Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование условий, влияющих на образование фактора сосудистой проницаемости в культурах холерных вибрионов

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бугоркова, Татьяна Васильевна

ВВЕДЕНИЕ .5

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.9

Экзотоксин холерных вибрионов и методы определения его активности

1. Свойства холерного экзотоксина.9

2. Методы определения токсигенной активности холерных вибрионов.26

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. 37

Материалы. 37

Методы исследования.38

1. Методика культивирования холерных вибрионов. 33

2. Изучение культуральных свойств . 39

3. Биохимические реакции

4. Гистологические методы исследования

5. Методика получения гомогенатов.41

6. Методика получения фильтратов культур холерных вибрионов.

7. Биологические методы исследования. 42

ГЛАВА Ш. ХАРАКТЕРИСТИКА МЕСТНОЙ РЕАКЦИИ ПРИ ВНУТРИ-КОЖНОМ ВВЕДЕНИИ ЖИВЫХ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ И НЕКОТОРЫХ ИХ АНТИГЕНОВ.45

1. Сравнительное изучение кожной реакции при введении живых холерных вибрионов, фильтратов их жидких культур и убитых клеток.45

2. Выживаемость холерных вибрионов в коже кролика.54

3. Специфичность кожной реакции при внутрикожном введении живых холерных вибрионов . 58

4. Динамика морфологических изменений при внутрикожном введении живых холерных вибрионов 61

ГЛАВА ТУ. ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЙ

НА ТОКСИГЕННОСТЬ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ . 72

1. Культивирование холерных вибрионов на мембраноагаре.72

2. Морфология клеток холерных вибрионов, выращенных на мембраноагаре .75-ВО

3. Влияние температуры культивирования на образование фактора Ш холерных вибрионов .80

4. Значение среды культивирования для синтеза фактора ПФ холерными вибрионами .81

5. Влияние ионов железа и магния на продукцию фактора ПФ холерными вибрионами .82

6. Влияние адениннуклеотидов, гиалуроновой и аце-тилнейраминовой кислот на синтез фактора ПФ в клетках холерных вибрионов. 86

7. Влияние пепсина, трипсина, липазы, амилазы, ДНК-азы, РНК-азы и гиалуронидазы на токсигенность холерных вибрионов . 87

8. Влияние экстрактов ткани тонкой и толстой кишки человека и кролика на синтез холерными вибрионами фактора ПФ.93

ГЛАВА У. ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ КОМПОНЕНТОВ

КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ НА АКТИВНОСТЬ ШТОРА Ш.97

I. Токсигенность холерных вибрионов при совместном введении их с некоторыми низкомолекулярными веществами и биополимерами .97

2. Влияние некоторых низкомолекулярных и макромолеку-лярных компонентов клеток животных на активность препаратов холерного экзотоксина . 98

ГЛАВА У1. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАКТОРА Ш В ЗШВЫХ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНАХ И ЕЕ ПРАКТИЧЕСКОЕ

ПРИМЕНЕНИЕ.107

1. Методика определения фактора ПФ в живых холерных вибрионах.107

2. Характеристика различных штаммов холерных вибрионов по продукции фактора ПФ. .I03-II

3. Применение методики определения фактора ПФ в живых вибрионах для оценки их вирулентности.II4-II

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование условий, влияющих на образование фактора сосудистой проницаемости в культурах холерных вибрионов"

Актуальность проблемы. Сложная эпидемическая ситуация по холере, достигшая своего апогея в начале 70 х годов, продолжается и в настоящее время ( Felix н., 1980; who, 1980, 1981) главным образом в развивающихся странах Азии, Африки и Латинской Америки, где она все еще представляет серьезную угрозу для здоровья населения. Расширяющиеся международные отношения увеличивают риск заноса холеры в СССР. В связи с этим изучение особенностей микробиологии холеры является одной из актуальных задач.

В патогенезе холеры ведущее место занимают токсины холерных вибрионов. Еще с момента вьщеления Р.Кохом возбудителя холеры предполагалось, что клиническая картина заболевания связана с интоксикацией. В последующие годы были достигнуты значительные успехи в получении токсигенных штаммов, а также в изучении физико-химических и биологических свойств холерных токсинов (Burrows w., 1968; Белов Л.Г., Мохин К.М., 1972; Burrows W., Kaur J., 1974; Van Heyningen S., 1976, 1982; Саямов P.M. с соавт., 1983). Токсические субстанции, которые синтезируют холерные вибрионы, по классификации w.Burrows (1965, 1968) делятся на три типа. Наибольшее значение из них представляет токсин второго типа -экзотоксин (холероген) или энтеротоксин.

У холерного экзотоксина обнаружено три свойства. Первое свойство - энтеротоксичность (холерогенность) заключается в способности вызывать диарею у людей и некоторых новорожденных животных при пероральном или внутрикишечном введении ( Finkeistein R.A. et al., 1966; Sack R.B. et al., 1966; Coleman W.H. et al.,

1968; Lepot A., Banwell J.G., 1976; Baselski V. et al., 1977); второе свойство - мембранотоксичность проявляется в способности образовывать папулы при внутрикожном введении - фактор проницаемости сосудов ПФ ( PF по Craig J.Р., 1965, 1966) и третье свойство - вызывать гибель животных при внутривенном введении ( Craig J.P., 1971).

Для определения токсигенности штаммов холерных вибрионов широко используются методы внутрикишечного заражения суспензиями их культур крольчат 8-10 дневного возраста или взрослых кроликов в лигированные петли тонкой кишки ( De S.N., Chatter;)ее D.U., 1953; Dutta U.K., НаЪЪи M.K., 1955). Определение фактора проницаемости сосудов кожи по J.P.Craig (1965) при изучении токсигенности штаммов холерных вибрионов производится в фильтратах культур. Однако, эта методика имеет недостатки, так как большинство штаммов не синтезирует экзотоксин;, на лабораторных средах. Поэтому до настоящего времени у штаммов холерных вибрионов исследуют энтероток-сические свойства экзотоксина, но не определяют активности фактора проницаемости сосудов кожи.

Цель работы. Основная цель работы заключалась в разработке высокочувствительного метода определения фактора проницаемости сосудов кожи в культурах холерных вибрионов и изучении его активности у штаммов, вьщеленных из разных источников.

Для достижения цели работы были поставлены следующие задачи:

1. Разработать метод выявления фактора сосудистой проницаемости кожи в живых культурах холерных вибрионов.

2. Исследовать влияние различных условий культивирования на синтез ПФ в клетках холерных вибрионов.

3. Изучить активность ПФ у штаммов холерных вибрионов, вьщеленных из разных источников.

4. Составить методические рекомендации по определению фактора сосудистой проницаемости (ПФ) в живых культурах холерных вибрионов.

Научная новизна. Впервые детально разработан метод определения фактора сосудистой проницаемости кожи (ПФ) в культурах живых холерных вибрионов. Выявлены вещества, стимулирующие и ингибирую-щие активность фактора ПФ у штаммов холерных вибрионов, определена интенсивность образования фактора ® в штаммах холерных вибрионов, вццеленных из разных источников.

Практическая ценность. Разработан новый метод определения ток-сигенных свойств штаммов холерных вибрионов по активности фактора проницаемости. На этот способ вьщано Государственным Комитетом СССР по делам изобретений и открытий авторское свидетельство № 625415 от 26 мая 1978 года. Составлены "Методические рекомендации по определению фактора проницаемости (Ш) в живых культурах холерных вибрионов, которые одобрены Ученым советом ВНИПЧИ "Микроб" и утверждены директором института. Для изучения биохимической активности штаммов были усовершенствованы методы определения проте-олитической и амилазной активности у холерных вибрионов.

Предложенные методы внедрены в работу отдела подготовки специалистов ВНИПЧИ "Микроб", Уральской ПЧС.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены:

- на научной конференции ВНИПЧИ "Микроб", посвященной III годовщине со дня рождения В.И.Ленина, Саратов, 1981;

- на научной конференции ВНИПЧИ "Микроб", посвященной 112 годовщине со дня рождения В.И.Ленина, Саратов, 1982;

- на научной конференции ВНИПЧИ "Микроб", Саратов, 1984.

Публикация. По теме диссертации опубликовано 5 работ и получено авторское свидетельство: "Способ определения экзотоксиген-ных штаммов холерных вибрионов" - № 625415 от 26 мая 1978 года.

Положения выдвигаемые на защиту:

1. Новый метод определения активности фактора проницаемости ПФ у живых холерных вибрионов.

2. Условия культивирования холерных вибрионов для выявления фактора ПФ.

3. Активность фактора ПФ у штаммов холерных вибрионов, вцце-ленных из разных источников.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Бугоркова, Татьяна Васильевна

ВЫВОДЫ

1. При внутрикожном введении животным живых холерных вибрионов под влиянием выделяющегося из клеток фактора сосудистой проницаемости (фактора ПФ по Крейгу) образуются папулы, диаметр которых колеблется от б мм до 15 мм.

2. Существенных различий в гистологических изменениях в кожной папуле при внутрикожном введении живой культуры и холерного экзотоксина не обнаружено; особенности гистологических изменений в папулах, образующихся после внутрикожного введения живых культур холерных вибрионов, и специфическая нейтрализация этого свойства вибрионов антитоксической холерной сывороткой, свидетельствуют о действии фактора ПФ.

3. При выращивании культур холерных вибрионов на целлофановой мембране, помещенной на поверхность казеинового питательного агара, наблюдается более интенсивное образование фактора ПФ, чем на казеиновом агаре. В клетках холерных вибрионов, выращенных на целлофановой мембране с помощью электронного микроскопа выявлены изменения, указывающие на увеличение их секреторной активности.

4. Достоверно активируют в живых культурах холерных вибрионов биовара эльтор фактор сосудистой проницаемости АТФ и цАМФд соли сернокислого железа и хлористого магния; ферменты трипсин и гиалуронидаза. Ферменты: РНК-аза и ДНК-аза ингибировали накопление фактора ПФ в культурах холерных вибрионов биовара холера и не влияли на указанный фактор холерных вибрионов биовара эльтор; фермент липаза и °С -амилаза снижали активность фактора ПФ в холерных вибрионах биовара эльтор. Гиалуроновая и и-ацетилнейра-миновая кислоты, экстракты ткани тонкой и толстой кишки человека. и кролика не влияют на активность фактора ® в культурах холерных вибрионов.

5. В экспериментах с препаратом холерного экзотоксина показано, что ферменты трипсин и гиалуронидаза стимулируют действие фактора ПФ; фермент липаза - угнетает.

