Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при действии стресс-факторов и коррекции состояния организма биологически активными веществами

Захарова, Ольга Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при действии стресс-факторов и коррекции состояния организма биологически активными веществами
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при действии стресс-факторов и коррекции состояния организма биологически активными веществами"

На правах рукописи

Захарова Ольга Анатольевна

Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при действии стресс-факторов и коррекции состояния организма биологически активными веществами

03.03.01 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Нижний Новгород 2012

1 0 ['<:-.....

005042822

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского»

Научный руководитель:

заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Крылов Василий Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, доцент Романова Елена Борисовна

доктор медицинских наук, профессор Перетягин Сергей Петрович

Ведущая организация: государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная

медицинская академия»

(О-о

Защита состоится «¿К аМ&п г. в часов на заседании диссертационного совета Д 212.166.15 Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского по адресу: 603950, Нижний Новгород, пр. Гагарина, д. 23, корп. 1, биологический факультет. Факс: (831) 465-82-92

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского.

Автореферат разослан «. » .2012 г., размещен на сайте ВАК РФ

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент C.B. Копылова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Среди актуальных проблем современной физиологии и медицины возрастающее внимание уделяется проблеме стресса. Такой интерес обусловлен все возрастающими антропогенными факторами, которые, так или иначе, воздействуют на организм человека и животных, провоцируя развитие стресса. В зависимости от силы и длительности стрессового фактора организм либо приспосабливается к новым условиям, либо погибает. На начальных этапах стресса происходит активация приспособительных процессов, а при дальнейшем прогрессировании альтерационного процесса возможно истощение адаптационных резервов. При этом чрезмерная по интенсивности и длительности стресс-реакция из звена адаптации превращается в звено патогенеза. В то же время адекватная реакция организма способствует стабилизации состояния и предупреждает нарастание недостаточности функций. В связи с этим крайне важной представляется оптимизация адаптационного процесса при действии стресс-факторов.

Показано, что применение веществ-адаптогенов способствует тренировке механизмов адаптации (Раппо$1ап, \Vikim, 2006). Кроме того, адаптогены оказывают антигипоксическое и цитопротективное действие (Арбузов и др., 2006; 8ап<1Ьег§, ОепсЬег, 1994). Адаптогенным действием могут обладать различные природные соединения. Широкое применение в медицине на сегодняшний день получили продукты пчеловодства (Крылов и др., 2007; Сулим, 2009), в частности маточное молочко, которое способствует повышению резистентности организма и обладает выраженной антиоксидантной активностью (Крылов, Сокольский, 2000; Вахонина и др., 2004). В терапевтических целях применяются препараты антигипоксического действия, такие как убихинон-10 (Крылов, Лукьянова, 2002), который обладает выраженным кардио- и радиозащитными свойствами (Корягин, Крылова, 2002) и янтарная кислота, обладающая антиоксидантными свойствами (Лукьянова, 2004). При лечении хронической цереброваскулярной недостаточности используются препараты кавинтон, цитофлавин, дельтаран, геримакс, обладающие нейропротективным и вазоактивным действиями (Остроумова, Ватутина, 2003).

Однако природные вещества-адаптогены в практике предупреждения и лечения заболеваний, связанных с действием стресс-факторов, на сегодняшний день не находят широкого применения для коррекции нарушенных функций. Это, видимо, связано с их относительно «мягким» и неочевидным действием и отсутствием экспериментального обоснования воздействовать на адаптационный процесс при действии стресс-факторов.

Среди методов, позволяющих привести такие доказательства, сегодня привлекает внимание измерение электрофоретической подвижности эритроцитов (ЭФПЭ) крови организма в условиях действия стресс-факторов и экспериментальной терапии веществами-адаптогенами. Электрофоретическая

подвижность эритроцитов (ЭФПЭ) является одним из жизненно важных параметров гомеостаза человека (Рязанцева, Новицкий, 2004). Регистрация перемещения клеток крови в электрическом поле позволяет оценить не только их электрокинетический потенциал и, следовательно, морфофункциональное состояние мембраны, но и состояние гомеостаза организма в целом (Крылов, Густов, Дерюгина, 1998). Анализ литературных данных свидетельствует об однообразной реакции электрокинетического потенциала эритроцитов, их электрофоретической подвижности (ЭФПЭ) - снижении при самых разных заболеваниях: у пациентов, страдающих гепатитом, при инфекционных и опухолевых процессах, у больных хронической и подростковой гипопластической анемией, при физических нагрузках и психическом напряжении (Гильмутдинов, 1994; Матюшичев, Шамратова, Гуцаева, 1995; Матюшичев и др., 1996, 1997). На этом основании развивается положение о том, что изменение электрокинетического потенциала эритроцитов при различных экстремальных воздействиях является отражением общей неспецифической реакции организма и связан с развитием стресс-реакции и вовлечением стресс-реализующих систем на действие раздражителей (Крылов, Дерюгина, 1998, 2005). Данное положение доказано авторами в опытах на животных: изменение ЭФПЭ у крыс при стрессовых воздействиях носит однотипный двухфазный характер - первоначальное снижение с последующим повышением и восстановлением по мере отмены стресса (Крылов и др., 1998). При этом понижение ЭФПЭ авторы связывают с активацией симпато-адреналовой системы, а повышение с активацией гипофизарно-надпочечниковой системы. В связи с тем, что в основе многих патологических процессов и чрезвычайных раздражителей лежит развитие стресса разной выраженности (Гаркави и др., 1977), можно предположить, что изменение ЭФПЭ является ранним критерием стресс - реакции. Поэтому измерение и анализ ЭФПЭ могут служить убедительным маркером идущего в организме патологического процесса. Учитывая, что ЭФПЭ позволяет исследовать развитие не только стресс-реакции в организме, но и патологического процесса, отражая состояние гомеостаза организма в целом, можно полагать, что исследование электрокинетических свойств эритроцитов может быть эффективным критерием выраженности адаптационных реакций организма при проведении терапии (Крылов, Дерюгина, 2000). Таким образом, измерение ЭФПЭ может быть использовано для анализа степени вовлечения адаптационных резервов организма при проведении терапевтических мероприятий веществами-адапогенами. Вышеизложенное послужило обоснованием цели исследования.

Цель работы: изучение электрофоретической подвижности эритроцитов (ЭФПЭ) крови человека и животных в норме, при альтерации и коррекции нарушенных функций организма веществами-адаптогенами.

Для достижения данной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Исследовать действие убихинона-10 и янтарной кислоты на ЭФПЭ крови крыс при моделировании адреналиновой токсемии и гипобарической гипоксии.

2. Исследовать действие пирадетама, кавинтона, цитофлавина и дельтарана на ЭФПЭ крови крыс на моделях локальной и тотальной ишемии головного мозга.

3. Исследовать изменения ЭФПЭ крови больных дисциркуляторной энцефалопатией (ДЭ) разной степени тяжести в ходе терапевтических мероприятий.

Научная новизна

В работе впервые проведено исследование ЭФПЭ крови человека и животных при проведении терапевтических и профилактических мероприятий природными веществами-адаптогенами в условиях нарушенных функций. Установлено, что предварительное введение убихинона-10, маточного молочка и янтарной кислоты препятствует снижению ЭФПЭ при гипоксических состояниях организма, вызванных адреналиновой токсемией и гипобарической гипоксией. Показано восстановление ЭФПЭ в ходе проведения стресс-модулирующей терапии при развитии ишемических повреждений головного мозга крыс. Выявлена однотипность изменения ЭФПЭ крови больных ДЭ и крови крыс при применении стресс-модулирующей терапии. Показана зависимость ЭФПЭ крови больных от тяжести заболевания и выбора препаратов-адаптогенов.

Теоретическая и практическая значимость работы

Работа выполнена в соответствии с плановыми НИР кафедры. Часть работы выполнена в рамках реализации программы ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы ( «Исследование типовых изменений мембран клеток крови при нарушении функций организма разного патогенеза", Государственный контракт № П604).

Полученные результаты позволили установить закономерности изменения ЭФПЭ при формировании целостной реакции организма в ответ на стресс различного генеза и при профилактике и терапии альтераций веществами-адаптогенами. Анализ изменений ЭФП эритроцитов позволил обосновать эффективность применения эффективных и безопасных адаптогенов в профилактике и терапии гипоксии, при нарушениях мозгового кровообращения, и включения в реабилитационный комплекс при лечении больных дисциркуляторной энцефалопатией. Выявленная направленность изменений ЭФПЭ при идущем в организме патологическом процессе и фармакологическом воздействии позволяет рекомендовать методику измерения электрофоретической подвижности эритроцитов при исследовании крови с целью ранней диагностики развития патологии и проводимой терапии.

Положения, выносимые на защиту:

1. Моделирование гипобарической гипоксии и адреналиновой токсемии вызывает однофазное изменение ЭФПЭ крови крыс: снижение с последующим восстановлением.

2. Предварительное введение маточного молочка, убихинона-10 и янтарной кислоты препятствуют снижению ЭФПЭ при гипобарической гипоксии и адреналиновой токсемии.

3. Моделирование тотальной и локальной ишемии головного мозга вызывает двухфазное изменение ЭФПЭ: первоначальное снижение (1 фаза) с последующим повышением (2 фаза).

4. Изменение ЭФПЭ крови больных дисциркуляторной энцефалопатией (ДЭ) зависит от тяжести заболевания. Направленность изменения ЭФПЭ в ходе терапии сочетается с развитием общих адаптационных процессов в организме.

Апробация работы

Апробация работы проведена на расширенном заседании кафедры физиологии и биохимии человека и животных ННГУ им. Н.И. Лобачевского. Основные положения доложены на XV, XVI Международных конференциях студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов- 2008, 2009» (Москва, 2008, 2009); 13- й и 14- й Нижегородской сессии молодых ученых (Нижний Новгород, 2008, 2009); Всероссийской научно- практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» (Башкирия, 2010); XTV-ая Пущинская Международная школа-конференция молодых ученых. (Пущино, 2010); XXI съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Калуга 2010); Международной конференции Пчеловодство XXI в. «Пчеловодство, апитерапия и качество жизни» (Москва, 2010); III Всероссийский с международным участием конгресс студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз-Россия 2010», (Нижний Новгород, 2010).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 14 работ, из них 2 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены на/^етраницах машинописного текста, иллюстрированы таблицами и /О рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, глав результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, содержащего источников, из которых

на русском и x^j/на иностранных языках.

Личный вклад соискателя

В исследованиях, которые положены в основу диссертационной работы, соискатель планировал и принимал участие в проведении экспериментальных исследований, в оценке результатов и формулировке выводов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследование проведено на белых нелинейных крысах массой 200 - 220 г. Содержание животных соответствовало правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) (Бургасов, 1973). Всего было использовано 265 животных. В исследованиях на животных было проведено 3 серии экспериментов.

В 1- й серии моделировали адреналиновую токсемию (Андреев, 1973). Моделирование осуществляли путем внутримышечного введения по 0,5 мл 0,1 % раствора адреналина- гидрохлорида. Предварительно животным в течение 7 дней вводили внутрижелудочно при помощи зонда препарат янтарной кислоты (0,5 г/кг) - 1 группа; убихинон-10 (10 мг/кг), растворенный в растительном масле - 2 группа; янтарная кислота+ убихинон-10 - 3 группа; 4 группа -контроль (скармливали растворитель - растительное масло 0,5 мл); интактные животные- 5 группа.

