Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование типовых изменений электрокинетических свойств эритроцитов в норме и при альтерации функций организма

ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Исследование типовых изменений электрокинетических свойств эритроцитов в норме и при альтерации функций организма"

005015190

Дерюгина Анна Вячеславовна

Исследование типовых изменений электрокинетических свойств эритроцитов в норме и при альтерации функций организма

03.03.01 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

1 2 МАР 2012

Нижний Новгород 2012

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Нижегородском государственном университете им. Н.И. Лобачевского»

Научный консультант:

заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Крылов Василий Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Копытова Татьяна Викторовна

доктор биологических наук, профессор Гелашвили Давид Бежаиовнч

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Левин Григорий Яковлевич

Ведущая организация: государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Нижегородская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится « 22 » марта 2012 г. в часов на заседании диссертационного

совета Д.212.166.15 при Нижегородском государственном университете им. Н.И.Лобачевского по адресу: 603950, Нижний Новгород, пр. Гагарина, д.23, корп.1, биологический факультет. Факс: (8312)65-82-92

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского.

Автореферат разослан 23.01.12.

¿Ь-Лс Р 2012 г., размещен на сайте ВАК РФ

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

С.В. Копылова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы

В основе жизнедеятельности организма лежат приспособительные реакции к постоянно меняющимся факторам окружающей среды. В зависимости от силы и длительности воздействия организм либо адаптируется к новым условиям, что способствует повышению устойчивости организма к любым воздействиям, либо происходит истощение адаптационных резервов, что, в свою очередь, может привести к развитию заболеваний различной этиологии (Chrousos, Gold, 1992; Барабой, 2006). В современной науке прослеживается тенденция выявления специфических изменений организма при его альтерации. Логично предположить, что множественность реакций в каждом конкретном случае является отражением единого общебиологического процесса, связанного с развитием типовых защитных и компенсаторно-приспособительных реакций организма в ответ на предъявляемое воздействие (Селье, 1979). В связи с изложенным, актуальность приобретает изучение общих закономерностей, происходящих в организме человека и животных процессов, что связанно как с развитием теоретических представлений о развитии адаптационного синдрома, так и при поиске эффективных корригирующих способов воздействия на организм при альтерации его систем. Адаптивный или повреждающий эффект любого фактора реализуется в условиях целостного организма опосредованно - через мембранные системы клеток (Меерсон, 1984). Состояние мембраны во многом определяет протекание физиологических и биохимических процессов и тем самым является исходным звеном в сложной цепи приспособительных модификаций на всех уровнях (Рязанцева и др., 2004). В этом плане эритроцитарные мембраны представляют собой удобный объект исследования, поскольку отражают общие принципы структуры мембран клеток организма. Кроме того, они обладают такими преимуществами как простота выделения, стабильность в искусственной среде, своеобразие организации, не усложненной внутриклеточными мембранами, вследствие отсутствия органелл и ядерного аппарата (Гильмугдинов, 1994, Takakuwa, 2001; Новицкий и др., 2006).

Биологическое состояние мембраны клетки напрямую связано с поверхностным зарядом, о наличии которого можно судить по электрофоретической подвижности (ЭФП) (Харамоненко, Ракитянская, 1974; Козинец и др., 2007). Регистрация перемещения клеток крови в электрическом поле позволяет оценить не только их ЭФП и, следовательно, получить информацию об интегральном состоянии мембранных функций, но и состояние организма в целом. Снижение отрицательного заряда и, как следствие, ЭФПЭ определяет повышение агрегации эритроцитов (Vicant, 1994), что оказывает непосредственное влияние на микроциркуляцию, увеличивает вязкость крови (Stoltz, Donner, 1991). Агрегаты заполняют просвет капилляров, не оставляя места для пристеночного слоя плазмы, являясь непосредственной причиной стаза крови, что в итоге вызывает тканевую гипоксию (Мчедлишвили, 1994). Установлены выраженные изменения ЭФПЭ крови у больных при различных видах патологии органов и систем организма (Козинец, 2008^ Важно отметить, что анализ литературных данных свидетельствует об однообразной реакции подвижности эритроцитов - ее снижении при самых разных заболеваниях: у пациентов, страдающих хронической почечной недостаточностью (Бирюкова и др., 2003), с заболеваниями органов дыхания (Аладашвили и др., 2003), при интоксикациях (Dobrzynska et al, 2006; Козинец и др., 2007), ишемической болезни сердца (Махнева, 2011), сердечно-сосудистых (Шилов и др., 2004; Пантюхина и др., 2010) и онкологических заболеваниях (Veshapidze et al, 2007), физических нагрузках и психическом напряжении (Шамратова, 2002).

Однонаправленность изменения ЭФПЭ при различных видах заболеваний позволяет предположить, что модификация ЭФПЭ является отражением общих закономерностей изменения состояния гомеостаза организма. В связи с тем, что в основе многих патологических процессов лежит развитие разной степени выраженности стресса,

можно ожидать, что ЭФПЭ является ранним критерием стресс-реакции и возникающей альтерации. Однако общие закономерности, происходящие на мембранном уровне, и механизмы, вызывающие изменения ЭФПЭ при альтерации организма, мало изучены.

Очевидно, что развитие различных по патогенезу патологических процессов и состояний сопровождается молекулярными изменениями плазматических мембран клеток, являющихся как непосредственной мишенью повреждающего действия патогенных факторов, так и вовлеченных в патологический процесс, в связи с инициацией универсальных механизмов повреждения клетки (Kiefer, Snyder, 2000). Между тем традиционный анализ структурно-функциональных показателей клеток, проводимый сразу после воздействия стресс-фактора, не только не дает исчерпывающей информации о состоянии организма, но и нередко маскирует реальную картину происходящих изменений. С позиций развития общего адаптационного синдрома, следует подчеркнуть, что при изучении ЭФПЭ требуется исследование морфо-функциональных характеристик клеток крови в динамике развития адаптационного процесса, с учетом последовательного включения стресс-реализующих систем организма, в частности симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой (Меерсон, Малышева, 1993; Kamal et all., 2001). Проведение комплексного анализа электрокинетических свойств клеток и их морфофункциональных показателей позволит получить обобщающие положения о базисных механизмах регуляции ЭФПЭ и закономерностях ее преобразования на фоне адаптационных перестроек организма при развитии стресс-реакции и патологии разного генеза. Раскрытие универсальных механизмов изменения клеточных мембран крайне важно для оценки состояния гомеостаза организма в целом и при разработке методов диагностики развития патологического процесса.

В связи с вышеуказанным, целью работы явилось изучение электрокинетических свойств эритроцитов крови человека и животных, их взаимосвязь со структурно-функциональным состоянием мембран в норме и при альтерации функций организма.

Для достижения данной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить динамику изменения электрокинетических свойств эритроцитов по ЭФПЭ в процессе развития стресс-реакции организма человека и животных при действии различных экстремальных факторов.

2. Провести сравнительное исследование ЭФПЭ крови животных разных таксономических групп при развитии у них стресс-реакции.

3. Выявить закономерности изменения ЭФПЭ и структурно-функциональных показателей мембран эритроцитов при активации симпатоадреналовой и гипофизарно-надпочечниковой систем организма.

4. Исследовать модификацию белок-липидного спектра мембран, изменение процесса ПОЛ и состояния системы глутатиона в эритроцитах, активность Na-K-АТФэзы, содержание АТФ и 2,ЗДФГ в клетках, морфометрические показатели эритроцитов при различных видах альтераций организма.

5. Оценить взаимосвязь ЭФПЭ со структурно-функциональными свойствами эритроцитарных мембран на фоне общих неспецифических адаптационных реакций организма при изучаемых видах воздействия.

6. Изучить ЭФПЭ и морфофункциональные характеристики эритроцитов крови животных и человека в динамике восстановления нарушенных функций организма фармакологическими и физиотерапевтическими средствами.

7. Проанализировать возможность использования исследования ЭФПЭ в качестве раннего и значимого критерия развития стресс-реакции в организме, характеристики тяжести и динамики альтерационного процесса, и эффективности корригирующих воздействий.

Научная новизна

Впервые проведен комплексный анализ изменения электрокинетических свойств эритроцитов и их взаимосвязь с модификацией морфофункциональных характеристик

мембраны на различных экспериментальных моделях напряжения и нарушения функций организма крыс разного генеза, а также при исследовании патологии у людей.

Впервые выявлена фазность изменения ЭФПЭ, зависящая от включения ведущих нейро-гормональных систем организма, таких как симпатоадреналовая и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая.

На основании результатов исследования сформулирована концепция о закономерностях изменения ЭФПЭ, реализующихся через структурно-функциональную модификацию мембран, связанных с изменением рецепторной реактивности клеток в ходе развития стресс-реакции, позволяющая рассматривать эритроцит как биологическую систему, отражающую гомеостаз организма в целом.

Впервые показано, что изменение ЭФПЭ является универсальным маркером развития не только патологического процесса в ходе действия альтерирующего фактора, но и включения адаптационных процессов в организме при развитии резистентности в ответ на действие адаптогенов. Доказана возможность использования ЭФПЭ в качестве метода диагностики стресс-реакции организма при его альтерации и степени развития адаптационных процессов в ответ на действие адаптогенов.

Теоретическая и практическая значимость работы

Работа выполнена в соответствии с плановыми НИР кафедры физиологии и биохимии человека и животных. Часть работы выполнена в рамках реализации ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (Государственный контракт № П604).

Работа является экспериментальным исследованием с перспективным практическим выходом, позволяющим разработать новые диагностические методы в медицине. Результаты исследования используются в учебном процессе кафедры физиологии и биохимии человека и животных Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского и кафедры неврологии, психиатрии и наркологии факультета повышения квалификации врачей Нижегородской государственной медицинской академии. Полученные результаты позволяют обосновать эффективность и целесообразность использования фармакологических и физиотерапевтических средств в динамике восстановления нарушенных функций. Результаты исследования внедрены в практику в неврологической клинике Нижегородской областной больницы им. Н.А.Семашко. По результатам исследования предложен способ оценки функциональной активности коры надпочечников организма, основанный на измерении электрофоретической подвижности эритроцитов крови (патентная заявка № 2011101256/001560 от 13.01.2011) и внедрен в практику способ исследования ЭФПЭ в качестве критерия оценки степени адаптационных процессов организма у больных с хронической ишемией головного мозга (патент на изобретение № 2371193 от 27.10.2009).

Положения, выносимые на защиту

1. Изменения ЭФПЭ человека и животных при нарушении функций организма носят однотипный характер независимо от вида воздействующего фактора и его длительности. Межгрупповые различия имеют лишь количественный характер и варьируют по времени, определяясь спецификой альтерационного воздействия.

2. Закономерности изменения ЭФПЭ при различных экстремальных воздействиях и патологии связаны с развитием стресс-реакции и вовлечением стресс-реализующих систем, таких как симпатоадреналовая и гипофизарно-надпочечниковая.

3. ЭФПЭ зависит от мембранно-клеточных характеристик эритроцитов и опосредована перестройками белок-липидной составляющей мембран, нарушением баланса про- и антиоксидантных систем клетки, изменением активности Ыа-К-АТФазы, перестройками метаболизма клеток, вызывающих морфологическую модификацию эритроцитов в ответ на стрессовое воздействие.

4. Изменения ЭФПЭ и морфофункциональных показателей эритроцитов при хроническом стрессе у животных и при патологии у людей однотипны с острым стрессом.

Степень восстановления ЭФПЭ на фоне развития адаптационных процессов в организме показывает эффективность фармакологических и физиотерапевтических средств в качестве адаптогенов.

5. Общие закономерности изменения ЭФПЭ, связанные с универсальными изменениями структурно-функционального состояния клеток, позволяют рассматривать эритроциты как биологическую систему, отражающую гомеостаз организма в целом, и проанализировать механизмы, по которым реализуется стадийность, общность и специфичность того или иного патологического процесса.

Апробация работы

Основные положения работы были доложены и обсуждены на IV ,V, VI VII научно-практических конференциях по апитерапии «Апитерапия сегодня», Рыбное, 1994, 1997, 1998, 2000; на XXXIV международном конгрессе по пчелокультуре, Лозанна, 1995; на Российской конференции «Экология, здоровье и природопользование», Саратов, 1997; на Втором Европейском конгрссе «Акупунктурные Белые Ночи», Санкт-Петербург, 1997; на XXXV международном конгрессе по пчелокультуре, Антверпен, Бельгия, 1997; на Всероссийской научной конференции с международным участием, посвящ. 150-летию акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, 1999; на XXXVI международном конгрессе по пчелокультуре, Ванкувер, Канада, 1999; на X Международной научно-практической конференции по апитерапии, Рязань, 2002; на 4-й Международной научно-практической конференции «Пчеловодство -XXI», Москва, 2003; на IX Всероссийском съезде неврологов, Ярославль, 2006; на VIII Международном конгрессе по адаптационной медицине, Москва, 2006, на II Международной конференции «Человек и электромагнитные поля», Саров, 2007, на XIII Всероссийской научно-практической конференции «Успехи апитерапии», Адлер, 2008; на 9-й научно-практической конференции «Интермед», Москва, 2009; на XIV Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации», Москва, 2009; на международной конференции «Пчеловодство XXI век. Пчеловодство, апитерапия и качество жизни» Москва 2010' на XXI съезде физиологического общества им. И.П. Павлова, Калуга, 2010; на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» Башкирия, Сибай, 2010; на II Межрегиональной научно-практической конференции неврологов и нейрохирургов Приволжского федерального округа «Высокие технологии в медицине», Н.Новгород, 2011; на IV Международной конференции по АСМ в науке и медицине, Париж, 2011; на Международной научно-практической конференции «Пути развития пчеловодства в России через успешный опыт регионов России, стран СНГ и Дальнего Зарубежья», Ярославль, 2011. Апробация работы проведена на заседании кафедры физиологии и биохимии человека и животных ННГУ им. Н.И. Лобачевского.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 74 работы, из них 22 — в изданиях, рекомендованных Перечнем ВАК МО РФ; получен 1 патент РФ, 1 патентная заявка.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 248 страницах машинописного текста; состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 428 источников, из которых 267 отечественных и 161 иностранных; содержит 74 таблицы и 30 рисунков.

Личный вклад соискателя

В исследованиях, которые положены в основу диссертационной работы, соискатель ставил проблему, подбирал методы исследования, планировал проведение исследований, принимал личное участие в проведении экспериментальных исследований, интерпретировал результаты и формулировал выводы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Введение. Включает обоснование актуальности темы диссертации, формулировку цели и задач исследования, научную новизну, теоретическую и практическую значимости, положения, выносимые на защиту.

Глава 1. Обзор литературы. Современные представления о структурно-функциональных показателях эритроцитов в норме и при стресс-реакции организма

В главе представлен анализ литературы отечественны и зарубежных исследователей, посвященной современным представлениям о структурной организации мембран эритроцитов, их электрокинетических свойствах, влияние про-, антиоксидантной систем и углеводно-фосфорного обмена на морфо-функциоанальных свойства эритроцитов; даны теоретические представления о стресс-реакции организма.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Глава 2. Материалы и методы 2.1. Характеристика материалов и объектов исследования

Работа выполнена на кафедре физиологии и биохимии человека и животных Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского (зав. кафедрой -д.б.н., профессор Крылов В.Н.). Клинический материал получен в Областной больнице им. H.A. Семашко (исследования проведены с к.м.н., доц. кафедры неврологии, психиатрии и наркологии ФПКВ ГОУ ВПО НижГМА Антипенко Е.А.), в Дорожной клинической больнице Горьковской железной дороги МПС РФ (исследования проведены с врачом гастроэнтерологического центра, к.м.н. Артемовой A.B.) и в Нижегородском научно-исследовательском кожно-венерологическом институте МЗ РФ (исследования проведены с врачом отделения хронических дерматозов Клеменовой И.А.). Схема проведенных исследований представлена в таблице 1.

Таблица 1

Экспериментальная часть

Этапы Направление исследований Кол-во животных

Острый стресс ЭФПЭ, МДА, глутатион, электрофорез белков в ДСН-ПААГ, разделение ФЛ методом тонкослойной хроматографии, измерение активности Ыа-К-АТФазы, определение 2,ЗДФГ и АТФ в эритроцитах, процентное распределение эритроцитов по диаметру, морфометрия эритроцитов методом сканирующей зондовой микроскопии, лейкограмма 440 крыс

Сравнительно-видовое действие стресса ЭФПЭ 50 крыс, 50 мышей, 50 лягушек

Действие стресс-реализующих систем ЭФПЭ, МДА, глутатион, электрофорез белков в ДСН-ПААГ, разделение ФЛ методом тонкослойной хроматографии, измерение активности Ыа-К-АТФазы, морфометрия методом сканирующей зондовой микроскопии 280 крыс

Адреналэктомия ЭФПЭ, МДА 50 крыс

Действие стресс-факторов на клетки ЭФПЭ, МДА Образцы крови 100 крыс in vitro

Повторяющийся стресс ЭФПЭ, МДА, глутатион, лейкограмма 80 крыс

Хронический стресс ЭФПЭ, МДА, глутатион, лейкограмма 150 крыс

Действие ЭФПЭ, МДА, лейкограмма 300 крыс

стрессмодулирующих средств после альтерации

Клиническая часть

Виды патологии Направление исследований Кол-во пациентов

Дисциркуляторная энцефалопатия 1, 2, 3 стадии (ХЦВН) ЭФПЭ, МДА, лейкограмма 126 человек

Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки ЭФПЭ, МДА, разделение фосфолипидов методом тонкослойной хроматографии 40 человек

Псориаз ЭФПЭ, МДА, разделение фосфолипидов методом тонкослойной хроматографии 70 человек

Вертеброгенная люмбоишиалгия ЭФПЭ, МДА 40 человек

Нервно-мышечные заболевания ЭФПЭ, МДА 40 человек

Экспериментальные исследования проведены на 1450 животных, из них 1200 нелинейных белых крыс-самок массой 200 - 250 г., 150 самцов белых крыс линии Вистар весом 250-300 г., 50 белых нелинейных лабораторных мышей массой 16-20 г., 50 лягушек рода Rana. Лабораторные животные были полученные из питомника г. Крюково. Содержание и оперативные вмешательства осуществляли в соответствии с нормативами, данными в руководстве «Guide for care and use of laboratory animals. ILAR publication, 1996, National Academy Press» и требованиями Приказа Минздрава России № 267 от 19.06.03 «Об утверждении правил лабораторной практики в Российской Федерации». Ряд исследований проводили на изолированных эритроцитах животных. Забор крови для анализа производили: у крыс из подъязычной вены, у мышей и лягушек после декапитации.

2.2. Модели напряжения и острого стресса

Физическая нагрузка заключалась в однократном плавании животных в течение 15 мин. с грузом 10% от массы тела животного при температуре 26-28°С (Артифексов, 1981).

Иммобилизационный стресс создавали 3-х часовой фиксацией крыс на планшетах за 4 конечности на спине (Сейдахметова, 2005)

Гипоксию моделировали, помещая животных в барокамеру и «поднимая» на высоту 11000 м в течение 5 мин (Евсеева и др., 2008).

Токсический стресс вызывали внутрибрюшинным введением крысам яда пчелы (0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг) и яда жабы (0,1мг/кг) (Киреева, 1985; Крылов, 1990).

Адреналиновую токсемию создавали внутрибрюшинным введением адреналина-гидрохлорида (0,1 мг/кг) (Крылов, 1990).

Воздействие ЭМИ осуществляли путем влияния НИЛИ, ИМИ и КВЧ-воздействия на затылочную область крыс, с расстояния 2-5 мм от аппликаторов, в течение 10 минут. В качестве источника лазерного излучения применяли аппарат лазерный терапевтический «Успех» (ГП «Восход»), работающий в импульсном режиме, с длиной волны излучения 0,8-0,9 мкм, частотой следования импульсов 415Гц, минимальное значение плотности средней мощности излучения в плоскости выходного окна аппликатора 193 мкВт/кв.см. В качестве источника излучений крайне высокой частоты применяли аппарат АМФИТ-0,2/10-01(000 «ФизТех») с шумовым спектром, мощностью 1 мкВт, частотой 53,57-78,33 ГГц. ИМП создавали аппаратом, генерирующим прямоугольные импульсы магнитного поля с частотой 20Гц, длительностью импульса 100 мкс и напряженностью 100 мТл (Девятков, 1991; Кожура, 1993).

Крыс подвергали общему однократному гамма-излучению (б0Со) при помощи терапевтической установки "АГАТ-С" (расстояние "источник-поверхность" - 50см, поле 20x20, мощность 1Гр/мин). Доза облучения составила ЗГр (модель костно-мозговой формы лучевой болезни средней степени тяжести) (Ярмоненко, Вайнсон, 2004).

Контролем служили интактные крысы. В опытах с введение инъекционных препаратов контролем были крысы после внугрибрюшинного введения 0,9% хлорида натрия.

2.3.Сравнителыю-видовое действие стресса

Лягушкам, мышам, крысам внутрибрюшинно вводили стресс агента - яд пчелы в дозе 0,5 мг/кг (Киреева, 1985). Контрольным животным проводили внутрибрюшинную инъекцию физиологического раствора.

2.4. Действие стресс-реализующих систем

Для выяснения роли симпатоадреналовой и гипофизарно-надпочечниковой систем на изменение электрокинетических и морфофункциональных свойств эритроцитов было изучено: действие адреналина (0,1мг/кг), кортизола (0,4мг/кг), блокатора ß-адренорецепторов (пропранолола, 0,2мг/кг), адреналина (0,1 мг/кг) или пчелиного яда (0,1 мг/кг) (в качестве стресс-фактора) на фоне пропранолола (0,2 мг/кг). Препараты вводили внутрибрюшинно. Адреналин и пчелиный яд после инъекции пропранолола вводили спустя 10 мин. Контролем служил физиологический раствор введенный внутрибрюшинно.

2.5. Адреналэктомия. Животным производили двухстороннюю адренапэктомию (Лазарев, 1954). Исследовали действие пчелиного яда (0,5мг/кг) параллельно на адреналэктомированных и интактных крысах.

2.6. Действие стресс-факторов на клетки

Исследовали действие стресс-факторов физической (ЭМИ) и химической (зоотоксины, адреналин, кортизол) природы на предварительно отмытые эритроциты. Эритроциты крыс инкубировали с пчелиным ядом (1-10"6-1 • 10"7г/мл), адреналином (МО -Ы0"'°г/мл), кортизолом (М0"7-5-10"7г/мл), жабьим ядом (1-10'7г/мл) или воздействовали различными видами ЭМИ (ИМП, НИЛИ, КВЧ-излучения) в течение 10 мин. В опытах с ЭМИ контролем служили интактные клетки, в опытах с инкубацией с различными химическими соединениями - клетки, инкубированные с физиологическим раствором.

Для модификации структуры клеток эритроциты фиксировали глутаровым альдегидом, используя методику H.Walter и J.Krob (1989). Взвесь эритроцитов инкубировали при t=22-24°C в течение 30 мин. в 0,1% растворе глутарового альдегида. После трехкратной отмывки физиологическим раствором, обработанные эритроциты инкубировали с зоотоксинами, адреналином, кортизолом, либо воздействовали различными видами ЭМИ.

2.7. Повторяющийся стресс

Физический стресс воспроизводили, вынуждая животных плавать в течение 15 мин. с грузом 10% от массы тела животного при температуре 26-28°С в течение 7 дней. Контролем служили интактные крысы. Токсический стресс вызывали внутрибрюшинным введением животным яда пчелы (0,1 мг/кг) на протяжении 7 дней.

2.8. Хронический стресс

Модели локальной и глобальной ишемии головного мозга крыс (Gill et al., 1991; Rosemary, 1997). Глобальную ишемию головного мозга моделировали путем необратимой одномоментной двусторонней окклюзии общих сонных артерий. Локальную ишемию головного мозга вызывали путем необратимой окклюзии левой ветви средней мозговой артерии и подходящей к ней вены с одновременной перевязкой ипсилатеральной сонной артерии. Окклюзия достигалась путем электрокоагуляции аппаратом электрохирургическим высокочастотным ФОТЕК Е81. Работу проводили под нембуталовым наркозом (нембутал внутрибрюшинное введение 35 мг/кг).

2.9. Действие стрессмодулирующих средств при альтерации функций организма

крыс

1 серия. Острый стресс моделировали 3-х часовой иммобилизацией в положении на спине с фиксацией конечностей. После иммобилизации животным в течение 5 дней, в зависимости от серии эксперимента, внутрибрюшинно вводили пчелиный яд (0,1 мг/кг), скармливали маточное молочко (100 мг/кг), маточное молочко и мед (100 мг/кг), прополис и мед (100 мг/кг), мед (100 мг/кг). Контролем служили крысы, не подвергнутые стрессу и

получавшие те же препараты. Дополнительно исследовалась кровь интактных животных и животных после стресса.

2 серия. Животные подвергались общему однократному у-облучению в дозе 3 Гр. Затем животным проводили курс 7-дневной терапии продуктами пчеловодства. Первой группе животных внутрибрюшинно вводили «Солапивен» - инъекционный раствор пчелиного яда в дозе 0,5 мг/кг. Вторая группа животных перорально получала мед в дозе 30 мг/кг, третья - смесь меда и маточного молочка (Апитонус) в дозе 30 мг/кг, четвертой группе проводилась ингаляция препаратом «Апингалин» (водно-спиртовая суспензия прополиса и маточного молочка). Контролем служили облученные животные без введения каких-либо препаратов.

3 серия. Острый стресс моделировали внутрибрюшинным введением животным адреналина-гидрохлорида в дозе 0,1 мг/кг. Через 30 минут после введения адреналина начинали низкоинтенсивное лазерное излучение и излучение крайне высокой частоты. Воздействие проводилось на затылочную область крыс, помещенных в открытую камеру, с расстояния 2-5 мм от аппликаторов, в течение 10 минут. Контрольную группу составляли интактные крысы.

4 серия. На моделях глобальной и локальной ишемии головного мозга крыс исследовали действие препаратов: кавинтон (0,7мг/кг), пирацетам (200 мг/кг), цитофлавин (0,16 мл/кг), дельтаран (150 мкг/кг) и геримакс (0,7мг/кг), которые вводили животным через 10 суток после операции. Повторное введение препаратов осуществлялось ежедневно в течение последующих 9 суток ишемии головного мозга. Группу интактных животных составили не оперированные крысы.

2.10. Клинические исследования

Исследовали кровь пациентов с хронической ишемией головного мозга, вертеброгенной люмбоишиалгией, нервно-мышечными заболеваниями, язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБДПК) и псориазом. Диагноз формулировался врачом в соответствии с общепринятыми клиническими критериями, на основании собранного анамнеза, и подтверждался лабораторными и клиническими исследованиями. Группу контроля при каждой патологии составили практически здоровые люди (по 20 добровольцев в каждой группе контроля сопоставимых по возрасту и полу с больными). Забор крови у больных и практически здоровых людей проводился из локтевой вены.

В соответствии с отечественной классификацией, степень цереброваскулярной недостаточности определялась как стадия дисциркуляторной энцефалопатии (ДЭ). Больные с ДЭ были распределены на четыре группы. 1 группа (30 пациентов) получали только базовую терапию. 2 группа (32 человека) получала на фоне базовой неспецифическую цитопротективную терапию - цитофлавин. 3 группа (31 пациента) получала на фоне базовой стресслимитирующую терапию - дельтаран. 4 группа (33 пациента) - на фоне базовой - природный адаптоген геримакс. Исследовали кровь пациентов до и после проведенного курса лечения.

Пациенты с вертеброгенной люмбоишиалгией и нервно-мышечными заболеваниями получали базовую терапию и дополнительно к базовой терапии получали инъекционный раствор пчелиного яда (апитерапия). Больные псориазом получали стандартную терапию (1 группа), а также дополнительно к стандартной терапии проводили КВЧ-воздействие (2 группа). Анализ крови проводили в период обострения заболевания и после проведенного курса лечения.

У пациентов с ЯБДПК проводили традиционную противоязвенную терапию с проведением контроля эрадикации через 6 недель после рубцевания язвы. Анализ крови производился в период обострения заболевания (острую стадию развития язвы) и в период ремиссии (стадия красного рубца) - через 6 недель после проведенного курса лечения.

2.11. Методы исследования

Измерение ЭФПЭ методом микроэлектрофореза (Харамоненко, Ракитянская, 1974), определение концентрации МДА в эритроцитах (Владимиров, Арчаков, 1972), определение глутатиона в эритроцитах (Sedlak, Lindsey, 1968), разделение фосфолипидов методом тонкослойной хроматографии (Шаршунова и др., 1980), электрофорез белков в ДСН-ПААГ (Laemmli, 1970), определение активности Na-K-АТФазы (Иващенко, Бушнева, 1981), определение 2,ЗДФГ и АТФ в эритроцитах (Виноградова и др., 1980), морфометрию эритроцитов методом сканирующей зондовой микроскопии (Pleskova et al, 2001), измерение диаметра эритроцитов и подсчет лейкоцитарной формулы в мазках крови (Меньшиков и др., 1987).

В работе применялись следующие приборы: аппарат для электрофореза (Москва); атомно-силовой микроскоп Accurex 2100 (США); микроскоп БИОМЕД-4 (Москва); рН-метр Мультитест ИПЛ-311 (Новосибирск); фотометр Мультискан ЕХ (Финляндия); мультицентрифуга СМ-6М (Латвия), фотометр фотоэлектрический КФК-3 (Москва); термостат Binder BD 240 (Германия); автоматическая система для высокоэффективной жидкостной хроматографии Biologie Duo-Flow Basic (Bio-Rad, U.S.A); камера Mini -PROTEAN Tetra Cell (Bio-Rad, U.S.A). Стандартные образцы фосфолипидов (Sigma, U.S.A) и белков (Bio-Rad, U.S.A).