6. Разработана методика определения ПФ в живых культурах холерных вибрионов; на большом числе штаммов установлена менее выраженная его активность у холерных вибрионов биовара холера в сравнении с биоваром эльтор.

7. Метод определения фактора ПФ в живых культурах холерных вибрионов в сочетании с другими тестами можно использовать для оценки вирулентности штаммов, выделенных из разных источников. Составлены методические рекомендации по определению фактора ПФ в живых культурах холерных вибрионов с учетом особенностей режима работы с возбудителями особо опасных инфекций.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В обзоре литературных данных было отмечено, что одним из основных факторов в патогенезе заболевания является холерный экзотоксин, который при введении в кишечник экспериментальным животным вызывает диарею, а при введении в кожу взрослого кролика -характерные кожные папулы (Burrows W., 1965, 1968; Craig J,p., 1965; Finkelstein R.A. et al.,1966, 1969; Coleman W.H., 1968; Зыкин Л.Ф., 1971; Белов Л.Г., Мохин К.М., 1972; van Heyningen S., 1976, 1978; Езепчук Ю.В., 1977; Адамов А.К., 1981).

Энтеротоксическая активность штаммов холерных вибрионов, выделенных из разных источников, обстоятельно изучена с помощью методик U.K.Dutta и М.К.НаЪЪи (1955) на крольчатах 8-10 дневного возраста (Адамов А.К. с соавт., 1969, 1971; Либинзон А.Е. с соавт., 1969; Зыкин Л.Ф., 1970; Коровкина Г,В., 1971; Лобанов В,В. с соавт., 1975; Кияткинов Б.Л. с соавт., 1977; %кова Э.В. с соавт., 1981; Эмдина П.А. с соавт., 1984; Асеева Л.Е. с соавт., 1984) и S.u.De и D. Chatter;) ее (1953) в лигированных петлях тонкой кишки взрослых кроликов (Burrows W., 1965; Эмдина Н.А. с соавт., 1984).

Свойство холерного экзотоксина усиливать проницаемость сосудов фактор ПФ ( М1) при введении в кожу взрослого кролика по методу J.P.Craig (1965) изучено только в экспериментах с фильтратами жидких культур токсигенных штаммов холерных вибрионов или с препаратами очищенного экзотоксина. В то же время активность фактора ПФ у штаммов холерных вибрионов, выделенных из разных источников не изучалась, вследствие отсутствия чувствительного метода выявления этого фактора в живых вибрионах.

Большинство авторов считает, что оба эти свойства принадлежат холерноь/цг экзотоксину (Van Heyningen W.E., I974;Yacobs J.W, et al., 1974; Finkelstein H.A. et al.,I975), хотя некоторые исследователи отмечают существование двух холерных экзотоксинов: энтеротоксин и мембранотоксин (Holmgren J. and Lonnroth I,, 1973; Наумшина M.C. с соавт., 1974; Адамов А.К., Тихонов Н.Г., 1976; Адамов А.К., 1981).

Не ставя перед собой задачу решить вопрос о существовании разных видов холерных токсинов, мы считали важным разработать высокочувствительную методику определения активности экзотоксина у живых холерных вибрионов по его действию на сосудистую проницаемость, т.е. по свойству, называемое J.P.Craig (1965) фактором ** (ПФ).

В проведенных наш исследованиях с целью разработки высокочувствительной методики определения фактора ПФ в культурах холерных вибрионов, изучались особенности местной реакции животных при внутрикожном введении фильтратов жидких культур, живых и убитых холерных вибрионов; возможность размножения вибрионов в месте введения; специфичность кожных изменений, вызываемых холерными вибрионами в месте введения; условия культивирования холерных вибрионов, способствующие образованию фактора ПФ; влияние некоторых веществ на синтез фактора ПФ.

С помощью разработанной новой методики определения фактора ПФ исследована его активность у штаммов холерных вибрионов, вццелен-ных из разных источников. При выполнении исследований было изучено 64 штамма холерных вибрионов биовара холера и 518 штаммов биовара эльтор.

В экспериментах было установлено, что при внутрикожном введении живых холерных вибрионов кожные папулы четко выражены уже через 6 часов с момента введения культуры, максимальные размеры регистрируются через 24 часа, а к 72 часам видимая кожная реакция исчезает. Холерные вибрионы в кожной ткани не размножаются, но сохраняют жизнеспособность в течение 24 часов. По-видимоцу, в процессе постепенного лизиса микробных клеток в кожной ткани высвобождается фактор ПФ, который непосредственно связывается с мембранами капилляров и обуславливает формирование кожной папулы. Возможно, что недостаток кислорода способствует высвобождению фактора ПФ, что косвенно может быть подтверждено экспериментами P.B.Fernandes et al, (1978), в которых они показали, что выращивание холерных вибрионов в анаэробных условиях при 37°С увеличивает выход мембраносвязанного токсина.

При внутрикожном введении клеток холерных вибрионов, убитых ионами серебра, в концентрации не инактивирующей фактор ПФ, высвобождения его из клеток вибрионов не наблюдалось.

Холерные вибрионы убитые ионами серебра в концентрации, разрушающей экзотоксин, инактивированные нагреванием при Ю0°С, а также холерный липополисахарид ШЛО при внутрикожном введении не вызывают образования папул.

Специфическая антитоксическая холерная сыворотка, введенная совместно с суспензией живых вибрионов внутрикожно, подавляет образование папул; холерная 0-агглютинирующая сыворотка существенно не влияет на этот процесс.

Исследования морфологических изменений в коже, вызываемые живыми холерными вибрионами, показали, что в месте введения холерных вибрионов развивалось острое воспаление с паралитическим расширением сосудов, эксудацией жидкости бедной белком, разрыхлением ткани, отеком кожи и подкожной клетчатки. Эндотелий сосудов набухал, увеличивалась порозность сосудов, отмечался выход через стенки капилляров форменных элементов крови. Вибрионы вызывали положительный хематаксис полиморфонуклеаров. Эти клетки (полиморфонуклеары) обладают различными ферментами, которые способны оказывать повреждающее действие на клеточные стенки, изменяя ее проницаемость (Пигаревский В.Е., 1975). Через 24 часа отек достигал максимальной величины. Макроскопически регистрировали хорошо сформированную пацулу. диаметром 10-15 мм. В коже (папуле) происходила смена форменных элементов - в дерме начинали преобладать мононук-леары. Через 48 часов отек уменьшался и к 72 часам отмечалась лишь незначительная отечность. Изменения в коже под действием токсигенных вибрионов сходны с изменениями, обусловленными действием холерного экзотоксина, причем отмечается выход из сосудистого русла отечной жидкости и торможение миграции полиморфонуклеа-ров.

Описанные морфологические изменения соответствуют результатам, полученным другими исследователями при введении экзотоксина (Roch -Arveiller et al., 1979; Kuroki Т., 1981).

С целью выбора состава среды и условий выращивания оптимальных для накопления фактора ПФ в культурах холерных вибрионов было проведено изучение влияния различных способов культивирования и некоторых веществ на этот процесс.

В экспериментах исследована активность фактора ПФ в культурах холерных вибрионов, выращенных на агаровой среде, на агаровой среде, покрытой целлофановой мембраной и в жидкой питательной среде; испытано влияние гиалуроновой и и -ацетилнейраминовой кислот; адениннуклеотидов: АТФ, АДФ, АМФ, цАМФд ферментов: пепсина, трипсина, липазы, -амилазы, ДНК-азы, РНК-азы и гиалуронидазы; солей: сульфата железа и хлористого магния; экстрактов тканей тонкой и толстой кишки человека и кролика на накопление фактора ПФ. в культурах холерных вибрионов, а также влияние перечисленных выше веществ на действие фактора ПФ в коже.

По данным А.А.Липкина (1974), И.П.Билько (1975) и некоторых других исследователей культивирование микроорганизмов на поверхности полупроницаемой мембраны, находящейся в контакте с твердой питательной средой, способствует получению в смыве высокоактивных антигенов и ферментов, свободных от примеси питательной среды. Нами также было установлено, что при вьфащивании холерных вибрионов на мембраноагаре (представляющем собой казеиновый агар, покрытый стерильной целлофановой пленкой) накопление фактора ПФ происходило более интенсивно, чем при выращивании их на казеиновом агаре без мембраны.

Морфология клеток вибрионов, вьфащенных на мембраноагаре несколько отличалась от морфологии клеток, выращенных на казеиновом агаре. С помощью электронного микроскопа в клетках вибрионов, выросших на мембраноагаре, в отличие от обычных агаровых культур, обнаруживалось разрыхление клеточной стенки, у некоторых клеток вибрионов - выпячивание клеточной поверхности в виде пузырьков.

Из испытанных сред: 2% агар, приготовленный из сердечной мышцы, агар Хоттингера с Ъ% крахмала и агар, приготовленный на ферментативном гидролизате казеина (аминный азот 175+25 мг%, рН 7,6 -7,8) лучшим для накопления токсина холерными вибрионами оказался казеиновый агар. Кроме того, казеиновые среды экономически более выгодны по сравнению со средами, получаемыми из высокосортного пищевого продукта (мяса).

Добавление в среду культивирования смеси солей сернокислого железа и хлористого магния способствует активации токсигенности у отдельных штаммов холерных вибрионов.

Полученные данные согласуются с результатами исследования J.K.Sagar et al* (1979, 1981), которые отмечали положительное влияние ионов железа и магния на размножение и синтез экзотоксина холерными вибрионами (штамм 569В) при культивировании в жидкой питательной среде.

Накопление фактора ПФ в культурах, выращенных на мембраноагаре происходило с одинаковой интенсивностью при 30° и 37°С.

Адениннуклеотиды: АТФ и ц/ШФд ^ в концентрациях 5 и 10 мкг на мембране стимулировали образование фактора ПФ в клетках штаммов вибрионов эльтор и не оказывали заметного влияния на синтез его в клетках вибрионов биовара холера. Увеличение концентрации адениннуклеотидов до 20 мкг не улучшало полученных результатов.

Гиалуроновая и я-ацетилнейраминовая кислоты не стимулировали накопление фактора ПФ в клетках вибрионов.

Исследованные нами ферменты в концентрации 1-5 мг/мл не подавляли роста холерных вибрионов.

Ферменты трипсин и гиалуронидаза, нанесенные на поверхность мембраноагара, достоверно (р < 0,025) увеличивали накопление фактора ПФ в клетках эльтор вибрионов и не влияли на накопление указанного фактора в клетках вибрионов биовара холера.