Во 2- й серии моделировали острую гипобарическую гипоксию. Моделирование осуществляли в вакуумной проточной барокамере при внешней температуре 20-22 °С (Петров, 1959). Крыс помещали в условия, соответствующие «подъему» на высоту 11000 м в течение 5 мин (Методические рекомендации, 1991). При этом исследовали действие убихинона-10 и маточного молочка при профилактическом применении, в течение 10 дней до гипоксического воздействия. Скармливали 100 мг/кг маточного молочка -lrpynna; 2 группа - скармливали убихинон (15 мг/кг), растворенный в растительном масле; 3 группа - скармливали маточное молочко (100 мг/кг) и убихинон (15 мг/кг); 4 группа - контроль (крысы получали растворитель -растительное масло 0,5 мл); 5 группа - интактные животные.

Кровь для анализа в экспериментах 1 и 2 серий брали из подъязычной вены через 15 мин, 1сутки и 1неделю после исследуемых видов воздействия.

В 3 серии у крыс моделировали локальную и тотальную ишемию головного мозга. Тотальную ишемию головного мозга моделировали путем одномоментной двусторонней окклюзии обеих сонных артерий (Rosemary, 1997). Локальную ишемию головного мозга вызывали путем клипирования средней мозговой артерии (Gill et al., 1991). Работу проводили под наркозом (нембутал, внутрибрюшинное введение 35 мг/кг). После операции рану обрабатывали пенициллином, кожу ушивали, шов обрабатывали 2% раствором йода. Через 10 дней после создания искусственной ишемии головного мозга животным вводили внутрибрюшинно пирацетам - 200 мг/кг и кавинтон - 0,7 мг/кг (1 группа), пирацетам, кавинтон и цитофлавин в дозе 1,6 мг/кг (2 группа), интраназально вводили препарат дельтаран в дозе 150 мкг/кг и внутрибрюшинно препараты пирацетам и кавинтон (3 группа). Животным контрольной группы терапевтических мероприятий не производили (4 группа); интактные животные (5 группа). Забор крови осуществлялся из подъязычной вены через 10 и 60 суток после моделирования гипоксии.

В клинических исследованиях на базе Нижегородской областной клинической больницы им. H.A. Семашко (лечащий врач, д.м.н. Е.А.

Антипенко) был проведен анализ крови 60 больных 35-55 лет, с диагнозом дисциркуляторная энцефалопатия (ДЭ) разной степени тяжести (1, 2, 3 стадии заболевания). Больные были разделены на 4 группы. Все пациенты в течение 10 дней получали базовую терапию (пирацетам и кавинтон) - 1-я группа; 2-я группа получала дополнительно цитофлавин; 3-я группа - дельтаран (интраназально); Геримакс-энерджи - 4-я группа (по 1 таб./ сутки в течение 20 дней). Кровь забирали из локтевой вены натощак, до и после проведенного курса лечения. В качестве контрольной группы исследовалась кровь 15 доноров.

Методы исследования включали измерение электрофоретической подвижности эритроцитов (ЭФПЭ) методом микроэлектрофореза (Харамоненко, Ракитянская, 1974). Принцип метода заключался в том, что в специально сконструированных планшетах измеряли под микроскопом скорость перемещения клетки в электрическом поле. Установка для определения ЭФПЭ состояла из горизонтальной микрокамеры, микроскопа, источника постоянного тока. Использовали электроды системы Ag/AgCI. Для измерения подвижности 0,1% суспензию эритроцитов помещали в трис-НС1 буфер (рН 7,4) и фиксировали перемещение клеток при силе тока 8 мА. В каждом опыте фиксировали время перемещения 6 клеток в двух направлениях, при этом знак заряда изменялся на электродах полярным переключателем. Величину электрофоретической подвижности эритроцитов определяли по формуле: U=S/TH, где S - расстояние, на которое перемещается эритроцит; Т -время перемещения эритроцита на расстояние S; H - градиент потенциала. Величина градиента потенциала определяется по формуле: H=Y/gX, где Y -сила тока; g - поперечное сечение микрокамеры; X - удельная электропроводность среды. Концентрацию МДА определяли фотометрическим методом (Владимиров, Арчаков, 1972). Определение лейкоцитов в окрашенных по Романовскому - Гимзе мазках крови (Меньшиков и др., 1987) с учетом рекомендаций Гаркави (1998).

Полученные данные были обработаны с помощью пакетов прикладных программ BIOSTAT и Microsoft Excel. Значимость различий средних между группами определяли параметрическим методом по t - критерию Стьюдента с учетом поправки Бонферрони. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05 (Гланц, 1999).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование ЭФПЭ крыс при моделировании альтераций функций организма животных.

Результаты проведенных исследований показали, что моделирование гипобарической гипоксии и адреналиновой токсемии у животных вызывало однотипное изменение динамики ЭФПЭ: снижение с последующим восстановлением данного показателя (рис.1). Снижение ЭФПЭ

регистрировалось через 1-15 мин после моделирования альтерации и продолжалось 1-2 суток, с последующим восстановлением ЭФПЭ к 1-й неделе исследования (рис.1).

3 гипобарическая гипоксия

□ адреналиновая токсемия

цеиствия

Рис. 1 Изменение ЭФПЭ (%) крови крыс при альтерирующих воздействиях. Примечание-. 1-15 минут;2- 1сутки;3-1 неделя

*- статистически значимые различия по отношению к интактной группе животных (р<0,05), принятой за 100%.

Таким образом, была установлена типовая однофазная реакция эритроцитов на оба стрессорные воздействия, проявляющаяся в изменении их ЭФП: уменьшение ЭФПЭ с последующим восстановлением. Вместе с тем, указанная реакция отличалась по интенсивности в зависимости от модели -более выраженное снижение ЭФПЭ регистрировалось при моделировании адреналиновой токсемии.

При анализе изменения интенсивности ПОЛ при исследованных альтерирующих воздействиях было установлено, что при и том и другом стрессовом воздействии в организме, в фазу снижения ЭФПЭ, наблюдается рост концентрации МДА, с последующим восстановлением по мере восстановления скорости ЭФПЭ. Однако и здесь скорость, и интенсивность нарастания уровня МДА зависели от вида модели альтерации. Так, при моделировании адреналиновой токсемии уже на 1-15 минуте регистрировали максимальный прирост МДА, тогда как при гипобарической гипоксии он максимально возрастал только через сутки после воздействия (рис.2).

250 т-%

200 150

ЮО 50 О

12 3

время воздействия

Рис. 2 Изменение концентрации МДА в эритроцитах (%) крови крыс при альтерирующих воздействиях.

Примечание: 1-15 минут; 2- 1сутки; 3-1 неделя

*- статистически значимые различия по отношению к интактной группе животных (р<0,05), принятой за 100%.

Анализ полученных результатов свидетельствует, что изменение ЭФПЭ связано с процессами ПОЛ эритроцитов и может отражать стереотипную реакцию клеток на стресс (Крылов, Дерюгина, 2005). Результаты свидетельствуют, что снижение ЭФПЭ сочетается с активацией процессов ПОЛ при действии стресс-факторов, тогда как восстановление значений ЭФПЭ сопровождается уменьшением концентрации МДА. Вместе с тем, выявленные типовые изменения ЭФПЭ и МДА имеют свою специфичность, зависящую от выбранной модели альтерации. Полученные результаты позволяют полагать, что адреналиновая токсемия вызывает более выраженную стресс-реакцию организма.

Ранее было показано (Крылов, Дерюгина 1998, 2005), что динамика изменения ЭФПЭ при действии различных стресс - факторов сопряжена с последовательной активацией стресс-реализующих систем организма: снижение ЭФПЭ обусловлено активацией симпато - адреналовой системы, тогда как повышение - гипофизарно-надпочечниковой. В отличие от этих исследований, в наших условиях установлено, что типичность изменения ЭФПЭ при моделировании гипобарической гипоксии и адреналиновой токсемии включает только первую фазу (снижение ЭФПЭ) без проявления второй фазы (повышение ЭФПЭ). Видимо, это связано с более существенной активацией только первого звена стресс-реализующей системы (симпато -адреналовой), с соответствующим увеличением уровня циркулирующих катехоламинов в крови и (или) повышением чувствительности к ним адренорецепторов клеток. Из этого можно объяснить и более значимое изменение изученных параметров именно при адреналиновой токсемии -

Э гипобарическая гипоксия

□ адреналиновая токсемия

эндогенные катехоламины могли потенцировать эффект экзогенного адреналина.

Исследование ЭФПЭ крыс при альтерирующих воздействиях и профилактическом действии адаптогенов.

Эксперименты, связанные с профилактическим использованием янтарной кислоты и убихинона-10 при моделировании адреналиновой токсемии и маточного молочка и убихиона-10 при гипобарической гипоксии выявили отсутствие уменьшения ЭФПЭ, характерного для обоих видов при альтерации (контроль). При моделировании адреналиновой токсемии было установлено, что предварительное введение убихинона-10, так же как и янтарной кислоты и их смеси препятствовало снижению ЭФПЭ (рис.3). При этом наиболее значимо влияло на восстановление ЭФПЭ до значений интактных животных применение смеси препаратов. Так, через 7 суток исследования ЭФПЭ крови крыс после курсового введения смеси веществ не отличалась от уровня интактных животных (рис. 3).

120

ЮО

Рис. 3 Изменение ЭФПЭ (%) крови крыс при моделировании адреналиновой токсемии и профилактическом действии убихинона- 10 и янтарной кислоты.

Примечание: 1-15 минут; 2- 1сутки; 3-1 неделя.

* - статистически значимые различия по отношению к интактной группе животных (р<0,05), принятой за 100%; "- статистически значимые различия по отношению к контрольной группе животных (р<0,05).

Таким образом, исходя из полученных результатов, можно говорить об эффективности применения исследуемых адаптогенов в качестве профилактики

Я убихинон-10

□ янтарная

гипоксии, вызванной введением стресс-фактора - адреналина. При этом наиболее эффективным оказалось применение смеси убихинона-10 с янтарной кислотой. Исходя из концепции последовательных нарушений митохондриальных ферментов в условиях кислородной недостаточности и развития энергодефицита в клетке, можно заключить, что совместное применение убихинона-10 - корректора цитохромного участка и янтарной кислоты - корректора субстратного участка дыхательной цепи, позволяет более эффективно предотвратить возникающую гипоксию организма с соответствующим ответом изменения ЭФПЭ.

Таблица 1.

Изменение ЭФПЭ (мкм см Впс-1) крови крыс при моделировании гипобарической гипоксии и профилактическом действии убихинона-10 и маточного молочка.

Группы Время воздействия

15 минут 1 сутки 1 неделя

Интактные животные 1.27+0.03" 1.27±0.02" 1.23 ±0.02

Контроль 1,11+0,02* 1,15±0,02* 1.29+0.03*"

Убихинон-10 1.22+0.03" 1.20±0.03* 1.29±0.03*"

Маточное молочко 1.18+0.02*" 1.15±0.03* 1.28±0.02

Убихинон-10+ Маточное молочко 1.34+0.03" 1.30±0.02" 1.36±0.03*"

Примечание: *- статистически значимые различия по отношению к интактной группе животных (р<0,05); "- статистически значимые различия по отношению к контрольной группе животных (р<0,05).