Полученные экспериментальные данные обрабатывали с использованием пакета программ Statistica 6.0. и Microsoft Excel. Результаты представлены в виде М±ш, где М -среднее арифметическое, ш - стандартная ошибка среднего. Для проверки гипотезы о виде распределения применялся метод Шапиро-Уилка. Изучение статистических закономерностей в выборках осуществлялось с применением параметрического (критерий Стьюдента, в том числе с поправкой Бонферрони) и непараметрических (критерий Вилкоксона, критерий Крускала-Уоллиса) методов статистики. Обработка экспериментальных данных проводилась с использованием параметрических критериев, клинических - непараметрических методов статистики. За величину уровня статистической значимости различий принимали р<0,05. Обработка результатов хроматографического анализа липидов и электрофоретического разделения белков проводилась с помощью программы Onedescan для Windows 98.

Глава 3. Исследование электрокинетических и структурно-функциональных характеристик мембран эритроцитов при различных видах воздействия 3.1. Исследование электрофоретической подвижности эритроцитов (ЭФПЭ) при различных видах воздействия на организма животных

На разных экспериментальных моделях напряжения и нарушения функций организма крыс, таких как: иммобилизация, гипобарическая гипоксия, физическая нагрузка, действие различных видов ЭМИ, гамма-облучение, токсический стресс (внутрибрюшинное введение зоотоксинов), адреналовая токсемия, была выявлена однотипная динамика изменения ЭФПЭ, проявляющаяся в первоначальном снижении с последующим повышением данного показателя относительно значений контроля (рис. 1). При этом пчелиный яд, гипобарическая гипоксия, иммобилизация, адреналин, ИМП, НИЛИ и ионизирующее излучение вызывали уменьшение ЭФПЭ с 15 мин. наблюдения, физическая нагрузка с 30 мин., жабий яд с 60 мин. эксперимента относительно значений контрольной группы. Адреналин вызывал наиболее длительное уменьшение ЭФПЭ в течение 120 мин. эксперимента, тогда как остальные виды воздействия к этому времени определили увеличение ЭФПЭ. К 1 суткам рост ЭФПЭ относительно уровня данного показателя, регистрируемого в первую фазу снижения ЭФПЭ, был зафиксирован при всех видах воздействия. Зоотоксины сохраняли повышенную ЭФПЭ относительно контроля к 1 неделе эксперимента, при остальных видах воздействия наблюдалось восстановление показателя до уровня контроля, за исключением ионизирующего излучения, вызывающего резкое уменьшение ЭФПЭ.

,/о 120

иммобилизация адреналин гипоксия гамма-облучение пчелиный яд жабий яд

50 I

0 15иин 30 мин бОиин 120 1сутки 1 вРеЛ»я ллин неделя

Рис. 1. Изменение ЭФПЭ при различных альтерирующих воздействиях

Примечание-. *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

Таким образом, установлена однотипная двухфазная реакция клеток на стрессор, проявляющаяся в изменении их ЭФПЭ: уменьшение ЭФПЭ (1-я фаза) с последующим ее увеличением (2-я фаза). Межгрупповые различия носили лишь количественный характер и варьировали по времени, отражая специфику наносимого стресс-воздействия. Адреналин, гипоксия, иммобилизация и ионизирующее излучение провоцировали развитие первой фазы изменения ЭФПЭ. Для экзотоксинов характерна более продолжительная 2-я фаза изменения ЭФПЭ, проявляющаяся существенным увеличением показателя, превышающим уровень контрольных значений. В отличие от этого, физическая нагрузка и действие на организм НИЛИ и КВЧ - облучение вызывали менее значимые колебания ЭФПЭ.

Сравнительно-видовое исследование ЭФПЭ крови животных разных таксономических групп (крыс, мышей и лягушек) при действии пчелиного яда также выявило однотипную реакцию клеток на стрессор, проявляющуюся в изменении их электрокинетических свойств (рис.2). Это отражалось в снижении ЭФПЭ в течение первого часа эксперимента с последующим увеличением показателя, превышающим уровень контрольных значений (р<0,05).

Рис. 2. Изменение ЭФПЭ крови крыс, мышей и лягушек при действии пчелиного яда

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с интактными животными.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о закономерных изменениях электрокинетических свойств эритроцитов в ответ на протекающие в организме стрессовые реакции.

3.2. Роль симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем в изменении ЭФПЭ

Учитывая, что при стрессе ведущими нейро-гормональными системами являются симпатоадреналовая и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая, можно полагать, что на

клеточном уровне реализуется последовательное включение процессов, опосредованное действием изменяющихся концентраций катехоламинов и кортикостероидов в периферической крови. Так, в следующей серии экспериментов, стрессовая реакция, вызванная введением крысам стресс-агента - пчелиного яда, приводила к появлению типичной двухфазной реакции ЭФПЭ (рис. 3). Внутрибрюшинное введение адреналина в организм животных вызывало снижение ЭФПЭ, напротив, введение кортизола определило рост ЭФПЭ во всех точках наблюдения (р<0,05). Введение адреналина и пчелиного яда на фоне блокады (3-адренорецепторов пропранололом снижало или полиостью отменяло реакцию снижения ЭФПЭ, но не изменяло фазу повышения ЭФПЭ в ответ на введение пчелиного яда.

- пчелиным яд

- адреналин

-кортизол

-адреноблокатор+ адреналин

- адреноблокатор-* яд

Время, мин

Рис. 3. Изменение ЭФПЭ при различных стрессовых воздействиях

Примечание-. *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

Исследование взаимосвязи изменения ЭФПЭ и уровня гормона коры надпочечников (кортизола) в плазме крови (иммуноферментативным способом) при внутрибрюшинном введении крысам пчелиного яда показало, что рост ЭФПЭ сочетался с увеличением концентрации кортизола (табл.2).

Таблица 2

Динамика изменения ЭФПЭ и уровня кортизола в крови при внутрибрюшинном

Время после воздействия, мин Изучаемые показатели

ЭФПЭ (мкмсм/Вс) Концентрация кортизола (нмоль/л)

0 1,01 ±0,01 47,77±5,12

60 1,28±0,02* 122,20±8,28*

180 1,32±0,04* 140,40±8,37*

Примечание: * - статистически значимые различия (р<0,05) с исходными показателями.

Результаты исследований свидетельствуют, что регистрируемое первичное уменьшение ЭФПЭ при стрессовых воздействиях связано с повышением уровня циркулирующих катехоламинов в крови и (или) повышением чувствительности к ним адренорецепторов клеток. Отмечено, что в реакциях на стресс концентрация адреналина в плазме возрастает в десятки раз уже через несколько минут (Тюрмина и др., 1997; Сейдахметова, 2005), в частности, при внутрибрюшинном введении пчелиного яда собакам на 1-5 минут (Vick et al., 1972). В процессе развертывания стресс-реакции катехоламины, активируя выброс АКТГ, стимулируют нарастание в крови уровня гормонов коры надпочечников. В то время как катехоламины отражают возникновение срочного пускового эффекта, для кортикостероидов характерно долгосрочное действие (Меерсон, 1986; Сапронов, 1998; Sunanda at al., 2000). Экскреция кортикостероидов,

направленная на лимитирование 1-й фазы стресс-реакции, вероятно, определяет повышение ЭФПЭ (2-я фаза).

С целью подтверждения указанного положения нами проведены исследования ЭФПЭ при внутрибрюшинном введении пчелиного яда адреналэктомированными крысам с ограниченным выбросом адреналина и кортизола. Введение пчелиного яда животным с удаленными надпочечниками не вызывало изменения ЭФПЭ, выявленного при действии апитоксина на интактных крыс (табл. 3)

Таблица 3

Динамика изменения ЭФПЭ (мкмсм/Вс) интактных и адреналэктомированных крыс

при внутрибрюшинном введении пчелиного яда

Группа животных До инъекции Время после инъекции

1 час 1 сутки 1 неделя

Контрольная группа 1,14±0,03 1,13±0,03 1,11 ±0,03 1,12±0,03

Интактные+ пчелиный яд 1,16±0,04 1,09±0,03* 1,26±0,03*° 1,20±0,03°

Адреналэктомия+ пчелиный яд 1,18±0,06 1,14±0,07 1,12±0,07 1,07±0,05

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с интактиыми животными (до инъекции); статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

Анализ результатов свидетельствует о высокой чувствительности ЭФПЭ к основным стресс-реализующим гормонам. Опыты на эритроцитах in vitro подтвердили данное положение. Отмечено, что использование адреналина в концентрации, соответствующей его концентрации в крови в условиях физиологической нормы (МО"|0г/мл), не вызывало достоверных изменений ЭФПЭ. Добавление адреналина в концентрации, соответствующей его уровню при стрессовых реакциях организма (МО'9 г/мл), проявлялось в необратимом уменьшении ЭФПЭ (р<0,05). В отличие от опытов с адреналином, инкубация эритроцитов с кортизолом (1-10"7-5-107 г/мл) определила увеличение ЭФПЭ в интервале от 30 мин. до 2 часов в зависимости от примененной концентрации (рис. 4).

Рис. 4. Изменение ЭФПЭ при действии адреналина (1-Iff9 г/мл) и кортизола (МО7 г/мл) в опытах in vitro

Примечание: * - статистически значимые различия (р<0,05) с исходными значениями.

Таким образом, изменения ЭФПЭ реализуются через повышение содержания в крови стресс-реализующих гормонов - адреналина и кортизола. Однако следует учитывать, что стресс-факторы среды могут воздействовать на рецепторы и непосредственно. Ярким примером этого является воздействие на опиоидные рецепторы человека не только эндогенных опиоидных пептидов, но и экзогенных растительных опиоидов. Поэтому для понимания механизмов выявленной типовой реакции ЭФПЭ на стрессовые воздействия представляло интерес изучение действия разных стресс-факторов на ЭФП изолированных эритроцитов.

3.3. Исследование изменения ЭФПЭ при действии стресс-факторов в опытах in vitro

Для обоснования зависимости ЭФПЭ от вида воздействующего фактора нами проведены опыты in vitro с пчелиным ядом, жабьим ядом и различными видами ЭМИ на эритроциты. В результате проведенных опытов было установлено, что обработка суспензии эритроцитов низкоинтенсивными ЭМИ, так же, как и инкубация в растворе пчелиного яда или адреналина приводила к однообразному изменению ЭФПЭ: первоначальное снижение с последующим повышением. При этом различия характеризовали лишь степень выраженности и длительность реакции. В отличие от этой картины, инкубация суспензии эритроцитов в растворе жабьего яда или кортизола приводила только к повышению ЭФПЭ (рис. 5).

Рис. 5. Изменение ЭФПЭ при действии различных факторов в опытах in vitro на интактные (А) и глутарфиксированные (В) эритроциты

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) со значениями контрольной группы

Из полученных результатов следует, что изменение ЭФПЭ при воздействии на изолированные эритроциты разных стресс-факторов (за исключением яда жабы и кортизола) имеет ту же типичную картину, что и при их действии на целостный организм, установленную нами в вышеприведенных экспериментах. Вероятно, специфика эффекта яда жабы определяется сходством его компонентов с кортизолом - основная часть яда -буфадиенолиды имеют ту же стероидную (циклопентанапергидрофенантрен) структуру (Крылов, 1990; Лопина, 2005).

Таким образом, выявленные изменения ЭФПЭ при исследуемых видах воздействия в опытах in vitro согласуются с полученными нами данными для различных видов стрессоров в исследованиях in vivo, связанными с закономерными изменениями электрокинетических свойств эритроцитов в ответ на развивающуюся в организме стресс-реакцию, реализующуюся, в частности, через модификацию адренорецепторов.

Из приведенных данных логично предположить, что действие стресс-факторов в опытах на изолированных эритроцитах приводит к непосредственной модификации их рецепторного аппарата. Принимая во внимание, что важнейшими структурными составляющими этого аппарата являются белки, следует заключить, что именно они являются мишенью действующих стресс-факторов.

Для подтверждения роли белков в модификации активности клеточных рецепторов при действии выбранных видов воздействия мы провели эксперименты с предварительной обработкой эритроцитов глутаровым альдегидом, фиксирующим белковые молекулы за счет образования сшивок по -NH2-rpynnaM (Walter, Krob, 1989). Было показано, что преинкубация эритроцитов с глутаровым альдегидом приводила к практически полной отмене первой фазы (уменьшение ЭФПЭ) реакции «интактных» эритроцитов на

стрессовое воздействие ЭМИ, пчелиного яда и адреналина. Вместе с тем, в сериях опытов с жабьим ядом и кортизолом было установлено, что выявленная в предыдущей серии опытов фаза повышения ЭФПЭ сохранялась (рис. 5).

Следует отметить, что при длительной фиксации (18ч) отменялась как фаза падения, так и фаза увеличения ЭФПЭ. Укажем, что варьирование времени фиксации влияет на глубину распространения фиксации за счет ковалентного связывания белков. Так, фиксация глутаровым альдегидом в течение 10 мин. не оказывает заметного влияния на структурные характеристики (Исаев-Иванов и др., 2010), тогда как полная фиксация образцов глутаровым альдегидом достигается в течение 18-24 часов (Загорулько 2002; Головченко, 2006).

Результаты исследования свидетельствуют, что на фоне фиксации белковых молекул глутаровым альдегидом отменяется реакция падения ЭФПЭ в ответ на стресс-воздействие. Можно предположить, что механизм ответной реакции клетки при различных воздействиях in vitro реализуется сходным образом с действием альтерирующих факторов на организм и связан с изменением рецепторной реактивности клеток. При этом, если первая фаза - снижение ЭФПЭ связана с модификацией адренорецепторов на мембране, то вторая фаза - повышение ЭФПЭ, может быть обусловлена модификацией внутриклеточных рецепторов стероидов, расположенных в цитозоле. Выявленные закономерности ЭФПЭ позволяют предположить возможность однотипных проявлений морфофункциональных свойств эритроцитов в ответ на различные виды воздействия. Решению этой задачи посвящена следующая глава работы.

Глава 4. Морфофункциональные характеристики эритроцитов при стрессовом

воздействии

4.1. Роль биохимических показателей эритроцитов в изменении ЭФПЭ

При действии стрессовых факторов стереотипная реакция организма проявляется интенсификацией процессов ПОЛ. Было установлено, что через 15-30 минут после альтерации в эритроцитах крыс всех групп наблюдалось увеличение содержания МДА. показателя традиционно характеризующего ПОЛ (Кирпатовский и др., 1996). Наиболее значимые изменения концентрации МДА регистрировались при действии гипобарической гипоксии, иммобилизации, адреналина и ИМП по сравнению с контрольной группой животных (рис.6). Гамма-облучение определило двухфазное увеличение концентрации МДА, с ростом данного параметра к 15 мин. эксперимента и к 1 неделе относительно контрольной группы животных. Зоотоксины, после первоначального роста концентрации МДА приводили к снижению его уровня после 30 мин. относительно значений контроля (р<0,05) с постепенным восстановлением к первой неделе наблюдения. Концентрация МДА снижалась при действии НИЛИ и ИМП к 60 мин. и 120 мин. соответственно, КВЧ -облучения не вызывало значимых изменений. Введение кортизола определило снижение данного метаболита относительно контрольных значений во всех точках наблюдения (р<0,05). На фоне блокады ß-адренорецепторов пропранололом выявлено ослабление эффектов связанных с действием адреналина.

Изменение концентрации МДА при исследуемых видах воздействия на организм свидетельствует о первичной активации ПОЛ, что согласуется с литературными данными (Владимиров, 1998; Kiefer, Snyder, 2000; Маслова, 2005). При этом анализ динамики ПОЛ в эритроцитах выявил зависимость между степенью изменения концентрации МДА в клетках и интенсивностью и вектором направленности ЭФПЭ от вида стрессового воздействия. Так, первоначальное снижение ЭФПЭ сочеталось с активацией процессов ПОЛ при действии стресс фактора, тогда как рост уровня ЭФПЭ сопровождался уменьшением концентрации МДА. Наиболее сильное увеличение концентрации МДА вызывало наибольшее уменьшение ЭФПЭ, что характерно для адреналовой токсемии, иммобилизации, гипобарической гипоксии и гамма-облучения. Уменьшение

интенсивности процессов ПОЛ сопровождалось развитием 2-й фазы ЭФПЭ, выраженной при действии зоотоксинов.

Изменение оксидантых процессов приводит к изменению состояния системы глутатиона, являющейся буферной системой, поддерживающей в восстановленном состоянии сульфгидрильные группы белков, определяющих глюкокортикоид-связывающую способность рецепторов (Килесса, 2010), проницаемость мембраны и состояние гемоглобина (Колесниченко, 2003)

%к контролю

% к контролю

—пчелиныияд

' —адреналин

— кортизол

—адреноблокатор «адреналин

—адреноблокатор

щ

О 15 мин 30 мин 60 мин 120 мин 1 сутки —иммобилизация —адреналин —гипоксия

—гамма-облучение —пчелиныияд —жабий яд _______________________________

Рис. 6. Изменение концентрации МДА в эритроцитах при различных видах воздействия Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

Исследование концентрации общего глутатиона позволило установить нарастание его уровня в динамике эксперимента при всех видах альтерации, за исключение действия на организм ионизирующего излучения (рис. 7). При воспроизведении адренаповой токсемии, иммобилизации и гипоксии отклонения от нормы содержания общего глутатиона в эритроцитах сохранялись на практически неизменном высоком уровне во всех точках наблюдения (р<0,05). Введение животным кортизола не вызывало значимых изменений данного параметра. Введение адреналина и пчелиного яда на фоне блокады 13-адренорецепторов пропранололом снижало или полностью отменяло рост данных показателей, наблюдаемый при действии адреналина и пчелиного яда на интактный организм.

15мин

•адреноблокатор «адреналин адреноблокатор +яд

—иммобилизуя —адреналин —гилокси: —гамма-облучение —пчелиный яд —жабий я Рис. 7. Изменение концентрации общего глутатиона воздействиях.

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

время

0 15 30 60 120 эритроцитах при различных стрессовых

Рассматривая динамику изменения содержания восстановленной и окисленной форм системы глутатиона в эритроцитах крыс сформированных групп, необходимо отметить, что тенденция вариации восстановленного глутатиона практически идентична обнаруженной для общего глутатиона, тогда как концентрация окисленной формы глутатиона увеличивалась при иммобилизации животных, гипобарической гипоксии и введении адреналина.

Полученные результаты свидетельствуют, что рост содержания глутатиона, по всей видимости, связан с активацией компенсаторно-приспособительных реакций в эритроцитах, приводящих к индукции синтеза глутатиона на фоне повышения активности ПОЛ. Так, наиболее сильные стрессовые воздействия приводили к наиболее длительному увеличению показателей антиоксидантного глутатионового статуса. При этом увеличение концентрации, как общего глутатиона, так и его восстановленной формы сочеталось с первоначальным уменьшением ЭФПЭ. Дальнейшее изменение вектора направленности (рост ЭФПЭ) не было сопряжено с изменением направленности в состоянии системы глутатиона.

В то же время следует отметить, что регистрируемое в опытах первичное уменьшение ЭФПЭ сочетающееся с ростом концентраций МДА и глутатиона при альтерации функций организма, нивелировалось при действии стресс-агента на фоне блокады ß-адренорецепторов, что может говорить о влиянии стрессоров через изменение адренореактивности клеток. Поскольку адренорецептор представляет собой белок и при взаимодействии с медиатором образует комплексное соединение, следует ожидать непосредственного его влияния на структурную модификацию белков эритроцитарной мембраны. При этом необходимо учитывать, что 90% отрицательного заряда клетки определяют сиаловые кислоты, входящие в основном в состав гликопротеинов (Seaman, 1983; Wojcicki, Beth, 1993). Поэтому следующая часть исследований связана с изучением белкового профиля эритроцитарных мембран при различных видах воздействия.

В ходе проведенных экспериментов была установлена общая тенденция изменения содержания основных белковых фракций эритроцитарной мембраны при действии альтерирующих факторов. На фореграммах к 15 мин. после воздействий регистрировалось снижение относительного содержания спектрина, анкирина, белка полосы 3 и гликофоринов при увеличении фракции белков полос 4.1, 4.2, 4.9 и тропомиозина относительно уровня значений данных фракций контрольных животных (рис.8).

Рис. 8. Изменение спектра белков эритроцитов при различных стрессовых воздействиях к 15 минуте после альтерации

1- спектрин; 2- анкирин; 3- б.п.З; 4 - б.п.4.1.; 5 - б.п.4.2; 6 - гликофорин А; 7 - б.п.4.9; 8 - актин; 9 - ГАФД; 10 - тропомиозин; 11 - гликофорин В

По оси ординат - % изменения концентрации белковых фракций к 100 % - уровню значений контроля.

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

Введение кортизола определило рост концентрации спектрина при отсутствии достоверных изменений других белковых фракций эритроцитов к 15 мин. эксперимента (рис. 9). При действии пчелиного яда на фоне блокады В-адренорецепторов, также как и при действии кортизола, наблюдалось увеличение концентрации спектрина, а эффекты, связанные с действием пчелиного яда, существенно нивелировались. Блокатор 13-адренорецепторов не вызывал достоверного изменения белкового состава мембран эритроцитов.

% к контролю

А

пчелиный яд блокатор+яд адреналин кортизол

В гликофорин А

Кортизол Пчелиный яд Адреналин Рис. 9. Изменение спектра белков эритроцитов к 15 минуте после воздействий Примечание-. *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

К 120 мин. при действии различных альтерирующих факторов наблюдалась модификация процентного соотношения белковых фракций, выражающаяся ростом концентраций белка полосы 3, гликофоринов и снижении содержания спектрина, белков полос 4 относительно концентраций данных фракций белков на 15 мин. эксперимента (р<0,05). Динамика изменения концентрации белков при действии кортизола и пчелиного яда на фоне блокады В-адренорецепторов к 120 мин. опыта носила сходный характер с действием других исследованных факторов (рис.10).

140 120 ХОО 80 60 40

У,, к контролю

л

пме л и н ы

й яд блокатор+яд

адреналин

кортизол

I спе ктри н

■ белок п.З

гликофорин А

Рис. 10. Изменение спектра белков эритроцитов к 120 минуте после воздействий Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

Результаты исследований показали, что изменение ЭФПЭ при действии экстремальных факторов на организм сопряжено с количественной модификацией белковой фазы мембраны. При этом механизм снижения ЭФПЭ при развитии стресс-реакции может быть обусловлен действием катехоламинов на белки эритроцитарной мембраны, что проявлялось в первоначальном снижении процента интегральных белков на фоне постепенного снижения уровня спектрина. Дополнительный вклад в уменьшение ЭФПЭ, по всей видимости, оказывало изменение белков полос 4 и тропомиозина, которые

участвуют в укреплении белков цитоскелета. Рост ЭФПЭ сочетался с относительным увеличением основных сиалогликопротеинов эритроцитарной мембраны, и, может быть опосредован преобразованиями цитоскелета, в частности, относительным уменьшением концентрации спектрина, составляющего 75% всей массы цитоскелета, определяющего увеличение латеральной подвижности гликопротеинов (Казенное, Маслова, 1988). В свою очередь, перераспределение зарядов интегральных белков по глубине гликокаликса, влияющее на увеличение ЭФПЭ, вероятно обусловлено развитием стресс-реакции в организме и ростом концентрации глюкокортикоидов в крови. Действие стероидных гормонов реализуется через взаимодействие их с внутриклеточными рецепторами, расположенными в цитозоле и в ядрах клеток (Морозова и др., 1990). При этом стероидные гормоны могут встраиваться в липидный бислой, способны уменьшать подвижность полярных группировок мембранных фосфолипидов, оказывают тормозящее действие на ПОЛ (Сергеев, 1984).

Учитывая, что фосфолипиды составляют основную часть мембранных липидов и в комплексе с белками выполняют структурообразующую функцию, нами было проведено исследование фосфолипидного профиля мембран эритроцитов при действии различных стрессоров.

В результате исследования установлено, что введение зоотоксинов, воспроизведение адреналовой токсемии, иммобилизация и гипоксическое воздействие вызывали значимые уменьшение концентрации ФЭА с 15-120 мин. относительно контроля (рис.11).

В г

Рис. 11. Динамика изменения различных фракций фосфолипидов при различных стрессовых воздействиях

А - фосфатидилэтаноламин, Б - фосфатидилхолин, В - лизофосфатидилхолин, Г - сфингомиелин По оси ординат - % изменения концентрации липидных фракций к 100 % - уровню значений контрольной группы животных.

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

Адреналовая токсемия, гипоксия и иммобилизация сохраняли статистически значимые различия концентрации ФЭА с уровнем контроля на всех этапах наблюдения, в том числе в его последней точке (1 сутки, р<0,05), восстановление значений до контроля регистрировалось при введении зоотоксинов. Исследование содержания ФХ в мембранах эритроцитов показало, что внутрибрюшинное введение пчелиного яда, адреналина, гипобарическая гипоксия и иммобилизация крыс приводили к нарастанию концентрации данного соединения в период 30-120 минут эксперимента. Исследование фракции ЛФХ показало значительный рост концентрации данной фракции фосфолипидов при воздействии гипобарической гипоксии, иммобилизации, зоотоксинов и адреналина. К 1 суткам наблюдалась тенденция восстановления показателей к исходным значениям при действии зоотоксинов. Внутрибрюшинное введение пчелиного яда, адреналина, гипобарическая гипоксия и иммобилизация определили достоверное снижение концентрации СМ мембран эритроцитов по сравнению с контролем. НИЛИ, КВЧ-воздействие и физическая нагрузка в виде плавания не оказывали статистически значимого влияния на концентрацию фосфолипидов эритроцитарных мембран на протяжении всего периода наблюдения. Исключение составило увеличение концентрации ФХ к 30-60-й мин. после воздействия НИЛИ.

Анализ полученных результатов свидетельствует, что в организме при различных видах экстремального воздействия происходит последовательное взаимопревращение отдельных фосфолипидов, целесообразность которых, очевидно, связана с необходимостью развития адаптационных преобразований на уровне клетки. В частности, уменьшение ФЭА и накопление лизоформ в клетке, сопряжено с активацией процессов ПОЛ. В норме лизоформы быстро подвергаются дальнейшему расщеплению. Главный путь утилизации лизофосфатидов - гидролитическое отщепление ЖК при участии лизофосфолипаз (фосфолипаза В). Кроме того, при конденсации двух молекул ЛФХ происходит образование ФХ (Грибанов, 1991, Клебанов, 1992.). ФЭА и ФХ метаболически связаны друг с другом, и восстановление концентрации ФЭА может идти за счет ФХ. При этом ФХ изменяет плотность поверхностного заряда мембраны (Березов, 1983) и именно поэтому снижение его концентрации может снижать чувствительность клеток-мишеней к лизису. В тоже время, СМ принимает участие в реализации внешних воздействий на клетку (Merrill, 1990). Так, внешние факторы через клеточные рецепторы оказывают влияние на сфингомиелазу, расщепляющей СМ до церамида, который в цитоплазме клетки при действии церамидазы расщепляется до сфингозина. Сфингозин активирует протеинкиназу С, фосфорилирующую белки мембран и цитоскелета, обеспечивая таким образом физиологический ответ клетки на внешнее воздействие (Генис, 1998).

Рассматривая влияние изменения фосфолипидного состава на ЭФПЭ следует учитывать, что исследованные фракции ФЛ относятся к нейтральным и могут опосредованно действовать на ЭФПЭ, определяя специфичность укладки полипептидных цепей белков и, в частности, сиалогликопротеинов.

В тоже время, увеличение ЭФПЭ может быть следствием стабилизирующего действия стероидных гормонов на липидный слой. Проведенное нами исследование действия кортизола на липидную составляющую эритроцитарной мембраны показало, что статистически значимые изменения регистрировались только к 15 мин. эксперимента в отношении СМ и ФХ, что выражалось в росте концентрации СМ на 14% (от 22,1 ±0,8% до 25,4±1,8 % от общего содержания фосфолипидов) и уменьшении ФХ на 15% (от 39,8±2,5% до 34,2±1,4% от общего содержания фосфолипидов). Концентрации ЛФХ и ФЭА относительно общего содержание ФЛ достоверно не изменялись. В дальнейшем содержание фосфолипидных фракций восстанавливалось до контрольных значений.

Реорганизация липидов закономерно приводит к изменению работы мембрансвязанных энзимов (Конторщикова, 2000; Андреев, 2005). Na-K-АТФаза является

липидзависимым ферментом, изменение активности которой влияет на поверхностный потенциал клеток (Schoner, 2003).

Результаты экспериментов показали, что активность Na-K-АТФазы при действии экстремальных факторов первоначально увеличивалась относительно значений интактной группы животных, к 120 минуте - ингибировалась с постепенным восстановлением в ходе эксперимента, и только гамма-облучение вызвало рост активности Na-K-АТФазы к 1 суткам (рис. 12). При действии кортизола и ß-адреноблокатора активность Ыа,К-АТФазы ингибировалась во всех точках наблюдения, тогда как воздействие пчелиного яда на фоне блокагора показало нивелирование проявления фазности изменения активности Na-K-АТФазы по сравнению с действием пчелиного яда на данный показатель.

Рис. 12. Динамика изменение активности Ыа-К-АТФазы при различных видах воздействия Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными

Анализ результатов свидетельствует о зависимости активности Na-K-АТФазы от развития стресс-реакции в организме на действие альтерирующих факторов. Возможно, стрессовые воздействия, первично приводя к мобилизации энергетических возможностей организма и возрастанию концентрации АТФ в клетках, обеспечивают дополнительную активацию Na-K-АТФазы (Болдырев, 1997). В дальнейшем, модификация липидной фазы мембраны и нарушение взаимодействия между белковыми молекулами в олигомерном ансамбле Na-K-АТФэзы, вероятно, ингибируют активность Na-K-АТФазы. Угнетение активности Ыа-К-АТФазы приводит к увеличению концентрации внутриклеточного Са2+ (вследствие активации Na+/Ca2+ обменного механизма), который, в свою очередь, участвует в регуляции клеточного метаболизма (Forman at el, 2004).