Ингибировали накопление фактора ПФ в культурах холерных вибрионов биовара холера ферменты РНК-аза и ДНК-аза, а биовара эльтор липаза и -амилаза.

В живой системе макроорганизма на токсигенность холерных вибрионов могут оказывать влияние комплексы ферментов и различных биологически активных веществ, поэтому было изучено влияние экстрактов ткани тонкой и толстой кишки человека и кролика на синтез холерными вибрионами фактора ПФ.

Результаты исследований показали, что стерильные экстракты, полученные из гомогенатов тканей тонкой и толстой кишки человека и взрослого кролика, не стимулировали накопление фактора ПФ в культурах холерных вибрионов.

При изучении влияния отдельных молекулярных компонентов клеток макроорганизма на активность препаратов холерного экзотоксина были испытаны: адениннуклеотиды, ферменты, гиалуроновая и К -ацетилнейраминовая кислоты, а также экстракты тканей тонкой и толстой кишки человека и кролика.

В экспериментах установлено, что адениннуклеотиды (АТФ, ДДФ, АМФ, цАМФд 5)» гиалуроновая и Я -ацетилнейраминовая кислоты в концентрациях 250 мкг/мл при совместном введении их с холерными вибрионами в кожу кролика не влияли на активность фактора ПФ.

Из испытанных ферментов трипсин оказывал активирующее действие на фактор ПФ при совместном введении в кожу кролика с холерными вибрионами биовара эльтор и не влиял на активность указанного фактора холерных вибрионов биовара холера. Фермент липаза ингибиро-вал активность фактора ПФ в холерных вибрионах биовара холера.

Об активирующем влиянии трипсина на экзотоксин холерных вибрионов в доступной нам литературе имеются лишь косвенные данные. Так, P.B.Fernandes et al. (1978) указывали на возможную роль протеоли-тических ферментов в стимуляции освобождения мембрано-связанного токсина, а также R.s.Rappoport et al. (1976) отмечали повышение активности фактора проницаемости- кишечной палочки под действием трипсина.

При совместном введении ферментов с препаратами холерного экзотоксина выявлено достоверное (р < 0,01) активирование фактора ПФ экзотоксина трипсином в концентрации I и 10 мг/мл и гиалурони-дазой в дозе 10 мг/мл.

Стимулирующее действие гиалуронидазы, по-видимому» можно объяснить деполимеризацией структур кожи, инактивирующих фактор ПФ.

Ферменты ДНК-аза и липаза в исследованных концентрациях подавляли (р< 0,01) активность фактора ПФ; РНК-аза и -амилаза не оказывали на него влияния.

Действие ферментов на экзотоксин зависит от их концентрации в среде. На примере липазы нами было показано, что высокие дозы токсина (100 кожных доз) инактивируются при наличие в среде не менее 2,5 мг/мл фермента и 24-часовой экспозиции. При снижении концентрации липазы или уменьшении периода инкубации ингибирующе-го действия не наблюдается.

Реакция токсин - фермент протекает относительно медленно, особенно при высоких концентрациях токсина в среде, причем для инактивации токсина важны количественные соотношения компонентов.

А.К.Адамов с соавт. (1979) установили, что взаимодействие фермента липазы и токсина эффективно при соотношении ТЕ/мл фермента = 80.

Гиалуроновая кислота, соли: сернокислое железо и хлористый магний не влияли на активность фактора ПФ экзотоксина. Не снижали активность экзотоксина (ПФ) экстракты тканей тонкой и толстой кишки человека и кролика.

На основании данных, полученных при изучении влияния различных условий на синтез фактора ПФ в клетках холерных вибрионов, была разработана стандартная методика, которая позволяет выявлять фактор ПФ у штаммов холерных вибрионов, выделенных из разных источников. Методом внутрикожного введения живых холерных вибрионов взрослому кролику можно на одном животном проверить токсигенность 10-14 штаммов. Предложенный метод обладает высокой чувствительностью, воспроизводимостью, не трубет дорогостоящих реактивов и специального оборудования, легко выполним.

Разработанная методика проверена на большом числе штаммов холерных вибрионов (518). Ее практическое применение показало, что по фактору ПФ выявляется большее количество штаммов, способных синтезировать экзотоксин, чем при использовании метода внутрики-шечного введения крольчатам 8-10 дневного возраста. Это можно объяснить более высокой чувствительностью кожного теста, позволяющего выявлять минимальные количества синтезируемого экзотоксина.

По данным ряда исследователей ( Craig J.p. ,1966; Burrows W.,

1966; Дурихин К.В. с соавт., 1976; Станиславский Е.С. с соавт., 1976; Шагинян И.А., 1984) метод внутрикожного введения экзотоксина значительно превышает чувствительность других биологических методов in vivo.

Анализ токсигенности штаммов холерных вибрионов показал, что культуры, вццеленные от людей в 90-95,6% (эльтор вибрионы), вызывающие холерогенную реакцию у крольчат, все обладали фактором ПФ.

Штаммы холерных вибрионов биовара эльтор, выделенные из объектов внешней среды,слабо синтезировали экзотоксин в кишечнике крольчат 8-10 дневного возраста (11,1% серовар Инаба, 14,7% серо вар Огава), но в значительно большей степени синтезировали фактор ПФ. Причем у штаммов серо вара Инаба процент культур высоко и умерено активных по фактору ПФ был выше (73,3%), чем у штаммов серовара Огава (54,6%).

Молено предположить, что клетки холерных вибрионов в процессе изменчивости под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды утрачивают быстрее свойство вызывать холерогенный синдром, а способность экзотоксина влиять на проницаемость клеточных мембран сохраняют несколько лучше. По-видимому, не исключена возможность, что холерные вибрионы при определенных благоприятных условиях могут восстанавливать энтеротоксическое свойство.

Для использования методики выявления фактора ПФ в живых холерных вибрионах при оценке их вирулентности нами были разработаны критерии, согласно которым по фактору ПФ штаммы можно разделить на вирулентные, слабовирулентные и авирулентные. Сравнительное исследование вирулентности с помощью комплексного метода in vitro , предложенного А.К.Адамовым с соавт. (1971) и определения фактора ПФ у живых холерных вибрионов показало, что все вирулентные по комплексному методу штаммы синтезируют фактор ПФ.

Обобщая полученные нами данные, необходимо отметить, что в результате проведенных исследований разработана методика определения фактора проницаемости в живых холерных вибрионах. В процессе изучения свойств холерных вибрионов модифицированы методики определения протеолитической и амилазной активности холерных вибрионов. Предложенные методики, проверенные на большом экспериментальном материале, позволяют получать не только более полную характеристику изучаемых культур, но и использовать их при определении вирулентных свойств холерных вибрионов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бугоркова, Татьяна Васильевна, Саратов

1. Адамов А.К., Мартене Л*А*, Джапаридзе М.Н., Егорова В.Д* Взаимодействие эндотоксинов холерного вибриона с юлекулярными системами клеток нормальных и иммунных животных* Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1972, вып.1, с.116-124.

2. Адамов А.К., Тихонов Н.Г. Роль серусодерхащих веществ в нейтрализации холерных экзотоксинов. Пробл«особо опасных инф. Саратов, 1976, вып.К4У), с.40-44.

3. Адамов А.К., Наумшина М.С., Солодовников Н.С., Бугоркова Т.В. Влияние ферментов на жизнеспособность холерных вибрионов.- Пробл. особо опасных инф. Саратов, 1976, вып.4, с.42-46.

4. Адамов А «К., Бугоркова Т.В., Наумшина М.С. Влияние липазы и антитоксинов на активность фактора кожной проницаемости холерных вибрионов. Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1979, вып.2(66), с.40-42.

5. Адамов А.К. Иммунология холеры. Изд-во Сарат.ун-та, 1981.-320с.

6. Адамов А.К. Механизмы иммунитета при холере.- В кн.: Специфическая профилактика холеры. Саратов, 1975, с.13-20.

7. Адамов А.К,, Мохин К.М., Хинц И.В., Наумшина M.C, Влияние никотиновой кислоты на реактивность кишечной мышцы к микробным антигенам. Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1969, вып.З, с.64-67.

8. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Гос.изд-во мед.литер., 1962.-180с.

9. Авроров В.П., Илюхин В.И., Иршенко Т.С., Компаниченко Г.В., Кирдеев В.К. К вопросу о десквамации слизистой тонкого кишечника и механизме обезвоживания организма при холере. Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1973, вып.4, с.148-153.

10. А.С. 625415 (СССР). Способ определения экзотоксигенных штаммов холерных вибрионов/Бугоркова Т.В., Адамов А.К., Наумшина М.С./.

11. А.С. 380326 (СССР). Способ получения холерного антигена/Липвин А.А./.Опубл. в Б.И., 1975, № I.

12. Авроров В.П., Саямов P.M., Илюхин В.И., Глянько Б.В., Бардых И .Д., Момот А.Г., Гончарова М.М. Экспериментальная модель холеры на щенках. -Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1972, вып.6, с.91-95.

13. Асеева Л.Б., Крупенина В.И., Фоменко H.M. Изучение холероген-ных свойств и метаболизма глюкозы у бактериальных и Л-форм холерных вибрионов. В кн.: Тез.обл. науч.-практ.конф. по пробл. "холера", Ростов-н/Д., 1984, с.51-52.

14. Бароян О.В., Гайлонская И.Н., Ферапонтов Г.К., Шагинян И.А., Вертиев Ю.В. Определение энтеротоксина холерного вибриона методом агрегат-гемагглютинации. Вестн.АМН СССР, 1979, № 2, с. 2631.

15. Белов Л .Г., Мохин К.М. Современные представления о холероген-ном токсине и механизме его действия. Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1972, вып.5, с.212-228.

16. Берлин А,Л,, Бердников В.А. Новый принцип культивирования микроорганизмов на полупроницаемых мембранах с проточной питательной средой. Вестн.микробиол., эпидемиол. и паразитол., 1930, т.9, вып.4, с.483-499.

17. Билько И.П. Способ получения биомассы микоплазм . Лабор.дело, 1975, № I, с.33-34.

18. Бургасов П.Н. Патогенез. В кн.: Холера Эль Тор. - М., 1971, с.35-41.

19. Брумштейн М.С., Ядрова И.К. Вопросы патогенеза и патологической анатомии холеры. Арх.патол., 1971, № 8, с.3-12.

20. Бессмертный Б.С. Математическая статистика в клинической, профилактической и экспериментальной медицине. М.: Медицина, 1967.-303с.