Аналогичные результаты были получены на другой модели альтерации -гипобарической гипоксии. В результате проведенных экспериментов по профилактике гипоксии убихиноном-10 и маточным молочком было установлено, что предварительное введение исследуемых препаратов также препятствовало снижению ЭФПЭ крови крыс во всех опытных группах (табл.1). Вместе с тем, было показано, что совместное применение маточного молочка и убихинона-10 не только препятствовало снижению ЭФПЭ, но и приводило к ее повышению по сравнению с группой интактных животных (табл.1). На 15 минуте и на 7-е сутки исследования смесь препаратов наибольшим образом увеличивала ЭФПЭ крови животных относительно контроля, что может свидетельствовать о развитии адаптационных процессов в организме, обеспечивающих приспособление его функционального состояния в условиях стрессового воздействия.

Вероятно, усиление метаболических процессов, благодаря совместному действию маточного молочка, которое улучшает трофику тканей, способствует активизации ферментативного обмена, улучшению тканевого дыхания (Крылов и др., 2007) и убихинона-10, обладающего выраженными антиоксидантными свойствами, (Лукьянова, 2000), способствует повышению адаптационных резервов организма.

Полученные результаты позволяют заключить, что исследуемые вещества-адаптогены препятствуют снижению и (или) приводят к повышению ЭФПЭ, что свидетельствует об активации компенсаторных механизмов регуляции функций организма, приводящих к уменьшению деструктивных изменений эритроцитарных мембран, развивающихся при альтерирующих воздействиях.

Исследование ЭФПЭ крыс при моделировании тотальной и локальной ишемии головного мозга и введении фармакологических средств.

Физиологические механизмы гипоксии и адаптации в полной мере развиваются при ишемическом повреждении мозга, поэтому целесообразно было исследовать изменения ЭФПЭ с целью характеристики стресс-реакции организма в этих условиях. Необходимо учитывать, что как локальная, так и тотальная ишемия являются хроническим стрессом, при котором неспецифическая активация симпато-адреналовой системы, вызывающая снижение ЭФПЭ (Козинец, 2008), может сглаживаться развитием адаптационных процессов на уровне организма, связанных с активацией гипоталамо-гипофизарно-надпочечникого комплекса вегетативной регуляции функций.

Таблица 2.

Электрофоретическая подвижность эритроцитов (мкм - см / В -с) крови крыс при хронической ишемии головного мозга

Группы Время воздействия

10 суток 60 суток

Интактные животные 1,37+0,02 1,32+0,02

Тотальная ишемия головного мозга 0,86+0,05* 1,46+0,04*

Локальная ишемия головного мозга 0,92+0,04* 1,63±0,03*

Примечание*- статистически значимые различия по отношению к интакгной группе животных (р<0,05).

В экспериментах на крысах было установлено, что при моделировании как тотальной, так и локальной ишемии головного мозга в крови животных наблюдается первичное снижение ЭФПЭ на 10- е сутки после воздействия с

последующим повышением исследуемого показателя к 60-м суткам исследования (табл.2). При этом наиболее значимо ЭФПЭ повышалась при локальной ишемии головного мозга, что свидетельствует о более выраженной активации гипофизарно-надпочечниковой системы при данной альтерации организма.

Таким образом, установлено, что при моделировании хронической ишемии головного мозга у животных наблюдается типичное двухфазное изменение ЭФПЭ: первичное снижение - 1 фаза с последующим увеличением ЭФПЭ - 2 фаза. Полученные результаты свидетельствуют об универсальном характере структурно-функциональной перестройке мембран эритроцитов в ответ на действие различных стресс-факторов, что подтверждает проведенные ранее исследованиями положения (Крылов, Дерюгина, 2005): снижение ЭФПЭ обусловлено активацией симпато-адреналовой системы, тогда как повышение -гипофизарно-надпочечниковой.

На 10-е сутки после воспроизведения хронической ишемии головного мозга крыс, в фазу понижения ЭФПЭ, были проведены «терапевтические» мероприятия, заключающиеся в курсовом введении препаратов-адаптогенов. Была применена схема, аналогичная терапевтическим мероприятиям у больных дисциркуляторной энцефалопатией (ДЭ) - базовая терапия: пирацетам (ноотороп) плюс кавинтон (нейровазодилятатор) с добавлением веществ-адаптогенов - цитофлавина (янтарная кислота с витаминами), дельтарана (пептид дельта-сна). В соответствии со схемой исследовали отдаленные результаты проводимой «терапии» - на 60-е сутки эксперимента.

Было показано, что в условиях тотальной ишемии головного мозга животных наиболее значимое изменение ЭФПЭ в указанный этап исследования производила «базовая терапия» - внутрибрюшинное введение пирацетама и кавинтона (рис. 4). Менее значимо, но так же эффективно по сравнению с контролем и интактными животными повышалась ЭФПЭ при дополнении к пирацетаму и кавинтону цитофлавина. Дополнительное использование дельтарана не влияло на показатели ЭФПЭ крови животных, которые были сравнимы с уровнем контроля.

Иные результаты были получены в экспериментах с моделированием локальной ишемии головного мозга. Из рис. 5 видно, что, в отличие от тотальной ишемии, при локальной - на 60-е сутки после клиппирования средней мозговой артерии скорость ЭФПЭ в контрольной группе была существенно повышена. Однако эффекты изменения ЭФПЭ при терапевтических воздействиях при локальной и тотальной ишемией были достаточно однотипными: наибольшие изменения по сравнению с интактыми животными наблюдались при базовой терапии и добавлении цитофлавина, а наименьшие - при добавлении дельтарана. Однако только дельтаран приводил к уменьшению ЭФПЭ по отношению к контролю.

1яИ11

шв

3 интактные

I контроль

□ пирацетам+кавиктон+ дельтаран

□ пирацетамч- кавинтон

I пирацетам+кавинтон+ цитофлавин

электрофоретическая подвижность эритроцитов

Рис. 4 ЭФПЭ (%) крови крыс при проведении терапии на фоне тотальной ишемии головного мозга к 60 суткам наблюдения. Примечание: на рис. 4, 5 *- статистически значимые различия по отношению к интактной группе животных (р<0,05); "- статистически значимые различия по отношению к контрольной группе животных (р<0,05).

Ш ингаюные Ш контроль

□ пирацетам+кавинтон+ дельтаран

□ пирацетам+кавинтон

■ пирацетам+кавинтон+ цитоф лавин

электрофоретическая подвижность эритроцитов

Рис. 5 ЭФПЭ (%) крови крыс при проведении терапии на фоне локальной ишемии головного мозга к 60 суткам наблюдения.

Из полученных результатов следует заключить, что препараты: пирацетам, обладающий ноотропным действием; кавинтон - сосудорасширяющий препарат

и цитофлавин - цитопротектор, судя по изменению ЭФПЭ, вызывали дополнительную активацию стрессреализующих систем при моделировании как тотальной, так и локальной ишемии головного мозга крыс. В отличие от этого, при локальной ишемии только действие дельтарана приводило к снижению ЭФПЭ крови стрессированных животных, тем самым, приближая адаптационные реакции к уровню физиологической нормы и вызывая восстановление исходного статуса организма.

Исследование изменений ЭФПЭ крови больных дисциркуляторной энцефалопатией разной степени тяжести в ходе терапевтических мероприятий.

В ходе исследования ЭФПЭ крови больных дисциркуляторной энцефалопатией (ДЭ) было показано, что при поступлении в стационар на I и II стадиях заболевания ЭФПЭ была повышена, а на III стадии - понижена по сравнению с возрастной нормой. Мы связали это с постепенным истощением субстратов коры надпочечников и снижением адаптационных резервов организма в целом при развитии ишемических повреждений головного мозга. При этом лейкоцитарная формула (ЛФ) (табл.3) свидетельствовала о снижении уровня реактивности на всех стадиях заболевания, особенно выраженной на третьей стадии, в связи с развитием десинхронизации в работе подсистем организма при усугублении патологии. Исследование изменения ЭФПЭ и ЛФ больных ДЭ после проведенной курсовой терапии показало, что она зависит как от тяжести заболевания, так и выбора препаратов лечения. На рисунке 6 видно, что применение базовой терапии (пирацетам и кавинтон) больным ДЭ I-й стадии заболевания, так же как и дополнительно дельтарана и цитофлавина приводило к тенденции восстановления (снижения) ЭФПЭ к уровню показателей ЭФПЭ условно-здоровых людей (доноры), указывая на приближение адаптационных реакций к уровню физиологической нормы и восстановлению баланса стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем. Применение геримакса в отличие от цитофлавина и дельтарана приводило к дальнейшему повышению ЭФПЭ больных, что, видимо, отражало переактивацию адаптационных процессов.

На П-й стадии заболевания, в отличие от результатов, полученных при изучении ЭФПЭ больных 1-й стадии, применение препаратов базового комплекса и дополнительно геримакса и цитофлавина приводило к повышению ЭФПЭ по отношению к ЭФПЭ группы здоровые (доноры) (Рис.7). Регистрируемые изменения ЭФПЭ свидетельствуют об активизации процессов адаптации при действии исследуемых препаратов, что, видимо, обусловлено недостаточной активностью гипофизарно - надпочечниковой системы на второй стадии. Однако отмеченное избыточное нарастание показателя отражало переактивацию адаптационных процессов. В то же время дополнительное использование к базовой терапии дельтарана, вызывало уменьшение исходно повышенного показателя ЭФПЭ (Рис.7).

3 до лечения Я после лечения

Рис. 6 ЭФПЭ (%) крови больных дисникуляторной энцефалопатией 1-й стадии заболевания при терапии.

1. Базовое лечение (пирацетам и кавинтон)

2. Комплексное лечение (базовое + дельтаран)

3. Комплексное лечение (базовое + цитофлавин)

4. Комплексное лечение (базовое + геримакс)

Примечание *- р< 0.05 по отношению к группе здоровые (доноры) (100%).

| Ш до лечения Ш после лечения |

Рис. 7 ЭФПЭ (%) крови больных дисциркуляторной энцефалопатией 2 стадии заболевания при терапии.

1. Базовое лечение (пирацетам и кавинтон)

2. Комплексное лечение (базовое + дельтаран)

3. Комплексное лечение (базовое + цитофлавин)

4. Комплексное лечение (базовое + геримакс)

Примечание *- р<0,05 по отношению к группе здоровые (доноры) (100%).

На третьей стадии заболевания при дополнительном использовании к базовой терапии дельтарана и цитофлавина наблюдалось восстановление до уровня физиологической нормы исходно пониженной ЭФПЭ. Применение базовой терапии, в большей степени, - с геримаксом, приводило к увеличению исследуемого показателя (р<0,05), относительно группы здоровые (доноры) (Рис 8).

140 ---------------------------------------------------------------------------------------------------

12 3 4

терапия

Рис. 8 ЭФПЭ (%) крови больных дисциркуляторной энцефалопатией 3

стадии заболевания при терапии.

1. Базовое лечение (пирацетам и кавинтон).

2. Комплексное лечение (базовое + дельтаран)

3. Комплексное лечение (базовое + цитофлавин)

4. Комплексное лечение (базовое + геримакс)

Примечание * - р <0,05 по отношению к группе здоровые (доноры) (100%).