Результаты экспериментов позволяют говорить, что динамика изменения активности Na-K-АТФазы взаимосвязана с изменением ЭФПЭ: уменьшение ЭФПЭ сопряжено с повышением активности фермента, а при росте ЭФПЭ работа Ыа-К-АТФазы ингибируется. Таким образом, изменение активности Na-K-АТФэзы, в ответ на структурно-функциональную перестройку эритроцитов, может оказывать влияние на модификацию ЭФПЭ при действии различных экстремальных факторов на организм.

Исследование уровня органических фосфатов в клетке (АТФ и 2.3ДФГ). по которым можно судить о состоянии метаболизма клеток, в наших экспериментах было проведено при действии пчелиного яда и иммобилизации животных. В результате измерения был выявлен рост концентрации АТФ в клетках на начальном этапе эксперимента с последующим ее уменьшением, сниженная концентрация 2,ЗДФГ постепенно увеличивалась в ходе эксперимента (табл. 4).

Таблица 4

Динамика изменения концентрации АТФ и 2,ЗДФГ (мкмольФн/мл клеток) в эритроцитах __при различных видах воздействия на крыс__

Вид воздействия Показатель Интактные Время после воздействия

15 мин 120 мин 24 часа

Иммобилизация АТФ 0,52±0,10 1,30±0,10 * 0,64±0,09 0,31±0,11*

2.3ДФГ 2,60±0,12 0,92±0,33 * 1,80±0,26 3,18±0,29*

Пчелиный яд АТФ 0,52±0,10 1,13±0,14 * 0,73±0,13* 0,42±0,11

2,ЗДФГ 2,60±0,12 1,50±0,28* 2,80±0,25 3,81±0,24*

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с интактными животными

Необходимо учитывать, что рост 2,3 ДФГ сопровождается диссоциацией спектрина, увеличением интегральной подвижности белков мембраны эритроцитов, увеличением площади и уменьшением объема клеток (Брызгалов и др., 2009). Кроме того, АТФ служит донором фосфата для протеинкиназных реакций, осуществляющих фосфорилирование мембранных белков. Результатом увеличения уровня фосфорилирования белковых компонентов цитоскелета является уменьшение сродства между их молекулами (Казеннов, Маслова, 1991, МаПеса Е. е! а1, 1992). Истощение эритроцитов по АТФ ведет за собой усиление белок-белковых взаимодействий (Палек и др, 1980). Вероятно, фосфорилирование мембранных белков может быть причиной изменения морфологии эритроцитов, связанной с перестройкой молекулярной архитектоники поверхности эритроцита, приводящей к перераспределению эффективного отрицательного заряда.

4.2. Морфометрические характеристики эритроцитов при стрессовом воздействии

Результаты исследований показали, что у изученных образцов крови интактных животных размеры эритроцитов составили: диаметр клетки 7,40±0,09 мкм, толщина в области краев клетки 1,33±0,05 мкм. При сравнении АСМ-изображений нормальных эритроцитов и эритроцитов, полученных после исследуемых видов воздействия, были выявлены изменения как размеров клеток, так топографии и рельефа поверхности мембраны эритроцитов (Рис. 13, 14). После стрессового воздействия диаметр клеток и толщина в области краев уменьшались, а размер центральной зоны увеличивался. При этом действие адреналина вызывало рост сферичности клеток, регистрируемый до конца эксперимента. Другие виды стрессового воздействия определили обратимые изменения ......

гиперадреналинемии

иммобилизация

пчелиный яд физиологический раствор

Рис. 13. Морфология эритроцитов при различных способах воздействия на организм крыс к 15 минуте после альтерации.

К 120 минуте адреналин при сохранении сферичности клеток определил появление сфероэхиноцитов. Внутрибрюшинное введение пчелиного яда, кортизола и иммобилизация животных приводили к появлению эхиноцитов (рис 14).

введение адреналина

введение кортизола

пчелиный яд иммобилизация

Рис.14. Морфология эритроцитов при различных способах воздействия на организм крыс к 120 минуте после альтерации.

введение пчелиного яда

Показано, что необратимый сфероэхиноцитоз индуцируется увеличением внутриклеточного кальция (Andrews, 2002). В тоже время, изменение формы обратимо, если уровень внутриклеточного ионизированного Са2+ не увеличивается выше ЗмМ. Увеличение концентрации внутриклеточного кальция в эритроцитах приводит к: изменению в архитектуре скелета эритроцитов через взаимодействие с кальмодулином; стимуляции мембранных фосфолипаз С и А; активации различных протеинкиназ; активации скрамблазы, что приводит к экспозиции ФС на внешнюю поверхность эритроцитов (Daleke, 2003; Zwaal, 2005). Выход ФС на внешнюю поверхность эритроцитов приводит к образованию эхиноцитов (Schwarz, 1999). В процессе образования эхиноцитов на мембране эритроцитов происходит перераспределение отрицательного заряда. В результате перераспределения заряда на мембране эритроцита образуются дискретные области с сильным отрицательным зарядом (Marikovsky, 1996).

Таким образом, модификация морфометрических параметров эритроцитов, по всей видимости, является стереотипной реакцией клетки при стрессе, приводит к изменению эффективного поверхностного заряда и их ЭФПЭ.

4.3. Зависимость ЭФПЭ от состава эритроцитарной популяции и

неспецифических адаптационных реакций организма

Изменения ЭФПЭ при действии различных факторов на уровне организма может быть результатом перераспределения клеток в общем пуле по их диаметру. В результате

проведенных исследовании выявлено, что действие пчелиного яда и адреналина сопровождалось увеличением гетерогенности популяции эритроцитов по диаметру (рис. 15). Так, данные виды воздействия на протяжении всего срока наблюдения (1 сутки) вызывали существенный рост количества эритроцитов с повышенным диаметром клеток и незначительное количественное, но статистически значимое, появление эритроцитов с уменьшенным диаметром клеток. Физическая нагрузка в виде плаванья не приводила к существенному изменению процентного распределения эритроцитов по диаметру клеток по сравнению с интактными образцами.

3-4мкм 5-бмкм 7-8мкм 9-10мкм 11-12мкм 13-14мкм

3-4МКМ 5-бмкм 7-8МКМ 9-10мкм 11-12мкм13-14мкм

В

Рис. 15. Распределение диаметра эритроцитов при различных видах воздействий на крыс, по оси ординат - % распределения эритроцитов по диаметру: а - 15 минут после воздействия, в - 1 сутки

после воздействия

* - статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными.

Изменение процента распределения эритроцитов по диаметру при действии исследуемых факторов, вероятно, обусловлено появлением в кровотоке депонированных форм эритроцитов (Кузник, 2004) и выбросом молодых эритроцитов из костного мозга, обладающих более высокой ЭФПЭ (Х1е е1:. а1, 2002). Сопоставление ЭФПЭ с распределением клеток по диаметру показало, что соотношение баланса субпопуляций эритроцитов, при котором проявлялась тенденция роста эритроцитов с повышенным диаметром, на начальном этапе не сочеталась с суммарной величиной ЭФПЭ, сниженной относительно уровня ЭФПЭ контроля.

Таким образом, исследование распределения эритроцитов по диаметру показало отсутствие прямой зависимости ЭФПЭ от изменения диаметра клеток, что позволяет говорить о роли именно структурного компонента в изменении ЭФПЭ. При этом следует учитывать, что восстановление электроотрицательное™ эритроцитов в постальтерационный период может быть результатом восстановительных процессов на уровне всего организма, приводящих к увеличению «омоложения» возрастного состава эритрона с повышенной ЭФПЭ.

Анализ типа общей неспецифической адаптационной реакции (ОНАР) на уровне организма (Гаркави,1995) свидетельствует, что иммобилизация животных и облучение крыс гамма-излучением приводили к развитию стресс-реакции уже на начальном этапе после воздействия, что проявлялось к 15 мин. снижением уровня лимфоцитов ниже

уровня нормы - до 50% (у крыс липфоцитарный тип кроветворения). Моделирование гипоксического состояния у животных вызывало развитие стрессовой реакции к 120 мин. наблюдения. Действие зоотоксинов и физической нагрузки определили реакцию активации, число лимфоцитов находилось в верхней половине зоны нормы (60-70%), тогда как действие адреналина на организм вызывало реакцию переактивации, характеризующуюся низким уровнем реактивности (количество лимфоцитов выше 80%). Соотношение форменных элементов белой крови в лейкоцитарной формуле свидетельствовало о развитии напряженности реакции.

Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что в ответ на действие острого стресса клеточная система отвечает целым комплексом стереотипных изменений, выраженность которых зависит от интенсивности воздействия, что проявляется в изменении общих неспецифических реакций на уровне организма.

Глава 5. Исследование повторяющегося и хронического стрессовых воздействий на ЭФПЭ и морфофункциональные показатели эритроцитов

5.1. ЭФПЭ крови крыс при повторяющемся и хроническом стрессе

Исследование действия повторяющегося стрессового воздействия на ЭФПЭ и концентрацию в них МДА показало сходную тенденцию изменения данных показателей с действием острого стресса. Так, ЭФПЭ к 1 часу после последнего воздействия на животных, как при действии пчелиного яда, так и при физической нагрузке в виде плавания, уменьшалась и возрастала к 1 суткам-1 неделе эксперимента. Пчелиный яд вызывал более значимые изменения как увеличения, так и уменьшения уровня ЭФПЭ (рис.16). При этом исследование концентрации МДА показало, что рост ЭФПЭ сочетался со снижением концентрации МДА. Рассматривая динамику изменения содержания общего, вБИ и вЗЗв в эритроцитах крыс после повторяющегося стрессового воздействия, необходимо отметить, что во всех группах наблюдалось снижение концентрации общего глутатиона, как за счет Оввв, так и за счет ОЭН. Анализ лейкоцитарной формулы крыс после повторяющегося стрессового воздействия показал развитие лимфопении и нейтрофилеза, наиболее ярко выраженных на 1 сутки наблюдения, свидетельствующих о развитии стресс-реакции в организме.

I пчелиным яд

I плавание

140 120 ЮО 80 60 40 20 О

ЭФП МДА

Рис. 16. Изменение ЭФПЭ, концентрации МДА и общего глутатиона при повторяющихся стрессовых воздействиях

По оси ординат - % изменения уровня исследуемых показателей к 100 % - уровню значений контрольной группы животных, по оси абсцисс - время после воздействия: 1 - 1 час; 2 - 1 сутки; 3 - 1 неделя.

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными

Таким образом, установлено, что повторяющееся стрессовое воздействие, так же как и острый стресс на фоне развития стресс-реакции вызывал первоначальное уменьшение ЭФПЭ с последующим ее ростом. При этом вторая фаза существенно более

продолжительна во времени при повторяющимся стрессе, по сравнению с действием острого стресса. По-видимому, этот факт объясняется тем, что при многократном воздействии происходит «суммирование эффектов» в силу того, что в течение суток сдвиги, вызванные ими в состоянии гомеостаза организма, не успевают полностью исчезнуть. Данное положение сочетается с данными литературы (Горизонтов и др., 1983 ЭаПтап е! а1., 1992). Однако следует подчеркнуть, что изменения в системе глутатиона при действии острого и повторяющегося стрессов носят неоднозначный характер. Так, при остром стрессе рост общего и восстановленного глутатиона свидетельствует о мобилизации резервов низкомолекулярных антиоксидантов, при которой развиваются метаболические перестройки, направленные как на усиление синтеза, так и восстановление окисленной формы глутатиона. Вместе с тем, внутриклеточные ресурсы системы глутатиона ограничены и, вероятно, при действии повторяющегося стресса, емкость данной системы уменьшается.

Дальнейшее исследование изменения ЭФПЭ было проведено при исследовании развития хронического стресса на моделях локальной и глобальной ишемии головного мозга крыс.

В ходе исследования крови крыс было выявлено, что ЭФПЭ животных в течение первых суток изменялась недостоверно с последующим понижением в течение 10 дней после альтерации организма относительно значений интактных крыс. Через 60 суток после моделирования как глобальной, так и локальной ишемии головного мозга ЭФПЭ была существенно повышена по сравнению с интактными животными (р<0.05) (рис. 17).

Исследование концентрации МДА эритроцитов выявило постепенное нарастание уровня данного показателя в ходе развития как глобальной, так и локальной ишемий головного мозга относительно уровня значений интактной группы крыс. Максимальный рост концентрации МДА был выявлен на 10 сутки после альтерации. Наиболее выраженные изменения регистрировались при развитии глобальной ишемии головного мозга. Состояния системы глутатиона характеризовалось снижением общего глутатиона и ГБН, при увеличении концентрации ГЗвГ относительно контроля. При исследовании лейкоцитарной формулы у животных к 10 дню после альтерации при обоих видах воздействия наблюдался рост сегментоядерных нейтрофилов и уменьшение количества лимфоцитов относительно интактных крыс, К 60 суткам количество лимфоцитов сохранялось пониженным при глобальной ишемии головного мозга, тогда как при локальной ишемии наблюдалась тенденция к восстановлению данного показателя к контролю.

Рис. 17. Изменение ЭФПЭ, концентрации МДА и общего глутатиона при хронической ишемии головного мозга крыс

По оси ординат - % изменения уровня исследуемых показателей к 100 % - уровню значений интактной группы животных, по оси абсцисс - время после воздействия, сутки. Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с интактными животными

Полученные результаты свидетельствуют, что при моделировании ишемии головного мозга у животных наблюдалось первичное уменьшение с последующим увеличением ЭФПЭ, что согласуется с полученными данными изменения ЭФПЭ при действии острого и повторяющегося стрессов. Анализ лейкоцитарной формулы при локальной ишемии соответствует реакции активации, при глобальной ишемии - реакции стресса. При этом развивающиеся моноцитопения и сдвиг лейкограммы влево свидетельствуют о напряженности реакций адаптации, нарушении гармоничности в функционировании подсистем организма и снижении уровня реактивности в ходе усугубления ишемии головного мозга.

5.2. ЭФПЭ крови больных с заболеваниями разной этиологии

Изучение крови больных ДЭ показало, что при поступлении в стационар у пациентов при 1 и 2 стадиях заболевания ЭФПЭ была повышена по сравнению с возрастной нормой. В отличие от этого, 3 стадия заболевания характеризовалась понижением данного показателя относительно ЭФПЭ возрастной нормы (рис. 18). Отмечалось повышение активности ПОЛ, наиболее выраженное у пациентов с 3-й стадией ДЭ. Уровень общего глутатиона был снижен относительно контроля у всех пациентов с ДЭ, в наибольшей степени это было выражено в 3-й стадии. Различалось и соотношение Г8Н и ГЗБГ у пациентов с разной степенью ХЦВН. При первой стадии ДЭ происходила значительная активация глутатионового звена антиоксидантной системы, что приводило к трансформации Г8Н в ГБвГ. Во второй стадии его активность несколько снижалась, но соотношение ГЭН и ГввГ, тем не менее, значимо отличалось от нормального уровня. При 3-й стадии происходило резкое падение уровня ГЭН, что, в сочетании со значительным снижением общего глутатиона, указывало на истощение резервов данной антиоксидантной системы.

При исследовании лейкоцитарной формулы выявлены достоверные изменения количества моноцитов, лимфоцитов, эозинофилов, базофилов относительно возрастной нормы, наиболее выраженные при 3-й стадии заболевания. Для пациентов со 2-й и 3-й стадиями был характерен сдвиг лейкоцитарной формулы влево.

Хроническая ишемия головного мозга, может вызывать развитие адаптационного процесса к существованию в условиях гипоксии головного мозга, что проявляется в повышении адаптационного резерва организма и обуславливает рост ЭФПЭ на 1 и 2 стадиях заболевания. Прогрессирование ДЭ приводит к нарушению адаптационных возможностей организма в 3 стадию болезни и определяет снижение ЭФПЭ.

250 200 150 ХОО 50 О

IV! ДА

глутати он

Рис. 18. Изменение ЭФПЭ, концентрации МДА и общего глутатиона больных ДЭ

По оси ординат - % изменения уровня исследуемых показателей к 100 % - уровню значений

возрастной нормы.

Примечание4. *- статистически значимые различия (р<0,05) с возрастной нормой

Результаты экспериментальных и клинических данных показали, что динамика изменения исследуемых показателей при моделировании хронической ишемии головного

мозга в эксперименте были аналогичны клиническим данным, что подтверждает целесообразность изучения ЭФПЭ как модели исследования развития не только стресс-реакции в организме, но и модели, позволяющей исследовать развитие патологического процесса.

Подтверждение сказанному являются проведенные исследования крови больных псориазом, ЯБДПК, вертеброгенной люмбоишалгией, нервно-мышечными заболеваниями. Было показано, что не зависимо от этиологии в период обострения заболевания ЭФПЭ снижена у всех групп больных (табл. 5). На основании полученных результатов следует заключить, что снижение ЭФПЭ носит общий характер, так как проявляется при разных заболеваниях и, вероятно, является закономерным изменением в ответ на текущий патологический процесс, который может рассматриваться как длительно действующий стрессовый фактор (Kaiser, 2006). При этом известно, что активность симпатоадреналовой системы максимальна в острую фазу стресса, затем снижается и повышается только под влиянием дополнительного раздражителя или при обострении уже имеющегося патологического процесса (Селье, 1972; Барабой, 2006).

Таблица 5

ЭФПЭ и концентрация МДА при различных видах заболеваний_

Показатель Вид заболевания

Псориаз ЯБДПК Люмбоишалгия Нервно-мышечные заболевания

ЭФПЭ, мкм-см/В-с 1,02+0,01* 1,09+0,07* 1,11+_0,02* 1,04+0,04*

МДА, нМоль/л 5,85+0,12* 5,01±0,22* 5,49±0,14* 5,56±0,26*

Примечание'. *- статистически значимые различия (р<0,05) по сравнению с нормой. ЭФПЭ доноров 1,31+0,02 - 1,40+0,03 мкм-см/В-с, концентрация МДА доноров 3,85±0,14 - 4,34±0,23 нМоль/л

Анализ состава липидных фракций мембран эритроцитов при псориазе и ЯБДПК показал, что в период обострения болезни и, соответственно, в фазу максимального снижения ЭФПЭ, у обеих групп больных однотипно изменялись уровни фракций СФ и ФЭА - их содержание снижалось, и фракции ЛФХ - ее содержание, напротив, повышалось. В отличие от выявленной типичности изменений для названных фракций, фракция ФХ претерпевала разнонаправленные изменения. При псориазе содержание ФХ уменьшалось, а при ЯБДПК - увеличивалось (табл.6).

Таблица 6

Содержание фосфолипидных фракций (%) в мембранах эритроцитов больных псориазом

Показатель Псориаз ЯБДПК

Контроль Больные Контроль Больные

Лизофосфотидилхолин 1,1+0,2 5,4+0,2* 4,2+0,2 12,6+0,3*

Сфингомиелин 13,3±0,2 12,2+0,3* 29,4+0,9 16,4+0,7*

Фосфатидилхолин 41,6+0,3 39,6+0,2* 34,8+0,6 43,6±0,8*

Фосфатидилэтаноламин 44,0+0,4 42,8+0,3* 31,6±0,6 27,4+1,2*

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с контролем

Полученные результаты совпадают с литературными данными (Рязанцева, Новицкий, 2004), где аналогичное изменение фракций фосфолипидов было установлено у пациентов при соматической и психической патологии: при однотипном изменении фракций ФЭА, СМ и ЛФХ концентрация ФХ изменялась разнонаправлено. Таким образом, типичность изменений ФЛ мембран эритроцитов, по всей видимости, отражает типичность структурных изменений их мембран, что может быть связано с процессами ПОЛ. Концентрация МДА в эритроцитах показала усиление активности ПОЛ при всех видах патологии (табл. 5).

Таким образом, изменения ЭФПЭ однотипны для изученных видов патологии и стрессе, и находятся в тесной взаимосвязи с изменениями структурно-функционального состояния мембран.

Глава 6. Исследование электрокинетических и структурно-функциональных показателей мембран эритроцитов при развитии адаптационных процессов

6.1. Исследование действия продуктов пчеловодства и ЭМИ на морфофункциональные показатели эритроцитов на фоне острого стресса у животных

В предыдущих разделах выявлено, что изменение ЭФПЭ отражает степень активации симпатоадреналовой и гипофизарно-надпочечниковой систем. Целесообразно ожидать, что воздействия, приводящие к более продолжительной активации гипофизарно-надпочечниковой системы, будут оказывать стресслимитирующее действие и определят повышение сопротивляемости организма к внешним стресс-факторам. Поэтому на данном этапе работы проводилось исследование восстановления нарушенных показателей гомеостаза продуктами пчеловодства и ЭМИ при моделировании альтерации функций организма животных.

Результаты проведенных исследований при использовании продуктов пчеловодства на фоне моделирования стрессовой реакции путем иммобилизации и гамма-облучения показали, что как при иммобилизации животных, так и гамма-облучении развивалась типичная картина стресс-реакции, которая частично или полностью купировалась продуктами пчеловодства. Так, в опытах как с иммобилизацией, так и с гамма-облучением животных было установлено, что иммобилизационный стресс и развитие лучевой болезни у крыс сопровождается ухудшением морфофункционального состояния эритроцитов, что отражалось в виде уменьшения ЭФПЭ и повышения интенсивности ПОЛ - увеличения уровня МДА. Исследование лейкоцитарной формулы свидетельствовало о развитии стресс-реакции.

Использование продуктов пчеловодства после облучения животных приводило к определенному лечебному эффекту по тесту морфофункционального состояния эритроцитов. В отличие от контроля, начиная со второй недели после облучения, во всех опытных группах происходило восстановление ЭФПЭ, наиболее значимое для меда с маточном молочком, и наименее - для меда (табл. 7).

Таблица 7

Изменение ЭФПЭ крыс (мкм см/В с) при использовании пчелопродуктов после __гамма-олбучения крыс_

Группы животных (п=9) Время эксперимента (недели)

1 2 3

Контроль 1,20+0,06 0,80+0,12* 0,80+0,13*

Апингалин 1,04+ 0,06# 1,02+ 0,08# 1,04+ 0,06#

Мед 1,04+ 0,09# 0,90+ 0,08* 1,00+ 0,06*#

Мед+маточное молочко 1,03±0,06# 1,01+0,06*# 1,30+0,05 *#

Пчелиный яд 1,08+ 0,08 1,05+ 0,10# 1,12+ 0,06#

Примечание: # - статистически значимые различия (р<0,05) с контролем, * - статистически значимые различия (р<0,05) с интактными животными. Значение ЭФПЭ интактных животных 1,15+0,06 мкм-см/В-с

Наиболее значимое влияние оказывали пчелопродукты на ПОЛ эритроцитов. Как видно из таблицы 8, все пчелопродукты снижали уровень ПОЛ (уменьшение МДА), по сравнению с контролем, в котором он оставался повышенным до конца экспериментов. Следует отметить, что наиболее эффективно повышенный уровень ПОЛ эритроцитов снижали пчелиный яд и Апингапин (суспензия прополиса и маточного молочка), практически восстанавливая уровень МДА до уровня интактных животных.

Таблица 8

Изменение концентрации МДА (нмоль/мл) в эритроцитах крыс при использовании _пчелопродуктов после гамма-облучения крыс_

Группы животных (п=9) Время эксперимента (недели)

1 2 3

Контроль 5,85 + 0,65* 11, 20+ 1,25* 11,18 ±1,07*

Апингалин 9,18+ 1,02*# 5,40 ±0,40*# 4,42 +0,55#

Мед 8,60+ 1,02*# 8,58 +0,66*# 8,10±1,01*#

Мед+маточное молочко 8,50+ 1,06*# 6,32 +0,28*# 6,00 ±1,22#

Пчелиный яд 6,90 ±.1,07* 4,50 ±0,82# 4,20 +0,38#

Примечание: # - статистически значимые различия (р<0,05) с контролем, * - статистически значимые различия (р<0,05) с интактными животными. Значение МДА у интактных животных 4,00±0,20 нМоль/мл.

Эксперименты, связанные с использованием продуктов пчеловодства в ходе развития иммобилизационного стресса у крыс также выявили улучшение исследуемых маркерных характеристик морфофункционального состояния мембран. Использование продуктов пчеловодства приводило к ограничению продолжительности протекания первой фазы ЭФПЭ, вызванной иммобилизационным стрессом и удлинению второй фазы ЭФПЭ, характеризующей повышение резистентности организма (табл.9). Исследование концентрации МДА эритроцитов крыс после воздействия на их организм продуктов пчеловодства на фоне развития стресса, вызванного иммобилизацией, показало достоверное уменьшение данного показателя относительно значений, полученных для иммобилизированных животных. Наиболее значимое снижение концентрации МДА регистрировалось при использовании прополиса с медом и меда с маточным молочком (табл.10).

Использование лейкограммы в качестве показателя адаптационных реакций организма при действии продуктов пчеловодства на фоне стресс-реакции подтвердило эффективность их применения на моделях гамма-облучения и иммобилизации животных, что выражалось в ограничении стресс-реакции и снижении напряженности с увеличением резистентности организма.

Таблица 9

Динамика изменения ЭФПЭ (мкм см/В с) при действии продуктов пчеловодства на фоне _иммобилизации крыс_

Группы животных Время воздействия

(п=8) 15 мин 1 сутки 1 неделя

Иммобилизационный стресс 1,15+0,04* 1,10+0,05* 1,45±0,07

Контроль 1,33±0,04 1,39±0,04 1,35±0,05

Иммобилизационный стресс+пчелиный яд 1,22+0,06* 1,37+0,06 # 1,39±0,07

Пчелиный яд 1,25+0,03* # 1,42+0,05# 1,52±0,04*

Иммобилизационный стресс+маточное молочко 1,33±0,08 # 1,25±0,10 1,26±0,10#

Маточное молочко 1,32±0,10 # 1,66±0,10*# 1,47±0,10

Иммобилизационный стресс+мед+маточное молочко 1,40±0,06# 1,50±0,10 # 1,51 ±0,06*

Мед+маточное молочко 1,44±0,05* # 1,54±0,10 *# 1,40±0,10

Имобилизационный стресс+мед+прополис 1,38±0,07# 1,40±0,09 # 1,40±0,09

Мед+прополис 1,39±0,10 # 1,44±0,09 # 1,36±0,09

Имобилизационный стресс+мед 1,26±0,05 1,25±0,08 *# 1,30±0,08

Мед 1,30±0,08 # 1,34±0,09# 1,36±0,06

Примечание: * - статистически значимые различия (р<0,05) с контролем, # - статистически значимые различия (р<0,05) с иммобилизированными животными. Значения ЭФПЭ интактных животных - 1,36±0,10 (мкмсм/Вс)

Таблица 10

Динамика изменения концентрации МДА в эритроцитах (нмоль/мл) при действии _продуктов пчеловодства на фоне иммобилизации крыс_

Группы животных Время воздействия

(п=8) 15 мин 1 сутки 1 неделя

Иммобилизационный стресс 5,41+0,12* 6,06+0,10* 3,46+0,12

Контроль 3,28±0,10 4,73±0,18 3,30+0,22

Иммобилизационный стресс+пчелиный яд 5,32+0,14* 5,64+0,16* # 3,36+0,16

Пчелиный яд 3,71+0,17* # 3,90+0,10* # 3,19+0,10 #

Иммобилизационный стресс+маточное молочко 3,52±0,25 # 3,76±0,60* # 3,34±0,20

Маточное молочко 3,19±0,17 # 3,32±0,52* # 3,17±0,15

Иммобилизационный стресс+мед+маточное молочко 3,83±0,34* ° 3,69±0,12* # 3,27±0,21

Мед+маточное молочко 3,76±0,40 # 3,46±0,31* # 2,97±0,18 #

Имобилизационный стресс+мед+прополис 3,97±0,37 *# 3,51 ±0,29* # 3,75±0,30

Мед+прополис 3,08±0,30 # 2,95±0,18*# 3,14±0,26

Имобилизационный стресс+мед 4,39±0,37 *# 4,94±0,29 # 3,76±0,30

Мед 3,68±0,30 # 4,22±0,36 # 3,74±0,32

Примечание: * - статистически значимые различия (р<0,05) с контролем, 0 - статистически значимые различия (р<0,05) с иммобилизированными животными. Значения МДА интактных животных - 3,01±0,45 (нмоль/мл)

Таким образом, продукты пчеловодства в исследуемых концентрациях вызывали развитие адаптационных процессов в организме, обеспечивающих приспособление его функционального состояния в условиях стрессового воздействия на всех уровнях. По всей видимости, действие продуктов пчеловодства, приводя к активации гипофизарно-надпочечниковой системы, стимулирует адаптивные механизмы в эритроцитах, что проявляется в повышении их ЭФПЭ, свидетельствующей о снижении деструктивных изменений эритроцитарных мембран, развивающихся при воздействии на организм иммобилизационного стресса и гамма-облучения. Следует подчеркнуть, что эффективность продуктов пчеловодства зависила от вида стрессового воздействия. Так, на фоне радиооблучения организма пчелиный яд и маточное молочко+прополис определяли поддержание уровня ЭФПЭ, приближенного к значениям интактных животных, мед с маточным молочком вызывали даже рост ЭФПЭ. При этом наиболее значимо тормозят повышенную активность ПОЛ пептиды пчелиного яда и флаваноиды прополиса, являясь известными ловушками свободных радикалов (Корягин, 2007). Кроме того, именно яд и прополис, как наиболее «чужеродные» для организма соединения, наиболее активно стимулируют выброс кортикостероидов, соответственно, наиболее активно тормозят процессы клеточной пролиферации, что в условиях радиопоражения (на ранней стадии) также может оказать радиопротекторный эффект (Крылов и др., 2008). Именно этим можно объяснить выявленную в опытах определенную неэффективность примененных пчелопродуктов в 1-ю неделю после облучения. При этом иммобилизация, являясь стрессом менее сильным по сравнению с гамма-облучение, вызывает менее значимые как по вектору, так и по продолжительности отклонения ЭФПЭ и концентрации МДА, и наиболее эффективным оказывается использование в качестве терапевтического средства меда с маточным молочком - продукта, который по всей видимости, вызывает общетонизирующее действие на организм, что приводит к повышению общей резистентности организма, опосредованной активацией гипофизарно-надпочечниковой системы.