21. Бебуришвили Е.М. Получение антитоксического холерного эритро-цитарного диагностикума. В кн.: Особо опасные и редко встречающиеся троп.инф. Тез.докл.науч.конф. Волгоград, 1980, с.7-8.

22. Ванеева Л.И., Цветкова Н.В. Иммуноферментный метод, его настоящее и будущее. Имцунология, 1980, № 2, с.13-19.

23. Вертиев Ю.В. Факторы патогенности ферментативной природы.-В кн.: Факторы патогенности микроорганизмов: хим.природа, биол. функции и генетический контроль. М., 1974, с.9-10.

24. Вертиев Ю.В., Езепчук Ю.В., Горина Л.Г. Использование метода агрегат-гемагглютинации для определения нейраминидазы холерноговибриона. ЖМЭИ, 1980, № II, с.60-64.

25. Вертиев Ю.В. Холероподобные энтеротоксины бактерий: механизм действия и роль в патогенезе инфекционных заболеваний. В кн.: Молекул.биол., генетика и иммунобиол.возбудителей особо опасных инф. Тез.докл.Всесоюз.конф. Ростов-н/Ц., 1984, с.82-87.

26. Воронежская Л .Т., Сравнение некоторых методов повышения вирулентности и стабилизации свойств холерных вибрионов. В кн.: Сб.науч.тр. Махачкала, 1961, с.306-310.

27. Гамалея Н.Ф. Экспериментальные исследования холерных ядов (1892). В кн.: Гамалея Н.Ф. Собр.соч., т.4. М., I960, с.296-309.

28. Гайлонская И.Н., Жукова Э.В., Шагинян И.А., Святой В.И. Роль энтеротоксина и нейраминидазы в биологической активности вибрионов эльтор. ЖМЭИ, 1982, № 9, с.90-93.

29. Гайлонская И.Н., Ну ко в а Э.В. Методические рекомендации по постановке реакции пассивного иммунного гемолиза для определения энтеротоксина у холерных вибрионов (РПИГ).- М., 1980, 8с.

30. Гаврилова Е.М., Дзантиев Б.Б., Егоров A.M. Получение и свойства иммунопероксидазных компонентов.- Биохимия, 1979, т.44, в.9, с.1614-1621.

31. Глезеров В.З. 0 действии микробных токсинов на проницаемость 1фове-тканевого барьера.- йурн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1970, №9, с.43-46,

32. Горская Е.М., Чехова О.В., Щустрова Н.М. Морфологические и им-муноморфологические изменения в кишечнике и регионарных лимфатических узлах при хроническом носительетве холерного вибриона Эль

33. Тор у крыс гнотобионтов. Арх.патол., 1978, № 2, с.51-56.

34. Голубинский Б.П., Марчук Л.М., Тафельштейн Э,А., Марамович А.С. Методические рекомендации по определению токсигенности холерных классических и Эль Тор вибрионов по их ганглиозидсвязываю-щей способности.- Иркутск, 1981. 5с.

35. Губарев Е.М. Химические основы патогенности микроорганизмов.-В кн.: Биохимия микробов. Горький, 1964, с.5-21.

36. Далин М.В., Фиш Н.Г. Токсины микроорганизмов. В кн.: Микробиология. М., 1977, т.6. - 103с.

37. Далин М.В., Фиш Н.Г. Белковые токсины микробов.- М.: Медицина, 1980. 224с.

38. Джапаридзе М.Н., Адамов А.К., Мартене Л.Н., Егорова В.Д., Урю-пина Н.В. Эндотоксины холерного вибриона Эль Тор ингибиторы НАД-зависимых дегидрогеназ цикла Кребса у экспериментальных животных. - В кн.: 2-ой Всесоюзн.биох.съезд. Ташкент, 1969, с.24-25.

39. Джапаридзе М.Н., Мартене Л.А., Егорова В.Д., Караева Л.Т., Куликова В.Л. Холероген и некоторые внеклеточные ферменты холерного вибриона.- В кн.: Факторы патогенности микроорганизмов: хим. природа, функции и генетический контроль. М., 1974, с.31-32.

40. Домарадский И.В., Кобринский Г .Д., Соловьев В.Д. Некоторые аспекты экологии возбудителей холеры и роль их энзимов в патогенезе заболевания,- Вестн.АМН СССР, 1973, № 3, с.26-29,

41. Долматова Л.А., Ефременно В.И., Нарбутович Н.И., Владимцева И,В, Получение эритроцитарного ганглиозидного диагностикума для выявления холерного энтеротоксина и токсоида в реакции непрямой гемагглютинации. ШМЭИ, 1981, № 10, с.101-104.

42. Дурихин К.В. и Попова А.Е. Количественная оценка биологической активности фильтратов культуры холерного вибриона (холерогена) на белых мышах. ШЭИ, 1974, № 9, с.52-56.

43. Дурихин К.В., Попова А.Ё. Сравнительная характеристика некоторых количественных методов оценки биологической активности холе-рогена,- Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1974, вып,4, с.88-89.

44. Дурихин К.В., Попова А.Е., Кобринский Г .Д. Продукция холерогена и нейраминидазы холерными вибрионами in vitro .- Бюл.эксперим. биол. и мед., 1976, т.81, № 5, с.566-567.

45. Езепчук Ю.В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий.-М.: Наука, 1977. 215с.

46. Езепчук Ю.В., Вертиев Ю.В., Денисов П.А. Роль нейраминидазы в функции бактериальных токсинов.- Щурн. молекул•генетикашкроби-ол. и вирусол., 1983, № I, с.21-24.

47. Ермольева З.В., Зыкин Л.Ф., Петрова Л.С. Современные представления о холерных токсинах и природе противохолерного иммунитета.-В кн.: Матер. 15 Всесоюз.съезда эпидемиол., микробиол. и инф. Тез .докл. Тбилиси, 1970, чЛ, с.260-261.

48. Ерохин Е.П., Домарадский И.В., Рас судов С.М., Путница И.П. Метод серологического титрования энтеротоксина холерного вибриона. Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1974, вып.2, с.142-144.

49. Ефимцева Е.П. Пирогенные свойства одной из полисахаридных фракций холерных вибрионов. ШЭИ, 1962, № 10, с.140-141.

50. Ефременко В.И. Получение кристаллических препаратов холероге-на и холерогеноида. ЖМЭИ, 1978, № 4, с.45-48.

51. Ефременко В.И. Молекулярная организация и функции белковых токсинов возбудителей холеры и чумы. ОДЭИ, 1983, № II, с.7-13.

52. Жукова Э.В., Шагинян Н.А., Гайлонская И.Н. Определение энтеротоксина холерных вибрионов методом пассивного иммунного гемолиза. ЖМЭИ, 1981, № 4, с.55-59.

53. Закревский В.И., Ефременко В.И., Лобанов В.В., Долматова Л.А. Изучение возможности очистки холерного токсина (холерогена) и антител к нему методом иммуносорбции. ЖМЭИ, 1979, № 5, с.30-34.

54. Зыкин Л.Ф., Петрова Л.С., Джапаридзе М.Н., Егорова В.Д., Бор-зов D.C. Получение экзотоксина холерного вибриона (холерогена) и изучение его свойств. Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1970, вып.б, с.17-23.

55. Зыкин Л.Ф. Клеточные структуры и токсины холерного вибриона: Дис. д-ра мед.наук. Саратов, 1971. - 33с.

56. Карачолева М.П., Мирчева И .П., Желева М. Изучение холерных экзотоксинов. I. Получение и изучение фактора, повышающего проницаемость капилляров кожи. В кн.: Тез.докл.3-й конгр.по мик-робиол. София, 1973. София, 1975, ч.2, с.113-115.

57. Киселев П.Н. Токсические вещества холерного вибриона.- В кн.: Токсикология инфекционных процессов. Л., 1971, с.41-43.

58. Кияткинов Б.Л., Зыкин Л.Ф., Герасименко Р.Т., Каримов Ш.М., Бурлаченко Т.А., Зотова Р.С., Незамов Ф.А., Святой В.И., Развых В.М. Холерогенность вибрионов Эль Тор. Журн. здравоохр.ТУркм.,1977, № 9, с.12-17.

59. Коробкова Е.И. Микробиология и эпидемиология холеры. 2-е изд. доп. и переработ. - М.: Медгиз, 1959- 304с.

60. Колесник B.C., Осипенко И.И. К патоморфологии экспериментальной холерной интоксикации у белых мышей. Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1969, вып.б, с.219-229.

61. Кох Р. Сообщение о холере на совещании по холере в 1884 г.-Врач, 1884, № 31, с.530-531.

62. Коровкина Г.В. Сообщение о выделении нового токсигенного штамма холерного вибриона Эль Тор. В кн.: Докл.Иркут.противочум. ин-та, 1971а, вып.9, с.103-104.

63. Коровкина Г.В., Козаренко Т.Д., Цугачева Н.Н., Урбаневич Л.Я., Каретникова Э.С., Сафонова А.Д., Осипенко И.И., Трофименко Н.З. Характеристика экзотоксина холерного вибриона Эль Тор. ШЭИ, 1973, № II, с.50-54.

64. Коровкина Г.В. К вопросу об изучении токсина первого типа холерного вибриона. В кн.: Докл.Иркут.противочум.ин-та, вып.9, 1971, с.101.

65. Котенок Я.Ф., Ураков Н.Н. Экспериментальная холера у морских свинок. Сообщение I. Разработка метода заражения. ШЭИ, 1976, № II, с.84-87.

66. Корнев А .В., Атрохов В. В. Влияние холерного фильтрата на аде-нилатциклазную систему in vitro.-Бюл.эксперим.биол. и мед., 1979, № 10, с.414-416.

67. Козьфева Л.А., Терновой В.И., Бардых И.Д., Гольдберг A.M. Количественный метод оценки энтеротоксигенных свойств вибрионов на мышах-сосунках, зараженных per os и per anum . В кн.: Патол.физиол.особо опасных инф. Саратов, 1981, с.45-49.

68. Козьфева Л.А., Терновой В.И., Гальцева Г.В., Кобринский Г .Д., Голотина Н.Б. Роль нейраминидазы в црилипании вибрионов к кишечному эпителию. В кн.: Особо опасные инф. на Кавказе. Ставрополь, 1978, с.387-389.

69. Колесникова Л.И., Гулида М.М., Фейцалова О.П., Кутырева И.В. Значение лецитиназы (фосфолипазы С) в вирулентности возбудителя холеры. В кн.: Тез.докл.обл.науч.-практ.конф. по пробл."холера", Ростов н/Д., 1984, с.90-91.