Анализируя критерии адаптационных реакций по лейкоцитарному коэффициенту (ЛК), можно говорить, что рост ЛК при развитии патологии свидетельствует о снижении уровня реактивности, тогда как терапевтические мероприятия вызывают активацию адаптационных процессов организма. При этом в ряде случаев отмечался рост ЛК в ходе используемой терапии, характеризующий наличие признаков напряженности адаптационных процессов (Табл.3) Так, отмеченный рост лейкоцитарного коэффициента при действии дельтарана на 1-й стадии заболевания, а также базовой терапии и дополнительного использования цитофлавина на Ш-й стадии заболевания. Анализ ЭФПЭ больных ДЭ свидетельствует, что уровень вовлечения адаптационных резервов организма существенно различается на разных стадиях заболевания. Так, повышенный уровень ЭФПЭ свидетельствует об

активации гипофизарно-надпочечниковой системы на 1-й стадии заболевания с постепенным ее истощением в ходе усугубления патологического процесса (Крылов, Дерюгина, 2005).

Таблица 3

Лейкоцитарный коэффициент (лимфоциты/сегментоядерные нейтрофилы) (%) крови больных дисциркуляторной энцефалопатией

Терапевтическое воздействие Время исследования Стадии заболевания

I II III

Базовое лечение До лечения 0,53 ± 0,07 0,66 ± 0,06 0,80 ± 0,08

После 0,67± 0,08 0,60+0,06 0,96± 0,06*

Дельтаран До лечения 0,59 ± 0,08 0,66 ± 0,07 0,78 ±0,09

После 0,80±0,08* 0,62±0,07 0,71+0,06

Цитофлавин До лечения 0,58 + 0,08 0,65 ± 0,05 0,76 ± 0,06

После 0,76± 0,08 0,72+ 0,06 0,90+0,07*

Геримакс До лечения 0,54 ± 0,08 0,66 ± 0,07 0,78 ± 0,09

После 0,62±0,08 0,68 ± 0,05 0,66+0,06

Примечание: *- статистически значимые различия (р<0,05) к значениям до

лечения.

По всей видимости, степень включения адаптационных процессов при развитии хронической цереброваскулярной недостаточности определяет различное влияние препаратов на разных стадиях заболевания, отражаемое в изменении ЭФПЭ. На 1-й стадии заболевания действие использованных в работе препаратов направлено на восстановление исходного статуса организма, за исключением включения в комплексную терапию геримакса, на П-й и Ш-й стадиях препараты определяют дополнительную активацию. В то же время, на основе анализа ЭФПЭ и ЛК продемонстрирована возможность целенаправленного воздействия на течение адаптационно-приспособительных процессов при применении стрессмодулирующей терапии. Так, включение в комплексную терапию регуляторного пептида дельтарана, оказывает корригирующее воздействие на течение адаптационного процесса на всех стадиях ДЭ и наиболее эффективно в стадии истощения адаптационного процесса (наблюдается восстановление ЭФПЭ при стабильном ЛК). Применение стресстренирующей терапии (геримакса) оказывает активирующее влияние на адаптационные механизмы, отражая активацию адренало-гипофизарно-надпочечниковой оси для реализации механизмов адаптации.

Включение цитофлавина в терапевтический комплекс, препарата обладающего цитопротективным действием, способствует развитию адаптационных процессов, однако на П-й стадии заболевания рост ЭФПЭ свидетельствует об избыточной активации адаптационных механизмов. По всей видимости, цитофлавин, являющийся сукцинат-содержащим антиоксидантом, активирует реакции срочной адаптации и эффективен только при относительной сохранности адаптационного резерва, что и наблюдается в восстановлении ЭФПЭ и ЛК на 1-й стадии заболевания.

На основании полученных результатов следует заключить, что как у крыс с моделируемой ишемией головного мозга, так и при ишемических нарушениях функции головного мозга у больных ДЭ, регистрируются типовые изменения ЭФПЭ периферической крови. Эти изменения зависят как от тяжести альтерации или заболевания, так и от проводимой терапии разными препаратами. Как видно из результатов, повышение на начальных этапах - на первой и второй стадиях заболевания ДЭ ЭФПЭ крови больных оказалось сходным с реакцией повышения ЭФПЭ крыс при моделировании локальной и тотальной ишемии головного мозга. И только у больных ДЭ 3-й стадии ЭФПЭ была сниженной, что соответствует литературным данным о типовой реакции ЭФПЭ при различных заболеваниях. Из этого можно предположить, что стадийность заболевания ДЭ отражает стадийность стрессовой реакции организма больных, что подтверждается и результатами анализа ЛФ больных ДЭ. Результаты экспериментальных данных свидетельствуют, что оценка исходного уровня адаптационных резервов организма по показателям ЭФПЭ позволяет скорректировать использование препаратов в целях повышения неспецифической резистентности организма и обосновать целесообразность включения стрессмодулирующей терапии в комплекс лечения хронической ишемии головного мозга.

ВЫВОДЫ

1. Моделирование гипобарической гипоксии и адреналиновой токсемии у крыс вызывали типовое однофазное изменение ЭФПЭ крови: снижение с последующим восстановлением данного показателя.

2. Предварительное введение маточного молочка, убихинона-10 и янтарной кислоты, а также их смеси препятствовало снижению ЭФПЭ крови крыс при гипобарической гипоксии и адреналиновой токсемии.

3. Тотальная и локальная ишемия головного мозга крыс вызывали однотипное двухфазное изменение ЭФПЭ: первоначальное снижение (1фаза), с последующим повышением (2 фаза).

4. Установлено, что в условиях как тотальной, так и локальной ишемии головного мозга у крыс, на 60-е сутки эксперимента (2-я фаза изменения ЭФПЭ) действие исследуемых веществ-адаптогенов: пирацетам+кавинтон, пирацетам+ кавинтон+цитофлавин приводило к дальнейшему повышению ЭФПЭ относительно уровня у интактных животных, а применение пирацетама+кавинтона+дельтарана приводило к восстановлению ЭФПЭ.

5. Установлено, что ЭФПЭ крови больных ДЭ первой, второй, третьей стадии заболевания зависит от тяжести заболевания. У больных ДЭ 1-й и 2-й стадии ЭФПЭ была повышенной, а при 3-й - пониженной по сравнению с нормой.

6. Направленность изменения ЭФПЭ крови больных ДЭ в ходе терапии сочеталась с развитием общих адаптационных процессов в организме. На 1-й стадии восстановление ЭФПЭ наблюдалось при действии базовой терапии и дополнительно дельтарана и цитофлавина; на 2-й при действии дополнительно дельтарана; на 3-й при действии дополнительно дельтарана и цитофлавина.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК

1. Крылов В.Н. Влияние пчелиного яда на адаптивные реакции эритроцитов при иммобилизационном стрессе / В.Н.Крылов, A.B. Дерюгина, O.A. Захарова// Вестник ННГУ. Серия Биология. №2(2) 2010. С. 627- 630.

2. Крылов В.Н. Исследование системы крови при ишемических нарушениях функций головного мозга / В.Н. Крылов, A.B. Дерюгина, О. А. Захарова Е.А. Антипенко // Клиническая лабораторная диагностика № 12, Москва. 2010. С. 28- 30.

Статьи в региональных изданиях и материалы конференций

3. Белякова O.A. Оценка гомеостаза крови больных дисциркуляторной энцефалопатией методом измерения электрофоретической подвижности/ O.A. Белякова// Материалы 61-й научной студенческой конференции биологического факультета. Н.Новгород: ННГУ, 2008. С. 5 - 6.

4. Белякова O.A. Электрофоретическая подвижность эритроцитов как отражение гомеостаза при альтерации функций головного мозга/ O.A. Белякова, Ю.А. Старателева // Тезисы докладов 13- й Нижегородской сессии молодых ученых. Н.Новгород, 2008. С.8 — 9.

5. Белякова O.A. Скрининг препаратов применяемых при лечении дисциркуляторной энцефалопатии /О. А. Белякова // Ломоносов -2009: тезисы докладов XVI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. М., 2009. С. 247.

6. Антипенко Е.А. Адаптивные реакции крови в ходе лечения хронической ишемии мозга (клинико - экспериментальное исследование)/ Е. А. Антипенко, A.B. Дерюгина, В.Н. Крылов, A.B. Густов, O.A. Белякова // Материалы XIV международного симпозиума «Эколого- физиологические проблемы адаптации»; Москва, РУДН: Тезисы докладов. М. 2009. С. 48 -50.

7. Белякова O.A. Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при терапии больных дисциркуляторной энцефалопатией / О. А. Белякова // Материалы 62-й научной студенческой конференции биологического факультета; Н.Новгород: ННГУ, 2009. С.7-8.

8. Захарова О. А. Изменение показателей крови при нарушениях мозгового кровообращения и методы лечения / О. А. Захарова // Ломоносов -2010: тезисы докладов XVII Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. М., 2010. С. 170-171.

9. Дерюгина А. В. Влияние однократного и многократного стрессового воздействия на электрокинетические про- и антиоксидантные свойства эритроцитов / А. В. Дерюгина, О. А. Захарова // Материалы Всероссийской научно- практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» Башкирия, г. Сибай, 2010. Том II. С 201-204.

10. Дерюгина A.B. Сравнительно-видовое изучение электрофоретической подвижности эритроцитов при стрессовом воздействии / A.B. Дерюгина, O.A. Захарова // Тезисы докладов XIV-й Пущинской Международной школы- конференции молодых ученых. Пущино, 2010. С. 123- 124.

П.Дерюгина A.B. Электрофоретическая подвижность эритроцитов при действии различных экзотоксинов на организм / A.B. Дерюгина, O.A. Захарова // Тезисы докладов XXI съезда физиологического общества им. И.П. Павлова. Москва-Калуга, 2010. С.226-227.

12. Крылов В.Н. Метод клиновидной дегидратации при оценки возрастных, гормональных и альтерационных изменений организма I В.Н. Крылов, A.B. Дерюгина, JI.M Обухова, О. А. Захарова // Материалы Международной конференции Пчеловодство XXI веке. Москва, 2010. С.56 - 58.

13. Захарова О.А Влияние маточного молочка и убихинона на функциональные характеристики эритроцитов крыс при развитии иммобили-зационно-болевого стресса / О. А. Захарова // Сборник тезисов III Всероссийского с международным участием конгресса студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз-Россия 2010». - Нижний Новгород, 2010. С. 131.

14. Крылов В.Н. Влияние пчелиного яда на адаптивные реакции эритроцитов крыс при экспериментальном стрессе/ В.Н. Крылов, A.B. Дерюгина, О.А Захарова. // Материалы Международного форума пчеловодов, Саранск, 2010, С.9-12.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГГНС гипофизарно-гипоталамо-надпочечниковая система

ДЭ дисциркуляторная энцефалопатия

КА катехоламины

ЛК лейкоцитарный коэффициент

ЛФ лейкоцитарная формула

МДА малоновый диальдегид

ПОЛ перекисное окисление липидов

САС симпатоадреналовая система

ЭФПЭ электрофоретическая подвижность эритроцитов

ХЦВН хроническая цереброваскулярная недостаточность

Подписано в печать 09.04.2012. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Гарнитура Тайме. Усл. печ. л. 1. Заказ № 215. Тираж 100.

Отпечатано в Центре цифровой печати Нижегородского госуниверситета им. Н.И. Лобачевского 603950, г. Нижний Новгород, пр. Гагарина, 23

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Захарова, Ольга Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Стресс и его роль в развитии патологических процессов.