Воздействие ЭМИ (НИЛИ и КВЧ-излучение) на животных не оказывало существенного влияния на исследуемые показатели гомеостаза. В отличие от действия ЭМИ, введение животным адреналина приводило к заметным сдвигам гомеостаза,

свидетельствующим о выраженной стресс-реакции организма. Было установлено, что эта реакция затрагивала все исследованные системы.

Действие изученных ЭМИ на фоне адреналиновой стресс-реакции вызывало полное или частичное восстановление нарушенных адреналином изучаемых показателей. Действие НИЛИ, так и КВЧ-излучения на альтерированный организм вызывало, согласно ОНАР, реакцию активации. Одновременно с этим происходило восстановление сниженной ЭФПЭ. Действие НИЛИ на данный показатель было более выражено по сравнению с КВЧ излучением (рис.19).

I □ интактные □ адреналин □ НИЛИ ЕЗ адр+НИЛИ □ КВЧ а адр-^КВЧ |

Рис. 19. Динамика изменения ЭФПЭ при действии ЭМИ на фоне адреналовой токсемии Примечание: * - статистически значимые различия (р<_0,05) с интактным; # - статистически значимые различия (р<_0,05) с введением адреналина; ° - статистически значимые различия (р< 0,05) с КВЧ облучением.

При действии ЭМИ сниженные альтерацией показатели ФЭА, СМ и повышенное содержание ФХ, а также ЛФ восстанавливались, приближаясь к значениям у интактных животных (рис.20).

30 60 120

время после воздействия, мин

30 3=25 |20 ¡15

|ю

О

& 5

#*#

МШИ

#*#

30 60 120

время после воздействия, мин

□ интактные

□ адр+НИЛИ

мя после воздействия, мин

а адреналин О НИЛИ

□ КВЧ аадр+КВЧ

С О

Рис. 20. Динамика изменения фосфолипидов в эритроцитах при действии ЭМИ на фоне адреналовой токсемии: А - ФЭА, В - ФХ, С - СМ, Э - ЛФХ.

Примечание: * - статистически значимые различия (р< 0,05) с интактным; # - статистически значимые различия (р<_0,05) с введением адреналина; ° - статистически значимые различия (р< 0,05) с КВЧ облучением. ** - статистически значимые различия (р<_0,05) с НИЛИ.

Отмеченное в наших опытах восстановление ЭФПЭ при действии ЭМИ на альтерированный организм животных можно связать с активацией 2-й фазы стресс реакции и повышением уровня в крови гормонов коры надпочечников. Повышение уровня кортикостероидов, для которых характерно долгосрочное действие, определяет увеличение ЭФПЭ за счет влияния гормонов на ФЛ мембран эритроцитов, способствуя восстановлению ее электроотрицательности.

Соответственно, анализ полученных результатов свидетельствует, что при остром стрессе, проявляющаяся коррекция гомеостаза, как продуктами пчеловодства, так и ЭМИ может быть объяснена развитием в организме относительно продолжительной компенсаторной реакции, опосредованной активацией гипофизарно-надпочечниковой системы, приводящей к повышению уровня циркулирующих глюкокортикоидов, направленных на элиминацию патогенного стресс-фактора.

6.2. Действие стрессмодулирующих средств на ЭФПЭ при развитии у животных хронического стресса

Длительное действие стресс фактора, в частности хроническая ишемия головного мозга, может вызывать развитие адаптационного процесса. При благоприятном течении адаптационного процесса наблюдается повышение резистентности организма к существующей ситуации, при неблагоприятном - прогрессирование патологии. Поэтому представляется целесообразным исследование на фоне исходного уровня адаптационных процессов организма возможности использования препаратов, влияющих на уровень адаптационного резерва и активирующих стрессреализующие механизмы.

Исследование ЭФПЭ при ишемических нарушениях головного мозга животных выявило, что используемые препараты (пирацитам, кавинтон, цитофлавин, геримакс) на фоне глобальной ишемии головного мозга крыс вызывали увеличение данного показателя относительно контроля, за исключением комплексного воздействия с дельтараном (табл. 11). В тоже время, исследуемые препараты на фоне локальной ишемии головного мозга, характеризующейся существенным ростом ЭФПЭ, либо не оказывали влияния на ЭФПЭ (пирацитам, кавинтон, цитофлавин), либо понижали ее, приближая к уровню показателей интактной группы животных.

Таблица 11

ЭФПЭ крови крыс (мкм см/В с) при применении стрессмодулирующих препаратов на фоне ишемии головного мозга к 60 суткам наблюдения

Группы Интактные животные Контрольная группа Пирацетам+ кавинтон Пирацетам+ кавинтон ^цитофлавин Пирацетам+ кавинтон ♦•дельтаран Пирацетам+ кавинтон <-геримакс

Глобальная ишемия 1,31 ±0,05 (п=20) 1,42±0,06 (п=4) 1,62±0,07"* (п=6) 1,75±0,06"* (п=6) 1,43±0,06 (п=7) 1,51±0,05" (п=7)

Локальная ишемия 1,32±0,06 (п=20) 1,63±0,06" (п=8) 1,60±0,06" (п=12) 1,60±0,07" (п=12) 1,40±0,03* (п=16) 1,36±0,04* (п=14)

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) с контрольными животными,

"- статистически значимые различия (р<0,05) с интактными животными

Таким образом, на фоне глобальной ишемии головного мозга животных применение препаратов вызывало дополнительную активацию стрессреализующих систем, за исключением дельтарана, который оказывал стресслимитирующее действие. Напротив, при избыточном напряжении механизмов адаптации на фоне локальной ишемии головного мозга используемые препараты либо не оказывали дополнительной активации, либо приближали адаптационные реакции к уровню физиологической нормы и восстанавливали баланс стрессреагирующих и стресслимитирующих систем.

При исследовании лейкоцитарной формулы крови крыс, динамика показателей во всех группах после воздействия исследуемых препаратов была однонаправленной: повышение количества лимфоцитов и снижение нейтрофилов до уровня интактных

животных, что свидетельствовало о снижении уровня напряженности и повышении реактивности организма.

В ходе экспериментальных исследований показана возможность воздействия стрессмодулирующих препаратов на состояние адаптационного резерва в целях повышения неспецифической резистентности организма, что позволило обосновывать целесообразность включения стрессмодулирующей терапии в комплекс лечения больных ДЭ. Поэтому дальнейшие исследование посвящено изучению изменения ЭФПЭ при проведении терапевтических мероприятий у больных ДЭ.

6.3. Исследование ЭФПЭ крови больных при терапии

Исследование изменения ЭФПЭ больных ДЭ после проведенной курсовой терапии показало, что она зависит как от тяжести заболевания, так и выбора препаратов лечения. Применение базовой терапии больным ДЭ 1-й стадии заболевания, так же как и дополнительно дельтарана и цитофлавина приводило к тенденции восстановления (снижения) ЭФПЭ к уровню показателей ЭФПЭ контроля (табл.12). Наиболее значимые изменения ЭФПЭ регистрировались при использовании дельтарана. В отличие от дельтарана и цитофлавина, применение геримакса, наоборот, приводило к повышению ЭФПЭ больных по сравнению с нормой, что отражало переактивацию адаптационных процессов.

В отличие от результатов, полученных при изучении ЭФПЭ больных 1-й группы, у больных на 2-й стадии заболевания применение препаратов базового комплекса и дополнительно цитофлавина и геримакса приводило к увеличению ЭФПЭ по отношению к уровню ЭФПЭ контроля. Динамика изменений ЭФПЭ свидетельствовала об активизации адаптационных процессов при действии данных препаратов, что, по всей видимости, обусловлено недостаточной активностью гипофизарно - надпочечниковой системы на второй стадии. Однако отмеченное избыточное нарастание показателя отражало переактивацию адаптационных процессов. В то же время дельтаран, так же, как и при 1 стадии заболевания, вызывал уменьшение исходно повышенного показателя ЭФПЭ.

На третьей стадии заболевания, восстановление к норме исходно пониженного уровня ЭФПЭ происходило только при дополнительном использовании дельтарана и цитофлавина, тогда как базовое лечение, в большей степени, - с геримаксом, наоборот, приводили к увеличению уровня ЭФПЭ.

Таблица 12

ЭФПЭ крови больных дисциркуляторной энцефалопатией (мкм см/В с)

Терапевтическое воздействие Время исследования Стадии заболевания

I II III

Базовое лечение До лечения 2,0+ 0,03* 1,90+ 0,03 1,70+ 0,04

После 1,90+ 0,05 2,40+ 0,04* 1,96 ±0,02*

Дельтаран До лечения 2,0+ 0,02* 1,90+0,01* 1,70 ±0,04

После 1,75+0,06 1,80+ 0,04 1,78+ 0,04

Цитофлавин До лечения 2,50+0,01* 2,10 ±0,04* 1,77+0,06

После 1,90+ 0,07 2,40+0,04* 1,90+ 0,05

Геримакс До лечения 2,0+0,02* 2,0+0,04* 1,70+ 0,03*

После 2,20+0,04* 2,30+0,03* г 2,10+0,04*

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) к значениям ЭФПЭ здоровых (доноров). Значение ЭФПЭ крови доноров 1,78+0,02 мкм-см/В-с

Таким образом, анализ ЭФПЭ больных ДЭ свидетельствует об активации гипофизарно-надпочечниковой системы на 1 стадии заболевания с постепенным ее

истощением в ходе усугубления патологического процесса. По всей видимости, степень включения адаптационных процессов при развитии ДЭ определяет различное влияние препаратов на разных стадиях заболевания, отражаемое в изменении ЭФПЭ. На 1 стадии заболевания использованные препараты вызывали восстановление исходного статуса организма, за исключение геримакса, действие которого, вероятно, приводит к избыточности адаптационных механизмов. На 2 и на 3 стадиях препараты определяли стимуляцию механизмов неспецифической адаптации. Включение в комплексную терапию регуляторного пептида дельтарана, оказывало корригирующее воздействие на течение адаптационного процесса на всех стадиях ДЭ.

Анализ результатов экспериментальных и клинических данных свидетельствует о возможности исследования ЭФПЭ как критерия исходного уровня адаптационного резерва и адаптационных возможностей организма при применении стрессмодулирующей терапии.

Для подтверждения возможности использования ЭФПЭ как маркера развития патологии и степени включения адаптационных резервов организма были проведены исследования крови больных псориазом, ЯБДПК, вертеброгенной люмбоишалгией, нервно-мышечными заболеваниями после проведения терапевтических мероприятий. Проведенные исследования показали, что в ходе лечения больных с различными заболеваниями, ЭФПЭ увеличивалась, приближаясь к уровню физиологической нормы (Табл.13). При этом концентрация МДА уменьшалась по сравнению с показателями до лечения и концентрация фосфолипидных фракций мембран эритроцитов восстанавливалась (Табл. 14,15,16).

Таблица 13

Изменение ЭФПЭ (мкм см/В с) при различных видах заболеваний_

Показатель Время исследования Вид заболевания

Псориаз ЯБДПК Люмбоишалгия Нервно-мышечные заболевания

Стандартная терапия До лечения 1,02+0,01 1,09+0,07 1,11±0,02 1,07+0,04

После 1,10+0,01* 1,46+0,07* 1,30+^0,07* 1,16^0,08*

Стандартная терапия + адаптогены До лечения 1,04+0,01 - 1,10^0,02 1,05+0,04

После 1,30±0,01* - 1,38+0,05* 1,24^0,08*

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) к значениям до лечения.

Таблица 14

Изменение концентрации МДА в эритроцитах (нмоль/л) при различных видах

заболеваний

Показатель Время исследования Вид заболевания

Псориаз ЯБДПК Люмбоишалгия Нервно-мышечные заболевания

Стандартная терапия До лечения 5,85+0,06 5,01±0,22 5,49±0,14 5,62±0,19

После 4,20+0,05* 4,42±0,20* 5,04±0,18* 5,02±0,20*

Стандартная терапия + адаптогены До лечения 5,70+0,06 - 5,38±0,17 5,56±0,26

После 3,85+0,03* - 4,64±0,20* 4,48±0,14*

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) к значениям до лечения.

Таблица 15

Содержание фосфолипидных фракций (% от общего содержания фосфолипидов) в _мембранах эритроцитов больных псориазом_

Показатель Контроль До лечения После лечения (стандартная терапия)

Лизофосфатидилхолин 1,1 ±0,2 5,4+0,2* 1,2+0,2°

Сфингомиелин 13,3+0,2 12,2+0,3* 14,0+0,2°

Фосфатидилхолин 41,6+0,3 39,6+0,2* 41,5+0,3°

Фосфатидилэтаноламин 44,0+0,4 42,8+0,3* 43,3+0,2°

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) к контролю,

° - статистически значимые различия (р<0,05) к значениям до лечения.

Таблица 16

Содержание фосфолипидных фракций (% от общего содержания фосфолипидов) в _мембранах эритроцитов больных ЯБДПК_

Показатель Контроль До лечения После лечения

Лизофосфатидилхолин 4,2+0,2 12,6+0,3* 6,3+0,8*°

Сфингомиелин 29,4+0,9 16,4+0,7* 22,6+0,9*°

Фосфатидилхолин 34,8+0,6 43,6+0,8* 39,4+1,1*°

Фосфатидилэтаноламин 31,6±0,6 27,4+1,2* 31,7+1,6°

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) к контролю,

° - статистически значимые различия (р<0,05) к значениям до лечения.

Следует отметить, что у больных псориазом при включении в стандартный курс лечения КВЧ-терапии показатели ЭФПЭ восстанавливались до уровня контроля, так же как у больных вертеброгенной люмбоишалгией и нервно-мышечными заболеваниями при дополнительном использовании апитерапии (введение пчелиного яда). Значимое увеличения ЭФПЭ при включении в терапию больных адаптогенов, по всей видимости, свидетельствует о развитии адаптационных процессов в организме, при стимуляции данными физиотерапевтическими и фармакологическими средствами гипофизарно-надпочечниковой системы. Изменение ЭФПЭ сочеталось с динамикой основной симптоматики болезни (Антипенко и др., 2006, 2007, 2008; Артемова и др., 2004).

Таким образом, положительная динамика ЭФПЭ в процессе лечения больных при разных заболеваниях отражает восстановление функциональных свойств эритроцитарной мембраны, обусловленное нормализацией ПОЛ и липидного спектра мембран. В свою очередь процессы, связанные с мембранными характеристиками опосредованы восстановительными реакциями в организме, что позволяет рассматривать ЭФПЭ в качестве диагностического и прогностического критерия эффективности проводимой терапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенного исследования установлен ряд принципиально новых фактов свидетельствующих, что однонаправленность изменения ЭФПЭ при различных экстремальных воздействиях и патологии, является общей неспецифичной реакцией организма. Анализ закономерностей изменения ЭФПЭ при различных экстремальных воздействиях и патологии свидетельствует, что данный показатель является отражением общей неспецифической реакции организма на раздражитель и связан с развитием стресс-реакции и вовлечением стресс-реализующих систем на действие чрезвычайных раздражителей (рис. 21).

Стадия тревоги (активации)

Стрессовое воздействие

Активация симпато-адреналовой системы

катехоламины

Стадия

резистентности (адаптации)

Активация гипофизарно-надпочечниковой системы

глюкокортикоиды

Стадия

истощения

(дизадаптации)

Рис. 21. Взаимосвязь ЭФПЭ с их структурно-функциональными показателями в ходе развития стресс-реакции в организме.

Проведенное исследование позволяет заключить, что разные альтетрирующие воздействия вызывают запуск универсального ответа клеточной системы, связанный с развитием стресс-реакции организма, которая включает стадию активации, стадию резистентности и стадию истощения. При этом на клеточном уровне реализуется последовательное включение адаптационных процессов, опосредованное развитием общего адаптационного синдрома на уровне организма. Так, в ответ на любое стрессовое воздействие в эритроците, как в биологической системе, развивается своеобразная «стадия тревоги», которая характеризуется всплеском процессов свободнорадикального окисления, приводящих к модификации фосфолипидного и белкового состава и уменьшению электроотрицательности мембран, сочетающееся с увеличением активности Ыа,К-АТФазы. Эта стадия способствует повышению активности антиоксидантной системы, лимитирующей развитие процессов перекисного окисления липидов, и обуславливает развитие «стадии адаптации» клеточной системы, сопряженной с ингибированием активности Ыа,К-АТФазы, восстановлением электроотрицательности мембраны и ее фосфолипидного и белкового спектров, а также с мобилизацией резервов низкомолекулярных антиоксидантов, в частности, глутатиона. При благоприятном течении адаптационного процесса происходит повышение резистентности организма, при неблагоприятном течении развиваются процессы, приводящие к дизадаптации организма и развитию патологии, проявляющееся в снижении ЭФПЭ, сопряженной с усилением деструктивных процессов на уровне клетки, проявляющихся развитием дисбаланса про- и антиоксидантных процессов.

Таким образом, ЭФПЭ является маркером стрессовой реакции, характеризующим вовлечение адаптационных систем организма, анализ которой дает возможность целенаправленно воздействовать на механизмы компенсации, способные повысить неспецифическую устойчивость организма.

ВЫВОДЫ

1. Изучение ЭФПЭ при действии разных альтерирующих факторов как химической, так и физической природы, а также сравнительно-видовое исследование ЭФПЭ холоднокровных и теплокровных животных показало сходство в динамике изменения ЭФПЭ, что выражалось в ее уменьшении (1-я фаза) с последующим увеличением (2-я фаза). Выраженность фаз ЭФПЭ зависела от интенсивности и типа воздействия на организм.

2. Динамика изменения ЭФПЭ опосредовалась последовательной активацией стресс-реализующих систем. Первичное уменьшение ЭФПЭ при стрессовых воздействиях связано с активацией выделения эндогенных катехоламинов и их действием на мембрану клеток. Вторая фаза - увеличение ЭФПЭ, имеет долгосрочное действие и обусловлена нарастанием в крови глюкокортикоидов. Механизм изменения ЭФПЭ под влиянием адреналина и кортизола реализуется через модификацию мембраны при изменении реактивности организма.

3. Уменьшение ЭФПЭ при остром стрессе сочеталось с увеличением концентрации МДА, изменением состава фосфолипидов - снижение содержания фракции ФЭА, СМ, возрастание лизоформ, и изменением белкового спектра - уменьшение концентрации сиалогликопротеинов, спектрина и увеличении белков полос 4.1, 4.2, 4.9, тропомиозина. Рост ЭФПЭ был сопряжен с увеличением концентрации общего и восстановленного глутатиона, уменьшением концентрации МДА, восстановлением фосфолипидного и белкового статуса эритроцитарных мембран.

4. Первоначальное снижение ЭФПЭ при различных видах альтерации происходило на фоне повышения активности Ыа-К-АТФазы, росте концентрации АТФ в клетках и увеличения их сферичности с последующим ингибированием работы №-К-АТФазы, понижением концентрации АТФ, увеличением 2,ЗДФГ, обратимой эхиноцитарной трансформацией эритроцитов и проявлением второй фазы ЭФПЭ.

5. Повторяющееся стрессовое воздействие (физическое и токсическое), и хронический стресс в виде локальной и глобальной ишемии головного мозга крыс вызывали первоначальное уменьшение ЭФПЭ с последующим ее ростом. Начальный этап ЭФПЭ при действии альтерирующих факторов был обусловлен развитием окислительного стресса, увеличением концентрации МДА, снижением общего и восстановленного глутатиона, приводящего к изменению структуры мембраны. Фазность проявления ЭФПЭ была более продолжительна во времени при повторяющимся и хроническом стрессах по сравнению с действием острого стресса. Исследование различных видов патологии организма человека показало, что изменение ЭФПЭ носило общий характер не зависимо от вида заболевания и являлось закономерным изменением в ответ на текущий патологический процесс.

6. Анализ ЭФПЭ на фоне общих неспецифических адаптационных реакций свидетельствовал, что различные альтерирующие воздействия вызывают запуск универсального ответа клеточной системы, связанный с последовательным включением адаптационных процессов, опосредованных развитием общего адаптационного синдрома на уровне организма. При этом первую фазу - снижение ЭФПЭ можно рассматривать как стадию тревоги системы, вторую - стадию напряжения системы, - характеризуется возвращением сниженной функции к исходному состоянию, или, если стрессовое воздействие продолжается, к повышенной функции системы в новых условиях.

7. Фармакологические и физиотерапевтические средства при альтерации функций у крыс (гамма-облучение, иммобилизация, ишемия головного мозга) и терапия больных с различными видами патологии (ХЦВН, вертеброгенная люмбоишиалгия, нервно-мышечные заболевания, ЯБДПК, псориаз) вызывали восстановление ЭФПЭ до показателей физиологической нормы.

8. Использование ЭФПЭ в качестве раннего и значимого критерия развития стресс-реакции в организме позволяет проанализировать тяжесть альтерационного процесса и эффективность корригирующих воздействий с учетом развития адаптационных реакций.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК

1. Антипенко Е.А., Анисимова Л.М., Густов A.B., Дерюгина A.B., Крылов В.Н. Опыт применения апитерапии у пожилых больных дисциркуляторной энцефалопатией // Неврологический вестник. 1997. Вып. 3/4. С.95-97.

2. Крылов В.Н., Густов A.B. Дерюгина A.B. Электрофоретическая подвижность эритроцитов и стресс // Физиология человека. 1998. Т.24, №6. С.108-111.

3. Хомутов А.Е., Орлов A.B., Калашникова Л.М., Дерюгина A.B., Зимина Т.А. Средство от ужалений//Пчеловодство. 1999. №1. С.60-61.

4. Шереметьев Ю. А., Суслов Ф.Ю., Шереметьева A.B., Дерюгина A.B. Влияние нейроминидазы и протеолитических ферментов на электрофоретическую подвижность эритроцитов и их агрегацию, индуцируемую La2+// Биофизика. 2000. Вып.1. С.79-82.

5. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Костина О.В. Влияние солапивена на реологические свойства крови ожоговых больных // Пчеловодство. 2002. №5. С.55.

6. Крылов В.Н., Дерюгина A.B. Типовые изменения электрофоретической подвижности эритроцитов при стрессовых воздействиях // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2005. Т. 139, №4. С. 364-366.

7. Дерюгина A.B., Крылова Е.В., Лукьянова Л.Д. Влияние убихинона-10 и янтарной кислоты на функциональные характеристики эритроцитов крыс при адреналовой токсемии // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2006. Т. 141, №4. С.397-400.

8. Антипенко Е.А., Густов A.B., Дерюгина A.B., Крылов В.Н., Паренко М.К. Комплексная оценка адаптационных возможностей пациентов с хронической

церебраваскулярной недостаточностью // Практическая неврология и нейрореабилитация. 2008. №4. С.6-10.

9. Крылов В.Н., Дерюгина A.B. Стресс-реакция организма при апитерапии пчелиным ядом // Пчеловодство. 2009. №2. С.56-57.

10. Антипенко Е.А., Густов A.B., Григорьева В.Н., Артемина Е.Е., Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Николаев И.Н. Использование препарата геримакс энерджи для оптимизации адаптационного процесса при дисциркуляторной энцефалопатии //Неврологический журнал. 2009. Т.14, №2. С.55-58.

11. Дерюгина A.B., Копылова C.B., Тапаманова М.Н., Чигарова O.A., Крылов В.Н. Изменение реактивности крови крыс при различных способах введения пчелиного яда //Вестник Нижегородского университета им. Н.И.Лобачевского. 2009. №2. С. 107-110.

12. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Антипенко Е.А. Типовые изменения электрофоретической подвижности эритроцитов и их фосфолипидный состав при разных заболеваниях //Клиническая лабораторная диагностика. 2009. №9. С.37-40.

13. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Лобкаева Е.П., Ошевенский Л.В. Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при действии низкоинтенсивного импульсного магнитного поля // Биофизика. 2010. Т.55, Вып. 4. С.652-657.

14. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Гришина A.A. Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов и липидного спектра их мембран при различных стрессовых воздействиях // Гематология и трансфузиология. 2010. №3. С.40-44.

15. Дерюгина A.B., Захарова O.A., Крылов В.Н. Влияние пчелиного яда на адаптивные реакции эритроцитов при иммобилизационном стрессе // Вестник Нижегородского университета им. Н.И.Лобачевского. 2010. №4. С.627- 630.

16. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Захарова O.A., Антипенко Е.А. Неспецифические адаптационные реакции крови при хронической ишемии головного мозга // Клиническая лабораторная диагностика. 2010. №12. С.28-30.

17. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Плескова С.Н. Электрофоретическая подвижность и морфометрия эритроцитов крыс при стрессовых воздействиях // Современные технологии в медицине. 2010. №4. С.23-27.

18. Крылов В.Н., Дерюгина A.B. Адаптационные реакции системы крови крыс при действии низкоинтенсивных электромагнитных излучений // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. 2010. Вып. 96, №6. С.582-589.

19. Дерюгина A.B., Крылов В.Н., Кондратьева Е.В. Взаимосвязь электрофоретической подвижности и спектра белков эритроцитов у крыс // Вестник Нижегородского университета им. Н.И.Лобачевского. 2010. №6. С.119-123.

20. Антипенко Е.А, Трошин В.В., Густов A.B., Дерюгина A.B. Неспецифическая резистентность организма при хронической ишемии головного мозга // Медицинский альманах. 2011. № 1. С.60-62.

21. Дерюгина A.B., Крылова Е.В., Антипенко Е.А. Исследование электрофоретической подвижности эритроцитов при использовании апитерапии // Традиционная медицина. 2011. №5. С.342-344.

22. Крылов В.Н., Дерюгина A.B. Изменение электрофоретической подвижности изолированных эритроцитов при действии стресс-факторов // Гематология и трансфузиология. 2011. №5. С.18-21.

Изобретения

23. Антипенко Е.А., Густов A.B., Дерюгина A.B., Мокина Т.В. Способ выбора тактики лечения у больных с хронической ишемией головного мозга. Патент на изобретение № 2371193 от 27.10.2009.

24. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Антипенко Е.А. Способ оценки функции коры надпочечников. Заявка № 2011101256/001560 от 13.01.2011.

Статьи в региональных изданиях и материалы конференций

25. Дерюгина А.В., Ошевенский J1.B., Крылов В.Н. Влияние солапивена на кровь при электрофоретическом введении // Матер. IV научно-практич. конф. по апитерапии «Апитерапия сегодня». Рыбное, 1994. С.63.

26. Troitskaya V.T., Derugina A.V., Krylov V.N. The influence of the electrophoretic mobility of erythrocytes // XXXIV international apicultural congress of apimondia. Lausanne, 1995. P.405-406.

27. Крылов B.H., Дерюгина A.B. Дезагрегирующее действие пчелиного яда // Матер. V научно-практич. конф. по апитерапии «Пчелы и ваше здоровье». Рыбное, 1997. С.97.

28. Дерюгина А.В., Густов А.В., Дудкина О.В., Крылов В.Н. Солапивен в лечении больных вертеброгенной люмбоишалгией // Матер. V научно-практич. конф. по апитерапии «Пчелы и ваше здоровье». Рыбное, 1997. С. 130.

29. Антипенко Е.А., Анисимова Л.М., Крылов В.Н., Дерюгина А.В., Николаев И.Н. Апипунктура у пожилых больных хронической цереброваскулярной недостаточностью // Матер. V научно-практич. конф. по апитерапии «Пчелы и ваше здоровье». Рыбное, 1997. С.131.

30. Дерюгина А.В. Свертываемость крови и перекисное окисление в условиях действия на организм гепарина и пчелиного яда //Матер. Росс, научно-практич. конф. «Экология, здоровье и природопользование». Саратов, 1997.С.26.

31. Антипенко Е.А., Анисимова Л.М., Дерюгина А.В., Густов А.В., Крылов В.Н. Эффективность апипунктуры в нейропедиатрической практике // Матер. Второго Европейского конгресса «Акупунктурные Белые Ночи». Санкт- Петербург, 1997. С.27-28.

32. Дерюгина А.В. Анализ изменения электрофоретической подвижности и агрегации эритроцитов при действии пчелиного яда // Тезисы докладов Второй Нижегородской сессии молодых ученых. Н.Новгород, 1997. С.213.

33. Derugina A.V., Krilov V.N., Dudkina O.V., Gustov A.V. Solapiven in the treatment of patients with vertebral lumboischialgesis // XXXV international apicultural congress. Antwerp, Belgium, 1997. P. 203.

34. Дерюгина A.B., Хомутов A.E., Зимина T.A. Стабилизация показателей гемостаза при действии пчелиного яда и гепарина // Матер, конф. «Кислотно-основной и температурный гемостаз: физиология, биохимия, клиника». Сыктывкар, 1997. С. 175-178

35. Крылов В.Н., Дерюгина А.В. Влияние пчелиного яда и его компонентов на электрофоретическую подвижность эритроцитов // Укр. биохим. журн. 1998. Т.70, №2. С.36-41.

36. Дерюгина А.В. Влияние гепарина на коагулирующие свойства крови в условиях действия на организм пчелиного яда // Регуляция и управление в биосистемах: сборник трудов молодых ученых биол. фак. ННГУ. Н.Новгород, 1998. С.34-36.

37. Дерюгина А.В., Дудкина О.В. Изменение гематологических показателей при использовании солапивена в патологии // Регуляция и управление в биосистемах: сборник трудов молодых ученых биол. факультета ННГУ. Н.Новгород, 1998. С.43-45.

38. Дерюгина А.В. Исследование терапевтического действия пчелиного яда на систему крови при радиационном поражении организма // Тезисы докладов Третьей Нижегородской сессии молодых ученых. Н.Новгород, 1998. С.201-202.

39. Дерюгина А.В., Попов М.В., Крылов В.Н. Влияние солапивена на электрокинетические свойства эритроцитов // Матер. VI научно-практич. конф. по апитерапии «Апитерапия сегодня». Рыбное, 1998. С.57-58.

40. Орлов А.В., Хомутов А.Е., Дерюгина А.В. Усиление токсического действия пчелиного яда антагонистами гепарина // Матер. VI научно-практич. конф. по апитерапии «Апитерапия сегодня». Рыбное, 1998.С.73-74.