70. Космоенко О.М. Разработка аппаратного метода культивирования чумного микроба и холерного вибриона на полупроницаемых мембранах.: Автореф.дис. .кащ.биол.наук.- Саратов, 1981 22с.

71. Либинзон А.Е., Терновой В.И., Киселева И.Е. 0 холерогенном действии вибрионов Эль Тор. В кн.: Физиол. и генетика микроорганизмов. Ростов-н/Д., 1969, сЛ35-137.

72. Лобанов В.В., Илюхин В.И., Филиппова Л.Н. Биологические и им-мунохимические свойства эндотоксинов холерных и нехолерных вибрионов.- Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1971, вып.6, с.19-23.

73. Лобанов В.В. Опыт титрования фактора цроницаемости и эндотоксина холерного вибриона в коже морских свинок.- Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1971а, вып.6, с.36-38.

74. Лобанов В.В., Мехедов Л.Н., Лосева Н.Л. и Филиппова Л.Н. Изучение условий выработки фактора проницаемости холерными вибрионами. МЭИ, 1974, № 5, с.88-91.

75. Лобанов В.В., Андрусенко И.Т., Милютин В.Н. Электронная микроскопия холерных вибрионов из содержимого кишечника зараженных кроликов—сосунков. ЖМЭИ, 1975, № 7, с.90-92.

76. Лобанов В.В., Сухарь В.В., Подосннникова Л.С. Сравнение активности холерогена и фактора проницаемости.- Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1976, вып.З, с.48-49.

77. Лобанов В.В. Методические рекомендации по применению реакции связывания комплемента для определения холерогена-токсина, холе-рогена-анатоксина и холерного 0-соматического комплекса в растворимых препаратах. Ростов-н/Д., 1978. - 8с.

78. Лобанов В.И., Милютин В.Н., Копылов В.А., Кириллова Н.Л., Караева Л.Т., Никитина Г.П. Получение холерного токсина на среде из очищенного дрожжевого экстракта в различных условиях культивирования. Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1979, вып.5, с.24-27.

79. Лобанов В.В.; Караева Л.Т., Никитина Г.П. Изучение токсиноге-неза у двух штаммов холерных вибрионов.- В кн.: Тез.обл.науч.-практ.конф. по пробл. "холера". Ростов-н/Д., 1984, с.134-136.

80. Мальцев В.Н. 0 токсическом действии бактериальных эндотоксинов на организм. КМЭИ, 1968, № 8, с.37-42.

81. Мечников И.И., Ру Э., Торрели-Салимбени. Холерный токсин и антитоксин (1896). В кн.: Мечников И.И. Изб.труды. М., 1951, с.414-444.

82. Меркулов Г.Н. Курс патологогистологической техники. Л.: Медицина, 1969. - 422с.

83. Мельников Н.И., Мельников В.Н., Гимранов М.Г. Ферменты патогенности и токсины бактерий. М.: Медицина, 1969. - 262с.

84. Мелихов В.И., Юркив В.А. Влияние холерного энтеротоксина на содержание цАМФ в слизистой тонкой кишки кролика. В кн.: Циклические нуклеотиды. Тез.докл. Минск, 1982, с.93-94.

85. Машилова Г.М. Некоторые ферменты как факторы патогенности микробов. В кн.: Совр.методы исслед. в микробиол. и иммунол. М., 1963, т.19, с.57-65.

86. Наумшина М.С., Адамов А.К. К методике получения холерогенного токсина.- Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1971, вып.6, с.172-176.

87. Наумшина М.С., Адамов А.К. Роль ферментов в разрушении холерного токсина. В кн.: Хим.вакцины. Матер.конф., посв.пам.И.И. Мечникова (15-16 июня 1971 г.). М., 1971а, с.II.

88. Наумшина М.С., Адамов А.К., Боровикова Т.П. О токсинах холерного вибриона. В кн.: Факторы патогенности микроорганизмов: хим. природа, биол.функции и генетический контроль. Тез.докл.2-го Всесоюзн.симпоз. М., 1974, с.42-43.

89. Наумшина М.С., Боровикова Т.П., Адамов А.К. Вещества, ингиби-рующие активность холерогенного токсина и фактора проницаемости.-Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1974, вып.б, с.93-95.

90. Никонов А.Г., Евсеева В.И., Бибикова П.Д., Бичуль К.Г. Культивирование холерных вибрионов в тонком кишечнике морских свинок. -Журн.микробиол., эпидемиол. и имъфгнобиол., 1958, № 12, с.51-53.

91. Никитина Г.П., Караева Л.Т., Кузнецова О.Р., Митрошина Т.Ф. Условия сохранения активности холерных токсинов.-Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1977, № б, с.56-59.

92. Огаренко Н.Б. Влияние эндотоксина холерного вибриона на дыхание митохондрий тонких кишок морских свинок, белых крыс и мышей.-Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1972, вып.4, с.92-94.

93. Огаренко Н.Б. К вопросу об ингибирующем действии холерного эндотоксина на окислительное фосфорилирование и свободное окисление в митохондриях тонких кишок морских свинок.- Пробл.особоопасных инф. Саратов, 1972а, вып.5, с.208-211.

94. Огаренко Н.Б. Влияние токсинов холерного вибриона на окислительный метаболизм в митохондриях тонкого кишечника экспериментальных животных: Автореф.дис. .канд.биол.наук. Саратов, 1975. - 12с.

95. Пастернак Н.А., Ведьмина Е.А., Андрусенко И.Т., Шендерович В.А., %равлева Т.П., Соболев В.Р. Модель УФ-2 цутанта Staphylococcus aureus 209р для титрования энтеротоксина холерных вибрионов. ШЭИ, 1983, № 7, с.55-59.

96. Пастернак Н.А., Ведьмина Е.М., Андрусенко И.Т., Шендерович В.А., Журавлева Т.П., Соболев В.Р. Титрование энтеротоксина холерных вибрионов на модели УФ-2 мутанта Staphylococcus aureus 209р. Лабор.дело, 1983а, № 9, с.52-53.

97. Первухина Н.К., Голубев A.M. Морфофункциональные изменения вкишечнике кроликов под действием токсинов холерных вибрионов.- Арх. патол., 1981, т.43, №7, с.59-62.

98. Пигаревский В.Е. Лизосомально -катионный тест и перспективы его применения в патоморфологической и лабораторной диагностической практике. Арх.патол., 1979, №5, с.74-80.

99. Попова А.Е., Дурихин К.В. Основные закономерности развития отека лапок белых мышей, вызванного холерным экзотоксином.-Пробл.особо опасных инф. Саратов, 1975, вып.6, с.56-59.

100. Позднякова Л.И., Щеглова М.К. Очистка пектолитического и про-теолитического комплексов ферментов возбудителя токсического бактериоза арбузов. В кн.: Методы получения высокоочищенных ферментов. Вильнюс, 1978, с.35-36.

101. Пфейффер Р., Фридбергер Е. Сущность вредоностности бактерий по исследованиям над холерными вибрионам.-Вестн.общ.гиг. 1902, т.2, с.1385.

102. Савельев В.Н., Грижебовский Г.М., Евченко Ю.М. Выявление холе-роген-экзотоксина вибрионов in vitro. В кн.: Болезни с природной очаговостью на Кавказе. Тез.докл.краев.научн.конф.,поев.60-летиго образования СССР. Ставрополь, 1982, с.124-125.

103. Савкина Л.Н., Ефимцева Е.П., Ермольева З.В. К сравнительной оценке двух полисахаридосодержащих препаратов у вибрионов эльтор. Антибиотики, 1974, № 6, с.535-539.

104. Саямов P.M., Авроров В.П., Ханумьян Т.А. Штамм вибриона Эль Тор серотипа Огава продуцент холерного экзотоксина.- ЗНурн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1983, № 3, с.40-42.

105. Сепетлиев Д. Статистические методы в научных медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1968. - 418с.

106. Скавронская А.Г., Гайлонская И.Н., Вертиев Ю.В., Алешкин Г.И., Тиганова И.Т., Шагинян И.А., Езепчук Ю.В. Генетический контроль токсинообразования у холерных вибрионов. Журн.микробиол., эпидемиол. и имк^унобиол., 1981, № 7, 0.22-2*?.

107. Солодовников Н.С., Адамов А.К. Вибриоцидные и вибриостатиче-ские свойства ферментов. Пробл.особо опасных инф. Саратов, 197I, вып.З, с.23-28.

108. Соловьев В.Д., Кобринский Г.Д., Гальцева Г.В., Саямов P.M. О роли нейраминидазы холерных вибрионов в патогенезе холеры. -В кн.: Факторы патогенности микроорганизмов: хим.природа, биол. функции и генетический контроль. М., 1974, с.28-29.

109. Строганов В.В. Применение мембранной технологии в изготовлении холерного токсина: Автореф.дис. .канд.биол.наук. Саратов, 1981. - 19с.

110. Станиславский Е.С., Волынский М.Я. Энтеротоксины энтеробакте-рий. Журн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1976, № 10, с. 3-8.

111. Сыресина-Недугова Г.И., Рубцов И.В., Мартынов Ю.В. Фракционирование энтеротоксина v.choierae методом изоэлектрического фокусирования в градиенте амфолинов.- Ж|урн.микробиол., эпидемиол. и им-мунобиол., 1979, №5, c.IIO-III.

112. Тафельштейн Э.Е., Вейде А.А., Блинова Л.С. Дегидрогеназы клеточных структур холерных и неагглютинирующихся вибрионов.- Пробл. особо опасных инф. Саратов, 1978, вып.4, с.67-69.

113. Тафельштейн Э.А., Марамович А.С., Вейде А.А., Пинигин А.Ф., Блинова Л.С. Нейраминидазная активность холерных вибрионов эль тор различной патогенности. В кн.: Специфическая профилакт.чумы ихолеры. Саратов, 1980, с.83-84.

114. Тихомирова М.М. Фактор распространения у холерных и водных вибрионов. Автореф.докл.науч.конф., поев.25-летию ТУркм.ШС. Ашхабад, 1961, с.41-42.

115. Тихонов Н.Г., Адамов А.К. К механизму взаимодействия холерных экзотоксинов с тканями организма.- ШЭИ, 1980, № 10, с.104-106.

116. Фейцалова О.П. Мутагенное действие И-нитрозометилмочевины на холерные вибрионы и характеристика спонтанных и индуцированных мутантов некоторых типов: Автореф.дис. .кацц.мед.наук.-Саратов, 1981.- 22с.

117. Холера в 1981 г.- Хрон.ВОЗ, 1982, т.36, $ 5, с.44.