1.2. Гипоксия - один из определяющих факторов тяжести патологического процесса.

1.3. Химический состав и фармакологическое действие веществ -адаптогенов различной природы.

1.4. Поверхностный заряд эритроцитов, и его биологическая роль.

1.4.1. Электрофоретическая подвижность эритроцитов крови организма как интегральный показатель состояния клеток в условиях действия стресс-факторов.

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Экспериментальные исследования.

2.2. Клинические исследования.

Глава 3. Результаты и их обсуждение

3.1. Исследование ЭФПЭ крови крыс при моделировании альтераций функций организма животных.

3.2. Исследование ЭФПЭ крови крыс при альтерирующих воздействиях и профилактическом действии адаптогенов.

3.3. Исследование ЭФПЭ крови крыс при моделировании тотальной и локальной ишемии головного мозга и введении фармакологических средств.

3.4. Исследование изменений ЭФПЭ крови больных дисциркуляторной энцефалопатией разной степени тяжести в ходе терапевтических мероприятий.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при действии стресс-факторов и коррекции состояния организма биологически активными веществами"

Среди актуальных проблем современной физиологии и медицины возрастающее внимание уделяется проблеме стресса. Такой интерес обусловлен все возрастающими антропогенными факторами, которые, так или иначе, воздействуют на организм человека и животных, провоцируя развитие стресса. Известно, что в ответ на любое нарушение гомеостаза или внешнее воздействие организм реагирует развитием общего адаптационного синдрома (Селье, 1960). В зависимости от силы и длительности стрессового фактора организм либо приспосабливается к новым условиям, либо погибает. На начальных этапах стресса происходит активация приспособительных процессов, а при дальнейшем прогрессировании альтерационного процесса возможно истощение адаптационных резервов. При этом чрезмерная по интенсивности и длительности стресс-реакция из звена адаптации превращается в звено патогенеза. В то же время адекватная реакция организма способствует стабилизации состояния и предупреждает нарастание недостаточности функций. В связи с этим крайне важной представляется оптимизация адаптационного процесса при действии стресс-факторов.

Показано, что применение веществ-адаптогенов способствует тренировке механизмов адаптации (Рапгкшап, \Vikim, 2006). Кроме того, адаптогены оказывают антигипоксическое и цитопротективное действие (Арбузов и др., 2006; БапсИэе^, ОепсЬег, 1994). Адаптогенным действием могут обладать различные природные соединения. Широкое применение в медицине на сегодняшний день получили продукты пчеловодства (Крылов и др., 2007; Сулим, 2009), в частности маточное молочко, которое способствует повышению резистентности организма и обладает выраженной антиоксидантной активностью (Крылов, Сокольский, 2000; Вахонина и др., 2004). В терапевтических- целях применяются препараты антигипоксического действия, такие как убихинон-10 (Крылов, Лукьянова, 2002), который обладает выраженным кардио- и радиозащитными 5 свойствами (Корягин, Крылова, 2002) и янтарная кислота, обладающая антиоксидантными свойствами (Лукьянова, 2004). При лечении хронической цереброваскулярной недостаточности (ХЦВН) используются препараты кавинтон, цитофлавин, дельтаран, геримакс, обладающие нейропротективным и вазоактивным действиями (Остроумова, Ватутина,

2003).

Электрофоретическая подвижность эритроцитов (ЭФПЭ) является одним из жизненно важных параметров гомеостаза человека (Рязанцева, Новицкий,

2004). Регистрация перемещения клеток крови в электрическом поле позволяет оценить не только их электрокинетический потенциал и, следовательно, морфофункциональное состояние мембраны, но и состояние гомеостаза организма в целом'(Крылов, Густов, Дерюгина, 1998). Анализ литературных данных свидетельствует об однообразной реакции электрокинетического потенциала эритроцитов, их электрофоретической подвижности (ЭФПЭ) - снижении при самых разных заболеваниях: у пациентов, страдающих гепатитом, при инфекционных и опухолевых процессах, у больных хронической и подростковой гипопластической анемией, при физических нагрузках и психическом напряжении (Гильмутдинов, 1994; Матюшичев, Шамратова, Гуцаева, 1995; Матюшичев и 6

1. ,,. др., 1996, 1997). На этом основании развивается положение о том, что изменение электрокинетического потенциала эритроцитов при различных экстремальных воздействиях является отражением общей неспецифической реакции организма и связан с развитием стресс-реакции и вовлечением стресс-реализующих систем на действие раздражителей (Крылов, Дерюгина, 1998, 2005). Данное положение доказано авторами в опытах на животных: изменение у крыс при стрессовых воздействиях носит однотипный двухфазный характер - первоначальное снижение с последующим повышением и восстановлением по мере отмены стресса (Крылов и др., 1998). При этом понижение ЭФПЭ авторы связывают с активацией симпато-адреналовой системы, а повышение с активацией гипофизарно-надпочечниковой системы. В - связи с тем, что в основе многих патологических процессов и чрезвычайных раздражителей лежит развитие стресса разной выраженности (Гаркави и др., 1977), можно предположить, что изменение ЭФПЭ является ранним критерием стресс - реакции. Поэтому измерение и анализ ЭФПЭ могут служить достаточно убедительным маркером идущего в организме патологического процесса. Учитывая, что ЭФПЭ позволяет исследовать развитие не только стресс-реакции в организме, но и патологического процесса, отражая состояние гомеостаза организма в целом, можно полагать, что исследование электрокинетических свойств эритроцитов может быть- эффективным критерием выраженности адаптационных реакций организма при проведении терапии (Крылов, Дерюгина, 2000). Таким образом, измерение ЭФПЭ может быть использовано для анализа степени вовлечения адаптационных резервов организма при проведении терапевтических мероприятий веществами-адапогенами. Вышеизложенное послужило обоснованием цели исследования.

Для достижения данной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Исследовать действие убихинона-10 и янтарной кислоты на ЭФПЭ крови крыс при моделировании адреналиновой токсемии и гипобарической гипоксии

2. Исследовать действие пирацетама, кавинтона, цитофлавина и дельтарана на ЭФПЭ крови крыс на моделях локальной и тотальной ишемии головного мозга.

3. Исследовать изменения ЭФПЭ крови больных дисциркуляторной энцефалопатией разной степени тяжести в ходе терапевтических мероприятий.

Научная новизна I

В работе впервые проведено исследование ЭФПЭ крови человека и животных при проведении терапевтических и профилактических мероприятий природными веществами-адаптогенами. Установлено, что предварительное введение убихинона-10, маточного молочка и янтарной кислоты препятствует снижению ЭфПЭ при проведении профилактических мероприятий гипоксических состояний организма, вызванных адреналиновой токсемией и гипобарической гипоксией. Показано восстановление ЭФПЭ в ходе проведения стресс-модулирующей терапии при развитии ишемических повреждений головного мозга крыс. Выявлена однотипность изменения ЭФПЭ крови больных ДЭ и крови крыс при применении стресс-модулирующей терапии. Показана зависимость ЭФПЭ крови больных от тяжести заболевания и выбора препаратов-адаптогенов.

Теоретическая и практическая значимость работы

Работа выполнена в соответствии с плановыми НИР кафедры. Часть работы выполнена в рамках реализации программы ФЦП «Научные и научно- педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы («Исследование типовых изменений мембран клеток крови при нарушении функций организма разного патогенеза» Государственный контракт № П604).

Полученные результаты позволили установить закономерности изменения ЭФПЭ при формировании целостной реакции организма в ответ 1 . .,; ^ на стресс различного генеза, а также при профилактике и терапии альтераций веществами-адаптогенами. Анализ изменений ЭФП эритроцитов позволил обосновать эффективность применения эффективных и безопасных адаптогенов в профилактики и терапии гипоксии, а так же при нарушениях мозгового кровообращения и включения в реабилитационный комплекс методов при лечении больных дисциркуляторной энцефалопатией.

Выявленная направленность изменений ЭФПЭ при идущем в организме патологическом процессе и фармакологическом воздействии позволяет рекомендовать методику измерения электрофоретической подвижности эритроцитов при исследовании крови ;с Iцелью ранней диагностики развития патологии и проводимой терапии.

Положения, выносимые на защиту:

Апробация работы

Апробация работы проведена на расширенном заседании кафедры физиологии и биохимии человека и животных ННГУ им. Н.И.Лобачевского.

Основные положения доложены на XV, XVI Международных конференциях студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов- 2008, 2009» (Москва, 2008, 2009); 13- й и 14- й Нижегородской сессии молодых ученых (Нижний Новгород, 2008, 2009); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» (Башкирия, 2010); ХГУ-ая Пущинская Международная школа- конференция молодых ученых. (Пущино, 2010); XXI съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Калуга 2010); Международной конференции Пчеловодство XXI в. «Пчеловодство, апитерапия и качество жизни» (Москва, 2010); III Всероссийский с международным участием конгресс студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз-Россия 2010», (Нижний Новгород, 2010).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 14 работ, из них 2 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены на 120 страницах машинописного текста, иллюстрированы 10 таблицами и К) рисунками. Работа состоит из

10 введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, глав результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, содержащего 197 источников, из которых 154 на русском и 43 на иностранных языках.

Личный вклад соискателя

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Захарова, Ольга Анатольевна

выводы

4. Установлено, что в условиях как тотальной, так и локальной ишемии головного мозга у крыс, на 60- е сутки эксперимента (2-я фаза изменения ЭФПЭ) действие исследуемых веществ-адаптогенов: пирацетам+кавинтон, пирацетам+ кавинтон+цитофлавин приводило к дальнейшему повышению ЭФПЭ относительно уровня у интактных животных, а применение пирацетама+кавинтона+дельтарана приводило к восстановлению ЭФПЭ.

5. Установлено, что ЭФПЭ крови больных ДЭ первой, второй, третьей стадии заболевания изменяется разнонаправлено и зависит от тяжести заболевания. У больных ДЭ 1-й и 2-й стадии ЭФПЭ была повышенной, а при 3-й -пониженной по сравнению с нормой.

6. Направленность изменения ЭФПЭ в ходе-терапии сочеталась с развитием общих адаптационных процессов в организме. Эффективность использования лекарственных средств зависела от тяжести заболевания. На 1-й стадии восстановление ЭФПЭ наблюдалось при действии базовой терапии и дополнительно дельтарана и цитофлавина; на 2-й при действии дельтарана на фоне базовой терапии; на 3-й при действии дельтарана и цитофлавина на фоне базовой терапии.

100

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании проведенных исследований можно заключить, что установлены закономерные изменения ЭФПЭ при формировании целостной реакции организма в ответ на стресс различного генеза и при профилактике и терапии альтераций веществами - адаптогенами. Анализ изменений ЭФП эритроцитов позволил обосновать эффективность применения эффективных и безопасных адаптогенов в профилактике и терапии гипоксии, при нарушениях мозгового кровообращения, и включения в реабилитационный комплекс при лечении больных дисциркуляторной энцефалопатией.