41. Крылов В.Н., Дерюгина А.В. Электрофоретическая подвижность эритроцитов (ЭФПЭ) как индикатор регуляции гомеостаза // Матер. Всероссийск. научн. конф. с межд. участием, посвящ. 150-летию акад. И.П.Павлова. Санкт- Петербург, 1999. С.192.

42. Krilov V.N., Derugina A.V. Electrophoretic mobility of erythrocytes and stress-reaction by bee venom // XXXVI international apicultural congress. Vancouver, Canady, 1999. C.223.

43. Крылов B.H., Дерюгина A.B., Антипенко Е.А. Апитерапия и электрофоретическая подвижность эритроцитов// Матер. VII научно-практич. конф. «Апитерапия сегодня». Рыбное, 2000. С.118-119.

44. Крылов В.Н, Капустина Н.Б., Максимов Г.А., Дерюгина A.B. Влияние КВЧ-воздействия на электрофоретическую подвижность эритроцитов // Миллиметровые волны в биологии и медицине. Вестник Нижегородского университета. 2000. №2. С.5-7.

45. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Костина О.В. Влияние Солапивена на реологические свойства крови ожоговых больных // Матер. X Междунар. научно-практ. конф. по апитерапии «Апитерапия сегодня». Рязань, 2002.С.45-46.

46. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Густов A.B. Роль реологических механизмов в апитерапии неврологических заболеваний //Матер. 4-й Межд. научно-практич. конф. «Пчеловодство -XXI». Москва, 2003. С. 112-113.

47. Преснухина H.A., Крылов В.Н, Дерюгина A.B. Влияние электромагнитных волн миллиметрового диапозона на морфо-функциональные показатели периферической крови // Миллиметровые волны в биологии и медицине. Вестник Нижегородского университета. 2003. №1(6). С.51-56.

48. Крылов В.Н., Дерюгина A.B. Сравнительный анализ действия различных видов ЭМИ на электрофоретическую подвижность эритроцитов // Вестник Нижегородского университета им. Н.И.Лобачевского. Серия Биология. 2004. Вып.1, №7. С. 16-21.

49. Артемова A.B., Панова Т.М., Дерюгина A.B. Особенности электрофоретической подвижности эритроцитов и фосфолипидного спектра их мембран при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. 2004. №2-3. С.6.

50. Antipenko Е.А., Belokopytova O.N., Gustov A.V., Kornouhov A.E.,Derugina A.V. Cytoflavinum adaptic effect at chronic cerebral ischemia // International Society of adaptive Medicine (ISAM) VIII World Congress. Moscow, 2006. P. 183.

51. Крылов B.H., Дерюгина A.B., Болдырев А.Ф., Одинцов Г.В. Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов in vitro при действии низкоинтенсивного лазерного излучения // Электромагнитные поля и излучения в биологии и медицине: Межвузовский сборник научных трудов. Н.Новгород, 2006. С. 10-14.

52. Антипенко Е.А, Белокопытова A.B., Густов A.B., Паренко М.К., Дерюгина A.B., Щербаков В.И. Критерии оценки адаптационного процесса при хронической ишемии головного мозга // Матер. IX Всероссийского съезда неврологов. Ярославль, 2006. С.336.

53. Антипенко Е.В., Густов A.B., Давыдова К.С., Дерюгина A.B., Крылов В.Н. Уровень эритроцитарного глутатиона на разных стадиях хронической цереброваскулярной недостаточности II Научные труды VII Межд. научно-практич. конф. «Здоровье и образование в XXI». Москва, 2006. С.35.

54. Антипенко Е.А., Густов А.В, Белокопытова О.Н., Корноухов А.Е, Дерюгина A.B. Неспецифическая цитопротективная терапия при хронической ишемии головного мозга // Вестник Санкт-Петербург, мед. академии им. И.М. Сеченова. 2007. №1. С.240-244 .

55. Антипенко Е.А., Густов А.В, Григорьева В.Н., Белокопытова О.Н.,Дерюгина A.B. Опыт применения адаптогена «Геримакс-энерджи» при хронической ишемии головного мозга // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. Приложение к журналу «Инсульт». Спецвыпуск: Материалы II Российского Международного конгресса «Цереброваскулярная патология и инсульт». 2007. С. 358-359

56. Дерюгина A.B., Крылова Е.В. Влияние НИЛИ на структуру и функции крови крыс //Тезисы докладов 2-й Межд. конф. «Человек и электромагнитные поля». Саров, «РФЯИ-ВНИИЭФ», 2007. 37-38.

57. Антипенко Е.А., Хватова Е.М., Николаев И.Н., Дерюгина A.B. Стресс-лимитирующий эффект нейропептида дельта-сна при хронической ишемии головного

мозга // Научные труды VIII Междунар. научно-практич. конф. «Здоровье и образование в 21 веке». Москва, 2007. С.101

58. Дерюгина А.В., Крылова Е.В Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на структуру и функции крови крыс // Человек и электромагнитные поля. Сборник трудов. Саров, 2007. С. 66-72.

59. Krylov V.N., Derugina A.V., Goustov A.V., Antipenko E.A. Erythrocytes functional paramétrés changing under apitherapy of neurological patients // Mellifera. 2007. V.7. P. 27-32.

60. Крылов В.H., Дерюгина А.В., Корягин А.С. Сравнительный анализ радиозащитного действия продуктов пчеловодства при моделировании лучевой болезни у крыс // Матер. XIII Всеросс. научно-практ. конф. «Успехи апитерапии». Адлер, 2008. С. 43-47.

61. Антипенко Е.А., Густов А.В., Григорьева В.Н., Дерюгина А.В., Крылова Е.В., Давыдова КС., Кузнецова Е.В., Паренко М.К., Щербаков В.И. Психофизиологическая адаптация при хронической цереброваскулярной недостаточности // Нижегородский медицинский журнал. 2008. №4. С. 90-94.

62. Крылов В.Н., Дерюгина А.В., Антипенко Е.А., Обухова Л.М. Пчелиный яд в геронтологии // Матер, координационного совещания и 9-й научно-практич. конф. «Интермед». Москва, 2009. С. 223-229.

63. Антипенко Е.А., Густов А.В., Белякова О.А., Дерюгина А.В., Крылов В.Н. Адаптивные реакции крови в ходе лечения хронической ишемии мозга (клинико-экспериментальное исследование) // Матер. XIV Междунар. симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации». Москва, 2009. С. 48-50.

64. Дерюгина А.В., Гришина А.А., Крылов В.Н. Влияние пчелиного яда на электрофоретическую подвижность и оксидантную систему эритроцитов у крыс Апитерапия сегодня. // Матер. XIV Всеросс. научно-практич. конф. «Успехи апитерапии». Рыбное, 2009. С.43-46.

65. Дерюгина А.В., Захарова О.А., Обухова JI.M., Крылов В.Н. Метод клиновидной дегидратации при оценке возрастных, гормональных и альтерационных изменений организма // Матер, междунар. конф. «Пчеловодство XXI век. Пчеловодство, апитерапия и качество жизни». Москва, 2010. С. 56-58.

66. Захарова О.А., Дерюгина А.В Сравнительно-видовое изучение электрофоретической подвижности при стрессовом воздействии // Матер. 14 Пущинской Межвузов, школы-конференции молодых ученых. Пущино, 2010. С. 123-124.

67. Дерюгина А.В., Сенюрина А.И. Активность Na.K-АТФазы эритроцитов при действии продуктов пчеловодства на фоне иммобилизационного стресса у крыс // Матер. III Всеросс. с международным участием конгресса студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз-Россия 2010». Н.Новгород, 2010. С.128.

68. Захарова О.А, Дерюгина А.В. Влияние маточного молочка и убихинона на функциональные характеристики эритроцитов крыс при развитии иммобилизационно-болевого стресса // Матер. III Всеросс. с международным участием конгресса студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз-Россия 2010». Н.Новгород, 2010, С. 131.

69. Дерюгина А.В., Захарова О.А. Электрофоретическая подвижность эритроцитов при действии различных экзотоксинов на организм. // Матер. XXI Съезда Физиологического общества им. И.П. Павлова. Калуга, 2010. С. 226-227.

70. Крылов В.Н., Дерюгина А.В. Электрофоретическая подвижность эритроцитов как диагностический тест альтерационных состояний организма // Матер, первой междунар. научно-практич. конф. «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине». Санкт-Петербург, 2010. С. 261.

71. Крылов В.Н., Дерюгина А.В., Захарова О.А. Влияние пчелиного яда на адаптивные реакции эритроцитов крыс при экспериментальном стрессе // Матер. Междунар. форума пчеловодов. Саранск, 2010. С. 9-12.

72. Дерюгина А.В., Сенюрина А.И. Активность Ыа,К-АТФазы эритроцитов крыс при различных стрессовых воздействиях // Матер. IV Всеросс. с междунар. участием конгресса студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз-Россия 2011». Воронеж, 2011, С. 69-71.

73. Derjugina A., Goshkova Е„ Pleskova S., Krylov V. Morphological and electrokinetic indicator erythrocytes of rat at stressful influences estimated by AFM //Fourth international meeting of AFM in life sciences and medicine. Paris, France, 2011. P. 79/168.

74. Крылов B.H., Дерюгина A.B. Влияние продуктов пчеловодства на адаптационные реакции крови крыс при различных видах стресса // Матер. Междунар. научно-практич. конф. «Пути развития пчеловодства в России, стран СНГ и дальнего зарубежья». Ярославль, 2011. С. 147-150.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АТФ аденозинтрифосфорная кислота

2,3 ДФГ 2,3 дифосфоглицерат

СБН глугатион восстановленный

0580 глутатион окисленный

ДЭ дисциркуляторная энцефалопатия

КВЧ-излучение излучение крайне высокой частоты

ИМП импульсное магнитное поле

ЛФ лизофосфолипиды

ЛФХ лизофосфатидилхолин

МДА малоновый диальдегид

НИЛИ низкоинтенсивное лазерное излучение

ОНАР общие неспецифические адаптационные реакции

ПОЛ перекисное окисление липидов

ДСН-ПААГ полиакриламидный гель с додецилсульфатом натрия

СМ сфингомиелин

ФЛ фосфолипиды

ФХ фосфатидилхолин

ФЭА фосфатидилэтаноламин

ЭМИ электромагнитное излучение

ЭФПЭ электрофоретическая подвижность эритроцитов

ХЦВН хроническая цереброваскулярная недостаточность

ЯБДПК язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки

Благодарности. Автор искренне признателен своему научному консультанту д.б.н., профессору В.Н. Крылову. Автор выражает глубокую благодарность специалистам, коллегам и соавторам, помогавшим в проведении исследований в ходе выполнения работы. Автор благодарен д.б.н. Корягину A.C., к.б.н. Ошевенскому Л.В., к.б.н. Миронову A.A. и всем сотрудникам кафедры за помощь, советы и конструктивные предложения. Автор благодарен к.м.н. Антипенко Е.А. и к.м.н. Артемовой A.B. за проведение совместных клинических исследований.

Подписано в печать 17.02.2012 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать цифровая. Усл. печ. л. 2,6 Заказ № 101. Тираж 120 экз.

Отпечатано с готового оригинал-макета g РИУ ИНГУ им. Н И. Лобачевского. 603000, г. Нижний Новгород, ул. Б. Покровская, 37

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Дерюгина, Анна Вячеславовна

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Современные представления о структурно-функциональных показателях эритроцитов в норме и при стресс-реакции организма

Часть 1. Структурная организация мембран эритроцитов - основа функционального проявления их свойств.

1.1. Современные представления о структурной организации мембран эритроцитов.

1.2. Электрокинетические свойства эритроцитов.

1.3. Углеводно-фосфорный обмен в проявлении морфо-функциоанальных свойств эритроцитов.

1.4. Влияние про- и антиоксидантной систем на мембрану эритроцитов.

1.4.1. Роль глутатиона в антиоксидантной защите эритроцитов.

Часть 2. Теоретические представления о стресс-реакции организма

1.5. Общая характеристика стресса.

1.6. Участие нервной и эндокринной систем в формировании стресс-реакции.

1.7.Типы неспецифических адаптационных реакций организма.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Характеристика материалов и объектов исследования.

2.2. Модели напряжения и острого стресса.

2.3. Сравнительно-видовое действие стресса.

2.4. Действие стресс-реализующих систем.

2.5. Адреналэктомия.

2.6. Действие стресс-факторов на клетки.

2.7. Повторяющийся стресс.

2.8. Хронический стресс.

2.9. Действие стрессмодулирующих средств при альтерации функций организма крыс.

2.10. Клинические исследования.

2.11. Методы исследования.

Глава 3. Исследование электрокинетических и структурно-функциональных характеристик мембран эритроцитов при различных видах воздействия

3.1. Исследование электрофоретической подвижности эритроцитов (ЭФПЭ) при различных видах воздействия на организма животных.

3.2. Роль симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем в изменении ЭФПЭ.

3.3. Исследование изменения ЭФПЭ при действии стресс-факторов в опытах in vitro.

Глава 4. Морфофункциональные характеристики эритроцитов при стрессовом воздействии

4.1. Роль биохимических показателей эритроцитов в изменении ЭФПЭ.

4.1.1. Влияние перекисного окисления липидов и концентрации глутатиона на ЭФПЭ.

4.1.2. Взаимосвязь электрофоретической подвижности и белок-липидного профиля мембран эритроцитов.

4.1.3. Влияние активности Na-K-АТФазы, концентрации неорганических фосфатов на ЭФПЭ.

4.2. Морфометрические характеристики эритроцитов при стрессовом воздействии.

4.3. Зависимость ЭФПЭ от состава эритроцитарной популяции и неспецифических адаптационных реакций организма.

Глава 5. Исследование повторяющегося и хронического стрессовых воздействий на ЭФПЭ и морфофункциональные показатели эритроцитов

5.1. ЭФПЭ крови крыс при повторяющемся и хроническом стрессе.

5.2. ЭФПЭ крови больных с заболеваниями разной этиологии.

Глава 6. Исследование электрокинетических и структурно-функциональных показателей мембран эритроцитов при развитии адаптационных процессов

6.1. Исследование действия продуктов пчеловодства на морфофункциональные показатели эритроцитов на фоне острого стресса у животных.

6.2. Исследование ЭМИ на морфофункциональные показатели эритроцитов на фоне острого стресса у животных.

6.3. Действие стрессмодулирующих средств на ЭФПЭ при развитии у животных хронического стресса.

6.4. Исследование ЭФПЭ крови больных при терапии.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование типовых изменений электрокинетических свойств эритроцитов в норме и при альтерации функций организма"

В основе жизнедеятельности организма лежат приспособительные реакции к постоянно меняющимся факторам окружающей среды. В зависимости от силы и длительности воздействия организм либо адаптируется к новым условиям, что способствует повышению устойчивости организма к любым воздействиям, либо происходит истощение адаптационных резервов, что, в свою очередь, может привести к развитию заболеваний различной этиологии [11, 293]. В современной науке прослеживается тенденция выявления специфических изменений организма при его альтерации. Логично предположить, что множественность реакций в каждом конкретном случае является отражением единого общебиологического процесса, связанного с развитием типовых защитных и компенсаторно-приспособительных реакций организма в ответ на альтерирующее воздействие [217]. В связи с изложенным, актуальность приобретает изучение общих закономерностей, происходящих в организме человека и животных процессов, что связанно как с развитием теоретических представлений общебиологических законов развития адаптационного процесса, так и при поиске эффективных корригирующих способов воздействия на организм при альтерации его систем. Адаптивный или повреждающий эффект любого фактора, а тем более комплекса факторов, как стресс, реализуется в условиях целостного организма опосредованно - через мембранные системы клеток [170]. Состояние мембраны во многом определяет протекание физиологических и биохимических процессов и тем самым является исходным звеном в сложной цепи приспособительных модификаций на всех уровнях [210]. В этом плане эритроцитарные мембраны представляют собой удобный объект исследования, поскольку отражают общие принципы структуры мембран клеток организма. Кроме того, они обладают такими преимуществами как простота выделения, стабильность в искусственной среде, своеобразие организации, не усложненной внутриклеточными мембранами, вследствие отсутствия органелл и ядерного аппарата [55, 183, 402].

Биологическое состояние мембраны клетки напрямую связано с поверхностным зарядом, о наличии которого можно судить по электрофоретической подвижности (ЭФП) [116, 246]. Регистрация перемещения клеток крови в электрическом поле позволяет оценить не только их ЭФП и, следовательно, получить информацию об интегральном состоянии мембранных функций, но и состояние организма в целом. Снижение отрицательного заряда и, как следствие, ЭФПЭ определяет повышение агрегации эритроцитов [409], что оказывает непосредственное влияние на микроциркуляцию, увеличивает вязкость крови [399]. Агрегаты заполняют просвет капилляров, не оставляя места для пристеночного слоя плазмы, являясь непосредственной причиной стаза крови, что в итоге вызывает тканевую гипоксию [181]. Установлены выраженные изменения ЭФПЭ крови у больных при различных видах патологии органов и систем организма [117]. Важно отметить, что анализ литературных данных свидетельствует об однообразной реакции подвижности эритроцитов - ее снижении при самых разных заболеваниях: у пациентов, страдающих хронической почечной недостаточностью [19], с заболеваниями органов дыхания [1], при интоксикациях [118, 301], ишемической болезни сердца [168], сердечно-сосудистых [191, 262] и онкологических заболеваниях [408], физических нагрузках и психическом напряжении [257].

Однонаправленность изменения ЭФПЭ при различных видах заболеваний позволяет предположить, что модификация ЭФПЭ является отражением общих закономерностей изменения состояния гомеостаза организма. В связи с тем, что в основе многих патологических процессов лежит развитие разной степени выраженности стресса, можно ожидать, что ЭФПЭ является ранним критерием стресс-реакции и возникающей альтерации. Однако общие закономерности, происходящие на мембранном уровне, и механизмы, вызывающие изменения ЭФПЭ при альтерации организма, мало изучены.

Очевидно, что развитие различных по патогенезу патологических процессов и состояний сопровождается молекулярными изменениями плазматических мембран клеток, являющихся как непосредственной мишенью повреждающего действия патогенных факторов, так и вовлеченных в патологический процесс, в связи с инициацией универсальных механизмов повреждения клетки [333]. Между тем традиционный анализ структурно-функциональных показателей клеток, проводимый сразу после воздействия стресс-фактора, не только не дает исчерпывающей информации о состоянии организма, но и нередко маскирует реальную картину происходящих изменений. С позиций развития общего адаптационного синдрома, следует подчеркнуть, что при изучении ЭФПЭ требуется исследование морфо-функциональных характеристик клеток крови в динамике развития адаптационного процесса, с учетом последовательного включения стресс-реализующих систем организма, в частности симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой [330]. Проведение комплексного анализа электрокинетических свойств клеток и их морфофункциональных показателей позволит получить обобщающие положения о базисных механизмах регуляции ЭФПЭ и закономерностях ее преобразования на фоне адаптационных перестроек организма при развитии стресс-реакции и патологии разного генеза. Раскрытие универсальных механизмов изменения клеточных мембран крайне важно для оценки состояния гомеостаза организма в целом и при разработке методов диагностики развития патологического процесса.

В связи с вышеуказанным, целью работы явилось изучение электрокинетических свойств эритроцитов крови человека и животных, их взаимосвязь со структурно-функциональным состоянием мембран в норме и при альтерации функций организма.

Для достижения данной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить динамику изменения электрокинетических свойств эритроцитов по ЭФПЭ в процессе развития стресс-реакции организма человека и животных при действии различных экстремальных факторов.

2. Провести сравнительное исследование ЭФПЭ крови животных разных таксономических групп при развитии у них стресс-реакции.

3. Выявить закономерности изменения ЭФПЭ и структурно-функциональных показателей мембран эритроцитов при активации симпатоадреналовой и гипофизарно-надпочечниковой систем организма.

4. Исследовать модификацию белок-липидного спектра мембран, изменение процесса ПОЛ и состояния системы глутатиона в эритроцитах, активность Ыа-К-АТФазы, содержание АТФ и 2,ЗДФГ в клетках, морфометрические показатели эритроцитов при различных видах альтераций организма.

5. Оценить взаимосвязь ЭФПЭ со структурно-функциональными свойствами эритроцитарных мембран на фоне общих неспецифических адаптационных реакций организма при изучаемых видах воздействия.

6. Изучить ЭФПЭ и морфофункциональные характеристики эритроцитов крови животных и человека в динамике восстановления нарушенных функций организма фармакологическими и физиотерапевтическими средствами.

7. Проанализировать возможность использования исследования ЭФПЭ в качестве раннего и значимого критерия развития стресс-реакции в организме, характеристики тяжести и динамики альтерационного процесса, и эффективности корригирующих воздействий.

Научная новизна

Впервые проведен комплексный анализ изменения электрокинетических свойств эритроцитов и их взаимосвязь с модификацией морфофункциональных характеристик мембраны на различных экспериментальных моделях напряжения и нарушения функций организма крыс разного генеза, а также при исследовании патологии у людей.

Впервые выявлена фазность изменения ЭФПЭ, зависящая от включения ведущих нейро-гормональных систем организма, таких как симпатоадреналовая и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая.

На основании результатов исследования сформулирована концепция о закономерностях изменения ЭФПЭ, реализующихся через структурно-функциональную модификацию мембран, связанных с изменением рецепторной реактивности клеток в ходе развития стресс-реакции, позволяющая рассматривать эритроцит как биологическую систему, отражающую гомеостаз организма в целом.

Впервые показано, что изменение ЭФПЭ является универсальным маркером развития не только патологического процесса в ходе действия альтерирующего фактора, но и включения адаптационных процессов в организме при развитии резистентности в ответ на действие адаптогенов. Доказана возможность использования ЭФПЭ в качестве метода диагностики стресс-реакции организма при его альтерации и степени развития адаптационных процессов в ответ на действие адаптогенов.

Теоретическая и практическая значимость работы

Работа выполнена в соответствии с плановыми НИР кафедры физиологии и биохимии человека и животных. Часть работы выполнена в рамках реализации ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (Государственный контракт № П604).

Работа является экспериментальным исследованием с перспективным практическим выходом, позволяющим разработать новые диагностические методы в медицине. Результаты исследования используются в учебном процессе кафедры физиологии и биохимии человека и животных Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского и кафедры неврологии, психиатрии и наркологии факультета повышения квалификации врачей Нижегородской государственной медицинской академии. Полученные результаты позволяют обосновать эффективность и целесообразность использования фармакологических и физиотерапевтических средств в динамике восстановления нарушенных функций. Результаты исследования внедрены в практику в неврологической клинике Нижегородской областной больницы им. Н.А.Семашко. По результатам исследования предложен способ оценки функциональной активности коры надпочечников организма, основанный на измерении электрофоретической подвижности эритроцитов крови (патентная заявка № 20111012-56/001560 от 13.01.2011) и внедрен в практику способ исследования ЭФПЭ в качестве критерия оценки степени адаптационных процессов организма у больных с хронической ишемией головного мозга (патент на изобретение № 2371193 от 27.10.2009).

Положения, выносимые на защиту

1. Изменения ЭФПЭ человека и животных при нарушении функций организма носят однотипный характер независимо от вида воздействующего фактора и его длительности. Межгрупповые различия имеют лишь количественный характер и варьируют по времени, определяясь спецификой альтерационного воздействия.

2. Закономерности изменения ЭФПЭ при различных экстремальных воздействиях и патологии связаны с развитием стресс-реакции и вовлечением стресс-реализующих систем, таких как симпатоадреналовая и гипофизарно-надпочечниковая.

3. ЭФПЭ зависит от мембранно-клеточных характеристик эритроцитов и опосредована перестройками белок-липидной составляющей мембран, нарушением баланса про- и антиоксидантных систем клетки, изменением активности Ыа-К-АТФазы, перестройками метаболизма клеток, вызывающих морфологическую модификацию эритроцитов в ответ на стрессовое воздействие.

4. Изменения ЭФПЭ и морфофункциональных показателей эритроцитов при хроническом стрессе у животных и при патологии у людей однотипны с острым стрессом. Степень восстановления ЭФПЭ на фоне развития адаптационных процессов в организме показывает эффективность фармакологических и физиотерапевтических средств в качестве адаптогенов.

5. Общие закономерности изменения ЭФПЭ, связанные с универсальными изменениями структурно-функционального состояния клеток, позволяют рассматривать эритроциты как биологическую систему, отражающую гомеостаз организма в целом, и проанализировать механизмы, по которым реализуется стадийность, общность и специфичность того или иного патологического процесса.

Апробация работы

Основные положения работы были доложены и обсуждены на IV ,У, VI VII научно-практических конференциях по апитерапии «Апитерапия сегодня», Рыбное, 1994, 1997, 1998, 2000; на XXXIV международном конгрессе по пчелокультуре, Лозанна, 1995; на Российской конференции «Экология, здоровье и природопользование», Саратов, 1997; на Втором Европейском конгрссе «Акупунктурные Белые Ночи», Санкт-Петербург, 1997; на XXXV международном конгрессе по пчелокультуре, Антверпен, Бельгия, 1997; на Всероссийской научной конференции с международным участием, посвящ. 150-летию акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, 1999; на XXXVI международном конгрессе по пчелокультуре, Ванкувер, Канада, 1999; на X Международной научно-практической конференции по апитерапии, Рязань, 2002; на 4-й Международной научно-практической конференции «Пчеловодство -XXI», Москва, 2003; на IX Всероссийском съезде неврологов, Ярославль, 2006; на VIII Международном конгрессе по адаптационной медицине, Москва, 2006, на II Международной конференции «Человек и электромагнитные поля», Саров, 2007, на XIII Всероссийской научно-практической конференции «Успехи апитерапии», Адлер, 2008; на 9-й научно-практической конференции «Интермед», Москва, 2009; на XIV Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации», Москва, 2009; на международной конференции «Пчеловодство XXI век. Пчеловодство, апитерапия и качество жизни», Москва, 2010; на XXI съезде физиологического общества им. И.П. Павлова, Калуга, 2010; на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» Башкирия, Сибай, 2010; на II Межрегиональной научно-практической конференции неврологов и нейрохирургов Приволжского федерального округа «Высокие технологии в медицине», Н.Новгород, 2011; на IV Международной конференции по АСМ в науке и медицине, Париж, 2011; на Международной научно-практической конференции «Пути развития пчеловодства в России через успешный опыт регионов России, стран СНГ и Дальнего Зарубежья», Ярославль, 2011. Апробация работы проведена на заседании кафедры физиологии и биохимии человека и животных ННГУ им. Н.И. Лобачевского.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 74 работы, из них 22 - в изданиях, рекомендованных Перечнем ВАК МО РФ; получен 1 патент РФ, 1 патентная заявка.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 248 страницах машинописного текста; состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 428 источников, из которых 267 отечественных и 161 иностранных; содержит 74 таблицы и 30 рисунков.

Личный вклад соискателя

В исследованиях, которые положены в основу диссертационной работы, соискатель ставил проблему, подбирал методы исследования, планировал проведение исследований, принимал личное участие в проведении экспериментальных исследований, интерпретировал результаты и формулировал выводы.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Дерюгина, Анна Вячеславовна

ВЫВОДЫ

1. Изучение ЭФПЭ при действии разных альтерирующих факторов как химической, так и физической природы, а также сравнительно-видовое исследование ЭФПЭ холоднокровных и теплокровных животных показало сходство в динамике изменения ЭФПЭ, что выражалось в ее уменьшении (1-я фаза) с последующим увеличением (2-я фаза). Выраженность фаз ЭФПЭ зависела от интенсивности и типа воздействия на организм.

2. Динамика изменения ЭФПЭ опосредовалась последовательной активацией стресс-реализующих систем. Первичное уменьшение ЭФПЭ при стрессовых воздействиях связано с активацией выделения эндогенных катехоламинов и их действием на мембрану клеток. Вторая фаза -увеличение ЭФПЭ, имеет долгосрочное действие и обусловлена нарастанием в крови глюкокортикоидов. Механизм изменения ЭФПЭ под влиянием адреналина и кортизола реализуется через модификацию мембраны при изменении реактивности организма.

3. Уменьшение ЭФПЭ при остром стрессе сочеталось с увеличением концентрации МДА, изменением состава фосфолипидов -снижение содержания фракции ФЭА, СМ, возрастание лизоформ, и изменением белкового спектра - уменьшение концентрации сиалогликопротеинов, спектрина и увеличении белков полос 4.1, 4.2, 4.9, тропомиозина. Рост ЭФПЭ был сопряжен с увеличением концентрации общего и восстановленного глутатиона, уменьшением концентрации МДА, восстановлением фосфолипидного и белкового статуса эритроцитарных мембран.

4. Первоначальное снижение ЭФПЭ при различных видах альтерации происходило на фоне повышения активности Ыа-К-АТФазы, росте концентрации АТФ в клетках и увеличения их сферичности с последующим ингибированием работы Ыа-К-АТФазы, понижением концентрации АТФ, увеличением 2,ЗДФГ, обратимой эхиноцитарной трансформацией эритроцитов и проявлением второй фазы ЭФПЭ.

5. Повторяющееся стрессовое воздействие (физическое и токсическое), и хронический стресс в виде локальной и глобальной ишемии головного мозга крыс вызывали первоначальное уменьшение ЭФПЭ с последующим ее ростом. Начальный этап ЭФПЭ при действии альтерирующих факторов был обусловлен развитием окислительного стресса, увеличением концентрации МДА, снижением общего и восстановленного глутатиона, приводящего к изменению структуры мембраны. Фазность проявления ЭФПЭ была более продолжительна во времени при повторяющимся и хроническом стрессах по сравнению с действием острого стресса. Исследование различных видов патологии организма человека показало, что изменение ЭФПЭ носило общий характер не зависимо от вида заболевания и являлось закономерным изменением в ответ на текущий патологический процесс.