118. Хусаинова С.А., Савицкая Л.А., Зайцева Т.С. Ферментативная активность неагглютинирующихся вибрионов.- Мед.журн.Узбекистана, 1980, № 7, с.91-92.

119. Шахламов В.А. Новые данные о механизмах действия холерного токсина.-Арх.патол., 1980, т.42, №5, с.75-83.

120. Шагинян И.П., Маракуша Б.И. Модификация метода пассивного иммунного гемолиза на плотной среде для выявления продукции термолабильных энтеротоксинов штаммами холерных вибрионов и кишечной палочки. ШЭИ, 1983, № 7, с.92-96.

121. Шагинян И.А. Холероподобные энтеротоксины бактерий: методология диагностики. В кн.: Молекул.биол., генетика и иммунобиол. возбудителей особо опасных инф. Тез.докл.Всесоюз.конф. Ростов-н/Д., 1984, с.73-78.

122. Эмдина И.А., Алексеева Л.П. Экзотоксины холерных вибрионов и методы их изучения. В кн.: Тез.обл.науч.-практ.конф. по проблеме "холера". Ростов-н/Д., 1984, с.118-120.

123. Яговкин Э.А., Домарадский И.В., Киселева В.И., Лобанов В.Н. Получение и некоторые биологические свойства липополисахаридов холерного вибриона. ЖМЭИ, 1972, № 10, с.47-51.

124. Яговкин Э.А., Домарадский И.В., Грищенко А.Н., Фомичева А.С. Антигенные и протективные свойства липополисахаридов холерного вибриона Эль Тор. В кн.: Специфическая профилакт.холеры. Тез. докл.на Всесоюз.симпоз. Саратов, 1975, с.84-86.

125. Яговкин Э.А. Иммунохимическая гетерогенность липополисахаридов V.cholerae Eltor и методы их фракционирования. ЖМЭИ, 1981, № 5, с.93-96.

126. Яговкин Э.А. Имьяунохимические и биологические свойства липополисахаридов холерного вибриона Эль Тор: Автореф.дис. .канд. мед.наук. Саратов, 1981а. - 20с.

127. Яровая Л.М. Некоторые данные о биохимических свойствах токсинов эшерихий, холерного вибриона и пшгелл. ЖМЭИ, 1981, № 4, с.16-24.

128. Akhter М.Н., Sabir М., Bhide Anti-inflammatory effectof berberine in rats injected locally with cholera toxin. -Indian J.Med.Res., 1977, v.65, N 1, p.133-141.

129. Antoni G., Marsili I., Tarili 0., ITeri P. Resistance of purified cholera toxin to enzymatic tratment with pancreatic elacta-se and papain. Expexdenta, 1976, v.32, N 8, p.971-972.

130. Arbuthnoft J.P. Role of exotoxins in bacterial pathogenicity* J. Appl. Bacterid., 1978, v.44, p.329-345.

131. Avrameas S. Coupling of enzymes to proteins with glutaralde-hyde. Innminochemistry, 1969, v.6, p.43-48.

132. Banwell J.G., bepot A., Hanke D.W., Sigdiestad C. Small intestinal epithelial renewell in the Syrian hamster exposed to cholera enterotoxin. J.Gastroenterol., 1978, v.75, H 4, p.717-722.

133. Barth S.S., Baselski V.S., Parker C.D. Clinical and environmental isolates of Vibrio cholerae studied in the infant mouse.- In: Abstrs.79th Ann.Meet Amer.Soc.Microbiol . Los Angeles, Calif., 1979, Washington D.C., 1979, p.18-24.

134. Baselski V., Briggs R., Parker C. Intestinal fluid accumulation induced by oral challenge with V.cholerae or cholera toxin in infant mice. Infect. Immun., 1977, v.15, p.704-712.

135. Baaelski V.S., Upchurch S., Parker Ch. Isolation and phenoty-pio characterization of virulence-deficient mutants of Vibrio cholerae. Infect.Immun., 1978, v.22, ff 1, p.181-188.

136. Bennet V., O'Keefe Б., Cuatrecases P. Mechanism of action of cholera toxin and the mobile receptor theory of hormone receptor-adenylate cyclase interactions. Proc.Uat.Acad.Sci.USA, 1975, v.72, К 1, p.33-37.

137. Berkenbill P., Delancy R. Stimulation of adenylate cyclase by Vibrio cholerae toxin and its active subunit.- J.Infect.Dis., 1976, v.133, p.82-88.

138. Bhatia A.L., Tandon H.K.L., Thomas A.K. Studies on cholera type 2 toxin: physical and chemical characterisation, concentration and titration of toxin. Indian J.Microbiol., 1977, v.17# U" 1, p. 13-22.

139. Burrows W. Cholera vibrio toxicities. Ins Proc.cholera Res. Symposium. January, 24-29, 1965* Honolulu, Hawaii. Washington, 1965, p.120-124.

140. Burrows W., Musteikis G. Cholera infection and toxin in the rabbit ileal loop. J.Infect.Dis., 1966, v. 116, TS 2, p. 183-190.

141. Burrows W. Cholera toxins. Ann.Rev.Microbiol., 1968, v.22, p.246-268.

142. Burrows W., Kaur J. Cholera toxins. In: Cholera. Ed. by Barua D. and Burrows W., Philadelphia-London-Toronto, W.B.Saunders Company, 1974, v. 7, p.143-167*

143. Carpenter C.C.J. Pathogenesis and pathophysiology of cholera.-In: Principles and Practice of cholera Control /Geneva/, WHO, 1970, 10, p.53-56.

144. Carpenter C.C.J., Greenough W.B. Response of the canine duodenum to intraluminal challenge with cholera exotoxin. J.Clin. Invest., 1968, v.47, ЕГ 12, p.2600-2607«

145. Chatterjee P.K., Rao S.S., Dutta U.K. Attempt to characterizecholeragenic fraction and the skin permeability factor from vib- . .rio culture filtrates as separate identity. Indian J.Med.Res., 1972, v.60, IT 11, p.1568-1574.

146. Chatterjee P.K., Rao S.S., Dutta N.K. Studies on the nature and antigenicity of the toxins produced by V.cholerae. Indian J.Med.Res., 1973, v.61, N 12, p.1751-1757.

147. Chen L.C., Rohde J.E., Sharp G.W.G. Properties of adenyl cyclase from human jejunal mucosa during naturally acquired cholera convalescence. J.Clin.Invest., 1972, v.51, p.731-740.

148. Craig J. P. A permeability Factor (Toxin) found in Cholera stools and Culture Filtrates and its neutralization by convalescent cholera sera. Nature, 1965, v.207, p.614-616.

149. Craig J.P. Preparation of the vascular permeability factor of Vibrio cholerae. - J.Bacterid., 1966, v.92, N 3» P.793-795.

150. Craig J.P. Cholera toxins, In: Microbiol toxins, v,2 "A", Bacterial.protein toxins, N-y-London. Ac.Press, 1971, v.5> p.189-254.

151. Craig J.P., Echner E.R., Hornick R.B. Cutaneous responses to cholera skin toxin in man* I.Responses in immunized American males. J.Infect.Die., 1972, v.125, p.203-315.

152. Craig S.t Cuatrecasas P. Immunological probes into the mechanism of cholera toxin action, Immun.Communs., 1976, v. 5, IT 5» p.387-400.

153. Coleman W.H., Kaur J., Inwert M.E., Kasai G.J., Burrows W. Cholera toxins: purification and preliminary characterisation of ileal loop reactive type 2 toxin. J.Bacterid., 1968, v.96, p.1137-1139.

154. Cuatrecasas P. Vibrio cholerae Choleragenoid. Mechanism of Inhibition of Cholera Toxin Action. Biochem., 1973» v.12, N 18, p.3577-3581.

155. De S.N,, Ghosh M.L., Chandra J, Further observations on cholera enterotoxln, Trans,roy,Soc,trop.Med. and Hyg., 1962, v,56, N3, p.241-245.

156. De S,N, Enterotoxicity of bacteria-free culture filtrate of Vibrio cholerae. Nature, 1959, v.183, p.1533-1534.

157. De S.N., Chatterjee D. An experimental study of the mechanism of action of V.cholerae on the investinal mucousmembrane.-J.Biochem., Bacterid., 1953, v.66, N 2, p.559.

158. Donta S,T, Interactions of choleragenoid and Gm^ ganglioside with enterotoxins of Vibrio cholerae and Escherichia coli in cultured adrenal cells. J,Infect.Dis., 1976, v.133, p.115-119.

159. Donta S.T., King M., Sloper K. Inducation of steroidogenesis in tissue culture by cholera enterotoxin. Nature, New Biol., 1973, v.243, U 129» p.246-247.

160. Donta S.T. Neutralization of cholera enterotoxiM-induced steroidogenesis by specific antibody.- J.Infect.Dis., 1974» v.129, p.284-288.

161. Dutta U.K., Habbu M.K. Experimental cholera in infant rabbits; a method for chemotherapeutic investigation. Br.J,Pharmacol., Chemother., 1955, v.10f p.153-159.

162. Dutta U.K. Choleragenic toxin a new factor in the causation of cholera.- J.Sci.Indastr.Res., 1969, v.28f N 9, p.334-338.

163. Dutta N.K., Panse M.V., Kulkarni D.R. Role of cholera toxin in experimental cholera. J.Bacterid.» 1959, v.78, N 4, p.594-595.

164. Evans D.J., Richardson S.H. In vitro production of choleragen and vascular permeability factor by vibrio cholerae. J.Bact., 1968, v.96, N 1, p.126-130.

165. Eriesson C.D., Evans D.G., Du Pont H.L., Evans D.J., Pickering L.K. Bismuth Subsalicylate Inhibits activity of crude toxins of E.coli and v.cholerae. J.Infect.Dis., 1977, v.136, N 5, p.693-696.

166. Fackrell H.B., Wiseman G.M. Production and Purification of the Gramma Haemolysin of Staphylococcus aureus "Smith 5R".- J. Gen.Microbiol., 1976, v.92, part 1, p.1-10.

167. Felix H. Situation epidemiologique actuelle du cholera dans le monde. Ann.Microbiol., 1980, V.A131, N 1, p.113-114.

168. Fernandes P.B., Smith H.L. The effect of anaerobiosis and bile salt on the growth and toxin production by Vibrio cholerae.-J.Gen.Microbiol., 1977, v.98, p.77-86,

169. Fernandas P.В., Bayer M.E. Membrane-bound enterotoxin of Vibrio cholerae. J.Gen.Microbiol., 1977, v.103, N 2, p.381-387.