Таким образом, изменение ЭФПЭ может быть чувствительным методом выявления определенных этапов стресса различной природы, характеризующим вовлечение адаптационных систем организма, анализ которой дает возможность целенаправленно воздействовать на механизмы компенсации, способные повысить неспецифическую устойчивость организма. Выявленная направленность изменений ЭФПЭ при идущем в организме патологическом процессе и фармакологическом воздействии позволяет рекомендовать методику измерения электрофоретической подвижности эритроцитов при исследовании крови с целью ранней диагностики развития'патологии и проводимой терапии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Захарова, Ольга Анатольевна, Нижний Новгород

1. Агамалян Н.Г. Иследование процесса гемолиза эритроцитов под влиянием различных физико химических факторов в норме и при сердечно-сосудистых заболеваниях. Автореф. дис. канд. биол. наук. Ереван, 1988. 23 с.

2. Агеева Т.С., Захарова Н.Б., Рассомахин A.A.: Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран у больных с ишемическим инсультом и дисциркуляторной энцефалопатией / Журн. невропатол. и психиатр, им. С.С.Корсакова 1992 - т.94(1) - стр.6-8.

3. Аитов К.А., Борисов В.А., Прокопьева П.Л., Ходус В.И. Детоксикация тяжелого течения боррелиоза с помощью соли янтарной кислоты // Вестник Санкт Петербургской медицинской академии им. И.И. Мечникова. 2004, № 4. С. 153-155.

4. Аитов К.А., Прокопьева П.Л., Ходус В.И. Актуальные вопросы интенсивной терапии. 2004. Выпуск 1, № 14-15.

5. Аладашвили Н.З., Сарычева Т.Г., Попова О.В., Чернов В.М., Козинец Г.И. Электрофоретическая подвижность эритроцитов у детей с заболеваниями органов дыхания // Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2003. Т.2, №4. С.36-39.

6. Александрова М.П. Действие маточного молочка на микробы. Рязань: 1962. 34-37с.

7. Александровский Ю.А. Психиатрия и психофармакотерапия (избранные лекции и выступления). М: ГЭОТАР - МЕД, 2003. - 432 с.

8. Алексеева Н.С., Кистенев Б.А.: Применение кавинтона для лечения сосудистых заболеваний головного мозга с учетом возрастных особенностей / М., 1983 стр.57-63.

9. Алешин Б.В., Бондаренко; Л.А. Стресс, адаптация и функциональные нарушения.- Кишинев:Штиинца.-1984.-С.11-12.

10. Алмазов В.А. Физиология лейкоцитов человека. Л.: Наука, 1979.230 с.101. 1 . . . >t 1, • II V, 1 V ' ! V

11. П.Афанасьев B.B. Цнтофлавнн в интенсивной терапии. Пособие для врачей. СПб, 2005. 36 с.

12. Аронов Д.М. Применение коэнзима Q10 в кардиологической практике // РМЖ.2004.Т. 12,№ 15.

13. Арбузов А.Г., Крылатов A.B., Маслов JI.H. и др. Антигипоксический, кардиопротекторный и антифибрилляторный эффекты комплексного адаптогенного препарата растительного происхождения // Бюлл. экспер. биологии- 2006- Т. 142, № 8.- С 177-179.

14. Аткинс Р. Природная альтернатива лекарствам при лечении и профилактике болезней. Биодобавки доктора Аткинса: Пер. с англ. -М.: РИПОЛ КЛАССИК, Трансперсональный институт, 1999. -480 с.

15. Афанасьев В. В. Клиническая фармакология реамберина (очерк): Пособие для врачей: СПб., 2005. 44 с.

16. Бабский Е. Б., Косицкий Г. И., Ходоров Б. И. Физиология человека. Учебное пособие. М.: "Медицина", 1985. 544 с.

17. Баранов H.H. Мышечная деятельность, адаптация, тренированность. Кишинёв: Штиинца, 1989. 150 с.

18. Барабой В. А. Стресс: природа, биологическая роль, механизмы, исходы. Киев: Фитосоциоцентр, 2006. 424 с.

19. Белявский А. Д., Исаян Л. А. О целесообразности использования реамберина и цитофлавина в интенсивной терапии ожоговой болезни // Вестник интенсивной терапии-. № 5, 2006. С. 225-227.

20. Белая О.Л. и др. Опыт применения коэнзима Q10 в комплексной терапии ИБС с дислипидемией // Клиническая медицина. 2006. № 5.21 .Бердичевский М.Я. Венозная дисциркуляторная патология головного мозга. М.: Медицина, 1989. 224 с.

21. Бизенкова М.Н.,! Романцов М.Г., Чеснокова Н.П. Метаболические эффекты антиоксидантов в условиях острой гипоксической гипоксии / Фундаментальные исследования. 2006. - №1. - С. 17-22.

22. Блума Р.К. Калния И.Э., Иванова С.М. Исследование структурно-функциональных свойств мембран эритроцитов с помощью флуоресцентных зондов ДСМ и ДСП-6 // Биол. мембраны. 1992. Т.9, №5. С.47-52

23. Брайен М.В. Общественные насекомые: экология и поведение. М.: Мир. 1986.-400 с.

24. Брайнес Л.Н. Маточное' молочко в свете вопросов биологии и медицины.М: 1958. 51 с.

25. Буканова Ю.Н., Солнцева Е.И.: Ноотроп винпоцетин блокирует калиевый ток задержанного выпрямления сильнее, чем высокопороговый кальциевый ток / Журн. высшей нервной деят. 1996 -т.46(5)-стр.911-916.

26. Буканова Ю.В., Солнцева Е.И., Скребицкий В.Г.: Влияние винпоцетина на различные типы высокопорогового калиевого тока нейронов моллюска / Бюлл. эксперимент, биол. и медицины 1998 -т. 126(10) - стр.408-41-2пю. .

27. Вавилов Ю.Л. Биохимические компоненты маточного молочка медоносной пчелы и их морфогенетические действия //Автореф. дисс. канд. биол. наук -Горький, 1971.-21 с.

28. Василенко Н.П. Влияние белковых подкормок на молочную продуктивность пчелиных семей. «Апитерапия». 1998. 24-27 с.

29. Василенко Н.П. Сравнительная оценка пчел разных пород как производителей маточного молочка. «Апитерапия» 1997. 40-42.

30. Вахонина Т.В., Бурмистрова JI.A. Состав и свойства маточного молочка //Материалы 4-ой Междун. науч.-практ.конф. «Пчеловодство XXI век» (4-5 сентября 2003 г.). М.: МСХ РФ, 2003. - С.85-90.

31. Вахонина Т.В. Пчелиная аптека. С-Пб.:-1995. 240 с.

32. Верещагин Н.В., Моргунов В.А., Гулевская Т.С. Патология головного мозга при атеросклерозе и артериальной гипертонии. М: Медицина, 1977, 228 с.

33. Верещагин Н. В. Гетерогенность инсульта в клинической практике // Альманах № 1. Академия инсульта. 2006.С. 4-7.

34. Весельский И.Ш., Саник A.B.: Коррекция нарушения микроциркуляции у больных с дисциркуляторной энцефалопатией / Врачебное дело 1991 - №7 - стр.85-87.

35. Владимиров Ю.А., Поглазов А.Ф. Структурная организация мембран // Биологические мембраны, 1973. №4. С 7-8.

36. Владимиров Ю.А., Арчаков, А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембанах. М: Наука, 1972. 252с

37. Волчегорский И. А., Москвичев И. А., Чащина Е. Н. Влияние антиоксидантов на проявления сенсомоторной полиневропатии и аффективные нарушения при сахарном диабете // Клиническая медицина. 2004, № 11. С. 31-35.'

38. Ганнушкина И.В., Коплик Е.В., Конорова И.Л. и др. Индивидуальная устойчивость к ишемии головного мозга у крыс: негативное влияние эмоционального стресса на ее течение. Бюл. экспер. биол. и мед 2004; № 2: С. 145-148.

39. Ганнушкина И.В., Конорова И., Коплик Е.В., Антелава A.JI. Коррекция церебральной ишемии у низкорезистентных к ней животных антистрессорным препаратом дельтаран. бюл. экспер. биол. и мед 2005; № 3. С. 259-262.

40. Гаркави JI.X. Активационная терапия. Ростов Н/Д: Изд-во Рост, ун-та, 2006. 256 с.

41. Гаркави JI.X., Квакина Е.Б. Адаптационные реакции и резистентность огранизма. Ростов Н/Д., 1990. 222 с.

42. Гаркави JI.X. Адаптационная реакции и резистентность организма. Ростов Н/Д., 1977. 275 с.

43. Гафуров Б.Г., Бусаков Б.С.: Состояние неспецифических систем мозга при первичных проявлениях недостаточности мозгового кровоснабжения и циркуляторной энцефалопатии / Журн. невропатол. и психиатр, им. С.С.Корсакова 1992 - т.92(1) - стр.38-40.

44. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функция. М.: Мир, 1997. 624с

45. Гильмутдинов Р.Я. Электрокинетические характеристики клеток крови и их взаимосвязь с другими гематологическими показателями в норме и патологии. Афтореф. дис. докт. биол. наук. Казань, 1994. 34 с.

46. Герасименко А. В. Патофизиологическое обоснование антиоксидантной терапии и коррекции функционального состояния печени при остром панкреатите. Автореферат дисс. канд. мед. наук. Москва, 2006, 36 с.

47. Гланц С. Медико биологическая статистика. - М.: Практика, 1999.

48. Гольдберг Е.Д., Гольдберг A.M., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., Гипоксия и система крови, Издательство Томского университета, 2006.

49. Гончарова Ё.И., Пинаев Т.Л. Белки цитоскелета эритроцитов // Цитология, 1988, № 1. С.5-8.

50. Гонян С.А. Поверхностный заряд клеток при различных функциональных состояниях: автореф. дисс. канд. биол. наук. Ереван, 1993. 21 с.

51. Горизонтов Н.Д., Протасова Т.Н. Роль КТГ и кортикостероидов в патологии. М.: Медицина, 1968.335 с.

52. Горчакова H.A., Гудивок Я.С., Гунина JI.M. Фармакология спорта/ К.Юлимп. л-ра, 2010.- 640 с.

53. Григоренко Г.А. Апитерапия рассеянного склероза //Апитерапия сегодня: Тез. докл. V науч.-практ. конф. Рыбное, 1997. С. 148-149.

54. Гузюкина Е.П. О сроках применения маточного молочка у преждевременнс рожденных детей / Е.П. Гузюкина, Н.В. Дмитриева, A.B. Дмитриев и др. //Апитерапия сегодня: Тез. докл. VI науч.-практ. конф. по апитерапии. Рыбное. Рязань, 1998. С. 85-87.

55. Гусев С.И., Коновалов А.Н., Бурд Г.С. Неврология и нейрохирургия. М. :Медицина, 2000.656 с.

56. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга.- М.: Медицина, 2002.

57. Дмитриева Н.В. Использование маточного молочка при перинатальной энцефалопатии у новорожденных детей / Н.В. Дмитриева, Е.П. Гузюкина. A.B. Дмитриев, Д.Г. Узбекова //Апитерапия сегодня: Тез. докл. V науч.-правк, конф. Рыбное, 1997. С. 135-136.

58. Ефимова Н.В., Шибкова Д.З. Модифицирующее действие радиационного фактора на стволовые кроветворные клетки экспериментальных животных. Челябинск: Изд-во Челяб. гос. пед. унта. 2007. 201 с.

59. Заречнова Н.В. Экспериментально-клиническое обоснование комплексного, применения:раннего энтерального питания и реамберина при панкреатодуоденальной резекции. Автореферат дисс. канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 2007. 22 с.