6. Анализ ЭФПЭ на фоне общих неспецифических адаптационных реакций свидетельствовал, что различные альтерирующие воздействия вызывают запуск универсального ответа клеточной системы, связанный с последовательным включением адаптационных процессов, опосредованных развитием общего адаптационного синдрома на уровне организма. При этом первую фазу - снижение ЭФПЭ можно рассматривать как стадию тревоги системы, вторую - стадию напряжения системы, - характеризуется возвращением сниженной функции к исходному состоянию, или, если стрессовое воздействие продолжается, к повышенной функции системы в новых условиях.

7. Фармакологические и физиотерапевтические средства при альтерации функций у крыс (гамма-облучение, иммобилизация, ишемия головного мозга) и терапия больных с различными видами патологии (ХЦВН, вертеброгенная люмбоишиалгия, нервно-мышечные заболевания,

ЯБДПК, псориаз) вызывали восстановление ЭФПЭ до показателей физиологической нормы.

8. Использование ЭФПЭ в качестве раннего и значимого критерия развития стресс-реакции в организме позволяет проанализировать тяжесть альтерационного процесса и эффективность корригирующих воздействий с учетом развития адаптационных реакций.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенного исследования установлено ряд принципиально новых фактов свидетельствующих, что однонаправленность изменения ЭФПЭ при различных экстремальных воздействиях и патологии, является общей неспецифичной реакцией организма. Анализ динамики изменения ЭФПЭ при действии альтерирующих факторов позволил установить, что первая фаза - уменьшение ЭФПЭ сочеталась с действием адреналина, последующее (2-я фаза) повышение ЭФПЭ под влиянием стресс-факторов выражалось сходством с изменением ЭФПЭ при действии кортизола.

Проведенный анализ ЭФПЭ при действии различных факторов в опытах in vivo показал сходную в качественном отношении с опытами in vitro динамику изменения ЭФПЭ. Ограничение выброса адреналина и кортизола у адреналэктомированных крыс приводящее к нивелированию изменений ЭФПЭ, а также отсутствие первой фазы изменения ЭФПЭ при действия сресс-фактора на фоне блокады ß-адренорецепторов и проявление второй фазы ЭФПЭ сочетающееся с ростом концентрации кортизола свидетельствуют о роли гормональной перестройки организма на ЭФПЭ при развитии стресс-реакции. Учитывая, что стрессовое воздействие сопровождается секрецией и выбросом катехоламинов и глюкокортикоидов и, сопоставляя динамику ЭФПЭ с результатами опытов in vitro, можно говорить о закономерном и последовательном изменении ЭФПЭ в ответ на развитие стресс-реакции в организме, связаным с изменением рецепторной реактивности клеток.

Главное содержание стресс-реакции составляет активация адренергической и гипофизарно-надпочечниковой систем. В результате реализуются эффекты высоких концентрации катехоламинов и глюкокортикоидов [169, 170]. Говоря о гормональной регуляции процессов жизнедеятельности, необходимо отметить, что главный и первичный объект действия гормонов - внутриклеточные обменные процессы. Обладая большой мощностью и широким спектром действия на общий обмен веществ в клетке, гормоны способны изменять функцию и структуру клеток, которые в свою очередь изменяют состояние тканей и органов всего организма [200].

Модифицирующее действие гормонов на эритроцитарные мембраны, по всей видимости, связано с последовательным включением стресс-реализующих систем клетки. Так, взаимодействие адреналина с рецепторами эритроцитарных мембран через соответствующие в-белки может регулировать активность аденилатциклазы и фосфолипазы С [23, 235, 348]. В этом случае под действием гормона в клетке изменяется концентрация нескольких вторичных посредников: цАМФ, инозитолфосфата и диацилглицерина [317, 426]. цАМФ в клетке взаимодействует с цАМФ-зависимой протеинкиназой, которая фосфорилирует киназу фосфорилазы и АТФазы клетки [235], что вызывает нарушение ионного состава в цитозоле клеток. Увеличение поступления в клетке Са2+ приводит к активации Са2+- зависимых фосфолипаз, активирующих липолиз и процессы ПОЛ [161]. В наших экспериментах регистрировался рост концентрации МДА в эритроцитах.

Активация процессов ПОЛ вызывает модификацию липидного бислоя. В ходе проведенного исследования показано значительное снижение содержания фракции ФЭА и возрастание ЛФ, что, в полной мере, согласуется с данными литературы [183]. Усиление процессов ПОЛ может оказывать влияние непосредственно на белковые компоненты мембран путем ослабления липид-белковых взаимодействий и образования поперечных белковых "сшивок" [18, 287, 323]. Под действием МДА происходит денатурация спектрина и актина [80]. В наших экспериментах выявлено уменьшение концентрации основных сиалогликопротеинов - белка полосы 3 и гликофоринов, которые вносят существенный вклад в создание отрицательного заряда клеток. Кроме того, отмечено изменение соотношение белков цитоскелета: уменьшалось количество спектрина, анкирина и наблюдалось увеличение фракций белков полосы 4 и тропомиозина. Дезорганизация белкового состава мембран красных кровяных клеток, характеризующаяся снижением содержания высокомолекулярных пептидов и увеличением доли низкомолекулярных белков, отмечена при развитии различных видов патологии организма [183].

Активация процессов ПОЛ и увеличение концентрации внутриклеточного кальция приводит к увеличению относительной микровязкости липидного слоя мембран [20, 105], меняется характер межмолекулярных взаимодействий интегральных белков и белков цитоскелета, снижается деформабильность [312, 358, 420, 421, 422], увеличивается пассивная проницаемость липидного бислоя для одновалентных катионов и для воды [5, 56], изменяется форма клеток [142, 196], что приводит к перераспределению заряда по глубине гликокаликса и на фоне уменьшения сиалогликопротеинов мембраны, по всей видимости, определяет уменьшение эффективного отрицательного заряда и их ЭФПЭ.

Изменения организации интегральных и периферических белков и связанные с этим изменения гидрофобных взаимодействий в зонах белок-липидных контактов приводят к изменению состояние мембраносвязанных липид-зависимых ферментов (аденилатциклазы, фосфодиэстеразы, 1Ча+К+-АТФазы Са2+-АТФазы) [132].

Снижение активности №-К-АТФазы определяет увеличение

2+ концентрации ингибирование Ыа- Са обмена и дальнейшее увеличение концентрации Са в цитозоле эритроцитов. В цитоплазме Са соединяется со своим внутриклеточным рецептором кальмомодулином (КМ), активирует КМ - зависимую протеинкиназу, которая активирует клеточные процессы приводящие к мобилизации функции клетки. В частности, можно предположить активацию пентозофосфатного пути, сопряженного с глутатионредуктазной системой, за счет чего происходит увеличение концентрации общего и восстановленного глутатиона. Рост глутатиона, с одной стороны, снижает сродство гемоглобина к кислороду, что, вероятно, направлено на удовлетворение возросших потребностей организма в кислороде, с другой стороны, с помощью восстановленного глутатиона осуществляется детоксикация гидроперекисей [96].

Активация протеинкиназ приводит к фосфорилированию белков цитоскелета. Фосфорилирование белков может происходить путем прямого активирования протеинкиназы С. Активация этого фермента происходит диацилглицеролом - продуктом конвертации мембранных фосфоинозитидов [426]. Фософрилирование белков эритроцитарной мембраны приводит к ослаблению белковых взаимодействий, а активация скрамблазы, закономерная в условиях накопления в клетке Са , определяет переход ФЭА и ФС на внешний монослой мембраны [420]. Выход фосфатидилсерина на внешнюю поверхность эритроцитов приводит к образованию эхиноцитов [384]. Эхинацитарная форма клеток является наиболее устойчивой к действию факторов среды [198]. При образовании эхиноцитов на мембране эритроцитов происходит перераспределение отрицательного заряда. В результате перераспределения заряда на мембране эритроцита образуются дискретные области с сильным отрицательным зарядом [347], что приводит к увеличению электроотрицательности клеток.

При этом специфические метаболические механизмы играют роль модуляторов [169, 171]. Необходимо учитывать, что стресс-активирующие системы уровновешиваются стресс-лимитирующими системами. Существенным противовесом активационным системам служат кортикостероиды. Механизм действия гюкокортикоидов на мембранном уровне до конца не выяснен. Считают, что действие глюкокортикоидов осуществляется, главным образом, на уровне регуляции транскрипции генов. Оно опосредуется взаимодействием глюкокортикоидов со специфическими глюкокортикоидными внутриклеточными рецепторами. При отсутствии гормона внутриклеточные рецепторы, которые представляют собой цитозольные белки, неактивны и входят в состав гетерокомплексов, включающих также белки теплового шока [338]. Белки теплового шока способствуют поддержанию оптимальной конформации гормоносвязывающего домена рецептора и обеспечивают высокое сродство рецептора к гормону. После проникновения через мембрану внутрь клетки глюкокортикоиды связываются с рецепторами, что приводит к активации комплекса. При этом олигомерный белковый комплекс диссоциирует -отсоединяются белки теплового шока (Шр 90 Ь НБр 70). В результате этого рецепторный белок, входящий в комплекс в виде мономера, приобретает способность димеризоваться. Вслед за этим образовавшиеся комплексы «глюкокортикоид+рецептор» транспортируются в ядро, где взаимодействуют с участками ДНК, расположенными в промоторном фрагменте стероид-отвечающего гена и регулируют процесс трансдукции определенных генов. Это приводит к стимуляции или супрессии образования мРНК и изменению синтеза различных регуляторных белков и ферментов, опосредующих клеточные эффекты.

При этом защитный эффект кортизона может обнаруживаться в течение нескольких минут [64]. Так, отмеченное в ходе исследования, восстановление мембранных белковых структур, может происходить за счет действия белков-шаперонов, которые способны связывать белки, утратившие свою конформацию и которые еще можно восстановить [234], №р 70 предотвращают агрегацию поврежденных стрессом полипептидов и сохраняют белковый гомеостаз в клетке [310], Шр 90 связываются с актином и поддерживают функциональную активность внутриклеточных белков [340, 397]. Глюкокортикоиды вызывают конформационные изменения липидной части мембран, стабилизацию мембран, уменьшение их проницаемости [64, 219]. Кроме того, стероидные гормоны участвуют в работе антиокислительной системы [219]. Выявлена корреляция между концентрацией кортизола и активностью глютатионпероксидазы [61]. Вероятно, восстановление белок-липидной структуры мембраны в ходе развития адаптационных процессов при альтерирующем воздействии в проведенных экспериментах, и, прежде всего, восстановление основных сиалогликопротеинов и возможное увеличение ФС, являющегося кислым ФЛ, на внешней стороне мембраны, определяют увеличение отрицательного заряда поверхности клеток и рост ЭФПЭ.

Таким образом, в результате названные перестройки мембраны и, связанное с этим изменение активности ферментов, по всей видимости, приводят к смене режимов функционирования клетки, направленных на оптимизацию процессов на уровне всего организма.

Проведенное исследование позволяет заключить, что различные стрессирующие воздействия вызывают запуск универсального ответа клеточной системы, связанный с развитием стресс-реакции организма, которая включает стадию активации, стадию резистентности и стадию истощения (рис. 6.1). При этом на клеточном уровне реализуется последовательное включение адаптацинных процессов, опосредованное развитием общего адаптационного синдрома на уровне организма. Так, в ответ на любое стрессовое воздействие в эритроците, как в биологической системе, развивается своеобразная «стадия тревоги», которая характеризуется всплеском процессов свободнорадикального окисления, приводящих к модификации фосфолипидного и белкового состава и уменьшению электроотрицательности мембран, сочетающееся с увеличением активности Ка,К-АТФазы, ростом концентрации АТФ в клетках и увеличением их сферичности. Эта стадия способствует повышению активности антиоксидантной системы, лимитирующей развитие процессов перекисного окисления липидов, и обуславливает развитие «стадии адаптации» клеточной системы, сопряженной с ингибированием активности Ка,К-АТФазы, восстановлением фосфолипидного и белкового спектров эритроцитарных мембран, их электроотрицательности, а также с мобилизацией резервов низкомолекулярных антиоксидантов, в частности, глутатиона. При благоприятном течении адаптационного процесса происходит повышение резистентности организма, при неблагоприятном течении развиваются процессы, приводящие к дизадаптации организма и развитию патологии, проявляющееся в снижении ЭФПЭ, сопряженной с усилением деструктивных процессов на уровне клетки, проявляющихся развитием дисбаланса про- и антиоксидантных процессов.

Таким образом, изменение ЭФПЭ является маркером стрессовой реакции, характеризующим вовлечение адаптационных систем организма, анализ которой дает возможность целенаправленно воздействовать на механизмы компенсации, способные повысить неспецифическую устойчивость организма.

Доказательством правомерности вышеизложенных положений является оптимизация адаптационного процесса при ДЭ путем использования стрессмодулирующих препаратов. Установленная модификация ЭФПЭ на воздействие пчелопродуктов и ЭМИ, свидетельствует о продолжительном увеличении уровня глюкокортикоидов, которые не только усиливают процессы метаболизма, но и лимитируют развитие стрессовых процессов, являясь эффективными адаптогенами в условиях пониженной резистентности организма и факторами неспецифической терапии больных при различных видах патологии.

Стрессовое воздействие

Стадия тревоги

Гактивапии^

Активация гипофизарно-надпочечниковой гигтемы

Стадия резистентности

Стадия истощения

МДА I

ЛФ, I ФЭА, См| глутатио 4

Рис. 6.1. Взаимосвязь ЭФПЭ с их структурно-функциональными показателями в ходе развития стресс-реакции в организме.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Дерюгина, Анна Вячеславовна, Нижний Новгород

1. Аладашвили Н.З., Сарычева Т.Г., Попова О.В., Чернов В.М., Козннец Г.И. Электрофоретическая подвижность эритроцитов у детей с заболеваниями органов дыхания // Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2003. Т.2, №4. С.36-39.

2. Алесенко A.B., Соловьев A.C., Терентьев A.A., Хренов A.B. Роль продуктов сфингомиелинового цикла в развитии апоптоза, индуцированного через рецепторы FAS и TNF- // Известия АН. Серия биологич. 1998. Вып.2 С.150-159

3. Андреев А.Ю., Кушнарева A.A., Старков Ю.Е. Метаболизм активных форм кислорода в митохондриях // Биохимия. 2005. Т.70, №2. С.246-264.

4. Анисимова A.B., Кузин В.М., Колесникова Т.И. Гусев Е.И. Компьютерная морфоденситометрия эритроцитов в диагностике и прогнозе хронической ишемии головного мозга // Инсульт. 2006. №18. С.36-46.

5. Аношина М.Ю., Перехрестенко Т.П., Яговдик М.В. Свободно-радикальное окисление липидов у больных хроническими лимфолейкозами // Укр. мед. журн. 2006. Т.56, № 6. С.78-82.

6. Артемов Н.М. Физиологические основы действия на организм пчелиного яда: Доклад на соиск. уч. степ. д. б. н. Горький, 1969. 56с

7. Артифексов С.Б. Морфофункциональное исследование половых клеток самцов белых крыс при гипотермии. Автореф. дис.канд. мед. наук. Челябинск, 1981. 26с.

8. Атаджанов М.А., Баширова Н.С., Усманходжаева А.И. Спектр фосфолипидов в органах-мишенях при хроническом стрессе // Патол. Физиол. и эксперим. терапия. 1995. №3. С.46-48

9. Атауллаханов Ф.И. и др. Регуляция объема эритроцитов человека. Роль калиевых каналов, активируемых кальцием / Кляткина А.Б., Витвицкий В.М., Пичугин A.B. // Биол. мембраны. 1993. Т. 10, №5. С.519-526

10. Балчугов В.А., Полякова А.Г., Анисимов С.И. КВЧ-терапия низкоинтенсивным шумовым излучением. Н.Новгород: Изд-во ННГУ им. Н.И. Лобачевского, 2002. 192с

11. Барабой В. А. Стресс: природа, биологическая роль, механизмы, исходы. Киев: Фитосоциоцентр, 2006. 424 с.

12. Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин В.Г. Перекисное окисление и стресс. С-Пб.: Наука, 1992. 292с

13. Баранов H.H. Мышечная деятельность, адаптация, тренированность. Кишинёв: Штиинца, 1989. 150 с.

14. Бейер Э.В., Локтев H.A. Гистохимические и морфологические изменения в различных областях гиппокампа крыс при плавательном стрессе // Рос. физиол. журн. 2001. № 3. С. 314-318

15. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1983. 584с.

16. Бецкий О.В., Лебедева H.H. О механизмах взаимодействия миллимитровых волн низкой интенсивности с биологическими объектами // Миллиметровые волны в биол. и мед. 2001. №3. С.5-9

17. Бизенкова М.Н., Романцева М.Г., Чеснокова Н.П. Метаболические эффекты антиоксидантов в условиях острой гипоксической гипоксии // Фундаментальные исследования. 2006. №1. С. 17-21.

18. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М.: Медицина, 1989. 368с

19. Блума Р.К. Калния И.Э., Иванова С.М. Исследование структурно-функциональных свойств мембран эритроцитов с помощью флуоресцентных зондов ДСМ и ДСП-6 // Биол. мембраны. 1992. Т.9, №5. С.47-52

20. Богородская С.Л., Клинова С.Н., Голубев С.С. АТФ-азная активность и уровень ионов в сердечной ткани при экспериментальном адреналовом повреждении и проведении клеточной трансплантации // Сибир. мед. журнал 2011. №6. С. 102-105

21. Болдырев A.A. Биологические мембраны и транспорт ионов. М.: Изд-воМГУ, 1985. 93с

22. Болдырев A.A. Регуляция активности мембранных ферментов // Соросовский образовательный журн. 1997. № 6. С. 21-27

23. Бондарь О.П. и др. Поверхностный заряд мембран эритроцитов при нарушении липидного обмена по данным микроэлектрофореза, Н-титрования и флуоресцентных исследований / Холодова Ю.Д., Смирнова И.П., Возиян П.А. // Укр. биохим. журн. 1988. Т.60. С.77-84

24. Брилль Г.Е., Петросян В.И., Житнева Э.А. и др. Новые данные об изменении структуры биожидкостей под влиянием низкоинтенсивного лазерного излучения // Физическая медицина. 1996. Т. 5, № 1-2. С. 39-40

25. Брызгалов Н.Ю. и др. Роль цитоплазматических структур эритроцитов в изменение сродства гемоглобина к кислороду / Браж е H.A., Юсипович А.И., Максимов Г.В., Рубин А.Б. // Биофизика. 2009. Т.54, №З.С. 442-447.

26. Булгакова О.С., Баранцева В.И. Общий клинический анализ крови методом определения постстрессовой реабилитации // Успехи соврем.естествознания. 2009. №6. С.27-29.

27. Булегенов К.У., Балмуханов Б.С. Агрегация эритроцитов в присутствии алцианового голубого // Кардиология. 1993. Т.ЗЗ, №4. С.42-44

28. Бышевский А.Ш., Терсенов O.A. Биохимия для врача. Екатеринбург, 1994. 421с.

29. Василенко И.А., Боровягин B.J1. Полиморфизм липидов модельных и биологических мембран // Биологические мембраны. 1990. №7. С. 677-702

30. Верлан Н.В. Клинико-фармакологический анализ состояния системы глутатиона при церебральной ишемии. Автореф. дис.докт. мед. наук. 2008. 37с.

31. Верхуша В.В., Староверов В.М., Вржец П.В. Модель адгезионного взаимодействия клеток в потоке жидкости // Биол. мембраны. 1994. Т.11, №4. С.437-450

32. Весельский И.Ш., Саник A.B. Микроциркуляция, реологичекие свойства крови, их коррекция при ишемических нарушениях мозгового кровообращения //Журн. неврапатол. и психиатр. 1991. №1. С.62-65.

33. Викулов А.Д, Мельников А.А, Багракова С.В. Агрегация эритроцитов у спортсменов // Физиология человека. 2003. Т.29, №4. С.76-83

34. Виноградова И.Л., Багрянцева С.Ю., Дервиз Г.В. Метод одновременного определения 2,3 ДФГ и АТФ в эритроцитах // Лаб.дело. 1980. №7. С.424-426.

35. Виру A.A., Кырге П.К. Гормоны и спортивная работоспосбность. М.: Физкультура и спорт, 1983.153с

36. Владимиров И.А., Шуба М.Ф. Синаптические процессы в гладких мышцах // Нейрофизиология. 1984. №3. С.307-319

37. Владимиров Ю. А. и др. Свободные радикалы в главных системах / Азизова О. А., Деев А. И., Козлов А. В., Осипов А. Н., Рощупкин Д. И. // Биофизика (Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР). 1991. Т. 1, №6.С.17-18

38. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и незапрогромированная смерть клетки // Соросовский образовательный ж. 2000. Т.6, №9. С.2-9

39. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН. 1998. №7. С. 43-51

40. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембанах. М: Наука, 1972. 252с

41. Вовк C.B. Влияние иммобилизации на морфофункциоанльные свойства лизосомального аппарата нейтрофильных лейкоцитов в условиях блокады ß-адренорецепторов // Физиол. журн. им. М.И.Сеченова. 1993. Т.79, №9. С.42-47

42. Высокогорский В.Е., Ефременко Е.С., Грицаев И.Е. Характеристика обмена глутатиона при алкогольном абстинентном синдроме // Наркология. 2006. Т. 56, Вып.8. С.59-61

43. Вьюшина A.B., Герасимова И.Г., Флеров М.А. Перекисное окисление белков сыворотки крови у крыс, селектированных по сокрости выроботки условного рефлекса активного избегания в норме и при стрессе // Бюлл. экспер. биол. и мед. 2002. Т.133, №3. С.286-288

44. Гаврилов O.K., Козинец Г.И., Черняк Н.Б. Клетки костного мозга и периферической крови . М.: Медицина, 1985. 288с

45. Гаркави Л.Х. Активационная терапия. Ростов н/Д: Изд-во Рост, ун-та, 2006. 256 с.

46. Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов н/Д: Изд-во Рост, ун-та, 1990. 376с

47. Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б. О критериях оценки неспецифической резистентности организма при действии различных биологически активных факторов с позиции теории адаптационных реакций // Миллиметровые волны в биологии и медицине. 1995. № 6. С.11-21

48. Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Кузьменко Т.С. Антистрессорные реакции и активационная терапия. Реакция активации как путь к здоровью через процессы самоорганизации. М.: ИМЕДИС, 1998. 656 с

49. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функция. М.: Мир, 1997. 624с

50. Герасимов И.Г. О стехиометрии межклеточного ИаД-обмена // Биофизика. 2007. №1. С.69-75.

51. Гильмутдинов Р.Я. Электрокинетические характеристики клеток крови и их взаимосвязь с другими гематологическими показателями в норме и патологии. Автореф. дис.докт. биол. наук. Казань, 1994. 34 с.

52. Глушков B.C., Сторожок С.А., Петровец A.M. Модификация структуры мембран клеток крови как модулятора изменения проницаемости мембран для АДФ при сдвиговой деформации // Известия Челябинского научного центра. 2004. Вып.1. С.224-230

53. Голиков П.П. Рецепторные механизмы глюкокортикоидного эффекта М.: Медицина, 1989. 288с.

54. Головченко Т.В. Связывание капсульного антигена возбудителя чумы и антифракционных иммуноглобулинов класса G с липосомами. // Естествознание и гуманизм. 2006. Т. 3, № 2. С.56-58.

55. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шерстобаев Е.Д. Механизмы локальной регуляции кровотворения. Томск: STT, 2000.148с

56. Голюченко O.A., Осочук С.С. Повышение содержания кортизола у часто болеющих детей как фактор, восприимчивость к острым респираторным инфекциям // Клин. лаб. диагн. 2010. №12. С. 14-16

57. Гончарова Н.Д., Шмалей A.B., Маренин В.Ю., Смелкова С.А. Гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая система и ферменты глутатионзависимой системы при стрессе и старении // Бюлл. экспер. биол. и мед. 2007. Т. 144, № 11. С.574-577

58. Гончарова Е.И., Пинаев Г.Л Белки цитоскелета эритроцитов // Цитология. 1988. Т.30, №1. С.5-18.

59. Гонян С.А. Поверхностный заряд клеток при их различных функциональных состояниях. Авто реф. дис.канд. биол. наук. Ереван, 1993. 23с

60. Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И. Стресс и система крови. М. Медицина, 1983. 240с.

61. Грибанов Г.А. Особенности структуры и биологическая роль лизофосфолипидов // Вопр.мед.химии.1991. №4. С.2-10.

62. Гриневич В.В., Поскребышева Е.А., Савелов H.A. Иерархические взаимоотношения между органами гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы (ГГАС) при воспалении // Усп. физиол. наук. 1999. Т. 30, № 4. С. 50

63. Гущин И.С. Аллергические воспаление и его фармакологический контроль. М.: Фармруспринт.1998. 485с

64. Девятков Н.Д., Голант М.Б., Бецкий О.В. Миллиметровые волны и их роль в процессах жизнедеятельности. М.: Радио и связь, 1991. 160с

65. Девятков Н.Д. Радиоволны в медицине и биологии. М.: Радио и связь, 1995. 295с.

66. Добротина H.A., Копытова Т.В., Щелчкова H.A. Характеристика функционального состояния мембран эритроцитов у больных хроническими распростроненными дерматозами // Успехи совр. естествознания. 2010. №2. С. 39-43

67. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса // Вопр. мед. химии 2001. Т.47, №6. С. 561-581

68. Дубинина Е.Е., Пустынина A.B. Свободнорадикальные процессы при старении, нейродегенеративных заболеваниях и других патологических состояниях // Биомед. химия. 2007. Т.53, Вып.4. С.351-372.

69. Дубинина,Е.Е., Шугалей И.В. Окислительная модификация белков // Успехи современной биологии. 1993. Т.113, №1. С.71-79

70. Духин С.С., Дерягин Б.В. Электрофорез. М.:Наука, 1976. 248с

71. Евсеева М.А. и др. Механизмы развития острой гипоксии и пути ее фармакологической коррекции / Евсеева A.B., Правдивцев В.А., Шабанов П.Д. // Обзоры по клин, фармакопии и лекарст. терапии. 2008. Т.5, №1. С. 3-17.

72. Ефимова Н.В., Шибкова Д.З. Модифицирующее действие радиационного фактора на стволовые кроветворные клетки экспериментальных животных. Челябинск: Изд-во Челяб. гос. пед. ун-та. 2007. 201 с.

73. Желенина JI.A., Иващенко Т.Э., Ефимова Н.С. Полиморфизм генов семейства глутатион-8-трансферазы (GST) при бронхиальной астме у детей // Аллергология. 2003. № 2. С. 43—46

74. Журавлев А.И. Свободно-радикальная биология. М.: Московская ветеренарная академия, 1993. 70с.

75. Журавлев А.И., Зубкова С.М Антиоксиданты. Свободнорадикальная патология. М.: МГАВМ и Б им. К.И.Скрябина, 2008. 272с

76. Заводник И.Б., Лапшина Е.А., Брышевска М. Эффект свободных жирных кислот на состояние липидного и белкового компонентов мембран // Биол. мембраны. 1995. №5. С. 516-523

77. Загорулько А.К. и др. Компплексная электронно-микроскопическая оценкаизменений ультроструктуры эпителия бронхиол при бронхиальной астме в эксперименте / Аскари Т.А., Загорулько A.A., Самойлов А.Н. // Укр. пульмонологический ж. 2002. №. 2. С. 51-53.

78. Зарубина И.В. Молекулярные механизмы индивидуальной устойчивости к гипоксии // Обз. клин, фармакол. лек. тер. 2005. Т.4, №1. С.49-51

79. Зенков И.К., Меныцикова Е.Б., Шергин С.М. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика. Новосибирск, 1993. 181с

80. Зинчук В.В., Шульга Е.В., Гуляй И.Э. Влияние эритропоэтина на кислородтранспортную функцию крови и прооксидантно-антиоксидантное состояние у кроликов при введении липополисахарида // Рос. физиол. журн. им И.М. Сеченова. 2010. Т. 96, №1. С.43-49

81. Золотарева Т.А., Олешко А.Я., Олешко Т.И. Экспериментальное исследование антиоксидантного действия низкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного диапазона // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 2001, № 3. С. 3-5

82. Иванов И.Т. Исследование роли белков эритроцитарной мембраны в термоиндуцированных нарушениях барьера проницаемости // Биол. мембраны. 1997. Т. 14, №1. С.41-49

83. Иващенко А.Т., Бушнева И.А. Выделение и свойства аниончувствительной аденозинтрифосфотазы из мембран эритроцитов// Биохимия. 1981. №3. С.486-488

84. Ивенс И., Скейтлак Р. Механика и термодинамика биологических мембран. М.: Мир, 1982. 257 с

85. Игнатьев В.В. и др. Изменение некоторых физиологических функций в эритроцитах человека и млекопитающих по сравнению с эритроцитами других видов животных / Кидалов В.Н, Хадарцев А.А., Сясин Н.И. // Вестник нов. мед. технологий.2007. №1. С. 25-32.

86. Исаев-Иванов В.В, Лебедев Д.В., Лауте X. Сравнительный анализ нуклеосомной структуры клеточных ядер — малоугловое нейтронное рассеяние // Физика твердого тела. 2010. Т. 52, №.5. С.996-1005.

87. Каган В.Е. Механизмы структурно-функциональной модицикации биомембран при перекисном окислении липидов. Автореф. дис.докт. биол. наук. М: МГУ, 1981. 48с.

88. Казеннов A.M., Маслова М.Н. Активность ЫаД-АТФазы в мембранных препаратах эритроцитов и почках спонтанно гипертензивных крыс // Физиол. журн. СССР. 1993. Т.79, №8. С.66-72.

89. Казеннов A.M., Маслова М.Н. Влияние мембран безъядерных эритроцитов на свойства транспортных АТФ // Цитология. 1991. Т.31, №11. С.32-40

90. Казеннов A.M., Маслова М.Н. Структурно-биохимические свойства мембраны безъядерных эритроцитов // Физиол. журнал СССР. 1988. №12. С.1587-1598

91. Казеннов A.M., Маслова М.Н., Шалабодов А.Д. Роль белков мембранного скелета безъядерных эритроцитов в функционировании мембранных ферментов // Докл. АНСССР. 1990. Т.312, №1. С.223-226

92. Казимирко В. К, Мальцев В. И. Антиоксидантная система и ее функционирование в организме человека // Здоровье Украины. 2004. № 98. С. 31-37.

93. Казимирко В.К,.Мальцев В.И, Бутылин В.Ю., Горобец Н.И. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная терапия К.: Морион, 2004. 160 с

94. Калинин C.B. Изучение с помощью флуоресцентных липидных зондов связывания анионов с липидным бислоем // Биол.мембраны. 2000. Т. 17, №6. С. 666-669

95. Кальман П. А., Волчкова Г.И. Взаимодействие системы транспорта кальция и адренорецепции в регуляции перекисной резистентности эритроцитов и вктивности ферментов антиоксидантной защиты. Харьков. Изд-во харьк. ун-та, 1993. 94с.

96. Камышников B.C. Справочник по клинико-химической лабораторной диагностики: в 2 т. Т.2. Минск: Беларусь. 2002. 463с.

97. Кандыба Д.В. Магнитотерапия. М.: Наука, 2003. 17с

98. Капля A.A., Морозова B.C. Функционирование Na-K-АТФазы в поляризованных клетках // Укр.биох.журн. 2010.Т.82, №1. С.5-20.

99. Капрельянц A.C. Динамические ансамбли в биологических мембрана // Биохимия. 1982. Т.47, Вып.6. С.883-892

100. Кеэп Т.В. Исследование с помощью флуоресцентных зондов перестроек в структуре мембран клеточных ядер при перекисномокислении липидов, вызванном у- облучение// Радиобиология. 1980. Т.20, №5. С.648-653

101. Кидалов В.Н., Сясин Н.И., Хадарцев A.A. К вопросу о физиологической значимости изменений формы, ультраструктуры и флуоресценции эритроцитов периферической крови, трансформирующихся в эхиноциты // Вестник новых мед. технологий. 2005. Т 12, №2. С.6-10

102. Килеса В.В. Глюкокортикоиды // Таврический медико-биологич. вестник. 2010. Т. 13, №1. С.228-235

103. Киреева В.Ф. Морфофункциональная характеристика эритроцитов при действии некоторых зоотоксинов // Механизмы действия зоотоксинов. Межвуз. сборник. 1985. С. 104-113.

104. Кирпатовский В.И. и др. Использование эмульсии а-токоферола для антиоксидантной защиты ишемизированных и консервированных почек / Никифорова Н.В., Кудряшов Ю.В., Надточий О.Н. // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1996. №5. С.499-502.

105. Клебанов Б.М. Фармокологическая регуляция воспаления: современные проблемы и перспективы развития // Экспер.и клин.фармакл. 1992. №4. С.4-8

106. Кленова Н. А. Биохимические механизмы дезинтеграции эритроцитов человека в различных условиях функционирования. Автореф. дис.докт.биол. наук. Тюмень, 2003, 37с.

107. Клиорин А.И., Тиунов JÏ.A. Функциональная неравнозначность эритроцитов. Л.: Наука, 1974. 148 с

108. Козинец Г. И. и др. Кровь и экология / Высоцкий В.В., Захаров В.В., Оприщенко С.А., Погорелов В. М. М.: Практическая медицина, 2007. 432 с.

109. Козинец Г. И. и др. Электрический заряд клеток крови /Попова О.В. , Будник М.И. , Шмаров Д.А. , Погорелов В. М. , Проценко Д.Д. М.: Практическая медицина 2007, 208 с.

110. Козинец Г. И. Анализы крови и мочи. Клиническое значение. М.: Практическая медицина, 2008. 152с.

111. Козинец Г.И. и др. Электрофоретическая подвижность эритроцитов у больных с тяжелыми формами интоксикации / Попова О.В., Мороз В.В., Бирюкова J1.C., Головецкий И.Я. // Общая реаниматология. 2007. № 5. С.75-79

112. Козинец Г.И. Интерпретация анализов крови и мочи и их клиническое значение. М.: ТриадаХ, 1998. 104с.

113. Козинец Г.И. Общие вопросы кроветворения // Исследования системы крови в клинической практике. М.Триада X. 1998. 480с.

114. Козлов В.И., Буйлин В.А. Основы лазерной и рефлексотерапии. Киев: Здоровье, 1993. 216 с

115. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И., Шпрах В.В., Бардымов В.В., Верлан Н.В. Изменение концентрации глутатиона и активности ферментов его метаболизма в эритроцитах и плазме крови больных ишемическим инсультом // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. 2003. №4. С.47^19

116. Коротаева A.A., Чеглаков И.Б., Морозкин А.Д., Суслова И.В., Проказова Н.В. Влияние лизофосфотидилхолина на структуру и функциилипопротеинов низкой плотности // Биол. мембраны. 1996. Т. 13, №5. С.484-496.

117. Кондрашова М.Н., Лесогорова М.Н., Шноль С.Э. Метод определения неорганического фосфата по спектрам поглощения молибдатовых комплексов в ультрофиолете // Биохимия. 1965. №3. С.567-572

118. Конторщикова К.Н. Перекисное окисление липидов в норме и патологии: Учебное пособие. Нижний Новгород, 2000. 24с.

119. Корягин A.C. Сравнительный анализ радиозащитных свойств некоторых биологически активных веществ // Вестник ННГУ им. Н.И.Лобачевского. Серия биология. 1999. Вып.1. С. 72-77

120. Корягин A.C. Эколого-физиологическая характеристика адаптогенных свойств зоотоксинов при повреждающем действии гамма-облучения на организм экспериментальных животных. Автореф. дис.докт.биол. наук. Н.Новгород, 2007. 44с.

121. Кост Е.А. Справочник по клиническим методам исследования. М.: Медицина, 1975. 382с.

122. Красовская И.Г. Сценарий создания экспертной системы для предварительной эксперсс-диагностики клеток урови // Системы обработки информации. 2008. Вып 6(73). С.135-138.

123. Крыжановский Г.Н. Некоторые общебиологические закономерности и базовые механизмы развития патологических процессов // Архив патологии. 2001. №6. С. 44-49

124. Крылов В.Н. и др. Теория и средства апитерапии / Агафонов A.B., Кривцов Н.И., Лебедев В.И., Бурмистрова Л.А., Ошевенский Л.В., Сокольский С.С. М.Камильфо, 2007. 296с.

125. Крылов В.Н. Механизмы изменения некоторых функций нормального и альтерированного сердца при действии зоотоксинов: Автореф. дис.докт.биол. наук. Н.Новгород, 1990. 32с

126. Крылов В.Н., Корягин A.C., Ерофеева Е.А. Сравнительный анализ противолучевых свойств некоторых зоотоксинов // Журн. эвол. биох. и физиол. 2008. Т.44, № 4. С. 424-428.

127. Крылов В.Н., Максимов Г.А. Физиологические аспекты КВЧ-терапии // Вестник Нижегородского государственного университета им. Н.И.Лобачевского. Серия Биология. 2001. № 2. С. 8-15

128. Крылов В.Н., Млявый В.П. Пчелиный яд в научной и практической медицине. Минск, 2002. 158с.

129. Кудряшов A.M., Титова Н.М., Кудряшова Е.В. Влияние поллютантов с различными стресс-характеристиками на антиоксидантный стаус эритроцитов in vitro // Экология человека. 2005. №1. С.14-18.

130. Кудряшов Ю.Б. Радиационная биофизика (ионизирующие излучение) М., 2004. 448с.

131. Кузник Б.И. Малежик Л.П., Молчанова Н.Л., Альфонсов В.В. Связь агрегатного состояния крови с функциональной активностью клеточных структур // Система агрегатного состояния крови в норме и патологии / Под. ред. O.K. Гаврилова. М., 1982.-С.30-35

132. Кузник Б.И. Физиология и патология системы крови. М.:Вузовская книга,. 296с.

133. Кулапина О.И. и др. Проницаемость мембран эритроцитов у больных с инфекционной патологией / Киричук В.Ф., Утц И.А., Кулапина Е.Г., Зайцева И.А. // Критические технологии. Мембраны. 2005. №1. С.З-11.

134. Кулинский В.И., Колесниченко JI.C. Биологическая роль глутатиона // Успехи современной биологии. 1990. Т.110, №1. С.20-32

135. Курашвили Л.В., Васильков В.Г. Липидный обмен при неотложных состояниях. Пенза, 2003. 202с.

136. Лазарев Н.В. Воспроизведение заболеваний у животных для экспериментально-терапевтических исследований. Л.:Медгиз, 1954. 392с.

137. Лакомкин В.Л., Коркина О.В., Цыпленкова В.Г., Тимошин A.A., Рууге Э.К., Капелько В.И. Защитное действие убихинона (коэнзима Q10) при ишемии и реперфузии сердца // Кардиология. 2002. Т.42, №12. С. 5155

138. Лапшина Е.А., Заводник И.Б. Микрокалориметрические и флуоресцентные исследования рН-индуцируемых переходов в эритроцитарных мембранах // Биол.мембраны. 1993. Т. 10, №2. С. 170-178

139. Левин В.И. и др. Двойственный характер действия антител на электрофоретичесую подвижность эритроцитов / Янович Э.А., Луц Л.С., Свирновский А.И.// Гематол. и трансфуз. 1983. №9. С.29-31

140. Левин Г.Я., Шереметьев Ю.А. Роль N-ацетилнейраминовой кислоты и отрицательного заряда эритроцитов в их агрегации // Пробл. гематол. и перелив, крови. 1981. №6. С.6-8

141. Левтов В.А., Регирер С.А., Шадрина Н.Х. Реология крови. М.Медицина, 1982. 272с

142. Лившиц В.М., Седельникова В.И.Медицинский лабораторно-аналитический справочник. М.: Триада X. 2007. 304 с.

143. Линькова Н.С., Горшкова О.П., Шуваева В.Н., Дворецкий Д.П. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения красного спектра на некоторые свойства эритроцитов крыс Вистер // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2008. Т.145, №1. С.12-14.

144. Лисенко В. М., Минц Г.И., Скопионов С. А. Альтерация биологических жидкостей при лазеротерапии у хирургических больных.

145. Тез. докл. Межд. симп. Применение лазеров в хирургии и медицине. Ред O.K., Скобелкин М.З. СССР. М. 1989. 529-530

146. Лопина О.Д. №,К-АТФаза и сердечные гликозиды: новые функции известного белка // Росс, физиол. журн. им И.М.Сеченова. 2005. Т.91, №2. С. 158-168.

147. Лю Б.И., Шайхутдинов Е.М. Физико-химические и биокибернетические аспекты онкогенеза. Алма-Ата, 1991. 270с

148. Максимов Г.В. и др. Использование наночастиц для исследования конформации примембранного гемоглобина / Браже H.A., Юсипович А.И., Паршина Е.Ю., Родненков О.В., Зубин А.Б., Левин Г.Г., БыковВ.А. //Биофизика. 2011. Т.56, Вып. 6. С. 1099-1104.

149. Маркосян A.A., Лисовсакя И. Л., Маркосян P.A. Электрокинетические характеристики и межклеточные взаимодействия форменных элементов крови // Успехи физиол.наук. 1977. Т.8, №1. С.91-108

150. Маслова М.Н. Молекулярные механизмы стресса // Росс, физиол. журн. им И.М.Сеченова.2005.Т.91,№11.С. 1320-1328.

151. Матвеев А.Г. Феномен цитотоксичности и механизмы повреждения нейронов новой коры при гипоксии и ишемии // Медицинский журнал. 2004. №2. С. 18-23.

152. Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г. Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при онкопатологии // Биофизика. 1996. Т.41, Вып.5. С. 1093-1096.

153. Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г., Ахунова А.Р. Соотнесенность электрофоретической подвижности эритроцитов крови человека с уровнем гемоглобина в норме и при почечной патологии // Физиол. человека. 1997. Т.23, №.4. С.110-113.

154. Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г., Гуцаева Д.Р. Связь кислотно-щелочного состояния крови с электрофоретической подвижностью эритроцитов при патологии печени // Цитология. 1995. Т.37, №5/6. С.444-448.

155. Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г., Музафарова Д. А. Исследование соотношения количества объема эритроцитов и лейкоцитов крови человека // Рос.физиол.журн.им.И.М.Сеченова. 2000. Т.86, №4. С.427-429

156. Махнева A.B. Возрастные особенности состояния клеточных мембран эритроцитов у больных с ишемической болезнью сердца // Вестник Российского гос. мед. университета, 2011. №3. С.19-24

157. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. М.: Наука, 1981. 280с.

158. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессовых и ишемических повреждений сердца. М.: Медицина, 1984. 302с

159. Меерсон Ф.З., Кругликов Р.И. Высшие адаптационные реакции организма // Физиология адаптационных процессов. М.:Наука, 1986. С.492-518.

160. Меерсон Ф.З., Малышева И.Ю. Феномен адаптационной стабилизации структур и защита сердца. М.: Наука, 1993. 159с

161. Мирошников А.И., Фомченков В.М., Иванов А.Ю. Электрофоретический анализ и разделение клеток. М.: Наука, 1986. 184с

162. Мокрушников П.В. и др. Взаимодействие нанокристаллов корунда и кварца с мембраной эритроцитов / Панин J1.E., Зайцев Б.Н., Доронин Н.С., Козельская А.И., Панин A.B. // Биофизика. 2011. Т. 56, Вып. 6. С.1105-1110.

163. Молчанова Т.Т. Основы молекулярной организации белков мембраны эритроцитов и их дефекты, приводящие к гемолитическим анемиям // Гематология и трансфузиология. 1989. №7. С. 32-41

164. Морозов С.В., Долгих В.Т., Полуэктов B.J1. Активация процессов липопероксидации патогенетический фактор полиорганной дисфункции при остром панкреатите // Бюлл. СО РАМН. 2005. №4. С.32-35

165. Морозова Г.И., Добрецова Г.Е., Баренбойм Г.М. Регистрация изменения поверхностного заряда эритроцитов и модельных мембран с помощью флуоресцентных зондов // Биофизика . 1982. Вып.2. С.329-331

166. Морозова Т.М. и др. Участие трансмембранных систем посредников в действии стероидных гормонов на клетки-мишени / Левашова З.Б., Нагибнева И.Н., Pay В.А., Сидоркина О.М. // Физиол. журн. СССР. 1990. Т.76, №9. С. 1179-1186

167. Мосягин В.В. Особенности функционирования АТФ-аз эритроцитов циплят-бролеров // Науч. журн. КубГАУ. 2008. №35. С. 8-12.

168. Мусил Я., Новакова О., Кунц К. Современная биохимия в схемах. М.: Мир, 1984.216с.

169. Мчедлишвили Г.И. Экспериментальный анализ развития местного капилярного стаза // Физиол. журн. 1994. №2. С.105-113

170. Науменкова Т.В.и др. Сравнительное исследование структурных свойств мелиттина в воде и 33%-м трифторэтаноле методом молекулярной диагностики / Левцова О.В., Николаев И.Н., Шайтан К.В. // Биофизика. 2010.Т.55, Вып.55.С.32-38.

171. Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., Вечерский Ю.Ю. Патоморфоз эритроцита у больных с приобретенными пороками сердца и в условиях их хирургической коррекции // Бюл. экспер. биол. и мед. 2004. Т. 137, № 3. С. 336-340.

172. Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., Степовая Е.А. Физиология и патофизиология эритроцита. Томск: Изд-во Том. ун-та, 2004. 202 с

173. Орлов Б.Н., Гелашвили Д.Б. Зоотоксинология (ядовитые животные и их яды). М.: Высшая школа, 1985. 280с.

174. Орлов Б.Н., Крылов В.Н, Жабий яд. Химический состав, физико-химические свойства // Механизмы действия зоотоксинов. Межвузовский сборник. ГГУ, 1978. С.3-9

175. Палек И., Гург А., Файрбенкс Г. Трансмембранное движение и распределение кальция в нормальных эритроцитах и содержащих Hb G эритроцитах // Мембрана и болезнь. М:Медицина, 1980.С. 60-68.

176. Панин Л.Е. Биохимические механизмы стресса. Новосибирск: Наука, 1983.216с.

177. Панин JI.E., Мокрушников П.В., Куницын В.Г., Панин В.Е., Зайцев Б.Н. основы многоуровневой мезомеханики наноструктурных переходе в мембранах эритроцитов и их разрушения при взаимодействии с гормонами стресса // Физ. мезомех. 2011. Т. 14, №1. С. 5-17.

178. Пантюхина Н.В., Сушенцева Т.В., Гасников К.В., Бадриева Ю.Н. Электрокинетические свойства эритроцитов в оценке фетоплацентарной недостаточности у беременных с артериальной гипертензией // Успехи современного естествознания, 2010. №10, С.69-71.

179. Паранич A.B. и др. О патогенетическом значении нарушений состояния антиокислительного гомеостаза у больных гипертонической болезнью / Лад С.Н., Фролова H.A., Снегурская И.А., Коваль С.Н. // Вопр. мед.химии 2006. №6.26-32.

180. Петренко Ю.М., Владимиров Ю.А. Роль поверхностного заряда в поддержании осмотической резистентности эритроцитов // Вопр. трансфузиологии. 1988. С.15-19

181. Петруняка В.В., Панюшкина Е.А., Северина Е.П. Активация и ингибирование Ыа,К-АТФазы мембран эритроцитов эндогенными Са2-зависимыми регуляторами. Са2-зависимое действие уабаина на Са-АТФазу //Биол.мембраны. 1990.Т.7,№4.С.352-358

182. Поливода Б.И., Конев В.В., Попов Г.А. Биофизические аспекты радиационного поражения биомембран. М.: Энергоатомиздат, 1990. 154с.

183. Постнов Ю.В., Орлов С.Н. Первичная гипертензия как патология клеточных мембран. М.: Медицина, 1987. 193с.

184. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии // Патол. физиол.и экспер. терапия. 2001. №1. С.23-26

185. Репин Н.В., Кирошка В.В., Головко О.И. Анализ морфологии эритроцитов от pH и ионной силы среды в условиях гипотермического хранения // Проблемы криобиологии. 2009. Т. 19, №1. С. 10-17.

186. Рогов O.A. Механизмы повреждения эритроцитов при остром отравлении монооксидом углерода. Автореф. дис.канд.биол. наук. Иркутск, 2006.25с.

187. Розен В.Б. Основы эндокринологии. М.: Изд-во МГУ, 1994. 384с.

188. Розин В.В., Сенькович O.A., Черницкий У. А. Влияние температуры на гемолиз и везикуляциию эритроцитов, индуцированных додецилсульфатом натрия // Биол. мембраны. 2001. Т. 18, №4. С.294-298.

189. Руденко C.B., Божок Г.А., Нипот Е.Е. Индуцированное пчелиным ядом уменьшение объема теней эритроцитов // Биохимия. 1997. Т.62, №1. С.121-127.

190. Руденко C.B., Нипот Е.Е., Павлюк О.М. Влияние ионов Jn на гемолиз эритроцитов индуцированный мелиттином // Биохимия. 1995. Т.6, Вып.5. С.723-733.

191. Руденко C.B., Семенченко А.Ю. Изменение объема эритроцитов и спектра мембранных белков, индуцированное мелиттином, фосфолипазой А2 и пчелиным ядом // Биохимия. 1995. Т.6, Вып.5. С.734-745

192. Румянцева С. А. Комплексная антиоксидантная терапия реамбирином у больных с критическими состояниями неврологического генеза // Междун. медицинский журнал. 2002. №2. С.129-137.

193. Рыбина В.В., Еленская И.А., Каймачникова Н.П. Регуляция активности Са2+-АТФазы ионами Са2+ и кальмодулином в эритроцитах человека при различном времени хранения // Биол. мембраны. 2001. Т. 18, №4. С.287-293.

194. Рябов Г.А. Азизов Ю.М., Пасечник И.Н. Окислительный стресс и эндогенная интоксикация у больных в критических состояниях // Вестник интенсивной терапии. 2002. №4. С.4-7.

195. Рязанцева Н.В. Патофизиология эритроцитов при психических расстройствах // Нейрофизиология. 2000. №3. С. 259-261

196. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. Типовые нарушения молекулярной организации мембраны эритроцита при соматической и психической патологии // Успехи физиол. наук. 2004. Т.35, № 1. С. 53-65.

197. Сапронов Н.С. Фармакология гипофизарно-надпочечниковой системы СПб: Специальная литература, 1998.336с.

198. Сарычева Т.Г. и др. Морфометрия и электрофоретическая подвижность эритроцитов больных бронхиальной астмой при лечении внутривенным облучением крови / Цыбжитова Э.В., Попова О.В., Александров О.В.//Клин. лаб. диагностика. 2009. №3. С. 13-14.

199. Северин Е.С. Биохимия. М.: «ГЭОТАР-Медиа», 2005. 779с.

200. Сейдахметова З.Ж. Влияние иммобилизационного стресса на реактивность симпато-адреналовой системы и резистентность эритроцитов у крыс в период маммо- и лактогенез// Бюлл. СОР АМН. 2005. №3-4. С.93-95

201. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М.: Медгиз, 1960. 254 с

202. Селье Г. На уровне целого организма. М: Наука, 1972. 122 с.

203. Селье Г. Стресс без дистресса. М.: Прогресс, 1979. 123с

204. Сенькович O.A., Розин В.В., Черницкий Е.А. Влияние сахарозы и полиэтиленгликолей на параметры везикуляции и быстрого гемолиза эритроцитов, индуцированных NA-додецилсульфатом // Биол. мембраны. 2001. Т. 18, №2. С.120-124.

205. Сергеев П.В. Стероидные гормоны. М.: Наука, 1984. 240с.

206. Силиванова Е.А. и др. Активность Na-K-АТФазы эритроцитов и различных регионов головного мозга крыс при ингибированииацетилхолинэстеразы различными дозами неостигмина

207. Кыров Д.Н., Дубровский В.Н., Шалабодов А.Д. // Вестник тюменского госуниверситета. 2006. №5. С.12-19.

208. Скорпичев В.Г., Шумилов Б.В. Морфология и физиология животных: Учебное пособие. СПб., 2004. 416 с

209. Скулачев В.П. Эволюция, митохондрии и кислород // Соросовский образовательный журн.1999. №9. С.4-10

210. Сметанина Н.С., Ковригина Е.С., Токарев Ю.Н. Окислительное повреждение эритроцитов при талассемии // Гематол. и трансфуз. 1994. Т.39, №2. С39-41

211. Солодилова М.А. Роль генетических и средовых факторов в детерминации количественного содержания основных белков мембран эритроцитов человека. Дис. на соискание ученой степени канд.биол.наук. М., 1999. 160с.

212. Сороковой В.И., Никитина Г.М., Моченова H.H. Роль плазмолеммы в процессах старения, воспроизводства и элиминации эритроцитов: микровезикулы плазмолеммы как стимуляторы эритропоэза // Вест. РАМН. 1996. №9. С.35-40

213. Справочник по формулированию клинического диагноза болезней нервной системы / Под ред. В.Н. Штока, О.С. Левина. М: Медицинское информационное агентство, 2006. 265с.

214. Сторожок С.А. Панченко Л.Ф. Филиппович Ю.Д., Глушков B.C. Изменения физико-химических свойств биологических мембран при развитии толерантности к этанолу // Вопр. мед. химии. 2001. №2. С. 4251.

215. Сторожок С.А., Санников А.Г., Белкин A.B. Зависимость стабильности деформабильности мембран эритроцитов от межмолекулярных взамодействий белков цитоскелета // Научный вестник ТюмГУ. 1996. Т.1, №3. С.8-15

216. Сторожок С.А., Санников А.Г., Захаров Ю.М. Молекулярная структура мембран эритроцитов и их механические свойства. Тюмень. Изд-во ТюмГУ, 1997.140с.

217. Сторожок С.А., Соловьев C.B. Структурные и функциональные особенности цитоскелета мембран эритроцита // Вопр. мед. химии. 1992. Т.38, №2. С.14-17

218. Тараховский Ю.С. и др. О наличии упорядоченности организации гидрофобной области биологических мембран / Деев A.A., Куниский A.C., Единцов И.М.// Биол. мембраны,- 1992.-Т.9.-№7.-С.723-732.

219. Татков О. В., Гаркави JI. X., Рубцов В. В., Фатькина Н. Б. Актуальные проблемы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии. С-Пб.: Изд-во С.-Пб. ун-та, 2004. 242 с.

220. Титов В.Н. Функциональная роль холестерина: различие пулов холестерина в клетке и отдельных классов липопротеинов крови // Клинич. лабор. диагностика.2000. №3. С.3-10

221. Титов В.Н., Крылин В.В. Стресс, белки-шапероны. Нарушение биологической функции эндоэкологии и биологических реакций экскреции, воспаления и артериального давления // Клин. лаб. диагностика. 2010. №5. С.20-36

222. Ткачук B.C., Авакян А.Э. Молекулярные механизмы сопряжения G-белков с мембранными рецепторами и системами вторичных посредников // Росс, физиол. ж. им. И.М. Сеченова. 2003. Т. 89, №12. С.1478-1490.

223. Трещинский А.И., Мицук И.И. Электркинетические свойства крови //Анестез. и реаним. 1981. №4. С. 17-21

224. Туганова A.B., Коцюруба A.B. Исследование взаимодействия С27-стеринов с мембранами эритроцитов // Укр. биохим. журн. 1996. Т.68, №6. С.61-68

225. Тюрмина O.A., Кузьмин А.И., Медведев О.С. Дифференцированная активация симпатической нервной системы ивыброса катехоламинов при нейрогликопении убодрствующих крыс // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1997. Т. 124, №11. С.509-512

226. Федорова М.З. и др. Использование атомно-силовой микроскопии для оценки морфометрических показателей клеток крови / Павлов H.A., Зубарева Е.В., Надеждин C.B., Симонов В.В., Забиняков H.A., Тверитина Е.С. // Биофизика. 2008.Т.53, №6. С.1014-1018.

227. Федорова О.В., Коростовцева Л.С., Шапиро Дж.И., Багров А.Я. Эндогенные кардиотонические стероиды: клинические перспективы // Артериальная гипертензия. 2008. Т. 14. № 3. С.220-232.

228. Филаретов A.A. Подвигина Т.Г., Филоретова Л.П. Адаптация как функция гипофизарно-адреналовой системы. СПБ.: Наука, 1994. 131с.

229. Флауэр Р.Дж, Дейл М.М. Противовоспалительное действие кортикостероидов: Руководство по иммонофармокологии. М.: Медицина, 1998. С.246-259

230. Флеров М.А., Вьюшина A.B. Свободнорадикальное окисление липидов в гипоталамусе крыс при стрессе после введения кортизола // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2011. Т.97, №9. С.898-902.

231. Хависон В.Х., Баринов В.А., Арутюнян A.B. Свободнорадикальное окисление и старение СПб.: Наука, 2003. 327с.

232. Хаитов P.M., Лесков В.П. Иммунитет и стресс // Росс.физиол.журнал им. И.М. Сеченова. 2001. Т.87, №8. С. 1060-1072

233. Харамоненко С.С., Ракитянская А.А, Электрофорез клеток крови в норме и при патологии. Минск: Беларусь, 1974. 144 с.

234. Холодов Ю. А. Неспецифическая реакция нервной системы на неионизирующие излучения // Радиационная биология. Радиоэкология. 1998. Т. 38, №1. С. 121-125

235. Хургин Ю.В., Лебедев О.В., Макмарева Е.Ю. О роли активации воды в лекарственной и КВЧ терапии // Миллиметровые волны в биологии и медицине. 1994. №4. С.28-31

236. Цой П.К. Свободнорадикальное окисление в медицине и фармации // Казахстанский фармацевтический вестник. 2002. №5. С.38-40

237. Чейда A.A., Каплан М.А., Ефимова Е.Г., Холодов Ю.А. Влияние низкоинтенсивного инфракрасного лазерного излучения на модели биологических систем. Иваново: Изд. ИвГМА, 2002. 102 с.

238. Черницкий Е.А., Воробей A.B. Структура и функции эритроцитарной мембраны. Минск: Науки и техника, 1981. 250с.

239. Черницкий Е.А., Сенькович O.A. Гемолиз эритроцитов детергентами // Биол. мембраны. 1997. Т. 14, №4. С.385-393

240. Черный В.В. Распределение потенциала на бислойной липидной мембране при функционировании фосфолипазы А2 / Сихарулидзе М.Г., Мирский В.Н., Соколов B.C. // Биол.мембраны. 1992. Т.6. №7. С.733-740.

241. Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Бизенкова М.Н. Молекулярно-клеточные механизмы инактивации свободных радикалов в биологических системах // Успехи современ.естествознания. 2006. №7. С.29-36.

242. Чуян E.H. Физиологические механизмы биологических эффектов низкоинтенсивного ЭМИКВЧ. Симферополь:Эльиньо, 2003.448с.

243. Шаршунова М. В., Шварц В.И., Михалец Ч.Г. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. М., 1980. 554 с.

244. Шевченко A.C. и др. Транспорт Са2 в нейтрофилах и эритроцитах человека в гипотонической и гипертонической средах /

245. Кобялко В.О., Шевченок Т.С., Орлов С.Н.// Биол.мембраны. 1995. Т. 12, №3. С.254-259

246. Шереметьев Ю.А., Суслов Ф.Ю., Макин Г.И. О слиянии эритроцитов индуцированных La3+ // Биол.мембраны, 1991. Т.8, №4. С.402-406

247. Шилов A.M., Авшалумов A.C., Синицына E.H., Марковский В.Б., Полищук О.И. Изменение реологических свойств крови у больных с метаболическим синдромом // Рус. мед. журн. 2008. №4. С.200-204

248. Шилов A.M., Мельник М.В., Чубаров М.В. Бисопролол и препараты магния при лечении артериальной гипертензии // Рус. мед. журн. 2004. Т. 12., №4. С.866-871.

249. Шуваева В.Н., Кузнецова Н.П., Левтов В.А. Реологические свойства крови при частичном замещении ее у крыс раствором модифицированного гемоглобина// Физиол. журн. СССР. 1990. Т.76, №2. С. 192-199

250. Элиава М.И. Гриневич В.В., Оганесян Г. А. активность гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы и цикл бодрствование- сон при остром системном воспалении у крыс // Бюлл.экспер. биол и мед. 2003. Т.136, №8. С.128-131

251. Яструбинецкая О.И. и др. Исследование зависимости между электрофоретической подвижностью и СОЭ периферической крови у больных гемофидией / Шмаров Д.А., Сарычева Т.Г., Попова О.В., Козинец Г.И. // Клинич. лаб. диагностика. 2009. №11. С.46-48.

252. Ярмоненко С.П., Вайнсон A.A. Радиобиология человека и животных. М.: Высшая школа. 2004, 549с.

253. Akera T., Ng Y.C. Digitalis sensitivity of NaK-ATPase, myocytes and herd // Life.Sci. 1991. V.48, №2. 97-106

254. An X., Takakuwa Y., Manno S. Modulation of band 3 ankyrin interaction by protein 4.1 // J. Biol. Chem. 1996. V.276. № 38. P.35778-35785.

255. Andrews D.A., Yang L., Low P.S. Phorbol ester stimulates s protein kinase C mediated agtoxin-TK-sensitive calcium permeability patway human red blood cell // Blood.2002.V100.P.3382-3392

256. Ariga T., Jarvis W.D., Yu R.K. Role of sphingolipid-mediated in neurodegenerative diseases // J.Lipid.Res.l998.V.39, №1.P.5-16.

257. Aruoma, O.I. Free radicals, oxidants and antioxidants: trend towards the year 2000 and beyond // Molecular Biology of Free Radicals in Human Disease .-Ed.: O. Aruoma and B. Halliwell.-Lo ndon: Oica International, Saind Lucia. 1998.P.16-28.

258. Arya R., Mallik M., Lakhotia S.C. Heat shock genes-integrading cell survival and death // J. Biosci. 2007. V.32. № 3. P. 595-610

259. Baker K.J., East J.M., Lee A.G. Mechanizm of indibition of the Ca2+-ATPase by melittin // Biochemistry.l995.V.34.№l l.P.3596-3604

260. Bancs B.E.C., Shipolini A.R. Chemistry and pharmacology of honeybee venom // In venom of hymenoptera: Td.T.Pick.-London: academic press, 1986.P.329-416

261. Banerjee T., Kuypers F.A. Reactive oxygen species and phosphatidylserine externalization in murine sickle red cells // Br. J. Haematol.2004.V. 124, №3.P.391 -402.

262. Bauer V., Bauer F. Reactive oxygen species as mediators of tissue protection and injury // Gen. Physiol. Biophys.- 1999.- V.18.- P.7-14.

263. Baynes J.W. Thorpe S.R. Oxidative stress in diabetes // Antioxidants in diabetes managtment.: Ed. L Packer.- NY M Dekker Inc, 2000.P.77-92.

264. Beere H.M. «The stress of dying» the role of heat shock proteins in the regulation of apoptosis // J. Cell Sci. 2004.V.117. Pt. 13. P.2611-2651

265. Bennett V., Baines A.J. Spectrin and ankyrin-based patways: metazoan invention for integrating cell and tissues // Physiol.Rev.2001.V.81. P.1353-1390

266. Bennett, V. Spectrin-based membrane skeleton: a multipotential adaptor between plasma membrane and cytoplasm / V. Bennett// Physiol.Rev. 1990. V.70.P. 1029-1065

267. Bizzozero O. A., Reyes S., Ziegler J., Smerjas S. Lipid peroxidation scavengers prevent the carbonylation of cytoskeletal brain proteins induced by glutathione depletion // Neurochem. Res. 2007.№ 6.P 320-325

268. Blanco G., Mercer R.W. Isozymes of the Na,K-ATPase: heterogeneity in structure, diversity in function // Amer. J. Physiol. 1998. 275. № 5. P.633-650

269. Branton D. Membrane cytoskeletal interaction in the human eryhtrocytes//Cold.Spring.Harbor.Sump.Guant.Biol. 1982.V.46.P. 1-5

270. Bunn H.F. Differences in the interaction of 2,3 diphosphoglycerate with certain mammalian hemoglobins // Science. 1971. V.172 №. 3987. P.1049-1050

271. Burack W.R., Godd M.E., Biltonen R.L. Modulation of phospholipase A2: indentification of an inactive membrane-bound state.-1995.-V.34.-№45.-P.14819-14828

272. Catala A. Lipid peroxidation of membrane phospholipids generates hydroxy 1-alkenals an/or' pathological conditions // Chem. Phys. Lipids. 2009. V.157, №.1. P. 5-11.

273. Chernitsky E.A., Martynova M., Nylund A. DNA-synthezing cells in the heart of ascidia oblliqua (Tunicata) // Membr. Cell. Biol. 2001. V. 14. P. 629-634.

274. Christians E.S., Yan L.J.,Benjamin I.J. Heat shock factor 1 and heat shock proteins: critical partners in protection against acute cell injuty // Crit. Care Med. 2002. V.30. P.43-50.

275. Chrousos G.P., Gold P.W. The concerts of stress and stress system disorders // JAMA. 1992. № 267. P. 1244-1252

276. Cohen C.M. Tht molecular organization of the red cell membrane skeletion // Seminars in gematologe.l983.V.20.P.141-158

277. Cohen C.M., Langley R. Characterization of human erythrocyte spectrin and 3 chains: association with actin and erythrocyte protein 4.1// Biochemistry. 1984. V.23, №.19. P.4488-4495

278. Daleke D.L. Regulation of transbilayer plasma membrane phospholipid asymmetry // J.Lipid Research.2003.V.44.P.233-242.

279. Dallman M. F., Akana S.F., Scribner K.A., Bradbury M.F., Walker C.D., Strack A.M., Cascio C.S. Stress, feedback and facilitation in thenhypothalamo-pituitary-adrenal axis // J. Neuroendocrinology, 1992. V. 4, №5. P.517-526

280. Despopoulos A., Silbernagl S. Physiology. Thieme. 2003.450p.

281. Devaux, P.F. Lopez- Monteo I., Bryde S. Proteins involved in lipid translocarion in eukaryotic cells // Chem.Phys.Lipids.2006. V. 141 .P. 119-132

282. Dobrzynska I., Szachowicz-Petelska B., Skrzydlewska E., Figaszewski Z.A. Protective effect of green tea on electric properties of rat erythrocytes membrane during ethanol intoxication // Journal of Environmental Biology. 2006. V.27, №2. P. 161-166.

283. Dolowy K., Godlewski Z. Computation of the erythrocyte cell membrane parameters from electrj phoretical and biochemical data sternlike electrochemical model of the cell membrane // J. theor.Biol. 1982. V.84, №4. P.709-723

284. Dominguez, C. Parameters of oxidative stress in children with Type 1 diabetes mellitus and their relatives / C Dominguez, E.Ruiz, M. Gussinye, A. Carrascosa// Jounal of Diabetes and its Complications. 1998. V.17, №1. P.7-10

285. Donath E., Voigt A. Charge distribution within cell surfase coats of single and interaction surface-a minimum free electrostatic energe approach: coclusions for electrjphoretic mobility measurements // J. Jhror.Biol. 1983. V.101. P.569-584

286. Eder P., Soong C., Nao M. Phosphorylation reduces the affinity of protein 4.1 for spectrin // Biochemistry. 1986. V.25, №7. P. 1764-1770

287. Forman H. J., Fukuto J.M, Tottes M. Redox signaling: thiol chemistry defines which reactive oxygen and nitrogen species can act as second messengers // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2004. V.287, №2. P.246-256.

288. Galbo H., Hoist J.J., Christenses N.J., Hilsted J. Glucogon and plasma cateholamines during betaOreceptor blockade in exercising man // J. Appl. Phisiol.l976.V.40. P. 855-866

289. Galle J. Schneider R., Vinner B. Glyc-oxidized JJ&R impair endothelial function more potently than oxidized LDL: role of enhanced oxidative stress // Atherosclerosis. 1998. V.138, №.1. P.65-77

290. Gascard P. et al. Characterization of structural and Functional phosphoinositide domains in human erythrocyte membranes / Sauvage M., Sulpice I.C., Giraud F. // Biochemistry.-1993.-V.23.-P.5941-5948.

291. Gidalevitz T., Kikid E.A., Morimoto R.I. A cellular ptrspective on conformational disease: The role of genetic background and proteostasis networks // Curr. Open. Struct. Biol. 2010. V. 20. P. 23-32.

292. Gill R., Brazell C., Woodruff G.N., Kemp J.A. The neuroproyective action of dizocilpine (MK-801) in the rat middle cerebral artery occlusion model of focal ischemia//Br.J.Pharmacol. 1991.№103. P.2030-2036

293. Gimsa J., Ried C.Do band 3 protein conformational changes mediated shape changes of human erythrocytes// Mol.Membr.Biol.l995.V.12.P247-254.

294. Giugliano D. Dietary antioxidants for cardiovascular prevention // Nutrition, metabolism and Cardiovascular Diseases.2000. №10.P.38^44

295. Glitsch H.G. Electrophysiology of the sodium-potassium-ATPase in cardiac cells//Physiol. Rev. 2001. V.81. P.1791-1826.

296. Goodman S.R., Shiffer C. The spectrin membran skeleton if normal and abnormal human erythrocytes // Fmer.G.Physiol. 1983. V.244. P.44-121

297. Guan X.M., Amend A., Strader C.D. Determination of structural dornens for G protein coupling and ligand binding in beta 3-adrenergic receptor//Mol. Pharmacol. 1995. V.48. P.492-498

298. Gudermann T., Kalkbrenner F., Schultz G. Diversity and selectivity of receptor-G protein interaction // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1996. V.36. P.429-459.

299. Haas M., Askari A., Xie Z. Involvement of Src and epidermal growth factor receptor in the signal transducing function of Na+/K+-ATPase // J. Biol.Chem. 2000. V. 275, №36. P. 27832-27837.

300. Habermann E. Apamin // Rharmac.Ther. 1984. V.25. P.255-270.

301. Habermann E., Wadstrom T. Melittin-structure and activity // Natural toxin, Pergaton press Oxford and New York.l980.P.173-181.

302. Haest C.W.M., Kamp D., Deuticke B. Transbilayer reorientation of phospholipid probes in human rrythrocytes // Biochim.Biophys.Acts. 1997. V.1325. P.17-32

303. Haest C.W.M., Vondenhof A., Kamp D. Mechanisms of transmembrane moverment phosphatidic acid in human erythrocytes // Brit.J.Hematol. 1994. V.84, №1. P.146-152

304. Halliwell B. Reative oxygen speciec in living systems/ Source, biochemistry and role in human disease // Amer.J.Med. 1991. V.91. P. 14-22

305. Halliwell B., Reactive oxygen species and the central nervous system // Free radical in brain. Aging, neurological and mental disorders.- Ed.: L. Packer, L. Philipko, Y. Christen.- Berlin, N.Y. London: Springer- verlag, 1992.-P.21-40.

306. Hartmann J., Glaser R.The influence of chlorpromazine on the potential-inducsd shapes-change of human erythrocytes // Biosci. Rep. 1994. V.11.P.213-221

307. Hulbert A.J., Turneer N., Storlien L.H., Else P.L. Dietary fats and membrane function: implications for metabolism and disease // Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 2005. V.80, № 1. P.155-169

308. Jensen F.B. Red blood cell pH, the Bohr effect and other oxydenation-linked phenomena in blood O2 and C02 transport // Acta Physiol. Scand. 2004.V.182. P. 215-223.

309. Jones d.P. Redefining oxidative stress dean // Antioxid. Redox. Signal. 2006. № 8. P.1865-1944

310. Kaiser M.M. Adaptation to stress in physical and mental illness // International society for adaptive medicine (ISAM). VIII World Congress. Moscow. 2006. P. 136.

311. Kamal E., Habib M.D., Philip W., Gold M.D., George P., Chrousos M.D. Neuroendocrinology of stress // Endocrinology and Metabolism Clinics. 2001. V. 26, № 3. P. 814-824

312. Kasapoglu M., Ozben T. Alterations of antioxidant enzymes and oxidative stress markers in aging // Exp. Gerontol. 2001.V.36, №2.P.209-220

313. Khanna R., Chang S.H., Andrabi S., Azam M., Kim A., Rivera A., Brugnara C. Headpiece doman of dematin is reguired for the stability of rrythrocyte membrane // Biochemistry. 2002.V. 99, № 10. P.6637-6642.

314. Kiefer C.R., Snyder L.M. Oxidation and erythrocyte senescence // Current Opinion in Hematology. 2000. № 2. P. 113—116

315. Keeton K.S., Kaneko I.I. Characterization of adenosinetriphosphatase in erythrocyte membrane of the cow // Proc. Soc. Ekp. Boil, and Med. 1972.№1 .P. 140-145

316. Krapfenbauer, K. Glycoxidation and protein and DNA oxidation in patients with diabetes mellilus / K. Krapfenbauer, R. Bimbacher, Y. Vierhapper, K. Herkner, D. Kampel, G. Lubee // Clinical Science. 1998. V.43, № 3. P.332-347

317. Krivoi I. Porcine kidney extract contains factor(s) that inhibit the ouabain-sensitive isoform of Na,K-ATPase in rat skeletal muscle // Annals new York academy of sciences. 2003. V.986. P.639-641.

318. Laemmli U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. V. 227, № 259. P. 680-685

319. Laksanalamai P., Robb F.T. Small heat shock proteins from extremophiles a review // Extremophiles. 2004. V.8, №1.P. 3-11.

320. Lang F., Busch G. L., Volkl H. The diversity of volume regulatory mechanisms. Cell. Physiol. Biochem.1998. V. 8, №1-2. P. 1-45.

321. Lanneau D., Brunet M., Frisan E. Anti-cancer trerapeutic approaches based on intracellular and extracellular heat shck proteins // J. cell. Mol. Med. 2008. V. 12, №3. P. 743-761.

322. Lenormand G., Henon S., Richert A., Simeon J., Gallet F. Direct measurement of the area expansion and shear moduli of the human red ,lood cell membrane skeleton // Biophysical J. 2001. V.81, №1. P.43-56

323. Lenz A.G. Costabel U., Shaltiel S., Levine R.L. Determination of carbonyl groups in oxidatively modified proteins by reduction with tritiated sodium borohydride //Analytical Biochemistry. 1989. V.177. P.419-425

324. Lewant B., Crane J.F., Carloson S.E. Sub-chronic treatment with antipsychotic drugs does not alter phospholipid fatty acid composition in rats // Prog. Neuro-psychopharmacol Biol. Psychiatr. 2006. V.30. P.728-732.

325. Li Y. et al. Phospholipase A2 engineering. Structural and functional roles of the highly conserved active site residue aspartate 49 / Yu B., Thu H., Jain M.K., Tsai M. //Biochemistry. 1994. V.33, №49. P. 14714-14722.

326. MacDonold R.J. Temperatute and ionic effects on the interaction of erythroid spectrin with phospatidylserine membranes // Biochem. 1993. V.32, №27. P.6957-6964

327. Mantovani G., Maccio A., Madeddi C. Reactive oxygen species, antioxidant mechanisms and serum cytokine lrvels in cancer patients: impact of an antioxidant treatment// J. Cell. Mol. Med. 2002. V.6, №6. P.570-582.

328. Marikovsky Y. The cytoskeleton in ATP—depended erythrocytes6 the effects of shape transformation // Mech. Ageing and dev. 1996.V.86.P.191-197

329. Mattecci E. e t al. Erythrocyte ATPase enzymes family in normal people / Cocci F., Pellegrini L., Gregori G., Navalesi R., Giampietro O. // Eur.J.Clin.Jnvest. 1992. V.22, №4. P.ll-18

330. McMillan D.C. Favism6 effect of divicine on rat erythrocyte sulfhydryl status, hexose monophosphate shunt activity, morphology and membrane skeletal proteins // Toxicol. Sci. 2001.V.62, №2. P. 353-359.

331. Meister A., Anderson M. Glutathione // Annual Review. Biochemistry. 1983. №52. P.711-760

332. Merrill A.H., Jones D.D. An update of the enzymology and regulation of shingomyelin metabolism // Biochim. Biophys. Acta. 1990.V. 1044. P. 1-12

333. Michiels C., Remacle J. Cytotoxicity of linoleic acid peroxide, malondialdehyde and 4-hydroxynonenal towards human fibroblast // Toxicology. 2004. V. 66, № 2. P. 225-234.

334. Mombers C., de Gier J., Demel R.A., VanDeenen L.L. Spectrin-phospholipid interaction // Biochim. biophys. acta. 1980. V.603. P.52-62

335. Morrison M., Mikozak A., Gomutkilwicz J. The effect of ATP on the mobility of lipids in bovine erythrocytes membrane // Biochem. 1990. V.1092, №3. P.361-364.

336. Mosior M., Mikotazak A., Gomutkiewicz J. The effekt of ATP on the order and the mobility of lipids in bovine erythrocyte membrane // Biochim. et biophys. acta biomembranes. 1990. V.1022, №3. P.361-364

337. Mosley P. Stress proteins and immune tesponse // Immunopharmacology. 2000. V.48, №3. P.299-302.

338. Nagababu E., Chrest F.J., Rifkind J.M. Hydrogen-peroxide-induced heme degradation in red blood cell: the protective roles of catalase and glutathione peroxidase // Biochim. Biophys. Acta 2003 .V. 1620, №1-3. P. 211217.

339. Nakao M. New insights into regulation of erythrocyte shape// Current Opinion Hematology. 2002.V.9.P. 127-132

340. Nelson W.J., Veshnock P.J. Ankirin binding to (Na-K)ATPase and implications for the organisation of membrane domain in polorized cells // Nature: 1987. V.328, № 6130. P.533-535

341. Nihei Y., Asai H., Ukai T., Marimoto H., Nakajima Y., Hanajiri T., Maekawa T. Detection of surface immunoreactions on individual cells by electrophoretic mobility measurement in a micro-channel // Sensors and actuators B. 2008. № 131.P.285-289

342. Ohvo-Rekila H., Ramstedt B., Leppimaki P., Slot-te J.P. Cholesterol interactions with phospholipids in membranes // Prog. Lipid Res. 2002. V. 41, № l.P. 457-468.

343. Panin L.E., Morrushnicjv D. V., Kunitsyn V.G., Zaitsev B. M. Intrraction mechanism of Cortisol and catecholamines structural components of erythrocyte membrane // Phys. Chem. 2010.V.114.P.9462-9471

344. Pereira A. N., Eduardo P.C., Matson L.M., Marques M.M. Effect of low-power laser irradiation on cell growth and procollagen synthesis of cultured fibroblasts // Journal of Clinical Laser Medicine and Surgery. 2003, №6. P. 351-355

345. Petelska A.D., Figaszewski Z.A. Effect of pH on the interfacialtension of bilayer lipid membrane formed from phosphotidylcholine or phosphatidylserine // Biochem., Biophys. Acta, 2002. V. 1561. № 131-146.

346. Pierre S.V., Xie Z. The Na, K-ANPase receptor complex: its organization and membership // Cell Biochem. Biophys. 2006. V. 46, № 3. P. 303-316

347. Piagnerelli M., Boudjeltia K., Brohel D. Assessment of erythrocyte shape by flow cytometry techniques // J. Clin. Pathol. 2007. V.60, №5. P.549-554.

348. Pleskova S.N., Zaslavzkaia M.I., Guschina Yu.Yu., Koksharov I.A., Erastova Yu. G. Morfolgical investigation of human blood neutrophil phagocytosys in vitro by AFM . Phys. Low-Dim. Struct. 2001. № 3/4. P. 249260

349. Pradhan D. Willimson P., Schlegel R.A. Bilayer/cytoskeleton-interaction in lipid-symmetric erythrocytes assessed by a photoactivable phospholipid analoque // Biochemistryio 1991.V.30. P.7754-7758

350. Rajkumar V., Ragatzki P., Sima A., Levy J. Enhanced platelet aggregation high homocysteine level and microvascular disease in diabetic // Endocrine. 1999. V.10, № 1. P. 1-6.

351. Rekka E., Kourounakis L., Kourounakis P. Antioxidant activity of and interleukin production affected by honey bee venom // Arzneimittelforschung. 1990. V. 40. №8. P.912-915.

352. Rodgers W., Glaser M. Distributions of proteins and lipids in the erythrocyte membrane // Biochem.-1993.-V.32.-№47.-P. 12591-12598.

353. Rong Q. et al. Li NMR Relaxation study of Li+ binding in human erythrocytes / Espanol M., de Freitas D.M., Geraldes F. // Biochemistry.-1993.-V.32.-№49.-P. 13490-13498.

354. Rosemary L. Experimental neuronal protection in cerebral ischemia // J.Clin. Neuroscience. 1997.V.5, № 3. P.31-36

355. Salhany J.M., Cordes K.A., Schopfer L.M. Kinetics of conformational changes associated with inhibitor binding to the purified band 3 transporter. Direct observation of allosteric subunit interactions // Biochem. 1993. V.32, №29. P.7413-7420

356. Schafer F.Q., Buettner G.R. Redox environment of the cell as viewed yhrough the redox state of the glutathione disulfide glutathione couple // Free Rad. Biol. Med. 2001.V.30.P.1191-1199.

357. Schleger R.A., Williamson P. Phosphatidylserine, death knell // Cell Death Differentiation. 2001.V.8.P.551-563

358. Schmitz G., Williamson E. High-density lipoprotein metabolism, reverse cholesterol transport and membrane protection // Curr. Opin. Lipidol. 1991. V.3. P.177-189

359. Schoner W. Endogenous cardiotonic steroids // Cell Mol. Biol. 2001. V. 47, № 2. P. 273-280.

360. Schroit A.J., Zwaal R.F.A. Transbilayer movement of phospholipids in red cell and platelet membranes // Biochim.Biophys. Acts. 1991. V. 107 l.P.313-329.

361. Schwartz R et al. Protein 4.1 in sickle erythrocytes/ Rybicki A., Heath R., LubinB. //J.Biol.Chem.1987. V.262. P.15666-15672

362. Schwarz S, Deuticke B., Haest C.W. Passive transmembrane redistribution of phospholipids as determination of erythrocyte shape change studied of electroporated cell // Mol. Membr. Biol. 1999. V.16. P.247-255

363. Seaman G.V.F. et al. Surfase alterations of erythrocytes with cell age/ Walter H., Krob E.J., Tambiyn C.H. // Bioch. and bioph. reserch communications. 1983. V.97.P. 107-113

364. Sedlak J., Lindsey R. Estimation of total protein bound, nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent // Analytical Biochemistry. 1968. №2. P. 192-205

365. Seigneuret M., Devaux P.F. ATP-dependent asymmetric distribution of spin -labeled phospholipids in the erythrocyte membrane6 relation to shape changes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. V.81. P. 3751-3755.

366. Semenza G.L. Regulation of oxygen homeostasis by hypoxia-inducible factor 1 // Physiology. 2009. № 24. P.97-106

367. Shacter E Differential susceptibility of plasms to oxidative modification: examination by western blot immunoassay / E. Shacter, J.A. Williams, M. Lim, R.L.Levine // Free Radic.Biol. Med. 1994. V.17, №5. P.429-437.

368. Shacter E. Quantification and significance of protein oxidation in biological samples // Drug metabolism reviews. 2000. V. 32, № 3 4. P.307-326.

369. Shah J.R., Laredo J., Hamilton B.P., Hamlyn J.M. Effects of angiotensin II on sodium potassium pumps, endogenous ouabain and aldosterone in bovine zona glomerulosa cells // Hypertension. 1999. V. 33, №1/2. P.373-377

370. Sheetz M.P. Febbroriella P., Koppel D.E. Triphosphoinosite increases glycoprotein lateral mobility in erythrocyte membranes // Nature. 1982. V.296. P.91-93

371. Sheng H., Bart R.D., Oury T.D. Mice overexpressing extracellular superoxide dismutase have increased resistace to focal cerebral ischemia Pearlstein R.D.// Neuroscience. 1999. V.88, №. 1. P. 185-191

372. Sherman W. Membrane structure and function of malaria parasites and the infected erythrocytes // Parasitology. 1985. V.91. P. 609-645.

373. Simkowski K., Tao M. Studies on a soluble human erythrocyte proyein kinase // J. Biol. Chem. 1980. V.255, № 13. P.6456-6461.

374. Sreedhar A.S., Kalmar E., Csermely P. Hsp 90 isoforms6 functions expression and clinical importance // FEBS. Lett. 2004. V. 562. № 1-3. P. 11-17

375. Stocker R., Frei B. Endogenous antioxidant defences in human blood plasma. In: Sies h. Oxidative stress: oxidants and antioxidants. London: Academic Press.l991.P.213-243.

376. Stoltz J.F., Donner M. Red blood cell aggregation: measurements and clinical application // Jurk. j of med. sciences. 1991. V. 15, №1. P.26-32.

377. Sum D.D., Guo X.E., Likhitpanichkul M., Lai W.M., Mow V.C. The influence of the fixed negative charges on mechanical and electrical behaviors of articular cartilage under unconfmed compression // Biochemistry.2004. V.43. №2. P310-314

378. Sunanda, Shankaranarayana Rao B.S., Raju T.R. Restraint stress-induced alterations in the levels of biogenic amines, amino acids and AchE activity in the hippocampus // Neurochem. Res. 2000. V. 12. P. 1547-1552.

379. Susan M., Castracane V., Mantzoros S. Energy humeostasis, obesity and eating disorders: recent advances in endocrinology // J.Nutr. 2004. 134. P. 290-298.

380. Takakuwa, T. Regulation of cell membrane protein interaction: implication for red cell function // Curr. Opion in Hematology. 2001. V.8. P.80-84

381. Tikhonova N.S., Moskaliova O.S., Margulis B.A., Guzhova I.V. Molecular chaperone Hsp 70 and neuronal stress // Brain Res. 2001. V.914. P.66-77.

382. Therien A. G., Blostein R. Mechanisms of sodium pump regulation // Am J. Rhysiol.Cell Physiol. 2000. V.279. P. 18694-18702

383. Tsantes A.E. et al. Red cell macrocytosis in hypoxemic patients with chronic obstructive pulmonary disease / Papadhimitriou S.I.,Tassiopoulos S.T., Bonovas S., Paterakis G., Meletis I., Loukopoulos D. // Respir.Med. 2004. V.98, №11. P. 1117-1123.

384. Tuma D.J., Thiele G.M., Xu D. Acetaldehyde and malondialdehyde react together to generate distinct proteib adducts in the liver during long-term ethanol administration // Hepatology. 1996. V.23, 4. P.872-880.

385. Vicant E. L' Agrégation erythrocytaire // STV: Sang, thrombose, vaissaux. 1994. №6. P. 181-189.

386. Vick J.A.et al. Beta-adrenerjic and antiarythmtc effects of a compound of bee venom / Shipman W.H., Brooks R.B., Hasset C.C. // Amer.bee.J. 1972. 112. P.288

387. Vickers T., Young I.S., McEneny J. Lipoprotein oxidation and atherosclerosis // Biochem. Soc.Trans. 2001. V.29, №2. P.358-362

388. Waczulikova I., Sikurova L., Carsky J. et al. Decreased fluidity of isolated erythrocyte membranes in type 1 and type 2 diabetes. The effect of resorcylidene aminoguanidine // Gen Physiol Biophys. 2000. V. 19, № 4. P. 381—392.

389. Wahid S.T., Marshall S.M., Thomas T.H. Increased platelet and erythrocyte external cell membrane phosphatidylserine in type 1 diabetes and microalbuminuria // Diabetes Care. 2001. V. 24. № 11. P. 2001—2003

390. Wallis C.J., Babitch J.A., Wenegiemc E.F. Divalent cation binding to erythrocyte spectrin // Biochemistry. 1993. V.32, №19. P.5045-5050

391. Walsh K., Graeme A. Alcoholic liver disease // Postgrad. Med. J. 2000. V. 76. P. 280-286

392. Walter H., Krob E.J. Fixation with even small guantities of glutaraldehyde effects red bloods cell surface properties in a cell // Bioscience reports. 1989. V.9.P.727-735.

393. Watson B.D., Dietrich W. D., Busto R. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis // Ann. Neurol. 1985.V.17. P.497-504

394. Wilson M.J., Richter-Lowney K., Daleke D.L. Hyperglycemia induces a loss of phospholipid asymmetry in human erythrocytes // Biochemistry. 1993. V.32, №42. P. 11302-11310.

395. Wojcicki W.E., Beth A.H. Structural and binding properties of the stilbenedisulfonate sites on erythrocyte bands 3: an electron paramagneticresonance study using spin-labeled stilbenedisulfonates // Biochem. 1993. V.32, №36. P. 9454-9464

396. Woon L.A., Holland J.W., Kable E.P., RoufogalisB.D. Ca2+ sensitivity of phospholipid scrambling in human red cell ghosts // Cell Calcium. 1999. V.5, №4. P.313-320.

397. Wong P. The behavior of the human erythrocyte as an imperfect osmometer A hypothesis // J. Theor.Biol. 2006. V. 238. P. 167-171.

398. Wong, P. A basis of echinocytosis and stomatocytosis in the discsphere transformation of the erythrocytes // J. Theor. Biol. 1999. V. 196. P. 343-361.

399. Xie L., Sun D., Yao W., Wen Z. Microrheological characteristics of reticulocyte in vivo // Science in China. 2002. V.45, №1. P.50-57

400. Young E.A., Akana S., Dallman M.F. Desreased sensitivity to glucocorticoid fast feedback in chronically stressed rats // J.neuroendocrinology, 1990. V.51, №6. P.536-541

401. Zitnanova T., Sumegova K., Simko M. Protein carbonyls as a biomarker of hypoxic stress // Clin. Biochem. 2007. V.40, №8. P.567-570.

402. Zwaal R.F.A., Comfurius P., Bevers E.V. Surface exposure of phosphatidylserine in pathological cell // Cell. Mol. Life. Sci. 2005. V.62. P.971-988.