170. Finkelstein R.A., Kye S.W., Atthasampunna P., Charunmethee P. Pathogenesis of experimental choleras Effect of choleragen on vascular permeability. Lab.Invest., 1966, v.15, N 10, p.1601-1609»

171. Finkelstein R.A., Jahl J.J., Goth A. Pathogenesis of Experimental Cholera: Cholerage n-induced. Rat Foot Edema; a Method of Screening Anticholera Drugs. Proc.Soc.Exp.Biol, and Med., 1969, v.132, N 3, p.835-840.

172. Finkelstein R.A., LoSpalluto J.J. Crystalline cholera toxin and toxoid. Science, 1972, 175, p.529-530.

173. Finkelstein R. Observations on the cholera enterotoxin (choleragen). Jap.J.Med.Sci.Biol., 1975a, v.28, N 1, p.76-78.

174. Finkelstein R.A. Cholera enterotoxin. In: Microbiology. -1975, Washington, D.C., 1975, p.236-241.

175. Finkelstein R.A., Eorris H.T., Dutta U.K. Pathogenesis of experimental cholera in infant rabbits. 1 Observations on the intraintestinal infection and experimental cholera produced with cell-free products. J.Infect.Dis., 1964, v.114, IT 3, p.203-217.

176. Finkelstein R.A., Atthasampuna P., Chulasamayu M., Charunmethee P. Pathogenesis of experimental cholera: biologic activities of purified procholeragen A. J.Immunol., 1966, v.96, IT 3, p.440-449.

177. Finkelstein R.A. The role of choleragen in the pathogenesis and immunology of cholera. Texas Rep.Biol.Med., 1969, v.27, N 1, p.181-201.

178. Field M. Intestinal secretion: effect of cyclic AMF and its role in cholera. N.Engl.J.Med., 1971, v.284, p.1137-1144.

179. Field M. Mode of action of cholera toxin: stabilization of catecholamine-sensitive adenylate cyclase in turkey erythrocytes. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1974, v.71, H 8, p.3299-3303.

180. Field M., Fromm D., Al-Awoqati Q., Greenough W.B. Effect of cholera enterotoxin on ion transport across isolated ileal mucosa. J.Clin.Invest., 1972, v.51, N 4, p.796-804.

181. Fishman P.H., Role of membrane gangliosides in the binding and action of bacterial toxins. J.Membrane Biol., 1982, v.69, И 2, p.85-97.

182. Fishman P.H., Moss J., Osborne J.C. Interaction of choleragen with the oligosaccharide of ganglioside Gm^: evidence for multiple oligosaccharide binding sites. Biochemistry, 1978, v.17, N 4, p.711-716.

183. Flores J., Grady G., Mclver J., Witcum P., Becman В., Sharp G.W.G. Comparison of the effects of enterotoxins of Shigella dysenteriae and Vibrio cholerae on the adenylate cyclase system of the rabbit intestine. J.Infect.Dis., 1974, v.130, H 4, p.374-379.

184. Forsyth G.W., Hamilton D.L., Goertz K.E., Johnson M.P. Cholera toxin effects on fluid seoretion adenylate cyclase and cyclic AMP in porcine Small intestine. Infect.Immun., 1978, v.21,", H 1, p.373-380.

185. Gallut J. Contribution a l1etude de la toxine cholerique: variation du pouvoir toxique de Vibrio cholerae (Ogawa) an cviers de maladie. Ann.Inst.Pasteur, 1954, Я 86, p.561-569.

186. Gallut J. Contribution a l1etude du complexe antigenique "0" des vibrions. Relations immimologiques antre v.cholerae et vib-rions dits inagglutinabeles (HAG).- Ann.Inst.Pasteur, 1960, v.99, И 1, p.28-55.

187. Ganguly R., Misra S.B., Shrivastava D.L. Studies iq. immuno-chemistry of Vibrio cholerae* V11. Action of enzymes on the antigens. Indian.J.Med.Res., 1967, v.55, N 7, p.671-673.

188. Ganguly U., Greenough W.B. Stimulation of epinephrine-sensi-tive fat cell adenylate cyclase by cytosol: effect of cholera toxin.- Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 1975, v.72, p.3561-3564.

189. Gill D.M., Meren R. ADP-ribosilation of membrane proteins catalysed by cholera toxin: basis of the activation of adenylate cyclase. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1978, v.75, p.3050-3054.

190. Gill D.M., Rappaport R.S. Origin of the enzymatically active A1 fragment of cholera toxin. J.Infect.Dis., 1979, v.139, N 6, p.674-680.

191. Grady G.F., Madoff M.A., Duhamel R.C., Moore E.W., Chalmers T.G. Sodium transport inhibition by chfclera toxin: the role of non-ionic diffusion of ammonia. J.Infect.Dis., 1968, v.18, N 3, p.263-270.

192. Greenough W.B., Pierce N.P., Vaughan M. Titration of cholera enterotoxin and antitoxin in isolated fat cells. J.Infect.Dis., 1970, v.121, p.111-113.

193. Guerrant R.L., Chen L.C., Sharp G.W. Intestinal adenylcyclase activity in canine cholera: correlation with fluid accumulation.-J.Infect.Dis., 1972, v.125, N 4, p.377-381.

194. Harris C.C., Yolken R.H., Krokan H., Hsu Ihn Clang. Ultra-sensitivity enzymatio radioimmunoassay: application to detection of cholera toxin and rotavirus. Proc.3Jatl.Acad.Sci.USA, 1979, v.76, p.5336-5339.

195. Heckly R.J., Walochow H. Characterization and purification of cholera toxin. J.Infect.Dis., 1970, N 121, p.80-84,

196. Heytmancik K.E., Peterson J.W., Markel D.E., Kurosky A* Radioimmunoassay for the Antigenic Determinants of cholera Toxin and Its Components. Infect.Immun., 1977, v.17, N 3, с.621-628.

197. Hewlett E.L., Guerrant R.L., Evans D.J., Greenough W.B. Toxins of Vibrio cholerae and E.coli stimulate adenyl cyclase in rat fat cells. Nature, 1974, v.249, p.371-373.

198. Holmgren J., Lonnroth I., Ouohterlony 0. Immunochemical studies of two cholera toxins containing standard culture filtrate preparatioms of vibrio cholerae. Infect.Immun., 1971, v.3, N 6, p.747 -755.

199. Holmgren J. Comparison of the tissue for Vibrio cholerae and Escherichia coli enterotoxins by means of gangliosides and natural cholera toxoid. Infect.Immun., 1973, v.8, N 4, p.851-859.

200. Holmgren J., Lonnroth I. Oligomeric structure of cholera toxin: characteristics of the nH" and L-subunits.- J.Gen.Microbiol., 1975, v.86, part 1, p.49-65.

201. Holmgren J,, Lonnroth I, Structure and function of entero- ~ - % .toxins and their receptors. In: Cholera and Relat.Diarrheas. Mol.Aspects Glob.Health Probl.43-d Nobel Symp. WHO, Stockholm, 1978. Basel e.a., 1980, p.88-103.

202. Holmgren J. Actions of cholera toxin and the prevention and treatment of cholera. Nature, 1981, v.292, N 5822, p,413-417.

203. Jacobs J.W., Niall H.D., Sharp G;W.G. The aminotermlnal sequence of cholera toxin subunits. Biochem.Biophys.Res.Commun., 1974, v.61, N 2, p.391-395.

204. Jenkin C.R» The immunological relationship of a protein toxin from Vibrio comma to its "0n somatic antigen. Immunology, 1959» v.11, N 2, p.363-367.

205. Jenkin C.R. Possible factors in the pathogenesis of cholera.-Br.J.Exp.Pathol., 1959, v.40, N 5» p.474-481.

206. Jenson K.E. Isolation of protective somatic antigen from v.cholerae (Ogawa) ribosomal preparations.- Infect.Immun.» 1972, v.6, N 2, p.156-161.

207. Jenkin C.R., Rowley D. Toxic proteins from V.cholerae and water vibrios which ore lethal for mice.- J.gen.Microbiol., 1959, v.21, IT 1, p.191-202.

208. Joseph K.C., Kim S.U., Stieber A. and Ganatas U.K. Endocytosis of cholera toxin into neuronal GEEL. Proc*nat*Acad*Sci*TJSA, 1978, v.75, U 6, p.2815-2819.

209. Kabir Sh. Characterization of the lipopolysaccharide from Vibrio cholerae 395 (Ogawa). Infect.Immun., 1982, v.38, N 3, p.1263-1274.

210. Kasai G.I., Burrows W. The titration of cholera toxin and antitoxin in the rabbit ileal loop. J.Infect.Dis*, 1966, v.116, p.606-614.

211. Kantor H.S., Pao P., Gorbash Sh. Stimulation of intestinal adenylcyclase by E.coli enterotoxin: comparison of strains from an infant and an adult with diarrhea. J.Infect.Dis., 1974, v.129, N 1, p.1-9.

212. Kantor H.S. Enterotoxins of Escherichia coli and Vibrio cholerae: Tools for the Molecule Biologist. J.Infect.Dis., 1975, H 131, p.22-32.

213. Kaur J., Shrivastava I.B. Immunochemical studies on Vibrio polysaccharides. Indian Med.Res., 1964, v.52, IT 8, p.809^815.

214. Kennedy J.R., Richardson S.H* Pine structure of Vibrio cholerae during toxin production. J. Bacterid., 1969, v. 100, p.1393-1401.

215. Kennedy J.R., Richardson S.H. Effect of cholera permeability factor on guinea pig skin, an electron microscopic study* Lab. Invest., 1972, v.26, H 4, p.409-413*

216. Knoop P.O. The interaction of cholera toxin subunit A with cultured adrenal cells. Can.J.Microbiol., 1978, v.24, N 8, p.915-921.

217. KLapper D.G., Pinkelstein R.A., Capra J.D. Subunit structure and H-terminal aminoacid sequence of the three chains of cholera enterotoxin. J.Immunochem., 1976, v.13, N 7, p.605-611.

218. Kovacs N. Identification of Pseudomonas pyocyanea by the oxidase reaction. Nature, 1956, v.178, p.703.

219. Kovacs H. The oxidase reaction: a rapid and simple method of recognizing cholera vibrios. Lancet, 1963, v.2, N 7306, p.497-498.

220. Kusama H., Craig J.P. Production of Biologically Active Substances by Two Strains of Vibrio cholerae. Infect.Immun., 1970, v.1, N 1, p.80-87.

221. Kuroki T. Induction by cholera toxin of synchronous divisions in vivo in the epidermis resulting in hyperlasia* Proc.Natl. Acad.Sci.USA, 1981, v.78, N 11, p.6958^6962.

222. Mekalanos J.J., Collier R.J., Romig W.R. Simple method for purifying choleragenoid the natural toxoid of Vibrio cholerae. -Infect.Immun., 1977, v.16, N 3, p.789-795.

223. Mekalanos J»J., Collier R.J., Romig W.R. Purification of cholera Toxin and its Subunits: New Methods of Preparation and the Use of Hypertoxinogenic Mutants. Infect.Immun., 1978, v.20, N 2, p.552-558.

224. Minneman K.P., Iversen L.L. Cholera toxin induces pineal enzymes in culture. Science, 1976, v.192, p.803-805.

225. Moss J., Vaughan M. Mechanism of action of choleragen and E. coli heat-labile enterotoxin: activation of adenylate cyclase by ADP-ribosylation. Mol.Cell.Biochem., 1981, v.37, N 2, p.75-90.

226. Mullin B,R., Aloj S.U., Fishman P.H., Lee G., Kohn L.D., Brady R.O. Cholera toxin interactions with thyrotropin receptors on thyroid plasma membranes. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1976, v.73, N 5, p.1679-1683.

227. Mulltr H.E. Das Cholera-Syndrom-Pathogenese und Erreger.-Munch.Med.Woohenschr., 1976, B.118, H 2, S.27-30.

228. Murray A.W., Solonki V., Proscio M., Rogers A. Effects of cholera toxin on ornithine decarboxylase activity in mouse skin.-J.Invest.Dermatol., 1980, v.75» N 6, p.508-511*

229. Heri P., Antoni G., Tarli P. Difference in resistance of Sub-units A and В of Vibrio cholerae toxin (choleragen) to treatment with pronase. Experientia, 1978, v.34, H 10, p.1293-1294.

230. Nozawa R., Kon P., Yokota I. Increased adhesion of Chinese hamster ovary cells to substratum by cholera enterotoxin.-Infect.Immun., 1975, v.12, p.621-624.

231. Nozawa R.T., Yokoto Т., Kuwahara S. Assay method for Vibrio cholerae and Escherichia coli enterotoxins by automated counting of floating Chinese hamster ovary cells in culture medium. -J.Clin.Microbiol., 1978, v.7, U 5, p.479-485.

232. Ohtomo IT., Muraska Т., Jashiro A., Linnaka v., Amako K.-Size and structure of the cholera toxin molecule and its subunits. J.Infect.Dis., 1976, v.133, p.231-240.

233. Ouchterlony 0. Methods for immunological identification ofenterotoxinogenic pathogenes.- In: Cholera and Related Diarrhe, as, 43rd Uobel.Symp., Stockholm 1978. Basel, 1980, p.142-143.■ • .

234. Oza H.B., Dutta 1T.K. Experimental cholera produced by toxin prepared by ultrasonic disintegration of Vibrio comma.- J.Bacterid., 1963, v.85, U 2, p.497-498.

235. Pacuszka Т., Bradley R.M. Mechanizm dzialania toksyny Vibrio• * •• . .cholerae-choleragenu. Post Biochem., 1980, t.26, П 4, s.585-611.

236. Pal S.C., Pandit C.G., Raghavan H.G.S. Chicken ileal loop as an experimental model for cholera. Part 1. Preliminary report.-Indian J.Med.Res., 1968, v.56, N 10, p.1482-1485.

237. Рапве M.V., Dutta U.K. Excretion of toxin with, stools of cholera patients.- J.Infect.Dis., 1961, v.109, ff 1, p.81-84.

238. Pierce U.P., Carpenter C.C.J., Elliott H.L., Greenough W.B. Effects' of prostaglandins, theophylline and cholera exotoxin upon transmucosal water and electrolyte movement in the canine jejunum. Gastroenterology, 1971, F 1, p.22-32.

239. Rappoport R.S., Bonde G., McCann Т., Pint H. Development of a purified cholera toxoid. 11. Preparation of a stable, antigenic toxoid by reaction of purified toxin with glutaraldehyde.-J.Infect.Immun., 1974, v.9, II 2, p.304-307.

240. Reed G.B., Eerchner D.G. Surface growth of bacteria on cellophane. Can.J.Res., 1948, v.26(E), part 3, p.330-332.

241. Richardson S.H., Giles G.C., Kruger K.S. Sealed Adult Mice: New model for Enterotoxin Evaluation. Infect.Immun., 1984, v.43, N 2, p.482-486.

242. Sack R.B., Carpenter C.C.J., Steenburg R.IJ., Pierse IT.P. Experimental cholera. A canine model.- Lancet, 1966, v.2, p.206-207.

243. Sack R.B., Carpenter C.C.J. Experimental canine cholera. 2.Production by cell free culture filtrates of v.cholera.- J.Infect. Dis., 1969, v.119, p.150-157.

244. Sack R.B., Carpenter C.C.J. Experimental canine cholera. 3. Serologic studies and re-challenge experiments. J.Infect. Dis., 1969, v.119, p.158-164.

245. Sagar I.K., Nagesha C.N., Bhat J.V. Effect of metal ions on the production of vascular permeability factor by 569B strain of Vibrio cholerae. Indian J.Med.Res., 1979, v.69, p.18-25.

246. Sagar I.K., Nagesha C.N., Bhat J.V. The role of trace elements and phosphates in the synthesis of vascular-permeability factor by Vibrio cholerae. J.Med.Microbiol., 1981, v.14, N 3, p.243-250.

247. Sanyal S.C., Alam K., Heogi P.K.B., Huo M.J., Al-Mahmud K.A. A new cholera Toxin.- Lancet, 1983, v.1, IT 8337, p.1337.

248. Sharp G.W.G., Hynie S. Stimulation of intestinal adenyl cyclase by cholera toxin. Nature, 1971, v.222, IT 5282, p.266-269. Sharp G.W.G., Hynie S., Ebel H., Parkinson D.K., Witkum P.

249. Properties of adenylate cyclase in mucosal cells of the rabbiti 'ileum and the effect of cholera toxin.- Biochim. biophys.Acte, 1973, v.309, N 2, p.339-348,

250. Shah D.B., Kauffman P.E., Bautin B.K., Gohnson C.H. Detection of heat-labile entегоtoxin-producing colonies of E.coli and v. cholerae by solid-phase sandwich radioimmunoassays.- J.Clin, Microbiol., 1982, v.16, N 3, p.504-508.

251. Shrivastava D.L. Immunochemis'jjry of the polysaccharides of vibrio cholerae. Prоc.Symp.Diamond Gubilu Haffkine Inst.Jan. 1959, 1960, p.48-51.

252. Schafer D., Lust W.D., Poison J.B. The possible role of cyclic AMP in some actions of cholera toxin. Ann.N.Y.Acad.Sci., 1971, v.185, p.376-385.

253. Schneider D.R., Parker Ch.D. Isolation and characterization of protease deficient mutants of Vibrio cholerae.- J.Infect.

254. Die., 1978, v.138, N 2, p.143-151.

255. Schneider D.R., Sigel S.P., Parker Ch.D. Characterization of Vibrio cholerae protease activities with peptide digest analysis. J.Clin.Microbiol., 1981, v.13, N 1, p.80-84.

256. Smith P.A., Case R.M., Effects of cholera toxin on cyclic adenosine 3'-5'-monophosphate concentration and secretory processes in the exocrine pancreas. Biochim.Biophys.Acta, 1975, v.399, N 2, p.277-290.

257. Sporecke I., Castro D., Mekelanos J.J. Genetic mapping of Vibrio cholerae Enterotoxin Structural Genes. J.Bacterid., 1984, v.157, N 1, p.253-261.

258. Svennerholm Ь. Structure and biology of cell membrane ganglio-sides.- In: Cholera and Relat.Diarrheas: Mol.Aspects Glob.Health Probl.43rd Nobel Symp.WHO, Stockholm, 1978, Basel e.a., 1980, p.80-87.

259. Takeda Т., Takeda V., Miwatani Т., Ohtomo N. Detection of cholera enterotoxin activity in suckling hamsters. Infect.Immun., 1978, v.19, N 2, p.752-754.

260. Tu A.T., Toom P.M. Enzymatic and biological Studies of cholerae (Vibrio cholerae) toxin. Experientia, 1971, v.27, N 7, p.858-859.

261. Trjman N., Cardamone A., Gotterer G.S., Hendrix T.R. Effect of nicotinic acid on cholera-induced fluid movement and unindi-rectional sodium fluxes in rabbit jejunum.- Hoppkins Med.J., 1980, v.147, N 6, p.209-211.

262. Van Heyningen W.E., Carpenter Ch.C.J., Pierce N.T., Greenough W.B. Deactivation of cholera toxin by gangliosides.- J.Infect. Dis., 1971, v.124, N 4, p.415-418.

263. Van Heyningen S. The subunits of cholera toxins structure, stoichimetry and function,- J.Infect.Dis,, 1976, v.133, N 3, p.5-13.

264. Van Heyningen S. Cholera toxin. - Biol.Rev,, 1977, v.52, P.509-549.

265. Van Heyningen S. Bacterial toxins and cyclic AMP, Nature, 1982, v.299, N 5886, p.782.

266. Van Heyningen S. Cholera toxin»- Biosci,Repts., 1982a, v,2, N 3, p.135-146.

267. Walker W.A., Field M,, Isselbacher K. Specific binding of cholera toxin to isolated intestinal microvillous membranes.-Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1974, v.71, N 2, p.320-324.

268. Watanabe G., Verwey W.F. Protective antigens from El Tor vibrios. 1. The preparation and properties of a purified protective antigen from El Tor vibrio (Ogawa subtype). Bull.WHO, 1965, v.32, N 6, p.809-821.и

269. Wheeler M.A., Solomon R.A., Cooper C,, Hertzberg L., Mehta H., Miki N., Bitensky M.W. Intraction of vibrio cholerae toxin with Sarcoma 180 cell membranes. J.Infect.Dis., 1976, v.133, p.89-96.

270. Zenser T.V., Metzger J.E. Comparison of the action of Escherichia coli enterotoxin on the thymocyte adenylate cyclase-cyclic adenosine monophosphate system to that of cholera toxin and prostaglandin E1Infect.Immun., 1974, v.10, N 3, p.503-509.

271. Zuckerman S.H., Douglas S.D. Effects cholera enterotoxin on Pc receptor activity of limphoid cells and mononuclear phagocytes. J.Immunol., 1976, v.32, H 3, p.247-253.