60. Захаров В.В., Дамулин И.В., Яхно Н.И. Диагностика и лечение нарушений памяти и других высших мозговых функций у пожилых: Метод. Рекомендации. -М.:ММА, 1997.

61. Каган В.Е. Механизмы структурно функциональной модификации биомембран при перекисном окислении липидов: автореф. дис. д. б. н. М: МГУ, 1981.48с.

62. Канарейкин К.Ф., Манвелов Л.С.: Лечение больных с начальными проявлениями недостаточности кровоснабжения мозга при вазомоторных дистониях / Клиническая медицина 1992 - т.70(5-6) -стр.56-60., I

63. Коган А.Б. Физиология человека и животных. М.: Высш. Шк.,1984.85с.

64. Козинец Г.И., Макаров В.А. Исследование системы крови в клинической практике. М.: Триада, 1998. 480 с.

65. Козинец Г. И. Анализы крови и мочи. Клиническое значение. М.: Практическая медицина, 2008. 152 С.

66. Козинец Г.И. и др. Электрофоретическая подвижность эритроцитов у больных с тяжелыми формами интоксикации / Попова О.В., Мороз

67. В.В., Бирюкова Л.С., Головецкий И.Я. // Общая реаниматология. 2007. № 5. С.75-79.1. >

68. Козлова E.H., Усман В.Б., Лобкова Т.Н.: Применение кавинтона для лечения сосудистых заболеваний головного мозга с учетом возрастных особенностей / М., 1983 стр.43-47.

69. Кокс Т. Стресс. М.: Медицина, 1981. 216 с.

70. Кокшаров Г.И., Борзова Л.В., Кульман P.A. Поверхностный заряд клеток крови и некоторые аспекты его биологической роли // Лабораторное дело. 1975.№5. 284 с.

71. Кривцов Н.И., Лебедев В.И. Содержание пчелиных семей с основами селекции. М.: Колос. 1995. - 400 с.

72. Кривцов Н.И. Продукты пчеловодства для здоровья // Н.И. Кривцов, В.Н. Крылов, В.И. Лебедев и др. Краснодар: «Агропромполиграфист», 2002. с. 272.

73. Крохотина Л.В., Моршчакова Е.Ф.: Влияние кавинтона на систему эритрон и. газовый состав .крови. у крыс /.Эксп. клинич. фармакол. -1994 т.54(5) - стр.32-33.

74. Крылов В.Н., Дерюгина A.B. Электрофоретическая подвижность эритроцитов и стресс // Физиология человека. 1998. Т.24, №6.С. 108-111.

75. Крылов В.Н., Дерюгина A.B. Типовые изменения электрофоретической подвижности эритроцитов при стрессовых воздействиях // Бюлл. эксп. биол. и мед., 2005, №4, 364-366

76. Крылов В. Н., Агафонов А. В., Кривцов Н. И. с соавт. Теория и средства апитерапии. М.; 2007. 236 с.

77. Крылов В.Н., Сокольский ,С.С. Маточное молочко пчел. Свойства, получение, применение. Краснодар: Агропромполиграфист. 2000. -216 с.

78. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Захарова O.A., Антипенко Е.А. // Клинич. лабор. диагностика. 2010, №12. - С.28-30

79. Ковалев Г.И., Ахапкина В.И., Абаимов Д.А., Фирстова Ю.Ю. «Фенотропил как рецепторный модулятор синаптической нейропередачи»; Атмосфера Нервные болезни, 2007, No4, С. 1—4.

80. Кочетков А.Г. Адаптационный процесс: общие закономерности, диагностика и коррекция величины воздействия. Нижегородский медицинский журнал. 2005.№1. С.56-64.

81. Куниёси Кисаки Способы применения пчелиного маточного молочка. Япония, Кайгай. 2005.

82. Лакомкин В.Л., Коркина О.В. и др. Защитное действие убихинона (коэнзима Q10) при ишемии и реперфузии сердца // Кардиология. 2002, 12,51-55.

83. Ланкин В.З., Капелько В.И., Рууге Э.К. и др. Коэнзим Q10: физиологическая функция и перспективы использования в комплексной терапии заболеваний сердечно—сосудистой системы: пособие для врачей. М.: Медпрактика-М, 2008.

84. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Антиоксиданты в комплексной терапии атеросклероза: pro et contra // Кардиология, 2004, 72-81.

85. Ласукова Т.В. Влияние опиоидных пептидов на функцию коры надпочечников в норме и при стрессе// дис. на соиск. степени канд. биол. наук.-Томск.-1991.

86. Левин Г.Я., Шереметьев Ю.А. Роль N-ацетилнейраминовой кислоты и отрицательного заряда эритроцитов в их агрегации // Пробл. гематол. и перелив, крови. 1981. №6. С.6-8

87. Литвицкий П.Ф., Патофизиология, М., ГЭОТАР-МЕД, 2002.

88. Лысенко А.В. Протеолитические процессы в мозге крыс при стрессе и адаптации, влияние- сон индуцирующего пептида// дис. на соиск. степени канд. биол. наук.- Ростов Н/Д.-1993.

89. Малы Е. Пчелиное молочко и его применение в медицине. «Пчеловодство». 1961. 35-36 с.

90. Мазина Н. К. и соавт. Системный анализ клинико-фармакологической эффективности реамберина при ишемическом инсульте // Вестник Санкт-Петербургской государственной академии им. И. И. Мечникова. 2006, № 1.С. 35-42.

91. Манвелов A.A., Кадыков А.Ю. Инсульт— проблема социальная и медицинская // Наука и жизнь. 2002, № 5 С. 52 -54.

92. Маркосян A.A., Тихомиров А.Н. Дайняк Б.А. Изменение структурного состояния мембран эритроцитов при дегидратации // Бюлютень эксперементальной биологии и медицины. 1996, №16.С. 402-404.

93. Маслова М.Н. Молекулярные механизмы стресса // Росс, физиол. журн. им И.М.Сеченова.2005.Т.91 ,№ 11 .С. 1320-1328.

94. Матюшев В.Б., Шамратова В.Г. Изменение электрофоретической подвижности крови при больших физических нагрузках и психическом напряжении // Физиология человека. 1995, №4. С.123-127.

95. Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г. Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при онкопатологии // Биофизика. 1996. Т.41, Вып.5. С. 1093-1096.

96. Махнева A.B. Возрастные особенности состояния клеточных мембран эритроцитов у больных с ишемической болезнью сердца // Вестник Российского государственного медицинского университета, 2011. №3. С. 19-24

97. Меерсон Ф.З., Малышева И.Ю. Феномен адаптационной стабилизации структур и защита сердца. М.: Наука, 1993. 159с.

98. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессовым ситуациям и физическим нагрузкам.- М.: Медицина 1998.

99. Мирошников А.И., Фомченков В.М., Иванов А.Ю. Электрофоретический анализ и разделение клеток. М.: Наука, 1986. 184с. . w . . .Ii.,.nie,.:.-.

100. Моргунов С. С. Коррекция реамберином тканевой гипоксии и состояние проантиоксидантной систем у хирургических больных с110гастродуоденальным кровотечением // Вестник интенсивной терапии. 2006, № 3. С. 58-62.

101. Мчедлишвили Г.И.: Микроциркуляция крови / Л.: Наука, 1989 -стр.296.

102. Ненашев В.А. Слияние клеточных и модельных мембран // Итоги науки и техники ВИНИТИ. 1984, №З.С.87-118.

103. Орлов А.Д., Ноздрачев А.Д. Нормальная физиология: Учебник.- М.: ГЭОТАР- Медиа, 2006.- 696 с.

104. Островский Д.Н. Молекулярная организация биологических мембран. Рига: Знание, 1977.157 с. № 10. С. 1030-1041 .

105. Пальчик А.Б., Шаболов Н.П. Гипоксически ишемическая энцефалопатия новорожденных. С.- Петербург, 2001.224 с.

106. Ш.Панин Л.Е. Биохимическиемеханизмы стресса. Новосибирск: Наука, С.- Петербург, 1983. 216 с.

107. Парамонова Н.С., Лискович В.А., Наумов И.А. и др. Неонатология // Учебное пособие. ГрГМУ, 2005.

108. ПЗ.Петруняк В.В. Активация и ингибирование №,К-АТФазы мембран эритроцитов эндогенными Ca 2- зависимыми регуляторами. 1990, №4.352 с.

109. Рембольд Г. Маточное молочко //В кн.: Матководство. Бухарест: Апимондия, 1982. С. 18-24.

110. Робу А.И. Стресс и¡гипоталамические гормоны. /Кишенев.: /Штица/, 1989.210 с.

111. Романова Е.Б., Гелашвили Д.Б. Иммунотропная активность зоотоксинов. Учебное пособие. Издательство ННГУ, 2011.-224 с.111

112. Русяев В.Ф., Савушкин A.B. Влияние биоактивных веществ на электрокинетические свойства эритроцитов. 1974, №8. С. 23-25.

113. Саврасов Е.Д. Неврология и анализ. С.- Петербург, 2003.Т.7.1561-6274 с.

114. Салиева P.M., Коплик Е.В., Каменов З.А. Пептид, вызывающий дельта-сон в крови и гипоталамусе крыс с различной устойчивостью к эмоциональному стрессу. Бюл экспер биол и мед 1988; 9: 264-266.

115. Салиева P.M., Коплик Е.В., Каменов З.А. Влияние бета-эндорфина и пептида, вызывающего дельта-сон на устойчивость к эмоциональному стрессу. Бюл экспер биол и мед 1989; 10: 464-466.

116. Сапронов Н.С. Фармакология гипофизарно-надпочечниковой системы СПб: Специальная литература, 1998. 336с.

117. Сашенков С.Л., Захаров Ю.М., Егорова Н.В. Механизм изменения электрофоретической подвижности эритроцитов акклиматизированных к теплу животных // Физиологический журнал СССР им. И.М. Сеченова. 1989.Т.75, №9. С. 1238-1242.

118. Селье,Г. Очерки об,.адаптационном синдроме. М.: МЕДГИЗ, 1960. 254с.

119. Селье Г. Стресс без дистресса. М.: Прогресс, 1979. 123с.

120. Сергеев П.В. Стероидные гормоны. М.: Наука, 1984. 240с.

121. Сигал В.П. Электрокинетический заряд эритроцитов и его роль в обеспечении структурных ■ свойств крови // Вопросы трансфузиологии.1989, №5.С. 40-44.

122. Сим Э. Биохимия мембран. М.: Мир, 1985.110 с.

123. Сторожок С.А., Соловьев C.B. Структурные и функциональные особенности цитоскелета эритроцитов // Вопросы медицинской химии. 1992, №2. С. 14-17.

124. Татков О. В., Гаркави JI. X., Рубцов В. В., Фатькина Н. Б. Актуальные проблемы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии. СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2004. 242 с.

125. Тодуа, Д. Г. Гачечиладзе, Берая М.В., Берулава Д.В. Состояние церебральной венозной гемодинамики при хронических нарушениях мозгового кровообращения // Антиология и сосудистая хирургия. 2005. Т.11, № 2 С.37-32.

126. Трещинский А.И.,Мищук И.И. Электрокинетические свойства крови // Анестезиология и реаниматология. 1981, №4. С. 17-20.

127. Трошин В.Д., Густов A.B. Сосудистые заболевания нервной системы. Изд. НГМА. Н.Новгород . 2005. 2002 с.

128. Трошин В.Д. Стресс и стрессорные расстройства. М.: Медицинское информационное агентство, 2007. 784 с.

129. Умрюхин П.Е. . Пептид, v . .вызывающий дельта-сон, блокирует возбуждающие эффекты глутамата на нейронах мозга у крыс. Бюл экспер биол и мед 2002; 134: 7: 9-11.

130. Федин А. И., Румянцева С. А., Пирадов М. А. и соав. Клиническая эффективность Цитофлавина у больных с хронической ишемией головного' ' мозга ' (многоцентровое плацебоконтролируемое рандомизированное исследование //Врач. 2006.№ 13. - С. 52-58.

131. Филаретов A.A., Богданов А.И., Ярушкина Н.И. Стресс- вызванная анальгезия. Роль гормонов гипофизарно- адренокортикальной системы // Физиол. журн.-1995.-81 .-№2.-С.40-46.

132. Филаретов A.A. Подвигина Т.Г., Филоретова Л.П. Адаптация как функция гипофизарно-адреналовой системы. СПБ.:Наука, 1994. 131с.

133. Флеров М.А., Вьюшина A.B. Свободнорадикальное окисление липидов в гипоталамусе крыс при стрессе после введения кортизола // Рос. физиол. журн., им. И.М. .Сеченова. 2011. Т.97, №9. С.898-902.113

134. Фурдуй Ф.И. Физиологические механизмы стресса и адаптации при остром действии стресс- факторов// дис.на соиск. степени доктора биол. наук.-Л.-1987.

135. Хавинсон В.Х. Свободнорадикальное окисление и старение / В.Х. Хавинсон, В.А. Баринов, A.B. Арутюнян с соавт. СПб.: Наука, 2003. -С. 10-122.

136. Харамоненко С.С., Ракитянская A.A. Электрофорез клеток крови в норме и патологии. Минск: Беларусь, 1974.144 с.

137. Хитров Н.К., Пауков B.C., Адаптация сердца к гипоксии, М., Медицина, 1991.

138. Чарный A.M. Патофизиология гипоксических состояний. Медгиз, М., 1961.

139. Черницкий Е.А., Воробей A.B. Структура и функции эритроцитарных мембран. Минск: Наука и техника, 1981.216 с.

140. Чернух A.M., Александров гЛ.'Н. Микроциркуляция. М. Медицина, 1984.432 с.

141. Чижевский A.J1. Биохимические механизмы реакции оседании эритроцитов.- Новосибирск: Наука, 1980. 178с

142. Шанин В.Ю. Клиническая патофизиология (п/р Шевченко Ю.Л.) // Учебник для медицинских вузов.- СПб. "Специальная литература", 1998. С. 569.

143. Шмидт Е.В., Лунев Д.К. Сосудистые заболевания головного и спинного мозга. М.: Медицина,. 1976.284 с.

144. Шпрах В.В. Варианты клинического течения дисциркуляторной энцефалопатии // Проблемы неврологии и нейрохирургии./ Под ред. Бурцева Е.М. М.: Медицина, 1994. С.257-266.

145. Эделыптейн Э.А., Бондаренко Е.С., Быкова Л.И. Перинатальные гипоксические синдромы. Учебное пособие. М., 1988.

146. Яхно Н.Н., Штульман Д.Р. Болезни нервной системы. М.: Медицина, 1995.653 с.

147. Aejmelaeus R., Metsa-Ketela Т. et al. Ubiquinol-10 and total peroxil radical trapping capacity of LDL lipoproteins during aging: the effects of Q-10 supplementation // Mol. Aspects Med. 1997, 18, 113-120.

148. Arango V., Underwood M.D., Mann J.J.: Fewer pigmented neurons in the locus coeruleus of uncomplicated alcoholics / Brain Res. 1994 - Vol. 650(1)-p.1-8.

149. Bennet V. The • membrane - skeleton of human erythrocytes and its implications for complex cells // Anni. Rev.Biochem.1985.- V.54.-H.273-304.

150. Goodman S.R., Shiffer C., Fmre. G.Physiol. // The spectrin membrane skeleton in normal and abnormal human erythrocytes. 1983.-V.244.-P.44-121.

151. Beyer R. E. The participation of coenzim Q in free radical production and antioxidation / R. E Beyer // Free Radic. Biol. Med., 2004. Vol. 8. - P. 545-565.

152. Birringer M. Vitamin.,E, analogues as inducers of apoptosis: structure-function relation / M. Birringer, J. H. EyTina, В A. Salvatore // Br. J. Cancer., 2003. Vol. 88. - P. 1948-1955.115

153. Bowler J., Hachinski V.: Vascular cognitive impairment: a new approach to vascular dementia / Baill. Clin. Neurol. 1995 - Vol.4(2) - p.357-376.

154. Choy R.J., Deng Y.M. et al. Coenzyme Q(10) supplementation inhibits aortic lipid oxidation but fails to attenuate intimal thickening in balloon-injured New Zealand white rabbits // Free. Radic. Biol. Med. 2003, 1, 35 (3), 300-309.

155. Crestanello J.A., Doliba N.M. et al. Effect of coenzyme Q10 supplementation on mitochondrial function after myocardial ischemia reperfusion // J. Surg. Res. 2002, 102 (2), 221-228.

156. Dimick P.S. Howe S.R. Stable carbon isotop analysis of harvested and commercial Royall Jelly //Apicultural Research. 1985. V. 24, № 1. - P. 4951.

157. Dolowy K.,- Godlewski Z. Computation of the erythrocyte cell membrane parameters from electrj phoretical and biochemical data sternlike electrochemical model of the cell membrane // J. theor.Biol. 1982. V.84, №4. P.709-723

158. Donath E., Voigt A. Charge distribution within cell surfase coats of single and interaction surface-a minimum free electrostatic energe approach: coclusions for electrjphoretic mobility measurements // J. Jhror.Biol. 1983. V.101. P.569-584

159. Eder P., Soong C., Nao M. Phosphorylation reduces the affinity of protein 4.1 for spectrin//Biochemistry. 1986. V.25, №7. P.1764-1770

160. Gill R, Brazell C, Woodruff GN, Kemp JA. The neuroprotective action of dizocilpine (MK-801) in the rat middle cerebral artery occlusion model of focal ischemia // Br J Pharmacol. 1991. № 103. P. 2030-2036.116

161. Giurgea C. and Salama M. «Nootropic drugs»; Prog. Neuro-Psychopharmac. Vol. 1, pp. 235-247, 1977.

162. Greenquist A.C., Shohet S.B. Phosphorylation in erythrocyte membranes from abnormally shaped cells // Blood. 1976.V.48.P.877-886

163. Grimes A.J. Human red cell metabolism. Blackwell. Scintific publications. Oxford. London. Edinburg. Melboum, 1980.22lp.

164. Jannuzzi J. Royal Jelly: mistery food //Amer. Bee J. 1990. № 8. - P. 532534.

165. Irwin R. S., Rippe J. M. // Intensive care medicine. 2003. - P. 2336.

166. Kasapoglu M., Ozben T. Alterations of antioxidant enzymes and oxidative stress markers in aging // Exp. Gerontol. 2001.V.36, №2.P.209~220.

167. Kendell S. et al. Principles of neural Sciences Appleton &Lange. 2000.1134 p.

168. Lenaz G., D'Aurelio M., Merlo Pich M. et al «Mitochondrial bioenergetics in aging» Biochim.Biophys. Acta, 2000, 1459(2-3), 3997-404.

169. Malykh Andrei G. and M. Reza Sadaie «Piracetam and piracetam-like drugs. From basic science to novel clinical applications to CNS disorders»; Drugs 2010; 70(3): 287-312.

170. Marikovsky Y. The cytoskeleton in ATP—depended erythrocytes6 the effects of shape transformation // Mech. Ageing and dev. 1996.V.86.P.191-197.

171. Melov, S. Animal models of oxidative stress, aging and therapeutic antioxidant interventions / S. Melov // Int. J. Biochem. Cell Biol., 2003. -Vol. 34.-P. 1395-1400.

172. Mondadori C., Petschke F. «Do piracetam-like compounds act centrally via peripherial mechanisms?»; Brain Research, 435 (1987) 310-314.

173. Morison M., Mikozak A., Gomutkilwicz J. The effect of ATP on the other and the mobility of lipids in bovine erythrocytes membrane // Biochem.-1990.-V. 1092.-№3p.361-3 64.

174. Mueller T., Morison M. Glycoconnectin ( Pas 2 ) a membrane attachment site for the human erythrocytes cytoskeleton // Erythrocyte Membranes Receert Clinical and Experimental Advances. 1981. Vol.2.P. 95-112.

175. Padayatty, S. J. Vitamin C as an Antioxidant: Evaluation of Its Role in Disease Prevention / S. J. Padayatty, A. Katz, Y. Wang // Journal of the American College of Nutrition, 2003. Vol. 22. - P. 18-35.

176. Pannosian A., Wikim G. The patology of plant adaptogens: on overview with particular reference to their mechanisms of action and indications// 8 World Congress ISAM- Moscow, 2006.- P. 176-177.

177. Pilch H., Muller W.F. «Piracetam elevates muscarinic cholinoreceptor density in the frontal cortex of aged but not of young mice»; Psychopharmacology (1988) 94: 74-48.

178. Sandberg F., Dencher F. Experimental and clinical tests on Ginseng// Z. Phytother.- 1994. Bd 15, N1.- S.38-42/

179. Sahin E., Gumutslu S. Immobilization stress in rat tissues6: alterations in protein oxidation, lipid peroxidation and antioxidant defense system// Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2007. V.34, № (5-6). P.425-431

180. Seaman G., Heard P.H. A micro electrophoresis chamber of small volumt for use with biological systems. // Hematology. -1983. -V.97. -P. 107-113.

181. Sherman W. Membrane structure and function of malaria parasites //

182. Parasitology. 1985. Vol 90;P.611-616.

183. Stoltz J.F., Donner M. Red blood cell aggregation: measurements and clinical application//Jurk. j ofmed. sciences. 1991. V.15, №1. P.26-32.

184. Thomas S.R., Neuzil J., Stocker R. «Inhibition of LDL oxidation by ubiquinol-10. A protective mechanism for coenzyme Q10 in atherogenesis?» Mol.Aspects Med., 1997, 18, 85-103.

185. Tuma D.J., Thiele G.M., Xu D. Acetaldehyde and malondialdehyde react together to generate distinct proteib adducts in the liver during long-term ethanol administration//Hepatology. 1996. V.23, 4. P.872-880.

186. Walter H., Krob E.J. Fixation with even small guantities of glutaraldehyde effects red bloods cell surface properties in a cell // Bioscience reports. 1989. V.9.P.727-73 5.

187. Winblad B. «Piracetam: a review of pharmacological properties and clinical uses»; CNS Drug Reviews, Vol 11, No.2, pp. 169-182, 2005.

188. Wong P. The behavior of the human erythrocyte as an imperfect osmometer6 A hypothesis // J. Theor.Biol. 2006. V. 238. P. 167-171.

Информация о работе

Захарова, Ольга Анатольевна
кандидата биологических наук
Нижний Новгород, 2012
ВАК 03.03.01

Диссертация

Изменение электрофоретической подвижности эритроцитов при действии стресс-факторов и коррекции состояния организма биологически активными веществами - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы