P. 798-801.

237. Mammalian peroxiredoxin isoforms can reduce hydrogen peroxide generated in response to growth factors and tumor necrosis factor-a / S.W. Kang et al. // J. Biol. Chem. 1998. - Vol. 273. - P. 6297-6302.

238. Marklund S.L. Caeruloplasmin, extracellular superoxide dismutase, and scavenging of superoxide anion radicals / S.L. Marklund // Free Radical Biol, and Med. 1987.-Vol. 2.-P. 255-261.

239. McCord J.M. The purification and crystallization of beef erythrocyte superoxide dismutase / J.M. McCord, I. Fridovich // J. Biol. Chem. 1969. - Vol. 244, № 12.-P. 6049-6056.

240. Molecular mechanisms of toxicant-induced immunosuppression: role of second messengers / M.P. Holsapple et al. // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. — 1996.-Vol. 36.-P. 131-159.

241. Monje P. Characterization of membrane estrogen binding proteins from rabbit uterus / P. Monje, R. Boland // Mol. Cell. Endocrinol. 1999. - Vol. 147, № 1-2.-P. 75-84.

242. Moore K. Measuremant of lipid peroxidation / K. Moore, L.J. Roberts // Free radic res. 1998. - Vol. 28, № 6. - P. 659-671.

243. Morley J. Platelet activating factor and asthma / J. Morley // Agents Actions. 1989. - Vol. 26, № 1-2. - P. 31-39.

244. Morley J. The platelet in asthma / J. Morley, S. Sanjar, C.P. Page // Lancet. 1984. - Vol. 2. - P. 1142-1144.

245. Murina M.A. Effect of ultraviolet radiation on aggregation of human erythrocytes / M.A. Murina, D.I. Roshchupkin // Photobiochem. Photobiophys.-1984.-V. 7.-P. 59-65.

246. Murphy S. Asthma, inflammation, and airway hyperresponsiveness in children / S. Murphy, H.W. Kelly // Curr. Opin. Pediatr. 1993. - Vol. 5, № 3. - P. 255-265.

247. Newton R. Molecular mechanisms of glucocorticoid action: what is important? / R. Newton // Ibid. 2000. - Vol. 55, № 7. - p. 601-612.

248. NF-kB: an important transcription factor in photobiology / S. Legraund-Poels et al. // J. Photochem. Photobiol. 1998. - Vol. 45. - P. 1-8.

249. Nijkamp F.P. Receptors in airway disease. Beta-adrenoceptors in lung inflammation / F.P. Nijkamp, P.A. Henricks // Am. Rev. Respir. Dis. — 1990. — Vol. 141, №3.-P. 145-150.

250. Nishizuka Y. Studies and perspectives of protein kinase / Y. Nishizuka // Science. 1986. - Vol. 233. - P. 305-312.

251. Nordberg J. Reactive oxygen species, antioxidants and the mammalian thio-redoxin system / J. Nordberg // Free radical biology and medicine. 2001. -Vol.31,№ 11.-P. 1287-1312.

252. Opposing effects of glucocorticoids on the rate of apoptosis in neutrophilic and eosinophilic granulocytes / L. Meaher et al. // J. Immunol. — 1996. —1. Vol. 156.-P. 4422-4428.

253. Oxidative stress induces NF-kB DNA binding and inducible NOS mRNA in human epithelial cells / I.M. Adcock et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1994.-Vol. 199.-P. 1518-1524.

254. Paterson J.W. Pharmacology of asthma treatment: overview / J.W. Paterson, K.M. Lulich, R.G. Goldie // Med. J. Aust. 1995. - Vol. 162, № 1. - P. 42-43.

255. Petroni K.S. Modulation of human polymorphonuclear leukocyte IgG Fc receptors and Fc receptor-mediated functions by IFN-gamma and glucocorticoids / K.S. Petroni, L. Shen, P.M. Guyre // J. Immunol. 1988. - Vol. 140, № 10. -P. 3467-3472.

256. Piedimonte G. Glucocorticoids inhibit neurogenic plasma extravasation and prevent virus-potentiated extravasation in the rat trachea / G. Piedimonte, D.M. McDonald, J.A. Nadal // J. Clin. Invest. 1990. - Vol. 86, № 5. - P. 14091415.

257. Pin I. Mecanismes de l'hyperreactivite bronchique: role de 1'inflammation des voies aeriennes et de l'atopie / I. Pin, P. Godard // Rev. Val. Respir. — 1994. Vol. 11, № 2. - P. 111-112.

258. Piper P.J. Pharmacology and biochemistry of the leukotrienes / P.J. Piper // Eur. J. Respir. Dis. 1982. - Vol. 122. - P. 54-61.

259. Platelet activating factor. Stimulation of the lipoxygenase pathway in polymorphonuclear leukocytes by l-0-alkil-2-0-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine / F.H. Chilton et al. // J. Biol. Chem. 1982. - Vol. 257, № 10. - P. 54025407.

260. Platelet-activating factor and airway reactivity / R.G. Townley et al. // J. Allergy. 1989. - Vol. 83, № 6. - 997-1010.

261. Platelet-activating factor induces a platelet-dependent bronchoconstriction unrelated to the formation of prostaglandin derivatives / B.B. Vargafting et al. // Eur. J. Pharmacol. 1980. - Vol. 19, № 5-6. - P. 185-192.

262. Ponta H. Interference of pathway specific transcription factors / H. Ponta, A.C. Cato, P. Herriich // Biochim. Biophys. Acta. 1992. - Vol. 1129, № 3. -P. 255-261.

263. Prednisolone resistance in childhood acute lymphoblastic leukemia: vitro-vivo correlations and cross-resistance to other drugs / G J Kaspers et al. // Blood. 1998. - Vol. 2, № 11. - P. 259-266.

264. Predominant generation of 15-lipoxygenase metabolites of arachidonic acid by epithelial cells from human trachea / J.A. Hunter et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1985. - Vol. 82, № 14. - P. 4633-4637.

265. Reactive oxygen species, cell signaling, and cell injuiy / K. Hensley et al. // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 10. - P. 1456-1462.

266. Reichardt H.M. Glucocorticoid signalling—multiple variations of a common theme / H.M. Reichardt, G. Schütz // Mol. Cell. Endocrinol. 1998. - Vol. 146, № 1-2.-P. 1-6.

267. Relationships among allergen — induced early and late phase airway obstructions, bronchial hiperreactivity, and inflammation in conscious, unrestrained guinea pigs / R.E. Sauting et al. // J. Allergy. 1994. - Vol. 93, № 6. - P. 1021-1030.

268. Rogers D.F. Inhibition of cigarette smoke-induced airway secretory cell hyperplasia by indomethacin, dexamethasone, prednisolone, or hydrocortisone in the rat / D.F. Rogers, P.K. Jeffeiy // Exp. Lung. Res. 1986. - Vol. 10, № 3. -P. 285-298.

269. Role of cationic proteins in the airway. Hyperresponsiveness due to airway inflammation / A.J. Coyle et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. — 1994. -Vol. 150,№5.-P. 63-71.

270. Roshchupkin D.I. Effect of temperature and pH on the lipid photoperoxida-tion and structural state of erythrocyte membranes / D.I. Roshchupkin, A.B. Pe-lenitsyn, Yu.A. Vladimirov // Stud. Biophys. 1978. - Vol. 71. - P. 23-27.

271. Rumita S. Radiation induced lipid peroxidation: factors which determine the oxidizability of lipids / S. Rumita // Can. J. Physiol. Pharmacol. 2001.1. Vol. 79, №2.-P. 144-153.

272. Saatcioglu F. Negative regulation by nuclear receptors / F. Saatcioglu, F.X. Clared, M. Karin // Semin. Cancer. Biol. 1994. - Vol. 5. - P. 347-359.

273. Sasaki H. Clinical strategy of chronic obstructive pulmonary disease in the elderly / H. Sasaki, K. Sekizawa // Nippon Ronen Igakkai Zasshi. 1993. -Vol. 30, № 12. - P. 999-1004.

274. Scholz R.W. Glutathione disulfide enhances the reduced glutathione inhibition of lipid peroxidation in rat liver microsomes / R.W. Scholz, K.S. Graham,

275. C.C. Reddy // Biochem. and Biophys. Res. Communs. 1990. - V. 166, № 2. -P. 960-966.

276. Schulze-Osthoff K. Redox signalling by transcription factors NF-kB and AP-1 in lymphocytes / K. Schulze-Osthoff, M. Los, P. Baeuerle // Biochem. Pharmacol. 1995. - Vol. 50. - P. 735-741.

277. Sevanian A. Lipid damage and repair / A. Sevanian // Free Rad. Biol. Med.- 1990.-№ l.-P. 117.

278. Sies H. Oxidative stress From basicresearch to clinical application / H. Sies // Amer. J. Med. - 1991. - Vol. 91. - P. 31-38.

279. Smih D.L. Bronchoalveolar lavage in asthma: an update and perspective /

280. D.L. Smith, R.D. Deshazo // Am. Rev. Respie. Dis. 1993. - Vol. 148. -P. 523-532.

281. Stabilization effect of tocopherol and catalase on the life-time of liposome-embedded heme as an oxygen carrier / M. Yuasa et al. // Biochim. et biophys. acta. 1987. - V. 900, № 1. - P. 160-162.

282. Stevens D.A. Beta-Agonists inhibit DNA binding of glucocorticoid receptors in human pulmonary and bronchial epitelial cells / D.A. Stevens, P.J. Barnes, I.M. Adcock // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1995. - Vol. 151. - P. 195.

283. Stimler N.P. Spasmogenic properties of platelet-activating factor: evidence for a direct mechanism in the contractile response of pulmonary tissues / N.P. Stimler, J.T. O'Flaherty // Am. J. Pathol. 1983. - Vol. 113, № 1. - 75-84.

284. Svensjo E. Time-dependent inhibition of bradykinin- and histamine-induced microvascular permeability increase by local glucocorticoid treatment / E. Svensjo, K. Roenpke // Prog. Respir. Res. 1985. - Vol. 19. - P. 173-180.

285. Szentivanyi A. The beta adrenergic theory of the atopic abnormality in bronchial asthma / A. Szentivanyi // J. Allergy. 1968. - Vol. 42. - P. 203.

286. Tang D.G. Arachidonate lipoxygenases as essential regulators of cell survival and apoptosis / D.G. Tang, Y.Q. Chen, K.V. Honn // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1996. - V. 93. - P. 5241-5246.

287. The bronchoconstrictior effect of inhaled prostaglandin D2 in normal and asthmatic men / C.C. Hardy et al. // N. Engl. J. Med. 1984. - Vol. 311, №4.-P. 209-213.

288. The mechanism of glucocorticoid inhibitory tracheal glands / S. Shimura et al. // Am. Rev. Respir. Dis. 1988. - Vol. 136. - P. 6.

289. The release of platelet-activating factor from human endothelial cells in culture / G. Camussi et al. // J. Immunol. 1983. - Vol. 131, № 5. - P. 23972403.

290. Torrielli M.V. Free radicals in inflammatory disease / M.V. Torrielli, M.U. Dianzani // Free Radicals in Molecular Biology, Aging and Disease. — N.Y. : Raven Press, 1984. P. 355-379.

291. Transcription factor interactions: selectors of positive or negative regulation from a single DNA element / M.I. Diamond et al. // Science. 1990. -Vol. 249.-P. 1266-1272.

292. Treatment of acute asthma: effect of intravenous corticosteroids and beta 2-adrenergic agonists / A. Arnaud et al. // Lung. 1979. - Vol. 156, № 1. — P. 43-48.

293. Two mechanisms of interferon production by leukocytes from immunized animals / L.M. Trubina et al. // Acta virol. 1975. - Vol. 19. - P. 116-120.

294. Varma S.D. Prevention of cataracts by nutritional and metabolic antioxidants / S.D. Varma et al. // Crit. Rev. Food Sei. Nutr. 1995. - Vol. 35. - P. 111-129.

295. Von Knethen A. Superoxide attenuates macrophage apoptosis by NF-kappa B and AP-1 activation that promotes cyclooxygenase-2 expression / A. von Knethen, D. Callsen, B. Brune // J. Immunol. 1999. - Vol. 163, № 5. -P. 2858-2866.

296. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen / A. Wendel // Enzymes — Tools and Targets. — Basel: Karger, 1988. P. 161-167.

297. Willson R.L. Organic peroxy free radicals as ultimate agents in oxygen toxicity / R.L. Willson // Oxidative Stress. L.: Acad. Press, 1985. - P. 41-72.

298. Yang M.H. Factors affecting DNA damage caused by lipid hydroperoxides and aldehydes / M.H. Yang, K.M. Schaich // Free Rad. Biol. Med. 1996. -V. 20. - P. 225-236.

299. Zimmerman W.F. Effects of pro and anti-oxidizing conditions on phospholipid metabolism within isolated vertebrate rod outer segments / W.F. Zimmerman // Free Rad. Biol. Med. 1990. - № 1. - P. 117.

Информация о работе

Савостина, Ирина Евгеньевна
кандидата биологических наук
Воронеж, 2005
ВАК 03.00.02

Диссертация

Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы